Исследование динамики гибели адипоцитов при гипертермии и воздействии лектинов

Черкасова, Ольга Алексеевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Исследование динамики гибели адипоцитов при гипертермии и воздействии лектинов
ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Автореферат диссертации по теме "Исследование динамики гибели адипоцитов при гипертермии и воздействии лектинов"

На правах рукописи

Черкасова Ольга Алексеевна

ИССЛЕДОВАНИЕ ДИНАМИКИ ГИБЕЛИ АДИПОЦИТОВ ПРИ ГИПЕРТЕРМИИ И ВОЗДЕЙСТВИИ ЛЕКТИНОВ

Специальность 03.00.02 - биофизика

003 16 1706

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук

Саратов - 2007

Работа выполнена в Саратовском государственном университете им. Н. Г. Чернышевского

Научный руководитель:

Заслуженный деятель науки РФ,

доктор физико-математических наук,

профессор Тучин В. В.

Официальные оппоненты: доктор физико-математических наук,

профессор Березин Валентин Иванович

доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник Дыкман Лев Абрамович

Ведущая организация:

Санкт-Петербургский государственный университет информационных технологий, механики и оптики

Защита состоится 13 ноября 2007 года в 15.30 часов на заседании диссертационного совета Д 212.243.05 в Саратовском государственном университете им. Н. Г. Чернышевского по адресу: 410012, Саратов, ул. Астраханская, 83.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Саратовского государственного университета.

Автореферат разослан 10 октября 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

д.ф.-м.н., профессор

Дербов В. Л.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Исследование механизмов гибели клетки является одной из актуальных проблем биофизики Несмотря на большое количество экспериментальных данных, до сих пор остаются не выясненными многие механизмы этого явления, в частности, не до конца понятны механизмы регуляции гибели отдельных клеток в целостном многоклеточном организме (Фильченко А А, Стойка Р С, 1999) Актуальность этой проблемы определяется взаимосвязью нарушения регуляции процесса запрограммированной гибели клетки с большинством заболеваний Выявление конкретных механизмов нарушения регуляции клеточной гибели, сопровождающих конкретные заболевания, позволит определить этиологию и патогенез данных заболеваний Детерминация гибели клеток и ее регуляция - одна из центральных проблем биологии клетки (Уманский С Р , 1996, Abastado J -Р , 1996, Pnns J В et al, 1994, 1997, Бший P О , Стойка Б Р , Стойка Р С , 2002)

В последние годы в биофизике успешно развиваются новые методы исследования человеческих тканей и органов, основанные на хорошо контролируемом по температуре, времени и пространству нагреве С этой точки зрения особый интерес представляет жировая ткань. Так, например, жировая ткань характеризуется достаточно низкой температурой плавления, близкой к физиологической, что может значительно повлиять на динамику поведения тканей, имеющих жировые накопления При нагреве от 24°С до 45°С жировая ткань претерпевает несколько фазовых переходов Фазовые превращения "кристаллическая фаза — жидкость" в адипоцитах человека протекают в широком диапазоне температур, что связано с многокомпонентностью запасенного жира (Garti N, Sato К, 1988)

Одной из важных проблем современной медицины и, косметологии в частности, является исследование способов физического воздействия на жировые клетки с целью их разрушения Одним из самых простых, но эффективных способов физического воздействия на жировые клетки, является гипертермия (Prms J В , Walker NI et al, 1994), эффективность которой можно усилить с помощью биоактивных веществ

В настоящее время в качестве гистохимических реагентов большое внимание уделяется использованию лектинов Это позволяет эффективно проводить селективное гистохимическое маркирование отдельных типов и популяций клеток, тканевых структур, а также осуществлять управление

биохимическими процессами в клетках, в частности вызывать апоптоз (Bilyy R, Stoika R, 2003, Porras F et al, 2000, Антонюк J1П, Игнатов В В, 2001, Лахтин ВМ, 1987, Луцик М Д, Кусень СИ, 1987, Никитина BE и соавт, 1998, Франц X, 1980)

Анализ литературы показывает, что проблема управления процессами гибели адипоцитов еще очень далека от своего решения Например, недостаточно полно изучены механизмы повреждения жировых клеток при воздействии физических факторов и биологически активных веществ Все это не позволяет пока однозначно осуществить выбор внешнего фактора, активного вещества и предсказать результаты этих воздействий на биоткань Таким образом, возникает потребность проведения исследований, направленных на определение морфологических изменений в адипоцитах, механизма гибели жировой ткани под воздействием физических (нагрев, ИК излучение) и биохимических факторов

В данной работе в качестве физических факторов выбрано тепловое воздействие (гипертермия), вызванная контактным нагревом или нагревом ИК лазерным излучением, в качестве биологически активных агентов выбраны нетоксичные фукозоспецифичные лектины Azospirillum brasílense Sp7 и Laburnum anagyroides

Целью данной работы явилось комплексное изучение морфологических изменений адипоцитов жировой ткани человека и механизмов их гибели в условиях гипертермического воздействия, анализ участия лектинов в регуляции клеточной гибели адипоцитов человека, склонного к ожирению в норме и при патологии сахарного диабета, а также исследование динамики гибели адипоцитов в условиях ИК (805 нм) лазерного нагрева

В рамках работы решались следующие задачи

- изучение морфологических изменений при гипертермии в адипоцитах жировой ткани человека в норме и при патологии,

- разработка методики воздействия лектинов на жировые клетки,

- изучение влияния лектинов на процесс гибели адипоцитов при гипертермии,

- исследование влияния углеводной специфичности лектина азоспирилл на структурные изменения в адипоцитах при нагреве,

- анализ морфологических изменений адипоцитов при ИК лазерном воздействии;

- изучение процесса гибели жировых клеток в условиях действия лектина азоспирилл и ИК лазерного излучения

Научная новизна работы

1 Исследована динамика гибели адипоцитов жировой ткани человека при нагреве в диапазоне физиологической гипертермии и при ИК лазерном воздействии

2 Впервые изучено действие фукозоспецифичных лектинов Azospirillum brasilense Sp7 и Laburnum anagyroides на жировую ткань Установлено, что лектины при нагреве оказывало разное влияние на адипоциты жировой ткани Растительный лектин Laburnum anagyroides не оказывал влияния на гибель клеток, в то время как лектин бактерий рода Azospirillum brasilense Sp7 активировал скорость гибели клеток

3 Впервые на примере жировой ткани показано, что лектин азоспирилл в совокупности с нагревом ((43,5±0,5)°С) активирует клеточную гибель

4 Показано, что углеводсвязывающий центр лектина азоспирилл принимает участие в его воздействии на клетки жировой ткани человека Однако влияние лектина характеризуется не только специфическим, но и не специфическим воздействием на адипоциты, поскольку и с заблокированным активным центром лектин продолжает оказывать влияние на адипоциты, хотя и менее выраженное

5 Впервые рассмотрена динамика гибели адипоцитов жировой ткани людей с нормальной массой тела, склонных к ожирению и больных сахарным диабетом

Практическая значимость

Проведенные исследования процесса гибели адипоцитов при комбинированном внешнем воздействии позволяет подвести теоретическую базу для разработки эффективных методов коррекции жировой массы, борьбы с опухолевыми новообразованиями, для выяснения механизма клеточной гибели (апоптоз или некроз)

Исследования изменения структуры адипоцитов в условиях внешнего воздействия (контактный и лазерный нагрев), а также влияние биологического фактора (лектина) на гибель адипоцитов в норме и при патологии, существенно расширяют возможности диагностики и дифференциации патологий жировой ткани по характеру гибели адипоцитов и открывают новые возможности для изучения мембраны жировых клеток

Достоверность результатов

Достоверность полученных результатов обеспечивается адекватностью используемых методов измерения, обработки и анализа экспериментальных данных Результаты проведенных исследований подвергались статистической обработке общепринятыми методами с использованием t-критерия Стьюдента, достоверными считали различия при р<0,05 Все оригинальные результаты воспроизводятся при повторении экспериментов

Основные результаты и положения, выносимые на защиту

1 При нагреве до температуры (43,5±0,5)°С возникают морфологические признаки апоптоза у адипоцитов здорового человека с нормальной массой тела и некроза у жировых клеток человека с нормальной массой тела и патологией сахарного диабета. Время гибели клеток здорового человека примерно в 2 раза меньше, чем время гибели адипоцитов людей с нормальной массой тела и патологией сахарного диабета

2 В условиях комбинированного воздействия лектина азоспирилл и нагрева до температуры (43,5±0,5)°С ускоряется процесс гибели клеток жировой ткани, как здоровых, так и больных сахарным диабетом людей СКО, при этом воздействие лектина азоспирилл характеризуется не только специфическим, но и не специфическим воздействием на адипоциты, поскольку и с заблокированным активным центром данный лектин продолжает оказывать влияние на адипоциты

3 Нагрев адипоцитов ИК лазерным излучением до температуры (40,5±0,5)°С приводит к увеличению скорости гибели клеток в 2 раза по сравнению с контактным нагревом

Апробация работы

Результаты работы докладывались и обсуждались на следующих международных конференциях II международная научная молодежная школа "Оптика - 2002" (С-Петербург, октябрь 2002), "Saratov Fall Meeting International School on Optics, Laser Physics & Biophysics" (Саратов, октябрь 2002, 2003, сентябрь 2004, 2005, 2006), II International Conference "Laser Optics for young Scientists 2003" (С -Петербург, июнь 2003), III международная конференция молодых ученых и специалистов "Оптика - 2003" (С -Петербург, октябрь 2003), IV международная конференция молодых ученых и

специалистов "Оптика - 2005" (С -Петербург, октябрь 2005), Международная научно-практическая конференция "Современная техника и технологии в медицине, биологии и экологии" (Новочеркасск, декабрь 2003), Пироговская студенческая научная конференция (Москва, март 2004, 2005, 2006, 2007), X Всероссийская научная конференция студентов-физиков и молодых ученых "ВНКСФ-10" (Москва, апрель 2004), международная научно-техническая конференция "Наука и образование - 2004" (Мурманск, апрель 2004), IV Международная научно-практическая конференция "Медицинская экология" (Пенза, июнь 2005), V Всероссийский научный семинар и Молодежная научная школа "Химия и медицина" (Уфа, сентябрь 2005 г), 10-я Пущинская школа-конференция молодых ученных "Биология — наука XXI века" (Пущино, апрель 2006 г), Всероссийская конференция с международным участием "Фундаментальные и прикладные аспекты исследования симбиотических систем" (Саратов, сентябрь 2007 г )

Исследования, проводимые по теме диссертации, выполнялись в рамках грантов грант РФФИ "Ведущие научные школы" № 00-15-96667 2000-2002 гг (руководитель - профессор В В Тучин), международный грант СПОР № 11ЕС-006 2000-2003 гг, фант Мин образования РФ "Ведущие научно-образовательные коллективы" № 01 2003 15221, грант президента РФ "Под держка научных школ" № 25 2003 2

Публикации

По теме диссертации опубликовано 22 работ (5 статей в рецензируемых журналах, 15 статей в научных сборниках, 2 статьи в сборнике тезисов докладов конференций)

Личный вклад соискателя

Личный вклад соискателя состоит в самостоятельной постановке и проведении экспериментов, обработке и интерпретации полученных результатов Постановка исследовательских задач осуществлялась профессором, д ф -м н Тучиным В В Исследования с лектинами проводили совместно с к б н Е Г Пономаревой и д б н В Е Никитиной (ИБФРМ РАН, Саратов) Исследование по воздействию температурного фактора проводили совместно с к ф -м н Г В Симоненко

Структура и объем работы

Диссертация состоит из введения, четырех глав, заключения и списка цитируемой литературы из 357 наименований Работа изложена на 168 страницах, иллюстрирована 93 рисунками, из них 50 фотографии

КРАТКОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Во Введении обоснована актуальность решаемых задач, сформулирована цель работы, её научная новизна, научно-практическая значимость, основные положения и результаты, выносимые на защиту

Первая глава диссертации носит обзорный характер В этой главе на основе данных, опубликованных в литературе, вводятся основные понятия и рассматриваются особенности основных форм повреждения жировой ткани

В данной главе указаны основные характеристики жировой ткани Описываются ее состав, физические и биохимические свойства, а также функциональные особенности Представлены механизмы повреждения жировой ткани и их причины, рассматриваются характеристики основных форм повреждения клеток Описываются особенности некроза и апоптоза клеток Также перечислены способы воздействия на жировую ткань, описано применение нагрева и лазерного излучения для редукции жировой ткани

Материалы и методы рассмотрены в начале каждой главы, посвященной экспериментальным исследованиям (главы 2,3 и 4)

Материалы и методы исследования

В качестве объекта исследования в рамках данной работы был выбран подкожный жир человека, взятый из области брюшной полости и ягодиц пациентов Использовали подкожный жир практически здоровых и больных сахарным диабетом людей (инсулинозависимых), с нормальной массой тела (ИМТ<25 кг/м2) и людей, склонных к ожирению (СКО, ИМТ 25-29,9 кг/м2) Возраст пациентов составлял 32 - 40 лет

Эксперименты проводились на клетках подкожной жировой ткани поверхностного слоя, который состоит из плотных пакетов жира, заключенных в хорошо организованную фиброзную оболочку, на гистологических образцах, где клетки были изолированы от организма, но оставались живыми и реагировали на внешние воздействия

Для изучения морфологии клеточной гибели в эксперименте использовали установку, состоящую из микроскопа (МФН-11 NXA1951), который снабжен цифровой фотокамерой (Nikon coolpix 995), подключенной к персональному компьютеру, и термостатируемого столика (термостолик) Для контактного нагрева жировой ткани использовали термостолик

Эксперименты выполнялись на свежих жировых клетках подкожного жира человека, полученных в процессе хирургического вмешательства После извлечения жировая ткань помещалась в физиологический раствор (0,9% водный раствор NaCl с рН 6,8) и промывалась фосфатно-солевым буфером (PBS) Затем ее замораживали при температуре минус 10°С Жировая ткань использовалась в течение первых шести суток после изъятия В результате экспериментального исследования и в соответствии с литературными данными было подобрано время хранения ткани (Граменицкий Е М, 1963) Все операции по подготовке образцов были выполнены при комнатной температуре

После замораживания, делали тонкие срезы размером 1x1 см и толщиной 100-200 мкм, с помощью микротома, и постепенно нагревали до температуры (20-25)°С Жизнеспособность изучаемых адипоцитов фиксировали с помощью окраски 0,2 %-ным раствором метиленового синего по методу В Я Александрова (Граменицкий ЕМ, 1963, Александров ВЯ, 1949, Фихман Б А, 1967) В растворе краски аутопсированный материал выдерживался при комнатной температуре в течение 1-1'Л часов Также проводилось исследование изменения характера прижизненной окраски адипоцитов после воздействия

После того как была проверена жизнеспособность клеток в образце ткани, его помещали на термостолик, который фиксировался с помощью зажимов на предметном столике поляризационного микроскопа Температура термостолика в ходе эксперимента поддерживалась постоянной в пределах физиологической гипертермии (43,5±0,5)°С

В отдельной серии экспериментов были изучены структурные изменения адипоцитов в условиях воздействия фукозоспецифичных лектинов (лектин бобовника и лектин азоспирилл) и гипертермии, с последующей блокадой лектина азоспирилл специфичными гаптенами Для анализа взаимодействия лектинов с адипоцитами использовали лекгины в концентрации 10 мкг/мл, гаптены в концентрациях 0,3 М (L-фукоза, D-галактоза) и 1,5 мг/мл (Р глюкозидаза)

Способность различных гаптенов ингибировать или активировать специфичность лектина проверяли смешиванием равных объемов (1 1) раствора

лектина и раствора соответствующего гаптена Тонкие срезы жировой ткани, подвергшиеся воздействию биоактивных веществ, помещали во влажную среду чашки Петри на 30 минут при комнатной температуре При прошествии данного времени образцы промывали раствором PBS Полученные образцы жировой ткани с жизнеспособными адипоцитами помещали на термостолик Контролем служили образцы, не подвергавшиеся нагреву, а также образцы, не обработанные биоактивными веществами, но находившиеся под действием гипертермии

Были изучены характерные особенности гибели адипоцитов у людей СКО в норме при облучении диодным лазером (OPC-B015-MMM-FCTS) с Х=805 нм В отдельной серии экспериментов образцы окрашивали 0,2 %-ным раствором индоцианина зеленого (ICG), с последующей инкубацией при комнатной температуре в течение 3 часов В другой части экспериментов образцы жировой ткани не подвергались предварительной окраске ICG Обработку образцов жировой ткани проводили при мощности излучения 2 и 3 Вт Диаметр лазерного пятна 13 мм, расстояние между торцом волокна и поверхностью образца составляло 17 мм, плотность мощности облучения составляла 1,5 и 2,3 Вт/см2 Начальная температура образца была постоянной (33,5±0,5)СС Аналогичные серии экспериментов были проведены на адипоцитах после воздействия лектина азоспирилл

Результат гибели клеток при микроскопическом исследовании определялся по отсутствию светящегося ободка клеточной стенки Появление яркого изображения границы (мембраны) клетки в норме (без разрывов мембраны) связано с дифракцией и многократным внутренним отражением между границами трех прилегающих и отличающихся по показателю преломления сред (окружающая среда, мембрана клетки и цитоплазма (жировая капля)) Для клетки с целостной мембраной яркость изображения наибольшая Для жировых клеток нарушение целостности мембраны изменяет характер светопреломления таким образом, что изображения клеток становятся все менее контрастными по мере фрагментации стенки Окрашивание образцов по окончании эксперимента витальным красителем не выявляло клеточных структур, что подтверждает эти наблюдения

Основными параметрами, по которым судили о состоянии жировых клеток, были выбраны линейные размеры клеток (большой и малый размер), а также площадь Данный выбор сделан потому, что это самый наглядный и простой способ наблюдения изменений, которые происходят с клетками во время воздействия на

них внешних факторов Изображения, полученные с помощью цифровой фотокамеры, переносились на ПК Во время нагрева образца, фотографии делались через каждые 2 мин Наблюдения велись непрерывно за одними и теми же клетками С помощью программ для обработки растровых изображений вычислялись значения размеров выбранной клетки в пикселях по всем элементам изображения образца Необходимо отметить, что измерения размеров клетки проводились с погрешностью разрешения монитора (3,7 пикселей/мм) Калибровка результатов измерений геометрических характеристик образцов осуществлялась по стандартной методике с использованием объект - микрометра проходящего света (ОМ-П) (Zimnyakov D А et al, 2001)

Полученные результаты статистически обрабатывались Статистическая обработка проводилась на группах близких по размерам и по времени гибели клеток За величину среднего линейного размера одного адипоцита было взято среднее значение между его большим и малым размером Группа близких по размеру жировых клеток формировалась как среднее значение менаду средними линейными размерами адипоцитов, входящих в данную группу Площадь по группе определялась как среднее значение всех площадей адипоцитов, входящие в группу Результатом всех измерений является построение зависимости средних линейных размеров или средней площади групп клеток от времени нагрева образцов жировой ткани Достоверными считали различия при Р<0,05

Во второй главе представлено экспериментальное исследование воздействия гипертермии на жировую ткань человека с нормальной массой тела Основное внимание уделено изучению характера гибели адипоцитов в образцах жировой ткани человека практически здорового и больного сахарным диабетом

Проведенные исследования показали различие в механизме гибели жировых клеток здорового человека и человека больного сахарным диабетом при гипертермии (рис 1) Время полного разрушения жировых клеток практически здоровых людей и больных сахарным диабетом различается в 2 раза Предполагая из формы кривых, изображенных на рис 1, экспоненциальный спад на выбранных участках, можно записать закон изменения площади клеток в виде

SO) = S0 ек!, (1)

где S0 - площадь клеток в образце ткани непосредственно перед началом нагрева, к — эффективная константа скорости гибели адипоцитов, t — время При t—>0 тангенс угла наклона увеличивается, следовательно, площадь клеток S(t) будет стремиться к величине S0 В случае, когда время растет вплоть до г —> со, тангенс

угла наклона уменьшается, а площадь клеток при этом будет стремиться к нулю. Поток вещества будет уменьшаться при уменьшении объёма. Следовательно, к характеризует изменение площади в е раз. Наклон прямой полулогарифмической зависимости равен тангенсу угла наклона с одной стороны, а с другой - минус к.

, 10 20 30 40 50 60 70 Время наблюдения гипертермии, мин.

а) здорового человека Рис. 1. Динамика изменения

Время наблюдения гипертермии, мин.

б) человека больного сахарным диабетом площади адипоцитов при гипертермии

В результате расчёта установили, что константа скорости гибели адипоцитов здорового человека (кш = 0,0064 мин"1) больше в 2,8 раза константы скорости тепловой гибели адипоцитов больного сахарным диабетом (к&> = 0,0023 мин"1), следовательно, адипоциты гибнут быстрее.

Было установлено, что у адипоцитов жировой ткани человека с патологией наблюдались разрывы мембран клеток. Так как разрыв мембраны происходит только при некрозе, то для жировой ткани человека больного сахарным диабетом гибель адипоцитов идет по некрозному механизму гибели клетки.

В отличие от адипоцитов жировой ткани человека с патологией гибель жировых клеток здорового человека идёт по механизму подобному апоптозу. При гипертермии адипоцитов практически здорового человека наблюдались морфологические изменения клеток: образование "клеточных телец", которые впоследствии увеличивались в размерах, и затем происходило слияние некоторых клеток друг с другом. В процессе образования этих телец, размер исходных клеток уменьшается. Все эти изменения характерны при самопрограммируемой клеточной гибели. Таким образом, механизм гибели адипоцитов зависит от типа ткани (здоровая ткань или с патологией).

В третьей главе описано экспериментальное исследование структурных изменений жировых клеток здоровых и больных сахарным диабетом людей, СКО, при гипертермии и совместном воздействии нагрева и лектинов

различной природы. В результате исследований установили, что клетки жировой ткани человека СКО также подчиняются закону (1). Существенным различием было то, что адипоциты практически здорового человека СКО под действием температуры гибли в среднем за 130±10 мин, в то время как клетки жировой ткани человека СКО с патологией гибли за 220±20 мин (рис. 2).

Для описания динамики изменения площади адипоцитов применяем закон распределения (1) на участках [0; 100] мин (для здорового человека СКО рис. 2а) и 1е[0;180] мин (для человека СКО с патологией рис. 26). В результате установили, что эффективные константы тепловой гибели адипоцитов тучного человека в норме и при патологии равны соответственно: 0,0029 и 0,0013 мин"1. Сравнивая результаты, полученные на адипоцитах человека с патологией сахарного диабета (рис. 16) и практически здорового человека СКО (рис. 2а), видим, что время гибели составляет 130±10 минут для обоих случаев, при этом

а) практически здорового б) больного сахарным диабетом

Рис. 2. Динамика изменения площади адипоцитов человека СКО при гипертермии

Обработка образцов жировой ткани лектином азоспирилл предполагала возможность его влияния на время разрушения адипоцитов. В ходе эксперимента было установлено, что совместное действие гипертермии и бактериального лектина азоспирилл на образцы ткани оказало активирующее влияние на гибель адипоцитов человека СКО как в норме, так и при патологии. В результате исследований было обнаружено, что предварительная обработка лектином перед нагревом дает существенный сдвиг (в сторону увеличения) скорости гибели адипоцитов. Здесь можно предположить, что лектин, действуя на адипоциты человека СКО, запускает механизм их гибели. Такое действие лектина азоспирилл характерно для ткани, как в норме, так и при патологии (рис 3).

Связывание лектинов с мембраной вызывает целый ряд изменений в молекулярной организации мембраны и ее функции (Луцик М.Д., 1981). Такова

примерная закономерность связывания лектинов с мембранными рецепторами. Первоначально рецепторы равномерно распределены на поверхности клетки. Связывание лектина индуцирует перемещение рецепторных комплексов в плоскости мембраны с образованием кластеров, которые постепенно укрупняются до бляшек и собираются на одном полюсе клетки, образуя так называемые шапочки. Таким образом, меняется конформационное состояние мембраны, что, возможно, и обусловливает различие в воздействии на адипоциты нагрева и лектина, и только нагрева. Без температурного воздействия лектин не оказывал влияния на морфологию контрольного образца жировой ткани.

а) практически здорового б) больного сахарным диабетом

Рис. 3. Изменение площади клеток тучного человека при действии гипертермии и лектина

Для описания динамики изменения площади адипоцитов тучного человека в условии гипертермии и воздействии лектина применяем закон изменения площади (1) на участках 1е[0;45] мин (для здорового человека СКО рис. За) и 1е[0;80] мин (для человека СКО с патологией рис. 36). В результате установили, что эффективные константы тепловой гибели адипоцитов тучного человека в норме и при патологии в условии гипертермии и воздействии лектина равны соответственно: 0,006 и 0,0036 мин"1.

Проведенные исследования показали, что предварительная обработка жировой ткани бактериальным лектином усиливает воздействие нагрева на клетки жировой ткани как здорового человека СКО, так и тучного человека больного сахарным диабетом. Обнаружены различия во времени гибели адипоцитов при нагреве и в присутствии лектина в зависимости от физиологического состояния ткани. Таким образом, клетки жировой ткани, подвергнутые нагреву и предварительной обработке лектином азоспирилл, заметно уменьшаются в размере, а затем и погибают, в отличие от контрольных образцов ткани, обработанных только лектином и не подвергавших нагреву.

Однако в результате исследований влияния на физиологию адипоцитов другого фукозоспецифичного лектина - Laburnum anagyroides аналогичного действия не выявлено. Из полученных данных можно сделать вывод, что активность лектина зависит не только от его углеводной специфичности, но и от природы макромолекулы. Такой же результат получили на образцах, под действием гипертермии и белка бычий сывороточный альбумин (BSA).

Изучение биологической активности лектина азоспирилл дает возможность оценить их вклад во взаимодействии с животными клетками, поэтому были проведены исследования по изучению роли углеводсвязывающего центра бактериального лектина при воздействии гипертермии на структурные изменения адипоцитов жировой ткани СКО человека в норме и при патологии.

Была проведена серия экспериментов по воздействию гипертермии и лектина азоспирилл, с заблокированным специфичным гаптеном углеводсвязывающим центром, на адипоциты людей СКО.

-Пектин бактерий Azospirillum brasilense Sp7, имеет специфичность к D-галактозе и ярко выраженную к L-фукозе. Согласно полученным результатам, у адипоцитов "практически" здорового человека СКО, при гипертермии и лектином с заблокированной активностью (в качестве блокирующего агента выступала L-фукоза), были обнаружены характерные признаки апоптоза: изменение формы клеток, образование щупалец и апоптозоподобных телец (рис. 4). Особое внимание, по-нашему мнению, необходимо уделить изменению формы адипоцитов в последний период нагрева. Рассмотрим, конкретный образец с 5

а) до нагрева б)58-я мин нагрева в)72-я мин нагрева г)76-я мин нагрева

Рис. 4. Гистологический срез жировой ткани человека СКО, предварительно обработанный лектином, блокированным Ь-фукозой, и подвергнутым нагреву

клетками. Подобная картина фиксировалась во всех проведенных экспериментах. Наиболее интересные изменения происходят с адипоцитами № 1 и № 2, начиная с 58 минуты нагрева (рис. 46). Клетки как бы отпочковываются, образуя щупальца, которые в конечном итоге обособляются от самой клетки, образуя везикулы, окруженные мембраной. По окончанию образования везикул

клетка стремится к восстановлению своей первоначальной формы По прошествии 75 минут (рис 4г) эксперимента клетки №1, №4, № 5 вновь увеличиваются в размере, по-видимому, в этот момент они выполняют роль фагоцитов захватывают близлежащие везикулы малого размера, что и проиллюстрировано фотографиями (рис 46,в,г)

Процесс изменения формы адипоцитов имеет черты, схожие с процессом апоптоза, для которого характерны физиологические изменения образование мембранных пузырей без нарушения целостности мембраны, сжатие клетки, образование апоптозных телец, фагоцитоз соседними клетками, отмирание одиночных клеток

Сравнение результатов, полученных на образцах, обработанных лектином и лектином с блокированной активностью, показало, что время гибели клеток различно При обработке лектином клетки здорового человека СКО при нагреве гибли в среднем за 55±5 мин, в то время как обработанные блокированным лектином за 80±5 мин Жировые клетки здорового человека СКО, не обработанные лектином, под действием только нагрева гибнут за 13 0± 10 мин

Из полученных данных можно сделать вывод, что углеводсвязывающий центр бактериального лектина принимает участие в его воздействии на адипоциты Блокирование активного центра лектина снижает его влияние на клетки Однако воздействие лектина зависит, по-видимому, не только от активности его углеводсвязывающего центра, но и от других причин, не связанных с основным свойством лектина

Аналогичные результаты получены на адипоцитах человека СКО больного сахарным диабетом Если клетки здорового человека СКО претерпевают значительные изменения (форма клетки, образование везикул), то для адипоцитов ткани человека больного сахарным диабетом СКО эти изменения не обнаружены В то же время наблюдается сжатие клеток, что характерно для начальной стадии апоптоза В конце эксперимента клетка погибает, однако разрешающая способность микроскопа не позволила нам обнаружить разрывы мембраны и характерные признаки некроза Результат гибели клеток, наблюдаемый при микроскопическом исследовании, определялся по отсутствию темного ободка клеточной стенки

Под действием температуры и при обработки, как лектином, так и лектином с блокированной активностью адипоциты больного сахарным диабетом СКО гибли в среднем за 150±10 мин Жировые клетки больного сахарным диабетом СКО, не

обработанные лектином, под действием только нагрева гибнут за 220±20 мин Результаты исследования позволяют сделать вывод, что углеводсвязывающий центр лектина не принимает участия во взаимодействии лектина с клетками при патологии сахарного диабета Однако, независимо от этого, лектин увеличивает скорость гибели клеток патологической ткани В данном случае причина влияния лектина на клетки остается неясной и требует дальнейшего изучения свойств лектина, не связанных напрямую с его углеводсвязывающим центром

Помимо фукозы лектин бактерий рода Azospirillum Ъгasílense Sp7 имеет специфичность к D-галакгозе, однако блокирующая концентрация данного углевода на порядок выше По-видимому, для данного лектина характерно присутствие "расширенного" связывающего центра, способного взаимодействовать не с одним, а с несколькими углеводными остатками В данном случае можно говорить о существовании двух субцентров связывания углеводов

В результате эксперимента было получено время гибели адипоцитов здорового человека СКО, что составило 60±5 мин, а человека больного сахарным диабетом СКО - 145±5 мин В итоге установили, что воздействие гипертермии и лектина с заблокированным D-галактозой активным центром, не вьивило влияния углеводсвязывающего центра лектина на гибель клеток

Показано, что углеводсвязывающий центр лектина принимает участие в его воздействии на адипоциты жировой ткани человека СКО Однако это воздействие не является полностью специфичным, поскольку и с заблокированным активным центром лектин продолжает оказывать влияние на адипоциты, хотя и менее выраженное По-видимому, сродство рецептора к данному лектину на поверхности адипоцита определяется не только связывающейся с лектином углеводной детерминантой, но зависит также и от свойств рецептора как макромолекулы

Блокирование лектиновой активности происходит по средствам рецепторов Сахаров, поэтому необходимо было выявить степень влияния данных Сахаров на адипоциты при гипертермии

В случае, когда клетки обрабатывались блокированным раствором лектина, время гибели составляло 80±5 мин, при обработке чистым раствором L-фукозы -55±5 мин. Данный результат говорит о том, что L-фукоза не ингибировала процесс гибели адипоцитов, а наоборот стимулировала его Возможно, она участвует в ферментативных процессах, которые индуцируют гибель клеток Аналогичный результат видим и в случае с жировой тканью человека СКО с патологией

сахарного диабета Клетки, обработанные неактивным лекгином, гибли примерно за 150±10 мин, при обработке раствором фукозы за 105±5 мин

Другая ситуация складывается когда адипоциты обработаны раствором О-галактозы и затем подвергнуты нагреву клетки тучного человека гибнут за 120±5 мин, а адипоциты ткани СКО с патологией за 210±5 мин Время гибели жировых клеток, обработанных Б-галактозой, входит в интервал гибели адипоцитов при гипертермии Следовательно, скорость гибели адипоцитов, обработанных Э-галактозой, совпадает со скоростью гибели жировых клетках при гипертермии Данное исследование показывает, что О-галактоза действует не так как Ь-фукоза, что вполне вероятно связано с изометрией данных Сахаров, к тому же они принадлежат к разным генетическим рядам и классам

Известно, что лектин азоспирилл проявляет активность и к ферменту р-глюкозидаза Было изучено действие на адипоциты раствора лектин-фермент и гипертермии Эксперимент показал, что адипоциты жировой ткани тучного человека в среднем гибнут за 20±5 мин, а жировые клетки тучного человека больного сахарным диабетом за 50±5 мин

Действие комплекса лектин-фермент на адипоциты может быть описано кинетической моделью

где в качестве субстрата (5) выступает триглицерид, а лектин является эффектором (Э) В нашем случае комплекс лектин-фермент активирует гибель жировых клеток ткани Активность комплекса связана с особенностями как лектина, так и фермента Р-глюкозидаза

На основе проведенных экспериментов, строим гистограммы зависимости скорости гибели адипоцитов за определенный промежуток времени при гипертермии (рис 5 и 6)

На первом месте располагаются жировые клетки в условиях гипертермии, обработанные раствором лектин-фермент, на втором - растворами Ь-фукозы, глюкозидазы, лектин-галактоза, лектина, лектин-фукоза, на третьем рас! вором Б-галактозы и на четвертом - действие гипертермии Полученные данные хорошо демонстрируют термоиндукцию адипоцитов за счёт биологически активных веществ

ЭЕ + Р

Е + Р

100

I 70

о 40

— а 30

о 10

■леытнн-фермент

■ фермент, фу коза, лектнн.

лектнн-галакт оча ЕСлектнн-фукоча

61.6 ■ • галактоза

1® ■ только нагрев

■ L

2? минут воздействия гипертермии (Т={41-44)вС)

Рис. 5. Скорость гибели адипоцитов тучного человека (СКО) при нагреве

* лекшн-фермент ■ фермент, фуко-до Н лекшн-галактоза Ш пекпш-футсоча

в галактоза Ш только нагрев

55 минут действия гипертермин (Т==(43-44)0С) Рис. 6. Скорость гибели адипоцитов тучного человека с патологией при нагреве

В четвертой главе описано экспериментальное исследование влияние лазерного излучения (805 нм) на адипоциты жировой ткани человека СКО. Было установлено, что за 1 час суммарных экспозиций клетки тучного человека погибали. Адипоциты отвечают на излучение лазера изменением распределения жира, жировая вакуоль медленно опустошается и этот эффект сохраняется длительное время, в зависимости от лазерной дозы. Во время облучения у клетки наблюдается разрыв мембраны и освобождение жира. При дальнейшем облучении клетки освобождаются от своих жировых вакуолей и гибнут. Время гибели адипоцитов при лазерном нагреве отличается от времени гибели при гипертермии.

На рис. 7 представлена графическая зависимость средней площади адипоцитов, предварительно обработанных 0,2 %-ным раствором ICG, от общего времени экспозиции. Видно, что площадь одной группы клеток падает по экспоненциальному закону. Однако площадь другой группы клеток наоборот растет. Разрушение происходит только после этого увеличения. Увеличение площади может быть связано с попытками данной клетки захватить свободный жир и тем самым установить равновесие в окружающей её области. Следовательно, процесс гибели адипоцитов индивидуален и протекает в соответствии с физиологическими потребностями самих клеток.

Сравнивая эти результаты, с результатами, полученными на адипоцитах здорового человека СКО при нагреве, видим, что время гибели сильно отличается. Если в случае воздействия температуры адипоциты гибли в среднем

16,0 „ 15.5 1 15,0 d 14,5 | 14,0 В 13.5

I ".О

Í 12,5 1 12,0 I 11,5 С 11.0 10,5 10,0

0 5 10 15 20 25 30 35 40 Общее время экспозиции, мин

Рис. 7. Динамика изменения плошади жировых клеток человека, СКО, в период облучения

за 130± 10 мин, то при фототермическом эффекте за 60±5 мин. Таким образом, время гибели уменьшалось в 2 раза при лазерном нагреве.

Рассмотрим изменения в жировых клетках, на которые воздействовали излучением (805 нм) без предварительной окраски ICG. В результате эксперимента получили, что площадь групп клеток падает по экспоненциальному закону (2). Было установлено, что общее время облучение, в течение которого клетки погибали, составило 60±5 минут. Точно такой же результат получили при фототермическом эффекте. Следовательно, окрашивание образца ткани ICG не даёт значительного увеличения поглощаемой энергии, и в том и в другом случае имеем чисто тепловое воздействие.

Инфракрасное излучение умеренной интенсивности оказывает неспецифическое тепловое воздействие на жировую ткань. Рост интенсивности включает адаптационные и регуляционные механизмы клеток, позволяющие восстановить жизнедеятельность клетки, но при дальнейшем увеличении интенсивности клетки не справляются с восстановлением, и происходят необратимые процессы. Такие изменения нарастают и приводят к разрушению объекта исследования. Увеличим интенсивность до 2,3 Вт/см" и исследуем адипоциты СКО. Особое внимание следует уделить изменению формы адипоцитов. Во время облучения у жировых клеток наблюдаются некоторые признаки апоптоза, клетки при длительном облучении сливаются — это хорошо демонстрируют фотографии одного из гистологических срезов (рис. 8), аналогичная картина наблюдается и в других экспериментах.

до облучения 14 мин облучения 30 мин облучения 55 мин облучения Рис. 8. Гистологический срез жировой ткани человека СКО при плотности излучения 2,3 Вт/см2

Увеличение интенсивности облучения до 2,3 Вт/см2 повлекло за собой увеличение скорости гибели клеток. Адипоциты гибли в среднем за 40±5 мин, что составляет 66,4 % от скорости гибели при мощности излучения в 2 Вт. Дальнейшее повышение температуры при росте мощности излучения до 5 Вт приводит сначала к испарению жидких сред в образце, а затем к обугливанию

органических компонентов жировой ткани. Взаимодействие импульсного излучения большой энергии с тканью вызывает локальное повышение температуры, вследствие чего происходит разрушение ткани.

Время гибели жировых клеток, предварительно обработанных лектином, и подвергнутых воздействию лазерного излучения, с интенсивностью 1,5 Вт/см2, составляет 24±8 мин. За этот же интервал времени погибают 39% адипоцитов, подвергнутых действию только ИК лазерного излучения.

Используя полученные результаты, можем проанализировать скорость гибели клеток только при нагреве лазерном излучением и при совместном действии лектина и излучения (рис. 9). Скорость гибели адипоцитов, обработанных лектином, составляет 0,39% и 0,58% от времени гибели клеток, облучаемых только лазером при мощности 2 и 3 Вт, соответственно. Взаимодействие света с молекулами образца приводит к их возбуждению и последующему переходу в основное состояние за счёт безизлучательных переходов с выделением тепла.

В заключении сформулированы основные результаты и выводы диссертационной работы.

Основные результаты и выводы работы

1. Исследована динамика гибели адипоцитов жировой ткани человека практически здорового и больного сахарным диабетом с нормальной массой тела и склонного к ожирению при гипертермии и совместного действия нагрева и биологически активных веществ, а также нагрева ИК излучения.

2. Выявлен характер и особенности клеточной гибели адипоцитов. Обнаружено что при физиологической гипертермии (43,5±0,5)°С возникают морфологические признаки апоптоза у адипоцитов здорового человека с нормальной массой тела и некроза у жировых клеток человека с нормальной массой тела и патологией сахарного диабета.

3. Установлено различие во времени гибели адипоцитов: клетки здорового человека гибли в 2 раза быстрее (время гибели составляло 60-70 мин), чем клетки человека с патологией сахарного диабета (время гибели - 120-140 мин).

32 мин облучения

Рис. 9. Скорость гибели адипоцитов тучного человека СКО при облучении

4 Впервые исследовано действие фукозоспецифичных лектинов (Azospinllum brasílense Sp7 и Laburnum anagyroides) на адипоциты тучных людей Растительный лектин Laburnum anagyroides не воздействует на адипоциты В то время как лектин бактерий рода Azospirillum brastlense Sp7 являлся активатором скорости гибели клеток

5 Впервые установлено, что воздействие бактериального лектина на адипоциты зависит, от его углеводной специфичности Показано, что углеводсвязывающий центр лектина азоспирилл принимает участие в его воздействии на клетки жировой ткани человека Однако это воздействие не является основным, поскольку и с заблокированным активным центром лектин продолжает оказывать влияние на адипоциты, хотя и менее выраженное По-видимому, сродство рецептора к данному лектину на поверхности адипоцита определяется не только связывающейся с лектином углеводной детерминантой, но также зависит и от свойств рецептора макромолекулы

6 Впервые обнаружены особенности воздействия гаптенов, специфичных к лектину Azospirillum (сахара - L-фукоза и D-галактоза, фермент — Р-глюкозидаза) при нагреве на адипоциты Обнаружено, что клетки гибнут быстрее, если их обработать раствором лектина Azospirillum, блокированным глюкозидазой, и затем подвергнуть нагреву

7 Выявлены особенности взаимодействия адипоцитов с лазерным излучением и совместного действия лектина Azospirillum и излучения Установлено, что лазерное излучение активирует гибель адипоцитов, а предварительная обработка клеток лектином увеличивает скорость их гибели в 2 раза

8 Нагрев адипоцитов ИК лазерным излучением до температуры (40,5±0,5)°С приводит к увеличению скорости гибели клеток в 2 раза по сравнению с контактным нагревом

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Черкасова О А, Симоненко Г В, Тучин В В Исследование жировой ткани при температурном воздействии // Проблемы оптической физики - Саратов Изд-во СГУ,2003 -С 32-38

2 Черкасова О А, Симоненко Г В, Тучин В В Моделирование апоптоза жировой ткани // Вторая научная молодежная школа "0птика-2002" Тр Конференции -С -Пб СПбГУ ИТМО, 2002 - С 27

3. Simonenko G.V., Cherkasova O.A., Denisova Т.О., Tuchin V.V. Thermal action on the lipocells // SPIE, 2003. - Vol. 5068. - P. 458-461.

4. Черкасова O.A. Исследование in vitro жировой ткани при внешних воздействиях // Вестник РГМУ, 2004. - № 3 (34). - С. 192.

5. Черкасова O.A., Симоненко Г.В., Тучин В.В. Температурное воздействие на жировые клетки // 111 международная конференция молодых ученных и специалистов "0птика-2003": Тр. Конференции. - С.-Пб.: СПбГУ ИТМО, 2003. -С. 294-295.

6. Черкасова O.A. Лектин как активатор гибели клеток жировой ткани // Современная техника и технологии в медицине, биологии и экологии / Материалы IV междунар. научн.-практ. конф., Новочеркасск, 19 дек. 2003 г. -Новочеркасск: ЮРГГУ, 2003. - С. 4-6.

7. Черкасова O.A. Активаторы гибели жировых клеток человека // 10 Всероссийская научная конференция студентов-физиков и молодых ученных: в 2 т. - Екатеринбург-Красноярск: Изд. АСФ России. - 2004. Т. 2. - С. 870-872.

8. Черкасова O.A. Исследование жировой ткани человека при воздействии на нее физического и биологического факторов. // Проблемы оптической физики. В 2 кн.-Саратов: Изд-во ГосУНЦ"Колледж".-2004. Кн. 1.-С. 149-153.

9. Черкасова O.A. Действие лектина на жировые ткани человека с патологией. // Проблемы оптической физики. В 2 кн. - Саратов: Изд-во ГосУНЦ "Колледж". -2004. Кн. 1.-С. 153-157.

Ю.Черкасова O.A., Пономарёва Е.Г., Никитина В.Е. Исследование влияния белков на адипоциты человека склонного к ожирению. // Наука и образование - 2004 / Материалы Международной научно-технической конференции: в 6 ч. -Мурманск: МГТУ.-2004.-Ч.6.-С. 131-135.

11. Черкасова O.A., Пономарёва Е.Г. Влияние лазерного излучения высокой интенсивности на жировые клетки человека в присутствии лектина бактерий рода Azospirillum brasilense Sp7 // Вестник РГМУ, 2005. - № 3 (42). - С. 194.

12.Cherkasova O.A., Simonenko G.V. Influence of laser radiation on fatty cells // II International conference on Laser Optics for Young Scientists (LOYS-2003). - St.-P„ 2003.-P. 141.

13.Cherkasova O.A. Influence of laser radiation on fatty cells // III международная конференция молодых ученых и специалистов "0птика-2003": Тр. Конференции. - С.-Пб.: СПбГУ ИТМО, 2003. - С. 296.

Н.Черкасова O.A. Взаимодействие ИК-излучения с адипоцитами // Медицинская экология: Сборник статей IV Международной научно-практической конференции. -Пенза, 2005.-С. 144-146.

15.Синицына Р.В., Черкасова O.A. Расчет скоростей возмущенных двухстадийных процессов с использованием графов // Радиотехника, 2005. - № 4. - С. 91-95.

16. Черкасова O.A., Пономарёва Е.Г., Никитина В.Е., Тучин В.В. Роль углеводсвязывающего центра бактериального лектина в его воздействии на морфологию адипоцитов при нагреве // 10-я Пущинская школа-конференция молодых ученных "Биология - наука XXI века": Сборник тезисов, Пущино, 1721 апр. 2006 г. - Пущино, 2006. - С. 122.

17.Черкасова O.A., Пономарёва Е.Г. Особенности морфологических изменений в адипоцитах при совместном действии нагрева и неактивного лектина азоспирилл // Вестник РГМУ, 2006. - № 2 (49). - С. 437.

18. Черкасова O.A. Влияние лектина блокированного фукозой на адипоциты человека склонного к ожирению // IV международная конференция молодых ученых и специалистов "0птика-2005": Тр. Конференции. - С.-Пб.: СПбГУ ИТМО, 2005.-С. 315-316.

19. Черкасова O.A. Влияние температуры на морфологию адипоцитов // IV международная конференция молодых ученых и специалистов "0птика-2005": Тр. Конференции. - С.-Пб.: СПбГУ ИТМО, 2005. - С. 317-318.

20. Черкасова O.A., Пономарёва Е.Г. Влияние фукозоспецифичного лектина на процесс гибели адипоцитов // Новые лекарственные средства: успехи и перспективы / Под. ред. И.Б. Абдрахманова, Ф.С. Зарудия, М.С. Юнусова. — Уфа: Гилем, 2005. - С. 195-198.

2[.Черкасова O.A., Тучин В.В., Пономарёва Е.Г., Никитина В.Е. Влияние бактериального лектина и роль его углеводсвязывающего центра при воздействии на адипоциты при повышенной температуре // Биофизика, 2007. — Т. 52.-Вып. 4.-С. 687-692.

22.Пономарёва Е.Г., Черкасова O.A., Никитина В.Е. Воздействие бактериального лектина и повышенной температуры на адипоциты // Фундаментальные и прикладные аспекты исследования симбиотических систем: Материалы всероссийской конференции с международным участием. Саратов, 25-27 сентября 2007г. - Саратов: Изд-во Научная книга, 2007. - С. 98.

Подписано в печать 8.10.07. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Гарнитура Times. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1. Тираж 100 экз. Заказ 180.

Отпечатано в типографии «Три А». Саратов, ул. Панфилова, 1.

Содержание диссертации, кандидата физико-математических наук, Черкасова, Ольга Алексеевна

ГЛАВА 1. СТРУКТУРА И СВОЙСТВА ЖИРОВОЙ ТКАНИ. МЕХАНИЗМЫ ПОВРЕЖДЕНИЯ КЛЕТОК. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Адипоциты. Состав жировой ткани. Физические и химические свойства жировой ткани.

1.2. Механизмы повреждения клеток и их причины.

1.3. Общие механизмы и характеристики гибели клеток.

1.3.1. Некроз.

1.3.2. Апоптоз.

1.4. Влияние физических и биохимических факторов на адипоциты.

ГЛАВА 2. ВОЗДЕЙСТВИЕ НАГРЕВА НА ЖИРОВУЮ ТКАНЬ.

2.1. Аппаратура и методы исследования.

2.2. Изменения жировых клеток у практически здоровых и больных сахарным диабетом людей при нагреве.

2.3. Результаты исследования воздействия нагрева на адипоциты.

ГЛАВА 3. ИССЛЕДОВАНИЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ПРИ НАГРЕВЕ НА ЖИРОВЫЕ КЛЕТКИ IN VITRO.

3.1. Материалы и методы исследования.

3.1.1 Приготовление смешанных растворов углеводов различной концентрации.

3.1.2 Микробиологическое исследование.

3.2. Исследования влияния лектинов на жизнедеятельность жировых клеток

3.2.1. Воздействие гипертермии на морфологию адипоцитов людей, склонных к ожирению.

3.2.2. Воздействие бактериального лектина при гипертермии на адипоциты тучных людей.

3.2.3. Воздействие бычьего сывороточного альбумина при нагреве на структурные изменения адипоцитов.

3.2.4. Воздействие растительного лектина на адипоциты при гипертермии.

3.3. Влияние углеводной специфичности лектина азоспирилл на структурные изменения в адипоцитах при гипертермии.

3.3.1. Воздействие лектина азоспирилл с заблокированным L-фукозой центром при гипертермии на адипоциты тучного человека.

3.3.2. Воздействие гипертермии и L-фукозы на адипоциты человека склонного к ожирению.

3.3.3. Воздействие лектина азоспирилл с заблокированным D-галактозой центром при гипертермии на адипоциты человека склонного к ожирению

3.3.4. Воздействие D-галактозы на адипоциты человека склонного к ожирению в условиях гипертермии.

3.3.5. Воздействие гипертермии и лектина азоспирилл с заблокированным 0-глюкозидазой центром на адипоциты тучного человека в норме и при патологии.

3.3.6. Воздействие гипертермии и fi-глюкозидазы на скорость гибели адипоцитов человека склонного к ожирению.

3.4. Основные результаты по воздействию внешних факторов на адипоциты

ГЛАВА 4. ВОЗДЕЙСТВИЕ ЛАЗЕРНОГО ИЗЛУЧЕНИЯ НА ЖИРОВЫЕ КЛЕТКИ.

4.1. Материалы и методы исследования.

4.2. Взаимодействие жировой ткани с излучением

4.2.1. Фототермическое воздействие на адипоциты тучного человека.

4.2.2. Нагрев лазерным излучением адипоцитов человека склонного к ожирению.

4.2.3. Совместное воздействие лазерного излучения и лектина азоспирилл на адипоциты тучного человека.

4.3. Основные результаты исследования по воздействию лазерного излучения на адипоциты.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование динамики гибели адипоцитов при гипертермии и воздействии лектинов"

Актуальность темы. Исследование механизмов гибели клетки является одной из актуальных проблем биофизики. Несмотря на большое количество экспериментальных данных [1-41], до сих пор остаются не выясненными многие механизмы этого явления, в частности, не до конца понятны механизмы регуляции гибели отдельных клеток в целостном многоклеточном организме. Актуальность этой проблемы определяется взаимосвязью нарушения регуляции процесса запрограммированной гибели клетки с большинством заболеваний [5,9,11,12,14,17,18,35,37,40,41]. Выявление конкретных механизмов нарушения регуляции клеточной гибели, сопровождаемых конкретными заболеваниями, позволит определить этиологию и патогенез данных заболеваний. Детерминация гибели клеток и ее регуляция - одна из центральных проблем биологии клетки.

В последние годы в биофизике успешно развиваются новые методы исследования человеческих тканей и органов[4,5,31,36,37], основанные на хорошо контролируемом по температуре, времени и пространству нагреве. С этой точки зрения особый интерес представляет жировая ткань. Так, например, жир характеризуется достаточно низкой температурой плавления, что может значительно повлиять на динамику нагрева тканей, имеющих жировые накопления. При нагреве от 24°С до 45°С жировая ткань претерпевает несколько фазовых переходов. Фазовые превращения "кристаллическая фаза -жидкость" в адипоцитах человека протекают в широком диапазоне температур, что связано с многокомпонентностью запасного жира [42-45]. Одной из важных проблем современной медицины и косметологии в частности, является исследование способов физического воздействия на жировые клетки с целью их разрушения. Одним из самых простых, но эффективных способов физического воздействия на жировые клетки, является гипертермия [31], эффективность которой можно усилить с помощью биоактивных веществ.

В настоящее время в качестве гистохимических реагентов большое внимание уделяется использованию лектинов. Это позволяет эффективно проводить селективное гистохимическое маркирование отдельных типов и популяций клеток, тканевых структур, а также осуществлять управление биохимическими процессами в клетках, в частности вызывать апоптоз [46-68].

Анализ литературы [31,32,36,40,60,62] показывает, что, проблема управления процессами гибели адипоцитов еще очень далека от своего решения. Например, недостаточно полно изучены механизмы повреждения жировых клеток, воздействие физических факторов на них и взаимодействие биоактивных веществ с жировой тканью. Всё это не позволяет пока однозначно осуществить выбор внешнего фактора, активного вещества и качественно предсказать результаты этих воздействий на биоткань. Таким образом, возникает потребность проведения исследований, направленных на определение морфологических изменений в адипоцитах, механизма гибели жировой ткани под воздействием физических (нагрев, ИК излучение) и биохимических.

В данной работе в качестве физических факторов выбрано тепловое воздействие (гипертермия), вызванная контактным нагревом или ИК лазерным излучением; в качестве биологически активных агентов выбраны нетоксичные фукозоспецифичные лектины Azospirillum brasilense Sp7 и Laburnum anagyroides.

Целью данной работы явились комплексное изучение морфологических изменений адипоцитов жировой ткани человека и механизмов их гибели в условиях гипертермического воздействия, анализ участия лектинов в регуляции клеточной гибели адипоцитов человека, склонного к ожирению, в норме и при патологии сахарного диабета, а также исследование морфологических изменений адипоцитов в условиях ИК (805 нм) лазерного воздействия.

В рамках работы решались следующие задачи:

- изучение морфологических изменений при гипертермии в адипоцитах жировой ткани человека в норме и при патологии;

- разработка методики воздействия лектинов на жировые клетки;

- изучение влияния лектинов на динамику гибели адипоцитов при гипертермии;

- исследование влияния углеводной специфичности лектина азоспирилл на структурные изменения в адипоцитах при нагреве;

- анализ морфологических изменений адипоцитов при нагреве ИК лазерным воздействии;

- изучение процесса гибели жировых клеток в условиях действия лектина азоспирилл и ИК лазерного излучения.

Научная новизна работы

1. Впервые исследована динамика гибели адипоцитов жировой ткани человека при нагреве в диапазоне физиологической гипертермии и при ИК лазерном воздействии.

2. Впервые изучено действие фукозоспецифичных лектинов Azospirillum brasilense Sp7 и Laburnum anagyroides на жировую ткань. Установлено, что лектины при нагреве оказывают разное влияние на адипоциты жировой ткани. Растительный лектин Laburnum anagyroides не оказывал влияния на гибель клеток, в то время как лектин бактерий рода Azospirillum brasilense Sp7 активировал скорость гибели клеток.

3. Впервые на примере жировой ткани показано, что лектин азоспирилл в совокупности с нагревом ((43,5±0,5)°С) активирует клеточную гибель.

4. Показано, что углеводсвязывающий центр лектина азоспирилл принимает участие в его воздействии на клетки жировой ткани человека. Однако влияние лектина характеризуется не только специфическим, но и не специфическим воздействием на адипоциты, поскольку и с заблокированным активным центром лектин продолжает оказывать влияние на адипоциты, хотя и менее выраженное.

5. Впервые рассмотрена динамика гибели адипоцитов жировой ткани людей с нормальной массой тела, склонных к ожирению и больных сахарным диабетом.

Практическая значимость

Проведенные исследования о характере гибели адипоцитов при комбинированном внешнем воздействии являются необходимой теоретической предпосылкой для разработки эффективных методов коррекции жировой массы, борьбы с опухолевыми новообразованиями, для выяснения механизма клеточной гибели (апоптоз или некроз). Исследования динамики гибели адипоцитов в норме и при патологии в условиях внешнего воздействия (нагрев, Ж лазерное воздействие, лектин, гаптены) существенно расширяет возможности диагностики и дифференциации патологий жировой ткани по характеру гибели адипоцитов, и открывают новые возможности для изучения мембраны жировых клеток.

Достоверность результатов

Достоверность полученных результатов обеспечивается адекватностью используемых методов измерения, обработки и анализа экспериментальных данных. Результаты проведенных исследований подвергались статистической обработке с использованием t-критерия Стьюдента [69]. Достоверными считали различия при р<0,05. Все оригинальные результаты воспроизводятся при повторении экспериментов.

Основные результаты и положения, выносимые на защиту

1. При нагреве до температуры (43,5±0,5)°С возникают морфологические признаки апоптоза у адипоцитов здорового человека с нормальной массой тела и некроза у жировых клеток человека с нормальной массой тела и патологией сахарного диабета. Время гибели клеток здорового человека примерно в 2 раза меньше, чем время гибели адипоцитов людей с нормальной массой тела и патологией сахарного диабета.

2. В условиях комбинированного воздействия лектина азоспирилл и нагрева до температуры (43,5±0,5)°С ускоряется процесс гибели клеток жировой ткани, как здоровых, так и больных сахарным диабетом людей СКО, при этом воздействие лектина азоспирилл характеризуется не только специфическим, но и не специфическим воздействием на адипоциты, поскольку и с заблокированным активным центром данный лектин продолжает оказывать влияние на адипоциты.

3. Нагрев адипоцитов ИК лазерным излучением до температуры (40,5±0,5)°С приводит к увеличению скорости гибели клеток в 2 раза по сравнению с контактным нагревом.

Апробация работы

Результаты работы докладывались и обсуждались на следующих международных конференциях: II международная научная молодежная школа "Оптика - 2002" (С.-Петербург, октябрь 2002); "Saratov Fall Meeting: International School on Optics, Laser Physics & Biophysics" (Саратов, октябрь 2002, 2003, сентябрь 2004, 2005); II International Conference "Laser Optics for young Scientists 2003" (С.-Петербург, июнь 2003); III международная конференция молодых ученых и специалистов "Оптика - 2003" (С.-Петербург, октябрь 2003); IV международная конференция молодых ученых и специалистов "Оптика - 2005" (С.-Петербург, октябрь 2005); международная научно-практическая конференция "Современная техника и технологии в медицине, биологии и экологии" (Новочеркасск, декабрь 2003); Пироговская студенческая научная конференция (Москва, март 2004, март 2005, март 2006, март 2007); X Всероссийская научная конференция студентов-физиков и молодых учёных "ВНКСФ-10" (Москва, апрель 2004); международная научно-техническая конференция "Наука и образование - 2004" (Мурманск, апрель 2004); IV Международная научно-практическая конференция "Медицинская экология" (Пенза, июнь 2005); V Всероссийский научный семинар и Молодежная научная школа "Химия и медицина" (Уфа, сентябрь 2005 г); 10-я Пущинская школа-конференция молодых ученных "Биология - наука XXI века" (Пущино, апрель 2006 г.); Всероссийская конференция с международным участием "Фундаментальные и прикладные аспекты исследования симбиотических систем" (Саратов, сентябрь 2007 г.).

Исследования, проводимые по теме диссертации, выполнялись в рамках грантов: грант РФФИ "Ведущие научные школы" № 00-15-96667 2000-2002 гг. (руководитель - профессор В.В. Тучин); международный грант CRDF № REC

006 2000-2003 гг.; грант Мин. образования РФ "Ведущие научно-образовательные коллективы" № 01.2003.15221; грант президента РФ "Поддержка научных школ" № 25.2003.2.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 22 работ (5 статьи в рецензируемых журналах, 15 статей в научных сборниках, 2 статья в сборнике тезисов докладов конференций).

Личный вклад соискателя

Личный вклад соискателя состоит в самостоятельной постановке и проведении экспериментов, обработке и интерпретации полученных результатов. Постановка исследовательских задач осуществлялась профессором, д. ф.-м. н. В.В. Тучиным. Исследования с лектинами проводили совместно с к.б.н. Е. Г. Пономарёвой и д.б.н. В.Е. Никитиной (ИБФРМ РАН, Саратов). Исследование по воздействию температурного фактора проводили совместно с к. ф.-м. н. Г. В. Симоненко.

Структура и объём работы

Диссертация состоит из введения, четырех глав, заключения и списка цитируемой литературы из 357 наименований. Работа изложена на 168 страницах, иллюстрирована 93 рисунками, из них 50 фотографии.

Заключение Диссертация по теме "Биофизика", Черкасова, Ольга Алексеевна

Основные результаты и выводы работы

4. Впервые исследовано действие фукозоспецифичных лектинов {Azospirillum brasilense Sp7 и Laburnum anagyroides) на адипоциты тучных людей. Растительный лектин Laburnum anagyroides не воздействует на адипоциты. В то время как лектин бактерий рода Azospirillum brasilense Sp7 являлся активатором скорости гибели клеток.

5. Впервые установлено, что воздействие бактериального лектина на адипоциты зависит, от его углеводной специфичности. Показано, что углеводсвязывающий центр лектина азоспирилл принимает участие в его воздействии на клетки жировой ткани человека. Однако это воздействие не является основным, поскольку и с заблокированным активным центром лектин продолжает оказывать влияние на адипоциты, хотя и менее выраженное. По-видимому, сродство рецептора к данному лектину на поверхности адипоцита определяется не только связывающейся с лектином углеводной детерминантой, но также зависит и от свойств рецептора макромолекулы.

6. Впервые обнаружены особенности воздействия гаптенов, специфичных к лектину Azospirillum (сахара - L-фукоза и D-галактоза, фермент - р-глюкозидаза) при нагреве на адипоциты. Обнаружено, что клетки гибнут быстрее, если их обработать раствором лектина Azospirillum, блокированным глюкозидазой, и затем подвергнуть нагреву.

7. Выявлены особенности взаимодействия адипоцитов с лазерным излучением и совместного действия лектина Azospirillum и излучения. Установлено, что лазерное излучение активирует гибель адипоцитов, а предварительная обработка клеток лектином увеличивает скорость их гибели в 2 раза.

8. Нагрев адипоцитов ИК лазерным излучением до температуры (40,5±0,5)°С приводит к увеличению скорости гибели клеток в 2 раза по сравнению с контактным нагревом.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проведенные исследования являются необходимой теоретической предпосылкой для разработки эффективных методов коррекции жировой массы, борьбы с опухолевыми новообразованиями, для выяснения механизмов клеточной гибели (апоптоз или некроз), существенно расширяют возможности диагностики и дифференциации патологий жировой ткани по характеру гибели адипоцитов и открывают новые возможности для изучения мембраны жировых клеток.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата физико-математических наук, Черкасова, Ольга Алексеевна, Саратов

1. Албертс Б., Брей Д., Льюис Дж., Рэфф М., Роберте К., Уотсон Дж. Молекулярная биология клетки: В 3 т. -М., Мир, 1994.

2. Coppack S. W, Jensen М. D., Miles J. М. In vivo regulation of lipolysis in human//J. Lipid Res, 1994,-Vol. 35.-P. 177-193.

3. Wahrenberg H, Lonnqvist F, Arner P. Mechanisms underlying regional differences in lipolysis in human adipose tissue // J. Clin. Invest, 1989. Vol. 84. -№8.-P. 458-467.

4. Программированная клеточная гибель // Под ред. проф. B.C. Новикова. -С.-Пб.: Наука, 1996. 276 с.

5. Лушников Е.Ф, Абросимов А.Ю. Сравнительная морфология апоптоза и некроза клеток опухолей / Тезисы 1 Белорусского съезда патологоанатомов и судебных медиков. Минск, 1990-1991. Т. 2. - С. 299-300.

6. Magno G, Joris I. Apoptosis, oncosis, necrosis // Amer. J. Pathol, 1995 -Vol.146.-№1.-P. 3-15.

7. Agid Y. Aging, disease and nerve cell death // Bull. Acad. Natl. Med, 1995.-Vol. 179.-№6.-P. 1193-1203.

8. McConkey DJ, Zhivotovsky B, Orrenius S. Apoptosis-molecular mechanisms and biomedical implications // Molec. Aspects Med. -1996. Vol. 17. - P. 1 -110.

9. Фильченко A.A, Стойка P.C. Апоптоз и рак. К.: Морион, 1999. -184 с.

10. Cafforio Р, Romito A, Grizzuii М.А. et al. Methods for assessing programmed cell death // Recent Prog. Med, 1996. Vol. 87. - № 7-8. - P. 366-373.

11. Jonston N.V. Neuronal death in development, aging and disease // Neurobiol. Aging, 1994. Vol. 15. - № 2. - P. 235-236.

12. Macaya A. Apoptosis in the nervous system // Rev. Neurol, 1996. Vol. 24.-№135.-P. 1356-1360.

13. Kerr J.F.R, Wyllie A.H, Curne A.R. Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide-ranging implications in tissue kinetics // Br. J. Cancer, 1972. -Vol. 26.-№2.-P. 239-257.

14. Colucci W.S. Apoptosis in the heart // New. Engl. J. Med., 1996. Vol. 335. -P. 1224-1226.

15. Olivetti G., Abbi R., Quaini F. et al. Apoptosis in failling human heart // New. Engl. J. Med., 1997.-Vol. 336.-P. 1131-1141.

16. Маянский A.H., Маянский H.A., Абаджиди M.A., Заславская М.И. Апоптоз: начало будущего // Микробиология, 1997. № 2. - С. 88-94.

17. Робинсон М.В., Труфакин В.А. Апоптоз клеток иммунной системы // Успехи соврем, биол., 1991.-Т. 111.-№2.-С. 246-259.

18. Романенко А.М. Апоптоз и рак // Арх. Патол., 1996.-№3.-С. 18-22.

19. Уманский С.Р. Апоптоз: молекулярные и клеточные механизмы // Молекулярная биология, 1996. Т. 30. - Вып. 3. - С. 487-502.

20. Pan Н., Yin С., Dyke T.V. Apoptosis and cancer mechanisms // Cancer Surveys, 1997. Vol. 29. - P. 305-327.

21. Белушкина H.H., Хасан Хамад Али, Северин С.Е. Молекулярные основы апоптоза // Вопросы биол. мед. и фарм. химии, 1998. №4. - С. 15-23.

22. Хананашвили Я. А., Хлопонин П. А., Хлопонин Д. П. Апоптоз: морфогенетические и физиологические аспекты. Ростов-на-Дону: Изд. РГМУ, 2001.-56 с.

23. Лушников Е.Ф., Загребин В.М. Апоптоз клеток: морфология, биологическая роль, механизмы развития // Архив патологии, 1987. Т. 49. - С. 84-89.

24. Arends M.J., Wyllie А.Н. Apoptosis. Mechanism and role in patology // Intern.Rev.Exp.Pathol., 1991. Vol.32. -P.223-254.

25. Abastado J.-P. Apoptosis: function and regulation of cell death // Res.Immunol. 1996. Vol. 147. - P. 443-456.

26. Wyllie A.H. Apoptosis (the 1992 Frank Memorial Lecture) // British. J. Cancer, 1993. Vol. 67. - P. 205-208.

27. Wyllie A.H. Apoptosis: an overview // British Medical. Bulletin, 1997. -Vol. 53.-P. 451-465.

28. Lawen A. Apoptosis an introduction // BioEssays, 2003.- Vol.25. - P. 888-896.

29. Evan G, Littlewood T. A matter of life and cell death // Science, 1998. -Vol. 281.-P. 1317-1322.

30. Walker N.I, Harmon B.V, Gober G.C, Kerr J.F.R. Patterns of cell death // Methods and Achievements in Experimental Pathology, 1988. Vol. 13. - P. 18-54.

31. Prins J.B, Walker N.I, Winterford C.M. and Cameron D.P. Apoptosis of human adipocytes in vitro // Biochem. Boiphys Res. Commun., 1994. Vol. 201. -№2.-P. 500-507.

32. Prins J.B, Niesler C.U, Winterford C.M. et al. Tumor necrosis factor-a induces apoptosis of human adipose cells // Diabetes, 1997. Vol. 46. - P. 1939-1944.

33. Кудрявец Ю.И, Фильченков А.А, Абраменко И.В. и др. Динамика апоптозных событий, индуцированных фактором некроза опухолей в лейкозных клетках U-937 // Эксперим. Онкология, 1996. Т. 18. - С. 353-365.

34. Oral N, Kapadia S, Nakano M. et al. Tumor necrosis Factor alfa and Falling Human Heart //Clin. Cardiology, 1995. Vol. 18 (Suppl. IV). - P. 20-27.

35. Bristow M.R. Tumor necrosis factor and cardimyopathy //Circulation, 1999.-Vol.97.-P. 1340-1341.

36. Vaux, D.L, Korsmeyer S.J. // Cell, 1999. Vol. 96. - P. 245-254.

37. Thornbery N.A, Lazebnik Y. // Science, 1998.-Vol. 281.-P. 1312-1316.

38. Unger R.H, Orci L. Lipoapoptosis: its mechanism and its diseases // Biochem. Boiphys. Acta, 2002. Vol. 1585. - P. 202-212.

39. Бший Р. О., Стойка Б. Р., Стойка Р. С., Запрограмована смерть юптин (апоптоз) у репродуктивных органах ссавщв // Бюлогш тварин, 2002. Т. 4. - № 1-2. - С. 31-43. - на укр. яз.

40. Химия жиров./ Под ред. Тютюнникова Б.Н. М.: Колос, 1992. 448 с.

41. Garti N., Sato К. Crystallization and Polymorphism of Fats and Fatty Acids. New York: Marcel Dekker, 1988. - 249 p.

42. Верещагин А.Г. Биохимия триглицеридов. M.: Наука, 1972. 185 с.

43. Рубин А.Б. Биофизика Кн. 2 Биофизика клеточных процессов. М.: Высш. шк., 1987.-303 с.

44. Bilyy R., Stoika R. Lectinocytochemical detection of apoptotic leukemia L1210 cells // Cytometry, 2003. Vol. 56A. - P. 89-95.

45. Porras F., Lascurain R., Chavez R., Ortiz В., Hernandez P., Debray H., Zenteno E. Isolation of the receptor for Amaranthus leucocarpus lectin from murine naive thymocytes // Glycobiology, 2000. Vol. 10. - P. 459-465.

46. Луцик М.Д., Панасюк E.H., Луцик А.Д. Лектины. Львов: Виша школа, 1981.- 152 с.

47. Франц X. Лектины: свойства, функции и возможности применения // Журн. Микробиол., энзимологии и иммунологии, 1980. № 1. - С. 3-10.

48. Sharon N., Lis Н. Lectins. 2 ed. - Amsterdam: Kluwer scientific publ., 2003.-454 p.

49. Луцик М.Д., Кусень С.И. Исследование мембранных гликопротеинов эритроцитов человека с применением лектинов // Укр. Биохим. Журнал, 1987. -Т. 59.-№6.-С. 3-9.

50. Хомутовский О.А., Луцик М.Д., Передерей О.Ф. Электронная гистохимия рецепторов клеточных мембран. Киев: Наукова думка, 1986. -166 с.

51. Войтенюк Н.Н. Митогенный фактор лимфоцитов человека, индуцированный фитогемагглютинином // Проблемы гемотологии и переливания крови, 1975. № 3. - С. 48-51.

52. Петров Р.В, Чередеев А.Н. Т- и В-лимфоциты // Успехи современной биологии, 1974. Т. 77. - № 1. - С. 90-105.

53. Микаелян Н.П, Максина А.Г, Князев Ю. А. Состояние мембран эритроцитов при сахарном диабете // Лаб. Дело, 1991. -№ 9. С. 41-44.

54. Никитина В.Е, Пономарева Е.Г, Итальянская Ю.В, Богомолова Н.В. Гомеостаз и инфекционный процесс // Материалы Второй Всерос. конф. -Саратов, 1998.-С. 52.

55. Kawiak J, Skorski Т, Ciechanowicz A, et al. Cytochemical characterization of mouse L1210 leukemia // Immunol. Invest, 1988. Vol. 17. - P. 543-550.

56. Golab J, Zagozdzon R, Kozar K, et al. Potentiated anti-tumor effectiveness of combined therapy with interleukin-12 and mitoxantrone of L1210 leukemia in vivo // Oncol. Rep, 2000. Vol. 7. - P. 177-181.

57. Czech M. P, Lynn W.S, Stimulation of glucose metabolism by lectins in isolated white fat cells // Biochem. Biophys. Acta, 1973. Vol. 297. - P. 368-377.

58. Hedo J.A, Harrison L.C, Roth J, Binding of insulin receptors to lectin: evidens for common carbohydrate determinants on several membrane receptors // Biochemistry, 1981. Vol. 20. -P. 3385-3393.

59. Ng T.B, Li W.W, Yeung H.W. Effect of lectins with various carbohydrate binding specificities on lipid metabolism in isolated rat and hamster adipocytes // Int. J. Biochem, 1989. Vol.21. - №2. - P.149-155.

60. Лахтин B.M. Лектины в исследовании белков и углеводов // ВИНИТИ Биотехнология, 1987 № 2. - С. 288.

61. Никитина В.Е. Свойства, биологическая активность и возможные области применения лектинов азоспирилл // 1-е рабочее совещание микробиологов Поволжья "Фундаментальные аспекты микробиологии". Саратов, 2000. http://web.saratov.ru/ibppm.

62. Никитина В.Е., Богомолова Н.В., Бугаева И.О., Пономарева Е.Г., Тихомирова Е.И. Лектины в иммунологии // Научно-информационное пособие. Саратов: Изд-во Сарат. гос. мед. ун-та, 2001. - 28 с.

63. Никитина В.Е., Богомолова Н.В., Пономарева Е.Г. Лектины в экспериментальной и клинической онкологии // Научно-информационное пособие. Саратов: Изд-во Сарат. гос. мед. ун-та, 2001. - 54 с.

64. Антонюк Л.П., Игнатов В.В. О роли агглютинина зародышей пшеницы в растительно-бактериальном взаимодействии: гипотеза и экспериментальные данные в ее поддержку // Физиология растений, 2001. Т. 48. - № 3. - С. 427-433.

65. Ойвин И.А. Статистическая обработка результатов экспериментальных исследований // Патол. физиология и экспериментальная терапия, 1960. № 4. - С. 76-89.

66. Шурыгин Д.Я., Вядицкий П.О., Сидоров К.А. Ожирение. Л.: Медицина, 1975. - 263 с.

67. Lafontan М., Daug L., Berlan М. Alpha adrenergic anti-lipolytic effect of adrenaline in human fat cells of the thigh // Eur. J. Clin. Invest, 1979. Vol. 9. - P. 261-266.

68. Lafontan M., Berlan M., Fat cells adrenergic receptors and the control of white and brown fat cell function // J. Lipid. Res., 1993. Vol. 34. - P. 1057-1091.

69. Motulsky H.J., Insel P.A. Adrenergic receptors in man. Direct identification, physiologic regulation and clinical alfa-ations // New engl. J. Med., 1982.-Vol. 308.-P. 18-29.

70. Arner P. Adrenergic receptor function in fat cells // Am J. Clin. Nutr., 1992.-Vol. 55.-P. 2285-2365.

71. Lonnqvist F., Nyberg В., Wahrenberg H., Arner P. Catecholamine-induced lipolysis in adipose tissue of the elderly // J. Clin. Invest, 1990. Vol. 85. -P. 1614-1621.

72. Arner P, Marcus С, Karpe B. et al. Role of alpha-adrenoceptors for adipocytes size in man // Eur, J. Clin. Invest, 1987. Vol. 17. - P. 58-62.

73. Wahrenberg H, Lonnqvist F, Engfeldt P, Arner P. Abnormal action of catecholamines on lipolysis in adipocytes of type I diabetic patients treated with insulin // Diabetes, 1989. Vol. 38. - P. 524-533.

74. Arner P, Engfeldt P, Nowak J. In vivo observations on the lipolytic effect of noradrenaline during therapeutic fasting // J. Clin. Endocr. Metab, 1981. Vol. 53. -P. 1207-1212.

75. Татонь Ян Ожирение: патофизиология, диагностика, лечение. -Варшава: Польское Мед. Изд., 1981. 363 с.

76. Giyer A, Van R.L.R. New perspectives in adipose tissue: structure, function and development. London: Butterworths & Co, 1985. - P. 65-85.82. www.selfcare.ru publication.

77. Lean M.E.J. Brown adipose tissue in humans // Proc. Nutr. Soc, 1989. -Vol. 48.-P. 243-256.

78. Vikman H-L, Ranta S, Kiviluoto T, Ohisalo J.J. Different metabolic regulation by adenosine in omental and subcutaneous adipose tissue // Acta. Physiol. Scand, 1991. Vol. 142. -P. 405-410.

79. Fredholm B.B, Sollevi A. The release of adenosine and inosine from canine subcutaneous adipose tissue by nerve stimulation and noradrenalin // J. Physiol, 1981. Vol. 313. -P. 351-367.

80. Arner P. Adenosine, prostaglandins and phosphodiesterase as targets for obesity pharmacotherapy // Int. J. Obes, 1993. Vol. 17. - № 1. - P. 57-62.

81. Stoneham S, Kiviluoto T, Keso L, and Ohisalo J. Adenosine and the regional differences in adipose tissue metabolism in women // Acta. Endocrinol, 1988.-Vol. 118.-P. 327-331.

82. Грин Н., Стаут У., Тейлор Д. Биология: В 3 т. / Под ред. Р. Сопера. -М.: Мир, 1990.

83. Campbell P.J., Carlson M.G., Nurjhan N. Fat metabolism in human obesity // Am J. Physiol., 1994. Vol. 266. - P.600-618.

84. Editorial Infant and adult obesity // Lancet, 1974. Vol. 1. - P. 17-18.

85. Лейтес C.M. Патофизиология жирового обмена. M., 1964. - 43 с.

86. Rohner-Jeanrenaud F., Jeanrenaud В. Neuroendocrine aspects of obesity: relationships between neuropeptide Y and leptin//Topical. Endocrinol.,- 1997-Vol. 6.-P. 7-10.

87. Friedman M., Halaas J.L. Leptin and the regulation of body weight in mammals // Nature, 1998. Vol. 395(6704). - P. 763-770.

88. Caro J.F. Leptin: From 1958 to the Present. // Canad. J. Diab. Care., 1998. -Vol. 22(1).-P. S18-S23.

89. Bray G.A., York D.A. Leptin and clinical medicine: a new piece in the puzzle of obesity // J. Clin. Endocrinol. Metab., 1997. Vol. 82. - № 9. - P. 2771-2776.

90. Auwerx J, Staels B. Leptin // Lancet, 1998. Vol. 351(9104). - P. 737-742.

91. Coleman D.L. Obese and Diabetes: two mutant genes causing diabetes-obesity syndromes in mice // Diabetologia, 1978. Vol. 14. - P. 141-148.

92. Coleman D.L., Hummel K.P. Effects of parabiosis of normal with genetically diabetic mice // Am J. Physiol., 1969. Vol. 217. - P. 1298-1304.

93. Halaas J.L., Gajiwala K.S., Maffei M., et al. Weight reducing effects of the plasma protein encoded by the obese gene // Science, 1995. Vol. 269. - P. 543-546.

94. Bado A., Levasseur S., Attoub S. et al. The stomach is a source of leptin // Nature, 1998. Vol. 394(6695). - P. 790-793.

95. Masuzaki H., Ogawa Y., Sagawa N. et al. Nonadipose tissue production of leptin: leptin as a novel placenta-derived hormone in humans // Nature Med., 1997. -Vol.3.-P. 1029-1033.

96. Zhang F., Basinski M.B., Beals J.M. et al. Crystal structure of the obese protein leptin-ElOO // Nature, 1997. Vol. 387(6629). - P. 206-209.

97. Soukas A, Cohen P, Socci N.D., Friedman J. M. Leptin-specific patterns of gene expression in white adipose tissue // Gene Develop, 2000. Vol. 14(8). - P. 963-980.

98. Considine R.V, Sinha M.K, Heiman M.L. et al. Serum immunoreactive -leptin concentrations in normal weight and obese humans // New Engl. J. Med, 1996. -Vol. 334.-P. 324-325.

99. Kolaczynski J.W, Considine R.V, Ohannesian J. et al. Responses of leptin to short-term fasting and refeeding in humans: a link with ketogenesis but not ketones themselves // Diabetes, 1996. Vol. 45. - P. 1511-1515.

100. Havel P.J, Kasom-Karakas S, Dubuc G.R., Mueller W, Phinney S.D. Gender differences in plasma leptin concentrations // Nat. Med, 1996. Vol. 2. - P. 949-250.

101. Maffei M, Halaas J, Ravussin E. et al. Leptin levels in human and rodent: Measurement of plasma leptin and ob RNA in obese and weight-reduced subjects // Nat.Med, 1995.-Vol. l.-P. 1155-1161.

102. Tartaglia L.A, Dembski M, Weng X. et al. Identification and expression cloning ofa leptin receptor, OB-R//Cell, 1995.-Vol. 83.-P. 1263-1271.

103. Strosberg A.D, Issad T. The involvement of leptin in humans revealed by mutations in leptin and leptin receptor genes Current Awareness. // Trends Pharmacol. Sci, 1999. Vol. 20(6). - P. 227-230.

104. Lord G.M, Matarese G, Howard J.K, Baker R.J, Bloom S.R, Lechler R.I. Leptin modulates the T-cell immune response and reverse starvation induced immunosuppression // Nature, 1998. Vol. 394. - P. 897-901.

105. Kieffer T.J. Heller R.S, Leech C.A, Holz G.G, Habener J.F. Leptin inhibits insulin secretion by activating beta cell ion channels // Diabetes, 1997. Vol. 46. -P. 1087-1093.

106. Wang J, Liu R, Hawkins M, Barzilai N, Rozetti L. A nutrient-sensing pathway regulates leptin gene expression in muscle and fat // Nature, 1998. Vol. 393. -P. 684-688.

107. Sierra-Honigmann M.R, Nath A.K, Murakami C, Garcna-Cardeca G, Papapetropoulos A, Sessa W.C. et al. Biological action of leptin as an angiogenic factor. Science 1998; 281:1683-1686.

108. Halaas J.L., Boozer С., Blair-West J., Fidahusein N., Denton D.A., Friedman J.M. Physiological response to long-term peripheral and central leptin infusion in lean and obese mice // Pros. Natl. Acad. Sci. USA, 1997. Vol. 94(16). - P. 8878-8883.r>

109. Ravussin E., Pratley R.E., Maffei M., Wang H., Friedman J.M., Bennett P.H., Bogardus C. Relatively low plasma leptin concentrations precede weight gain in Pima Indians // Nature Med., 1997. Vol. 3(2). - P. 238-240.

110. Banks W.A., Kastin A.J., Huang W., Jaspan J.B., Maness L.M. Leptin enters the brain by a saturable system independent of insulin // Peptides, 1996. Vol. 17. -P. 305-311.

111. Montague C.T., Farooqu S., Whitehead J.P. et al. Congenital leptin deficiency is associated with severe early-onset obesity in humans // Nature, 1997. -Vol. 387.-P. 903-908.

112. Strobel A., Issad Т., Camoin L., Ozata M., Strosberg A.D. A leptin missense mutation associated with hypogonadism and morbid obesity // Nat. Genet., 1998.-Vol. 18.-P. 213-215.

113. Bray G. A., York D., A. Leptin and clinical medicine: a new piece in the puzzle of obesity // J. Clin. Endocrinol. Met., 1997. Vol. 82. - № 9. - P. 2771-2776.

114. Vankelecom H., Carmeliet P., Van Damme J., Billiau A., Denef C. Production of interleukin-6 by folliculo-stellate cells of the anterior pituitary gland in a histotypic cell aggregate culture system // Neuroendocrinology, 1989. Vol. 49. -P. 102-106.

115. Kameda Т., Matsuzaki N., Sawai K., Okada Т., Saji F., Matsuda Т., et al. Production of interleukin-6 by normal human trophoblast // Placenta, 1990. Vol. 11. -P. 205-213.

116. Kishimoto T, Akira S, Narazaki M, Taga T. Interleukin-6 family of cytokines and gpl30 // Blood, 1995. Vol. 86. - P. 1243-1254.

117. Sehgal P.B. Regulation of IL6 gene expression // Res. Immunol, 1992. -Vol. 143.-P. 724-734.

118. Kishimoto T, Taga T, Akira S. Cytokine signal transduction // Cell, 1994.-Vol. 76.-P. 253-262.

119. Stahl N, Yancopoulos G.D. The alphas, betas, and kinases of cytokine receptor complexes // Cell, 1993. Vol. 74. - P. 587-590.

120. Papanicolaou D.A, Tsigos C, Torpy D.J, Defensor R, Thompson B, Chrousos G.P. Recombinant interleukin-6 effects on pituitary secretion in humans Abstract. // J. Invest. Med, 1996. Vol. 44. - P. A266.

121. Breuninger L.M, Dempsey W.L, Uhl J, Murasko D.M. Hydrocortisone regulation of interleukin-6 protein production by a purified population of human peripheral blood monocytes // Clin. Immunol. Immunopathol, 1993. Vol. 69. - P. 205-214.

122. Soszynski D, Kozak W„ Conn C.A, Rudolph K, Kluger M.J. Beta-adrenoceptor antagonists suppress elevation in body temperature and increase in plasma IL-6 in rats exposed to open field // Neuroendocrinology, 1996. Vol. 63. - P. 459-467.

123. Libert C., Takahashi N., Cauwels A., Brouckaert P., Bluethmann H., Fiers W. Response of interleukin-6-deficient mice to tumor necrosis factor-induced metabolic changes and lethality // Eur. J. Immunol., 1994. Vol. 24. - P. 2237-2242.

124. Culley F.J., Harris R.A., Kaye P.M., McAdam K.P., Raynes J.G. C-reactive protein binds to a novel ligand on Leishmania donovani and increases uptake into human macrophages // J. Immunol., 1996. Vol. 156. - P. 4691-4696.

125. Hager K., Machein U., Krieger S., Piatt D., Seefried G., Bauer J. Interleukin-6 and selected plasma proteins in healthy persons of different ages // Neurobiol. Aging., 1994. Vol. 15. -P. 771-772.

126. Cohen H.J., Pieper C.F., Harris Т., Rao K.M., Currie M.S. The association of plasma IL-6 levels with functional disability in community-dwelling elderly // J. Gerontol. A Biol. Sci. Med. Sci., 1997. Vol. 52. - P. M201-M208.

127. Vgontzas A.N., Papanicolaou D.A., Bixler E.O., Kales A., Tyson K., Chrousos G.P. Elevation of cytokines in disorders of excessive daytime sleepiness: role of sleep disturbance and obesity // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1997. Vol. 82. -P. 1313-1316.

128. Bataille R., Klein B. C-reactive protein levels as a direct indicator of interleukin-6 levels in humans in vivo // Arthritis. Rheum., 1992. Vol. 35. - P. 982-984.

129. Bauer J., Strauss S., Schreiter-Gasser U., Ganter U., Schlegel P., Witt I., et al. Interleukin-6 and alpha-2-macroglobulin indicate an acute-phase state in Aizheimer's disease cortices // FEBS Lett, 1991. Vol. 285. - P.l 11-114.

130. Boden G., Shulman Gl. Free acids in obesity and type 2 diabetes: defining their role in the development of insulin resistance and p-cell dysfunction // Eur. J. Clin. Invest, 2002. Vol. 32 (Suppl 3). - P. 14-23.

131. Jeguer E, Tappy L. Regulation of body weight in humans // Physiol. Rew, 1999.- Vol. 79.-№2.-P. 451-475.

132. Серов B.B, Шехтер А.Б. Соединительная ткань (функциональная морфология и общая патология). М.: Медицина, 1981. - 312 с.

133. Edens N.K, Leibel R.L, Hirsch J. Mechanism of free fatty acid re-esterification in human adipocytes // J. Lipid. Res, 1990. Vol. 31. - P. 1423-1430.

134. Dole V.P. The fatty acid pool in adipose tissue // J. Biol. Chem, 1961. -Vol. 236.-P. 3121-3124.

135. Cornow K, Pascoe L, White PC. Genetic analysis of the human type 1 angiotensin II receptor // Mol. Endocronol, 1992. Vol. 6. - P. 1113-1118.

136. Marian A.J, Yu Q.T, Workman R, et al. Angiotensin-converting enzyme polymorphism in hypertrophic cardiomyopathy and sudden cardiac death // Lancet, 1993.-Vol. 342 (8879). P. 1085-1086.

137. Marre M, Bernadet P, Gallois Y, Savagner F, Guyene T-T, Hallab M, et al. Relationships between angiotensin I-converting enzyme gene polymorphism, plasma levels, and diabetic retinal and renal complications // Diabetes, 1994. Vol. 43. -P.384-388.

138. Myerson S, Hemingway H, Budget R. et al. Human angiotensin I-converting enzyme gene and endurance performance // J. Appl. Physiol, 1999, Vol. 87 (4). - P. 1313-1316.

139. Bengtsson G., Olivercrona T. Lipoprotein lipase: some effects of activator proteins // Eur. J. Biochem., 1980. Vol. 106. - P. 549.

140. Eckel R.H. Lipoprotein lipase: a multifunctional enzyme relevant to common metabolic diseases // N. Engl. J. Med., 1989. Vol. 320. - P. 1060-1068.

141. Eckel R.A., Yost T.J. Weight reduction increases adipose tissue lipoprotein lipase responsiveness in obese women // J. Clin. Invest., 1987. Vol. 80. -P. 992-997.

142. Rayker P.V., Fung M.C., and Anderson B.D. The role of protein and lipid domains in the uptake of solutes by human stratum corneum // Pharm. Res., 1988. -Vol. 5.-P. 140-150.

143. Schwartz R.S., Brunzell J.D. Increase of adipose tissue lipoprotein lipase activity with weight loss // J. Clin. Invest., 1981. Vol. 67. - P. 1425-1430.

144. Pykalisto O.P., Smiht P.H., Brunzell J.D. Determinants of human adipose tissue lipoprotein lipase. Effect of diabetes and obesity on basal- and diet-induced activity // J. Clin. Invest., 1975. Vol. 56. - P. 1108-1116.

145. Kern P.A., Ong J.M., Goers J.F., Pedersen M.E. Regulation of lipoprotein lipase immunoreactive mass in isolated human adipocytes // J. Clin. Invest., 1988. -Vol. 81.-P. 398-406.

146. Kern P.A., Ong J.M., Saffari В., Carty J. The effect of weight loss on the activity and expression of adipose-tissue lipoprotein lipase in very obese humans // N. Engl. J.Med., 1990.-Vol. 322.-P. 1053-1059.

147. Kern P. A., Marshall S., Eckel R.H. Regulation of lipoprotein lipase in primary cultures of isolated human adipocytes //J. Clin. Invest., 1985. Vol. 75. -P. 199-208.

148. Kern P.A., Saghizadeh M., Ong J.M., Bosch R.J., Deem R., Simsolo R.B. The expression of tumor necrosis factor in human adipose tissue // J. Clin. Invest., 1995.-Vol. 95.-P. 2111-2119.

149. Reynisdottir S., Langin D., Carlstrom K., Holm C., Rossner S., Arner P. Effects of weight reduction on the regulation of lipolysis in adipocytes of women with upper-body obesity // Clinical Science, 1995. Vol. 89. - № 4. - P.421-429.

150. Stralfors P., Olsson H., Belfrage P. Hormone sensitive lipase. In: Boyer P. D., Krebs E. G. The enzymes. -N.Y.: Academic Press, 1987. Vol. 18. - P. 147-177.

151. Bjorntorp P. Adipose tissue distribution and function // Int. J. Obes., 1991. -Vol. 15.-P. 67-81.

152. Beck-Nielsen H. General characteristics of the insulin resistance syndrome: preva lence and heritability European Group for the study of Insulin Resistance (EGIR) // Drugs, 1999. Vol. 58. - P. 5-7.

153. Bergman R. Non-esterified fatty acids and the liver: why is insulin secreted into the portal vein? // Diabetologia, 2000. Vol. 43. - P. 946-953.

154. Boden G. Shulman Gl. Free acids in obesity and type 2 diabetes: defining their role in the development of insulin resistance and p-cell dysfunction // Eur. J. Clin. Invest., 2002. Vol. 32. - № 3. - P. 14-23.

155. Hotamasligil G.S. Molecular mechanism of insulin resistance and the role of the adipocyte // Int. J. Obes. 2000. Vol. 24. - № 4. - P. 23-27.

156. Joseph N.A., Greenberg A.S. Adipocytokines and insulin resistance // J. Clin. Endocrinol. Metab., 2004. Vol. 89. - № 2. - P. 447-460.

157. Reaven G.M. Banting Lecture: role of insulin resistance in human disease //Diabetes, 1988.-Vol. 37.-P. 1595-1607.

158. Weyer C., Funahashi Т., Tanaka S., et al. Hypoadiponectinemia in obesity and type 2 diabetes: close association with insulin resistance and hyperinsulinemia // J. Clin. Endocrinol. Metab., 2001. Vol. 86. - P. 1930-1935.

159. Loftus T.M., Kuhajda F.P., Lane M.D. Insulin depletion leads to adipose-specific cell death in obese but not lean mice // Proceed. Nat. Acad. Sci. USA, 1998. -Vol. 95.-P. 1416-1420.

160. Kelley D., Bray G., Xavier F. et al. Clinical efficacy of orlistat therapy in overweight and obese patients with insulin-treated type 2 diabetes // Diabetes, 2002. -Vol. 25.-P. 1033-1041.

161. Annane D. Corticosteroids for septic shock // Crit. Care. Med., 2001. -Vol. 29.-№7.-P. 15-19.

162. Arner P. Differences in lipolysis between human subcutaneous and omental adipose tissues // Ann. Med, 1995. Vol. 27. - P. 435-438.

163. Берпггейн Л.М. Эндокринная функция жировой ткани //Природа, 2005. -№ 3.

164. Haunter Н. Human adipocytes state of the art. In: Progress in obesity research. Bth. International congress on obesity. B. Guy-Grand, G. Ailhaud, eds. London: John Libbey 1999; 47-53.

165. Moitra J, Mason M.M, Olive M. et al. Life without white fat: a transgenic mouse // Genes Dev., 1998. Vol. 12. - P. 3168-3181.

166. Ouchi N, Kihara S, Nishida M et al. Adipocyte-derived plasma protein, adiponectin, suppress lipid accumulation and class A scavenger receptor expression in human monocyte-derived macrophages // Circulation, 2001. Vol. 103. - P. 1057-1063.

167. Jansson P.-A, Larsson A, Smith U, Lonnroth P. Glycerol production in subcutaneous adipose tissue in lean and obese humans // J. Clin. Invest, 1992. Vol. 89. -P. 1610-1617.

168. Yanovsky S, Yanovsky J. Obesity // N. Engl. Med, 2002. Vol. 346. -№8.-P. 591-602.

169. Ramsay T.G. Obesity: Fat cells // J. Clin. Endocr. Metab, 1996. Vol. 25. -№4.-P. 847-870.

170. York D.A.J. Obesity: Lessons from animal models of obesity // Clin. Endocr.Metab, 1996.-Vol.25.-№4.-P. 781-800.

171. Leiter L.A. Obesity: overview of pathogenesis and treatments // Can. J. Physiol. Pharmacol, 1985.- Vol. 64. -№ 6. -P. 814-817.

172. Willard M.D. Obesity: types and treatments // Am. Fam. Physician, 1991. -Vol. 43.-№6.-P. 2099-2108.

173. Мельниченко Г.А. Ожирение в практике эндокринолога // РМЖ, 2001.-Т. 2.-№9.-С. 82-87.

174. Kissebah A, Krakower G. Regional adiposity and morbidity // Physiol. Rev, 1994.-Vol. 74.-P. 761-811.

175. Schwartz M.W., Seeley R.J. The new biology of body weight regulation // J. Am. Diet. Assoc., 1997. Vol. 97. - № 1. - P. 54-58.

176. Hager A. Adipose cell size and number in relation to obesity // Postgrad. Med. J., 1975.-Vol. 53.-P. 101-107.

177. Cheer D.B. The control of fat cell mass and replication. The DNA unit a personal 20-year study // Earlv. Hum. Dev., 1985. Vol. 12. - № 3. - P. 211-239.

178. Prins J.B., ORahilly S. Regulation of adipose cell number in man // J. Clin. Sci., 1997. Vol. 91 - № 1. - P. 3-11.

179. Бутрова C.A. Метаболический синдром: патогенез, клиника, диагностика, подходы к лечению // РМЖ, 2001ю Т. 2. - № 9. - С. 56-60.

180. Никитин Ю.П., Казека Г.Р., Симонова Г.И. Распространенность компонентов метаболического синдрома X в неорганизованной городской популяции (эпидемиологическое исследование) // Кардиология, 2001. Т. 9. - С. 37-40.

181. Auwerx J., Mangelsdorf D. X-ceptors, nuclear receptors for metabolism // Excerpta Medica, Atherosclerosis, 2000. Vol. XII. - P. 21-40.

182. Donahoe C.P., Lin D.H., Kirschenbaum D.S., Keesey R.E. Metabolic consequences of dieting and exercise in the treatment obesity // J. Consult. Clin. Psychol., 1984. Vol.52. - P. 827-836.

183. Despres J.-P., Marette A. Relation of components of insulin resistance syndrome to coronary disease risk // Curr. Opin. Lipidol., 1994. Vol. 5. - P. 274-289.

184. Sonnenberg G.E., Krakower G.R., Kissebah A.H. A novel pathway to the manifesta tions of metabolic syndrome // Obesity Research, 2004. Vol. 12-№2.-P. 180-192.

185. Matsuzawa Y., Funahashi Т., Nacamura T. Molecular mechanism of metabolic syndrome X: contribution of adipocyte-derived bioactive substances // Ann. N. Y. Acad. Sci., 1999. Vol. 892. - P. 146-154.

186. Neel J, Julius S., Weder A. et al. Syndrome X: is it for real? // Genet. Epidemiol., 1998.-Vol. 15.-P. 19-32.

187. Vanhala M.G., Pitkajarvi Т.К., Kumpusalo E.J., Takala J.K. Metabolic syndrome in middle-aged Finnish population // J. Cardiovasc. Risk, 1997. Vol. 4. -P. 291-295.

188. Шевченко О.П, Праскурничий E.A, Шевченко A.O. Метаболический синдром. -M.: Реафарм, 2004. 141 с.

189. Гнедов Д.А. Жировой компонент массы тела у мужчин, больных ишемической болезнью сердца, и его клиническое значение // Кардиология, 1999.-№1,-С. 60-64.

190. Gillum R, Mussolino М, Madans J. Body fat distribution, obesity, overweight and stroke incidence in women and men: the NHANES I Epidemic Follow-up Study // Int. J. Obes. Relat. Metab. Disord, 2001. Vol. 25. - P. 628-638.

191. KalkhoffR.D, Hartz A.J, Ruplay D.C, Kissebah A, Kelber S. Relationship of body fat distribution to blood pressure, carbohydrate tolerance, and plasma lipids in healthy obese women // J. Lab. Clin. Med, 1983. Vol. 102. - P. 621-627.

192. Rexrode K, Buring J, Manson J. Abdominal and adiposity and risk of coronary heart disease in men // Int. J. Obes. Relat. Metab. Disord, 2001. Vol. 25. -P. 1047-1056.

193. Быков B.JI. Цитология и общая гистология. С.-Пб, 2000.

194. Vague G, Finasse R. Comparative anatomy of adipose tissue // Handbook of Physiology. Washington, American Physiology Society, 1965.

195. Markman В, Barton FE Jr. Anatomy of the trunk and lower extremity // Plast. Reconstr. Surg., 1987. Vol. 80. - P. 248-253.

196. Kosmetik international, 2001. № 2.

197. Harris R.B., Martin R.J. Changes in lipogenesis and lipolysis associated with recovery from reversible obesity in mature rats // Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1989.-Vol. 191.-P. 82-89.

198. Savard R., Deshaies Y., Despres J.P. et al. Lipogenesis and lipoprotein lipase in human adipose tissue: reproducibility of measurements and relationships with fat cell size // Can. J. Physiol. Pharmacol., 1984. Vol. 62. - P. 1448-1453.

199. Schrado E., Spennetta Т., Gordon E. Fatty acid synthesis in human adipose tissue // J. Biol. Chem., 1969. Vol. 244. - P. 2761-2768.

200. Coppack S. W., Jensen M. D., Miles J. M. In vivo regulation of lipolysis in human // J. Lipid Res., 1994. Vol. 35. - P. 177-193.

201. Wahrenberg H., Lonnqvist F., Arner P. Mechanisms underlying regional differences in lipolysis in human adipose tissue // J. Clin. Invest., 1989. Vol. 84. -№8.-P. 458-467.

202. Barondes S.H. Soluble lectins: a new class of extracellular proteins // Science, 1984. V. 223. - № 4642. - P. 1259-1264.

203. Пучкова T.B., Путвинский A.B., Владимиров Ю.А. Снижение электрической прочности как основной механизм нарушения барьерной функции биомембран // Докл. АН СССР, 1983. Т. 270. - № 6. - С. 1489-1492.

204. Владимиров Ю.А., Парнев О.М., Черемисина З.П. Электрическая прочность мембран митохондрий // Биол. мембраны, 1984.-Т. 1 .-№ 4.-С. 428-434.

205. Антонов В.Ф., Смирнов Е.Ю., Шевченко Е.В. Липидные мембраны при фазовых превращениях. М.: Наука, 1992. - С. 125.

206. Древинг В.П, Калашников Я.А. Правило фаз. М.: Изд. Моск. Унта, 1964.-454 с.

207. Molecular biology of the cell / Alberts B, Johnson A, Lewis J, Raff M, Roberts K, Walter P. 4 ed. - New York: Garland Science, 2002. - 1536 p.

208. Чизмаджев Ю.А, Аракелян В.Б, Пастушенко В.Ф. Биофизика мембран. М.: Наука, 1981. - С. 207-229.

209. Антонов В.Ф. Липидные поры: стабильность и проницаемость мембран//СОЖ, 1998.-№10.-С. 10-17.

210. Yuen W, Fung К, Lee С, Choy Y, Kong S, Ко S, Kwok T Hyperthermia and tumour necrosis factor-alpha induced apoptosis via mitochondrial damage // Life Sci., 2000. Vol. 67. - P. 725-732.

211. Inamori T, Ghamen A.-H, Higuchi W.I, Srinivasan V. Macromolecule transport in and effective pore size of ethanol pretreated human epidermal membrane // Inter. J. Pharmac, 1994. Vol. 104. - P. 113-123.

212. Scott E.R., Laplaza A.I, White H.S, Phipps J.B. Transport of ionic species in skin: contribution of pores to the overall skin conductance // Pharmac. Research, 1993.-Vol. 10.-№ 12.-P. 1699-1709.

213. Iwamoto K, Sunamoto J, Inoue K, Endo T, Nojima S. Importence of surface structure in liposomal membranes of glyceroglycolipids // Biochim. Biophys. Acta, 1982.-Vol. 691.-P. 44-51.

214. Hauner H, Petruschke Th, Russ M, Rohrig K, Eckel J. Effects of tumor necrosis factor alpha (TNFa) on glucose transport and lipid metabolism of newly-differentiated human fat cells in cell culture // Diabetologia, 1995. Vol. 38. - P. 764-771.

215. Gay C.L, Guy R.H, Golden G.M., Mak V.H.W., Francoeur M.L. Characterization of low-temperature (i.e., <65°C) lipid transitions in human stratum corneum // J. Invest. Dermatol, 1994. Vol. 103. - P. 233-239.

216. Branconnier R. J, Branconnier M. E, Walshe Т. M. et al. Blocking the Ca2+-activated cytotoxic mechanisms of cholinergic neuronal death: a novel treatment strategy for Alzheimer's disease // Psychopharmacol. Bull, 1992. Vol. 28. -№ 2. -P. 175-181.

217. Alsopp Т.Е., Wyatt S., Paterson H.F. et al. The protooncogene bcl-2 selectively rescue neurotrophic-factor-dependent neurons from apoptosis // Cell, 1995. Vol. 73. -№ 2. - P. 295-307.

218. Brune В., Golkel C., von-Knethen A. Cytokine and low-level nitric oxide prestimulation block p53 accumulation and apoptosis of RAW 264.7 macrophages // Biochem. biophys. Res. Commun., 1996. Vol. 229. - № 2. - P. 396-401.

219. Enokicdo Y., Araki Т., Tanaka K. et al. Involvement of p53 in DNA strand break-induced apoptosis in postmitotic CNS neurons // Eur. J. Neurosci., 1996. -Vol. 8. № 9. - P. 1812-1821.

220. Sancar A. DNA repair in humans // Ann. Rev. Genet., 1995. Vol. 29. -№2.-P. 69-105.

221. Garzetti G.G., Ciavattini A., Provinciali M. et al. Expression of p53 and apoptosis of tumor cells in locally advanced cervical carcinoma after cisplatin based neoadjuvant chemotherapy // Anticancer Res., 1996. Vol. 16. - № 5B. - P. 3229-3234.

222. Hunt K.K., Deng J., Liu T.J. et al. Adenovirus-mediated overexpression of the transcription factor E2F-1 induces apoptosis in human breast and ovarian carcinoma cell lines and does not require p53 // Cancer. Res., 1997. Vol. 57. - № 21. -P. 4722-4726.

223. Kuwano K., Kunitake R., Kawasaki M. et al. P21/Cip/Sdil and p53 expression in association with DNA strand breaks in idiopathic pulnonary fibrosis // Am J. Response. Crit. Care. Med., 1996. Vol. 154. - P. 477-483.

224. Soini Y., Paakko P. Extent of apoptosis in relation to p53 and bcl-2 expression in germ cell tumors //Human Pathol., 1996.-Vol.27.-№ ll.-P. 1221-1226.

225. Управляемая гипертермия / Баллюзек Ф. В., Баллюзек М. Ф., Виленский В. И. и др. С-Пб.: Невский Диалект, 2001. - 124 с.

226. Шевченко В.П, Фомичев Н.Г, Верещагин И.П, Быкова Е.В, Кривошапкин A.J1. Способ проведения общей управляемой гипертермии человеческого организма Патент РФ 10.08.2002, № 2186550 С2.

227. Жуковский Ю.Г, Алексеева О.С, Быковская Е.Ю, Жуковская В.А, Кузнецова Г.В, Михайлова Л.Ю, Попов А.А, Радько А.А. Способ повышения резистентности организма к гипертермическому воздействию Патент РФ2006.2003, № 2206335 С1.

228. Светицкий П.В. Использование тепла в лечении злокачественных опухолей. Ростов-на Дону: Эверест, 2001. - 160 с.

229. Сувернев А.В, Патока А.В, Писарев А.А, Семенов И.Р. Способ общей гипертермии Патент РФ 10.11.1996, № 93056247.

230. Сувернев А.В, Писарев А.А, Верещагин И.П, Брюн Е.А, Шамов С.А, Теркулов Р.А, Кузнецов А.К. Способ купирования абстинентного синдрома у наркоманов Патент РФ 20.12.1999, № 2142762.

231. Schlemmer М, Lindner L.H, Abdel-Rahman S, Issels R.D. Principles, technology and indication of hyperthermia and part body hyperthermia // Radiologe, 2004. Vol. 44. -№ 4. - P. 301-309.

232. Douwes F, Bogovi C. J, Douwes O, Migeod F, Grote C. Whole-body hyperthermia in combination with platinum-containing drugs in patients with recurrent ovarian cancer // Int. J. Clin. Oncol, 2004. Vol. 9. - № 2. - P. 85-91.

233. Solarte E, Isaza C, Criollo W, Rebolledo A, Arroyave J, RamHrez H, Neira R. In vitro effects of 635 nm low intensity diode laser irradiation on the fat distribution of one adipose cell // Proc. SPIE, 2002. Vol. 4829. - № 2. - P. 961-962.

234. Neira R, Arroyave J, Ramnrez H, Ortiz-Neira C, Solarte E, Sequeda F, Gutifirrez M. I. Fat liquefaction: Effect of Low -Level Laser Energy on adipose tissue // Plast. Reconstr. Surg. J, 2002. Vol. 110. -№ 3.-P. 912-920.

235. Bachman T. Suction lipectomy and body sculpturing. StLouis: Mosby, 1987.-791 p.

236. Draelos Z.D., Marenus K.D, Cellulite: Etiology and purported treatment // Dermatol. Surg., 1997.-Vol. 23.-P.l 177-1181.

237. Greenway F.L. Obesity: Surgery for obesity // Endocr. Metab. Clin., 1996. -Vol. 25. № 4. - P. P1005-P1030.

238. Rohrich R.J., Beran S.J., Kenkel J.M. Ultrasound-assisted Liposuction. -St Louis: Quality Med Publ, 1998.

239. Schrudde J. Lipexeresis as a means of eliminating local adiposity // Aesthetic. Plast. Surg., 1980. Vol. 4. - P. 215-221.

240. Matarasso A., Kim R.W., Krai J.G. The impact of liposuction on body fat // Plast. Reconstr. Surg., 1998. Vol. 102. - № 5. - P. 1686-1689.

241. Gasparotti M. Superficial liposuction: a new application of the technique for aged and flaccid skin // Aesth. Plast. Surg., 1992. Vol. 16. - P. 141-153.

242. Indech R. Subcutaneous neural stimulation or local tissue destruction US Patent 10.08.82, №4.343.301.

243. Fellner D.G. Method of removing adipose tissue from the body US Patent 01.09.92, №5.143.063.

244. Weiss W.V. Method of non-invasive reduction of human site-specific subcutaneous fat tissue deposits by accelerated lipopysis metabolism US Patent 16.04.96, №5.507.790.

245. Richards W.F., LeVay P. Microwave applicator and method of operation -US Patent 23.06.98, № 5.769.870.

246. Klebanov G.I., Chichuk T.V., Shutova L.N., Stranadko E.F., Vladimirov Yu.A. Hematoporphyrin derivative or phthalocyanine photosensitized hemolysis of erythrocytes under laser irradiation // Membr. and Cell Biol., 1998. Vol. 11. - № 5. - P. 597-607.

247. Tuchin V.V. Lasers light scattering in biomedical diagnostics and therapy //J. Laser Appl, 1993. Vol. 5. - № 2-3. - P. 43-60.

248. Niemz M.H. Laser-tissue interactions. Fundamentals and applications. -Berlin: Springer, 1996.

249. Тучин В.В. Лазеры и волоконная оптика в биомедицинских исследованиях. Саратов: Изд-во СГУ, 1998. - 383 с.

250. Приезжев А.В, Тучин В.В, Шубочкин Л.П. Лазерная диагностика в биологии и медицине. М.: Наука, 1989. - 240 с.

251. Bilyy R.O, Antonyuk V.O, Stoika R.S. Cytochemical study of role of a-d-mannose- and b-d-galactose-containing glycoproteins in apoptosis // J. Mol. Histol, 2004.-Vol. 00.-P. 1-10.

252. Ruiz-Ruiz M, Lopez-Rivas A. p53-mediated up-regulation of CD95 is not involved in genotoxic drug-induced apoptosis of human breast tumor cells // Cell Death. Differ, 1999. Vol. 6. - P. 271-280.

253. Stoika R, Yakymovych M, Souchelnytskyi S, Yakymovych I. Potential role of transforming growth factor 31 in drug resistance of tumor cells // Quarterly, 2003. Vol. 50 - № 2. - P. 497-508.

254. Cuatrecasas P. and Tell G.P.E. Insulin-like activity of Concanavalin A and wheat germ agglutinin direct interactions with insulin receptors И Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1973. - Vol. 70. - № 2. - P. 485-489.

255. Katzen H.M., Vicario P.P., Mumford R.A., Green B.G. Evidence that the insulin-like activities of conconavalin A and insulin are mediated by a common insulin receptor linked effector system // Biochemistry, 1981. Vol. 20. - P. 5800-5809.

256. Васянин С.И., Гамалей И.А., Трошин A.C. Конканавалин A: Взаимодействие с поверхностью мышечного волокна и стимуляция транспорта D-ксилозы // Доклады Академии наук СССР, 1982. Т. 262. - № 2. - С. 466-468.

257. Никитина В. Е., Богомолова Н. В., Пономарева Е. Г., Соколов О. И. Влияние лектина азоспирилл на способность семян к прорастанию // Известия РАН. Серия биологическая. 2004. - №4. - С. 431-435.

258. Черкасова О.А., Симоненко Г.В., Тучин В.В. Исследование жировой ткани при температурном воздействии // Проблемы оптической физики. -Саратов: Изд-во СГУ, 2003. С. 32-38.

259. Черкасова О.А., Симоненко Г.В., Тучин В.В. Моделирование апоптоза жировой ткани // Вторая научная молодежная школа "0птика-2002": Тр. Конференции. С.-Пб., 2002. - С. 27.

260. Граменицкий Е.М. Прижизненная окраска клеток и тканей в норме и патологии. JL: Изд-во мед. лит., 1963. - 154 с.

261. Александров В Л. Методика прижизненной окраски основными красителями тканей и органов млекопитающих //Тр. АМН СССР.- 1949-№3.-С. 10-15.

262. Фихман Б. А. Микробиологическая рефрактометрия. М., 1967. - 280 с.

263. Advances in Biophotonics / Eds. Wilson Brian W, Tuchin Valery V, and Tanev Stoyan. IOS Press, Amsterdam, Netherlands, 2005.

264. Zimnyakov D.A, Simonenko G.V, Bashkatov A.N. et al. Spatial resolved microspectrometry for hair optical and geometry studies: CCD hair tester // Proc. SPIE, 2001. Vol. 4244. - P. 96-102.

265. Simonenko G.V, Cherkasova O.A, Denisova Т.О., Tuchin V.V. Thermal action on the lipocells // SPIE, 2003. Vol. 5068. - P. 458-461.

266. Черкасова O.A. Исследование in vitro жировой ткани при внешних воздействиях // Весник РГМУ, 2004. № 3 (34). - С. 192.

267. Черкасова О.А, Симоненко Г.В, Тучин В.В. Температурное воздействие на жировые клетки // III международная конференция молодых ученных и специалистов "0птика-2003": Тр. Конференции. С.-Пб, 2003. - С. 294-295.

268. Тиунов JI. А. Основные механизмы метаболизма ксенобиотиков в организме человека и животных. В кн.: Итоги науки и техники. Серия токсикология. Метаболизм ксенобиотиков в организме человека и животных. -М.: ВИНИТИ, 1981.-Т.12.-С.5-65.

269. Румпшнский JI.3. Математическая обработка результатов эксперимента. -М.: Наука, 1971.-192 с.

270. Дунин-Барковский И.В, Смирнов Н.В. теория вероятностей и математическая статистика в технике. Общая часть. М.: Гос. Изд. Технико-теоретической литературы, 1955. - 556 с.

271. Итальянская Ю.В, Никитина В.Е, Пономарева Е.Г, Аленькина С.А. Лектины бактерий рода Azospirillum // Изучение и применение лектинов. Т. 1. -Тарту: Изд-во Тартус. Ун-та, 1989. С. 179-184.

272. А. с. №1312773 СССР. Опуб. 22.01.87. Способ получения фукозоспецифичного лектина / В.Е. Никитина, Ю.В. Итальянская.

273. Пономарева Е.Г. Биологическая активность лектинов бактерий рода Azospirillum: Дис. канд. биол. наук. Саратов, 1997. -105 с.

274. Никитина В.Е, Итальянская Ю.В. Бактериальный фукозоспецифичный лектин // Информ. листок № 563-88. Саратов: МТЦНТИП, 1988. - С. 1-2.

275. Итальянская Ю.В., Никитина В.Е., Карпунина JI.B. Лектины азоспирилл: некоторые физико-химические и биологические свойства // Молекулярные и генетические механизмы взаимодействия микроорганизмов с растениями: Сб. науч. тр. Пущено, 1989. - С.201-205.

276. Никитина В.Е., Аленькина С.А., Итальянская Ю.В., Пономарева Е.Г. Очистка и сравнение лектинов с клеточной поверхности активных и неактивных по гемагглютинации клеток азоспирилл // Биохимия, 1994. Т. 59. -Вып. 5.-С. 656-662.

277. Аленькина C.A., Никитина B.E. Влияние лектина Azospirillum brasilense Sp7 на активность гетерогенной |3-глюкозидазы // 2-й Биохимический съезд: Тез. Доклада. М., 19-23 мая 1997. - С. 166.

278. Лахтин В.М. Лектины регуляторы метаболизма // Биотехнология, 1986.-№6.-С. 66-79.

279. Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. М.: Медицина, 1978. - 394 с.

280. Lofitus Т.М., Kuhajda F.P., Lane M.D. Insulin depletion leads to adipose-specific cell death in obese but not lean mice // Proceed. Nat. Acad. Sci. USA, 1998. -Vol. 95.-P. 1416.

281. Shuldiner A., Yang R., Gong D.W. Resistin, obesity and insulin resistance //N.Engl. J. Med., 2001.-Vol. 345. -№ 18.-P. 1345-1346.

282. Мамедов M.H.,. Перова H.B., Метельская B.A., Органов Р.Г. Взаимосвязь абдоминального типа ожирения и синдрома инсулинрезистентности у больных с артериальной гипертензией // Кардиология, 1999. -№ 9. С. 18-22.

283. Черкасова О.А. Лектин как активатор гибели клеток жировой ткани // Современная техника и технологии в медицине, биологии и экологии /

284. Материалы IV междунар. научн.-практ. конф, Новочеркасск, 19 дек. 2003 г. -Новочеркасск: ЮРГТУ, 2003. С. 4-6.

285. Черкасова О.А. Активаторы гибели жировых клеток человека // 10 Всероссийская научная конференция студентов-физиков и молодых ученных: в 2 т. Екатеринбург-Красноярск: Изд. АСФ России. - 2004. Т. 2. - С. 870-872.

286. Черкасова О.А. Исследование жировой ткани человека при воздействии на нее физического и биологического факторов. // Проблемы оптической физики. В 2 кн. Саратов: Изд-во ГосУНЦ "Колледж". - 2004. Кн. 1. - С. 149-153.

287. Черкасова О.А. Действие лектина на жировую ткань человека с патологией. // Проблемы оптической физики. В 2 кн. Саратов: Изд-во ГосУНЦ "Колледж". - 2004. Кн. 1. - С. 153-157.

288. Синицына Р.В, Черкасова О.А. Расчет скоростей возмущенных двухстадийных процессов с использованием графов // Радиотехника, 2005. № 4. -С. 91-95.

289. Александров В.Я. Клетки, макромолекулы и температура. Л.: Наука, 1975. - 330 с.

290. Айзенберг Э.И. Влияние температуры на митозы многослойного эпителия кожи лягушки//Арх. Анат, гист. и эмбр, 1934.-Т. 13.-№ 1.-С. 115-133.

291. Александров В. Я. Специфическое и неспецифическое в реакции клетки на повреждающее воздействие. Дисс. биол. наук. JI, 1940. 120 с.

292. Samali A, Gorman A.M., Cotter T.G. Apoptosis the story so far // Experientia, 1996.-Vol. 52.-P. 933-941.

293. Зенгбуш П. Молекулярная и клеточная биология: В 3 т. / Под ред. В.

294. A. Энгельгардта. М.: Мир, 1982. - Т. 3. - 344 с.

295. Зенгбуш П. Молекулярная и клеточная биология: В 3 т. / Под ред.

296. B. А. Энгельгардта. -М.: Мир, 1982.

297. Burger M. M. A difference in the architecture of the surface membrane of and virally transformed cells // Proc. natl. acad. sci. USA, 1969. Vol. 62. - P. 994-1001.

298. Nicolson G. L. Trans-membrane control of the reseptors on normal and tumor cells //Biochim. biophys. acta, 1976. Vol. 458. - P. 1-20.

299. Yonish-Rouach E., Resnitsky D., Lotem J., Sachs L., Kimchi A., Oren M. Wild-type p53 induces apoptosis of myeloid leukaemic cells that is inhibited by interleukin-6 // Nature, 1991. Vol. 352. - P. 345-347.

300. Итальянская Ю.В., Никитина B.E., Панина Н.П., Кураксина С.К. Мутагенная и митогенная активность фукозоспецифичного лектина азоспирилл // Изучение и применение лектинов. Т. 2. Тарту: Изд-во Тартус. Ун-та, 1989. - С. 205-208.

301. Никитина В.Е., Богомолова Н.В., Кураксина С.К., Пономарева Е.Г. Митогенная активность фукозоспецифичного лектина // Материалы 2-ой Всерос. конф. "Гомеостаз и инфекционный процесс". Саратов, 1998. - С. 52.

302. Королев Н.П Функции лектинов в клетках // Итоги науки и техники. Общие проблемы физико-химической биологии. М.: Наука, 1984. - Т. 1. - С. 232-254.

303. Аленькина С.А., Никитина В.Е., Борисова-Головко М.В. Изучение взаимосвязи лектиновой, а-, (3-глюкозидазных и |3-галактозидазной активности азоспирилл // Микробиология, 2001. Т. 70. - № 5. - С.647-650.

304. Аленькина С.А., Жаркова В.Р., Никитина В.Е. Изучение стабилизирующего влияние лектинов азоспирилл на активность (3-глюкозидазы // Прикладная биохимия и микробиология. В печати.

305. Синицына Р.В., Черкасова О.А. Анализ смешанного влияния обратимого эффектора на кинетику двухстадийных процессов // Вопросы прикладной физики, 2004. Вып. 11. - С. 228-233.

306. Эмануэль Н.М., Кнорре Д.Г. Курс химической кинетики. М.: ВШ, 1984.-463 с.

307. Гольдштейн Б.Н. Кинетические графы в энзимологии. М.: Наука, 1989.-165 с.

308. Tuchin V.V. Laser and fiber optics in biomedicine // Laser Physics, 1993. Vol. 3. - № 3,4. - P. 767-820.

309. Аникина Е.Б, Шапира Е.И, Губкина Г.Л. Применение низкоэнергетического лазерного излучения у пациентов с прогрессирующей близорукостью // Вестник офтальмологии, 1994. Т. 3. - С. 17-19.

310. Аскарьян Г.А. Увеличение прохождения лазерного и другого излучения через мягкие мутные физические и биологические среды // Квантовая электроника, 1982. Т. 9. - № 7. - С. 1379-1383.

311. Губкина Г.Л. Метод транссклерального лазерного воздействия на ослабленную цилиарную мышцу и его эффективность: Дисс. канд. мед. наук. -М, 1994.-124 с.

312. Тучин В.В. Исследование биотканей методами светорассеяния // Успехи физических наук, 1997. Т. 167. - С. 517-539.

313. Тучин В.В, Башкатов А,Н, Генина Э.А, Синичкин Ю.П, Лакодина Н.А. In vivo исследование динамики иммерсионного просветления кожи человека // ПЖТФ, 2001. Т. 27.-№ 12. - С. 10-14.

314. Шубочкин Л.П. Светорассеивающие свойства биологических структур применительно к задачам лазерной диагностики в офтальмологии: Дисс. канд. физ-мат. наук. Саратов, 1987. - 132 с.

315. Ярославская А.Н. Спектроскопические исследования биотканей и суспензий клеток применительно к задачам лазерной диагностики и терапии: Дисс. канд. физ.-мат. наук. Саратов: СГУ, 1999. - 142 с.

316. Neira R, Neira-Ortiz С. Low level laser- assisted liposculpture: Clinical report of 700 cases // Aesthetic. Surg. J, 2002. - Vol. 22. - P. 451-455.

317. Schmitt J.M, Kumar G. Optical scattering properties of soft tissue: a discrete particle model // Appl. Opt, 1998. Vol. 37. - P. 2788-2797.

318. Schuele G, Vitrin E, Huie Ph, O'Connell-Rodwell C, Palanker D, Perelman L.T. Optical spectroscopy noninvasively monitors response of organelles to cellular stress//J. ofBiomed. Optics, 2005.-Vol.10.-№ 5.-P. 051404-1 -8.

319. Крюк С.А., Мостовников В.А., Хохлов И.В., и др. Терапевтическая эффективность низкоинтенсивного лазерного излучения. Минск, 1986. - С. 5-120.

320. Чудновский В.М., Бондарев И.Р., Оратовская С.В. Лазеры и медицина. Ташкент, 1989.-Ч. 1.-С. 142-143.

321. Федосеев А.В. Лазеры и медицина. -М., 1989. -Ч. 1. -С. 140-141.

322. Oschner М. Photophysical and photobiological processes in the photodynamic therapy of tumors // J. Photochem. Photobiol. B. Biol., 1997. Vol. 39. - P. 1-18.

323. Oleinick N.L. and Evans H.H. The photobiology of photodynamic therapy: cellular targets and mechanisms//Radiat. Res., Suppl., 1998.-Vol. 150.-P. S146-S156.

324. Cherkasova O.A., Simonenko G.V. Influence of laser radiation on fatty cells // II International conference on Laser Optics for Young Scientists (LOYS-2003).- St.-P., 2003.-P. 141.

325. Cherkasova O.A. Influence of laser radiation on fatty cells // III международная конференция молодых ученных и специалистов "0птика-2003": Тр. Конференции. С.-Пб., 2003. - С. 296.

326. Черкасова О.А. Взаимодействие ИК-излучения с адипоцитами // Медицинская экология: Сборник статей IV Международной научно-практической конференции. Пенза, 2005. - С. 144-146.

327. Черкасова О.А., Пономарева Е.Г. Влияние лазерного излучения высокой интенсивности на жировые клетки человека в присутствии лектина бактерий рода Azospirillum brasilense Sp7 // Вестник РГМУ, 2005. № 3 (42). - С. 194.

328. Лазеры в клинической медицине: Руководство для врачей / Под ред. С. Д. Плетнева. -М.: Медицина, 1981.-400 с.

329. Bailey Ch.A., Cowan Th.M., Liu V.G., Lemley E.C., Chen W.R. Optimization of selective hyperthermia // J. of Biomed. Optics, 2004. Vol.9. - № 3. - P. 648-654.

330. Бек Дж., Блакуэлл Б., Сент-Клэр Ч., мл. Некорректные обратные задачи теплопроводности: Пер. с англ. -М.: Мир, 1989. 312 с.

331. Биофизические характеристики тканей человека. Справочник / Березовский В. А., Колотилов Н. Н.; Отв. ред. и авт. предисл. Костюк П. Г.— Киев: Наук, думка, 1990. 224 с.

Информация о работе

Черкасова, Ольга Алексеевна
кандидата физико-математических наук
Саратов, 2007
ВАК 03.00.02

Диссертация

Исследование динамики гибели адипоцитов при гипертермии и воздействии лектинов - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы