Исследование механизмов действия УФ-света и различных препаратов α-интерферона на структурно-функциональное состояние компонентов T- и B- клеточного звена иммунитета человека

Вдовина, Вера Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Исследование механизмов действия УФ-света и различных препаратов α-интерферона на структурно-функциональное состояние компонентов T- и B- клеточного звена иммунитета человека
ВАК РФ 03.01.02, Биофизика

Автореферат диссертации по теме "Исследование механизмов действия УФ-света и различных препаратов α-интерферона на структурно-функциональное состояние компонентов T- и B- клеточного звена иммунитета человека"

)

На правах рукописи

Вдовина Вера Александровна

ИССЛЕДОВАНИЕ МЕХАНИЗМОВ ДЕЙСТВИЯ УФ СВЕТА И РАЗЛИЧНЫХ ПРЕПАРАТОВ а-ИНТЕРФЕРОНА НА СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ КОМПОНЕНТОВ Т И В-КЛЕТОЧНОГО ЗВЕНА ИММУНИТЕТА ЧЕЛОВЕКА

03.01.02. - Биофизика

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 7 ппЗ 2377

Воронеж - 2010

4843475

Работа выполнена в Воронежском государственном университете

Научный руководитель доктор биологических наук,

профессор Артюхов Валерий Григорьевич

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор Попова Татьяна Николаевна

кандидат биологических наук, доцент Дмитриев Евгений Владиславович

Ведущая организация: Московский государственный университет

им. М.В. Ломоносова

Защита состоится 31 января 2011 года в 14:00 на заседании диссертационного совета Д 212.038.03 при Воронежском государственном университете по адресу: 394006 Воронеж, Университетская пл., 1, биолого-почвенный факультет, ауд. 59.

С диссертацией можно ознакомиться в зональной научной библиотеке Воронежского государственного университета.

Автореферат разослан«*-д декабря 2010 года

Ученый секретарь диссертационного совета

Грабович М.Ю.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.

Иммунорегуляция является одной из наиболее актуальных проблем современной фундаментальной и прикладной иммунологии, молекулярной биофизики и биофизики клетки.

Функционирование иммунной системы контролируется за счет целого ряда эндогенных и экзогенных факторов. Ключевым этапом функционирования иммунной системы является экспрессия поверхностных рецепторов, которые обеспечивают восприятие клеткой внешних сигналов. На поверхности мембран лимфоцитов в большом количестве экспрессируются молекулы рецепторного комплекса, принимающие участие в антигенраспознающей функции Т- (CD3-TCR, корецепторы CD4 и CD8) и B-лимфоцитов (костимулирующие молекулы BCR - CD19, CD20 маркеры) (A.A. Ярилин, 1999; P.M. Хаитов, 2006). Для нормального протекания иммунного ответа в организме необходима сбалансированная активность взаимодействующих иммуннорегуляторных клеток. При различных патологических состояниях (аутоиммунные и аллергические заболевания, иммунодефициты, гепатиты различного вида, злокачественные опухоли и др.) меняется поверхностный фенотип иммунокомпетентных клеток, количественный и качественный состав их субпопуляций, уровень продуцируемых цитокинов, в результате чего механизмы регуляции иммунного ответа будут нарушены (Г.Н. Дранник, 2003; Н.В. Романова и др., 2005; O.E. Чечина и др., 2008; Y.B. Sullivan et al., 2001). Так, отсутствие или незначительный уровень экспрессии функционально значимых молекул на поверхности иммуноцитов при различных патологиях ведут к ослаблению процессов передачи сигнала внутрь клетки и к снижению интенсивности иммунного ответа на попадание чужеродного антигена (Г.Н. Дранник, 2003).

Одним из возможных регуляторов процессов взаимодействия между клеточными и гуморальными факторами иммунитета является УФ-свет, который в последнее время широко применяется в клинической практике. Для коррекции нарушений в работе иммунной системы больных используется метод АУФОК-терапии (аутотрансфузии УФ-облученной крови). При проведении этого метода были установлены такие лечебные эффекты как бактерицидный, противовоспалительный, иммунокорригирующий, комплексный иммуностимулирующий (увеличение количества и активности иммунокомпетентных клеток в циркулирующей крови, стимуляция выработки иммуноглобулинов, компонентов комплемента) и др. (Е.В. Волгарева и др., 1990; Ф.Х. Кутушев и др., 1990; К.А. Самойлова, 1991; В.И. Карандашов и др., 2001).

При ретрансфузии УФ-облученной крови происходят структурно-функциональные изменения поверхности иммунокомпетентных клеток и их активация (И.М. Гамова и др., 1991).

Несмотря на большое количество экспериментальных данных, молекулярные механизмы регуляторного действия УФ-света на клеточные и гуморальные компоненты иммунной системы недостаточно хорошо изучены.

Основными модуляторами иммунной системы и факторами межклеточного взаимодействия являются цитокины, участвующие в формировании и ре-

гуляции всех звеньев иммунного ответа (неспецифическая резистентность, гуморальный и клеточный иммунитет), включая дифференцировку иммуноком-петентных клеток-предшественников, презентацию антигена, клеточную активацию и пролиферацию, экспрессию молекул адгезии (Г.И. Васильева и др., 2001; A.C. Симбирцев, 2002; В.А. Щербак и др., 2005; Е.И. Батенева и др., 2006).

В настоящее время в медицине для лечения больных с различной патологией эффективно применяется цитокинотерапия, в частности, терапия природными и генно-инженерными препаратами a-интерферона. (И. А. Васильева и др., 2003; Ф.И. Ершов, О.И. Киселев, 2005; В.А. Шмелев, 2008). Интерфероны играют важную роль в функционировании иммунной системы и являются иммуномо-дуляторами широкого спектра действия (В.П. Алферов и др., 1998; Ф.И. Ершов, О.И. Киселев, 2005; В.А. Шмелев, 2008). Несмотря на большие перспективы использования различных препаратов a-интерферона в клинической практике, необходимо решить ряд проблем, связанных с подбором терапевтических концентраций, трудностью прогнозирования и контроля реакций организма на ци-токинотерапию на ранних этапах и при длительном лечении.

С лечебной целью нередко используется совместное проведение АУФОК-и цитокинотерапии. Тем не менее, конкретные механизмы их сочетанного действия на организм человека требуют дальнейшего исследования.

В связи с вышеизложенным, представляется интересным изучение возможности регулирования иммунологических процессов как отдельным, так и комбинированным действием на компоненты иммунной системы естественных модуляторов физической и химической природы (УФ-света и а- интерферона), что позволит разработать методы направленной иммунокорекции для комплексной терапии.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось изучение структурно-функционального состояния компонентов Т- и В- клеточного звена иммунитета человека после воздействия УФ-излучения, различных препаратов a-интерферона и их сочетанного действия.

В связи с вышесказанным перед нами были поставлены следующие задачи:

1. Изучить влияние УФ-света (240-390 нм) в дозах 151, 453, 906 и 1359 Дж/мг на уровень экспрессии основных мембранных маркеров рецепторного комплекса Т- и B-лимфоцитов, образование «кэппинг»-эффекта молекул анти-генраспознающего рецепторного комплекса на поверхности Т-клеток, ИФНу-продуцирующую способность Т-клеток и антителообразуюшую способность В-лимфоцитов.

2. Исследовать действие рекомбинантного а2ь-интерферона (0,01-100 ME/мл) на уровень экспрессии рецепторного аппарата Т- и В-лимфоцитов, ИФНу-продуцирующую способность Т-клеток и антителообразуюшую способность В-лимфоцитов.

3. Изучить структурное состояние мембран лимфоцитов после воздействия УФ-света (151-1359 Дж/м2) и рекомбинантного а2Ь-интерферона (0,01-100 МЕ/мл).

4. Оценить сочетанное влияние УФ-излучения (151-1359 Дж/м2) и чело-

веческого лейкоцитарного а-интерферона (0,01-100 МЕ/мл) на уровень экспрессии CD8 и CD95 маркеров на поверхности Т-лимфоцитов крови человека.

Научная новизна. Работа является комплексным исследованием, посвященным изучению структурно-функционального состояния компонентов Т- и В-клеточного звена иммунитета человека после воздействия УФ-излучения, различных препаратов а-интерферона и их комбинированного действия.

Обнаружено, что УФ-свет в малых и средних дозах (151, 453 и 906 Дж/м2) оказывает однонаправленное (активирующее) действие на экспрессию молекул рецепторного комплекса Т- и В-лимфоцитов крови человека, а в большой дозе (1359 Дж/м2) может как повышать (CD4, CD8, CD95, CD19 и CD20 маркеры), так и снижать (CD3 комплексы) количество анализируемых молекул на поверхности их мембран.

Показано, что структурно-функциональные фотомодификации мембран Т-лимфоцитов обусловлены «кэппинг»-эффектом молекул рецепторного комплекса (CD3, CD4 и CD8 маркеров), участвующих в распознавании чужеродных антигенов.

Установлено, что изучаемые нами трансмембранные рецепторы обладают разной чувствительностью к действию рекомбинантного а2ь-интерферона.

Показаны изменения функциональной активности (цитокинпродуцирую-щей способности Т-лимфоцитов и антителообразующей способности В-лимфоцитов) иммунокомпетентных клеток крови человека после УФ-облучения и модифицикации рекомбинантным агь-интерфероном.

Впервые был изучен характер изменения уровня экспрессии CD8 и CD95 рецепторов на поверхности мембран Т-лимфоцитов крови человека в условиях комбинированного действия УФ-света и человеческого лейкоцитарного а-интерферона.

Предложены схемы возможных механизмов действия УФ-света и рекомбинантного а2ь-интерферона на структурно-функциональное состояние компонентов Т- и В-клеточного звена иммунитета человека.

Практическая значимость. Научные положения диссертационной работы расширяют и углубляют современные представления о механизмах действия физико-химических агентов (УФ-излучения и различных препаратов а-интерферона) на функционирование отдельных звеньев иммунной системы.

Данные, полученные при исследовании влияния УФ-света и а-интерферона на уровень экспрессии CD3, CD4, CD8 маркеров на поверхности Т-лимфоцитов и CD19, CD20 рецепторов на поверхности В-клеток необходимо учитывать при изучении вклада отдельных популяций и субпопуляций иммунокомпетентных клеток в процессы реализации иммунного ответа.

Результаты изучения индуцированных УФ-светом и различными препаратами а-интерферона изменений уровня экспрессии молекул рецепторного комплекса Т- и В-лимфоцитов, цитокинпродуцирующей и антителообразующей способности иммуноцитов важны для понимания тонких механизмов саморегуляции и функционирования компонентов иммунной системы в норме и при патологии.

Полученные экспериментальные данные могут способствовать разработке новых подходов к иммунокоррекции отдельных звеньев иммунного ответа

при различных патологических состояниях организма как при отдельном, так и при совместном проведении АУФОК- и цитокинотерапии.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на IV Международной конференции по иммунотерапии «Физиология и патология иммунной системы» (Москва, 2008); V Съезде Российского фотобиологического общества (Пущино, 2008); IV Международной научной конференции «Электромагнитные излучения в биологии. БИО-ЭМИ-2008» (Калуга, 2008); II Съезде физиологов СНГ (Кишинев, 2008); Всероссийской конференции с международным участием «Актуальные вопросы медицинской науки» (Ярославль, 2009); Международной научной школе для молодежи «Инновационные технологии в здравоохранении: молекулярная медицина, клеточная терапия, трансплантология, нанотехнологии» (Екатеринбург, 2009); VI Международной научно-технической конференции «Актуальные вопросы теоретической и прикладной биофизики, физики и химии. БФФХ - 2010» (Севастополь, 2010); Девятом съезде Белорусского общественного объединения фотобиологов и биофизиков (Минск, 2010); Международной научной конференции «Современные проблемы радиобиологии» (Гомель, 2010); XXI Съезде Физиологического общества им. И.П. Павлова (Калуга, 2010).

Публикации. По теме диссертационной работы имеется 22 публикации: 14 статей и 8 тезисов, в том числе 2 статьи в журналах из «Перечня ВАК РФ».

На защиту выносятся следующие положения:

1. УФ-свет (151-1359 Дж/м2) и рекомбинантный агь-интерферон (0,01100 МЕ/мл) изменяют структурное состояние лимфоцитарных мембран, уровень экспрессии молекул рецепторного комплекса Т-клеток (CD3, CD4, CD8, CD95) и В-лимфоцитов (CD 2 9, CD20), их функциональную активность.

2. УФ-свет (151-1359 Дж/м2) вызывает перераспределение молекул анти-генраспознающего рецепторного комплекса (CD3, CD4 и CD8 маркеров) на поверхности Т-лимфоцитов в виде «кэппинг»-эффекта с образованием рецептор-ных кластеров различных типов («кэп Vz», «кэп й» и амебовидный кэп).

3. Ответная реакция CD8 и CD95 маркеров Т-лимфоцитов крови человека на комбинированное воздействие УФ-света и человеческого лейкоцитарного а-интерферона зависит как от используемой дозы УФ-облучения, так и от концентрации добавленного цитокина.

4. УФ-излучение (151-1359 Дж/м2) и препараты лейкоцитарного и реком-бинантного а-интерферона (0,01-100 МЕ/мл) могут выступать в роли факторов, определяющих направление иммунного ответа по клеточному или гуморальному пути и регулирующих уровень его интенсивности.

5. Схемы возможных процессов действия УФ-света и рекомбинантного а2ь-интерферона на структурно-функциональное состояние компонентов Т- и В-клеточного звена иммунитета человека.

Структура и объем работы.

Диссертационная работа включает 154 страницы машинописного текста; состоит из «Введения», 5 глав, «Заключения», «Выводов» и «Приложения». Список литературы содержит 184 источника. Иллюстрационный материал включает 37 рисунков и 2 таблицы в основном тексте и 22 таблицы в «Приложении».

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

В главе дана краткая характеристика Т- и В-лимфоцитов крови человека, рассмотрены структурно-функциональные свойства молекул рецепторного комплекса на их поверхности, охарактеризованы фотоиндуцированные изменения компонентов иммунной системы. Представлен анализ литературных данных о классификации, физико-химических и функциональных свойствах основных модуляторов иммунной системы - интерферонов.

Глава 2. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектом исследования явились лимфоцитарные клетки, выделенные из гепаринизированной крови доноров с помощью седиментации в градиенте плотности фиколл-урографина (Д. Кэтти, 1991). Разделение лимфоцитов на Т- и В-популяции осуществляли используя колонки с синтетической ватой по методу P. Terasaki (Ю.М. Зарецкая, 1983; J. Danilovs, 1980).

Жизнеспособность лимфоидных клеток определяли в тесте с трипановым синим (Д.К. Новиков, В.И. Новикова, 1996).

Облучение суспензий лимфоцитов УФ-светом проводили в термостатируе-мой (37 °С) стеклянной кювете сверху с использованием ртутно-кварцевой лампы ДРТ-400 через светофильтр УФС-1 с полосой пропускания 240-390 нм. Интенсивность излучения составляла 151 Дж/м2 в мин на расстоянии 0,23 м до объекта. Дозы облучения клеточных суспензий - 151,453,906 и 1359 Дж/м2.

Для модификации суспензий Т- и В-лимфоцитов применяли препараты человеческого лейкоцитарного а-интерферона (Микроген, Москва), рекомби-нантного агь-интерферона (НПП «Фармаклон») в концентрациях 0,01; 0,1; 1; 10; 100 МЕ/мл и ингибитор синтеза белка - анизомицин (10 6 моль/л; «Sigma», США).

Для определения уровня экспрессии CD3 комплексов, CD4, CD8, CD95, CD 19 и CD20 маркеров на поверхности мембран нативных и модифицированных Т- и В-лимфоцитов применяли методы непрямого твердофазного иммуно-ферментного анализа (ИФА) и проточной цитофлуориметрии.

При проведении ИФА использовали соответствующие моноклональные антитела LT3, LT4, LT8, LT95, LT19 и LT20 и конъюгат к ним - козьи антитела против IgG мыши, меченные пероксидазой хрена ("Сорбент", Москва).

При использовании метода проточной цитофлуориметрии применяли моноклональные антитела LT3, LT4, LT8, меченные ФИТЦ (ООО "Сорбент", Москва) и IgG-FITC в качестве изотопического контроля.

Распределение CD3 комплексов, CD4 и CD8 рецепторов на поверхности нативных и фотомодифицированных Т-клеток исследовали методом непрямой иммунофлуоресценции с использованием моноклональных антител LT3, LT4, LT8 к CD3, CD4, CD8 рецепторам соответственно и Р(аЬ)2-фрагментов овечьих антител к IgG мыши, меченных ФИТЦ ("Сорбент", Москва).

Исследование структурного состояния лимфоцитарных мембран осуще-

ствляли при помощи флуоресцентного зонда 1-анилинонафталин-8-сульфоната.

Концентрации у-интерферона, IgM, IgG и IgA в супернатантах нативных и модифицированных лимфоцитов крови человека определяли с помощью коммерческих ИФА-тест-систем (ЗАО «Вектор-Бест»).

Статистическую обработку результатов экспериментов осуществляли с помощью прикладных программ «STATISTICА 6.0.» Достоверность различий контрольных и опытных значений сравниваемых показателей определяли по t-критерию Стьюдента при 5 % уровне значимости.

ГЛАВА 3. ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ УФ-СВЕТА НА СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ КОМПОНЕНТОВ Т- И В-КЛЕТОЧНОГО ЗВЕНА ИММУНИТЕТА ЧЕЛОВЕКА

При исследовании структурного состояния цитоплазматических мембран после воздействия УФ-излучения (151-1359 Дж/м2) на суспензию лимфоцитов было обнаружено статистически достоверное понижение интенсивности флуоресценции зонда 1,8-АНС (рис. 1) и сдвиг максимума его спектра флуоресценции в более коротковолновую область, что свидетельствует об изменении микроокружения зонда с полярного на более гидрофобное.

!фл, отн. ед. 16г 16 14. 12 10

контроль 151 453

Рис. 1. Изменение интенсивности флуоресценции зонда 1,8-АНС в лимфоцитарных мембранах после УФ-облучения

1359

Доза облучения. Дж/м

Таким образом, модификация структурного состояния лимфоцитарных мембран после воздействия УФ-света может отразиться на уровне экспрессии поверхностных рецепторов, их локализации и переориентировке в мембране, что будет вносить вклад в модуляцию функциональной активности Т- и В-клеточного звена иммунитета.

При изучении влияния УФ-света (151-1359 Дж/мг) на Т-клеточное звено иммунитета человека были получены следующие данные. Показано, что УФ-свет в малых и средних дозах (151, 453 и 906 Дж/мг) оказывает однонаправленное (активирующее) действие на экспрессию молекул рецепторного комплекса Т-лимфоцитов крови человека, а в большой дозе (1359 Дж/м2) может как повышать (CD4, CD8, CD95 маркеры), так и снижать (CD3 комплексы) количество анализируемых молекул на поверхности их мембран (рис. 2).

Использование ингибитора синтеза белка - анизомицина, позволило нам установить, что увеличение уровня экспрессии тестируемых маркеров после облучения Т-лимфоцитов УФ-светом в дозах 151-906 Дж/м2 (CD3, CD4) и 4531359 Дж/м2 (CD8, CD95) связано с синтезом данных рецепторов Т-лимфоцитами de novo (рис. 2).

D. опт. ед. 0.300,

0,250 0.200 0.150 0,100 0,050 0

D. опт ед. 0,300

i+i

контроль 151

453

906 1359 Доза облучения. Дж/м2

0,250 0,200 0,150 0,100 0,050 0

контроль 151

453

906 1359 2 Доза облучения, Дж/м

D, опт. ед. 0,400г 0,350 0,300 0,250 0,200 0,150 0,100 0,050:

D, опт. ед. 0,300,

Нп

•fi

rin

r+l

контроль 151

453

906 1359 Доза облучения, Дж/м2

0,250 0,200 0,150 0,100 0,050 0

r+T+i

rhii

-ь

■ь

контроль 151 453

906 1359 Доза облучения, Дж/м2

Рис. 2. Динамика уровня экспрессии CD3 комплексов (A), CD4 (Б), CD8 (В) и CD95 (Г) маркеров на поверхности УФ-облученных Т-лимфоцитов в присутствии анизомицина: О лимфоциты; □ лимфоциты + анизомицин

Для подтверждения результатов, полученных с помощью метода твердофазного иммуноферментного анализа, при исследовании влияния УФ-света на уровень экспрессии CD3 комплексов, CD4, CD8 рецепторов на поверхности Т-лимфоцитов крови человека нами были проведены эксперименты по изучению уровня экспрессии изучаемых маркеров на поверхности нативных и фотомоди-фицированных клеток методом проточной цитофлуориметрии.

Было выявлено, что субпопуляционный состав нативных Т-лимфоцитов включал в себя 76+4 % CD3+ клеток, 43+2 % CD4+ лимфоцитов, 23+4 % CD8+ клеток и не изменялся после воздействия на смесь иммунокомпетентных клеток УФ-света в дозах 151-1359 Дж/м2. Средняя интенсивность флуоресценции (СИФ) CD3 клеток после действия на смесь лимфоцитов УФ-света в дозах 151906 Дж/м2 повышалась, а в дозе 1359 Дж/м2 - снижалась. УФ-свет во всех используемых дозах индуцировал увеличение СИФ CD4+ Т-лимфоцитов и CD8+ клеток относительно немодифицированных образцов, причем наблюдался эффект увеличения численности клеток в субфракции с высоким уровнем экспрессии CD4 и во фракции со сниженным уровнем экспрессии CD8 под влиянием УФ-облучения (рис, 3).

Таким образом, результаты, полученные с помощью метода проточной цитометрии, позволили исключить возможность субпопуляционных сдвигов и показали более четкую динамику изменения уровня экспрессии CD3, CD4 и CD8 маркеров на поверхности Т-лимфоцитов крови человека после воздействия УФ-излучения.

CD3FITC

CD4FITC II

Рис. 3. Изменение уровня экспрессии CD3 комплексов (I), CD4 (II) и CD8 (III) маркеров на поверхности лимфоцитов крови человека, модифицированных УФ-светом (гистограммы, слева - изотип-контроль, справа - специфическая окраска): а - нативные клетки; б, в, г, д - УФ-облученные лимфоциты в дозах 151, 453, 906 и 1359 Дж/м2

соответст-

венно

CD8FITC III

Для выяснения наличия «кэппинг»-эффекта молекул антигенраспознающе-го рецепторного комплекса (CD3, CD4 и CD8 маркеров) на поверхности мембран Т-лимфоцитов после действия УФ-излучения (151-1359 Дж/м2) были проведены эксперименты с помощью иммунофлуоресцентного анализа. Типы распределения флуоресцирующих комплексов (CD3, CD4 и CD8 маркеров с FITC-меченными лигандами) на поверхности нативных и УФ-модифицированных Т-лимфоцитов представлены на рис. 4.

При изучении локализации CD3, CD4 и CD8 рецепторов на поверхности нативных Т-лимфоцитов крови человека было установлено, что 56 % CD3+-, 55 % CD4+- и 49 % СБ8+-лимфоцитов характеризовались равномерной (периферической) флуоресценцией, а 44 %, 45 % и 51 % клеток находились в состоянии кэп-пинга соответственно. УФ-свет в терапевтической дозе (151 Дж/м2) не вызывал

увеличения числа кэштрующих иммуноцигов, зато приводил к появлению клеток с амебовидным типом свечения (CD3+, CD8") и флуоресцирующих по типу «кэп У-г» (CD4+). После действия УФ-света в дозах 453, 906 и 1359Дж/м2 доля кэгаш-рующих CD3*- и CD4' клеток достоверно повышалась, также появлялись клетки с амебовидным типом свечения (CD3+) и флуоресцирующие по типу «кэп Vi» (CD4+). Увеличение числа кэппирующих CD8+-клеток наблюдалось после облучения лимфоцитов УФ-светом в дозах 453 и 906 Дж/м2.

Рис. 4. Типы распределения флуоресцирующих комплексов (CD3. CD4 и CD8 маркеров с FITC-меченными лигандами) на поверхности нативных и УФ-модифицированных Г лимфоцитов: а) периферический; б) «кэп Уг»; в) «кэп %»; г) амебовидный кэп

Таким образом, УФ-свет (151-1359 Дж/м) вызывает перераспределение CD3, CD4 и CD8 рецепторов на поверхности Т-лимфоцитов и индуцирует структурные фотомодификации их мембран, проявляющиеся в виде «кэппинг»-эффекта с образованием рецепторных кластеров различных типов («кэп Уг», «кэп %» и амебовидный кэп), что свидетельствует о способности иммуно компетентных клеток регулировать процесс функционирования антигенраспознающего рецеп-торного аппарата при экзогенных воздействиях.

При исследовании влияния УФ-излучения на цитокинпродуцирующую способность Т-лимфоцитов крови человека было установлено, что УФ-свет в дозах 151-1359 Дж/м2 оказывает иммуносупрессивное воздействие на продукцию ими у-интерферона, что, по-видимому, может быть связано с фотоинактивацией путей передачи транскрипционного сигнала в клетке (рис. 5).

При изучении влияния УФ-света на В-клеточное звено иммунитета человека было выявлено, что корецепторные молекулы CD19 и CD20 на поверхности В-лимфоцитов проявили фоторезистентность к действию УФ-света в дозах 151-906 Дж/м2 и только максимальная доза УФ-света (1359 Дж/м2) индуцировала рост уровня их экспрессии (рис. 6).

[у-ифн], пг/мл 24 22 20 18

контроль 151

¿UiL

1359

Доза облучения, Дж/м

Влияние УФ-

D, опт. ед. 0,400 0,350 0,300 0,250 0,200 0,150 0,100 0,050 0

гН

контроль 151

1359

Доза облучения, Дж/м

Рис.

излучения на синтез у-интерферона Т-лимфоцитами крови человека

Рис. 6. Изменение уровня экспрессии СБ 19 и С1320 рецепторов на поверхности В-лимфоцитов, модифицированных УФ-светом (151-1359 Дж/м2): □ СБ19; □ СБ20

Установлено, что УФ-свет (151-1359 Дж/м2) разнонаправленно влияет на антителообразующую способность В-лимфоцитов крови человека: активирует синтез ^А, 1§С и снижает уровень продукции 1§М (рис. 7).

[IgM], мг/мл 1,0, 0,8 0,6 0,4 0,2

о1

1+1

[IgG], мг/мл 60 50 40 30 20 10 0L

контроль 151 453 906 1359 Доза облучения, Дж/м

контроль 151 453 906 1359 2 Доза облучения, Дж/м

[1дА],мг/мл 3,00 2,50 2,00 1,50 1.00 0,50 0

гН

контроль 151 453 906 1359

Доза облучения, Дж/м

III

Рис. 7. Влияние УФ-излучения на синтез IgM (I), IgG (II) и IgA (III) B-лимфоцитами крови человека

Проведенные нами исследования показали, что УФ-свет (240-390 нм) в дозах 151-1359 Дж/м2 значительным образом влияет на структурно-функциональные свойства лимфоцитарных клеток: индуцирует изменение поверхностного фенотипа Т- и B-лимфоцитов, вызывая перераспределение молекул антигенраспознакмцего рецепторного комплекса (CD3, CD4 и CD8 маркеров) на поверхности Т-лимфоцитов в виде «кэшшнг»-эффекта, снижает продукцию у-интерферона Т-лимфоцитами и оказывает разнонаправленное действие на антителообразующую способность B-клеток, тем самым принимая участие в регуляции иммунных реакций Т- и B-клеточного звена иммунитета.

ГЛАВА 4. ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО а2Ь ИНТЕРФЕРОНА НА СТРУКТУРНО ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ КОМПОНЕНТОВ Т-И B-КЛЕТОЧНОГО ЗВЕНА ИММУНИТЕТА

ЧЕЛОВЕКА

При исследовании структурного состояния мембран лимфоцитов после действия на них рекомбинантного агь-интерферона (0,01-100 МЕ/мл) было обнаружено снижение интенсивности флуоресценции зонда 1,8-АНС и сдвиг его максимума флуоресценции в более коротковолновую область, что указывает на изменение микроокружения АНС с полярного на более гидрофобное и повышение микровязкости липидного бислоя мембраны (рис. 8). Модификация ли-пидного состава лимфоцитарных мембран после действия используемого цит-кина отразится на топографии поверхности их мембран.

1ф„, отн. ед. 18 16 14 12 10

гЬ

Рис. 8. Изменение интенсивности флуоресценции зонда 1,8-АНС в лимфоцитарных мембранах после действия рекомбинантного а2Ь-интерферона

контроль U,U1

10 100

[а2„-интерферон|, МЕ/мл

На рис. 9 представлены данные по влиянию рекомбинантного а2Ь-интерферона на рецепторный аппарат мембран Т-лимфоцитов крови человека.

D, опт. ад 0,250

0,200 0,150 0,100 0,050

контроль 0,01 0,1

10 100 [о^-интерферон], МЕ/мл

D, опт. ед. 0,350,

0,300 0,250 0,200 0,150 0,100 0,050 0

контроль0,01 0,1 1

То таг

[02ь-интерферон], МЕ/мл

D, опт. ед. 0,350^

0,300

0,250 0,200 0,150 0.100 0,050 0

D, опт. ед.

0,300.

rfrt

контроль0,01 0,1

0,250 0.200 0.150 0,100

0,050 0

rHfi

10 100 [а2ь-интерферон], МЕ/мл

контроль 0,01 0,1

10 100 [а2с-интерферон], МЕ/мл

Рис. 9. Динамика уровня экспрессии CD3 комплексов (A), CD4 (Б), CD8 (В) и CD95 маркеров (Г) на поверхности Т-лимфоцитов, модифицированных рекомбинантным а2Ь-интерфероном и анизомицином: □ лимфоциты; □ лимфо циты + анизомицин

Установлено, что цитокин в малых концентрациях (0,01-1 МЕ/мл) увеличивает уровень экспрессии CD3, CD4, CD8 и CD95 маркеров, а в больших концентрациях (10 и 100 МЕ/мл) - снижает уровень экспрессии CD3 и CD95 рецепторов и повышает количество CD8 антигенов на поверхности Т-лимфоцитов крови человека. Эксперименты с использованием ингибитора синтеза белков анизомицина, подтвердили, что увеличение уровня экспрессии CD3 комплексов после действия а2ь-интерферона в концентрациях 0,01-1 МЕ/мл и CD8 маркеров после действия цитокина в концентрациях 0,1-100 МЕ/мл обусловлено синтезом Т-лимфоцитами их новых молекул (рис. 9).

При изучении функциональных свойств Т-лимфоцитов крови человека, было выявлено, что а2ь-интерферон (0,01-100 МЕ/мл) увеличивает уровень спонтанной и ФГА-индуцированной продукции ими у-интерферона (рис. 10).

[Y-ифн], пг/мл 1400. 1200 1000 800 600 400 200 о

контроль 0,01 0,1

10 100 [агь-интерферон], МЕ/мл

Рис. 10. Уровень продукции у-интерферона Т-лимфоцитами крови человека, модифицированными рекомбинантным агь-интерфероном: □ уровень продукции у-ифн; □ уровень ФГА-индуцированной продукции у-интерферона

В отношении В-лимфоцитов было показано, что применение рекомби-нантного а2ь-интерферона в малых концентрациях (0,01 и 0,1 МЕ/мл) индуцирует увеличение уровня экспрессии СБ20 маркеров, а в диапазоне концентраций 0,01-100 МЕ/мл - рост уровня экспрессии СБ 19 маркеров на поверхности их мембран (рис. 11). Данный цитокин в малых концентрациях (0,01-1 МЕ/мл) индуцирует синтез ^А, в большой концентрации (100 МЕ/мл) - синтез но не оказывает влияния на синтез 1§М В-лимфоцитами крови доноров (рис. 12).

D, опт. ед. 0,400 0,350 0,300 0,250 0,200 0,150 0,100 0,050 0

гН

контроль 0,01 0,1

10 100 [с^-интерферон], Мё/мл

контроль о,01

10 100 [агь-интерферон], МЕ/мл

Рис. 11. Динамика уровня экспрессии С1) 19 и СВ20 маркеров на поверхности В-лимфоцитов, модифицированных рекомбинантным а2ь-интерфероном: □ СБ 19; □ СБ20

Рис. 12. Влияние рекомбинантно-го а2ь-интерферона на синтез IgM, IgG и IgA B-лимфоцитами крови человека: □ IgM; □ IgA; S IgG

Анализируя полученные результаты, можно заключить, что рекомби-нантный агь-интерферон индуцирует синтез у-интерферона Т-лимфоцитами, антителообразующую способность В-лимфоцитов (IgG и IgA) и усиление экспрессии мембранных белков на поверхности иммунокомпетентных клеток, тем самым оказывая иммунорегуляторное действие на Т- и B-клеточное звено иммунитета.

Глава 5. ИССЛЕДОВАНИЕ КОМБИНИРОВАННОГО ДЕЙСТВИЯ УФ СВЕТА И ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО ЛЕЙКОЦИТАРНОГО а ИНТЕРФЕРОНА НА УРОВЕНЬ ЭКСПРЕССИИ CDS И CD95 МАРКЕРОВ Т-ЛИМФОЦИТАМИ

КРОВИ ДОНОРОВ

В настоящее время в клинической практике для коррекции иммунного статуса больных с различными типами патологий эффективно применяются как АУФОК, так и фармакоиммунотерапия.

В связи с вышесказанным нами были проведены модельные эксперименты по изучению совместного действия человеческого лейкоцитарного а-интерферона и УФ-света на уровень экспрессии CD8 и CD95 маркеров на поверхности мембран Т-лимфоцитов крови человека.

Установлено, что цитокин в диапазоне концентраций 0,01-1 МЕ/мл стимулирует экспрессию CD8 маркеров нативными Т-лимфоцитами. Ответная реакция CD8 антигенов фотомодифицированных Т-клеток на воздействие а-интерферона зависит как от используемой дозы УФ-облучения, так и от концентрации добавленного к ним цитокина (рис. 13).

Рис. 13. Динамика уровня экспрессии CD8 маркеров на поверхности УФ-облученных Т-лимфоцитов, модифицированных человеческим лейкоцитарным а-интерфероном: ин-тактные клетки И; УФ-облученные Т-лимфоциты □; УФ-облученные Т-лимфоциты, модифицированные а-интерфероном в концентрациях: 0,01 МЕ/мл □; 0,1 МЕ/мл 0; 1 МЕ/мл В; 10 МЕ/мл В; 100 МЕ/мл Я

Выявлено, что применение цитокина в малых концентрациях (0,01 и 0,1 МЕ/мл) способствует усилению иммуностимулирующего действия УФ-света в терапевтической дозе (151 Дж/м2). Т-лимфоциты, облученные УФ-светом в дозах 453 и 906 Дж/м2, проявляют резистентность к действию а-интерферона (0,01-100 МЕ/мл). Данный цитокин ослабляет активирующий эффект большой дозы УФ-излучения (1359 Дж/м2).

В связи с тем, что при АУФОК-терапии прямому действию УФ-квантов подвергаются не только форменные элементы крови, но и цитокины, находящиеся в плазме, в том числе различные виды интерферонов, мы сочли целесообразным изучить воздействие УФ-облученного (151-1359 Дж/м2) а-интерферона на уровень экспрессии CD8 антигенов на поверхности мембран нативных и фотомодифицированных в тех же дозах Т-лимфоцитов. Установлено, что цитокин в концентрациях 0,01-100 МЕ/мл, модифицированный УФ-излучением в дозах 151-906 Дж/м2 и с активностью 0,01-10 МЕ/мл, облученный УФ-светом в дозе 1359 Дж/м2, вызывает рост уровня экспрессии CD8 антигенов на поверхности Т-лимфоцитов (рис. 14).

Рис. 14. Динамика уровня экспрессии CD8 маркеров на поверхности Т-лимфоцитов, модифицированных УФ-облученным человеческим лейкоцитарным а-интерфероном: интактные клетки 6Е; Т-лимфоциты, модифицированные УФ-облученным а-интерфероном в концентрациях: 0,01

Доза облучения Дж/м2 МЕ/мл О-1 МЕ/мл 1 МЕ/ш 10 МЕ/мл 3; 100 МЕ/мл в

Результаты экспериментов по исследованию уровня экспрессии CD8 маркеров на поверхности мембран фотомодифицированных Т-лимфоцитов крови доноров, инкубированных с УФ-облученным человеческим лейкоцитарным а-интерфероном, представлены на рис. 15. Показано, что воздействие УФ-облученного (1359 Дж/м2) цитокина в концентрациях 0,01-100 МЕ/мл нивелирует иммуностимулирующий эффект данной дозы УФ-излучения на экспрессию CD8 маркеров Т-лимфоцитами.

D. опт. ед. 0,400. 0,350 0,300 0,250 0,200 0,150 0,100 0,050 О

Доза облучения, Дж/м

D, опт. ед. 0,400, 0,350 0,300 0,250 0,200 0,150 0,100 0,050 0

151

453

Г*

906 1359

D, опт. ед. 0,350

0,300

0,250

0,200

0,150

0,100

0,050

Hffli

ipta

151

453

906 1359 , Доза облучения, Дж/м

Рис. 15. Динамика уровня экспрессии CD8 маркеров на поверхности фотомо-дифицированных 'Г-лимфоцитов, инкубированных с УФ-облученным человеческим лейкоцитарным а-интерфероном: интактные клетки И; УФ-модифицированные Т-лимфоциты, инкубированные с УФ-облученным а-интерфероном в концентрациях: 0,01 МЕ/мл □; 0,1 МЕ/мл О; 1 МЕ/мл В; 10 МЕ/мл В; 100 МЕ/мл ® Выявлено, что человеческий лейкоцитарный а-интерферона в диапазоне концентраций 0,01-1 МЕ/мл увеличивает экспрессию CD95 маркеров нативны-ми Т-лимфоцитам и. Добавление большой концентрации а-интерферона (100 МЕ/мл) к фотомодифицированным Т-клеткам снижает уровень экспрессии изучаемых маркеров, тем самым нивелируя иммуностимулирующий эффект УФ-облучения (151-1359 Дж/м2) (рис. 16).

Рис. 16. Динамика уровня экспрес-0 30()ПТ 6Д СИИ маркеров на поверхности

УФ-облученных Т-лимфоцитов, модифицированных человеческим лейкоцитарным а-интерфероном: интактные клетки Я; УФ-облученные Т-лимфоциты □; УФ-облученные Т-лимфоциты, модифицированные а-интерфероном в концентрациях: 0,01 МЕ/мл В; 0,1 МЕ/мл Я; 1 МЕ/мл В; 10 МЕ/мл В; 100 МЕ/мл В

453

906 1359 ,2 Доза облучения, Дж/м

Полученные нами данные о сочетанном влиянии человеческого лейкоцитарного а-интерферона и УФ-света на уровень экспрессии CD8 и CD95 рецепторов на поверхности Т-лимфоцитов крови человека имеют важное значение и могут быть использованы для прогнозирования результатов лечения больных при совместном проведении АУФОК- и цитокинотерапии.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

С помощью методов лазерной проточной цитофлуориметрии, твердофазного иммуноферментного анализа, непрямой иммунофлуоресценции и флуоресцентных зондов исследовано структурно-функциональное состояние компонентов Т- и В-клеточного звена иммунитета человека после воздействия УФ-излучения (240-390 нм) в дозах 151-1359 Дж/м2 и различных препаратов а-интерферона (0,01-100 МЕ/мл).

Методом флуоресцентных зондов было выявлено, что УФ-свет и рекомби-нантный а2ь-интерферон влияют на структурное состояние лимфоцитарных

мембран, изменяют гидрофобное окружение зонда и повышают микровязкость липидного бислоя мембраны, что, в свою очередь, может отразиться на уровне экспрессии поверхностных рецепторов, их локализации и переориентировке в мембране.

Данные проточной цитофлуориметрии и ИФА подтвердили изменение уровня экспрессии молекул рецепторного комплекса на поверхности Т- (TCR-CD3 и костимулирующих CD4 и CD8 молекул; CD95 маркеров, инициирующих апоптоз) и В-лимфоцитов (корецепторов BCR - CD 19 и CD20 маркеров) крови человека после действия УФ-излучения (151-1359 Дж/м2).

Установлено, что УФ-свет в малых и средних дозах (151, 453 и 906 Дж/м2) индуцирует повышение уровня экспрессии CD3 комплексов, CD4, CD8 и CD95 маркеров, а в большой дозе (1359 Дж/м2) - снижение уровня экспрессии CD3 комплексов и увеличение количества CD4, CD8, CD95 антигенов на поверхности мембран Т-клеток.

Основными механизмами фотоиндуцированных изменений экспрессии изучаемых трансмембранных маркеров на поверхности иммуноцитов являются конформационные перестройки, вызывающие их переориентировку в мембране; синтез рецепторов de novo; открытие предсуществующих антигенных структур, локализованных в толще липидного бислоя, ранее не доступных для определения (экстернализация), и шеддинг антигенных детерминант с клеточной поверхности или их интернализация.

При изучении цитокинпродуцирующей способности Т-клеток нами было выявлено снижение синтеза у-интерферона фотомодифицированными Т-лимфоцитами крови доноров.

При исследовании влияния УФ-излучения на компоненты гуморального звена иммунитета было обнаружено, что УФ-свет в максимальной дозе (1359 Дж/м2) увеличивает уровень экспрессии CD 19 и CD20 маркеров на поверхности мембран В-лимфоцитов. Изучаемые корецепторы BCR оказались фоторезистентны к действию УФ-света в дозах 151-906 Дж/м2. УФ-свет оказывает разнонаправленное влияние на функциональную активность (антителообразую-щую способность) В-лимфоцитов крови человека. Нами было показано стимулирующее действие УФ-света (151-1359 Дж/м2) на синтез IgG, IgA и супрессивное - на синтез IgM В-лимфоцитами.

Известно, что от соотношения Т-хелперов 1 и 2 типов, продуцирующих различный набор цитокинов (ТЫ - у-ИФН, IL-2, ФНО-а/р, IL-12 и др.; Th2 -IL-4, IL-6, IL-10 и др.), зависит структура иммунной защиты и направление развития иммунных процессов в сторону клеточного и гуморального ответа. Thl определяют развитие иммунитета по клеточному типу, a Th2 - по гуморальному. Так, по-видимому, выявленное нами УФ-индуцированное снижение синтеза у-интерферона (основного цитокина, усиливающего клеточный иммунный ответ) Thl-лимфоцитами компенсируется выработкой цитокинов ТЪ2-клетками,

обеспечивающих развитие гуморальной формы иммунитета посредством усиленного синтеза иммуноглобулинов фотомодифицированными В-клетками.

Таким образом, УФ-свет принимает активное участие в регуляции соотношения клеточной и гуморальной составляющих иммунного ответа.

На основании литературных и собственных экспериментальных данных была предложена схема возможных механизмов действия УФ-света на структурно-функциональное состояние компонентов Т- и В-клеточного звена иммунитета человека (рис. 17).

Рис. 17. Схема возможных механизмов действия УФ-света на структурно-функциональное состояние компонентов Т- и В-клеточного звена иммунитета человека

Результаты исследования уровня экспрессии поверхностных маркеров лимфоцитов крови человека, модифицированных рекомбинантным агь-интерфероном, свидетельствуют о том, что данный цитокин в малых концен-

трациях (0,01-1 ME/мл) оказывает иммуностимулирующее влияние на уровень экспрессии CD3 комплексов, CD4 и CD95 маркеров, а в больших концентрациях (10 и 100 ME/мл) - иммунодепрессивное действие на уровень экспрессии CD3 и CD95 маркеров на поверхности Т-лимфоцитов крови человека. а2ь-интерферон во всех используемых концентрациях (0,01-100 ME/мл) увеличивает количество CD8 антигенов на поверхности Т-клеток.

Увеличение уровня экспрессии изучаемых маркеров иммунокомпетент-ными клетками после действия используемого цитокина может быть обусловлено их синтезом de novo: а-интерферон стимулирует возникновение транскрипционного сигнала, включающего активацию цитоплазматических факторов STATa/ß и STAT2, тирозинкиназ Jakl и Тук2, образование транскрипционного фактора ISGF3 и синтез ряда белков в клетке. Кроме того, известно, что при действии а-интерферона происходит усиление процессов ПОЛ биомембран лимфоцитов и накопление в клетке АФК, что, с одной стороны, может привести к шеддингу рецепторов с клеточной поверхности или к их интернализации, а, с другой стороны, - к экспонированию «скрытых» молекул рецепторов на поверхность плазматической мембраны лимфоцитов.

При изучении функциональных свойств Т-лимфоцитов крови человека было установлено, что а2ь-интерферон (0,01-100 ME/мл) увеличивает уровень спонтанной и ФГА-индуцированной продукции ими у-интерферона, под действием которого происходит усиление экспрессии молекул МНС I и II классов на антигенпредставляющих клетках и активация синтеза цитокинов, необходимых для презентации антигена Т-лимфоцитами. В то же время он служит фактором, способствующим выработке IgG и IgA В-лимфоцитами (A.A. Ярилин, 1999).

В отношении B-лимфоцитов было установлено, что рекомбинантный а2ь-интерферон в малых концентрациях (0,01 и 0,1 ME/мл) индуцирует увеличение уровня экспрессии CD20 маркеров, а в диапазоне концентраций 0,01-100 ME/мл - рост уровня экспрессии CD 19 маркеров на поверхности их мембран. При исследовании антителообразующей способности B-лимфоцитов крови доноров после действия а2ь-интерферона было обнаружено, что данный цитокин в малых концентрациях (0,01-1 ME/мл) индуцирует синтез IgA, в большой концентрации (100 ME/мл) - синтез IgG, но не оказывает влияния на синтез IgM.

Следовательно, рекомбинантный а2ь-интерферон принимает участие в модуляции ряда иммунорегуляторных функций, которые способствуют взаимодействию между Т- и В-лимфоцитами.

На основании литературных и собственных экспериментальных данных была предложена схема возможных механизмов действия рекомбинантного а2Ь-интерферона на структурно-функциональное состояние компонентов Т- и В-клеточного звена иммунитета человека (рис. 18).

Изучение уровня экспрессии CD8 и CD95 маркеров на поверхности Т-лимфоцитов крови доноров при сочетанном применении УФ-света и природного лейкоцитарного а-интерферона позволило сделать заключение о том, что на-тивные и фотомодифицированные Т-лимфоциты по-разному отвечают на воздействие человеческого лейкоцитарного а-интерферона. Так, а-интерферон в диапазоне концентраций 0,01-1 ME/мл стимулирует экспрессию CD8 и CD95 маркеров интактными Т-лимфоцитами. Ответная реакция данных антигенов

фотомодифицированных Т-клеток на воздействие а-интерферона зависит от используемой дозы УФ-облучения и от концентрации добавленного к ним ци-токина.

Рис. 18. Схема возможных механизмов действия рекомбинантного а2ь-интерферона на структурно-функциональное состояние компонентов Т- и В-клеточного звена иммунитета человека.

Проведенные нами исследования свидетельствуют о том, что УФ-излучение (151-1359 Дж/м2) и различные препараты лейкоцитарного и рекомбинантного а-интерферона (0,01-100 МЕ/мл) оказывают значительное влияние на структурно-функциональное состояние иммунокомпетентных клеток и могут выступать в роли факторов, целенаправленно регулирующих уровень интенсивности иммунного ответа. В связи с этим открываются широкие перспективы для модуляции активности Т- и В-клеточного звена иммунитета как отдельным, так и комбинированным воздействием УФ-излучения и различных препаратов а-интерферона.

ВЫВОДЫ

1. После воздействия на смесь иммунокомпетентных клеток УФ-света (240-390 нм) в дозах 151-1359 Дж/м2 субпопуляционный состав нативных Т-лимфоцитов (76±4 % CD3" клеток, 43+2 % CD4+ лимфоцитов, 23±4 % CD8+ клеток) не изменялся.

2. Снижение интенсивности флуоресценции зонда 1,8-АНС в суспензии лимфоцитов после действия УФ-света (151-1359 Дж/м2) свидетельствует об изменении структурного состояния их мембран, что, в свою очередь, отражается на уровне экспрессии поверхностных рецепторов, их локализации и переориентировке в мембране.

3. УФ-свет в малых и средних дозах (151, 453 и 906 Дж/м2) оказывает однонаправленное (активирующее) действие на экспрессию молекул рецепторного комплекса Т-лимфоцитов крови человека, а в большой дозе (1359 Дж/м2) может как повышать (CD4, CD8, CD95 маркеры), так и снижать (CD3 комплексы) количество анализируемых молекул на поверхности их мембран.

4. Установлено, что увеличение уровня экспрессии тестируемых маркеров после облучения Т-лимфоцитов УФ-светом в дозах 151-906 Дж/м2 (CD3, CD4) и 453-1359 Дж/м2 (CD8, CD95) связано с синтезом данных рецепторов de novo.

5. УФ-свет (151-1359 Дж/м2) вызывает перераспределение CD3 комплексов, CD4 и CD8 маркеров на поверхности Т-лимфоцитов крови человека в виде «кэппинг»-эффекта с образованием рецепторных кластеров различных типов («кэп '/2», «кэп Vi» и амебовидный кэп).

6. Корецепторные молекулы CD 19 и CD20 на поверхности В-лимфоцитов крови человека проявляют фоторезистентность к действию УФ-света в дозах 151906 Дж/м2 и только максимальная доза УФ-света (1359 Дж/м2) оказывает иммуностимулирующее влияние на уровень их экспрессии.

7. Изменение структурного состояния мембран лимфоцитов, выявленное после воздействия рекомбинантного а2ь-интерферона, сопровождается увеличением уровня экспрессии CD3, CD4, CD8 и CD95 маркеров (0,01-1 МЕ/мл), снижением уровня экспрессии CD3, CD95 рецепторов и повышением количества CD8 антигенов (10 и 100 МЕ/мл) на поверхности Т-лимфоцитов крови человека.

8. Установлено, что увеличение уровня экспрессии CD3 комплексов после действия а2ь-интерферона в концентрациях 0,01-1 МЕ/мл и CD8 маркеров после действия цитокина в концентрациях 0,1-100 МЕ/мл обусловлено синтезом их новых молекул Т-лимфоцитами.

9. Выявлено, что рекомбинантный а2ь-интерферон (0,01-100 МЕ/мл) активирует дозозависимое образование у-интерферона Т-лимфоцитами крови доноров.

10. Обнаружен рост уровня экспрессии CD 19 маркеров на поверхности В-лимфоцитов крови человека после применения рекомбинантного агь-интерферона в диапазоне концентраций 0,01-100 МЕ/мл, а экспрессии CD20 маркеров - только в концентрациях 0,01 и ОД МЕ/мл.

11. Рекомбинантный а2ь-интерферон в малых концентрациях (0,01-1 МЕ/мл) индуцирует синтез IgA, в большой концентрации (100 МЕ/мл) - синтез IgG, но не оказывает влияния на синтез IgM В-лимфоцитами крови доноров.

12. Интерферончувствительность фотомодифицированных Т-клеток отличается

от таковой интактных образцов: a-интерферон, добавленный в различных концентрациях к УФ-облученным лимфоцитам, может как активировать, так и подавлять стимулирующее действие УФ-излучения на уровень экспрессии CD8 и CD95 рецепторов на поверхности их мембран, что необходимо учитывать при совместном проведении АУФОК- и цитокинотерапии.

13. a-интерферон в концентрации 100 ME/мл нивелирует иммуностимулирующий эффект УФ-облучения (151-1359 Дж/м2) на уровень экспрессии CD95 маркеров Т-лимфоцитами.

14. УФ-излучение (151-1359 Дж/м2) и различные препараты лейкоцитарного и рекомбинантного а-интерферона (0,01-100 ME/мл) оказывают значительное влияние на структурно-функциональное состояние иммунокомпетентных клеток и могут выступать в роли факторов, целенаправленно регулирующих уровень интенсивности иммунного ответа.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. О коррекции a-интерфероном негативного действия больших доз УФ-света на Т-лимфоциты крови человека / И.А. Колтаков, В.Г. Артюхов, О.В. Путинце-ва, В.А. Вдовина // Владикавказский медико-биологический вестник. - 2007. -Т. VII, № 13.-С. 266-268.

2. Экспрессия CD4 маркеров на поверхности мембран Т-лимфоцитов крови человека, модифицированных УФ-светом, a-интерфероном и их совместным воздействием / И.А. Колтаков, В.А. Вдовина, О.В. Путинцева, В.Г. Артюхов // Материалы международной научно-практической конференции «Новые технологии в экспериментальной биологии и медицине», Ростов-на-Дону, 10-12 октября 2007.-С. 120-122.

3. Влияние интерферона а на уровень экспрессии CD95 рецепторов нативными и УФ-облученными Т-лимфоцитами крови человека / В.Г. Артюхов, О.В. Путинцева, В.А. Вдовина, И.А. Колтаков, МЛ. Бычков // Аллергология и иммунология: материалы междунар. конф. "Физиология и патология иммунной системы", IV междунар. конф. по иммунотерапии - 2008. - Т. 9, № 3. - С. 360.

4. Изменение уровня экспрессии CD4 антигенов на поверхности мембран на-тивных и УФ-модифицированных Т-лимфоцитов крови человека в присутствии различных концентраций а-интерферона / В.Г. Артюхов, О.В. Путинцева, И.А. Колтаков, В.А. Вдовина // Сборник научно-практических работ №2 «Производственная, клиническая и транспортная трансфузиология: этапы реформирования, инфекционная и иммунологическая безопасность, критерии качества». -Воронеж, 2008.-С. 147-151.

5. Иммуноферментное определение уровня экспрессии CD4 антигенов на поверхности фотомодифицированных Т-лимфоцитов крови человека в присутствии а-интерферона / В.Г. Артюхов, О.В. Путинцева, И.А. Колтаков, В.А. Вдовина // Рефераты докладов. Второй международный форум «Аналитика и Аналитики», Воронеж, 22-26 сентября 2008. - Т. 2. - С. 513.

6. Исследование фотоиндуцированных изменений уровня экспрессии некоторых мембранных маркеров Т-лимфоцитами крови человека / В.Г. Артюхов, О.В. Путинцева, И.А. Колтаков, В.А. Вдовина, С.М. Дубова // Труды Четвертой

международной конференции «Электромагнитные излучения в биологии», Калуга, 21-23 октября 2008. - С. 17-23.

7. Поверхностный фенотип Т-лимфоцитов крови человека в условиях их УФ-облучения / В.Г. Артюхов, О.В. Путинцева, В.А. Вдовина, С.М. Дубова, И.А. Колтаков // Научные труды II Съезда физиологов СНГ, Кишинев, 29-31 октября 2008.-С. 157.

8. Изменение уровня экспрессии CD4 антигенов на поверхности мембран на-тивных Т-клеток крови человека, модифицированных УФ-облученным а-интерфероном / В.Г. Артюхов, О.В. Путинцева, В.А. Вдовина, И.А. Колтаков // Сборник материалов международной научной конференции «Биология: теория, практика, эксперимент» - Саранск, 2008. - С. 239-241.

9. Уровень экспрессии CD8 рецепторов на поверхности Т-лимфоцитов крови человека, индуцированной УФ-излучением / О.В. Путинцева, В.Г. Артюхов, В.А. Вдовина. И.А. Колтаков // V Съезд Российского фотобиологического общества, Пущино, 8-13 июня 2008. - С. 175.

10. Влияние a-интерферона на уровень экспрессии CD95 рецепторов на поверхности Т-лимфоцитов крови человека / В.А. Вдовина, О.В. Путинцева, M.J1. Бычков, В.Г. Артюхов // Организация и регуляция физиолого-биохимических процессов: Межрегиональный сборник научных работ. Выпуск 10 - Воронеж, 2008. - С. 66-68.

11. Экспрессия СБЗ-комплексов нативными и УФ-облученными Т-лимфоцитами крови человека после их модификации препаратом лейкоцитарного а-интерферона / В.Г. Артюхов, О.В. Путинцева, И.А. Колтаков, В.А. Вдовина // Биофизика. - 2009. - Т. 54, № 2. - С. 252-255.

12. Влияние рекомбинантного а2ь-интерферона на уровень экспрессии CD8 рецепторов на поверхности Т-лимфоцитов крови человека / В.А. Вдовина // Сборник тезисов Всероссийской школы-семинара для студентов, аспирантов и молодых ученых «Нанобиотехнологии: проблемы и перспективы». - Белгород, 14-17 октября 2009. - С. 10-12.

13. Влияние a-интерферона на уровень экспрессии CD95 рецепторов на поверхности УФ-облученных Т-лимфоцитов крови человека / В.Г. Артюхов, О.В. Путинцева, В.А. Вдовина, M.JI. Бычков // Организация и регуляция физио-лого-биохимических процессов: Межрегиональный сборник научных работ. -Воронеж, 2009. - С. 34-37.

14. Изменение уровня экспрессии CD8 антигенов на поверхности мембран на-тивных и УФ-модифицированных Т-лимфоцитов крови человека в присутствии различных концентраций а-интерферона / В.А. Вдовина // Тезисы докладов Международной научной школы для молодежи «Инновационные технологии в здравоохранении: молекулярная медицина, клеточная терапия, трансплантология, нанотехнологии», Екатеринбург, 9-12 ноября 2009. - С. 50-52.

15. Уровень экспрессии CD19 и CD20 рецепторов на поверхности мембран В-лимфоцитов крови человека, модифицированных различными концентрациями а-интерферона / М.А. Янц, В.А. Вдовина // Сборник научных работ студентов и молодых ученых Всероссийской конференции с международным участием «Актуальные вопросы медицинской науки». - Ярославль, 2009. - С. 88-89.

16. Изменение уровня экспрессии CD8 антигенов на поверхности мембран на-

тивных Т-лимфоцитов крови человека, модифицированных УФ-облученным а-интерфероном / В.А. Вдовина. О.В. Пугинцева, В.Г. Артюхов / Материалы Всероссийской научно-практической конференции с. международным участием «Актуальные проблемы современной науки и образования» Т.П. Биологические науки. - УФА, 2010. - С. 140-144.

17. Изменения уровня экспрессии СБ 19 и С020 рецепторов на поверхности В-лимфоцитов крови доноров, модифицированных УФ-светом и рекомбинантным а2ь-интерфероном / В.А. Вдовина, В.Г. Артюхов, О.В. Путинцева // Материалы VI Международной научно-технической конференции «Актуальные вопросы теоретической и прикладной биофизики, физики и химии. БФФХ - 2010». Т. 2. Биофизика и биофизическая медицина - Севастополь, 26-30 апреля 2010. - С.

18. Влияние различных препаратов интерферона на уровень экспрессии CD95 рецепторов на поверхности мембран Т-лимфоцитов крови человека / В.А. Вдовина // Сборник научных работ студентов и молодых ученых Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, посвященной 1000-летию г. Ярославля «Актуальные вопросы медицинской науки». - Ярославль, 2010.-С. 96-97.

19. Чувствительность рецепторного аппарата мембран Т-лимфоцитов крови человека к воздействию УФ-света / О.В. Путинцева, С.М. Дубова, В.А. Вдовина, В.Г. Артюхов // Международная научная конференция «Молекулярные, мембранные и клеточные основы функционирования биосистем», Минск, 23-25 июня 2010. Сборник статей в двух частях,часть 1. - С. 121-123.

20. Действие человеческого лейкоцитарного а-интерферона на уровень экспрессии С08-рецепторов нативными и УФ-облученными Т-лимфоцитами крови доноров / В.Г. Артюхов, О.В. Путинцева, В.А. Вдовина // Иммунология. -2010. - Т. 31, №3,-С. 152-153.

21. Анализ процессов биосинтеза CD8 рецепторов на поверхности УФ-облученных Т-лимфоцитов крови человека с использованием анизомицина / В.А. Вдовина, В.Г. Артюхов, О.В. Путинцева // Тезисы докладов. XXI Съезд физиологического общества им. И.П. Павлова, Калуга, 19-25 сентября 2010. -

22. Влияние УФ-излучения на процесс синтеза у-интерферона лимфоцитами крови человека / О.В. Путинцева, В.Г. Артюхов, В.А. Вдовина, С.М. Дубова // Материалы международной научной конференции «Современные проблемы радиобиологии», Гомель, 14-15 октября 2010. - С. 96-97.

Статьи № 11, 20 опубликованы в печатных изданиях, состоящих в списке журналов, рекомендованных ВАК РФ.

Подписано в печать 28.12.2010 г. Формат 60 х 84/16 . Бумага офсетная. Усл. печ. л. 1,4 Тираж 100 экз. Заказ №45 Отпечатано в типографии Воронежский ЦНТИ - филиал ФГУ «РЭА» Минэнерго России 394036, г. Воронеж, пр. Революции, 30

295-298.

С. 110.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Вдовина, Вера Александровна

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ,

СИМВОЛОВ, ЕДИНИЦ И ТЕРМИНОВ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Краткая характеристика Т- и В-лимфоцитов

1.1.1. Морфологические особенности лимфоцитов

1.1.2. Строение мембран лимфоцитов

1.1.3. Происхождение Т- и В-клеток

1.1.4. Функциональные особенности и основные мембранные маркеры

Т- и В-лимфоцитов

1.2. Структура, физико-химические свойства и функции антигенраспознающих рецепторов Т- и В- лимфоцитов

1.2.1. Антигенраспознающий рецепторный комплекс Т-лимфоцитов

1.2.2. В-клеточный антигенраспознающий комплекс

1.3. Структура, физико-химические свойства и функции СБ95 (Раз/АРО-1) рецептора

1.4. Краткая характеристика УФ-излучения и его влияние на структурно-функциональное состояние компонентов иммунной системы

1.5. Характеристика интерферонов

1.5.1. Свойства и классификация интерферонов

1.5.2. Современные данные о структуре молекул интерферонов

1.5.3. Механизм взаимодействия интерферона с клеточной мембраной и его противовирусное действие

1.5.4. Влияние интерферона на функциональные свойства иммунокомпетентных клеток и экспрессию мембранных маркеров 53 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 2. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объект исследования

2.2. Методы исследования

2.2.1. Выделение лимфоцитов из крови доноров

2.2.2. Разделение лимфоцитов на Т- и В-популяции

2.2.3. Определение жизнеспособности лимфоидных клегок

2.2.4. Облучение суспензий лимфоцитов УФ-светом

2.2.5. Модификация лимфоцитов различными препаратами а-интерферона

2.2.6. Комбинированное действие УФ-излучения и человеческого лейкоцитарного а-интерферона на Т-клетки

2.2.7. Исследование уровня экспрессии некоторых мембранных маркеров на поверхности Т-лимфоцитов методом лазерной проточной цитофлуориметрии

2.2.8. Использование метода иммуноферментного анализа для определения уровня экспрессии некоторых мембранных маркеров на поверхности

Т- и В-лимфоцитов крови человека

2.2.9. Исследование синтеза CD3 комплексов, CD4, CD8, CD95 маркеров de novo Т-лимфоцитами крови человека

2.2.10. Изучение структурных свойств мембран Т-лимфоцитов с помощью метода иммунофлуоресценции

2.2.11. Исследование структурного состояния лимфоцитарных мембран при помощи метода флуоресцентных зондов

2.2.12. Определение концентрации у-интерферона в супернатантах Т-лимфоцитов крови человека с помощью метода иммуноферментного анализа

2.2.13. Исследование антителообразующей способности В-лимфоцитов крови человека методом иммуноферментного анализа

2.2.14. Статистическая обработка результатов

Глава 3. ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ УФ-СВЕТА НА СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ КОМПОНЕНТОВ Т- И В-КЛЕТОЧНОГО ЗВЕНА ИММУНИТЕТА ЧЕЛОВЕКА 70 3.1. Исследование структурного состояния мембран УФ-облученных лимфоцитов крови человека с помощью флуоресцентного зонда 1,8-АНС

3.2. Исследование влияния УФ-света на Т-клеточное звено иммунитета человека

3.2.1. Исследование влияния УФ-света на уровень экспрессии молекул рецепторного комплекса Т-лимфоцитов крови человека

3.2.1.1. Изучение влияния УФ-света на уровень экспрессии CD3 комплексов Т-лимфоцитами крови человека

3.2.1.2. Изучение влияния УФ-света на уровень экспрессии CD4 маркеров Т-лимфоцитами крови человека

3.2.1.3. Изучение влияния УФ-света на уровень экспрессии CD8 маркеров Т-лимфоцитами крови человека

3.2.1.4. Изучение влияния УФ-света на уровень экспрессии CD95 маркеров Т-лимфоцитами крови человека

3.2.1.5. Исследование влияния УФ-света на уровень экспрессии CD3 комплексов, CD4 и CD8 маркеров методом проточной цитофлуориметрии

3.2.2. Изучение влияния УФ-света на локализацию молекул рецепторного комплекса (CD3 комплексов, CD4 и CD8 маркеров) на поверхности Т-лимфоцитов крови человека

3.2.3. Влияние УФ-излучения на синтез у-интерферона Т-лимфоцитами крови человека

3.3. Исследование влияния УФ-света на В-клеточное звено иммунитета человека

3.3.1. Изучение влияния УФ-света на уровень экспрессии CD 19 и CD20 маркеров В-лимфоцитами крови человека

3.3.2. Влияние УФ-излучения на синтез IgM, IgG и IgA В-лимфоцитами крови человека

Глава 4. ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО а2ь-ИНТЕРФЕРОНА НА СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ КОМПОНЕНТОВ Т- И В-КЛЕТОЧНОГО ЗВЕНА ИММУНИТЕТА ЧЕЛОВЕКА 96 4.1. Влияние рекомбинантного оьь-интерферона на структурное состояние мембран лимфоцитов крови человека

4.2. Влияние рекомбинантного а2ь-интерферона на Т-клеточное звено иммунитета человека

4.2.1. Влияние рекомбинантного а2ь-интерферона на рецепторный аппарат мембран Т-лимфоцитов крови человека

4.2.1.1. Влияние рекомбинантного а2ь-интерферона на уровень экспрессии CD3 комплексов Т-лимфоцитами крови человека

4.2.1.2. Влияние рекомбинантного а2ь-интерферона на уровень экспрессии CD4 маркеров Т-лимфоцитами крови человека

4.2.1.3. Влияние рекомбинантного а2ь-интерферона на уровень экспрессии CD8 маркеров Т-лимфоцитами крови человека

4.2.1.4. Влияние рекомбинантного сьь-интерферона на уровень экспрессии CD95 маркеров Т-лимфоцитами крови человека

4.2.2. Влияние рекомбинантного а2ь-интерферона на синтез у-интерферона Т-лимфоцитами крови человека

4.3. Влияние рекомбинантного а2Ь-интерферона на В-клеточное звено иммунитета человека

4.3.1. Влияние рекомбинантного а2ь-интерферона на уровень экспрессии

CD 19 и CD20 маркеров В-лимфоцитами крови человека

4.3.2. Влияние рекомбинантного а2ь-интерферона на синтез IgM, IgG и IgA В-лимфоцитами крови человека

Глава 5. ИССЛЕДОВАНИЕ КОМБИНИРОВАННОГО ДЕЙСТВИЯ УФ-СВЕТА И ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО ЛЕЙКОЦИТАРНОГО а-ИНТЕРФЕРОНА НА УРОВЕНЬ ЭКСПРЕССИИ CD8 И CD95 МАРКЕРОВ Т-ЛИМФОЦИТАМИ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА

5.1. Исследование уровня экспрессии CD8 маркеров на поверхности мембран нативных и УФ-модифицированных Т-лимфоцитов крови доноров в присутствии человеческого лейкоцитарного а-интерферона различных концентраций

5.2. Исследование уровня экспрессии CD8 маркеров на поверхности мембран нативных Т-клеток крови доноров, модифицированных УФ-облученным человеческим лейкоцитарным а-интерфероном

5.3. Исследование уровня экспрессии CD8 маркеров на поверхности мембран фотомодифицированных Т-лимфоцитов крови доноров, инкубированных с УФ-облученным человеческим лейкоцитарным а-интерфероном

5.4. Исследование уровня экспрессии CD95 маркеров на поверхности мембран нативных и УФ-модифицированных Т-лимфоцитов крови доноров в присутствии человеческого лейкоцитарного а-интерферона различных концентраций 120 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 124 ВЫВОДЫ 134 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ 13 7 ПРИЛОЖЕНИЕ

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ, СИМВОЛОВ,

ЕДИНИЦ И ТЕРМИНОВ

АПК - антигенпрезентирующие клетки АУФОК - аутотрансфузия УФ-облученной крови ИФА - иммуноферментный анализ ИФН - интерферон

МНС - главный комплекс гистосовместимости

НЖК - ненасыщенные жирные кислоты

ПОЛ - пероксидное окисление липидов

ПФОЛ - пероксидное фотоокисление липидов

СКК - стволовая кроветворная клетка

ЦТЛ - цитотоксические Т-лимфоциты

ВСЯ - В-клеточный рецептор для антигена - иммуноглобулин

1Ь - интерлейкин

СБ - кластер дифференцировки

ТСЯ - Т-клеточный рецептор для антигена

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование механизмов действия УФ-света и различных препаратов α-интерферона на структурно-функциональное состояние компонентов T- и B- клеточного звена иммунитета человека"

Актуальность проблемы.

Функционирование иммунной системы контролируется за счет целого ряда эндогенных и экзогенных факторов. Ключевым этапом функционирования иммунной системы является экспрессия поверхностных рецепторов, которые обеспечивают восприятие клеткой внешних сигналов. На поверхности мембран лимфоцитов в большом количестве экспрессируются молекулы рецепторного комплекса, принимающие участие в антигенраспознающей функции Т- (CD3-TCR, корецепторы CD4 и CD8) и B-лимфоцитов (костимулирующие молекулы BCR - CD 19, CD20 маркеры) (A.A. Ярилин, 1999; P.M. Хаитов, 2006). Для нормального протекания иммунного ответа в организме необходима сбалансированная активность взаимодействующих иммуннорегуляторных клеток. При различных патологических состояниях (аутоиммунные и аллергические заболевания, иммунодефициты, гепатиты различного вида, злокачественные опухоли и др.) меняется поверхностный фенотип иммунокомпетентных клеток, количественный и качественный состав их субпопуляций, уровень продуцируемых цитокинов, в результате чего механизмы регуляции иммунного ответа будут нарушены.(Г.Н. Дранник, 2003; Н.В. Романова и др., 2005; O.E. Чечина и др., 2008; Y.B. Sullivan et al., 2001). Так, отсутствие или незначительный уровень экспрессии функционально значимых молекул на поверхности иммуноцитов при различных патологиях ведут к ослаблению процессов передачи сигнала внутрь клетки и к снижению интенсивности иммунного ответа на попадание чужеродного антигена (Г.Н. Дранник, 2003).

Основными модуляторами иммунной системы и факторами межклеточного взаимодействия являются цитокины, участвующие в формировании и регуляции всех звеньев иммунного ответа (неспецифическая резистентность, гуморальный и клеточный иммунитет), включая дифференцировку иммунокомпетентных клеток-предшественников, презентацию антигена, клеточную активацию и пролиферацию, экспрессию молекул адгезии (Г.И. Васильева и др., 2001; A.C. Симбирцев, 2002; В.А. Щербак и др., 2005; Е.И. Батенева и др., 2006).

В настоящее время в медицине для лечения больных с различной патологией эффективно применяется цитокинотерапия, в частности, терапия природными и генно-инженерными препаратами а-интерферона (И.А. Васильева и др., 2003; Ф.И. Ершов, О.И. Киселев, 2005; В.А. Шмелев, 2008). Интерфероны играют важную роль в функционировании иммунной системы и являются иммуномодуляторами широкого спектра действия (В.П. Алферов и др., 1998; Ф.И. Ершов, О.И. Киселев, 2005; В.А. Шмелев, 2008). Несмотря на большие перспективы использования различных препаратов а-интерферона в клинической практике, необходимо решить ряд проблем, связанных с подбором терапевтических концентраций, трудностью прогнозирования рт контроля реакций организма на цитокинотерапию на ранних этапах и при длительном лечении.

В связи с вышеизложенным, представляется интересным изучение возможности регулирования иммунологических процессов как отдельным, так и комбинированным действием на компоненты иммунной системы естественных модуляторов физической и химической природы (УФ-света и а-интерферона), что позволит разработать методы направленной иммунокорекции для комплексной терапии.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось изучение структурно-функционального состояния компонентов Т- и В-клеточного звена иммунитета человека после воздействия УФ-излучения, различных препаратов а-интерферона и их сочетанного действия.

В связи с вышесказанным перед нами были поставлены следующие задачи:

1. Изучить влияние УФ-света (240-390 нм) в дозах 151, 453, 906 и 1359 1

Дж/м~ на уровень экспрессии основных мембранных маркеров рецепторного комплекса Т- и В-лимфоцитов, образование «кэппинг»-эффекта молекул антигенраспознающего рецепторного комплекса на поверхности Т-клеток, ИФНу-продуцирующую способность Т-клеток и антителообразующую способность В-лимфоцитов.

2. Исследовать действие рекомбинантного сьь-интерферона (0,01-100 МЕ/мл) на уровень экспрессии рецепторного аппарата Т- и В-лимфоцитов, ИФНу-продуцирующую способность Т-клеток и антителообразующую и способность В-лимфоцитов.

3. Изучить структурное состояние мембран лимфоцитов после воздействия

•у

УФ-света (151-1359 Дж/м") и рекомбинантного а2ь-интерферона (0,01-100 МЕ/мл).

4. Оценить сочетанное влияние УФ-излучения (151—1359 Дж/м") и человеческого лейкоцитарного а-интерферона (0,01-100 МЕ/мл) на уровень экспрессии CD8 и CD95 маркеров на поверхности Т-лимфоцитов крови человека.

-у

Обнаружено, что УФ-свет в малых и средних дозах (151, 453 и 906 Дж/м") оказывает однонаправленное (активирующее) действие на экспрессию молекул рецепторного комплекса Т- и В-лимфоцитов крови человека, а в большой дозе (1359 Дж/м2) может как повышать (CD4, CD8, CD95, CD 19 и CD20 маркеры), так и снижать (CD3 комплексы) количество анализируемых молекул на поверхности их мембран.

Установлено, что изучаемые нами трансмембранные рецепторы обладают разной чувствительностью к действию рекомбинантного агь-интерферона.

Показаны изменения функциональной активности цитокинпродуцирующей способности Т-лимфоцитов и антителообразующей способности В-лимфоцитов) иммунокомпетентных клеток крови человека после УФ-облучения и модифицикации рекомбинантным а2ь-интерфероном.

Впервые был изучен характер изменения уровня экспрессии CD8 и CD95 рецепторов, на поверхности,мембран: Т.-лимфоцитов> крови человека в условиях комбинированного действия УФ-света и человеческого лейкоцитарного а-интерферона.

Предложены схемы возможных, механизмов действия УФ-света и рекомбинантного ; а2ь-интерферона • на структурно-функциональное состояние: компонентов Т-и В-клеточного звена иммунитета человека.

Практическая- значимость. Научные положения диссертационной" работы, расширяют и углубляют современные представления о, механизмах действия- физико-химических агентов* (УФ-излучения и различных препаратов а-интерферона) на функционирование отдельных звеньев иммунной системы.

Данные, полученные при исследовании влияния. УФ-света и;, а-интерферона, на уровень экспрессии GD3. CD4, С138 маркеров на поверхности; Т-лимфоцитов и CD 19, CD20 рецепторов на поверхности В-кле гок необходимо» учитывать при изучении вклада . отдельных популяций и субпопуляций, иммунокомпетентных клеток в процессы реализации иммунного ответа.

Результаты изучения индуцированных УФ-светом, и различными препаратами а-интерферона изменений уровня экспрессии молекул рецепторного комплекса Т- и В-лимфоцитов, цитокинпродуцирующей и антителообразующей способности иммуноцитов важньг для понимания тонких механизмов саморегуляции и функционирования компонентов иммунной системы в норме и при патологии:

Полученные экспериментальные, данные могут способствовать, разработке новых подходов к иммунокоррекции отдельных звеньев иммунного ответа при различных патологических состояниях, организма как при отдельном, так и при совместном проведении АУФОК- и цитокинотерапии.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на Международной научно-практической конференции «Новые технологии в экспериментальной биологии и медицине» (Ростов-на-Дону, 2007); IV Международной конференции по иммунотерапии «Физиология и патология иммунной системы» (Москва, 2008); V Съезде Российского фотобиологического общества (Пущино, 2008); IV Международной научной конференции «Электромагнитные излучения в биологии. БИО-ЭМИ-2008» (Калуга, 2008); Международной научной конференции «Биология: теория, практика, эксперимент» (Саранск, 2008); II Международном форуме «Аналитика и Аналитики» (Воронеж, 2008); II Съезде физиологов СНГ (Кишинев, 2008); Всероссийской конференции с международным участием «Актуальные вопросы медицинской науки» (Ярославль, 2009); Всероссийской школе-семинаре для студентов, аспирантов и молодых ученых «Нанобиотехнологии: проблемы и перспективы» (Белгород, 2009); Международной научной школе для молодежи «Инновационные технологии в здравоохранении: молекулярная медицина, клеточная терапия, трансплантология, нанотехнологии» (Екатеринбург, 2009); VI Международной научно-технической конференции «Актуальные вопросы теоретической и прикладной биофизики, физики и химии. БФФХ - 2010» (Севастополь, 2010); Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы современной науки и образования» (Уфа, 2010); Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные вопросы медицинской науки» (Ярославль, 2010); Девятом сьезде Белорусского общественного объединения фотобиологов и биофизиков (Минск, 2010); Международной научной конференции «Современные проблемы радиобиологии» (Гомель, 2010); XXI Съезде Физиологического общества им. И.П. Павлова (Калуга, 2010), а гакже на Научной отчетной конференции преподавателей и сотрудников Воронежского госуниверситета (Воронеж, 2010).

На защиту выносятся следующие положения:

1. УФ-свет (151-1359 Дж/м ) и рекомбинантный а2ь-интерферон (0,01— 100 МЕ/мл) изменяют структурное состояние лимфоцитарных мембран, уровень экспрессии молекул рецепторного комплекса Т-клеток (СБЗ, СБ4,

CD8, CD95) и В-лимфоцитов (CD 19, CD20), их функциональную активность.

2. УФ-свет (151—1359 Дж/м ) вызывает перераспределение молекул антигенраспознающего рецепторного комплекса (CD3, CD4 и CD8 маркеров) на поверхности Т-лимфоцитов в виде «кэппинг»-эффекта с образованием рецепторных кластеров различных типов («кэп 1Л», «кэп 1А» и амебовидный кэп).

4. УФ-излучение (151-1359 Дж/м ) и препараты лейкоцитарного и рекомбинантного а-иптерферона (0,01-100 МЕ/мл) могут выступать в роли факторов, определяющих направление иммунного ответа по клеточному или гуморальному пути и регулирующих уровень его интенсивности.

Структура и объем работы.

Заключение Диссертация по теме "Биофизика", Вдовина, Вера Александровна

выводы

1. После воздействия на смесь иммунокомпетентных клеток УФ-света (240-390 нм) в дозах 151-1359 Дж/м" субпопуляционный состав нативных Т-лимфоцитов (76±4 % CD3+ клеток, 43±2 % CD4+ лимфоцитов, 23±4 % CD8+ клеток) не изменялся.

2. Снижение интенсивности флуоресценции зонда 1,8-АНС в суспензии лимфоцитов после действия УФ-света

151-1359 Дж/м ) свидетельствует об изменении структурного состояния их мембран, что, в свою очередь, отражается на уровне экспрессии поверхностных рецепторов, их локализации и переориентировке в мембране.

3. УФ-свет в малых и средних дозах (151, 453 и 906 Дж/м") оказывает однонаправленное (активирующее) действие на экспрессию молекул рецепторного комплекса Т-лимфоцитов крови человека, а в большой дозе (1359

-у

Дж/м") может как повышать (CD4, CD8, CD95 маркеры), так и снижать (CD3 комплексы) количество анализируемых молекул на поверхности их мембран.

4. Установлено, что увеличение уровня экспрессии тестируемых маркеров после облучения Т-лимфоцитов УФ-светом в дозах 151-906 Дж/м" (CD3, CD4) и 453-1359 Дж/м2 (CD8, CD95) связано с синтезом данных рецепторов de novo.

О '

5. УФ-свет (151-1359 Дж/м") вызывает перераспределение CD3 комплексов, CD4 и CD8 маркеров на поверхности Т-лимфоцитов крови человека в виде «кэппинг»-эффекта с образованием' рецепторных кластеров различных типов («кэп 16», «кэп %» и амебовидный кэп).

6. Корецепторные молекулы CD 19 и CD20 на поверхности В-лимфоцитов крови человека проявляют фоторезистентность к действию УФ-света в дозах 151-906 Дж/м" и только максимальная доза УФ-света (1359 Дж/м") оказывает иммуностимулирующее влияние на уровень их экспрессии.

7. Изменение структурного состояния мембран лимфоцитов, выявленное после воздействия рекомбинантпого а2ь~интерферона, сопровождается увеличением уровня экспрессии CD3, CD4, CD8 и CD95 маркеров (0,01-1 МЕ/мл), снижением уровня экспрессии CD3, CD95 рецепторов и повышением количества CD8 антигенов (10 и 100 МЕ/мл) на поверхности Т-лимфоцитов крови человека.

8. Установлено, что увеличение уровня экспрессии CD3 комплексов после действия а2Ь-интерферона в концентрациях 0,01-1 МЕ/мл и CD8 маркеров после действия цитокина в концентрациях 0;1-100. МЕ/мл обусловлено синтезом их новых молекул Т-лимфоцитами.

9. Выявлено, что рекомбинантный а2ь-интерферон (0,01-100« МЕ/мл) активирует дозозависимое образование у-интерферона Т-лимфоцитами крови доноров.

10. Обнаружен рост уровня экспрессии CD 19 маркеров на поверхности В-лимфоцитов крови человека после применения рекомбинаптного а2ь-интерферона в диапазоне концентраций 0,01-100 МЕ/мл, а экспрессии CD20 маркеров - только в концентрациях 0,01 и 0,1 МЕ/мл.

12. Интерферончувствительность фотомодифицированных Т-клеток отличается от таковой интакгных образцов: а-интерферон, добавленный в различных концентрациях к УФ-облученным лимфоцитам, может как активировать, так и подавлять стимулирующее действие УФ-излучения на уровень экспрессии CD8 и CD95 рецепторов на поверхности их мембран, что необходимо учитывать при совместном проведении АУФОК- и цитокинотерапии.

13. а-интерферон в концентрации 100 МЕ/мл нивелирует иммуностимулирующий эффект УФ-облучения (151-1359 Дж/м2) на уровень экспрессии CD95 маркеров Т-лимфоцитами.

14. УФ-излучение (151-1359 Дж/м~) и различные препараты лейкоцитарного и рекомбинаптного а-интерферона (0,01-100 МЕ/мл) оказывают значительное влияние па структурно-функциональное состояние иммунокомпетентных клеток и могут выступать в роли факторов, целенаправленно регулирующих уровень интенсивности иммунного ответа.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

С помощью методов лазерной проточной цитофлуориметрии, твердофазного иммуноферментного анализа, непрямой иммунофлуоресценции и флуоресцентных зондов исследовано структурно-функциональное состояние компонентов Т- и В-клеточного звена иммунитета человека после воздействия УФ-излучения (240-390 нм) в-дозах 151-1359 Дж/м" и различных препаратов а-интерферона (0,01-100 МЕ/мл).

Методом флуоресцентных зондов было выявлено, что УФ-свет и рекомбинантный а2ь-интерферон влияют на структурное состояние лимфоцитарных мембран, изменяют гидрофобное окружение зонда и повышают микровязкость липидного бислоя мембраны, что, в свою очередь, может отразиться на уровне экспрессии поверхностных рецепторов, их локализации и переориентировке в мембране.

Установлено, что УФ-свет в малых и средних дозах (151, 453 и 906 Дж/м") индуцирует повышение уровня экспрессии CD3 комплексов, CD4, CD8 и CD95 маркеров, а в большой дозе (1359 Дж/м") - снижение уровня экспрессии CD3 комплексов и увеличение количества CD4, CD8, CD95 антигенов на поверхности мембран Т-клеток.

С помощью иммунофлуоресцентного метода было показано, что УФ-свет (151-1359 Дж/м2) вызывает перегруппировку CD3, CD4 и CD8 рецепторов, участвующих в распознавании чужеродных антигенов, па поверхности Т-лимфоцитов в виде «кэппинг»-эффекта с образованием рецепторных кластеров различных типов («кэп 1Л», «кэп 'А» и амебовидный кэп), что, вероятно, будет улучшать функционирование антигенраспознающего рецепторного аппарата Т-лимфоцитов и проведение активационных сигналов от TCR внутрь клетки под действием антигенного стимула.

Основными механизмами фотоиндуцированных изменений экспрессии изучаемых трансмембранных маркеров на поверхности иммуноцитов являются конформационные перестройки, вызывающие их переориентировку в мембране; синтез рецепторов de novo; открытие предсуществующих антигенных структур, локализованных в голще липидного бислоя, ранее не доступных для определения (экстернализация), и шеддинг антигенных детерминант с клеточной поверхности или их интернализация.

Использование ингибитора синтеза белка — анизомицина, позволило нам установить, что увеличение уровня экспрессии тестируемых маркеров после облучения Т-лимфоцитов УФ-светом в дозах 151-906 Дж/м" (CD3, CD4) и 453-1359 Дж/м2 (CD8,'CD95) связано с синтезом данных рецепторов de novo.

При изучении цитокинпродуцирующей способности Т-клеток нами было выявлено снижение синтеза -у-интерферона фотомодифицированными Т-лимфоцитами крови доноров, что, по-видимому, может быть обусловлено фотоинакгивацией путей передачи фанскрипционного сигнала в клешу.

При исследовании влияния УФ-излучения на компоненты гуморального звена иммунитета было обнаружено, что УФ-свет в максимальной дозе (1359 Дж/м") увеличивает уровень экспрессии CD 19 и CD20 маркеров па поверхности мембран В-лимфоцитов. Изучаемые корецепторы BCR оказались фоторезистентны к действию УФ-света в дозах 151-906 Дж/м".

УФ-свет оказывает разнонаправленное влияние на функциональную активность (антителообразующую способность) В-лимфоцитов крови человека. Нами было показано стимулирующее действие УФ-света (151-1359 Дж/м2) на синтез IgG, IgA и супрессивное - на синтез IgM В-лимфоцитами. Причем установлен дозозависимый эффект повышения уровня продукции иммуноглобулинов класса G и понижения иммуноглобулинов класса М В-лимфоцитами. Динамика гуморального иммунного ответа проявляется в смене синтеза антител различных классов (IgM—»IgG—>IgA). Известно, что некоторые цитокины (IL-4, у-ИФН, трансформирующий фактор роста (3, IL-5) участвуют в переключении синтеза IgM на синтез IgG и IgA. Полученные нами результаты согласуются с ранее опубликованными данными о способности УФ-света модулировать уровень ряда цигокинов (IL-1J3, IL-2, IL-6) лимфоцитарными клетками, стимулирующих выработку иммуноглобулинов В-лимфоцитами. Увеличение уровня продукции IgG и IgA фотомодифицированными В-лимфоцитами (151 Дж/м") будет способствовать более эффективному протеканию реакций, направленных на распознавание и элиминацию чужеродных антигенных детерминант и индукцию гуморального- В-клеточного ответа, обуславливая наблюдаемые положительные эффекты при АУФОК-терапии.

В связи с тем, что CD3 комплексы и корецепторы CD4, CD8 являются основными молекулами антигенраспознающего рецепторного аппарата Т-лимфоцитов, то следствием выявленного нами фотоиндуцированного увеличения их уровня- экспрессии после действия терапевтических доз УФ-света, может быть усиление антигенраспознающей способности Т-клеток, хелперной и цитотоксической активности субпопуляций лимфоцитов за счет повышения эффективности взаимодейстия TCR-CD3 с комплексом пептид-МНС I/II-класса при реализации иммунного ответа, что приведет к более активному его протеканию по клеточному или гуморальному пути. Снижение уровня экспрессии CD3 комплексов после облучения Т-клеток УФ-светом в максимальной дозе (1359 Дж/м") может вызывать угнетение процессов проведения активационного сигнала от TCR внутрь клетки и распознавания Т-лимфоцитами чужеродного антигена при взаимодействии с антигенпрезентирующими клетками и, как следствие, к торможению развития иммунных реакций. В то же время увеличение уровня экспрессии корецепторных молекул CD 19 и CD20 на поверхности В-лимфоцитов после действия УФ-света в дозе 1359 Дж/м" будет улучшать проведение внутриклеточных сигналов от BCR и участие В-лимфоцитов в иммунном ответе. Повышение функционирования Т- и В-клеточных рецепторов после фотомодификации может быть обусловлено усилением работы сигналтрансдуцирующих систем лимфоцитов за счет дополнительных молекул корецепторов (CD4, CDB - для TCR и CD 19, CD20 - для BCR). Увеличение уровня экспрессии CD95 маркеров Т-лимфоцитами под действием УФ-излучения обеспечит более высокую, степень восприимчивости клеток к внешним апоптотическим сигналам.

Известно, что от соотношения Т-хелперов 1 и 2 типов, продуцирующих различный набор цитокинов (Thl - у-ИФН, IL-2, ФНО-а/р, IL-12 и др.; Th2 -IL-4, IL-6, IL-10 и др.), зависит структура иммунной защиты и направление развития иммунных процессов в сторону клеточного и гуморального ответа. Thl определяют развитие иммунитета по клеточному типу (фагоцитоз, цитотоксичность, гиперчувствителыюсть замедленного типа и др.), a Th2 - по гуморальному (P.M. Хаитов и др., 2000; Г.И. Васильева и др., 2001; Г.Ф. Железникова, 2008). Так, по-видимому, выявленное нами УФ-индуцированное снижение синтеза у-интерферона (основного цитокина, усиливающего клеточный иммунный ответ) Thl-лимфоцитами компенсируется выработкой цитокинов ТЬ2-клетками, обеспечивающих развитие гуморальной формы иммунитета посредством усиленного синтеза иммуноглобулинов фотомодифицированными В-клетками, особенно антител класса IgG.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Вдовина, Вера Александровна, Воронеж

1. Антитела. Методы / Под ред. Д. Кэтти: В 2-х кн. М.: Мир, 1991. - Кн. 2. -380 с.

2. Артюхов В.Г. Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами / В.Г. Артюхов, М.А. Наквасина. Воронеж: Изд-во ВГУ, 2000. - 296 с.

3. Артюхов В.Г. Влияние ультрафиолетового излучения па структурно-функциональное состояние Т- и B-лимфоцитов крови человека / В.Г. Артюхов, О.В. Путинцева, Е.В. Дмитриев // Радиац. биология. Радиоэкология. 2003. - Т. 43, № 1. - С. 82-86.

4. Артюхов В.Г. Оптические методы анализа интактных и модифицированных биологических систем / В.Г. Артюхов, О.В. Путинцева. Воронеж: Изд-во Воронеж, ун-та, 1996. - 240 с.

5. Артюхов В.Г. Структурно-функциональное состояние биомембран и межклеточные взаимодействия: учебное пособие / В.Г. Аргюхов, М.А. Наквасина. Воронеж: Издательско-полиграфический центр ВГУ, 2008,- 156 с.

6. Артюхов В.Г. Уровень экспрессии некоторых адгезивных молекул интактными и УФ-облученными Т-лимфоцитами крови человека / В.Г. Артюхов, О.В. Путинцева, С.М. Дубова // Медицинская иммунология. 2009. - Т. 11, № 1. - С.79-84.

7. Арцишевская P.A. Десорбция гликопротеинов с поверхности лимфоцитов периферической крови человека после облучения коротковолновыми УФ-лучами / P.A. Арцишевская, А.П. Миронова, К.А. Самойлова // Цитология. -1984, Т. 26., № 2. С. 209-214.

8. Афанасьев Ю.И. Гистология / Ю.И. Афанасьев, И.А. Юрина. М.: Медицина, 1999. - 744 с.

9. Бажан С.И. Математическое моделирование регуляции синтеза и противовирусного действия интерферон-стимулируемого белка Мх1 /

10. С.И. Бажан, O.E. Белова // Молекулярная биология. 1997. - Т. 31, № 6. - С. 1071-1081.

11. Бажан С.И. Молекулярно-генетические аспекты индукции и противовирусного действия интерферона / С.И. Бажан, O.E. Белова // Вестник РАМН. 1998. - № 3. - С. 18-24.

12. Барышников А.Ю. Иммунологические проблемы апоптоза / А Ю. Барышников, Ю.В. Шишкин. М.: Эдиториал УРСС, 2002. - 320 с.

13. Башарина О.В. Влияние УФ-света на синтез некоторых белков лимфоцитами / О.В. Башарина, В.Г. Артюхов, И.Е. Савостина // Иммунология. 2009. - № 3. - С. 152-154.

14. Биофизика: Учебник для вузов / Под ред. В.Г. Артюхова. М.: Академический проект; Екатеринбург: Деловая книга, 2009. - 294 с.

15. Бойчук C.B. Fas-рецептор и его роль при атопических заболеваниях / C.B. Бойчук, И.Г. Мустафин // Экспериментальная и клиническая аллергология. 2001. - № 3. - С. 24-29.

16. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология / Л.Б. Борисов. М.: ООО «Мед. информ. агенство», 2001. - 736 с.

17. Бородин Ю.И. Функциональная морфология иммунной системы / Ю.И. Бородин, В.Н. Григорьев, А.Ю. Летягин. Новосибирск: Наука, 1987.-235 с.

18. Брондз Б.Д. Т-лимфоциты и их рецепторы в иммунологическом распознавании / Б.Д. Брондз. М.: Наука, 1987. - 480 с.

19. Бурместер Г.-Р. Наглядная иммунология / Г.-Р. Бурместер, А. Пецутто. Пер. с англ. -М.: БИНОМ, 2007. 320 с.

20. Васильева Г.И. Цитокины общая система гомеостатической регуляции клеточных функций / Г.И. Васильева, И.А. Иванова, С.Ю. Тюкавкина // Цитология.-2001.-Т. 43, № 12. - С. 1101-1111.

21. Вершигора А.Е. Общая иммунология / А.Е. Вершигора. — Киев: Вища школа, 1990.-736 с.

22. Владимиров Ю.А. Физико-химическме основы фотобиологическихпроцессов / Ю.А. Владимиров, А.Я. Потапенко. М.: Высшая школа, 1989. -199 с.

23. Владимиров Ю.А. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран / Ю.А. Владимиров, Г.Е. Добрецов. М.: Высшая школа, 1980. — 320 с.

24. Влияние рекомбинантного интерферона альфа и обработанных ими мононуклеарных клеток на синтез IgE in vitro лимфоцитами периферической крови человека / Н.С. Прозоровский и др. // Иммунология. — 1992.-№2.-С. 19-21.

25. Волгарева Е.В. Влияние УФ-облучения и УФ-облученной аутологичной крови на функциональное состояние лимфоцитов периферической крови человека / Е.В. Волгарева, А.П. Волгарев, К.А. Самойлова // Цитология. 1990. Т. 32, №.12. -С. 1217-1223.

26. Волкова М.А. Основные представления об интерферонах / М.А. Волкова // Гематология и трансфузиология. 1999. - Т. 44, № 4. - С. 32-36.

27. Волкова Т.О. Молекулярные механизмы апоптоза лейкозной клетки / Т.О. Волкова, H.H. Немова. М.: Наука, 2006. - 205 с.

28. Галактионов В.Г. Иммунология / В.Г. Галактионов. М.: Издательский центр «Академия», 2004. - 528 с.

29. Гамова И.М. Изменения экспрессии мембранных рецепторов иммуннокомпетентных клеток крови, индуцированные различными методами модификации крови. / И.М. Гамова, К.Д. Оболенская, К.А. Самойлова // Цитология. 1991. - Т. 33, № 9. - 63 с.

30. Геннис Р. Биомембраны: Молекулярная структура и функции / Р. Геннис. Пер. с англ. -М.: Мир, 1997. 624 с.

31. Глик Б. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение / Б. Глик, Д. Пастернак. М.: Мир, 2002. - 589 с.

32. Двурекова Е.А. Структурно-функциональное состояние иммуноцитов при их взаимодействии с гуморальными факторами иммунной системы в условиях УФ-облучения: дис. канд. биол. наук / Е.А. Двурекова. Воронеж, 2005.208 с.

33. Дисбаланс программированной гибели CD4+- и СВ8+-лимфоцитов при хронической вирусной инфекции / O.E. Чечина и др. // Гематология и трансфузиология. -2008.-Т. 53,№2.-С. 38-41.

34. Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеинов / Г.Е. Добрецов. М.: Наука, 1989. — 277 с.

35. Дранник Г.Н. Клиническая иммунология и аллергология / Г.Н. Драпник. -М.: Мед. информ. агенство, 2003. 604 с.

36. Дьячкова С.Я. Противовирусные средства: Учебно-методическое пособие для фармацевтических факультетов вузов РФ / С.Я. Дьячкова,

37. B.А. Николаевский. Воронеж. Изд-во ВГУ, 2004. - 112 с.

38. Ершов Ф.И. Интерфероны / Ф.И. Ершов // Вопр. вирусологии. 1998. - № 6. —1. C.247-252.

39. Ершов Ф.И. Интерфероны и их индукторы (от молекул до лекарств) / Ф.И. Ершов, О.И. Киселев. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005. - 368 с.

40. Железникова Г.Ф. Роль гамма-интерферона в иммунопатогенезе инфекций (обзор литературы) / Г.Ф. Железникова // Клиническая лабораторная диагностика. 2008. - № 4. - С. 3-7.

41. Зарецкая Ю.М. Клиническая иммуногенетика / Ю.М. Зарецкая. М.: Медицина, 1983.-208 с.

42. Изучение влияния медиаторов тканевого повреждения на экспрессию поверхностных антигенов лимфоцитами человека in vitro / Г.В. Порядин и др. // Бюллетень эксперим. биол. и медицины. 1995. -№ 2. - С. 196-199.

43. Иммунология / Под ред. У. Пола. Пер. с англ.: В 3-х т. М.: Мир, 1987. -Т. 1.-476 с.

44. Иммуноферментный анализ FAS-рецептора (CD95) у лиц с патологией щитовидной железы / Н.В. Пивень и др. // Иммунопатология, аллергология, инфектология. 2001. - № 3. - С. 15-20.

45. Интерфероновая система человека: биологическая роль и взаимосвязь с иммунной системой / Н.В. Шабалина и др. // Рос. вестн. перинатологии и педиатрии. 1995.-Т. 40, № 5. - С. 29-35.

46. Использование количественной полимеразной цепной реакции для оценки цитокинового профиля человека / Е.И. Батенева и др. // Иммунология. —2006.-Т. 27, № 1.-С. 9-12.

47. Исследование цитокинов при среднетяжелых формах гриппозной инфекции и других ОРЗ в условиях комплексной терапии / И.А. Васильева и др. // Цитокины и воспаление. 2003. - Т. 2, № 2. - С. 24-28.

48. К иммуномодулирующему действию препаратов интерферона. Влияние медицинских препаратов а-интерферона на розеткообразующую активность лимфоцитов крови человека / Ж.И. Авдеева и др. // Вестник дерматологии и венерологии. 1990. - № 7. - С. 7-12.

49. Карандашов В.И. Ультрафиолетовое облучение крови / В.И. Карандашов, Е.Б. Петухов. -М.: Медицина, 1997. 224 с.

50. Карандашов В.И. Фототерапия / В.И. Карандашов, Е.Б. Петухов, B.C. Зродников. М.: Медицина, 2001. - 392 с.

51. Клиническая иммунология и аллергология / Под ред. A.B. Караулова. М.: Медицинское информационное агентство, 2002. - 651 с.

52. Клиническая иммунология и аллергология / Под ред. Г. Лолора мл., Т. Фишера, Д. Адельмана. М.: Практика, 2000. - 806 с.

53. Колтаков И.А. Исследование структурно-функционального состояния Т-лимфоцитов крови человека при модификации а-интерфероном и в условиях УФ-облучения: дис. канд. биол. наук / И.А. Колтаков. Воронеж,2007.-130 с.

54. Косников B.B. Измерение потенциала трансмембранного поля плазматической мембраны лимфоцитов зондом АНС / В.В. Косников, Г.Е. Добрецов // Биологические мембраны. 1989. - Т. 6, № 10. - С. 11121117.

55. Кремлев С.Г. Иммуноферментный анализ изменения экспрессии антигенов II класса главного комплекса гистосовмесгимости под влиянием препаратов интерферона / С.Г. Кремлев, Н.В. Медуницып // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1989. - № 11. - С. 577-580.

56. Крыленков В.А. Электронно-микроскопическое исследование поверхности необлученных и УФ-облученных лимфоцитов крови человека / В.А. Крыленков, М.С. Брудная, Я.Ю. Комиссарчик // Цитология. -1983. Т. 25, № 4. - С. 476-478.

57. Кутушев Ф.Х. Фотомодификация аутокрови в хирургии / Ф.Х. Кутушев и др..//Хирургия, 1990.-№ П.-С. 104-108.

58. Лабораторные и инструментальные исследования в диагностике: Справочник / Под ред. В.Н. Титова. Пер. с англ. М.: ГЭОТАР-МЕД, 2004. - 960 с.

59. Лядова И.В. Молекулы CD27: роль в дифференцировке и миграции Т-лимфоцитов / И.В. Лядова // Иммунология. 2008. - № 4. - С. 244-248.

60. Малашенкова И.К. Интерфероны и индукторы их синтеза (обзор) / И.К. Малашенкова, Э.Б. Тазулахова, H.A. Дидковский // Терапевтический архив.-1998.-№ 11.-С. 35-39.

61. Механизмы регуляции транскрипции интерферон-индуцируемых генов: описание в информационной системе IIG-TRRD / Е.А. Ананько и др. // Молекулярная биология. 1997. - Т. 31, № 4. - С. 701-713.

62. Михелева Е.А. Модуляция физико-химическими агентами структурно-функционального состояния нейтрофилов крови человека: дис. канд. биол. наук / Е.А. Михелева. Воронеж, 2006. - 201 с.

63. Молчанов O.E. Современные тенденции применения препаратов рекомбинантного интерлейкина-2 в онкологии / O.E. Молчанов, М.И. Карелин, Г.М. Жаринов // Цитокины и воспаление. 2002. - Т. 1, № 3. - С. 38-47.

64. Мур М. Интерфероны / M. Мур, М. Даусон // Руководство по иммунофармакологии. М., 1998. - С. 292-301.

65. Наградова Н.К. Взаимодействие «гидрофобной пробы» 1-анилин-8-нафталин-сульфоната с глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназой / Н.К. Наградова, P.A. Асриянц // Доклады АН СССР. - 1971. - Т. 199, № 2. -С.474-477.

66. Новиков Д.К. Оценка иммунного статуса / Д.К. Новиков, В.И. Новикова. -Витебск, М.: Медицина, 1996. 282 с.

67. О влиянии препаратов лейкоцитарного интерферона на экспрессию CD3 комплексов УФ-облученными Т-лимфоцитами крови человека / В.Г. Артюхов и др. // Электромагнитные излучения в биологии : тр. 3 международ, конф. «БИО-ЭМИ-2005». — Калуга, 2005 С. 8-13.

68. Песнякевич А.Г. Основы иммунологии: курс лекций / А.Г. Песнякевич. -Минск: БГУ, 2008. 195 с.

69. Повышенный уровень растворимых антигенов CD50, CD95 и HLA I класса в сыворотке крови больных гепатитом А / И.В. Евсегнеева и др. // Цитокины и воспаление. 2005. -№ 3. - С. 25-27.

70. Покровский В.И. SARS: тяжелый острый респираторный синдром. Новый вирус новая болезнь / В.И. Покровский, О.И. Киселев, П.Г. Назаров // Цитокины и воспаление. - 2003. - Т. 2, № 2. - С. 42-51.

71. Попов В.Ф. Лекарственные формы интерферонов / В.Ф. Попов. М.; Триада-Х, 2002.- 136 с.

72. Потапнев М.П. Апоптоз клеток иммунной системы и его регуляция цитокинами / М.П. Потапнев // Иммунология. 2002. - № 4. - С. 237-243.

73. Продукция рекомбинантного белка интерферона-ß человека в культуре клеток птиц / Е.А. Черентаева и др. // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. — 2008. № 3. - С. 37^-0.

74. Рабсон А. Основы медицинской иммунологии / А. Рабсон, А. Роит, П. Делвз. Пер. с англ. М.: Мир, 2006. - 320 с.

75. Растворимые изоформы рецептора интерферона I типа и антиинтерфероповые антитела как регуляторы действия экзогенного и эндогенного интерферона / A.B. Караулов и др. / Иммунология. 2007. - № 4. - С. 240-243.

76. Регуляция активности мРНК цитокинов интерфероном и его индукторами / М.Ю. Вершинина и др. // Иммунология. 2002. -№ 2. - С. 161-166.

77. Робинсон М.В. Морфология и метаболизм лимфоцитов / М.В. Робинсон, Л.Б. Топоркова, В.А. Труфакин. Новосибирск: Наука, 1986. - 128 с.

78. Ройт А. Основы иммунологии / А. Ройт. М.: Мир, 1991. - 328 с.

79. Рощупкин Д.И. Основы фотобиофизики / Д.И. Рощупкин, В.Г. Артюхов. -Воронеж: ВГУ, 1997.- 116 с.

80. Рощупкин Д.И. Фотобиологические процессы в биомембранах при действии ультрафиолетового излучения на клетки, ткани и органы животных / Д.И. Рощупкин, М.А. Мурина // Биофизика. 1993. - Т. 38, № 6. -С.1053-1068.

81. Самойлова К.А. Триггерные механизмы лечебного эффекта облучения крови УФ лучами / К.А. Самойлова // Цитология. 1991. — Т. 33, № 9. -С. 101-102.

82. Самойлова P.C. B-клеточный иммунитет / P.C. Самойлова, В.М. Манько // Гематология и трансфузиология. 1990. - № 8. - С. 31-34.

83. Самуилов В.Д. Иммуноферментный анализ / В.Д. Самуилов // Соросовский образовательный журнал. 1999. - № 12. - С. 9-15.

84. Связь фенотипа лимфоцитов с поражениями органов и систем при системной красной волчанке / Н.В. Романова и др. // Иммунология. 2005. -Т. 26,№5.-С. 318-319.

85. Сидорова Е.В. Антигенспецифичные рецепторы Т- и В- лимфоцитов и передача сигнала / Е.В. Сидорова // Успехи современной биологии. 1995. - № 5. - С. '627-640.

86. Симбирцев A.C. Цитокины новая система регуляции защитных реакций организма / A.C. Симбирцев // Цитокины и воспаление. - 2002. - Т. 1, № 1. -С. 9-16.

87. Система интерферона и интерферонотерапия: новые возможности и перспективы / В.Г1. Алферов и др. // Рос. сем. врач. 1998. - № 1. - С. 3541.

88. Содержание центральных и эффекторных клеток памяти и функциональные свойства Т-лимфоцитов новорожденных и взрослых при различных способах активации in vitro / В.Ю. Талаева и др. // Иммунология. -2005. Т. 26, № 5. - С. 267-274.

89. Сорокин A.M. Иммуномодулирующая активность отечественных медицинских препаратов интерферона-а / A.M. Сорокин, С.Б. Чекнев, В.П. Кузнецов // Иммунология. 1991. - № 1. - С. 17-20.

90. Стимулирующее действие УФ-излучения на активность антител и комплемента крови человека / К.А. Самойлова и др. // Механизмы влияния облученной ультрафиолетовыми лучами крови на организм человека и животных. JT., 1986. - С. 226-237.

91. Структурно-функциональные модификации лимфоцитов человека, индуцированные воздействием УФ-свега / В.Г. Артюхов и др. //

92. Радиационная биология. Радиоэкология. 2008. -№ 6. - С. 741-747.

93. Татаришвили И.С. «Кэппинг»-эффект и возможности его использования в клинике / И.С. Татаришвили, Д.В. Стефании // Лаб. дело. 1989. - № 2. -С. 16-17.

94. Теория и практика иммуноферментного анализа / A.M. Егоров и др. М.: Высш. шк., 1991.-288 с.

95. Трофимова И.Б. у8-Т-клетки и их распространение в организме / И.Б. Трофимова, Е.В. Задионченко // Вестник дерматологии и венерологии. -2005.-№3.-С. 16-20.

96. Трубицына М.С. Исследование путей реализации апоптоза лимфоцитов человека, индуцированного воздействием УФ-света и активных форм кислорода: дис. канд. биол. наук / М.С. Трубицына. Воронеж, 2009. - 172 с.

97. Фотомодификация иммунокомпетентных клеток крови человека /

98. B.А. Крыленков и др. // Бюллетень эксперим. Биол. и мед. 1987. - № 5.1. C. 600-603.

99. Фрейдлин И.С. Интерлейкин-12 ключевой цитокин иммунорегуляции / И.С. Фрейдлин // Иммунология. - 1999. - № 4. - С. 5-9.

100. Фрейдлин И.С. Клетки иммунной системы / И.С. Фрейдлин, A.A. Тотолян. -СПб.: Наука, 2001.-390 с.

101. Хаитов P.M. Иммунология / P.M. Хаитов, Г.А. Игнатьева, И.Г. Сидорович. -М.: Медицина, 2000. 432 с.

102. Хаитов P.M. Иммунология: учебник для студентов медицинских вузов. М.: ГЭОТ АР-Медиа, 2006. 320 с.

103. Чекнев С.Б. Интерфероны и другие иммуномодуляторы в коррекции активности ЕК-клеток у больных рассеянным склерозом in vitro / С.Б. Чекнев,

104. J1. Латышева, Л.А. Денисов // Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях. -Челябинск, 1990.-С. 221-222.

105. Чучалин А.Г. Терапия / А.Г. Чучалин. М.: ГЭОТАР Медицина, 1997. -1024 с.

106. Шмелев В.А. Ишерферон-гамма, фактор некроза опухолей, тимозин-альфа1 — противоинфекционные и противоопухолевые цигокины и препараты /

107. B.А. Шмелев. М.: «МЕДПРАКТИКА», 2008. - 536.

108. Щербак В.А. Цитокины при иммуномодулирующей терапии детей с хроническим гастродуоденитом / В.А. Щербак, Б.И. Кузпик, Ю.А. Витковский // Иммунология. 2005. - Т. 26, № 6. - С. 342-344.

109. Экспрессия рецепторов для человеческих а- и у-интерферонов на поверхности мононуклеарных клеток периферической крови при вирусных инфекциях / Е.П. Баркова и др. // Вопр. вирусол. 1999. - № 1. —1. C. 16-18.

110. Ярилин А.А. Апоптоз и его место в иммунных процессах / А.А. Ярилин // Иммунология. 1996.-№ 6.-С. 10-23.

111. Ярилин А.А. Основы иммунологии / А.А. Ярилин. — М.: Медицина, 1999. — 608 с.

112. Ярилин А.А. Радиация и иммунитет. Вмешательство ионизирующих излучений в ключевые иммунные процессы / А.А. Ярилин // Радиац. биология. Радиоэкология. 1999. - Т. 39, № 1. - С. 181-189.

113. A defective retroviral vector encoding human interferon alpha 2 can transduce human leukemic cell lines / E. Austruy et al. // Cancer Gene Ther. 1998. - Vol. 5. -P. 247-256.

114. A dual role of IFN-a in the balance between proliferation and death of human CD4+ T Lymphocytes during primary response / E. Dondi et al. // The Journal of Immunology. 2004. - Vol. 2. - P. 3740-3747.

115. A pool of central memory-like CD4 T cells contains effector memory precursors / J.M. Blander et al. // J. Immunol. 2003. - Vol. 170. - P. 2940-2948.

116. Alcami A. Viral mimicry of cytokines, chemokines and their receptors / A. Alcami // Nature Rev. Immunol. 2003. - Vol. 3. - P. 36-50.

117. Alpha/beta interferon inhibits cap-dependent translation of viral but not cellular mRNA by a PKR-independent mechanism / M.Z. Tesfay et al. // J. of Virology. -2008. Vol. 82. - P. 2620-2630.

118. Antiadhesive function of 130-kd glycoform of CD43 expressed in CD4 T-lymphocyte clones and transfectant cell lines / M. Fukuoka et al. // Blood. -2000. Vol. 96. - P. 4267-4275.

119. Arnett K.L. Crystal structure of a human CD3-s/8 dimer in complex with a UCHT1 single-chain antibody fragment / K.L. Amett, S.C. Harrison, D.C.Wiley // PNAS.-2004.-Vol. 101.-P. 16268-16273.

120. Association with FcR gamma is essential for activation signal through NKR-P1 (CD161) in natural killer (NK) cells and NK1.1+ T cells / N. Arase et al. // J. Exp. Med.-1997.-Vol. 186.-P. 1957-1963.

121. Atomic structure of a fragment of human CD4 containing two immunoglobulin-like domains / J. Wang et al. //Nature. 1990. - Vol. 348. - P. 411-418.

122. Biron C.A. Interferons a and (3 as immune regulators a new look / C.A. Biron // Immunity. - 2001. - Vol. 14. - P. 661-664.

123. Bradley J.E. Processed MHC class I alloantigen as the stimulus for CD4+ T-cell depent antibody-mediated graft rejection / J.E. Bradley, A. Mowat, E. Bolton // Immunology Today. 1992. - Vol. 13. - P. 3434-3438.

124. Bronte V. Identification of a CD11 b+/Gr-1+/CD31 + myeloid progenitor capable of activating or suppressing CD8+ T / V. Bronte, E. Apolloni, A. Cabrelle // Blood. -2000. Vol. 96. - P. 3838-3846.

125. Calpain expression in lymphoid cells. Increased mRNA and protein levels aftercell activation / R. Deshande et al. // J. Biol. Chem. 1995. - Vol. 270. - P. 2497-2505.

126. CD4+ Thl cells promote CD8+ Tel cell survival, memory response, tumor localization and therapy by targeted delivery of interleukin 2 via acquired pMHC I complexes / H. Huang et al. // Immunology. 2006. - Vol. 120. - P. 148-159.

127. Comparable potency of IFNa2 and IFN/? on immediate JAK/STAT activation but differential down-regulation of IFNAR2 / Z. Marijanovic et al. // J. Biochem. 2007. - Vol. 407. - P. 141-151.

128. Chuck R. Effect of CD4 Engagement on CD4-T cell receptor complexes / R. Chuck, C. Cantor, B. Doiis // Cellular Immunology. 1993. -Vol. 152. -P. 2110-2119.

129. Crise B. Identification of palmitoylation sites on CD4, the human immunodeficiency virus receptor / B. Crise, J.K. Rose // J. Biol. Chem. 1992. -Vol. 267.-P. 13593-13597.

130. Danilovs J., Ayoub G., Terasaki P.I. B lymphocyte isolation by thrombin nylon wool. In P.I. Terasaki (ed.). Histocompatibility Testing. Los Angeles: UCLA Tissue Typing Laboratory, 1980. P. 287-288.

131. Deans J.P. CD20-medianed apoptosis: signaling through lipid rafts / J.P. Deans, H. Li, M.J. Polyak // Immunology. 2002. - Vol. 107. - P. 176 -182.

132. Determination of the human type I interferon receptor binding site on human interferon-a2 by cross saturation and an NMR-based model of the complex / R. Sabine et al. // Protein Science. 2006. - Vol. 15. - P. 2656-2668.

133. Differential involvement of the CD95 (Fas/APO-1) receptor/ligand system on apoptosis induced by the wild-type p53 gene transfer in human cancer cells / T. Fukazawa et al. // Oncogene. 1999. - Vol. 18. - P. 2189 -2199.

134. Down-modulation of responses to type I IFN upon T cell activation / E. Dondi et al. // The J. of Immunology. 2003. - Vol. 170. - P. 479-756.

135. Down-regulation of interferon y-activated STAT1 by UV light / Y. Aragane et al. // Immunology. 1997. - Vol. 94. - P. 11490-11495.

136. Dunkern T.R. Cell proliferation and DNA breaks are involved in ultraviolet light-induced apoptosis in nucleotide excision repair-deficient Chinese hamster cells / T.R. Dunkern, B. Kaina // Molecular Biology of the cell. 2002. - Vol. 13. -P. 348-361.

137. Dynamic repositioning of CD4 and CD8 genes during T cell development / S. Delaire et al. // J. Exp. Med. 2004. - Vol. 200. - P. 1427-1435.

138. Elmore S. Apoptosis: a review of programmed cell death / S. Elmore // Toxicol. Pathol. 2007. - Vol. 35. - P. 495-516.

139. Evidence that DNA damage triggers interleukin 10 cytokine production in UV-irradiated murine keratinocytes / C. Nishigori et al. // Immunology. — 1996. — Vol. 93.-P. 10354-10359.

140. Expression of functional CD32 molecules on human NK cells is determined by an allelic polymorphism of the FcgammaRIIC gene / D. Metes et al. // Blood. — 1998. Vol. 91. - P. 2369-2380.

141. Fomsgaard A. Cloning and sequences of primate CD4 molecules: diversity of the cellular receptor for simian immunodeficiency virus/human immunodeficiency virus / A. Fomsgaard, V.M. Hirsch, P.R. Johnson // Eur. J.mmunol. 1992. - Vol. 22.-P. 2973-2981.

142. Functional and phenotypic differences between CD4+ and CD4~ T cell receptor-gamma delta clones from peripheral blood / H. Spits et al. // J. Immunol. 1991. -Vol. 147.-P. 1180-1188.

143. Geahlen R.L. Syk and p Tyr'd: signaling through the B cell antigen receptor / R.L. Geahlen // Biochim Biophys Acta. 2009. - Vol. 7. - P. 1.115-1127.

144. Gupta N. Lipid rafts and B cell signalin / N. Gupta, A.L. DeFranco // Semin Cell Dev Biol. 2007. - Vol. 5. - P. 616-626.

145. Harrison G. Type 1 interferon genes from the egg-laying mammal, Tachyglossus aculeantus (short-beaked echidna) / G. Harrison, K.A. McNicol, E.M. Deane // Immunology and Cell Biol. 2004. - Vol. 82. - P. 112-118.

146. Human IFN-a protein engineering: The amino acid residues at position 86 and 90 are important for antiproliferative activity / R. Hu at al. // J. of1.munology.-2001.-Vol. 167.-P. 1482-1489.

147. HussainM. Identification of interferon-alpha 7, -alpha 14, and -alpha 21 variantsin the genome of a large human population / M. Hussain, D.S. Gill, M.-J. Liao // J. Interferon Cytokine Res. 1996. - Vol. 16. - P. 853-859.

148. Identification of genes differentially regulated by interferon alpha, beta, or gamma using oligonucleotide arrays / S.D. Der et al. // Prok. Natl. Acad. USA. -1998.-Vol. 95.-P. 15623-15628.

149. Identification of nine interferon-alpha subtypes produced by Sendai virus-induced human peripheral blood leucocytes / T.A. Nyman et al. // Biochem. -1998. Vol. 329. - P. 295-302

150. IFNs and STATs in innate immunity to microorganisms / T. Decker et al. // The J. of Clinical Investigation. -2002.-Vol. 109.-P. 1271-1277.

151. IFN, regulatory factor-1 plays a central role in the regulation of the expression of class I and II MHC genes in vivo / M. Hobart et al. // J. Immunol. 1997. - Vol. 158.-P. 4260-4269.

152. Global changes in STAT target selection and transcription regulation upon interferon treatments / S.E. Hartman et al. // Genes and development. 2005. -Vol. 19.-P. 2953-2968.

153. Interferon-y: an overview of signals, mechanisms and functions / K. Schroder et al. // J. of leukocyte biology. 2004. - Vol. 75. - P. 163-189.

154. Itoh N. Effect of bcl-2 on Fas antigen-mediated cell death / N. Itoh, Y. Tsujimoto, S. Nagata // J. of Immunology. 1993. - Vol. 2. - P. 621-627.

155. Katze M.G. Viruses and interferon: a fight for supremacy / M.G. Katze, Y. He, M. Gale // Nature Reviews Immunology. 2002. - Vol. 2. - P. 675-687.

156. Khabar Khalid S.A. Post-transcriptional control of the interferon system / Khalid S.A. Khabar, H.A. Young // Biochimie. 2007. - Vol. 89. - P. 761-769.

157. Kontsek P. Forty years of interferon / P. Kontsek, E. Kontsekova // Acta virologica. 1997. - Vol. 41. - P. 349-353.

158. Kulms D. Ultraviolet radiation inhibits interleukin-2-induced tyrosine phosphorylation and the activation of STAT5 in T lymphocytes / D. Kulms,

159. T. Schwarz // J. Biol. Chem. 2001. - Vol. 276. - P. 12849-12855.

160. Kulms D. Ultraviolet radiation-induced interleukin-6 releas in Hela cellss mediated via membrane events in a DNA damage-independent way / D. Kulms,

161. B. Poppelmann, T. Schwarz // J. Biol. Chem. 2000. -Vol. 275 - P. 1506015066.

162. Lambert C. Fas-beyond death: a regenerative role for Fas in the nervous system /

163. C. Lambert, A.M. Landau, J. Desbarats // Apoptosis. 2003. - Vol 8. - P. 551562.

164. Molecular pathogenesis of influenza A virus infection and virus-induced regulation of cytokine gene expression / I. Julkunen et al. // Cytokine and Growth factor reviews.-2001.-Vol. 12.-P. 171-180.

165. Orange J.S. Characterization of early IL-12, IFN-a/p and TNF effects on antiviral state and NK cells responses during murine cytomegalovirus infection / J.S. Orange, C.A. Biron // J. Immunol. 1996. - Vol. 156. - P. 4746-4756.

166. Paillard F. Transcriptional and posl-transcriptional regulation of TcR, CD4 and CD8 gene expression during activation of normal human T lymphocytes / F. Paillard, G. Sterkers, C. Vaquero // The EMBO Journal. 1990. - Vol. 9. -P. 1867-1872.

167. Piehler J. Mutational and structural analysis of the binding interface between type 1 interferons and their receptor Ifnar2 / J. Piehler, G. Schreiber // J. Mol. Biol. 1999. - Vol. 294. - P. 223-237.

168. Ploegh H.L. Viral strategies of immune evasion / H.L. Ploegh // Science. -1998. -Vol. 280.-P. 248-253.

169. Prolonging the half-life of human interferon-a2 in circulation: Design, preparation, and analysis of (2-sulfo-9-fluorenylmethoxycarbonyl)7-interferon-a2 / Y. Shechter et al. // PNAS. 2001. - Vol. 98 - P. 1212-1217.

170. Rabinowitz J. Kinetic discrimination in T-cell activation / J. Rabinowitz, C.Beeson, D. Lyons // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1996. - Vol. 93. -P. 1401-1405.

171. Recruitment of Statl to chromatin is required for interferon-induced serinephosphorylation of Statl transactivation domain / I. Sadzak et al. // PNAS. -2008. Vol. 26. - P. 8944-8949.

172. Reduced T-cell receptor CD3^-chain protein and sustained CD3s expression at the site of mycobacterial infection / U. Seitzer et al. // Immunology. 2001. -Vol. 104.-P. 269-277.

173. Schreiner G.F. Calcium-sensitive modulation of Ig capping: evidence supporting a cytoplasmic control of ligand-receptor complexes / G.F. Schreiner, E.R. Unanue//J. Exp. Med. 1976. - Vol. 143.-P. 15-31.

174. Vaccinia virus infection disarms the mitochondria-mediated pathway of the apoptotic cascade by modulating the permeability transition pore / S.T. Vasilenko et al. // J. Virol. 2001. - Vol. 75. - P. 11437-11448.

175. Sen G.C. Viruses and interferons / G.C. Sen // Annu. Rev. of Microbiol. — 2001. — Vol. 55.-P. 255-281.

176. Smith G.L. Poxviruses: interfering with interferon / G.L. Smith, A.J. Symons, A. Alcami // Semin. Virol. 1998. - Vol. 8. - P. 409-418.

177. Structural and functional heterogeneity of the amino-terminal receptor-binding domain of human interferon-alpha 2 / E. Kontsekova et al. // Inter. J. of Biological Macromolecules. 1999. - Vol. 24. - P. 11-14.

178. The CD4 molecule on CD8+ T lymphocytes directly enhances the immune response to viral and cellular antigens / S.G. Kitchen et al. // PNAS. 2005. - Vol. 102-P. 3794-3799.

179. The crystal structure of human interferon (3 at 2.2 A resolution / M. Kaipusas et al. // Proc. Natl. Acad, of Sci., USA. 1997. - Vol. 94. - P. 11813-11818.

180. The role of receptor internalization in CD95 signaling / K-H. Lee et al. // The EMBO Journal.- 2006. Vol. 25. - P. 1009-1023.

181. The tyrosine kinase Tyk2 controls IFNAR1 cell surface expression /

182. J. Ragimbeau et al. // The EMBO Journal.- 2003. Vol. 22. - P. 537-547.

183. Transcriptional control of the human plasma membrane phospholipid scramblase 1 gene is mediated by interferon-a / Q. Zhou et al. // Blood. 2000. - Vol. 95 -P. 2593-2599.

184. Upregulation of CD4 on CD8+ T cells: CD4d,mCD8bright T cells constitute an activated phenotype of CD8+ T cells / Y.B. Sullivan et al. // Immunology. -2001.-Vol. 103.-P. 270-280.

185. Waring P. Cell death induced by the Fas/Fas ligand pathway and its role in pathology / P. Waring, A. Mullbacher // Immunology and cell biology. 1999. -Vol. 77.-P. 312-317.

186. Wetzel R. Assignment of the disulphide bonds of leukocyte interferon / R. Wetzel // Nature 1981. - Vol. 289. - P. 606-607.

Информация о работе

Вдовина, Вера Александровна
кандидата биологических наук
Воронеж, 2010
ВАК 03.01.02

Диссертация

Исследование механизмов действия УФ-света и различных препаратов α-интерферона на структурно-функциональное состояние компонентов T- и B- клеточного звена иммунитета человека - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы