Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Использование липоевой кислоты с целью усовершенствования питательных сред для культивирования чумного микроба

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Катунина, Людмила Семеновна

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Использование сред из различных питательных основ для культивирования чумного микроба.

1.1 .Питательные потребности чумного микроба.

1.2.Питательные среды для выращивания чумного микроба.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1.Материалы исследования.

2.1.1.Штаммы чумного микроба.

2.1.2.Питательные основы и среды.

2.1.3.Растворы, соли и другие ингредиенты.

2.2. Методы исследования.

2.2.1.Лабораторные методы исследования на чуму.

2.2.2.Методы приготовления гидролизатов.

2.2.3.Изучение эффективности использования липоевой кислоты при бактериологической диагностике. . ф

2.2.4.Изучение количественного состава аминокислот в гидролизатах.

2.2.5.Методика определения прочности агаровых гелей.

2.2.6.Методика исследования эктопаразитов.

2.2.7.Методика электронной микроскопии.

2.3. Контроль концентрации микробной взвеси

2.4. Статистические методы.

3. НЕКОТОРЫЕ АСПЕКТЫ ТЕХНОЛОГИИ ПРИГОТОВЛЕНИЯ И КА

ЧЕСТВА ПЛОТНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД.

3.1. Изучение влияния отдельных факторов на качество питательных сред для культивирования чумного микроба.4 ^

3.1.1 .Изучение количественного состава аминокислот в используемых для получения питательных сред гидролизатах.

3.1.2.Изучение влияния состава используемой воды на ростовые качества питательной среды.

3.1.3.Изучение зависимости ростовых качеств питательной среды от используемого агар-агара.

3.2. Отработка технологии приготовления питательных сред.

4. ИЗУЧЕНИЕ СТИМУЛИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ ЛИПОЕВОЙ КИСЛОТЫ НА РОСТ ЧУМНОГО МИКРОБА.

4.1. Отработка метода приготовления питательной среды с липоевой кислотои.

4.2.Влияние липоевой кислоты на ростовые качества питательных сред при культивировании штаммов чумного микроба различных разновидностей./и

4.3.Влияние липоевой кислоты на ростовые качества питательных сред,приготовленных на основе ферментативных,кислотных и щелочных гидролизатов кукурузы. ' ^

4.4.Апробация питательной среды с липоевой кислотой при исследовании полевого материала в Дагестанском высокогорном очаге чумы.^

5.ИЗУЧЕНИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ С ЛИПОЕВОЙ КИСЛОТОЙ В КАЧЕСТВЕ

НАКОПИТЕЛЬНОЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ ЧУМНОГО ВАКЦИННОГО ШТАММА ЕВ В ПРОИЗВОДСТВЕННЫХ ЦЕЛЯХ.

5.1.Изучение различных факторов, влияющих на ростовые качества среды накопления.

5.2.Изучение влияния липоевой кислоты на ростовые качества агара Хоттингера, используемого для получения биомассы вакцинного штамма ЕВ.

5.3.Изучение влияния липоевой кислоты на фазы роста чумного микроба вакцинного штамма ЕВ.

5.4.Изучение влияния липоевой кислоты на синтез фракции 1.

5.5.Узучение влияния условий культивирования на клеточную структуру чумного микроба.Ю

Введение Диссертация по биологии, на тему "Использование липоевой кислоты с целью усовершенствования питательных сред для культивирования чумного микроба"

Актуальность проблемы.

При подборе необходимого для определенного микробиологического процесса состава среды следует принимать во внимание множество факторов. Один из них связан со стехиометрией клеточного роста и количеством биомассы, которое необходимо иметь по завершении процесса. Основой любых расчетов является простой материальный баланс, связанный с превращением в процессе клеточного роста низкомолекулярных органических и неорганических соединений в биомассу. Для синтеза заданного количества продукта процесса (биомассы) в систему необходимо ввести достаточное количество питательных веществ, взятых в определенном соотношении.

Потребность в питательных веществах различно в зависимости от вида микроорганизмов. Для нормального роста и жизнедеятельности некоторых микроорганизмов необходимо наличие в питательной среде определенных аминокислот и факторов роста. Другие микроорганизмы, не столь требовательны к составу среды, но тем не менее растут значительно быстрее в присутствии определенных (не обязательных) факторов роста и источников азота и углерода. Что касается промышленных процессов, то необходимые факторы роста обычно обеспечивают какой-либо из полупродуктов, входящих в состав среды, например кукурузный настой или дрожжевой аутолизат.

Вопросу культивирования чумных бактерий на питательных средах, в частности, выявлению оптимальных условий для роста на той или иной среде, в зависимости от ее назначения, посвящено значительное количество работ (16,17,15,83,191,40).

Авторами было показано существенное значение для роста и сохранения определенных свойств чумного микроба температуры выращивания, рН среды, степени расщепления белковой молекулы, концентрации аминного азота, содержания минеральных компонентов и других факторов.

Все это указывает на необходимость при подборе питательных сред учитывать биологические особенности чумного микроба. Обладая слабыми протеолитическими свойствами, чумной микроб требует наличия в среде продуктов глубокого распада белковой молекулы. Чем больше относительное количество продуктов распада белка, тем интенсивнее рост бактерий (39). Рост чумного микроба из единичных клеток на средах, содержащих частицы более глубокого расщепления молекулы белка, наблюдается при значительно большем разведении основы, чем из гидролизатов с меньшей степенью расщепления. Кроме того, известно, что и редуцирующая способность у чумного микроба выражена слабо, поэтому чумные бактерии, не могут восстановить среду до необходимого уровня потенциала и не прорастают. Пытаясь подобрать среду, которая давала бы наиболее благоприятные результаты при посеве небольших доз Y.pestis, исследователи использовали для стимуляции роста различные препараты такие как лизированная, дефибринированная, сухая кровь, перевар Филдса, лизаты и фильтраты сарцин, стафилококков, кукурузный экстракт, сульфит натрия, некоторые соли металлов и другие и другие (7, 19,38,69, 70, 86, 90, 103, 104, 113, 114, 174, 200, 205, 229, 233, 248, 252, 279, 287). Однако широкого применения в практике предложенные стимуляторы роста чумного микроба не нашли.

В целях повышения ростовых качеств различных питательных сред при культивировании чумного микроба исследователи, продолжают проводить постоянный поиск более новых и эффективных, дешевых веществ, способствующих активации в развитии чумного микроба.

В настоящей работе мы попытались дополнить арсенал стимуляторов и сделать его более полным.

Цель работы: Изучить возможность использования липоевой кислоты как стимулятора роста чумного микроба с целью усовершенствования питательных сред для выделения, идентификации чумного микроба, а также для получения достаточных количеств биомассы, необходимой в производстве профилактических и диагностических препаратов.

Задачи исследования:

- изучить зависимость ростовых качеств питательной среды для культивирования чумного микроба от используемых компонентов при ее приготовлении;

- разработать технологический процесс приготовления питательной среды для культивирования микроорганизмов в производственных условиях и соответствующую нормативную документацию;

- изучить стимулирующее действие липоевой кислоты на рост и развитие чумного микроба в питательных средах различного состава;

- исследовать влияние липоевой кислоты на биологические свойства чумного микроба (фазы роста, продукцию фракции 1);

- использовать влияние липоевой кислоты на ростовые качества питательных сред для культивирования чумного микроба различных подвидов;

- изучить возможность использования липоевой кислоты в составе питательных сред для получения биомассы микроба в производственных целях;

- использовать возможность замены липоевой кислотой витамина В1, применяемого для роста полевочьего подвида чумного микроба.

Научная новизна.

Установлено, что ростовые качества питательных сред зависят от многих факторов, в том числе, от разновидностей используемых гидролизатов, агар-агаров, воды, при одинаковой технологии их приготовления.

Впервые обнаружено стимулирующее действие липоевой кислоты на рост чумного микроба.

Установлено, что липоевая кислота при добавлении к питательным средам повышает процент жизнеспособных клеток чумного микроба и способствует накоплению фракции 1.

Доказана возможность замены в питательных средах витамина В1 на липоевую кислоту при выращивании чумного микроба полевочьей разновидности.

Показана принципиальная возможность использования питательной среды с липоевой кислотой как накопительной для получения биомассы вакцинного штамма чумного микроба в производственных целях.

На основании выполненных исследований получено авторское свидетельство на изобретение "Питательная среда для культивирования Y.pestis ЕВ" 3aN 1577353 от 13.07.1986 г.

Практическая значимость.

По материалам исследований составлены и утверждены на Ученом Совете СНИПЧИ "Методические рекомендации по использованию липоевой кислоты как стимулятора для приготовления питательных сред". Протокол N 3 от 29.03.01 г., региональный уровень внедрения.

Разработана нормативная документация на питательную среду агаризованную (агар Хоттингера) готовую к применению:

- регламент производства N 1088-01 (Утвержден директором СНИПЧИ 9.11.2001 г.);

- фармакопейная статья (находится на утверждении в Фармакопейном комитете РФ);

- фармокопейная статья предприятия (находится на утверждении в Фармакопейном комитете РФ);

- инструкция по применению.

Получено заключение Комитета медицинских иммунобиологических препаратов МЗРФ от 22.02.2001 г. о внедрении агара Хоттингера готового к применению для культивирования микроорганизмов.

Аттестовано производство агара Хоттингера комиссией ГИСК им.Л.А.Тарасевича (акт от 21.12.2001 г.).

Питательная среда агаризованная (агар Хотингера) используется при производстве чумной живой сухой вакцины согласно регламенту производства N 702-97,утвержденного директором СНИПЧИ и согласованного с ГИСК им. Л.А.Тарасевича.

Основные положения, выносимые на защиту.

1 .Питательный агар Хоттингера, приготовленный в производственных условиях по разработанной нами технологии может быть использован в бактериологической практике для выделения и идентификации различных микроорганизмов.

2.Присутствие в питательной среде оптимальной концентрации (5 мг/л) липоевой кислоты оказывает стимулирующее действие на рост чумного микроба и позволяет обнаружить рост вполне определяемых типичных колоний микроба уже через 24+2 ч при температуре 28° С.

11

3.На питательной среде с липоевой кислотой повышается процент жизнеспособных клеток чумного микроба и усиливается синтез фракции 1.

4.Питательную среду с липоевой кислотой можно использовать как накопительную для получения биомассы, необходимой при производстве вакцины и диагностических препаратов.

Апробация.

Материалы исследований были доложены на научных конференциях Ставропольского научно-исследовательского противочумного института в 1987,1988 и 1991 гг. на конференции Дагестанской противочумной станции,г.Махачкала,1989 г.

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 10 научных работ.

Объем и структура диссертации.

Работа изложена на 164 страницах машинописного текста, иллюстрирована 10 рисунками, 26 таблицами. Состоит из введения, обзора литературы, 4 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, включающего 233 отечественных и 58 иностранных источников.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Катунина, Людмила Семеновна

ВЫВОДЫ

1 .Установлено, что ростовые качества питательных сред зависят от многих факторов, в том числе, от разновидностей используемых гидролизатов, агар-агаров, воды при одинаковой технологии их приготовления.

2.Отработана технология приготовления и разработана необходимая нормативная документация на питательную среду (агар Хоттингера) агаризованную.

3.Впервые установлено стимулирующее действие липоевой кислоты на рост чумного микроба в питательных средах различного состава. В присутствии оптимальной концентрации липоевой кислоты (5 мг/л) рост вполне определяемых типичных колоний чумного микроба может быть обнаружен уже через 24+2 ч при температуре инкубации 28 °С.

4. Впервые показана принципиальная возможность замены дорогостоящих мясных сред на кукурузные при условии добавления к ним липоевой кислоты для культивирования чумного микроба.

5. При выращивании чумных культур полевочьей разновидности возможна замена в питательных средах витамина В1 на липоевую кислоту в концентрации 5 мг/л. Это указывает на целесообразность использования питательных сред с липоевой кислотой при проведении эпизоотологическото обследования природных очагов чумы.

6. Впервые выявлено, что липоевая кислота при добавлении к питательным средам повышала процент жизнеспособных клеток чумного микроба и способствовала усилению синтеза фракции 1.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Со времени открытия чумного микроба Иерсеном и Китазато было предложено большое количество питательных сред для его выделения и культивирования.

На ранних этапах изучения чумного микроба применялись жидкие питательные среды: свернутая кровяная сыворотка, щелочной раствор пептона с желатиной, нейтральный бульон с 1 % пептона и 0,5% поваренной соли. В этот период исследователи широко применяли среды, содержащие желчь. Добавление желчи способствовало повышению чувствительности сред.

Публикации последних лет свидетельствуют о том, что для чумного микроба применяли предпочтительнее среды богатые белками. В качестве белкового субстрата использовали мясо, печень тарбагана, пептоны сердца, крови, почек животных (137,196), кровяные сгустки (202) и др. Показано было, что источником питания для чумного микроба может также служить рыба, рыбокостная мука (116, 212, 211). Работы ряда авторов посвящены изучению качества питательных сред, приготовленных из растительного сырья (53, 84, 89). Пытаясь подобрать среду, которая давала бы наиболее благоприятные результаты при культивировании чумного микроба, исследователи использовали для стимуляции его роста различные препараты: препараты крови, сульфит натрия, экстракты печени и селезенки собаки, фильтраты бульонной культуры спорообразующих микробов (105, 174, 196, 267) и др.

Возможность получения роста чумного микроба на большом количестве питательных сред говорит о его активной приспособительной способности. Вместе с тем рост из минимальных посевных доз, что важно для целей диагностики, обеспечивается далеко не всегда даже на достаточно высоко питательных средах из-за биологической особенности чумного микроба - неспособности расти из малых доз.

Кроме того, для производства бактерийных препаратов необходимы среды, обеспечивающие не только получение большого количества биомассы, но и интенсивный рост морфологически типичных жизнеспособных клеток.

Все это свидетельствует о том, что подбор оптимальных сред для роста и развития чумного микроба до настоящего времени остается проблемой актуальной.

Наши исследования были направлены на изучение возможности использования липоевой кислоты в качестве стимулятора роста чумного микроба на различных питательных средах.

Известно, что на свойства микробов большое влияние, наряду с такими факторами, как температурный режим, продолжительность инкубирования, оказывает и состав питательной среды: степень расщепления белка, содержание свободных аминокислот, биологически активных соединений, солей, агар-агара и др.

Первоначально нами было изучено влияние таких компонентов питательной среды как аминокислотный состав гидролизатов, разновидностей агар-агаров, воды на ростовые качества питательных сред, получаемых в лабораторных условиях для культивирования чумного микроба.

Качественный и количественный состав аминокислот был изучен в гидролизате говяжьего мяса, используемого для приготовления жидких и твердых питательных сред. Полученная аминограмма позволила установить наличие в гидролизате 17 аминокислот: треонин, аспарагиновая кислота, метионин, изолейцин, лейцин, тирозин, фенилаланин, гистидин, лизин, аргинин, серин, глютаминовая кислота, пролин, цистеин, глицин, аланин, валин. Литературные данные по питательным потребностям чумного микроба не однозначны, но можно предположить, что данный перечень аминокислот позволит расти чумному микробу при наличие других факторов роста в питательной среде.

Изучение в сравнительном аспекте физико-химических свойств дистиллированной и водопроводной воды свидетельствовало о том, что отличительной чертой водопроводной воды является содержание в ней железа, кальция, азота аммиачного, цинка, сульфатов при отсутствии указанных микроэлементов и солей в дистиллированной воде.

В дальнейших исследованиях нами проведено сравнительное изучение ростовых качеств различных бульонов Хоттингера. Было получено, что активнее чумной микроб рос на питательной среде, полученной при использовании водопроводной воды, по всей вероятности, в связи с присутствием в ней ионов железа и кальция, что не противоречит опубликованным ранее литературным данным (48,127 и др.).

Одним из важных компонентов твердых питательных сред является агар-агар, представляющий собой полисахарид, выделенный из морских водорослей. Принято считать, что агар в питательных средах несет только скелетную функцию, являясь индифферентным по отношению к микроорганизмам. Однако, известно, что некоторые марки агаров могут влиять на морфологию колоний. В агаре содержатся определенное количество жирных кислот, токсичных для многих видов бактерий и качество агара зависит от степени его очистки. Нами испытаны для приготовления твердых питательных сред агар-агары различного производства (корсаковский-Корсаковский завод по получению агара и микробиологический-Владимировский агаровый завод). Лучшие результаты по росту чумного микроба вакцинного штамма ЕВ были получены при использовании корсаковского агар-агара.

Таким образом, проведенные исследования свидетельствовали о возможном широком диапазоне колебаний ростовых качеств питательных сред в зависимости от различных факторов.

В связи с этим, наши дальнейшие исследования были направлены на отработку технологии получения агаризованной питательной среды (агара Хоттингера) в производственных условиях с учетом необходимости стандартизации всех факторов, влияющих на ростовые качества питательной среды и, соответственно разработку необходимой нормативно-технической документации. За основу взята технология, описанная в справочной литературе (96).

Оценку питательных сред и их компонентов проводили с помощью совокупности биологических показателей. Учитывая, что агар Хоттингера, как известно, может быть использован для культивирования различных видов микроорганизмов, нами в процессе экспериментальной работы были отобраны и в дальнейшем внесены в НТД следующие тест-штаммы: Shigella flexneri la 8516, Shigella sonnei "S form", Serratio marcescens 1; Psedomonas aeruginosa 27/99, полученные из ГИСК им.Тарасевича. Параллельно для проведения научных исследований были взяты представители других видов микроорганизмов и, в том числе, и чумной вакцинный штамм ЕВ.

В процессе отработки технологического производственного процесса были испытаны в качестве основы перевары Хоттингера, содержащие различное количество аминного азота (6,0, 7,0, 9,0 г/л), но с одинаковым конечным содержанием аминного азота в средах-1,4 г/л. Установили, что независимо от исходного значения аминного азота в переварах, питательные среды обеспечивали рост тест-штаммов, стабильно сохраняя их биологические свойства.

Проверена была и зависимость ростовых качеств питательных сред, полученных в производственных условиях, и от взятого агар-агара. Было выявлено, что физико-химические показатели питательных сред были одинаковы и не зависели от используемых агаров. Однако, прослежена четкая зависимость ростовых качеств питательных сред от разновидности агар-агара по биологическим показателям, а именно, по скорости и количеству формирования пигмента у пигментообразующих тест-штаммов (Serratia marcescens и Pseudomonas aeruginosa).

В результате проведенных исследований была разработана технологическая схема производства, включающая все необходимые стадии и операции для получения питательной среды (агара Хоттингера) агаризованной. Было изготовлено 10 экспериментально - производственных серий (по 100 л каждая), проверены их физико-химические и биологические показатели. Разработана необходимая нормативная документация (ФС, ФСП, РП, инструкция по применению), которая вместе с прилагаемыми пятью производственными сериями агара Хоттингера прошла контроль в ГИСК им. Тарасевича. Получено положительное решение, нормативные документы направлены в Фармакопейный комитет РФ. Комиссией ГИСК им.Тарасевича аттестовано производство питательных сред. Получено заключение Комитета медицинских иммунобиологических препаратов МЗ РФ от 22.02.2001 г. о внедрении агара Хоттингера готового к применению для культивирования микроорганизмов. Проведена аттестация производства питательных сред (Акт комиссии ГИСК им. Тарасевича от 21.12.2001г.).

При изучении возможности использования для культивирования других видов микробов питательной среды (агара Хоттингера), полученного в производственных условиях, было установлено, что она обеспечивает рост и размножение микроорганизмов таких видов, как кишечная палочка, сальмонеллы, стрептококки. Что касается чумного микроба, то на данной среде наблюдается его рост через 46+2 ч при температуре 28+2°С, но в количестве в 2 раза меньшем в сравнении с представителями других, указанных выше микроорганизмов. Это позволяет сделать вывод, что данная питательная среда, приготовленная по разработанной нами технологии, может быть использована для культивирования чумного микроба, но при условии, особенно для получения биомассы для производства бактерийных препаратов, введения в него одного из стимуляторов роста данного микроба.

В настоящее время данная среда с добавлением в нее сульфита натрия используется в институте при производстве чумной живой вакцины.

Как известно, поиск более эффективных, стандартных ростостимулирующих факторов, обеспечивающих оптимальные условия для проявления физиологических особенностей микроорганизмов, продолжается до настоящего времени.

На наш взгляд целесообразным казалось испытание в качестве биостимулятора липоевой кислоты, представляющей собой коферментный препарат невитаминного происхождения и являющейся важным окислительно- восстановительным переносчиком водорода. Липоевая кислота - это один из препаратов пируватдегидрогеназы (225), играет весьма ответственную роль в биологическом окислении, обеспечивает клетку необходимой для ее жизнедеятельности энергией, принимает участие в биосинтезе углеводов, липидов и других соединений.

В литературе известно лишь, что липоевая кислота является незаменимым фактором роста для молочнокислых бактерий, которые ее не синтезируют (231).

Предварительно была отработана методика приготовления питательной среды с липоевой кислотой. В работе использовали порошкообразную липоевую кислоту, разработанную во ВНИСВМ (115).В качестве растворителей были испытаны: дистиллированная вода, эфир, хлоро-форм, бензин авиационный, спирт ректифицированный 96°. Наиболее приемлимым оказался спирт ректифицированный, в котором быстро растворялась кислота (96°-сразу и 40°-3-4 мин).

Липоевую кислоту вносили в питательную среду двумя способами: до стерилизации питательной среды и "ex tempore", добавляя в простерилизованную среду.

Были взяты в опыт различные концентрации липоевой кислоты (2,5-15 мг/л),которые вносили в агар Хоттингера рН 7,1+0,1,содержащий 0,14 % аминного азота. Биологические показатели сред изучали, используя вакцинный штамм ЕВ чумного микроба. Выявлено, что выраженное стимулирующее действие на рост чумного микроба оказывала липоевая кислота в концентрации 5 мг/л - количество выросших колоний при вычислении среднего показателя параллельных определений равнялось 79,6+7,2 (контроль - 44,0+3,2).

Кроме того в опытах было испытано стимулирующее действие липоевой кислоты на 9 вирулентных штаммов, выделенных в разное время из 3 очагов Кавказа: (3 штамма чумного микроба, выделенные от горного суслика в 1986 г. из Центрального горного очага, 3 штамма чумного микроба, выделенные от полевок в 1980 г. из Закавказского высокогорного очага, 3 штамма, выделенные от полевок в 1988 г. из Дагестанского высокогорного очага).

Агары готовили из ОРХа говяжьего мяса по Хоттингеру и гидролизата кукурузы с последующим добавлением липоевой кислоты. Контролем служили агары, приготовленные с витамином В1 и сульфитом натрия без липоевой кислоты.

Полученные результаты свидетельствовали о том, что во всех исследуемых агарах липоевая кислота повышала питательную ценность агара при сравнении с агарами, приготовленными без липоевой кислоты, на 15-30 процентов. Оптимальная концентрация липоевой кислоты во всех испытанных средах также составила 5 мг/л.

Мы установили, что в присутствии липоевой кислоты, рост характерных, легко опознаваемых колоний чумных микробных клеток, может быть обнаружен уже через 24+2 ч при 28 °С инкубации, тогда как на контрольных пластинках агара колонии за этот период времени не имеют достаточно характерной морфологии, и гораздо меньше по своим размерам.

Просмотр мазков под микроскопом показал, что морфология чумных микробов, выращенных на опытных и контрольных средах, была типичной -биполярные грамотрицательные палочки.

В последующих опытах нами изучено влияние липоевой кислоты на ростовые качества сухих питательных сред для культивирования чумного микроба (Иркутский агар мясной, Иркутский агар казеиновый), а также питательных сред, приготовленных нами на основе ферментативных, кислотных и щелочных гидролизатов кукурузы. Выявлено выраженное ростостимулирующее действие на чумной микроб липоевой кислоты в концентрации 5 мг/л, независимо от используемой питательной среды.

Этим показана принципиальная возможность замены дорогостоящих мясных сред на кукурузные - экономически более выгодные при условии введения в них в качестве стимулятора роста липоевую кислоту.

Положительные данные, полученные при изучении питательной среды с липоевой кислотой в экспериментальных условиях на музейных штаммах чумы полевочьей разновидности НИПЧИ, позволили нам продолжить эти исследования на практике при бактериологическом обследовании полевого материала из Дагестанского высокогорного очага чумы аналогичной разновидности.

Питательная среда (агар Хоттингера) с добавлением липоевой кислоты в концентрации 5 мг/л была нами апробирована на двух штаммах NN195 5 и 1956 чумного микроба полевочьей разновидности, ранее выделенных от блох Ctenophthalmus intermediae и хранящихся в музее живых культур Дагестанской ПЧС, кроме того был исследован полевой материал с Кокмадагского участка с точки Хазрех (блохи Ctenophthalmus intermedius, снятые при очесе обыкновенных полевок с участка 155 5-6 км; блохи Ctenophthlmus caspia, отловленные из гнезда обыкновенной полевки с участка 300 0,5-1 км; блохи Cteno- phthalmus golovi из гнезда обыкновенной полевки с участка 270 2-3 км. и обыкновенные полевки в количестве 20 голов). Были выделены три культуры от блох. Культуры для сравнительного изучения характера роста параллельно посеяны и на контрольный агар Хоттингера с витамином В1.

При посеве штаммов NN 1955 и 1956 и культуры от блох трех разновидностей на агаре с липоевой кислотой через 36 ч инкубирования при 24+2 °С наблюдался пышный рост, с типичной морфологией колоний-колонии в R форме, бурый зернистый центр, с крупной кружевной зоной, сохраняющейся на многих колониях и после 3-4 суток роста. На третьи сутки отдельные колонии достигали до 0,5 см в диаметре, не утрачивая своих морфологических свойств, присущих чумному микробу. Тогда, как на агаре Хоттингера с витамином В1 колонии вырастали через 2 суток до 1,2 мм в диаметре, расчерченные светлыми полосами с небольшой кружевной зоной, которая через 48 ч роста у большинства колоний отсутствовала. В среднем из 100 и 10 посеянных микробных клеток вырастало до 54-55 и 5-5 колоний на питательной среде с витамином В1 и с липоевой кислотой- 68-70 и 6-7 соответственно. На основании полученных результатов был составлен на Дагестанской ПЧС акт апробации питательной среды с липоевой кислотой для выделения и культивирования чумного микроба.

Последующие опыты были посвящены изучению роли липоевой кислоты в составе питательных сред, используемых в качестве накопительных для получения значительных объемов биомассы чумного микроба вакцинного штамма ЕВ, необходимых в производстве чумной вакцины и диагностических препаратов. В качестве основы твердых питательных сред были использованы две серии ОРХов из говяжьего мяса и ферментативного гидролизата кукурузы СМК. Установлено с помощью аминограмм, что гидролизаты двух серий, полученные по одинаковой методике из говяжьего мяса, существенно отличались по аминокислотному составу, что указывает на необходимость подбора гидролизатов по качественному составу при использовании их в производственных целях. Кроме того, проведенные исследования позволили определить преимущество питательной среды как накопительной - агара Хоттингера с добавлением 5 мг/л липоевой кислоты.

Установлено, что добавление к агару Хоттингера липоевой кислоты в качестве стимулятора обеспечивало более высокий выход жизнеспособных клеток, чем без нее, а на агаре СМК получали обратный эффект. Процент живых микробов в биомассе был достоверно выше с питательной среды с липоевой кислотой, а поврежденных клеток больше на агаре СМК, примерно в 5,5 раза.

Кроме того, нами изучена с помощью электронной микроскопии морфология чумного микроба, выращенного на агаре Хоттингера с добавлением 5 мг/л липоевой кислоты и на СМК без липоевой кислоты. При электонномикроскопическом исследовании подтверждено, что среда СМК по питательным свойствам уступает агару Хоттингера с добавлением липоевой кислоты. При подсчете количества поврежденных клеток процент их распределился следующим образом: агар Хоттингера с липоевой кислотой 5,0+1, агар СМК - 28,0+0,1.

Нами в сравнительном аспекте проведены ряд опытов по выращиванию биомассы на агаре Хоттингера различной питательной ценности (содержание аминного азота-500, 1000, 1500, 2000 мг/л) в матрацах без добавок и с добавлением липоевой кислоты (5 мг/л) или сульфита натрия (210 мг/л).Показано преимущество агара Хоттингера как накопительной среды при включении в ее состав 5 мг/л липоевой кислоты,независимо от содержания в ней аминного азота ( 500-2000 мг/л),в сравнении с контрольными средами (без добавок и с сульфитом натрия).

Известно, что на длительность фазы роста микроба определенный эффект оказывает состав питательной среды. Нами изучено влияние липоевой кислоты на фазы роста чумного микроба вакцинного штамма ЕВ. Выявлено, что относительное время предлогарифмической, логарифмической и постлогарифмической фаз на опытной среде (с липоевой кислотой) и на контрольной (без добавок) было различно. Выше была константа роста популяции чумного микроба в логарифмической фазе, большее число генераций формировалось в течение логарифмической фазы роста и короче была длительность одной генерации на агаре Хоттингера с липоевой кислотой. Все указывало на то, что добавление липоевой кислоты к питательной среде обеспечивало более высокий процент жизнеспособных клеток и при этом значительно (в 5,5 раза) снижался процент поврежденных клеток.

Известно, что иммуногенные свойства чумного вакцинного штамма зависят от набора антигенных компонентов. Определяющее место в иммуногенезе при чуме отводится фракции 1. Рядом авторов было установлено, что помимо температуры выращивания, аэрации большое значение для биогенеза имеет состав питательной среды.

Нами было изучено влияние различных концентраций липоевой кислоты на синтез фракции 1 вакцинного штамма ЕВ. Были приготовлены питательные среды с липоевой кислотой и в качестве контроля - агар с сульфитом натрия. После выращивания чумного микроба на указанных средах при температуре 28 °С и 37 °С фракцию 1 определяли в РПГА, РНАт и РИФ с антисывороткой. Установлено, что добавление липоевой кислоты к

120 питательной среде способствует усилению синтеза фракции 1 вакцинного чумного штамма ЕВ. Большое количество фракции 1 синтезировалось,как и должно быть, при температуре 37 °С. Показано преимущество использования для синтеза фракции 1 стимулятора роста чумного микроба липоевой кислоты по сравнению с сульфитом натрия, так как синтез фракции 1 был значительно выраженнее на среде с липоевой кислотой.

Таким образом, нами доказана возможность повышения ростовых качеств питательных сред для выращивания культур штаммов чумы путем включения в их состав липоевой кислоты. Такие среды успешно могут использоваться как в качестве диагностических, так и накопительных при производстве вакцины и получении антигенных комплексов для конструирования диагностических препаратов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Катунина, Людмила Семеновна, Ставрополь

1. Авакян А.А., Кац Л.Н., Павлова И.Б. Атлас анатомии бактерий, патогенных для человека и животных. М.: Медицина, 1972.-С. 14-15, 41, 57.

2. Аванян Л.А., Губина Н.Е. Действие железа на рост чумного микроба // Тр. Арм. противочумной станции.- Ереван, 1960.-Вып.1.-С. 149-160.

3. Авророва И.В., Метелина В.Н. Питательные среды для культивирования и выделения возбудителя чумы // Особо опасные инфекционные заболевания: Иммунология, генетика и биологические свойства возбудителей: Сборник науч.работ. Вып.5.-Волгоград,1989.- С.3-28.

4. Апарин Г.П., Голубинский Е.П. Микробиология чумы: Руководство. -Иркутск: Изд-во ун-та, 1989-91 с.

5. Апсатаров Р.А., Орел Л. Л. Питательная среда для выделения чумного микроба // Материалы Межгос. науч. конф. "Профилактика и меры борьбы с чумой", посвященной 100-летию открытия возбудителя чумы (6-7 сент. 1994.,г. Алматы).Ч. 1 .-Алматы, 1994.-С.62-63.

6. АРыкпаева У.Т., Классовский Л.Н., Самыгин В.М., Степанов В.М. Дополнительные данные о потребности возбудителя чумы в факторах роста при 37°С // Профилактика особо опасных инфекций: Тр. противочумных учреждений СССР.-Саратов, 1980.-С. 15-20.

7. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях.- М.: Медлит, 1962.-180с.

8. Баканурская Т.Л., Пак Г.Ю., Семиотрочев В.Л. Получение и изучение гладких вариантов возбудителя чумы // Песчанки важнейшие грызуны аридной зоны СССР: Материалы 3 Всесоюз. совещ., Ташкент, 19- 23 сент., 1989.-Ташкент, 1989.-С.211-213.

9. Балахонов С.В., Воронина Г.А., Рудник М.П., Белькова С.А., Косилко С.А. Актуальные аспекты совершенствования лабораторной диагностики чумы //Chinese yournal of controljfendemic diseae.-1999.-N4.-С. 187-190.

10. Бахрах Е.Э. Окислительно-восстановительный потенциал в культуре чумного микроба. Сообщ.2 .// Труды ин-та "Микроб".-Саратов,1951.-Вып.1.-С.84-91.

11. Бахрах Е.Э., Дроздовский Ф.К., Муравьева Н.К. Значение физико-химического состояния питательной среды в производстве чумной вакцины // Биохимия микробов и иммунохимия: Материалы конф. 18-20 апреля 1966г.-Горький,1966.-С.32-33.

12. Бахрах Е.Э., Крайнова А.Н., Михайлова А.П. Зависимость роста чумного микроба от наличия в питательной среде азотистых веществ // Труды института "Микроб".-Саратов, 1951 .-Вып. 1 -С. 168-173.

13. Бахрах Е.Э., Шушерова Н.И. Зависимость роста чумного микроба от окислительно-восстановительного потенциала питательной среды.Сообщ.2.// Тр. института "Микроб". Саратов, 1951.-Вып. 1,- С.92-98.

14. Безсонова А.В. Метод получения перехо дно-шероховатых (ОР) вариантов P.pestis // Вестн. микробиол., эпидемиол. и паразитол.-1936. -Т.ХУ, вып.2.- С.195-198.

15. Бекер М.Е., ДамбергБ.Е., Рапопорт А.И. Анабиоз микроорганизмов.-Рига, 1981.-248с.

16. Бендас Л.Г., Раскин Б.М. Стимулятор бактериального роста из кормовых дрожжей // Лаб. дело.-1974.-№ 1.-С.43-46.

17. Блохина И.Н., Перова Р.С., Усцова М.В. Об особенностях аминокислотного обмена некоторых вариантов энтеробактерий // Тез. докл. конф., посвященной биохимии и физиологии микробов.-Горький,1960.-С.15.

18. Бондаренко Л.Н. Оптимизация плотной среды для аппаратного культивирования чумного микроба в бифазной системе: Автореф. дис. . канд. мед. наук.-Саратов, 1988.-23с.

19. Бондаренко А.И., Тинкер А.И. Разработка электронномик-роскопического теста количественного определения поврежденных бактериальных клеток.-Ставрополь, 1991 .-16с.-Библиогр: 25 назв.- Рус.-Деп. в ВИНИТИ 07.05.91., № 1871.-В91.

20. Борисенко Е.Г. Конструирование питательных сред из кислотных гидролизатов белково-витаминных препаратов // Лаб. дело.-1967.- №8,- С.488-501.

21. Борисенко Е.Г. Культивирование микроорганизмов на питательных средах приготовленных из продуктов микробиологического синтеза // Лабораторное дело.-1968.- № 3.- С. 184-185.

22. Борисов Л.Б. Физиология и биохимия микроорганизмов (бактерий): Медицинская микробиол., вирусол., иммунол.: Учебник / Под ред. Л.Б.Борисова, А.М.Смирновой.-М.Д994,- С.44-56.

23. Быстренин А.И., Липатова Т.И., Хворостухина М.М. Рост Y. pestis на средах с различным содержанием продуктов белкового распада // Вестн. микробиол., эпидемиол. и паразитол.-1937.- Т.16.-Вып.3-4.- С.281-286.

24. Вейнблат В.И., Кузьмиченко И.А., Синичкина А.А., Борисова Н.П. Синтетическая питательная среда для выращивания чумных микробов при 28 и 37 // Проблемы особо опасных инфекций.- Саратов, 1972.- Вып.4.- С. 123-127.

25. Виноградов Е.Я. Значение морской воды для изготовления питательных сред // Тр. Целиноград. мед.ин-та.-1968. -№2.-С.156-157.

26. Гавристова И.А., Бендас Л.Г. Характеристика белковых основ бактериологических питательных сред по содержанию углеводов // ЖМЭИ.-1991.-№ 5.-С.76.

27. Галаев Ю.В. Особенности обмена дикарбоновых аминокислот и их амидов у микроорганизмов кишечной группы // ЖМЭИ.- 1974.- №6.-С.23-26.

28. Голшмидт В.К., Курбагалина Ф.К. Химические показатели казеиново-растительной питательной среды для получения столбнячного токсина // Материалы по производству вакцин и сывороток.-М.,1968.-Вып.9.-С.41-44.

29. Гончарова М.Н. Некоторые аспекты сравнительного изучения чумных вакцин. Дис. . канд. биол. наук.- Ставрополь, 1981,- 175с.

30. Гриднева Н.И. Конструирование и стандартизация сухих диагностических питательных сред промышленного выпуска: Автореф. дис. . канд. мед. наук М., 1979.- 21с.

31. Губарев Е.М.,Заплатина С.И.,Коннова A.M. Культивирование Past, pestis на питательных средах известного химического состава // Тр. Ростов-на-Д. противочумного института.-1956.- Т.ХС.-С.69-89.

32. Губарев Е.М., Липатова Т. Влияние некоторых анионов и катионов на рост Past, pestis // Вестн. микробиол., эпидемиол. и паразитол.-1930.-Т.10,вып.4,- С.507-512.

33. Гюлушанян К.С., Чернова Э.А., Остров А.В., Юндин Е.В., Галенко Т.Н., Угримов С.А., Майская В.Д., Саркисян Н.А. Подбор гидролизатов для приготовления кукурузно-казеинового агара//Там же.-С.74-77.

34. Диковский Ф.Ф. Числовые индексы для сравнительной характеристики роста популяции энтеробактерий при глубинном культивировании // Биохимия микробов: (Сб.тр.).-Горький,1964.- С.51-61.

35. Домарацкий И.В., Башева B.C., Сидорова Н.К. Культивирование чумного микроба на средах известного состава // Изв. Иркутского гос. н.-и. противочумного института Сибири и Дальнего Востока.-Улан-Удэ,1958.-Т.18.-С.55-63.

36. Домарацкий И.В., Голубинский Е.П., Лебедева С.А., Сучков Ю.Г. Биохимия и генетика возбудителей чумы.- М.: Медицина, 1974.-165с.

37. Донская Т.Н., Савицкая Л.Н., Кондрашкова Т.В., Зимарина Л.С., Амплеева Э.А. Использование солей железа в качестве стимуляторов роста чумного микроба// Лабораторное дело.-1983.-№ 3.-С.13-58.

38. Дятлов И.А. Разработка новых технологий экспериментального и производственного аппаратного культивирования чумного микроба: Автореф. дис. . Д-ра. мед. наук.- Саратов, 1992.-42с.

39. Дятлов И.А., Филиппов А.Ф. Утилизация глюкозы культурами штаммов УВ и К-1 чумного микроба // Микробиология, иммунология и биохимия особо опасных инфекций: Тр. противочумных учр. СССР.-Сара-тов, 1987.-С.23-30.

40. Дятлов И.А., Филиппов А.Ф., Мамонова Т.А. Значение низкомолекулярных пептидов для роста и биосинтеза чумного микроба //

41. Биотехнология, иммунология и биохимия особо опасных инфекций: Тр. противочумных учреждений СССР.- Саратов, 1989.- С.43-49.

42. Дьяконов О.Б., Сидоров Н.И., Горлов Б.В., Хитров B.C. Влияние режимов стерилизации питательных сред на динамику роста и накопление микробов рожи свиней // Тр. гос. науч.-контрол. института вет.препаратов.-1966.-Т.Х111.-С.223-228.

43. Заренков М.И., Саямов С.Р., Гончаров Е.Г. Влияние ионов Mg на свойства некоторых штаммов чумного микроба // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология,- 1989.- 12.- С.17-21.

44. Затурский А.В. Прибор типа Валента для определения прочности растворов агар-агара и агаровых диагностических питательных сред // Учен, зап. Дагест. н.-и .ин-та по производству питательных сред.-1964.-Т. 1У,-С.18-27.

45. Зимарина Л.С., Донская Т.Н., Байгушева А.Ф., Кондрашкова Т.В. Молибденово-кислый аммоний как стимулятор роста чумного микроба наказеиновых средах // Информационный бюллютень изобретений и рацпредложений.- Саратов, 1979.- СЛ.

46. Иванов В.А.К вопросу о культивировании чумного микроба на синтетических средах: Автореф. дис.канд. мед.наук.-Саратов, 1961.- 18 с.

47. Иерусалимский Н.Д. Основы физиологии микробов.- М.Д963. 241с.

48. Инструкция по применению серологических методов диагностики при эпизоотологическом обследовании природных очагов чумы,- Саратов, 1974,-68с.

49. Инструкция по бактериологическому контролю питательных сред для выделения чумного микроба,- Саратов, 1984.-6с.

50. Каграманов B.C., Голубинский Е.П. Использование чумным микробом глюкозы и глюконата // Микробиология, эпидемиология и профилактика инфекционных болезней:Сб.науч.работ.-Ставрополь, 1976.-С. 18-21.

51. Канчух А.А., Сагатовский В.Н., Мелехина А.Ф., Сурнина Н.С. Использование кукурузного экстракта в качестве основы для питательной среды чумного микроба. Сообщ.1.// Сб. науч. работ,- Махачкала, 1961.- С. 193206.

52. Карпузиди К.С., Макаровская JI.H. Рост и размножение чумного микроба на среде с лизатом микробов "кормилок" // Тр. Ростов н/Д. противочумного института.-1956.-Т.Х.-С.44-53.

53. Карташова Л.Д., Криваченко К.Б., Пасюков В.В., Булахова О.Г., Каграманов B.C., Асеева Л.Е. Управление ростом и биосинтезом некоторых антигенов в периодических агаровых культурах чумного микроба // Биотехнология,- 1999.- № 1.-С.86-88.- Рус:, рец. англ.

54. Карташова Л.Д., Шереметов О.В. Технология изготовления гидролизата белка отрубей питательной основы микробиологических сред // Разработка и производство препаратов медицинской биотехнологии.: Тез. конф. 29-30 мая 1990.- Ч.1.- Махачкала, 1990.-С.40-41.

55. Касаткин Н.Ф., Ованесова Н.Г., Тынянова В.И. Влияние кукурузного экстракта на качество агара Хоттингера, используемого для выращивания возбудителя чумы // Проблемы особо опасных инфекций.- Саратов, 1972.-Вып.З (25).- С.206-208.

56. Кивман Г.Я., Прядкина М.Д., Гуторова Н.М. Высушенная гемо-лизированная кровь как стимулятор роста чумного микроба // ЖМЭИ.-1955.-№ 5.-С.82-85.

57. Кивман Г.Я., Прядкина М.Д., Гуторова Н.М. Препарат для выявления и стимуляции роста чумных микробов// ЖМЭИ.-1955.-№ 12.-С.61-66.

58. Классовский Л.Н., Мартиневский И.Л., Степанов В.М. О факторах роста штаммов бактерий чумы, выделенных на Закавказском нагорье от полевок и блох // Проблемы особо опасных инфекций.- Саратов,1972.- Вып.1,-С.186-188.

59. Классовский Л.Н., Степанов В.М. О полиауксотрофном мутанте штамма ЕВ // Проблемы особо опасных инфекций,- Саратов, 1971Вып.4.-С.186-188.

60. Князева В.А. Стимуляция роста чумного микроба фильтратами его бульонной культуры // Тр. института "Микроб".-,Саратов, I960.- Вып.4.-С. 157-161.

61. Ковтун А.Л., Рогожин А.З., Непранов В.П., Нестеров Ю.Е., Черкасов Н.А. Способ получения биомассы чумного микроба: Пат.2102472 Россия, МКИ6 с 124 1/20.-N94027451/13; ЗаявлЛ9.07.94; 0публ.20.10. 98, Бюл. № 2.

62. Козлов Ю.А. Питательные среды в медицинской микробиологии: (Руководство по приготовлению питательных сред для микробиологических институтов и санитарно-бактериологических лабораторий).-М.: Медгиз,1950.-С.251.

63. Кондратенко Н.Г., Юргина З.А. Возможности использования агаровых сред, приготовленных из кровяных сгустков, в производстве живой противочумной вакцины // Тр.Ростов н/Д. противочумного института,-1960.-Т.ХУ11.-С.146-151.

64. ЮО.Кондрашкова Т.В., Кузнецова Л.И., Узенцов С.А., Курилова Л.С. Казеиновые среды для выращивания чумного микроба // Профилактика особо опасных инфекций: Эпизоотология микробов и специфическая профилактика чумы. Вып.1.-Саратов,1976.-С.115-117.

65. Кондрашкова Т.В., Донская Т.Н., Зимарина Л.С. Влияние некоторых минеральных солей на качество и срок годности питательной среды для выращивания чумного микроба //Проблемы особо опасных инфекций.-Саратов, 1978.-Вып.4.-С.25-27.

66. Коробкова Е.И., Митина Е. Влияние некоторых условий питательной среды на плотность микробной популяции // Вестн. микробиол., эпидемиол. и паразитол.-1935.-Т.Х1У.- Вып.2.-С.105-114.

67. ЮЗ.Коробкова Е.И. К биологии Pasteurella pestis .Вариабельность чумных культур после длительного хранения их без пересева // Вестн. микробиол., эпидемиол. и паразитол.-1936.-Т.ХУ.- Вып.2.-С.172-184.

68. Красикова М.А.О возможности снижения затрат сырья на изготовление питательных сред, применяемых для диагностики чумного микроба // Материалы VI11 Науч. конф. противочумных учреждений Средней Азии и Казахстана.-Алма-ата, 1974.-С.449-451.

69. Красикова М.А., Рогачева А.А. О свойствах гидролизата из микробной массы вакцинного штамма ЕВ // Проблемы особо опасных ин-фекций.-Саратов, 1974.-Вып. 1 (35).-С.33-35.

70. Кузнецов В.И., Татаринова О.Г., Липаева Л.С., Болдина А.А. Питательные среды выделения и идентификации возбудителя чумы // Chinese journal of control of endemic disease.-1999.-N 14.-C.208-209.

71. Лихварь Н.А., Горшанова Е.П., Ряполова Р.Г. Получение сухих казеиновых гидролизатов //Технология производства сухих диагностических питательных сред.-Махачкала,1971.-Т.86.-С.36-38.

72. Логинова Л.Г., Головачева Р.С., Егорова Л.А. Жизнь микроорганизмов при высоких температурах.- М.:Наука, 1966,- 296 с.

73. Машковский М.Д. Лекарственные средства.-М.,1972.-Т.2.-С.27 -29.11 б.Мартенс Л. А. Получение питательных сред из кислотных гидролизатов рыбокостной муки // Ученые записки Дагестанского н.-и. ин-та по производству питательных сред.-1964.-Вып.4.-С.87-97.

74. Мартенс Л.А. Плотные агаровые среды из кислотных гидролизатов рыбокостной муки // Микробиология и иммунология особо опасных инфекций: Сб. науч. работ противочумных учреждений СССР.-Саратов,1964,-С.290-293.

75. Мартиневский М.Л. Биология и генетические особенности чумного и близкородственных ему микробов.-М.: Медицина, 1969.-296с.

76. Мартиневский И.Л. Гладкие формы возбудителя чумы //Карантинные и зоонозные инфекции Казахстана.-Алматы,1999.-Вып.1.-С.211-212.

77. Мартиневский И.Л. К вопросу о природе штаммов бактерий, выделенных от полевок и их блох в нагорной части Закавказья // Микробиология и иммунология особо опасных инфекций: Сб. науч. работ противочумных учреждений страны.-Саратов,1964.-С.26-28.

78. Мартиневский И.Л. Характер питательных потребностей у различных представителей рода Yersinia в зависимости от температурных условийвыращивания // Материалы УП науч. конф. противочумных учреждений Средней Азии и Казахстана.-Алма-Ата,1971.-С.29-31.

79. Мартиневский И.Л., Осадчая Л.М. Питательные потребности чумных бактерий, выделенных в различных очагах чумы // Материалы науч. конф. по природной очаговости и профилактике чумы. (Февраль, 1963,г.Алма-Ата).-Алма-Ата, 1963. -С. 143 -145.

80. Мартиневский И.Л., Степанов В.М. Штамм бактерий Yersinia pestis продуцент фракции 1 чумного микроба: Пат.2031938 Россия, МКИ С 12 N 1/20, N 5021953/13: РЖ Микробиол. сан. и мед.- 1996,- № 5 190П,- С.24

81. Матвеев В.Е., Скворцов Г.Е., Куян Н.В. О качестве питательных сред,подвергаемых тепловой обработке // Использование микроорганизмов в сельском хозяйстве и промышленности: Сб.н ауч. тр.-Новосибирск, 1982,-С.170-174.

82. Мединский Г.М. Сывороточная питательная среда для выращивания лептоспир, приготовленная на морской воде // Сб. науч. работ врачей Краснознаменного Балтийского флота. Вып.2.-Таллин,1960.-С. 34-40.

83. Меньшов П.И. Влияние солей металлов на выход фракции 1 чумного микроба // Материалы науч. конф. противочумных учреждений Ср. Азии и Казахстана.- Алма-Ата, 1969.- Вып.1,- С.61-63.

84. Методические рекомендации к контролю питательных сред по биологическим показателям.- М.,1980.

85. Методические рекомендации "Выращивание чумного микроба ЕВ в АКМ-Ш и матрацах для использования полученной биомассы в экспериментальных целях", утвержденными директором НИПЧИ Кавказа и Закавказья 2 декабря 1983г. проф. И.Ф.ТАРАН.

86. Методика ионообменной хроматографии на ионитах Микротехника, н.п. Прага 4- Морджаны, 1981 .-С.44.

87. Методические указания по применению физико-химических методов контроля питательных сред,- М.,1977.- 18 с.

88. Мишанькин Б.Н., Кравченко А.И., Майский В.Г. Тимин и тими-динзависимость мутантов Yersinia pestis с измененной тимидилатсинтетазой // ЖМЭИ.-1989.-2.-С.24-29.

89. Мук 4.1/4.2.588-96.(Методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов, вводимых людям, 1988).

90. Муравьева Н.К., Крайнова А.Н., Маслова О.П. Применение казеиновых сред в вакцинном производстве/Юсобо опасные природноочаговые инфекции-М.: Медгиз,1962.-С.207-211.

91. Наумов А.В. Влияние некоторых условий культивирования на активность ферментов начальных этапов углеводного обмена у субкультур чумного микроба // Проблемы особо опасных инфекций.-Саратов,1970,-Вып.2,- С.87-90.

92. Никитина В.А., Бобрышев В.И., Кафизова .Ф. Изыскание эффективной дрожжевой питательной среды для культивирования бактерий // Ученые записки Казанского гос. ветеринарного ин-та им. Н.Э.Баумана.-Казань,1979.-С.132-134.

93. Николаев Н.И., Шестеренко А.Ф., Филиппов А.Ф., Караева Л.Т. Выращивание микроорганизмов на плотных питательных средах в аппаратах АКМ-Ш//Материалы к конф., посвященной 50-летию института "Микроб".-Саратов,1968.-С.139-140.

94. Плоскирев Н.В., Соловьева A.M. Пригодность различных сортов агар-агара для получения сухих диагностических сред // Ученые записки Даг. НИИПС.- Махачкала, 1964.- Вып.4.-С.12-17.

95. Пошевина Г.О., Степанов В.М., Пейсахис JI.A., Быкова Л.Т., Ар-гининзависимые штаммы возбудителя чумы, выделенные в Муюнкумах // Проблемы особо опасных инфекций.-Саратов,1968.-Вып.2.-С.173-175.

96. Пономарева Л.В., Яковлев В.И., Цветкова Н.П., Крупчак В.Г. Мецелиальные отходы производства тетрациклина как компонента питательной среды (! Антибиотики и химиотерапия.- 1999.- Т. 44.-№ 1.-С.11-13.

97. Поздеев O.K., Покровский В.И. Бактериологические исследования // Медицинская микробиология / Гл. ред. В.И. Покровский, O.K. Поздеев.-М.,1999.- 1200с.

98. Приказ N 31 МЗ СССР от 13.01.83г. (сборник инструкций). Об унификации методов контроля медицинских иммунобиологических препаратов.-М.,1983.-78с.

99. Прядкина М.Д. Методика изготовления препарата манифестатора для стимуляции роста чумных и дифтерийных микробов // Материалы по обмену опытом.-М.Д958.-Т.1/53.-С.353-357.

100. Радченко Г. А., Хамзин Т.Х., Каусов С.Г. Морфологическая характеристика штаммов чумного микроба, выделенных в Волго-Уральском песчаном очаге в 1997г. //Карантинные и зоонозные инфекции в Казахстане.-Алматы,1999.- Вып. 1.-С.217-219.

101. Раскин Б.М. Экспериментальное обоснование рационального использования сырья в производстве микробиологических питательных сред: Дис. . Д-ра. мед. наук.-М.,1982.-399с.

102. Регламент производства вакцины чумной живой сухой № 702-97.

103. Рогачева А.А., Красикова М.А. О стимулирующих свойствах гидролизата из микробной массы штамма ЕВ на рост возбудителей чумы и холеры // Материалы УП науч. конф. противочумных учреждений Средней Азии и Казахстана.-Алма-Ата,1971.-С.51-53.

104. Розонова Г.Н., Лалазарова И.Г., Елкин Ю.М., Свешникова Л.П. Потребности в факторах роста чумного микроба из Закавказского нагорья // Проблемы особо опасных инфекций: иммунология, микробиология.-Саратов, 1976.- № 3.-С.8-11.

105. Рублев Б.Д., Каграманов B.C., Бурша О.С., Рыжков В.Ю. Изучение ассимиляции чумным микробом железа в условиях железодефицитных сред // Микробиол. жу рн. -1989.-Т.51 .-№ 1 .-С. 13-18.

106. Сагимбеков У.А., Рахимов К.Р. О выделении лейцинзависимых штаммов чумного микроба из Саксаулдалы // Микробиология, лабораторная диагностика и специфическая профилактика карантинных инфекций: Тр. противочумных учреждений СССР.-Саратов,1989.-С.102-103.

107. Самойлова Л.В., Донская Т.Н., Вейнблат В.И., Коровкин С.А., Плотникова Е.А., Пионтковский С.А., Куличенко А.Н. Чума // Лабораторная диагностика возбудителей опасных инфекционных болезней.-Саратов, 1998.-Т.1.-С.З-49.

108. Сапожников В.И., Новикова Т.А., Копбаев Е.Ш., ой К.В., Ковалева Г.Г., Новиков Г.С., Давыдова В.Н., Стогов Л.И., Безверхний А.В. Особенности штаммов возбудителя чумы из Илийской котловины, выделенных в 1998 // Там же.-С.127-130.

109. Саямов С.П. Плотная дифференциальная среда для оценки кальцийзависимости и пигментсорбции Yersinia pestis // Клиническая лабораторная диагностика.- 1994,- № 6.-С.45-46.

110. Междунар. науч.-практ.конф.,15-17 сентября 1998г.- Саратов, 1998.-С.191-193.

111. Сержанов О.С., Лухнова Л.Ю., Айкимбаев А.М.,Намвар

112. Соколова Н.М. Оценка некоторых эффективных питательных сред, употребляемых для диагностики чумного микроба // Тр. ин-та "Микроб".-1959.-Вып.3.-С.115-116.

113. Сохина A.M., Биргер М.О. Потребление аминокислот микробами семейства кишечных // ЖМЭИ.-1961.-С.81-87.

114. Сохина A.M., Биргер М.О. О потреблении различных аминокислот энтеробактериями // Биохимия микробов.-Горький, 1964.-С.316-326.

115. Справочник по микробиологии и вирусологическим методам исследования / Под ред. М.О. Биргера.-М.: Медицина, 1982,- 464с.

116. Степанов В.М. К вопросу о влиянии факторов питания на формирование чумного микроба // Проблемы особо опасных инфекций.-Саратов, 1969.-Вып.З (7).-С.92-85.

117. Степанов В.М., Мартиневский И.Л. Об открытии возбудителя чумы Иерсеном и Китазато и его значение в противочумной практике // Материалы Межгос. науч. конф. "Профилактика и меры борьбы с чумой (6-7 сентября 1994г., г. Алматы). Ч.1.- Алматы,1994,- С.3-4.

118. Сучков Ю.Г., Домарацкий И.В., Канатова Е.А. Аминокислотные потребности чумного микроба и неоднородность популяции по этому признаку // Генетика, биохимия и иммунохимия особо опасных инфекций.-Ростов-на-Дону, 1967 .-Вып. 1 .-С. 15 3 -15 8.

119. Сучков Ю.Г., Богданова М.И., Мишанькин Б.Н. Антигенный состав и иммуногенность ауксотрофных мутантов вакцинного штамма ЕВ чумного микроба // Проблемы особо опасных инфекций.-Саратов,1971.-Вып.2.-С.21-24.

120. Сызранцев П.И. Простые способы вычисления основных статистических величин //Социалистическое зерновое хозяйство.-1983.- №3.-С.185-203.

121. Телишевская Л.Я., Простяков А.П., Цыганкова С.И., Трусова Л.И. Контроль и стандартизация компанентов и питательных сред бактериальных культур // Бюллетень Всесоюзного ордена Ленина НИИ эксперим. ветеринарии им. Я.Р.Коваленко.-М.,1983.-№ 49.-С.83-89.

122. Терентьева Л.И. Содержание ионов кальция в питательной среде и их влияние на рост чумного микроба //ЖМЭИ.-1967.-№4.-С. 138-139.

123. Терентьева Л.И., Разумнова В.Ф., Стручкова Э.Н. Изучение влияния соединений магния на рост и выживаемость вакцинного штамма ЕВ НИИЭГ // Там же.-С.269-271.

124. Тимофеева Л.А., Апарин Г.П., Трофименко Н.З. Потребности в аминокислотах штаммов чумного микроба, выделенных в очагах Сибири // Докл. Иркутского противочумного ин-та.-1971.-Вып. 1Х.-С.43-44.

125. Тимофеева JI.A., Носкова Л.И. О качестве питательных сред // Изв. Иркутского гос. н.-и. противочумного института Сибири и Дальнего Востока,-1957.-Т.Х1У.-С.36-45.

126. Трифонова А.А. Сравнительное изучение некоторых стимуляторов роста чумного микроба II Тр. института "Микроб" Саратов, 1960.-Вып.4. -С.162-167.

127. Трифонова А.А., Кондрашкова Т.В. О приготовлении агара из перевара сгустков крови//Проблемы особо опасных инфекций.-Саратов,1972.-Вып.4 (26).-С.162-163.

128. Трифонова А.А., Тереножкина А.В. Питательная среда из кровяных сгустков для культивирования чумного микроба // Микробиология и иммунология особо опасных инфекций.-Саратов,1964.-С.287-290.

129. Трофименко Н.З., Домарацкий И.В., Носкова Л.И., Михалева В.Я. Среды из соево-кислотиого гидролизата для выращивания чумного микроба // Докл. Иркутского противочумного института.-1963.-Вып.5.-С.48-52.

130. Трофименко Н.З., Колесинская Н.И., Носкова Л.И. Среды из ферментативных гидролизатов соевых бобов для выращивания чумного микроба // Проблемы особо опасных инфекций,- Саратов, 1969.-Вып.З(7).-С.212-213.

131. Туманский В.М. Микробиологические основы диагностики чумы // Тр. науч. конф., посвященной 25-летию института "Микроб", август, 1944.-Саратов, 1948.-С.69-79.

132. Туманский В.М. К вопросу о заменителях перевара Филдса для выращивания чумного микроба // Тр. института "Микроб".-СаратовД 951.-Вып.1.-С.289-291.

133. Тюлембаев М.А. Влияние температуры роста на синтез капсульного антигена чумного микроба // Там же.-С.145-146.

134. Тюлембаев М.А. Влияние отдельных компонентов питательной среды на синтез фракции 1 при 37° С // Там же.-С.145.

135. Уилли Б. Электронная микроскопия для начинающих.- М.Д975.

136. Филиппов А.Ф., Кондрашкова Т.В., Муравьева Н.К., Павлова Л.П., Огарев Н.Н. Выращивание культур чумного микроба на средах из аутолизатов рыбы // Проблемы особо опасных инфекций.-СаратовД973,- Вып.6(34).-С.74-77.

137. Филиппов А.Ф., Кондрашкова Т.В., Муравьева Н.К., Павлова Л.П., Огарев Н.Н. Свойства культур чумного микроба, выращенных на средах из аутолизатов рыбы // Проблемы особо опасных инфекций.-СаратовД 974.-Вып.3(37).-С.62-66.

138. Хазан М.А. Конструирование из непищевого сырья плотных питательных сред для диагностики и накопления бактериальной массы чумного микроба: Автореф. дис. . канд. мед. наук.-Саратов,1987.- 24с.

139. Харитонова Т.И., Юргина З.А. Казеиновый агар для культивирования бруцелл // Вопросы микробиологии и лабораторной диагностики особо опасных инфекций.-Саратов, 1965.-С. 128-131.

140. Харькова Н.М. Влияние ионов железа на рост чумного микроба: Дис. . канд. биол. наук.-Ставрополь,1973.-С.164.

141. Хозова И.А., Кузнецова Л.С. Влияние некоторых витаминов на рост чумного микроба // Иммунология, биохимия, патогенез.-Саратов, 1978.-Вып.3 (61).-С.70-71.

142. Шеремет О.В. Характер роста чумного микроба на плотной дрожжевой питательной среде // Проблемы особо опасных инфекций. Микробиология и иммунология-Саратов, 1978.-Вып.4 (62).-С.28-31.

143. Шеремет О.В., Карташова Л.Д., Зинченко Л.Н., Терентьев А.Н., Ермоленко Т.Д., Рыжков В.Ю. Выращивание бактерий чумы Y.pestis при различных лимитирующих возможностях в стационарную фазу периодической агаровой культуры // ЖМЭИ.-1994.-№ 5.-С.78-79.

144. Шеремет О.В., Карташова Л.Д., Ермоленко Т.Д., Терентьева А.Н. Влияние характера лимитации на жизнеспособность возбудителя чумы и содержание фракции 1 //Т ам же.-С.157.

145. Шлегель Г. Общая микробиология: Пер. с нем.-М.:Мир, 1987,-567с.,ил.

146. Шпилевая Э.Г. Культивирование чумного микроба аппаратным способом на агаре из сухих кормовых дрожжей: Автореф. дис. . канд. биол. наук,- Саратов,1984.-С.24.

147. Шпилевая Э.Г., Тинкер А.И., Гончарова М.Н., Таран И.Ф. Культивирование чумного микроба на средах из непищевого сырья в производственных условиях.-Ставрополь, 1993.-155с.-Библиогр. :428 назв.-Деп. в ВНИИТИ 26.02.93,N 478-В 93.

148. Шунаев В.В. К вопросу о росте B.pestis на крови животных, имеющих видовой иммунитет к чуме // Изв. Иркутского гос. н.-и. противочумного института Сибири и Дальнего Востока.-1935.-Т.2.-С.12-14.

149. Юркевич A.M. Липоевая кислота // Химическая энциклопедия,- М.: Советская энциклопедия, 1990.- Т.2.- С.600-601.

150. Яромюк Г.А., Васюхина А.В., Трофименко Н.З. К вопросу о про-тотрофных мутантах чумного микроба // Эпидемиология и профилактика особо опасных инфекций в МНР и СССР.- Улан-Батор, 1978.-С.76-77.

151. Ящук А.П. Подбор оптимальных питательных сред для выращивания B.pestis. Среда Филдса и ее применение // Вестн.микробиол., эпидемиол.и паразитологии.-1939.-Т.ХУШ,Вып.1-2.-С.34-43.

152. Ail S.J., Rust L., Hunter D. et al. Preparation of serologicaly homogenus plague mirine togin and it rections with physical, chemical and enzymic agents // J. Immunol.-Vol.60.- N 6.-P.435-440.

153. Amrane A., Prigent Y. Lactic acid production rates during the different growth of Lactobacillus helveticus cultivated on whey supplemented with yeast extract // Biotechnol. Lett.-1998.-Vol.20.- N 4.-C.379-383.

154. Arntzeen L., Frean I.A. The laboratory diagnosis of plague: (Pap) "Int. Workshop" Rodent Biol, and Integr. Pest Manag.Aft., Morogoro,Tanzania,21-25 Oct.,1996 /Belg.I.zoo 1.-1997,- J27,Suppl.- C.91-96.- Англ.

155. Berkman S. Accessory growth factor reguirements of the members pasteurell //J. Infect.dis.-1942.-V.71,- No.3.-P.201-211.

156. Berry A., De-Vault J.D., Chakrabarty A.M. High osMolarity is a signal for mucoid and Pseudomonas aeruginosa strains // J.Bacterid.-1989,-Vol.171.-N 5.-P.2312-2317.

157. Biorn M.I., Socol P.A., Iglewski B.H. Influence of iron on of exytracellular products in Pseudomonas aeruginoza cultures // J.Bocteriol.-1979.-Vol.l 38.-N 1.-P.193-200.

158. Brownlow W.J., Wessman G.E. Nutrition of Pasteurella pestis in chemically defined media at temperatures of 36 to 38° С // J.Bacteriology.-1960.-V.79.-N 1.-P.299-304.

159. Brubaker R.R., Surgalla M.L. The effect of Ca++ and Mg++ on lysis growth and production of virulence antigens by P. pestis // J.Infect.Dis.-1964.-V.l 14.-P.13-25.

160. Charnetzky W.T., Brubaker R.R. RNA synthesis in Jersinia pestis during growth restriction in calcium deficient medium // J.Bacteriol.-1982.- Vol. 149.-N 3.-P.1089-1095.

161. Doudoroff M. Studies on the nutrition and metabolizm of Pasteurells pestis // Pros. Soc, exp. Biol.-1943,- Vol.53.-P.73-75.

162. Efthymolov C. J., Joseph S.W. Development of a selective enterococcus medium based on manganese ion deficiency sodium azido and alkaline ph // Appl.microbiol.-1974.- Vol.28.-N 3.-P.411-416.

163. Englesberg E., Levi J. Studies on immunization against plague.V.l.Growth of P.pestis and production of the envelope and other soluble antigens in a casein hydrolysate mineral medium // J.Bacteriol.-1954.- Vol.67. -N 4.-P.438-444.

164. Flambard В., Helinck S., Jean R., Vincent J. The contribution of caseins to amino acid suppli for Lactococcus lactis depends on the type of cell envelope proteinase // Appl. and Environ.Microbiol.-1998.-64,N 6.-C.1991-1996.

165. Gore S.N., Citiert S.S., Sokhey // Ind.J.med.Res.-1939.-V. 27.-No.2.-P.322.

166. Gotshalk G. (ГОТШАЛК.) Метаболизм бактерий: Пер. с англ.-М.: Мир, 1982.-310 с.

167. Groman N., Judge K. Effect of metal ions on diphteria toxin production // Infect, and Immun.-1979.- Vol.26.-N 3.- P.1065-1070.

168. Hayaski K., Seino A., Kasumi T. Bacteriolytic enzyme produced by streptomyces sp //J. Ferment Technol.-1981.- Vol.59.-N 4.- P.319-323.

169. Herbert D. Studies on the nutrition of P. pestis and factors effecting the growth of isolated cells on an agar surface // Brit. J. Exper. Path.-1949.- Vol.30.-P.509-519.

170. Higuchi K., Carlin C.E. Studies on the nutrition and physiology of Pasteurella pestis. 1 .A casein hydrolyzate medium for the growth of Pasteurella pestis // J.Bacteriol.-1957.-Vol.73.-P.122-129.

171. Higuchi K., Kupferberg L., Smith J. Studies on the nutrition and physiology Pasteurella pestis. 3. Effects of Calcium ions on the growth of virulent and avirulent strains of Pasteurella pestis // J.Bacteriol.-1959.- Vol.77.- P.317.

172. Hilla G.M., Spyrr E.D. The effect of temperature on the nutritional reguirements of P. pestis //J. gen. Microbiol.-1952.-N0.6.-P.64-73.

173. Yersin I. La peste bubonique a Hong-Kong // Ann. Inst. Pasteur. -1994.-V.8.-P.662-667.

174. Keller G.M., Hanson R.S., Bergdoll M.S. Effect of minerals on Staphylococceae enterotoxin B. production // Infect, and Immun.-1973.- Vol.20.-N 1,- P.158-160.

175. Kitasato S. The bacillus of bubonic plague // Lancet.-1894. -V.2.-N0.8.-P.428-430.

176. Lahoz R., Reyes F., Martines M.I. Effect on the pH on the degree of autolysis of Aspergillus niger // Can.J.Bot.-1979.-Vol.57.-N 18.- P.1901-1903.

177. Leal N., Cintra G., AbathF., Coutinho G., Alver L. C., de Almeida A.M. R. // Rev. Inst. med. trop. Sao Paulo.-1996.-Vol.38.-N 5.-C.371-373 Англ; рец.порт.

178. Leighton P.M., Macsween H.M. Yersinia hepatic abscesses to longterm iron therapy // J.Amer. med. Ass.- 1987.-Vol.257.-N 7.-P.964-965.

179. Leninger А. (Ленинджер А.) Биохимия: Пер. с англ.-М.: Мир,1976.- 412 С.

180. Levin М.А., Trupin G.S., Cabelli V.L. Clear media for the recovery Pasteurella tularensis // Appl.Microbiol-1962.- Vol.10.-N5.- P.407-412.

181. Macfarlane D.E., Elian-Jones Т.Е. Improved media for the culture of Neisseria gonorrhocea / /J.Microbiol.- 1980.- Vol.13.-N4.- P.595-607.

182. Mesrobeanu L., Paunesku E. (Месробяну И.Л., Пэунеску Э.) // Физиология бактерий.- Бухарест: Медицина, 1963,- 807 с.

183. Meynell Е., Meynell J. (Мейнелл Э., Мейнелл Дж.) Экспериментальная микробиология (теория и практика): Пер. с англ.-М.: Мир, 1967.347 с.

184. Meyer K.F., Batchelder А.P. Selective medium in the diagnosis rodent plague//J. Infect. Dis.-1926.-No.39.-P.370-385.

185. Morio A., Yukinodu N., Yamada T. Protein production by yeast in acidik cultural condition // Agr. and Biol. Chem.-1978.-Vol.42.-N 12,- P.2391-92.

186. Morichi Т., Irie R. Factors affecting repair of production injury in frozen in freezen dried Bacteria // Cryobiology.-1973.-Vol. 10.-N 5,- P.393-399.

187. Nimcevic D., Schuster M., Gapes J.R. Solvent production by Clostridium beijerinckii NRRL B, 592 growing on different potato media // Appl. Microbiol., and Biotechnol.- 1998.- Vol.50.-N 4.-C.426-428.

188. Piroth L., Meyer P., Bielefeld P., Besancenot J.F. Yersinia bacteremia and iron overload // Rev.Med.Interne.-1997.-Vol.3.-N 12.-P.932-938.

189. Porter J.R. Bacteriol. chemistry and physiology // Ed.ll.-NV.London: Ed. J .Willey, A.Chorman,1954.- P. 1073.

190. Rao M. Further studies on the nutrition of the plague bacillus: the role of haemation and other compounds // J.Med.Res.-1940.- Vol.27.- P.833.

191. Rochenmacher M., James H.A., Seberg S.S. The nutrition and physiology of P.pestis.l.A chemically defined culture medium for P. pestis // J.Bacteriol.-1952.-Vol.63. -P.788-794.

192. Rroland F.R. Salt-starch lysine deoxycholate agar. A single medium for isolation of sodium and non-sodium dependent enteric gramnegative bacilli // Med. Microbiol, and Immunol.-1977.-Vol.163.-N 4,- P.241-249.

193. Russell P., Nelson M., Whittington D., Green M., Eley S.M., Titdall R.W. Laboratory diagnosis of plague // Brit. J. Biomed. Sci.- 1997.- Vol.54.-N 4.- C.231-236,- Англ.

194. Shutze H., Hassanein M.A. The oxygen reguirements of P. pestis and Pasteurella Strains // Brit. J. Exper.Pathol.-1929.-V.10.-No.3.-P.204-209.

195. Scott T.A., Bellion M. The Conversion of-Formyl-L-Aspartate into Nicotinic Acid by Extracts of Clostridium butyhcum//Europ. J. Biochem.-1969.-Vol.lO.-Р.318-323.

196. Scott T.A., Devonshire A.L. The Incorporation of (14C ) aspartic Acid into Nicotinic Acid N-Glucoside in Nicotiana tabacum // Biochem. J.-1971.-Vol. 124.-P.949-950.

197. Seal S.C. Casein hydrolysate agar a new Solid Medium for the growth of Pasteurella pestis and allied organisms // Ann. Biochem. Exper. Med.,Calcutta.-1950,- Vol.10.- N 3/4.-P.85-94.

198. Seal S.C., Mukheryi S.R. Hydrolysate of casein se a fluid Medium for the growth of Pasteurella pestis // Ann. Biochem., Exper. Med., Calcutta.- 1950.-Vol.10.- N 3-4.-P.109-118.

199. Seal S.C. Studies on specific soluble protein of P. pestis and allied organisms. 1. Isolation,fractionation and certain physical, chemical and serological properties // J. Immunol.- 1951.-Vol.67.-P.93-108.

200. Siems H. Auswahi von Selektivmedien zur Ertassung von Staphylococeus aureus in Lebensmitteln // Lebensmitteltechnik.-1980.- Bd.l2-N 6.- S. 71-75.

201. Smith I.D., Phillips R.L. Growth of P. pestis on a casein digest medium II J. Franklin Inst.-1943,- Vol.235.- P.536-545.

202. Sokhey S.S Experimental studies on plague // Ind. J. med. Res. -1939.-V.27.-No.2.-P.313.

203. Sokhey S.S., Habbu M.K., Bharucha K.H. Hydrolyzate of casein for the preparation of plague and cholera vaccines // Bull. Wld. Health. Org.- 1950,- N 3,-P.25-31.164

204. Spivack M., Foster L., Larson A. et al. The immune response of the guinea pig to the antigens of Pasteurella pestis // J. Immunol.- 1958.- Vol.80.-N 2,-P.132-141.

205. Weiner Ronald M., Manyak David I.; (Metod for fermentation of marine bacteria: Пат.5 5 87313 США, МПК 6 С 12N 1/00,С 12 N1/12 // University of Maryland.-N P. 402-480.

206. Wren M.W.D. An improved cooked meat medium for the growth of anaerobic bacteria // Med. Lab. Sci.- 1979.- Vol.36.-N 2.-P. 197-199.