Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Использование межвидовой гибридизации в селекции F1 гибридов капусты пекинской с групповой устойчивостью к киле и сосудистому бактериозу

ВАК РФ 06.01.05, Селекция и семеноводство

Автореферат диссертации по теме "Использование межвидовой гибридизации в селекции F1 гибридов капусты пекинской с групповой устойчивостью к киле и сосудистому бактериозу"

На правах рукописи

МОНАХОС Сократ Григорьевич

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕЖВИДОВОЙ ГИБРИДИЗАЦИИ В СЕЛЕКЦИИ ГИБРИДОВ КАПУСТЫ ПЕКИНСКОЙ С ГРУППОВОЙ УСТОЙЧИВОСТЬЮ К КИЛЕ И СОСУДИСТОМУ БАКТЕРИОЗУ

06.01.05 - селекция и семеноводство

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук

Москва 2005

Работа выполнена на кафедре селекции и семеноводства овощных, плодовых и декоративных культур РГАУ-МСХА им. К.А.Тимирязева

Научный руководитель:

доктор сельскохозяйственных наук, профессор КРЮЧКОВ А.В.

Официальные оппоненты:

доктор сельскохозяйственных с.-х. наук, профессор ЛУДИЛОВ В.А. кандидат сельскохозяйственных наук, ст. науч. сотр. СТАРЦЕВ В.И.

Ведущее предприятие: Российский государственный аграрный заочный университет

Защита диссертации состоится _и февраля 2006 г. в * ""часов на заседании Диссертационного совета Д 220.043.10 л/г.«. Российском государственном аграрном университете - Московской сельскохозяйственной академии им. К.А.Тимирязева по адресу: 127550, Москва, ул. Тимирязевская, д.

С диссертацией можно ознакомится в Центральной научной библиотеке РГАУ-МСХА им. К.А.Тимирязева.

Автореферат разослан " ' " января 2006 г.

Учёный секретарь

49.

диссертационного совета: кандидат биологических наук

КАРЛОВ Г.И.

wjl

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В настоящее время пекинская капуста является важнейшей культурой в Восточноазиатских странах, широко известна в Северной Америке, Западной Европе и Австралии. Она занимает ведущее место в мировом объеме производства салатных овощей. Благодаря высокой скороспелости, диетическим и вкусовым качествам ее значение возрастает и в России. Сочетание уникальных качеств культуры с современными технологиями возделывания позволяют получать два урожая в год и обеспечивать население в весенний и осенний периоды ранней свежей продукцией, витаминами и биологически активными веществами. Вместе с тем, в сортименте Госреестра селекционных достижений представлены преимущественно сорта и гибриды зарубежной селекции, не полностью удовлетворяющие современным требованиям интенсивной технологии, а многие восприимчивы к наиболее вредоносным патогенам. Лишь два гибрида, Fi Ника и Кудесница, созданные на Селекционной станции им. Н.Н.Тимофеева, устойчивы к киле крестоцветных.

Таким образом, особенно актуальным является расширение сортимента этой культуры за счет создания высокоурожайных выровненных гибридов с высокими товарными качествами для различных направлений использования (потребление в свежем виде, переработка, хранение) устойчивых к наиболее вредоносным заболеваниям (кила крестоцветных, сосудистый бактериоз, вирус мозаики турнепса и др.).

Дель и задачи исследования. Исходя из вышеизложенного, цель настоящей работы - селекция F( гибридов капусты пекинской с генетической устойчивостью к киле и сосудистому бактериозу. Данная работа предполагает решение следующих задач:

1) изучить возможность передачи посредством межвидовой гибридизации цитоплазматической мужской стерильности от рапса (B.napus) в капусту пекинскую (B.pekinensis) и выявить ее проявление в сочетании с новым ядерным материалом;

2) изучить возможность передачи доминантной моногенной устойчивости из B.carinata в B.pekinensis и создать линии пекинской капусты с групповой устойчивостью к киле и четырем расам сосудистого бактериоза;

3) изучить возможность конвертирования RAPD маркера RA12-75А доминантного гена устойчивости к киле в соответствующий доминант-ный/кодоминантный SCAR маркер и оценить его эффективность на различных популяциях пекинской капусты и репы;

4) изучить характер наследования основных хозяйственно-ценных признаков самонесовместимых инбредных линий капусты пекинской, оценить комбина-

ционную способность и влияние условий возделывания на ее проявление, выявить перспективные гибридные комбинации.

Научная новизна работы. Установлена высокая эффективность метода отдаленной гибридизации при передаче ЦМС из рапса (B.napus) в капусту пекинскую (B.pekinensis).

Показано устойчивое наследование признака устойчивости к сосудистому бактериозу в потомствах от скрещивания родственных видов, пекинской и абиссинской (B.carinata) капуст, при беккроссировании капустой пекинской, а также возможность объединения генов устойчивости к данному заболеванию и киле крестоцветных в одном генотипе.

Выявлена возможность создания специфичного кодоминантного SCAR маркера гена устойчивости к киле крестоцветных на основе RAPD маркера с помощью методов молекулярной биотехнологии.

В системе полных диаллельных скрещиваний выяснен характер наследования основных хозяйственно-ценных признаков, генетика комбинационной способности. Определены корреляционные связи между основными признаками, а также между эффектами ОКС и фенотипическим проявлением этих признаков у родительских линий.

Выявлено влияние погодных условий весенне-летнего и летне-осеннего периодов выращивания на проявление эффектов ОКС.

Практическая значимость. Создана и депонирована в каталоге коллекции ВНИИР им. Н.И.Вавилова №426 ЦМС-линия, Чи1мс, - донор цитоплазма-тической мужской стерильности, кроме того, создана форма, устойчивая к сосудистому бактериозу и Киле, - донор генов устойчивости в селекции капусты пекинской и репы.

Разработан кодоминантный SCAR маркер одного из генов устойчивости к киле, эффективный при идентификации устойчивых и восприимчивых генотипов в популяции пекинской капусты.

Выделены наиболее перспективные в селекции Fi гибридов инбредные линии с высокой ОКС по основным хозяйственным признакам, а также перспективные гибридные комбинации.

На защиту выносятся следующие основные положения:

• межвидовая гибридизация как эффективный метод интродукции цитоплаз-матической мужской стерильности от B.napus и гена устойчивости к сосудистому бактериозу от B.carinata в B.pekinensis-,

• конвертирование неспецифичного (RAPD) молекулярного маркера гена устойчивости к киле крестоцветных в специфичный (SCAR) маркер;

• особенности наследования основных хозяйственно ценных признаков ин-бредных линий капусты пекинской, оценка комбинационной способности;

выделение наиболее перспективных линий в селекции на высокую урожайность и скороспелость; • наиболее перспективные для условий Нечернозёмной зоны России Р, гибриды капусты пекинской.

Апробация результатов работы. Результаты работы апробированы на ежегодных научных конференциях Московской сельскохозяйственной академии им. К.А.Тимирязева (Москва, март 2000 г., март 2002 г., март 2004 г., декабрь 2004 г.), на научной конференции "Памяти Грегора Менделя" (Москва, февраль 2001 г.), научной конференции молодых учёных, аспирантов и студентов, посвященной 115-летию со дня рождения академика Н.И.Вавилова (Саратов, ноябрь 2002 г.) и ежегодной научной конференции Вятской государственной сельскохозяйственной академии (Киров, 2004 г.).

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения; обзора литературы; экспериментальной части, содержащей четыре главы, каждая из которых включает описание целей, материалов и методов исследований, результаты исследований и краткие выводы; выводов, рекомендаций и предложений, списка литературы и приложения. Работа изложена на 172 страницах машинописного текста, содержит 27 таблиц, 33 рисунка. Список литературы включает 285 источника, из них 203 на иностранных языках. Приложения содержат 52 таблицы и 6 рисунков.

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 8 печатных работ.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Обзор научной литературы по изучаемым вопросам

2. Создание линий с цитоплазматической мужской стерильностью

В современном сельскохозяйственном растениеводстве приоритетное значение имеет производство гибридных семян. При этом одной из биологических основ, позволяющей получать 100%-но гибридные семена при семеноводстве, а кроме того эффективно защищать авторские права не только на селекционные достижения, но и на признаки и гены, является цитоплазматическая мужская стерильность.

2.1. Материалы и методы. Работа выполнена на селекционной станции им. Н.Н.Тимофеева МСХА и на кафедре генетики МСХА в 1999 - 2004 гг. В опыте использовали растения ярового рапса (В.парт), Б] Посейдон, - источник ЦМС; коллекцию инбредных линий капусты пекинской (Вректепш) с генетической устойчивостью к киле крестоцветных (Р. Ьгаззкае Wor.); растения линий белокочанной капусты (В.о1егасеа).

Признак ЦМС передавали путем межвидовой гибридизации с последующим беккроссированием и отбором. Гибридизацию проводили вручную. Оценку проявления мужской стерильности проводили визуально, оценку устойчивости к киле проводили сначала на естественном, а в последующих поколениях на искусственном инфекционном фоне «пипеточным» методом.

Выявление самосовместимых линий и линий с пониженной самонесовместимостью проводили автогамным опылением 10 цветков 10 растений каждой линии. Степень самосовместимости оценивали подсчетом среднего числа завязавшихся семян на 1 стручок со всех растений каждой линии.

Изогенные пары (ЦМС-линия - фертильный аналог) создавали беккроссированием ЦМС-формы фертильными самосовместимыми линиями в ряде поколений и отбором по морфологическим признакам и биологическим свойствам. Отбор проводили до полной идентичности стерильных линии и их фертильных аналогов.

2.2. Результаты исследований. Растение рапса (B.napus, ААСС) с ЦМС подвергали опылению в бутонах пыльцой линий пекинской (В pekinensis, АА) и белокочанной (В. oleráceo, СС) капуст. Скрещивание с пекинской капустой проходило довольно легко - в среднем на один стручок завязалось 15-20 семян. Однако семян от скрещивания рапса с белокочанной капустой получить не удалось. Таким образом, выявились большие различия в совместимости родственных видов: гибридизация амфидиплоида с геномной формулой АС с растениями, обладающими геномом А, проходит легко, а с видами, имеющими геном С, очень затруднена.

Изучение 250 растений межвидового гибрида (B.napus х B.pekinensis, ААС) показало, что у F! гибридов в целом доминируют признаки родителя с большим числом хромосом, т.е. рапса. Они имели длинный ветвистый стебель, рассечённый лист на длинном черешке, тёмную окраску листьев. При этом все растения были стерильны, имели функционально активные нектарники, охотно посещались пчёлами и были устойчивы к киле.

Несколько растений были отобраны для проведения беккросса. В беккрос-се скрещивание проходило легко. В среднем на опылённый бутон завязалось 3 -6 семян. В полученных популяциях BQ наблюдали более широкий полиморфизм растений по вегетативным признакам, чем у гибридов F, (по форме и цвету листа, ширине черешка, длине и ветвистости стебля). В результате цитологического анализа некоторых растений было установлено, что число хромосом в BCi варьирует от 2п = 21 до 2п = 29 (рис. 1).

Из всего многообразия выращенных растений (250 шт.) удалось выделить 15 форм, по своим морфологическим признакам приближающихся к пекинской капусте. Причём одно растение полностью соответствовало отцовской форме.

Цитологический анализ пыльников молодых бутонов этого растения показал, что микроспорогенез проходит до образования тетрады микроспор нормально, а анализ пыльников в фазу начала раскрытия цветка показал, что в них образуются мелкие деформированные стерильные пыльцевые зерна. Это свидетельствует о том, что абортация пыльцы происходит в процессе формирования мужского гаметофита (микрогаметогенеза).

Рис. 1. Метафазиые пластинки митотических клеток растений ВС) с числом хромосом 2п - 21 (А) и 2п = 29 (Б).

В результате второго беккросса этого растения получены стабильные 20-хромосомные устойчивые к киле растения типичной капусты пекинской с ци-топлазматической мужской стерильностью.

В селекции гибридов капустных культур на основе линий с цитоплазма-тической мужской стерильностью основной проблемой является размножение ЦМС-линий. Для решения этой проблемы предполагается создание изогенных пар: ЦМС-линия - фертильный аналог. Такие изогенные пары создают бек-кроссированием в ряде поколений и отбором по морфологическим и биологическим свойствам до полной идентичности стерильной линии и фертильного аналога, кроме признака мужской стерильности. При этом в качестве фертиль-ных аналогов необходимо использовать только самосовместимые линии, так как беккроссирование самонесовместимой линией приведет к насыщению ЦМС-линии аллелями гена самонесовместимости, что вызовет их нескрещиваемость (Г.Ф.Монахос, 2003).

Исходя из вышесказанного, следующий этап селекционной работы состоял в поиске самосовместимых линий и создании изогенных пар ЦМС-линия - фертильный аналог. В результате обследования коллекции линий капусты пекинской на самосовместимость были выявлены две линии Чи1к4-34 и 21ок4-54, обладающие пониженной самонесовместимостью и завязывающие от самоопыления 6-7 семян на стручок. К настоящему моменту проведено несколько циклов беккросса ЦМС-формы этими линиями, что позволило получить достаточно выровненную по морфологическим признакам ЦМС-линию капусты пекинской - Чи1к4мс.

Итак, межвидовая гибридизация является высокоэффективным способом интродукции признака цитоплазматической мужской стерильности от рапса в капусту пекинскую, позволяющая получать формы со стабильным проявлением ЦМС, лишенные морфологических дефектов и пригодные для гетерозисной селекции.

3. Создание линий устойчивых к сосудистому бактериозу

Одной из наиболее вредоносных бактериальных болезней капусты пекинской является сосудистый бактериоз (возбудитель Xanthomonas campes tris pv. campestris (Pamm.) Dow.). Вследствие того, что химические меры борьбы неэффективны или запрещены к применению на этой культуре, селекция на устойчивость является главным способом снижения потерь урожая от этой болезни. Для создания устойчивых растений необходимо осуществление межвидовой гибридизации с привлечением сортов амфидиплоидных видов B.juncea (2п=36), B.carinata (2п=34), доноров высокой устойчивости к основным расам (1, 3, 4 и 5) Х.с. pv. campestris, определяемой одним доминантным геном Rb из генома В (H.Guo et al., 1991; A.N.Ignatov et al., 2001).

3.1. Материалы и методы. Работа выполнена на селекционной станции им. Н.Н.Тимофеева, на кафедре генетики МСХА и в лаборатории станции защиты растений МСХА в 2001-2004 гг. В опытах использовали абиссинскую капусту (B.carinata, ВВСС), линию PI 199947 - источник устойчивости к сосудистому бактериозу (расам 1, 3, 4, 5); устойчивую к киле пекинскую капусту ([B.pekinensis, АА), линию №2.

Растения заражали путем прокалывания жилок по краю листовой пластинки (20-30 уколов на один лист) стерильной препаровальной иглой, смоченной в суспензии бактерий с концентрацией 3-5 х 108 бак/мл. Изоляты возбудителя сосудистого бактериоза, 1-ю, 4-ю и 5-ю расы, любезно предоставил с.н.с. Центра «Биоинженерия» РАН А.Н.Игнатов, расы 0 и 3 - профессор кафедры фитопатологии Ф.С.Джалилов. Дифференциация рас по S.Kamoun (1992) Учет устойчивости/восприимчивости проводили на 12 день после инокуляции. За устойчивое принималось растение без симптомов поражения, за восприимчивое - растение с типичными симптомами.

Цитологический анализ и подсчет числа хромосом осуществляли в клетках меристематических тканей кончиков корешков и в клетках пыльников молодых бутонов. Материал фиксировали уксусным алкоголем (этанол : уксусная кислота - 3:1). Препараты готовили методом распластывания клеток. Окрашивали 1% раствором Гимза. Анализ препаратов проводили с помощью микроскопа Axiolab (Carl Zeiss).

Растения пекинской капусты с групповой устойчивостью к киле и четырем расам сосудистого бактериоза получали путем принудительного опыления растений пекинской капусты пыльцой абиссинской с последующим отбором и беккроссированием пекинской капустой.

Яровизацию растений проводили на стадии проростков. Чашки Петри с наклюнувшимися семенами помещали в холодильную камеру и выдерживали 10-15 дней при +4°С. Яровизированные растения распикировывали в кассеты со стороной ячейки 4 х 4 см и затем высаживали в горшки объемом 0,7 л.

3.2. Результаты исследований. Перед гибридизацией родительских линий №2 и PI 199947 провели их оценку на устойчивость к пяти расам сосудистого бактериоза (расы 0, 1, 3, 4, 5). Все растения абиссинской капусты проявили устойчивость к расам 1, 3, 4, 5 и восприимчивость к расе 0, пекинской - восприимчивость ко всем расам. Первое скрещивание B.pekinensis с B.carinata проходило довольно легко, несмотря на принадлежность растений к разным видам. Межвидовые гибриды (B.pekinensis х B.carinata, геномная формула ABC) проявили полную устойчивость к расам 1, 3, 4, 5 и были восприимчивы к расе 0. Это свидетельствует о доминантном характере генетического контроля устойчивости у линии PI199947.

Получить беккроссное потомство от скрещивания с капустой пекинской оказалось непросто, так как вследствие нарушений в мейозе все растения Fi обладали стерильностью мужского и женского гаметофитов. В результате опыления около 3-х тысяч цветков получено лишь 5 жизнеспособных семян. Три выращенных из них растения обладали устойчивостью к 1, 3, 4 и 5-й расам, что свидетельствовало о присутствии в беккроссных растениях хромосомы из генома В, содержащей ген Rb, и соответственно о целесообразности использования данного материала в дальнейшей селекционной работе.

В результате цитологического анализа клеток корневых меристем двух растений, имеющих наибольшее сходство по морфологическим признакам с капустой пекинской, было установлено, что число хромосом одного растения BCi составляет 2п = 28, другого - 2п = 29, т.е. закономерного уменьшения числа хромосом до числа, свойственного беккроссирующему родителю, не произошло, это объясняется очень малым числом растений в популяции.

Беккроссированием устойчивых растении получено около 60 растений ВСг, половина из которых на стадии 4-5 настоящих листьев обладала устойчивостью к четырем расам сосудистого бактериоза. При повторной инокуляции на стадии 6-7 настоящих листьев тремя расами ксантомонад (1, 3 и 4-й) оказалось, что все, за исключением пяти растений, утратили устойчивость к первой расе. Такая реакция на заражение может быть объяснена либо тем, что в использованном изоляте расы 1 изначально присутствовала какая-то доля виру-

лентной расы 0, либо тем, что раса 1 на фоне неполной дозы гена устойчивости беккроссных растений мутировала в расу 0.

Одно из пяти устойчивых к четырем расам Х.с. ру. сатреьЫз (1, 3, 4 и 5-й) (обозначенное далее «№1») имело большое морфологическое сходство с пекинской капустой и было частично фертильным. Цитологический анализ корневых меристем устойчивых и восприимчивых растений второго беккроссного поколения показал высокое варьирование числа хромосом 2п = 23 - 29. Также были выявлены химерные растения с числом хромосом в корневых меристемах 2п = 23, 24, 25. Интересно отметить, что растение №1, проявляющее наибольшее сходство с капустой пекинской, в корневых меристемах имело 23 хромосомы, тогда как в мейотических клетках пыльников на стадии метафаза I оно содержало 2п = 21 (рис. 2). При последующих делениях в анафазе I или анафазе II происходила утрата еще одной хромосомы (рис. 3). Таким образом, образовывались гаплоидные клетки микроспор, имеющие п = 10 хромосом. Из них формировались жизнеспособные пыльцевые зерна.

Рис. 2. А) Метафазиая пластинка митотической клетки корневой меристемы растения №1,2п = 23; Б) мейотическая клетка пыльников растения №1,2п = 21

Рис. 3. Мейотическое деление в клетках пыльников растения ВСь №1: А) анафаза I, отставание 21-й хромосомы, Б) анафаза П, неправильное расхождение отставшей хромосомы

В результате двух последующих беккроссов и отбора получены стабильные фертильные 20-хромосомные растения типичной капусты пекинской.

Варьирование растений популяций ВС4 и Р2 (полученной от самоопыления растений ВСз) по морфологическим признакам было незначительным. Это свидетельствует о достаточно высокой генетической однородности растений внутри этих популяций. Однако оценка устойчивости к сосудистому бактериозу в популяциях ВС4 и Р2 показала, что наследование гена ЯЬ нестабильно и не подчиняется менделевским законам, что подтверждается статистической оценкой распределения устойчивых и восприимчивых растений по критерию х2- Отсутствие закономерного менделевского расщепления по признаку устойчивости к Х.с. ру сатре$&Ы у растений четвертого поколения беккросса объяснимо нарушениями хода мейотического деления. Это нарушение, вероятно, вызвано замещением целой хромосомы генома А В ректет1з чужеродной хромосомой из генома В В.сагтШа, несущей ген ЯЬ и отбираемой в каждом поколении с устойчивыми растениями. Причем замещенная хромосома не имеет заметного влияния на проявление морфологических и биологических признаков капусты пекинской. Таким образом, можно предположить, что хромосомные наборы устойчивых растений популяций ВС4 и ¥2 представлены следующим составом 18А+А+В и/или 18А + ВВ.

Устойчивые к сосудистому бактериозу и киле растения популяции ВС4 высажены в зимней теплице для проведения следующего цикла беккросса устойчивыми к киле линиями капусты пекинской.

4. Селекция на устойчивость к киле крестоцветных. Разработка молекулярных маркеров

Основным методом традиционной селекции растений на устойчивость к болезням является создание гибридных популяций с последующим отбором в ряде поколений возвратных скрещиваний и/или инбридинга. Этот процесс может быть значительно ускорен за счет применения молекулярных маркеров.

4.1. Материалы и методы. Размножение растений и оценка устойчивости к киле крестоцветных были проведены на Селекционной станции им. Н.Н.Тимофеева МСХА, в зимней остекленной теплице; молекулярные анализы - в Центре «Биоинженерия» РАН, в лаборатории «Генома растений», в 20022004 гг. В качестве донора генов устойчивости к киле использовали растения турнепса линии ЕСБ04-1. В качестве донора аллелей восприимчивости - растения турнепса линии ЖТ1-1 и растения инбредной линии капусты пекинской, Се-3.

Получение популяций и ВС}. Устойчивые к киле растения линии ЕС004-1 скрещивали с восприимчивыми растениями линий ЖГ1-1 и Се-3. По одному из растений потомств (ЕСШ4-1хЖТ1-1 и ЕС004-1хСе-3) самоопы-

ляли в бутонах для получения Fj и скрещивали с восприимчивым родителем для получения ВС].

Оценка устойчивости к кипе крестоцветных. Оценку устойчивости к киле полученных популяций растений и родительских форм проводили на искусственном инфекционном фоне. Индекс расового состава использованной полевой популяции патогена - 16/11/31, концентрация суспензии спор 107 спор/1мл. Посев проводили в кассеты со сторонами ячеек 4x4 см, на глубину 0,5 см с немедленным заражением, используя модификацию пипеточного метода (W.Lamers, H.Toxopeus, 1977; R.Voorrips, D.Visser, 1993). Учет устойчивости растений проводили через шесть недель. За устойчивое принимали растение без малейших признаков поражения килой.

Молекулярные анализы. Выделение геномной ДНК проводили из молодых тканей по методике K.Edwards et al. (1991) в модификации Д.Дорохова и Э.Клоке (1997).

Амплификацию геномной ДНК проводили на амплификаторе ABS-2000 (Applied Biosystems) в 15 мкл реакционной смеси, содержащей буфер (67 мМ трис-HCl рН-8,8; 166 мМ (NH^SO-t; 2,5 мМ MgCl2; 0,01% Твин-20), по 0,2 мМ каждого dNTP, 5-15 пМ соответствующего праймера(ов), 20 нг геномной ДНК и 0,5 ед. Taq-полимеразы. Праймер RA12-75 - 5'- CATTATGCGGGC -3', разработанный японскими исследователями Y.Kuginuki с соавт. (1997). RAPD амплификацию проводили по следующей программе: 3 мин при +94°С; 35 циклов: +94°С - 30 с, +36°С - 30 с, +72"С - 1,0 мин; +72°С - 10,0 мин. SCAR амплификацию - 3 мин при +94°С; 35 циклов: +94°С - 15 с, +64'С - 15 с, +12°С - 1,0 мин; +72°С - 5,0 мин.

Продукты амплификации разделяли электрофорезом в 1,5 % агарозном геле, содержащем 0,5 мкг/мл бромистого этидия, и стандартном Трис-ацетат-ЭДТА электрофорезном буфере (RAPD при напряженности 4 Вт/см в течение 120 мин; SCAR при напряженности 6 Вт/см в течение 30 мин).

Клонирование RAPD фрагмента проводили с помощью набора pGEM T Vector System 1 ("Promega", USA) согласно инструкции фирмы производителя.

Полученными препаратами плазмидной ДНК проводили трансформацию компетентных клеток E.coli. Рекомбинантные клоны отбирали методом бело-голубой селекции. Отобранные клоны размножали с последующим выделением плазмидной ДНК. После проведения ПЦР и рестрикционного анализа плазмид на наличие вставки целевого фрагмента его секвенировали с помощью автоматического секвенатора. Полученная последовательность фрагмента ДНК была проверена на сходство с известными последовательностями в базе данных Ген-банка на сервере NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/GenBank) с использованием

программ BLAST и S-SEARCH. Подбор специфичных праймеров проводили при помощи программы OLIGO.

4.2. Результаты исследований. RAPD маркер RA12-75650, сцепленный с признаком устойчивости к киле, был амплифицирован, разделен от других ам-плифицированных фрагментов в агарозном геле и выделен для клонирования. Данный фрагмент был успешно клонирован и секвенирован (рис. 4).

OGATCCATTA TGCGGOCAGT ТАОААСТТТС ААТААСССТТ TCTTTAGAAC TAGTTAAATG GCTCTGCGGT TQTAATTOAC AGAAAATTAA GAGCTTGATC TGCTGCCATC GGTTAAAAGA TIACATATTG ATAGTCTCCT TTTATTTATG CGATAGCTTT GTGCATTTTT GATTTAGCTG CTGGATGTTG GGATTTATTA AATTCATGTC СААСТСТАТА TTATCCGATT AGTACGATAT TGTCTACTTT GOGCCTAATT GCCTGGCTCG CATGAATTTA CTTTTOGTCT CATTCCCAAA AGGCTTCTAC TAATTAGAGT TGGACATCTT СТТАТАТАТТ AGACACTCAT TGTCTAATTC ТССААТвТвв TACTTAGTW GATATCCCAA ATTCTCCCCC TCAAACTAAG GATCATATTC ATCGCGTGTC CCACAACTGA CTTTGAGGAT CTTCTGACTT GATCTCTACC ACATACCTCC СААТССТААС TCGATGGGTC АСОТТССТАС TCGAAAGOTA TTTTGGTCTT CTTGCAGATT TCTCGTCAAC CTGGCTCTGA TACCAATTGT TGGGATTAAT TAAATCCATG ТССААСТСТА TATTATCTGA TTAGTACGAT ATTGTCCACT ТЮМССТАА TTGGCIGGCC

Рис. 4. 5'-3' последовательность RAPD фрагмента RA-1275-650bp

Сравнение секвенированной последовательности локуса RA12-75650 с последовательностями ДНК базы данных Генбанка показало, что данная последовательность с 5'-конца представлена фрагментом, гомологичным участку клона T24I21 хромосомы 2 Arabidopsis thaliana, и двумя вырожденными повторами сходными с фрагментом клона AJ_245480 Bnapus, кодирующим S-аденозил метионин салициловой кислоты карбоксил метионил трансферазу и ген глико-протеина S-локуса, фланкированными с 3'- конца участком LTR ретротранспо-зона.

На основе известной последовательности RAPD-локуса RA12-7565o были разработаны 6 специфичных праймеров: три прямых - SCARplF, SCARp50F, SCARp91F и три обратных - SCARp406R, SCARp463R, SCARp636R (табл. 1). Возможные комбинации синтезированных SCAR-праймеров показали различную эффективность при идентификации восприимчивых и устойчивых генотипов (рис. 5).

Таблица 1

Синтезированные SCAR-праймеры_

Праймер 5'-3' последовательность

>SCABplF GGA ТСС ATT ATG CGG GCA GTT AG

>SCARp50F СТА GTT AAA TGG CTC TGC GGT TG

>SCARp91F GAG CTT GAT CTG CTG CCA TCG G

>SCARp406R CAC GCG ATG AAT ATG АТС CTT AG

>SCABp463R GGA TTG GGA GGT ATG TGG TAG AG

>SCÄKp636R ATG CGG GCC AGC CAA TTA GGC

и

Две пары специфичных праймеров 8СА11р91Р - БСАЯрвЗбЯ и 8САЯр50Р -БСАИрвЗбЯ при оптимизированных условиях ГПДР дали ко-доминантные фрагменты, выявляющие как восприимчивый, так и устойчивый генотипы (рис. 5). Учитывая расположение прямого и обратного праймеров этих маркеров, можно предположить, что восприимчивый аллель маркерного локуса имеет лишь один повтор фрагмента клона А1_245480.

- 550 п.а.

ей в К в К 8К $КМ

Рис. 5.8С АЛ-фрагменты, полученные в результате амплификации в - восприимчивых (Се-3) ий- устойчивых образцов (БСД04-1) с различными комбинациями праймеров.

1-9 различные комбинации праймеров: 1- 5САКр1Т-8САКр406г,

2- $САКри-$СА11р463г, 3- вСАКрК-вСАКрбЗбг, 4- 8САКр50Г-8САКр406г, 5- 8САНр5М-8САКр463г, 6- вСАКрЗДГ- вСАЯрбЗбг, 7- 8САКр91Г-8СА11р406г, 8- 8СА11р9и-8САКр463г, 9- вСАКрЭи-вСАКрбЗбг; 6 и 9 - комбинации, давшие ко-доминантные фрагменты, выявляющие устойчивые (вертикальные стрелки) и восприимчивые (горизонтальные стрелки) генотипы. М - маркер молекулярной массы

Испытание синтезированных специфичных праймеров показало, что один из маркеров (комбинация 8САЯр91 Р-БСАЛрвЗбЯ) позволяет четко различать генотипы устойчивых образцов европейской репы ЕС1Ю4-1 от генотипов восприимчивых образцов капусты пекинской Се-3, но является неэффективным при анализе устойчивости в популяциях азиатской репы ЖТ1-1.

5. Комбинационная способность и характер наследования хозяйственных признаков у линий капусты пекинской

Знание типа взаимодействия полигенов при контроле важнейших хозяйственных признаков у р! гибридов, комбинационной способности конкретных самонесовместимых линий и её генетической природы позволит в значительной степени увеличить эффективность селекции на продуктивность и качество товарной продукции.

5.1. Материал и методика. Материалом исследования служили 110 р! гибридов, полученных гибридизацией 11 инбредных линий пекинской капусты

в системе полных диаллельных скрещиваний. Гибридизацию проводили вручную в 2003 г. в зимней остекленной теплице. Полевое испытание гибридов и родительских линий проводили в 2004 г, в летне-осеннем (июль-сентябрь) обороте, в 2005 г. - в весенне-летнем (апрель-июль) обороте на опытном участке селекционной станции им. Н.Н.Тимофеева МСХА. В 2004 г. опыт был заложен методом рендомизированных повторений по 10 растений на делянке в двукратной повторности, в 2005 г. - методом рендомизированных повторений по 8 растений на делянке в трехкратной повторности. Рассаду выращивали в пленочной теплице. Весенний посев 15 апреля, высадка рассады в открытый грунт 6 мая, уборка кочанов с 16 июня по 8 июля. Летний посев 1 июля, высадка рассады в открытый грунт 25 июля, уборка с 15 сентября по 8 октября. В 2004 г. изучаемый материал сравнивали с отечественным гибридом, Р] Ника, в 2005 г. - с гибридом Ника и двумя гибридами голландской селекции Старко и Р, Та-ранко.

Учет массы проводили индивидуальным взвешиванием каждого растения; учет длины, ширины высоты и диаметра - обмером при помощи линейки и штангель-циркуля; числа розеточных листьев и листьев кочана - прямым подсчетом.

Комбинационную способность родительских линий оценивали по Б.Гриффингу (В.(}пйт§, 1956), генетический контроль признака исследовали методом дисперсионного и графического анализа диаллельных таблиц по Б.Хейману и Дж.Джинксу (В.Наушап, 1954; К.Мазер, Дж.Джинкс, 1985).

5.2. Результаты исследований

5.2.1 Средняя масса кочана Р] гибридов, комбинационная способность самоиесовместимых линий и наследование признака

В 2004 году в летне-осеннем периоде выращивания средняя масса кочана родительских линий варьирует от 0,43 до 1,33 кг, а у гибридов от 0,57 до 2,00 кг. Средняя масса кочана растений стандартного гибрида ?! Ника составляет 1,28 кг, родительских линий - 0,93 кг, Р, гибридов - 1,29 кг. Общее превосходство гибридов над родительскими линиями составляет 38,7 %. Семнадцать гибридных комбинаций значительно превысили стандарт по этому признаку, семьдесят шесть значимо не отличаются и семнадцать значимо меньше стандарта. Наибольшими эффектами ОКС обладают линии Чи1 (0,20 кг) и Кн70 (0,20 кг), они наиболее перспективны для создания высокоурожайных гибридов. Оценка эффектов СКС в комбинациях скрещиваний показывает, что их величины высокие и варьируют в пределах от -0,30 до 0,35 кг. Высокий гетерозисный эффект у лучших гибридов обусловлен удачным сочетанием высокой ОКС роди-

тельских линий с высоким эффектом СКС. Например, для Кн70х20-ЗСе2 Ху=2,00 кг; &=0,20 кг; й=0,08 кг; ^=0,20 кг.

При оценке в весенне-летнем периоде выращивания в 2005 году размах варьирования по средней массе кочана у родительских линий от 0,40 до 1,07 кг, у гибридов - от 0,53 до 1,92 кг. Средняя масса кочана растений стандартных гибридов Ника Рь Старко Б) и Таранко Р] составляет 1,43,1,4 и 1,45 кг соответственно, родительских линий - 0,72 кг, Б] гибридов -1,16 кг. Общее превосходство гибридов над родительскими линиями составляет 61,7 %. Семь гибридных комбинаций значительно превысили стандарты по этому признаку, сорок четыре значимо не отличаются и шестьдесят меньше стандартов. Линии, обладающие максимальными эффектами ОКС, - Чи1 (0,24 кг) и 20-2сс1 (0,20 кг). Величины эффектов СКС в комбинациях скрещиваний высокие и варьируют в пределах от -0,35 до 0,46 кг.

При сравнении показателей признака «средняя масса кочана» гибридов и родительских линий весенне-летнего и летне-осеннего периодов вегетации, видно, что пределы варьирования гибридных комбинаций сохраняются (от 0,57 до 2,00 кг при летнем посеве и от 0,53 до 1,92 кг при весеннем посеве), а у родительских линий изменяются - при весеннем посеве более широкие (от 0,43 до 1,33 кг), чем при летнем (от 0,40 до 1,07 кг). Вместе с тем средняя масса кочанов родительских линий и Р) гибридов в весенний период ниже, чем в летнем -0,72, 1,16 кг и 0,93, 1,29 кг соответственно, однако у стандартного гибрида р! Ника изменение имеет обратную тенденцию - 1,43 кг и 1,28 кг.

Между эффектами ОКС и фенотипическим проявлением признака у родительских форм корреляция средней и высокой силы (г = 0,65 ± 0,25 и г = 0,75 ± 0,22) указывает на возможность прогнозирования ОКС оцениваемых линий. Анализ корреляционной зависимости между общей комбинационной способностью родительских линий в весеннем и осеннем оборотах показал их высокую зависимость (г = 0,86). Из этого следует, что оценка ОКС по данному признаку в одних условиях соответствует оценке в других.

Дисперсионные анализы по Гриффишу и Хейману показали, что варьирование признака «средняя масса кочана» при выращивании в летне-осеннем обороте определяется преимущественно эффектами общей комбинационной способности, меньше эффектами специфической комбинационной способности, а при выращивании в весенне-летнем обороте вклад эффектов ОКС и СКС в варьирование признака примерно одинаковый. В контроле общей комбинационной способности преобладают эффекты неполного доминирования. Специфическая комбинационная способность при летнем посеве определяется преимущественно специфическим взаимодействиям полигенов (комплементарным эпистазом) и в меньшей мере асимметрией их распределения; при весеннем по-

севе - специфическими взаимодействиями полигенов (комплементарным эпи-стазом) и однонаправленным их действием.

5.2.2 Продолжительность вегетационного периода Р] гибридов, комбинационная способность линий и наследование признака

При выращивании в летне-осеннем периоде 2004 года размах варьирования у родительских линий составляет от 82,5 до 109,0 дней, у гибридов - от 75,5 до 109,0 дней. Показатель стандартного гибрида Р] Ника составляет в среднем 82,5 дня. Во всем многообразии гибридных комбинаций нет существенно более скороспелого гибрида. Наиболее перспективные в селекции на скороспелость являются линии 20-2сс1 и Чи1, обладающие самыми низкими эффектами ОКС --9,28 и -8,89 дней соответственно.

При выращивании в весенне-летнем периоде 2005 года размах варьирования у родительских линий от 72,0 до 81,3 дней, у гибридов - от 71,7 до 81,3 дней. Вегетационный период стандартного позднеспелого гибрида Р| Ника составил 78,3 дня, раннеспелого и среднеспелого Старко и Б] Таранко - 65,8 и 75,0 соответственно. Из общего числа гибридов (110) выделяются 37 более скороспелых, чем Р| Ника, в том числе 16 более скороспелых, чем Р] Таранко. Однако гибридов, приближающихся по данному признаку к показателю раннеспелого стандарта Р] Старко, не наблюдается.

По данным весенне-летнего оборота, в селекции на скороспелость перспективно использование линий Т52 (-2,02 дня), №72 (-2,62 дня) и Кн70 (-2,32 дня) - линии с наиболее низкими отрицательными эффектами ОКС, а использование линий 20-2сс1 (2,72 дня), Чи1 (2,42 дня), 22ч4 (2,39 дня), обладающих высокими положительными эффектами ОКС, - нецелесообразно.

Между эффектами ОКС и фенотипическим проявлением признака у родительских форм в оба периода установлена высокая корреляционная зависимость (г = 0,77 ± 0,21 и г = 0,80 ± 0,20), что указывает на возможность прогнозирования скороспелости гибридов по показателям родителей.

Корреляционная связь ОКС родительских линий по данному признаку при выращивании в весеннем и летнем оборотах слабой силы и отрицательная (г = -0,54). Из этого следует, что оценка ОКС по данному признаку в одних условиях не соответствует оценке в других.

Разнообразие гибридов капусты пекинской по продолжительности вегетационного периода определяется главным образом различиями между линиями по общей комбинационной способности с преобладанием эффектов неполного доминирования при выращивании в летне-осеннем периоде и эффектов сверхдоминирования при выращивании в весенне-летнем. В меньшей мере разнорб-разие определяется специфической КС: в летне-осеннем обороте преимущественно специфическими неаллельными взаимодействиями (комплементарным

эпистазом) и в меньшей мере асимметрией распределения полигенов, а в весенне-летнем обороте специфическими аллельными взаимодействиями (сверхдоминированием) и в гораздо меньшей степени асимметричным распределением генов. При этом отмечается полное отсутствие влияния материнских эффектов.

Ш Плотность кочана Г1 гибридов, комбинационная способность самонесовместимых линий и наследование признака

В 2004 году при выращивании в летне-осеннем обороте у родительских линий размах варьирования составляет от 0,15 до 0,55 г/см3, у гибридов - от 0,19 до 0,60 г/см3. Плотность кочана стандартного гибрида Ника составила 0,47 г/см3. В большинстве гибридные комбинации (60 шт.) значимо не отличаются от стандарта и лишь пять существенно превышают его.

В 2005 году при выращивании в весенне-летнем обороте у родительских линий размах варьирования от 0,13 до 0,44 г/см3, у гибридов - от 0,11 до 0,52 г/см3. Средняя плотность кочана у стандартных гибридов Р] Ника, Р] Старко и Р1 Таранко составила 0,45, 0,51 и 0,50 г/см3 соответственно. Плотность кочана превалирующего большинства гибридных комбинаций (91 шт.) существенно ниже плотности отечественного стандарта Р] Ника, 17 гибридов не отличаются от него, и лишь два превосходят (на 15,6%). При сравнении со стандартными гибридами голландской селекции, Р) Старко и Таранко, выявлено лишь 6 гибридов с показателями соответствующего уровня, все остальные существенно ниже него.

Анализ средних популяционных значений плотности кочана выявляет существенные различия в проявлении данного признака при выращивании в весенне-летнем и летне-осеннем оборотах. Изменение показателей плотности кочана выражается в снижении средних популяционных значений родительских линий и гибридов в весенне-летний период (Р^, = 0,26 г/см3, Р1ср = 0,30 г/см3), по сравнению с летне-осенним (Рср = 0,35 г/см3, Р|Ср = 0,41 г/см3). Однако при этом превосходство гибридов над родительскими формами сохраняется на том же уровне, 15,3% и 17,1% соответственно, т.е. в весенне-летнем периоде происходит смещение пределов варьирования в меньшую сторону.

Высокая корреляционная зависимость (г = 0,92) проявления эффектов ОКС по плотности кочана изучаемого набора линий в разные периоды возделывания (летне-осенний и весенне-летний), свидетельствует о возможности проведения равноценной оценки и отбора на высокую ОКС по данному признаку в любом из этих периодов. Перспективными для данного направления селекции являются линии Чи1,20-2сс1, Т52,20-ЗСе2,22ч4 и 21т1.

У самонесовместимых инбредных линий капусты пекинской плотность кочана контролируется полигенной системой. Линии существенно различаются

по аддитивным и доминантным эффектам полигенов, а также эффектам плаз-могенов как в летне-осеннем, так и весенне-летнем периодах выращивания. Разнообразие гибридов, полученных с участием данного набора инбредных линий, определяется преимущественно различиями между линиями по общей комбинационной способности и значительно меньше различиями по специфической комбинационной способности. Варьирование линий по ОКС в оба периода исследований обусловлено аддитивными и доминантными эффектами полигенов, но в большей мере последними с преобладанием эффектов полного доминирования. Варьирование линий по СКС в летне-осеннем обороте обусловлено специфическими аллельными взаимодействиями и в меньшей мере асимметрией распределения доминантных генов между линиями, а в весенне-летнем обороте - комплементарным эпистазом и значительно меньше асимметрией распределения полигенов и их направленным действием.

Высокая корреляционная зависимость между эффектами ОКС и фенотипи-ческим проявлением признака у родительских форм (г = 0,86 ± 0,17; г = 0,89 ± 0,16) позволяет по проявлению фенотипа достоверно прогнозировать ОКС линий.

5.2.4 Результаты оценки родительских линий и гибридных комбинаций

Наиболее перспективными в селекции р1 гибридов являются две уникальные линии Чи1 и 20-2сс1, обладающие наивысшими значениями проявления эффектов ОКС по важнейшим хозяйственно полезным признакам. Использование этих линий в скрещиваниях дает возможность получить гибриды, сочетающие в себе высокую массу и плотность кочана, а также более высокую скороспелость. Уникальность линии Чи1 заключается еще и в том, что она обладает устойчивым проявлением высоких эффектов ОКС по массе и плотности кочана независимо от периода выращивания.

В результате оценки 110 гибридных комбинаций выделена лишь одна, 20-2сс1хКн70, которая превосходит отечественный стандарт р! Ника, как по средней массе кочана (на 46,9 и 31,5% при летнем и осеннем посевах соответственно), так и по скороспелости - в летне-осеннем периоде выращивания созревает на 5-7 дней раньше.

5.2.5 Корреляционная связь основных хозяйственных признаков при оценке в весенне-летнем и летне-осеннем периодах выращивания

В результате корреляционного анализа одиннадцати хозяйственно ценных признаков установлено, что в превалирующем числе случаев между признаками нет существенной связи - значения коэффициента корреляции г находятся в

пределах от 0,00 до 0,50; у небольшого числа пар признаков наблюдается связь средней силы (г = 0,50-0,75) и еще реже - высокая корреляция (г > 0,75).

Значимая корреляция средней и высокой силы чаще проявляется при оценке изучаемых генотипов в летне-осеннем периоде (у 18 пар), чем при оценке в весенне-летнем (у 6 пар). Стабильное проявление связи в оба периода исследований наблюдается только между четырьмя парами признаков, две из которых сохраняют высокую положительную корреляцию: «ширина жилки» и «масса кочана» (г = 0,74; 0,75), «длина жилки» и «длина листа» (г = 0,79; 0,79), а две другие - прямую средней силы: «число листьев в кочане» и «масса кочана» (г = 0,50; 0,54), «ширина листа» и «длина листа» (г = 0,66; 0,66).

ВЫВОДЫ

1. Межвидовая гибридизация диплоида B.pekinensis (геном А) с амфидип-лоидами B.napus (геномная формула ААСС) и B.carinata (геномная формула ВВСС) проходит легко. Гибридные растения вследствие нарушений в мейозе стерильны. Беккроссирование сесквиполиплоидного гибрида, В. napusy B.pekinensis (геном ААС), видом B.pekinensis проходит без затруднений, а амфигаплоидного ВpekinensisxB.carinata (геномная формула ABC) - осложнено стерильностью межвидового гибрида.

2. При гибридизации диплоидного вида, капусты пекинской (B.pekinensis, 2п=20), с амфидиплоидными, рапсом (В napus, 2п=38) и абиссинской капустой {B.carinata, 2п=34), у гибридов Fi доминируют признаки амфидиплоидных видов, т.е. родительских форм с большим числом хромосом.

3. При гибридизации B.pekinensis с амфидиплоидными видами рода Brassica для получения формы с фенотипом капусты пекинской достаточно 1-2-х бек-кроссов.

4. У анеуплоидных растений беккроссных поколений происходит редукция хромосом в процессе митотического и мейотического клеточного деления. Это подтверждается выявлением в ВСг растения, в корневых меристемах которого было 23 хромосомы, тогда как в мейотических клетках пыльников на стадии метафаза 1-21 хромосома. В анафазе I или II мейотического деления наблюдается утрата хромосом в результате неправильного расхождения и отставания.

5. У растений ЦМС-линии капусты пекинской, Чи1мс, микроспорогенез до стадии тетрад проходит нормально, стерилизация пыльцы происходит в процессе микрогаметогенеза.

6. Интродукция гена Rb, контролирующего устойчивость к четырем расам сосудистого бактериоза, из генома В в геном А осложнена очень низкой рекомбинацией гомеологичных хромосом. Признак устойчивости в Fj B.carinata х B.pekinensis имеет доминантный характер наследования.

7. Разработанный кодоминантный SCAR-маркер одного из генов устойчивости к киле эффективен при идентификации устойчивых и восприимчивых генотипов в популяции пекинской капусты и может быть успешно использован в селекции.

8. Разнообразие гибридов капусты пекинской, полученных с участием изучаемого набора инбредных линий, по таким признакам, как средняя масса кочана, продолжительность вегетационного периода, плотность кочана, ширина жилки и число листьев кочана определяется преимущественно различиями между линиями по общей комбинационной способности с преобладанием доминантных эффектов и в меньшей мере - по специфической с преобладанием комплементарного эпистаза.

9. Высокая корреляционная зависимость между проявлением признака у родительских линий и их эффектами общей комбинационной способности по признакам плотность кочана (г = 0,86 - 0,89) и продолжительность вегетационного периода (г = 0,77 - 0,80) позволяет с высокой достоверностью по проявлению данных признаков прогнозировать и проводить отбор на высокую ОКС.

Ю.Высокая корреляционная зависимость (г = 0,86 - 0,92) между эффектами ОКС по плотности кочана, массе кочана и ширине жилки листа в летне-осеннем и весенне-летнем периодах исследований, свидетельствует о возможности проведения равноценной оценки в любом из этих периодов.

РЕКОМЕНДАЦИИ И ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Использовать в селекции гетерозисных гибридов капусты пекинской в качестве донора цитоплазматической мужской стерильности линию Чи1мс, депонированную в каталоге коллекции ВНИИР им. Н.И.Вавилова № 426.

2. Использовать разработанный специфичный SCAR маркер (F 5'-CTAGTTAAATGGCTCTGCGGTTG-3', R 5'-ATGCGGGCCAGCCAATTAGGC-3') для селекции капусты пекинской на устойчивость к киле.

3. Организовать производство семян гибридной комбинации 20-2ccl х Кн70 для проведения станционного испытания.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Монахос Г.Ф., Монахос С.Г. Использование межвидовой гибридизации при создании линий пекинской капусты с цитоплазматической стерильностью// Памяти Грегора Менделя. Материалы научной конференции. М.: Изд-во МСХА, 2001. с. 88-89.

2. Монахос С.Г., Монахос Г.Ф., Соловьев A.A. Перенос цитоплазматической мужской стерильности в B.pekinensis из B.napus путем межвидовой гибридизации// Сб. студ. н. работ. Вып. 7. М.: Изд-во МСХА. 2001. с. 68-73.

3. Монахос С.Г., Джалилов Ф.С. Наследование гена устойчивости к сосудистому бактериозу при отдаленной гибридизации видов B.carinata и B.pekinensís// Тезисы докладов науч. конф. молодых ученых, аспирантов и студентов, посвященной 115-летию со дня рождения академика Н.И. Вавилова. Саратов, 2002. с. 86-88.

4. Монахос С.Г., Джалилов Ф.С., Соловьев A.A. Передача устойчивости к сосудистому бактериозу от абиссинской капусты (B.carinata) к пекинской (B.pekinensís)// Сб. студ. науч. работ. Вып. 8. М.: Изд-во МСХА. 2002. с. 24-28.

5. Монахос С.Г., Игнатов А.Н., Дорохов Д.Б. Монахос Г.Ф., Характеристика ПНР маркеров связанных с локусами расово-специфичной устойчивости к киле капусты у Brassica rapa// Генетика в XXI веке: современное состояние и перспективы развития. Москва. 2004. с. 111.

6. Монахос С.Г., Игнатов А.Н., Соловьев A.A. Создание молекулярных маркеров генов устойчивости к киле (Plasmodiophora brassicae Wor.) для селекции родительских линий гибридов F] пекинской капусты и репы// Сб. студ. н. работ. Вып. 10. М.: Изд-во МСХА. 2004. с. 139-143.

7. Монахос С.Г. Наследование массы кочана у самонесовместимых линий капусты пекинской//Материалы II межд. науч. конф. «Состояние и проблемы научного обеспечения овощеводства защищенного грунта». Москва. 2005. с. 9496.

8. Крючков A.B., Монахос С.Г. Комбинационная способность линий пекинской капусты при выращивании в весеннем и осеннем обороте// Докл. ТСХА. Вып. 277. М., 2005. с. 417-421.

Тираж 100 экз.

Зак. 807.

Объем 1,25 печ. л

Центр оперативной полиграфии ФГОУ ВПО РГАУ - МСХА им. К.А Тимирязева 127550, Москва, ул. Тимирязевская, 44

«

r

Содержание диссертации, кандидата сельскохозяйственных наук, Монахос, Сократ Григорьевич

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Народнохозяйственное значение капусты пекинской.

1.2. Происхождение, систематика, эволюция.

1.2.1 Происхождение.

1.2.2 Систематика.

1.2.3 Эволюция.

1.3 Отдаленная гибридизация.

1.3.1 Отдаленная гибридизация видов Brassica.

1.4 Селекция на устойчивость к основным патогенам.

1.4.1 Xanthomonas campestris pv. campestris (Pammel) Dowson.

1.4.2 Plasmodiophora brassicae Wor.

1.5 Селекция гетерозисных гибридов.

1.5.1 Селекция гетерозисных гибридов капусты пекинской.

1.6 Комбинационная способность.

1.7 Методы создания Fi гибридов.

1.7.1 Способы контроля опыления.

1.7.2 Ядерная мужская стерильность (ЯМС).

1.7.3 Цитоплазматическая мужская стерильность (ЦМС).

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

ГЛАВА 2. СОЗДАНИЕ ЛИНИЙ С ЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКОЙ МУЖСКОЙ СТЕРИЛЬНОСТЬЮ.

2.1 Цель, материалы и методы исследований.

2.2 Результаты исследований.

Щ 2.3 Выводы.

ГЛАВА 3. СОЗДАНИЕ ЛИНИЙ УСТОЙЧИВЫХ К СОСУДИСТОМУ

БАКТЕРИОЗУ.

3.1 Цель, материалы и методы исследований.

Оценка устойчивости к сосудистому бактериозу.

Цитологический анализ.

Схема гибридизации.

3.2 Результаты исследований.

3.3 Выводы.

ГЛАВА 4. СЕЛЕКЦИЯ НА УСТОЙЧИВОСТЬ К КИЛЕ КРЕСТОЦВЕТНЫХ. РАЗРАБОТКА МОЛЕКУЛЯРНЫХ МАРКЕРОВ.

4.1 Цель, материалы и методы исследований.

Получение популяций F2 и BCi.

Оценка устойчивости к киле крестоцветных.

Молекулярные анализы.

4.2 Результаты исследований.

4.3 Вывод.

ГЛАВА 5. КОМБИНАЦИОННАЯ СПОСОБНОСТЬ И ХАРАКТЕР НАСЛЕДОВАНИЯ ХОЗЯЙСТВЕННЫХ ПРИЗНАКОВ У ЛИНИЙ КАПУСТЫ ПЕКИНСКОЙ.

5.1 Цель, материалы и методы исследований.

Технология выращивания капусты в опытах.

5.2 Условия проведения опытов.

5.2.1 Характеристика почвы опытного участка.

5.2.2 Температура воздуха.

5.2.3 Ход атмосферных осадков в период вегетации.

5.3 Анализ и результаты исследований.

5.3.1 Средняя масса кочана Fj гибридов, комбинационная способность самонесовместимых линий и наследование признака.

5.3.2 Продолжительность вегетационного периода F\ гибридов, комбинационная способность линий и наследование признака.

5.3.3 Ширина жилки кроющего листа Fi гибридов, комбинационная способность самонесовместимых линий и наследование этого признака.

5.3.4 Число листьев кочана Fi гибридов, комбинационная способность самонесовместимых линий и наследование признака.

5.3.5 Плотность кочана Fi гибридов, комбинационная способность самонесовместимых линий и наследование признака.

5.3.6 Результаты оценки родительских линий и гибридных комбинаций.

5.3.7 Корреляционная связь основных хозяйственных признаков при оценке в весеннелетнем и летне-осеннем периодах выращивания.

5.4. Выводы.

ВЫВОДЫ.

РЕКОМЕНДАЦИИ И ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Использование межвидовой гибридизации в селекции F1 гибридов капусты пекинской с групповой устойчивостью к киле и сосудистому бактериозу"

Капуста пекинская (Brassica pekinensis (Lour.) Rupr.) является одной из древнейших овощных культур, полукочанные и кочанные формы которой появились в северных районах Китая в период с XIV по XVII века (C.W.Li, 1981). Долгое время ее возделывали преимущественно в Северном Китае, откуда она вместе с усовершенствованием агротехники постепенно распространилась в южном и восточном направлении. Уже в начале XIX века капуста пекинская стала одним из важнейших овощей в Корее, к концу XIX века была интродуцирована на японские острова, стала известна в странах Западной Европы и Североамериканского континента (L.H.Bailey, 1928).

В настоящее время пекинская капуста является важнейшей культурой Восточноазиатских стран, Китая, Кореи, Японии и др., широко известна в Северной Америке, Западной Европе и Австралии. Она занимает ведущее место в мировом объеме производства салатных овощей, и вместе с ростом популярности культуры наблюдается увеличение мирового рынка потребления и расширение площадей возделывания.

Благодаря высокой скороспелости, диетическим и вкусовым качествам ее значение возрастает и в России. Сочетание этих уникальных качеств с современными технологиями возделывания позволяют получать два урожая в год и обеспечивать население в весенний и осенний периоды ранней свежей продукцией, витаминами и биологически активными веществами. Вместе с тем, сортимент Госреестра селекционных достижений представлен преимущественно сортами и гибридами зарубежной селекции, которые не полностью удовлетворяют современным требованиям интенсивной технологии, а многие восприимчивы к наиболее вредоносным патогенам. Лишь два гибрида Fi Ника и Кудесница, созданные на Селекционной станции им. Н.Н.Тимофеева, устойчивы к киле крестоцветных.

Таким образом, на сегодняшний день особенно актуальным является расширение сортимента этой культуры за счет создания высокоурожайных выровненных гибридов с высокими товарными качествами для различных направлений использования (потребление в свежем виде, переработка, хранение) устойчивых к наиболее вредоносным заболеваниям (кила крестоцветных, сосудистый бактериоз, вирус мозаики турнепса и др.). А для этого необходимо: изучить биологические особенности цветения, позволяющие контролировать опыление при естественном скрещивании с помощью насекомых и получать 100%-ный выход гибридных семян; создать коллекции самонесовместимых линий и линий с цитоплазматической мужской стерильностью; создать чистые линии гомозиготные по морфологическим и хозяйственным признакам; изучить расовый состав возбудителей основных заболеваний, найти доноры устойчивости, изучить её генетику, разработать молекулярные маркеры генов устойчивости и создать устойчивые линии; изучить генетику количественных признаков и комбинационную способность инбредных линий по основным хозяйственным признакам; и, наконец, разработать эффективные способы промышленного семеноводства родительских линий и гибридов Fj. Особое положение в решении генетико-селекционных вопросов по созданию ЦМС линий и линий, устойчивых к заболеваниям, занимает метод отдаленной гибридизации.

Основные положения, выносимые на защиту: межвидовая гибридизация как эффективный метод интродукции цитоплазматической мужской стерильности от B.napus и гена устойчивости к сосудистому бактериозу от B.carinata в B.pekinensis; практический результат конвертирования неспецифичного (RAPD) молекулярного маркера гена устойчивости к киле в специфичный (SCAR); особенности наследования основных хозяйственно ценных признаков инбредных линий капусты пекинской, оценка комбинационной способности; выделение наиболее перспективных линий в селекции на высокую урожайность и скороспелость; выделение наиболее перспективных для условий Нечернозёмной зоны России Fi гибридов капусты пекинской.

Заключение Диссертация по теме "Селекция и семеноводство", Монахос, Сократ Григорьевич

ВЫВОДЫ

1. Межвидовая гибридизация диплоида B.pekinensis (геном А) с амфидиплоидами B.napus (геномная формула ААСС) и B.carinata (геномная формула ВВСС) проходит легко. Гибридные растения вследствие нарушений в мейозе стерильны. Беккроссирование сесквиполиплоидного гибрида, B.napusxB.pekinensis (геномная формула ААС), видом B.pekinensis проходит без затруднений, а амфигаплоидного B.pekinensisxB.carinata (геномная формула ABC) — в значительной степени осложнено стерильностью.

2. При гибридизации диплоидного вида, капусты пекинской (B.pekinensis, 2п=20), с амфидиплоидными, рапсом (B.napus, 2п=38) и абиссинской капустой (.B.carinata, 2п=34), у гибридов Fi доминируют признаки амфидиплоидных видов, т.е. родительских форм с большим числом хромосом.

3. При гибридизации B.pekinensis с амфидиплоидными видами рода Brassica для получения формы с фенотипом капусты пекинской достаточно 1-2-х беккроссов.

4. У анеуплоидных растений беккроссных поколений происходит редукция хромосом в процессе митотического и мейотического клеточного деления. Это подтверждается выявлением в ВСг растения, в корневых меристемах которого было 23 хромосомы, тогда как в мейотических клетках пыльников на стадии метафаза 1-21 хромосома. В анафазе I или II мейотического деления наблюдается утрата хромосом в результате неправильного расхождения и отставания.

5. У растений ЦМС-линии капусты пекинской, Чи1мс, микроспорогенез до стадии тетрад проходит нормально, стерилизация пыльцы происходит в процессе микрогаметогенеза.

6. Интродукция гена Rb, контролирующего устойчивость к четырем расам сосудистого бактериоза, из генома В в геном А осложнена очень низкой рекомбинацией гомеологичных хромосом. Признак устойчивости в Fi B.carinata х B.pekinensis имеет доминантный характер наследования.

7. Разработанный кодоминантный SCAR-маркер одного из генов устойчивости к киле эффективен при идентификации устойчивых и восприимчивых генотипов в популяции пекинской капусты, и может быть успешно использован в селекции.

8. Разнообразие гибридов капусты пекинской, полученных с участием изучаемого набора инбредных линий, по таким признакам, как средняя масса кочана, продолжительность вегетационного периода, плотность кочана, ширина жилки и число листьев кочана определяется преимущественно различиями между линиями по общей комбинационной способности с преобладанием доминантных эффектов и в меньшей мере - по специфической с преобладанием комплементарного эпистаза.

9. Высокая корреляционная зависимость между проявлением признака у родительских линий и их эффектами общей комбинационной способности по признакам плотность кочана (г = 0,86 - 0,89) и продолжительность вегетационного периода (г = 0,77 — 0,80) позволяет с высокой достоверностью по проявлению данных признаков прогнозировать и проводить отбор на высокую ОКС.

10. Высокая корреляционная зависимость (г = 0,86 - 0.92) между эффектами ОКС по плотности кочана, массе кочана и ширине жилки листа в летне-осеннем и весенне-летнем периодах исследований, свидетельствует о возможности проведения равноценной оценки в любом из этих периодов.

РЕКОМЕНДАЦИИ И ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Использовать в селекции гетерозисных гибридов капусты пекинской в качестве донора цитоплазматической мужской стерильности линию Чи 1 к4мс, депонированную в каталоге коллекции ВННИР им. Н.И.Вавилова № 426.

2. Использовать разработанный SCAR маркер гена устойчивости к киле (F 5 '-CTAGTTAAATGGCTCTGCGGTTG-3R 5 '-ATGCGGGCCAGCCAATTAGGC-3') для селекции капусты пекинской на устойчивость.

3. Организовать производство семян гибридной комбинации 20-2ccl х Кн70 для проведения станционного испытания.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата сельскохозяйственных наук, Монахос, Сократ Григорьевич, Москва

1. Антонов Ю.П. Сократить потери от килы// Защита растений. 1984.- N9. С. 49.

2. Артемьева A.M. Общая и специфическая комбинационная способностьсамонесовместимых инбредных линий капусты белокочанной. Бюлл. ВИР Л., 1983, вып. 187, С. 58-59.

3. Борисполец М.В., Неделеева Т.М. Устойчивость сортов капусты кзаболеванию килой // Тр. Урал. НИИ с. х-ва. 1984,- Т.41.- С. 115118.

4. Брежнев Д. Д. Гетерозис в овощеводстве. Л., Колос, 1966. - 315 с.

5. Буренин В.И. Способ оценки общей комбинационной способности наоснове топкросса// Бюл. ВИР. 1971. - Вып. 19. - С. 32-36.

6. Вольф В.Г. и др. Методические рекомендации по применениюматематических методов для анализа экспериментальных данных по изучению комбинационной способности. Харьков: 1980, - С. 1-53.

7. Воронин М. Plasmodiophora brassicae организм, причиняющийкапустным растениям болезнь, известную под названием "кила". -Тр. С.-Петербургского общества естествоиспытателей, VIII. С.Петербург: 1877, - С. 169-201.

8. Воскресенская Г.С. Перспективы селекции сарептской горчицы. // Тез.докл. на Всесоюзн. совещании по отдаленной гибридизации растений и животных. М., 1968. С. 29-30

9. Герасимов Б.А., Осницкая Е.А. Вредители и болезни овощных культур.- М., Сельхозиздат.- 1961. 79 с.

10. Гордиенко Ф.И. Природа и пути инфекции главнейших бактериозовкапусты и обоснование способов борьбы с ними. Харьков: НИИсоцземледелия, 1940. — 50 с.

11. Джалилов Ф.С., Монахос Г.Ф., Р.Д.Тивари. Вредоносность сосудистогобактериоза капусты // Известия ТСХА, вып. 3, 1989. С. 69-71.

12. Дорохов Д.Б., Клоке Э. Быстрая и экономичная технология RAPDанализа растительных геномов // Молекулярная генетика. 1997. Т. 33. №4. С. 443-450.

13. Жуковский П.М. Культурные растения и их сородичи. 3-е изд.,перераб. и доп. JI. 1971.

14. Игнатов А. Н., Монахос Г. Ф., Джалилов Ф. С. Появление расы 0 врезультате спонтанной мутации изолята расы 1 Xanthomonas campestris pv. campestris — возбудителя сосудистого бактериоза крестоцветных// Известия ТСХА, 2000. Вып.4. С. 71-75.

15. Игнатов А.Н., Я.Кугинуки, К.Хида и др. Патоген крестоцветных

16. Xanthomonas campestris. О создании устойчивых к ксантомонадам растений семейства BrassicaceaeII Сельскохозяйственная биология, 2002, №5. С. 75-84.

17. Йорданов М., Даскалов X. и др. Гетерозис и его использование вовощеводстве. М.: Колос, 1978. - 308 с.

18. Карпеченко Г.Д. Межродовые гибриды Raphanus sativus L. х Brassicaoleracea L. Научно-агроном. труды, 1924, 1, №5-6, С. 390-410.

19. Карпеченко Г.Д. Полиплоидные гибриды Raphanus sativus L. х Brassicaoleracea L. — Тр. по прикл. бот., ген. и сел., 1927, т. 17, вып.З. С. 305410.

20. Карпеченко Г.Д. Теория отдаленной гибридизации. M.-JL, Сельхозгиз,1935. С. 1-64.

21. Карпеченко Г.Д. Экспериментально полученный плодовитыйтетраплоидный гибрид Brassica oleracea L. х Brassica chinensis L. —

22. Труды по прикл. ботанике, генетике и селекции 1937а, серия 2, №7. С. 455-464.

23. Карпеченко Г. Д. Экспериментальное получение тетраплоидныхгибридов Brassica oleracea L. х Brassica carinata All.Braun. — Труды по прикл. ботанике, генетике и селекции 19376, серия 2, №7, С. 5368.

24. Кедров-Зихман О.О. Поликросс тест в селекции растений. - Минск,1974.- 127 с.

25. Кобылянский В.Д., Лапиков Н.С. Перспективы использованиягетерозиса в селекции гибридной ржи. Тр.по прикл.бот., ген. и сел., 1976, т.58, вып.2. - С. 128-154.

26. Кривченко В.И., Боос Г.В., Сурмава М.Е. Характеристика генофондакапусты по устойчивости к Plasmodiophora brassicaell Тр. по прикладной ботанике, генетике и селекции 1982.- Т. 72.- Вып. 3.- С. 113-120.

27. Кривченко В.И., Сурмава М.Е. Расы Plasmodiophora brassicae Wor.//

28. Микология и фитопатология. Л., 1980. Т. 14. С. 346 350.

29. Круг Г. Овощеводство / Пер. с нем. В.И. Леунова. М.: Колос, 2000.576 с.

30. Крючков А.В. Основные принципы получения гибридных семянкапусты на основе самонесовместимости// Докл.ТСХА, вып. 186, 1972.-С. 195-199.

31. Крючков А.В. Схема выведения четырехлинейных гибридов капустына основе самонесовместимости// Изв.ТСХА, 1977, вып.1. С. 124131.

32. Крючков А.В., Кулиев Ш.Б., Алиаскер-Заде Р.Д. Оценка общей испецифической комбинационной способности самонесовместимых инбредных линий белокочанной капусты при летнем и весеннем выращивании гибридов// Изв.ТСХА, 1979, вып.1. С. 108-118.

33. Крючков А.В. Результаты исследований по созданию гетерозисныхгибридов кочанной капусты на основе самонесовместимости// Биологические основы промышленной технологии овощей открытого и закрытого грунта. М. - 1982. - С. 126-130.

34. Крючков А.В. Самонесовместимость и ее использование в селекциикапусты // Культурная флора СССР. Том XI. - Капуста. - JL, 1984. -С. 260-269.

35. Крючков А.В., Фам Хонг Кук. Оценка комбинационной способностисамонесовместимых инбредных линий раннеспелой кочанной капусты//Изв.ТСХА, 1986, вып.З. С.76-79.

36. Крючков А.В., Монахос Г.Ф., Нгуен Тхи Нгок Хуэ. Оценкакомбинационной способности самонесовместимых инбредных линий среднеспелой белокочанной капусты по массе кочана// Изв. ТСХА, 1989, вып. 1,С. 42-46.

37. Крючков А.В. Селекция Fi гибридов кочанной капусты на основеспорофитной самонесовместимости Дисс. на соискание степ, доктора с.-х. наук в форме научного доклада. — М., ТСХА, 1990, - 61 с.

38. Крючков А.В., Монахос Г.Ф., Пацурия Д.В. Итоги селекции гибридовкапусты в Московской сельскохозяйственной академии им. К.А.Тимирязева// Изв. ТСХА, 1997, вып.1, С. 42-55.

39. Крючков А.В., Г.Ф.Монахос, Д.В.Пацурия, Н.Н.Воробьева,

40. А.А.Лежнина, Д.М.Харламов, В.С.Судденко. Методические рекомендации по размножению самонесовместимых инбредныхлиний поздней кочанной капусты. М., МСХА им. К.А.Тимирязева, -2002, - 20 с.

41. Лизгунова Т. Культурная флора СССР, том XI. Капуста. Л.: Колос,1984.-328 с.

42. Лобашев М.Е. Генетика. Изд-во ленинградского университета. 1967.751 с.

43. Мазер К., Джинкс Дж. Биометрическая генетика: Пер. с англ. М.:1. Мир, 1985.-463 с.

44. Макарова Г.А., Алимова З.И. Некоторые практически ценные гибридныеформы редисно-капустного гибрида. В кн.: Сб. трудов АФИ, 1968, вып. 15 С.

45. Мамонов Е.В., Ркейби Ж. Комбинационная способность инбредныхлиний пекинской капусты по биохимическим признакам// Известия ТСХА, вып. 2, 2001, С. 54-72.

46. Мичурин И.В. Принципы и методы работы. Собр. Соч. Т. 1. Изд. с.-х.лит-ры. М., 1948,716 с.

47. Монахос Г.Ф., Джалилов Ф.С. Состояние и перспективы селекциикапусты белокочанной на устойчивость к бактериозам//Докл. ТСХА, вып. 268,1997. С. 227-233.

48. Монахос Г.Ф., Н.С.Теренина. Генетические источники устойчивости ккиле крестоцветных (Plasmodiophora brassicae Wor.) при селекции пекинской капусты//Известия ТСХА, вып. 3, 1998. С.87-93.

49. Монахос Г.Ф., Ушанов А.А. Наследование устойчивости к киле

50. Plasmodiophora brassicae Wor.) у линий листовой капусты (Brassica oleracea ssp. acephala)HИзвестия ТСХА.- М.: ТСХА, 1998а, №2 С. 106-115.

51. Монахос Г.Ф., Ушанов А.А. Наследование продуктивности у кормовойкапусты// Докл. ТСХА, 19986 Вып. 269. - С. 174 - 183.

52. Монахос Г.Ф, Барашева Г.М. Наследование массы корнеплодаинбредными линиями редиса// Изв. ТСХА. 1999. - вып. 1. - С. 92100.

53. Монахос Г.Ф. Отчёт о научно-исследовательской работе по теме

54. Разработать и испытать новые методы семеноводства гибридов позднеспелой белокочанной капусты, получаемых на основе мужскостерильных родительских линий" М.: ТСХА, 2000. - 39 с.

55. Монахос Г. Ф., Зубик И. Н. Наследование средней массы корнеплода икомбинационная способность самонесовместимых линий дайкона// Докл. ТСХА, 2000а, вып. 271. С. 175 - 185.

56. Монахос Г.Ф., И.Н.Зубик. Наследование устойчивости к киле у линийдайкона//Докл. ТСХА, вып. 272, 20006. С. 85-88.

57. Монахос Г.Ф., Пацурия Д.В., Лежнина А.А., Воробьёва Н.Н. Влияниехлорида натрия на проявление самонесовместимости линий белокочанной капусты//Докл. ТСХА, 2000 Вып. 271. - С. 163-169.

58. Монахос Г.Ф., Абдул Хамид. Использование хлорида натрия приразмножении самонесовместимых линий белокочанной капусты//Известия ТСХА, вып.2, 2001. С. 73-80.

59. Монахос Г.Ф., Харламов Д.М. Создание устойчивых к сосудистомубактериозу линий брокколи путем межвидовой гибридизации//Доклады ТСХА, вып. 273, ч.2, Москва, 2001. С. 165168.

60. Монахос, Г.Ф., Игнатов А.Н., Джалилов Ф.С. и др. Синтезаллогексаплоида с геномной формулой ААВВСС рода Brassica L. как донора устойчивости к киле и сосудистому бактериозу крестоцветных//Известия ТСХА. 2001, вып.4 С. 56-68.

61. Монахос, Г.Ф., Игнатов А.Н., Джалилов Ф.С., Цветков И. Л.,

62. Вишнякова Х.М., Дорохов Д.Б., Позмогова Г.В., Соловьев А.А. Вновь синтезированный аллогексаплоидный вид Brassica с геномом

63. ААВВСС как источник устойчивости к киле и сосудистому бактериозу крестоцветных// Известия ТСХА. 2001, № 2 С. 51-59.

64. Монахос Г.Ф. и др. Методические рекомендации по созданию итехнологии размножения линий капусты с цитоплазматической мужской стерильностью. М., МСХА им. К.А. Тимирязева, -2003, -22 с.

65. Мусич В.Н., Герасименко В.Ф. Комбинационная способность и типыдействия генов у сортов озимой мягкой пшеницы по признаку морозостойкости//журнал Генетика, 1984, т. XX, №12. С. 20312034.

66. Мюнтцинг А. Генетика. Общая и прикладная. М., 1967. 487 с.

67. Наумов Н.А. Материалы по изучению капустной килы. Б.М.- 1925. 24с.

68. Пакудин В.З. Оценка комбинационной способности линий кукурузы вдиаллельных и анализирующих скрещиваниях//Бюлл. ВИРа, Л., 1974, вып. 42, С. 73-76.

69. Пирсон О.Х. Гетерозис овощных культур. в кн.: Гетерозис. - М.:

70. Агропромиздат, 1987(a). С. 188-191.

71. Пирсон О.Х. Гетерозис овощных культур. в кн.: Гетерозис. - М.:

72. Агропромиздат, 19876. С. 199.

73. Рыбин В.А. Опыт синтеза культурной сливы из родственных ей дикихвидов// «Социалистическое растениеводство», 1935, №15. С. 87-100.

74. Савченко В.К. Метод оценки комбинационной способностигенетически разнокачественных наборов родительских форм. в сб.: Методики генетико-селекционного и генетического эксперимента. -Минск, 1973. - С. 48-77.

75. Савченко В.К. Многоцелевой метод количественной оценкикомбинационной способности в селекции на гетерозис. в ж.: Генетика, 1978, №5.- С. 793-804.

76. Савченко В.К. Оценка общей и специфической комбинационнойспособности полиплоидных форм в системах диаллельных скрещиваний. в ж.: Генетика, 1966, №1. - С. 29-40.

77. Соколова JI.A., Тупеневич С.М. Кила капусты. JI. "Колос", 1974.- 74 с.

78. Стэкмен Э., Харрар Дж. Основы патологии растений. М., 1959. 136с.

79. Турбин Н.В., Кедров-Зихман О.О., Шварц М.К. Селекция накомбинационную способность. Бюлл. института биологии, вып.5,1960.-С. 210-216.

80. Турбин Н.В. Гетерозис и генетический баланс//Гетерозис Минск,1961.-С. 3-35.

81. Турбин Н.В. Генетика гетерозиса и методы селекции растений накомбинационную способность. в ж.: Вестник с.-х. науки. - М., 1967, №3. - С. 16-91.

82. Турбин Н.В. Гетерозис. в кн.: Гетерозис служит человеку. - М., 1968.1. С. 5-17.

83. Турбин Н.В., Кедров-Зихман О.О. Метод поликроссов в селекциирастений и его теоретическое обоснование. в кн.: Генетические основы селекции гетерозисных популяций. - Минск, 1971. - С. 3-20.

84. Турбин Н.В., Хотылева JI.B., Тарутина JI.A. Диаллельный анализ вселекции растений. Минск : Наука и техника, 1974. - С. 5-20.

85. Турбин Н.В. и др. Гетерозис. М.: Наука и техника, 1982. - 248 с.

86. Федоров П.С. Биохимические и физиологические основы гетерозиса укукурузы/Яруды КНИИЗ, Вып. VI. Фрунзе, 1968. 195 с.

87. Харламов Д.М., Колесников И.М. Оценка комбинационнойспособности самонесовместимых инбредных линий брокколи (Brassica oleracea var. cymosa Duch.)// Докл. ТСХА, вып. 268, 1998. -С. 183-190.808384,85,86