Бесплатный автореферат и диссертация по географии на тему

Исследование естественной резистентности крови журавлей при разведении в неволе

ВАК РФ 11.00.11, Охрана окружающей среды и рациональное использование природных ресурсов

Автореферат диссертации по теме "Исследование естественной резистентности крови журавлей при разведении в неволе"

На правах рукописи

ОД

ШАБАЛИН Геннадий Семенович

ИССЛЕДОВАНИЕ ЕСТЕСТВЕННОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ КРОВИ ЖУРАВЛЕЙ ПРИ РАЗВЕДЕНИИ В НЕВОЛЕ

Специальность 11.00.11 - Охрана окружающей среды и рациональное

использование природных ресурсов

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 1998

Работа выполнена в Московской Государственной Академии Ветеринарной Медицины и Биотехнологии им. К.И. Скрябина

Научный руководитель:

доктор ветеринарных наук, профессор БЕССАРАБОВ Б.Ф.

Официальные оппоненты:

- доктор биологических наук, профессор ГАБУЗОВ О.С.

доктор биологических наук, профессор ШЕСТАКОВ В.А.

Ведущая организация:

Гематологический Научный Центр Российской Академии Медицинских наук

Чашита состоится "..<?£?." !90Я г, ч-сго :гд

заседании Диссертационного Совета Д. 002.48.03 по защите диссертаций ;т:. -апс:-;ан;;г ученой степени доктора биологических наук при Институте проблем экологии и эволюции им. А.Н. Северцова РАН ( Москва, Ленинский проспект, 33 ).

Отзывы на реферат просим направлять по адресу: 117071, Москва, В-71 Ленинский проспект, 33, ученому секретарю Диссертационного Совета Д.002.48.03.

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке Отделения общей биологии РАН, Москва, Ленинский проспект, 33.

Автореферат разослан ". . 1998 г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета кандидат географических наук

Янковская И.Н.

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность темы. Нарушение экосистем, связанное с их 1нтропогенным преобразованием все чаще приводит к сокращению численности i исчезновению многих биологических видов. Конвенция о биологическом зазнообразии ( Рио-де-Жанейро, 1992г. ) наряду с мерами по сохранению зиоразнообразия " in - situ " предусматривает и сохранение генофонда путем зазведения в неволе ( " ex - situ " ). Благодаря разведению в искусственных условиях и последующей интродукции животных в природную среду уже удалось :пасти и увеличить численность ряда видов ( зубр, американский сокол, авайская казарка и др. ). Разрабатываются и осуществляются аналогичные троекты по ориксу, лошади Пржевальского, американскому кондору, алеутской санадской казарке и ряду других видов, для многих из которых единственная 1адежда на выживание связана именно с разведением в условиях неволи, /спешное разведение диких животных в неволе, в количествах достаточных для штродукции, требует разработки технологий, включающих весь комплекс юоветеринарных вопросов.

Разработке таких технологий для сельскохозяйственных, домашних и мбораторных животных человечество посвятило не одну сотню лет, тогда как зазведение и содержание большинства видов диких животных " ex - situ " до сих тор остается информационным пробелом. Поэтому для сохранения ценного енофонда, целесообразно максимально использовать современные достижения в збласти зооветеринарии, их методические подходы и принципы, с учетом зиологических особенностей разводимого вида.

Важное место в решении проблем сохранения биоразнообразия, при разведении животных " ex - situ ", занимают вопросы жизнеспособности кивотных, что неразрывно связано с их врожденной устойчивостью к теблагоприятным факторам среды обитания или естественной резистентностью.

Особый интерес к естественной резистентности крови( ЕР ) связан с тем, гго показатели ЕР дают не только четкое представление о физиологическом юстоянии организма, но и позволяют оценить состояние здоровья животного и 1рогнозировать возможность сохранения вида.

Подавляющее большинство исследований, направленных на изучение :стественной резистентности, проводилось на лабораторных и ¡сельскохозяйственных видах животных. В дикой природе такие работы крайне малочисленны, хотя отдельные сведения встречаются в публикациях.

Журавли представляют собой интересный объект изучения во - первых юстольку поскольку аспекты естественной резистентности этих птиц до сих пор ie известны, а во - вторых сами по себе это реликтовая группа птиц, большей тстью состоящая из редких видов, находящихся под угрозой исчезновения и уже зазводимых во многих питомниках мира, в том числе в России.

В ходе исследований, помимо собственно описания физиологических юрм некоторых гематологических и иммунологических показателей крови для саждого из представленных видов журавлей, установлены межвидовые зсобенности, приведено обсуждение полового диморфизма и выявлены юзрастные отличия. Более того, для каждого вида приведены факты сезонных солебаний уровня естественной резистентности крови.

Цель и задачи исследований. Изучение естественной резистентности срови журавлей проводилось в первую очередь с целью сохранения их генофонда мониторинг, поддержание искусственной и естественной популяций ), возможности проведения ветеринарного контроля и оценки состояния здоровья.

Кроме достижения конкретных практических задач, работа представляла для нас чисто научный интерес. В задачи наших исследований входило:

1) Изучение морфологии лейкоцитов периферической крови журавлей.

2) Определение гематологических норм.

3) Изучение неспецифического ( врожденного ) иммунитета, обусловленного главным образом фагоцитами.

4) Изучение сезонных колебаний гематологических и иммунологических параметров с учетом возраста, пола и вида.

Научная новизна.

1. Впервые дана подробная морфологическая характеристика гранулоцитам и агранулоцитам периферической крови трех видов журавлей.

2. Представлен новый метод окраски мазков крови, модернизированы методики определения фагоцитарной активности гетерофилов и НСТ - тест, предложен раздельный подсчет ЛКБ в цитоплазме гетерофилов.

3. Установлены гематологические и иммунологические нормы для серого, японского журавля и стерха, с учетом сезонных колебаний, возраста и пола птиц.

4. Описаны достоверные межвидовые отличия уровня естественной ре^истеншосш предстазленных видов журавлей, с учегом их возраст, пола и вргчгеки гола.

Практическая ценность работы. Использование результатов наших исследований полезно при сравнительной оценке реактивности отдельных особей, как содержащихся в вольерных условиях, так и свободноживущих.

Результаты исследований имеют большое практическое значение доя диагностики и прогнозирования патологических процессов у птиц во время гтрпводимой тт::очой диспансеризации в различных центрах, где содержатся журавли. Приведенный табличный материал может служить в качестве сравнения, для оценки физиологического состояния птенцов, а также взрослых самок и самцов трех видов журавлей в разные периоды года.

Предложенные методы контроля за здоровьем журавлей, могут использоваться как в местах их содержания, так и в полевых условиях, для изучения состояния защитных свойств популяций этих птиц. Работа представляет интерес при изучении других редких и исчезающих видов. Поскольку подобные методы исследований способны дать качественную характеристику врожденной устойчивости организма, выявляя при этом " сильных " и " слабых " особей, то их применение может прояснить причины сокращения численности и исчезновения редких видов животных.

На основании проведенных исследований получены данные, которые позволяют оценить состояние особей в ограниченных популяциях и возможность их сохранения, прогнозировать исход влияния экстремальных условий, а также позволяют оценить реактивность животных и определять половую принадлежность.

Апробация работы. Полученные результаты исследований успешно апробированы на базе журавлиного питомника Окского Государственного Биосферного Заповедника ( ОГБЗ ), а также в полевых условиях на территории ОГБЗ и Куноватского заказника.

Материалы диссертации были доложены на научной конференции Московской Государственной Академии Ветеринарной Медицины и Биотехнологии ( МГАВМиБ ) ( 1993, 1994 ).

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 180 страницах, в том числе 139 стр. машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, описатге материала и методик, результаты собственных исследований, их обсуждение, выводы, список литературы ( 277 источников, в том числе 119 иностранных ) и приложения. Работа иллюстрирована 16 таблицами и 32 рисунками.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 научных статей.

Положения, выносимые на защиту:

1. Описание картины крови трех видов журавлей.

2. Определение физиологической нормы уровня естественной резистентности крови серого, японского журавлей и стерха.

3. Изучение сезонных колебаний гематологических и иммунологических показателей крови.

4. Изучение видовых особенностей естественной резистентности крови журавлей.

5. Описание гематологических и иммунологических признаков полового диморфизма, представленных видов журавлей.

6. Изучение изменения уровня естественной резистентности крови в процессе онтогенеза.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Работа проводилась в течение трех лет с 1992 по 1995 гг. главным образом на базе журавлиного питомника ОГБЗ, а также в его окрестностях во время осеннего отлова серых журавлей ( Grus grus ), в Московском зоопарке и на территории Куноватского Заказника ( Ямало- ненецкий АО). За истекший срок, во время экспедиционных работ в Крыму и Каргополъеком район? (Архангельской области ), проводились также визуальные наблюдения за серыми л:}равля\\ш, с в Xinira"o;oi: гссудпр;:ъс::нм: запсЕсдгапсе ( Амурская область ) -за японскими ( Grus japonensis ). Сбор образцов крови в журавлином питомнике проводили 4 раза в год. Гематологические исследования выполняли сразу после взятия крови, а детальное изучение фагоцитарной активности, HCT и ЛКБ, вели после транспортировки фиксированных мазков крови на кафедру Птицеводства и болезней птиц ( МГАВМ и Б ).

Объектами наших исследований стали три вида журавлей: серый журавль (Grus grus ), японский журавль ( Grus japonensis ) и стерх ( Grus leucogeranus ), из которых два последних вида занесены в Красную книгу Международного Союза Охраны Природы и природных ресурсов, СССР, РФ. За истёкший срок было обследовано 145 стерхов, 63 японских журавлей и 23 серых, содержащихся в журавлином питомнике ОГБЗ. Во время работ в Куноватском заказнике по проекту " Стерх " проводилась еженедельная диспансеризация стершат (интродуцированных в природу ) в течение месяца. Кроме того, было обследовано 8 серых журавлей, пойманных в местах осенних концентраций в районе ОГБЗ. Отлов проводился с помощью препарата альфа- хлоралозы (Williams Lovett 1973 ), добавляемого в подкормочное зерно.

За истекший период проведено 924 гематологических и 1155 гистохимических исследований крови.

2.1. Гематологические исследования.

- Общее количество лейкоцитов и эритроцитов определяли по общепринятой методике с использованием камеры Горяева ( Болотников, Соловьев 1980).

- Определение гематокритного числа ( Харитонов 1978 ), основано на разделении цельной крови на две фракции: форменные элементы и плазму, под действием центробежной силы.

- Определение лейкограммы крови осуществляли по стандартной методике (Болотников, Соловьев 1980).

- Изучение картины крови проводили с помощью окрашивания мазков -по Романовскому - Гимза, Лейшману, Май - Грюнвальду и Паппенгейму (Никитин 1946 - 56; Крюков 1946; Гольдберг 1973; Васильев 1948; Матыжев 1969; Карпуть 1986 ). При описании морфологии лейкоцитов был использован последний способ окрашивания.

Полевые условия, работа с большим количеством материала и ограниченное время работы стали предпосылками для разработки и использования более простой методики окрашивания. Наш метод можно использовать при дифференциальном подсчете лейкоцитов и при определений фагоцитарной активности гетерофилов.

Сущность этого способа заключается в использовании двух анилиновых красителей: Май- Грюнвальда и Азура А.

Сперва сухой, фиксированный мазок помещают в емкость с неразведенной краской Май - Грюнвальда на 10 минут. Затем он вынимается, промывается чистой проточной водой, высушивается и на 30 секунд помещается в емкость с 0,25 % ра - м Азура А. После вторичной промывки и высушивания мазок готов для микроскопирования.

Краска Май - Грюнвальда хорошо окрашивает цитоплазму и зернистость, а Азур А - структуру ядра. Несколько уступая в богатстве красок методу Паппенгейма, описанная, простая методика позволяет хорошо идентифицировать форменные элементы крови журавлей делая возможным определение возраста гранулоцитов крови.

2.2. Исследования естественной резистентности крови.

- содержание лизосомальных катионных белков ( ЛКБ ) в цитоплазме гранулоцитов определяли по методу Пигаревского, доработанного Колабской с соавторами (Пигаревский 1979; Колабская, Шорникова и др. 1987 ).

Помимо стандартного определения ЛКБ в гранулоцитах, было проведен раздельный подсчет ЛКБ в гетерофилах, причем в каждой возрастной категории этих клеток.

- Фагоцитарную активность гетерофилов ( ФА ) определяли по методу Колабской с соавторами ( 1980), в нашей модификации, включающей следующие методические приемы:

1. Для фагоцитоза использовалась цельная гепаринизированная кровь, со сроком хранения не более 2-х часов.

2. Густоту микробной взвеси доводили до 2-х миллиардов микробных клеток в 1 мл. раствора Рингера, под контролем оптического стандарта мутности.

3. После инкубации смеси ингредиентов и центрифугирования, осадок не рессуспендировали. Из верхнего светлого слоя, состоящего главным образом из лейкоцитов, готовили мазки.

4. Окраску фиксированных мазков проводили по нашей методике, описанной выше.

Подсчет клеток с последующим определением фагоцитарной активности проводили в рамках стандартной методики. Помимо обшей фагоцитарной активности гетерофилов, мы определяли фагоцитарную активность для разных возрастных категорий гетерофилов.

- Реактивность гетерофилов изучали с помощью спонтанного ( сп. HCT - тест ) и индуцированного теста восстановления нитросинего тетразолиевого (инд. HCT - тест ), предложенного Виксманом и Маянским ( 1980 ). Их методика оказалась наиболее подходящей для изучения птичьей крови. Некоторые методические изменения сделали ее выполнимой при минимальных лабораторных условиях с использованием наиболее распространенных реактивов.

1. Вместо буферов использовали готовый раствор Рингера.

2. После инкубации суспензию не рессуспендировали. Пробирки с содержимым центрифугируются 5 минут при 1500 об\мин. После центрифугирования надосадочную жидкость сливали, а из верхнего слоя готовили мазки.

3. Окраску мазков проводили 2 % раствором метилового зеленого в течение 15 минут.

4. Инкубация при t = 40 С.

Изучение активации гетерофилов проводили классическим методом, с помощью сп. и инд. HCT теста. Помимо принятого определения общей реактивности гетерофилов, была установлена активизация разных возрастных категорий этих клеток.

Статистическую обработку результатов исследования проводили с помощью статистического пакета CSS для PC.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Картина крови журавлей.

Во время изучения картины крови трех представленных видов журавлей, были установлены общие характерные признаки лейкоцитов - базофилов, эозинофилов, гетерофилов, лимфоцитов и моноцитов. Исследования, проводимые в рамках указанной выше методики, показали отсутствие существенных морфологических межвидовых особенностей, хотя некоторые отличительные признаки все-таки отмечались. К таким можно отнести форму и размеры клеток, которые варьируют в зависимости от видовой принадлежности. Так гранулоциты серого журавля больше, чем у стерха и еще в большей степени превышают размеры гранулоцитов японского журавля. Агранулоциты всех представленных видов журавлей - примерно одинаковых размеров. Более округлая форма гетерофилов и эозинофилов присуща птенцам и молодым птицам, клетки этой категории птиц к тому же имеют меньшие размеры. Для описания картины крови использовались клетки, без патологоморфологических отклонений.

Учитывая отсутствие существенных морфологических признаков между лейкоцитами крови трех видов журавлей, мы представили общую характеристику форменных элементов крови.

Гетерофилы.

Среди гранулоцитов, чаще встречаются гетерофилы (псевдоэозинофилы). Клепси округлой формы, цитоплазма окрашивается в бледно - розовый, иногда буроватый цвет, ( у миелоцитов, реже у юных гетерофов, цитоплазма нежно - голубая ). Хорошо видно ядро, которое по мере развития клетки приобретает сегментированную форму. В периферической крови птиц вс-речдются четыре возрастных категории гетерофилов - миелоциты, юные, палочкоядерные и сегментоядерные. Помимо этих клеток, в крови встречаются старые, распадающиеся формы.

Возраст клеток определяется по степени сегментированное™ ядра - у молодых форм ядро округлой формы. По мере роста гетерофилов, ядро приобретает более вытянутую форму, далее постепенно скручивается образуя сегменты.

Отс^пготается ядро в коричневый тет и им?ет размытый вид. В цитоплазме встречаются гранулы двух основн^к типов: круглые азурофильные и .специфические палочковидные. Аэурофильные зерна окрашены в ярко - красный цвет, а палочковидные в буроватый. Второй тип зерен присущ только гетерофилам. Размеры и форма таких зерен могут варьировать, но в подавляющем большинстве гранулы представлены в виде веретен разного размера. Специфические зерна заметно крупнее азурофильных. Гранулы не заполняют цитоплазму полностью, между ними остаются свободные участки.

Эозинофилы.

Эти клепси реже встречаются в периферической крови журавлей. По своей структуре они сильно напоминают гетерофилы. Для правильной идентификации этих двух видов клеток подходят очень немногие методы окрашивания. Из апробированных нами годятся две - Паппенгейма и в нашей модификации. По размерам эозинофилы уступают первому типу клеток, они имеют почти правильную круглую форму. Даже в не окрашенном виде эти клетки отличаются более высоким коэффициентом преломления. Цитоплазма слабо -голубого цвета. В ней хорошо видно темно - коричневое ядро, в котором четко просматриваются окси- и базихроматиновые участки. Для эозинофилов также характерна сегментированность ядра, которая определяет возраст клетки. Структура последнего прокрашивается очень хорошо и не имеет размытый вид, как у гетерофилов.

В цитоплазме видны гранулы светло - рыжего ( морковного ) цвета. Зернистость густо заполняет цитоплазму, почти не оставляя свободного промежуточного места. Зерна круглой или слегка вытянутой формы, значительно меньше гранул гетерофилов.

Базофилы.

Третий тип гранулоцитов - базофилы, в периферической крови журавлей встречается крайне редко. Это не только самые малочисленные, но и самые мелкие клетки. Базофилы невозможно спутать с другими лейкоцитами. Они имеют округлую форму. В цитоплазме, окрашенной в красновато-фиолетовый цвет расположено довольно крупное, темно - коричневое ядро, круглой формы (сегментированность не обнаружена ), с неровными краями. Структура ядра выражена слабо, имеет размытый вид.

В цитоплазме хорошо видны очень крупные, круглые гранулы фиолетового цвета. Обычно зерен не много - 4 - 5, расположены они на некотором удалении друг от друга, иногда они лежат на ядре.

Лимфоциты.

Лимфоциты - самые многочисленные клетки крови. У всех представленных видов журавлей кровь имеет лимфоцитарный профиль, исключение составляют птенцы с гетерофильным профилем крови. Эти клетки различаются по размерам, мы отмечали большие, средние и малые лимфоциты. Общим для всех трех типов клеток является большое круглое ядро и цитоплазма, занимающая меньшую площадь. Хорошо просматривается структура ядра, окрашенного в темно - коричневый цвет.

Цитоплазма светло - голубого цвета, в которой всегда хорошо выражена более светлая перинуклеарная зона. В цитоплазме больших и особенно средних лимфоцитов может находится незначительное количество мелких, круглых азурофильных зерен. У лимфоцитов журавлей часто встречаются зафиксированные в момент передвижения псевдоподии. Возрастные категории лимфоцитов отличаются между собой не только размерами, но и площадью цитоплазмы. У молодых, более крупных лимфоцитов цитоплазма занимает большую площадь, чем у зрелых форм.

Моноциты.

Это большие клетки крови округлой, иногда неправильной формы с большим количеством цитоплазмы, равномерно окрашивающейся в пепельный цвет - без перинуклеарной зоны. В цитоплазме мононуклеарных клеток часто видны вакуоли. Иногда встречаются фагоцитирующие клетки. В цитоплазме моноцитов расположено большое ядро, с бухтообразными вдавлениями и лопастями. Интенсивность окраски ядра моноцитов гораздо слабее, чем у лимфоцитов. Зернистость почти не видна.

Эритроциты.

Количество эритроцитов в периферической крови журавлей в несколько раз превышает обшее количество всех остальных форменных элементов крови. Эритроциты журавлей эллипсоидной формы, с продолговатым ядром внутри. Размеры варьируют в зависимости от вида птицы и возраста.

Цитоплазма окрашивается в красный цвет, ядро в светло - коричневый, структура ядра достаточно хорошо просматривается.

Тромбоциты.

По форме эти клетки похожи на эритроциты, но меньше последних почти вдвое. Количество тромбоцитов в крови журавлей значительно меньше, чем красных кровяных клеток и варьирует главным образом в зависимости от физиологического состояния птиц. При изучения мазков крови часто встречались скопления тромбоцитов. Отличаются эти клетки от эритроцитов не только размерами. К отличительным особенностям относится: более вытянутая форма клетки, наличие мелких азурофильных зерен в цитоплазме, очень бледная окраска цитоплазмы и размытый вид круглого ядра.

Клетки Тюрка.

В крови иногда встречаются довольно крупные клетки овальной формы с эксцентрично расположенным ядром эллипсоидной формы. Площадь ядра и цитоплазмы примерно одинаковы. Клетки Тюрка напоминают большие лимфоциты, но несколько крупнее их. Цитоплазма окрашена в темно - синий цвет, перинуклеарная зона отсутствует. Ядро темно - коричневого цвета.

3.2. Физиологическая норма уровня естественной резистентности крови серого, японского журавлей и стерха.

В результате проведенных исследований установлены физиологически нормы для гематологических ( Общее содержание лейкоцитов и эритроцито] гематокрит, лейкоцитарная формула ) и показателей естественной резистентно« организма ( ЛКБ, ФА и НСТ- тест ), для последних приведены сведения п каждой возрастной категории гетерофилов, встречающихся в периферическо крови журавлей. Полученные данные представлены в 71 таблице, 55 из которы сведены в раздел приложения. Таблицы включают данные по трем вида журавлей в каждый сезон года, с учетом пола и возраста птиц.

3.3. Сезонные колебания гематологических и иммунологическн показателей.

Сезонные колебания гематологических и иммунологических показателе трех видов журавлей имеют общую тенденцию, которая описана ниже, достоверные видовые особенности представлены в последующем разделе.

3.3.1. Гематологические показатели.

В осенний период года в периферической крови стерхов и японски журавлей наблюдается повышенное содержание эритроцитов и лейкоците] сочетающееся с уменьшением значения гематокритного числа ( Рис. 1, 2 Лейкоцитоз обоснован повышенным выходом в периферическую кров палочкоядерных гетерофилов.

Сезонные колебания лейкоцитов в

крови журавлей

60000,00

. 40000,00-

а 20000,00

лето

осень

Рис. 1

серый японский

стерх

зима

Зимой количество эритроцитов и лейкоцитов в периферической кров стерхов и общий объем последней уменьшаются ( Рис. 2 ). Умеренная лейкопеш обоснована главным образом снижением числа всех гранулоцитов, срел которых чаще встречаются более зрелые, сегментоядерные клетки. Количеств моноцитов в зимний период года повышается.

Весной содержание циркулирующих эритроцитов в периферическо крови уменьшается ( Рис. 2 ). Вместе с тем наблюдается увеличение объема крови

Сезонные колебания эритроцитов в крови журавлей Рис. 2

—стерх | японский - серый

весна

лето

осень

зима

за счет плазмы; и лейкоцитоз, характеризующийся повышенным содержанием всех видов белых клеток в крови, причем наряду с высокой концентрацией зрелых, сегментоядерных гранулоцитов, в периферической крови наблюдается появление достаточно большого количества молодых клеток.

Летом в циркулирующей крови журавлей установлено повышенное количество эритроцитов, снижение объема плазмы и уменьшение обшего числа лейкоцитов, главным образом за счет агранулоцитов и гетерофилов. Исключение состамяют базофилы и эозинофилы, количество которых в летний период максимально.

3.3.2. Показатели естественной резистентности крови журавлей.

Осенью в периферической крови журавлей циркулирует максимальное число активизированных гетерофилов, с повышенным индексом активизации (ИАГ ) ( результаты сп. НСТ - теста ). В это время года установлена максимальная ФА и повышенное содержание ЛКБ в гетерофилах ( Рис. 3, -1 ). Функциональный резерв этих клеток осенью максимальный (инд. НСТ - тест).

Сезонные колебания содержания АКБ

Зимой наблюдается снижение числа активизированных клеток и ИАГ ( сп. НСТ- тест), понижается ФА и содержание ЛКБ ( Рис. 3, 4 ). Функциональный резерв гетерофилов, тем не менее, хотя и имеет тенденцию к снижению, остается на довольно высоком уровне.

Сезонные колебания фагоцитарной активности гетерофилов журавлей Рис. 4

весна

лето

осень

зима

В весеннее время года ФА гетерофилов и содержание ЛКБ повышаете количество активизированных гетерофилов и ИАГ остаются на низком уров! (сп. НСТ- тест ), а функциональный резерв уменьшается ( инд. НСТ - тест).

Летом наблюдается снижение ФА, а содержание ЛКБ в цитоплаз), фагоцитов с весны практически не изменилось (Рис. 3, 4). КоличестЕ активизированных гетерофилов и ИАГ в крови увеличилось (сп. НСТ- тест), функциональный резерв гетерофилов в летний период у журавлей сведен минимуму (инд. НСТ- тест).

3.4. Видовые особенности естественной резистентности крови журавлей.

К достоверным гематологическим отличительным признакам японсю журавлей относится количество эритроцитов, эозинофилов и моноцито содержание которых в отдельные периоды года достоверно отличается с стерхов. Так весной в периферической крови японских журавлей циркулиру< больше эритроцитов; в осенне - летний период года кровь японских журавл« достоверно отличается меньшим содержанием эозинофилов, особеш палочкоядерных и сегментоядерных форм; к видовой особенности этих пти; установленной в зимний период года, относится пониженное абсолютное относительное количество моноцитов.

К достоверным видовым признакам японских журавлей в весеннее вре\ года относится пониженная ФА и более высокая степень активизации ( сп. НС' тест ), летом ФА гетерофилов по прежнему остается пониженной, вместе с те наблюдается снижение количества ЛКБ. В осеннее время года японские журав! отличаются более высокой концентрацией ЛКБ, повышенной степень активизации и большим функциональным резервом. Зимой ФА гетерофилов степень их активизации в крови японских журавлей достоверно меньше, чем стерхов, а количество ЛКБ - больше.

К видовым особенностям серых журавлей относится повышение содержание эритроцитов в крови. В отличие от японских журавлей и стерхов периферической крови серых журавлей в весенне - зимний и осенний период года циркулирует большее количество эритроцитов. Кроме того, серые журав; достоверно отличаются от двух других видов птиц содержанием в кро! эозинофилов, гетерофилов и лимфоцитов. Отметим, что эти птицы имек видовые особенности, обособляющие их в одном случае от японских журавлей, в другом - от стерхов. В осенне - летний период периферическая кровь серь журавлей, в отличие от японских, характеризуется повышенным содержание лимфоцитов. Зимой поступление в периферическую кровь этих клетс ограничивается, причем в

ючительно большей степени, чем у японских жураатей. Между серыми уравлями и стгрхами установлешюе отличие обусловлешю пониженной онцентрации в крови эозинофильных лейкоцитов в осенне - летний период, етняя эозинофилия, у серых журавлей проявляется в меньшей степени, чем у герхов.

При изучении иммунологических показателей крови серых журавлей или установлены следующие видовые особенности: в весенний период года угерофилы периферической крови этих птиц содержат больше ЛКБ; ФА ггерофилов в осенне - летний период года достоверно ниже, чем у стерхов, но олыпе, чем у японских журавлей. Зимой полиморфноядерные лейкоциты серых уравлей характеризуются достоверно пониженной ФА и меньшей онцентрацией ЛКБ.

3.5. Признаки полового диморфизма, обусловленные факторами ггественной резистентности крови, представленных видов журавлей.

Основанием для обсуждения полового диморфизма послужило главным бразом крайне малочисленное количество публикаций, посвященное этой роблеме, а также затруднения, возникающие при морфометрической оценке оловой принадлежности журавлей. Половые особенности факторов еспецифического иммунитета журавлей а На-кп работе представлены впервые.

Абсолютное количество лейкоцитов в крови самок и самцов журавлей ( Весна ) Рис. 5

25000-Л"

□ стерх самцы

□ стерх самки

■ японский самцы

■ японский самки

[ри анализе результатов исследований четкая половая разнородность крови тонских журавлей и стерхов установлена только в весенний период. В это время эда наблюдается повышенная циркуляция эритроцитов в периферической крови шок японских журавлей и стерхов. В крови самцов этих видов птиц встречается овыщенное количество всех видов лейкоцитов ( Рис. 5 ). Достоверные отличия у герха установлены по содержанию гетерофилов, а для японских журавлей -ггерофилов, эозинофилов и лимфоцитов. Отметим, что помимо изиологического лейкоцитоза, весной проявляется тенденция повышения актерицидных свойств фагоцитов в крови самцов обоих видов птиц, а также олыщш функциональный резерв этих клеток ( НСТ - тест ). Несколько иная артина наблюдается в крови самок. Характерным половым признаком оследних является повышенная ФА полиморфноядерных лейкоцитов ( Рис. 6).

Фагоцитарная активность гетер офилов самок и самцов журавлей

( Весна ) Рис. 6

____———

Кяетки

Общее значение

стерх самцы стерхсамки японский самцы японский самки

Далее половые отличительные признаки также имеют место, но меньшей степени. Установлено, что в течение года меняется не только степе: проявления полового диморфизма, но и его характер. Комплексная оцет проведенная с помощью гематологических показателей, показала относительн) равнозначность естественной резистентност самок и самцов обоих вид журавлей.

3.6. Изменения уровня естественной резистентности крови в процес онтогенеза.

В ходе работы, установлена общая, для обследованных видов журавле тенденция изменения факторов естественной резистентности.

Как показали результаты исследований, начиная с двухмесячно возраста в периферической крови птенцов стерхов циркулирует повышенн количество белых форменных элементов, такая тенденция сохраняется до месячного возраста. Возрастной лейкоцитоз, достоверно обусловл повышенным количеством гетерофилов и базофилов в крови молодых стерхов, чем свидетельствует лейкоцитарная формула. К отличительной особенное крови птенцов относится меньшее число моноцитов.

Содержание АКБ в крови молодых и взрослых стерхов ( Дето ) Рис. 7

■ взрослые □ молодые

9.

Клетки

Характерной особенностью птенцов является не только относитель; низкая ФА гетерофилов и меньшая концентрация в крови ЛКБ ( Рис. 7, 8 ), но пониженный функциональный резерв этих клеток ( инд. НСТ - тест).

Фагоцитарная активность гетерофилов молодых и взрослых стерхов ( Осень ) Рис. 8

Ю П С Общее

Клетки значение

При изучении сезонной динамики уровня неспецифического иммунитета олодых журавлей, установлена меньшая степень колебаний. Так осенью, когда у ¡рослых птиц проявляется максимальная активизация клеточного иммунитета, в гриферической крови птенцов описан лишь незначительный подъем пибактериалъных свойств форменных элементов ( ЛКБ ). В тоже время летом и шой, когда уровень естественной резистентности половозрелых стерхов аходится на достаточно низком уровне, достоверные возрастные отличия у герхов сведены к минимуму.

ВЫВОДЫ.

1. Для оценки физиологического состояния журавлей предложены эполненные, модернизированные методики исследования крови, учитывающие гецифические, видовые свойства последней: окраска мазков, определение агоцитарной активности гетерофилов и HCT тест.

2. В результате изучения картины крови трех видов журавлей описаны орфологические особенности форменных элементов, включающие общие орфологические признаки и некоторые видовые особенности.

3. Определены физиологические нормы показателей естественной гзистентности крови трех видов журавлей, которые представлены в 71 таблице.

4. При изучении показателей естественной резистентности крови трех адов журавлей установлены следующие сезонные колебания:

- в осенне - летний период года в периферической крови журавлей яркулирует повышенное количество эозинофилов, а в весенне - зимний держание этих клеток в крови уменьшается.

- в весенне - зимний период года в крови жураатей содержится больше >елых ( сегментоядерных ) гетерофилов, а летом и осенью наблюдается зеличение чиста молодых клеток.

- для всех видов журавлей установлены общие сезонные колебания изиологического состояния полиморфноядерных лейкоцитов, выражающиеся в эвышении количества катионных белков, степени активизации ( сп. HCT - тест ), ункционального резерва этих клеток ( инд. HCT - тест ) и фагоцитарной стивноста в осенний период и снижении в летний.

5. При изучении клинических и иммунологических показателей крови зех видов журавлей установлены достоверные межвидовые особенности, фактер которых меняется в разные периоды года:

- гематокритное число серых журавлей в летний период достоверно выш чем у японских и стерхов.

- повышенное содержание эозинофилов установлено в периферическо крови стерхов (в осенне - летний период года ).

- в крови серых журавлей установлено максимальное количеств катионных белков в весеннее время года и минимальное в зимнее.

- японские журавли достоверно отличаются от двух других видо пониженной концентрацией ЛКБ летом и повышенной в осенне - зимний перио года.

- максимальная фагоцитарная активность гетерофилов установлена крови стерхов, такая тенденция наблюдается на протяжении всего года. Межд серыми и японскими журавлями достоверное отличие установлено тольк осенью, когда фагоциты серых журавлей проявляют большую активность.

- достоверное видовое отличие степени функционального раздражен« гетерофилов ( спонтанный НСТ - тест ), установлено в весенний период год; когда фагоциты японских журавлей проявляют большую степень активизащи чем гетерофилы стерхов, и меньшую в зимнее время года.

видовые отличия, обусловленные функциональным резерво гетерофилов (индуцированный НСТ - тест ), установлены между японским журавлями и стерхами в период осенних миграций. Фагоциты японских жураале отличаются большим функциональным резервом.

6. Установлены признаки полового диморфизма в крови японски журавлей и стерхов, которые максимально проявляются в весенний период год достоверной отличительной особенностью самцов стерхов и японских жураалей весенний период года являсия повышенное содержание в крови всех ьидс лейкоцитов и большее количество лизосомальных катионных белков цитоплазме гетерофилов; у самок двух видов журавлей установлено повышение содержание эритроцитов в циркулирующей крови и большая фагоцитарнг активность полиморфноядерных лейкоцитов.

7. В периферической крови молодых стерхов циркулирует больш< количество всех видов лейкоцитов, особенно гетерофилов и базофило Полиморфноядерные клетки стершат отличаются пониженной фагоцитарнс активностью, меньшим содержанием ЛКБ и низкими показателями спонтанног и индуцированного НСТ - теста.

8. Содержание общего количества ЛКБ во всех видах гранулоцито определяемого с помощью стандартного метода подсчета, достоверно меньп установленного нами содержания катионных белков в гетерофилах. Поэто\ предложено дифференцированное использование ЛКТ для оцет бактерицидных свойств гетерофилов. Целесообразность дифференциально! подсчета ЛКБ в гетерофилах обоснована также сезонными колебаниями друп видов клеток (эозинофилов ), содержащих катионные белки, что внои некоторую погрешность при оценке бактерицидных свойств фагоцитов.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ.

1. Для клинической оценки физиологического состояния журавлей редложено использование новых, модернизированных методов исследований, ключаюших: окраску мазков крови, для изучения картины крови; определение гагоцитарной активности гетерофилов и Тест восстановления синего етразолиевого. Указанные методы прошли успешную апробацию в полевых словиях и поэтому могут быть использованы не только для ветеринарного онтроля птиц, содержащихся в вольерных условиях ( орнитологические центры, оопарки, питомники ), но и в полевых условиях, при изучении клинического остояния отловленных диких журавлей.

2. Для определения лизосомальных катионных белков в периферической рови журавлей, нами предложен раздельный подсчет ЛКБ в гетерофилах.

3. Результаты исследований, представленные в табличной форме, могут тужить физиологической нормой при диспансерном обследовании трех видов :уравлей, с учетом сезона года, пола и возраста птиц и использоваться для пределения уровня естественной резистентности журавлей, а также диагностики степени тяжести патологического процесса.

4. Данные, полученные в результате изучения факторов естественной езистенлт'псти трех видов журавлей, предлагаются в качестве дополнительной нформашш о биологических особенностях этих видов птиц, включающей

¿^ОЛ!-.^,^ .1 ¿>гйкГИ31ЮСТИ журав-хСй С > -¡с . ^ VI ьЛДОЗ^и, Ли.ХОЗОЙ

ринадлгжносги журавлей и возрасгных особенностей.

СВЕДЕНИЯ О ПРАКТИЧЕСКОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Результаты исследований были использованы при диспансеризации ;уравлей питомника ОГБЗ и Хинганского заповедника ( Амурская область ); рл ¿ехериаарном контроле физиологического состояния птенцоз еггрхов а олевых условиях Куноватского заказника, во время проведения международной рограммы по реинтродукшш стерхов в район Западной Сибири; а также при зучении естественной резистентности диких серых журавлей, отловленных в ;естах их осенних концентраций.

2. Полученные данные используются в учебном процессе, при чтении екций по естественной резистентности птиц.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Шабалин Г.С., Морфология лейкоцитов и лейкограмма крови ¡уравлей., Проблемы современной экологии и экологического бразования.,1994.

2. Шабалин Г.С., Изменение лейкограммы крови журавлей., Проблемы овременной экологии и экологического образования., 1994.

3. Шабалин Г.С., О методиках изучения естественной резистентности рови журавлей., Актуальные проблемы экологии и зоокультуры., 1995.

4. Шабалин Г.С.. Давыдова Н.С., Сорокин А.С, Ветеринарные проблемы ешггродукции белого сибирского журавля ( в. Leцcogeгanus ). Актуальные роблемы экологии и зоокультуры., 1995.

5. Шабалин Г.С., Бессарабов Б.Ф., Остапенко В.А., Лизосомально -атионнын тест сибирского и японского журавлей в зимний период., Актуальные роблемы экологии и зоокультуры., 1995.