Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изучение регуляции биогенеза пигментбелковолипидных комплексов хлоропластов

ВАК РФ 03.00.12, Физиология и биохимия растений

Автореферат диссертации по теме "Изучение регуляции биогенеза пигментбелковолипидных комплексов хлоропластов"

ИНСТИТУТ ФИЗИОЛОГИИ И БИОФИЗИКИ РАСТЕНИИ АН ТАДЖИКСКОЙ ССР

На правах рукописи УДК 581.131:581.132.1:581. 167:577.15

УДНИК Ирина Вадимовна

ИЗУЧЕНИЕ РЕГУЛЯЦИИ БИОГЕНЕЗА ПИГМЕНТБЕЛКОВОЛИПИДНЫХ КОМПЛЕКСОВ ХЛОРОПЛАСТОВ

03.00.12. — физиология растений

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

ДУШАНБЕ — 1900

Работа выполнена в лаборатории биофизики фотосинтеза Института физиологии и биофизики растений АН Таджикской ССР.

Научный руководитель — доктор биологических паук Ю. Е. Гиллер.

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

доктор биологических наук, профессор Р. А. Гасанов; кандидат биологических наук Л. А. Кононенко.

Ведущее учреждение—Институт почвоведения и фотосинтеза АН

в . . . . часов на заседании специализированного совета Д 013.03.01 при Институте физиологии и биофизики растений АН Таджикской ССР (734063, г. Душанбе, ул. Айни 299/2).

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке им. И. Ганди АН Таджикской ССР.

СССР.

Защита диссертации состоится «У. . »

Автореферат разослан

1990 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат биологических наук

Р. И. ЧЕРНЕР

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Успехи генетики и молекулярной биологии хлорогшастов, достигнутые в последнее время, убедительно показывают, что органельная транскрипционно-трансля-ционная система играет исключительную роль в формировании фотосинтетического аппарата. В хлорошгастной хромосоме, например, выявлены гены 14 полипептидов,входящих в состав фотосистем. Тем не менее известно, что белки светособирагщего комплекса имеют цитоплазматическое происхождение, а формирование функционально-активных фотосинтетических мембран невозможно без нормальной работы ядерно-вдтоплазматической бе-лок-синтезируюцей системы (Насыров, 1972, 1975; Kachold, Aurich, 1972; Ellis,1977,1983). Таким образом, выяснение деталей кооперированного взаимодействия ядерного генома и пла-стома, цитоплазматического и хлоропластного трансляционных аппаратов остается актуальнейшей проблемой молекулярной биологии и физиологии фотосинтеза.

В числе наиболее ватаых задач в современных исследованиях фотосинтеза следует в первую очередь назвать выяснение структурной организации фотосинтетических мембран,особенно в части организации их пигментного аппарата.

Поскольку в фотосинтезирующих организмах первичная утилизация световой энергии весьма эффективна, отличается высокой степенью надежности и при этом процесс является легко регулируемым, для понимания принципов этого регулирования ваяно исследование специфики организации пигментной системы фотосинтетических мембран, выявление связи пигментов-переносчиков энергии с отдельными мембранными компонентами, их размещения в пространстве и характера взаимодействия в процессах переноса энергии (Кочубей, 1984). Эта часть физиологической проблемы регулирования организации и функций растительного организма и определила направление наиих исследований.

Известно, что формирование пигментной системы фотосинте-. тического аппарата, осуществляющей поглощение, концентрацию и первичное преобразование энергии света при фотосинтезе,неотделимо от биогенеза мембран хлорогшастов. Б работах нашей лаборатории показано, что становление пигментной системы

пластид, в частности, системы нативных форм хлорофилла,представляет собой реализацию в ходе биогенеза мембран двух массивов генетической информации - о свойствах самих молекул хлорофилла и о свойствах непигментных компонентов мембран (главным образом - белков), которыми определяются условия упаковки хлорофилла в мембранных пигмент-белковых комплексах (Гиллер, 1982,1984,1989; Асоева,1987). Эти данные относятся к формированию фотосинтетического аппарата de novo. Информация о том, каким образом осуществляется эндогенное управление состоянием хлорофилла в ходе постоянно идущего в зеленых листьях обновления пигментной системы хлоропластов (Шлык и др.,1972) и о связи этого процесса с биосинтезом белка в клетке, к началу наших исследований вообще отсутствовала.

Цель и задачи исследования. Целью работы было детальное исследование связи формирования пигментной системы хлоролла-стов в зеленых и зеленеющих листьях с биосинтезом белка в цитоплазме и пластидах для дальнейшего развития представлений о механизмах эндогенного управления структурой и функциями фотосинтетического аппарата. Такая информация могла быть получена путем использования специфических ингибиторов биосинтеза РНК и белка, опыт применения которых для изучения принципов эндогенного регулирования нативного состояния хлорофилла имеется в нашей лаборатории. В связи с необходимостью обнаруживать и исследовать изменения состояния обновляющейся части хлорофилла в зеленых листьях применялся способ "разборки" мембран хлорошгастов по "естественным границам", позволяющий делить мембрану на функционально активные фрагменты - супракомплексы, различающиеся по степени сформированное™ (Фрадкин, 1982).

Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие экспериментальные задачи:

- исследовать действие специфических ингибиторов биосинтеза РНК и белка на свойства субмембранных частиц хлорошгастов и состояние хлорофилла в зеленых листьях;

- провести сравнительный анализ действия специфических ингибиторов биосинтеза белка на изучаемые характеристики хло-ропластных мембран в зеленеющих и зеленых листьях;

- исследовать действие специфических ингибиторов биосинтеза белка на полипедтидный состав ламеллярных мембран и суб-

мембранных частиц.

Научная новизна и практическое значение работы. Обнаружено и систематически исследовано действие специфических ингибиторов биосинтеза ШК и белка на состояние хлорофилла в зеленых листьях. Показано, что в результате подавления процессов транскрипции и трансляции генетической информации в ядре .цитоплазме и хлоропластах в общем объеме тилакоидных мембран возрастает доля незрелых участков,задерживается развитие и созревание субмембранных частиц хлоропластов и изменяется распределение хлорофилла по нативным формам и их до-норно-акцепторкые связи в процессах переноса энергии. Следовательно, белковые факторы кодируемые и синтезируемые в различных компартментах клетки необходимы не только дая формирования пигментной системы хлоропластов при зеленении, но и для ее обновления и поддержания в активном состоянии в уже сформировавшемся фогосинтетическом аппарате.

Впервые исследовано действие специфических ингибиторов трансляции на полипептидный состав тилакоидных мембран и субмембранных частиц хлоропластов. Для некоторых,главным образом, длинноволновых нативных фор/ хлорофилла, обнаружена возможность связи их образования и включения в систему переноса энергии с биосинтезом отдельных групп полипептидов хло-ропластных мембран.

Результаты работы расширяют наши представления о механизмах эндогенного регулирования.молекулярной организации и функционирования пигментной системы хлоропластов как в процессе формирования, так и при обновлении в зеленых клетках. На установлении факта зависимости структуры и функций фотосинтетического аппарата от биосинтеза белка в течение всего жизненного цикла растения основана возможность использования в селекционной практике показателей актизности белок-синте-зирующих систем клетки на всех этапах онтогенеза растений.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены (или представлены) на У Всесоюзном биохимическом съезде (Киев, 1986), республиканской научно-теоретической конференции молодых ученых и специалистов Таджикской ССР (Душанбе, 1987), Всесоюзных конференциях: "Структурная динамика биологических мембран и ее роль в регуляции фотобиологических и рецептор-ных процессов" (Минск,1988) и "Первичные процессы фотосинте-

за и механизмы их регуляции" (Ужгород,1988), 1У Всесоюзной конференции молодых ученых по физиологии растительной клетки (Минск,1990) и на У Международном симпозиуме молодых ученых по регуляции метаболизма растений (Варна, Болгария, 199о )• Публикации. Материалы диссертации опубликованы в 10 печатных работах.

Структура работы. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, 4 глав, в которых излагаются методы, результаты экспериментов и их обсуждение, заключения,выводов и списка цитированной литературы, содержащего 172 наименования. Работа изложена на 142 страницах машинописного текста, включает 29 рисунков и II таблиц.

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Зеленые проростки ячменя ( Hordeum vulgare, L. ), отделенные от зерновки переносили на воду, содержащую ингибитор (опыт) или на чистую воду (контроль) и выдерживали 24 ч в темноте и 48 ч на свету (IG4 лк). Для работы с зеленеющими проростками, ячмень проращивали на водопроводной воде при 20°С в темноте в течение 5-6 дней. Этиолированные проростки выдерживали на среде.содержащей ингибитор (опыт), или частой воде (контроль) 24 ч в темноте и 24 или 48 ч на свету (I04 лк). Применяли: ингибиторы биосинтеза белка на хлоро-пластных рибосомах - линкошцин (ЛКМ, Мосмедпрепарат) - О,] г/л и хлорамфеникол (ХАФ, Reanal ) _ 0,375 г/л; ингибитор биосинтеза белка на цитоплазматических рибосомах - цикло-гексимид (ЦГИ, Serva ) - 0,02 г/л; ингибитор транскрипции-актиномицин Д (АД, Reanal ) _ 0,01 г/л и ингибитор транскрипции в хлоропластах - рифампяцин (Pfí.Caibiochen). q,j г/л Выделение хлорошгастов (0,05 М фосфатный буфер pH- 7,8, содержащий 0,3 М сахарозы и 0,1 М ), обработку дигятони' ном (4 %) и электрофорез (5 % полиакриламадный гель,реактив: Reanal ) проводили ранее описанными методами (Фрадкин и др 1973,1978). Сканирование столбиков геля после электрофорез выполняли на гель-сканере спектрофотометра "Shimadzu" (Ядо ния) или вырезали из них окрашенные хлорофиллом зоны, на спектрофотометре СФ-14 регистрировали спектры поглощения этих зон и определяли площади полос в области 640-720 нм.До

ли каждой зоны в суммарной площади полос поглощения всех зон данного геля, выраженные в процентах, использовали в качестве показателей распределения хлорофилла по злектрофорети-ческим зонам. Оценка значимости различий между опытом и контролем для каждого ингибитора выполнена методом парных сравнений (Лакин, 1980).

Спектроскопическому анализу подвергали листья, суспензии хяорошгастов, дигитониновые солюбилизаты и окрашенные хлорофиллом алектрофоретические зоны. Спектры поглощения регистрировали на спектрофотометрах Сф-14 и "БИЗ-тайги тг-зоо" Относительную концентрацию нативных форм хлорофилла рассчитывали путем разложения спектров поглощения (640-720 нм) на индивидуальные полосы (Гуляев и др., 1973). Спектры низкотемпературной флуоресценции регистрировали на спектрофлуори-метре, собранном в лаборатории.

Об активности ФС1 судили по отношению Хл/П^дд в суспензии солюбилизированных тритоном Х-100 (0,1%) мембран хлоропласте®. Хл/П^оо измеряли по фотоиндуцированному окислению в двулучевом режиме на дифференциальном спектрофотометре "змтайги" при насыщающей интенсивности актиничного света с фильтрами СЗС-22 и КС-17 ($радкин и др., 1980).

Анализ полипептидного состава мембран и субмембранных частиц хяорошгастов проводили по схеме, предложенной Л.Г.Та-расенко (Тарасенко, Лис, 1986). Тилакоидные мембраны обрабатывали 1% додецилсульфатом натрия, а окрашенные хлорофиллом кусочки геля, содержащие субмембранные частицы, без какой-либо предварительной обработки помещали в карманы пластины 12% полиакриламидного геля, содержащего 0,2% додецилсульфат натрия и проводили вертикальный электрофорез на приборе производства "Хийу Капур", Таллинн. Пластины геля окрашивали Кумасси о-250 и после отмывки фона денситометрировали на гель-сканере "-кко" (США). Оценку молекулярных масс полипептидов проводили по данным денситограмм. Расчеты вели на БУМС-01.

СВОЙСТВА ФОТОСИНТЕТИЧЕСКИХ МЕМБРАН И БИОСИНТЕЗ БЕЛКА В ЗЕЛЕНЫХ ЛИСТЬЯХ

Действие специфических ингибиторов биосинтеза РНК и белка

аа состав субмембранных частиц хлорошгастов в зеленых листьях. Гель-алентрофорез солюбили зированных дигитонином хлоро-пластов позволяет выделить из фотосинтетических мембран стабильные субмеыбранные частицы, содержащие ФС I (электрофо-ретические зоны 3 и 4) или обогащенные ФС 2 (электрофорети-ческие зоны I и 2) и включающие соответствующие светособира-ющие комплексы. Выделяется также часть фонда светособирающих комплексов,до обработки растений локализованная в формирующихся и еще нестабильных субмембранных частицах (электрофо-ретическая зона 5) (Фрадкин и др., 1973,1981).

Из таблицы I видно, что изменения относительных количеств хлорофилла в зонах 2 и 5 в экспериментах с ЛКМ статистически существенны. Значимым было возрастание количества хлорофилла в зоне бив экспериментах с ХАФ, ЦГИ, АД . Дашь в опытах с РП изменения относительных количеств хлорофилла во всех зонах оказались несущественными,хотя тенденция к росту доли хлорофилла, попадающей в зону 5,по сравнению с водным контролем наблюдается и в этом варианте. АД и ХАФ значимо уменьшали количество хлорофилла в зоне I.

Таблица I

Действие специфических ингибиторов биосинтеза РНК и белка на распределение хлорофилла мезду субмембранныма частицами хлоропластов. % от общего количества во всех зонах

Вариант Электрофоре тические зоны

I ! 2 1 з ! 4 ! 5

Контроль ЛКМ к Р ( п = II) 25 23 >0,05 19 16 0,01 9 10 >0,1 20 18 >0,05 27 33 <0,01

Контроль ХАФ Р ( п = 3) 23 16 <0,02 12 13 >0,1 13 14 >0,05 21 20 >0,1 31 37 <0,02

Контроль ЦГИ Р ( п = 9) 24 22 >0,05 20 17 <0,02 10 II >0,1 21 18 <0,05 25 32 <0,01

Контроль Р ( п = 5) 27 23 <0,01 20 20 >0,1 II 10 >0,1 18 17 >0,1 24 30 <0,05

Контроль РП Р ( п = 4) 24 24 >0,1 20 20 >0,1 8 >0,1 21 20 >0,1 23 25 >0,05

п*- число степеней свободы

Обнаруженное возрастание доли всего хлорофилла мембраны, приходящейся на частицу зоны 5. вероятно, является следствием того, что в результате угнетения биосинтеза белка в общем объеме мембран хлоропластов увеличивается относительное содержание незрелых участков из-за задержки созревания возникающих субмембранных частиц и их ненормального развития. В листьях растений, обработанных ингибиторами, возможно, также замедляется образование новых субмембранных частиц, однако этот процесс не проявляется при анализе распределения имеющегося хлорофилла мевду различными элементами хлоропла-стных мембран.

Уменьшение относительных количеств хлорофилла под действием АД , ЛКМ, ХАФ и ЦГИ (табл.1) свидетельствует об участии как цитоплазматического, так и пластидного аппаратов перено-за генетической информации в управлении формированием суб-яембранных частиц зон I и 2. Обращает на себя внимание тот £акт, что в этих экспериментах не проявилось действие ЛКМ и САФ на субмембранные частицы зон 3 и 4, содержащие только К! I. Это расхождение с известными данными (Насыров, 1975, ¡еггшапи et а1., 1980) о важности трансляции в пластидах щя формирования I, возможно, обусловлено тем, что части-щ зон 3 и 4 представляют собой относительно зрелые элементы «ембраны, синтез новых компонентов которых если и протекает, ю медленно и главным образом с участием образованных в цитоплазме полипептидов, в то время как синтез новых подипеп-эдов в пластидах менее существенен. Наличие изменений рас-[ределения хлорофилла между зонами в опытах с АД, но не с РП юзволяет думать, что в условиях экспериментов с зелеными :истьями основное значение для формирования и обновления убмембранных частиц имела едерная генетическая информация.

Действие специфических ингибиторов биосинтеза РНК и бела на состояние хлорофилла и перенос энергии возбуждения в убмембранных частицах хлоропластов зеленых листьев. Сопо-тавяение распределения хлорофилла по нативным формам в суб-ембранных частицах хлоропластов ячменя с аналогичными дан-ыми, приведенными в диссертации автора метода (Фрадкин, 982), и распределением пигмента по нативным формам в листь-х фасоли (Гуляев и др., 1973) показало, что полученные дан-ые об относительном содержании в субмембранных частицах

хлорофилла в (Хл в - 650) и нативных фора хлорофилла а Хл а-683, Хл g - 693 и Хл а - 704, в основном, соответствуют наблюдаемому ранее (Фрадкин, 1982). Обнаруженные различия не принципиальны и обусловлены не полной идентичностью растительного материала (различные сорта и не совсем одинаковые условия выращивания, процедур выделения и особенно методов расчета). Распределение хлорофилла по нативным формам в субмембранных частицах хлоропластов вполне соответствовало этому распределению в листьях.

На рис.1 приведены только те данные об изменениях относительного содержания нативных форм хлорофилла в субмембранных частицах хлоропластов, достоверность которых, оцененная методом Стьвдента (Литвин, 1975),была удовлетворительной. Установлено, что обработка зеленых проростков ингибиторами изменяла относительное содержание в разных частицах всех нативных форм пигмента кроме Хл а - 662. Так доля хлорофилла g изменялась в частицах 3 и 4 электрофоретических зон,увеличиваясь под действием АД, ЛКМ и ХАФ. Доля Хл а - 671 увеличивалась в частицах зоны 2 (ЛКМ, ХАФ и РП), но уменьшалась в частицах зоны I (ЛКМ, ХАФ и АД). В частицах зоны I под действием АД росло относительное содержание Хл g - 676,но падало - Хл а - 683. В частицах зоны 3 увеличивалась под действием АД и ЛКМ доля Хл â - 686. Относительное содержание Хл а

- 693 в зоне I увеличивалось (ЦЕИ, ЛКМ, ХАФ, РП), а в зоне 5

- уменьшалось (АД, РП). Наиболее подверженным действию ингибиторов оказалось распределение по субмембранным частицам

самых длинноволновых нативных форм хлорофилла а. Так относительное содержание Хл а - 704 увеличивалось в частицах зон I (РП) и 5 (все цримененные ингибиторы) и падало в частицах зон I (АД, ЛКМ и ХАФ), 2 и 3 (РП). Доля Хл а - 715 возрастала в частицах зон 2 (ингибиторы трансляции и P1I), 3 (ингибиторы трансляции), 4 (АД) и уменьшалась в частицах зон 3 (АД, РП), 4 (РП) и 5 (АД, РП и ХАФ).

Данные, представленные на рис.1, показали также, что при подавлении процессов реализации генетической информации в зеленых листьях народу с общей редукцией длинноволновых нативных форм хлорофилла, отмеченной по спектрам поглощения хлоропластов в опытах с ингибиторами трансляции и уже обнаруженной ранее (Парамонова,1977; Hiller et al.,1977; Гилле£

О

ЛАА

¡3

Л

2

□

Э

д

* А л гр А 4-Л 'О

е О 1

•я д л ¡л О

с 1 О 0 1

1 е>

о.

-4

[

« с 3 с * > □

650

о-Ай о-ЦГИ

662 671 676 683с

704 715нм

А-ХАФ

г о

ГО

<и

2 о

О! ГТ К В О)

О,

Сц Ен К 0> ч (О

3686 693 л-ЛКМ • ; п-РП

Рис.1. Действие специфических ингибиторов биосинтеза РНК и белка на распределение хлорофилла по нативным формам в субмембранных частицах хлоропластов.

и др., 1979),имело место и определенное увеличение их относительного содержания в отдельных частях мембраны. Это явление может быть обусловлено изменениями распределения как фонда нативной формы между субмембранными частицами, так и фонда пигмента частицы между нативными формами. Вторая возможность, вероятно, более предпочтительна, т.к. чаще наблюдались ситуации, когда действие одного и того же ингибитора приводило к увеличению в субмембранных частицах определенных алектрофоре-тических зон относительного содержания одних нативных форм хлорофилла при одновременном уменьшении доли других форм.

В табл.2 обобщены полученные данные по действию ингибиторов на распределение хлорофилла по наивным формам и их вклады в спектры низкотемпературной. флуоресценции субмембранны:. частиц хлоропластов. Четко видно, что наибольшая изменчивость исследуемых характеристик наблюдалась у длинноволновых нативных форм хлорофилла . Это соответствует ранее сделанному выводу (Гиллер, 1982; о зависимости образования коротковолновых нативных форм от количеств;; пигмента в клетках, примерно одинакового во всех вариантах опытов с зелеными растениями.

Обращает на себя внимание тот факт, что только в несколь-

ОТ9 птс гчлр

ких случаях (^7041707 и ^710-715 ~ час™Цы 30НЫ 5» действие АД и ^7X0-715' час™Щ1 зон 3 и 4, действие Ш) имело место соответствие между изменениями относительного содержания форм хлорофилла и выраженностью.ах полос в эмиссионном спектре.Чаще наблюдались изменения одной из двух исследованных характеристик или их одновременные изменения противоположной направленности (Хл||з^698 в частицах зоны 5 и Хл71о_7Х5 в частицах зоны 4, действие АД). Следовательно, обнаруженные отклонения от нормы распределения интенсивностей в спектрах низкотемпературной флуоресценции обусловлены главным образом не изменением количества пигмента в виде форм, ответственных за ту или иную эмиссионную полосу, а уменьшением выхода свечения формы. Наиболее вероятная причина этого - нарушение процессов переноса энергии. Ранее было показано, что подавление ингибиторами переноса генетической информации в зеленеющих постэтиоли-рованных проростках среди Дфугих эффектов приводит к увеличению эффективности сенсибилизации флуоресценции ^едз^упд (Гиллер, Асоева, 1982) в ущерб переносу энергии на Хл^

1 I хо

Таблица 2

Действие специфических ингибиторов биосинтеза РНК и белка на характеристики нативных форм хлорофилла в субмембранных частицах хлоропластов ячменя

Инг и б и т о Р Ы

Нативные линкомицин хлорамфеникол ( циклогексимид актиномицин Д рифампицин

формы I 2 3 4 5 I 2 3 4 5 | I 2 3 4 5 I 2 3 4 5 I 2 3 4 5

Хл68^ , 674-676я

Хл686 681-683

Хл

693

686-690

у-697-704 693-698

+ +

уя712-715. 704-707

+ + +

Хл,

726 709

+ +

Хл738 710-715

+ +

+ +

- + - + -

х максимум полосы поглощения, ** максимум полосы флуоресценции.

Для каждой нативной формы: верхняя строчка - изменение выхода флуоресценции (+ - больше, - - меньше), нижняя - изменение относительного содержания. I - 5 - электрофопетаческие зоны.

основную акцепторную форму высших растений (Литвин и др., 1976). Приведенные данные (табл.2) показали, что это явление обнаруживается и цри обработке ингибиторами зеленых растений, но только при анализе состояния хлорофилла в субмембранных частицах хлоропластов. Выше было показано, что при этом имеет место и перераспределение пигмента между частицами. Все эти явления наблюдались в зеленых листьях, что свидетельствует о необходимости белковых факторов, кодируемых и синтезируемых в различных частях клетки, не только для формирования пигментной системы хлоропластов при зеленении (Насыров и др., 1974; Гиллер, Щербакова, 1976; Kirk, 1978), но и для ее обновления и поддержания в активном состоянии в уже сформировавшемся фотосинтетическом аппарате.

Роль биосинтеза белка в обеспечении нативного состояния хлорофилла в фотосинтегаческих мембранах зеленых клеток.Ранее было показано, что мутационная изменчивость признаков нативного состояния хлорофилла подчиняется закону гомологических рядов в наследственной изменчивости (Гиллер,1982,1989).Это же установлено для характеристик ультраструктурной организации пластид (Абдуллаев и др.,1979) и процессов формирования комплексов фотосистем (Квитко,1979). Гомология морфологических и функциональных признаков определяется гомологией на генетическом уровне. Это позволило допустить, что нарушение процессов передачи генетической информации с помощью ингибиторов транскрипции и трансляции (подобно искусственному мутагенезу (Гиллер и др.,1975) должно было приводить к изменчивости признаков наивного состояния хлорофилла в пределах их филогенетического и онтогенетического разнообразия. Первые доказательства справедливости этого предположения были получены в опытах с обработкой ингибиторам;; постэтиолкрованных проростков в процессе зеленения (Насыров и др.,1974; Гиллер и др., 1980 ). Благодаря наличию данных о спектрах низкотемпературной флуоресценции хлорофилла в субмеадбрачных частицах хлоропластов растений различных таксономических групп (Фрадкин,1975),можно было вновь вернуться к проверке сделанных ранее выводов на основе полученных результатов.

При сопоставлении данных о положении максимумов эмиссионных полос хлорофилла в субмембранных частицах хлоропластов растений различных видов и зеленых проростков ячменя,подверг-

нутых обработке ингибиторами, обнаружено, что действие ингибиторов приводило к появлению в спектрах частиц полос, не свойственных данному виду, но встречающихся у других видов высших растений или у водорослей. В основном это были эмиссионные полосы ми» шх акцепторных

при подавлении процессов переноса генетической информации в зеленых листьях наблюдались изменения спектров низкотемпературной флуоресценции хлорофилла, обусловленные, как показано выше, изменениями переноса энергии возбуждения и не выходящие за пределы филогенетического разнообразия этого признака.

О природе главной длинноволновой полосы в спектре низкотемпературной флуоресценции хлорофилла в хлоропластах, мембранных фрагментах и пигмент-белковолипидных комплексах высших растений до сих пор отсутствует единая точка зрения. По одним данным это эмиссионная полоса одной нативной формы Хл?3® (Си— нещеков, 1983), по другим - она имеет тонкую структуру (Кочубей, 1983) и, следовательно, обусловлена свечением нескольких форм. Положение максимумов отдельных компонентов этой полосы (717, 720, 725 и 728 нм) (Кочубей,1983) совпадает с главными максимумами спектра хлорофилла в клетках различных видов" водорослей (Литвин и др., 1976). Вторая позиция (Кочубей, 1983) кажется более предпочтительной, т.к. обнаруженное в наших опытах "проявление" в спектрах частиц эмиссионных полос "водорослевого типа" происходило чаще всего без увеличения относительного содержания нативных форм, ответственных за эти полосы. Т.е. действие ингибиторов приводило скорее к "визуализации" структуры главной полосы в низкотемпературном спектре флуоресценции из-за нарушения переноса энергии в системе форм, нежели к возникновению новых, отсутствующих в норме центров свечения.

Уже при исследовании связи образования нативных форм хлорофилла с процессами передачи и реализации генетической информации в ходе биогенеза пластидных мембран был отмечен сложный кооперативный характер участия ядерно-цитоплазматической и органельной гранскрипционно-трансляционных систем в формировании пигментного аппарата хлородластов (Насыров, 1975; 51Пег, 1984). При этом удалось ориентировочно локализовать кодирование и синтез белковых факторов, ответственных за

форм водорослей

Таким образом

образование и функционирование в процессах переноса энергии отдельных нативных форм хлорофилла (Асоева,1987).Рассмотренные результаты выявили зависимость исследованных признаков нативного состояния хлорофилла (распределение пигмента по нативным формам, их донорно-акцепторные связи в процессах переноса энергии, стабильность длинноволновой флуоресценции) от функционирования как ядерного генома, так и пластома, как цитоплазматических, так и пластидных рибосом. Следовательно, не только для становления, но и для поддержания нативного состояния хлорофилла необходимо функционирование и ядерно-цитошгазматической, и хлородластной транскридционно-трансля-ционных систем.

Следующим шагом в экспериментальном обосновании этих представлений и их дальнейшем развитии должно было стать исследование последствий действия применяемых ингибиторов на уровне полипептидного состава пластидных мембран.Однако, понимая все сложности подобной работы с зелеными листьями (в этом случае нужно было бы фиксировать небольшие изменения на фоне больших количеств ранее сформировавшихся белковых компонентов мембраны), мы посчитали целесообразным вновь вернуться к постэтиолированным проросткам. Но для этого следовало применяемыми в данной работе методами (анализ состояния хлорофилла в субмембранных частицах хщропластов и формирования самих частиц), ранее не использовавшимися в исследованиях эндогенного регулирования состояния хлорофилла в процессе зеленения, убедиться в принципиальном сходстве эффектов действия ингибиторов в зеленых и зеленеющих постэтиоли-рованных проростках. Экспериментальному решению этой задачи и посвящена следующая глава,

ФОРМИРОВАНИЕ ШТОСШТЕТИЧЕСКИХ мЕМБРАН И БИОСИНТЕЗ БЕЛКА

Действие специфических ингибиторов биосинтеза белка на состав субмембранных частиц хлоропластов постэтиолированных листьев. Формирование высокоорганизованных структурных компонентов хлоропластных мембран происходит ступенчато.несинхронно, но уже к 24 ч освещения электрофореграмма пластидно-го материала проростков по виду подобна электрофореграмме материала зеленых листьев (Фрадкин,Ксяяго,1977). Этим объясняется выбор условий для работы с постэтиолированными про-

ростками.

Таблица 3

Действие специфических ингибиторов биосинтеза белка на распределение хлорофилла меаду субмембранными частицами хлоропластов (24 часа зеленения)

% от общего количества во всех зонах

Вариант ЭлектроФоретические зоны

I ! 2 1 3 ! 4 ! 5

Контроль 23+7 16+4 14+1 13+1 26+4

Линкомицин 25+6 16+5 10+1 13+2 36+3

Циклогексимид 26+6 15+5 10+2 10+1 40+5

Как показано в табл.3, подобно результатам опытов с зелеными растениями (табл.1),на электрофореграммах обнаруживалось пять хлорофилл-содержащих зон. Уменьшение относительного содержания хлорофилла в зоне 3 под влиянием ЛКМ указывает на важность трансляции в пластидах для формирования ФС I.Влияние ЛКМ на частицы зоны 5 было одинаковым как у зеленых, так и у постэтиолированных проростков: наибольшее количество хлорофилла обнаруживалось в этой зоне, содержащей,в основном, све-тособираюгций комплекс, увеличивалось оно и по отношению к контрольному варианту.

В варианте с ЦГИ действие ингибитора сказалось на относительном содержании хлорофилла в частицах зон 3, 4 и 5. На подавление этим ингибитором накопления хлорофилла в комплексах ФС I,а,следовательно, и необходимости синтезированных в цитоплазме полилептидов для образования ФС I, указывалось при обсуждении результатов, полученных в опытах с зелеными проростками. Под влиянием ЦГИ также наибольшее относительное содержание хлорофилла наблюдалось в зоне 5.

Таким образом, обнаруженное увеличение доли мембранного материала в зоне 5 под действием ингибиторов белкового синтеза как в зеленых, так и в зеленеющих проростках,указывает на одинаковый принцип эндогенного регулирования процессов становления и функционирования фотосинтетического аппарата,что проявляется в кооперированном взаимодействии белок-синтезирующих систем цитоплазмы и хлоропластов.

Действие специфических ингибиторов биосинтеза белка на состояние и функциональную активность хлорофилла. При анализе низкотемпературной флуоресценции субмембранных частиц хлоро-

пластов было обнаружено, что действие ЛКМ и ЦГИ на постэтио-лированные проростки приводит к некоторым изменениям в положении основных и дополнительных полос в этих спектрах (табл. 4) и интенсивности их свечения.

Таблица 4

Положение максимумов полос низкотемпературной флуоресценции хлорофилла в субмембранных частицах хлоро-пластов постэтиолированных проростков ячменя

Вариант

Злектрофоретические зоны

т

Контроль Линкомицин

Цикяогекси-мид

Ш.695, £83,696, 705, (726ГГ&8) 735

35,694, 726)

т

692, Ж!,735

683,700, 623,690, Ш(723) 680(727} 6Ш,740 Г755) 696,

(720-730)

Ы™

23,700, 14,735

',725

£80(725) 680,720

Наиболее значительные изменения под действием ЛКМ наблюдались в зонах 2 и 3, а под действием ЦГИ - в зонах 2,3 и 5. В опытах с ЛКМ в спектре частиц зоны 2 длинноволновые формы представлены широкой полосой в области 720-730 нм с меньшей интенсивностью, чем в контроле, а в спектре зоны 3 интенсивность длинноволнового максимума несколько выше, чем в ¿пект-ре контрольного варианта.

Обработка этиолированных проростков ЦГИ приводила к падению интенсивности длинноволновых форм хлорофилла в спектрах низкотемпературной флуоресценции, особенно в зонах 3 и 4, что отмечалось так же при изучении действия ЦГИ на зеленые проростки.

Рассмотренные в этой главе экспериментальные данные достаточно убедительно показали, что ингибироваяие биосинтеза белка в пластидах или цитоплазме действует на состав субмембранных частиц хлоропластов постэтиолированных проростков и состояние в них хлорофилла практически аналогично тому, как это наблюдалось в опытах с зелеными листьями. На основе этих результатов казалось оправданным провести анализ влияния ингибиторов на белковые компоненты хлоропластов в опытах с зеленеющими постэтиолированными проростками.

ДЕЙСТВИЕ СПЕЦИФИЧЕСКИХ ИНГИБИТОРОВ БИОСИНТЕЗА БЕЛКА НА

ПОШПЕПТЩЩЬЙ СОСТАВ ФОТОСИНТЕТИЧЕСКИХ МШБРАН.

Полипептидннй состав тилакоидных мембран. Как видно из рис.2 в варианте с ЛКМ сильно снижалась интенсивность полос с М.м.69 и 110 кДа и не проявлялись полосы 35, 38 и 46 кДа. В варианте с ЦГИ на фоне общего хорошего разрешения полос наблюдалось увеличение интенсивности пиков 69 и 13 кДа. На эгах денситограммах менее интенсивно, чем в контроле, проявлялись полосы с М.м. 46 и 51 кДа.

Установлено (табл.5), что ингибирование биосинтеза белка ЛКМ наиболее часто приводило к уменьшению интенсивности полос в области М.м. 60-75 кДа по сравнению с контролем, тогда как действие ЦГИ в этой области быт., противоположным.Различным было действие ингибиторов и на интенсивность полос в области 18-48 кДа. Под влиянием ЛКМ вклад этих полос в общую площадь денситограммы увеличивался, а в варианте с ЦГИ - уменьшался. Одинаковым бшго действие обоих ингибиторов на интенсивность полос низкомолекулярных (с М.м. ниже 18 кДа) и высокомолеку -лярных (М.м. больше НО кДа) полипептидов.

В число 5-6 полкпептидов комплекса ядра ФС I входят компоненты с М.м. 60-70 кДа, 22-25 и 16 кДа (Орт, Говиндаи,1987), обнаруживаемые на денситограммах (рис.2). Одной из наиболее выраженных была полоса полипептидов 67-69 кДа, интенсивность которой под действием ингибиторов изменялась. Снижение интенсивности этой полосы ЛКМ подтверждает факт кодирования и синтеза полипептида 65-70 кДа - апопротеина Пудд генетической системой хлоропласта (Орт, Говиндаш,1987).

В варианте с ЦГИ наблюдалось увеличение интенсивности полосы 69 кДа с одновременным уменьшением относительного содержания высокомолекулярных белков (с М.м. более 110 кДа). Поскольку димерная форма полипептида 67-70 кДа имеет М.м. около 130 кДа (Орт, Говинджи,1987), то возможно, что сборка полипептидов РЦ ФС I в единый функциональный комплекс зависит от процессов трансляции не только в пластидах,но и в цитоплазме.

Ранее указано на принадлежность к РЦ ФС 2 полипептида 51 кДа ( •Лез'ДюГГ ег а!., 1983). Его полоса обнаружена и на денситограммах в наших экспериментах (рис.2). Причем в контроле и варианте с ЛКМ проявление полосы 51 кДа было более

Рис.2. 1 Рис.-З. 5

Рис.2. Действие ингибиторов биосинтеза белка на полипептидный состав мембран хлоропластов

( I - 3 - денситограммы, 4 - схема разделения Рис.3. Действие ингибиторов биосинтеза белка на полипептидный состав субмембранных частиц хлошпластов I и 5 электтюгЕюпетииеские зоны ).

четким, чем в варианте с ЦГИ. Вероятно, биогенез РЦ К 2 зависит не только от функционирования пластома, его нормальное протекание требует также экспрессии и ядерного генома.

Как видно из рис.2, существует еще одна хорошо выраженная группа полос в пределах М.м. 25-30 кДа. Эту группу можно отнести к полипептидам ССК ФС I и ФС 2 (вепе«, 1986 ; Москаленко и др., 1987). Интенсивность полос 25-30 кДа в вариантах с ингибиторами бшга близкой к контролю, но соотношения вкладов этих полипептидов и группы полипептидов 60-75 кДа в общую плсгодь денситограммы существенно различались (табл.5).В опытах с ЛКМ оно увеличивалось, а в опытах с ЦГИ уменьшалось по зравнэнию с контролем. Таким образом, синтез полипептидов ССК зависел преимущественно от трансляции в цитоплазме.

Таблица 5

Изменение относительного содержания (%) отдельных групп полипептидов под действием ингибиторов биосинтеза белка в сравнении с контролем (+ - увеличение, — уменьшение)

№ Вари-)пыч ант га

М.м.. кДа

более 48-100 ! 18-48 25-30 менее 18

НО 1 |

К 16,2+0,3 26,5+1,0 41,1+0,25 20,5+0,2 13,9+0,4

ЦГИ - + - +

ЛКМ - - + + +

К 16,0+0,8 32,2+1,3 33,9+2,7 17,1+0,4 5,7+0,5

ЦГИ - + + + +

лил + + +

К 19,1+1,6 32,7+0,9 38,5+2,0 19,2+1,3 43,0+1,1

ЦГИ - + +

ЛКМ + - + +

К 17,4+0,8 36,7+1,1 34,0+2,2 17,1+1,1 3,7+0,9 ЦГИ - + ~

ЛКМ - + - -

Полипептидный состав субмембранных частиц хлоропластов, а рис.3 приведены результаты анализа белков субмембранных астиц двух зон: первой, как наиболее близкой по полипептид-ому составу к тилакоидной мембране, и пятой, картина распре-еления полипептидов в которой наиболее отлична от других зон.

Как видно из рис.3, в варианте с ЛКМ в субмембранных частицах т. зоны сильно снижалась интенсивность полосы полипептида с кДа, тогда как в варианте с ЦГИ полосы, соответствующие к .лшонентам 29,69 и 126 кДа с М.м имели примерно одинаковую интенсивность, что не противоречит данным,полученным для мембран хяородяастов и позволяет охарактеризовать субмембранные частицы первой зоны как наиболее зрелые мембранные структуры.

Из табл.6 следует, что под действием ЦГИ уменьшалось относительное количество высокомолекулярных полипептидов (М.м. более 100 кДа) во всех зонах, кроме пятой. ЛКМ оказывал инги-бирующее действие, в основном, на группу полипептидов с М.м. от 48 до 100 кДа. Под влиянием обоих ингибиторов в первых четырех зонах чаще всего происходило увеличение относительного вклада полос низкомолекулярных (менее 18 кДа) полипептидов в общую площадь денситогралаа.

Таблица 6

Относительное содержание отдельных групп полипептидов в субмембранных частицах хлоропласте©, %

М.м., кДа Вариант ! ЗлекттюсЬотэотические з они

! Г 2 3 4 5

более 100 К ЦГИ лгал 17,5+0,5 13,1+0,1 22,0+1,8 29,6±0,1 18,0+0,5 13,0+1,0 22,5+0,1 20,0+3,0 18,0+5,4 38,4+0,1 31,2+0,2 40,3+0,1 5,0+0,9 16,0+0,1 22,0+1,5

48-100 К ЦГИ ЛКМ 32,5^0,3 45,1+0,2 27,0+1,6 41,1+0,2 32,6+0,1 23,1+1,3 33,5+0,3 37,0+1,1 34,4+1,3 33,8+0,3 43,$+0,4 27,5+4,6 18,2+0,1 33,0+0,6 29,0+4,2

18-48 4 ЦГИ ЛКМ 42,0+1,4 35,8+0,4 40,0+1,5 25,7+0,2 29,4+0,5 43,0+2,5 34,4+0,2 22,0+0,4 37,0+5,8 21,8+0,1 21,1+0,1 16,8+0,4 67,0+1,8 44,0+0,6 45,0+2,6

ме^е К ЦГИ ЛКМ 7,6+0,3 5,9±0,2 10,0+1,7 3,6+0,2 19,9+0,1 21,1+1,6 9,3+0,2 21,0+1,9 11,0+0,9 6,0+0,3 4,9+0,4 15,0+1,0 9,9+0,3 6,7+0,1 4,1+0,1

Как видно из рис.3, в субмембранных частицах пятой зоны наилучшим образом представлена группа полипептидов светособи-

рающих комплексов с примерной М.м.25 и 27 кДа. Под действием как ЦГИ, так и ЛКМ уменьшается доля этой группы, но одновременно увеличивается относительное количество двух других более высокомолекулярных групп полипептидов, т.е. в материале пятой зоны в результате действия ингибиторов оказываются в больших количествах, по сравнению с контролем, полипептиды, характерные для других субмембранных частиц.По-видимому, подтверждается предположение о том, что подавление биосинтеза белка ЦГИ и ЛКМ задерживает созревание субмембранных частиц и (или) приводит к их ненормальному развитию. При этом установлено, что синтез отдельных полипептидов полностью не нарушается, а наблюдаются лишь изменения относительной интенсивности этих полос на денситограммах.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Многие из возможных путей ядерно-гагастомного генетического контроля молекулярной организации и функционирования фотосинтетического аппарата сегодня уже известны. Это, в первую очередь, синтез на цитоплазматических рибосомах балков шгас-ТИДНЫХ рибосом ( Peio.-abeг.i, 1979), ферментов и факторов,

регулирующих трансляцию в пластидах (íiVige-a.-.r., 1981; Rearden, 1983), а также различные способы реализации ядерной генетической информации в процессах формирования белковых компонентов мембран хлорооластов (Насыров,1975).Детальный анализ действия каждого из этих механизмов необходим для более полного понимания процессов формирования, функционирования и поддержания в активном состоянии пигментной системы фотосинтетического аппарата.

Экспериментальные данные, приведенные,в настоящей работе, показали, что действие специфических ингибиторов биосинтеза РНК и белка приводит к увеличению доли мембранного материала в алектрофоретической зоне, где сосредоточена часть фонда светособирающих комплексов из формирующихся и еще нестабильных субмембранных частиц, как при формировании фотосинтетической мембраны вообще, так и при обновлении ее компонентов в зеленых клетках.

Сопоставление этих данных, результатов спектрального анализа субмембранных частиц хлорошгастов зеленых (табл.2) и постэтиолированных (табл.4) проростков с результатами анализа

лолипептадного состава тилакоидной мембраны (табл.5)и субмембранных частиц (табл.6) позволило выявить ряд закономерностей в действии ингибиторов биосинтеза белка.

Так, обнаружено, что под влиянием ЦГИ в субмембранных частицах зоны I происходило увеличение относительного содержания "относящегося к ядру ФС I (Кочубей, 1984),и увеличивалось относительное содержание полипептидов с М.ы. в пределах 48-100 кДа, а так же интенсивность на электрофорег-раммах полосы 67-69 кДа, ассоциируемого ФС I ( Westhoff , 1983). Обнаруженный эффект может указывать на участие белок-синтезирутацей системы цитоплазмы в формировании РЦ ФС I.

По литературным данным (Орт, Говинджи, 1987; Москаленко и др., 1987) достаточно хорошо известно, где осуществляется кодирование практически всех псшшептидов тилакоидной мембраны, но сведений о местах синтеза отдельных полипептидов явно недостаточно, чтобы судить о зависимости формирования функционально активных комплексов ФС I и ФС 2 только от генетической системы ядра и цитоплазмы или хлорошгастной белоксинтези-рующей системы.

Под действием ЦГИ в зоне I также отмечено уменьшение количественного содержания группы полипептидов 18-48 кДа и снижение относительного содержания из периферической ан-. теннн ФС I (Кочубей, 1984). По-видимому, в группу этих полипептидов входят полипептиды ССК I, кодирование и синтез которых осуществляется генетической системой ядра и цитоплазмы ( Ellis,1984). Из этой группы полипептидов на денситограммах в наших экспериментах отмечается пик в области 27 кДа, интенсивность которогов опытах с ЦГИ уменьшается. Возможно, в результате подавления синтеза данного полипептида в цитоплазме уменьшается и относительное содержание формы Хл7^- Поскольку ССК I состоит из нескольких полипептидов, подавление синтеза одного из них может создавать условия для усиленного синтеза других полипептидов. В экспериментах с ЦГИ обнаружено увеличение относительного содержания нативной формы, также входящей в состав ССК I — ^710-715• Можно предположить, что в результате действия ингибиторов трансляции в цитоплазме происходит перераспределение "нагрузки" между отдельными компонентами ССК ФС I. Интересно, что при прочих различных эффектах, относительное количество длинноволновой формы Хл™ 7Т(. уве-

личивается как в экспериментах с ЦГИ (зоны I и 2), так и в опытах с ЛКМ (зоны 2 и 3). По-видимому, синтез полипептидов, ответственных за образование данной нативной формы наименее подвержен действию ингибиторов трансляции. Дополнением к сказанному могут служить данные об увеличении относительного содержания группы полипептидов 18-48 кДа в тех же случаях, когда увеличено и относительное содержание ^7jq_7j5 (в опытах с ЦГИ - зона 2, ЛКМ - зоны 2 и 3). Практически то же самое можно сказать и о Хл^^ из периферической антенны ССК ФС I.

Результаты экспериментов с ЛКМ показали, что действие этого ингибитора проявлялось и в тех случаях, когда полипептид кодирован в ядре (22 и 16 кДа). При этом имело место уменьшение относительного содержания группы полипептидов 48100 кДа в субмембранных частицах зон 1-4 и уменьшение интенсивности основной полосы этой группы - 67-69 кДа по сравнению с контрольным вариантом. Данные, полученные спектральным анализом материала субмембранных частиц хлоропластов постэтиоли-рованных проростков, показали, что в спектрах зон I и 2 происходило увеличение свечения в области флуоресценции основных нативных форм хлорофилла ядра ФС I - Xflgg-j-. Вероятно,этот эффект в действии ЛКМ указывает на то, что в результате неполного синтеза белков ядра ФС I происходит усиление переноса энергии с донорных на основные акцепторные нативные формы хлорофилла комплекса ЗС I, на что указывает так же и то, что

под действием ЛКМ наблюдалось увеличение относительного со-

7ТЯ

держания нативных форм хлорофилла ССК I (Хл^^ и Хл^д) и в то же время возрастало относительное содержание группы полипептидов 18-48 кДа.

Таким образом, полученные результаты указывают на тесную взаимосвязь и взаимообусловленность биосинтеза белка со становлением и функционированием системы нативных форм хлорофилла в биогенезе как пигмент-липопротеидных комплексов, так и фотосинтетической мембраны в целом.

ВЫВОДЫ:

I. При подавлении биосинтеза РНК и белка в цитоплазме и пластидах в зеленеющих и зеленых листьях увеличивается относительное содержание незрелых участков мембраны, т.е. задерживается формирование мембраны как de novo , так и в про-

цессе ее обновления.

2. Нарушение процессов передачи и реализации в биосинтезе белка генетической информации в зеленых листьях приводит к изменениям распределения хлорофилла по нативным формам и до-норно-акцепторных связей форм при переносе энергии возбуждения. Наущаемые изменения состояния хлорофилла не выходят за пределы филогенетической изменчивости этих признаков.

3. Для нормального хода процессов обновления и поддержания в нормальном состоянии системы нативных форм хлорофилла в зеленых листьях нужны синтезируемые в цитоплазме и хлороплас-тах полипептида. Существенную роль при этом играет генетическая информация адра.

4. В результате обработки этиолированных зеленеющих проростков ингибиторами биосинтеза белка, отклонения от нормального формирования субмембранных частиц хлородластов и изменения характеристик состояния хлорофилла в этих частицах были такими же, как при действии ингибиторов на зеленые проростки.

5. Действие ингибиторов трансляции не полностью нарушает синтез отдельных полипептидов, а приводит к изменению их относительного содержания как в тилакоидной мембране в целом, так и отдельно в белковых компонентах мембранных супракомп-лексов,

СП'У

6. Для некоторых нативных форм хлорофилла (Хл^ - форма ядра ФС I; Хл^2, Хл710_715 - формы периферической антенны $С I) обнаружена зависимость их накопления и включения в систему переноса энергии от количества в мембранных комплексах групп полипептидов с М.м. 48-100 кДа и 18-48 кДа.

Материалы диссертации опубликованы в следующих работах:

1. Гиллер Ю.Е,, Вахидова Л.Р., Дудник И.В. Действие специфических ингибиторов биосинтеза НЖ и белка на формирование фотосинтетических мембран. // У Всесоюзный биохимический съезд. Тезисы стендовых сообщений. - М. 1986. - Т.З. - С.75.

2. Гиллер Ю.Е. ( Вахидова Л.Р., ^гдник И.В., Коляго В.М., Фрадкин Л.И. Влияние ингибиторов биосинтеза РНК и белка на фракционирование субмембранных частиц хлоропластов. // Физиология растений. - 1986. - Т.33, № 5.. - С.850-855.

3. Дудник И.В., Вахидова Л.Р., Гиллер Ю.Е. Влияние ингибиторов биосинтеза РНК и белка на состояние хлорофилла в субмембранных частицах хлоропластов. // Рукопись деп. в ВИНИТИ 04.06.1986. - Л 4063. - 386 - 51 С.

4. Гиллер Ю.Е., Дудник И.В., Вахидова Л.Р. Влияние ингибиторов биосинтеза РНК и белка на состояние хлорофилла в зеленых листьях. // Докл. АН Тада.ССР. - 1986. - Т.29. й 8. -С.489-492.

5. Дудник И.В. Действие специфических ингибиторов биосинтеза белка на состояние хлорофилла в субмембранных частицах хлоропластов. // Материалы республиканской научно-теоретической конференции молодых ученых и специалистов Таджикской ССР. Секция биологии и медицины. - Душанбе, 1987.-С.22-23.

6. Дудник И.В., Вахидова I.Р., Гиллер Ю.Е. Действие специфических ингибиторов биосинтеза белка на полипептидный состав фотосинтетических мембран. // Структурная .динамика биологических мембран и ее роль в регуляции фотобиологических и рецелторных процессов: Тез.докл. - Минск, 1988. - С.51.

7. Дудник И. В., Вахидова Л. Р., Гиллер Ю.Е. О действии специфических ингибиторов биосинтеза белка на полипептидный состав фотосинтетических мембран. // Докл. АН Тада. ССР. 1989. - Т.32. Д I. - С. 68-72.

8. Дудник И.В. Действие ингибиторов биосинтеза белка на фракционирование и полипептидный состав субмембранных частиц хлоропластов. // 1У Всесоюзная конференция молодых ученых по физиологии растительной клетки. Тез.докл. - Шнек, 1990.

9. Дудник И.В., Вахидова Л.Р., Гиллер Ю.Е. Влияние специфических ингибиторов биосинтеза белка на полипептидный состав субмембранных частиц хлоропластов. // Докл. АН Тадж.ССР. - 1990. - Т.33. В 3. - С.196-198.

10. Dudnik Irina V. Action of specific inhibitors of protein biosynthesis on the polypeptide composition of

chloroplast submembrane particles // V^ international youth symposium on plant metabolism regulation. Abstracts.- Varna, Bulgaria, 1990 - P. 71.

C.4I