Исследование аномальных проявлений генетического аппарата человека при псориазе на уровне белковых продуктов генов лейкоцитов и популяционного состава лимфоцитов

Сунцова, Инна Гурьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Исследование аномальных проявлений генетического аппарата человека при псориазе на уровне белковых продуктов генов лейкоцитов и популяционного состава лимфоцитов
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Исследование аномальных проявлений генетического аппарата человека при псориазе на уровне белковых продуктов генов лейкоцитов и популяционного состава лимфоцитов"

На правах рукописи

РГВ ОА

£ з '«¡'и >Ж.)

СУНЦОВА Инна Гурьевна

"ИССЛЕДОВАНИЕ АНОМАЛЬНЫХ ПРОЯВЛЕНИЙ ГЕНЕТИЧЕСКОГО АППАРАТА ЧЕЛОВЕКА ПРИ ПСОРИАЗЕ НА УРОВНЕ БЕЛКОВЫХ ПРОДУКТОВ ГЕНОВ ЛЕЙКОЦИТОВ И ПОПУЛЯЦИОННОГО СОСТАВА ЛИМФОЦИТОВ."

03.00.04 - биохимия, 14.00.36 - аллергология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание учерой степени кандидата биологических наук

МОСКВА 2000

Работа выполнена в Медико-генетическом научном центре РАМН, г.Москва и Центральном научно-исследовательском кожно-венерологическом Институте МЗ

РФ, г.Москва.

Научные руководители: кандидат биологических наук доктор медицинских наук, профессор

Папонов В.Д. Мордовцев В.Н.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

доктор биологических наук

Петрунин Д.Д. Филатов А.В.

Ведущая организация: Российский Университет Дружбы народов.

Защита сост оится 2000 г. в /г ч. на заседании Диссерта-

ционного Совета Д 084.66.01 при НИИ физико-химической медицины МЗ РФ по адресу: 119828, г.Москва, ул. Малая Пироговская, д. 1а.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ физико-химической медицины МЗ РФ.

Автореферат разослан ^ " О^^У/у^ 2000 г.

РЫЧ ^'/У, 0

Ученый секретарь Диссертационного Совета ¿у

кандидат биологических наук Мурина М.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Псориаз является высоко наследуемым (64-72% -Мордовцев В Н., 1977; 80% - Duffy D.L. et а!., 1993; -91% - Elder J.T. et al., 1994) и широко распространенным (1-3% в разных популяциях - Ikaheimo I. et al, 1996) хроническим, часто рецидивирующим, полигенным и мультифакгориальным заболеванием, связанным с гиперпролиферацией клеток кожи. Не исключается наследуемость только предрасположенности к заболеванию (Ortonne J.P., 1996), остается неясным первичное звено патологии, которое в последнее время часто связывают с нарушениями лимфоцитов периферической крови, способных в свою очередь трансформировать кератиноциты инфилмруясь в кожу или инфильтруя ее ростовыми факторами и/или иммуномодуляторами (Wrone-Smith Т., NickololT B.J , 1996; Zheng М et al.,1996; Schon M P. et al., 1997; Valdimarsson H. et al., 1997).

В этой связи исследование аномальных проявлений генетического аппарата человека на уровне биохимических маркеров псориаза в лейкоцитах крови могло освегить некоторые новые аспекты патогенеза псориаза, дать возможность мониторинга динамики заболевания и подбора адекватного лечения по представленности определенных белков в лейкоцитах, а также подсказать подходы к профилактике псориаза в семьях, отягощенных данной патологией.

Псориаз рассматривался в настоящей работе как одно из конкретных патологических изменений фенотипа человека на уровне биохимических изменений лейкоцитов, обусловленное некими аномалиями генетического аппарата человека, некоторые из которых мы и попытались выявить.

Фенотипическое проявление псориаза, как полигенного заболевания, характеризуется множественными поражениями. Это изменения кожи, проявляющиеся в гиперпролиферации кератиноцитов, воспаление костно-суставного аппарата, нарушения иммунной, эндокринной и нервной систем (Ikaheimo I. et al, 1996).

Хотя обнаружены десятки показателей (в вйде отдельных генов и определенных белков), ассоциированных с псориазом (Beckman L. et al., 1977; Walter H. et al., 1977; Elder et al., 1994; Henseler Т., 1997), болезнь остается практически неизлечимой, поскольку большая часть обследованных больных болеют даже не годы, а десятилетия. Причина состоит в том, что из-за низкой степени ассоциации с псориазом, ранее обнаруженные патологические факторы не смогли стать для врачей четким ориентиром в подборе эффективного лечения. В этой связи выявление аномальной представленности белков с массами 53 и 43 килодальтон у всех обследованных больных псориазом и тенденция к нормализации этих показателей у отдельных больных после лечения позволяют надеяться на возможность подбора адекватного лечения пациентов с псориазом с учетом их индивидуальной генетически обусловленной реактивности.

Псориаз относят к аутоиммунным заболеваниям и активно исследуют его ассоциацию с иммунологическими маркерами (De Pita О. et al., 1996). Получены данные о важной роли иммуноцитов периферической крови в патогенезе псориаза (Wrone-Smith Т., Nickoloff В J., 1996; Sclion MP et al., 1997; Gilhar A. et al.,

1997). Поэтому нами исследована ассоциация белков с массами 53 и 43 кнло-дальтон с параметрами иммунного статуса (популяционный состав лимфоцитов).

Цель исследования состояла в анализе биохимических и иммунологических аспектов патогенеза псориаза и предрасположенности к этой болезни путем исследования аномальных проявлений генетического аппарата человека при псориазе на уровне белков лейкоцитов периферической крови и популяционного состава лимфоцитов, демонстрирующего состояние иммунного статуса.

Задачи исследования:

1) Исследование особенностей белкового состава лейкоцитов периферической крови больных псориазом дня выявления высокоассоциированных с патологией факторов, позволяющих анализировать патогенетические характеристики заболевания и наследственную предрасположенность к нему.

2) Выявить гетерогенность больных псориазом на основе ассоциированных с патологией белков.

3) На основании семейного анализа установить способность ассоциированных с псориазом белков достоверно выявлять предрасположенность к заболеванию у родственников больных для организации профилактики псориаза.

4) Исследовать патогенетическое значение иммунопатологии при псориазе на основе анализа корреляции между белками, ассоциированными с псориазом, и популяционным составом лимфоцитов, как индикатором клеточного иммунитета.

5) Изучить информативность белков, ассоциированных с псориазом, в параметров клеточного иммунитета для прогноза динамики заболевания, подбора эффективного вида терапии и предупреждения вредных побочных эффектов лечения.

Научная новизна работы.

1) Обнаружены впервые патологические изменения в белковом составе лейкоцитов при псориазе, которые вместе с аномальным популяционным составом лимфоцитов периферической крови больных доказывают, что псориаз нельзя рассматривать только как кожную патологию, связанную с гиперпролиферацией кератино-цитов.

2) Патологические проявления генетического аппарата в лейкоцитах крови всех обследованных больных и их родственников, без клинических признаков псориаза, указывают, что первичным звеном поражения при псориазе являются лейкоциты крови, а не кератиноцигы кожи, как считалось ранее.

3) Семейный анализ ассоциации аномального отношения белков 53К/Н2А показал впервые, что дети, один из родителей которых болен псориазом, обнаруживают даже при отсутствии клинических признаков псориаза достоверное отличие по критерию х-квадрат и по критерию Стыодента от группы доноров (в=19, средний возраст 23 года) и от группы новорожденных (п=2147). Это доказывает наличие аномалии в генетическом аппарате этих детей, проявляющейся в предрасположенности к псориазу.

4) Выявлена впервые гетерогенность больных псориазом, проявляющаяся в нормальных либо аномальных значениях отношения белков 43К/Н2А в лейкоцитах обследованных пациентов.

Научно - практическая значимость. 1 .Обнаружена ассоциация аномального соотношения белков 53К/Н2А>0,25 с 80% больных псориазом, а аномальные соотношения 53К/Н2А>0,25 и 43К/Н2А<1,6 ассоциированы со всеми обследованными больными псориазом и не имеющими признаков псориаза родственниками больных. 2.На основании сделанных в диссертационной работе наблюдений появляются следующие возможности для практической медицины:

а) осуществлять индивидуальный подход к пациентам при лечении псориаза, ориентируясь на генетически обусловленную индивидуальную реактивность, проявляющуюся в изменении отношений белков 53К/Н2А и 43К/Н2А в лейкоцитах.

б) организовать клинические испытания воздействия иммуномодуляторов с целью профилактики заболеваний псориазом у детей, в семьях, где один из супругов или один из детей болен псориазом, ориентируясь на нормализацию выявленных аномалий в белковом составе лейкоцитов.

с) обнаруженная в работе ассоциация 53К/Н2А с иммунопатологией, делает актуальным использование в лечении и профилактике псориаза иммуномодуляторов, причем их индивидуальный подбор облегчается ориентировкой только на два показателя, выявляемых в одном тесте, а не на множество нарушенных при псориазе характеристик иммунного статуса.

Положения, выносимые на защиту:

1) У больных псориазом, а также у их здоровых родственников отношение лейкоцитарных белков 53К/Н2А достоверно повышено по сравнению с этим показателем у здоровых доноров.

2) Все обследованные больные псориазом характеризуются аномальными значениями одного или обоих отношений лейкоцитарных белков 53К/Н2А>0,25; 43К/Н2А<1,6.

3) Выявлена корреляция между иммунологическими'параметрами больных псориазом и отношением лейкоцитарных белков 53К/Н2А.

4) Показана возможность использования показателей в виде отношений белков 53К/Н2А и 43К/Н2А для определения эффективности лечения псориаза по степени приближения этих параметров к нормальным значениям: 53К/Н2А<0,25; 43К/Н2А>1,6.

5) Выявлена гетерогенность больных псориазом, связанная с представленностью в лейкоцитах белков 43К/Н2А>1,6 либо 43К/Н2А<1,6.

Объем и структура диссертаиии.

Диссертация содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты и обсуждение, заключение, выводы, список литературы. Работа изложена на 159 страницах машинописного текста и иллюстрирована 29 таблицами и 16 рисуиками. Список литературы содержит 151 публикацию, включая 56 работ зарубежных авторов.

Апробаиия работы. Материалы диссертации представлялись и обсуждались на: конференции "Современные вопросы патогенеза и терапии псориаза и распространенных аллергических дерматозов"; научно-практической конференции по-

священной 75-летию ЦНИКВИ; VII Российском съезде дерматологов И венерологов; научно-практической конференции "Современные аспекты клиники, диагностики и лечения инфекции, передаваемых половым путем, наиболее распространенных дерматозов и микозов. Эпидемиологические подходы к анализу заболеваемости и деятельности ЛПУ "; 1-м Российском съезде медицинских генетиков, конференции, посвященной 60-легию кафедры кожных болезней МГМСУ; 2-м Российском съезде медицинских генетиков, Ученом Совете МГНЦРАМН.

По материалам диссертации опубликовано 11 печатных работ, в которых полностью отражены основные положения диссертации.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Электрофорез белков в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия.

Приготовление образца лейкоцитарных белков.

Периферическую кровь (3 мл) собирали в пробирку, смешивали с 15 мкл гепарина (5000 МЕ/мл) + 200 мкл 0,15 М NaCL (25 ME гепарина на 1 мл крови). Кровь использовали в течение не более 3 часов после забора. К трём частям крови добавляли одну часть 3% раствора желатина в 0,15М NaCl и инкубировали 30 мин. при 37°С в конической центрифужной пробирке объёмом 10 мл. Аккуратно отбирали надосадочную жидкость. Гемолиз эритроцитов, оставшихся в лейкоцитарной взвеси, проводили во льду 5 сек при 8-кратном разведении дистиллированной водой. Добавляли 2 мл 3,6% раствора NaCl и центрифугировали 5 минут при 1500 g. Надосадочную жидкость удаляли. Осадок отмывали физиологическим раствором следующим образом: к осадку добавляли 3 мл 0,15М NaCl с ImM PMSF (в физраствор добавляется маточный ЮОмМ раствор PMSF в соотношении 1:100) таким образом, чтобы осадок полностью разбился. Центрифугировали 5 минут при 1500 g. Надосадочную жидкость удаляли. Лейкоциты использовали для анализа их белков электрофорезом в полиакриламидном геле (ПААГ). Из осадка лейкоцитов готовили образцы лейкоцитарных белков. Для этого к осадку добавляли по 150 мкл белкового буфера, содержащего 2% Na-SDS; 5% (З-меркаш-оэтанол; 0,0625 М Трис-HCL, рН 6.8; 10% глицерин; 0,001% бромфеноловый синий; 2мМ PMSF. Осторожно ресуспендировали с помощью шприца до состояния пены и кипятили образец 1 мин. в микропробирке на водяной бане. На этой стадии образец может хранится при -20°С длительное время.

Элекрофоретическое выявление в лейкоцитах белков с молекулярной массой S3 кД и 43 кД.

Молекулярную массу и уровень белков 53 К и 43 К в лейкоцитах периферической крови оценивали электрофоретически в ПААГ в присутствии доде-цилсульфата натрия по модифицированному методу Laemmii (1970).

В качестве стандартов молекулярного веса используется коммерческая смесь белков фирмы Bio-rad (Австрия).

Окрашивание белков кумасси R-250 проводится по методу Fairbanks (1971) в растворе: 25% пропанол + 10% ледяная уксусная кислота + 0,05% кумасси R-250.

Окрашивание осуществлялось в термостате при 37°С в течение 2,5 часов.

После окрашивания гель отмывается в течение 20 часов при непрерывном встряхивании »отбывающем растворе: 5 % пропанол + 7 % уксусная кислота.

Определение относительного содержания белков 53К/Н2А в образце лейкоцитарных белков проводили с помощью денситометрирования полосок геля с образцами на денситометре "JilfonT при 570 нм н ширине щели 0,1 мм. Уровень белков 53К и 43К в лейкоцитах в виде отношения амплитуды пика, соответствующей этим белкам к амплитуде гистона Н2А (рис.№1). Присутствие гистона Н2А в клетках строго детерминировано количеством ДНК в геноме, т.к. гистон Н2А обеспечивает упаковку ДНК на уровне нуклеосом (Папонов В. Д., 1987).

Фракционирование белков двумерным электрофорезом осуществлялось по О'Фаррелу в модификации (KovaJjov L et al., 1990).

Рисунок №1. Денситограмма белков лейкоцитов венозной крови больного псориазом.

2 - реперные беях» (слева направо): катал аза (60 цДК овальбумнн (43 кД), альдажга (40 кД), химотрнпскноген А (25 кД).

Препаративное выделение белковой фрокцкш е молекулярной массой 53 кД зяюароланаемиз аолоскмгеля.

Для выделения белковой фракции с молекулярной массой 53 кД проводили электрофорез одного образца лейкоцитарных белков. Затем пластину геля с дорожками окрашивали 0,2% раствором кумасси в течении 40 мин. при 37°С. Отмывали пластину в теплой воде 1 час с одной сменой. Полоски с предполагаемым местом нахождения белковой фракции вырезали и хранили при -20"С в течении суток. На следующий день инкубировали полоски 2 раза во 5 мин. через 1 час в 0.125М Трис-НС1 (рН 6,8) + 0,1% МаБОЭ. Заполимеризовывали полоски в трубочки 5% ПААГ геля и вели электрофорез в течение 14,5 часов.

Белок собирали в диализный мешок на конце трубки геля. Раствор да-ализовали против 1 литра дистиллированной воды на мешалке при 37°С. Приблизительно 3 мл полученного раствора замораживали при -20°С, затем помещали на лиофильную сушку. На следующий день, полученный препарат проверяли на чистоту выделения, используя электрофорез. Определение попуяяционного и субпопулщионного состава лимфоцитов крови болышх псориазом по CD-маркерам (CD3, CD4, CDS, CD16, CD72) методом проточной цитометрии.

Для количественной оценки показателей иммунофенотипа лимфоцитов использовали метод непрямой иммунофлуоресценции с применением монокло-напьных антител (МКА) против дифференцмровочных лимфоцитарных антигенов .

Определение лопуляционного и субпопуляционного состава лимфоцитов осуществлялось на проточном цитометре FACScalibur после их специфического связывания с МКА и окрашивания антиглобулиновыми антимышиными антителами, мечеными флуорохромом FITC.

Для идентификации Т-лимфоцитов (CD3) и их основных популяций (CD4, CD8), B-лимфоцитов, естественных киллеров (NK, CD16) использовали следующие МКА из Института иммунологии МЗ РФ.

Для настройки прибора, оценки чувствительности и приборной погрешности использовалась программа FACS Comp вместе с калибровочными частицами Colibrite; для работы - программа Cell Quest. '

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

Клиническая характеристика больных псориазом.

Для выполнения поставленных задач, нами было обследовано 108 больных различными формами псориаза. Среди них - 57 мужчин (53%) и 51 женщина (47%). Возраст больных варьировал от 6 до 69 лет. Данные приведены в табл.№1. Таблицами. Распределение больных псориазом по возрасту и поду._

Возраст в года!

Мужчины

Женщины

Мужчины н женщины

количество

0- 9 10- 19 20- 29 30 - 39 40- 49 50- 59 60- 69

3 6 5 22 14 5 2

5 10

39 25 9 3

4 10 7 14 10

5 1

8 20 13,5 27 20 9,5 2

7 16 12 36 24 10 3

6,5 15 11

33,5 21,5 9,5 3

Число

обследованных

100

108

100

Из табл.№1 видно, что 66% всех больных псориазом были в возрасте от 20 до 50 лет. Первые признаки заболевания среди обследованных больных отмечались от 3 до 43 лет, что говорит о возможности как раннего, так и очень позднего начала заболевания псориазом, т.е. о важности средовых влияний и даже воз-

растных нарушений в организме человека для развития псориаза. Длительность заболевания к моменту обследования больных колебалась от нескольких месяцев до 44 лет. У 59% больных псориазом длительность заболевания была выше 10 лет, что говорит о крайне низкой эффективности лечения псориаза.

Большинство больных (60%) страдали обычным псориазом, у 28% был экс-судативный псориаз, у 10% больных отмечался артропатический псориаз, у 2% -псориатическая зритродермия.

В прогрессирующей стадии находилось 80% , в стационарной 20% больных. Семейный псориаз зарегистрирован у 18 (17%) больных. У 30% больных поражено все тело, в том числе, верхняя часть головы, лицо, кожа стоп и ладоней, у 38% - кожа туловища, верхних и нижних конечностей, у 32% высыпания локализуются на туловище или только на конечностях.

О распространенности процесса судили с учетом площади поражения кожи по методу Г.Д. Вилявина (И.А. Амирова, 1985). При распространенности кожного поражения до 24% площади тела, считали процесс ограниченным, свыше 24% - распространенным. Распространенный процесс был у 80%, ограниченный у 20% больных.

Сравнительный анализ представленности белков 53 К и 43 К в лейкоцитах периферической крави больных псориазом и доноров:

Обследовавшиеся 108 больных псориазом были разделены на 2 группы. Первой группе больных анализ был сделан до лечения, второй после лечения. В зависимости от вида терапии больные второй группы были разделены на три подгруппы: после лекарственной терапии, ультрафиолетового облучения в совокупности с фотосенсибилизатором (ПУВА-терапии) и селективной фототерапии (СФТ терапии).

В качестве контроля были использованы доноры Центральной станции переливания крови, средний возраст 23 года в количестве 19 человек. Гистограмма распределения белков 53К/Н2А в группе обследованных нами доноров представлена на рис.№2. Наивысшее значение модального класса в распределении является высшей границей показателя для группы "нормы": 53К/Н2А 5 0,25.

Дополнительным информативным показателем были взяты белки с массой 43кДа. Их количество в лейкоцитах здоровых доноров высокое: 43К/Н2А>1,6. При различных патологиях может изменяться состояние мембран клеток, в том числе и лейкоцитов. Если повышается проницаемость мембран, уровень белков 43К и 53К в выделенных для белкового анализа лейкоцитах падает. Поэтому одновременное определение количества белка 53 К и 43К дает возможность выявлять истинное или "ложное" (за счет дефекта мембран) малое содержание белка 53К.

Гистограмма распределения белков 43К/Н2А для группы обследованных доноров представлена на рис.№2. Минимальный показатель модального класса распределения использовали в качестве нижней границы в группе "нормы": 43 К/112А>1,6.

Исходя из вышеизложенного, а также из анализа представленности белков 53 К и 43 К при различных типах патологий, описанных в работах Папонова В.Д.

и соавторов(1982-1996), относительные значения 53К и 43К были разделены на группы (табл.№2).

Рисунок№2. Гистограммы распределения доноров по представленности 53К/Н2А II43К/Н2А в лейкоцитах периферической крови.

(№■ 0.16- QJf>- ОХ- 0.«-0.15 1125 (>.15 0.45 055

51К71СЛ

9 2

DKiiH*> | ,»»4**! ■

i В''о ' '

•(.ВДЕЛ

Габлица №2. Распределение относительных значений 53К, 43К по группам

~ —--__43 К/Н2А > 1,6 S1,6

53 К/Н2А -

20,25 I IV

0,26 - 0,35 И IV

>0,35 III IV

1. 53 К/Н2А < 0,25; 43 К/Н2А > 1,6 - группа нормы

И. 0,25 <53 К/Н2А £0,35; 43 КУША >1,6 -группариска Ш. 53 К/Н2А > 0,35; 43 К/Н2А > 1,6 - фуппа особого риска

IV. Все возможные значения 53 К/Н2А; 43 К/Н2А < 1,6 - относились к группе риска по фактору 43К.

Болыше до лечения.

В первой обследованной группе было 73 человека в возрасте от 6 до 69 лет, в том числе 37 мужчин и 36 женщин. Средний возраст больных составил 30 лет, средняя длительность заболевания 10 лет. Обычный псориаз был у 46 человек, экссудата вныи у 17-чёлрвек, артропатический у 7 человек, псориатическая эритродермия у 3 человек. Распространенный псориаз наблюдали у 65% больных, ограниченный у 35% больных. Все больные находились в прогрессивкой о алии заболевания.

Из рнс.ЖЗ. видно, что с увеличением возраста процент больных, входящих во вторую группу (с невысоким количеством белка 53К), уменьшается с 43% до 0 в возрасте 40-69 лет. Количество больных, входящих в третью группу, уменьшается от 55% в молодом возрасте (6-19 лет) до 35% в возрасте 20-59 лет, а количество больных, имеющих дефекты мембран лейкоцитов, неуклонно увеличивается с возрастом от 0 до 100%. Таким образом, чем старше человек, страдаю-

щий псориазом, тем выражениее у него нарушение клеточных мембран, а в остальном патология проявляется в высоком количестве 53К/Н2А в лейкоцитах, рисунок №3, Распределение различных возрастных категорий больных псориазом до лечения по группам, сформированным на основе представленности в лейкоцитах белков 53К и 43К.

О,

□ИепСО

&7Ъ

1-1ДО*

Ы-пуп

«О

я>

10 1-4=

г я

£ й

пКогио бпш в%

вцрст

Уровень белков 53К, 43К коррелирует с длительностью заболевания. Количество больных, входящих во Ц группу по уровню белка 53К, уменьшается с увеличением длительности заболевания от 22 до12,5%, количество же больных входящих в IV группу увеличивается с 38 до 54 %.

Из 63 обследованных больных псориазом до лечения с обычной и экссуда-тмвной формами все находились в II, Ш и IV группах по уровню белков т.е. в группах риска или в 1руппе особого риска. Причем 50 человек (79%) находились в III и IV группах, что указывает на высокую представленность в лейкоцитах белка 53К или на дефектность мембран (табл.№3). Все больные с более тяжелыми формами заболевания (артропатический псориаз и псорнатическая эритродер-МИЯ) оказались В III н IV группах, что указывает на наличие корреляции между клиническим состоянием больных и их оценкой по представленности белков 53К/Н2А и 43К/Н2А в лейкоцитах крови.

Таблица №3. Распределение больных псориазом до лечения по группам, связанным с показателями 53К/Н2А и 43К/Н2А, в зависимости от клинической

Клиническая форма псориаза Количество больных Распределен по грз 1ие бальных гппам

I II III IV

Обычный псориаз 46 0 9 11 26

% 0 19,6 23,9 56,5

')кссу дативный псориаз 17 0 4 и 2

% 0 23,5 64,7 11,8

Артропатический псориаз 7 0 0 5 2

% 0 0 71,4 28,6

Псориатическая эритродермия 3 0 0 .1 2

% , 0 0 33,3 66,7

При распространенном псориазе уменьшается процент лиц, находящихся в группе риска (II) за счет увеличения процентного содержания больных в группе (IV) и группе особого риска (III).

Таблица №4. Уровни относительной представленности лейкоцитарных белков 53 К и 43 К у больных псориазом до лечения и у доноров. _

Больные Доноры

Пол Мужчины Женщины Мужчины Женщины

Количество обследованных 36 37 10 9

Средние значения 53К/Н2А 0,35 + 0,12*** 0,36 + 0,11*» 0,24 ±0,06 0,26 ± 0,07

Средние значения 43К/Н2А 1,95 ±0,85 2,10+0,91 1,75 ±0,77 2,61 ±0,74

Примечание: ** - уровень достоверности отличия больных от доноров р<0,01, *** - уровень достоверности отличия больных от доноров р<0,001, по (критерию Стьюдента.

Из табл.№4 видно, что как мужчины, так и женщины больные псориазом до лечения достоверно отличаются от группы доноров по средним значениям 53К/Н2А.

На рис.№4 и №5 представлении распределения больных псориазом по уровням белков 53KVH2A и 43К/Н2А до лечения.

Из рис.№4 видно, что 80% больных псориазом до лечения имеют повышенный уровень 53К/Н2А (> 0,25). Из рис.№5 видно, что у 42% больных снижено соотношение 43К/Н2 А (< 1,6).

Из рис.№5 видно, что у больных псориазом до лечения имеется два модальных класса в распределении по показателю 43К/Н2А. Это особенно видно, если уменьшить размер класса. Можно говорить о двух группах среди больных псориазом: одна с модальным классом 1,31-1,6 по 43К/Н2А, а другая с модальным классом 2,51-2,8. Пониженные относительно группы доноров показатели 43К/Н2А в 1-й группе предполагают необходимость дифференцированной тактики лечения этих больных псориазом. Возможно, что дефектность мембран лейкоцитов у этой группы больных псориазом связана с нарушениями липидного обмена, выявленными у части больных псориазом (Мордовцев В Н., Рахметов А.Б., 1987). Имеются также указания на генетическую детерминацию нарушений липидного обмена (Балтабаев М.К. и соавт., 1995).

Рисунок №4. Гистограмма распределения больных псориазом до лечения по уровням белков 53К/Н2А.________

•4

50.0 45,0 40.0 .1S.I) М.О

IS.it 111.(1 5.0 0.0

мужчщмы м »»щнни

г— г—] — "Ь,

о" о о о о* о о о

рисунок №5. Гистограмма распределения больных псориазом до лечения по уровням белков 43К/Н2А.

Классовый интервал 0.6 классовый интервал 0.1

мужчины н ясешшны

пины и отшинм

88Я888Я8ЭгР83

Ч -г ? -г' 7" •! '! 7 7 ?' т ^

Больные после лечения.

Группа больных после лечения состояла из 47 человек в возрасте от 6 до 57 лет, в том числе 25 мужчин н 22 женщин. Средний возраст больных составил 28 лет, средняя длительность заболевания 10 лет. Все больные находились в регрессирующей стадии заболевания, в клинической стадии выздоровления и были разделены по видам терапии: 1) после лекарственной терапии; 2) после ГТУВА терапии, 3) после селективной фототерапии (СФТ-терапия).

Можно видеть (рис.№6), что после лечения больных псориазом в группе нормы не оказалось, но по величине наиболее легкой группы риска (группа №2) более эффективным методом лечения является СФТ-терапия, а наиболее неэффективной - ПУВА-терапия.

рисунок №6. Гистограммы распределения больных псориазом после лечения по группам, связанным с показателями 53К/Н2А и 43К/112А в зависимости от терапии.

п~25 п=!2 п=10

.'ккчгппйяпупя

ОКйвдавгт» 'я

ОРТ-1гряия

О fj.-l-i.vrH ЛЫ^ЯЛМ!

I п ш IV

Из табл.№5 можно видеть, что по критерию Стьюдента больные псориазом до лечения отличаются от доноров высоко достоверно (р<0,001). После лечения Л Г п СФТ-терапией больные уже не отличаются достоверно от доноров, хотя

средний показатель 53 КУША у них выше, чем у доноров. Однако после ЛУЗА-терапии больные отличаются от доноров, хотя с меньшим уровнем достоверности (р<0,05),чем до лечения (р<0,001), а среднее значение 53К/Н2А даже чуть выше, чем до лечения. Это также согласуется с ранее сделанным заключением об относительной эффективности этих видов терапии.

СФТ-терапия >лекарственной терапия > ПУВА-терапия.

Таблица №5. Уровни относительной представленности лейкоцитарных белков 53К и 43К у больных псориазом в группе до лечения, в группе после лечения и в группе доноров.__

Группа До лечения После лечения доноры

ПУВА, п=25 СФТ, п=25 ЛТ,п=12 п=19

53KVH2A 0,36 + 0,12*** 0,37 + 0,09* 0,31 +0,10 0,32 +0,11 0,25 + 0,07

43К/Н2А 2,03+0,88 1,64 + 0,81 2,35 + 0,64 2,05 ± 1,07 2,16 + 0,86

Примечание. * - уровень достоверности отличия больных от доноров р<0,05, *** - уровень достоверности отличия больных от доноров р<0,001, по Ь кригерию Стьюдента.

Это дает основание сделать предположение об отрицательном эффекте псо-ралена при ПУВА-терапии и необходимости использовать одновременно коррегирующие виды лечения, что было отмечено в работе Витряка A.A. и со-авт., (1992), Олисовон М.О. и соавт.(1995). Высокое значение параметра 53К/Н2А, характерное для больных после ПУВА-терапии, коррелирует с последующими обострениями у таких больных, а также с торпидностью заболевания к последующему лечению, что отмечено в работах многих авторов.

Больные до и после лечения.

Для сравнения изменений уровней лейкоцитарных белков 53К и 43К у конкретных пациентов до и после лечения были проанализированны 2 группы больных псориазом: 1 - взрослая группа (мужчины и женщины), 2 - детская группа, а также уровни белков одного больного в мониторинге.

У 5 человек из 12 (42%) после лечения состояние по оценке уровней 53К и 43К улучшилось, у 4 (33%) - ухудшилось, у 3 (25%) - осталось без изменений.

У 5 детей из 11 (45%) состояние после лечения по оценке уровней белков 53К и 43К - улучшилось, у 2 (16%) - ухудшилось, у 4 (36%) - осталось без изменений.

На рис.№7 показана зависимость показателей 53К/Н2А от лечения в мониторинге для одного больного. За один год он дважды пролечился в стационаре ЦНИКВИ с улучшением. Больной М. , возраст- 33 года. Диагноз - распространенный псориаз, экссудативная форма, осенне-зимняя, распространенность до 25%, локализация- верхняя часть головы, тело, ноги. Длительность заболевания -12 лет, полной ремиссии не было, неоднократно лечился в стационаре ЦНИКВИ с улучшением. Сопутствующие заболевания: хр. холецисто-панкреатит, гастрит, колит, простатит, тиреоидит. Наследственность не отягощена.

Из рис.№7 видно, что на протяжении наблюдения уровень белка повышенный. Если кривую разделить на отрезки по времени в точках измерения уровня белка, то видно, что положительные изменения связаны:

В этой связи, можио думать о компенсаторных отклонениях от нормы иммунных параметров, о чем часто говорят клинические иммунологи. Именно по этой причине динамику иммунологических показателей можно связывать с эффективностью лечебных процедур статистически, но в динамике заболевания индивидуального пациента иммунологические показатели трудно интерпретировать.

Сравнение информативности иммунологических показателей и оценки уровней белков 53К и 43К при псориазе.

Как было отмечено многими авторами (Василевский С.С., 1990; Балтабаев М К, 1995), возможности использования иммунологических показателей (помуляционного состава лимфоцитов) для характеристики псориатического процесса, а также корректировка лечения с их использованием ограничена.

Как видно из табл.№8 у 100 % больных до лечения уровень белков 53К/Н2А был повышен, в то время как изменения популяционного состава лимфоцитов до лечения выявлены максимум у 50% обследованных. Причем у 66,5 % больных до лечения (из 1-й группы) и у 55,5% больных (для 2-й группы) уровень белков 53К/Н2А был значительно повышен (53К/Н2А>0,35). После лечения количество больных с измененными иммунологическими показателями колебалось от 0 до 75 % (для различных субпопуляций), количество больных со значительно повышенным уровнем белков 53К/Н2А (53К/Н2А>0,35) снизилось до 33 %, что клинически сопровождалось разрешением кожного процесса.

Вторая группа больных до лечения характеризовалась сниженным значением белков 43К/Н2А < 1,6 у 71,5% пациентов, что возможно связано с утяжелением псориатического процесса у взрослых людей (наличием значительного времени болезни и соответственно тяжести заболевания).

В табл.№9 представлены данные корреляционного анализа между уровнем относительной представленности в лейкоцитах белков 53К/Н2А и различными субпопуляциями лейкоцитов и лимфоцитов у больных псориазом. Наибольшая корреляция наблюдается между уровнем белков 53К/Н2А и субпопуляциями лимфоцитов: CD3+, CD4+, CD8+, B-клетки. Следовательно, лейкоцитарный параметр 53К/Н2А действительно связан с иммунопатологией.

В качестве примера информативности иммунологических показателей и оценки уровней белков 53К/Н2А и 43К/Н2А были проанализированы иммунологические и биохимические данные больного М., на фоне лечения в стационаре (Табл.№10). Как, до, так и после лечения, только процентное содержание естественных киллеров, и в одном случае процентное содержание B-клеток снижено при нормальном значении показателей субпопуляций Т-клеток. Уровень параметра 53К/Н2А при этом снизился незначительно с 0,55 до 0,45, оставаясь на высоком уровне (>0,35). Псориатический процесс при этом не прекратился: больной выписался с кожными проявлениями и с незначительными улучшением.

Таким образом видно, что использование иммунологических показателей для оценки эффективности лечения затруднительно, так как изменения в составе субпопуляций могут быть компенсаторными и носить временный характер.

Таблица №8. Сравнение лабораторных показателей компонентов венозной крови до и после лечения у больных

псориазом.

Сравнение показателей Популшет лейкоцитов Популяция лимфоцитов Белки лейкоцитов

Лейк Лвмф Нейтр Мои Эозин СТ>3+ СТМ+ СИ8+ ИРИ Вкл

Абс % Абс V. Абе % Абе •/о Абг % Абс % Абс % Абс Абс % Абс 53К/ Н2А 43К/ Н2А

Норма Нормальные значения показателей (6-14 лет) 4000 9000 25 48 1200 3000 50 70 2000 5500 3 11 90 600 0 5 20 300 40 80 1000 2000 20 60 500 1300 10 40 200 700 1,0 2,5 5 19 200 500 <0,25 >1,6

До лечения Значения показателей для больных псориазом 5833 + 1353 45 + 7 2600 + 625 46 + 8 2736 + 990 5 + 4 277 + 238 4 + 5 218 + 253 69 + 5 1692 + 402 40 + 6 989 + 341 25 + 7 625 + 336 1,78 + 0,65 5 + 2 132 + 96 0,42 + 0,10 2,97 + 0,66

% люден с измененными показателями 8,5 33,5 33,5 66,5 33,5 41,5 25 25 41,5 0 25 0 25 0 25 12,5 50 37,5 100 0

После лечения Значения показателей для больных псориазом 6280 + 1025 42 + 11 2559 + 592 51 + 11 3249 + 1076 5 + 3 344 + 224 4 + 5 298 + 393 76 + 7 1973 + 465 45 + 11 1172 + 410 24 + 4 600 + 116 1,97 + 0,65 8,5 ± 2,2 217 + 65 0,35 + 0,12 2,40 + 0,49

% людей с измененными показателями 0 50 20 55,5 0 10 10 20 20 37,5 75 12,5 25 0 37,5 12,5 0 50 89 11

До лечения 2-я возрастная группа 34,4 + 11,9 58 + 16 41,5 + 10,9 31,9 + 9,6 1,44 ±0,7 22,5 ± 13 0,37 + 0,09 1,83 + 1,29

% люден с измененными показателями 28,5 55,5 50 50 50 78 100 71,5

Таблица №9. Корреляционный анализ распределений иммунологических показателей и белков 43К/Н2А относительно распределения 53К/Н2А.

Субпопуляции ЛЕЙК ЛИМФ НЕЙТР МОН ЭОЗИН СОЗ+ СБ4+ СБ8+ ИРИ В-кл 53К/ Н2А 43К/ Н2А

Коэффициент корреляции, до лечения -0,22 -0,55 -0,06 0,24 0,20 -0,66 -0,72 -0,58 0,23 -0,65 1 0,72

Уровень достоверности, р <0,05 <0,01 <0,05 <0,05 0 <0,01

Таблица №10. Биохимические и иммунологические показатели больного псориазом М в процессе лечения.

Т-лимфо- Т-хелпе- Т-супрес- ЕК, НЬА ОН, В-клетки, 53К/Н2А 43К/Н2А Группа по уровню

циты, % ры, % соры, % % % % белков

нормы 40-80 20-40 10-40 6-20 6-20 5-19 < 0,25 >1,6

1 56 33 23 2 3 11 0,55 4,72 III

2 60 31 31 4 6 3 0,42 2,54 Ш

3 63 35 31 5 8 5 0,45 2,99 III

4 - - - - - - 0,38 2,25 III

Кроме того, между содержанием клеток, несущих известные лимфоцитариые маркеры, и хепперным, супрессорным эффектом четкой зависимости не обнаружено (Йегер, 1986). Для того, чтобы охарактеризовать «иммунологический портрет заболевания», необходимо учитывать функциональные свойства иммуноком-петентных клеток, уровни щггокинов н т.д., так как псориаз - это заболевание, в котором задействованы все звенья иммунитета.

Для клинического использования целесообразно иметь один или два показателя, коррелирующих с патогенезом заболевания и характеризующими иммунную систему больного. Такими показателями , как было показано выше, могут служить уровни белков S3K/H2A и 43К/Н2А в лейкоцитах больных псориазом, которые показали 100% ассоциацию с этим заболеванием.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Исследования аномальных проявлений генетического аппарата человека при патологии и, в частности, при псориазе основаны на широко распространенном убеждении, что именно генетический аппарат определяет нормальную жизнедеятельность клеток и многоклеточных организмов и только создание в нем аномальных отклонений или нарушений за счет вредных воздействий может привести к патологичным клиническим признакам, а также к биохимическим изменениям в клетках, тестируемых лабораторными анализами.

Рассмотрим какое значение имеют для анализа патогенеза псориаза полученные в настоящей работе результаты 1) Они согласуются с представлениям и о полигенной природе этого заболевания, поскольку белки с массами как S3 так и 43 килодальтон могут иметь разный пептидный состав, т.е. быть продуктами нескольких генов. 2) Они показывают, что при псориазе поражаются не только клетки кожи, во и лейкоцит периферической крови. В третьих, аномальное состояние лейкоцитов у здоровых в отношении псориаза снбсов пробандов позволяет утверждать, что первичным пораженным звеном в развитии псориаза является не кожа, а лейкоцит крови. Данные в пользу этого вывода, полученные совершенно другим» экспериментальными методами, веда&но появились в литературе (Wrone-Smith T., NickoloffBJ, 1996; Zheng M. et. al, 1996; Scbon M.P. et a!., 1997; Valdimarsson "H. étal., 1997). Авторы указанных работ приводят данные в пользу того, что первичным звеном в развитии псориаза является нарушение дифференцяровки лимфоцитов, которые в свою очередь трансформируют кера-тиноциты.

Наши результаты показывают, что здоровые в отношении псориаза сябсы пробандов со средним возрастом 10 лет достоверно отличаются по критерию %-квадрат и по критерию Стьюдентз от группы доноров со среднем возрастом 23 года и от новорожденных, как по среднему значению отношения 53К/Н2А, так и по распределению обследуемых лиц по группам нормы 53К/Н2А < 0,25 и группам риска: 0,25 < 53К/Н2А < 0,35 и 53К/Н2А > 0,35. Выявление аномальных белковых показателей у сибсов пробандов, здоровых в отношении псориаза, требует обсуждения проблемы "доклинической диагностики заболеваний и возможности

нормокопнрования фенотипа", вошедшей в силу ее актуальности в учебники (Бочков Н.П., 1997).

Эта проблема активно обсуждается известными Российскими клиницистами Д.С. Саркисовым, М.А. Пальцевым и Н.К. Хитровым в монографии "Общая патология человека" (1995). Указанные авторы делают вывод о существовании доклинического периода в развитии любых заболеваний - периода, связанного с отставанием клинических проявлений болезни от развития внутренних структурных изменений в организме, которые можно выявлять специальными лабораторными тестами на внутриклеточные модификации.

Одной из иллюстраций этого вывода является наша находка аномального соотношения белков 53К/Н2А в лейкоцитах у сибсов пробандов, когда клинические признаки псориаза отсутствуют.

Полученные в настоящей работе новые данные о патогенезе псориаза, дают основание использовать соотношение 53К/Н2А в качестве показателя для профилактики псориаза в семьях, отягощенных этим заболеванием с помощью методов, нормализующих этот показатель.

Как показано в предыдущих работах В. Д. Папонова, нормализация этого показателя возможна с помощью различных иммуномодуляторов, а также методов очистки крови, с помощью гемосорбентов, которые активно используются в клинике при различных хронических заболеваниях.

Для профилактики заболеваний крайне важным является существование неспецифических индикаторов общей патологии, позволяющих осуществлять отбор (просеивание) индивидов, нуждающихся в уточняющей диагностике и лечении, либо в нормализации фенотипа на основании адекватных для конкретных индикаторов общей патологии лечебных процедур. (Маймулов В.Г., 1998).

На основании многолетнего опыта изучения "донозологических состояний организма" Маймулов В.Г. (1998) утверждает, что при массовых обследованиях наиболее пригодны "показатели неспецифической резистентности организма", в качестве которых упоминаются, в частности: определение концентрации в слюне секреторного иммуноглобулина А, лизоцима, супероксиддисмутазы, т.е. фактически белковых продуктов генетического аппарата человека.

Все это доказывает, что поиск аномальных проявлений генетического аппарата человека при различных видах частной и общей патологии уже давно ведется, а выявленные аномалии используются в практической медицине.

ВЫВОДЫ.

1 Обнаружены патологические изменения в экспрессии генов лейкоцитов периферической крови больных псориазом в виде достоверно повышенного отношения белков 53К/Н2А по сравнению с клинически здоровыми донорами, что доказывает, что псориаз нельзя рассматривать только как кожную патологию, связанную с гиперпролиферацией кератиноцитов. 2. Все обследованные больные псориазом характеризуются аномальными значениями одного или обоих отношений лейкоцитарных белков 53К/Н2А > 0,25; 43К/Н2А < 1,6.

3. Выявлена корреляция отношения 53К/Н2А с иммунологическими параметрами больных псориазом в виде содержания в периферической крови субпопуляций лимфоцитов СДЗ+, СД4+, СД8* и В-лимфоцнтов.

4. Выявление патологических изменений в содерхсании белков в лейкоцитах крови всех обследованных больных и их родственников (сибсов) без клинических признаков псориаза указывает, что первичным звеном поражения при псориазе являются лейкоциты крови, а не кератиноциты кожи.

5. Показано достоверное отличие детей без клинических признаков псориаза, но один из родителей которых болен псориазом, от группы новорожденных детей и доноров более старшего возраста по представленности в лейкоцитах белков 53К/Н2А, которые могут служить индикатором предрасположенности к псориазу в семьях, отягощенных данной патологией.

6. Показана возможность использования показателей в виде отношений белков 53К/Н2А и 43К/Н2А для определения эффективности лечения псориаза по степени приближения этих параметров к нормальным значениям: 53К/Н2А<0,25; 43К/Н2А>1,6.

7. Выявлена гетерогенность больных псориазом по представленности в лейкоцитах белков 43К/Н2А > 1,6 либо 43К/Н2А < 1,6.

Список работ, опубликованных по Teaie диссертации.

1. Сунпова И.Г.. Байдакова Г.В., Мордовцев В.Н., Сигора Г.А., Папонов В.Д. Особенности белкового состава лейкоцитов периферической крови больных псориазом.// Тезисы докладов 1-го Российского съезда медицинских генетиков. Москва, с.56-57,1994.

2. Папонов В.Д., Сунцова И.Г.. Опарин Р.Б., Байдакова Г.В. Различные лабораторные методы исследования как оценка эффективности лечения при псориазе.// Тезисы докладов "Научно-практическая конференция посвященная 75-летию ЦНИКВИ", Москва, с. 64,1996.

3. Папонов В.Д., Сунцова И.Г.. Старков И.В., Хапилова В.И. Новые биохимические факторы, ассоциированные с псориазом и иммунопатологией.// Тезисы докладов VII Российского съезда дерматологов и венерологов, Казань,ч.1, с. 165166,1996.

4. Папонов В.Д., Симонова A.B., Байдакова Г.В., Сигора Г.А., Сунпова И.Г., Хапилова В.И., Мордовцев В Н. Специфические белки лейкоцитов крови - нмму-ногенетические маркеры оценки эффективности терапии при псориазе.// "Иммунология", №2, с.48-50,1996.

5. Кирсанов И.С., Самбурский В.И., Суханов Г.А., Григорьев Б.И., Чернов В В., Кирсанова Т.В., Сунцова И.Г. Особенности мониторинга за больными раком молочной железы (РМЖ) нераспространенных форм а условиях крупной ЦРБ.// Тезисы докладов 1-го съезда онкологов стран СНГ, Москва, ч.2, с.497,1996.

6. Папонов В.Д., Суниова И.Г.. Хайленко В.А., Сергеев А.В., Сергеева Т.И., Самбурский В.И., Байдакова Г.В., Жордания К.И., Комов Д.В., Ласкин В.А., Си-гсра Г. А. Проявление онкопаггологии на уровне белкового состава лейкоцитов венозной крови.// Материалы Юбилейной конференции, посвященной 130-летию Подольской центральной городской больницы: "Вопросы организации и клинической медицины", с.30-31, Подольск, 1996.

7. Папонов В.Д., Суниова И.Г.. Мордовцев В.Н., Опарин Р.Б., Байдакова Г.В. Новый метод оценки эффективности лечения и профилактики побочных эффектов терапии больных псориазом.// Материалы конференции "Современные вопросы патогенеза и терапии псориаза и распространенных аллергических дерматозов", Москва, с. 87-88, 1998.

8. Папонов В.Д., Суниова И.Г.. Тупиченко В.Н. Оценка эффективности лечения псориаза иммуногенетическими маркерами р53 и р43.// Тезисы докладов научно-практической конференции "Современные аспект клиники, диагностики и лечения инфекций, передаваемых половым путем, наиболее распространенных дерматозов и микозов. Эпидемиологические подходы к анализу заболеваемости и деятельности ЛПУ.", Москва, с. 143-144,1999.

9. Суниова И.Г.. Кирсанов И.С. Иммуномониторинг рака молочной железы неспецифическими маркерами р53 и р43 У/ Материалы 2-й конференции молодых ученых Московского региона "Современные аспекты клинической медицины", Москва, с.75, 1999.

Ю.Папонов В.Д., Мордовцева В.В., Мордовцев В.Н., Суниова И.Г.. Байдакова Г.В., Сигара Г.А. Исследование иммунного и иммуногенетического статуса у больных неврофиброматозом I типаУ/ Материалы конференции, посвященной 60-летию кафедры кожных болезней МГМСУ, Москва, с.83-84,1999.

11. Папонов В.Д., Суниова И.Г.. Байдакова Г.В., Мордовцев В Н. Эпигенетические изменения генома человека при псориазе на уровне белковых продуктов генов в лейкоцитах крови и их медико-генетическое значение.// Тезисы докладов 2-го Российского съезда медицинских генетиков, Курск, ч.2, с.99-100, май, 2000.

Участок множительной техники ОНИ им. Н. Н. Блохина РАМН Подп. к печати ¿9. 2.ООО Заказ в!Тираж 100 экз.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Сунцова, Инна Гурьевна

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1 Фенотипические признаки псориаза.

1.2 Роль наследственности и среды в развитии псориаза, (концепции этиологии псориаза).

1.3 Ассоциация генетических и фенотипических признаков псориаза с родителями и сибсами пробандов.

1.4 Особенности иммунного статуса больных псориазом.

1.5 Современные методы лечения псориаза и их эффективность

1.6 Лейкоцитарные белки с молекулярной массой 53 и 43 кД. Информативность использования их как индикаторов аномального проявления генетического аппарата человека при патологии.

Собственные исследования.

Глава 2. Материалы и методы.

2.1 Растворы и реакти вы.

2.2 Электрофорез белков в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия.

2.2.1 Приготовление образца лейкоцитарных белков.

2.2.2 Электрофоретическое выявление в лейкоцитах белков с молекулярными массами 53 кД и 43 кД.

2.3 Разделение изоэлектрической фокусировкой фракции белков с молекулярной массой 53 кД.

2.3.1 Изоэлектрофокусирование в полиакриламидном геле (первое направление).

2.3.2 Фракционирование электрофорезом по методу Laemmli второе направление).

2.4. Препаративное выделение белковой фракции с молекулярной массой 53 кД элюированием из полоски геля.

2.5. Определение популяционного и субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови больных псориазом по CD-маркёрам (CD3, CD4, CD8, CD 16, CD72) методом проточной цитометрии.

2.6. Статистическая обработка результатов.

Глава 3. Результаты и обсуждение.

3.1 Клиническая характеристика больных псориазом

3.2 Сравнительный анализ представленности белков с молекулярными массами 53 и 43 кД в лейкоцитах периферической крови здоровых доноров и больных псориазом.:

3.2.1 Больные до лечения.

3.2.2 Больные после лечения.

3.2.3 Больные до и после лечения.

3.3. Обследование родственников больных псориазом на ассоциацию с иммуногенетическими маркерами лейкоцитарными белками 53К и 43К.

3.4 Иммунологические обследования больных псориазом.

3.5 Сравнение информативности иммунологических показателей и оценки уровней белков 53 К и 43 К при псориазе.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование аномальных проявлений генетического аппарата человека при псориазе на уровне белковых продуктов генов лейкоцитов и популяционного состава лимфоцитов"

Псориаз является высоко наследуемым (64-72% - Мордовцев В Н., 1977; 80% - Duffy D.L. et al., 1993; -91% - Elder J.T. et al., 1994) и широко распространенным (1-3% в разных популяциях - Ikaheimo I. et al, 1996) хроническим, часто рецидивирующим, полигенным и мультифакториаль-ным заболеванием, связанным с гиперпролиферацией клеток кожи. Не исключается наследуемость только предрасположенности к заболеванию (Ortonne J.Р., 1996), остается неясным первичное звено патологии, которое в последнее время часто связывают с нарушениями лимфоцитов периферической крови, способных в свою очередь трансформировать кератино-циты инфильтруясь в кожу или инфильтруя ее ростовыми факторами и/или иммуномодуляторами (Wrone-Smith Т., Nickoloff B.J., 1996; Zheng М et al.,1996; SchonM.P. et al., 1997; Valdimarsson H. et al., 1997).

В этой связи исследование аномальных проявлений генетического аппарата человека на уровне биохимических маркеров псориаза в лейкоцитах крови могло осветить некоторые новые аспекты патогенеза псориаза, дать возможность мониторинга динамики заболевания и подбора адекватного лечения по представленности определенных белков в лейкоцитах, а также подсказать подходы к профилактике псориаза в семьях, отягощенных данной патологией.

Хотя обнаружены десятки показателей (в виде отдельных генов и определенных белков), ассоциированных с псориазом (Beckman L. et al., 1977; Walter H. et al., 1977; Elder et al., 1994; Henseler Т., 1997), болезнь остается практически неизлечимой, поскольку большая часть обследованных больных болеют даже не годы, а десятилетия. Причина состоит в том, что из-за низкой степени ассоциации с псориазом, ранее обнаруженные патологические факторы не смогли стать для врачей четким ориентиром в подборе эффективного лечения. В этой связи выявление аномальной представленности белков с массами 53 и 43 килодальтон у всех обследованных больных псориазом и тенденция к нормализации этих показателей у отдельных больных после лечения позволяют надеяться на возможность подбора адекватного лечения пациентов с псориазом с учетом их индивидуальной генетически обусловленной реактивности.

Псориаз относят к аутоиммунным заболеваниям и активно исследуют его ассоциацию с иммунологическими маркерами (De Pita О. et al., 1996) Получены данные о важной роли иммуноцитов периферической крови в патогенезе псориаза (Wrone-Smith Т., Nickoloff В.J., 1996; Sclion М.Р. et al. 1997; Gilhar A. et al., 1997). Поэтому нами исследована ассоциация белков с массами 53 и 43 килодальтон с параметрами иммунного статуса (популяционный состав лимфоцитов). Цель исследования.

Цель работы состояла в анализе биохимических и иммунологических аспектов патогенеза псориаза и предрасположенности к этой болезни путем исследования аномальных проявлений генетического аппарата человека при псориазе на уровне белков лейкоцитов периферической крови и популяционного состава лимфоцитов, демонстрирующего состояние иммунного статуса.

Задачи исследования:

1) Исследование особенностей белкового состава лейкоцитов периферической крови больных псориазом для выявления высокоассоциированных с патологией факторов, позволяющих анализировать патогенетические характеристики заболевания и наследственную предрасположенность к нему.

2) Выявить гетерогенность больных псориазом на основе ассоциированных с патологией белков.

3)На основании семейного анализа установить способность ассоциированных с псориазом белков достоверно выявлять предрасположенность к заболеванию у родственников больных для организации профилактики псориаза.

4) Исследовать патогенетическое значение иммунопатологии при псориазе ю на основе анализа корреляции между белками, ассоциированными с псориазом, и популяционным составом лимфоцитов, как индикатором клеточного иммунитета. 5) Изучить информативность белков, ассоциированных с псориазом, и параметров клеточного иммунитета для прогноза динамики заболевания, подбора эффективного вида терапии и предупреждения вредных побочных эффектов лечения.

Научная новизна работы.

1) Обнаружены патологические изменения в белковом составе лейкоцитов (ранее неизвестные) и в популяционном составе лимфоцитов периферической крови пациентов с псориазом. Это доказывает, что псориаз нельзя рассматривать только как кожную патологию, связанную с гиперпролиферацией кератин оцитов.

2) Патологические проявления генетического аппарата в лейкоцитах крови всех обследованных больных и их родственников, без клинических признаков псориаза, указывают, что первичным звеном поражения при псориазе являются лейкоциты крови, а не кератиноциты кожи, как считалось ранее.

3) Семейный анализ ассоциации аномального отношения белков 53К/Н2А показал, что дети, один из родителей которых болен псориазом, обнаруживаю! даже при отсутствии клинических признаков псориаза достоверное отличие по критерию /-квадрат и по критерию Стьюдента от группы доноров (11=19, средний возраст 23 года) и от группы новорожденных детей (п=2147). Это доказывает наличие аномалии в генетическом аппарате этих детей, проявляющейся в предрасположенности к псориазу.

4) Выявлена гетерогенность больных псориазом, проявляющаяся в нормальных либо аномальных значениях отношения белков 43К/Н2А в лейкоцитах обследованных пациентов.

Научно - практическое значение работы.

1 Обнаружена ассоциация аномального соотношения белков 53К/Н2А>0,25 с 80% больных псориазом, а аномальные соотношения 53К/Н2А>0,25 и 43К/Н2А<1,6 ассоциированы со всеми обследованными больными псориазом и здоровыми в отношении псориаза родственниками больных.

2. На основании сделанных в диссертационной работе наблюдений появляются следующие возможности для практической медицины: а) осуществлять индивидуальный подход к пациентам при лечении псориаза, ориентируясь на генетически обусловленную индивидуальную реактивность, проявляющуюся в изменении отношений белков 53К/Н2А и 43К/Н2А в лейкоцитах. б) организовать клинические испытания воздействия иммуномодуля-торов с целью профилактики заболеваний псориазом у детей, в семьях, где один из супругов или один из детей болен псориазом, ориентируясь на нормализацию выявленных аномалий в белковом составе лейкоцитов. с) обнаруженная в работе ассоциация 53К/Н2А с иммунопатологией, делает актуальным использование в лечении и профилактике псориаза иммуномодуляторов, причем их индивидуальный подбор облегчается ориентировкой только на два показателя, выявляемых в одном тесте, а не на множество нарушенных при псориазе характеристик иммунного статуса.

Положения, выносимые на защиту:

3) Выявлена корреляция иммунологических параметров больных псориазом и отношения лейкоцитарных белков 53К/Н2А.

4) Показана возможность использования отношений белков 53К/Н2А и 43К/Н2А для определения эффективности лечения псориаза, ориентируясь на нормализацию этих параметров: 53К/Н2А<0,25; 43К/Н2А>1,6.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Сунцова, Инна Гурьевна

140 ВЫВОДЫ.

1. Обнаружены патологические изменения в экспрессии генов лейкоцитов периферической крови больных псориазом в виде достоверно повышенного отношения белков 53К/Н2А по сравнению с клинически здоровыми донорами, что доказывает, что псориаз нельзя рассматривать только как кожную патологию, связанную с гиперпролиферацией кератиноцитов.

2. Все обследованные больные псориазом характеризуются аномальными значениями одного или обоих отношений лейкоцитарных белков 53К/Н2А > 0,25; 43К/Н2А< 1,6.

4. Выявление патологических изменений в содержании белков в лейкоцитах крови всех обследованных больных и их родственников (сибсов) без клинических признаков псориаза указывает, что первичным звеном поражения при псориазе являются лейкоциты крови, а не кератиноциты кожи.

142

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Рассмотрим какое значение имеют для анализа патогенеза псориаза полученные в настоящей работе результаты. 1) Они согласуются с представлениями о полигенной природе этого заболевания, поскольку белки с массами как 53 так и 43 килодальтон могут иметь разный пептидный состав, т.е. быть продуктами нескольких генов. 2) Они показывают, что при псориазе поражаются не только клетки кожи, но и лейкоциты периферической крови. В третьих, аномальное состояние лейкоцитов у здоровых в отношении псориаза сибсов пробандов позволяет утверждать, что первичным пораженным звеном в развитии псориаза является не кожа, а лейкоциты крови. Данные в пользу этого вывода, полученные совершенно другими экспериментальными методами, недавно появились в литературе (Wrone-Smith Т., Nickoloff B.J., 1996; Zheng М. et. al„ 1996; Schon M.P. et.al., 1997; Valdimarsson H. et.al., 1997). Авторы указанных работ приводят данные в пользу того, что первичным звеном в развитии псориаза является нарушение дифференцировки лимфоцитов, которые в свою очередь трансформируют кератиноциты.

Наши результаты показывают, что здоровые в отношении псориаза сибсы пробандов со средним возрастом 10 лет достоверно отличаются по критерию хквадрат и по критерию Стьюдента от группы доноров со средним возрастом 23 года и от новорожденных, как по среднему значению отношения 53К/Н2А, так и по распределению обследуемых лиц по группам нормы 53К/Н2А < 0,25 и группам риска: 0,25 < 53К/Н2А < 0,35 и 53К/Н2А > 0,35. Выявление аномальных белковых показателей у сибсов пробандов, здоровых в отношении псориаза, требует обсуждения проблемы "доклинической диагностики заболеваний и возможности нормокопирования фенотипа", вошедшей в силу ее актуальности в учебники (Бочков Н.П., 1997).

Как показано в предыдущих работах В.Д. Папонова, нормализация этого показателя возможна с помощью различных иммуномодуляторов, а также методов очистки крови, с помощью гемосорбентов, которые активно используются в клинике при различных хронических заболеваниях.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Сунцова, Инна Гурьевна, Москва

1. Абракманова А.О. Особенности иммунограмм при различных формах псориаза.// Дйссертацйя на соискание ученой степени к.м.н., Алмааты,1994.

2. Альбанова В.И., Мордовцев В.Н., Тимошин Г.Г. Морфологические изменения микроциркулярного русла кожи больных псориазом после лечения.// Вестник дерматологии и венерологии, 1988, №3, с.4-8.

3. Амирова И. А. Комплексное лечение больных псориазом с использованием иммунокоррегирующих средств.// Диссертация на соискание ученой степени к.м.н., Баку, 1985.

4. Анищенко В.А., Мельников Б.И., Ярулин Р.Г., Русинов В.И., Антонов Ю.В. НЬА антигены I класса у больных вульгарным псориазом.// Иммунология, 1998, №2, с.45-46.

5. Балтабаев М.К. Псориаз (Вопросы диагностики, патогенеза и совершенствования лечения.).// Диссертация на соискание ученой степени д.м.н., Ташкент, 1997.

6. Балтабаев М.К., Хамидов Ш.Л., Федоров С.М., Джалотов К.Д. Спектр нейтральных липидов в периферической крови больных псориазом и хроническом гепатите.// Вестник дерматологии и венерологии, 1995, №5, с.44-49.

7. Балтабаев М.К., Хамидов Ш.А. Состояние клеточного иммунитета у больных псориазом и больных хроническим гепатитом. // Вестник дерматологии и венерологии, 1996, №1, с. 41-45.

8. Батпекова Г.Р. Эффективность клинико-биохимических исследований в диагностике нарушений печени, почек, обмена веществ при псориазе.// Диссертация на соискание ученой степени к.м.н., Алмааты, 1996.

9. Бочков Н.П. Клиническая генетика.// Москва, "Медицина", 1997.

10. Василевский С. С. Взаимоотношения иммунологических и неиммунологических факторов патогенеза псориаза.// Вестник дерматологии и венерологии, 1990, №9, с.26-29.

11. Вильчионков А.И., Орлов Е.В., Селезнев Е.И., Васильева И.Я., Дьячков В.А. Лечение псориаза внутрисосудистым лазерным облучением крови. // Вестник дерматологии и венерологии, 1997, №1, с. 36-38.

12. Витряк A.A. Обоснование комплексной терапии псориаза патогенетическими препаратами, корригирующими побочное действие псориаза при радиационной фоторадиохимии. // Диссертация, на соискание ученой степени к.м.н., Москва, 1992.

13. Владимиров В.В., Полев A.B., Чубинидзе Г.Д. Псорантрон в терапии псориаза.// Вестник дерматологии и венерологии, 1992, №3, с.48-51.

14. Гребенников В.А., Зотова В.В., Анисимова Л.А., Энгель М.Б. Сравнительная эффективность различных вариантов иммунокорректирующеголечения больных псориазом детей на основе кластерного анализа.// Вестник дерматологии и венерологии, 1994, №5, с. 26-28.

15. Гребешок В.Н., Новикова З.И., Акулов Ю.С. Гришко Г.И. Клинические особенности псориаза у детей.// Вестник дерматологии и венерологии, 1994, №5, с. 38-40.

16. Гришко Т.Н. Особенности клиники и и мму но корректирующая терапия псориаза у детей. // Диссертация на соискание ученой степени к.м.Н., Москва, 1989.

17. Довжанский С.И., Слесаренко H.A., Ледванов М.Ю. Реакция бласттрансформации лимфоцитов и интерлейкины у больных красным плоским лишаем и псориазом// Вестник дерматологии и венерологии, 1994, №2, с. 12-17.

18. Зернов A.A. Иммунорегуляторные нарушения при псориазе, их коррекция у больных псориатической эритродермией. // Диссертация на соискание ученой степени к.м.н., Москва, 1990.

19. Знаменская Л.Ф., Резайкина С.Ю., Ялин М.А. Скрининг иммуномодуляторов хемилюминисцентным методом в тесте in \itro. // Вестник дерматологии и венерологии, 1996, №3, с. 65-67.

20. Исаева М.П. Применение тималина, тимогена, эпиталанина в терапии псориаза с учетом нарушении иммунитета и гемостаза. // Диссертация на соискание ученой степени к.м.н., С-Петербург, 1990.

21. Йегер Л. Клиническая иммунология и аллергология.// Москва, «Медицина», 1990.

22. Каграманова А.П. Полиамины биохимические маркеры псориаза.// Диссертация на соискание ученой степени к.м.н., Москва, 1992.

23. Кадумов И.Е. Об активности щелочной фосфатазы сыворотки крови, как факторе, отражающем хронический воспалительный процесс при псориазе.// Вестник дерматологии и венерологии, 1990, №12.

24. Карякина Л.А. Инфракрасные лазерные лучи в терапии тяжелых форм псориаза.// Диссертация на соискание ученой степени к.м.н., С.Петербург, 1995.

25. Кешелева З.Б. Эпидемиология псориаза, значение иммуногенетических маркёров и иммунных нарушений для оценки риска развития, прогноза течения и эффективности терапии больных.// Диссертация на соискание ученой степени д.м.н., Москва, 1991.

26. Корсун В.Ф., Сталевич A.B., Яговдик Н.З., Левин М.М. О вирусной итиологии псориаза.// Вестник дерматологии и венерологии, 1999, №4, с. 18-20.

27. Косинец В.Н. Сочетанная иммунокорректирующая терапия аутологичными иммуноцитоксинами и сывороткой крови в комплексном лечении больных распространенным псориазом.// Диссертация на соискание ученой степени к.м.н., С-Петербург, 1997.

28. Курьянова О.Н., Мазина H.H., Владимиров В.В. Сандимун в лечении больных с тяжелыми формами псориаза.// Вестник дерматологии и венерологии, 1994, №4, с. 39-42.

29. Левин М.М., Чернышов И.С., Шубчек В.М., Евстафьев В.В., Левин М.Я. Характеристика аутоиммунных процессов при псориазе.// Вестник дерматологии и венерологии, 1995, №3, с. 29-33.

30. Мавров И.И. Роль цитокинов в лечении дерматозов.// Вестник дерматологии и венерологии, 1997, №2, с. 23-27.

31. Маймулов В.Г. Проблемы донозологической диагностики у детей при антропогенном воздействии.// Материалы 3-го конгресса педиатров

32. России "Экологические и гигиенические проблемы педиатрии", Москва, 1998, с.116.

33. Малашенкова Е.В. Оценка взаимосвязи клинико-иммунологических показателей с содержанием лейкоцитарных белков крови р53 и р43 при хронических заболеваниях легких.// Диссертация на соискание ученой степени к.м.н., Москва, 1996.

34. Малова И.О. Влияние фотохимиотерапии и регуляторных пептидов на иммунологические показатели у больных псориазаом.// Диссертация на соискание ученой степени к.м.н., Москва, 1990.

35. Маркушева Л.И., Волкухин В.А., Полянская Н.П. Адаптивные белки сыворотки крови у больных псориазом как критерий оценки общей реактивности организма.// Вестник дерматологии и венерологии, 1995, №5, с. 60-62.

36. Маркушева Л.И., Самсонов В.А., Фомина Е.Е., Чистякова И.А. Уровень сывороточного фактора некроза опухоли (а) при псориазе.// Вестник дерматологии и венерологии, 1997, №3, с.8-12.

37. Маркушева Л.И., Фомина Е.Е., Кеда Ю.М., Морозова М.С., Панков Ю.А, Антитела к фибробластам кожи человека у больных псориазом.// Иммунология, 1997, №5, с.52-53.

38. Машкиельсон A.M., Рубине А.Я., Векслер Х.М. Иммунологические аспекты патогенеза псориаза.// Вестник дерматологии и венерологии, 1987, №2, с. 17-22.

39. Милевская А.Я. Информационно-функциональная модель иммунного статуса у больных псориатическим артритом и псориазом.// Вестник дерматологии и венерологии, 1991, №1, с. 52-56.

40. Мордовцев В.Н. Роль наследственных факторов при псориазе.// Диссертация на соискание ученой степени д.м.н., Москва, 1977.

41. Мордовцев В.Н., Прокоров А.Ю., Старков И.В., Меликянц И.Г. Современные концепции по патогенезу псориаза. // Вестник дерматологии и венерологии, 1987, №7, с. 28-33.

42. Мордовцев В.Н., Старков И.В., Забаровский Е.П., Чумаков И.М., Степанова J1.B., Киселев JI.JI. Псориаз: электронно-микроскопические вирусологические молекулярно-биологические исследования.// Вестник дерматологии и венерологии, 1987, №7, с. 4-10.

43. Мордовцев В.Н., Мушет Г.В., Бируков A.B., Скрипник А.Ю. Иммунорегуляторные процессы при псориазе. Проблемма связи состояния иммуной системы с патогенезом кожного поражения.// Терапевт. Арх., 1990, т. 62, №12, с. 98-102.

44. Мордовцев В.Н. Наследственные болезни кожи. Псориаз.// Монография "Наследственная патология человека" под ред. Ю.Е.Вельтищева, Н.П. Бочкова, Москва, 1992, C.93-15Q.

45. Мордовцев В.Н., Мушет Г.В., Альбанова В.И. Псориаз.// Кишинев, Штиица, 1991.

46. Мошкалов A.B., Имякитов E.H. Генетика псориаза. Обзор литературы. // J. Denn. Cosmet. 1995, №1, р. 17-19.

47. Никитин А.Ф., Легостев Б.И., Серлявская И.В. К вопросу о патогенезе псориаза.// Вестник дерматологии и венерологии, 1990, №5, с.42.

48. Опарин Р.Б. Нарушение иммунного гомеостаза при псориазе у детей.// Сборник научных статей "Актуальные вопросы дерматологии и венерологии", Астрахань, 1998, с. 78-80.

49. Остерман Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот (электрофорез и ультрацентрифугирование).// Москва, Наука, 1981, с. 3-20.

50. Папонов В.Д. Динамика генетического аппарата эукариотов (динамика генома).// Успехи современной биологии, т 103, вып 3, с. 354370, 1987.

51. Папонов В.Д. Динамика генетического аппарата эукариотов при дифференциальной транскрипции генома.// Успехй современной биологии, т. 104, вып.2(5), с.167-183, 1987.

52. Папонов В.Д., Громов П.С., Ковалев Л.И., Щеглова Е.Г., Спитковский Д.М., Шишкин С.С. Электрофоретический анализособенностей белкового состава лейкоцитов больных с синдромом Дауна. //Бюлл. эксп. биол. мед. 1985, т.99, №1, с. 50-52.

53. Папонов В.Д., Щеглова Е.Г., Яруллин H.H., Купсик Е.Г. Злектрофо-ретическое выявление белка р53 в лейкоцитах человека.// Бюлл. экспер. биол. и мед. 1985, т. 100, №8, с. 188-191.

54. Папонов В.Д., Радько С.П. Анализ встречаемости белка с массой 53 кДа в лейкоцитах семейных пар, отягощенных детьми с врожденной патологией.// Тезисы докладов 2-го Всесоюзного съезда медицинских генетиков, Алма-ата, 1990, с.339-340.

55. Папонов В.Д., Радько С.П., Штейн Е.В., Щеглова Е.Г. Электрофоре-тический анализ представленности белка 53 К в лейкоцитах крови новорожденных. //Бюлл. эксп. биол. и мед. № 5, с. 527-529, М, 1992.

56. Папонов В.Д., Сунцова И.Г., Опарин Р.Б., Байдакова Г.В. Различные лабораторные методы исследования, как оценка эффективности лечения при псориазе.// Тезисы докладов научно практической конференции, посвященной 75-летию ЦНИКВИ., Москва, 1996, с.64.

57. Папонов В.Д., Сунцова И.Г., Старков И.В., Хапилова В.И. Новые биохимические факторы, ассоциированные с псориазом и иммунопатологией.// VII Российский съезд дерматологов и венерологов, Казань, 1996, с. 165 166.

58. Папонов В.Д., Симонова A.B., Байдакова Г.В., Сигора Г.А., Сунцова И.Г., Хапилова В.И., Мордовцев В.Н. Специфические белки лейкоцитовкрови иммуногенетические маркеры оценки эффективности терапии при псориазе.//Иммунология, 1996, №2, с. 46-48.

59. Повалий Т.М., Логинова Т.К., Шарапова Г.Я., Гусев С.А. Количественный анализ холестерина мембран кератиноцитов эпидермиса при псориазе.// Вестник дерматологии и венерологии, 1997, №1, с. 4-7.

60. Потекаев Н.С., Курдина М.И. Плазмоферез в терапии рефракторных форм псориаза.// Вестник дерматологии и венерологии, 1990, №9, с. 40-49.

61. Прохоров А.Ю., Мордовцев В.Н. Репарация ДНК у больных псориазом в процессе терапии.// Вестник дерматологии и венерологии, 1991, №1, с. 4-6.

62. Рахматов А.Б., Чигенина И.В. Генетические маркеры псориаза.// Вестник дерматологии и венерологии, 1990, №5, с. 40-41.

63. Рахматов А.Б. Связь генетических факторов с выражением иммунного ответа у больных псориазом.// Вестник дерматологии и венерологии, 1991, №2, с. 30-34.

64. Резайкина A.B., Самсонов В.А. Способ оценки эффективности ПУ-ВА-терапии больных псориазом.// Вестник дерматологии и венерологии, 1995, №4, с. 49-52.

65. Рогаев Е.И. Генетические факторы и полигенная модель болезней Альцгеймера.// Генетика, 1999, т.35,№11, 1558-1571.

66. Родин В.Н. Клинико-генетические особенности, некоторые аспекты патогенеза и новые методики лечения псориаза.// Диссертация насоискание ученой степени д.м.н., Волгоградская медицинская Академия, 1999.

67. Рокицкий П.Ф. Биологическая статистика// Минск, 1973.

68. Рубине А.Я. Иммунные механизмы патогенеза и обоснование иммунокорригирующей терапии больных псориазом.// Диссертация на соискание ученой степени д.м.н., Рига, 1987.

69. Русак Н.Э. Лечение псориаза селективной фототерапией в сочетании с солевыми ваннами и дитраколом.// Вестник дерматологии и венерологии, 1997, №1, с. 31-33.

70. Рыбкина В.Л. Значение отдельных компонентов системы комплемента в патогенезе псориаза.// Тезисы докладов научно-практической конференции:" Новое в диагностике и лечении заболеваний, передающихся половым путем и болезней кожи Москва 1997.

71. Саркисов Д.С., Пальцев М.А., Хитров Н.К. Общая патология человека.//Москва, "Медицина", 1995.

72. Свердлов Е.Д. Микрокосм генома.// Молекулярная биология, 1999, 33, №6, 917-940.

73. Скрипкин Ю.К., Каламкарян A.A., Мандель А.Ш., Тимошин Г.Г. Основные методы лечений больных псориазом.// Вестник дерматологии и венерологии, 1987, №7, с. 22-28.

74. Соколов Е.И., Глан П.В., Гришина Т.И., Кузьменко Л.Г., Матвеев Н.В., Перламутров Ю.Н., Пухальский А.Л., Сомов Б.А., Яцына И.В.

75. Клиническая иммунология.// Руководство для врачей, Издательство "Медицина", Москва, 1998.

76. Старченко М.Е., Пирятинская В.А., Рябинина М.Е. Леакадин в терапии тяжелых форм псориаза.// Вестник дерматологии и венерологии, 1995, №1, с. 40-42.

77. Стенина М.А., Зернов A.A., Бирюков A.B., Скрипкин А.Ю. Иммунорегуляторные процессы при псориазе. Проблема связи состояния иммунной системы с патогенезом кожного поражения.// Вестник дерматологии и венерологии, 1990, №2, с98-104.

78. Сунцова И.Г., Байдакова Г.В., Мордовцев В.Н., Сигора Г.А., Папонов В.Д. Особенности белкового состава лейкоцитов периферической крови больных псориазом.// Тезисы докладов 1-го Российского съезда медицинских генетиков. Москва 1994, с.56-57.

79. Тищенко А. Л. Влияние ультрафиолетового облучения на взаимодействие тиамина и пиридоксина у больных псориазом.// Вестник дерматологии и венерологии, 1997, №6, с.9-12.

80. Филимонова H.H., Левчик Н.К. К вопросу о патогенезе псориаза.// Тезисы докладов научно-практической конференции:" Новое в диагностике и лечении заболеваний, передающихся половым путем и болезней кожи ", Москва 1997.

81. Чередеев А.Н. Методы, ошибки и клинические показания к лабораторным иммунологическим исследованиям.// Лабораторное дело, Москва, 1989, №12, с. 4-13.

82. Чередеев А.Н., Ковальчук Л.В. Интерпретация лабораторных показателей при оценке иммунного статуса человека.// Лабораторное дело, Москва, 1991, №2 с. 6-14.

83. Шахтмейстер И.Я. Новые аспекты патогенеза и лечение псориаза.// Клин, фармак. и терап., 1995, т.4, №2, с. 93-94.

84. Шегай М.М., Кешилева З.Б., Анышебаева Г.А. Роль некоторых цитокинов в развитии псориаза.// Вестник дерматологии и венерологии, 1998, №5, с.7-14.

85. Шилов В.И,, Сергиенко В.И. Новые подходы к изучению патогенеза и лечению псориаза.// Вестник дерматологии и венерологии, 1998, с.49-53.

86. Яковдик Н.З., Петровская Т.Н. Сравнительная оценка чувствительности эпидермиса человека к Gl-кейлону в норме и при псориазе.// III симпозиум по псориазу дерматовенерологов социалистических стран, Москва, 1987, с. 156-157.

87. Ananthakrishnan R., Eckesh L., Walter H. On the genetics of psoriasis: an analisys of Hellgen's data for model of multifactorial inheritance.// Arch Dermatol. 1973, vol.247, pp53-58.

88. Beckman L., Bergdahl K., Cedergren В., Liden S. Genetic markers in psoriasis.//Acta Dermatovener., 1977, v.57, pp. 247-251.

89. Boehncke W.H. Psoriasis and bacterial superantigens formal or causal correlation.// Trends Microbiol. 1996,V4, N12, pp485-489.

90. Bos J.D. The skin as an organ of immunology.// Clin Exp Immunol v. 107, N1,1997, pp 3-5.

91. Bos J.D., Kapsenberg M.L., The skin immunol system ( sis ): Is cellular constituents and their interactions.// Immunol Today, N3, 1997, pp 234-240.

92. Coffey R.J., Derynck R., Wilccox J.N. Production and autoinduction of of transforming growth factor-alfa in human keratinocytes.// Nature, 1987, vol. 328, pp 817-820.

93. De Risi J.L., Iyer V.R., Brown P.O. Exploring the metabolic and genetic control of gene expression on a genomic scale.// Science, 1997, v.278, pp.680686.

94. De Pita O., Ruffelli M., Cadoni S., Frezzollini A., Biava GF., Simom R., Bottari V., De Sanctis G. Psoriasis: comparison of immunological markers in patients with acute and remission phase.// J Dermatol Sci. 1996, V.13, N2, pp 118-124.

95. Debets R., Hegmans J.P., Croughs P., Troost R.J., Prins J.B., Benner R., Prens E.P. The IL-1 system in psoriatic skin: EL-1 antagonist sphere of influence in lesional psoriatic epidermis.// J Immunol., 1997, Y.158, N6, pp 2955-2963.

96. Duffy D.L., Spelman L.S., Martin N.G. Psoriasis in Australian twins.// J. Amer. Acad. Dermatol., 1993, v.29, №3, pp.428-434.

97. Edwards J.H. The simulation of mendelism.// Acta Gen Stat Med, 1960, v.10(1-3), pp 63-70.

98. Enerback.C., Martinsson T., Inerot A,. Evidence that HLA-Cw6 determines early onset of psoriasis, obtained using sequence-specific primers (PCR-SSP).// Acta Derm venerol, 1997, V.77, N4, pp 273-276.

99. Fairbanks G., Streck T.L., Wallach D.F.H. Electroforetic analysis of the major peptides of the erytrocytes membrane.// Biochemistry, 1971, v. 10, pp2607-2617.

100. Falconer D.S. The inheritance of liability to certain diseases, estimated from the incidence among relatives.// Ann Hum Genetics, 1965, v.29, pp51-71.

101. Farber E.M. The genetics of psoriasis. // JAMA, 1972, v219, №8, pp1063-1064.

102. Fogli K., Sogaard H., Herlin T., Kragballe K. Improvement of psoriasis vulgaris after intralesional injections of 15-hydroxyeicosatetraenoic acid (15HETE).// J Amer Acad derm, 1988, vol.18, pp 279-285.

103. Gilhar A., David M„ Ullmann Y., Berkutski T., Kalish R.S. T-lymphocyte dependence of psoriatic pathology in human psoriatic skin grafted to SCID mice.// J. Invest. Dermatol., 1997, v/109, №3, pp. 283-288.

104. Guckian M., Jones C.D., Vestey J.P., Cooper E.J., Dawe R., Gills N.K., Norval M. Immimomodulation at the initiation of phototherapy and photochemotherapy.// Photodermatol. Photoimmunol. Photomed., 1995, v. 11, №4, pp. 163-169.

105. Guzzo C. Recent advances in the treatment of psoriasis.// Dermantol Clin., 1997, v,15,Nl, pp. 59-68.

106. Henseler T. The genetics of psoriasis.// J. Am. Acad. Dermatol., 1997, v.37 (2 pt 3), pp. 1-11.

107. Hieter P., Boguski M. Functional Genomics: It's all how you read it.// Science, 1997, v. 278, pp 601-602.

108. Ikaheimo I., Silvennoinen-Kassinen S., Karvonen J. The friquency of QAP 2.1 is increased in psoriasis vulgaris patients but no unusual linkagebetween QAP/PQA or QBP/PQB1.// Arch Dermatol Res, 1997, V289, N7, pp 373-377.

109. Isaacs I.D., Burroows N., Wing M., Keoodan M.T., Rebello P.R. Humanized anti-CD4 monoclonal antibodeis therapy of autoimmune and inflammatory disease.// Clin Exp Immunol, 1997, V.l 10, N 2, pp 158-166.

110. Jablonska S., Glinski W. Overview of immunology "Psoriasis"// 1992, pp. 261-285.

111. Kapp A., Wokalek H., Schopf E. Involvement of complement in psoriasis and atopic dermantitis measurement of C3a and C5a, C3, C4 and CI inactivator.// Arch Dermatol Res, 1985, v. 277, pp 359-361.

112. Kaur I., Handa S., Kumar B. Natural history of psoriasis: a study from the Indian subcontinent.// J. Dermatol., 1997, v.24, №4, pp. 230-234.

113. Kaur I. Oral lesions in psoriasis.// Int. J. Dermatol, v.36(I), pp 78-79, 1997.

114. Kerkhof P., Lammers A. Intraepidermal accomulation of polymorphonuclear leucocytes in chronic stable psoriasis.// Dennatologia, 1987, v.174, pp224-227.

115. Kovalyov L.I., Naumov V., Samko A., Tsvetkova M., Shishkin S.S. Two-dimentional electroforesis of heart muscle proteins in human cordiomyopathy.// Electroforesis, 1990, v.4, pp333-336.

116. Krohi T. Possible function of 1 (OH)2 25-Dihyobroxyvitamin D3 an active form of vitamin D3 in the differentation and development of skin.// J Invest Dermatol., 1985, v.84, pp459-460.

117. Laemmli U.K. // Nature, 1970, Vol.227, pp. 680-686.

118. Lhend M., Mrouietz V. Phenotipic differences between human blood monocyte subpopulation in psoriasis and atopic dermantities.// J Dermantool, 1997, V.24,№6, pp 370-78.

119. Mahmoud F., Abul B., Morgan G. Differential expression of interferon gamma by mitogen-stimulation peripheral blood mononuclear cell among Kuwaiti psoriasis patients.// J Dermatol, 1999, Jan 26(1), pp23-28.

120. Ortonne J.P. Aetiology and pathogenesis of psoriasis.// Br J Dermatol.,1996, V.135, Suppl.49, pp 1-5.

121. Rogers S. New developments in the treatment of psoriasis.// Ir Med J,1997, v.90, №5, pp 178-179.

122. Schon M.P., Detmar M., Parker C.M. Murine psoriasis like disorder induced by naive CD4+T cells.// Ñat.-Med., 1997, 3(2), pp. 183-188.

123. Smith C. Concordance in twins: methods and interpretation.// Am J Hum Genet., 1974, v.26, pp 454-466.

124. Szczerkowska Dobosz A., Placek W., Szczerkowska Z., Roszkiewicz J. Psoriasis vulgaris with the early and late onset HLA phenotype correlations.// Arch. Immunol. Ther. Exp. Warsz., 1996, v.44, №4, pp 265-269.

125. Teofoli P., De-Pita O., Lootti T.M. Cyclosporin G inhibits proliferation of A 431 cells in a dose-and-time dependent manner comparable to cyclospoorin A.// Skin Pharmacol., 1997, V.10, №2, pp. 79-84.

126. Van de Kerkhof F.C., Gerritsen M.J., De Jong E.M. Transition from symptomless to lesional psoriatic skin. II Clin Exp Dermatol., 1996, v.21, №5, pp 325-329.

127. Valdimarsson H., Sigmundsdottir H., Jonsdottir I. Is psoriasis induced by streptococcal superantigens and maintained by M-protein-spesific T cells that cross-react with keratin?// Clin. Exp. Immunol., 1997, v.107 (suppl.), pp.21-24.

128. Van-Steensel M.A., Steijlen P.M. Genetics of psoriasis.// Clin Dermatol, 1997, V.15, №5, pp 669-675.163

129. Voorhees J.J. Dohi Memorial Lecture. Psoriasis an immunological disease.// J Dermatol, 1996, V.23, №12, pp. 851-857.

130. Walter H., Brachter R., Eckes L., Hilling M. Psoriasis vulgaris and genetic markers.// Hum. Genet., 1977, v.37, №2, pp. 169-181.

131. Watson W., Cann H.M., Farber E.M., Nail M.L. The genetics of psoriasis.// Arch. Dermatol., 1972, v.105, №2, ppl97-207.

132. Wrone-Smith T., Nickoloff B.J. Dermal injection of immunocytes induces psoriasis.//J. Clin. Invest., 1996, v.98, №8, pp. 1878-1887.

133. Yokote R., Tokura Y., Furukawa F., Takigawa M. Decreased responsiveness of T cell to toxic shock syndrome toxin-1 in patients with severe psoriasis at active stage.// Arch Dermatol Res, 1997, V.289, №9, pp 547-550.

134. Zheng M., Sun G., Mrowietz U. The chemotactic activity of T-lymphocytes in response to interleukin 8 is significantly decreased in patients with psoriasis and atopic dermatitis.// Exp. Dermatol., 1996, v.5, №6, 334-340.

135. Zlatkov N.B.,Minev M., Martinova F. HLA System and Therapy of Psoriasis.// Dermatológica, 1993, v.266, ppl56-160.1. NOVOR.00111 1 ' M400 600 FSC-H1. File: NOVOR.OOI Log1. Sample ID: CONTR 1 Pati1. Patient Name: Cas

136. Acquisition Date: 21-Feb-97 Gat«

137. Gated Events: 4916 Tot; X Parameter: FL1-H (Log)

138. Marker Left, Right Events % Gated1. All M11, 62,9910 60984916 100.00 63 1.28o o .c\jo co .o , CM.1. NOVOR.002c1. U 00 ■1. M11. FL1-H10"10

139. File: NOVOR.002 Sample ID: CD3 1 Patient Name:

140. Acquisition Date: 21-Feb-97 Gated Events: 4588 X Parameter. FL1-H (Log)1. Histogram Statistics1.g Data Units: Linear Values Patient ID: N1 Case Number: Gate: G11. Total Events: 10000

141. Marker Left, Right Events % Gated % Total Mean Geo Mean AH 1, 9910 4588 100.00 45.88 221.07 111.58 M1 66, 4614 2868 62.51 28.68 339.56 309.36o o .1. C\Jo <o .o1. CNJ .c ^1. NOVOR.0031. M1

142. File: NOVOR.OO3 Sample ID: CD4 Patient Name:

143. Acquisition Date: 21-Feb-97 Gated Events: 5160 X Parameter: FL1-H (Log)1. Histogram Statistics1.g Data Units: Linear Values Patient ID: N1 Case Number: Gate: G11. Total Events: 10000

144. Marker Lett, Right Events % Gated % Total Mean Geo Mean Ail 1, 9910 5160 100.00 51.60 90.85 39.26 M1 42, 7704 2226 43.14 22.26 191.14 169.92oo <D .1. O C\i .1. NOVOR.0041. So

Информация о работе

Сунцова, Инна Гурьевна
кандидата биологических наук
Москва, 2000
ВАК 03.00.04

Диссертация

Исследование аномальных проявлений генетического аппарата человека при псориазе на уровне белковых продуктов генов лейкоцитов и популяционного состава лимфоцитов - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы