Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Исследование конформации ингибиторов протеиназ, выделенных из фасоли и картофеля, методами КД-спектроскопии и модификации функциональных групп

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Дронова, Лидия Александровна

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. КОНФОРМАЦИОННЫЕ СВОЙСТВА ГЛОБУЛЯРНЫХ БЕЛКОВ.II

1.1. Принципы организации и стабилизации структуры . II

1.2. Круговой дихроизм.

1.2.1. Определение вторичной структуры из спектров КЦ.

1.2.2. Спектры 1ЭД в ближней УФ-области.

2. КРУГОВОЙ ДИХРОИЗМ ИНГИБИТОРОВ ПРОТЕАЗ И ИХ КОМПЛЕКСОВ

С ПРОТЕИНАЗАМИ.

2.1. Вторичная структура.

2.2. Третичная структура.

2.3. Свойства комплекса ингибитор-протеиназа . 57 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Материалы.

2. Спектрофотометрические измерения.

2.1. Спектры КД и спектры поглощения.

2.2. Собственная флуоресценция.

2.3. Флуоресценция зонда.

3. Гель-хроматография.

4. Седиментационный анализ.

5. сйектрофорез в полиакриламидном геле.

6. Изоэлектрофокусирование в геле.

7. Диссоциация комплекса фермент-ингибитор.

8. Ограниченный протеолиз.

9. Восстановление дисульфидных связей.

10. Оцределение содержания сульфгидрильных групп.

11. Модификация остатков лизина.

12. Модификация остатков аргинина.

13. Модификация остатков тирозина.

14. Определение ингибиторной активности

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛВДОВАНИИ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ КОНФОРМАЦИИ ИНГИЬЖОРОВ ПРОТЕАЗ ИЗ ФАСОЛИ И КАРТОФЕЛЯ.

1.1. Конформация нативных молекул ингибиторов

1.2. Влияние денатурирующих агентов на конформацшо ингибитора из фасоли

1.3. Влияние денатурирующих агентов на конформацию ингибитора из картофеля.

1.4. Флуоресцентные свойства ингибиторов.

2. ОСОБЕННОСТИ КОНФОШАЦИОННЫХ ПРЕВРАЩЕНИЙ БРИ ОБРАЗОВАНИИ ФЕРТЛЕНТ-ИНГИБИТОРНЫХ КОМПЛЕКСОВ.

2.1. Взаимодействие химотрипсина с нативными ингибиторами из фасоли и картофеля.

2.2. Взаимодействие химотрипсина с ингибитором из картофеля, модифицированным с помощью ограниченного протеолиза.

2.3. Связывание флуоресцентного зонда с комплексом химотрипсин-ингибитор из картофеля.

3. ПРИРОДА КОМПЛЕКСОВ ИНГИБИТОРА ИЗ КАРТОФЕЛЯ С ПРОТЕИНАЗАМИ.ИО

3.1. Физико-химическая характеристика.III

3.2. Стехиометрия взаимодействия.

3.3. О взаимосвязи структуры и функции.

4. ВЛИЯНИЕ МОДИФИКАЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ГРУШ ИНГИБИТОРА

ИЗ КАРТОФЕЛЯ НА ЕП) КОНФОШАЦИЮ И ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ С ПРОТЕИНАЗАМИ.

4.1. Восстановление дисульфидных связей

4.2. Модификация остатков основных аминокислот -аргинина и лизина.

4.3. Модификация остатков тирозина.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование конформации ингибиторов протеиназ, выделенных из фасоли и картофеля, методами КД-спектроскопии и модификации функциональных групп"

Белки являются незаменимым компонентом живой материи, они определяют природу основных явлений жизнедеятельности, начиная с ферментативного катализа и кончая процессами мышечной деятельности и нервной проводимости. Белки замечательны тем, что служат не только главным строительным материалом клетки, но и являются регуляторами всех клеточных процессов /12/. Среди белков, выполняющих регуляторную функцию, большое внимание исследователей привлекают ингибиторы протеолитических ферментов. Интерес к этой группе белков обусловлен в первую очередь важностью их физиологических функций. Многочисленными работами доказано участие ингибиторов цротеаз в регуляции таких процессов как свертывание крови, оплодотворение, секреция белковых веществ ферментов, гормонов, токсинов, белков плазмы 1фови и т.д. /66,186,203/. В живом организме ингибиторы могут играть роль защитных агентов, предохраняя белковые вещества клетки от разрушения протеолитическими ферментами /82/. Известно, что овоингибитор, присутствующий в яичном белке птиц, является эффективным ингибитором микробных цротеаз /67/, В семенах фасоли имеется белок-ингибитор, способный подавлять активность цротеаз патогенного гриба Coiietotrichiira lindemuthiantun /148/. Важное физиологическое значение ингибиторов цротеаз подтверждается тем, что их недостаток может приводить к тяжелым заболеваниям животных и человека. Имеются данные, что нарушение равновесия между протеолитическими ферментами и их ингибиторами является одним из факторов, способствующим злокачественному росту клеток /56/. Кроме ингибиторов протеаз, известны ингибиторы других ферментов, относящихся к классу гидролаз, например, ингибиторы липазы и фосфолипазы, инвертазы, дезоксирибонушгеазы, рибонуклеазы /22,97,140/. Специфические вещества, способные действовать как ингибиторы протеолитических ферментов, обнаружены во всех исследованных тканях животных и растений, а также уЦкроорганизмов /166/. Подавляющее большинство природных ингибиторов протеаз составляют вещества белковой природы. Особенностью этой зтруппы белков является высокая устойчивость к денатурации и протеолитическому расщеплению /12,126/. Поскольку протеолитическому расщеплению подвергаются преимущественно молекулы денатурированных белков, то можно предположить, что устойчивость к денатурации является важным свойством ингибиторов протеаз, непосредственно связанным с их функциями. Как известно, биологические функции белков определяются пространственным строением их молекул, поэтому изучение тонкой структуры белков-ингибиторов, с одной стороны, важно для понимания общей устойчивости белков к денатурации и протеолитическому расщеплению, а с другой стороны, представляет интерес с точки зрения эволюции структуры и функции белковых макромолекул. Механизм действия белковых ингибиторов включает образование стабильных комплексов с ферментами, характеризующихся низкими константами диссоциации /198/. Комплексы представляют собой белок-белковые соединения, устойчивые при физиологических условиях рН, в связи с этим систему фермент ингибитор можно рассматривать как удобную модель для изучения высокоспецифических белок-белковых взаимодействий. Следует подчеркнуть, что ключом к пониманию механизма действия белко:ингибиторов служит выяснение детального строения их макромолекул. В настоящее время исследование пространственной структуры белков цредставляет собой, пожалуй, наиболее сложную и наименее разработанную проблему. Это объясняется, с одной стороны, сложностью конформационного анализа гибких полипептидных цепей и, на первый взгляд, отсутствием у них достаточно выраженных предпочтительных ориентации. С другой стороны, при изучении белковых макромолекул встречаются трудности в использовании ряда физических, в частности, спектральных методов, поскольку сигналы от множества родственных группировок "сливаются" в один общий сигнал, который не всезэда удается расчленить даже при довольно высокой разрешающей способности приборов /32/. Поэтому определение тонкой пространственной структуры белков в водном растворе, т.е. в условиях, в которых белки проявляют свои биологические функции, пока еще представляет исключительно сложную задачу, решаемую лишь в отдельных случаях при комплексном использовании новейших физико-химических методов. Прямым методом исследования структуры белков является рентгенографический метод. Именно с помощью этого метода впервые были идентифицированы -спираль и б-структура /17/. Метод рентгеноструктурного анализа позволяет определить полные трехмерные конфигурации ряда белковых молекул вплоть до координат отдельных атомов, однако это касается лишь кристаллического состояния, т.е. статической конформации белка. Выше подчеркивалось, что наиболее ценной является информация о динамических конформационных состояниях белковой макромолекулы в растворе, коррелируемых с ее биологической функцией. Поэтому сейчас широко применяются несравненно более простые методы оптики и спектроскопии, дающие косвенную информацию о структуре, но позволяющие исследовать белки в растворах. Помимо простоты, преимущество оптических методов состоит в возможности использования малых количеств веществ и быстром получении результатов.В зависимости от подхода все оптические методы моясно разделить на две группы. Первая группа включает методы, использующие спектральные и оптические свойства самих белков. В частности, на этом принципе основаны методы спектрополяриметрии круговой дихроизм и дисперсия оптического вращения и спектрофотометрия в инфракрасной, видимой и ультрафиолетовой области /2,37/, Вторая группа методов применяет специальные зонды атомы и атомные группы, обладающие выразительными оптическими характеристиками, среди которых наибольшую популярность приобрели флуоресцентные и парамагнитные зонды /13,16/. Опыт работы с белками и полипептидными соединениями, накопленный за последние годы, позволил довольно точно определить храницы применения различных методов. Ценную информацию о вторичной структуре ряда белков удалось получить с помощью метода дисперсии оптического вращения. Метод ИК-спектроскопии успешно применяется для изучения подвижности в белках и полипептидах /37/. Метод имеет большую чувствительность к складчатой структуре полипептидной цепи. В этом смысле он является црекрасным дополнением к методу дисперсии оптического вращения, с помощью которого моЕно количественно оценить содержание к -спиралей в макромолекуле /15/. Озтраничения в использовании Ж-спектро- скопии связаны, главным образом, с методическими трудностями. ИК-спектры большинства биологических объектов наиболее цросто получить в твердом виде, хотя возможно проведение измерений и в виде растворов. Ряд специальных вопросов пространственного строения был успешно разрешен на основе люминесцентных методов. Методы собственной люминесценции широко используются для изучения структуру ных и динамических характеристик белковой молекулы. С помощью флуоресцентных зондов можно определить размеры и форму белковой молекулы, регистрировать небольшие конформавдонные перестройки, важные для фушщионирования белка. Спектроскопия ядерного магнитного резонанса Ш Р дающая уникальную информацию о поведении отдельных функциональных групп белка в растворе в условиях, близких к нативным, представляет собой необходимое дополнение к методу рентгеноструктурного анализа /16/. В исследованиях четвертичной структуры сложных белков все большее значение приобретают нейтронографические методы и метод электронной микроскопии /36/. Эти методы широко применяются при изучении механизмов образования таких сложных функционирующих надмолекулярных структур, как рибосомы, митохондрии, вирусы, Ж1УТИКИ бактерий и т.д. Способность К ассоциации обнаружена у ряда природных ингибиторов протеаз, однако их молекулы никогда не образуют крупных белковых агрегатов. Одни белки-ингибиторы присутствуют в растворе в виде равновесной смеси мономер rzzzz димер или мономер димер тример /86,91,143,174/, другие образуют четвертичную структуру /141,190/. 7 большинства ингибиторов протеаз функционально активной является молекула, состоящая из одной полипептидной цепи и поэтому при изучении пространственной структуры белков-ингибиторов особого внимания заслуживают методы определения вторичной и третичной структур белков в растворе. В настоящее время 11рактически единственным, кроме рентгеноструктурного анализа, широко доступным методом, позволяющим получать информацию о количественном содержании и неупорядоченных структур в белках является метод кругового дихроизма /2/.в цредставленной диссертационной работе методом кругового дихроизма исследована конформация двух белков-ингибиторов, выделенных из семян фасоли и клубней картофеля. Оба ингибитора характеризуются высоким содержанием дисульфидных связей, но в отличие от ингибитора из фасоли ингибитор из картофеля имеет четвертичную структуру и содержит в 1,5 раза больше остатков гидрофобных аминокислот /20/. В связи с этим в сравнительном аспекте изучено влияние денатурирующих агентов на конформациго ингибиторов, охарактеризованы их флуоресцентные свойства и способность связываться с флуоресцентным зондом. Методом кругового дихроизма изучены особенности взаимодействия .с цротеиназами. Получены данные, позволившие сделать вывод о том, что взаимодействие ингибиторов с химотрипсином сопровождается локальными конформационными изменениями, затрагивающими, главным образом, молекулу ингибитора. Дан детальный анализ состава комплексов, образуемых димерной молекулой ингибитора из картофеля с ферментами. Гфоведена химическая модификация отдельных функциональных групп в молекуле ингибитора из картофеля с целью выяснения их участия в ассоциации субъединиц и проявлении ингибиторной активности. В литературном обзоре рассмотрены воцросы, касающиеся принципов организации и стабилизации глобулярных белков. Специальный

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Дронова, Лидия Александровна

ВЫВОДЫ

1. Исследованы особенности конформации двух белков-ингибиторов сериновых протеиназ - ингибитора из фасоли (белок с pi 4,7) и ингибитора из картофеля (белок с pi 7,3).

2. В нативном состоянии содержание упорядоченных структур в белках не превышает 30%. Преобладающей является /-структура. Содержание J. -спиральных участков составляет 4-7$ для ингибитора из фасоли, в ингибиторе из картофеля ©(-спиральные участки полностью отсутствуют.

3. Анализ спектров КД ингибитора из фасоли позволяет отнести белок к распространенному типу ингибиторов протеиназ из семейства бобовых, характеризующихся высоким содержанием дисульфидных мостиков. В отличие от ингибитора из фасоли ингибитор из картофеля, по-видимому, относится к новому, ранее не описанному семейству белков-ингибиторов протеиназ.

4. Изучение влияния денатурирующих агентов позволило заключить, что: а) важная роль в стабилизации нативной конформации молекул ингибиторов принадлежит дисульфидным связям; б) гидрофобные взаимодействия вносят относительно больший вклад в поддержание нативной структуры молекулы ингибитора из картофеля по сравнению с ингибитором из фасоли. .

5. Опыты по химической модификации белков тетранитрометаном показали, что единственный остаток тирозина в молекуле ингибитора из фасоли расположен на ее поверхности. В димерной молекуле ингибитора из картофеля 6 остатков тирозина располагаются на поверхности, а остальные 10 находятся в скрытом состоянии внутри белковой глобулы. Полученные результаты показывают, что остатки тирозина не цринимают непосредственного участия в реакции взаиы^ действия ингибиторов с протеиназами, а также в ассоциации субъединиц в молекуле ингибитора из картофеля.

6. Взаимодействие ингибиторов из фасоли и картофеля с с-химотрипсином сопровождается конформационными изменениями, носящими локальный характер и затрагивающими преимущественно молекулу ингибитора. В случае образования комплексов ингибиторов с трипсином конформационные изменения реагирующих молекул не наблюдались. Полученные результаты свидетельствуют о большей степени комплементарности реагирующих поверхностей молекул ингибиторов и области активного центра трипсина.

7. Показано, что димерная молекула ингибитора из картофеля образует с ферментом комплексы двух типов, содержащие недиссо-циированную молекулу ингибитора и одну (12Е) или две (Igiy молекулы фермента. Содержание той или иной формы определяется соотношением ингибитор/фермент в реакционной смеси. Более стабильным является комплекс состава IgE.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Особенностью белковых ингибиторов протеаз является устойчивость к денатурации и протеолитическому расщеплению. Как известно, биологические функции белков определяются пространственным строением их молекул. Изучение трехмерной структуры белков-ингибиторов, с одной стороны, важно для понимания общей устойчивости белков к денатурирующим воздействиям и протеолизу, а с другой стороны, может служить ключом к познанию их конкретной физиологической функции.

В настоящей работе исследованы конформационные свойства двух белков-ингибиторов протеаз и особенности их взаимодействия с протеина зами. Оба ингибитора выделены в лаборатории: один из клубней картофеля, а другой из семян фасоли. По ряду физико-химических свойств исследуемые ингибиторы отличаются от других известных ингибиторов, поэтому их следует рассматривать как новые белки.

Изучение конформации этих белков методом КД показало, что спектр ингибитора из фасоли близок к спектрам ингибитора Баумана-Бирк и других низкомолекулярных ингибиторов из бобовых растений. Особенно ярко сходство спектров проявляется в ближней УФ-области. Анализ полученных данных позволил заключить, что ингибитор из фасоли гомологичен ингибитору Баумана-Бирк и, таким образом, является еще одним представителем этого семейства ингибиторов.

Инигибитор из картофеля в дальней УФ-области имеет спектр, сходный со спектром ингибитора из фасоли, но в ближней УФ-облас-ти их спектры сильно различаются.

Ранее было показано, что исследуемые ингибиторы имеют аминокислотный состав, типичный для большинства ингибиторов цротеаз растительного происхождения. Оба белка характеризуются отсутствием триптофана, высоким содержанием дисульфидных связей и остатков пролина. Видимо, поэтому в их структуре преобладают участки неупорядоченной полипептидной цепи. Расчеты показывают, что в состоянии статистического клубка находится более 60% аминокислотных остатков. На долю р -структуры приходится около 30%, а о(-спиральные участки практически отсутствуют.

Белки различаются по содержанию остатков гидрофобных аминокислот: ингибитор из картофеля более гидрофобный, чем ингибитор из фасоли (hps =0,27 для ингибитора из картофеля, nps =0,15 для ингибитора из фасоли). Нто касается остатков ароматических аминокислот, вносящих основной вклад в спектр КД в ближней УФ-области, то в ингибиторе из фасоли (мол.м. 12000) содержится 2 остатка фенилаланина и I остаток тирозина, тогда как в нативной молекуле ингибитора из картофеля (мол.м. 32500) имеется 6 остатков фенилаланина и 16 остатков тирозина.

Несмотря на высокое содержание основных хромофоров, ингибитор из картофеля имеет невыразительный спектр КД в ближней УФ-области. Сравнение со спектрами других ингибиторов показало, что в ближней УФ-области спектр этого ингибитора не имеет аналогий. Более того, характер спектра дает основание полагать, что ингибитор из картофеля не принадлежит ни к одному из семейств ингибиторов, предложенных Ласковским.

Исследование влияния денатурирующих агентов на конформацию белков-ингибиторов, а также результаты опытов по химической модификации функциональных групп и опытов с флуоресцентным зондом показали, что важная роль в стабилизации нативной структуры принадлежит дисульфидным связям, а гидрофобные взаимодействия играют большую роль в формировании нативной структуры ингибитора из картофеля по сравнению с ингибитором из фасоли.

Из двух исследуемых ингибиторов четвертичной структурой обладает ингибитор из картофеля. По тлеющимся данным, остатки тирозина могут играть важную роль в образовании олигомерной структуры белков, представляющей собой либо фермент-ингибиторный комплекс, либо четвертичную структуру нативного белка. Например, при участии остатков тирозина цротекает процесс агрегации инсулина /109/. По имеющимся данным ацетшшрование остатка тирозина, локализованного вблизи химотрипсинсвязывающего центра в ингибиторе из лимской фасоли, сопровождается потерей антихимотриптичес-кой активности ингибитора /115/.

В настоящей работе возможность участия остатков тирозина в ассоциации субъединиц ингибитора из картофеля, а также во взаимодействии с протеиназами была исследована методом химической модификации. Обработка белка тетранитрометаном показала, что на поверхности молекулы локализовано 6 остатков тирозина. В присутствии DS-Na нитруются практически все (I3+I) остатки тирозина, хотя ингибитор из картофеля в этих условиях сохраняет четвертичную структуру. Модификация поверхностных тирозинов не влияет на его способность ингибировать химотрипсин, но снижает его антитрип-тическую активность. Изменение стехиометрии иншбирования трипсина в результате нитрования косвенно свидетельствует о большей степени комплементарности трипсинсвязываицего центра ингибитора области активного центра трипсина.

Подтверждением тому служат данные, полученные цри изучении взаимодействия ингибитора из картофеля с протеиназами методом 1Щ, Этот ингибитор эффективно подавляет трипсин, образуя прочный комплекс, при этом не было обнаружено заметной разницы между спектром комплекса и суммой спектров компонентов. Это означает, что в процессе комплексообразования конформационные изменения не происходят.

В случае ингибитора из фасоли взаимодействие с трипсином также не сопровождалось конформационными превращениями реагирующих молекул. На наш взгляд, отсутствие изменений в спектрах КД свидетельствует о высокой степени комплементарности реактивных центров ингибиторов области активного центра трипсина.

Конформационные изменения наблюдали цри взаимодействии исследуемых ингибиторов с химотрипсином. Тот факт, что эти изменения имели место, главным образом, в той области спектра, в которой вклад ингибитора больше, послужил предпосылкой к постановке опытов по модификации ингибитора из картофеля с помощью ограниченного цротеолиза. В кислой среде в присутствии каталитических количеств фермента происходит разрыв одной пептидной связи в реактивном центре ингибитора. Такой модифицированный ингибитор с расщепленной пептидной связью способен к образованию комплекса, но реакция идет значительно медленнее. При смешивании модифицированного ингибитора с химотрипсином наблюдается возрастание разницы между спектром комплекса и суммой спектров компонентов. Полученные результаты достаточно оцределенно показывают, что конформационные изменения в большей степени затрагивают молекулу ингибитора. Этот вывод особенно важен, так как в большинстве работ, посвященных исследованию взаимодействия ингибиторов с ферментами методом КД, лишь констатируется наличие конформацион-ных изменений, но не уточняется, какой из реагирующих белков претерпевает эти изменения.

Уже отмечалось, что из двух ингибиторов четвертичной структурой обладает только ингибитор из картофеля. Молекула этого ингибитора состоит из двух идентичных субъединиц, при этом каждая субъединица содержит два реактивных центра, один для трипсина, а другой для химотрипсина.

Показано, что ингибитор из картофеля образует с протеина-зами комплексы разного состава. Из них устойчивым является комплекс, состоящий из одной димерной молекулы ингибитора и одной молекулы фермента. В случае ингибитора субтилизина из streptomyces, который подобно ингибитору из картофеля является димером, также наблюдалось образование комплексов, содержащих одну или две молекулы субтилизина. Однако в данном случае стабильным оказывается комплекс, состоящий из одной димерной молекулы ингибитора и двух молекул субтилизина.

Можно предположить, что различие в количественном составе стабильных комплексов обусловлено различным расположением субъединиц в этих ингибиторах.

Согласно современным представлениям о расположении субъединиц в олигомерных белках, возможны два типа ассоциаций: изоло-гическая и гетерологическая /76/. Димеры являются наиболее распространенной формой олигомерных белков. Для изологической ди-меризации характерно связывание двух одинаковых участков прото-меров по принципу комплементарности, при этом образуется симметричная структура. Значительно реже встречается ассимметричная димеризация, примером которой может служить дрожжевая гексокиназа. В результате гетерологической ассоциации, осуществляющейся по принципу связывания в домене, создаются стерические помехи для присоединения других молекул белков. В случае ингибитора из картофеля нестабильность комплексов с двумя молекулами фермента может быть следствием гетерологической ассоциации субъединиц ингибитора.

Есть основания предполагать, что четвертичная структура ингибитора не является обязательным условием образования комплексов, но, по всей вероятности, способствует прочности связывания с ферментом. Так хорошо известно, что каждый из доменов, на которые удалось разделить ингибитор Баумана-Еирк, сохранял ингибиторную активность, но их комплексы с ферментами диссоциировали быстрее, чем с нативным ингибитором /95/.

Наличие четвертичной структуры, а также склонность к ассоциации, характерная для многих ингибиторов, особенно растительного происхождения, вероятнее всего является результатом физико-химических свойств самих молекул.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Дронова, Лидия Александровна, Москва

1. Баскова И.П., Струкова С.М., Кваст М., Черняк В.Я., Глотова В.Л. Диссоциация на субъединицы и изменение активности тромбина при малеилировании. - Биохимия, 1973, т. 38, № 1. с. 212-225.

2. Болотина И.А. Изучение структуры белков методом кругового дихроизма. В сб.: Молекулярная биология, ВИНИТИ, М., 1973, т. I, с. 61-104.

3. Болотина И.А., Чехов В.О., Лугаускас В.Ю., Финкельштейн А.В., Пгицын О.Б. Определение вторичной структуры белков из спектров кругового дихроизма. I. Белковые реперные спектры для ^jb и нерегулярной структур. - Молек. биол., 1980, т. 14, № 4, с. 891-901.

4. Болотина И.А., Чехов В.О., Лугаускас В.Ю., Пгицын О.Б. Определение вторичной структуры белков из спектров кругового дихроизма. II. Учет вклада ^e-изгибов. Молек. биол., 1980, т. 14,4, с. 902-909.

5. Болотина И.А., Чехов В.О., Лугаускас В.Ю., Пгицын О.Б. Определение вторичной структуры белков из спектров кругового дихроизма. III. Белковые реперные спектры для антипараллельной и параллельной jb-структур. Молек. биол., 1961, т. 15, № I, с.167-175.

6. Бурштейн Э.А. Люминесценция белковых хромофоров. Биофизика, 1976, т. 6. Итоги науки и техники. - 213с.

7. Вайнштейн Б.К., Борисов В.В. Структура и функции глобулярных белков в свете данных рентгеноструктурного анализа. Успехи биол. химии, 1973, т. 14, с. 91-145.

8. Валуева Т.А., Мосолов В.В. Трипсинсвязывающий центр ингибитора сериновых протеиназ из картофеля. Биоорганическая химия, 1976, т. 2, № 10, с. 1389-1394.

9. Валуева Т.А., Зимачева А.В., Мосолов В.В. ХимотрипсинсвяБывающий центр ингибитора с ершовых протеиназ из картофеля. Биоорганическая химия, 1977, т. 3, № 9, с. 1273-1279.

10. Валуева Т.А., Зимачева А.В., Мосолов В.В. Локализация трипсин-связывающего центра в молекуле ингибитора сериновых протеиназ из картофеля. Докл. АН СССР, 1977, т. 236, № 6, с. 1513- 1515.

11. Веялюз Л., Легран М., Горожан М. Оптический круговой дихроизм. -М.: Мир, 1967. 318 с.12. 1}эин Н.М., Нейрат X. Белки. М.: Иностр. лит., 1969, т. 3, ч.2.

12. Добрецов Г.Е. Исследование структуры белков методом флуоресцентных зовдов. В сб.: Молекулярная биология, ВИНИТИ, М., 1975, т. 6, с. 34т-93.

13. Добрецов Г.Е., Владимиров Ю.А. Исследование белков и мембран с помощью флуоресцентных зондов. Успехи биол. химии, 1975, т. 16, с. II5-I34.

14. Джерасси К. Дисперсия оптического вращения. М.: Иностр. лит., 1969. - 397 с.

15. Дудкин С.М., Сахаровский С.Г. Применение метода ЯМР для изучения структуры и функции ферментов. В сб.: Молекулярная биология, ВИНИТИ, М., 1975, т. 6, с. I05-I5I.

16. Леви А., Сикевиц Ф. Структура и функция клетки. М.: Мир, 1971. -5ЬЗ с.

17. Лим В.И., Мазанов А.Л., Ефимов А.В. Стереохимическая теория пространственной структуры глобулярных белков. I. Высоко спиральные промежуточные структуры. Молек. биол., 1978, т. 12, № I, с. 206-213.

18. Лим В.И. Стереохимическая теория пространственной структуры глобулярных белков. II. Переход высокоспиральной промежуточнойструктуры в нативцую. Молек. биол., 1978, т. 12, № I, с. 214-218.

19. Малова E.JI. Выделение и характеристика белка-ингибитора сери-новых протеиназ из клубней картофеля. Дисс. . кацц. биол. наук. - Москва, 1976. - 165 с.

20. Маурер Г.Р. Диск-электрофорез. М.: Мир, 1971. - 247 с.

21. Мосолов В.В. Протеолитические ферменты. М.: Наука, 1971. -413 с.

22. Мосолов В.В., Малова E.JI., Валуева Т.А., Щульмина А.И. Свойства ингибитора сериновых протеиназ из картофеля. Биоорганическая химия, 1975, т. I, № 10, с. 1449-1457.

23. Мосолов В.В., Федуркина Н.В., Валуева Т.А., Соколова Е.В. Спирторастворимый ингибитор трипсина из фасоли. Прикл. биох. и мшфобиол., 1976, т. 12, № I, с. 37-44.

24. Мосолов В.В., Федуркина Н.В., Валуева Т.А. Выделение и свойства изоингибиторов трипсина из фасоли. Биохимия, 1977,т. 42, № 7, с. I20I-I2II.

25. Мосолов В.В., Щульмина А.И., Дронова JI.A., Черняк В.Я. Взаимодействие белка-ингибитора из картофеля (белок с pi 7,3) с протеиназами. Биохимия, 1978, т. 43, № 6, с. 1079-1085.

26. Мосолов В.В., Валуева Т.А., Малова E.JI., Колосова Г.В., Чебан А.Н. Строение реактивных центров белка-ингибитора сериновых протеиназ из фасоли. Биохимия, 1982, т. 47, № 4, с. 561-568.

27. Мосолов В.В. Белковые ингибиторы протеолитических ферментов. -Дис. . докт. биол. наук, Москва, 1979. - 396 с.

28. Мосолов В.В., Валуева Т.А., Колосова Г.В. Выделение белка-ингибитора химотрипсина из семян гледичии (Gleditsia triacan-thos L. ). Биохимия, 1982, т. 47, № 12, с. 2015-2021.

29. Мосолов В.В., Колосова Г.В., Валуева Т.А., Дронова JI.A. Ингибитор трипсина из семян гледичии (Gleditsia triacanthos L.). -Биохимия, 1982, т. 47, № 5, с. 797-803.

30. Нортроп Д., Кунитц М., Харриотт Р. Кристаллические ферменты. -М.: Иностр. лит., 1950. 347 с.

31. Овчинников Ю.А. Исследование конформационных состояний пептидов и белков. В сб. Современные проблемы химии пептидов и белков. М.: Наука, 1969, с. 70-87.

32. Пгицын О.Б., Финкелыптейн А.В. Механизмы самоорганизации третичной структуры глобулярных белков. Биоорганическая химия, 1978, т. 4, № 3, с. 349-353.

33. Пгицын О.Б., Финкелыптейн А.В. Проблема предсказания структуры белка. В сб.: Молекулярная биология, ВИНИТИ, М., 1979, т. 15, с. 6-41.

34. Пгицын О.Б. Исследование сравнительной стабильности d-спира-лей, jb-структуры и клубкообразного состояния синтетических полипептидов в органических растворителях. В сб.: Современные проблемы химии пептидов и белков. - М.: Наука, 1969,с. 95-105.

35. Шглазов Б.Ф. Сборка биологических структур. М.: Наука, 1970,156 с.36а. Чебан А.Н. Множественные формы ингибиторов сериновых протеиназ в семенах фасоли (Phaseolus vulgaris L. ). Дис. . кацц. биол. наук. Москва, 1982. - 144 с.

36. Чиргадзе Ю.Н. Инфракрасная спектроскопия голипетвдов и белков. -В сб.: Молекулярная биология, ВИНИТИ, М., 1973, т.1, с. 9-34.

37. Andersson L.-O. Physicоchemical properties of antithrombin III. Physiol. Inhibit. Uoagul., i'ibrinolys, 1979, p. 39-42.

38. Anfinsen C.B. The influences of Three-dimensional configuration on the chemical reactivity and stability of proteins. -J. Polymer Sci., 1961, vol. 49, И 1, p. 31-45.

39. Anfinsen G.B. Principles that govern the folding of protein chains. Science, 1973, vol. 181, N 20, p. 223-230.

40. Baba M., Hamaguchi K., Ikenaka T. States of tyrosyl residues and circular dichroism of Kunitz trypsin inhibitor. J. Bio-chem., 1969, vol. 65, N 1, p. 113-121.

41. Barrett A.J., Starkey P.M. The interaction of ^ macro-globulin with proteinase. - Biochem. J., 1973, vol. 133,1. N 4, p. 709-724.

42. Beilsteins Nandbuch der organischen Chemie, Berlin, 1973, vol. 17, p. 432-433.

43. Belitz H.-D., Kaiser K.P., Santarius K. Trypsin and e(-chy-motrypsin inhibitors from potatoes: isolation and some properties. Biochem. and Biophys. Res. Communs, 1971, vol. 42, JU 3, p. 420-427.

44. Birk J. Naturally occurring protease inhibitors. In: Methods in Enzymology, 1976, vol. 45, part B, p. 639-888.

45. Blow D.M., Wright U.S., Kukla D., Ruhlman A., Steigemann W., Huber R. A model for the association of bovine pancreatic trypsin inhibitor with chymotrypsin and trypsin. J. Mol. Biol., 1972, vol. 69, N 1, p. 137-144.

46. Bjork I., Danielsson A., Fenton J., Jornvall H. The site in human antithrombin for functional proteolytic cleavage by human thrombin. PEBS Letters, 1981, vol. 126, N 2, p. 257260.

47. Bosterling В., Quast U. Soybean trypsin inhibitor (Kunitz)is doubleheaded kinetics of the interaction of oi- chymotrypsin with each side. Biochim. et biophys. acta, 1981, vol. 657, N 1, p. 58-72.

48. Burger M.M. Proteolytic enzymes initiating cell division and escape from contact inhibition of growth. Nature, 1970, vol. 227, N 2, p. 170-171.

49. Chang C.T., Wu C.-S.C., Yang J.T. Circular dichroic analysis of protein conformation; inclusion of the j*>-turns. -Analyt. Biochem., 1978, vol. 91, N 1, p. 13-31.

50. Chen У.Н., Yang I.T. A new approach to the calculation of secondary structures of globular proteins by optical rotatory dispersion and circular dichroism. Biochem. and Biophys. Res. Communs., 1971, vol. 44, N 6, p. 1285-1291.

51. Chen Y.-H., Yahg J.T., Chan K.H. Determination of the helix and Jb-form of proteins in aqueous solution by circular dichroism. Biochemistry, 1974, vol. 13, N 16, p. 3350-3359.

52. Chou P.Y., Fasman G.D. j£-turns in proteins. J. Mol. Biol., 1977, vol. 105, N 2, p. 135-175.

53. Chothia C., Janin J. Principles of protein-protein recognition. Nature, 1975, vol. 256, N 5520, p. 705-708.

54. Crestfield A.M., Moore S., Stein V/.H. The preparation and enzymatic hydrolysis of reduced and S-carboxymethylated proteins. J. Biol. Chem., 1963, vol. 238, N 2, p. 622-627.

55. Cowgill R.W. Fluorescence and protein structure. XI. Fluorescence quenching by disulfide and sulfhydryl groups. Biochim. et biophys. acta, 1967, vol. 140, N 1, p. 37-44.

56. Danishefsky I., Zweben A., Slomiany B.L. Human antithrombin III. Carbohydrate components and associated glycolipid. -J. Biol. Chem., 1978, vol. 253, N 1, p. 32-37.

57. Davie E.W., Fujukawa K. The role of serine proteinases inthe early phase of blood coagulation. Biochem. Soc. Trans., 1975, vol. 5, N 5, p. 1241-1243.

58. Davis J.G., Zahnley J.G., Donovan J.W. Separation and characterization of the ovoinhibitors from chicken egg white. -Biochemistry, 1969, vol. 8, N 5, p. 2044-2053.

59. Dixon H.B.F., Perham R.N. Reversible blocking of amino groups with citraconic anhydride. Biochem. J., 1968, vol. 109,1. N 2, p. 312-314.

60. Edelhoch H., Steiner R.F. Changes in physical properties accompanying the interaction of trypsin with protein inhibitors. J. Biol. Chem., 1965, vol. 240, N 7, p. 2877-2882.

61. Ellman G.L. Tissue sulfhydryl groups. Arch. Biochem. and Biophys., 1959, vol. 82, N1, p. 70-77.

62. Pelgenhauer K. Evalution of molecular size by gel electro-phoretic techniques. Hoppe-Seyler»s Z. Physiol. Chem., 1974, vol. 355, N 10, p. 1281-1290.

63. Finkelstein A.V., Ptitsyn O.B., Kozitsyn S.A. Theory of protein molecule self-organization. II. A comparison ofcalculated thermodynamic parameters of local secondary structures with experiments. Biopolymers, 1977, vol. 16, ИЗ, p. 497-524.

64. Freedman M,H., Grossberg A.L., Pressman D. The effects ofcomplete modification of amino groups on the antibody activity of antihapten antibodies. Reversible inactivation with maleic anhydride, Biochemistry, 1968, vol. 7, К 5, р» 19411950.

65. Fridrich P., Hajdn J., Bartha F. Subunit arrangement in oli-gomeric enzymes. In: Protein: Struct. Funct. and Ind. Appl. FEBS Fed. Eur. Biochera. Soc. 12th Meet., Dresden, 1978, Oxford e.a., 1979, p. 239-248.

66. Gennis L.S., Cantor C.R. Double-headed protease inhibitors from black-eyed peas. II. Structural studies by optical ab-sorbtion and circular dichroism. J. Biol. Chem., 1976, vol. 251, К 3, P. 741-746.

67. Gennis L.S., Cantor C.R. Double-hesded protease inhibitors from black-eyed peas. IV. Half-site reactivity in the formation of complexes with trypsin and chymotrypsin. J. Biol. Chem., 1976. vol. 251, К 3, p. 754-762.

68. Gertler A., Ben-Valid G. Stoichiometry of interaction of chicken ovoinhibitor with pancreatic trypsin, chymotrypsin and elastase I. Europ. J. Biochem., 1980, vol. 110, IT 2, p. 571-577.

69. Glaser C.B., Karic L. Spectral studies on two genetic forms of the human serum proteinase inhibitor, alpha-1-antitrypsin. Int. J. Peptide and Protein Res., 1978, vol. 12, N 5, p. 284-292.

70. Graham J.S., Ryan С.A. Accumulation of a metallocarboxypep-tidase inhibitor in leaves of wounded potato plants. Biochem. and Biophys. Res. Coramuns, 1981, vol. 101, N 4, p. 1164-1170.

71. Greenfield W.J., Fasman G.D. Computed circular dichroism spectra for the evalution of protein conformation. Biochemistry, 1969, vol. 8, N 10, p. 4108-4116.

72. Gubensek T., Ritonja A. CD study of viper venom trypsin inhibitor. Period, biologorum, 1981, vol. 83, H 1, p. 140-142.

73. Hamaguchi K., Ikeda K., Lee Ch.-Y. Optical rotatory dispersion and circular dichroism of neurotoxins isolated from the venom of Bungaris multicinctus. J. Biochem., 1968, vol. 64, N4, p. 503-506.

74. Harry J.B., Steiner R.F. Characterization of the self-association of a soybean proteinase inhibitor by membrane osmometry. Biochemistry, 1969, vol. 8, N 12, p. 5060-5064.

75. Harpel P.C., Hayes M.B. Studies on the subunit structure of ^-macroglobulin. I. New fragments generated by heat treatment. II. Binding of plasmin to ^g-macroglobulin sub-units. Physiol. Inhib. Fibrinilysis, 1979, p. 231-238.

76. Haynes R., Feeney R.E. Transformation of active-site lysine in naturally occuring trypsin inhibitors. A basis for a general mechanism for inhibition of proteolytic enzymes. -Biochemistry, 1968, vol. 7, N 8, p. 2879-2885.

77. Hirono S., Nakamura K.T., Ii'saka Y., Mutsui Y. Crystal structure of the complex of subtilisin BPN* with its protein inhibitor Streptomyces subtilisin inhibitor. The structure atо4,3 A resolution. J. Mol. Biol., 1979, vol. 131, N 4, p. 855-869.

78. Hochstrasser К., Illchmann К., Werle E. Die Aminosaurese-quenz des sperzifischen trypsininhibitors aus Maissamen, Charakterisierung als polymers. Hoppe-Seyler's Z. physiol. Chem., 1970, vol. 351, Ы 6, p. 721-728.

79. Hochstrasser K., Feuth H., Steiner 0. Zur Charaklerisierung der saurestabilen Proteaseninhibitoren aus Human plasma. -Hoppe-Seyler's Z. physiol. Chem., 1973, vol. 354, N 8, p. 927-932.

80. Huber R., Kukla D., Steigemann W., Deisenhofer J., Jones A. Structure of the complex formed by bovine trypsin and bovine pancreatic trypsin inhibitor refinement of the crystal structure analysis. Bayer - Symp. Y Prot. Inhib., 1974, p. 497512.

81. Ikenaka Т., Odani S., Koide T. Chemical structure and inhibitory activities of soybean protease inhibitors. Bayer -Symp. Y Prot. Inhibit., 1974, p. 325-343.

82. Ikenaka Т., Odani S. Structure function relationships of soybean double - headed proteinase inhibitors. - Proc. 11th FEBS Meet. Regulatory Proteolytic Enzymes and Their Inhibitor, Oxford Pergamon, 1978, p. 207-217»

83. Irshad M., Sharma C.B. Purification and properties of an ck -amylase protein-inhibitor from Arachis hypogasa seeds.- 158

84. Biochim. et biophys. acta, 1981, vol. 659, N 2, p. 326-333.

85. Janin J.t Sweet R.M., Blow D.M. The mode of action of soybean trypsin inhibitor as revealed by crystal structure analysis of the complex with porcine trypsin. Bayer-Symp. Y Prot. Inhib., 1974, p. 513-520.

86. Janin J., Chothia U. Stability and specificity of protein -protein interactions. The case of the trypsin trypsin inhibitor complexes. - J. Mol. Biol., 1976, vol. 100, N 2, p. 197-211.

87. Jeppson J.-O., Laurell C.B. Function and chemical composition of cA^ antitrypsin. - Proteases and Biol. Contr. Cold Spring Harbor, 1975, p. 405-414.

88. Jibson M.D., Birk Y., Bewley T.A. Circular dichroism spectra of trypsin and chymotrypsin complexes with Bowman Birk or chickpea trypsin inhibitor. - Int. J. Peptide and Protein Res., 1981i, vol. 18, N 1, p. 26-32.

89. Jirgensons В., Kawabata M., Capetillo S. Circular dichroism of soybean trypsin inhibitor and its derivatives. Die Makromol. Ohemie, 1969, vol. 125, N 1, p. 126-135

90. Jirgensons B. The sensitivity of some nonhelical proteins to structural modification by sodium dodecyl sulfate and its homologues. Biochim. et biophys. acta, 1973, vol. 328,1. H 2, p. 314-322.

91. Jirgensons В. Conformational transitions of non helical proteins effected by dodecyl sulfate. - Biochim. et biophys. acta, 1976, vol. 434, W 1, p. 58-68.

92. Jirgensons B. Circular dichroism and conformation of human-1-antitrypsin. Biochem. and Biophys. Kes. Commune, 1977, vol. 493, N 2, p. 352-358.

93. Kahn P.C. The interpretation of near ultraviolet circular dichroism. - In: Methods in Enzymology, 1979, vol. 61, part H, p. 339-378.

94. Kay E., Strikland E.H., Billups C. Near ultraviolet circular dichroism and absorption spectra of chicken ovomucoid and acetylated derivatives at 297 and 77°k. J. Biol. Chem., 1974, vol. 249, N 3, p. 797-802.

95. Kassel В., Radicevic M., Berlow S., Peanasky R.J., Laskov-ski M.Sr. The basic trypsin inhibitor of bovine pancreas. An improved method of preparation and amino acid composition. J. Biol. Chem., 1963, vol. 238, N 10, p. 3274-3279*

96. Kassel B. Proteinase inhibitors from egg white. In: Methods in Enzymology, 1970, vol. 19, Р- 890-906.

97. Kay E. Structure function relation ships of proteinase inhibitors from soybean (Bowman-Birk) and lima bean. Modification by H-acetylimidazole. - J. Biol. Chem., 1979, vol. 254, N 16, p. 7648-7650.

98. Klotz G.M., Langerman N.R. Quaternary structure of proteins. Ann. Rev. Biochem., 1970, vol. 39, p. 27-68.

99. Kortt A.A. Isolation and properties of a chymotrypsin inhibitor from winged bean seed (Psophocarpus tetragonolobus) (L.) Dc.). Biochim. et biophys. acta, 1980, vol. 624, N 1, p. 237-248.

100. Kortt A.A. Specificity and stability of the chymotrypsin inhibitor from winged bean seed (Psophocarpus tetragonolobus (L.) Dc.). Biochim. et biophys. acta, 1981, vol. 657, IT 1, p. 212-221.

101. Kortt A.A., Jermyn M.A. Acacia proteinase inhibitors. Purification and properties of the trypsin inhibitors from Acacia elata seed. Europ. J. Biochem., 1981, vol. 115, N 3, p. 551-557.

102. Kosower E.M. The effect of solvent on spectra. I. A new empirical measure of solvent polarity Z-values. J. Amer. Chem. Soc., 1958, vol. 80, N 13, p. 3253-3260.- 161

103. Kowalski D,, Leary T.R., McKee R.E., Sealock R.W., Wang D., Laskowski M,Jr. Replacement, insertions, and modifications of amino acid residues trypsin inhibitor (Kunitz). Bayer- Symp. V Prot. Inhibit., 1974, p. 311-324.

104. Kunitz M., Nortrop J.H. Isolation from beef pancreas a crystalline trypsinogen, trypsin, a trypsin inhibitor and an inhibitor-trypsin compound. J. Gen. Physiol., 1936, vol. 19, N 7, p. 991-1007.

105. Kurachi K., Schmer G., Herraodson M.A., Teller D.C. Characterization of human, bovine and horse antithrombin III. -Biochemistry, 1976, vol. 15, N 2, p. 368-373.

106. Mc Lachlan A.D. Threefold structural pattern in the soybean trypsin inhibitor (Kunitz). J. Mol. Biol., 1979, vol.133, N 4, p. 557-563.

107. Laskowski M.Jr., Sealock R.W. Protein proteinase inhibitors- molecular aspects. The Enzymes, 1971, vol. 3, p. 375401, Acad. Press, N.Y. - London.

108. Laskowski M.Jr. Resume. Bayer - Symp. V. Proteinase Inhibitors, 1974, p. 679-684.

109. Laskowski M.Jr., Kato I. Protein inhibitors of proteinases.-Ann. Rev. Biochem., 1980, vol. 49, p. 593-626.

110. Laurent Т.О., Killander I. A theory of gel filtration and its experimental verification. J. Chromat., 1964, vol.14, N 3, p. 317-330.

111. Leach B.S., Pish W.W. Resistance of soybean trypsin inhibitors (Kunitz) to denaturation by guanidinium chloride.

112. J. Biol. Chem., 1977, vol. 252, N 15, p. 5239-5243. 131• Levitt M., Chothia C. Structural patterns in globular proteins. Nature, 1976, vol. 261, N 5561, p. 552-557.

113. Levitt M., Greer J. Automatic identification of secondary structure in globular proteins. J. Mol. Biol., 1977, vol. 114, N 2, p. 181-293.

114. Lewis P.N., Momany F.A., Scheraga H.A. Chain reversals in proteins. Biochim. et biophys. acta, 1973, vol. 303, N 2, p. 211-229.

115. Linderstrom-Lang K.U. Proteins and enzymes. Lane Medical Lectures. Stanferd Univ. Press, 1955, Chem. Soc. (London), Spec. Publ. 2.

116. Lin W.-H., Means G.E., Feeney R.E. The inhibitory properties of avain ovoinhibitors against proteolytic enzymes. Biochim. et biophys. acta, 1971, vol. 229, I 1, p. 176-185.

117. Lo T.N., Cohen A.B., James H.L. The interaction of Д-1-an-titrypsin with soluble and sepharose-bound elastase. -Biochim. et biophys. acta, 1976, vol. 453, N 2, p. 344-356.

118. Madison V., Schellman J. Optical activity of polypeptides and proteins. Biopolymers, 1972, vol. 11, N 5, p. 10411076.

119. Mahoney W.C., Kurachi K., Hermodson M.A. Formation and dissociation of the covalent complexes between trypsin and two homologous inhibitors, ©(^-antitrypsin and antithrombin III, Europ. J. Biochem., 1980, vol. 105, N 3, p. 545-552.

120. Martodam R.R., Liener I.E. The interaction of ^-antitrypsin with trypsin, chymotrypsin and human leukocyte elastase as revealed by end group analysis. Biochim. et biphys. acta, 1981, vol. 667, N 2, p. 328-340.

121. Matsushita K., Uritani I. Isolation and characterization of acid invertase inhibitor from sweet potato. J. Biochem., 1976, vol. 79, N 3, p. 633-639.- 163

122. Melville J.С., Ryan С.A. Chymotrypsin inhibitor I from potatoes. A multisite inhibitor composed, of subunits. Arch. Biochem. and Biophys., 1970, vol. 138, N 2, p. 700-702.

123. Melville J.C., Ryan C.A. Chymotrypsin inhibitor I from potatoes. J. Biol. Chem., 1972, vol. 247, N 11, p. 34453453.

124. Osuga D.T., Peeney R.E. Electrophoretic studies of interactions between proteolytic enzymes and inhibitors. Arch. Biochem. and Biophys., 1967, vol. 118, N 2, p. 340-346.

125. Ovadi J., Libor S., Elodi P. Spectrophotometric determination of histidine in proteins with diethylpyrocarbonate. -Acta Biochim. et Biophys. Acad. Sci. Hung, 1967, vol. 2,a 4, p. 455-458.

126. Ozawa K., Laskowski M.Jr., The reactivity site of trypsin inhibitors. J. Biol. Chem., 1966, vol. 241, N 17, p.39553961.

127. Pfiel W. The problem of the stability of globular proteins. Molec. and Cell. Biochem., 1981, vol. 40, N 1, p. 3-28.

128. Qasin M.A., Salahuddin A. The conformational consequence of maleylation of amino groups in ovalbumin. J. Biochem., 1979, vol. 85, N 4, p. 1029-1035.

129. Richardson M., Barker R.D.J., Mc Millan M.T. Re examination of the molecular weight of chymotryptic inhibitor I from potatoes. - Biochem. Soc. Trans., 1976, vol. 4, N 6, p. Ю77-Ю79.

130. Richardson M. The proteinase inhibitors of plants and microorganisms. Phytochemistry, 1977, vol. 16, N1, p.159

131. Salvesen G.S., Barrett A.J. Covalent binding of proteinases in thier reaction with c< macroglobulin. - Biochem. J., 1980, vol. 187, N 3, p. 695-701.

132. Smirnoff P., Khalef S., Birk J., Applebaum S.W. A trypsin and chymotrypsin inhibitor from chick peas (Cicer arieti-num). Biochem. J., 1976, vol. 157, N 3, p. 745-751.

133. Sottrup Jensen L., Stepanik T.M., Jones C.M., Petersen Т.Е., Magnusson S. Studies on the primary structure of human <A g - macroglobulin. - Physiol. Inhib., Coagul. Fibri-nol., 1979, p. 255- 271.

134. Strickland E.H. Near ultraviolet circular dichroism bands of aromatic amino acids and peptides. - Handb. Biochem. Mol. Biol., 3rd Ed., 1976, vol. 3, p. 167-173.

135. Strickland E.H. Near ultraviolet circular dichroism bands of proteins. - Handb. Biochem. Mol. Biol. 3rd Ed., 1976, vol. 3, p. 141-166.

136. Teale F.W.J., Weber G. Ultraviolet fluorescence of the aromatic amino acids. Biochem. J., 1957, vol. 65, N 3, p. 476-482.

137. T85. Tschesche H. Biochemie naturlicher proteinase inhibitoo-ren. - Angew. Chem. Internat. Edit., 1974, vol. 13, p. 1028.

138. Tschesche H., Kupfer S., Klauser R., Pink E., Fritz "H. S Structure, biochemistry and comparative aspects of mammalian seminal plasma acrosin inhibitors. Protides Biol. Fluids Proc. 23rd Colloq. Brugge, 1975, Oxford e.a., 1976, p. 255-266.

139. Tsukamoto S., Ohno M. Modification of papain with tetra-nitromethane. J. Biochem., 1978, vol. 84, N 6, p. 16251632.

140. Tung Jwu-Sh., Knight C.A. Effect of charge on the determination of molecular weight of proteins by gel electrophoresis. Biochem. and Biophys. Res. Coinmuns, 1971, vol. 42, N 6, p. 1,117-1121.

141. Turner D.C., Brand L. Quantitative estimation of protein binding site polarity. Fluorescence of N-arylaminonaphtha-lenesulfonates. Biochemistry, 19^8, vol. 7, N 10, p. 3381-3390.

142. Vincent J.-P., Lazdunski M. Trypsin pancreatic trypsin inhibitor association. Dynamics of the interaction and roleof disulfide bridges. Biochemistry, 1972, vol. 11, N 16, p. 2967-2977.

143. Vincent J.-P., Peron-Renner M., Pudles J., Lazdunski M. The association of anhydrotrypsin with the pancreatic trypsin inhibitors. Biochemistry, 1974, vol. 13, N 20, p. 4205-4211.

144. Vincent J.-P., Schweitz H., Lazdunski M. Guanidination of lysine-15 in active site of the basic pancreatic trypsin inhibitor. Implications for complex formation with trypsin and chymotrypsin. Europ. J. Biochem., 1974, vol. 42, N 2, p. 505-510.

145. Vincent J.-P., Lazdunski M. Pre-existence of the active site in zymogens, the interaction of trypsinogen with the basic pancreatic trypsin inhibitor (Kunitz). PEBS Letters, 1976, vol. 63, N 2, p. 240-244.

146. Vogel R., Trautschold I., Werle E. Natural proteinase inhibitors. Acad. Press, N.Y. - London, 1968.

147. Watanabe К,, Matsuda Т., Sato Y. The secondary structure of ovomucoid and its domains as studied by circular dich-roism. Biochim. et biophys. acta, 1981, vol. 667, N 2, p. 242-250.

148. Waugh D.F. Protein-protein interactions. Adv. Protein Chem., 1954, vol. 9, p. 326-437.

149. Weber K., Osborn M. The reliability of molecular weight determinations by dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis. - J. Biol. Chem., 1969, vol. 244, N 16, p. 44064412.

150. Weber E., Papamokos E., Bode W., Huber R. Crystallization, crystal structure analysis and molecular model of the third domain of Japanese quail ovomucoid, a Kazal type inhibitor. J. Mol. Biol., 1981, vol. 149, N 1, p. 109-123.

151. Willadsen P., Riding G.A. On the biological role of a proteolytic enzyme inhibitor from the ectoparasitic tick Boophilus microplus. - Biochem. J„ 1980, vol. 189, К 2,p. 295-303.

152. Woody R.W., Tinoco I.Jr. Optical rotation of oriented helixes. III. Calculation of the rotatory dispersion and circular dichroism of the alpha and 3-jQ-helix. - J. Chem. Phys., 1967, vol. 46, N 12, p. 4927-4945.

153. Wrigley C.W. Gel electrofocusing. In: Methods in Enzymo-logy, 1971, vol. 22, p. 559-564.

154. Yamamoto M., Ikenaka T. Studies on soybean trypsin inhibitors. J. Biochem., 1967, vol. 62, N 2, p. 141-149.

155. Yoshida C., Yoshikava M., Takagi T. Near UV circular dichroism of trypsin inhibitor of Adzuki beans attributable to disulfide groups. J., Biochem., 1976, vol. 80, N 3, p. 449454.

156. Yoshida С., Yoshikawa M. Purification and characterization of proteinase inhibitors from Adzuki beans (Phaseolus angu-laris). J. Biochem., 1975, vol. 78, H 5, p. 935-945.

157. Rees D.C., Lipscomb W.N. Structure of potato inhibitor complex of carboxypeptidase A at 5,5 A0 resolution. Proc. Hatl. Acad. Sci. USA, 1980, vol. 77, N1, p. 277-280.

158. Schmid F.X. A native-like intermediate on the ribonuclease A folding pathway. I. Detection by tyrosin fluorescence changes. Europ. J. Biochem., 1981, vol. 114, N 1, p. 105-109.

159. Andrews P. Estimation of the molecular weights of proteins by sephadex gel-filtration. Biochem. J., 1964, vol. 91, И 2, p. 222-233.