Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Исследование роли периферических полипептидов КВ ФС и частиц в активности и фотоустойчивости ФС и высших растений в процессе их биогенеза

ВАК РФ 03.00.12, Физиология и биохимия растений

Автореферат диссертации по теме "Исследование роли периферических полипептидов КВ ФС и частиц в активности и фотоустойчивости ФС и высших растений в процессе их биогенеза"

академия наук азербайджанской республики л институт ботаники

ГЛДЖИЕВЛ РЕНЛ МЕХРЛДЖ кызы

ИССЛЕДОВАНИЕ РОЛИ ПЕРИФЕРИЧЕСКИХ полипептидов кб фс ii частиц В активности И ФОТОУСТОЙЧИВОСТИ ФС и высших растении в процессе их биогенеза

(03.00.12—Физиология растений)

Иа правах рукописи УДК 581.012

Л I! Т О !> К Ф Е Р А Т

диссер1<1Щ!а па соискание ученой сгелени кандидата Оиолитческнх наук

баку —

Работа выполнена в Институте ботаники АН Азербайджанской Республики.

Научный руководи г ел ь: —доктор биологических наук, профессор Р. А. Гасанов.

Официальные оппоненты:

—доктор биологических наук, профессор Кулиев А. А. —кандидат биологических наук Асидол А. А.

Ведущее учреждение: Азербайджанский государственный университет нм. М. Э. Расул-заде.

Зашита состоится „ " «^¿¿З^/Й^

1994

в . часов на заседании Специализироьанш>го сощ. ;а

Д.004.!>".Э1 ло защите диссертаций на соискание ученой степени дс.'Л'^ра биологических паук по специальности «Физиология растений» при Институте ботаники Академии Наук АзерОа ад 5:;ачекой Республики (370073, г. Баку. Патамдарт-ское шоссе, 40).

С диссертацией можно ознакомиться р библиотеке Института ботаники АН Азербайджанской Республики,

Автореферат разослан _____19'а4 г.

Ученый секретарь Специализирован;17?: " "0"з?та, кандидат Сколот .еекмх

наук ДЖАБАДОВА Р. К.

ХАРАКТЕРИСТИКА Р.Л1ЮТН

АКТУАЛЬНОСТЬ НГОБЛСМЫ. Ропрос о механизме образования кислорода фотосинтезируюготи писании растениями и подорослини продолжает оставаться актуальный » настоящее время. Известно. что реак-пии , лезатле и основе процесса ныделения кислорода, осуществляются высоко организованным кислородпиделягошм комплексом (КОМ. Фуншшониропаиие которого тесно связано с организацией его структуры. и сняэи с эти полнлептшишп состаи м палнолекулярная организация КБК интенсивно исследуется . особенно большое вшмояне уделяется донорнол стороне КВК и трен наиболее круннмн белкам с Кг 10, 24, 33 кДа . Селективное удаление этик белкой с целы) исследования их функций может бить осуществлено отмиианиен мембран-них фрагментов. обогащенных ФС П. пиеокими концентрациями различных солей или денатурируюших агентов . Однако при псом многообразии сушестиугпих методов модификации кислородниделу чвих частиц ФС II (КО 4С II» следует отметить некогогуо протиноречииость Результатов и сложность интерпретации получаемого материала. С другой сторони известно, что фогмиро»ание ККК неотделимо от биогенеза мембран хлоропластон и что Формирование КВК, как и хлороц-ластов, многоступенчатой процесс, на различных стадиях которого различная структура комплекса обуславливает изменение его активности, Так, иа перииз этапах зеленения, несмотря на сулествоиание п этнопластах 33-кДэ белка (капкз ич а!> 1903) не обнаружено ни-деления кислорода (Гасаноп н лр. « 1980>, проявляется лмиь активность ФС I. обусловленная присутствием в этионластах зленеатоп электронного транспорта, ассоциированного с С'С I, таких как 'ш-тохрон í, нластопнашш н Ферредоксин. Сгзетоиал зависимость синтеза пнтохрона 8-559 и Д1 белка реакционного центра фс II (1>Ц те II) юаноано ограничивает активность КПК на стадии этиолировании« растений. По пере углубления наиих знании становится все сложнее 2)Роблена взаимодействия стрлстури и Фушсиин кпк. Информация о тем, на какой стадин Формнроиаиия квх ноянллотся периферические белки и гак это отражается на Функционально!! активности комплексов и их Фотоустойчипости практически, отс. тстнует. Исследование ялпн.пин изменяющейся а процессе биогенеза структуры КВК па их активность и ^отоустоЛчийость н опР&лелнли направление нсследона-шгП.

_ _

ilE/!b И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Поиски путей исследования структуры КВК, голи периферических белков в активности комилексон и их Фотоустойчивости привели une к нисли о необходимости изучения этого вопроса с многоплановом комплексном acneicre: во-нероык, исследования роли периферических нолшюптидов и функциональной активности КВК прелых проростков; во-вторих, пииоления их влияния на процесс повреждения КВК и условиях светового стресса, и , наконец, в-третьих, изучение биогенеза квк и изменение Фотоустсйчи-вости его с процессе истраиоашш периФерическик белков в тилакоид-чые мембрани. Выполнение поставленной цели предопределило экспериментальное реаеиие следующих задач-.

I- Изучение мановения качественного и количественного содержания белков, спектральних Форм клороФилла и состояния РЦ КВ <5С П частиц в процессе биогенеза.

й. изучение роли периферических пошшеитидов в выделении кислорода и генерация ииллисекундной замедленной Флуоресиеииии (ил. ЭФ).

3. Изучение механизма фотововреждеиия зрелш КВ 40 11 часчи» 1. исследовании Фотоустойчивости кик в процессе биогенеза. НАУЧНАЯ НОВИЗНА К ПРАКТИЧЕСКОЕ ЭНАЧЕНЯЕ. Вперпие исследована роль периферических белков к выделении кислорода, генерации ил. эф и Фотоустойчивости на основе анализа различий в структуре и соответствующих изменений и активности и Фотоустойчивости КВ ФС Ii частиц проростков, лакодншихен на рэзличних стздияк фор-пироваии»

Показано. что ЗЗ-кДа белок высоко специфичен дли бцетрой компонент пл. 3J- и кинетической характеристики выделении клелоро-да и сиесте с ю и сЧ-кда белком стабилизирует КВК. Отсутствие 33-кда белка приводит' к ннгнезировашю донорлой ctopohu 4-е II и ' замедлению рекоибипадип РъисГсГсостоииин и супествеиио подавляет выделение кислорода на вешлаку. Частной, выделенные из этиолированных epopoctkou некомпетентны в виделешш кислорода в сипзи с иесФорниропанной доиорной стороной ц преобладание» популяции 4-е центров, зз-кЯа белок неспособен встраиваться в ненбрапу без спета. При Фотодеструкш-ш обиаруденн две Фазы иигк-бнрования, причем установлено, что реакции цсрвичиого Разделения зарядов поирехдается в посяедшоы очередь.

Получение результата позволит- существенно углубить паши представления об особенностях взаимодействия структуры и Функции КВК пыешиг растений, с учетон шявлетшк закономерностей Фотодес-

трукпни и соответствуй™* ctiocoOon стабнлизапии XI) 5 С П частиц in vitro Hoano разрабатывать с истеки, (шделяххпне кислород и характеризующиеся nomjnemofi Фотоустойчивостыо. Обнаруженные закономерности Фотодеструкпии ^огосинтеиги'ского аппарата ногут бить использованы в качестве чуистмлелълш. тестов при анализе повеления растений п экстремальных /словник,

АПРОЯЛЩ1Н ГЛШГО: i-аооча апробирована «а научных сежшарах Института ботаники ЛИ Лзербгйдтлка (Как*. 195». 1992. 1993). Иа-териали по тепе диссертации ыпш лслшыты и прсдставлеш н г. у б ли-клпнях ряда спепиализироьашшк п^ушшк конференций: материалах научной конференции аспирантов Академии Наук Азербайджана (Баку, 1991); IV Нгглунаропного Симпозиума но минеральному питашю и Фотосинтезу, (Болгария, TojitiyxMii, 1908)! Международной конференции " фотосинтез и it>oTot>!4oTexiioiioriiH' (Пумшм, 1591); 6-oil Енропейс-коп биоэнергетической кон4ереыти < Нидерланды, Амстердам, 1991), X Международного Конгресса ио Фотосинтез}' (Япония, На-гоя, 1992), гй-ои конференции r'EBS ( Евеция. Стокгольм. 1993) .

ПУП/В1КЛЦИН: По материалам диссертации опубликовано 8 раоит.

СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ: Ди(.сертдпия состоит из введения. обзора литература. описания материалов и методов, изложении результатов и нк обсуждения, внводоы ч списка литературы. Работа иллюстрирована Ю рисунками и г таблняакн.

iiATCi'HA/iu и иктоды кссякдовлшш

Объектен исследования служили ко фс и-часппш-нз проростков нпеншщ (Triticwo aesiivrai) следли^их времешшх точек: из этиоли-рованнык проростков - Формирование светонсзаписгоан компонентой; из проростков, освегсатзихся 0ч.. 18ч.. 2'1ч. п проростков, росенх и условиях постоянного освеяеиий. KB ФС II частшш были полученн по нетогоже Yamamoto et al (19) с использованием подписании Selbert et al (20). опшвапио белков проводили по методу Hirao et al (si). полипептиды кв ФС [I частиц разделялись в ю-гох налГ\ содераагаен ей ночевкпг по истоду chtia et al (221. Частицу этиолированных проростков подвергали также электроФоретичсскону анализу в ю-15>: -пом ПААГ по кетоду Laeraull (231. Для проявления полипептидов Использованы как Кгнасси R-250. так и серебро (21). Электрофореграмнц денентоиетрироваля на микрофотометре ИФО-451.о состоянии реакгоюшшго пеитра судйли по выделению О. на кислород-

л • » «с

нон электроде Кларк-типа с «ении-п-бсизокипочои п качестве искус-стиелиого акцептора при конкецтаиии о, 5 ми и кинетике замедленно!! Флуоресценции, измеренной с поношыо фосфороскопа со временен мед{-ду возбуждением и измерением свечения 1.С5 ис. Регистрация Фототока производилась через усилитель постоянного тока с выходным сопротивлением 100 мои на самописце и пифропечатаюшим устройством через интегратор, нозволяжшй оценивать нлошадь под шшом замедленной Флуореспеншш. Низкотемпературную Флуореепевдию измеряли на устаиовке , собранной и описанной ранее (25). Фотоингибирова-ние проводили в аэробных усдоштк белим светом интенсивность»! 1000 мкЕ/м с как п присутствии 15 ик!1 ДХНМ/ 3(3.4 - пихлорфе-нил)-1,1(диметилночевина)/ . так и о его отсутствии.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

I. Роль периферически« полииептидов в функционировании кис-лородвыделяотик частиц ФС II высший растений.

Спгктр.-.лыще характеристики иолученных КВ ФС II частно соответствуют литературным данным об идентичны» комплексах. Электро-Фореграмна тилакоидов хлоропластов (Рис.1.А) представлена поли-пентидлии с ЙГ 70. 70. 00. 50. '17, 43, 33. 30, Е7. Й5, гз. 19. 16 кАл. Коипозиншшши состав полниепгнлои КВ 4С 11 часта характеризуется увеличенчен доли белков с Нг 17 и 13 кДа но сравнению с тилакоилаии и присутствием периферических белков 33, г5, 15 1сДа. Псе периферические болкл обнаружены и супсрнатанте после промывки к13 «1С п частиц растворами НаСЬ в присутствии ночевтш. (Рис. 1.0).

ки ФС II частицы характеризуш-си классическим типом индукционной кривой инллисекундиой зф. (Рис. 2. контроль». Известно, что Зф отражает изнененип рекомбинации в паре Р800 значение электрохимического потенциала и элсктровнотранспортигю активность Фо-тосинтезируюших объектов . Измерения показывают. Что донорная сторона КВ ФС II частиц не блокирована . события, наблюдасине на акцепторной стороне, также демонстрируют патипную структуру комплекса. использование 111 МаС1, позволяет селективно экстрагировать белгси 16 и 25 кЛа. При ик удалении быстрая компоиемта зф остается почти неизменной. Следовательно, эта обработка не изменяет элепт

ИаС1+

А ' 3

Рас. 1.л. ^лсктгс'Ы-егрйша бслкогого спектра тнлакоидов. КВ '5С II '¡лс-пш ;; селективно исли^ицироваиш;;: КВ ФС II пасши.

В. ЭлектрсФарограинз и дснситограмма опериатанта после оогаботки кв к п частиц 1И КаС1,+г, ем со (ни :

- в -

Рис, г И1ШУкиноя.1Ы^ i-wuic iki/jm.'vkvsjúi í :>«.m i.:i< .s •> Pfci;ni'hi::',u ТИЛ&КОНЯОБ и те il 4.:7iw, о'::Ч'Т\:: •". ЧсЛ.*?. ï СО (IM !

( ft-включение с cera. V su. jscíi u:n ¡

рондонируетг» свосоэпость родорасиепляггаей снстерл. Когда отпивается белой ЗЗ-itfla » то драматически изменяется индукционная кар-•птз ЗФ в результате вотери способности донирооания электрона п КВ ФС II частипак, Быстрая коняонента ЗФ исчезает (рекомбинация Рбво"^и »"затруднена!. ЛФ К и fiXfllt не? изменяют а той картина. что показывает «а инактивация донорнои стороны. Это говорит о том, что периферический 33-кЛа пояипептид пысоко специфичен для быстро!» компоненты замедленной Флуоресценции, т, о. участвует в Формировании Р08(ГО состоякия . Go epamieatm с тилакоидннии ненсранами КП ÍC II частйцу Езрз.тгеризяэтся сувествсшшни различиями (как в амплитуде. так и п попупермодо пегпоначальаого всплеска школа гепедородаь ПрггайТо считать, что индукционные красна перпоцачаль-пого всплеска синода кислорода после включения постоянного света отражает унонызепие размеров пластохииоиового пула (Рис. Зь Плас-токшюповш! ara в ЕВ Фа II частицах значительно меньпе, чей в контрольных ялоропластах, В соответствии с зтии КВ fC II частицы обладают nepnoríaчзлмюн ясплескон ризода кислорода с более низкой амплитудой и больсим полупериодон. Општыз с помоаьо ítaCL КВ 1С II частной все ейе ое.чадаот оакслйзлъппм пмкояол па 2-я .чегогску, котя амплитуда кинодз ркеиьяается приблизительно в 4 раза по сравнен«» с необрабоТзншаш частипа-т. При онивашм 3-к периФс-f:í'!CCK!I3 с e/utoп паалйдаятсн с гп я с тс а и пи о изменения о кинетический .карактсрнстккая (&Mmúu!0itui!3 крпкгк силояепия кислорода при постоянном оспспэпмл. с.тчако коиячгша объеН гчделеииого кислорода практически не из1(ейиотся, Эти гш *G II частота яарактериэуэтея очепь налу и виетден ¡ас.псрода на tícfciiacy с приблизительно рапной гнелнтулой дам ::эсле l-cn ncffirracrt (Гкс. 3). Пелучепвне с подобии-пи SB SG И частика!!!! результата указывает па существенные изие-иештя как в ic.íii entice nepDinijoro сснлеска шгкода кислорода На пос-точпчое осоепотк, тал и пнхода кислорода на ссшлжу. Ото позволяет предположить . что а зтпз оаразИзг кщшТгам обрагпен.чп РЦ ФС II (S- перекогш) такде изменена. С пельэ вмясненпя этана, на и -тором неглшпм аккупуляшш. эквивалентов блокируется в результате отннвагепей пройедури 11 для того, чтобы попять роль в этой йериФе-рическия «енбранпаа белков . исследовано вреня обраяепия s-cocto-япнп о функвдга теипопого интервала нёяду двумя посделопателмшии вепткани п серии' вепштк через 5 гаш. tnmyeamra. Дшншр таблшш I показывает, что гяшетнка ггихоаа Ш1слорода. па З-d пс'шйпку , как Фппошя тсипопого интервала иехду первой и второй.вспыяками (S-»S,.

U { < I 3 , ?.LLIX

1 2 Э 4 5 i т ез »on

СОСИЕОИГЕЛЫШ-Ь

Рис.3 а Первоначальный зсплеск. кислорода в 'хлоропласта:; (А).

кисдородвыделяших частицах ФС II (В), частицах, об' работанпыг. с аоношью NaCL (С), частица::, обработанных с поиошью ' 1И HaCL* 2.8Н СО(НН ) (Д>. Ъ Выходи кислорода на испиику.

С - хлоропласта, 3 - кислородвыде.г.ЖЕие частицы ФС II, X - частниы, обработанные с пометы,- НаСЬ.Л-частипь'., обработанные с помощью Ж KaCL*2.en COCIIH >

Таблтоа 1- Кинетика обрапения переходов (Э^

центров ФС II в нативних, селективно ванных 1И НаСЬ КВ ФС II частицах

реакционных

нодифидиро-

Наранетр

Натишше КВ ФС II частицы

КВ ФС II частипы. обработанные 1Н НлС1,

Л

в с к к г

5»»

8,02 5,00 4,09 73,03 го, оо 2,07 1,00

0, 36

1. >'1 3, 71

60, 00 14, яо 0. 07

о, ог

» - выход кислорода после 3-ей всюлжи, зависящий от интервала нехду 1-ой и 2-ой оспинками. был измерен с использованием Флисшш:

уът- 'Ао0-елр(к,)) +30 (/-ехриг)) гСа(/- мрЩ))

йспользопааи частады, пзошгуопашмо из ТПИсига аезНУшз (О, з нг/нл). Объем образпа - о, 07 ил.

5«« - сяша кваараптшн отклонения.

- 1г -

перекоды ). интерираютуется цдк cjnna родрастдаздз з;£спанешш-альиык конпоигнтоц <АЙ. I30,c0i р qbojík нсслепорашак преваратаа. Хотя коистаити скоростей этн5 кошюиеитов Е^» к^существенно не кзкеняются отшзаяиги 16 ц 25 кда ееякоп, те« из иг не с относительное число двестоушне пептров B0t Gp> суиестцецио гнеиь-шается. Более того, в отпита« ИаС1 частицах число центров 1Л >» дейстиэтсгаих с шсокоЛ константой скорости К резко уменьшается до значения С. 06 по срансюш с С, 02 з в необработан®« час-ишак, оташаше 16 к C't кда бедасов приводит к укснывепк» iüuiütjhui обра-шешш аереиода и вероятно цосяелуюшге пересадои ^¡¡¡'SjSq-

Этан. как нал кэдется, объясняется вабдшаеиор таепьаеапе анаш-тулн выхода кислорода на испааку, отсутствий значительного эффекта аа перпопачалышй всялеск квсдороча шт постоянно:! оевсаегав?! отрзааший разяери йпастоышоиового и у л г. н отсутствие чувствительности к жсиьпсшдо константа скорости реакции, вдпшнкаюкш; участие иа окислитеяьиой стороне <¡a II. При оксграютш 33-WU по-лчпситида аипяитуда вихода кислорода на вспнакУ ciumito угнетается и пенознокно точно овредепсть парзнетри обратаол жиаеткга:. Аналогичные результате пох.учевд Шуао íí,, Hurata к, I9fi0 по«твергдап-сгие. что обработка части« почешшоК«КаС1., вдаквает удаление белков 16. S4, 33 кДа без освобождения 1'п и драматическое кзненеиие всег исследовании*: иаранатров,

Т. о., 33-кДа периферический балец ш;сокр специфичен для быстрой конпоцента ЗФ и кинетической характеристики ^деления кислорода. На предполагав, что са явдястея веоОЙяи„ш мя росстацов-леиия 1н>оо . подяераивая. вероятно, лоцорнгв сторону водсокксляо-neft сжетош в S/Z состокши (где Z - елекгродаив донор). Оидаю-иае этого белка задергивает процесс окисления води, вероятно, n SJ-' состоянии,

П, Рсаь nepuiep'.mecKus волипецтшчоа р аитаяности кпелррод-ваделиших частиц 1С. и частиц аелеиексаи: цветков.

V кв фс II частиц апмитпшша ирероепт поютентешшп состан характеризуется вргвалдоовашгеи иолиаептмдоо с iw до го кЛа (Рис. 4), обпаруае|ш та.е пороса, соответствуете 30 и 32-кДа полииептвдан (Рис.5), где 36-кДа белок , вгродтдо, является нрсд-иестяевшшж Л1 белка. % периферических шыпшеющ«! хж amen-ствует в сяедоБцх кошиествак ззада белок (Рис.5), обиарумп в ZB

«йл

г

.3*

•!'• ' '-.-к- 33 кда ¿з _ 28 кда Г кда^22 кда

Л ' II ' Т »ДО

• • >

' - ~*Ю кда

** йп^З кЙ-э ii III и

ЭлектроФореграияа пслипе.тгндного состава-КВ ФС II час- • т:п, полуденных из: этиолированных проростков -I, проростков, зглсисюд:::: оч - П , проростков, зеленевших 16 л - III, проростков, зел?кекэдих £Чч. .--iv. ' *

Ï4

* A.0,1«

РИС. ' '

Денситсграмма белкового сррктрд KB ФО 71 чэст;:и, погуимши;; us

?тио лsipolí .шину, прс'ро г tkolî.

[■^гагггггт^

е « ..*

Рис. С

Донектоггамне лкового г.егтра KB <tç П частиц, noj: ."¡eíniij;; пп' модификации m: растзо:".^ ;м HaCL'c1. Olí СО (НИ ) А: 1. II. III -частиг.ц и;< огис-дироваииык г.ро-рогтков; пг-огостков, ил^нилли:: г-; лрегостг.ов, ' ber.cHf'i Ciч. í

ветствеино. IV, V, VI сгкчЕетгтпгг" тис 'супгрнатанты I - ча'""лш и* нормальных проростков; ii - соот-ветствуюсий супггнатгчт ..

cq II чзстилах этоодэтопагагл проростков и 17-кДа полнпептнл. во он по является псрифежпескш белком, учасгщтгптн а пиделетгн кислорода п сняли с тем, что при вминппшш периферических полн-педтидсз с поноиьп ш ПаСЬ и Н, ен иочепили (Рис. 6) 17 кда комио-непта и э.тозте «е обппрухпио. по всей пероптлости этот полипептад ¡шляется прслпсстпсшпнсон для биосинтеза более внсоконолекуляпгак компонентов.

Через бч. зслепешгя полинептиднап состав кп te II частиц претерпевает ряд изиснсикй. Содердани« полипептида с Иг 37 кДа гецплгт по нирч сссс.вгшш и у часта» проростков, зеленеют« ьч. , его нет. появляется полоса ui-кЛа перН'5ег-тюского белка, содержа-шм которого настолько изло. что обнаруживается он лить при oicra-етлзшт серебром (Гкс. 6), а также 28 и 30 кла полилептнлы схкзс <?с II (?;:с. 'О, сдекс-еатейьио, « течение "«еяегшеиталыюго периода пач!гпакт синтезироваться ноше комплексы аптешш, формироваться YA'i. Через ?Лч. зелеш.чтия п КГ) ÍC II частицах ноянляотсч белки с Пг 10, ?.Ь íííl, ?A v.ra, где 2'1-кда - периферически« поякаептид УЛ12, участпугекна л гшяеятпгл кислорода, а 22-кДа - ослоп, тели-чппагпиЛ электронао-трапсаортиу» актншость на акпентор.чол стороне (Пепгуз'коп et al.. 19Л7; (IhnnotaKls et al.. 1957). Фгакиии 10 к/1и бедка ene не известии. :;отя полагают , что он ответственен за спязивлшн; U-кДа белка и внутренне/Ч поверхности тиллконда (Unciera et al., 1960 ).

Изиепет'.я, яроис;:одяст!а н поливелттном составе пасши но миге зеленения, сказнзаптся и па их функциональной активности. ее:j¡ji v частиц этиолиропашя.ч: проростков не удалось зарегистрировать шде.чешш кислорода, через 6ч. зеленения 'гйслорояьнлелягтаая активность наблюдается только у прсросткод, то через 24 ч. зеленения

частшш способот сйдолять кислород со скоростью 57 икпорьо^

/нгглч, при досаилзпки 10 ни СгСЬ^- 175, а в присутсттж го им CaCL^- 21'i тс:олых/нгхлч (Табл. 2). Очевидно кз втаес-.'лзанного, что периферические полкпет'тл <10, 2'.Ч S"} нда) рлкгапивпэтен в количестве, пеобкоднпон емделгшш кислорода через 21ч. непрерывного освеаеннн. Однако значительное увеличение скорости гп;де-ленни кислорода н присутствии СаО/^-гоиори о тон, что у частиц проростков. зеленоулик 2'1ч.. содержание iionoi Са и С1 и салтлл ик №wn5wiu>oiuv,iir.;, кпк и 15. S'i-WUi белков, янпг.кстхея их kohhviit-раторани , нее ene недостаточно, хотя дошрная сторона полностью сторнирована и устойчива к процедуре выделении. Под ¡.¡лияшл.ч»

Рис. 7

Пименовне быстрой компонента 3■!• Гг (А), отношения быстрой компоненты ЗФ !с максимальной геличино 34' «/Рт (Е) и отношения хлорофилл.белок (кл/б) (С) КБ '"'С II частиц по мере зеленения проростков пшеницы; I - бч, ?. - Гбч,. 3 - 21ч.

Габляиэ 2. Скорость выделения кислорода ) ш-иольО^/ мгкл ч

КБ ФС II частицами.

время ос-в ¿час-пня (ч)

КБ 1С II частицы

КЕ ФС II частица ♦ 10 кМ СаСЬ„

КВ ФС II частичы £0 мК СаС1.«

О 6

г'ц

148

57

2&9

175 293

211

¿90 .

..-

лалыюггаого освггення к;- нзбтистся ¡слхгм-ллбо качественных из-ürniomut n noniiiicmiwioH составе кв те П -мстнп. а идет лшзь ко-г.ичйстпсглюг накоплен!;* Селгов (PfiC.ö) (I , следовательно, увеличение количества ккслоролс^долятих потто?!, л результате скорость гилелення -кислорода усоличиппотсн no 209 1г:::!ОльО^/нгхп ч у чаепш. шзделоштх из коптрольвнх растений.

Пол влпаннен света изменяется и характер нндушшошшк кривых Я? (Рис.7). V частип зтиолкровлппгн: проростков не удалось заре-гнетриропать яарактерноп дяп частиц из нормально разннваюянхеп проростков гг'шоП 3$. Через бч. зеленения Формируется Ff ЗФ, относительная оеличнна которой составляв!' Ь<У' , что говорят о налк-ЧН:1 активного РП. Fi 3t> увеличивается цо норе осветсшш, достигая накскнальноп велнчизш через ?Лч. освещении.

т. о.. частном зп'о.'тропашшх проростков не вмлелпют кислород. несмотря па присутствие 33-кДа бешеа. Причиной . иояет быть «го неспособность бея спета встраиваться в Формирующийся КВК. Из совремешшз исследований очевидно, что дг.п прикрепления 33-кДа бедка необзтодиш! ионы Яп i т. к. нет данник о той. что 33-кДа белок прикрепляется к марганцевому [мастеру в отсутствии помои Кд , о то .те время есть Факты . говорящие о тол. что карганпевнл кластер без 33-кДа белка существенно не изменяется (Cole "t al,. 1907! Styrins et al., 1907). Кроне того, сгиествует корреляпиа иеллу отпэплепнен коков ип и 33-кДз белка (Hirrata et al.. 1903). для сиязшкшия (In пеобгоагг; Д1 белок ( Eutiierford et al.. .1938) для образования зрелой -}оphi AI белка необходим свет. (Klein ot al., 1933), сксдопзтеягпо, rcipaппапг.э 33-кДа белка а иенбргну является светозагасгнаш шчжеесом.

Т. о.. ицолпе очевидно. 'ito частота из заполированная вророс-ткс)п. нссиотря на присутствие и следовая количествах 33-кДа бедка, не cnocoötRi гудслять кислород, т.к. Д1 белок, находппяШсл п Фо»•::? предяеетвешшка, не способен связать nonii Iln и присоединить 33-кДа белок без спета и паргамиепия кластер в полон не сторнирован из-за отсутствия периферически полипептидов п попов tin. i-a, Cl d нестаз tra локализации и Фугатиоютопзпил.

У частиц йрэросткой, зелепешия 6ч., появляется 16-кДа белок я пезпачятелыго упеличивается содержание 33-КДл полнпептида, по выделения кислорода ие обпарушгвается, яотя проростки пшеитш на данной стадии зелеиЬиия виделпвт кислород (DanKs et al, 1983). следовательно, па зтоя стаяга развита марганцевый кластер сФор-

инрочан. но не стабилен н разрушается при выделении. В часпшал проростков, зеленешик 2'1ч. . отличатияся от 1Ш ФС XI частиц проростков, эеленемаих 64. . появлением белкой С ílr 10, 2'1-кДа и значительном увеличением содержания зз-кда белка <Рис. '1,6) стабильность иаргапдевого кластера увеличивается н они способны выделят« кислород (Табл.?). Т.о., наличке 10, 24. 33-кДа белков стабилизирует КВК и делает его устойчивым к процедуре выделения.

III. Роль периферических поливеитидои и Фотоустойчивостп ккслорсквшюлявсмк части« ФС II асленевшк. проростков.

Различия в структ/ро частиц, мзг.ьлешш« из проростков. ocii'j-паваисхся различное время. влияот не только на их Функциональную активность, но такхе jí lia и;; Фотоустойчквость как у контрольны:: часлш, так и у обработанных Лхпн. Скорость ингибировашт выраас-на более резко у частиц и нрлсггстшги ингибитора. Так, навр;шер, если у КВ ФС II частиц проростков, зеденеилтмй Оч., в присутствии ингибитора 50Х падение К* наблюдается через 3,5 и;ш. дейстшш сильного света, то у частиц тех хе проростков в отсутствии ингибитора через 5,5 кии. (Рис. ni. v кв «с II частиц проростков, зе-леиешьшх 2'1ч., и присутствии ингибитора 50/. падение П через 0. ü нин., а и отсутствии /ШШ - через i кип. (Гис.О). Одисй из воз-моашЕ причин нсает бить то, что в ирлсутстшш д'ш$ пул иластохп-нона окислен и наплетен тусителеи Флуоресценции (Кгаизе et al. , 1990 ). В то на брони налицо больиан отоустойчивость кв СС II частии ироросткси, зелелеодии; оч., по срашкмцсэ с частицами проростков, зелелешн:: '¿Пч. Так, если у КП чс II частиц проростков, зелепеших , через 3 пин. Фотонлгнсировликя наблвлаетсл падение КГ 3i' на '¡ЧУ- и чгг ( и отсутствии и присутствии ингибитора coi тветстпенно, то у КВ СС II частиц, зеленеиш-ш бч. , - на 10/ ц 33/. соответственно (Рис. 9), 'Í. о. , у часта« проростков, зелонеюаих Оч.. присутствие ингибитора не приводит к столь резкоиу сшисиа» Fí. ' как у частиц проростков, зеленею:;« 2'1ч, (Рис. С), следовательно. у частиц проростков, зепеиеглшк. бч. , преобладает популяция т.н. ФС 11^центров (Пени et al., lyao ), яарактеризуг&нлся акташшн Píí, uo на способны:; переносить электроны от первичного етшокового акцептора ко вторично!,-у кпноповону акцептору Q . в результате наличие лкмн не приводит к значнтельнкм изменения;! в переносе электрона ь элеютон-трапспортной цепи (Гнс. 0), Ото:-тс-

Рис. 8 Kiiiu-'Tiii'i к>то:игис!!!'оваиия отношения переменной, компо • иентн зф к максимальному шкоду ЗФ (Fí/Fm) (lûoooo лк, семы., светс ".'L'i-uiot?, и тлит) KB 'ГС II частии , выделенных из иго -j ocT.rvL. . Г ч. (Aï. £'1ч (Е) / '(О-ДХКК ) (••ДШ! ) /

Гис. О кшюткка ч-.тоингибироБания откоаения быстрой кошо-неиты 31 к м.::'.с',1и.<лык>й величине Зф (Ff/Fm! KB <íC П'частшк О - KB id : I частиц проростков, зел'еногчних 'vr. х- KB te и ''астиц пгоростков. • зеленеющих 6ч и обработанных

дуги, .

Л- КБ *С II 'истин-jfi'ororrKOE, зеленеющих гчч, в- лГ Ii: I час тли ирогостков, З'.'/енегэд:;: _'1ч н oïp.iccrar-!пп; д:;>:М. ■ ■

- го -

•гвуег г КЗ чС II части« про постои. делеисшав бч., и 22-кДа бедок. пригагоаюашй участие в электром-транспортник реакциях на ак-цеп~арпой стороне ФС II (Рис. 4), Это также свидетельствует о преобладании ФС 13^ центров в этих частицах . т.к. согласпо данный Andersson et al., 1990 22-кДа />елок пгггстпует у ФС 11^, Центров и появляется лишь у ФС центров. характеризующихся эффективным переносом электрона на акцепторной стороне ФС II (Hells et al., 19вв). Т. о, на акцепторной стороне ФС II у KB 4C II частиц, выделенных из проростков, зеленевших бч.. отсутствует эффективный перенос электронов.

о преобладании у ю* ФС II частиц через бч. зеленения популяции ФС 11^цептров. характеризующихся разобщенностью СХБК ФС II от рц, говорят и спектры низкотемпературной Флуоресценгош . согласно которым зрелый'СХБК ФС II через вч. зеленевия все те отсутствует. т.к. регистрируются максимумы ФЛУОреспенпии при 077, 086 и Т15 пм. СХНК ФС II только начинает орнироваться И не может быть ни эффективного поглошенмя энег тш света па данной стадии развития пи полной утилизации поглощенной энергии света из-за энергетического разобисния Формирующегося СХЕЕ ФС II от Pit Энергия возбуждения тушится па СХБК ФС II, который Фактически является ее конечным акцептором. Несфориироваиа у частпп проростков, зеленевши: 8ч., и донорнап сторона (отсутствуют 10, 24 -кДа оедки. а содержание 33-кДа полияептида незначительно. Т.о. ♦ можно говорить об отсутствии эффективного переноса электрона как па донориоП стороне, так к са акцепторной стороне ФС II частиц проростков. зеленеишх бч.. и об эффективном Флшиюниройашш лишь РЦ (относительная величина Ff составляет 66*), V частиц проростков, зеленеете* 244.., присутствует сформированная эяектроитравспортнап цепь с эФФективишт реакциями и иа донорпой стог-оне. и в РЦ. И на акцепторной стороне. В нкх же обцаружеп зрелый СХБК II (сформирован его полнпептидный состав (Рис. 4), в о спектре низкотемпературной Флуоресценции появляются наксинупи при 689, 69D и 735 нм., характерные пая зрелых проростков! следовательно, аа этой стадии развития произошло не только эавегаепио Форипрованш до-порной стороны (присутствует все три периферических колппепткда 10. 24. зз кДа а регистрируется киелородвяделяшая активность частиц), появляется 22-кЛа белок акцепторной стороиы СС II, но и запегаеиие Фортютоватя СХПК ФС II, сопровоадашоеся его tipncoe-динонкеи к ФС II центра» с образованием вюттапыя кясао*ч>двшхелш-

шик СС центров (ИоИз е1 а1,, 19ва), в которых эффективен перенос-электрона от О. и ().. в результате чего К! Эф подвергается А о

болев драматическим изменениям под действием сильного света п првсутстнии ДХН» по сравнению с контролен <Рис. в) .Очевидна большая Фотоустойчипость Ff ЗФ КГ) ФС XI частиц проростков, зеяенешиа бч. , как в контроле, так и а присутствии ингибитора. (Рис, 9). Большая ФотоустоПчииость КВ <ЗС II частиц проростке 1, зеленеет,иш 6ч., в которых Фактически отсутствуют реакции донорной и акцепторной сторон и эффективно функционирует липь реакппя первичного разделения зарядов, по сравнении с КВ ФС II частицами проростков, зелемешнх 24ч.. в которых существует полностью сформированная электронтранспортная цепь, говорит о тон, что при Фотоингибиропа-шш реакция первичного разделения зарядов повреждается в .нослед-ню» очередь.

Независимо от стадии зеленения у часта« как обработаны.'« ДХМ.Ч, так и в отсутствии ингибитора паблшается ^отодесгрукакя 50У. и вмла переменной части ЗФ в течении -1-6 мин. действия сильного света (Рис. 8). Фотонпгибироизни'4 скорости выделения кислорода замедлено по сравнению с уменьиениен РТ 3£. Так, 50падение наблюдали через 1 шш. освещения, а через 50 мни. се величина пока,чит до 2Х. Скорость ае выделения кислорода уиеныаается в 2 раза по емшешю с контролен только через 10 пин. освешегшн, а через ео ими. ее величина составляет Ю* (Рис. Л), это возпоаяет предположить, что доногная сторона не является церпичной 'мияеит зотопеструктш. X тону ес добавление искусственных доноров <кп, ДФК) не восстанавливает аитяпноегь частиц . Ото говорит либо о неизменности натияной структуры i;'. v.: л о р о д г:и".е ;хц ого комплекса <!с II либо о повреждении участка РЫ ФС II, куда ДФК дон.^ует электроток. мо^ио предположить. что при осуществлении Фотоингибнроиання наргааотся первичное разделение заряди, но ревнтипапия Г£ зф кв «С II частая посредством ВД'п СП показывает, что рц не разрушается, т. о. первичное разделение заряда фуикпионкрует в болызеи части центром, дз^е когда з? полиостьи угнетена. Реактивация Г* З',ь ври теннопей адаатапии п точения 30 шш. пги г С доказывает. что при сильном освевешш пронзоало восстановлен"? всех Од, при дальнейшем оспегаеяш! когло бы произойти повреждение , прпводшгее к

пгрупеии» транспорта электрона от о. к о». к тому же скорость фо-

А О

тодестряотни у частая в присутствии дхш (Рис. 0) более резко вк-рааепа ео срапепив с контрольными частицами. Ото наводит на

Рис. 10

Линамика 'toiмиы'ибироваиия гистрои компоненты 31 Ff ? - KB ФС II частицы р- КВ ФС II частицы п'ЛУ/аск ¿¡- КБ i-C .И частицы > сид/кат

л • зо «а

Рис. 11

Дииаиика фотоингибироьанич скорости выделения кислорода о- КВ ФС И частицы

КВ ФС II частицы + глу/аск Ц- КВ ФС Ii частиий + сод/кат

ю а ао 40 w

tcüs^iäts, iZJ

кисль, что О,, о не Q. является первичной нияень» Фотоннгибирова-

Л а

Пия. т.к. ДХ1Е1, блокируя т.н. О^салт, Фактически долаен выполнять при Фотодеструкиии заиитиуп ФлнтИо. что виразилось бн в занед-лепкой по сравнении с контролен кичетике Убниания Ff. Однако наблюдалась обратная картина. Оледвательно! по пере Фотодеструкпнл увеличивается популяция ФС IГ цритроп с поврежденный . Бивод о тон. что Qg не является первичной штсньр при Фо то ш? гиб про на ник подтверждается также рндон экспериментов с использованием супе-роксндднснутазы (сод), каталази (кат), глутатиона (глу) и аскор-бата На (аск На), т.е. соединения - Раеителей свободпорадикалышх состояний кислорода, ооразусявкся под пейст««ен света и влиявлих на о.-сайт ДХ белка (Asada et al.t I90/). сод устраняет суперок-

О

сил. продуцируя из него а глу - ОН -радикалн. В присутствии

этия вешеств наблюдается Некоторое замедление янгибировакия Ff (Рис. 10). причем заяитиий эффект усиливается со врепеиеи освещения. Так, если прй Фотодвструки№ п течений 9 ним. наблюдается Увеличение Ff в присутстшш сод/кат и глу/аск иа чу. и 0* соответственно. то далее эффект занято ?даличиваегся до ítix и 16. ■'!/ .о-отвстственно (при оспепении п течении го шт. ). Что касается динамики скорости шшелышл кислорода (Рис. и). то после добавки /глзпггелеп свободпорадвкалымя состояния кислорода. сгпестветтх изменения не обнаружено. еиднио. зтН Факта гохяо объяснить некоторой влиянием активная видов кислорода на ойсаит. На этол стад1.-1

вознояно воестансс.чегле активности 1-*Ц СС ti. однако ззапггныя з'^ект изп (1-3?.) (Рис. И) к надо полагать, что •тотопигчбирокаиие ла етоп стадии обусловлено пг толы.о L'íj'jmiicíi зктйшпгг видов тс;с-«орела. Ля/:ое пел действие!» ететэ у го исходят процессы» кркводякис к несбраттюну поиредчениэ К» тс 1т частая: увеличение числа РЦ, содеряапия новрйгдегешв 0}н f>3. 'погрегдгеж? Л1. Д.Э и дргглг: аел-. к о г -íC II йзд t&tótonsit ияшивгг видов кислорода п ns деградация bV.^Ja et al., 19571 < Чомсшюетаипз xaoFoíiwma. oíttwai-.-aeo производство егчн'летаого :;келорода через ФоточЛ'Ствнтедыше реакции. Этим ногио объяснить увеякчеияэ oJíeirra заелт» сол/кат и vur/лск на воздшп стопинг ишчшироаанм.

Т. о., и»«! световой стрессе запечено дпя iáau иигибироватга. 1 фаза быстрая, гле идет ttaníSttpottamw активности íc li на 50-бох и скорости потедепия.¡жсЛорояз па го-зох (Prtc. io, ti). Реконститу-шш Ff 39 посредством iln ¡i írt ноказивает, что сап РЯ пе разрушается . о тон ле> говорит и поестамовлеш:*? Ff з> при тейповой 7нку-

_ г'- ~

банки длительностью го мин. при 4 С. в течение которой ироискодит рео"чсление вторая Фаза медленная И пеобратаная. Ио*но предположить два уровня говреаюеиия КВ $С II частиц. ПервНй обратим, связан с переходом все» О. в О состояние, частичный цоврехдениеи О-

П л °

- сайта под влиянием активных видои кислорода, о чей нохио судить по некоторой запште 1'1-в'/-) Р{ ЗФ КВ ФС II частиц посредством ве-шеств - гасителей свободнорадикалытж состояний кислорода, при этой возиохио иэненение копформашга белка, второй уровень Необратим. он связан с повреждением Од» иеканизи которого еше предстоит выяснить. Так. например. Лгк1егзйоп см а1.. 1987 полагает.

а-

что происходит даойлое восстановление О.» после чего он но1сидаот

гл

участок своей локализации. Если би этот Факт имел носто в действительности . то он бы составил первую необратимую стадия при Фо-тонигибировачии. Далее происходит деградация Д1 и Д2 белков, разрыв связи между РЦ и светособираюапг' комплексов и Фотоишшетаиие последнего. Вследствие веек этих процессов снихаетея величина ЗФ и скорости выделения кислорода.

выводи

1. Установлена высокая специфичность 33-кДа периферического белка для функционирования КВ 4-С и частиц, отсутствие белка 33-кДа приводит к ипгиоироваиию доцориой стороны <к; ii и занедле-Пии рекомбинации РббО О состояния и существенно иодавяиет выделение 1сислорода на пепнагсу, ДпукФазная кшютшеа восстанопнтедышй реаглий резко замедлена.

а. Показано, что 33-кЛа белок необколнл для восстановления Рбео, поддергивая донорную сторону водоокисляюией систеш» в Ъ состоянии. Вшшвание этого белка задердивает процесс окисления ноды п '¿¿г состоянии.

3. Выявлено, что г КВ ФС IX частиц этиолированные проростков полипептидний состав характеризуется превалирование« полипеитидов с Кг до ЕО кЛа. Из периферических полнпептидов присутствует в следогшг количествах 33-кДа белек . ЛесФорикровашюсть наргапие-вого кластера фс И из-за неспособности 33-кДа белка встраиваться и него Вез света , отсутствии периферических иолшшптидов 10, Е4 кЛа, зрелой Форш Д1 белка и попов Шь Са. С1 в сантал не функционирования является причшой неспособности КВ ФС II частиц этиолировании* проростков выделять кислород.

- -

4. Через 6ч зеленения появляется 16-кДа белок, иарганяевип кластер не стабилен, но активпо функционирует реакция первичного разделения зарядов , Через 24 ч зеленения появляются белки с Иг 10. 24 «Да , стабилизирующие марганцевый кластер, увеличивается содержание 33-кЛа полипептила, регистрируется кислородпыдедяюаая активность, Ff Зф достигает наксиналыюй величины, электонтранс-портная пень полностью сторнирована.

5. Установлено на оснонашш более високоп Фоточувсттжтельности Ff ЗФ KB ФС II частиц проростков, зеленевших 24ч., по сравнении с KD ФС II частипаки из проростков, зеленеющих бч. , у которых отсутствует сформированная доногная и акцепторная ctopoihj, что реакция первичного разделения зарядов при Фотоингибировании повреждается в последи»» очередь,

6. При Фотодеструкпин КП ФС II частиц наблюдается две Фазы ин-гибнрования: 1-ая обратнна и связана с а!скуцуляиией в восстановленной состоянии и влияние» активных видов кислорода на Од, ?.-ая необрзтнма и связана с цоврехпениен увеличением концентрации активных Форм кислорода, способстпут-шх повреждении» , деграда-шш Д1 и да и Фотовнппеташто хлорофилла.

Основное содержание диссертации изложено в следующих работах:

1. Роль периферических полипептидоп п Функииотгровании кнело-родвыделясших чаетт фс II висинх растений, биокюпш, 1990. 'г. 55, II 12, Р. г1?.г-21га,

2. Светоиндупированное ннгкОнроиание Ездедснил кислорода ФС II частиц (KB ФС II). Иегдунаролная конференция "Фотосинтез и фотобиотехнология", Пгашо, СССР» 1991, с. то,

3. Lieht-induced inhibition of Isolated охуйеп-evolvms Photosy3teo II (OE PS II) particles. In 15th International Congress of Blochenl3try, Jerusaleo. Israel, 1991, abstract H 728.

4. Л role of the extrinsic proteins of О evolving PS II particles (ОЕГ). vill intern, conaress ^n Photosynthesis, stohholm, 1989, Abstract к юза, p. юз,

5. Photoinhibitlon of Isolated chloropiasta and oxyaen-evolvina PS II particles, in IX international Сопяге.чз on Photosynthesis, Japan . Photosynth. Res., 1992, v. 34, Hi, p 227.

- ¿и -

6, Photoinlubition of rtiotoclvjaicai activity of isolates osreen-evolvine FS IJ particles and chlorop|asts. In 7 European Bloenergetic Conference, Helsinki, Kipland, 1992, Abstract II 1-е, V. 7. i>. 5.

7. Effect of Specific Extrinsic Polypeptide Release on Delayed LI slit Ktalssion and OXYReij Evolvm Patterns in Fliotosy^sten E Particles. Phatosynthetica, »991, V. 35, 11 '1, p. 657-565.

e. The го'э of 33, an, to iu>a porii'lieral proteins in tlje activity and photostabi uty of OE PS xi particles, in eerni Fiajs, StoclüjolE, SfrnJen, 1993, Ab-.tract И 35C, p.' 176.

СПКСОК СОКРАЩЕНИИ

c-c I, ',c II - iotcckctc-t.ii i i? ii, кис - ¡шслородвидеяядеия

комплекс, KB CG II часть-си - |'л:с^ородпг;«елЕ--1;!10 частицы Ji, рц

- реакционный пеют, Э> - загедлелнья Сяуоресцеивдн, а„- перпич-шгй кшюиош'Л Екпеитор, итог-нчши, хлпоцодий акцептор . /UK -t. 5-«кфениа1«арбоггдраз»ж, лхш- - э, е-г.вдяоряенмкидо-ичюл, лхш

- / 3 (3. 'I - дихлор4еиил)-1. 1{липатпетэчегала)/.

X У Л Л с э

Лли биткнлэрий вэ дооунларьц фогосингази замены окснквния а мала келмэсинца поло кул,1 ар изханязыи проо'лгии иядик! з&чакда акт у ал галматдадыр. иелувдур ки, оксикенин адрылиаси заданы баш ;;зрэн рваксидалар оксикэн адыран комплекс (ОЫ) терэуивдэн Ьэ-дат качирклир вэ онун ти нлэ сгрунхуру арасында сьа влага иэв-чулдур. Бунунла элагэдер олараг* ОАК-нкн шштзпшд гэркчба иитеисиЕ суротдр тэдгиг едаллр. лакни оак-ииа экэлэ ка.тгаспнин )'аиси стадиДасывда 18, ЗЗ-гДа пер-ферпи зулалларыи емзлэ кэл-иэси во бунун коншшссларин фукисчонсл активлкди вз фотодавемли-П!н;| юс;; >.; Ьаггда инфоркаснда дохдур. Тедгигатларьш- нэтичэсиндв илк дэфэ оларег пврифэрик зклалларьш оксикенан аЗркл:ласкнда, • лэнкидилшы флуорсссзнспдапын гензрасидаскнда вз ататэлиф форма-льлша стздпдасывда олан чучэртилорип ^отодаваилыгында ролу кес-

ГЭр1ГЛГ.1ИШ.ППр,

Касторнликвдир ки, 33-вда зулал лаякидняиил .флуоре ссеиснда-нцн тез ио.-.'.поненги учун спасифицдир вэ 10, 24-ьДа зулалларлы ОАл-и стаО;1лле;;1д1!рир. 38-кДа .зудалии олиамасы II ФС-ин лонор те-' рэ^ишш инкиоирлэашэсино, Рб30+9" вэзиддэтишш ргкомбинасидакии зэиц7кзыыэсинэ вэ оксшсвнин адрылмасыкын дадийилиасинз кэтириб чькарыр.Етиолнзэ олукмуш чучартнлэрдэн адрылиыш Ьмссэчнклзр ФС II популдасидасынын чохлугуна каре оьсшен адыриыр. 33-«гДа зулал наш* сиз ме:.!бранын пчэрисинэ гурула оилмир, Фотодоструксида эаманы иькиопрлэшмонин шш фаз асы' ашкар едклмнаднр вз та дни олукмушлур ¡•"л, дуклорин плкип адрЫдмасы рзаксидасы сон ногоатп? зодолоннр.

Фотодгструнсиданын гаиунаудгуидуту вэ II ¿С ОА 1т:юсом;:кло-рпаин стнбплизасида усу аларшш нэзорэ олараг та]щ дуксек «доола-1;;:;1лыль;га нолик олан обсикан адыран- систзилар мдэдиб Ьазырланаг о лир, *отос:1чтзгшс ««ара ста ¿имр олуаици 4 ^ г о тг в сг ] см д а)] 1.?; г га-иунаудгунаугларйт: 6 «илляри» екса^еиал' лореигда !.'?зид]з.т ¡-"^ анализиндэ тгслс то от лор гаши истифадб етизк олар.

SlKifi-'sBV

The clarification problem of aoiecular raachanisa of osyaea fornation by photosyntl-.-tic hlsher planta and algae remains actual at. present tine. This function la carried out by oxygen evolving c ^nrpleK (oec), vhich activity is determined by orcanlzation its structure. In connection with this the polypeptide structure of oec is bains investigated intensively. However information at what oec formation staee appear peripheral polypeptides with Hr 18. 21, 33 liDa and how they affect on functional activity of complexes and their Photostability is absent now. In' in»estieations was shown that 33 KDa polypeptide is nesessarr for the P6C0 reduction, because it fountains the donor side of the water-hydrolyzing system In • the S, Z state.. It was «shown that 33 KDa protein together with 10 and £<t-KDa protein stabilizes OEC. Oxreen evolvins particles of PB II of etiolated seedlings do not evolve oKYeen, because its donor side is.not formed and PS II population doialnate in them, 33 KDa protein can not JoJn to OEC without llHbt . It sugeested tuo phases durins Hiotodestruction and the reaction of prircarv charees separation is damaged for the last turn.

The obtained results not only eive the hew Knowledges about connection of structure and function of PS II one, but allow to obtain oxiaen-effolving systems with, hleher photostabilitrinvlt.ro.