Исследование структуры и функции гена Trithorax-like Drosophila melanogaster

Катохин, Алексей Вадимович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Исследование структуры и функции гена Trithorax-like Drosophila melanogaster
ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Исследование структуры и функции гена Trithorax-like Drosophila melanogaster"

КАТОХИН

Алексей Вадимович

На правах рукописи УДК 575.117.2: 577.2

пгъ ол

* 3 2303

ИССЛЕДОВАНИЕ СТРУКТУРЫ И ФУНКЦИИ ГЕНА ТтШютах-Ике ОговорЬИа melanogaster

Генетика 03.00.15

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

новосибирск 2000

Работа выполнена в Институте цитологии и генетики СО РАН сектор молекулярной нейрогенетики дрозофилы, г. Новосибирск

Официальные оппоненты:

Ведущее учреждение:

доктор биологических наук профессор

Захаров Илья Кузьмич Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск

кандидат биологических наук Беклемишев Анатолий Борисович Институт биохимии СО РАМН, г. Новосибирск

Томский государственный университет, г. Томск

Защита состоится 2000 г. на утреннем заседании

диссертационного совета по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук (Д-002.11.01) в Институте цитологии и генетики СО РАН в конференц-зале Института по адресу: 630090, г. Новосибирск-90, проспект академика Лаврентьева, 10.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института цитологии и генетики СО РАН.

Автореферат разослан " 2000 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук " А.Д. Груздев

Еечс.(9, 0 ~Г?счь. /. о

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Исследования структуры и функции транскрипционных факторов, играющих ключевую роль в процессах регуляции экспрессии генов, находятся в ряду самых актуальных направлений разв!пия современной молекулярной биологии. Особое внимание в последнее время уделяется изучению транскрипционных факторов, вовлеченных на начальных этапах регуляции транскрипции во взаимодействие с хроматином, что приводит к изменению степени доступности регуляторных последовательностей ДНК для последующего специфического связывания с другими белками.

Одним из таких факторов, осуществляющих эту важнейшую функцию перестройки и поддержания необходимой конформации хроматина у D. melcmogaster, является ГАФ ( GAGA factor или GAF). Первоначально ГАФ бьи обнаружен благодаря его способности связываться с (ОА)„-богатыми последовательностями и активировать транскрипцию генов ЦЪх и en [ Soeller et al, 1988, Biggin,Tjian,1988]. Позднее было выявлено множество других геноз-мишеней ГАФ, контролирующих жизненно важные этапы в процессе развития дрозофилы (гомеозисные гены, гены сегментации, экдизон-индуцируемый ген Eip74EF). Также он необходим для активации генов белков теплового шока (hsp26, hsp27, hsp70) и "генов домашнего хозяйства" (his3, his4, actin5C, aJ-tubu!in)[ Granoke/я/., 1995, Wilkins, Lis, 1997].

Молекулярная функция ГАФ в настоящий момент достаточно подробно исследованы. Он действует как «ангирепрессор», т.е. участвует в процессе перестройки и расформирования нуклеосом и тем самым способствует в составе комплексов, перестраивающих хроматин, преодолению подавляющего действия, которое нуклеосомы и гистон HI оказывают на транскрипцию [см. обзоры Cairns, 1998, Varga-Weisz,Becker, 1998, Travers,1999], Было показано, что ГАФ участвует также в создании и поддержании в течение клеточного цикла хроматиновой конформации таких регуляторных структур, как "глушители" (silencers) [Strutt et al., 1997, Hagstrom,Schedl,1997, Cavalli et al., 1998], "изоляторы" (insulators) [Gerasimova, Corces,1998, Ohtsuki, Levine, 1998, Bell,Felsenfeld, 1999] или "граничные элементы" ( boundary elements) [ Sun,Elgin, 1999].

Представление о биологической значимости функции ГАФ дополнилось после того, как было показано, что он кодируется геном Trithorax-like (Trl) [ Farkas et al, 1994], мутации которого проявляются как усилители эффекта положения мозаичного типа [Farkas et al, 1994, Wallrath,1998], Ген Trl по характеру взаимодействий с гомеозисными генами бьи отнесен к trx-rpynne генов [Simon,1995, Hagstrom,Schedl,1997, Gellon,McGinnis,1998]. Известные четыре мутации гена Trl охарактеризованы поверхностно, поэтому поиск и исследования других мутаций представляют собой актуальную задачу.

Выявление гена Tri, кодирующего ГАФ, и получение соответствующей кДНК позволили выяснить доменную структуру белка. ДЕЖ-связывающий домен представлен одним "цинковым пальцем" [ Pedone et al, 1996, Qmichinski et aL, 1997]. Домены, ответственные за белок-белок взаимодействия, представлены амнно-концевым BTB/POZ доменом [ Espinas et al., 1999, Katsani et al., 1999] и карбокси-кондевым глутамин-богатым доменом [ Agianian el al., 1998, Wilkins,Lis,1999], Исследования продуктов гена Tri показали, что сам ГАФ представлен несколькими шоформами [ Biggin,Tjian,1988, Soeller étal., 1993, Benyajati et al., 1997], а спектр мРНК гена Tri состоит из нескольких транскрштгов, причем спектр меняется в течение развития [ Soeller étal, 1993, Benyajati et al, 1997], a также различается в некоторых органах [Перелыгана и др.,1993]. Однако многие аспекты экспресс™ гена Tri, в частности его транскрипционной активности, до сих пор остаются не исследованными Становится ясно, что без подробных исследований молекулярных механизмов генерирования разнообразия продуктов гена Tri невозможно полностью охарактеризовать функциональные активности ГАФ. Однако, исследования в этом направлении существенно сдерживаются из-за отсутствия геномной последовательности гена и данных о его молекулярной структуре.

Цель и задачи исследования. Целью представляемой работы являлось исследование молекулярной структуры гена Tri и новых аспектов его экспрессии. В ходе работы планировалось решить следующие конкретные задачи: 1) Построить молекулярную карту гена Tri на основе сравнения геномной последовательности гена ( AJ225042) с относящимися к нему последовательностями из баз данных ( кДНК, EST и последовательности, фланкирующие Р-элеменгаые встройки), определить экзон-интронную структуру и выявить места для событий альтернативного сплайсинга, выявить существующие встройки Р-элеменгов; 2) Исследовать экспрессию гена Tri D. melcaiogaster на транскрипционном уровне, провести сравнение спектров транскрштгов в разных органах/тканях и выявить специфические различия; 3) Выяснить зависимость транскрипционной активности гена Tri от температурного режима содержания дрозофил; 4) Изучить жизнеспособность и другие фенотипические характеристики у мутаций гена Tri, включая вновь выявленные Р-элементные встройки, провести комплементационный анализ мутаций по признаку жизнеспособности на разных стадиях развития; 5) Провести контекстный анализ регуляторной области гена Tri, определить расположение его промотора и тип, к которому он может быть отнесен.

Научная новизна и практическая ценность. Впервые установлена экзон-ишронная структура большей части транскрипционной единицы гена Tri. Выявлено, что в 5' негранс-лируемом районе гена транскрипты формируются в результате использования альтернатив-

ных донорных сайтов сплайсинга. Применение экзон-специфических проб для аналша спектров транскрштгов гена Tri позволило обнаружить, что у личинок Ш возраста D. melanogaster между спектром транскрштгов гена Tri из мозговых ганглиев и аналогичным спектром из слюнных желез наблюдаются различия по составу. Показано, что состав спектра транскриптов гена Tri меняется в зависимости от температурных условий развития дрозофил. Впервые исследованы четыре новых мутации в гене Tri по пршнакам жизнеспособности и фертильности. Построена карта комплементации восьми мутаций гена Tri. С помощью контекстного анализа проведено комплексное исследование промоторных и нуклеосомных свойств ДНК в 5' области гена Tri, на основании чего его промотор был локализован и определен как TATA- и DPE-несодержащий.

Полученные результаты по анализу молекулярной структуры гена Tri, особенностей его транскрипционной активности и проявлений мутаций закладывают основу для более детальных исследований механизмов структурного преобразования продуктов гена и раскрытия всего многообразия проявления гена Tri.

Апробация работы. Основные результаты диссертации были представлены на отчетной сессии Института цитологии и генетики СО РАН (1999г.).

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 5 статей.

Структура и объем работы. Диссертация содержит разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты и обсуждение, выводы, список литературы (250 ссылок). Работа изложена на 122 страницах, содержит 13 рисунков и 4 таблицы.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

В экспериментах использовали линии Drosophila melanogaster с мутациями TrI13C/TM3,Sb',Sery; Tri63/TM3,Sb',Ser,y+; Trf'67/Tbü£b',Ser, /¡Гг/^/ТМЗЖ&гУ" (любезно предоставлены Ф. Каршем (Женевский Университет); Р2088 (\v'"s\ P{w+nC= lacW} I(3)s2í25sm¡I TM3,Sb') ( получена из Блуминггонского Центра линий (США)); >/ш; ЕР(3)3184 / TM6,7Z>', w"ls-, ЕР(3)3191 / ТМ6,Tb1, w1"8; ЕР(3)3609/ TM6,7Z>; ( линии встроек из серии Р{ЕР} [ Rorth,1996]); ( получены из г.Сегед, Венгрия)).

РНК выделяли по двум методикам: а) Из целых мух - изотиоцианат-фенол-хлоро-формным методом [ Chomchinski,Sacchi,1987]. б) Из личиночных органов - фенол-хлороформным методом [ Vinsent et al., 1984] ( автор благодарит Э.М Баричеву за приготовление этих образцов). Образцы РНК денатурировали в смеси глиоксаля с ДМСО и разделяли в 1,2% агарозном геле [ Маниатис и др.,1984]. Перенос разделенных образцов РНК на фильтры Zeta-Probe (Bio-Rad) и гибрвдшцию проводили в соответствии с рекомендациями фирмы. Для оценки размеров транскриптов Tri гели окрашивали бромистым этидием ( выяв-

ляли 18S РНК (1,97 та), а фильтры перегибридизовывали с пробами на мРНК hsp83 (2,8-2,9 та [ Blackman,Meselson,1986]) и ß-акшна ( 1,95 и 1,7 тн [ Kuaora,McGinnis, 1988]).

Для контекстного анализа и выравнивания нуклеотидных последовательностей использовали пакет программ VOSTORG (ИЦиГ СО РАН, V.6.50) [Zharkïkh et al.,1991] и программы, доступные по сети Internet.. Для предсказаний промоторов и поиска функциональных сайтов применяли программы, доступные по сети Internet [см. обзоры FickettjHaLzigeorgiou, 1997, Pedersen et al, 1999]. Для контекстного анализа нуклеосомных и промоторных свойств последовательностей использовали дискриминангные функции и программы, разработанные В.Г. Левицким ( лаб. теоретической генетики ИЦиГ СО РАН).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Построение молекулярной карты гена Tri Drosophila melanogaster. Значительным продвижением в исследовании структуры гена Tri D. melanogaster было определение сотрудниками сектора молекулярной нейрогенетики ИЦиГ СО РАН геномной последовательности AJ225042, охватывающей район размером около 3 тн из 5'-обласга и транскрибируемую часть гена размером более 5тн. Автором бьша просеквенирована значительная часть 5'-области и отдельные участки в кодирующей части гена. Экзон-ишронная структура гена Tri бьша установлена с помощью выравнивания геномной последовательности AJ225042 с депонированными в банках данных несколькими последовательностями кДНК этого гена, а также с некоторыми EST ( Expressed Sequence lags), привлеченными из базы данных BDGP ( Berkley Drosophila Genome Project). На Рис.1 изображены результаты этого выравнивания в виде молекулярной карты гена Tri.

Самая протяженная из «полных» последовательностей кДНК начинается с позиции 3067, а самая продвинутая в 5' область EST - с позиции 2998. Завершается этот экзон неоднозначно - при сопоставлении двух последовательностей кДНК ( XJ18386 и U16728) и 18-ти EST, соответствующих 5'-нетранслируемому району гена, выявлены три донорных сайта сплайсинга в позициях 3044, 3110 и 3467 (третий вариант сплайсинга обнаружен только в транскрштгах, выделенных из яичника). Соответственно, длина первого интрона имеет значения 576, 510 и 153 н. Второй экзон начинается во всех последовательностях кДНК и EST с позиции 3620, т.е. используется один и тот же акцепторный сайт. Во втором экзоне с позиции 3855 начинается кодирующая часть гена. Заканчивается второй экзон единообразно для всех последовательностей кДНК - в позиции 4046. После второго интрона длиной 2353 н во всех последовательностях кДНК следуют: третий экзон ( с 6401 по 6866), третий интрон длиной 118 н, четвертый экзон (с 6986 по 7321) и четвертый интрон длиной 158 н. Структура пятого экзона сложна. Его первая часть ( участок с 7481 по 7618) выявляется во всех после-

!ЕРЙ)31Э1!

PP BN X F

......J-i......i.....t

Ш P

Эт.

Et. проба A npoba Б

GAGA-519b US8533 GAGA-519a U1B3G6 GAGA-681 U1672S

К ГАФ X597S4

L222QS

EGT AA391S33 EST ААЭ04115 EST ААЯ73387

Щ атв домен I Zinc Flnfler дсмем

AJ225042

Рис.1. Молекулярная карта гена Tri. Выше геномной последовательности AJ225042 приблизительно показаны районы, удаляемые соответствующими делениями. Также показаны места встроек Р-элементов. Буквы над геномной последовательностью - сайты рестрикции (В - ВатШ, Е -EcoRI, N - Ncol, Р - Pstt, X - Xhol). Ниже представлена структура транскриптов: Х59784 [Перелыгина и лр.,1993], L22205 [Soeller et а/.,1993], U68563, U18386, U16728 [Benjajati et а!., 1997]. Незаштрихованные части прямозтолышков соотвепл^тот некодирукяцим районам; в кодирующей области указаны районы, соответствующие разным белковым доменам. Снизу показаны структуры трех EST, отражающих события сплайсинга в 5' нетранслирусмом районе.

довательностях кДНК, затем в позиции 7619 расположен альтернативный донорный сайт сплайсинга. В одних кДНК наблюдается сплайсинг геномного фрагмента вплоть до участка, расположенного через 1,5 тн далее (GAGA-581/U16728), а в других кДНК этот фрагмент сохраняется (этот участок обозначен как экзон 5А). У последних кДНК завершение 5А экзо-на происходит двумя способами - в одном случае ( кГАФ/Х59784 и L22205) он обрьшается в позищш 8116 при наличии несовершенного сигнала полиаденилирования, а в другом случае (GAGA-519a/U18386 и GAGA-519b/ U88583) простирается после этого сигнала вплоть до канонического донорного сайта сплайсинга в позиции 8253. В этом 5А экзоне в позиции 8042 заканчивается открытая рамка считывания у всех последовательностей кДНК, имеющих этот экзон. Выведенная аминокислотная последовательность образует изоформу ГАФ длиной 519 ак. Последовательности кДНК GAGA-519a/U18386 и GAGA-519b/U88583 продолжаются после сплайсинга 5-го интрона еще на несколько тысяч нуклеотидов и выходят за пределы прочитанной и зарегистрированной области геномной последовательности гена Tri. В случае сплайсинга геномного фрагмента между позицией 7619 и шестым экзоном, отстоящим на 1,5 тн, рамка считывания продолжается. Выведеная в этом случае аминокислотная последовательность образует изоформу ГАФ длиной 581 ак.

На Рис.1 гоображены все мутации, известные до сих пор для гена Tri. это 7 встроек Р-элементов и две делеции. Место встройки Р-элеменга, вызвавшего мутацию Trt2 , и точки

разрыва делеции DfTrf83 шображены приблизительно, как они приведены в работе [ Farkas et al., 1994]. Встройка Tri'30 расположена в районе 5432-5440, а делеция DfTrf67 удаляет район правее встройки, захватывая при этом несколько кодонов третьего экзона [ Б. Karch, личное сообщение]. К числу этих двух встроек добавлены еще четыре, которые были выявлены в результате BLAST- анализа последовательности AJ225042 отноаггельно базы данных BDGP. В этой базе данных собраны расшифрованные нуклеогидные последовательности геномных фрагментов, фланкирующих встройки Р-элеменгов. Среди них были обнаружены четыре фрагмента, относящихся к последовательности AJ225042. Элемент ЕР(3)3191 ( AQ073806) встроился в положении 1849, ЕР(3)3609 ( AQ073055) - в позиции 3276, т.е. между вторым и третьим донорными сайтами сплайсинга; !(3)s2325 ( AQ026386) -в позиции 4432, т.е. в начале второго нитрона; и ЕР(3)3184 (AQ073801) -в позищш 5444, т.е. в середине второго нитрона Недавно другими авторами была обнаружена во втором шпро-не (позиция 5688) еще одна встройка Р-элемента под названием mei-P24, которая вызывала нарушения в спаривании, рекомбинации и расхождении хромосом [ Sekelsky etaL, 1999].

В целом, структура гена Tri представляет собой пример геномной организации гена, кодирующего транскрипционный фактор дрозофилы. Известно, что в результате альтернативного сплайсинга районов, соответствующих кодирующей части гена, модулируются свойства транскрипционных факторов, поскольку образуется несколько транскрштшв, транслируемых как изоформы белка, с различными ДНК-связывающим свойствами или способностями к белок-белок взаимодействиям. В случае ГАФ две изоформы различаются по структуре карбокси-концевых глутамин-богатых доменов, ответственных за белок-белок взаимодействия и образование гомо- и гегеромерных комплексов [Benyajati et al, 1997, Wilkins,Lis,1999]. Примеров альтернативного сплайсинга, модулирующего структуру лидер-ных последовательностей мРНК, известно пока немного. Биологическое значение такого сплайсинга, возможно, заключается в том, что для одного гена образуется набор из мРНК, различающихся по способности образовывать вторичные структуры, определяющие такие важные динамические аспекты функционирования мРНК, как их стабильность и транслиру-емость, а также их щггоплазматическую локализацию. Т.к. известно, что транскршпы Tri запасаются в яйцеклетке и транслируются лишь после оплодотворения [ Bhat et al, 1996], то эти аспекты несомненно привлекут внимание исследователей структуры и функции гена Tri.

Анализ спектра транскриптов гена Tri.

Принцип отбора при выделении гена Tri заключался в выявлении геномных последовательностей D. melanogaster, экспрессирующихся в нервной ткани [Кокозаидр.1991].

Сравнительный анализ спектров транскриптов гена Tri в РНК из голов дрозофилы и из остальных их частей подтвердил наличие нейроспецифического аспекта в экспрессии гена Tri у взрослых дрозофил [ Перелыгина и др. 1992, Перелыгина и др. 1993].

В настоящей работе исследованы спектры транскриптов гена Tri в разных органах у личинок конца III возраста. Дта этого выделяли суммарную РНК из слюнных желез и мозговых ганглиев с прилегающими имагинальными дисками В качестве меченой радиоактивной пробы были использованы: а) Pstl-Xhol фрагмент кГАФ, охватывающий часть третьего экзона, весь четвертый экзон и часть пятого экзона (проба А (Рис. 1)) и б) XhoI-EcoRI фрагмент кГАФ, охватывающий незначительную часть пятого экзона, расположенную до донорного сайта сплайсинга, и весь 5А экзон, расположенный после (проба Б ( Рис. 1)). Спектр транскриптов гена Tri в РНК из слюнных желез личинок, температуро-зависимые изменения в этом спектре. На Рис.2-1 представлены результаты нозерн-блот гибридизации суммарной РНК, выделенной из слюнных желез личинок конца П1 возраста, выращенных при разных температурах. Проба А показала (Рис.2-1-А), что при температуре 18°С, 20°С и 30°С в препаратах суммарной РНК удается выявить лишь один транскрипт величиной 2.0 тн. Этот же транскрипт выявляется в препаратах РНК из слюнных желез личинок, содержащихся в течение 2-5 часов при температуре 37°С. Однако при температуре 14°С картина экспрессии в слюнных железах другая: в ней выявляются три транскрипта величиной 2.0,2.5 и 3.0 тн. Иногда при 16°С кроме отчетливого транскрипта в 2.0 тн удается обнаружить также транскрипт величиной 3.0 тн, тогда как транскрипт 2.5 тн не выявляется. Применение пробы Б, однако, не выявляет в тех же образцах температуро-зависимых транскриптов: присутствует всегда только транскриггг величиной 2.0 тн( Рис.2-1-Б).

14° 16° 18° 25° 30°25°в7° 14° 16° 13° 25° 30° 25°/37°

14° 16° 18° 25° 30° 2$№ 14° 16° 18° 25° 30° 25°/37"

3.0- «У ■

i f

Рис.2. Спектры транскриптов гена Tri в слюнных железах (панель I) и в мозговых ганглиях с прилегающими имагинальными дисками (панель Н).у личинок III возраста, развивавшихся при 14°С, 16°С, 18°С, 25°С, 30°С и перенесенных с 25°С на 37°С на 2-5 часов. Блот А: гибридизация с пробой А; блот Б: гибридгаация с пробой Б.

Спектр транскригггов гена Tri в РНК из мозговых пшгяиев с прилегающими имагинальными дисками личинок, температурозависимые изменения в этом спестре, Результаты нозерн-блот гибридизации суммарной РНК, выделенной из мозговых ганглиев личинок конца Ш возраста, выращенных при различных температурах представлены на Рис.2-П-А ( для пробы А) и -Б ( для пробы Б). При температурах 18°С, 25°С и 30°С в этих препаратах удается выявить с помощью обех проб два отчетливых транскригтга величиной 2.0 и 2.5 тн. В некоторых случаях при этих температурах удается выявить дополнительно еще два более тяжелых транскрипта Можно предположить, что 5А экзон включен в выявленные транскрипты, синтезированные при нормальной для личинок дрозофилы температуре. Однако, при 14°С и 16°С проба А выявляет только один транскриггг величиной 2.5 та, а проба Б в тех же образцах РНК - два транскрипга величиной 2.0 и 2.5 тн. У подвергнутых тепловому шоку личинок (2-5 часов при 37°С) в препаратах РНК, вьщеленной из мозговых ганглиев, обнаруживается с помощью обех проб только одантранскрипт в 2.0 тн.

Приведенные результаты по нозерн-блот анализу спектра транскригггов гена Tri у личинок подтверждают, что ГАФ выполняет какие-то специфические функции в нервной системе, поскольку наблюдаются различия по составу спектров транскрштгов в препаратах РНК из слюнных желез и мозговых ганглиев. Также выявлено, что спектр транскригггов гена Tri подвержен влиянию со стороны внешних условий содержания и выращивания личинок. При пониженной температуре спектр транскригггов. в мозговых ганглиях почти не отличается от такового при нормальной температуре (Рис.2-11). В слюнных железах, напротив, при пониженной температуре разнообразие в спектре увеличивается за счет добавления к транскрипту размером 2,0 тн еще двух размером 2,5 и 3,0 тн ( Рис.2-1). В случае, если личинок подвергнуть тепловому шоку, в обоих органах спектры состоят из одной разновидности мРНК размером 2,0 тн, однако, транскрипция гена не прекращается вовсе. Это можно расценить как дополнительное свидетельство необходимости участия ГАФ в оперативном развертывании клеточной реакции на неблагоприятные условия, т.е. в реакции на тепловой шок

Применение в качестве проб разных фрагментов последовательности кДНК гена Tri позволяет иногда предположить примерный состав выявляемых мРНК. Например, различия в выявляемых спектрах транскршггов из слюнных желез на Рис.2-1-А и Б, по-видимому, указывают на то, что образующиеся в этом органе при температуре 14°С дополнительные транскршпы не содержат 5А экзон. Для объяснения различий в спектрах транскрихггов из мозговых ганглиев (Рис. 2-П-А и Б), можно предположить, что при низкой температуре в этих органах образуется новая разновидность мРНК размером 2,0 тн, не содержащая экзоны с 3-его по 5-ый. Представленные данные демонстрируют отдельные результаты альтерна-

тивного сплайсинга пре-мРНК гена Tri как одного из механизмов пост-транскрипционных преобразований структуры продукта гена Tri. Эта данные предлагают перспективные направления для дальнейших исследований разнообразных аспектов экспрессии гена Tri.

Генетический анализ мутантных аллелей гена Tri.

Исследование фазы легальности мутаций гена Tri На молекулярной карте гена Tri ( Рис.1) изображены все известные его мутации. Это семь Р-элементных встроек и две делении. Поскольку сведения о влиянии мутаций гена Tri на развитие дрозофилы сводятся в основном к описанию встройки Trl!3C [ Farkas et a!., 1994, Bhat et al., 1996], встала задача провести более систематическое описание и сравнение онтогенеза у особей, несущих вновь выявленные встройки. Для этого сначала все мутации были однообразно перебалансированы и в какой-то мере выровнены по генетическому фону. Как балансер была использована хромосома TM3,Sb,Sery. Ее сочетание с X хромосомой, несущей у', дает возможность выявлять гомозиготных особей по наличию признака yellow начиная со стадии личинок I возраста.

Сразу же было замечено, что в линиях со встройками ЕР(3)3184 и ЕР(3)3191 образуется много гомозигот. Однако, цвет глаз у мух указывал на присутствие маркера Р-элемен-тной конструкции [ Rorth,1996], Отсаженные отдельно гомозиготные особи размножаются и поддерживаются в культуре. В других двух линиях на стадии взрослых мух гомозиготные особи не обнаруживались. Для этих линий было предпринято исследование по определению стадии, на которую приходится фаза летальности.

Для того, чтобы проследоть за ходом онтогенеза гомозиготных особей, образующихся в каждой из "летальных" линии, личинок изатекади из питательной среды, быстро отмывали проточной водой и аналгаировали под бинокулярным микроскопом. В каждой линии было проанализировано не меньше 200 особей. Личинок с желгозато-бурым челюстным крючком отбирали, помещали в отдельный стакан с гаггательной средой.. Были выявлены следующие фазы летальности мутаций: а) эмбриональная (Dflrf81 , ЕР(3)3609, Trl'3C); б) личиночная (1(3)s2325); в) предкуколочная ( Trf\DfTrP67) (Табл.1).

Таблица 1. Фазы летальности у гомозиготных особей линий с мутациями гена Tri.

Линия количество гомозиготных личинок доля выживших особей по стадиям (% от числа личинок) Фаза легальности (стадии)

предкуколки куколки взрослые

DfTrl"" 13 0 0 0 эмбрион и личинка I

Dm"" 44 39 0'. ■■ 0. предкуколка

l(3)s2325 101 0 0 - о ; личинка Ш

Tri62 67 27 ■ 0' 0 ' предкуколка

EP(3)3609 0 . 0 0 0 эмбрион

Triuc 0' " . 0 о -'j-o эмбрион

Необходимо отметить, что есть некоторое отличие представленных данных от литературных. В работе Фаркас и др. [ Farkas et al., 1994] приведено краткое описание, что особи, гомозиготные по аллелю Tri'30, имеют пониженную жизнеспособность, в основном поп ¡бают в личиночном возрасте, отдельные все же достигают взрослого состояния, а особи, гомозиготные по Tri62, D/Tri485 и DJTrf67, погибают в течение третьего личиночного возраста. Нами же было обнаружено в случаях с Trf2 и DJTrf67 продление развития гомозигот, а в случаях с DJTrf85 и Trluc - напротив, сокращение развития. С чем связана эта разница в наблюдениях, предстоит изучить в дальнейшем.

Анализ межаллельной комплементации в гене Tri. Заключение об аллельносш вовлеченных в анализ мутаций, основанное на данных по молекулярному картированию, требует подтверждения со стороны общегенегических методов, т.е. проведения комплементационного теста. Результаты попарных двунаправленных скрещиваний между особями мутангных линий представлены в Табл. 2.

Таблица 2. Учет компаундов в потомстве от скрещиваний между особями мута1гтых линий.

родители всего потомков доля комлаувдов (%) родители всего потомков доля компаундов (%)

Tri™х Tri™ 232 - 0 l(3)s2325 х ЕР(3)3609 264

Tri X l(3)s2325 257 l(3)s2325 X TW13С 443 3.61

Tri№!> x Tri 62 211 l(3)s2325 X ЕР(3)3184 661 29.04

Tri x EP(3)36Ü9 225 0 l(3)s2325 х ЕР(3)3191 942 28.02

Tri™** Tri™ 174 0 Tri62 х ЕР(3)3609 273 о

Tri h°6 x EP(3)3i84 616 30.65 Tri*2X Tri 276 5.79

TrliUaxEP(3)3191 654 31.58 Tri" X ЕР(3)3184 449 33.18

Tri™ xl(3)s2325 240 0 Tri62 X EP(3)3191 471 33.33

Tri K°' x Tria 335 EP(3)3609 x Tri13G 421 25.41

TriK57 x EP(3)3609 456 EP(3)3609 x EP(3)3184 594 29.12

Tri™1 x Tri™ 365 1.917 EP(3)3609 x EP(3)319l 731 32.42

Tri™ XEP(3)3184 368 28.53 Tri130 x EP(3)3184 543 32.78

TriBb/ x EP(3)3191 474 30.59 Tri13C x EP(3)3191 348 33.33

l(3)s2325 X Triи 255 ■Л: <3 EP(3)3184 x EP(3)3191 534 28.65

Из представленных данных можно сделать вывод, что по признаку жизнеспособности (т.е. достижению взрослой стадии) наблюдается межаллельная комплементация при некоторых комбинациях мутации гена Tri. Например, встройка ЕР(3)3191 комплеменгаруег практически все "летальные" аллели. Аллель ЕР(3)3184 в целом ведет себя сходно, проявляя лишь еле заметное взаимодействие с аллелями D[TrfSS, DJTrf^7, ЕР(3)3609 и ЕР(3)3191. Слабая комплементация наблюдается при сочетании аллеля Trf3C саллелем DJTrf67, чуть

посильнее - с аллелями ТгР и !(3)s2325, сильная - с аллелем ЕР(3)3609. Аллель DfTrf'85 не комплеменгирует ни с одним из "летальных" аллелей. По этим данным построена карта комплементации мутаций гена Tri по признаку жизнеспособности взрослой стадии ( Рис.3).

, RSS

III t ГС

Рис.3. Карта комплементации мутаций гена Tri по признаку жизнеспособности взрослой стадии ( Взаиморасположение линий условно обозначает степень генетического взаимодействия между мугатными аллелями).

JifTrl' DfTrl'

ТгГ i(3)s2325

шж&шт&жш* Tri130

На Рис.3 условно отражено, что делеция DfTrtm оказьшает самое сильное влияние на жизнеспособность, которое не преодолевается большинством других мутаций. Также показано, что наличие встроек ЕР(3)3191 и ЕР(3)3184 в комбинации с "летальными" аллелями восстанавливает в значительной степени жизнеспособность особей. Анализ комплементации мутаций гена Tri по признаку фертильности самок показал, что только самки, несущие в любых сочетаниях с "летальными" мутациями встройки ЕР(3)3191 и ЕР(3)3184, плодовшы.

Взаимодействия между аллелями, влияющие на жизнеспособность особей на различных стадиях развития, также были проаналшированы, в результате были определены фазы летальности у образующихся в межлинейных скрещиваниях компаундов ( Рис.4.).

Рис.4. Сочетания мутаций гена Tri, Тт,ис К вызывающиее летальность на стадиях:

Ш эмбрион S3 личинка 03 предкуколка ГП куколка ш (pharate adult)

(Незакрашенные квадраты означают стерильных взрослых)

В большинстве случаев при комбинировании в одном генотипе разных мутаций, существенно влияющих на жизнеспособность особей, развотие компаундов продлевается по крайней мере еще на одну стадию, т.е. фаза легальности сдвигается. Например, компаунды DfTrt83/ l(3)s2325 доживают до стадии предкуколки; компаунды ЕР(3)3609)!ТгР, EP(3)3609)!DfTrfss, EP(3)3609)/DfTrfe7 и ЕР(3)3609 ll(3)s2325 претерпевают метаморфоз, но погибают в пупарии в виде pharate adults; при комбинациях

Trl13CiTrf, Trf3CIDfTrP67, Trl,3CH(3)s2325 и Trl,3C IEP(3)3609) выводятся взрослые особи ( однако все они оказываются стерильными) ( Рис.4).

Анализ летальности по стадиям, начиная с личиночной, выявил, что смертность мутан-тных особей происходит по двум причинам: 1) нарушения детерминации и дифференциров-ки клеток, приводящие к полной легальности; 2) замедление физиологических процессов, удлинение развития и падение сопротивляемости стрессам. Гомозиготам и компаундам достается среда обитания, существенно более низкого качества. Учитывая, что продукт гена Tri - ГАФ - является важным компонентом такой антистрессовой системы, как реакция на тепловой шок [ Wilkins,Lis,1997], можно предположить, что некоторая доля мутантов гибнет из-за пониженной способности преодолевать стрессы. Например, при комбинациях ЕР(3)3609 / I(3)s2325 и ЕР(3)3609) / Trf2 из отсаженных в более благоприятные условия личинок удается получить около 1% (от числа отсаженных личинок) мух.

Все полученные взрослые компаунды были проанализированы также на наличие морфологических признаков, описанных ранее у гомозигот по аллелю Trluc [Farkas et al, 1994]: у всех наблюдалась грубоватая поверхность глаз, у многих самцов на VI стерните присутствовали дополнительные щетинки (что указывало на частичную утерю Abd-B+ функции в шестом абдоминальном сегменте). Был обнаружен новый признак: при некоторых комбинациях мутаций (в основном с аллелями Trl'3C и ЕР(3)3609) у самок иногда появлялись щетинки на брюшной плевре. Этот признак, возможно, указывает на нарушения в процессе детерминации структур кутикулы. В результате наблюдения фаз летальности у гомозигот и компаундов можно предположить, что недостаток нормального продукта гена Tri (ГАФ) особенно заметно проявляется при преодолении особями основных критических моментов в развитии: вылупление из яйца, окукливание и метаморфоз, вылет из куколки, а также при развитии генеративных органов.

Контекстный анализ 5' области гена Tri.

Еще один механизм генерирования разнообразия структуры мРНК какого-либо гена -это альтернативное использование нескольких точек старта транскрипции (TSS), управляемых, соответственно, альтернативными промоторами. Поэтому одним из основных вопросов при установлении структуры гена является локализация его промотора и выявление необходимых структурных элементов, ответственных за эффективную транскрипцию гена. Набор из 18-ти гена Tri представляет экспериментальные свидетельства для определения его TSS. Начала этих EST расположены перед началом самой продвинутой в 5' область последовательности кДНК. Структура одной EST ( АА978387), первые 63 нуклеотидов ко-

торой вообще не содержатся в просеквенированных 3 тн кз 5'области гена, добавляет неопределенность в вопросе о расположении TSS, так как можно предполож!пъ, что этот фрагмент относится к впередилежащему экзону (Рис. 1).

Для того, чтобы выявшъ промоторные районы, был сделан теоретический анализ 5' области гена длиной 3 тн с помощью нескольких доступных через сеть Интернет программ, предсказывающих промоторные области генов [ см. обзоры Fickett,Hatzigeorgiou, 1997, Pedersen et al., 1999]. Однако, подавляющее большинство программ не предназначены для анализа последовательностей дрозофилы, поэтому таким способом вопрос о расположении TSS гена Trl не был решен. Картирование структурных элементов промоторов, описанных для дрозофилы (ТАТА-бокса, Inr (Initiator) и DPE ( Downstream Promoter Element) [Purnell et al., 1994, Burke, Kadonaga,1996]), также не позволило однозначно определить положение TSS: В предполагаемых местах не было выявлено ни канонических ТАТА-боксов, ни DPE, лишь тандемный повтор из Inr-элеменгов. Можно предположить, что промотор (-ы) гена Trl относятся к пока не охарактеризованному типу промоторов, определяемых какими-то особыми, расположенными вокруг TSS элементами.

В последнее время в лаборатории теоретической генетики ИЦиГ СО РАН разрабатывается оригинальный метод распознавания регуляторных сигналов в геномных последовательностях. Метод основывается на данных, что промоторные районы, как правило, в значительной мере свободны от нуклеосом. Такая конформация хроматина обеспечивает необходимую экспозицию ДНК промотора для взаимодействия как с базальными ТФ, так и с активаторами и репрессорами транскрипщш [ Tsukiyama,Wu,1997, Cairns, 1998]. Исследования нуклеотидного состава ДНК и зависящих от этого состава фгаических свойств ДНК в промоторном районе показали, что непосредственно перед TSS она имеет пониженную способность укладываться вокруг гисгонового октамера [ Ioshikhes et al., 1999, Levitsky et al., 1999]. Новый метод, основанный на линейном дискриминационном анализе динукле-отидных частот, одновременно учитывает при сканировании геномной последовательности как значения способности ДНК к укладке в нуклеосому ( нуклеосомнош потенциала), так и значения распознающей промоторы функции [ Levitsky,Katokhin, in press]. Для адаптации этого метода к последовательностям D. melanogaster была использована база данных по промоторам Drosophila melanogaster - DPD, созданная Архиповой И.Р. [ Arkhipova,1995],

Выборка промоторов дрозофилы состоит из двух подвыборок, объединяющих ТАТА-содержащие и ТАТА-несодержащие промоторы. Это разделение легло в основу дальнейшего подразделения промоторов по признакам наличия ТАТА-бокса и степени его соответствия консенсусу. Для подвыборок "ТАТА-сильных" и ТАТА-несодержащих промоторов

разработаны функции распознавания промоторных последовательностей. Для анализа генов, промоторы которых представлены в DPD, и для новых генов были использованы эти две функции и функция распознавания нуклеосомных сайтов. При анализе промоторов, участвовавших в "обучающих" выборках, отмечено, что в случае ТАТА-содержащих промоторов в позиции TSS функция распознавания "ТАТА-сильных" промоторов близка к значению 1, а функция распознавания ТАТА-несодержахцих промоторов в этих же позициях отклоняется от 1 к 0. В случае ТАТА-несодержащих промоторов наблюдается обратная ситуация. Однако, во всех случаях функция распознавания нуклеосомных сайтов образует как бы широкую область с отрицательными значениями перед начальными экзонами, т.е. перед TSS.

После такого тестирования новый метод распознавания промоторов был применен для анализа структуры 5' области гена Tri. На Рис.5 представлены профили трех функций. Видно, что перед первым экзоном форма профиля функции распознавания нуклеосомных сайтов вполне соответствует форме, характерной для промоторов. По соотношению значе-

Ркс.5. Профили функоя распознаваний в области промотора гена Trithorax-like (FBgnOO 13263). Обозначения функций: : —ТАТА-несадерж. ***** нукг.еосош.

—■—ТАТА-сильн. CS3S3 эюон

ний функций распознавания промоторов, можно предположить, что в области, предшествующей первому экзону, вероятнее всего расположен ТАТА-несодержащий промотор. Однако конкретные структуры, составляющие этот промотор гена Tri, пока неразличимы, - ситуация такая же, как и в случаях многих генов, кодирующих регуляторные белки, промоторы которых до сих пребывают в базах данных без описания выраженных функциональных элементов, однако успешно выполняют свои функции in vivo ( например, промотор гена Notch). Пополнение списка таких промоторов облегчает задачу тонкого препарироваши их структуры.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Построение на основе просеквенированной геномной последовательности гена Tri его молекулярной карты, охватывающей почти всю белок-кодирующую часть и около 4 тн 5' области, вывело представления о структуре гена на новый уровень и открыло новые перспективные направления для исследования его структуры и функции. Во-первых, существенно пополнились знания о строении 5' нетранслируемых районов в разных транскриптах, образованных в результате сплайсинга с использованием трех донорных сайтов сплайсинга, и появились некоторые основания предположить существование дополнительного 5'-экзона. В настоящий момент ясно, что расшифровка структур выявляемых на нозерн-блотах транскриптов как набора из конкретных экзонов пока невозможна, поскольку необходим учет всех комбинаций альтернативного использования донорных сайтов сплайсинга в первом, пятом и, возможно, в последующих З'-экзонах. Во-вторых, представленное в работе исследование условий формирования спектров транскриптов гена Tri показало, насколько информативнее использование экзон-специфических проб для выявлен™ особенностей сложной транскрипционной активности гена, характеризующейся, наряду с уже описанной стадия-специфичностью, еще и нейроспецифичностью и зависимостью от условий внешней среды. В-третьих, соотнесение нанесенных на построенную молекулярную карту мест встроек Р-элементов с представленными данными о фенотагсгческом проявлении этих мутаций позволяет наметить дальнейшие исследования функциональной значимости отдельных районов в интронах и в 5' области гена Tri Наконец, картирование с помощью EST последовательностей регуляторной области гена Tri предоставляет широкие возможности для исследования тонкого строения и функции регуляторных районов гена. Представленный контекстный анализ этих районов позволил более точно указать месторасположение промотора, управляющего синтезом большинства известных на настоящий момент транскриптов гена, и, как следствие, определил фокус в намечающихся исследованиях регуляторных элементов, через связывание с которыми осуществляется регуляция гена Tri транскрипционными факторами ( например, обнаруженные элементы для связывания фактора теплового шока).

ВЫВОДЫ

1. Построена молекулярная карта гена Tri D. melcmogaster. За основу была взята геном-ная последовательность гена, состыкованная из просеквенированной ранее в секторе молекулярной нейрогенетики транскрибируемой области и из установленной в представленной работе первичной структуры 5' области. Относительно нее были выровнены все представленные в базах данных относящиеся к гену Tri последовательности кДНК, EST

и последовательности, фланкирующие встройки Р-элементов. В результате установлена экзон-интронная организация гена Tri, определены места возможного альтернативного сплайсинга и выявлены четыре новых встройки Р-элеменгов.

2. Проведен анализ спектра транскрштгов гена Tri D. melanogaster с помощью нозерн-блот гибридизации: выявлены органоспецифические различия в спектрах транскринтов у мух (голова - тело) и у личинок (слюнные железы - мозговой ганглий), позволяющие предположить наличие нейроспецифических аспектов в экспрессии гена.

3. Впервые показано, что состав транскрштгов гена Tri изменяется в зависимости от температуры содержания личинок дрозофил: в слюнных железах при 14°С спектр транскрштгов представлен тремя транскриптами, а при 25°С - одним размером около 2.0 тн; в мозговых ганглиях при 14°С спектр транскриотов представлен двумя транскриптами, а при 25°С - одним размером примерно 2.5 тн; при тепловом шоке в обоих органах в спектре остается один транскрштг размером около 2.0 тн.

4. Исследованы фенотипические проявления мутаций гена Tri D. melanogaster, (шести встроек Р-элементов и двух делецин), с помощью анализа межаллельных отношений составлена карта комплементации этих мутаций и выявлены случаи частичной межаллельной комплементации; установлены фазы летальности мутаций гена Tri у гомозигот и всех компаундов.

5. Проведен контекстный анализ 5' области гена Tri D, melanogaster: представлено сравнение результатов распознавания промотора и функциональных элементов, характерных для промоторных областей. Впервые проведено комплексное исследование промоторных и нуклеосомных свойств ДНК в 5' области гена, на основании чего выдвинуто предположение о расположении промотора гена Tri.

Список публикаций

1. Kokoza V.A., Baricheva Е.М., Katokhin A.V. Cloning and chromosomal localization of conser-vative brain specific sequences of D. melanogaster II Drosophila Inf.Serv. 1991. V.70. P. 121-123.

2. Кокоза B.A., Баричеза Э.М., Каюхин A.B. Клонирование и цитогенетическая локализация эволюционно консервативных экспрессирующихся в головах имаго геномных последовательностей Drosophila melanogaster //Генетика. 1991.т.27. с.51-60

3. Перелыгина JIM., Баричева Э.М., Себелева Т.Е., Катохин A.B., Соловьева И.В., Кокоза В.А. Изучение особенностей экспрессии последовательностей Ncl8A, Nc34CD, Nc70F и Nc98F из генома Drosophila melanogaster / / Генетика 1992. Т.28. С.98-104.

4. Баричева Э.М., ПерелыгинаЛ.М., Катохин А.В. Особенности экспрессии гена, кодирующего транскрипционный фактор GAGA D.melanogaster. тканеспецифичность и зависимость от температуры //Докл. Акад.Наук РАН. 1997. Т.355. С.827-830.

5. Baricheva Е.М., Perelygina L.M., Katokhin A.V. Expression of Drosophila melanogaster gene encoding transcription factor GAGA is tissue-specific and temperature-dependent / / FEBS Letters. 1997. V.414, P.285-288.

Подписано к печати 20.03.2000

Формат бумаги 60 х 90 1/16. Печ.л.1. Уч.изд.л. 0,7

Тираж 100 экз. Заказ 40

Ротапринт Института цитологии и генетики СО РАН 630090, Новосибирск, проспект академика М.А.Лаврентьева, 10

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Катохин, Алексей Вадимович

Список принятых сокращений

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. Структура и функция гена Tri Drosophila melanogaster и его продукта транскрипционного фактора GAGA ( ГАФ). ( ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ )

1.1. Феногенетическая характеристика гена Tri D. melanogaster .ю

1.1.1. Проявление мутаций гена Tri в онтогенезе.

1.1.2. Проявление гена Tri в регуляции гомеозисных генов-переключателей.

1.1.3. Проявление мутаций гена Tri как модификаторов ЭПМТ.

1.2. Структура и функция продукта гена Tri - транскрипционного фактора GAGA (ГАФ)

1.2.1. Доменная структура ГАФ.

1.2.2. Взаимодействие ГАФ с хроматином у D. melanogaster.

1.2.3. Роль ГАФ в процессах онтогенеза дрозофилы.

1.3. Молекулярно-генетическая характеристика гена Tri.

1.3.1. Описание нукпеотидных последовательностей гена Tri.

1.3.2. Экспрессия гена Tri.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование структуры и функции гена Trithorax-like Drosophila melanogaster"

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

Исследования структуры и функции транскрипционных факторов, играющих ключевую роль в процессах регуляции экспрессии генов, находятся в ряду самых актуальных направлений развития современной молекулярной биологии. Особое внимание в последнее время уделяется изучению транскрипционных факторов, участвующих во взаимодействии с хроматином на начальных этапах регуляции транскрипции, что приводит к изменению степени доступности регуляторных последовательностей ДНК для последующего специфического связывания с другими белками.

Одним из таких факторов, осуществляющих эту важнейшую функцию перестройки и поддержания необходимой конформации хроматина у D. melanogaster, является ГАФ ( GAF или GAGA factor). Первоначально ГАФ был обнаружен благодаря его способности связываться с (ОА)п-богатыми последовательностями и активировать транскрипцию генов Ubx и en in vitro [ Soeller et al., 1988, B¡ggin,Tjian,1988]. Позднее было выявлено множество других генов-мишеней ГАФ, контролирующих жизненно важные этапы в процессе развития дрозофилы ( гомеозисные гены Abd-B, abd-A, Antp, гены сегментации eve, ftz, Кг, экдизон-индуцируемый ген Eip74EF). Наряду с этим он необходим также для активации генов, участвующих в системе клеточной реакции на тепловой шок ( hsp26, hsp27, hsp70), а также генов, называемых "генами домашнего хозяйства" ( his3, his4, actinöC, cri-tubulin) [ Granok et al., 1995, Wilkins, Lis, 1997].

Особенности молекулярного функционирования ГАФ в настоящий момент достаточно подробно исследованы. Было выявлено, что он не является обычным активатором транскрипции, взаимодействующим с базовым транскрипционным комплексом. Он действует как «антирепрессор», т.е. участвует в процессе перестройки и расформирования нуклеосом и тем самым способствует в составе комплексов, перестраивающих хроматин, преодолению того подавляющего действия, которое нуклеосомы и Н1 гистон обычно оказывают на транскрипцию [Corona et al., 1999, Hamiche et al., 1999, также последние обзоры Armstrong, Emerson,1998, Cairns,1998, Varga-Weisz,Becker, 1998, Travers, 1999].

В последнее время было показано, что ГАФ также участвует в создании и поддержании в течение клеточного цикла специфической хроматиновой конформации таких регуляторных структур, как "глушители" (silencers) [Strutt et al., 1997, Hagstrom et al., 1997, Hagstrom,Schedl, 1997, Cavalli et a/.,1998], а также "изоляторы" (insulators) [ Gerasimova,Corees, 1998, Ohtsuki,Levine,1998, Bell, Felsenfeld, 1999] или "граничные элементы" ( boundary elements) [ Sun, Elgin, 1999].

Представление о разнообразии и биологической значимости функции ГАФ (см. Рис. 1 на стр. 39) существенно дополнилось после того, как в 1994 году было показано, что он кодируется геном Trithorax-like (Tri) [ Farkas et al., 1994], мутации которого проявляются как усилители эффекта положения мозаичного типа [ Dorn et al., 1993, Farkas et а/., 1994, Wallrath, 1998]. Ген Tri по характеру генетических взаимодействий с гомеозисными генами был отнесен к trx-группе генов [ Kennison,1993, Farkas et al., 1994, Simon,1995, Hagstrom,Schedl,1997, Gellon,McGinnis,1998, van Lohuizen, 1999, Satijn,Otte,1999],

Однако, известные к настоящему моменту четыре мутации гена Tri охарактеризованы довольно поверхностно, поэтому поиск других мутаций и дальнейшие исследования их генетических проявлений представляют собой актуальную задачу.

Выявление гена Tri, кодирующего ГАФ, и получение соответствующей кДНК позволили установить структуру белка и функциональное значение его доменов [ Pedone et al., 1996, Omichinski et al., 1997, Agianian et al., 1998, Jimenez-Garcia et al., 1998, Espinas et al., 1999, Katsani et al., 1999, Wilkins, Lis, 1999, Tan, Richmond, 1999].

Исследования продуктов гена Tri показали, что сам ГАФ представлен несколькими изоформами [ Biggin,Tjian, 1988, Benyajati et al., 1992, Soeller et al., 1993], а спектр мРНК гена Tri состоит из нескольких транскриптов, причем состав спектра меняется как в течение развития [Soeller et al., 1993], так и различается в разных органах [ Перелыгина и др., 1993]. Эти наблюдения указывают, что без подробных исследований молекулярных механизмов генерирования разнообразия продуктов гена Tri невозможно полностью охарактеризовать функциональные активности ГАФ [ Wilkins, Lis, 1997]. Однако, развитие исследований в этом направлении существенно сдерживается из-за отсутствия геномной последовательности гена и, соответственно, данных о его молекулярной структуре.

В недавней первой работе по исследованию изоформ транскриптов и белков ГАФ были охарактеризованы три основные изоформы транскриптов и соответствующие им два полипептида. Было также описано их распределение в развитии [ Benyajati et а!., 1997]. Однако другие аспекты экспрессии гена Tri, в частности его транскрипционной активности, до сих пор остаются не исследованными

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

В связи с вышеизложенным состоянием знаний о гене Tri D. melanogaster целью представляемой работы являлось исследование молекулярной структуры этого гена и отдельных аспектов его экспрессии.

Были поставлены следующие конкретные задачи:

1. Построить молекулярную карту гена Tri на основе сравнения геномной последовательности гена ( AC AJ225042) с другими относящимися к нему последовательностями из баз данных (кДНК, EST и последовательности, фланкирующие Р-элементные встройки), определить экзон-интронную структуру и выявить места для событий альтернативного сплайсинга, выявить существующие встройки Р-элементов.

2. Исследовать экспрессию гена Tri D. melanogaster на транскрипционном уровне -- провести сравнение спектров транскриптов в разных органах/тканях и выявить специфические различия.

3. Выяснить зависимость транскрипционной активности гена Tri от температурного режима содержания дрозофил.

4. Изучить жизнеспособность и другие фенотипические характеристики у мутаций гена Tri, включая вновь выявленные Р-элементные встройки, провести комплементационный анализ мутаций по признаку жизнеспособности на разных стадиях развития;

5. Провести контекстный анализ регуляторной области гена Tri и определить расположение его промотора и тип, к которому он может быть отнесен.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ

Впервые установлена экзон-интронная структура большей части транскрипционной единицы гена Tri, Это позволило выявить, что в 5' нетранслируемом районе гена транскрипты формируются в результате использования альтернативных донорных сайтов сплайсинга.

Применение экзон-специфических проб для исследования спектров транскриптов гена Tri позволило обнаружить, что у личинок III возраста D. melanogaster между спектром транскриптов гена Tri из мозговых ганглиев с прилегающими имагинальными дисками и аналогичным спектром из слюнных желез наблюдаются различия по составу. Также показано, что состав спектра транскриптов гена Tri подвержен изменениям в зависимости от температурных условий развития дрозофил.

Впервые исследованы четыре новых мутации в гене Tri, представляющие собой Р-элементные встройки, по признакам жизнеспособности и фертильности. Установлены фазы летальности у гомо- и гетерозигот по восьми мутациям гена и для них построена карта комплементации.

С помощью контекстного анализа проведено комплексное исследование промоторных и нуклеосомных свойств 5' области гена Tri и выдвинуто предположение о расположении и типе его промотора.

Полученные результаты по анализу особенностей молекулярной структуры гена Tri, особенностей его транскрипционной активности и фенотипического проявления мутаций закладывают основу для дальнейших более глубоких и детальных исследований механизмов структурного преобразования продуктов гена и, соответственно, для раскрытия всего многообразия проявления гена Tri.

ВКЛАД АВТОРА

Автор непосредственно участвовал в установлении нукпеотидной последовательности геномного фрагмента гена Tri, помещенной в банке данных. Автором самостоятельно был проведен анализ особенностей структуры гена Tri и генетический анализ мутаций. Анализ транскрипционной активности гена Tri проводился совместно с Э.М. Баричевой. Контекстный анализ регуляторной области гена Tri проводился совместно с Левицким В.Г.

ПУБЛИКАЦИИ

По материалам диссертационной работы опубликовано 5 статей. БЛАГОДАРНОСТИ

Пользуясь благоприятной возможность, я выражаю искреннюю благодарность и признательность проф. H.A. Колчанову за огромную помощь и разноплановую поддержку при проведении представленной работы. Также я благодарю коллектив сектора молекулярной нейрогенетики - Э.М. Баричеву, Арискину Г.В., Федорову Е.В. и Пиндюрина A.B. - за помощь в экспериментальной части работы, а также сотрудника лаборатории теоретической генетики Левицкого В. Г. за предоставление программ для контекстного анализа. Я также очень признателен проф. И.И. Кикнадзе за постоянное внимание к моей и нашего коллектива работе и моральную поддержку. Еще я хочу выразить благодарность всем друзьям и коллегам, помогавшим мне на разных этапах выполнения работы: Блинову А.Г., Богачеву С.С., Аймановой К.Г., Щербик С.В., Перелыгиной Л.М., Макунину И.В., Борисевичу И.В., Демакову С.А., Похолковой Г.В., Демаковой О.В., Омельянчуку Л.В., Волковой Е.И., Труновой С.А., Хегаю И.И., Матушкину Ю.Г., Бабенко В.Н., Келю А.Э., Хлебодаровой Т.М., Осиповой Л.П., Гундериной Л.И., Себелевой Т.Е., Истоминой А.Г., Лашиной В.В., Орловой Г.В., Гусельниковой Н.С., Елисафенко Е.А., Павловой С.В., Свиташеву С.К., Иванову С.В., Богдановой B.C., Протопопову А.И., Протопоповой М.В., Мечетиной Л.В., Перемыслову В.В., Лактионову П.П., Чинакову В.Д. Я очень признателен проф. И.Ф. Жимулеву за помощь в сборе коллекции линий с мутациями гена Tri. Отдельно хочу поблагодарить моих первых рецензентов Фурман Д.П. и Ромащенко А.Г., в значительной мере разделивших со мной труд по подготовке рукописи.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Катохин, Алексей Вадимович

ВЫВОДЫ

1. Построена молекулярная карта гена Tri D. melanogaster. За основу была взята геномная последовательность гена, состыкованная из просеквенированной ранее в секторе молекулярной нейрогенетики транскрибируемой области и из установленной в представленной работе первичной структуры 5' области. Относительно нее были выровнены все представленные в базах данных относящиеся к гену Tri последовательности кДНК, EST и последовательности, фланкирующие встройки Р-элементов. В результате установлена экзон-интронная организация гена Tri, определены места возможного альтернативного сплайсинга и выявлены четыре новых встройки Р-элементов.

2. Проведен анализ спектра транскриптов гена Tri D. melanogaster с помощью нозерн-блот гибридизации: выявлены органоспецифические различия в спектрах транскриптов у мух (голова - тело) и у личинок (слюнные железы -мозговой ганглий) , позволяющие предположить наличие нейроспецифических аспектов в экспрессии гена.

3. Впервые показано, что состав транскриптов гена Tri изменяется в зависимости от температуры содержания личинок дрозофил: в слюнных железах при 14°С спектр транскриптов представлен тремя транскриптами, а при 25°С - одним размером около 2.0 тн; в мозговых ганглиях при 14°С спектр транскриптов представлен двумя транскриптами, а при 25°С - одним размером примерно 2.5 тн; при тепловом шоке в обоих органах в спектре остается один транскрипт размером около 2.0 тн.

4. Исследованы фенотипические проявления мутаций гена Tri D. melanogaster, ( шести встроек Р-элементов и двух делеций), с помощью анализа межаллельных отношений составлена карта комплементации этих мутаций и выявлены случаи частичной межаллельной комплементации; установлены фазы летальности мутаций гена Tri у гомозигот и всех компаундов.

5. Проведен контекстный анализ 5' области гена Tri D. melanogaster. представлено сравнение результатов распознавания промотора и функциональных элементов, характерных для промоторных областей. Впервые проведено комплексное исследование промоторных и нукпеосомных свойств ДНК в 5' области гена, на основании чего выдвинуто предположение о расположении промотора гена Tri.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Во-вторых, представленное в работе исследование условий формирования спектров транскриптов гена Tri показало, насколько использование экзон-специфических проб информативнее при выявлении особенностей сложной транскрипционной активности гена, характеризующейся наряду с уже описанной стадияспецифичностью еще и нейроспецифичностью и зависимостью от условий внешней среды.

В-третьих, соотнесение нанесенных на представленную молекулярную карту мест встроек Р-элементов с представленными данными о фенотипическом проявлении этих мутаций позволяет наметить дальнейшие исследования функциональной значимости отдельных районов в интронах и в 5' области гена Tri.

Наконец, картирование с помощью EST последовательностей регуляторной области гена Tri предоставляет широкие возможности для исследования тонкого строения и функции регуляторных районов гена. Представленный контекстный анализ этих районов позволил более точно указать месторасположение промотора, управляющего синтезом подавляющего большинства известных на настоящий момент транскриптов гена, и, как следствие, определил фокус в намечающихся исследованиях регуляторных элементов, через связывание с которыми осуществляется регуляция гена Tri со стороны белковых факторов (например, обнаруженные элементы для связывания фактора теплового шока).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Катохин, Алексей Вадимович, Новосибирск

1. Баричева Э.М., Катохин А.В. и Перелыгина Л.М. Особенности экспрессии гена, кодирующего транскрипционный фактор GAGA D. melanogaster: тканеспецифичность и зависимость от температуры. / / Докл. Акад. Наук РАН. 1997. Т.355. С.827-830.

2. Блинов А.Г. Выделение ДНК фага X. / / Методы молекулярной генетики и генной инженерии. Новосибирск: Наука. 1990. С.7-9.

3. Богачев С.С. и Чикаев Н.А. Метод получения делеций с использованием экзонукпеазы III и S1 нукпеазы. // Методы молекулярной генетики и генной инженерии. Новосибирск: Наука. 1990. С. 103-107.

4. Вингендер Э. Классификация транскрипционных факторов эукариот. / / Мол Биол. 1997. Т. 31.№4. С.584-600.

5. Жимулев И.Ф. Гетерохроматин и эффект положения гена. // Новосибирск: Наука, 1993. 490 с.

6. Кокоза В.А., Баричева Э.М. и Катохин А.В. Клонирование и цитогенетическая локализация эволюционно-консервативных, экспрессирующихся в головах имаго геномных последовательностей D. melanogaster. II Генетика. 1991 .Т.27. С.51-60.

7. Мазин А.В., Кузнеделов К.Д., Краев А.С. и др. Методы молекулярной генетики и генной инженерии. Новосибирск: Наука. 1990. 248с.

8. Маниатис Т.,Фрич Э. и Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии . II Молекулярное клонирование. М.: Мир. 1984. 480 с.

9. Мглинец В.А. Гомеозисные мутации у дрозофилы и проблемы генетики развития. / / Дрозофила в экспериментальной генетике. 1978. Новосибирск: Наука. 1978. С.41-71.

10. Наякшин A.M. Трансформация Е.coli плазмидной ДНК. // Методы молекулярной генетики и генной инженерии. Новосибирск: Наука. 1990. С.39-40.

11. Перелыгина Л.М., Баричева Э.М., Себелева Т.Е., Катохин А.В., Соловьева И.В. и Кокоза В.А. Изучение особенностей экспрессии последовательностей Nc18A, Nc34CD, Nc70F и Nc98F из генома Drosophila melanogaster. 11 Генетика. 1992. Т.28. С.98-103.

12. Холодилов Н.Г. Выделение плазмидной ДНК методом щелочного лизиса. / / Методы молекулярной генетики и генной инженерии.Новосибирск:Наука. 1990.С.9-10.

13. Agianian В.Leonard K.,Bonte Е., et al. The glutamine-rich domain of the Drosophila GAGA factor is Necessary for amyloid fibre formation in vitro, but not for chromatin remodeling. // J. Mol. Biol. 1998. V.285. P.527-544.

14. Arkhipova I. Promoter elements in Drosophila melanogaster revealed by sequence analysis. // Genetics. 1995. V. 139. P. 1359-1369.

15. Armstrong J.A. and Emerson B.M. Transcription of chromatin: these are complex times. // Curr.Opin.Gen.Devel. 1998. V.8. P.165-172.

16. Arnone M.I. and Davidson E.H. The hardwiring of development: organization and function of genomic regulatory systems. // Development. 1997. V. 124. P. 1851-1864.

17. Ayer S. and Benyajati C. Conserved enhancer and silencer elements responsible for differential Adh transcription in Drosophila cell lines. // Mol. Cell. Biol. 1990. V.10. P.3512-3523.

18. Bardwell V.J. and Treisman R. The POZ domain: a conserved protein-protein interaction motif. // Genes Dev. 1994. V.8. P. 1664-1677.

19. Baricheva E.M., Katokhin A.V. and Perelygina L.M. Expression of Drosophila melanogaster gene encoding transcription factor GAGA is tissue-specific and temperature-dependent. // FEBS Letters. 1997. V.414. P.285-288.

20. Benyajati C.,Ewel A.,McKeon J. et al. Characterization and purification of Adh distal promoter factor 2, Adf-2, a cell-specific and promoter-specific repressor in Drosophila. II Nucl. Acids Res. 1992. V.20. P.4481-4489.

21. Benyajati C.,Mueller L.,Xu N. et al. Multiple isoforms of GAGA factor, a critical component of chromatin structure. // Nucl. Acids Res. 1997. V.25. P.3345-3353.

22. Bermingham J.R.,Martinez-Arias A.,Petitt M.G. et al. Different patterns of transcription from the two Antennapedia promoters during Drosophila embryogenesis. / / Development. 1990. V.109. P.553-566.

23. Bhat K.M.,Farkas G.,Karch F. etal. The GAGA factor is required in the early Drosophila embryo not only for transcriptional regulation but also for nuclear division. / / Development. 1996. V. 122. P. 1113-1124.

24. Biggin M.D. and McGinnis W. Regulation of segmentation and segment identity by Drosophila homeoproteins: the role of DNA binding in functional activity and specificity. // Development. 1997. V. 124. P.4425-4423.

25. Biggin M.D. and Tjian R. Transcription factors that activate the Ultrabithorax promoter in developmentally staged extracts. // Cell. 1988. V.53. P.699-711.

26. Blackman R.K. and Meselson M. Interspecific nucleotide sequence comparisons used to identify regulatory and structural features of the Drosophila hsp82 gene. / / J.Mol.Biol. 1986. V.188. P.499-515.

27. Brown J.L. and Wu C. Repression of Drosophila pair-rule segmentation genes by ectopic expression of tramtrack. // Development. 1993. V. 117. P.45-58.

28. Bucher P. Weight matrix descriptions of four eukaryotic RNA polymerase II promoter elements derived from 502 unrelated promoter sequences. // J.Mol.Biol. 1990. V.212. P.563-578.

29. Burke T.W. and Kadonaga J.T. Drosophila TFIID binds to a conserved downstream1.lbasal promoter element that is present in many TATA-box-deficient promoters. / / Genes Dev. 1996. V. 11. P.711 -724.

30. Burke T.W. and Kadonaga J.T. The downstream core promoter element, DPE, is conserved from Drosophila to humans and is recognized by TAFn60 of Drosophila. // Genes Dev. 1997. V.11. P.3020-3031.

31. Cairns B.R. Chromatin remodeling machines: similar motors, ulterior motives. // Trends Biol. Sci. 1998. V.23. P. 19-24.

32. Cavalli G. and Paro R. The Drosophila Fab-7 chromosomal element conveys epigenetic inheritance during mitosis and meiosis. // Cell. 1998. V.93. P.505-518.

33. Cavarec L.,Jensen S.,Casella J.-F. et al. Molecular cloning and characterization of a transcription factor for the copia retrotransposon with homology to the BTB-containing Lola neurogenic factor. // Mol. Cell. Biol. 1997. V.17. № 1. P.482-494.

34. Chen W.,Zollman S.,Couderc J.-L. and Laski F.A. The BTB domain of brie a brae mediates dimerization in vitro. // Mol. Cell. Biol. 1995. V.15. №6. P.3424-3429.

35. Chiwalla V.,Jane E.P. and HarteP.J. The Drosophila trithorax protein binds to specific chromosomal sites and is co-localized with Polycomb at many sites. / / EMBO J. 1995. V.14. P.2056-2065.

36. Chomchinski P. and Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidium thiocyanate-phenol-chloroforme extraction. // Anal.Biochem. 1987. V.162. P.156-159.

37. Chung Y.-T. and Keller E.B. Positive and negative regulatory elements mediating transcription from the Drosophila melanogaster actin 5C distal promoter. // Mol.Cell.Biol. 1990. V.10. P.6172-6180.

38. Chung Y.-T. and Keller E.B. The TATA-dependent and TATA-independent promoters of the Drosophila melanogaster actin 5C-encoding gene. // Gene. 1991 .V. 106. P.237-241.

39. Colgan D.F. and Manley J.L. Mechanism and regulation of mRNA polyadenylation. / / Genes Dev. 1997. V.11. P.2755-2766.

40. Corces V.G. Keeping enhancers under control. // Nature. 1995. V.376. P.462-463.

41. Csink AK and Henikoff S. Something from nothing: the evolution and utility of satellite repeats. // Trends Genet. 1998. V.14. P. 200-204.

42. DiBello P.R.,Withers D.A.,BayerC.A., et al. The Drosophila Broad-Complex encodes a family of related proteins containing zinc fingers. // Genetics. 1991. V. 129. P.385-397

43. Dorn R.,Szidonya J.,Korge G., et al. P transposon-induced dominant enhancer mutations of position-effect variegation in Drosophila melanogaster. II Genetics. 1993. V.133. P.279-290.

44. Eisen J.A.,Sweder K.S. and Hanawalt P.C. Evolution of the SNF2 family of proteins: subfamilies with distinct sequences and functions. 11 Nucl. Acids Res. 1995. V.23 P.2715-2723

45. Elfring L.K.,Daniel C.,Papoulas 0., et al. Genetic analysis of brahma: the Drosophilahomolog of the yeast chromatin remodeling factor SWI2/SNF2. // Genetics. 1998. V.148. P.251-265.

46. EspinasM.L.,Jimenez-Garcia E.,VaqueroA. et al., the N-terminal POZ domain of GAGA mediates the formation of oligomers that bind DNA with high affinity and specificity. 11 J.Biol.Chem. 1999. V.274. P. 16461-16469.

47. Farkas G.,Gausz J.,Galloni M.,Reuter G.,Gyurkovics H. and Karch F. The Trithorax-like gene encodes the Drosophila GAGA factor. // Nature. 1994. V.371. P.806-808.

48. Felsenfeld G. Chromatin unfolds. // Cell. 1996. V.86. P. 13-19.

49. Fernandes M.,Xiao H. and Lis J.T. Binding of heat shock factor to and transcriptional activation of heat shock genes in Drosophila // Nucl.Acids Res. 1995.V.23.P.4799-4804.

50. Fickett J.W. and Hatzigeorgiou A.G. Eukaryotic promoter recognition. // Genome Res. 1997. V.7. P.861-878.

51. Fletcher J.C.,D'Avino P.P. and Thummel C.S. A steroid-triggered switch in E74 transcription factor isoforms regulates the timing of secondary-response gene expression. II Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1997. V.94. P.4582-4586.

52. Fletcher J.C. and Thummel C.S. The Drosophila E74 gene is required for the proper stage- and tissue-specific transcription of ecdyson-regulated genes at the onset of metamorphosis. // Development. 1995. V.121. P. 1411-1421.

53. Galloni M.,Gyurkovitcs H.,Schedl P. and Karch F. The bluetail transposon: evidence for independent cis-regulatory domains and domain boundaries in the bithorax complex. // EMBO J. 1993. V.12. P. 1087-1097.

54. Gellon G. and McGinnis W. Shaping animal body plans in development and evolution by modulation of HOX expression patterns. // BioEssays. 1998. V.20. P. 116-125.

55. Georgel P.T.,Tsukiyama T. and Wu C. Role of histone tails in nucleosome remodeling by Drosophila NURF. 11 EMBO J. 1997. V.16. P.4717-4726.

56. Georgiev P. and Kozycina M. Interaction between mutations in the suppressor of Hairy wing and modifier of mdg4 genes of Drosophila melanogaster affecting the phenotype of gypsy-induced mutations. // Genetics. 1996. V. 142. P.425-436.

57. Gerasimova T.I.,Gdula D.A.,Gerasimov D.V. et al. A Drosophila protein that imparts directionality on chromatin insulator is an enhancer of position-effect variegation. / / Cell. 1995. V.82. P.587-597.

58. Gerasimova T.I. and Corces V.G. Polycomb and trithorax group proteins mediate the function of a chromatin insulator. // Cell. 1998. V.92. P. 511-521.

59. Gilmour D.S.,Thomas G.H. and Elgin S.C.R. Drosophila nuclear proteins bind to regions of alternating C and T residues in gene promoters. // Science. 1989.V.245. P. 14871490.

60. Giniger E.,Tietje K.,Jan L.Y. and Jan Y.N. lola encodes a putative transcription factor required for axon grouth and guidance in Drosophila. // Development. 1994.1. V. 120. P. 1385-1398.

61. Glaser R.L.Thomas G.H.,Siegfried E. et al. Optimal heat-induced expression of the Drosophila hsp26 gene requires a promoter sequence containing (CT)n • (GA) n repeats. // J.Mol.Biol. 1990. V.211. P.751-761.

62. Granok H., Leibovitch B.A., Shaffer C.D. and Elgin S.C.R. Chromatin. Ga-ga over GAGA factor. // Curr. Biol. 1995. V.5. P.238-241.

63. Greenberg A.J.,Yanowitz J.L. and Schedl P.D. GAGA factor's role in dosage compensation. // A. Dros. Res. Conf. 1999.V. 40. P.59.

64. Greenblatt J. RNA polymerase II holoenzyme and transcriptional regulation. // Curr. Opin. Cell Biol. 1997. V.9. P. 310-319.

65. Hagstrom K., Muller M. and Schedl P. Fab-7functions as a chromatin domain boundary to ensure proper segment specification by the Drosophila bithorax complex. / / Genes Dev. 1996. V.10. P.3202-3215.

66. Hagstrom K., Muller M. and Schedl P. A Polycomb and GAGA dependent silencer adjoins the Fab-7 boundary in the Drosophila bithorax complex. II Genetics. 1997. V.146. P. 1365-1380.

67. Han W.,Yu Y.,Su K., et al. A binding site for multiple transcriptional activators in the fushi tarazu proximal enhancer is essential for gene expression in vivo. // Mol. Cell. Biol. 1998. V.18. P.3384-3394.

68. Harris N.L. Genotator: A workbench for sequence annotation. / / Genome Research 1997. V.7. P.754-762.

69. Harrison S.D and Travers A.A. The tramtrack gene encodes a Drosophila finger protein that interacts with the ftz transcriptional regulatory region and shows a novel embryonic expression pattern. II EMBO J. 1990. V.9. P.207-216.

70. Henikoff S. Dosage-dependent modification of position-effect variegation in Drosophila. II BioEssays. 1996. V.18. P.401-409.

71. Hirose S. Chromatin remodeling and transcription. / /J. Biochem.1998. V. 124. P. 106064

72. Hoffmann A.,Oelgeschlager T. and Roeder R.G. Considerations of transcriptional control mechanisms: do TFIID-core promoter complexes recapitulate nucleosome-like functions? II Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1997. V.94. P.8928-8935.

73. Horowitz H. and Berg C.A. The Drosophila pipsqueak gene encodes a nuclear BTB-domain-containing protein required early in oogenesis. II Development. 1996. V. 122. P. 1859-1871.

74. Hsu T.,Gogos J.A., Kirsh S.A. and Kafatos F.C. Multiple zinc fingers forms resultingfrom developmentally regulated alternative splicing of a transcription factor gene. // Science. 1992. V.257. P.1946-1950.

75. Hu S.,Fambrough D.,Atashi J.R.,Goodman C.S. and Crews S.T. The Drosophila abrupt gene encodes a BTB-zinc finger regulatory protein that controls the specificity of neuromuscular connections. // Genes Dev. 1995. V.9. P.2936-2948.

76. Huet F., Ruiz C. and Richards G. Sequential gene activation by ecdyson in Drosophila melanogaster. the hierarchical equivalence of early and early late. / / Development. 1995. V.121. P.1195-1204.

77. Jackson S.P. and Tjian R. O-Glycosylation of eukaryotic transcription factors: implications for mechanisms of transcriptional regulation. // Cell.1988.V.55.P.125-133

78. Jimenez-Garcia E.,Vaquero A.,Espinas M.L. et ai, The GAGA factor of Drosophila binds triple-stranded DNA. JI J. Biol.Chem.1998.V.273.P.24640-24648.

79. Kadonaga J.T. Eukaryotic transcription: an interlaced network of transcription factors and chromatin-modifying machines. // Cell.1998.V. 92. P.307-313.

80. Karlin S. and Bürge C. Trinucleotide repeats and long homopeptides in genes and proteins associated with nervous system disease and development. / / Proc. Natl. Acad. Sei. USA 1996. V.93. P. 1560-1565.

81. Katsani K.R.,Hajibagheri N. and Verrijzer C.P. Co-operative DNA binding by GAGA transcription factor requires the conserved BTB/POZ domain and reorganizes promoter topology. // EMBO J. 1999. V.18. P.698-708.

82. Kaufman T.C.,Seeger M.A. and Olsen G. Molecular and genetic organization of the Antennapedia gene complex of Drosophila melanogaster. / / Adv Genet. 1990. V.27. P.309-362.

83. Kennison J.A. Transcriptional activation of Drosophila homeotic genes from distant regulatory elements. // Trends Genet. 1993. V.9. P.75-79.

84. Kerrigan L.A.,Croston G.E.,Lira L.M. and Kadonaga J.T. Sequence-specific transcriptional antirepression of the Drosophila Krüppel gene by the GAGA factor. // J. Biol. Chem. 1991. V.266. P.574-582.

85. Kingston R.E.Bunker C.A. and Imbalzano A.N. Repression and activation by multiprotein complexes that alter chromatin structure. / / Genes Dev. 1996. V.10. P.905-920

86. Kidd S. Characterization of the Drosophila cactus locus and analysis of interactions between cactus and dorsal proteins. // Cell. 1992. V. 71. P. 623-635.

87. Klug A. and Schwabe J.W. Protein motifs 5. Zinc fingers. // FASEB J. 1995. V.9. P.597-604

88. Knudsen S. Promoter2.0 : for the recognition of Pol II promoter sequences. / / Bioinformatics. 1999. V.15. P.354-361.

89. Kokoza V.A.,Baricheva E.M. and Katokhin A.V. conservative brain specific sequences of D. 1991. V.70. P.121-123.

90. Cloning and chromosomal localization of melanogaster. II Drosophila Inf.Serv.

91. Kokoza V., Perelygina L., Baricheva E., Katokhin A., Solovyeva I. and Sebeleva T. Molecular cloning and analysis of a set of evolutionary conserved neurogenes in Drosophila. II CSH Meeting on Mol. Neurobiology of Drosophila. 1991. P. 101 (abstract)

92. Kondrakhin Y.V.,Kel A.E.,Kolchanov N.A.,Romashchenko A.G. and Milanesi L. Eukaryotic promoter recognition by binding sites for transcription factors. // CABIOS. 1995. V.11. P. 477-488

93. Kuziora M.A. and McGinnis W. Different transcripts of the Drosophila Abd-B gene correlate with distinct genetic sub-functions. 11 EMBO J. 1988. V.10. P.3233-3244.

94. Q.,Wallrath L.L.,Granok H. and Elgin S.C.R. (CT)n (GA)n repeats and heat shock elements have distinct roles in chromatin structure and transcriptional activation of theDrosophila hsp26 gene. // Mol.Cell.Biol. 1993. V.13. P.2802-2814.

95. Q.,Wallrath L.L.,Emanuel P.A., et al. Insensitivity of the preset hsp26 chromatin structure to a TATA box mutation in Drosophila.l / J.Biol.Chem.1994.V.269.P.15906-11

96. Mace H.A.F.,Pelham H.R.B. and Travers A.A. Association of Si nuclease-sensitive structure with short direct repeats 5' of Drosophila heat shock genes. / / Nature. 1983. V.304. P.555-557.

97. Mackay J.P. and Crossley M. Zinc fingers are sticking together. // Trends Biol.Sci.1998. V.23. P. 1-4.

98. Martin C.H., Mayeda C.A., Davis C.A., etal. Complete sequence of the bithorax complex of Drosophila. II Proc. Natl. Acad. Sci. 1995. V.92. P.8398-8402.

99. Martinez-Balbas M.A.,Dey A.,Rabindran S.K. et al. Displacement of sequence-specific transcription factors from mitotic chromatin. / / Cell. 1995. V.83. P.29-38.

100. Martinez-Balbas M.A.,Tsukiyama T.,Gdula D. and Wu C. Drosophila NURF-55, a WD repeat protein involved in histone metabolism. // Proc. Natl. Acad. Sci. 1998. V.95. P. 132-137.

101. Mazina O.M.,Belyaeva E.S. and Zhimulev I.F. Cytogenetical analysis of 2B3-4-2B11 region of the X chromosome of Drosophila melanogaster. II Mol. Gen. Genet. 1991 .V.225. P99-105

102. McGinnis W. and Krumlauf R. Homeobox genes and axial patterning. // Cell. 1992. V.68. P. 283-302.

103. Mihaly J.,Hogga l.,Gausz J. et al. In situ dissection of the Fab-7 region of the bithorax complex into a chromatin domain boundary and a Polycomb-response element. // Development. 1997. V.124. P. 1809-1820.

104. Milanesi L.,Rogozin I.B. and D'Angelo D. WEBgene: interactive tools for prediction and analysis of protein-coding genes structure in Internet. / / Proc. 1st Int. Conf. Bioinform. Genome Reg. & Str., Novosibirsk. 1998. V.2. P.251-253.

105. Mironov A.A. and Gelfand M.S. Gene recognition using EST data: unexpectedly frequent alternative splicing of human genes. // Proc. 1st Int. Conf. Bioinform. Genome Reg. & Str., Novosibirsk. 1998. V.2. P.249-250.

106. Mironov A.A., Fickett J.W. and Gelfand M.S. Frequent alternative splicing of human genes. // Genome Res. 1999. V.9. P. 1288-1293.

107. Mizuguchi G.,Tsukiyama T.,Wisniewski J. and Wu C. Role of nucleosome remodeling factor NURF in transcriptional activation of chromatin. // Molec. Cell. 1997. V.1. P. 141-150.

108. Mount S.M.,Burks C.,Hertz G. et al. Splicing signals in Drosophila: intron size, information content, and consensus sequences. // Nucl. Acids Res. 1992. V.20. P.4255-4262.

109. Murakami K. and Takagi T. Gene recognition by combination of several gene-finding programs. II Bioinformatics. 1998. V.14. P.665-675.

110. Mutsuddi M. and Lakhotia S.C. Spatial expression of hsr-omega (93D) gene in different tissues of Drosophila melanogaster and identification of promoter element controlling its developmental expression. / / Dev.Genet. 1995. V. 17. P.303-311.

111. Nigg E.A. Nucleocytoplasmic transport: signals, mechanisms and regulation. // Nature. 1997. V.386. P.779-787.

112. Nightingale K.P.,Wellinger R.E., Sogo J.M. and Becker P.B. Histone acetylation facilitates RNA polymerase II transcription of the Drosophila hsp26 gene in chromatin. // EMBO J. 1998. V.17. P.2865-2876.

113. Neugebauer K.M. and Roth M.B. Transcription units as RNA processing units. // Genes Dev. 1997. V.11. P.3279-3285.

114. O'Brien T.,Hardin S.,Greenleaf A. and Lis J.T. Phosphorylation of RNA polymerase II C-terminal domain and transcriptional elongation. // Nature. 1994. V.370. P.75-77.

115. O'Brien T.,Wilkins R.C.,Giardina C. and Lis J.T. Distribution of GAGA protein on Drosophila genes in vivo. // Genes Dev. 1995. V.9. P. 1098-1110.

116. O'Connor M.B.,Binari R.,Perkins L.A. and Bender W. Alternative RNA products from the Ultrabithorax domain of the bithorax complex. / / EMBO J.1988.V.7.P.435-445.

117. O'Donnell K.H. and Wensink P.S. GAGA factor and TBF1 bind DNA elements that direct ubiquitous transcription of the Drosophila a1-tubulin gene. // Nucl. Acids Res. 1994. V.22. P.4712-4718.

118. Okada M. and Hirose S. Chromatin remodeling mediated by Drosophila GAGA factor and ISWI activates fushi tarazu gene transcription in vitro. // Mol.Cell.Biol. 1998. V.18. P.2455-2461.

119. Omichinski J.G.,Pedone P.V.,Felsenfeld G. et al. The solution structure of a specific GAGA factor-DNA complex reveals a modular binding mode. / / Nature Struct.Biol.1997. V.4. P.122-132.

120. Orenic T.V.,Slusarski D.C.,Kro!l K.L. and Holmgren R.A. Cloning and characterization of the segment polarity gene cubitus interruptus Dominant of Drosophila . / / Genes Dev. 1990. V.4. P. 1053-1067.

121. Ohtsuki S. and Levine M. GAGA mediates the enhancer blocking activity of the eve promoter in the embryo. // Genes Dev. 1998. V. 12. P.3325-3330.

122. Paro R. Propagating memory of transcriptional states. // Trends Genet. 1995. V.11. P.295-297

123. Patikoglou G. and Burley S.K. Eukaryotic transcription factor-DNA complexes. // Annu. Rev. Biophys.Biomol.Struct. 1997. V.26. P.289-325.

124. Pazin M.J. and Kadonaga J.T. SWI2/SNF2 and related proteins: ATP-driven motors that disrupt protein-DNA interaction? / / Cell. 1997. V.88. P.737-740.

125. Pedone P.V., Ghirlando R., Clore G.M. et al. The single Cys2-His2 zinc finger domain of the GAGA protein flanked by basic residues is sufficient for high-affinity specific DNA binding. // Proc. Nat. Acad. Sci. 1996. V.93. P.2822-2826.

126. Pedersen A.G.,Baldi P.,Chauvin Y. and Brunak S. the biology of eukaryotic promoter prediction a review. 11 Computers&Chemistry. 1999. V. 23. P. 191-207.

127. Perkins K.K., Dailey G.M. and Tjian R. In vitro analysis of the Antennapedia P2 promoter: identification of a new Drosophila transcription factor. // Genes Dev. 1988. V.2. P. 1615-1626.

128. Perutz M. Polar zippers: their role in human disease. // Prot.Sci.1994.V.3. P.1629-1637.

129. Perutz M. Glutamine repeats and neurodegenerative diseases: molecular aspects. / / Trends Biol. Sci. 1999. V.24. P. 58-63.

130. Pirrotta V. PcG complexes and chromatin silencing. // Cur. Opin. Gen. Dev. 1997. V.7. P.249-258

131. Pirrotta V. Polycombing the genome: PcG, trxG, and chromatin silencing. // Cell 1998. V.93. P.333-336.

132. Platero J.S.,Csink A.K.,Quintanilla A. and Henikoff S. Changes in chromosomal localization of heterochromatin-binding proteins during the cell cycle in Drosophila. / / J.Cell.Biol. 1998. V.140. P.1297-1306.

133. Prestridge D.S. SIGNAL SCAN: A computer program that scans DNA sequences for eukaryotic transcriptional elements. // CABIOS. 1991. V.7. P.203-206.

134. Prestridge D.S. Prediction of Pol II promoter sequences using transcription factor binding sites. // J.Mol. Biol. 1995. V.249.P.923-932.

135. Promega protocols and applications guide. / / Promega corporation. Second edition.1991.P.90-98.

136. Ptitsyn A.A.,Rogozin I.B.,Streletc V.B.,Milanesi L. and Kolchanov N.A AUTOGENE v1.0 the operating media for molecular genetic research. / / 1994. http://wwwicg.bionet.nsc.ru/SRCG/AUG/Title.html; ftp.bionet.nsc.ru; директория pub/biology/aug/manual.txt

137. Purnell B.A.,Emanuel P.A. and Gilmour D.S. TFIID sequence recognition of the initiator and sequences farther downstream in Drosophila class II genes. // Genes Dev. 1994. V.8. P.830-842.

138. Raff J.W., Kellum R. and Alberts B. The Drosophila GAGA transcriptional factor is associated with specific regions of heterochromatin throughout the cell cycle. II EMBO J. 1994. V.13. P.5977-5983.

139. Rand N.K. Crystal violet can be used to visualize DNA bands during gel electrophoresis and to improve cloning efficiency. /1 Technical Tips Online. Elsevier Science. 1996.

140. Read D., Nishigaki T. and Manley J.L. The Drosophila even-skipped promoter is transcribed in a stage-specific manner in vitro and contains multiple, overlapping factor-binding sites. // Mol. Cell. Biol. 1990. V.10. P.4334-4344.

141. Read D. and Manley J.L. Alternatively spliced transcripts of the Drosophila tramtrack gene encode zinc finger proteins with distinct DNA binding specificities. / / EMBO J.1992. V.11. P. 1035-1044.

142. Read C.M. and Driscoll P.C. GAGA over the nucleosome. // Nature Struct. Biol. 1997. V.4. P.87-99.

143. Reese M.G.,Harris N.L. and Eeckman F.H. Large scale sequencing specific neural networks for promoter and splice site recognition. / / Biocomputing: Proceed, of the

144. Pacific Symp. 1996.(ed. by L. Hunter and T.E. Klein, World Scientific Publishing Co) Singapore.

145. Ren B. and Maniatis T. Regulation of Drosophila Adh promoter switching by an initiator-targeted repression mechanism. // EMBO J. 1998. V.17. P. 1076-1086.

146. Reuter G. and Spierer P. Position effect variegation and chromatin proteins. / / BioEssays. 1992. V.14. P.605-612.

147. Robinson D.N. and Cooley L. Drosophila kelch is an oligomeric ring canal actin organizer. // J. Cell Biol. 1997. V.138. P.799-810.

148. Rorth P. A modular miswxpression screen in Drosophila detecting tissue-specific phenotypes. // Proc. Nat. Acad. Sci. 1996. V.93. P. 12418-12422.

149. Rosenberg U.B.,Schroder C.,Preiss A. et al. Structural homology of the product of Drosophila Kruppel gene with transcription factor IIIA. // Nature. 1986. V.319. P.336-339

150. Rudolph K.,Morganelli C. and Berger E.M. Regulatory elements near the Drosophila hsp 22 gene required for ecdysterone and heat shock induction. // Dev. Genetics 1991. V.12. P.212-218.

151. Quandt K.,Freeh K.,Karas H.,Wingender E. and Werner T. Matlnd and Matlnspector: new fast and versatile tools for detection of consensus matches in nucleotide sequence data. // Nucleic Acids Res. 1995. V. 23. P. 4878-4884.

152. Sandaltzopoulos R. and Becker P.B. Heat shock factor increases the reinitiation rate from potentiated chromatin templates. // Mol.Cell.Biol. 1998. V.18 P.361-367.

153. Sass G.L. and Henikoff S. Comparative analysis of position-effect variegation mutations in Drosophila melanogaster delineates the targets of modifiers. / / Genetics. 1998. V.148. P.733-741.

154. Satijn D.P.E. and Otte A.P. Polycomb group protein complexes: do different complexes regulate distinct target genes? // Biochim.Biophys.Acta. 1999. V. 1447.P. 1-16.

155. Schug J. and Overton G.C. "TESS: Transcription Element Search Software on the WWW". // 1997. Technical Report CBIL-TR--1001-v0.0, of the Computational Biology and Informatics Laboratory, School of Medicine, University of Pennsylvania.

156. Schwartz C. and Kornberg T.B. Getting from A to P in imaginal discs: reconstructing a transcriptional switch. // A. Conf. Dros. Res. 1997. V. 38. P. 157B.

157. Sharp P.A. Splicing of messenger RNA precursors. / / Science. 1986.V.235.P.776-771.

158. Sharp P.A. Split genes and RNA splicing. // Cell. 1994. V.77. P.805-815.

159. Shopland L.S., Hirayoshi K., Fernandes M. and Lis J.T. HSF access to heat shock elements in vivo depends critically on promoter architecture defined by GAGA factor, TFIID, and RNA polymerase II binding sites. // Genes Dev. 1995. V.9. P.2756-2769

160. Simon J. Locking in stable states of gene expression: transcriptional control during Drosophila development. // Curr.Opin.Cell Biol. 1995. V.7. P.376-385 .

161. Small S.,Blair A. and Levin M. Regulation of even-skipped stripe 2 in the Drosophila embryo. // EMBO J. 1992. V.11. P.4047-4057.

162. Soeller W.C., Poole S.J. and Kornberg T.B. In vitro transcription of the Drosophila engrailed gene. // Genes Dev. 1988. V.2. P.68-81.

163. Soeller W.C., Oh C.E. and Kornberg T.B. Isolation of cDNAs encoding the Drosophila GAGA transcription factor. // Mol. Cell. Biol. 1993. V. 13. P.7961-7970.

164. Sun F.-L. and Elgin S.C.R. Putting boundaries on silence. // Cell. 1999. V. 99. P.459-462.

165. Steger D.J. and Workman J.L. Remodeling chromatin structures for transcription: what happens to the histones? // Bioessays 1996. V.18. P.875-884.

166. Stott K.,Blackburn J.M.,Butler P.J.G. and Perutz M. Incorporation of glutamine repeats makes protein oligomerize: implications for neurodegenerative diseases. // Proc. Nat. Acad. Sci. 1995. V.92. P.6509-6513.

167. Strutt H., Cavalli G. and Paro R. Co-localization of Polycomb protein and GAGA factor on regulatory elements responsible for the maintenance of homeotic gene expression. II EMBO J. 1997. V. 16 P.3621-3632.

168. Talbot W.S.,Swyryd E.A. and Hogness D.S. Drosophila tissues with different metamorphic responses to ecdysone express different ecdyson receptor isoforms. / / Cell. 1993. V.73. P. 1323-1337.

169. Talerico M. and Berget S.M. Intron definition in splicing of small Drosophila introns. II Mol. Cell. Biol. 1994. V.14. P.3434-3445.

170. Tan S. and Richmond S.T. Eukaryotic transcription factors. I / Curr. Opin. Struct. Biol. 1998. V. 8. P.41—48.

171. Technical Bulletin № 159, 160 , Ambion. II http://www.ambion.com

172. Thummel C. The Drosophila E74 promoter contains essential sequences downstream from the start site of transcription. // Genes Dev. 1989. V.3. P.782-792.

173. Topol J.,Dearolf C.R.,Prakash K. and Parker C.S. Synthetic oligonucleotides recreate Drosophila fushi tarazu zebra-stripe expression. // Genes Dev. 1991. V.5. P.855-867.

174. Travers A. An engine for nucleosome remodeling. / / Cell. 1999.V. 96. P. 311-314.

175. Tripoulas N.A.,Hersperger E., La Jeunesse D. and Shearn A. Molecular genetic analysis of the Drosophila melanogaster gene absent, small or homeotic discs 1 (ash1). // Genetics. 1994. V. 137. P. 1027-1038.

176. Tsai C. and Gergen P. Pair-rule expression of the Drosophila fushi tarazu gene: a nuclear receptor response element mediates the opposing regulatory effects of runt and hairy. II Development. 1995. V. 121. P.453- 462.

177. Tsukiyama T.,Becker P.B. and Wu C. ATP-dependent nucleosome disruption at a heat-shock promotor mediated by binding of GAGA transcription factor. // Nature. 1994. V.367. P.525-532.

178. Tsukiyama T.,Daniel C.,Tamkun J., and Wu C. ISWI, a member of the SWI2/SNF2 ATPase family, encodes the 140 kDa subunit of the nucleosome remodeling factor. // Cell. 1995. V.83. P. 1021-1026.

179. Tsukiyama T. and Wu C. Purification and Properties of an ATP-dependent nucleosome remodeling factor. // Cell.1995. V.83. P.1011-1020.

180. Tsukiyama T. and Wu C. Chromatin remodeling and transcription. // Curr. Opin. Genet. Dev. 1997. V.7. P. 182-191.

181. Ura K.,Kurumizaka H.,Dimitrov S.,Almouzni G. and Wolffe A.P. Histone acetylation: influence on transcription, nucleosome mobility and positioning, and linker histone-dependent transcriptional repression. // EMBO J.1997.V.16. P.2096-2107.

182. Urness L.D. and Thummel C.S. Molecular analysis of a steroid-induced regulatory hierarchy: the Drosophila E74A protein directly regulate L71-6 transcription. // EMBO J.1995.V.14. P.6239-6246.

183. Varga-Weizs P.D. and Becker P.B. Chromatin-remodeling factors: machines that regulate? / / Cur. Opin. Cell Biol. 1998. V. 10. P. 346-353.

184. Varga-Weizs P.D.,Blank T.A. and Becker P.B. Energy-dependent chromatin accessibility and nucleosome mobility in a cell-free system. // EMBO J. 1995. V.14. P.2209-2216.

185. Varga-Weisz P.D.,Wi!m M. and Bonte E. et al. Chromatin-remodeling factor CHRAC contains the ATPases ISWI and topoisomerase II. // Nature. 1997. V.388. P.598-602.

186. Vinsent A.,0'Connel P.,Gray M. and Rosbash M. Drosophila maternal and embryo mRNAs transcribed from a single transcription unit use alternate combinations of exons. // EMBO J. 1984V.3. P.1003-1013.

187. Wakimoto B.T. Beyond the nucleosome: epigenetic aspects of position-effect variegation in Drosophila. II Cell 1998. V.93. P.321-324.

188. Wall G.,Varga-Weisz P.D.,Sandaltzopoulos R. and Becker P.B. Chromatin remodeling by GAGA factor and heat shock factor at the hypersensitive Drosophila hsp26 promoter in vitro. II EMBO J. 1995. V.14. P. 1727-1736.

189. Wallrath L.L. Unfolding the mysteries of heterochromatin. // Curr.Opin.Genet. Devel.1998. V.8. P. 147-153.

190. Wallrath L.L. and Elgin S.C.R. Position effect variegation in Drosophila is associated with an altered chromatin structure. 11 Genes Dev. 1995. V.9. P.1263-1277.

191. Walter J., Dever C.A. and Biggin M.D. Two homeo domain proteins bind with similar specificity to a wide range of DNA sites in Drosophila embryos. // Genes Dev. 1994. V.8. P. 1678-1692.

192. Warrick J.M.,Paulson H.L.,Gray-Board G.L. et al. Expanded polyglutamine protein forms nuclear inclusions and causes neural degeneration in Drosophila. / / Cell. 1998. V.93. P.939-949

193. Weber U.,Siegel V. and Mlodzik M. pipsqueak encodes a novel nuclear protein required downstream of seven-up for the development of photoreceptors R3 and R4. // EMBO J. 1995. V.14. P.6247-6257.

194. Weber J.A.,Taxman D.J.,Lu Q. and Gilmour D.S. Molecular architecture of the hsp70 promoter after deletion of the TATA box or the upstream regulation region. // Mol.Cell. Biol. 1997. V.17. P.3799-3808.

195. Wilkins R.C. and Lis J.T. Dynamics of potentiation and activation: GAGA factor and its role in heat shock gene regulation. // Nucl. Acids Res. 1997. V.25. P.3963-3968.

196. Wilkins R.C. and Lis J.T. GAGA factor binding to DNA via single trinucleotide sequence element. // Nucl. Acids Res. 1998. V.26. P.2672-2678.

197. Wilkins R.C. and Lis J.T. DNA distortion and multimerization: novel functions of the glutamine-rich domain of GAGA factor. // J. Mol.Biol. 1999. V.285. P.515-525.

198. Wolff R.A and Hull R. A rapid and easy method for DNA recovery from agarose gels using Wizard minicolumns. II Trends Genet. 1996. V.12. P.339-340.

199. Wolffe A.P.and Pruss D. Targeting chromatin disruption: Transcription regulators that acetylate histones. // Cell. 1996. V.84. P.817-819.

200. Xiong W.-C. and Montell C. tramtrack is a transcriptional repressor required for cell fate determitation in the Drosophila eye. // Genes Dev. 1993. V.7. P. 1085-1096.

201. Yarfitz S., Provost N.M. and Hurley J.B. Cloning of a Drosophila melanogaster guanine nucleotide regulatory protein beta-subunit gene and characterization of its expression during development. // Proc.Natl.Acad.Sci.U S A. 1988. V.8. P.7134-7138.

202. Zhang M.Q. Identification of human core-promoters in silico. II Genome Res. 1998. V.8. P.319-326.

203. Zharkikh A.,Rzhetsky A.,Morozov P. et al. VOSTORG: package of microcomputer programs for sequence analysis and phylogenetic trees construction. / /Gene. 1991 .V. 101 .P.251 -254.

204. Zink D. and Paro R. Drosophila polycomb-group regulated chromatin inhibits the accessibility of trans-activator to its target DNA. // EMBO J. 1995. V.14. P.5660-5671.

Информация о работе

Катохин, Алексей Вадимович
кандидата биологических наук
Новосибирск, 2000
ВАК 03.00.15

Диссертация

Исследование структуры и функции гена Trithorax-like Drosophila melanogaster - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы