Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Исследование роли лектина пшеницы в защитных реакциях растений при грибном патогенезе

ВАК РФ 03.00.12, Физиология и биохимия растений

Автореферат диссертации по теме "Исследование роли лектина пшеницы в защитных реакциях растений при грибном патогенезе"

российская академия наук

казанскш научный центр институт биологии

На правах рукописи УДК 531.2.07:577.112:633.11

Хейруллин Рпмш» Магзкнурович

ИССЛЕДОВАНИЕ РОЛИ ЛЕКТИНА ПШЕНИЦЫ В ЗАЩИТНЫХ РЕАКЦИЯХ РАСТЕНИИ ПРИ ГРИБНОМ ПАТОГЕНЕЗЕ

(03.00.12 Физиологи.! растений 06.01.II Запита растений от вредителей и болезней)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

К/,' АНЬ - 1994

Работа выполнена в лаборатории биохимии и генетики иммунитета растений Отдела биохимии и цитохимии Уфимского научного центра Российской Академии наук

Научный руководитель - доктор биологических наук

А. К. ЯМАЛЕЕВ

Официальные оппоненты - доктор биологических наук

В. Б-О. ГРОМОВА кандидат биологических наук Н. Н. иАКСОТОВА Ведущая организация - Ордена Трудового Красного

Защита диссертации состоится 23 марта 1994 г а 10-00 ч на заседании специализированного совета К 002.16.01. по присуждению ученой степени кандидата биологических наук в Институте биологии КНЦ РАН по адресу: 420503, г. Казань, ул. Лобачевского, д. 2/31. А/я 30.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института биологии

Авторефергт разослан " /9" февраля 1994 г.

Ученый секретарь специализированного совета,

Знамени Институт физиологии растений им. К А. Тимирязева РАН

кандидат биологических наук

ЛОСЕВА

- 1 -

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Повышение устойчивости сельскохозяйственных культур к болезням и другим неблагоприятным факторам является одной из важнейших проблем растениеводства. Решению этой проблемы в значительной степени способствует познание естественных механизмов устойчивости растений при стрессовых воздействиях.

Считается, что в реакциях устойчивости растений к неблагоприятным факторам среды принимают участие не менее 10 различных классов соединения, в том числе и растительные лектины 1Не1еаагс1 е1 а1., 1991]. Лектины - это белки (гликопротеины) неиммунной природы способные специфически и обратимо связываться с углеводными молекулами. Лектины встречаются во всех живых организмах и могут быть обнаружены в каждом растении [Королев, 1984]. В значительных количествах такой белок содержится в зародыше пшеницы. Структура и свойства лектина (агглютинина) зародыша пшеницы (АЗП) хорошо исслудованы [Реитапэ, 19843, однако функции, выполняемые этим белком в растительной клетке, до сих пор не установлены.

АЗП специфически связывается с хитином - структурным углеводным компонентом клеточной стенки многих фитопатогенных микроорганизмов. В связи с этим, в качестве основной функции лектина предполагается защита растений от грибных патогенов СМ1ге1тап еЬ а1., 1976]. Это предположение основано на экзогенном воздействии АЗП на фитопатогенные микроорганизмы, однако, нет данных о непосредственном участии лектина в процессе развития защитных реакций растений пшеницы при грибном патогенезе.

Цель работы состояла в том, чтобы определить вовлекается ли АЗП в реакцию устойчивости пшеницы к болезням и выяснить насколько участие лектина специфично в развитии защитных механизмов растений против грибных патогенов. Для этого были поставлены следующие задачи :

- выделение, очистка и характеристика АЗП;

- изучение динамики накопления лектина в растениях лри патогенезе и определение характера этого изменения у сортов пшеницл, различающихся по устойчивости к болезням;

- определение возможности использования показателя содержали АЗП в сухих зрелых семена.; пшеницы в качестве диагностического признака ее устойчивости к грибным болезням;

- выяснение возможности вовлечения лектина, как предполагаемого защитного белка, в механизмы индуцирования устойчивости

- г -

растений веществами типа иммунизаторов;

- исследование влияния других стрессовых факторов на количественный уровень этого белка в растениях и определение специфичности предполагаемых завдтных реакций растений пшеницы с участием в них АЗП.

Необходимым условием выполнения поставленных задач являлась постановка высокоспецифичного и чувствительного метода количественного определения лектина в растениях пшеницы в качестве которого был выбран непрямой твердофазный конкурентный иммунофермент-ный анализ (И£>А).

Научная новизна. С использованием метода ИФА впервые выявлено накопление агглютинина зародыша в растениях пшеницы при патогенезе, вызванном грибами Septoria nodorum Berk и Helminthosporl-um sativum Pam. и одновременно определен баланс фитогормонов -абсцизовой (АБК) и индолилуксусной (ИУК) кислот. Впервые показано, что реакция восприимчивого к болезням сорта пшеницы в сравнении с устойчивым характеризуется более значительными количественными изменениями уровня лектина.

Исследованы некоторые механизмы действия на растения новых химических иммуностимуляторов бисол 2 и базуран, " также биопрепаратов зкост и эмистии. Впервые показано, что повышение устойчивости растений к болезням иммунизаторами может быть связано с индукцией накопления лектина в растениях под их воздействием.

Впервые выявлено увеличение количественного уровня агглютинина зародыша в проростках пшеницы в ответ на солевой стресс.

Практическая значимость работы. Результаты исследований вносят определенный вклад в познание молекулярных механизмов защитных реакций растений и расширяют знания, необходимые для успешного решения практических задач биотехнологии и селекции растений на устойчивость к болезням.

Результаты исследований некоторых механизмов индуцированной устойчивости пастений к болезням могут найти непосредственное применение в скрининге новых средств защиты растений.

Оригинальные решения исследовательских задач, полученные при постановке и оптимизации метода иммуноферментного анализа лектина и разработке способа его экстрагирования из растительного материала, должны найти применение в проведении научных исследований, связанных с изучением этих уникальных растительных белков.

Апробация работы. Результаты работы докладывались и обе уедались на международных конференциях "INTERLEC 11й (Tartu, 1989),

"INTERLEC 15" (Szeged, 1993), Всесоюзной научно-практической конференции "Физиолога-биохимические и генетико-селекционные основы иммунитета с.-х. растений к грибным болезням" (Уфа, 1989), 1 Всесоюзной школе-семинаре "Иммуноферментный анализ регуляторов роста растений: применение в физиологии растений и экологии" (Уфа, 1991), П и HI съездах ВОФР (Минск, 1990; С.-Петербург. 1993), П Республиканской конференции "Регуляторы р^ста и развития растений" (Москва, 1993).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 13 работ.

Структура и объем диссертации." Диссертация состоит из введения, обзора литературы, изложения методов исследований, результатов исследований и их обсуждения, заключения и выеодов. Работа изложена на*127 стр. машинописного текста, содержит 24 рисунка, б таблиц и список литературы, включающий 150 работ.

ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектом, на котором проводились исследования, были растения родов Triticum L. и Aegílops L. в различных стадиях онтогенеза.

В лабораторных опытах семена перед посевом стерилизовали 70Z этанолом или этанолом и 1-3 % перекисью водорода и проращивали на стерилизованных субстратах в комнате на светоьлошздке (фотопериод 16 ч, освещенность 12-16 тыс. лк.). Для получения семян различной степени зрелости использовались растения, выращиваемые в поле.

Заражение проростков или колосьев взрослых растений септори-ей (S. nodorum) проводили опрыскиванием их суспензией спср (1 млн/ мл) в стерильной дистиллированной воде с 0,1Z Твин-20 [James, 1971]. До созревания семян колосья изолировали бумажными колпачками. Поражение проростков корневой гнильв (Н. sativum) вызывали поливом основания стеблей проростков суспензией конидий в стерильной воде по Кумачевой и Поповой С197Б]. Контрольные растения-в опытах обрабатывали соответствующим раствором без спор патогена. Поражение септориозом и корневой гнилью определяли визуально t Пыжикова и Карасева, 1985; Чулкина, 19851.

Обработку растений иммуьлзаторами проводили: 1- предпе^евным опудриванием семян байтаном (Bayer, ФРГ) (2 г/ кг семян) или замачиванием (3 ч) в 0.002Х водном растворе бисола 2 или базурана (получены в Институте органической химии УНЦ РАН). Для анализа фиксировали 7-дневные проростки. 2 - опрыскиванием 6-дневных проростков бисолом 2 из расчета 2 л препарата/га или базураном (0,5

кг. д. в. /га), расход рабочей жидкости 40 мл/кв. м. Проростки анализировались через 6 дней после обработки. 3 - предпосевным опудри-ванием семян экостом (10 г/ кг семян) или опрыскиванием 8 дневных проростков о,01% раствором змистима (биопрепараты "Полихимбиотех", Москва). В опыте фиксировали соответственно 7- и 15-дневные проростки. Контроль во всех опытах- обработка дистиллированной водой.

Для моделирования солевого стресса 4-х суточные проростки помешали на 1,5-5Х-й раствор NaCl в 27. растворе сахарозы.

Растительный материал фиксировали в жидком азоте.

Выделение и очистку АЗП из обезжиренных зародышей пшеницы проводили последовательной аффинной хроматографией на овогеле СЛуцик и др. , 19843 и хитине [Bloch & Burger, 19763. Дополнительную очистку лектина проводили гель-фильтрацией на сефадексе 6-75.

Гемагглютинирующую активность АЗП определяли двойным разведением растворов белка в крутлодоннЫх планшетах, используя трипсинизированные и фиксированные глутаровым альдегидом эритроциты кролика [Lis et.al., 1970; Turner & Liener, 1975).

Углеводную специфичность определяли по Дуцик и др. £19813. .

SDS-электрофорез проводился по методу Лэммли [Laemmli, 19703 Белки окрашивали кумасси 6-250 в растворе хлорной :исдоты.

Изоэлектрическое фокусирование белков проводили в 7Z геле по лиакриламида (ПААГ) с градиентом pH 3,5-10 (амфолины, LKB). Изоэ-лектрическую точку лектина определяли набором маркерных белков (Serva). Белки окрашивали кумасси 6-250 в растворе серной кислоты

Анти-АЗП сыворотку получали внутримышечной иммунизацией кроликов очищенным препаратом лектина в смеси с полным адъювантоы Фрейнда Иммуноглобулины осаждали сульфатом аммония СБрок, 1979; Эрнст и Тесман, 19793 и хранили при -70*С.

Специфичность и титр антител определяли образованием преципитата в 1.57. геле агарозы в фосфатно-солевом буфере (ФБС) по методу Ухтерлони, описанным Бэм [19793. Для предотвращения неспецифической связи лектина с углеводными молекулами иммуноглобулинов в ФБС добавляли 0,15 М специфического углеводного гаптена АЗП - Ii - ацетил-О-глюкозамина (GlcNAc).

Содержание белка определяли биуретовой реакцией и по Jtaypi [Скоупс, 19853, углеводов - фенол-серным методом [Chaplin, 1986

Содержание ИУК и АБК в растениях определяли методом ИФА (Ку-доярова и др., 19853. Коньюгаты белков с фитогормонами и антитела к ним были получены совмесгно с сотрудниками лаборатории.

Содержание АЗП в экстрактах определяли также методом непря-

мого конкурентного ИФА, поставленным в данной работе.

Опыты закладывались в 3-х повторах или воспроизводились. Компьютерную статистическую обработку данных проводили по стандартным программам. На рисунках показана ошибка средней.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Характеристика очищенного препарата АЗП и специфичности полученных против него антител

С использованием последовательной аффинной хроматографии на овогеле и хитине и гель-фильтрацией на сефадексе G-75 мы получили препарат лектина со следующими основными характеристиками. Ге-магглютинирующзя активность лектина (0,12 мкг/мл) находилась в пределах значений, приводимых другими авторами (0,02 - 5 мкг/мл, Vretblad С1976]; Bloch & Burner £19761) и, вероятно, была связана с источником сырья и способом выделения АЗП CTabary et al., 19843.

SDS-электрофорез АЗП выявил в ПААГ одну полосу белка массой 17-19 кД, что близко по аначению к расчетам Nakata & Burger [19743 и данным Bloch S Burger £19761, Peununs et al., С198П]. Чистота белка, определенная сканированием фотореплики, геля, составила более 99Х. Изоэлектрическая точка нашего препарата АЗП находилась при pH 8,7 и совпадала с данными Rice & Etzler [1975].

Специфическим гаптеном полученного лектина был GlcNAc, но не глюкоза, арабиноза, ксилоза, N-ацетил-О-галактозамин. Наш препарат лектина не содержал в структуре углеводные молекулы, что совпадает с результатами исследований Nagata & Burger t1974].

Т. о., нами получен высокос чищенный препарат АЗП, основные характеристики которого ЕО многом совпадают с литературными данными.

Анализ специфичности сыворотки по методу Ухтерлони показал, что антитела связываются с одним белком грубого экстракта (одна полоса преципитации) и что этот белок, АЗП, выделенный нами, и коммерческий лектин зародыша пшеницы иммунохимически идентичны.

Оптимизация метода иммуноферментного анализа АЗП

Схема выбраниов нами модификации ИФА была следующей: в лунки планшета, на поверхность которых предварительно сорбировали лектин, вносили аликвоты анализируемых образцов и одновременно ан-ти-АЗП сыворотку, разведенную в ФЕС с 0,6% лэлатйком и 0,05 X

твин-20. При этом происходила конкуренция за анти-АЗП антител между лектином, прочно связанным с полистиролом, и лектином в образце. Количество связавшихся с полистиролом анти-АЗП антител определяли с помощью антикроличьих антител меченых пероксидазой. А1 тивность фермента проявляли ортофенилендиамином. Расчеты проводи, по концентрационной кривой зависимости оптической плотности в лу! ках с 10-кратными разведениями известного количества чистого препарата АЗП. Выбор этого метода был связан с тем, что заключительные этапы этой модификации ИФА могут быть стандартными и пригодн! ми для количественного анализа разли<шых соединений, в том числ< фитогормонов. Однако нам не были известны работы с использование! этой модификации ИФА для количественной оценки АЗП, в связи с че1 были проведены самостоятельные исследования для оптимизации мето;

Первым и значительным этапом в системе ИФА является адсорбция белка на полистирол (сенсибилизация) ССтэндифер, 1988]. Противоречивые данные о влиянии рН и ионной силы буфера на сенсибилизацию поставили перед нами задачу определения влияния эти: факторов на связывание АЗП с полистиролом. Кроме того, мы определяли оптимальное время и температуру для сенсибилизации, а таю« исследовали влияние предварительной активации носителя 21 глутар< вым альдегидом на степень сорбции АЗП на полистирол

Нами было выявлено, что оптимальными, параметрами для эффективной адсорбции лектина являются сенсибилизация планшета 1,5-2 ' при 37* С раствором АЗП (0,25-0,5 мкг/мл) в 0,02 Ы Ма-фосфатном 0; фере, рН 7,2. Процессу адсорбции предшествовала активация полиси рола 2X глутаровым альдегидом 2 ч при комнатной температуре.

В иммунохимическом анализе лекгинов потенциальной проблемо] является неспецифическое для реакции антиген-антитело лектин-уг леводное взаимод Яствие, поскольку молекулы иммуноглобулинов яв ляются гликопротеинами. Однако оказалось, что добавление в наш; тест-систему специфического углеводного гаптена АЗП - 61сНАо Д( конечной концентрации 0,15 К существенно не сказывается на характере концентрационной кривой и чувствительности анализа в сравнении с буферной системой без углевода

Суммированным результатом работы является концентрационная кривая ИФА, позволяющая проводить относительную оцэнку содержания АЗП в образцах с чувствительностью до 1 нг (рис.1), что существенно не отличается от этого показателя в других модификациях ИФА .пектинов [Р2а1кЬе1 сЬ а1., 1984; НозБе1е1 еЬ а1., 1985]. Определение возможной точности проведения анализа на одном и на

Рис. 1. Калибровочная кривая иммуноферментного анализа АЗП

зньпс планшетах фирмы Linbro (Англия) показало, что значение ж>-фициента вариации не превышает допустимого - 10Z t Егоров и др., 913.

Способ экстрагирования АЗП из растительного материала

Для успешной реализации -лавных достоинств ИФА лектина -:троты и серийности - необходимо использование простых и быст-с способов получения экстрактов, содержащих этот белок. Показа, что АЗП экстрагируется больше в кислой (0,05 М НС1) среде, а в нейтральной (0,01 М ФЕС) tNapata й Burger, 1974; Mishkind al. ,19801. Однако иммунохимические реакции ИФА проходят в сре-близкой к нейтральной и поэтому перед использованием в ИФА :лый экстракт необходимо нейтрализовать.

Анализ различных экстрагентов подтвердил, что наилу .шим экстентом лектина является 0.05 М НС1. Однако известные способы 1трализации кислых экстрактов (диализ против ФВС CMishkn.J et , 1980] или осаждение белков сульфатом аммония с последующим «растворением их в ФПС [Raikhel et al., 1984]) имели супуэст-ные недостатки (длительность диализа и низкая концентрация :ка для его эффективного осаждения). В связи с этим необходимо о найти оптимальный способ нейтрализации кислых экстрактов.

Нами было выявлено, что при добавлении 1 М Na-фосфатного буфера pH 7,2-7,4 в соотношении буфер: экстракт 1:10 (V/V) происходит нейтрализация кислых (0,05 М HCl) экстрактов семян и проростков пшеницы до значений pH 7,0+0,2. При этом отпадает необходимость контроля конечного значения pH, т. к. нет опасности "перетитрования", как например при использовании раствора щелочи. Это позволяет работать с большим количеством образцов, при малых навесках материала Затраты роемени сбодятся к минимуму и снижается опасность потерь белка по сравнению с указанными выше способами.

В разных опытах нам необходимо было анализировать содержание в растениях лектина и фитогормонов ИУК или АБК. Более удобным в этом отношении явилось бы определение содержания этих веществ в одной навеске. Для проверки возможности экстрагирования фитогормонов и АЗП из одной навески мы провели следующие опыты. Проростки пшеницы различного возраста разделяли на параллельные однотипные навески и фиксировали в жидком азоте. Затем, первую параллель гомогенизировали в 80Х-этаноле и экстрагировали фитогормоны (4" С, 12-14 ч) для их количественной оценки методом ИФА. Твердый растительный остаток после промывки этанолом заливали 0,05 М HCl и экстрагировали белки в течение 1 ч при комнатной температуре. После центрифугирования надосадочную жидкость' нейтралировали, вновь центрифугировали. В супернатанте методом ИФА определяли содержание лектина. В качестве контроля использовались образцы, приготовленные традиционным способом. Для этого вторую параллель навесок гомогенизировали тем же раствором HCl 1 ч при комнатной температуре в том же соотношении навеска: акстрагент, что и первую параллель. Остальные операции были идентичны в обеих параллелях.

Данные опытов (табл. 1) убедительно свидетельствуют о том, что после экстрагирования фитогормонов спиртом, лектин остается в твердом осадке и 0,05 М HCl извлекает из него АЗП даже несколько больше, чем при использовании традиционного способа и долей потерь при обработке »лат ер "ала SOZ-ным этанолом, вероятно, можно принебречь.

Участие АЗП во взаимоотношениях растение-хозяин - патоген

Известно, что одним из признаков вовлечения белков в реакции устойчивости/восприимчивости растений являются количественные изменения их уровня или активности (Вандерпланк, 1981], однако, . факты количественного изменения ЛЗП в растениях пшеницы при фито-патогенезе до начала наших исследований в литературе не приводи-

Таблица 1

Сравнение двух способов экстрагирования лектина на.степень его извлечения из растений пшеницы (сорт Санзар)

Возраст растений, сут. Содержание АЗП, мкг/г сырого вещества Потери после обработки этанолом, 7. Соотношение навеска: экстрагент (г/ мл НС1)

этанол+ +НС1 НС1

2,(интактный проросток) 4,(интактный проросток) 6,(надземная часть) 110±7 4б±3 9,1+0,9 85±7 28±2. 8,7+0,9 2,7±0,4 8,5+1,8 11,8+3,1 1:10 1:5 1:3

лись. Для получения определенного ответа об участии АЗП в защитных реакциях растений при грибном патогенезе мы исследовали изменения содержания лектина в инфицированных S. nodorum и Н. sativum расте- . ниях пшеницы, различающихся по устойчивости к этим патогенам.

В качестве восприимчивого к септориозу мы выбрали сорт пшеницы Саратовская 29, а в качестве относительно устойчивого- Диамант [Деревянкин, 19711. Определение динамики развития септориозных пятен на листьях пшеницы показало, что темпы развития болезни выше на растениях пшеницы сорта Саратовская 29 в сравнении с сортом Диамант. На рис. 2а показана изменение содержания ЛЗП в растениях после заражения S. nodorum б-ти дневных проростков. В проростках восприимчивого сорта пшеницы накопление АЗП наблюдается на 6-е сутки после инокуляции, а на 9-е сутки (визуальное проявление болезни) содержание лектина в больных растениях в три раза выше, чем в здоровых. Накопление лектина при патогенезе наблюдается и в проростках пшеницы сорта Диамант, но проявляется после заражения позже и в меньшей степени, чем у сорта Саратовская 29.

Известно, что в регуляции синтеза лектина пшеницы принимает /частие АБК [Stintssen et al. , 1981; Raikhol et al. . 1986]. В :вяэи с этим мы исследовали динамику содержания фитогогмона АПК а также ПУК, как. антагониста АБК а регуляции многих физиологических процессов, в тех же проростках пшеницы. Существенных изменений в содержании как АБК, так и МУК в инфицированных проростках пшеницы устойчивого сорта в сравнении с контролем не наблюдалось. В тканях растений сорта Саратовская 29 при патогенезе выявлено существенное накопление ИУК (рис.26), при отсутствии изменения содержания АБК.

70 60 50

40 30

го но

0 5 6

Саратовская 29

Сутки после у эш ¡кения

Й 1 НЕ- ш гН^ 1

и § ■я

Сутки после

9 зярлтчия

пН

Сутки посл& р зярякения

Рис.2. Накопление АЗП (а) и ИУК (б) в проростках пшеницы, ин-фициоованных Б. по<1огит. | | - контрольные растения,

- и..фицированные растения.

- и -

Т. о., как в устойчивом, так и в восприимчивом сортах пшеницы По мере развития патогена в растениях происходит накопление АЗП. Вероятно, отсутствие четких различий между сортами по этому показателю связано с неспецифической устойчивостью пшеницы к септори-озу СКагза1а1пеп, 1985]. Известно, что 5. пойогит является гемиби-отрофом [Морозов, 1992]. Повышенный уровень ИУК в живых тканях, видимо, необходим патогену для аттракции пдвижных питательных метаболитов к месту его локализации, а также для нормального продуцирования их клетками хозяина Временное приостановление нормальных процессов метаболизма растения, одним из характерных признаков которого является повышение уровня АЕК [Мелехов, 1985], видимо, "не желательно" для развития гемибиотрофа в тканях хозяина. Возможно также, что увеличение АБК происходит в первоначальные этапы патогенеза (часы), которое запускает защитные механизмы (одним из которых может быть накопление АЗП), проявляющиеся через более длительный (сутк") промежуток времени.

5. по<1огит способен поражать развивающуюся зерновку пшеницы [ Васецкая и др., 1983], когда происходит усиленный синтез и накопление АЗП в зародыше ГРеитапэ, 1984]. В связи с этим мг определяли возможность вовлечения АЗП в проявление устойчивости пшеницы к септориозу на стадии созревания семян. Инфицирование колосьев растущих в поле растений проводили на б-й день после начала массового цветения пшеницы. Колосья с развивающимися семенами фиксировали на 1, 2, 3, 8, 15 и 21 дни после инокуляции (1, 2, 3, 4, 5 и 6-я точки фиксации).

Заражение колосьев Б. помогши первоначально ускоряло увеличение массы зерна, однако, к 15-му дню после инокуляции происходило замедление этого процесса относительно контроля. В инфицированных растениях уже через 2-3 дня после заражения колосьев наблюдалось очень резкое (почти в 3 раза) накопление лектина по сравнению с контролем (рис.3). В после дующие точки фиксации такое различие уменьшалось и на поздней стадии созревания отсутствовало.

Мы проследите характер изменения уровня свободных /"К и КУК в зерновках пшеницы, в ходе их формирования и созревания (рис. 4). Как видно, динамика содержании АБК в развивающихся семенах лисы-вается кривой с двумя максимумами (рис. 4а). Заражение растений ускоряет процесс накопления АЗК. Уже спустя сутки после заражения наблюдается увеличение содержания АБК в сравнении с контролем, и ко времени 3-ей фиксации происходит снижение первого максимума АБК. Пик второго максимума АБК в опыте приходится на период 4-ой

ТОО 600. §• 500,

400.

(О за? К

ЬО

50 «>

30 го ю

т

я

/т //!

/

а

/

/Р7

Точки

о * 2 3 Ч £ & фиксяцщ

Рис. 3. Динамика содержания АЗП в развивающихся зерновках пшеницы сорта Саратовская 29 при сепяориозе колоса. —-о — контрольные растения,—инфицированные растения.

фиксации. В последующие точки фиксации наблюдается постепенное снижение уровня АБК, однако в зрелых зерновках инфицированных растений содержание фитогормона больше в сравнении с контролем.

Сравнительное исследование динамики содержания ИУК в ходе созревания семян здоровых и инфицироранных растений показало, что заражение вызывает значительное накопление ИУК уже во второй точке фиксации и такое существенное различие по содержанию ИУК сохраняется в течение всех исследованных нами периодов развития семян. В контрольных и опытных зерновках динамика количественного уровня . ИУК в ходе созревания семян совпадает.

Известно, что активный синтез АЗП происходит одновременно с

«

/8 16 14 12 10 а в V а

I

£ 32

* 2

. Точки - ФИКСАЦИИ

го

1В /б !Ч /2 10

/Г Т____I г

Г I

12 3

* Точки

с ФИКСАЦИИ

Рис. 4 Характер изменения количественного уровня АБК (а) и ПУК (б) в развивающихся зерносках пвзници сорта Саратовская 29 под влиянием септориоза колоса «о» - контрольные растения,—»— - инфицированные растения.

активным делением клеток первичных осей зародыша и максимальны уровень лектина регистрируется в сформировавшемся зародыш [Peumans et al., 1982]. Сопоставление этих данных с известны свойством митогенности лектинов позволило Peumans & Stinisse [1983] предположить регуляторную роль АЗП в процессе эмбриогенез и охарактеризовать его i-ак белок свойственный стадии созревани семян. Обнаруженное нами ускорение накопления массы зерновки пр заражении растений S. nodorum с параллельным опережающим накопле 'кием АЗП в инфицированных растениях в сравнении с контрольным свидетельствует о том, что лектин включается в процесс ускорена созревания семян пшеницы при грибном патогенезе.

Исследование динамики содержания АБК, регулирующей спите; лектина, не выявило однозначной зависимости мевду уровнем этог< гормона в незараженных созревающих зерновках и накоплением лектина. Изменения уроиня АБК и АЗП в зерновках пшеницы в наших опыта] совпадают с данными Morris (1989], который считает, что, вероятно, синтез АЗП в созревающей зерновке может быть целой самостоятельной программой, которая запускается имеющимся в наличии эндогенным уровнем АБК, а в дальнейшем функционирует независимо. Kai следует из наших данных, действительно, некоторая параллель мевд индуцированным патогеном накоплением АБК и увеличением содержания АЗП в развивающейся зерновке имеет место в начальный период (1С дней) после цветения, причем как в контроле, так и в опыте в первые дчи после цветения уровень фитогормона выше, чем в последующие. Второй максимум фитогормона в зерновка*, не проявляющийся на уровне лектина, видимо, более корректно обсуждать с водным статусом тканей созревающих семян С Rademacher & Grabe, 1984].

Динамика уровня ИУК в наших опытах совпадает с данными Mlchaol a Beringer [1980], Rademacher & Grabe (1984]. При этом, в семенах растений инфицированных S. nodorum содержание ИУК было выше, чем в контроле на всех стадиях созревания, что, видимо, связано с особенность» паразитирования этого гриба иа пшенице.

Известно, что грибные патогены различаются по , типу питания на растениях. В связи с этим мы исследовали участие АЗП во взаимоотношениях пшеницы с грибом Н. sativum, который Ъ отличие от S. nodorum может более успешно раз. иваться на отмерших растительных тканях, проявляя некротрофные свойства (Чулкина, 1985). Этот патоген поражает корни и основание стебля растений- место преимущественной локализации АЗП [Raiknel et al. ,1984].

Двухнедельные проростки образцов пшеницы, различающихся по

тойчивости к болезни, заражали суспензией конидий грибг. Сорт гкой пшеницы Заря был выбран в качестве устойчивого, образец юницы Т. turgidum - восприимчивого СГолубинцева, 1952]. К момен-' фиксации растений, через неделю, болезнь визуально проявлялась 1 проростках. При этом сорт Заря действительно был устойчив в овнении с Т. turgidum и балл его поражения не превышал единицы, ределение содержания лектина в основан стебля проростков егмеит от щитка до основания листьев) показало, что образцы су-ственно различаются по этому показателю (рис.5а). Количество ктина у здоровых проростков сорта Заря было в 3 раза выше по авнению с таковыми у Т. turgidum. При заражении патогеном содер-,ние АЗП значительно возрастало в тканях восприимчивой пшеницы и актически не изменялось у устойчивой. При этом наблюдалось од-значное увеличение уровня АЗП по мере увеличения степени поранил патогеном.

Не менее интересной, на наш взгляд, является картина баланса тогормонов в листьях инфицированных проростков пшеницы. Как видна рис. 5(6,в), в инфицированных проростках восприимчивой пше-цы уровень АБК, как и лектина, возрастает (примерно в три раза) наблюдается резкое, более чем на порядок, снижение содержания К в инфицированных растениях в сравнении со здоровыми. В пророках устойчивой пшеницы существенных изменений в содержании этих тогормонов в листьях инфицированных растений не наблюдается.

Н. sativum относится к патогенам, способным вырабатывать Фи-токсины С Чулкина, 19851, которые рассматриваются как супрессорц щитных реакций растений (Метлицкий и др., 1986). Дезорганизация средством токсинов нормального метаболизма растительной клетки сприимчивого сорта приводит к успеху патогена в колонизации от-льных участков тканей хозяина и создает своеобразный плацдарм я дальнейших атак гриба. Вероятно, такое предположение позволя-объяснить тот факт, что в тканях восприимчивого к патогену об-зца пшеницы Т. turgidum происходят наиболее резкие изменения в держании исследованных соединений - существенно возрастает ко-чество лектина и этот процесс, видимо, регулируется фитогормо-м АБК, уровень которого в инфицированных проростках этой пшени-также возрастает почти в три раза. В качестве показателя сни-ния общей активности метаболизма растения можно рассматривать лее чем десятикратное падение уровня ИУК в тканях этого воспри-чивого образца. В проростках пшеницы сорта Заря существенных менений в метаболизме, вероятно, не происходит, о чем свидетель-

z

Рис.5. Содержание лектина (а) и фитогормонов АБК (а) и ПУК (б) в инфицированных Н. sativum проростках пшеницы, различающихся по устойчивости к патогену. [~~1 контрольные растения, Ь&^й инфицированные растения.

ствует отсутствие количественных изменений фитогормонов иук и абк, а также лектина, что, возможно, входит в причиннЪ-следственные связи устойчивости растений этого сорта пшеницы к патогену.

Т.о., при грибном патогенезе в растениях наблюдается накопление лектина, что, наряду с изменениями количественного уровня фитогормонов, позволяет говорить о непосредственном вовлечении АЗП во взаимоотношения растение-хозяин - патоген.

- 17 -

Анализ содержания лектина в покоящихся зерноьках пшеницы и эгилопса в связи с устойчивостью к болезням

Известно, что фитолектикы могут относиться к соединениям, определяющим устойчивость растений к вредителям и болезням (Лах-тин, 1987]. Сункционально близки к лектинам растительные ингибиторы протеиназ микроорганизмов и насекомых, причем у ингибиторов трипсиновой активности пшеницы, а также картофеля, показано наличие лектинподобных свойств СМелентьев и др., 1986; Isla et al., 1991; Громова, 19921. По данным Ямалёева и др. И9801 между активностью ингибитора трипсина в семенах пшеницы и ее устойчивостью к твердой головне обнаружена положительная коррелятивная связь.

В связи с этим, определенное значение для нас имело сравнительное изучение содержания лектина-в семенах разных видов пшеницы и эгилопса, различающихся по устойчивости к болезням. В анализ подбирались образцы одного вида пшеницы или эгилопса имеющие преимущественно одинаковые год и место репродукции. Предварительными исследованиями было установлено, что по мере хранения урожая содержание лектина в семенах одного и того же образца не уменьшается, что согласуется с исследованиями проведенными на зернобобовых fPojarova & Sasek, 1975; Svachulova et al., 19863.

Анализ содержания лектина в 'семенах образцов пшеницы и эгилопса приведен в табл. 2. Как видно, количественный уровень АЗП в зрелых зерновках характеризуется значительной вариацией как абсолютных (мкг/зерно), 'так и относительных значений (мкг/г зерна). Менаду абсолютными и относительными значениями содержания лектииз в семенах образцов одного вида существует положительная корреляционная связь с коэффициентом г-0,68т0,99.

Корреляционный анализ между содержанием АЗП в одной зерновке и плоидностью пшеницы выявил наличие связи средней силы между этими показателями (г-0,5б; Р-0,01). Аналогичные данные об увеличении количественного уровня АЗП в семенах пшеницы с возрастанием плоидности были получены Рапавой с соавтД1989], но с использованием метода гемагглютинации. Такая закономерность обгясняется увеличением числа гомо- и гетеродимеров изолектинов, происхождение которых непосредственно определяется соответствующими геномами А. В, D tRice, 1976; Peumans et al., 1982).

Мы провели корреляционный анализ связи между содержанием лектина в зрелой зерновке и устойчивостью образцов пшеницы Т. urartu, Т. dicoccum, T.spelta, T.boeottcum, Т. wonococcum,

Таблица 2

Содержание лектина в покоящихся зерновках пшеницы и агилолса, различающихся по геномному составу

Вид 2n Ге- Кол-во Масса АЗП*

ном изуч-х образцов зерновки, г*

мкг/зерно МКГ/Г зерна

Т. urartu 14 А" 9 0,008-0,015 0,10-0,77 6,2-73,5

Ае. bicornls 14 В 1 0.003 0,05 17,7 10,4-36,0

Ае. longtssima 14 В 5 0,005-0,009 0,05-0,26

Ае. sharonensis 14 В 2 0,007-0,008 .0,03-0,09 4.4-10.6

Т. dtcoccum 28 А" В 21 0,026-0,044 0,16-0,57 5,0-14,3

Т. aephioplcum 28 А" В 4 0,026-0,043 0,18-0,78 5,0-14.6

Т. persicum 28 А" В 3 0,020-0,026 0,33-0,89 10.2-21.6

Ае. tauschtl

ssp. tausch! i 14 И 4 0,002-0,015 0,03-0,20 1.4-15.9

Ае. tauscht i

ssp. straneulata 14 0 2 0.015-0,018 0,31-0,33 17,1-21,7

Т. spelta 42 А" ВО 10 0,023-0,075 0,40-1,80 9,4-33,0

Т. aesttvum 42 АиЮ 11 0,023-0,049 0,20-1,05 2,0-46,4

Т. boeottcum 14 А" 4 . 0.008-0,020 0.07-0.23 4,1-16,1 13,1-39,2

Т. monococcum 14 А* 7 0,012-0,025 0,21-0,67

Ае. speitotdes 14 в 3 0,005-0,007 0,10-0.17 14,0-28,8

Т. tlmopheevi t 28 А* в 10 0,022-0,032 0,01-0,38 0.4-12,5

* Минимальные и максимальные значения показателей

Т. иторЬееуп к корневым гнилям и септориозу, В целом, нам не удалось выявить наличие какой-либо достоверной и определенной связи между содержанием лектина в сухих семенах и устойчивость!) пшеницы к этим болезням. Сравнение содержишя АЭП в покоящихся семенах разных видов пшениц также не позволяет сделать вывод о том, что виды с высоким содержанием лектина могут быть отнесены к группе пшениц высокоустойчивых к грибным болезням. Так, хорошо известно, что пшеницы Т. попососсит и Т. ЫйсрЬееУП иммунны или высокоустойчивы к болезням, вызванным семенной инфгщией СЯмалеев и Долотовский, 19891. Однако эти виды не выделяются из общего ряда Пшениц по содержанию АЗП в зрелой зерновке.

Исходя из представленных результатов, мы считаем, что высокое содержание АЗП в покоящихся семенах пшеницы не может быть достаточным критерием для определения ее устойчивостй к септориозу и корневым гнилям.

- 19 -

Изменения содержания лектина в проростках пшеницы под действием иммунизаторов

Многочисленными исследованиями показано, что предобработка растений веществами типа иммунизаторов СРодигин, 1975) может значительно повышать их устойчивость к болезням. Вероятно, этот процесс связан с усилением синтеза компоненте растительной клетки, которые могут предопределять исход взаимодействия противостоящих систем в пользу растительного организма. Для того, чтобы выяснить является ли лектин пшеницы одним из претендентов на роль такого компонента-защитника клетки, мы исследовали уровень АЗП в проростках пшеницы, обработанных соединениями типа иммунизаторов.

Действие препаратов оценивали на разных сортах пшеницы. Результаты этого анализа приведены на рис. 6. Контрольные (обработка водой) проростки относительно устойчивого к корневым гнилям и твердой головне (Исаев, 1988) пшеницы сорта Заря характеризуются ббльшим содержанием лектина в сравнении с относительно восприимчивым сортом Московская 35 (рис. 6а). Обработка семян бисолом 2, базураном и байтаном в два и более раза повышает уровень лектина в растениях сорта Московская 35. Предобработка растений пшеницы сорта Заря этими препаратами не вызывает столь значительного увеличения количественного уровня АЗП.

Опрыскивание проростков пшеницы сорта Саратовская 29 бисолом 2 и базураном, также как и предпосевная обработка семян этими препаратами относительно восприимчивого сорта пшеницы Московская 35, вызывает увеличение содержания лектина в проростках в сравнении с контролем (обработка водой) (рис.66). Выявлено также, что обработка растений биопрепаратами экост и эмистим повышает содержание лектина в проростках на 35-60 XX в сравнении с контролем.

Таким образом, накопление АЗП в растениях пшеницы под влиянием исследованных иммунизаторов разной природы может быть одним из общих механизмов индуцирования устойчивости растений к болезням.

Накопление АЗП в проростках пшеницы под влиянием солевого стресса

Увеличение количественного уровня АЗП в проростках пшеницы, обработанных иммунизаторами, и в частности байтаном, повышающим устойчивость растений не только к болезням, но и к действию многих других стрессовых факторов [Fletcher 4 Hofstra, 1985), позво-

е ш £

I 300 § ¿00

I

1

30

го

^ ю

Московская 55

5т

£3

ГТ1

•'•^ЛМ У-г

Ч-Л'.';:.

V . ••. ...

г • .:

''•"> л ...' ..*

тг

■ > ■■

ксчшь штвлямн ылоп2 котть ьятн ыиурян

Сйрдтовскяй 2$

тай

$ »о;

£

. ям

V гоо-1

"Е-*»-

а:

н-

I

'йл

1

I

•л.

Рис. 6. Изменение содержания АЗП в проростках пшеницы при обработке растений иымунизаторами.

шло нам предположить, что, возможно, АЗЛ, как защитный белок, способен накапливаться не только при патогенезе, но и при действии других неблагоприятных факторов среды.

В качестве одного иа таких факторов мы выбрали действие ЛаС1 на проростки пшеницы сорта Саратовасая 29. Концентрация соли в опыте составляла 1,52 - 52 и, как показано (&таео|:а1 [19871, была достаточной для индукции синтеза специфических белков в проростках злаковых при солевом стрессе. В опытах трехсуточные проростки предварительно отделяли от эндосперма и выдерживали 14-16 ч на 22-ой сахарозе для снятия раневого стресса

Хлористый натрий (1,5 2) оказывал неблагоприятное действие на проростки и снижал прирост их массы в сравнении с контролем (22 сахароза). На рис.7а приведена динамика содержания АЗП в проростках пшеницы под влиянием солевого стресса, вызванного действием 1,5 2 соли. Накопление АЗП в опытных проростках в сравнении с контролем наблюдается через 6 часов действия стресса. Че-

рез сутки действия соли значительных различий мевду содержанием АЗП в контрольных и опытных проростках не наблюдается.

Обнаруженные нами изменения содержания АЗП в проростках пшеницы под действием 1,5 7. N301 близки к динамике развития реакций живых организмов в ответ на стрессовые воздействия, приводимые Селье Сцит. по Родченко и др., 1988]. Известно, что при значительных стрессовых нагрузках динамика ра^ лтия ответных реакций организма на стресс может изменяться СУдовенко, 1977]. Нам это удалось показать при действии 5Х ЫаС1. Как видно на рис. 76, увеличение количественного уровня лектина при действии более высокой концентрации соли наблюдается уже к третьему часу засоления и продолжает оставаться таким же высоким до 6 часов опыта. Затем оно падает и выравнивается с контролем.

В литературе имеются данные о накоплении АБК в растениях при действии солевого стресса СЫеишап еЬ а1., 1989]. Одним из возможных механизмов регуляции накопления АЗП в проростках при засолении могло быть увеличение содержания в них АБК. Для подтверждения этого предположения мы исследовали динамику содержания АБК в проростках под влиянием соли. Как видно на рис. 7в, уже в первые три часа действия солевого стресса при нижнем пороге концентрации соли (1,5%) наблюдается существенное накопление в проростках АБК, при этом содержание лектина в опытных растениях (рис. 7а) еще не превышает такового в контрольных.

Поскольку количественное возрастание лектина наблюдалось нат ми при действии различных по природе стрессовых воздействий, а также под влиянием вецеств (например байтана), повышающих устойчивость растений к ним, можно сделать вывод, что лектин пшеницы включается в общие неспецифические механизмы устойчивости рзсте-ний к неблагоприятным воздействиям среды.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

При поражении патогеном растение (как и любой другой живой организм) скорее "стремится" к выживанию, а не к гибели и поэтому включает прежде всего механизмы защиты, а не собственного поражения. Одним из признаков, указывающих на вовлечение растительных соединений в эти процессы при патогенезе является возрастание их активности или количественного уровня СВандерпланк, 1981]. Другим доказательством защитной роли растительных веществ может

сГ еоо

1

1 600

> 400.

£

<=г .200-

I

> %

ЙТ

600 500^

т

300 200

£ 60

о 50,

§

У4/ ■

> 50-

го

10.

Чя, N

VI к Т

! —, Л

О 3

5 /2

гч

I &

к

/ V

К'"1

Рис.7 Влияние засоления на динамику содержания АЗП (а-1,5Х б-БХ ЫаС1) и АБК (в-1,5Х ЫаС1) в проростках пшеницы-сорта Саратовская 29.— -о— - контроле (21 сахароза) ,—»•«•— - опыт.

¡ытъ их неблагоприятное экзогенное действие на фитопатоге:.ы, что >ыло показано для АЗП CMirelman et al., 19761. Доводов в пользу ¡элитной роли АЗП, основанных на фактах непосредственного вовле-юния лектина в защетные реакции растений при патогенезе, в лите->атуре не приводилось.

Выявленное нами накопление лектина в растениях при грибном гатогенезе и под воздействием неблагоприятк х абиотических факто-юв среды позволяет утверждать, что АЗП вовлекается в неспецифи-1еские защитные реакции растений пшеница Накопление лектина в ранениях в ответ на стресс, вр^оятно', является следствием активами его синтеза, в регуляции V дорого, как известно, участвует фи-гогормон АБК [Raikhel et al., 1986]. Такое предположение можно :делать в связи с тем, что, например, под воздействием солевогг ¡тресса (что показано нами), а также осмотического шока [Camnue >t al., 19893, возрастанию количественного уровня АЗП предшеству-)т накопление в проростках пшеницы фитогормона АБК. При патогене-ie, вызванном инфицированием проростков пшеницы Н. sativum эти фоцессы наблюдаются одновременно. Известно, что АБК накапливается з растениях в ответ на различные неблагоприятные воздействия и моют участвовать в регуляции синтеза стрессовых растительных белков Neuman et al., 1989). Сопоставление полученных нами результатов : работами других авторов, в которых выявлено накопление лектинов ш возрастание их активности в ответ на температурный [Spadoro-Гапк & Etzler,.19883, раневый С Любимова и Салькова, 19883 и осмотический ССаотше et al., 19893 стрессы, а тага» факты участия фитогормона АБК в регуляции синтеза лектина пшеницы, позволяют от-гести АЗП к своеобразному стрессовому белку растений пшеницы.

вывода

1. Выявлены оптимальные параметры проведения непрямого твер-цофазного конкурентного иммуноферментного анализа содержания АЗП в растениях пшеницы с чувствительностью до 1 нг и предложен оригинальный и эффективный способ экстрагирования АЗП и фитогормонов \БК и ИУК для их количественной оценки методом ИФА.

2. Впервые показано участие агглютинина зародыша пшеницы во взаимоотношениях растение - патоген при патогенезе, вызванном возбудителем септориоза S. nodorum и гельминтоспориозной корневой гнили Н. sativum, а также выявлены особенности ответных реакций растений пшеницы в зависимости от типа устойчивости сорта

3. Показано, что устойчивые сорта пшеницы более гомеостатич-ны в сравнении с восприимчивыми. Реакция восприимчивости растений при патогенезе характеризуется более значительными изменениями количественного уровня лектина и фитогормонов АБК и ИУК.

4. Впервые иыявлено, что значительное накопление лектина в восприимчивых сортах пшен;;цы при септориозе сопровождается повышением содержания фитогормона ИУК, а при гельминтоспориозной корневой гнили - АБК.

5. Установлено, что сравнительный количественный анализ лектина в покоящихся семенах не может быть достаточным критерием для использования его в качестве диагностического признака устойчивости пшеницы к септориозу и корневым гнилям.

6. Впервые показано, что агглютинин зародыша может включаться в механизмы индуцированной устойчивости пшеницы к болезням, накапливаясь в растениях под воздействием иммунизаторов.

7. Впервые выявлено накопление лектина в проростках пшеницы при солевом стрессе.

8. Полученные данные позволяют сделать заключение о том, что при грибном патогенезе и в ответ на абиотические стрессовые воздействия агглютинин зародыша пшеницы вовлекается в неспецифические защитные реакции растений. в регуляции которых принимает участие АБК.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Yanuleev А.М.,. Khairulltn R.М., Shakirova F.M. ELISA assay of VGA and ABA in the. infected wheat seedlings // Book of Abstracts INTERLEC 11.- Tartu, 1989. - P. 76.

2. Шакирова Ф. M., Хайруллин P. U., Ямалеев A. M. Сравнительный анализ содержания лектина и абсцизовой кислоты в проростках пшеницы, инфицированной корневыми гнилями // Иммунофе^нтный анализ регуляторов роста растений: применение в физиологии растений и экологии.- Уфа: БНЦ УрО АН СССР, 1990.- С. 38-41.

3. Безрукова VL Е , Хайруллин P. U. Динамика изменения содержания АЗП и активности ингибиторов трипсина при прорастании пшеницы //Изучение и рациональное использование природных ресурсов. Тезисы докл. конференции. - Уфа; БНЦ У(.0 АН СССР, 1991. - С. 26.

4. Хайруллин Р. Ч , Шакирова Ф. Ы. , Безрукова М. Е . Ямалеев А. Ы. Накопление лектина и абсцизовой кислоты в проростках пшеницу под . действием препаратов аминового ряда бисол 2 и базурана // Новые средства и методы зашиты растений.- Уфа: БНЦ УрО РАН, 1992.- С.

2-117.

5. Шакирова Ф. М. , Хайруллин Р. М., Безрукова Ы. В., Ямалеев А. , Исаев Р. Ф. Содержание лектина в семенах разных видов пшеницы

Физиол. и биохимия культ, раст. - 1992 - Т. 24. N 1.- С. 73-78.

6. Хайруллин Р. М. , Шакирова Ф. М.. Безрукова ü Е . Ямалеев М. Использование твердофазного конкурентного иммуноферментного ализа для определения лектина в семенам и проростках пшеницы

Прикл. биохимия и микробиол. - 1992. - Т. 28. вып. 3. - С. 468-474.

7. Шзкирова Ф. М., Ямалеев А. М., Хайруллин Р. Ы. Связь между . звнем лектина пшеницы и ее устойчивостью к корневой гнили // эрой съезд ВОФР. Тезисы докладов. - Москва, 1992. - С. 96.

8. Шзкирова Ф. )1, Безрукова М. Е , Хайруллин Р. 11 Влияние со-зого стресса на содержание лектина в проростках пшеницы // Тре

i съезд ВОФР. Тезисы докладов. - С. -Петербург, 1993. - С. 4а .

9. Максимов II Е , Хайруллин Р. М., Безрукова Ы. Е , Шакирова L Исследование содержания фитогормонов и лектина в связи с ■ойчивостью пшеницы к грибным болезням // Там же. - С. 666.

10. Шакирова Ф. Ы., Максимов И. Е , Хайруллин Р. Ы., Безрукова Ы. Влияние септориоза колоса на содержание фитогормонов в зернов-пшеницы в ходе их формирования // Вторая конференция "Регуля-ы роста и развития растений". Тез» докл. - Москва. 1993. - С. 12.

11. Хайруллин Р, lt. Шакирова'Ф.М., Максимов И.Е, Безрукова ., Ямалеев А. Ы. Изменение содержания лектина, абсцизовой и ин-илуксусной кислот в растениях пшеницы, инфицированных Septoria orum Berk // Физиол. и биохимия культ, раст.- 1993.- Т.25, N2.

, 138-144.

12. Шакирова Ф. М. , Безрукова М. Е , Хайруллин Р, Ii , Ямалеев Увеличение уровня лектина в проростках пшеницы под влиянием

;вого стресса// Изв. РАЕ Сер. биол. -1993. - N. 1. - С. 143-145.

ia А.М. Yaraleev, I.V. Maksímov, R.M. Khairullia Dynamics lectin accumulation in vheat seedlings by septoria pathogene-// Book of Abstracts 1NTERLEC 15. - Szeged. - 1993. - P. 36

ГП «Принт» Зак. Ni 49 Тираж -/00

экз.