Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Молекулярно-генетическая характеристика мутаций гена Trithorax-like и их влияние на оогенез Drosophila melanogaster

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Молекулярно-генетическая характеристика мутаций гена Trithorax-like и их влияние на оогенез Drosophila melanogaster"

На правах рукописи УДК 575 224 577 21 591 3 595 773 4

а л

У

JP

„У

if

ОГИЕНКО АННА АЛЕКСАНДРОВНА

МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МУТАЦИЙ ГЕНА TRITHORAX-LIKE И ИХ ВЛИЯНИЕ НА ООГЕНЕЗ DROSOPHILA MELANOGASTER

Генетика - 03 00 15

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

0030655ЭВ

Новосибирск, 2007

003065596

Работа выполнена в лаборатории эволюционной биологии клетки, Института цитологии и генетики СО РАН, г Новосибирск

Научный руководитель

кандидат биологических наук Баричева Элина Михайловна, Институт цитологии и генетики СО РАН, г Новосибирск

Официальные оппоненты

доктор биологических наук, профессор

Серов Олег Леонидович, Институт цитологии и генетики СО РАН, г Новосибирск

кандидат биологических наук, Гусаченко Анна Михайловна, Новосибирский государственный университет, г Новосибирск

Ведущее учреждение

Институт физиологии им И П Павлова РАН, г Санкт-Петербург

Защита диссертации состоится «3» октября 2007 г на утреннем заседании диссертационного совета Д - 003 011 01 в Институте цитологии и генетики СО РАН в конференц-зале института по адресу 630090, г Новосибирск, проспект Лаврентьева, 10, т/ф (383)333-12-78, е-пш! ётоуС^йЬюпе! пбс ги

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института цитологии и генетики СО РАН

Автореферат разослан «_» августа 2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

АД Груздев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Оогенез представляет собой сложный, контролируемый скоординированным действием большого числа генов, многоэтапный процесс, результатом которого является формирование зрелой яйцеклетки Изучение оогенеза - одна из приоритетных задач современной биологии и медицины Несмотря на то, что уже известны многие гены, контролирующие этот процесс, в настоящее время ведутся интенсивные поиски новых генов и особенно комплексов взаимодействующих генов, участвующих в его регуляции Данная работа посвящена изучению роли гена Trithorax-like (Tri) в оогенезе Drosophüa melanogaster Ген Tri кодирует многофункциональный белок GAGA, одной из основных функций которого является регуляция экспрессии генов Наиболее хорошо изучена роль этого белка в ходе эмбриогенеза О функциональной значимости белка GAGA в ходе оогенеза дрозофилы ранее можно было судить только на основании косвенных данных Было известно, что продукты гена Tri, активно экспрессирующегося в яичниках взрослых мух, накапливаются в растущем ооците и необходимы для развивающегося эмбриона Однако при анализе ранее известных 7>/-мутантов и генетических мозаиков не было выявлено никаких морфологических нарушений в структуре яичников и яйцевых камер Отсутствие прямых доказательств того, что ген Tri необходим для оогенеза дрозофилы, связано с тем, что в мировых коллекциях отсутствовали мутации, позволяющие проводить подобного рода исследования В данной работе были получены и охарактеризованы новые гипоморфные мутации гена Tri, которые позволите провести всесторонний анализ влияния гена Tri на оогенез дрозофилы Белок GAGA требуется для обеспечения экспрессии множества генов дрозофилы, поэтому полученные в работе данные позволяют выявить не только участие самого гена Tri в ходе оогенеза, но и ряд предполагаемых, ранее не описанных в литературе, генов-мишеней белка GAGA, участвующих в контроле оогенеза Результаты исследования оогенеза дрозофилы имеют фундаментальное значение для выяснения причин стерильности насекомых, а данные о формировании актиновых филаментов и миграции клеток могут быть использованы в исследованиях, проводимых на других модельных объектах

Цели и задачи" работы состояли в изучении роли гена Tri и кодируемого им белка GAGA в оогенезе D melanogaster В связи с этим были поставлены следующие задачи-

1 Получить новые гипоморфные мутации гена Tri, влияющие на оогенез дрозофилы, и провести их картирование,

2 Провести анализ влияния вновь полученных мутаций на экспрессию гена Tri как на уровне мРНК, так и на уровне белка,

3 Исследовать влияние этих мутаций на оогенез дрозофилы,

4 Изучить изменение фертильности и морфологии яичников мутантов в зависимости от уровня экспрессии гена Tri

Научная новизна работы

Получены и охарактеризованы новые гипоморфные мутации гена Tri, в разной степени снижающие экспрессию гена Полученные мутации явились уникальным инструментом, позволившим впервые провести детальное исследование влияния гена Tri на оогенез дрозофилы

Впервые показано, что изменение экспрессии гена Tri приводит к изменению структуры яичников мух Нарушения выявляются как в овариолах, так и в отдельных яйцевых камерах Установлено, что 7>/-мутации вызывают изменение числа половых клеток (питающих и ооцитов) в яйцевых камерах по сравнению с нормой Впервые у 7И-утантов выявлены дефекты в формировании стадиоспецифических цитоплазматических актиновых филаментов в питающих клетках на поздних стадиях развития яйцевой камеры В работе впервые описано нарушение в функционировании соматических клеток у Tri мутантов На поздних стадиях развития яйцевой камеры у мутантов нарушается миграция бордюрных и центрипетальных клеток Дефекты в формировании цитоплазматических актиновых филаментов и в функционировании соматических клеток приводят к нарушению процесса переноса цитоплазмы питающих клеток в ооцит и, следовательно, к прекращению роста ооцита Положения, выносимые на защиту

В результате проведенного в данной работе исследования было установлено, что нарушение в экспрессии белка GAGA является причиной выявленных дефектов в ходе оогенеза мутантов Установлено, что все анализируемые Trl-мутанты характеризуются однотипными, но проявляющимися в разной степени нарушениями морфологии яичников Степень проявления нарушений коррелирует с уровнем снижения транскрипции гена Tri в яичниках Наиболее сильные нарушения зарегистрированы для мутантов Шза, у которых значительно снижен уровень экспрессии гена Tri в яичниках У мутантов Trl3ú2fex> и Trf"82, характеризующихся незначительными изменениями экспрессии гена, степень проявления дефектов значительно меньше Введение трансгенных конструкций в геном мутантов, обеспечивающих дополнительную экспрессию кДНК гена Tri, приводит к восстановлению фертильности самок и морфологии их яичников, что свидетельствует о том, что именно изменение в экспрессии гена Tri является причиной выявленных нарушений в оогенезе мутантов

Научно-практическая значимость работы Результаты данной работы способствуют расширению фундаментальных знаний о процессе оогенеза насекомых Материалы данной диссертационной работы могут быть использованы в курсах лекций для студентов биологических и медицинских факультетов

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, четырех глав (обзор литературы, материалы и методы, результаты, обсуждение), выводов и списка литературы Работа изложена на 122 страницах печатного текста, содержит 7 таблиц и иллюстрирована 41 рисунком В списке литературы приведен 201 источник

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Линии D. melanogaster описаны в справочнике (Lindsley, Zimm, 1992), базе данные FlyBase (www Flybase org), а также в статьях (Федорова и др, 2006, Огиенко и др, 2006)

Морфологический анализ яичников проводили, как описано в статье (Огиенко и др , 2006)

Иммунохимическое окрашивание органов дрозофилы для детекции на флуоресцентном и лазерном сканирующем микроскопах проводилось согласно (Xue, Cooley, 1993), с некоторыми модификациями Антитела против белка GAGA были любезно предоставлены профессором В Пирротта (V Pirrota) (Женевский Университет, Швейцария) (Poux et al, 2001)

Окрашивание яичников дрозофилы с помощью фаллоидина для детекции на флуоресцентном и лазерном сканирующем микроскопах проводили, как описано в статье (Guild et al, 1997)

Детекция апоптоза проводилась по методике, описанной в статье (Foley, Cooley, 1998)

Нозерн-блот гибридизация проводилась по методике Бурнета (Burnett, 1997) В качестве зондов для гибридизации использовали (Р32) - меченые фрагменты кДНК гена Trl (экзоны 2, 3 и 4) и гена гр119

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

1. Новые гипоморфные мутации гена Trithorax-like.

В ходе работы был проведен анализ новых гипоморфных мутаций гена Trithorax-like (Tri) -Trl36i, Trlm(ex> и ТгГ82 Мутации Tri362, Trl362<ex> были получены автором, а мутация TrF"82 - выделена в Лаборатории молекулярной биологии Института фундаментальных исследований (г Бомбей, Индия) MB Волошиной Все три мутации затрагивают 5'-регуляторную область гена Tri (рис 1) Мутация Tri362 связана с внедрением Р(7ас^-транспозона в прямой ориентации в 5'- некодирующую область гена (в позицию 2979) Позиции здесь и далее указаны в соответствии с последовательностью GenBank #AJ225042 (Катохин и др, 2001) К транспозону прилегает делеция размером 97 п н (29793076), удаляющая два первых сайта инициации транскрипции, используемых в яичниках (позиции 3009 и 3065 по ДА Карагодину) Мутация Trl362{) несет такую же делению, как и аллель Tri362, однако Р-элемент отсутствует (рис 1) Проведенный в Лаборатории эволюционной биологии клетки молекулярный анализ мутации ТгГ82 позволил сделать заключение, что мутация ТгГ82 обусловлена внедрением Р-элемента размером 1,4 т п н в 5'-некодирующую область гена Tri, в позицию 2997 В линии, несущей данную мутацию, не обнаружено никаких дополнительных изменений в гене Tri, т е в ней сохранены все пять сайггов инициации транскрипции (рис 1)

Самки, несущие мутации Tri и Tri <ех), стерильны как в гомозиготном состоянии, так и в сочетании с нуль-аллелем гена - мутацией TrlR8S У мутантных самок ТгГ'82 сильно снижается фертильность гомозиготном состоянии, а в

сочетании с нуль-аллелем гена (Тг1т) они являются полностью стерильными Все мутангные самки откладывают значительно меньшее, по сравнению с нормой, количество яиц Яйца значительно меньше по размеру, чем в норме, и имеют укороченные дорзальные выросты хориона Размер яиц составляет 320350 мкм у Гг/^-мутантов, 320-400 мкм у ТгГ82 и 350-420 мкм у Тг1ш<ех\ что значительно меньше нормы, где размер яйца составляет 500 мкм.

pOaW

Tri

362

Tri

362(ех)

Tri

еп82

П

И

П- г

! ............. I ......

г Г

Jr.

p—V

iL

iL

Рис. 1 Мутации, затрагивающие 5'-область гена Tri Положение мутаций показано относительно сайтов инициации транскрипции гена Tri в яичниках (по ДА Карагодину, неопубликованные данные) Треугольниками показаны места встройки Р-элементов, стрелка внутри треугольников указывает ориентацию транспозонов Скобками указана делеция, пунктирными стрелками - удаляемые мутациями сайты инициации транскрипции

Несмотря на то, что все мутанты в гомозиготном состоянии доживают до стадии имаго и при этом не имеют заметных фенотипических отклонений, они все же характеризуются пониженной жизнеспособностью Жизнеспособность трансгетерозигот Trl362/Trlm снижается при 25°С на 18%, а при 29°С на 43% по сравнению с контролем TrlmsIOregon R. Жизнеспособность особей Trli62fex)/Trlm и Trf"b2/Trlms снижается на 14% при 25°С и на 20% при 29°С

2. Анализ экспрессии гена Tri у новых гипоморфных мутаций.

Для выяснения причин стерильности самок исследуемых Tri мутантов был проведен анализ транскрипции гена Tri в яичниках с помощью Нозерн-блот-гибридизации Как показано на рис 2, в яичниках имаго дикого типа наблюдается высокий уровень транскрипции гена Tri В РНК, выделенной из гонад взрослых самок дикого типа, выявляется один мажорный транскрипт размером 2 4 т п н и три минорных транскрипта большего размера

В РНК из яичников самок Тгг выявляется только один транскрипт размером 3 Т.П.Н., а суммарное количество мРНК гена Tri снижено как минимум в 10 раз, по сравнению с диким типом (рис. 2). Транскрипция гена Tri в яичниках гомозиготных ТгГ"82 мутантных самок снижена на треть по сравнению с нормой (рис. 2), тогда как в яичниках 7W3"fe*J-мутантов экспрессия гена практически не отличается от нормы. У мутантов TrfnS~ к Tri 11 в РНК, выделенной из

яичников, присутствуют все варианты транскриптов, обнаруживаемые в норме.

f

«/ V V

№ - 4 4

^ Ш грИ9

Рис. 2. Анализ трннскрипиии гена Tri у мутантов, Нозерн-бяат, содержащий суммарную PIIK, bí>iделенную из яичников гомозигот Trf"*7, ¡frí3 Tri*62, гетерозигот TrlM/TrlRS5 и мух дикого гигта (Oregon R). Стрелкой указан единственный транскрипт, выявляемый в яичниках мутантов Tri362. Внизу показана гибридизация этого же блоха с зондом грИ9 в качестве контрода нанесения РНК.

У мутантов Tri362, для которых было продемонстрировано значительное снижение уровня транскрипции гена Tri и яичниках, были обнаружены значительные нарушения в распределении белка GAGA в гонадах самок на разных стадиях развития (личинки 3-го возраста, предкуколки и имаго). В норме, в яйцевых камерах, покидающих гермарий, белок GAGA выявляется во всех типах половых (питающие клетки и ооцит) и соматических клеток (фолликулярные, интерфолликулярные, клетки терминального филамента и туники) (рис. 3 А-В). С ростом яйцевой камеры заметного снижения Количества белка GAGA ни а половых, ни в соматических клетках не наблюдалось. У Tri36'-мутантов в ядрах питающих клеток и ооците белок GAGA или не выявляется

вообще, или же выявляется в очень незначительных количествах (рис. 3 Г-Е), при этом данный белок отчетливо детектируется во всех типах соматических клеток (рис, 3 Л, Е). В яичниках гипоморфных мутантов Тг!30''"' и значительного снижения количества белка САОА обнаружено не было (рис. 4).

Рис. 3. Локализация белка GAGA в яичниках имаго дикого типа И мутантов Trl361, выявленная иммунохимическим окрашиванием с Применением антител против белка GAGA. А, Б, В - распределение белка GAGA в яичниках мух дикого типа. Г, Д, Е -распределение белка GAGA в яичниках мутанта ых мух. А - локализация белка GAGA в о вар иоле, состоящей и i герм ария (гер) и ряда фолликулов. Б - белок GAGA локализуется в питающих клетках (пк) и в клетках фолликулярного эпителия (фк) В -локализация белка GAGA в интерфолликулярных клетках (ифк) и Р клетках туники (кт). Д Е - белок GAGA не выявляется а цнтающнх клетках при этом выявляется в кликах фолликулярного эпителия, интерфолликулярных клетках и в клетках туники. Увеличение х20 {А, Б, Г, Д), хЮО (В, Е).

Рис. 4. Распределение GAGA белка у гипоморфных мутантов Тг}Ш(ех> и Trf"s>. А - Trl3"M, G - ТгГп. Масштаб - 100 дам.

3. Влияние мутаиин гена Tri на оогснез дрозофилы.

В результате про веде иного анализа мутантов было установлено, что самки, несущие различные мутаиии Tri, характеризуются однотипными, но проявляющимися в разной степени нарушениями морфологии яичников, У них нарушена структура как овариол а целом, так и отдельных яйцевых камер расположенных внутри овариолы, При этом степень проявления нарушений коррелирует с уровнем снижения транскрипция гена Tri в яичниках. Наиболее сильные нарушения зарегистрированы для мутантов Tri3", У мутантов Triшт и TrF"82, для которых сильного снижения экспрессии показано не было, дефекты в ходе оогенеза выявляются, однако степень их проявления значительно меньше.

ЭЛ. Мутации гела Triприводят к нарушению структуры оварнол.

По числу овариол яичники всех анализируемых мутантных самок не отличаются от яичников самок дикого типа, однако морфология значительной части овариол у муташш изменена. В яичниках мух литого тага каждый фолликул отделен от двух соседних интерфолликулярными клетками (рис. 5 А). Большинство овариол у мутантов Tri361 характеризуются слитными фолликулами, между которыми невозможно выявить интерфолликулярные клетки (рис. 5 Б, В). У Trl362tel) и Trf"sl количество слитных фолликулов несколько ниже, чем у мутантов Tri361.

Рис. S, Морфология овариол яичников самок дикого типа и мутантов ТгГ . А -овариолу яичников дикого типа. Стрелками указаны иктер фолликулярные клетки. Б, В -овариолы яичников Trf62/Trlmi. Фолликулы неправильно расположены внутри овариолы. Увеличение х40 для (А) и х20 для (Б. В).

Причинами наблюдаемого фенотипа могут быть как дефекты в структуре и формировании интерфолликулярных клеток, как это было показано для Notch- и ZWia-мутантов (Grammont, Irvine, 2002), так и нарушения в функционировании туники, которая в норме предохраняет фолликулы ог слипания и, благодаря перистальтическим движениям, способствует продвижению растущих яйцевых камер внутри овариолы (Middleton et al.. 20Г16).

ЗЛ. Мутация гена Tri приводят к нарушению числа половых клеток в яйцевых камерах.

В корме одна яйцевая камера содержит 1 ооштт и 15 питающих, клеток (рис. 6 А). У Tri мутантов наблюдаются многочисленные яйцевые камеры с отличным от нормы числом питающих клеток (рис. 6 Б, В) и/или ооцитов. в некоторым случаях ооциг характеризуется неправильной локализацией внутри камеры. Частота яйцевых камер с ненормальным числом ооцитов у мутантов frt362 составляет около 2%. в то время как биполярные ооциты встречаются гораздо реже (-€,[%). Каждый на ооцитов в камерах, содержащих больше одного ооцита. обладает четырьмя каналами и кариосомой. 8 яичниках мух дикого типа не было зафиксировано камер с числом ооцитов больше одного, а также камер с биполярными ооцитамй.

В яичниках мутантов Tri362 и Tt-i'''lla> повышено число камер с отличным от нормы числом питающих клеток. У мутантов Tri3** 37% яйцевых камер имеют отличное от 15 число питающих клеток, а у мутантов Trl367tex> число таких камер составляет 20%. Причем в большинстве случаев камеры с неправильным числом питающих клеток располагаются последовательно друг за другом, У мутантов Trf"52 и Тг!1Х число питающих клеток практически не отличается от нормы. Следует отметить, нгго мутанты Tri'1" и 7yi3'u(ex) характеризуются отсутствием двух первых сайтов инициации транскрипции (рис. 1), используемых в яичниках, тогда как у мутантов Trf"s и Tri'2' все пять сайтов присутствуют в неизмененном виде. Два первых сайта инициации транскрипции, по-видимому, являются важными для формирования яйцевых камер с нормальным числом половых клеток.

Рис. 6. Морфология яичников мутантов Tri362. А - яйцевые камеры яичников дикого типа. Каждая яйцевая кайера содержит 15 питающих клеток и 1 ооциг. Б. 13 - яйцевые камеры мутавтов Tri36''/Tri Б - число гиггаюших клеток меньше 15 и otm сильно варьируют по размеру (стрелки). В - увеличено число питающих клеток п яйцевой камере. Увеличение х40.

А

Б

В

Нарушение числа питающих клеток в яйцевой,камере может быть следствием нарушения числа делений цистобласта в гермарии, в этом случае число питающих клеток в яйцевой камере должно составлять 2n-l (1, 3, 7,31 ), где п -число делений цистобласта Однако у ZW-мутантов яйцевые камеры с таким числом питающих клеток не встречаются, следовательно, цистобласт претерпевает четыре цикла деления, как это и должно быть в норме Тот факт, что в камерах с нарушенным числом питающих клеток ооцит содержит четыре кольцевых канальца, также свидетельствует о том, что яйцевая камера прошла четыре раунда деления Поэтому предполагается, что причиной нарушения числа питающих клеток у TW-мутантов является неправильное обволакивание 1б-клеточной цисты фолликулярными клетками в гермарии Это подтверждается тем, что у TW-мутантов камеры с нарушенным числом питающих клеток часто располагаются друг за другом и сумма питающих клеток в двух соседних яйцевых камерах с нарушенным числом трофоцитов кратна 15.

3.3. Мутации Tri приводят к увеличению числа камер с конденсированным хроматином в ядрах питающих клеток.

Было установлено, что яйцевые камеры с конденсированными ядрами трофоцитов встречаются у Tri362 мутантов значительно чаще (18%), чем в норме (3,8%), у более слабых голоморфных мутантов такие камеры встречаются несколько реже (ТгГ82 - 13 11%, Trl362(ex> - 5%) В яичниках всех проанализированных мутантов деградирующие камеры, в которых наблюдается конденсация хроматина питающих клеток, выявляются на стадиях 9-11 (рис 7 Б), тогда как в норме деградация яйцевых камер происходит на более ранней -восьмой стадии развития яйцевой камеры (рис 7 A) (King, 1956) У мутантов Tri аномальная конденсация хроматина часто охватывает сразу несколько соседних яйцевых камер (рис 7 В) Поскольку конденсация хроматина характерна для апоптирующих клеток, было проведено специфическое окрашивание яйцевых камер мутантов акридином оранжевым Полученные результаты свидетельствуют в пользу того, что камеры с аномальной конденсацией хроматина действительно подвергаются апоптозу

3.4. Мутации по гену Tri влияют на формирование цитоплазматических актиновых фнламентов в питающих клетках яичников на поздних стадиях развития яйцевой камеры.

Известно, что маленький размер яиц дрозофилы зачастую является следствием нарушения актин-зависимой фазы быстрого транспорта на последних стадиях развития яйцевой камеры Поскольку для TW-мутантов характерно уменьшение размера яиц, то был проведен анализ структуры актиновых филаментов в яйцевых камерах Tri мутантов, используя Alexa-конъюгированный фаллоидин

Было установлено, что до 10-й стадии развития яйцевой камеры актиновые филаменты у всех 7>/-мутантов не отличаются от таковых у дикого типа, однако значительные изменения были выявлены в структуре цитоплазматических

%

Рис. 7. Аномальная конденсация хроматина у ТН-мутантор. А - овариола яичников дикого типа, конденсация хроматина наблюдается в камере на стадии 8 (указана стрелкой) Б - оаардтола Тг11 -мутанта, конденсация хроматина в яйцевой камере, находящейся на 10-1! с гадин развития (указана стрелкой). В - аномальная конденсация Хроматина в нескольких соседних камерах у 7>/мутанта. Масштаб -100 шгм.

актиновых филаментов, формирующихся на 10-й стадии. Этот тип акгкновых филаментов формируется непосредственно перед фазой быстрого транспорта, их функция заключается в удержании ядер питающих клеток вдали от кольцевых канальцев во время фазы быстрого транспорта (рис. 8 В).

Наиболее сильные изменения, по сравнению с нормой (рис, 8 Б), наблюдались у TY13 - мутантов., у которых значите ль но уменьшено число цкто плазматически* актиновых филаментов, они неравномерно формируются в клетке и образуют пучки, которые выглядят изломанными по сравнению с HQptíoñ. В сочетании с

т. .3v ;

нуль-аллелем мутация Тгг приводит к полному исчезновению цито плазматических акта новых филаментов в питающих клетках (рис. S Д) В результате этого, во время фазы быстрого транспорта большие полиплоидные ядра питающих клеток не удерживаются в центре клеток, как это наблюдается в норме (рис. 8 В), а под давлением, вызванным сокращением кортикального актишвого слоя, попадают в кольцевые каналы и блокируют дальнейший ток цитоплазмы из питающих клеток в ооиит (рис. 8 Г, Е). Это приводит к тому, что содержимое питающих клеток не может быть вовремя и полностью перенесено в растущий ооцит, и в результате он имеет сильно уменьшенный, по сравнению с нормой, размер.

У более слабых гипоморфных мутантов Trf"m и Тг?КЫх>, у которых не наблюдается сильного снижения количества белка GAGA в питающих клетках.

Рне. 8. Нарушение формирования цитоплазм этических акт и новых филаментов в пихающих клетках яичников мутантов Tri36' на поздних стадиях развития яйценой камеры. А, Б. В - часть яйцевой камеры самок дикого ТЯЛЩ Г. Л, Е -часть яйшгвйй камеры самок 7WJS*/TW'w- . А -ядра питающих [слеток. Ь - внутри питающих клеток хорошо вядны сформированные актиновые фдааменты. В - сумма А и Б. Г - ядра питающих клеток, измененной формы. Д - цктоп лаз магические актттовые фяламеаты полностью отсутствуют в питающих клетках. К - сумма Г и Д. Ядра питающих клеток проникают в кольцевые канальцы. Масштаб - 25 мкм. Кольцевые канальцы указаны стрелками.

нарушение структуры цитоплал магических актиновых филаментов выражено значительно менее явно. В большинстве питающих клеток актиновые филаменты формируются, однако выглядят они несколько более тонкими, менее организованными и неравномерно распределенными внутри яйцевой камеры по сравнению с диким типом. В отдельных яйцевых камерах слабых гипоморфных мугантов все же наблюдаются случаи полного отсутствия цитоплазматических актиновых филаментов, что также сопровождается блокированием кольцевых канальцев ядрами питающих клеток,

I tf-

У мутантов Tri были выявлены такие же нарушения в структуре и формировании цитоплазматичееких актиновых филаментов, как и у полученных нами ТЫ-мутштов. Наличие сходного фенотипа у независимо! полученных мутантов является одним из доказательств того, что нарушение экспрессии именно гена Tri приводит к дефектам в структуре цкгоплазматичееких актиновых филаментов в питающих клетках яичников.

У мутантов Tri362 полное отсутствие цитоплазматических акгиновых филаментов встречается почти в 90% камер, находящихся на 10-11 стадии развития, что приблизительно в 10 раз чаще, чем у мутантов Trl362(ex), Trf"S2 и Trll3C

Электронно-микроскопический анализ гомозигот Tri162, также как и исследование на уровне светового микроскопа, выявили нарушения в структурной организации актинового цитоскелета Кроме нормальных акгиновых пучков, состоящих из параллельно ориентированных акгиновых филаментов, в цитоплазме питающих клеток гомозигот Tri362 часто встречаются увеличенные в диаметре пучки, так же хак и пучки, в которых актиновые филаменты расположены под разными углами

3.5. Мутации по гену Tri влияют на функционирование соматических клеток

Наряду с нарушениями в числе и структуре половых клеток у TW-мутантов были выявлены нарушения и в функционировании соматических клеток

В норме до б стадии развития яйцевой камеры фолликулярные клетки (ФК), окружающие цисту со всех сторон, достаточно однородны по размеру и форме, однако впоследствии они претерпевают значительные морфологические изменения в зависимости от их дальнейшей судьбы Во время 7-8 стадии большинство ФК начинают мигрировать назад в сторону растущего ооцита, они приобретают цилиндрическую форму, тогда как 50 ФК, покрывающие питающие клетки, уплощаются и формируют тонкий однослойный эпителий (Spradlmg, 1993, Home-Badovmac, Bilder, 2005) В течение 9 стадии развития яйцевой камеры 6-8 ФК (2 полярные и прилежащие к ним ФК) отсоединяются от клеток однослойного эпителия в передней части камеры и начинают мигрировать между питающими клетками по направлению к ооциту Эти клетки получили название бордюрных клеток В норме к 10-й стадии бордюрные клетки достигают переднего края ооцита и в дальнейшем продолжают свое движение дорзально, уже по его поверхности (рис 9 А) (Montell et al, 1992, Montell, 2003) Следует отметить, что движение немногочисленных бордюрных клеток контролируется продуктами многих генов

На 10В стадии центрипетальные клетки (клетки цилиндрического эпителия, расположенные на границе между ооцитом и питающими клетками) уплощаются и начинают мигрировать внутрь яйцевой камеры, продвигаясь между питающими клетками и ооцитом (рис 10 А, Г, Ж) Миграция центрипетальных клеток заканчивается, когда они достигают бордюрных клеток, в результате, передняя часть ооцита также полностью покрывается фолликулярным эпителием (Horne-Badovinac, Bilder, 2005)

У всех анализируемых TW-мутантов выявлено нарушение миграции бордюрных клеток Бордюрные клетки у мутантов к 10-й стадии не достигают передней поверхности ооцита, а задерживаются в передней части камеры, между питающими клетками (рис 9 В, Г)

Герыарий Стадия 4 Стадия 6 Стадия 8

Стадия 9

Стадия 10

■------Ptcr

- ít-ПТ:

Г

-HÉtfj

гЩ

Рпс. 9. Нарушение миграции бордюрных клеток у Tri-мутантов на поздних стадиях развития я(щевой камеры, А - схематическое изображение овариолы, показана миграция бордюрных клеток в норме (с модификациями из Montell, 2003). Б - яйцевая камера 10-й стадяя (норма). Бордюрные клетки лежат на поверхности ооцита (стрелка). В: Г - яйцевые камеры 7W-мутантов Fía 11-й стадии развития. Миграция бордюрных клеток нарушена, они не достигли поверхности ооцита и располагаются между питающими клетками (стрелки), 6-Г - яйцевые камеры, окрашенные с помощью K-Gal. Масштаб 100 мкм.

У всех изученных TW-мутантов было обнаружено нарушение в движении цснрииеталъных клеток (рис. 10), которые в норме формируют границу между оонитом и питающими клетками. В результате, ФК располагаются зачастую только на заднем конце камеры, не покрывая передней поверхности ооцита (рис. 10). Это приводит к тому, что ооцнг внедряется 8 область, занимаемую питающими клетками, и принимает неправильную форму (рис. 10 Д, Е).

Таким образом, у TW-мутантов в яйцевых камерах, находящихся на поздних стадиях развития, были выявлены дефекты в движении соматических клеток. Как отмечалось ранее, изменение числа питающих клеток в пределах одной камеры, вероятно, обусловлено нарушением функционирования ФК в гермарии, т.е. функционирование ФК нарушено также и на более ранних стадиях развития яйцевых камер мутантов.

4. Восстановление фертильностн у 7>/-мутантных самок при экспрессии дополнительных копий кДНК гена Tri.

Предполагается, что причиной всех вышеперечисленных дефектов в оогенезе у Ж-мутантов является нарушение в экспрессии гена JW. Для подтверждена этого предположения были проведены эксперименты по спасению фенотипа мутантных самок, С помошыо скрещиваний в геном анализируемых мутантов были введены транспозоны hsp83:GAGA-5I9 и hspSÍ:GAGA-58I, позволяющие увеличить у мутантов количество различных изоформ белка GAGA (GAGA-519 и GAGA-581). Линии, несущие транспозоны, были любезно предоставлены профессором П. Шедлом (Greenberg, Schedl, 2001).

Н

■В'' vv . jVy^B

Рис. 10. Нарушение миграции фолликулярных клеток у мутантов Tri"**2 и Jrf''1'"^ на поздних стадиях развития яйцевой камеры. А, Г, Ж - яйцевая камера дикого типа на стадии 10; Б, Д. 3 - яйцевая камера мутанта ТгГ /TrlRS5\ В, Е, И - яйцевая камера мутанта TrlS61kx>/Тг\т. Г, Д, Е - яйцевые камеры, окрашенные А)еха-ковьюгированным фаллонднном (О - ооцит). Г - в норме цекринетальные клетки (указаны стрелками) глубоко проникают внутрь "камеры между оошпом и питающими клетками. Д. Е - у муталтов нарушена миграция центрипетальных клеток. Е - ооцит (выделен пунктиром) внедряется в область питающих клеток. Ж, 3, И - яйпеньте камеры, окрашенные DAPI. 3. И - фолликулярные клетки не покрывают поверхности всего ООЦИТ а. Треугольниками указана граница, где кончается миграций фолликулярных клеток. Масштаб 1UÖ мкм.

Было установлено, что добавление одной копии трансгена h.sp83:GAGA-5/9 в геном гомозиготных Tr¡36~ мух приводит к частичному восстановлению фертильности, в цитоплазме питающих клеток формируются актнновые фшгаменты. снижается число яйцевых камер с нарушениями. Добавление двух копий трансгена hsp83:GA GA-519 приводит к полному а ос становлению фертильности самок Tri36'. При добавлении же двух копий другого трансгенз hspS3: GA GA -5$ J восстановлений фертильности не происходло. Полученные » работе данные согласуются с данными Гринберга и Шедла о том, что трансген hsp83:GAGA-5l9 является более эффективным для спасения фенотипа Trl'iC мутантов, чем hsp83:GAGA-581-трансген (Greenbcrg and Sched), 2001). Фертильность самок Trf"": и Tri"2'"' восстанавливается при добавлении одной копии каждого из трннсгенов, Восстановление фертильности самок в результате увеличения количества белка GAGA свидетельствует о том, что стерильность быда обусловлена недостатком именно этого бел на.

выводы.

1 Получены новые гипоморфные мутации гена Tri, затрагивающие 5'-область, проведено их картирование Мутация Tri362 обусловлена встройкой Р-элемента в 5*-некодирующую область гена (в позицию 2979) и прилегающую к нему делецию размером 97 пн (2979-3076) Делеция удаляет два первых сайта инициации транскрипции, используемых в яичниках Мутация Trl362<ex) содержит такую же делецию в 5'-некодирующей области гена, как и мутация Tri3 , но не содержит Р-элемент

2 Показано, что мутации Tri362, Trl362(ex) и ТгГ82 приводят к снижению жизнеспособности и стерильности самок в гомозиготном состоянии и в компаунде с нуль-аллелем

3 Установлено, что в яичниках самок Tri362 транскрипция гена Tri снижена как минимум в 10 раз, что сопровождается значительным уменьшением количества белка GAGA в половых клетках Транскрипция гена Tri в яичниках гомозиготных ТгГ'^-мутантных самок снижена приблизительно на треть, тогда как в яичниках Tri б2^-мутантов экспрессия гена практически не отличается от нормы

4 Выявлено, что у всех анализируемых Tri мутантов в той или иной степени нарушена морфология овариол и яйцевых камер Яйцевые камеры мутантов характеризуются отличным от нормы числом половых клеток На поздних стадиях развития яйцевой камеры у мутантов выявлены нарушения в функционировании соматических клеток, а также в формировании стадиоспецифических цитоплазматических актиновых филаментов в питающих клетках

5. Введение трансгенных конструкций в геном мутантов, обеспечивающих дополнительную экспрессию кДНК гена Tri, приводит к восстановлению фертильности мутантных самок и морфологии их яичников Это свидетельствует о том, что именно изменение в экспрессии гена Tri является причиной выявленных нарушений в оогенезе мутантов.

СПИСОК ОСНОВНЫХ ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1 ЕВ Федорова, А А Огиенко, ДА Карагодин и др Получение и анализ новых мутаций по гену Trithorax-hke Drosophila melanogaster // Генетика 2006 Т 42 N 2 С 149-158

2 А А Огиенко, ДА Карагодин, С А Федорова и др Анализ новой гипомофной мутации гена Trithorax-like, влияющей на оогенез Drosophila melanogaster//Онтогенез 2006 Т 37 N 3 С 157-166

3 А А Огиенко Получение и анализ перестроек во втором интроне гена Trithorax-hke Drosophila melanogaster // Материалы XLI Международной научной студенческой конференции "Студент и научно-технический прогресс" 2003 С 29

4 А А Огиенко, Д А Карагодин, С А Федорова и др GAGA фактор, кодируемый геном Trithorax-like, требуется для оогенеза дрозофилы // Тезисы докладов XIV Школы по биологии развития «Актуальные проблемы биологии развития и биотехнологии» Онтогенез 2005 T36N5C388

5 А А Огиенко, Д А Карагодин, С А Федорова и др Анализ механизмов влияния гена Trithorax-like на формирование актиновых филаментов в питающих клетках яичников Drosophila melanogaster //Материалы 10-ой Пущинской Школы-конференции молодых ученых 2006 С 37-38

6 А А Огиенко, Д А Карагодин, С А Федорова и др Анализ механизмов влияния гена Trithorax-like на нарушение процесса быстрого транспорта в оогенезе Drosophila melanogaster // Материалы Международной конференции "Генетика в России и мире" 2006 С 144

Подписано к печати 20 08 2007 г

Формат бумаги 60 х 90 1/16 Печ л 1 Уч изд л 0,7

Тираж 100 экз Заказ 99

Ротапринт Института цитологии и генетики СО РАН 630090, Новосибирск, пр ак Лаврентьева

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Огиенко, Анна Александровна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Основные аспекты формирования и развития половой системы самок Drosophila melanogaster.

1.1.1. Формирование половой системы самок в эмбриогенезе.

1.1.2. Развитие половой системы самок у личинок и предкуколок.

1.1.3. Развитие половой системы у взрослых самок дрозофилы.

1.1.4. Развитие яйцевой камеры после выхода из гермария.

1.1.5. Транспорт цитоплазмы питающих клеток в ооцит (nurse cell - oocyte transport).

1.1.5.1. Селективный транспорт.

1.1.5.2. Быстрый транспорт.

1.1.5.3. Структура актинового цитоскелета в питающих клетках во время быстрого транспорта.

1.1.6. Эволюционная консервативность оогенеза.

1.2. Ген Trithorax-like: его роль и Функции.

1.2.1. Молекулярная организация и экспрессия гена Til.

1.2.2. Структура 5'-регуляторной области гена Тг1.

1.2.3. Гипоморфные мутации гена Т(1.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Молекулярно-генетическая характеристика мутаций гена Trithorax-like и их влияние на оогенез Drosophila melanogaster"

Оогенез насекомых представляет собой сложный, многоэтапный процесс, который контролируется скоординированным действием большого числа генов, результатом которого является формирование зрелого яйца. Изучение регуляции оогенеза - одна из приоритетных задач современной биологии, свидетельством чего является огромное количество публикуемых на эту тему работ. В данной работе для изучения процесса оогенеза была выбрана D. melanogaster. Дрозофила является классическим модельным объектом для проведения подобного рода исследований, поскольку предоставляет возможность проводить исследования как в системе in vitro, так и в системе in vivo. Широчайший набор различных мутаций дрозофилы, влияющих на различные этапы оогенеза, позволяет значительно дополнить и расширить данные, полученные в системе in vitro. С другой стороны, дрозофила предоставляет возможность одновременного применения современных цитогенетических и молекулярно-биологических методов исследований.

Протекание процесса оогенеза сильно отличается у разных видов, однако, имеется ряд общих черт, характеризующих данный процесс даже у эволюционно отдаленных видов. Поэтому данные, полученные на D. melanogaster, имеют большое фундаментальное значение и способствуют формированию целостной картины организации и функционирования оогенеза у эукариот.

Актуальность проблемы. Оогенез представляет собой сложный, контролируемый скоординированным действием большого числа генов, многоэтапный процесс, результатом которого является формирование зрелой яйцеклетки. Изучение оогенеза - одна из приоритетных задач современной биологии и медицины. Несмотря на то, что уже известны многие гены, контролирующие этот процесс, в настоящее время ведутся интенсивные поиски новых генов и особенно комплексов взаимодействующих генов, участвующих в его регуляции. Данная работа посвящена изучению роли гена Trithorax-like {Trl) в оогенезе Drosophiia melanogaster. Ген Trl кодирует многофункциональный белок GAGA, одной из основных функций которого является регуляция экспрессии генов. Наиболее хорошо изучена роль этого белка в ходе эмбриогенеза. О функциональной значимости белка GAGA в ходе оогенеза дрозофилы ранее можно было судить только на основании косвенных данных. Было известно, что продукты гена Trl, активно экспрессирующегося в яичниках взрослых мух, накапливаются в растущем ооците и необходимы для развивающегося эмбриона. Однако при анализе ранее известных ГгАмутантов и генетических мозаиков не было выявлено никаких морфологических нарушений в структуре яичников и яйцевых камер. Отсутствие прямых доказательств того, что ген Trl необходим для оогенеза дрозофилы, связано с тем, что в мировых коллекциях отсутствовали мутации, позволяющие проводить подобного рода исследования. В данной работе были получены и охарактеризованы новые гипоморфные мутации гена Trl, которые позволили провести всесторонний анализ влияния гена Trl на оогенез дрозофилы. Белок GAGA требуется для обеспечения экспрессии множества генов дрозофилы, поэтому полученные в работе данные позволяют выявить не только участие самого гена Trl в ходе оогенеза, но и ряд предполагаемых, ранее не описанных в литературе, генов-мишеней белка GAGA, участвующих в контроле оогенеза. Результаты исследования оогенеза дрозофилы имеют фундаментальное значение для выяснения причин стерильности насекомых, а данные о формировании актиновых филаментов и миграции клеток могут быть использованы в исследованиях, проводимых на других модельных объектах.

Цели и задачи работы состояли в изучении роли гена Trl и кодируемого им белка GAGA в оогенезе D. melanogaster. В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. Получить новые гипоморфные мутации гена Trl, влияющие на оогенез дрозофилы, и провести их картирование;

2. Провести анализ влияния вновь полученных мутаций на экспрессию гена Trl как на уровне мРНК, так и на уровне белка;

3. Исследовать влияние этих мутаций на оогенез дрозофилы;

4. Изучить изменение фертильности и морфологии яичников мутантов в зависимости от уровня экспрессии гена Trl.

Научная новизна работы. Получены и охарактеризованы новые гипоморфные мутации гена Trl, в разной степени снижающие экспрессию гена. Полученные мутации явились уникальным инструментом, позволившим впервые провести детальное исследование влияния гена Trl на оогенез дрозофилы.

Впервые показано, что изменение экспрессии гена Trl приводит к изменению структуры яичников мух. Нарушения выявляются как в овариолах, так и в отдельных яйцевых камерах. Установлено, что 7г/-мутации вызывают изменение числа половых клеток (питающих и ооцитов) в яйцевых камерах по сравнению с нормой. Впервые у 7г/-мутантов выявлены дефекты в формировании стадиоспецифических цитоплазматических актиновых филаментов в питающих клетках на поздних стадиях развития яйцевой камеры. В работе впервые описано нарушение в функционировании соматических клеток у 777 мутантов. На поздних стадиях развития яйцевой камеры у мутантов нарушается миграция бордюрных и центрипетальных клеток. Дефекты в формировании цитоплазматических актиновых филаментов и в функционировании соматических клеток приводят к нарушению процесса переноса цитоплазмы питающих клеток в ооцит и, следовательно, к прекращению роста ооцита.

Научно-практическая значимость работы. Результаты данной работы способствуют расширению фундаментальных знаний о процессе оогенеза насекомых. Материалы данной диссертационной работы могут быть использованы в курсах лекций для студентов биологических и медицинских факультетов.

Апробация работы. Полученные в ходе работы данные были представлены автором в виде тезисов на следующих конференциях:

• Устный доклад на отчетной сессии ИЦиГ СО РАН 2003 г.

• XIV Школе по биологии развития «Актуальные проблемы биологии развития и биотехнологии», Звенигород, 2004

• Школе-семинаре «Лазерная конфокальная микроскопия в биологии и медицине», Звенигород, 2005

• 10-ой Пущинской Школе-конференции молодых ученых, Пущино, 2006

• Международной конференции "Генетика в России и мире", 2006.

Вклад автора. Основная часть экспериментальной работы и обработка полученных результатов выполнена автором лично, либо совместно с научным руководителем. Материалы, вошедшие в данную работу, обсуждались и публиковались совместно с соавторами и научным руководителем. Анализ экспрессии гена Trl у мутантов, а также анализ экспрессии генов Actin 5, chic, cpb и bif выполнен при участии Карагодина Д.А. (ИЦиГ СО РАН, Лаборатория эволюционной биологии клетки). Электронно-микроскопический анализ актиновых филаментов в яичниках проведен при помощи Киселевой Е.В и Губановой Н.В. (ИЦиГ СО РАН, Лаборатория морфологии и функции клеточных структур). Анализ хромосомной сегрегации в течение эмбриональных митозов проводился с участием Федоровой С.А. (ИЦиГ СО РАН, Лаборатория генетики клеточного цикла). Микроскопический анализ на конфокальном микроскопе проводился при технической поддержке Рубцова Н.Б. и Байбородина С.И. (ИЦиГ СО РАН, Лаборатория морфологии и функции клеточных структур). Мутация Tifn82 была выделена Волошиной М.В.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Огиенко, Анна Александровна

ВЫВОДЫ

1. Получены новые гипоморфные мутации гена Trl, затрагивающие 5'-область, проведено их картирование. Мутация Trl362 обусловлена встройкой Р-элемента в б'-некодирующую область гена (в позицию 2979) и прилегающую к нему делецию размером 97 п.н. (2979-3076). Делеция удаляет два первых сайта инициации транскрипции, используемых в яичниках. Мутация Trf62(ex) содержит такую же делецию в 5'-некодирующей области гена, как и мутация Г/7362, но не содержит Р-элемент.

2. Показано, что мутации Trf62, ТгР62(ех> и Т/Т®"82 приводят к снижению жизнеспособности и стерильности самок в гомозиготном состоянии и в компаунде с нуль-аллелем.

3. Установлено, что в яичниках самок Trl362 транскрипция гена Trl снижена как минимум в 10 раз, что сопровождается значительным уменьшением количества белка GAGA в половых клетках. Транскрипция гена Trl в яичниках гомозиготных Trl8"82-мутантных самок снижена приблизительно на треть, тогда как в яичниках Тг1362(ех)-1лутантов экспрессия гена практически не отличается от нормы.

4. Выявлено, что у всех анализируемых Trl мутантов в той или иной степени нарушена морфология овариол и яйцевых камер. Яйцевые камеры мутантов характеризуются отличным от нормы числом половых клеток. На поздних стадиях развития яйцевой камеры у мутантов выявлены нарушения в функционировании соматических клеток, а также в формировании стадиоспецифических цитоплазматических актиновых филаментов в питающих клетках.

5. Введение трансгенных конструкций в геном мутантов, обеспечивающих дополнительную экспрессию кДНК гена Trl, приводит к восстановлению фертильности мутантных самок и морфологии их яичников. Это свидетельствует о том, что именно изменение в экспрессии гена Trl является причиной выявленных нарушений в оогенезе мутантов.

Заключение

На основе анализа новых гипоморфных мутаций гена Trl было установлено, что все эти мутации, в разной степени снижающие экспрессию гена Trl, приводят не только к нарушениям в развитии эмбриона, как это было показано ранее, но также драматически сказываются и на протекании самого процесса оогенеза. При этом у Trl мутантов нарушается развитие и функционирование, как половых, так и соматических клеток яичников.

Как следует из результатов, представленных в данной работе, белок GAGA требуется на разных этапах развития яйцевой камеры. Из литературных источников известен ряд генов, мутации которых вызывают нарушения, подобные тем, что обнаружены у Trl мутантов. Так, для мутантов по генам brainiac и egghead были показаны нарушения в функционировании фолликулярного эпителия, что приводит к формированию камер с отличным от нормы числом питающих клеток (Goode et al., 1996). У мутантов по генам singed, chickadee и quail были выявлены нарушения в формировании цитоплазматических актиновых филаментов (Paterson and О'Наге, 1991; Cant et al., 1994; Cooley et al., 1992; Mahajan-Miklos and Cooley, 1994). У мутантов по гену slbo нарушена миграция бордюрных клеток (Montell et al., 1992). Однако следует отметить, что мутации ни одного из вышеперечисленных генов не приводят к такому широкому спектру дефектов, которые наблюдаются у Trl мутантов.

Мы полагаем, что ген Trl играет решающую роль в регуляции процесса оогенеза дрозофилы, он контролирует разные по времени этапы оогенеза, а нарушение в его экспрессии отражается на функционировании разных типов клеток яичников.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Огиенко, Анна Александровна, Новосибирск

1. Катохин А.В., Пиндюрин А.В., Федорова Е.В., Баричева Э.М. Молекулярно-генетический анализ гена Trithorax-like, кодирующего транскрипционный фактор GAGA Drosophila melanogaster// Генетика. 2001. Т. 37. № 4. С.467-474.

2. Трунова С.А., Федорова С.А., Лебедева Л.И. и др. Влияние некоторых мутаций по гену Trl на митоз в эмбриональной и личиночных тканях и морфологию яйцевых камер Drosophila melanogasterII Генетика. 2001. Т. 37. №12. С.1604-1615.

3. Федорова Е.В., Огиенко А.А., Карагодин Д.А., Айманова К.Г., Баричева Э.М. Получение и анализ новых мутаций по гену Trithorax-like Drosophila melanogaster// Генетика. 2006. Т. 42. №. 2. С. 149-158.

4. Ambrosio L., Schedl P. Two discrete modes of histone gene expression during oogenesis in Drosophila melanogaster II Developmental biology. 1985. V.111. P.220-231.

5. Bai J., Montell D. Eyes absent, a key repressor of polar cell fate during Drosophila oogenesis II Development. 2002. V.129. P.5377-5388.

6. Bai J., Uehara Y., Montell D.J. Regulation of invasive cell behavior by taiman, a Drosophila protein related to AIB1, a steroid receptor coactivator amplified in breast cancer // Cell. 2000. V.103. P.1047-1058.

7. Bardwell V.J., Treisman R. The POZ domain a conserved protein-protein interaction motif//Genes & development. 1994. V.8. P.1664-1677.

8. Baricheva E.M., Katokhin A.V., Perelygina L.M. Expression of Drosophila melanogaster gene encoding transcription factor GAGA is tissue-specific and temperature-dependent// FEBS letters. 1997. V.414. P.285-288.

9. Bejarano F., Busturia A. Function of the Trithorax-like gene during Drosophila development// Developmental biology. 2004. V.268. P.327-341.

10. Bender W., Spierer P., Hogness D.S. Chromosomal walking and jumping to isolate DNA from the Ace and rosy loci and the bithorax complex in Drosophila melanogaster II Journal of molecular biology 1983. V.168. P.17-33.

11. Benyajati C., Mueller L., Xu N. Pappano M., Gao J., Mosammaparast M., et al.

12. Multiple isoforms of GAGA factor, a critical component of chromatin structure // Nucleic acids research. 1997. V.25. P.3345-3353.

13. Bhat K.M., Farkas G., Karch F., Gyurkovics H., Gausz J., Schedl P. The GAGA factor is required in the early Drosophila embryo not only for transcriptional regulation but also for nuclear division//Development. 1996. V. 122. P.1113-1124.

14. Braun R.E., Behringer R.R., Peschon J.J., Brinster R.L., Palmiter R.D. Genetically haploid spermatids are phenotypically diploid // Nature. 1989. V.337. P.373-376.

15. Brower D.L., Smith R.J., Wilcox M. Differentiation within the gonads of Drosophila revealed by immunofluorescence // Journal of embryology and experimental morphology. 1981. V.63. P.233-242.

16. Bruckner K., Perez L., Clausen H., Cohen S. Glycosyltransferase activity of Fringe modulates Notch-Delta interactions 11 Nature. 2000. V.406. P.411-415.

17. Burnett W.V. Northern blotting of RNA denatured in glyoxal without buffer recirculation // BioTechniques. 1997. V.22. P.668-671.

18. Calvi B.R., Lilly M.A., Spradling A.C. Cell cycle control of chorion gene amplification // Genes & development. 1998. V.12. P.734-744.

19. Cant K., Knowles B.A., Mooseker M.S., Cooley L. Drosophila singed, a fascin homolog, is required for actin bundle formation during oogenesis and bristle extension 11 The Journal of cell biology. 1994. V.125. P.369-380.

20. Carpenter A.T. Synaptonemal complex and recombination nodules in wild-type Drosophila melanogaster fema\es И Genetics. 1979. V.92. P.511-541.

21. Carpenter A.T. EM autoradiographic evidence that DNA synthesis occurs at recombination nodules during meiosis in Drosophila melanogaster females // Chromosoma. 1981. V.83. P.59-80.

22. Carpenter A.T. Egalitarian and the choice of cell fates in Drosophila melanogaster oogenesis // Ciba Foundation symposium. 1994. V.182. P.223-246.

23. Cavaliere V., Donati A., Hsouna A., Hsu Т., Gargiulo G. dAkt kinase controls follicle cell size during Drosophila oogenesis // Dev Dyn. 2005. V.232. P.845-854.

24. Chao S., Nagoshi R.N. Induction of apoptosis in the germline and follicle layer of Drosophila egg chambers // Mechanisms of development. 1999. V.88. P.159-172.

25. Chen C.Y., Gherzi R., Andersen J.S., Gaietta G., Jurchott K., Royer H.D., et al. Nucleolin and YB-1 are required for JNK-mediated interleukin-2 mRNA stabilization during T-cell activation // Genes & development. 2000. V.14. P. 1236-1248.

26. Chen E.H., Baker B.S. Compartmental organization of the Drosophila genital imaginal discs // Development. 1997. V.124. P.205-218.

27. Chen J., Godt D., Gunsalus K., Kiss I., Goldberg M., Laski F.A. Cofilin/ADF is required for cell motility during Drosophila ovary development and oogenesis // Nature cell biology. 2001. V.3. P.204-209.

28. Chung Y.T., Keller E.B. Regulatory elements mediating transcription from the Drosophila melanogaster actin 5C proximal promoter // Molecular and cellular biology. 1990. V.10. P.206-216.

29. Clark I., Giniger E., Ruohola-Baker H., Jan L.Y., Jan Y.N. Transient posterior localization of a kinesin fusion protein reflects anteroposterior polarity of the Drosophila oocyte // Curr Biol. 1994. V.4. P.289-300.

30. Coffman C.R. Cell migration and programmed cell death of Drosophila germ cells // Ann N Y Acad Sci. 2003. V. 995. P. 117-126.

31. Cooley L., Verheyen E., Ayers K. chickadee encodes a profilin required for intercellular cytoplasm transport during Drosophila oogenesis // Cell. 1992. V.69. P.173-184.

32. Cox D.N., Chao A., Baker J., Chang L., Qiao D., Lin H. A novel class of evolutionarily conserved genes defined by piwi are essential for stem cell self-renewal // Genes & development. 1998. V.12. P.3715-3727.

33. Cox D.N., Chao A., Lin H. piwi encodes a nucleoplasms factor whose activity modulates the number and division rate of germline stem cells // Development. 2000. V.127. P.503-514.

34. Cox R.T., Spradling A.C. A Balbiani body and the fusome mediate mitochondrial inheritance during Drosophila oogenesis // Development. 2003. V.130. P.1579-1590.

35. Croston G.E., Kerrigan L.A., Lira L.M., Marshak D.R., Kadonaga J.T. Sequence-specific antirepression of histone H1-mediated inhibition of basal RNA polymerase II transcription // Science. 1991. V.251. P.643-649.

36. Cummings C.A., Cronmiller C. The daughterless gene functions together with Notch and Delta in the control of ovarian follicle development in Drosophila II Development. 1994. V.120. P.381-394.

37. Deng W.M., Althauser C., Ruohola-Baker H. Notch-Delta signaling induces a transition from mitotic cell cycle to endocycle in Drosophila follicle cells // Development. 2001. V.128. P.4737-4746.

38. Dobens L.L., Raftery L.A. Integration of epithelial patterning and morphogenesis in Drosophila ovarian follicle cells II Dev Dyn. 2000. V.218. P.80-93.

39. Dodson G.S., Guarnieri D.J., Simon M.A. Src64 is required for ovarian ring canal morphogenesis during Drosophila oogenesis // Development. 1998. V.125. P.2883-2892.

40. Duchek P., Rorth P. Guidance of cell migration by EGF receptor signaling during Drosophila oogenesis // Science. 2001. V.291. P.131-133.

41. Duchek P., Somogyi KM Jekely G., Beccari S., Rorth P. Guidance of cell migration by the Drosophila PDGF/VEGF receptor//Cell. 2001. V.107. P. 17-26.

42. Dumont J.N. Oogenesis in Xenopus laevis (Daudin). I. Stages of oocyte development in laboratory maintained animals // Journal of morphology. 1972. V.136. P.153-179.

43. Dumont J.N., Brummett A.R. Oogenesis in Xenopus laevis (Daudin). V. Relationships between developing oocytes and their investing follicular tissues // Journal of morphology. 1978. V.155. P.73-97.

44. Duncan J.E., Warrior R, The cytoplasmic dynein and kinesin motors have interdependent roles in patterning the Drosophila oocyte // Curr Biol. 2002. V.12. P.1982-1991.

45. Edwards K.A,, Kiehart D.P. Drosophila nonmuscle myosin II has multiple essential roles in imaginal disc and egg chamber morphogenesis II Development. 1996. V.122. P.1499-1511.

46. Ephrussi A., Dickinson L.K., Lehmann R. Oskar organizes the germ plasm and directs localization of the posterior determinant nanos // Cell. 1991. V.66. P.37-50.

47. Estrada В., Casares F., Sanchez-Herrero E. Development of the genitalia in Drosophila melanogaster II Differentiation, research in biological diversity. 2003. V.71. P.299-310.

48. Farkas G.( Gausz J., Gallon! M., Reuter G., Gyurkovics H., Karch F. The Trithorax-like gene encodes the Drosophila GAGA factor// Nature. 1994. V.371. P.806-808.

49. Farkas G., Gausz J., Galloni M., Reuter G., Gyurkovics H., Karch F. The Trithorax-like gene encodes the Drosophila GAGA factor// Nature. 1994. V.371. P.806-808.

50. Farkas G.f Leibovitch B.A., Elgin S.C. Chromatin organization and transcriptional control of gene expression in Drosophila II Gene. 2000. V.253. P.117-136.

51. Field C.M., Alberts B.M. Anillin, a contractile ring protein that cycles from the nucleus to the cell cortex // The Journal of cell biology. 1995. V.131. P.165-178.

52. Foe V.E. Mitotic domains reveal early commitment of cells in Drosophila embryos // Development. 1989. V.107. P. 1-22.

53. Forbes A.J., Lin H., Ingham P.W., Spradling A.C. hedgehog is required for the proliferation and specification of ovarian somatic cells prior to egg chamber formation in Drosophila II Development. 1996. V.122. P.1125-1135.

54. Forbes A.J., Lin H., Ingham P.W., Spradling A.C. hedgehog is required for the proliferation and specification of ovarian somatic cells prior to egg chamber formation in Drosophila II Development. 1996. V.122. P.1125-1135.

55. Forbes A.J., Spradling A.C., Ingham P.W., Lin H. The role of segment polarity genes during early oogenesis in Drosophila // Development. 1996. V.122. P.3283-3294.

56. Fyrberg E.A., Mahaffey J.W., Bond B.J., Davidson N. Transcripts of the six Drosophila actin genes accumulate in a stage- and tissue-specific manner II Cell. 1983. V.33. P.115-123.

57. Gallie D.R. A tale of two termini, a functional interaction between the termini of an mRNA is a prerequisite for efficient translation initiation // Gene. 1998. V.216. P.1-11.

58. Ghosh M., Song X., Mouneimne G., Sidani M., Lawrence D.S., Condeelis J.S. Cofilin promotes actin polymerization and defines the direction of cell motility // Science. 2004. V.304. P.743-746.

59. Gilbert L.I., latrou K. and Gill S.S. Comprehensive Molecular Insect Science // Elsevier. 2005.

60. Gilmour D.S., Thomas G.H., Elgin S.C. Drosophila nuclear proteins bind to regions of alternating С and T residues in gene promoters // Science. 1989. V.245. P.1487-1490.

61. Glaser R.L., Thomas G.H., Siegfried E., Elgin S.C., Lis J.T. Optimal heat-induced expression of the Drosophila hsp26 gene requires a promoter sequence containing (CT)n.(GA)n repeats //Journal of molecular biology. 1990. V.211. P.751-761.

62. Godt D., Laski F.A. Mechanisms of cell rearrangement and cell recruitment in Drosophila ovary morphogenesis and the requirement of brie a brae // Development. 1995. V.121. P. 173-187.

63. Gondos B. The ultrastructure of granulose cells in the newborn rabbit ovary // The Anatomical record. 1969. V.165. P.67-77.

64. Gondos B. Intercellular bridges and mammalian germ cell differentiation // Differentiation. 1973. V.1. P. 177-182.

65. Gonzalez-Reyes A., Elliott H., St Johnston D. Oocyte determination and the origin of polarity in Drosophila. the role of the spindle genes // Development. 1997. V.124. P.4927-4937.

66. Gonzalez-Reyes A., St Johnston D. Role of oocyte position in establishment of anterior-posterior polarity in Drosophila II Science. 1994. V.266. P.639-642.

67. Goode S.( Melnick M., Chou T.B., Perrimon N. The neurogenic genes egghead and brainiac define a novel signaling pathway essential for epithelial morphogenesis during Drosophila oogenesis I/ Development. 1996. V.122. P.3863-3879.

68. Goodwin S.F., Taylor B.J., Villella A., Foss M., Ryner L.C., Baker B.S., et al. Aberrant splicing and altered spatial expression patterns in fruitless mutants of Drosophila melanogasterII Genetics. 2000. V.154. P.725-745.

69. Grammont M., Dastugue В., Couderc J.L. The Drosophila toucan (toe) gene is required in germline cells for the somatic cell patterning during oogenesis // Development. 1997. V.124. P.4917-4926.

70. Grammont M., Dastugue В., Couderc J.L. The Drosophila toucan (toe) gene is required in germline cells for the somatic cell patterning during oogenesis //

71. Development. 1997. V.124. P.4917-4926.

72. Grammont M., Irvine K.D. fringe and Notch specify polar cell fate during Drosophila oogenesis // Development. 2001. V.128. P.2243-2253.

73. Grammont M., Irvine K.D. Organizer activity of the polar cells during Drosophila oogenesis // Development. 2002. V.129. P.5131-5140.

74. Granok H., Leibovitch B.A., Elgin S.C. A heat-shock-activated cDNA encoding GAGA factor rescues some lethal mutations in the Drosophila melanogaster Trithorax-like gene II Genetical research. 2001. V.78. P.13-21.

75. Granok H., Leibovitch B.A., Shaffer C.D., Elgin S.C. Chromatin. Ga-ga over GAGA factor // Curr Biol. 1995. V.5. P.238-241.

76. Greenberg A.J., Schedl P. GAGA factor isoforms have distinct but overlapping functions in vivo // Molecular and cellular biology. 2001. V.21. P.8565-8574.

77. Grieder N.C., de Cuevas M., Spradling A.C. The fusome organizes the microtubule network during oocyte differentiation in Drosophila II Development. 2000. V.127. P.4253-4264.

78. Guild G.M., Connelly P.S., Shaw M.K., Tilney L.G. Actin filament cables in Drosophila nurse cells are composed of modules that slide passively past one another during dumping // The Journal of cell biology. 1997. V.138. P.783-797.

79. Gutzeit H.O. The role of microfilaments in cytoplasmic streaming in Drosophila follicles // Journal of cell science. 1986. V.80. P. 159-169.

80. Gyurkovics H., Gausz J., Kummer J., Karch F. A new homeotic mutation in the Drosophila bithorax complex removes a boundary separating two domains of regulation //The EMBO journal. 1990. V.9. P.2579-2585.

81. Hagstrom K., Muller M., Schedl P. A Polycomb and GAGA dependent silencer adjoins the Fab-7 boundary in the Drosophila bithorax complex II Genetics. 1997. V.146. P. 1365-1380.

82. Harrison D.A., McCoon P.E., Binari R., Gilman M., Perrimon N. Drosophila unpaired encodes a secreted protein that activates the JAK signaling pathway // Genes & development. 1998. V.12. P.3252-3263.

83. Hartenstein V. Atlas of Drosophila Development // Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1993.

84. Hawkins N.C., Thorpe J., Schupbach T. Encore, a gene required for the regulation of germ line mitosis and oocyte differentiation during Drosophila oogenesis // Development. 1996. V.122. P.281-290.

85. Horne-Badovinac S., Bilder D. Mass transit, epithelial morphogenesis in the Drosophila egg chamber// Dev Dyn. 2005. V.232. P.559-574.

86. Huynh J.R., St Johnston D. The role of BicD, Egl, Orb and the microtubules in the restriction of meiosis to the Drosophila oocyte // Development. 2000. V.127. P.2785-2794.

87. Januschke J., Gervais L., Dass S., Kaltschmidt J.A., Lopez-Schier H., St Johnston D., et al. Polar transport in the Drosophila oocyte requires Dynein and Kinesin I cooperation II Curr Biol. 2002. V.12. P.1971-1981.

88. Jenuth J.P., Peterson A.C., Fu K., Shoubridge E.A. Random genetic drift in the female germline explains the rapid segregation of mammalian mitochondrial DNA // Nature genetics. 1996. V.14. P.146-151.

89. Karch F., Galloni M., Sipos L., Gausz J., Gyurkovics H., Schedl P. Мер and Fab-7: molecular analysis of putative boundaries of cis-regulatory domains in the bithorax complex of Drosophila melanogaster II Nucleic acids research. 1994. V.22. P.3138-3146.

90. Katsani K.R., Hajibagheri M.A., Verrijzer C.P. Co-operative DNA binding by GAGA transcription factor requires the conserved BTB/POZ domain and reorganizes promoter topology II The EMBO journal. 1999. V.18. P.698-708.

91. Kerrigan L.A., Croston G.E., Lira L.M., Kadonaga J.T. Sequence-specific transcriptional antirepression of the Drosophila Kruppel gene by the GAGA factor // The Journal of biological chemistry. 1991. V.266. P.574-582.

92. King R.C., Rubinson A.C. and Smith R.F. Oogenesis in adult Drosophila melanogaster //Growth. 1956. V.20. P. 121-157.

93. King R.C. Ovarian development in Drosophila melanogaster II 1970. Academic Press, New York.

94. King R.C., Cassidy J.D. and Roussett A. The formation of clones of interconnected cells during oogenesis in insects II Insect Ultrastructure. 1982. V.1. P.3-31.

95. King F.J., Lin H. Somatic signaling mediated by fs(1)Yb is essential for germline stem cell maintenance during Drosophila oogenesis // Development. 1999. V.126. P. 1833-1844.

96. King F.J., Szakmary A., Cox D.N., Lin H. Yb modulates the divisions of both germline and somatic stem cells through piwi- and hh-mediated mechanisms in the Drosophila ovary // Molecular cell. 2001. V.7. P.497-508.

97. King R.C., Rubinson A.C., Smith R.F. Oogenesis in adult Drosophila melanogaster

98. Growth. 1956. V.20. P.121-157.

99. Koch E.A., Spitzer R.H. Multiple effects of colchicine on oogenesis in Drosophila: induced sterility and switch of potential oocyte to nurse-cell developmental pathway // Cell and tissue research. 1983. V.228. P.21-32.

100. Kornberg Т., Siden I., O'Farrell P., Simon M. The engrailed locus of Drosophila in situ localization of transcripts reveals compartment-specific expression // Cell. 1985. V.40. P.45-53.

101. Kosoy A., Pagans S., Espinas M.L., Azorin F., Bernues J. GAGA factor down-regulates its own promoter // The Journal of biological chemistry. 2002. V.277. P.42280-42288.

102. Kurilo L.F. Oogenesis in antenatal development in man // Human genetics. 1981. V.57. P.86-92.

103. Lantz V., Chang J.S., Horabin J.I., Bopp D., Schedl P. The Drosophila orb RNA-binding protein is required for the formation of the egg chamber and establishment of polarity // Genes & development. 1994. V.8. P.598-613.

104. Lasko P.F., Ashburner M. Posterior localization of vasa protein correlates with, but is not sufficient for, pole cell development // Genes & development. 1990. V.4. P.905-921.

105. Lee H., Kraus K.W., Wolfner M.F., Lis J.T. DNA sequence requirements for generating paused polymerase at the start of hsp70 II Genes & development. 1992. V.6. P.284-295.

106. Lewis E.B., Knafels J.D., Mathog D.R., Celniker S.E. Sequence analysis of the cis-regulatory regions of the bithorax complex of Drosophila II Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 1995. V.92. P.8403-8407.

107. Lilly M.A., de Cuevas M., Spradling A.C. Cyclin A associates with the fusome during germline cyst formation in the Drosophila ovary // Developmental biology. 2000. V.218. P.53-63.

108. Lilly M.A., Spradling A.C. The Drosophila endocycle is controlled by Cyclin E and lacks a checkpoint ensuring S-phase completion II Genes & development. 1996.1. V.10. Р.2514-2526.

109. Lin Н., Spradling A.C. Germline stem cell division and egg chamber development in transplanted Drosophila germaria // Developmental biology. 1993. V.159. P.140-152.

110. Lin H., Yue L., Spradling A.C. The Drosophila fusome, a germline-specific organelle, contains membrane skeletal proteins and functions in cyst formation // Development. 1994. V.120. P.947-956.

111. Lis J., Wu C. Promoter potentiation and activation: chromatin structure and transcriptional induction of heat shock genes // Chromatin Structure and Gene Expression. 1995. P.71-88.

112. Lopez-Schier H., St Johnston D. Delta signaling from the germ line controls the proliferation and differentiation of the somatic follicle cells during Drosophila oogenesis // Genes & development. 2001. V.15. P.1393-1405.

113. Lu Q., Wallrath L.L., Granok H., Elgin S.C. (CT)n (GA)n repeats and heat shock elements have distinct roles in chromatin structure and transcriptional activation of the Drosophila hsp26 gene // Molecular and cellular biology. 1993. V.13. P.2802-2814.

114. Lyko F., Paro R. Chromosomal elements conferring epigenetic inheritance // Bioessays. 1999. V.21. P.824-832.

115. Machesky L.M., Way M. Actin branches out // Nature. 1998. V.394. P.125-126.

116. Mahajan-Miklos S., Cooley L. The villin-like protein encoded by the Drosophila quail gene is required for actin bundle assembly during oogenesis // Cell. 1994. V.78. P.291-301.

117. Mahmoudi Т., Katsani K.R., Verrijzer C.P. GAGA can mediate enhancer function in trans by linking two separate DNA molecules // The EMBO journal. 2002. V.21. P. 1775-1781.

118. Mahowald A.P. Assembly of the Drosophila germ plasm // Int Rev Cytol. 2001. V. 203. P. 187-213.

119. Mahowald A.P., Strassheim J.M. Intercellular migration of centrioles in the germarium of Drosophila melanogaster. An electron microscopic study // The Journal of cell biology. 1970. V.45. P.306-320.

120. Maniatis Т., Sambrook J., Fritsch E.F. Molecular cloning (a laboratory manual) // Cold Spring Harbor Laboratory. 1989.

121. Margaritis L.H., Kafatos F.C., Petri W.H. The eggshell of Drosophila melanogaster.

122. Fine structure of the layers and regions of the wild-type eggshell // Journal of cell science. 1980. V.43. P. 1-35.

123. Margolis J., Spradling A. Identification and behavior of epithelial stem cells in the Drosophila ovary// Development. 1995. V.121. P.3797-3807.

124. Mata J., Curado S., Ephrussi A., Rorth P. Tribbles coordinates mitosis and morphogenesis in Drosophila by regulating string/CDC25 proteolysis // Cell. 2000. V.101. P.511-522.

125. Matova N. Cooley L. Comparative aspects of animal oogenesis II Developmental biology. 2001. V.231. P.291-320.

126. McCaffrey R., St Johnston D., Gonzalez-Reyes A. A novel mutant phenotype implicates dicephalic in cyst formation in the Drosophila ovary II Dev Dyn. 2006. V.235. P.908-917.

127. McKearin D. The Drosophila fusome, organelle biogenesis and germ cell differentiation: if you build it// Bioessays. 1997. V.19. P.147-152.

128. McKearin D., Ohlstein B. A role for the Drosophila bag-of-marbles protein in the differentiation of cystoblasts from germline stem cells // Development. 1995. V.121. P.2937-2947.

129. McNeil G.P., Smith F., Galioto R. The Drosophila RNA-binding protein Lark is required for the organization of the actin cytoskeleton and Hu-li tai shao localization during oogenesis // Genesis. 2004. V.40. P.90-100.

130. Middleton C.A., Nongthomba U., Parry K., Sweeney S.T., Sparrow J.C., Elliott C.J. Neuromuscular organization and aminergic modulation of contractions in the

131. Drosophila ovary // BMC biology. 2006. V.4. P17.

132. Miller A. The internal anatomy and histology of the image of Drosophila melanogaster II Biology of Drosophila. 1950. P. 420-534.

133. Mogilner A., Oster G. Cell motility driven by actin polymerization II Biophysical journal. 1996. V.71. P.3030-3045.

134. Moloney D.J., Panin V.M., Johnston S.H., Chen J.( Shao L., Wilson R., et al. Fringe is a glycosyltransferase that modifies Notch // Nature. 2000. V.406. P.369-375.

135. Montell D.J. Border-cell migration, the race is on // Nature reviews. 2003. V.4. P. 13-24.

136. Montell D.J., Rorth P., Spradling A.C. slow border cells, a locus required for a developmental^ regulated cell migration during oogenesis, encodes Drosophila C/EBP // Cell. 1992. V.71. P.51-62.

137. Morris J.Z., Hong A., Lilly M.A., Lehmann R. twin, a CCR4 homolog, regulates cyclin poly(A) tail length to permit Drosophila oogenesis // Development. 2005. V.132. P.1165-1174.

138. Neaves W.B. Intercellular bridges between follicle cells and oocyte in the lizard, Anolis carolinensis //The Anatomical record. 1971. V.170. P.285-301.

139. Orlando V., Jane E.P., Chinwalla V., Harte P.J., Paro R. Binding of trithorax and Polycomb proteins to the bithorax complex, dynamic changes during early Drosophila embryogenesis // The EMBO journal. 1998. V.17. P.5141-5150.

140. Patel N.H., Martin-Blanco E., Coleman K.G., Poole S.J., Ellis M.C., Kornberg T.B., et al. Expression of engrailed proteins in arthropods, annelids, and chordates // Cell. 1989. V.58. P.955-968.

141. Paterson J., O'Hare K. Structure and transcription of the singed locus of Drosophila melanogasterI/ Genetics. 1991. V.129. P.1073-1084.

142. Pepling M.E., de Cuevas M., Spradling A.C. Germline cysts: a conserved phase of germ cell development? //Trends in cell biology. 1999. V.9. P.257-262.

143. Pepling M.E., Spradling A.C. Female mouse germ cells form synchronously dividing cysts // Development. 1998. V.125. P.3323-3328.

144. Platero J.S., Csink A.K., Quintanilla A., Henikoff S. Changes in chromosomal localization of heterochromatin-binding proteins during the cell cycle in Drosophila II The Journal of cell biology. 1998. V.140. P. 1297-1306.

145. Poux S., Melfi R., Pirrotta V. Establishment of Polycomb silencing requires a transient interaction between PC and ESC // Genes & development. 2001. V.15. P.2509-2514.

146. Raff J.W., Kellum R., Alberts B. The Drosophila GAGA transcription factor is associated with specific regions of heterochromatin throughout the cell cycle // The EMBO journal. 1994. V.13. P.5977-5983.

147. Read D.( Nishigaki Т., Manley J.L. The Drosophila even-skipped promoter is transcribed in a stage-specific manner in vitro and contains multiple, overlapping factor-binding sites // Molecular and cellular biology. 1990. V.10. P.4334-4344.

148. Robertson H.M., Preston C.R., Phillis R.W., Johnson-Schlitz D.M., Benz W.K., Engels W.R. A stable genomic source of P element transposase in Drosophila meianogasterII Genetics. 1988. V.118. P.461-470.

149. Robinson D.N., Cant K., Cooley L. Morphogenesis of Drosophila ovarian ring canals // Development. 1994. V.120. P.2015-2025.

150. Robinson D.N., Cooley L. Stable intercellular bridges in development, the cytoskeleton lining the tunnel //Trends in cell biology. 1996. V.6. P.474-479.

151. Roth S., Neuman-Silberberg F.S., Barcelo G., Schupbach T. cornichon and the EGF receptor signaling process are necessary for both anterior-posterior and dorsal-ventral pattern formation in Drosophila II Cell. 1995. V.81. P.967-978.

152. Roulier E.M., Panzer S., Beckendorf S.K. The Tec29 tyrosine kinase is required during Drosophila embryogenesis and interacts with Src64 in ring canal development//Molecular cell. 1998. V.1. P.819-829.

153. Santos A.C., Lehmann R. Germ cell specification and migration in Drosophila and beyond // Curr Biol. 2004. V.14. P.R578-589.

154. Satterfield T.F., Jackson S.M., Pallanck L.J. A Drosophila homolog of the polyglutamine disease gene SCA2 is a dosage-sensitive regulator of actin filament formation // Genetics. 2002. V.162. P. 1687-1702.

155. Selman К., Robin A.W., Sarka A. et al. Stages of oocyte development in the zebrafish, Brachydanio rerio II Journal of Morphology. 1993. V.218. P. 203-224.

156. Silver D.L., Montell D.J. Paracrine signaling through the JAK/STAT pathway activates invasive behavior of ovarian epithelial cells in Drosophila II Cell. 2001. V.107. P.831-841.

157. Soeller W.C., Oh C.E., Kornberg T.B. Isolation of cDNAs encoding the Drosophila GAGA transcription factor // Molecular and cellular biology. 1993. V.13. P.7961-7970.

158. Soeller W.C., Poole S.J., Kornberg T. In vitro transcription of the Drosophila engrailed gene // Genes & development. 1988. V.2. P.68-81.

159. Sokol N.S., Cooley L. Drosophila filamin encoded by the cheerio locus is a component of ovarian ring canals II Curr Biol. 1999. V.9. P.1221-1230.

160. Song X., Xie T. Wingless signaling regulates the maintenance of ovarian somatic stem cells in Drosophila // Development. 2003. V.130. P.3259-3268.

161. Spradling A.C. Developmental genetics of oogenesis // The development of Drosophila melanogaster. Cold Spring Harbor Laboratory Press. 1993. P. 1-70.

162. Spradling A.C., de Cuevas M., Drummond-Barbosa D., Keyes L., Lilly M., et al. The Drosophila germarium: stem cells, germ line cysts, and oocytes // Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 1997. V.62. P.25-34.

163. Spradling A., Drummond-Barbosa D., Kai T. Stem cells find their niche // Nature. 2001. V.414. P.98-104.

164. Strutt H., Paro R. The polycomb group protein complex of Drosophila melanogaster has different compositions at different target genes // Molecular and cellular biology. 1997. V.17. P.6773-6783.

165. Swan A., Suter B. Role of Bicaudal-D in patterning the Drosophila egg chamber in mid-oogenesis // Development. 1996. V.122. P.3577-3586.

166. Theurkauf W.E., Alberts B.M., Jan Y.N., Jongens T.A. A central role for microtubules in the differentiation of Drosophila oocytes // Development. 1993. V.118. P.1169-1180.

167. Tilney L.G., Tilney M.S., Guild G.M. Formation of actin filament bundles in the ring canals of developing Drosophila follicles // The Journal of cell biology. 1996. V.133. P.61-74.

168. Tobin S.L., Cook P.J., Burn T.C. Transcripts of individual Drosophila actin genes are differentially distributed during embryogenesis // Developmental genetics. 1990. V.11. P.15-26.

169. Torres I.L., Lopez-Schier H., St Johnston D. A Notch/Delta-dependent relay mechanism establishes anterior-posterior polarity in Drosophila И Developmental cell. 2003. V.5. P.547-558.

170. Tsukiyama Т., Becker P.B., Wu C. ATP-dependent nucleosome disruption at a heat-shock promoter mediated by binding of GAGA transcription factor // Nature. 1994. V.367. P.525-532.

171. Tsukiyama Т., Daniel C., Tamkun J., Wu C. ISWI, a member of the SWI2/SNF2 ATPase family, encodes the 140 kDa subunit of the nucleosome remodeling factor //Cell. 1995. V.83. P.1021-1026.

172. Twombly V., Blackman R.K., Jin H., Graff J.M., Padgett R.W., Gelbart W.M. The TGF-beta signaling pathway is essential for Drosophila oogenesis // Development. 1996. V.122. P. 1555-1565.

173. Vaquero A., Espinas M.L., Azorin F., Bernues J. Functional mapping of the GAGA factor assigns its transcriptional activity to the C-terminal glutamine-rich domain // The Journal of biological chemistry. 2000. V.275. P. 19461-19468.

174. Verheyen E.M., Cooley L. Profilin mutations disrupt multiple actin-dependent processes during Drosophila development // Development. 1994. V.120. P.717-728.

175. Wagner C.R., Mahowald A.P., Miller K.G. One of the two cytoplasmic actin isoforms in Drosophila is essential // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2002. V.99. P.8037-8042.

176. Wang X., Bo J., Bridges Т., Dugan K.D., Pan T.C., Chodosh L.A., et al. Analysis of cell migration using whole-genome expression profiling of migratory cells in the Drosophila ovary // Developmental cell. 2006. V.10. P.483-495.

177. Weakley B.S. Light and electron microscopy of developing germ cells and follicle cells in the ovary of the golden hamster, twenty-four hours before birth to eight days post partum // Journal of anatomy. 1967. V.101. P.435-459.

178. Weber J.A., Taxman D.J., Lu Q., Gilmour D.S. Molecular architecture of the hsp70 promoter after deletion of the TATA box or the upstream regulation region // Molecular and cellular biology. 1997. V.17. P.3799-3808.

179. Wieschaus E., Szabad J. The development and function of the female germ line in Drosophila melanogaster. a cell lineage study // Developmental biology. 1979. V.68. P.29-46.

180. Wilkins R.C., Lis J.T. Dynamics of potentiation and activation: GAGA factor and its role in heat shock gene regulation // Nucleic acids research. 1997. V.25. P.3963-3968.

181. Wilkins R.C., Lis J.T. GAGA factor binding to DNA via a single trinucleotide sequence element// Nucleic acids research. 1998. V.26. P.2672-2678.

182. Williamson A., Lehmann R. Germ cell development in Drosophila //Annu Rev Cell Dev Biol. 1996. V. 12. P. 365-391.

183. Wu C., Tsukiyama Т., Gdula D., Georgel P., Martinez-Balbas M., Mizuguchi G., et al. ATP-dependent remodeling of chromatin // Cold Spring Harbor symposia on quantitative biology. 1998. V.63. P.525-534.

184. Wyllie A.H., Morris R.G., Smith A.L., Dunlop D. Chromatin cleavage in apoptosis. association with condensed chromatin morphology and dependence on macromolecular synthesis // The Journal of pathology. 1984. V.142. P.67-77.

185. Xie Т., Spradling A.C. decapentaplegic is essential for the maintenance and division of germline stem cells in the Drosophila ovary // Cell. 1998. V.94. P.251-260.

186. Xie Т., Spradling A.C. A niche maintaining germ line stem cells in the Drosophila ovary // Science. 2000. V.290. P.328-330.