Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕЖВИДОВОЙ ГИБРИДИЗАЦИИ В СЕЛЕКЦИИ F1 ГИБРИДОВ КАПУСТЫ ПЕКИНСКОЙ С ГРУППОВОЙ УСТОЙЧИВОСТЬЮ К КИЛЕ И СОСУДИСТОМУ БАКТЕРИОЗУ

ВАК РФ 06.01.05, Селекция и семеноводство

Автореферат диссертации по теме "ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕЖВИДОВОЙ ГИБРИДИЗАЦИИ В СЕЛЕКЦИИ F1 ГИБРИДОВ КАПУСТЫ ПЕКИНСКОЙ С ГРУППОВОЙ УСТОЙЧИВОСТЬЮ К КИЛЕ И СОСУДИСТОМУ БАКТЕРИОЗУ"



На правах рукописи

МОНАХОС Сократ Григорьевич

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕЖВИДОВОЙ ГИБРИДИЗАЦИИ В СЕЛЕКЦИИ Е, ГИБРИДОВ КАПУСТЫ ПЕКИНСКОЙ С ГРУППОВОЙ УСТОЙЧИВОСТЬЮ К КИЛЕ И СОСУДИСТОМУ БАКТЕРИОЗУ

06.01.05 - селекция и семеноводство

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук

Москва 2005

Работа выполнена на кафедре селекции и семеноводства овощных, плодовых и декоративных культур РГАУ-МСХА им. К А Тимирязева

Научный руководитель-

доктор сельскохозяйственных наук, профессор КРЮЧКОВ А.В.

Официальные оппоненты:

доктор сельскохозяйственных с.-ч наук, профессор ЛУДИЛОВ В.А. кандидат сельскохозяйственных наук, ст. науч сотр СТАРЦЕВ В.И.

Ведущее предприятие- Российский пхл . ^ нный ai - • шый университет

Защита диссертации состоится " fá " февраля 2006 г. в " ^ Ь^часов на заседании Диссертационного совета Д 220 043.10 ад«. Российском государственном аграрном университете - Московской сельскохозяйственной академии им К.А.Тимирязева по адресу: 127550, Москва, ул. Тимирязевская, д 49.

С диссертацией можно ознакомится в Центральной научной библиотеке РГАУ-МСХА им К А Тимирязева

Автореферат разослан " " января 2006 г.

Учёный секретарь диссертационного совета: кандидат биологических наук ' - КАРЛОВ Г.И.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В настоящее время пекинская капуста является важнейшей культурой в Восточноазиатских странах, широко известна в Северной Америке, Западной Европе и Австралии. Она занимает ведущее место в мировом объеме производства салатных овощей. Благодаря высокой скороспелости, диетическим и вкусовым качествам ее значение возрастает и в России. Сочетание уникальных качеств культуры с современными технологиями возделывания позволяют получать два урожая в год и обеспечивать население в весенний и осенний периоды ранней свежей продукцией, витаминами и биологически активными веществами. Вместе с тем, в сортименте Госреестра селекционных достижений представлены преимущественно сорта и гибриды зарубежной селекции, не полностью удовлетворяющие современным требованиям интенсивной технологии, а многие восприимчивы к наиболее вредоносным патогенам. Лишь два гибрида, F| Ника и Кудесница, созданные на Селекционной станции им. Н.Н.Тимофеева, устойчивы к киле крестоцветных.

Таким образом, особенно актуальным является расширение сортимента этой культуры за счет создания высокоурожайных выровненных гибридов с высокими товарными качествами для различных направлений использования (потребление в свежем виде, переработка, хранение) устойчивых к наиболее вредоносным заболеваниям (кила крестоцветных, сосудистый бактериоз, вирус мозаики турнепса и др.).

Цель н задачи исследования. Исходя из вышеизложенного, цель настоящей работы — селекция Fi гибридов капусты пекинской с генетической устойчивостью к киле и сосудистому бактериозу. Данная работа предполагает решение следующих задач:

1) изучить возможность передачи посредством межвидовой гибридизации цитоплазматической мужской стерильности от рапса (B.napus) в капусту пекинскую (B.pekinensis) и выявить ее проявление в сочетании с новым ядерным материалом;

2) изучить возможность передачи доминантной моногенной устойчивости из B.carinata в B.pekinensis и создать линии пекинской капусты с групповой устойчивостью к киле и четырем расам сосудистого бактериоза;

3) изучить возможность конвертирования RAPD маркера RA12-75A доминантного гена устойчивости к киле в соответствующий доминант-ный/кодоминантный SCAR маркер и оценить его эффективность на различных популяциях пекинской капусты и репы;

4) изучить характер наследования основных хозяйственно-ценных признаков самонесовместимых инбредных линий капусты пекинской, оценить комбина-

1ДНБ МСХА фонд научной литеоатлэы

ционную способность и влияние условий возделывания на ее проявление, выявить перспективные гибридные комбинации

Научная новизна работы. Установлена высокая эффективность метода отдаленной гибридизации при передаче ЦМС из рапса (В napus) в капусту пекинскую (В pekinensis)

Показано устойчивое наследование признака устойчивости к сосудистому бактериозу в потомствах от скрещивания родственных видов, пекинской и абиссинской (В carmata) капуст, при беккроссировании капустой пекинской, а также возможность объединения генов устойчивости к данному заболеванию и киле крестоцветных в одном генотипе

Выявлена возможность создания специфичного кодоминантного SCAR маркера гена устойчивости к киле крестоцветных на основе RAPD маркера с помощью методов молекулярной биотехнологии

В системе полных диаллельных скрещиваний выяснен характер наследования основных хозяйственно-ценных признаков, генетика комбинационной способности Определены корреляционные связи между основными признаками, а также между эффектами ОКС и фенотипическим проявлением этих признаков у родитетьских линий

Выявлено влияние погодных условий весенне-летнего и петне-осеннего периодов выращивания на проявление эффектов ОКС

Практическая значимость. Создана и депонирована в каталоге коллекции ВНИИР им НИ Вавилова .V<>426 ЦМС-линия, Чи1мс, - донор цитоплазма-тической мужской стерильности, кроме того, создана форма, устойчивая к сосудистому бактериозу и киле, - донор генов устойчивости в селекции капусты пекинской и репы

Разработан кодоминантный SCAR маркер одного из генов устойчивости к киле, эффективный при идентификации устойчивых и восприимчивых генотипов в популяции пекинской капусты

Выделены наиболее перспективные в селекции Fi гибридов инбредные линии с высокой ОКС по основным хозяйственным признакам, а также перспективные гибридные комбинации

На защиту выносятся следующие основные положения

• межвидовая гибридизация как эффективный метод интродукции цитоплаз-матической мужской стерильности от В napus и гена устойчивости к сосудистому бактериозу от В carinata в В pekinensis,

• конвертирование неспецифичного (RAPD) молекулярного маркера гена устойчивости к киле крестоцветных в специфичный (SCAR) маркер,

• особенности наследования основных хозяйственно ценных признаков ин-бредных линий капусты пекинской, оценка комбинационной способности,

выделение наиболее перспективных линий в селекции на высокую урожайность и скороспелость; • наиболее перспективные для условий Нечернозёмной зоны России Fi гибриды капусты пекинской.

Апробация результатов работы. Результаты работы апробированы на ежегодных научных конференциях Московской сельскохозяйственной академии им. К.А.Тимирязева (Москва, март 2000 г., март 2002 г., март 2004 г., декабрь 2004 г.), на научной конференции "Памяти Грегора Менделя" (Москва, февраль 2001 г.), научной конференции молодых учёных, аспирантов и студентов, посвященной 115-летию со дня рождения академика Н.И.Вавилова (Саратов, ноябрь 2002 г.) и ежегодной научной конференции Вятской государственной сельскохозяйственной академии (Киров, 2004 г.).

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения; обзора литературы; экспериментальной части, содержащей четыре главы, каждая из которых включает описание целей, материалов и методов исследований, результаты исследований и краткие выводы; выводов, рекомендаций и предложений, списка литературы и приложения. Работа изложена на 172 страницах машинописного текста, содержит 27 таблиц, 33 рисунка. Список литературы включает 285 источника, из них 203 на иностранных языках. Приложения содержат 52 таблицы и 6 рисунков.

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 8 печатных работ.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Обзор научной литературы по изучаемым вопросам

2. Создание линий с цитоплазматической мужской стерильностью

В современном сельскохозяйственном растениеводстве приоритетное значение имеет производство гибридных семян. При этом одной из биологических основ, позволяющей получать 100%-но гибридные семена при семеноводстве, а кроме того эффективно защищать авторские права не только на селекционные достижения, но и на признаки и гены, является цитоплазматическая мужская стерильность.

2.1. Материалы и методы. Работа выполнена на селекционной станции им. Н.Н.Тимофеева МСХА и на кафедре генетики МСХА в 1999 - 2004 гг. В опыте использовали растения ярового рапса (B.napus), Fi Посейдон, - источник ЦМС; коллекцию инбредных линий капусты пекинской (B.pekinensis) с генетической устойчивостью к киле крестоцветных (P.brassicae Wor.); растения линий белокочанной капусты (B.oleracea).

Признак ЦМС передавали путем межвидовой гибридизации с последующим беккроссированием и отбором Гибридизацию проводили вручную Оценку проявления мужской стерильности проводили визуально, оценку устойчивости к киле проводили сначала на естественном, а в последующих поколениях на искусственном инфекционном фоне «пипеточным» методом

Выявление самосовместимых линий и линий с пониженной самонесовместимостью проводили автогамным опылением 10 цветков 10 растений каждой линии Степень самосовместимости оценивали подсчетом среднего числа завязавшихся семян на 1 стручок со всех растений каждой линии

Изогенные пары (ЦМС-линия - фертильный аналог) создавали беккроссированием ЦМС-формы фертильными самосовместимыми линиями в ряде поколений и отбором по морфологическим признакам и биологическим свойствам Отбор проводили до полной идентичности стерильных линии и их фертильных аналогов

2.2. Результаты исследований. Растение рапса (В napus, ААСС) с ЦМС подвергали опылению в бутонах пыльцой линий пекинской (В pehnensis, АА) и белокочанной (В oleráceo, СС) капуст Скрещивание с пекинской капустой проходило довольно легко - в среднем на один стручок завязалось 15-20 семян Однако семян от скрещивания рапса с белокочанной капустой получить не удалось Таким образом, выявились большие различия в совместимости родственных видов гибридизация амфидиплоида с геномной формулой АС с растениями, обладающими геномом А, проходит легко, а видами, имеющими геном С, очень затруднена

Изучение 250 растений межвидового гибрида (В napus х В pekinensis, ААС) показало, что у Fi гибридов в целом доминируют признаки родителя с большим числом хромосом, т е рапса Они имечи длинный ветвистый стебать, рассеченный лист на длинном черешке, темную окраску листьев При этом все растения были стерильны, имели функционально активные нектарники, охотно посещались пчелами и были устойчивы к киле

Несколько растений были отобраны для проведения беккросса В беккрос-се скрещивание проходило легко В среднем на опыленный бутон завязалось 3 -6 семян. В полученных популяциях BCi наблюдали более широкий полиморфизм растений по вегетативным признакам, чем у гибридов F! (по форме и цвету листа, ширине черешка, длине и ветвистости стебля) В результате цитологического анализа некоторых растений было установлено, что чисто хромосом в BCi варьирует от 2п = 21 до 2п - 29 (рис 1)

Из всего многообразия выращенных растений (250 шт ) удалось выделить 15 форм, по своим морфологическим признакам приближающихся к пекинской капусте Причем одно растение полностью соответствовало отцовской форме

Цитологический анализ пыльников молодых бутонов этого растения показал, что микроспорогенез проходит до образования тетрады микроспор нормально, а анализ пыльников в фазу начала раскрытия цветка показал, что в них образуются мелкие деформированные стерильные пыльцевые зерна. Это свидетельствует о том, что абортация пыльцы происходит в процессе формирования мужского гаметофита (микрогаметогенеза).

Рис. 1. Метафазные пластинки мнтотических клеток растений ВС] с числом хромосом 2а - 21 (А) и 2п - 29 (Б).

В результате второго беккросса этого растения получены стабильные 20-хромосомные устойчивые к киле растения типичной капусты пекинской с ци-топлазматической мужской стерильностью.

В селекции Б) гибридов капустных культур на основе линий с цитоплазма-тической мужской стерильностью основной проблемой является размножение ЦМС-линий. Для решения этой проблемы предполагается создание изогенных пар: ЦМС-линия - фертильный аналог. Такие изогенные пары создают бек-кроссированием в ряде поколений и отбором по морфологическим и биологическим свойствам до полной идентичности стерильной линии и фертильного аналога, кроме признака мужской стерильности. При этом в качестве фертиль-ных аналогов необходимо использовать только самосовместимые линии, так как беккроссирование самонесовместимой линией приведет к насыщению ЦМС-линии аллелями гена самонесовместимости, что вызовет их нескрещиваемость (Г.Ф.Монахос, 2003).

Исходя из вышесказанного, следующий этап селекционной работы состоял в поиске самосовместимых линий и создании изогенных пар ЦМС-линия - фертильный аналог. В результате обследования коллекции линий капусты пекинской на самосовместимость были выявлены две линии Чи1к4-34 и 21ок4-54, обладающие пониженной самонесовместимостью и завязывающие от самоопыления 6-7 семян на стручок. К настоящему моменту проведено несколько циклов беккросса ЦМС-формы этими линиями, что позволило получить достаточно выровненную по морфологическим признакам ЦМС-линию капусты пекинской - Чи1к4мс.

Итак, межвидовая гибридизация является высокоэффективным способом интродукции признака цитоплазматичесхой мужской стерильности от рапса в капусту пекинскую, позволяющая получать формы со стабильным проявлением ЦМС, лишенные морфологических дефектов и пригодные для гетерозисной селекции

3. Создание линий устойчивых к сосудистому бактериозу Одной из наиболее вредоносных бактериальных болезней капусты пекинской является сосудистый бактериоз (возбудитель Xanthomonas campestris pv campestris (Pamm ) Dow ) Вследствие того, что химические меры борьбы неэффективны или запрещены к применению на этой культуре, селекция на устойчивость является главным способом снижения потерь урожая от этой болезни Для создания устойчивых растений необходимо осуществление межвидовой гибридизации с привлечением сортов амфидиплоидных видов В juncea (2п=36), В carmata (2п=34), доноров высокой устойчивости к основным расам (1, 3, 4 и 5) Xс pv campestris, определяемой одним доминантным геном Rb из генома В (Н Guo et al, 1991, А N Ignatov et al, 2001)

3.1. Материалы и методы. Работа выполнена на селекционной станции им Н Н Тимофеева, на кафедре генетики VfCXA и в лаборатории станции защиты растений МСХА в 2001-2004 гг В опытах использовали абиссинскую капусту (В carinata, ВВСС), тинию PI 199947 - источник устойчивости к сосудистому бактериозу (расам 1, 3, 4, 5), устойчивую к киле пекинскую капусту (В pekinensis, АА), линию №2

Растения заражали путем прокалывания жилок по краю чистовой пластинки (20-30 уколов на один лист) стерильной препаровальной иглой, смоченной в суспензии бактерий с концентрацией 3-5 х 108 бак/мл Изоляты возбудителя сосудистого бактериоза, 1-ю, 4-ю и 5-ю расы, любезно предоставил с н с Центра «Биоинженерия» РАН А Н Игнатов, расы 0 и 3 - профессор кафедры фитопатологии Ф С Джалилов Дифференциация рас по S Kamoun (1992) Учет устойчивости/восприимчивости проводили на 12 день после инокуляции За устойчивое принималось растение без симптомов поражения, за восприимчивое — растение с типичными симптомами

Цитологический анализ и подсчет чиста хромосом осуществляли в клетках меристематических тканей кончиков корешков и в клетках пыльников молодых бутонов. Материал фиксировали уксусным алкоголем (этанол уксусная кислота - 3 1) Препараты готовили методом распластывания клеток Окрашивали 1% раствором Гимза Анализ препаратов проводили с помощью микроскопа Axiolab (Carl Zeiss)

Растения пекинской капусты с групповой устойчивостью к киле и четырем расам сосудистого бактериоза получали путем принудительного опыления растений пекинской капусты пыльцой абиссинской с последующим отбором и беккроссированием пекинской капустой.

Яровизацию растений проводили на стадии проростков. Чашки Петри с наклюнувшимися семенами помещали в холодильную камеру и выдерживали 10-15 дней при +4°С. Яровизированные растения распикировывали в кассеты со стороной ячейки 4 х 4 см и затем высаживали в горшки объемом 0,7 л.

3.2. Результаты исследований. Перед гибридизацией родительских линий №2 и PI 199947 провели их оценку на устойчивость к пяти расам сосудистого бактериоза (расы 0, 1,3, 4, 5). Все растения абиссинской капусты проявили устойчивость к расам 1, 3, 4, 5 и восприимчивость к расе 0, пекинской — восприимчивость ко всем расам. Первое скрещивание B.pekinensis с B.carinata проходило довольно легко, несмотря на принадлежность растений к разным видам. Межвидовые гибриды (B.pekinensis х B.carinata, геномная формула ABC) проявили полную устойчивость к расам 1, 3, 4, 5 и были восприимчивы к расе 0. Это свидетельствует о доминантном характере генетического контроля устойчивости у линии PI 199947.

Получить беккроссное потомство от скрещивания с капустой пекинской оказалось непросто, так как вследствие нарушений в мейозе все растения F] обладали стерильностью мужского и женского гаметофитов. В результате опыления около 3-х тысяч цветков получено лишь 5 жизнеспособных семян. Три выращенных из них растения обладали устойчивостью к 1, 3, 4 и 5-й расам, что свидетельствовало о присутствии в беккроссных растениях хромосомы из генома В, содержащей ген Rb, и соответственно о целесообразности использования данного материала в дальнейшей селекционной работе.

В результате цитологического анализа клеток корневых меристем двух растений, имеющих наибольшее сходство по морфологическим признакам с капустой пекинской, было установлено, что число хромосом одного растения ВС) составляет 2п = 28, другого - 2п = 29, т.е. закономерного уменьшения числа хромосом до числа, свойственного беккроссирующему родителю, не произошло, это объясняется очень малым числом растений в популяции.

Беккроссированием устойчивых растении получено около 60 растений ВСг, половина из которых на стадии 4-5 настоящих листьев обладала устойчивостью к четырем расам сосудистого бактериоза. При повторной инокуляции на стадии 6-7 настоящих листьев тремя расами ксантомонад (1, 3 и 4-й) оказалось, что все, за исключением пяти растений, утратили устойчивость к первой расе. Такая реакция на заражение может быть объяснена либо тем, что в использованном изоляте расы 1 изначально присутствовала какая-то доля виру-

тентной расы 0, либо тем, что раса 1 на фоне неполной дозы гена устойчивости беккроссных растений мутировала в расу О

Одно из пяти устойчивых к четырем расам Xс рч сатреэгги (1, 3,4 и 5-й) (обозначенное далее «№1») имело большое морфологическое сходство с пекинской капустой и было частично фертильным Цитологический анализ корневых меристем устойчивых и восприимчивых растений второго беккроссного поколения показал высокое варьирование числа хромосом 2п - 23 ~ 29 Также были выявлены химерные растения с числом хромосом в корневых меристемах 2п = 23, 24, 25 Интересно отметить, что растение №1, проявляющее наибольшее сходство с капустой пекинской, в корневых меристемах имею 23 хромосомы, тогда как в мейотических клетках пыльников на стадии метафаза I оно содержало 2п = 21 (рис 2) При последующих делениях в анафазе I или анафазе II происходила утрата еще одной хромосомы (рис 3) Таким образом, образовывались гаплоидные клетки микроспор, имеющие п = 10 хромосом Из них формировались жизнеспособные пыльцевые зерна

Рис. 2. Л) Метафазыая пластинка митотической клетки корневой меристемы растения №1,2п - 23; Б) менотичсскаи клетка пыльников растения Л61,2п = 21

Рис. 3. Мейотическое деление в клетках пыльников растения ВС:, №1: А) анафаза I, отставание 21-и хромосомы. Б) анафаза II, неправильное расхождение отставшей хромосомы

В результате двух последующих беккроссов и отбора получены стабильные фертильные 20-хромосомные растения типичной капусты пекинской

Варьирование растений популяций ВС.» и F2 (полученной от самоопыления растений ВСз) по морфологическим признакам было незначительным. Это свидетельствует о достаточно высокой генетической однородности растений внутри этих популяций. Однако оценка устойчивости к сосудистому бактериозу в популяциях ВС« и F2 показала, что наследование гена Rb нестабильно и не подчиняется менделевским законам, что подтверждается статистической оценкой распределения устойчивых и восприимчивых растений по критерию Отсутствие закономерного менделевского расщепления по признаку устойчивости к Х.с. pv. campes tris у растений четвертого поколения беккросса объяснимо нарушениями хода мейотического деления. Это нарушение, вероятно, вызвано замещением целой хромосомы генома A B.pekinensis чужеродной хромосомой из генома В B.carinata, несущей ген Rb и отбираемой в каждом поколении с устойчивыми растениями. Причем замещенная хромосома не имеет заметного влияния на проявление морфологических и биологических признаков капусты пекинской. Таким образом, можно предположить, что хромосомные наборы устойчивых растений популяций ВС4 и F2 представлены следующим составом 18А+А+В и/или 18А + ВВ.

Устойчивые к сосудистому бактериозу и киле растения популяции ВС4 высажены в зимней теплице для проведения следующего цикла беккросса устойчивыми к киле линиями капусты пекинской.

4. Селекция на устойчивость к киле крестоцветных. Разработка молекулярных маркеров

Основным методом традиционной селекции растений на устойчивость к болезням является создание гибридных популяций с последующим отбором в ряде поколений возвратных скрещиваний и/или инбридинга. Этот процесс может быть значительно ускорен за счет применения молекулярных маркеров.

4.1. Материалы и методы. Размножение растений и оценка устойчивости к киле крестоцветных были проведены на Селекционной станции им. Н.Н.Тимофеева МСХА, в зимней остекленной теплице; молекулярные анализы - в Центре «Биоинженерия» РАН, в лаборатории «Генома растений», в 20022004 гг. В качестве донора генов устойчивости к киле использовали растения турнепса линии ECD04-1. В качестве донора аллелей восприимчивости - растения турнепса линии JR.T1-1 и растения инбредной линии капусты пекинской, Се-3.

Получение популяций F3 и BC¡. Устойчивые к киле растения линии ECD04-1 скрещивали с восприимчивыми растениями линий JRT1-1 и Се-3. До одному из растений потомств Fi (ECD04-lxJRTl-l и ECD04-lxCe-3) самоопы-

ляли в бутонах для полунения Fj и скрещивали с восприимчивым родителем для получения ВС)

Оценка устойчивости к киле крестоцветных. Оценку устойчивости к киле полученных популяций растений и родительских форм проводили на искусственном инфекционном фоне Индекс расового состава использованной полевой популяции патогена - 16/11/31, концентрация суспензии спор 107 спор/1мл Посев проводили в кассеты со сторонами ячеек 4x4 см, на глубину 0,5 см с немедленным заражением, используя модификацию пипеточного метода (W Lamers, H Toxopeus, 1977, R Voomps, D Visser, 1993) Учет устойчивости растений проводили через шесть недель За устойчивое принимали растение без малейших признаков поражения килой

Молекулярные анализы. Выделение геномной ДНК проводили из молодых тканей по методике К Edwards et al (1991) в модификации Д Дорохова и Э Клоке (1997)

Амплификацию геномной ДНК проводили на амшшфикаторе ABS-2000 (Applied Biosystems) в 15 мкл реакционной смеси, содержащей буфер (67 мМ трис-HCl рН-8,8, 166 мМ (NH,)2S04, 2,5 мМ MgCl2, 0,01% Твин-20), по 0,2 мМ каждого dNTP, 5-15 пМ соответствующего праймера(ов), 20 нг геномной ДНК и 0,5 ед Taq-полимерззы Праймер RA12-75 - 5*- CATTATGCGGGC -3", разработанный японскими исследоватетями YKuginuki с соавт (1997) RAPD амплификацию проводили по следующей программе 3 мин при 35 циклов -t-94'C - 30 с, +36°С - 30 с, +72*С - 1,0 мин, ->-72Т - 10,0 мин SCAR амплификацию - 3 мин при +94"С, 35 циклов -94°С - 15 с, +64°С - 15 с, +72"С - 1,0 мин, +72°С - 5,0 мин

Продукты амплификации разделяли электрофорезом в 1,5 % агарозном геле, содержащем 0,5 мкг/мл бромистого этидия, и стандартном Трис-ацетат-ЭДТА электрофорезном буфере (EAPD при напряженности 4 Вт/см в течение 120 мин, SCAR при напряженности 6 Вт/см в течение 30 мин)

Клонирование RAPD фрагмента проводили с помощью набора pGEM_T Vector System 1 ("Promega", USA) согласно инструкции фирмы производителя

Полученными препаратами плазмидной ДНК проводили трансформацию компетентных клеток Ecoli Рекомбинантные клоны отбирали методом бело-голубой селекции Отобранные клоны размножали с последующим выделением плазмидной ДНК После проведения ПЦР и рестрикционного анализа плазмид на наличие вставки целевого фрагмента его секвенировали с помощью автоматического секвенатора Полученная последоватечьность фрагмента ДНК была проверена на сходство с известными последовательностями в базе данных Ген-банка на сервере NCBI (http //www nebí nlm mh gov/GenBank) с использованием

программ BLAST и S-SEARCH Подбор специфичных праймеров проводили при помощи программы OLIGQ

4.2. Результаты исследований. RAPD маркер RA12-756S0, сцепленный с признаком устойчивости к киле, был амплифицирован, разделен от других ам-плифшшрованных фрагментов в агарозном геле и выделен для клонирования Данный фрагмент был успешно клонирован и секвенирован (рис 4)

GGATCCATTA TGCGGGCAGT TAGAACTTTG AATAACCSTT TCTTTAGAAC TAGTTAAATG GCTCIGCGGT TGTAATTGAC AGAAAATTAA GAGCTTGATC TGCIGCCATC GGTTAAAAGA TTAOATATTS ATAGTCTCCT TTTATTTATG CGATAGCTTT GTGCATTTTT GATTTAGCTQ CTGGATGTTG GGATTTATIA AATTCATGTC СААСТСТАТА TTATCCGATT AGTACGATAT ТСТСТАСТТТ GGGCCIAATT GGCTGGCTCG CATGAATTTA CITTTOGTCT CATTCCCAAA AGGCTTGTAC TAATTAGAGT TGGACATCTT СТТАТАТАТТ AGACACTCAT TGTCTAATTC TCCAATGTGG TACTTAGTTT GAIATCCCAA АТТСГССССС TCAAACTAAC GATCATATTC ATCGCGTGTC CCACAACTGA CTTTGAGGAT CIICIGACTI GATCTCTACC ACATACCTCC CAATCCTAAC TCGATGGGTC ACGITCCTAC TCGAAAGGTA TTTTGGTCTT CITGCAGATT TCTCGTCAAC CTGGGTCTGA TACCAATIGI TGGGATTAAT TAAATCCATG TCCAACTOTA TATTATCTGA TTAGTACGAI ATTGTCCACT TTOGGCCTAA TTGGCTGGCC

Рис 4 5'-3' последовательность RAPD фрагмента RA-1275-650bp

Сравнение секвенированной последовательности локуса RA12-756<j с последовательностями ДНК базы данных Генбанка показало, что данная последовательность с 5'-конца представлена фрагментом, гомологичным участку клона T24I21 хромосомы 2 irabidopns thahana, и двумя вырожденными повторами сходными с фрагментом клона AJ_245480 В napus, кодирующим S-аденозил метионин салициловой кистоты карбоксил метионил грансферазу и ген глико-протеина S-локуса, фланкированными с 3'- конца участком LTR ретротранспо-зона

На основе известной последовательности RAPD-локуса RA12-75650 были разработаны 6 специфичных праймеров три прямых - SCARpIF, SCARpSOF, SCARp91F и три обратных - SCARp406R, SCARp463R, SCARp636R (табл 1) Возможные комбинации синтезированных SCAR-праймеров показали различную эффективность при идентификации восприимчивых и устойчивых генотипов (рис 5)

Таблица 1

Синтезированные SCAR-праймеры__

Праймер 5'-3* последовательность

>SCMtplF GGA TCC ATT ATG CGG GCA GTT AG

>SCARp50F СТА GTT AAA TGG CTC TGC GGT TG

>SCARp91F GAG CTT GAT CTG CTG CCA TCG G

>SCARp406R CAC GCG ATG AAT ATG АТС CTT AG

>SCARp463R GGA TTG GGA GGT ATG TGG TAG AG ,

>SCARp636R ATG CGG GCC AGC CAA TTA GGC i

Две пары специфичных праймеров 5САЯр91Р - ЗСАКрбЗбЯ и 8САБ1р50Р -8САЯрб36К при оптимизированных условиях ПЦР дали ко-доминантные фрагменты, выявляющие как восприимчивый, так и устойчивый генотипы (рис. 5). Учитывая расположение прямого и обратного праймеров этих маркеров, можно предположить, что восприимчивый аллель маркерного локуса имеет лишь один повтор фрагмента клона А1_245480.

- 550 п.в.

в И М

Рис. 5. $САК-фрагменты, полученные в результате амплификации 8 — восприимчивых (Се-3) ий- устойчивых образцов (ЕСД04-1) с различными комбинациями праймеров.

1-9 различные комбинации праймеров: 1- 5САКр1Г-8САКр406г,

2- 8САКр|«САКр463г, 3- вСАКрН-вСАКрбЗбг, 4- 8САКр50Г-8САКр406г, 5- 8САНр50Г-5САКр463г, 6- 5САНр50Г- вСАКрбЗбг, 7- вСАЯрШ-вСАН^йОвг, 8- 8СА11р9Н-8САКр463г, 9- 8САКр91 Г-вСАКрбЗбп б и 9 - комбинации, давшие ко-доминантные фрагменты, выявляющие устойчивые (вертикальные стрелки) и восприимчивые (горизонтальные стрелки) генотипы. М - маркер молекулярной массы

Испытание синтезированных специфичных праймеров показало, что один из маркеров (комбинация БСАЛрЭ 1 Р-БСАКрбЗбК.) позволяет четко различать генотипы устойчивых образцов европейской репы ЕСБ04-1 от генотипов восприимчивых образцов капусты пекинской Се-3, но является неэффективным при анализе устойчивости в популяциях азиатской репы ЖТ1-1.

5. Комбинационная способность и характер наследования хозяйственных признаков у линий капусты пекинской

Знание типа взаимодействия полигенов при контроле важнейших хозяйственных признаков у гибридов, комбинационной способности конкретных самонесовместимых линий и её генетической природы позволит в значительной степени увеличить эффективность селекции на продуктивность и качество товарной продукции. .

5.1. Материал и методика. Материалом исследования служили 110 Б) гибридов, полученных гибридизацией 11 инбредных линий пекинской капусты

в системе полных диаллельных скрещиваний Гибридизацию проводили вручную в 2003 г в зимней осгекленной теплице Полевое испытание гибридов и родительских линий проводили в 2004 г, в летне-осеннем (июль-сентябрь) обороте, в 2005 г - в весенне-летнем (апрель-июль) обороте на опытном участке селекционной станции им Н Н1 имофеева МСХА В 2004 г опыт был заложен методом рендомизированных повторений по 10 растений на делянке в двукратной повторности, в 2005 г - методом рендомизированных повторений по 8 растений на делянке в трехкратной повторности Рассаду выращивали в пленочной теплице Весенний посев 15 апреля, высадка рассады в открытый грунт 6 мая, уборка кочанов с 16 июня по 8 июля Летний посев 1 июля, высадка рассады в открытый грунт 25 июля, уборка с 15 сентября по 8 октября В 2004 г изучаемый материал сравнивали с отечественным гибридом, И) Ника, в 2005 г - с гибридом Ника и двумя гибридами голландской селекции Р, Старко и Р] Та-ранко

Учет массы проводили индивидуальным взвешиванием каждого растения, учет длины, ширины высоты и диаметра - обмером при помощи линейки и штангель-циркуля, числа розеточных листьев и листьев кочана - прямым подсчетом

Комбинационную способность родительских линий оценивали по Б Гриффингу (В Ог^Япц, 195ь), генетический контроль признака исследовали методом дисперсионного и графического анализа диаллельных таблиц по Б Хейману и Дж Джинксу (В Наутап, 1954, К Мазер, Дж Джинкс, 1985)

5.2. Результаты исследований

5.2.1 Средняя масса кочана Ж) гибридов, комбинационная способность самонесовместимых линий и наследование признака

В 2004 году в летне-осеннем периоде выращивания средняя масса кочана родительских линий варьирует от 0,43 до 1,33 кг, а у гибридов от 0,57 до 2,00 кг Средняя масса кочана растений стандартного гибрида Р( Ника составляет 1,28 кг, родительских линий - 0,93 кг, гибридов - 1,29 кг Обшее превосходство гибридов над родительскими линиями составляет 38,7 % Семнадцать гибридных комбинаций значительно превысили стандарт по этому признаку, семьдесят шесть значимо не отличаются и семнадцать значимо меньше стандарта Наибольшими эффектами ОКС обладают линии Чи1 (0,20 кг) и Кн70 (0,20 кг), они наиболее перспективны для создания высокоурожайных гибридов Оценка эффектов СКС в комбинациях скрещиваний показывает, что их величины высокие и варьируют в пределах от -0,30 до 0,35 кг Высокий гетерозисный эффект у лучших гибридов обусловлен удачным сочетанием высокой ОКС роди-

тельских линий с высоким эффектом СКС. Например, для Кн70х20-ЗСе2 х„=2,00 кг; юг, ^=0,08 кг; бч=0,20 кг.

При оценке в весенне-летнем периоде выращивания в 2005 году размах варьирования по средней массе кочана у родительских линий от 0,40 до 1,07 кг, у гибридов - от 0,53 до 1,92 кг. Средняя масса кочана растений стандартных гибридов Ника Старко Б) и Таранко р1 составляет 1,43,1,4 и 1,45 кг соответственно, родительских линий - 0,72 кг, Р] гибридов - 1,16 кг. Общее превосходство гибридов над родительскими линиями составляет 61,7 %. Семь гибридных комбинаций значительно превысили стандарты по этому признаку, сорок четыре значимо не отличаются и шестьдесят меньше стандартов. Линии, обладающие максимальными эффектами ОКС, - Чи1 (0,24 кг) и 20-2сс1 (0,20 кг). Величины эффектов СКС в комбинациях скрещиваний высокие и варьируют в пределах от -0,35 до 0,46 кг.

При сравнении показателей признака «средняя масса кочана» гибридов и родительских линий весенне-летнего и летне-осеннего периодов вегетации, видно, что пределы варьирования гибридных комбинаций сохраняются (от 0,57 до 2,00 кг при летнем посеве и от 0,53 до 1,92 кг при весеннем посеве), а у родительских линий изменяются - при весеннем посеве более широкие (от 0,43 до 1,33 кг), чем при летнем (от 0,40 до 1,07 кг). Вместе с тем средняя масса кочанов родительских линий и Б) гибридов в весенний период ниже, чем в летнем — 0,72, 1,16 кг и 0,93, 1,29 кг соответственно, однако у стандартного гибрида Г] Ника изменение имеет обратную тенденцию — 1,43 кг и 1,28 кг.

Между эффектами ОКС и фенотипическим проявлением признака у родительских форм корреляция средней и высокой силы (г = 0,65 ± 0,25 и г = 0,75 ± 0,22) указывает на возможность прогнозирования ОКС оцениваемых линий. Анализ корреляционной зависимости между общей комбинационной способностью родительских линий в весеннем и осеннем оборотах показал их высокую зависимость (г = 0,86). Из этого следует, что оценка ОКС по данному признаку в одних условиях соответствует оценке в других.

Дисперсионные анализы по Гриффингу и Хейману показали, что варьирование признака «средняя масса кочана» при выращивании в летне-осеннем обороте определяется преимущественно эффектами общей комбинационной способности, меньше эффектами специфической комбинационной способности, а при выращивании в весенне-летнем обороте вклад эффектов ОКС и СКС в варьирование признака примерно одинаковый. В контроле общей комбинационной способности преобладают эффекты неполного доминирования. Специфическая комбинационная способность при летнем посеве определяется преимущественно специфическим взаимодействиям полигенов (комплементарным эпистазом) и в меньшей мере асимметрией их распределения; при весеннем по-

севе - специфическими взаимодействиями полигенов (комплементарным эпи-стазом) и однонаправленным их действием

5.2.2 Продолжительность вегетационного периода Р| гибридов, комбинационная способность линий и наследование признака

При выращивании в летне-осеннем периоде 2004 года размах варьирования у родительских линий составляет от 82,5 до 109,0 дней, у гибридов - от 75,5 до 109,0 дней Показатечь стандартного гибрида Р] Ника составляет в среднем 82,5 дня Во всем многообразии г ибридных комбинаций нет существенно более скороспелого гибрида Наиболее перспективные в селекции на скороспелость являются линии 20-2сс1 и Чи1, обладающие самьми низкими эффектами ОКС --9,28 и -8,89 дней соответственно

При выращивании в весенне-летнем периоде 2005 года размах варьирования у родительских пиний от 72,0 до 81,3 дней, у гибридов - от 71,7 до 81,3 дней Вегетационный период стандартного позднеспелого гибрида Ника составил 78,3 дня, раннеспелого и среднеспелого Сгарко и Р] Таранко - 65,8 и 75,0 соответственно Из общего числа гибридов (110) выделяются 37 более скороспелых, чем Р( Ника, в том числе 16 более скороспелых, чем Таранко Однако гибридов, приближающихся по данному признаку к показателю раннеспелого стандарта Р| Старко, не наблюдается

По данным весенне-летнего оборота, в селекции на скороспелость перспективно использование линий Т52 (-2,02 дня), №72 (-2,62 дня) и Кн70 (-2,32 дня) - линии с наиболее низкими отрицательными эффектами ОКС, а использование линий 20-2аЛ (2,72 дня), Чи1 (2,42 дня), 22ч4 (2,39 дня), обладающих высокими положительными эффектами ОКС, - нецелесообразно

Между эффектами ОКС и фенотипическим проявлением признака у родительских форм в оба периода установлена высокая корреляционная зависимость (г — 0,77 0,21 и г - 0,80 ± 0,20), что указывает на возможность прогнозирования скороспелости гибридов по показателям родителей

Корреляционная связь ОКС родительских линий по данному признаку при выращивании в весеннем и летнем оборотах слабой силы и отрицательная (г = -0,54) Из этого следует, что оценка ОКС по данному признаку в одних условиях не соответствует оценке в других

Разнообразие гибридов капусты пекинской по продолжительности вегетационного периода определяется главным образом различиями между линиями по общей комбинационной способности с преобладанием эффектов неполного доминирования при выращивании в летне-осеннем периоде и эффектов сверхдоминирования при выращивании в весенне-летнем. В меньшей мере разнообразие определяется специфической КС в летне-осеннем обороте преимущественно специфическими неаллельными взаимодействиями (комплементарным

эпистазом) и в меньшей мере асимметрией распределения полигенов, а в весенне-летнем обороте специфическими аллельными взаимодействиями (сверхдоминированием) и в гораздо меньшей степени асимметричным распределением генов. При этом отмечается полное отсутствие влияния материнских эффектов.

5.2.3 Плотность кочана Fj гибридов, комбинационная способность самонесовместимых линий и наследование признака

В 2004 году при выращивании в летне-осеннем обороте у родительских линий размах варьирования составляет от 0,15 до 0,55 г/см3, у гибридов - от 0,19 до 0,60 г/см3. Плотность кочана стандартного гибрида Fi Ника составила 0,47 г/см3. В большинстве гибридные комбинации (60 шт.) значимо не отличаются от стандарта и лишь пять существенно превышают его.

В 2005 году при выращивании в весенне-летнем обороте у родительских линий размах варьирования от 0,13 до 0,44 г/см3, у гибридов - от 0,11 до 0,52 г/см3. Средняя плотность кочана у стандартных гибридов F] Ника, Fi Старко и Fi Таранко составила 0,45, 0,51 и 0,50 г/см3 соответственно. Плотность кочана превалирующего большинства гибридных комбинаций (91 шт.) существенно ниже плотности отечественного стандарта Fi Ника, 17 гибридов не отличаются от него, и лишь два превосходят (на 15,6%). При сравнении со стандартными гибридами голландской селекции, Fi Старко и Fi Таранко, выявлено лишь 6 гибридов с показателями соответствующего уровня, все остальные существенно ниже него.

Анализ средних популяционных значений плотности кочана выявляет существенные различия в проявлении данного признака при выращивании в весенне-летнем и летне-осеннем оборотах. Изменение показателей плотности кочана выражается в снижении средних популяционных значений родительских линий и гибридов в весенне-летний период (Р^, = 0,26 г/см3, Ficp = 0,30 г/см3), по сравнению с летне-осенним (Рср = 0,35 г/см3, Fjcp= 0,41 г/см3). Однако при этом превосходство гибридов над родительскими формами сохраняется на том же уровне, 15,3% и 17,1% соответственно, т.е. в весенне-летнем периоде происходит смещение пределов варьирования в меньшую сторону.

Высокая корреляционная зависимость (г = 0,92) проявления эффектов ОКС по плотности кочана изучаемого набора линий в разные периоды возделывания (летне-осенний и весенне-летний), свидетельствует о возможности проведения равноценной оценки и отбора на высокую ОКС по данному признаку в любом из этих периодов. Перспективными для данного направления селекции являются линии Чи1,20-2ccl, Т52,20-ЗСе2,22ч4 и 21т1.

У самонесовместимых инбредных линий капусты пекинской плотность кочана контролируется полигенной системой. Линии существенно различаются

по аддитивным и доминантным эффектам полигенов, а также эффектам плаз-могенов как в летне-осеннем, так и весенне-летнем периодах выращивания Разнообразие гибридов, полученных с участием данного набора инбредных линий, определяется преимущественно различиями между линиями по общей комбинационной способности и значительно меньше различиями по специфической комбинационной способности Варьирование линий по ОКС в оба периода исследований обусловлено аддитивными и доминантными эффектами полигенов, но в большей мере последними с преобладанием эффектов полного доминирования Варьирование линий по СКС в летне-осеннем обороте обусловлено специфическими аллельными взаимодействиями и в меньшей мере асимметрией распределения доминантных генов между линиями, а в весенне-летнем обороте — комплементарным эпистазом и значительно меньше асимметрией распределения полигенов и их направленным действием

Высокая корреляционная зависимость между эффектами ОКС н фенотипи-ческим проявлением признака у родительских форм (г - 0,86 ± 0,17, г = 0,89 ± 0,16) позволяет по проявлению фенотипа достоверно прогнозировать ОКС линий

5.2.4 Результаты оценки родительских линии и гибридных комбинаций

Наиболее перспективными в селекции Р) гибридов являются две уникальные линии Чи1 и 20-2сс1, обладающие наивысшими значениями проявления эффектов ОКС по важнейшим хозяйственно полезным признакам Использование этих линии в скрещиваниях дает возможность получить гибриды, сочетающие в себе высокую массу и плотность кочана, а также более высокую скороспелость Уникальность линии Чи1 заключается еще и в том, что она обладает устойчивым проявлением высоких эффектов ОКС по массе и плотности кочана независимо от периода выращивания

В результате оценки 110 гибридных комбинаций выделена лишь одна, 20-2сс1хКн70, которая превосходит отечественный стандарт И) Ника, как по средней массе кочана (на 46,9 и 31,5% при летнем и осеннем посевах соответственно), так и по скороспелости - в летне-осеннем периоде выращивания созревает на 5-7 дней раньше

5.2.5 Корреляционная связь основных хозяйственных признаков при оценке в весенне-летнем и летне-осеннем периодах выращивания

В результате корреляционного анализа одиннадцати хозяйственно ценных признаков установлено, что в превалирующем числе случаев между признаками нет существенной связи - значения коэффициента корреляции г находятся в

пределах от 0,00 до 0,50; у небольшого числа пар признаков наблюдается связь средней силы (г = 0,50-0,75) и еще реже - высокая корреляция (г > 0,75).

Значимая корреляция средней и высокой силы чаще проявляется при оценке изучаемых генотипов в летне-осеннем периоде (у 18 пар), чем при оценке в весенне-летнем (у 6 пар). Стабильное проявление связи в оба периода исследований наблюдается только между четырьмя парами признаков, две из которых сохраняют высокую положительную корреляцию: «ширина жилки» и «масса кочана» (г = 0,74; 0,75), «длина жилки» и «длина листа» (г = 0,79; 0,79), а две другие — прямую средней силы: «число листьев в кочане» и «масса кочана» (г = 0,50; 0,54), «ширина листа» и «длина листа» (г = 0,66; 0,66).

ВЫВОДЫ

1. Межвидовая гибридизация диплоида B.pekinensis (геном А) с амфидип-лоидами B.napus (геномная формула ААСС) и B.carinata (геномная формула ВВСС) проходит легко. Гибридные растения вследствие нарушений в мейозе стерильны. Беккроссирование сесквиполиплоидного гибрида, B.naptisxB.pekinensis (геном ААС), видом B.pekinensis проходит без затруднений, а амфигаплоидного B.pekinensisxB.carinata (геномная формула ABC) - осложнено стерильностью межвидового гибрида.

2. При гибридизации диплоидного вида, капусты пекинской {B.pekinensis, 2п=20), с амфидиплоидными, рапсом (B.napus, 2п=38) и абиссинской капустой (B.carinata, 2п=34), у гибридов Fi доминируют признаки амфидиплоидных видов, т.е. родительских форм с большим числом хромосом.

3. При гибридизации B.pekinensis с амфидиплоидными видами рода Brassica для получения формы с фенотипом капусты пекинской достаточно 1-2-х бек-кроссов.

4. У анеуплоидных растений беккроссных поколений происходит редукция хромосом в процессе митотического и мейотического клеточного деления. Это подтверждается выявлением в ВС2 растения, в корневых меристемах которого было 23 хромосомы, тогда как в мейотических клетках пыльников на стадии метафаза 1-21 хромосома. В анафазе I или II мейотического деления наблюдается утрата хромосом в результате неправильного расхождения и отставания.

5. У растений ЦМС-линии капусты пекинской, Чи1мс, микроспорогенез до стадии тетрад проходит нормально, стерилизация пыльцы происходит в процессе микрогаметогенеза.

6. Интродукция гена Rb, контролирующего устойчивость к четырем расам сосудистого бактериоза, из генома В в геном А осложнена очень низкой рекомбинацией гомеологичных хромосом. Признак устойчивости в Fi B.carinata х B.pekinensis имеет доминантный характер наследования.

1S

7 Разработанный кодоминантный SCAR-маркер одного из генов устойчивости к киле эффективен при идентификации устойчивых и восприимчивых генотипов в популяции пекинской капусты и может быть успешно использован в селекции

8 Разнообразие гибридов капусты пекинской, полученных с участием изучаемого набора инбредных линий, по таким признакам, как средняя масса кочана, продолжительность вегетационного периода, плотность кочана, ширина жилки и число листьев кочана определяется преимущественно различиями между линиями по общей комбинационной способности с преобладанием доминантных эффектов и в меньшей мере - по специфической с преобладанием комплементарного эпистаза

9 Высокая корреляционная зависимость между проявлением признака у родительских линий и их эффектами общей комбинационной способности по признакам плотность кочана (г = 0,86 - 0,89) и продолжительность вегетационного периода (г 0,77 - 0,80) позволяет с высокой достоверностью по проявлению данных признаков прогнозировать и проводить отбор на высокую ОКС

10 Высокая корреляционная зависимость (г - 0,86 - 0,92) между эффектами ОКС по плотности кочана, массе кочана и ширине жилки листа в летне осеннем и весенне-летнем периодах исследований, свидетельствует о возможности проведения равноценной оценки в любом из этих периодов

РЕКОМЕНДАЦИИ И ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1 Использовать в селекции гетерозисных гибридов капусты пекинской в качестве донора цитоплазматической мужской стерильности линию Чи1мс, депонированную в каталоге коллекции ВНИИР им Н И Вавилова № 426 2. Использовать разработанный специфичный SCAR маркер (F 5'-CTAGTTAAArOGCTCTGCGGTTG-3', R 5'-ATGCGGGCCAGCCAATTAGGC-3') ДЛЯ селекции капусты пекинской на устойчивость к киле

3 Организовать производство семян гибридной комбинации 20-2ccl х Кн70 для проведения станционного испытания

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Монахос Г Ф , Монахос С Г Использование межвидовой гибридизации при создании линий пекинской капусты с цитоплазматической стерильностью// Памяти Грегора Менделя Материалы научной конференции М Изд-во МСХА, 2001 с 88-89.

2 Монахос С Г, Монахос Г Ф , Соловьев А А Перенос цитоплазматической мужской стерильности в В pektnensis из В napus путем межвидовой гибридизации//Сб студ н работ Вып 7 М Изд-во МСХА 2001 с. 68-73

3. Монахос С.Г., Джалилов Ф.С. Наследование гена устойчивости к сосудистому бактериозу при отдаленной гибридизации видов B.carinata и B.pekinensis// Тезисы докладов науч. конф. молодых ученых, аспирантов и студентов, посвященной 115-летию со дня рождения академика Н.И. Вавилова. Саратов, 2002. с. 86-88.

4. Монахос С.Г., Джалилов Ф.С., Соловьев АЛ. Передача устойчивости к сосудистому бактериозу от абиссинской капусты (B.carinata) к пекинской (B.pekinensis)/I Сб. студ. науч. работ. Вып. 8. М.: Изд-во МСХА. 2002. с. 24-28.

5. Монахос С.Г., Игнатов А.Н., Дорохов Д.Б. Монахос Г.Ф., Характеристика ПЦР маркеров связанных с локусами расово-специфичной устойчивости к киле капусты у Brassica raped! Генетика в XXI веке: современное состояние и перспективы развития. Москва. 2004. с. 111.

6. Монахос С.Г., Игнатов АЛ., Соловьев A.A. Создание молекулярных маркеров генов устойчивости к киле (Plasmodiophora brassicae Wor.) для селекции родительских линий гибридов Fi пекинской капусты и репы// Сб. студ. н. работ. Вып. 10. М.: Изд-во МСХА. 2004. с. 139-143.

7. Монахос С.Г. Наследование массы кочана у самонесовместимых линий капусты пекинской//Материалы II межд. науч. конф. «Состояние и проблемы научного обеспечения овощеводства защищенного грунта». Москва. 2005. с. 9496.

8. Крючков A.B., Монахос С.Г. Комбинационная способность линий пекинской капусты при выращивании в весеннем и осеннем обороте// Докл. ТСХА. Вып. 277. М., 2005. с. 417-421.

Объем 1,25 печ. л.

Тираж 100 экз.

Зак. 807.

Центр оперативной полиграфии ФГОУ ВПО РГАУ - МСХА им. К. А. Тимирязева 127550, Москва, ул. Тимирязевская, 44