Исследование Р2-рецепторов и активности экто-нуклеотидаз гемопоэтических клеток человека

Казакова, Рената Рувшановна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Исследование Р2-рецепторов и активности экто-нуклеотидаз гемопоэтических клеток человека
ВАК РФ 03.03.04, Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации по теме "Исследование Р2-рецепторов и активности экто-нуклеотидаз гемопоэтических клеток человека"

На правах рукописи

Казакова Рената Рувшановна

ИССЛЕДОВАНИЕ Р2-РЕЦЕПТОРОВ И АКТИВНОСТИ ЭКТОНУКЛЕОТИДАЗ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА

03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология 03.01.04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степенн кандидата биологических наук

- з т 20И

4858988

На правах рукописи

Казакова Рената Рувшановна

ИССЛЕДОВАНИЕ Р2-РЕЦЕПТОРОВ И АКТИВНОСТИ ЭКТОНУКЛЕОТИДАЗ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА

03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология 03.01.04 — биохимия

Автореферат диссертации на сонсканне ученой степени кандидата биологических наук

Работа выполнена в ГБОУВПО «Казанский государственный медицинский университет» Минздравсоиразвития России.

Научные руководители:

Доктор медицинских наук, профессор Зиганшин Айрат Усманович Доктор медицинских наук Мустафин Ильшат Ганиевич

Официальные оппоненты:

Доктор биологических, наук, профессор Валиуллин Виктор Владимирович Доктор биологических наук Коксин Владимир Петрович

Ведущая организация:

ГБОУ ВПО Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И.Пирогова Минздравсоцразвития России

Защита диссертации состоится у/^ _2011 г. в ч. на за-

седании диссертационного совета Д 212.117.01 при ГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. И.П. Огарева» по адресу: 430000, г. Саранск, ул. Большевисткая, 68.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. И.П. Огарева» по адресу: 430000, г. Саранск, ул. Большевисткая, 68.

Автореферат разослан " ^^__ 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор биологических наук, профессор В.П. Балашов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Проблема гуморальной регуляции функционирования различных клеток и тканей остается одной из самых значимых и недостаточно исследованных в биологии и медицине. Актуальность исследования возможностей гуморального контроля различных свойств клеток обусловлена в первую очередь запросами клиники, где врачам приходится сталкиваться с последствиями разнообразных нарушений такой регуляции (Galli S.J., 2000; Matsumoto Т., 2011; Zulewski II, 2011). Зачастую эти нарушения связаны не только (и не столько) с наличием или отстутствием самого регуляторного фактора, как с возможной потерей чувствительности клеток к нему (Михайлов В.В., Сагалович Б.М., 2011, Tah-rani А.А. et al., 2011), и поэтому изучение рецепторного аппарата клетки в решении этой проблемы имеет первостепенное значение. В связи с этим несомненный интерес представляет изучение наличия Р2-рецепторов (рецепторов к АТФ) на разных клетках, в том числе на стволовых клетках.

Несмотря на то, что функциональные свойства любой клетки наряду с работой гена определяются во многом и ее рецепторным аппаратом, изменения качественного состава рецепторов в процессе онтогенеза для большинства клеточных типов практически не исследованы (Drain N. et al, 2011; Ye Z.J. et al. 2011, Alea M.P. et al., 2011). В рамках этой проблемы несомненный интерес представляет ре-центорый аппарат стволовых клеток, способных к дифференцировке в различные клеточные типы (Mimeault М. et al., 2007). Одними из таких рецепторов могут быть Р2-рецспторы, основным естественным лигандом которых является АТФ. В литературе имеются убедительные свидетельства наличия Р2-рецепторов во всех органах и тканях человека (Burnstock G., 2006), наличие Р2-рецепторов также установлено в отдельных форменных элементах крови и их предшественниках (Sak К. et al, 2003). Вместе с тем, не исследовано то, как изменяются функциональные свойства клеток с появлением или исчезновением этих рецепторов. Неизвестно, когда они начинают экспрессироваться и характерны ли они для всех форменных элементов крови и их предшественников (Sak К. et al., 2003). Кроме того, отсутствуют исследования, посвященные взаимосвязи наличия подтипов Р2-рецепторов в стволовых клетках с активностью экто-нуклеотидаз - внеклеточных ферментов, участвующих в распаде нуклеотидов (Зиганшин А. У., Зиганшина JI.E., 2009).

Matthay M.A., 2011; Lai R.C. et al., 2011). При этом, выявление столовых клеток является отдельной трудоемкой задачей; в настоящее время в основе их идентификации лежит, в первую очередь, наличие определенных поверхностных маркеров. В крови имеются клетки предшественницы гемопоэза, маркерами которых является мембранный фосфогликопротеин - CD34, а также трансмембранный рецептор белка тирозинкиназы c-kit, также известный, как рецептор фактора роста стволовых клеток. Вместе с тем, совершенно не исследованно распределение различных подтипов Р2-рецепторов в CD34 и/или c-kit-позитивных клетках, хотя имеются основания считать, что Р2-рецепторы могут присутствовать на этих ранних стадия развития гсмопоэтических клеток, и быть вовлечены в процессы диф-ференцировки и созревания клеток (Burnstock G., 2006). Очевидно, что любые знания о регуляторном потенциале стволовых клеток безусловно окажутся востребованными, как для возможного решения конкретных клинических ситуаций, так и для интересов фундаментальной биологии и медицины.

Целью исследования - изучить наличие различных подтипов Р2-рецепторов в гсмопоэтических стволовых клетках и мононуклеарах крови человека, а так же активность эктонуклеотидаз в этих клетках.

Задачи исследования:

1. Изучить наличие подтипов Р2Х- и Р2У-рецепторов на С034+клетках и с-kit+клетках крови человека.

2. Исследовать наличие подтипов Р2Х- и Р2У-рецетторов иа лимфоцитах и моноцитах человека.

3. Провести сравнительный анализ наличия различных подтипов Р2-рецепторов на лимфоцитах, моноцитах и клетках-предшественниках гемопоэза пуповинкой и периферической крови человека.

4. Определить активность экто-нуклеотидаз в мононуклеарных клетках крови человека и клетках-предшественниках гемопоэза.

Объект исследования - гемопоэтические клетки-предшественники человека, полученные из пуповинной крови и периферической крови доноров; лимфоциты и моноциты пуповинной крови и периферической крови доноров.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые метолом проточной цитометрии установлено наличие всех изученных подтипов Р2-рецепторов на С034*-клетках и с-кк+-клетках нуиовинной крови человека, моноцитах и лимфоцитах пуповинной и периферической крови человека. Приоритетными являются данные, свидетельствующие о том, что активность экто-нуклеотидаз СГ)34+-клеток пуповинной крови в 1000 раз ниже, чем это значение в популяции мононуклеаров пуповинной крови, и сравнима с активностью этого фермента в популяции мононуклеаров периферической крови. Безусловной новизной обладают результаты исследования, в которых установлено, что в лимфоциты пуповинной и периферической крови не имеют достоверных различий по содержанию в них различных подтипов Р2У-рецеиторов.

Новыми являются количественные сведения о распределении подтипов Р2-рецепторов в различных клеточных популяциях и о связи экспрессии этих рецепторов с наличием или отсутствием маркеров СШ4 и с-к^.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Результаты проведенных исследований могут быть востребованы для разработки методов клеточной терапии с использованием гемопоэтических стволовых клеток. Полученные данные существенно приближают нас к пониманию механизмов дифференцировки гемпоэтических стволовых клеток и возможной роли рецепторного аппарата, участвующего в этих процессах. Результаты, описанные в диссертации, могут быть использованы в практике лабораторий, занимающихся проблемами клеточной терапии. Они могут послужить основой для изучения рецепторного аппарата разнообразных стволовых клеток.

Материалы диссертации включены в учебный процесс на кафедре фармакологии фармацевтического факультета с курсами фармакогнозии и ботаники и кафедре гистологии Казанского государственного медицинского университета.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Лимфоциты, моноциты, С034+-клетки пуповинной и периферической крови человека экспрессируют на своей поверхности Р2Х2-7 и Р2У1-, Р2У4-, Р2У6-рецепторы.

2. Содержание клеток, экспрессирующих Р2Х-рецепторы, увеличивается в процессе созревания гемопоэтических клеток - наименьший процент таких

клеток наблюдается в популяции СВ34+/ски"клеток, а наибольший обнаруживается на лимфоцитах пуповгашой крови человека.

3. В лимфоцитах пуповинной крови человека активность эктонуклеотидаз выше на 3 порядка по сравнению с таковой в гемопоэтических СВ34+клетках.

Апробация результатов исследования. Результаты работы и основные положения диссертации были доложены и обсуждены на Российской конференции «Фармакология и токсикология фосфорорганических соединений и других биологически активных веществ», посвященной 75-летию профессора И.А. Студенцо-вой (Казань, 2008), на Всероссийских научно-практических конференциях «Молодые ученые в медицине» (Казань, 2009, 2011), на Всероссийских студенческих научных конференциях КГМУ (Казань, 2010, 2011), на международной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам» (Москва, 2010), 16-м Всемирном съезде фармакологов (Копенгаген, Дания, 2010).

Публикации. По материалам исследования опубликовано 10 печатных работ, в том числе 3 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, их обсуждения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающего 197 источников, из которых 10 отечественных. Работа изложена на 107 страницах машинописного текста, иллюстрирована 40 рисунками, 14 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты проведены на 50 образцах пуповинной и 40 образцах периферической крови человека.

Иммуномагиитная сепарация. Процедуру иммуномапштной сепарации С034+клеток проводили из фракции мононуклеаров (лимфоцитов, моноцитов, CD34+kjictok), полученных выделением на фиколле из крови. Иммуномагиитная сепарация проходит в два этапа:

1. Инкубация магнитных частиц с мононуклеарами крови человека. Эти магнитные частицы связаны с первичными моноклональными антителами, специфичными в отношении маркера CD34+ клеток крови человека. Во время инкубации происходит связывание антител с С034+клетками. При помещении в магнитный концентратор (Dynaf MPC, Норвегия), связавшиеся с магнитными частицами СБ34+клетки удерживаются, а не связавашиеся -удаляются.

2. Изоляция отсепарированных клеток от магнитных частиц. Для этого добавляют специальный раствор (Invitrogen, Норвегия). Клетки опять помещают в магнитный концентратор, магнитные частицы улавливаются, а в растворе содержатся высвобожденные СП34+клетки.

Чистота выделения С034+клеток была 94,2±3,1% с сохранением жизнеспособности клеток.

Иммунофлуоресцентный анализ. Для проведения иммунофлуоресцентно-го анализа использовали антитела к рецепторам CD34, c-kit и разным подтипам Р2Х- и Р2У-реценторов. Антитела были связанны с разными флуоресцентными красителями, что позволяло одновременно определить три маркера: CD34, c-kit и какой-либо один из подтипов Р2-рецепторов.

Окрашивание С034+клеток проводили моноклональными антителами, конъюгированными с флуоресцентным красителем аллофикоцианином (АФЦ). Рецептор c-kit определяли с помощью моноклональных антител, конъюгирован-ных с флуоресцентным красителем фикоэритрином (ФЭ). Р2Х- и Р2У-рецепторы определяли в непрямой реакции иммунофлуоресценции. Для этого использовали первичные антитела к P2X2-, P2Xr, P2X4-, Р2Х3-, Р2Х6- и Р2Х7-рецепторам и P2Yr, P2Y4-, P2Y 6-рецепторам. Вторичные антитела были конъюгированы с флуоресцентным красителем флуоресцинизотиоцианатом (ФИТЦ). Наличие подтипов Р2-рецепторов определялось регистрацией флуоресценции ФИТЦ. Коэкс-

прессия CD34 и Р2-рецепторов определялась по одновременной регистрации флуоресценции АПС и ФИТЦ. Экспрессия же CD34, c-kit и какого либо подтипа Р2-рецепторов определялась одновременной регистрацией флуоресценции АПС, ФЭ и ФИТЦ.

Во всей серии экспериментов ставился отрицательный контроль, для того, что бы показать, что нет неспецифичного связывания со вторичными антителами. Контролем служили образцы, в которых вместо первичных антител был добавлен буферный раствор.

Проточная цнтофлуориметрия. Анализ проводили на проточном цитоф-луориметре FACSCanto II ("Becton Dickinson", США) в программе FACSDiva. Для каждого образца было проанализировано минимум 2000 событий. В области характерной для'лимфоцитов также находятся и С1)34+клетки.

Общее содержание С034+клеток в пуповинной крови составило 1-2 %. Такое низкое процентное содержание этих клеток в пуповинной крови не позволяет получать статистически достоверных результатов наличия рецепторов на них. Поэтому все дальнейшие исследования по определению Р2-рецепторов проводили на CD34+ioieTKax, полученных методом иммуномагнитной сепарации из фракции мо-нонуклеаров.

Определение активности экто-нуклеотндаз. Пуповинная кровь, объемом 50-110 мл, забиралась во время родов в мешки для взятия крови с антикоагулянтом. Определение активности экто-нуклеотидаз моноиуклеаров пуповинной и периферической крови проводилось после выделения на фиколле. Жизнеспособность клеток подтверждалась методом проточной цитометрии. Иммуномагнитную сепарацию СЭ34+клеток проводили по вышеизложенной методике. Инкубацию клеток с АТФ проводили при непрерывном перемешивании в планшете в течение часа при 37°С.

В эксперименте ставили следующие контрольные пробы:

1. инкубирование СБ34+клеток пуповинной крови без субстрата реакции — для определения количества АТФ в С034+клетках через час;

2. раствор АТФ в концентрации 10 мкМ- для контроля количества АТФ через час.

Данные контрольные пробы учитывались при итоговой оценке результатов.

Суспензию клеток забирали шприцем и для отделения клеток фильтровали через шприцевый фильтр, к фильтрату добавляли хлорную кислоту для осаждения белков и центрифугировали. Пробы хранились при температуре -20°С для последующего количественного определения АТФ методом высокоэффективной

жидкостной хроматографии (Perkin Elmee, Series 200). Для разделения нуклсоти-дов использовали колонку Discovery С18 длиной 15 см и внутренним диаметром 4.6 мм.

Разделение нуклеотидов проводили мобильной фазой, состоящей из 0,2 М раствора К2НР04 в 3% метаноле, pH 6,0, при скорости тока мобильной фазы 0,8 мл/мин, при длине волны 260 нм и объеме образца 20 мкл.

При этих условиях нуклеотиды появлялись в следующем порядке: АТФ, АДФ и АМФ. Определение концентрации АТФ проводили, сравнивая высоту пиков экспериментальных образцов с соответствующими высотами пиков, получаемых от стандартных растворов АТФ.

Статистическую обработку результатов проводили с помощью стандартной компьютерной программа GrafPadPrizm, используя Меритерий Стыодента для несвязанных величин. Разницу считали достоверной при р < 0,05. Данные представлены в виде арифметического среднего ± стандартная ошибка среднего (и - количество экспериментов).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В результате иммуномагнитной сепарации из моно.чуклеаров получали фракцию, содержащую не менее 90% С034+клеток, и фракцию С034"клеток, включающую лимфоциты и моноциты. При окрашивании С034+клеток антителами к c-kit мы установили, что большая часть клеток имела одновременную экспрессию обоих маркеров 65,6-91,7% (75,7±3,9%).

На рис. 1 по оси абсцисс отображена интенсивность флуоресценции клеток, меченных моноклональными антителами к CD34 (АРС-Н), коныюгированными с АФЦ; по оси ординат - интенсивность флуоресценции клеток, окрашенных в реакции непрямой иммунофлуоресценции моноклональными антителами к Р2Х2-рецепторам и вторичными антителами, конъюгированными с ФИТЦ (FITC-H). В левом верхнем квадранте отображены P2X7CD34, в правом верхнем -P2X+/CD34+, в правом нижнем- P2X"/CD34+, в левом нижнем - P2XYCD34"клетки.

® да 8 №041

Т1 1Ш & К- 1

•О " и. СИ 02 „л. • • У< ч ' ..................1

03 .2

Б. ,ыь5 1Г ГПТОПТ» ПЩ ~Т № »4 ш4

Рис. 1. Цитофлуорограмма интенсивности флуоресценции клеток, меченных двумя типами флуорохромов. На данном рисунке в качестве нрнмера приведено наличие Р2Х2-реценгоров на С1)34 клет ках пуповинной крови (Б), отрицательный контроль (А).

% 25-i 20 15105-

Ш пу повинная кровь KS периферическая кровь

Р2Х2* Р2Хз Р2Х( Р2Х, P2Xj Р2Х7 * РЗХ^рецепторы на клетках периферической крови не определялись

Рнс. 2. Относительное содержание СШ4+клеток пуповинной и периферической крови человека, экспрессирующих Р2Х-рецепторы

Нами было выявлено наличие P2X2-, P2X3-, Р2Х,-, P2X5-, Р2Х«-, Р2Х7-рецепторов на С034+клетках пуповинной крови человека после иммуномагнитной сепарации. Отличия в количестве Р2Х- позитивных лимфоцитов не было (рис. 2).

% 25 2015 10 5 0

Ш\ пуповинная кровь У7\ периферическая кровь

P2Y.

P2Y6

Рис. 3. Относительное содержание С 1)34 клеток пуповинной и периферической крови человека, экспрессирующих Р2У-рецелгоры

На СБ34+клетках пуповинной и периферической крови человека были выявлены Р2У,-рецепторы, Р2У4-рецепторы, Р2У6-рецепторы и они имели схожую картину наличия рецепторов (рис. 3).

% 50 45403530' 25-го-

151050

т г

р2х2

Ш пуповинная кровь КЗ периферическая кровь

р2х3 р2х, р2хс р2хв р2х7 *- р<0,06 относительно пуповинной крови

Рис. 4. Относительное содержание лимфоцитов пуповинной и периферической крови человека, экспрессирующих Р2Х-рецепторы

У лимфоцитов пуповинной и периферической крови были выявлены все изученные нами подтипы Р2Х-рецепторов. Интересно, что процент лимфоцитов пуповинной крови, имеющих Р2Х-рецепторы был выше процента лимофцитов периферической крови, имеющих на себе Р2Х-рецепторы (рис. 4).

% 25-2СН

15 1050'

¿А

Ш пуповинная кровь ЕЗ периферическая кровь

р2у, р2у4 р2у6

*- р<0 05 относительно пуповинной крови

Рис. 5. Относительное содержание лимфоцитов пуповинной и перифе-

рической крови человека, экспрессирующих Р2У-рецепторы

У лимфоцитов пуповинной и периферической крови человека были определены Р2УГ, Р2У4-, Р2У6- подтипы рецепторов. Меньше всего, среди лимфоцитов пуповинной крови человека, было клеток, позитивных по Р2Угрецепторам, а больше всего присутствовали Р2У4-позитивные клетки. Содержание лимфоцитов

периферической крови, имеющих Р2У,-рецепторы, было выше, чем количество лимфоцитов пуповинной крови (рис.5).

% 454035 30252015-IDS'

Р2Х,

р2х3 р2х, p2xg р2хе р2х7 р<0,05 относительно пуповинной крови

Ш пуповинная кровь БЭ периферическая кровь

Рис. 6. Относительное содержание моноцитов пуповинной н периферической крови чело-иска, экспресснрующих Р2Х-рецепторы

На моноцитах пуповинной и периферической крови были обнаружены все изученные подтипы Р2Х- и Р2У-рецепторов. Интересно, что достоверно меньше моноцитов периферической крови имели на себе Р2Х2-подип рецепторов (рис. 6).

% 908070 л 60 50403020 100

Ш пуповинная кровь ЕЗ периферическая кровь

р2у, р2у„ р2у3

*- р<0,05 относительно пуповинной крови

Рис. 7. Относительное содержание моноцитов пуповинной и периферической крови человека, экспресснруюших Р2У-рецепторы

Нами было показано, что среди моноцитов пуповинной крови большее содержание имели Р2Х2-рецепторы и Р2Х6-рецепторы. Остальные подтипы Р2Х-рецепторов имели менее 15% позитивных клеток (рис. 6). По полученным нами результатам, количество Р2УГ, Р2У4-, Р2У6-рецепторов на моноцитах пуповин-

ной крови было значительно выше, чем на других изученных клетках. А соотношение позитивных по Р2УГ, Р2У4-, Р2У6.-рецепторам клеток было одинаковым на СБ34*клетках пуповинной крови, лимфоцитах пуповинной и периферической крови: меньше всего было клеток, позитивных по Р2У,-рецепторам, а значительно больше - по Р2У„-рецепгорам. Следует отметить, что среди моноцитов периферической крови достоверно меньше клеток, позитивных по Р2У4-подтипу рецепторов, чем среди моноцитов пуповинной крови (рис. 7).

% 201 15 10-

С034*"/с-МГклетки CD34+/c-kif клетки С034*клетки

Р2Х,

Р2Х3 Р2Х< Р2Хд Р2Хб Р2Х, ■ р<0,05 относительно CD347c-kit1uieTOK

Рис. 8. Относительное содержание CD34 клеток пуповинной кропи человека, экснрессирующих Р2Х-рецепторы

При исследовании на цитометре CD34+/c-kit"raeTOK выяснили, что они содержат все изученные нами подтипы Р2Х-рецепторов. Наименьший процент позитивных клеток наблюдался для Р2Х5-подтипа рецепторов, наибольший процент имел Р2Х6-подтип рецепторов. На CD34+/c-ki.t+KJtetKax выявили P2X2-, Р2Х3-, P2X4-, P2XS-, Р2Хб- и Р2Х7-рецепторы без значительного отличия в экспрессии. Среди С034+/с-кй+клеток пуповинной крови процент клеток, позитивных по Р2Х-рецепторам выше, чем среди CD34+/c-kit'mieTOK пуповинной крови (рис. 8).

По литературным данным обнаружено наличие информационной РНК для большинства Р2-рецепторов в разнообразных клеточных типах (Wang L. et al., 2004; Jin J. et al., 1998), но до нашей работы не было сведений о присутствии разных подтипов Р2-рецепторов и распределении рецепторов на клетках крови человека. Вместе с тем, известно, что не всегда наличие информационной РНК приводит к появлению этого белка. Разница в экспрессии информационной РНК у разных видов млекопитающих не отражена на уровне функциональной значимости

фенотипа (Fu N. et al., 2007), то есть появление гена не связано с уровнем экспрессии белков, и присутствие белка должно быть подтверждено экспериментально, что и было проделано в нашей работе.

Стволовые клетки периферической и пуповшшой крови не отличаются по содержанию Р2-рецспторов, что может свидетельствовать об одинаковом функциональном состоянии клеток и стадий дифференцировки. Методика эксперимента не позволяет нам судить, представлены ли все подтипы Р2Х-рецелторов на одной и той же клетке или они встречаются на разных клетках, экспрессирующих все исследованные подтипы. В популяции С034+клеток значение экспрессии Р2Х-рецепторов на С034+клетках ниже, чем на лимфоцитах пуповинной крови. На сегодняшний день мы не знаем, первично ли появление Р2Х-рецепторов на CD34 клетках пуповинной крови, либо они появляются после контакта с антигеном, для дальнейшей интеграции в имунные реакции. В любом случае, высокий уровень экспрессии Р2-рецепторов на С034+клетках пуповинной крови позволяет предположить их участие в процессах дифференцировки клеток крови, что справедливо и для других клеток организма. Возможно, что АТФ может как-либо влиять на путь дифференцировки клеток крови, влияя на разные Р2-рецепторы, поскольку АТФ - это универсальный агонист почти всех подтипов Р2-рецеиторов, которые были обнаружены ца клетках крови.

Количество Р2Х2,-, P2X3-, P2X4-, P2X5-, Р2Х«-, Р2Х7-позитивных лимфоцитов пуповинной крови было выше, чем количество этих клеток периферической крови взрослых доноров и С034+клеток пуповинной и периферической крови. Данное явление можно объяснить нахождением лимфоцитов пуповинной крови в ином (активном) функциональном состоянии, нежели лимфоциты периферической крови здоровых волонтеров и CD34+joienai. Мы можем предположить, что появление Р2Х-рецепторов на лимфоцитах пуповинной крови является вторичным, по отношению к синтезу АТФ, и служит для проведения дополнительных сигналов. Это может быть еще одним подтверждением известного факта, что Р2-рецепторы играют большую роль в развивающемся организме по сравнению со взрослым.

Фенотипически c-kit негативные клетки (CD34+/c-kit") являются гшорипо-тентными гемопоэтическими клетками и экспрессия c-kit на них является первым шагом созревания в гемопоэзе (Sogo S. et al, 1997; Susumu I, 2000). Нами были получены данные, согласно которым среди С0347с-ИГклеток обнаруживается меньшее количество клеток позитивных по Р2Х-рецепторам, чем среди CD34+/c-

кй+ клеток. В исследовании ЬетоП (ЬегаоП 1Ш. е! а!., 2004) показано, что АТФ и УДФ, в высоких концентрациях, не влияют на пролиферативную активность сами по себе, но действуют как стимуляторы факторов роста для С034+клеток. Вероятно, что после активации клеток и экспрессии на них маркера пролиферации с-кй, начинается деление клеток, с вовлечением в этот процесс Р2Х-рецепторов. Описанные данные позволяют говорить об участии Р2Х-рецепторов в процессах дифференцирован гемопоэтических клеток.

Определение активности экто-АТФаз в клетках крови человека

Изучение активности экто-АТФазы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии показало, что при введении эталонного образца водного раствора АТФ (10 мкМ) наблюдалась характерная хроматограмма с пиком АТФ с максимумом на третьей минуте. При введении контрольной пробы наблюдался пик АДФ с несколько меньшей амплитудой на пятой минуте, и АМФ на шестой минуте. При введении опытной пробы наблюдался пик с еще меньшей амплитудой на третьей минуте.

Активность ферментов СП34+клсток при инкубации с АТФ в концентрации 10 мкМоль в течение 60 мин составила 0,158±0,027 амоль/мин/кл АТФ (амоль=агтомоль=10"18, п=6, табл. 1).

Табл. 1.

Активность экто-АТФаз клеток крови

Тип клеток Активность экто-АТФаз, амоль АТФ/мин/кл

Мононуклеары периферической крови 0,286±0,198*

Мононуклеары пуповшшой крови 0,158±0,027*

СПЗ 4'клетки пуповинной крови 281±112

Примечение: *- р< 0,05 относительно С034+клеток пуповшшой крови

Активность экто-ЛТФаз мононуклеаров (лимфоцитов и моноцитов) пупо-винной крови составила 0,281±0,112 фмоль/мин/кл АТФ (фмоль=фемтомоль= 10" ,5, п=13, табл. 1).

Активность экто-АТФаз СВ34+клсток периферической крови установить не удалось в связи с невозможностью выделить достаточное количество клеток для анализа.

Также нами была изучена активность мононуклеаров периферической крови человека, которая имела значение 0,286±0,198 амоль/мин/кл АТФ (амоль=аттомоль=10"18, п=13, табл. 1).

Таким образом, результаты нашего исследования свидетельствуют о том, что СВ34+гемопозтические клетки, моноциты, лимфоциты пуповинной и периферической крови человека содержат Р2Х2-, Р2Х3-, Р2Х4-, Р2Х5-, Р2Х6-, Р2Х?-рецепторы и Р2УГ, Р2У4-, Р2У6-рецепторы. Кроме того, было обнаружено, что число Р2Х-позигивиых клеток увеличивается в процессе дифференцировки клеток крови и это свидетельствует о связи между наличием или отсутствием этих рецепторов с процессами созревания.

Нами было обнаружено, что активность экто-АТФаз мононуклеаров пуповинной крови была на 3 порядка выше, чем активность этих ферментов в С034+клетках пуповинной крови и мононуклеарах периферической крови. Экспрессия Р2-рсцепторов на лимфоцитах пуповинной крови также была выше почти в 3 раза, чем на СВ34+клетках пуповинной крови и мононуклеарах периферической крови. Поскольку экто-АТФаза расщепляет внеклеточный АТФ, подготавливая таким образом Р2-рецепторы к восприятию новых порций медиатора, то между количеством рецепторов и активностью ферментов должна существовать взаимосвязь: активность экто-ЛТФаз выше там, где больше рецепторов, что и было подтверждено нашими исследованиями. Активность экто-АТФаз мононуклеаров пуповинной крови и количество Р2Х-рецепторов на лимфоцитах пуповинной крови выше, чем эти показатели у С034+клеток пуповинной крови и мононуклеаров периферической крови.

Результаты нашей работы подтверждают ранее высказанные предположения об участии Р2-рецепторов в процессе дифференцировки клеток крови (Эак К. е1 а1., 2003) и создают предпосылки для дальнейшего изучения вовлеченности рецепторов к АТФ в этот процесс.

В настоящее время трудно однозначно предсказать, какие функциональные свойства клетки контролируются с участием Р2-рецепторов. Клетки на которых

обнаруживаются различные подтипы этих рецепторов составляют совершенно гетерогенную популяцию по происхождению, строению и выполняемым функциям. В то же время, для изученных нами клеток, можно предположить, что Р2-рецепторы, каким-то образом, связаны с процессом дифференцировки.

ВЫВОДЫ:

1. На лимфоцитах, моноцитах, С034-позитивных клетках пуповииной и периферической крови человека установлено наличие Р2Х2-7, P2Yr, P2Y4-, P2Y6-рецепторов.

2. Различные подтипы Р2Х- и Р2У-рецепторов встречаются в 5-15% СД34+клеток как пуповипной, так и периферической крови. В популяции С034+/с-1аГклеток пу-повинной крови не более 5% клеток несут на себе Р2Х-рецепторы, тогда как в популяции CD34+/c-kít+KiieTOK от 5 до 8% клеток несут на себе Р2Х-рецепторы.

3. От 25 до 35% лимфоцитов пуповинной крови экспрессируют Р2Х-рецепторы, тогда как в популяции лимфоцитов периферической крови таких клеток не более 15%. В лимфоцитах пуповинной и периферической крови имеется одинаковое количество клеток, несущих на себе различные подтипы Р2У-рецепторов.

4. В популяции моноцитов пуповинной крови не менее 25% клеток экспрессируют Р2Х2-рецепторы, тогда как в популяции моноцитов периферической крови таковых менее 3%. Более 70% моноцитов пуповинной крови несут на своей поверхности Р2У4-рецепторы, тогда как в популяции моноцитов периферической крови таких клеток не более 12%.

5. Активность экто-нуклеотидаз С034+клеток пуповинной крови в 1000 раз ниже, чем это значение в популяции мононуклеаров пуповинной крови, и сравнима с активностью этого фермента в популяции мононуклеаров периферической крови.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Казакова P.P. Определение Р2-рецепторов на гемопоэтических клетках пуло-винной крови / P.P. Казакова, И.Г. Мустафин, P.P. Камалиев, И.М. Газизов, А.П. Кияеов, А.У. Зиганшин // Тезисы докладов Российской конференции «Фармакология и токсикология фосфорорганических соединений и других биологически активных веществ», посвященной 75-летию профессора И.А. Студенцовой. -Казань,2008.-С.41.

2. Казакова P.P. Определение экспрессии Р2Х-рецепторов на С034+клетках пупо-винной крови человека / P.P. Казакова, И.Г. Мустафин, А.У. Зиганшин, А.П. Кияеов И Тезисы докладов 14-ой конференции «Молодые ученые в медицине»,- Казань, 2009.-С. 135.

3. Нурхаметова Д.Ф. Экспрессия Р2Х-рецепторов на CD34+ клетках человека / Д.Ф. Нурхаметова, И.Г. Мустафин, P.P. Казакова // Тезисы докладов 84-й всероссийской студенческой научной конференции. - Казань, 2010. - С.68.

4.-Казакова P.P. Особенности экспрессии Р2Х-рецепторов на С034+клетках пуповиной крови / P.P. Казакова, И.Г. Мустафин, А.У. Зиганшин, C.B. Федотов, М.Ш. Шамелашвили // Тезисы докладов 5-ой международной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам». - Москва, 2010. - С.44.

5. Ziganshin A.U. '1Ъе presence of P2X-receptors in CD34-positive cells of human umbilical cord blood / A.U. Ziganshin, R.R. Kazakova, I.G. Mustafin, D.V. Nurullina, G.Z. Sagdieva, F.F. Kazakova, L.E. Ziganshina // 16th World Congress on Basic and Clinical Pharmacology. - Copenhagen, Denmark, 2010. - P.691.

6. Казакова P.P. Определение экспрессии Р2Х-рецепторов на CD34- и c-kit-положительных клетках пуповинной крови человека / P.P. Казакова, И.Г. Мустафин, Т.И, Мавлюдов, А.П. Кияеов, А.У. Зиганшин // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-2011. - т. 151, —С. 39-44.

7. Казакова P.P. Роль Р2-рецепторов, расположенных на клетках крови человека / P.P. Казакова, P.P. Камалиев, И.Г. Мустафин, А.У. Зиганшин // Казанский Медицинский Журнал. - 2011. - т. 92 (1). - С. 120-124.

8. Нурхеметова Д.Ф. Сравнительная характеристика экспрессии Р2Х-рецепторов на СТ)34+клетках пуповинной и периферической крови человека / Д.Ф. Нурхеметова, И.Г. Мустфин, P.P. Казакова // Тезисы докладов 85-й всероссийской студенческой научной конференции. - Казань, 2011. - С Л 63.

9. Казакова P.P. Определение экспрессии Р2У-рецепторов на клетках крови человека / P.P. Казакова, Д.Ф. Нурхаметова, Л.Г. Серазетдинова, Д.В. Нуруллина Д.В., Л.В. Копанец. // Тезисы докладов 6-й всероссийской научно-практической конференции «Молодые ученые в медицине» - Казань, 2011. - С. 109-110.

10. Мустафин Р.И. Биофармацевтическая оценка поликомплексной матричной системы доставки в толстый отдел кишечника на основе CARBOMER 940/ EUDRAGIT® ЕРО / Р.И. Мустафин, Т.В. Кабанова, И.И. Сёмина, A.B. Буховец,

В.Р. Гариггова, Е.В. Шиловская, Ш.Ф. Насибуллин, А.Ю. Ситекков, P.P. Казакова, В.А. Кеменова. // Хим.-фарм. жури. - 2011. - т. 45 (8). - С. 33-36.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АФЦ- аллофикоцианин ФИТЦ - флуоресцинизотиоцианат ФЭ - фикоэритрин

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Казакова, Рената Рувшановна

Список использованных сокращений.

1. Введение.

2. Обзор литературы.

2.1. Общие сведения об АТФ.

2.2. Классификация пуринорецепторов.

2.4. Р2-рецепторы

2.3. Аденозиновые рецепторы.

2.4.1. Р2Х-рецепторы.

2.4.2. Р2У-рецепторы.

2.4.3. Р2-рецепторы на клетках крови.

2.5. Экто-нуклеотидазы.

2.5.1. Экто-нуклеотидазы в клетках крови.

2.6. Гемопоэтические стволовые клетки.

2.6.1. Общие сведения о кроветворении.

2.6.2. СБ34+ (позитивные) клетки.

2.6.3. с-кк+(позитивные) клетки.

3. Материалы и методы.

3.1. Аспекты биомедицинской этики.

3.2. Определение экспрессии Р2-рецепторов.

3.2.1.Иммуномагнитная сепарация СБ34+клеток.

3.2.2. Иммунофлуоресцентный анализ.

3.2.3. Проточная цитофлуориметрия.

3.3. Определение активности экто-АТФаз.

3.4. Статистическая обработка результатов.

4. Результаты собственных исследований.

4.1. Определение наличия Р2-рецепторов.

4.1.1. Определение наличия Р2Х- и Р2У-рецепторов на клетках пуповинной крови человека.

4.1.2. Определение наличия Р2Х- и Р2У-рецепторов на клетках периферической крови человека.

4.1.3. Наличие Р2Х-рецепторов на С0347с-клГ и СБ34+/с-кк+клетках пуповинной крови человека.

4.1.4. Наличие Р2У-рецепторов на с-кк+/С034+клетках пуповинной крови человека.

4.1.5. Сравнение наличия Р2Х-рецепторов на разных типах клеток.

4.1.6. Сравнение наличия Р2У-рецепторов на разных типах клеток.

4.2. Определение активности экто-АТФаз в клетках крови человека.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование Р2-рецепторов и активности экто-нуклеотидаз гемопоэтических клеток человека"

Актуальность темы. Проблема гуморальной регуляции функционирования различных клеток и тканей остается одной из самых значимых и недостаточно исследованных в биологии медицины. Актуальность исследования возможностей гуморального контроля различных свойств клеток обусловлена в первую очередь запросами клиники, где врачам приходится сталкиваться1 с последствиями разнообразных нарушений такой регуляции (ваШ ¡5Л., 2000; МагвшшЛо. Т., 2011; 2и1е\уз1а Н., 2011). Зачастую эти нарушения связаны не только (и не столько) с наличием или отстутствием самого регуляторного фактора, как с возможной потерей чувствительности клеток к нему (ТаЬгаш А.А. et а1., 2011). Вот почему изучение рецепторного аппарата клетки в решении этой проблемы имеет первостепенное значение. В рамках этой проблемы несомненный интерес представляет наличие Р2-рецепторов (рецепторов к АТФ) на разных клетках, в том числе на активно, изучаемых сейчас стволовых клетках.

В последнее время пристальный интерес исследователей связан с возможностью применения стволовых гемопоэтических клеток для решения ряда клинических задач, например для лечения сахарного диабета (Михайлов В.В., Сагалович Б.М., 2001, Уо1агеую V. е1 а1., 2011), болезней Паркинсона (Веа1 Е., 2011), Альцгеймера (БапШта Е. е1 а1., 2010), инфаркта (ОипеШ М. е! а1., 2011), инсультов (ЫтсЬ/аП О., Кокша Ъ., 2011) и некоторых других, в частности, системных заболеваний (МлтеаиИ: М. е1 а1., 2007).

Одними из таких рецепторов могут быть Р2-рецепторы, основным естественным лигандом которых является АТФ. В литературе имеются убедительные свидетельства наличия Р2-рецепторов во всех органах и тканях человека (Burnstock G., 2006), наличие Р2-рецепторов также установлено в отдельных форменных элементах крови и их предшественниках (Sak К. et. al., 2003), более того, существует большое количество подтипов этих рецепторов. Вместе с тем, как изменяются функциональные свойства клеток с появлением или исчезновением этих рецепторов совершенно не ясно. Не известно, когда они начинают экспрессироваться и характерны ли они для всех форменных , элементов крови и их предшественников (Sak К. et. al., 2003). Кроме того, отсутствуют исследования, посвященные взаимосвязи наличия подтипов Р2-рецепторов в стволовых клетках с активностью экто-нуклеотидаз -внеклеточных ферментов, участвующих в распаде нуклеотидов (Зиганшин А.У., Зиганшина Л.Е., 2009).

В настоящее время бурно развивающейся областью медицины и биологии являются попытки использования различных стволовых клеток для лечения и профилактики разнообразных заболеваний (De Santis М. et al., 2011; Gotts J.E., f Matthay M.A. 2011; Lai R.C. et al. 2011). Причем, выявление разнообразных стволовых клеток является отдельной трудоемкой задачей и в настоящее время в основе их идентификации лежит, в первую очередь, наличие или отсутствие поверхностных маркеров. В крови имеются клетки предшественницы гемопоэза маркерами которых является мембранный фосфогликопротеин — CD34 и c-kit,

I представляющий собой трансмембранный рецептор белка тирозинкиназы, 1 также известным, как рецептор фактора роста стволовых клеток. Вместе с тем, совершенно не исследованно распределение различных подтипов Р2-рецепторов у CD34 и c-kit позитивных клеток, хотя имеются основания считать, что Р2-рецепторы могут присутствовать на этих ранних стадия развития гемопоэтических клеток, и быть вовлечены в процессы дифференцировки и созревания клеток.

Вместе с тем, несмотря на кажущуюся хорошую изученность экспрессии рецепторов к АТФ и с-к^ рецепторов в различных клетках организма, возможное влияние их присутствия на поведение клеток практически не исследовано. Тем не менее, любые знания о регуляторном потенциале стволовых клеток безусловно окажутся востребованными как для решения конкретных клинических ситуаций, так и для запросов фундаментальной биологии и медицины.

Целью исследования изучить наличие различных подтипов Р2-рецепторов в гемопоэтических стволовых клетках и мононуклеарах крови человека, а так же активность эктонуклеотидаз в этих клетках. Задачи исследования:

1. Изучить наличие подтипов Р2Х- и Р2У-рецепторов на СОЭ4+клетках и с-кк+клетках крови человека.

2. Исследовать наличие подтипов Р2Х- и Р2У-рецепторов на лимфоцитах и моноцитах человека.

3. Провести сравнительный анализ наличия различных подтипов Р2-рецепторов на лимфоцитах, моноцитах и клетках-предшественниках гемопоэза пуповинной и периферической крови человека.

Научная новизна

Впервые методом проточной цитометрии установлено наличие всех изученных подтипов Р2-рецепторов на С034+-клетках и с-кк+-клетках пуповинной крови человека, моноцитах и лимфоцитах пуповинной и периферической крови человека. Приоритетными являются данные, свидетельствующие о том, что активность экто-нуклеотидаз С034+-клеток пуповинной крови в 1000 раз ниже, чем это значение в популяции мононуклеаров пуповинной крови, и сравнима с активностью этого фермента в популяции мононуклеаров периферической крови. Безусловной новизной обладают результаты исследования, в которых установлено, что в лимфоциты пуповинной и периферической крови не имеют достоверных различий по содержанию в них различных подтипов Р2У-рецепторов.

Новыми являются количественные сведения о распределении подтипов Р2-рецепторов в различных клеточных популяциях и о связи экспрессии этих рецепторов с наличием; или отсутствием маркеров СБ34 и с-кк.

Научно-практическая значимость

Положения, выносимые на защиту:

1. Лимфоциты, моноциты, СВ34+-клетки пуповинной и периферической крови человека экспрессируют на своей поверхности Р2Х2-7 и Р2УГ, Р2У4-, Р2У6-рецепторы.

2. Содержание клеток, экспрессирующих Р2Х-рецепторы, увеличивается в процессе созревания гемопоэтических клеток - наименьший процент таких клеток наблюдается в популяции С034+/ск1Гклеток, а наибольший обнаруживается на лимфоцитах пуповинной крови человека.

3. В лимфоцитах пуповинной крови человека активность эктонуклеотидаз выше на 3 порядка по сравнению с таковой в гемопоэтических СБ34+клетках.

Заключение Диссертация по теме "Клеточная биология, цитология, гистология", Казакова, Рената Рувшановна

Выводы

1. На лимфоцитах, моноцитах, СИЗ 4-позитивных клетках пуповинной и периферической крови человека установлено наличие Р2Х2-7, Р2УГ, Р2У4-, Р2Уб-рецепторов.

2. Различные подтипы Р2Х- и Р2У-рецепторов встречаются в 5-15%

С034+клеток как пуповинной, так и периферической крови. В популяции

СБ34+/с-к1Гклеток пуповинной крови не более 5% клеток несут на себе Р2Х-рецепторы, тогда как в популяции С0347с-кк+клеток от 5 до 8% клеток несут на себе Р2Х-рецепторы.

5. Активность экто-нуклеотидаз СБ34+клеток пуповинной крови в 1000 раз ниже, чем это значение в популяции мононуклеаров пуповинной крови, и сравнима с активностью этого фермента в популяции мононуклеаров периферической крови.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Казакова, Рената Рувшановна, Казань

1. Воробьев А.И. Руководство по гематологии. «Ньюдиамед», 2002. т. 1. -С. 28-45.

2. Гривцова Л.Ю., Тупицын Н.Н. Ярыгин В.Н. И др. Субпопуляции мобилизованных стволовых (CD34+) клеток крови больных с последствиями тяжелой травмы спинного мозга // Иммунология гемопоэза. 2006. - Т. 3. - С. 24-42.

3. Марри Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В. Биохимия человека. Москва:1. Мир», 1993. т. 1, 2.

4. Михайлов В.В., Сагалович Б.М. Основы патологической физиологии:

5. Руководство для врачей / Москва: Медицина, 2001. С. 704.

6. Петровский Б.В. Максимов Александр Александрович. // Большая медицинская энциклопедия. «Советская энциклопедия», 1980. - т. 13 - С. 367368.

7. Козинец Г.И. Клетки крови и костного мозга. Цветной атлас-Медицинское информационное агенство Москва, 2004. С. 14-20.

8. Зиганшин А.У., Зиганшина Л.Е. Фармакология рецепторов АТФ. -ГЭОТАР МЕДИЦИНА. Москва.- 1999. 9-10.

9. Зиганшин А.У., Зиганшина Л.Е., Бернсток Дж. Экто-АТФазы и рецепторы

10. АТФ // Экспер. клин, фармакол. 1997. - Vol. 3. - Р. 78-82.

11. Зиганшин А.У., Зиганшина Л.Е. Р2-рецепторы: перспективная мишень дляf /будущих лекарств. Москва: «Геотар-медиа», 2009. - С. 133.

12. Зиганшин А.У. Антагонисты Р2-рецепторов тромбоцитов: успехи,iпробелмы, перспективы // Эксперимент, и клин, фармакол. 2010. - ч. 73. -С.38.43.

13. Adifolfi E., Melchiorri L., Falzoni S.et al. P2X7-receptor expression in evolutive and indolent forms of chronic B-lymphocytic leukemia // Blood. 2002. -Vol. 15.-P. 706-708.

14. Alea M.P., Borroto-Escuela D.O., Romero-Fernandez W. et al. Differential expression of muscarinic acetykcholine receptor subtypes in Jurkat cells and their signalling // J'. Neuroimmunol. 2011. - Vol. 153. - P. 23-28.

15. Alexander S.P.H., Mathie A., Peters J.A. Guide to Receptors and Channels (GRAC), 3rd edition // Br. J. Pharmacol. 2008. - Vol. 153. - P. 1-209.

16. Anderson D.M., Lyman S.D., Baird A. et al. Molecular cloning of mast cell growth factor, a hematopoietin that is active in both memrane bound and soluble forms // Cell. 1990. - Vol. 63. - P. 235-243.

17. Andre C., Hampe A., Lachaume P. et al. Sequence analysis of two genomic regions containing the KIT and. the FMS receptor tyrosine kinase genes // Genomics. 1997. - Vol. 39. - P. 216- 226.

18. Angiolillo D.J., Suryadevara S., Capranzano P., Bass T.A. Antiplatelet drug response variability and' role of platelet function testing: a practical' guide for interventional cardiologists //Am. Heart. J. 2008. - Vol. 156 -P. 10-15.

19. Ashman L.K. The biology of stem cell factor and its receptor c-Kit // Int. J. Biochem. Cell Biol. 1999. - Vol. 31.-P. 1037-1051.

20. Atkinson B., Dwyer K., Enjyoki K., Robson S.C. Ecto-nucleotidases of the CD39/NTPDase family modulate platelet activation and thrombus formation: Potential as therapeutic targets // Blood Cells Mol. Dis. 2006. - Vol. 36.20. P. 217-222.

21. Banerjee R.K. Ecto-ATPase // Mol. Cell. Biochem. 1981. - Vol. 37. - P. 9199.

22. Baricordi O.R., Ferrari D., Melchiorri L., Chiozzi P. An ATP-activated channel is involved in mitoganic stimulation of human T-lymphocytes // Blood. 1996. -Vol. 87.-P. 682-690.

23. Baricordi O.R., Melchiorri L., Adinolfi E. et al. Increased proliferation rate oflymphoid cells transfected with the P2X7ATP receptor // J. Biol. Chem. 1999. -Vol. 274.-P. 33206-33208.

24. Beal E. Parkinson disease: protein-based stem cells generate healthy dopamine neurons // Nat. Rev. Neurol.- 2011. Vol. 134 - P. 357-367.

25. Beldi G., Enjyoji K., Wu Y. et al. The role of purinergic signaling in the liver and in transplantation: effects of extracellular nucleotides on hepatic grafts vascular injury, rejection and metabolism // Front. Biosci. 2008. - Vol. 13. - P. 2588-2603.

26. Ben Yebdri F., Kukulski F., Tremblay A., Sevigny J. Concomitant activation of P2Y(2) and P2Y(6) receptors on monocytes is required for TLRl/2-induced neutrophil migration by regulating IL-8 secretion // Eur. J. Immunol. 2009. - Vol. 39.-P. 2885-2894.

27. Benham C.D., Tsien R.W. A novel receptor-opereted Ca2+-permeable channel activated by ATP in smooth muscle //Nature. 1987. - Vol. 238. - P. 275-278.

28. Beukers W.M., Pirovano I.M., Anton van Weert et al. Characterization of ecto-ATPase on human blood cells // Biochem. Pharmacol. 1993. - Vol. 46. - P. 19591966.

29. Bissels U., Wild S., Tomiuk S., Hafher M. et al. Combined characterisation of microRNA and mRNA profiles delineates early differentation pathways of CD133+ and CD34+hemapopoietic stem and progenitor cells // Stem Cells 2011. - Vol. 29. -P. 847-957.

30. Blume-Jensen P., Claesson-Welsh L., Siegbahn A. Activation of the human c-kit product by ligand-induced dimerization mediates circular acting reorganization and chemotaxis // EMBO J. 1991. - Vol. 10. - P. 4121-4128.

31. Boarder M.R., Weisman G.A., Turner J.T., Wilkinson G.F. G-protein coupled purinoreceptors: from molecular biology to functional responses // Trends Pharmacol. Sci.- 1995. -Vol. 16.-P. 133-139.

32. Boarder M.R., Webb T.E. P2Y receptors: Structure and Function // Handbook of Experimental Pharmacology, Vol. 151(1). Purinergic and Pyrimidinergic Signaling / Eds. M.P. Abbracchio M.P., Williams M. Berlin: Springer, 2001. - P. 66

33. Boettge K., Jaeger K.H., Mettenzwei H. Das adenylsauresystem. Neuere ergebnisse und probleme //Arzneim. Forsch. 1957. - Vol. 7. - P. 24-59.

34. Bouman H.J., van Werkum J.W., Rudez G. et al. The influense of variation un the P2Y12 receptor gene on in vitro platelet inhibition with the direct P2Y12 antagonist cangrelor // Thromb. Haemost. 2010. - Vol. 103. - P. 379-386.

35. Bours M.J., Daqnelie P.C., Giuliani A.L. P2 receptors and extracellular ATP: a novel homeostatic pathway in inflammation // Front Biosci (Schol Ed). 2011. -Vol. 3.-P. 1443-1456.

36. Boyer J.L., Downes C. P., Harden T. K. Kinetics of activation of phosphor-lipase C by P2Y-purinergic receptor agonists and guanine nucleotides // J. Bion. Chem. 1989. - Vol. 264. - P. 884 - 890.

37. Boyum A. Separation of leucocytes from blood and bone marrow // Scand. S. Clin. Lob. Invest. 1968. - Vol. 1. - P. 90 - 109.

38. Briddell R.A., Broudy V.C., Bruno E. et al. Further phenotypic characterization and isolation of human hematopoietic progenitor cells using a monoclonal antibody to the c-kit receptor // Blood. 1992. - Vol. 79. - P. 3159-3167.

39. Bruner G., Murphy S. ATP-evoked arachidonic acid mobilization in asrtrocytes is via a P2Y-purinoergic receptor // J. Neurochem. 1990. - Vol. 55. - P. 1569-1575.

40. Burnstock G. Evolution of the autonomic innervation of visceral and cardiovascular systems in vertebrates // Pharmacol. Rev. 1969. - Vol. 21. - P. 247- 324.

41. Burnstock G. Purinergic nerves // Pharmacol. Rev. 1972. - Vol. 24. - P. 509581.

42. Burnstock G. A unifing purinrgic hypothesis for the initiation of pain // Lancet. 1996a. - Vol. 347. - P. 1604-1605.

43. Burnstock G. Purinoreceptros: ontogeny and phylogeny // Drug. Dev. Res. -1996b. Vol. 39. - P. 204-242.

44. Burnstock G., King B.F. Nombering of cloned P2 purinoreceptors // Drug Rev. Res. 1996c. - Vol. 38. - P. 67-71.

45. Burnstock G. Purine-mediated signaling in pain and visceral perception I I Trends in Pharmacological Science. 2001. - Vol. 22. - P. 182-188.

46. Burnstock G. Cotransmission // Curren opinion in pharmacology. 2004. -Vol. 4.-P. 47-52.

47. Burnstock G. Pathophysiology and therapeutic potential of purinergic signaling // Pharmacol. Rev. 2006a. - Vol. 58. - P. 58-86.

48. Burnstock G. Purinergic signaling an overview // Novartis Found Symp. — 2006b. - Vol*. 276. - P. 26-48.

49. Burnstock G. Purine and pyrimidine receptors // Cell. Mol. Life Sci. 2007. -Vol. 64.-P. 1471-1483.

50. Burnstock G. Purines, purinoreceptors molecular biology, overview // Encyclopedia of Neuroscience. - 4td ed. / Ed.L.R. Squire. - Oxford: Academic Press, 2009.-P. 1253-1262.

51. Chiozzi P., Sans J.M., Ferrari D. et al. Sponaneous cell fusion in macrophage cultures expressing high levels of the P2Z/P2X7 receptors // J. Cell Biol. 1997. -Vol. 138.-P. 697-706.

52. Clemens M. J. PKR a protein kinase regulated by double - stranded RNA // Int. J. Biochem. Cell Biol. - 1997. - Vol. 29. - P. 945-949.

53. Clifford E.E., Martin K.A., Dalai P. et al. Stage-specific expression of P2Y receptors, ecto-apyrase, and ecto-5-nucleotidase in myeloid leukocytes // Am. J. Physiol. 1997. - Vol. 273. - P. 973-987.

54. Cohn Z.A., Parks E. The regulation of pinocytosis in mouse macrophages. 3. The induction of vesicle formation by nucleoside and nucleotides // J. Exp. Med. -1967. Vol. 125 (3). - P. 457-466.

55. Communi D., Janssens R., Robaye B. et al. Rapid up-regulation of P2Y messenger during granulocytic differentiation of HL-60 cells // FEBS Lett. 2000. -Vol. 475.-P.39-42.

56. Conigrave A.D., Lee J.Y., van der Weyden L. et al. Pharmacological profile of a novel cyclic AMP-linked P2 receptor on undifferentiated HL-60 leukemia cells //

57. Br. J. Pharmacol. 1998. - Vol. 124. - P. 1580-1585.

58. Conigrave A. D., Fernando K. C., Gu B. et al. P2Y(11) receptor expression by human lymphocytes: evidence for two cAMP-linked purinoceptors // Eur. J. Pharmacol. -2001. Vol. 426.-P. 157-163.

59. Cotrina M.L., Jane H.-C. Lin., Alexandre A.-R. et al. Connexins regulate calcium signaling by controlling ATP release // Proc. Natl. Acad, Sci. USA 1998. -Vol. 95.-P. 15735-15740.

60. Coutinho-Silva R., Persechini P.M., Bisaggio R.D., Perfettini J.L. P2Z/P2X7 receptor-depended apoptosis of dendritic cells //Am. J. Physiol. 1999. - Vol. 276. -P. 1139-1147.

61. Cowen D.S., Lazarus H.M., Shurin S.B. et al. Extracellular adenosine triphosphate activates calcium mobilization in human phagocytic leykocytes and neutrophil/monocyte progenitor cells // J. Clin. Invest. 1989. - Vol. 83. - P. 16511660.

62. Cronstein B.N., Rosenstein E.D., Ktamer S.B. et al. Adenosine: a physiologic modulator of superoxide anion generation by human neutrophils. Adenosine acts via an A2 receptor on human neutrophils // J. Immunol. 1985. — Vol. 135. - P. 13661371.

63. Cronstein B.N., Levin R.I., Philips M:R. et al. Neutrophil adherence to endothelium is enchanced via adenosine Al receptors and inhibited via adenosine A2 receptors // J. Immunol. 1992. - Vol. 148. - P. 2201-2206.

64. Cronstein B.N., Van de Stouwe M., Druska L. et al. Nonsteroidal antiinflammatory agents inhibit stimulated neutrophil adhesion to endothelium: adenosine depended and independed mechanisms // Inflam. — 1994. Vol. 18. - P. 323-355.

65. Cronstein B.N., Maarten G.B., Becker B.F. Purinergic mechanisms in inflammation // Drug. Developer. Res. 1996. - Vol. 39. - P. 426-435.

66. Dantuma E., Merchant S., Suqaya K. Stem cells for the treatment of neurodegenerative diseases // Stem cell Res. Ther. -2011. Vol. 10. -P. 37-42.

67. Davey H. Flow cytometry for clinical microbiology / CLI. 2004. - Vol. 2. -P. 12-15.

68. De Santis M., De Luca C., Mappa I. et al. In-utero stem cell transplantation: clinical use and therapeutic potential // Minerva Ginecol. 2011. - Vol. 63. - P. 387398.

69. Di Virgilio F., Pizzo P., Zanovello P., Gollavo D. Exracellular ATP as a possible mediator of cell-mediated cutoxocoty // Immunol. Today. 1990. - Vol. 11'. - P. 274277.

70. Di Virgilio F., Chiozzi P., Ferrari D. et al. Nucleotide receptors: an emerging' family of regulatory molecules in blood cells // Blood. 2001. - Vol. 97. - P. 587600.

71. Di Virgilio F., Wiley J.S. The P2X7-receptor of CLL lymphocytes a molecule with a split personality // Lancet. - 2002. - Vol. 360. - P. 1898-1899.

72. Dolci S., Williams D.E., Ernst M.K. Requirement for mast cell growth factor for primordial germ cell survival in culture // Nature. 1991. - Vol. 352. - P. 809811.

73. Droin N., Guery L., Benikhlef N., Solary E. Targeting apoptosis protein in hematological malignancies // Cancer Lett. 2011. - Vol.87.- 23-34.

74. Drury A.N., Szent-Guorgy A. The physiological activity of adenine compounds with special reference to their effects upon the mammalian heart // J. Physiol. 1929. -Vol. 68.-P. 213-237.

75. Dubyak G.R., Cowen D.S. Activation of inositol phospholipidspecific phospholipase C by P2-purinergic receptors in human phagocytic leukocytes // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1990. - Vol. 603. - P. 227-245.

76. Dubyak G.R., El-Moatassim C. Signal transduction via P2-purinoreceptors for external ATP and other nucleotides // Am. J. Physiol. 1993. - Vol. 265. - P. 577606.

77. Dubyak G.R., Clifford E.E., Humpheys B.D. et al. Expression of multiple ATP receptor subtypes during the differentiation and inflammatory activation of myeloidleukocytes // Drug. Dev. Res. 1996. - Vol. 39 - P. 269-278.

78. Dubyak G.R., Abbraccho M.P., Williams M. Role of P2 receptors in the Immune system // Handbook of experimental pharmacology. Purinergic and pyrimidinergic signaling. -2001. Vol. 151. - P. 323-354.

79. Edwards F.A., Gibb A J. ATP- a fast neurotransmitter // fEBS Lett. 1993. -Vol. 325.-P. 86-89.

80. Elliott M.R., Chekeni F.B., Trampont P.C. et al. Nucleosides released by apoptotic cells ast as a find-me signal to promota phagocytic clearance // Nature. -2009.-Vol. 461.-P. 282-286.

81. Engelhardt W.A. Enzymes as structural element of physiological mechanisms // Proc. Int. Symp. Enzyme Chem.- 1957. Vol. 2. - P. 163-166.

82. Escribano L., Ocqueteau M., Almeida J. Expression of the c-kit (CD 117) molecule in normal amd malignant hematopoiesis // Leuk. Lymphoma. — 1998. Vol. 30.-P. 459-466.

83. Falzoni S., Munerati M., Ferrari D., Spisani S. The purinergic P2z receptor of human macrophage cells. Characterisation and possible physiological role // J. Clin. Invest. 1995. - Vol. 95. - P. 1207-1216.

84. Ferrari D., Munerati M., Melchiorri L. et al. Responses to extracellular ATP of lymphoblastoid cell lines from Duchenne muscular dystrophy patients // Mol. Pharmacol. 1994. - Vol. 267. - P. 886-892.

85. Ferrari D., Cgiozzi P., Falzoni S., Dal Susino M. Extracellular ATP triggers IL-1 beta release by activating the purinergic P2Z receptor of human macrophages // J. Immunol.-1997a.-Vol. 159.-P. 1451-1458.

86. Ferrari D., Chiozzi P., Falzoni S., Hanau S. Purinergic modulation of interleukin-1P release from microglial cells stimulated with bacterial endotoxin // J. Exp. Med. 1997. - Vol. 185. - P. 579-582.

87. Forrester T. Release ATP from the heart. Presentation of release model using human erythrocyte //Ann. N. Y. Acad. Sci. 1990. -Vol. 603. - P. 335-352.

88. Fredholm B.B., Ijzerman A.P., Jacobson K.A. et al. Intrenationa union ofpharmacology. XXV. Nomenclature and classification of adenosine receptors // Pharmacol. Rev. 2001. -Vol. 53. - P. 527-552.

89. Fu N., Drinnenberg I., Kelso J., Wu J.-R. et al. Comparison of protein and mRNA expression evolution in human and chimpanzees // Plosone. 2007. -Vol. 2. — P. 216-221.

90. Furness J.B., Morris J.L., Gibbins I.L., Costa M.Chemical cording of neurons and plurichemical transmission // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1989. - Vol. 29. — P. 289-306.

91. Gachet C. The platelet P2 receptors as molecular targets for old and. new antiplatelet drugs // Pharmacol. Ther. -2005. Vol. 108. -P. 180-192.

92. Gacher C. P2 receptors, platelet function and pharmacological implications // Thromb. Haemost.- 2008. -Vol. 99. P. 466-472.

93. Gaddum J.H., Holtz P. The localization of the action of drugs on the pulmonary vessels of dogs and cats // J. Pharmacol. 1933. - Vol. 77. - P. 139-158.

94. Galli S.J. Allergy // Curr. Biol.- 2000. Vol. 10. - P. 93-95.

95. Gargett C.E., Cornish J.E., Wiley J.S. ATP, a partial agonist for the P2Z receptor of human lymphocytes // Br. J. Pharmacol. 1997. - Vol. 122: -P. 911-917.

96. Gever J.R., Cockayne D.A., Dillon M.P. et al. Pharmacology of P2X-channels // Pflugers Arch. 2006. - Vol. 452. - P. 513-537.

97. Gillespie J.H. The biological significance ot the linkages in adenosine triphophoric acid // J. Phisiol. 1993. - Vol. 80. - P. 345-349.

98. Gilman A.G. G protein: transducers of receptor-generated signals // Annu. Rev. Biochem. 1987. - Vol. 56. - P. 615-649.

99. Godin I., Deed R., Cooke J. Effects of the steel gene product on mouse primordial germ cell survival in culture // Nature. -1991. -V. 352. P. 807-809.

100. Gordon J.L. Extracellular ATP: effects, sources and fate // Biochem. J. 1986. -Vol. 233.-P. 309-319.

101. Gotts J.E., Matthay M.A. Mesenchymal stem cells and acute lung injury // Crit. Care Clin.-2011.-Vol. 27.-P. 719-733.

102. Grassi E Purinergic control of neutrophil activation // J. Mol. Cell. Biol.— 2010.-Vol. 2.-P. 176-177.

103. Gu B.J., Zhang W., Worthington R.A. et al. A Glu-496 to Ala polymorphism leads to loss of function of the human P2X7 receptor // J. Biol. Chem. 2001. - Vol. 276.-P. 11135-11142.

104. Gudmundsson K.O., Thorsteinsson L., Siqurjonsson O.E. Gene expression analysis of hemapopoietic progenitor cells identifies Dlg7 as a potential stem cell gene // Stem Cells. 1997. - Vol. 25. - P. 1498-1506.

105. Gunetti M., Noqhero A., Molla F. et al. Ex vivo-expanded bone marrow CD34(+) for acute myocardial infarction treatment: in vitro and in vivo studies // Cytotherapy.- 2011. Vol. 15. - P. 18-25.

106. Gutmann H.R., Chow Y.M., Vessella R.L. et al. The kinetic Properties of the ecto-ATPase of human peripheral^ blood lympocytes and of chronic lymphatic leukemia cells //Blood. 1983. - Vol. 62. - P. 1041-1046.

107. Hechler B., Cattaneo M., Gachet C. The P2-receptors in platelet function // Semin. Thromb. Hemost. 2005. -Vol. 31.-P. 150-161.

108. Hoffbrand A.V., Moss P.A.H., Pettit J.E. Essenttial Haematology. / Wiley-Blackwell, 2006.-P. 1-3.

109. Huang E., Nocka K., Beier D.R. et al. The hematopoietic growth factor KL is encoded at the SI locus and is the ligand of the c-kit receptors, the gene product ot the W locus // Cell. 1990. - Vol. 63. - P. 225-233.

110. Humphreys B.D., Rice J., Kertesy S.B., Dubyak G.R. Stress-activated protein kinase/JNK activation and apoptotic induction by the macrophage P2X7 nucleotide receptor// J. Biol. Chem. 2000. - Vol. 275. - P. 26792-26798.

111. Jin J., Dasari V.R., Sistare F.D., Kunapuli S.P. Distribution of P2Y-receptorssubtypes on hematopoietic cells // Br. J. Pharmacol. 1998. - Vol. 123. - P. 789-794.

112. Jiang Q., Mak D., Devidas S. et al. Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator-associated ATP release is controllled by a chloride sensor // The J. of Cell Biol. 1998. - Vol. 143. - P. 645-657.

113. Jin K., Mao X.O., Sun Y. et al. A Stem cell factor stimulates neurogenesis in vitro and in vivo // J. Clin. Invest. 2002. - V. 110. - P. 311-319.

114. Kapur R., Majumdar M., Xiao X. et al. Signaling through the interaction of membrane-restricted stem> cell factor and c-Kit receptor tyrosine kinase: Genetic evidence for a differential role in erythropoiesis // J. Blood.-1998.-V. 91.-P. 879-889.

115. Katsuragi T., Tokunaga T., Ogba M. et al. Implication of ATP release from atrial but not papillary muscle segments of quinea pig by- isoproterenol and forskolin. //Life Sei. 1993. - Vol. 53. - P. 961-967.

116. Keller J.R., Ortiz M., Ruscetti F.W. Steel factor (c-kit ligand) promotes the survival of hematopoietic stem/progenitor cells in the absence of cell division // Blood.- 1995-Vol. 86-P. 1757-1764.

117. Kennerdell J. R., Carthew R. W. Use of dsRNA-mediated genetic inter-ference to demonstrate that frizzled and frizzled 2 act in the wingless pathway // Cell. 1998 -Vol. 95-P. 1017-1026.

118. Keshet E., Lyman S. D:, Williams D. E. Steel Factor and c-kit Regulate CellMatrix Adhesion // J. Blood. 1994. - Vol. 183. - P. 1033-1038.

119. Klein C., Grahnert A., Abdelrahman A. et al. Extracellular NAD (+) induces a rise in Ca 2+ (I) in activated human monocytes via of P2Y (1) and P2Y (11) receptors // Cell Calcium 2009. - Vol. 46 (4). - P. 263-272.

120. Köles L., Fürst S., Illes P. Pyrine ionotropic (P2X) receptors // Cur. Pharm. Des. 2007. - Vol. 13. - P. 2368-2384.

121. Kraj M., Poglod R., Kopec-Szlezak J. et al. C-ki receptor (CD117) expression on plasma cells in monoclonal gammopathies // Leuk. Lymphoma — 2004. Vol. 45. -P. 2281-2289.

122. Kunapuli S.P., Dorsam R.T., Murugappan S., Ding Z. Clopidogrel: Interactionswith the P2Y12 Receptor and Clinical Relevance // Cur. Pharm. Des. 2003. - Vol. 9.-P. 2303-2316.

123. Kukulski R, Ben Yebdri R, Lecka J., Kauffenstein G. Extracellular ATP and P2-receptors are required for IL-8 to induce neutrophil migration // Cytolkine. -2009.-Vol. 46 (2)-P. 166- 170.

124. Lai R.C., Chen T.S., Lim S.K. Mesenchymal stem cell exosome: a novel stem cell-based therapy for cardiovascular disease // Regen Med. — 2001. Vol. 6. — P. 481-492.

125. Leal D.B., Streher C.A., Neu T.N. et al. Characterization of NTPDase (NTPDasel; ecto-apyrase; ecto-diphosphohydrolase; CD39; EC 3.6.1.5) activity in human lymphocytes //Biochim. Biophys. Acta. 2005. - Vol. 1721 - P. 9-15.

126. Lee D.H., Park K. S., Kong I. D. et al. Expression of P2-receptors in human B cells and Epstein-Barr virus-transformed lymphoblastoid cell lines // BMC Immunol. -2006.-Vol. 7.-P. 22-34.

127. Lemoli R.M., Ferrari D., Fogli M. et al. Extracellular nucleotides are potent stimulators of human hematopoietic stem cells in vitro and in vivo // Blood. 2004. -Vol. 104.-P. 1662-1670.

128. Li Z., Liang D., Chen L. Potential therapeutic target for ATP-gated P2X-receptor ion channels //Assay Drug Dev. Technol. 2008. - Vol. 6. - P. 277-284.

129. Limdvall O., Kokaia Z. Stem cell research in stroke: how far from the clinic? // Stroke.-2011. Vol. 42-P. 2369-2375.

130. Lipmann F. Metabolic generation and utilization of phosphate bond energy // Adv. Enzymol. 1941. - Vol. 1 - P. 99-162.

131. Lohmann J.U., Endl I., Bosch T. C. Silencing of Developmental Genes in Hydra //Dev. Biol. 1999. - Vol. 214. - P. 211-214.

132. Lorenze A., Schwabe U. Pl-receptor // Handbook of pharmacology: purinergic and pyrimidinergic signaling / Eds. Abbracchio M.P., Williams M. Berlin; Heidelberg: Springer-Verlag, 2001. - Vol. 151 (1). -P. 19-45.

133. Mallardo M., Poltroieri P., D'Urso O.F. Non-protein coding RNA biomarkersand differential expression in cancers: a review // J. Exp. Clin. Cancer Res. 2008. — Vol. 27.-P. 19-31.

134. Mancino G., Placido R., Di Virgilio R P2X7 receptors and apoptosis in tuberculosis infection // J. Biol. Requl. Homeost. Agents 2001. - Vol. 15. - P. 286293.

135. Marcus A. J., Broekman M.J., Drosopoulos J.H. et al. Metabolic control of excessive extracellular nucleotide accumulation by CD39/ecto-nucleotidase-l: implication for ischemic vascular diseases // J. Pharmacol. Exp. Ther. 2003. - Vol. 305.-P. 9-16.

136. Marcus A.J., Broekman M.J., Drosopoulos J.H. et al. Role of CD39 (NTPase-1) in thromboregulation, cerebroprotection, and cardioprotection // Semin. Thromb. Hemost. 2005. - Vol. 31. - P. 234-246.

137. Marquardt D.L., Gruber H.E., Wasserman S.I. Adenosine release from stimulated cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1984. Vol. 81. - P. 6192-6196.

138. Markwardy F., Lohn M., Bohm T., Klapperstuck M. Purinoreceptor-operated cationic channels in human B lymphocytes // BMC Immunol. 1997. - Vol. 498. — P. 143-151.

139. Matsui Y., Toksoz D., Nishikawa S. Effect of Steel factor and leukaemia inhibitory factor on murine primordial germ cells in culture // Nature. 1991. - Vol. 353.-P. 750-752.

140. Matsumoto T. Propress and perspective in bone research // Nichon Rinsho.— 2011.-Vol. 69- P. 1175-1180.

141. Meghji P. Storage, release, uptake, and inactivation of purines // Drug Dev. Res. 1993 - Vol. 28 - P. 214-219.

142. Miller J.S., Cervenka T., Lund J., Okazaki IJ. et al. Purine metabolites suppress proliferation of human NK cells through a lineage-specific purine receptor // The J. of Immunology. 1999. - Vol. 162. - P. 7376-7382.

143. Mimeault M., Hauke R., Batra S.K. Stem cells: a revolution in therapeutics — recent advances in stem cell biology and their therapeutic applications in regenerativemedicine and cancer therapies // Nature. 2007. - Vol. 82. - P. 252-260.

144. Mitchell C.H., Carre D.A., McGlinn A.M., Stone R.A. A release mechanisms for stored ATP in ocular ciliary epithelial cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. -Vol. 95.-P. 7174-7178.

145. Moreschi I., Bruzzone S., Nicholas R.A. et al. Extracellular NAD= is an agonist ot the human P2Y11 purinergic receptor in human granulocytes // J. Biol. Chem.- 2006. -Vol. 281.-P. 31319-31429.

146. Ngo H., Tschudi C., Gull K., Ullu E. Double-stranded RNA induces mRNA degradation-in Trypanosoma brucei // Proc. Natl. Acad. Sci. U S A 95. 1998. - Vol. 95.-P. 14687-14692.

147. Nocka K., Buck J., Levi E., Besmer P. Candidate Uganda for the c-kit transmembrane kinase receptor: KL, a fibroblast derived growth factor stimulates mast cells and erythroid'progenitors // J. EMBO. 1990. - Vol. 10. - P. 3287-3294.

148. Oshimi Y., Miyazaki S., Oda S. ATP-induced Ca2 response mediated by P2U and P2Y purinoceptors in human macrophages: signalling from dying cells to macrophages // Immunology. 1999. - Vol. 98. - P. 220-227.

149. Palmer T.M., Trevethick M.A. Supression of inflammatory and immune responses by the A2A-adenosine receptor: an introduction // Br. J. Pharmacol'. 2008. -Vol. 153.-P. 27-34.

150. Pearson J.D., Gordon J.L. P2-purinoreceptors in the blood vessel wall // Biochem. Pharmacol. 1989. - Vol. 38. - P. 4157-4163.

151. Pearson J.D., Coade S. B., Cusack N. J. Characterisation of ecto-nucleotidases on vascular smooth-muscle cells // Biochem. J. 1985. - Vol. 230. - P. 503-507.

152. Podesta M., Zocchi E., Pitto A.et al. Extracellular cyclic ADP-ribose increases intracellular free calcium concentration and stimulates proliferation of human hemopoietic progenitors // Faseb. J. 2000. - Vol. 14. - P. 680-690.

153. Ramamurthi A., Robson S.C., Lewis R.S. Effects of nitric oxide and soluble nucleoside triphosphate diphosphohydrolasw (NTPDase) on inhibition of platelet deposition in vitro // Thromb. Res. 2001. - Vol. 102. - P. 331-341.

154. Richards F.A. The effect of adenylic acid and adenosine on the human heart and blood vessels//J. Physiol. 1934.-Vol. 81.-P. 10.

155. Rossi L., Manfredini R., Bertollini F. et al. The extracellular nucleotide UTP is a potent inducer of hematopoietic stem cell migration // Blood. 2007. - Vol. 109. -P. 533-542.

156. Sak K., Boeynaems J-M., Everaus H. Involvement of P2Y-receptors in the differentiation of haematopoietic cells // J. of Leukocyte Biology. 2003. -Vol. 73 . -p; 442-447.

157. Sanchez Alvarado A., Newmark P.A. Double-stranded RNA specifi-cally disrupts gene expression during planarian regeneration // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. -Vol. 96. - P. 5049-5054.

158. Segel G.B., Ryan D.H:, Lichtman M.A. Ecto-nucleotide triphosphatese activity oh human lymphocyres: studies of normal and CLL lymphocytes // Journal of cellular physiol. 1985. - Vol. 124. - P. 424-432.

159. Shinozuka K., Kitagawa S., Kunitomo M. et al. Release of endogenous AYP from caudal artery from rats with arteriosclerosis // Eur. J. Pharmacol. 1994. — Vol. 292.-P. 115-118.

160. Simmons D.L., Satterthwaite A.B., Tenen D.G. et al. Molecular cloning of cDNA encoding CD34, a sialomucin of human hematopoietic stem cells // The J. of Immunol. 1992. - Vol. 148. - P. 267-271.

161. Simmons P.J., Aylett G.W., Niutta S. et al. c-kit is expressed by primitivehuman hematopoietic cells that give rise to colony-forming cells in stroma-dejuendent or cytokine-supplemented culture // Exp. Hematol- 1994. Vol. 22. - P. 157-165.

162. Sluyter R., Barden J.A., Wiley J.S. Detection of P2X purinergic receptors on human B lymphocytes // Cell Tissue Res. 2001. - Vol. 304. - P. 231-236.

163. Sogo S., Inaba M., Ogata H. et al. Induction of c-kit molecules on human 0034^/0-^ <low cells: evidence for CD34+/ c-kit <low cells as primitive hematopoietic stem cells // Stem Cells. 1997. - Vol. 15. - P. 420-429.

164. Solet D.J., Zacharski L.R., Plehn J.F. The role of adenosine 5'-diphosphate receptor blockade in patients with cardiovascular disease // Am. J. Med. 2,001. -Vol. 111.-P. 45-53.

165. Somers G.R., Hammet F.M., Trute L. et al. Expression of the P2Y6-purinergic receptors in human T cells infiltraing inflammatory bowel disease // Lab. Incvest. -1998.-Vol. 78.-P. 1375-1383.

166. Susumu I. Pluripotent hemopoietic stem cells in mice and humans // P.S.E.B.M. -2000. -Vol. 223. P. 149-155.

167. Suzuki H., Takei M., Nakahata T., Fukamachi H. Inhibitory effect of adenosine on degranulation of human cultered mast cells upon cross-linking of Fc epsilon RI // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1998. -Vol. 242. - P. 697-702.

168. Tahrani A.A., Bailey C.J., Del Prato S., Barnett A.H. Management of "type 2 diabetes: new and future developments in treatment // Lancet 2011. — Vol. 378. — P. 182-197.

169. Trams E.G. On the evolution of neurochemical transmission // Differenta."ti on.1981.-Vol. 19.-P. 123-133.

170. Tsukimoto M., Maehata M., Harada H. et al. Involvement of chloride in apoptotic cell death induced by activation of Atp-sensitive P2X7 purinoreceptors // J.Biol.Chem. 2005. - Vol. 280. - P. 2653-2658.

171. Vial C., Hecher B., Leon C. et al. Presence of P2X1 purinoreceptors in human platelets and megakarioblastic cell lines patients // Thromb. Haemost. -1997. Vol. 78.-P. 1500-1504.

172. Virgilio C., Robertson G., Surprenant A., North R.A. Trinitrophenyl-substituted nucleotides are potent antagonists selective for P2X1, P2X3 and heteromeric P2X2/3 receptors // Mol. Pharmacol. 1998. - Vol. 53. - P. 969-973.

173. Volarevic V., Arsenijevic N., Lukic M.L., Stojkovic M. Concise review:mesenchymal stem cell treatment of the complications of diabetes mellitus // Stem Cell.-2011.-Vol. 29.-P. 5-10.

174. Wang L., Ostberq O., Wihborq A.K., Broqren H. Quantification of ADP and ATP receptor exoression in human platelet // Mol. Pharmacol. 2003. - Vol. 1. - P. 330-336.

175. Wang L., Jacobsen S.E., Bentsson A., Erlinge D. P2-receptor mRNA expression profiles in human lymphocytes, monocytes and CD34+cells // BMC Immunology. 2004. - Vol. 5. - P. 16-23.

176. Wang L., Olivecrona G., Goberg M. et al. ADP acting on P2Y13 receptors is anegative feedback pathway for ATP release from human red blood cells // Circ. Res. -2005.-Vol. 96.-P. 189-196.

177. White T.D. Characteristics of neuronal release of ATP // Biol. Psychiatry. -1984.-Vol. 8.-P. 487-493.

178. Wiley J.S., Dubyak G.R. Extracellular adenosine triphosphate increases cation permeability of chronic lymphocytic leukemic lymphocytes // Blood. 1989. -Vol. 73.-P. 1316-1323.

179. Wiley J.S., Gargett C.E., Zhang W. Parial agonists and antagonists reveal a second permeability state of human phicyte P2Z/P2X7 channel // Am. J. Physiol. 1998.-Vol. 275.-P. 1224-1231.

180. Yamada M., Hamamori Y., Akita H. Yokoyama M. P2-Purinoreceptoers activation stimulates phosphoinositide hydrolysis and inhibits accumulation of cAMP in cultured ventricular myocytes // Circ. Res. 1992. - Vol. 70. - P. 477-485.

181. Ye Z.J., Gulcicek E., Stone K. et al. Complex interactionin EML cell stimulation by stem cell factor and IL-3 // Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 2011. -Vol. 108.-P. 4882-4887.

182. Yee N.S., Paek I., Besmer P. Role of kit-ligand in proliferation and suppression of apoptosis in mast cells: basis for radiosensitivity of white spotting and steel mutant mice // J. Exp. Med. 1994. -Vol. 179. - P. 1777-1787.

183. Yip L., Woehrle T., Corriden R. et al. Autocrine regulation ot T-cell activation by ATP release and P2X7 receptors // FASEB J. 2009. -Vol. 23. - P. 1685-1693.

184. Zanovello P., Bronte V., Rosato A. et al. Responses of mouse lymphocytes to extracellular ATP. II. Extracellular ATP causes cell type-dependent lysis and DNA fragmentation // J. Immunol. 1990. -Vol. 145. - P. 1545-1550.

185. Zezula J., Freissmuth M. The A2A-adenozine receptor: a GPCR with unique features // Br. J. Pharmacol. 2008. - Vol. 152. - P. 184-190.

186. Zheng L.M., Zychlinsky A., Liu C.C., Ojcius D.M. et al. Extracellular ATP as a trigger for apoptosis or programmed cell death // J. Cell. Biol. 1991. - Vol. 112. - P. 279-288.

187. Zimmermann H. Signaling via ATP in the nervous system // Trends Neurosci. -1994. Vol. 17. - P. 420-426.

188. Zimmermann H. Ecto-nucleotidases // Handbook of pharmacology: purinergic and pyrimidinergic signaling / Eds. Abbracchio M.P., Williams M. Berlin; Heidelberg: springer-Verlag, 2001. - Vol. 151 (I). - P. 209-250.

189. Ziganshin A.U., Hoyle C.H.V., Burnstock G. Ecto-enzymes and metabolism of extracellular ATP//Drug. Dev. Res. 1994. - Vol. 32. - P. 134-146.

190. Ziganshina L.E., Ziganshin A.U., Hoyle C.H.V., Burnstock G. Acute oedema formation induced by ATP: Re-evaluation of the mechanisms involved // Inflamm. Res. 1996. - Vol. 45. - P. 96-102.

191. Zsebo K.M., Wypych J., McNiece I.K. Identification, purification, and biological characterization of haematopoietic stem cell factor from buffalo rat liver-conditioned medium // J. Cell. 1990. -Vol. 63. - P. 195-201.

192. Zulewski H. Hypothyroidism // Ther Umsch. 2011. -Vol. 68. - P. 315-320.

Информация о работе

Казакова, Рената Рувшановна
кандидата биологических наук
Казань, 2011
ВАК 03.03.04

Диссертация

Исследование Р2-рецепторов и активности экто-нуклеотидаз гемопоэтических клеток человека - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы