Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Использование кленбутерола в комплексе с органическими соединениями цинка и селена с целью повышения продуктивности и резистентности цыплят-бройлеров

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Использование кленбутерола в комплексе с органическими соединениями цинка и селена с целью повышения продуктивности и резистентности цыплят-бройлеров"

ВСИЮКЙ^1Й НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ' ФИЗИОЛОГИИ, БИОХИМИИ И ПИТАНИЯ ' ' СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ

На правах рукописи БОРЯЕВ ГЕННАДИЙ ИВАНОВИЧ УДК 636.52/58.087.8:612.015.3 + 612.35

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ КЛЕНБУТЕРОЛА В КОМПЛЕКСЕ С ОРГАНИЧЕСКИМИ СОЕДИНЕНИЯМИ ЦИНКА И СЕЛЕНА С ЦЕЛЬЮ ПОВЫШЕНИЯ ПРОДУКТИВНОСТИ И РЕЗИСТЕНТНОСТИ ЦЫПЛЯТ-БРОЙЛЕРОВ

03.00.04 - биохимия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

>я- /

Боровск

/V

1992

О- ' л

Работа выполнена во Всесоюзном научно-исследовательском ■ институте физиологии, биохимия и питания сельскохозяйствен)« животнш

Научный руководитель - доктор биологических наук

Гклочкмн В.А. ^

Социальные оппонент - доктор биологических наук

Паенхов А.Н.

кандидат биологических наук Ковальский С.Д.

Ведущая организация - Московская ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени сельскохозяйственная академия км. К. А. Тимирязева. .•.."'• ,■

Зацита диссертации состоится " 3 " имэнЯ 1992 г.

на заседании специализированного совета Д.020.17.01 при Всесоюзном

научно-исследовательском институте физиологии, биохимик и питания

сельскохозяйственных животных.

Адрес института: 249010, г.Боровск, Калужской обл.»

ВНДОФБиП с.-х.живота- " •

С Диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

А вторейерат разослан 1992 г.

секретарь

сг.гтт •^зировакного ссаета , Дудин В.И.

ОЕЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность текы: Проблема наиболее полного использования генетического потенциала скорости роста животных и птиим остается в ряду ьажнейших в теории и практике ведения животноводства. Реализация генетически обусловленной скорости роста зависит от ряда факторов, и в первую очередь, от кормления животных и птицы. Обеспечение высокой интенсивности роста, разумеется, предполагает удовлетворение потребностей во всех питательных веществах. Однако, этого недостаточно. Для того, чтобы управлять скоростью роста, необходимо понимать и уметь контролировать глубинные физиолого-биохимичесуие процессы роста. Только таким путем представляется возможность непосредственного воздействия на интенсивность и направленность метаболических потоков, а, следовательно, и на продуктивность животных.

Достижения последних десятилетий, приведшие к реальному повышении продуктивноеги сельскохозяйственных животных и птицу, обычно связывают с использованием следующих групп биологически активных веществ:

1) анаболические средства;

2) адалтогенные препараты;

3) антимикробные средства;

4) неспецифические иммуностимуляторы и специфические иммунодеп-рессанш;

5) агонисты $ -адренергических рецепторов.

Если первые три направления в настоящее время относятся к наиболее полно изученным, то глубина разработки двух последующих может быть квалифицирована как недостаточная.

Одной из главных причин, снижающих скорость роста, а, следовательно, продуктивность и резистентность с.-х.животных и птицы, в последнее время считают хронически протекающие явно избыточные сьо-боднорадикальные процессы в организме.-Именно этим процессам отводят роль унифицированного патогенетического механизма, вызывающего самые различные патологии. В норме процессы неферментативного окиелыш ния протекают очень медленно, и концентрация перекисей подчеркивается на крайне низком уровне. В экстремальных условиях, в частности в стрессовых ситуациях, интенсивность процессов свободнорадикаль-ного окисления резко возрастает, что приводит к самым серьезным последствиям для всего организма.

Поэтому, очевидно, что любая стимуляция продуктивности ио,<ет стать оптимально эффективной только в тесной взаичосьязи тряд;шнон

- г -

кых и вновь разрабатываемых методов с комплексным подходом к повы-шедаю продуктивности и неспецифической резистентности с.-х. животных. В связи с этим представляется актуальным изучить влияние на продуктивность и резистентность цыплят-бройлеров, оплату корма продукцией и качество продукции таких соединений, как агониста^?-ад-речергических рецепторов, в частности, кленбутерола, а также нового биологически активного соединения 9-фенил-симиетричного-октагидро-селеноксантена (СП-1.соленопиран) и хелатного комплекса гистидина с шинком, как в отдельности, так и в различных сочетаниях этих трех препаратов.

Цель и задачи исследований. В задачи исследований входило:

- пыяшть оптимальные условия применения в кормлении ирплят-бройле-ров: а) кленбутерола- - типичного представителя агонистов$ -адре-нергических рецепторов; 45) органического соединения селена; в) органического соединения цинка. Все три названных соединения испытать как в отдельности, в различных дозах, так и в комплексе, в раэличшх сочетаниях;

- изучить ¿тветную реакцию иммунной, монооксигеназной систем и системы ан.ирадик&льной зшцйты организма на введение,этих препаратов;

- получить необходимые первичные ^изиолого-биохимические данные для разработки способа повышения продуктивности и резистентности цлп-лят-бройлеров с использованием указанных соединений.

Научная новизна.В зарубежной литературе имеется обширная информация о влиянии^ -адренергических агентов на продуктивность с.-х. животных и птииу, свидетельствующая о широких перспективах использований; этих веществ. Однако, данные, касающиеся влияния соедине-К1тР этого класса на иммунную, монооксигенаэную и антиоксидантную системы организма в мировой литературе практически отсутствуют. Впервые также испытано влияние кленбутерола в комплексе с новым биологически активным селеносодержащим соединением СП-1 и гистидинатом цинка на организм цыплят-бройлеров. В доступной литературе нами не обнаружено также попыток выявить взаимосвязь между иммунной, моно- . ойсигеназной, антиоксидантной системами и продуктивностью птица лри использовании исследуемых препаратов.

Практическая значимость работы. На основе полученных фшоло-го-^иохимических и зоотехнических данных разработан способ повышение продуктивности и резистентности цыплят-бройлеров. Разработанный способ нуждается в дополнительной более всесторонней проверке, пос» по чего может быть рекомендован к широкому использованию в гтроиз-

водстве мяса птицы.

Положения, шносимые на защиту.

1. Селеноорганическое соединение СП-1 обладает антиоксидантными свойствами, при его введении в рацион повышается продуктивность и резистентность цыплят-бройлеров.

2. Селенопиран перше этапы своего метаболизма проходит через цито-хром Р-450-зависимую монооксигеназную систем печени.

3. Нютвдинат цинка обладает иммуностимулирующим эффектом и выраженной доэозависимой способностью нейтрализовать свободные г'-дикалы.

4. Кленбутерол влияет на метаболические характеристики, повышаем и улучшает качество тушек цыплят-бройлеров. Специфической особенностью этого соединения является способность образовывать в' процессе метаболизма свободные радикалы и одновременно выступать в роли первичной "метаболической ловушки" свободных радикалов.

5.Комплексное использование кленбутерола и селенопирана оказывает более выраженный эффект, чем применение этих соединений в отдельности.

6. Существует тесная взаимосвязь между иммунной, монооксигеназной системами и системой антирадикальной защиты организма с главным

: связующим механизмом трех систем, заключающемся в способности образовывать и нейтрализовать свободные радикалы.

Апробация работы. Результаты исследований доложены на П Всесоюзном симпозиуме "Синтез органических соединений селена и теллура" (Ростов-на-Дону, 1991 г.), а также на межлабораторном совещании ВНИИ физиологии, биохимии и питания с.-х. животных.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 2 работы.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения; обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов исследований и их обсуждения, заключения, выводов, практических предложений, списка использованной литературы, который включает 157 источников, в том числе 86 иностранных.,

Работа изложена на 122 страницах машинописного текста, включает 21 таблицу, 2 рисунка и I фото.

- 4 - ; Схема второго опыта

Таблица I

Испытуемые {Контроль- }- Опытные группы -;-

соединения ¡ная группа) I ! П ! 1 I 1У ! У I У1

Сульфат танка,

мг цинка/кг корма 50 2 - - 50 50 50 Пютидинат цинка,

мг цинка/кг корма - 50 25 12 - - -Селенопиран, мг

селена/ кг корма - - - - 0,1 0,2 0,3

ЫАТЕШЛ И МЕТОДЫ ИССВДОВАНИЙ '

Дяя решения поставленных задач нами было проведено три ошта на цыплятах-бройлерах кросса *Бройлер-6" м "Лгёро-б" с суточного до 49-дневного возраста в условиях вивария ВШИФБиП с.-х.животных.

Дпд оценки антиоксидантных свойств селенопирана нами был про* веден Эксперимент 1а т1*го с использованием модели термического окисления метилового о^яра олеиновой кислоты.

С целью получения дополнительных данных по антирадикальным свойствам СП-1 был проведен опыт на щплятах-бройлерах, в рацион которых специальна вводили окисленный: жир (концентрация гидроперекисей 0,265 мЦ/г) (I опытная группа), жир, окисленный в присутст» вии СП-1 в дозе 10 мг селена/чг жира Ш опытная группа) и нормальный жир (контроль).

Антиексидантные свойства гиствдината цинка оценены по его способности тормозить автоокисление адреналина.

Схемы проведения второго и третьего опытов на цыплятах-бройлерах представлены в таблицах I и 2.

Цмплята получали рацион с кукурузно-пшеничной основой, сбалансированный по всем питательным веществам.

В исследованиях были определены следующие показатели:

- гемоглобин крови по Драбкину цианметгемоглобиновым методом; .

- общий белок крови по Лоури (1окгу ,1954);

- относительное количество.Т- и В-лим$оцитов в периферической крови С¿оп481 ,1972; Лозовой с соавторами,I986);

Состояние ентиоксидантной системы крови оценивали по активности основных ферментов антирадикальной защиты крови - супероксид-

Таблица 2

Схема третьего опыта

Испытуемые {Контроль- !-:- Опытные группы-

соединения |ная группа} I! П !Ш| 1У !У I У1

Сульфат цинка, мг цинка/кг корма 50 ' 45 45 50 50 50 50

Гистидинат цинка, мг цинка/кг корма 5 5 - _

Селенопиран, мг селена/кг корма _ _ 0,3 0,3 _ _

Кленбутерол, мг/ кг корма 0,3 1,0 0,3 1,0 0,3

Таблица 3

Схема проведения производственного опыта

Испытуемые соединения ¡Ко"^|ная1 0пытные ТУ™ -

J - | группа | х ; п I Ш_

Кленбутерол, мг/кг корма - 0,3 0,3

Селенопиран, кг селена/

кг корма - 0,3 - 0,3

дисмутазы (СОД) и глутатионпероксидазы (ГПО). Активность СОД определяли по степени торможения автоокисления адреналина (Miera , Pridovich ,1972) в модификации О.С.Брусова с соавторами (1976), активность ГШ - по методу Моина В.М. (1986).

Оценку функциональной активности монооксигеназной системы печени проводили определением количества основного фермента системы цитохрома Р-450 и его каталитической активности. Микросомальную фракцию выделяли методом дифферентального центрифугирования. Элек трофорез белков микросомальной фракции проводили в полиакриладад-йом геле.

В третьем опыте количество общих липидов в плазме крови опре-

* деляли по Фол чу, содержание неэстерифщированных жирных кислот (НЭМ) - тонкослойной хроматографией с последующим количественным определением бихроматным методом, антиокислительную активность липидов плазмы крови - по Бурлаковой Е.Б.(IS68). В съедобной часта туши определяли содержание абдоминального жира.

На протяжении всех опытов вели учет сохранности поголоеья, поедаемости ксрмов и скорости росте.

На основании полученных результатов были выбраны оптимальные дозы и варианты сочетания изучаемых препаратов,' которые апробированы в производственных условиях на птицефабрике "Васильевская" Пензенской области (табл.3).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛВДОВАШЙ

1.Антиоксидантные свойства органических соединений цинка и селена

В соответствии с принятой нами рабочей гипотезой для разработки способа повышения продуктивности и резистентности дешлят-бройлеров в качестве наиболее оптимальной схемы рассматривалась возможность применения различных доз агониста J> -адренергических рецепторов кленбутерола и органических соединений цинка и селена.

Органические соединения цинка и селена обладают антиоксидант-ныыи свойствами в условиях in vitro . Свойства гиствдината цинка нейтрализовать свободные радикалы исследовали по его способности la vitro тормозить автоокисление адреналина (рис.1). При введении гистидината цинка в реакционную среду в концентрации 8 х 10"^ Ц/л набладилось ускорение окисления адреналина, что свидетельствовало о проксидантном действии соединения. При снижении концентрации наблюдался противоположный аффект.

Исследование антиокислительных свойств селенопирала in vitro проводили на модели термического окисления метилового эфира олеиновой кислоты. Скорость торможения образования гидроперекисей в системе зависела от концентрации СП-I (рис.2).

Для получения более весомых, доказательств внтиоксидантных свойств селенопирала проведен модельный опыт на цыплятах-бройлерах. Цыплятам в составе рациона скармливали окисленный жир II опытная группа), жир, окисленный в присутствии СП-I Ш опытная группа) или нормальный жир (контрольная группа).

Включение в рацион птицы окисленного жира повлекло за собой резкое снижение активности антиоксидантной системы организма, понижение (на 12%) концентрации гемоглобина крови, ингибирование клеточных иммунных реакций. Эти процессы инициировались массированным введением свободных радикалов жирных кислот, которые образовывались при неферментативном окислении жира. И, как следствие, наблюдалось отставание в живой массе цыплят этой группы по сравнение с контролем. Внесение перед окислением жира СП-I не только полностью устраняло перечисленные отрицательные эффекты, но и по-

оптическая плотность

0,250 -0,200 _

время, мин-

1 2 3 4 5 Рис.1. Кривые автоокисления адреналина а - автоокисление чистого адреналина;

б - автоокисление адреналина при добавлении сульфата цинка; в,г,д - автоокисление адреналина при введении гистидината цинка

в концентрации:

в - Ш х КГ4) Ц/л; г - (8 х Ю-6) Ц/л;

д - 18 х Ю-7) М/л

концентрация 'перекисей, мЦ/л

-I-1-!-

4-

время, часы

1 2 3 4 5 9

Рис.2. Кривые окисления метилового э^ира олеиновой кислоты

а - окисление чистого метилолеата;

б,в,г - окисление метилолеата при введении в реакционную

среду селенопирана в концентрации:

б - 0,012 мг селена/мл метилолеата; в - 0,063 мг селена/мл метилолеата; г - 0,125 мг селена/мл метилолеата.

вышало активность глутатионпероксидазы, одного из основных ферментов антирадикальной защиты организма.

2.Влияние гистидината цинка и селенопирана на антиокси-даитную, иммунную, монооксигеназную системы и продуктивность иыплят-бройлеров

Исследования на идолятах-бройлерах свидетельствуют о том, что влияние гистидината цинка на антиоксидантную систему зависит ст количества его в корме птицу. Наблюдалась доэозависимая способность данного соединения нейтрализовать свободные радикалы в крови. Ори использовании хелата в дозе 25 мг цинка/кг корма происходило увеличение активности обоих антирадикальных ферментов. И, наоборот, введение гистадината,цинка в количестве 12 мг/кг корма приводило к снижению активности супероксиддисмутазы (СОД) в 14-суточном возрасте на 15,956, на фоне ее повышения у цуплят контрольной группы. Вероятно, наблццаемый эффект может быть непосредственно объяснен проявлением супероксвданионперехватывапцей способности соединения.

Включение в^рацион птичы селенопирана также увеличивало активность4' СОД в прямопропбрциональной зависимости от дозы соединения. Возрастание активности данного фермента может быть связано либо в с непосредственным влиянием препарата на фермент, либо с усилением функционирования микросомальной монооксигеназной системы печени, где, по-видимому, происходит первый этап окисления этого соединения. В процессе работа, монооксигеназная система в значительных количествах вырабатывает супероксвданион - основной индуктор актив-' ности..С0Д.

По иному изменяется активность глутатионпероксидазы (ГТЮ) при введении в корм цыплят селеноорганического соединения. Начиная с минимальной дозы 10,1 мг селена/кг корма), активность ПЮ выходит на плато. При всех испытуемых дозах во все возрастные периоды имело место стабильное повышение активности данного фермента на 4977 % по сравнению с контролем. Известно о существовании прямой зависимости между концентрацией селена в крови и активностью ГШ. Возможно, что селен, входящий в состав СП-I, способен активировать Г110. В наших исследованиях in vitro показаны антиоксидантные свойства селенопирана. Если предположить, что эти свойства сохраняются и jn vivo , 'то становится вполне объяснимым факт повышения активности ГЛО.

Потребление цыплятами гистидината цинка существенно повлияло

■ Таблица 4

Относительное содержание Т-лимфоцитов в периферической крови цыплят-бройлеров, %

Возраст,¡Контроль- { 0штные ГРУ"Ш -

' ' II П I Ш ! 1У I У ! У1

28 45,0+ 4,6Г 50,0+ 0,7- 49,5+ 55,0+ 1.3- 50,5+ 1,5- 50,0+ 1,7- 48,5+ 1.2-

49 40,5+ 0,5" 47,5+ 0..5Г 54,0+ о!ег. 54,5+ 0,6" 37,0+ 0,6_ 37,5+ 0,8" 44;{±

на их иммунный статус. Полученные нами результата показывают, что органическое соединений цинка обладает стимулирующим действием на клеточное звено иммунной системы цыплят-бройлеров (табл.4). Во всех трех опытных группах цыплят, в корм которым вводили гистидинат цинка, наблодалось достоверное увеличение относительного количества Т-лимфочитов по сравнению с контролем (р<0,05). Данное обстоятельство, по-видимому, связано с присутствием иона цинка в составе соединения. При использовании селенопирана в кормах црплят-брой-леров НУ,У и У1 опытные группы) достоверных различий относительного числа Т-клеток по сравнению с контролем не отмечено (р>0,05).

Относительное содержание В-лимфоцитов у цыплят всех опытных групп было на уровне контроля.

Присутствие органических соединений цинка и селена в рационе , птицы повлияло на состояние микросомальной монооксигеназной системы печени. При всех трех испытуемых дозах препарата цинка у 14-су-то'-кых цыплят наблюдалось снижение концентрации цитохрома Р-450 со стабилизацией в последующие возрастные периоды. Снижение количества гемопротеида происходило на фоне повышения его каталитической активности. Данное понижение содержания цитохрома Р-450 происходило, по-видимому, в результате ослабления биосинтеза собственно ферментного белка.

Более выраженные изменения происходили при введении в рацион цыплят-бройлеров органического соединения селена, являющегося типичным ксенобиотиком для организмл птицы. Функциональная активность монооксигеназной системы печени повышалась при использовании селенопирана в кормах цыплят: увеличивалось как содержание цитохрома Р-450 (рис.3), так и его каталитическая активность. Исходя из этого можно утверждать, что ниэкомолекулярное селеноорганиче!кос соединение СП-1 индуцирует ыонооксигеназнуп систему печени и пгр-

Содержание цитохрока Р-450

г

0,?50-

.5

0,450-

а

0,150-

14

28

49

Возраст, сутки

Рис. 3. Кривые возрастных изменений содержания цитохрома Р-450 а - контроль;

б - концентрация селена 0,1 мг/кг корма; в - концентрация селена 0,2 мг/кг корма; г - концентрация селена 0,3 мг/кг корма.

вые этапы окисления препарата, видимо, происходят именно в этой системе. Данные злектрофоретического исследования белков микросо-мальной фракции позволили расшифровать механизм этого процесса:' " препарат специфически индуцирует изоформу цитохрома Р-450, находящуюся в области белков с молекулярной массой 49 кД. Именно данная изоформа, вероятно, ответственна за метаболизацию этого соединения.

Введение в рацион даплят-Сройлеров гистидината цинка в дозе ¿5 мг/кг корма (в рассчете на цинк)1 увеличивало живую массу птицы на 6,2 % по сравнению с цыплятами контрольной группы.

Наиболее эффективно влияла на продуктивность цыплят-бройлеров доза селенопирана, равная 0,3 мг селена/кг корма. Цьшлята атой группы превосходили контрольных на 8,0 %. Необходимо отметить, что более выраженные различия при использовании обоих соединений наблодались у петушков-бройлеров.

3.Комплексное использование кленбутерола с гистидинатом

цинка и селенопираном в кормлении цыплят 3.1. Биохимические показатели крови

Основное действие агонистов £ -адренергических рецепторов заключается в изменении интенсивности и направленности метаболи-

Таблица 5

Биохимические показатели крови цыплят-бройлеров

Биохимические'|Контроль- I— 0пытше ^У1™ показатели |ная группа} I ( П } Ш { 1У | У | У1

Глюкоза,мг# 247+ 779 253+ 2270 269+ 1570 260+ 1470 242+ 2370 249+ 1770 670

Мочевая кислота, их% 7,56+ 0,57" 6,34+ 0,54" 5,60+ 0,44Г 5,00+ 0,44" 5,29+ 0)44— 6,07+ 0,40" 5,49, 0,62"

Обший белок, мг/мл 78,5+ 7,9" 57,0+ 68,3+ 8,9" 74,6+ 5,ОТ 81,8+ 6,7" 80,6+ 10,4" 76,3 + 6,4"

Общие лилиды, мг$ 307+ 2470 437+ 4470 481+ 8270 517+ 5270 522+ 4370 425+ 5870 435+ 40711

ЮМ, мг£ 40,2+ 4,95 52,5+ 4|1Т 53,0+ 4,7о 57,8+ 4,6Б 55', 8+ 4,5В 59,5+ 6,10 54,2 + 4,35

ческих потоков. Использование кленбутерола в кормах цщшят-оройле-ров повлияло на основные обменные процессы организма (табл.5). Концентрация глюкозы на двадцатый день дачи препарата как в отдельности, так и в сочетании с гисткдинатом цинка и селенопираном была на довольно постоянном уровне, но была повышенной на шестые сутки дачи препарата. Наблюдаемое увеличение концентрации глюкозы сьиде-тельствовало об усилении процессов гликогенолиза

Отмечалось снижение концентрации мочевой кислоты у иуплят всех опытных групп, что свидетельствовало о снижении величины деградации протеина в тканях и органах птицы.

■ Необходимо отметить, что концентрация общего белка в кропи цыплят Г опытной группы, которым скармливали максимальную дозу кленбутерола в сочетании с гистидинатом цинка,.была на 13 % ниже, чем у цыплят контрольной группы.

Включение в корм цыплят-бройлеров кленбутерола как в отдельности, так и в сочетании с солями цинка и селена повлекло за собой увеличение содержания в крови общих липидов и ШЖ. Такую реакции организма можно объяснить усиленном процессов липолиза в жироЕоИ тк&ни под действием кленбутерола |1 особенностями липогенеза в печени цыплят.

3.2.Функциональное состояние антиокислительной, иммунной и монооксигеназной систем имплят-оройлеров

Система антирадикальной защиты организма своеобразно отрсаги ■

Таблица Ь

Антирадикальная активность крови цыплят-бройлеров в 42-суточном возрасте

Биохимические '.Контроль- |-Огштные-гщт-;-

показатели ¡ная группа] I I П ! Ш ] 1У ! У I У1

Активность СОД,

¿/мг белка 4,54+ 9,49+ . 6,00+ 8,26+ 6,65+ 0,86+ 4,78+

0,60" 1.60Г IÍ4CГ 1,(ХГ 1.0СГ IÍI0" 0.6СГ

Активность ГТЮ,

i/л крови 28,3+ 23,1+ 24,0+ 39,2+ 33,7+ 24,4+ 27,8+

0Í4Ü 2|б0 2,30 3,20 2,70 I¡50 I¡50

Антиоксидантная активность липи-

дов, отн.ед. 300+ 215+ 373+ 540+ 482+ 218+ 435+

21" 17" 59" 8ÍT 22" 4СГ

ровала на введение в рацион цыплят кленбутерола как в отдельности, так и в комплексе с органическими соединениями цинка и селена (табл.6).

Наблюдалось увеличение активности супероксцвдисмутаэы (СОД) почти во всех опытных группах, кроме У1, где использовали только кленбутерол в дозе 0,3 мг/кг корма. В группе с максимальной дозой клонбутерола СУ) и в группах, где в корм чрплят вместе с кленбуте-ролсм вводили гистидинат цинка(1,П), на фоне повышения активности СОД отмечалось снижение активности ГТЮ. Возможно, данное снижение связано с распадом ферментного белка, который мог быть усилен повидением в крови перекисных продуктов.

Подтверждением шсказанного предположения может служить факт достоверного снижения антиокислительной активности липидов крови (на Zcj%) .. . I и У групп. У цыплят, получавших кленбутерол вместе с ееленопираном (Ш и 1У группы), отмечалось достоверное выраженное увеличение активности СОД (на 81,9 и 46,4 %) и ГШ ( на 38,6 и 19,1 %) с одновременным возрастанием антиоксидантной активности липидов на 240 и 182 относительных единицы, соответственно, по сравнению с контролем (хз<0,05). Усиление антиоксидантной активности липидов крови шплят этих групп мы склонны связывать с ан-тиоксидантними свойствами самого селенопирана.

Результаты наших исследований показали, что применение кленбутерола в кормлении цыплят-бройлеров существенно влияло на состояние ыонооксигеназной системы печени (табл.7). Необходимо отметить,

Таблица 7

Влияние кленбутерола, соединений цинка и селена на монооксигеназную и иммунную системы даплят-бройлертв

Показатели ¡Контроль- ! ¡ная группа| 1 1 Опытные ГРУППЫ

1 I 1 П ! Ш ! 1У ! У 1 У1

Содержание ци-тохрома Р-450, нМ/мг микр.белка 0,25+ 0,02" 0,12+ 0,02" 0,17+ 0,0ЗГ 0,23+ 0,25+ 0,02" 0,03" 0,16+ 0,02" 0,27+ 0,02"

Каталитическая активность ци-тохрома Р-450, £Умг белка 3,01+ 0,2?" 6,61+ 1,01- 4,22+ о.еог 4,93+ 4,55+ 1,20" 1,0СГ 3,09+ 0,80~ 4,14+ 0,68"

Содержание Т- ЛИМ(}ОЦИТОВ, % 40+ 173 52+ 172 53+ 177 43+ 40+ 171 079 39+ 075 40+ 174

Содержание В-лимфоштов, % 13+ 170 15+ 270 12+ 273 13+ 13+ 075 270 11+ 273 11+ 172

что в тех же грушах, где наблюдалось снижение антиоксидяятного статуса (I ,П и У), происходило уменьшение содержания иитохромя Р-450, а в группах с комплесным использованием кленбутерола и гис-тидината цинка II и П) это снижение сопровождалось увеличением каталитической активности гемопротекца и составило 219 и 136 % по отношению к контролю (р<0,05). Видимо, наблвдаемое уменьшение концентрации гемопротеида связано именно с усилением процессов пере-кисного окисления и повреждащим воздействием продуктов реакции на ферментный бнлок. При использовании кленбутерола в максимальной из испытуемых дозе 11,0 мг/кг корма), видимо, имел место э№?кт увеличения в микросомальной фракции количества непредельных жирных кислот - основного субстрата перекисных процессов. Возможно, на свободнорадикальнне процессы в еикросомальной Фракции цыплят I и II опытных групп оказал влияние гистидинат цинка.

Введение в рацион цыплят-бройлеров селеноорганического соединения стабилизировало ферментный белок. Стабилизирующий эффект се-ленопирана естественнее всего объяснить его антиоксидантными свойствами, что предотвращало токсическое действие перекисей на гемо-протенд.

Существенного влияния кленбутерола на относительное количество Т- и В-линфодатов в крови иыплят нами не обнаружено. При коми-

лсксном использовании кленбутерола с гистидинатом цинка наблюдалось достоверное увеличение числа Т-клеток в крови иыплят (р<0,05). Стимуляция клеточных иммунных реакций в данном случае безусловно связана с присутствием в рационе гистидината цинка, иммуностимулирующие свойства которого были показаны в предыдущем опыте.

Стимулирующее влияние гистидината цинка на клеточное звено иммунитета можно объяснить, основываясь на гипотезе, предложенной И.Е.Ковалевым и О.Ю.Полевой (1978, 1980). Ими впервые было высказано предположение о существовании реципрокных функциональных взаимоотношений между монооксигеназной и имунной системами. Главный связующий механизм этих систем основан на том, что в результате взаимодействия целого ряда низкомолекулярных веществ с монооксигеназной системой происходит, как правило, их превращение в более полярные и более легко выводимые из организма продукта. Однако, процесс окисления этих субстратов часто связан с образованием промежуточных реакционноспособных метаболитов (эпоксиды, хиноны, свободные радикалы и т.д.). Б зависимости от доз химических соединений, баланса образования реакционноспособных продуктов и скорости их нейтрализации промежуточные продукты могут вступать в ковалент-ные связи с макромолекулами клетки. При этом они образуют так называемые естественные коньюгированные антигены, когорте, в свою очередь, способны вызывать специфический иммунный ответ, направленный на связывание потенциально реакционноспособных лигандов в плазме крови и приводить тем самым к уменьшению их концентрации внутри клетки. Образование небольших количеств реакционноспособных метаболитов безопасно для организма - он находит другие пути их нейтрализации. Процесс ковалентного связывания низкомолекулярных лигандов с макромолекулами в такой ситуации не развивается.

Проанализировав полученные нами результаты, функциональной активности монооксигеназной и иммунной систем логично предположить, что активная клеточного звена иммунной системы в группах с до-барками гистидината цинка (I и П группы во втором опыте) происходила именно благодаря реакциям, протекавшим в системе цитохрома Р-450. Экспериментальные подтверждения высказанной гипотезы мы видим на примере I и П опытных групп, где происходило уменьшение содержания китохрома Р-450 с одновременным усилением его каталитической ективности. Следовательно, имело место явное увеличение концентрации свободных радикалов в системе. Вероятно, при исполь-«обании гистидината цинка, как в отдельности, так и в сочетании с

ыенбутеролом образовывалось значительное количество реакиионноспо-собных метаболитов, которые, в свою очередь, могли вполне вступать в описанные процессы биологического коньюгирования. На образовавшиеся коньюгаты иммунная система давала специфическую ответную реакцию, выразившуюся в увеличении относительного количества Т-лкм-фоцитов в периферической крови. В случае введения хелатного соединения в комплексе с кленбутеролоы II и П группы третьего опыта) на--блвдалось еще более усиленное снижение концентрации гемопротееда. Возможно, данное обстоятельство связано с увеличением потока ненасыщенных жирных кислот через систему цитохрома Р-450, концентрация которых возрастала при использовании кленбутерола в присутствии гистидината цинка. Такая комбинация, очевидно, явилась благоприятной для активации свободнорадикальных процессов. Видимо, вырабатывалось такое количество реакционноспособных метаболитов, что, наряду с коньюгированием, индуцировавшим иммунный ответ, происходило разрушение ферментного белка под действием избыточных доз свободных радикалов.

Наблюдавшееся снижение содержания гемопротеида в группе ццп-лят, получавших только кленбутеролв в дозе 1,0 мг/кг корма, не сопровождалось стимуляцией клеточного звена иммунной системы. Возможно, уменьшение концентрации цитохрома Р-450 в данном случае могло быть связано не с распадом ферментного белка, а явилось следствием ослабления синтеза фермента. Это обстоятельство подтверждено усилением каталитической активности фермента у цыплят данной группы. У цаплят остальных групп снижения количества цитохрома Р—150 не происходило, следовательно, организм справлялся с нейтрализацией вырабатываемых системой реакционноспособных метаболитов, неприбегая к помощи биологического коньюгирования.

Полученные нами данные функциональной активности цитохрома Р-450 микросом клеток печени не исключают, что аналогичные процессы вполне могли происходить и в системе цитохрома Р-450, хорошо представленной на плазматической мембране макрофагов и Т-лимфоцитов.

3.3.Качественный состав тушек цыплят-бройлеров

Полученные нами данные свидетельствуют о снижении содержания жира в тушках цыплят-бройлеров (табл.8). При использовании кленбутерола в тушках цыплят всех опытных групп, кроме I, снижалось содержание абдоминального жира. В группах, где применяли только кленбутерол (У и У1) снижение содержания жира составило 22,6 и 17,2%,

Таблицу.8

Качественный состав тушек даплят-бройлрров

¡Контроль- } Слитные группы

Показатели ,ная группа, i i п I Ш 1 1У 1 У I Л

Количество абдоминального жира, г 42,13+ 44,54+ 36,86+ 33,14+ 36,60+ 32,60+ 34,90+ 114СГ 7.9СГ 7|4СГ ^бЭГ 1.6СГ 1,'93Г 2,4£Г

Содержание жира в съедобной

части туши, г 41,87+ 40,95+ 38,17+ 35,50+ 39,41+ 36,67+ 38,28+

1,63" о,ser 1,НГ 0,8СГ i;<xr i,ior i.ocr

Достоверное снижение отложения жира происходило при комплексном использовании кленбутерола и селенопирана (р<0,05). Количество абдоминального жира в Ш и 1У опытных группах по отношении к контролю составило 78,6 и 86,8 %, соответственно. Весьма примечателен полученный экспериментальный факт, что сочетание кленбутерола и гис-и-идината цинка значительного влияния на зтот показатель не оказала. С большой доле вероятности можно предположить, что действие кленбутерола обусловлено взаимодействием со специфическими рецепторами клеточных мембран и запусканием поликомпонентного каскадного механизма аденилатциклазной системы. В результате во внутриклеточном пространстве вдилоцитов повысилась концентрация циклических монофосфатных нуклеотидов с сопровождающейся активацией ферментов липолиза и ингибированием ферментов липогенетического пути.

Б значительно меньшей степени кленбутерол повлиял на содержание межмышечного жира. Во всех опытных группах, кроме Ш, количество жира в съедобной части туши цыплят-бройлеров также снижалось, но недостоверно (р>0,05).

Полученный материал позволяет утверждать, что введение в рацион шплят-бройлеров агониста ^-адренергических рецепторов кленбутерола как одного, так и в сочетании с органическим соединением селена оказало благоприятное влияние на качественный состав туши. Использование кленбутерола в комплексе с органическим соединением цинка к аналогичным результатам не приводило.

3.4.Интенсивность роста цдалят-бройлеров

Согласно схеме опыта кленбутерол вводили в рацион цыплят-бройлеров с 28- до 49-суточного возраста, органические соединения цин-

Таблица 9 Продуктивность даплят-бройлеров

Показатели - °ШТНЫе ГИГИПЫ

_|Ная группа! х ; П 1 М ! 1У I У

Живая масса в 49 суток, г к1536+ 25Г 1607+ 24" 1603+ 22Г 1617+ 25- 1645+ 2ЭГ 1572+ 29" 1616+ 2СГ

п1812+ 35" 1840+ 26" 1855+ 2ег 1876+ 2СГ 1852+ 30" З1-* мси со 1866+ 31-

Среднесуточный прирост, г 33,30 33,53 34,14 34,81 34,92 33,69 34,С?

Расход корма на кг прироста, кг 2,22 2,21 2,15 2,09 2,08 2,21 2,12

Сохранность поголовья, % 93,1 94,8 97,4 97,5 97,5 92,9 94,7

Сохранность поголовья за период 28-49 суток 98,2 96,4 99,1 99,1 99,1 97,2 59,1

п - петушки; к - курочки

ка и селена скармливали на протяжении всего периода выращивания.

В 28-суточном возрасте мы отмечали достоверные различия в живой массе петушков, пслучаотих селенопиран 13,5 %) (р<0,05). В атой группе наблюдалось небольшое увеличение живой массы курочек.

Введение в корм кленбутерола еще более значимо отразилось на живой массе цыплят (табл.9). Во всех опытных группах, кроме У, Где кленбутерол скармливали в дозе 1,0 мг/кг корма, к 49 суткам наблюдалось достоверное увеличение живой массы курочек (р<0,05). Разница с контролем составила 2,3 - 7,1 % для I - У1 групп, соответственно. Что касается скорости роста петушков, то достоверные различия 13,5 %) по сравнению с контролем отмечены лишь в Ш опытной группе, где в корм даплят вводили кленбутерол в сочетании с селенопираном (р<0,05). Отмеченное отличие в живой массе петушков, по-видимому, в большей степени связано с действием селенопирана.

Увеличение живой массы цыплят-бройлеров объясняется тем, что кленбутерол в данной ситуации проявлял "зйфект участия", т.е. изменял интенсивность и направленность метаболических потоков в тканях в сторону уменьшения липогенеэа и деградации протеина, .усиления липолиза и синтеза белка.

Применение кленбутерола в различных концентрации в отдельных случаях повыпало эффективность использования корма. Значительные снижения затрат корна ка килограмм прироста живой массы Йыле полу-

чены в Ш и 1У группах (на 5,9 и 6,4 %).

Наибольшая сохранность поголовья за весь период выращивания била во П, Ш и 1У группах. Интересно проанализировать по атому показателю отдельно период выращивания цыплят с 28- до 49-суточного возраста, когда они с кормом получали кленбутерол. Во всех опытных группах, кроме 1 и У, наблюдалось незначительное Сна 0,9 %) увеличение сохранности. А в группах, где доза кленбутерола была 1,0 мг/кг корма (У) и в сочетании его с хелатом (I), наблюдалось снижение сохранности поголовья птииы по сравнению с контролем. Более существенным снижение сохранности было в I опытной группе (1,8

Наблсдаемое снижение сохранности поголовья мы склонны связывать с усилением свободнорадикальных процессов. Ранее обсуждалось» что именно у цыплят I. опытной группы было пониженным содержание общего белка крови, ослаблена система антирадикальной запри», что явилось следствием уменьшения антиоксидантной активности липидов крови. У этих же цыплят отмечено снижение концентрации цитохрома Р-450 в иикросомальной фракции, что, по-видимому, было связано с повреждавшим действием свободных радикалов. Казалось бы, что скорость роста в такой ситуации должна снизиться, однако, в действительности этого не происходило, что может быть объяснено общим анаболическим эффектом кленбутерола.

По полученным нами данным наиболее благоприятным сочетанием оказался комплекс кленбутерола с селенопираном в дозах 0,3 ыг/хг корма. .

Именно данное сочетание препаратов было апробировано на шеститысячном поголовье птиц» в условиях птицефабрики "Васильевская" Пензенской области. Произведена также проверка каждого препарата в отдельности. Экономический эффект от применения исследуемых препаратов составил 85,9? рублей на каждую I ООО голов при использовании селенопирана, 48,11 рублей - при применении кленбутерола и 92.24 рубля - в случае комплексного использования кленбутерола с : органическим соединением селена.' *

ВЫВОДИ

1.В научно-хозяйственном и производственном опытах установлен но, что комплексное применение агониста£-одренергических рецепторов кленбутерола и селеноорганического соединения антиоксидантной. прирепы обеспечивает поддержание на оптимальном уровне свободнора-пика.тьнк* процессов, е значительной степени определяпцих продук-тигнасть и резистентность чыялят-бройлерой.

2.Новое селеносодержащее соединение СД-I проявляет антиокси-дантные свойства in vitru тормозя накопление перекисей жирных кислот. Обнаружена прямая зависимость между интенсивностью окисления метилолеата и концентрацией СП—I в реакционной смеси. Гисткдинат цинка в зависимости от дозы способен проявлять как анти-, так и прооксидантные свойства.

3.Включение в рацион цыплят-бройлеров 3% окисленного жира вызывает резкое снижение активности супероксиддисмутязы в 2,5 раза и глутатаонпероксидазы на 38 %. Концентрация гемоглобина в креги снижается на 12 %. Супрессируется клеточное звено иммунитета, fi результате ухудшается скорость роста и сохранность хдаплят. Внесение в жир перед окислением СП-1 в дозе 10 мг селена на кило грат жира снимает все перечисленные отрицательные явления.

4. Начальный этап окисления СП-1 у щплят проходит через терминальный компонент монооксигеназной системч печени - цитохром Р-450. Селенопиран индуцирует синтез ¿Ьеру.ентного белка изотермы ци-тохрома Р-450 с молекулярной массой 49 кД и спектром поглощения 450 нм. По-видимому, именно этот изой*>рмент ответственен за мета-болизацию СП-1.

5.Включение гистчдината цинка в корм цуплят-бройлеров избирательно стимулирует клеточный иммунитет, повышая относительное количество Т-лим^оцитов в крови. В дозе 25 мг цинка/кг корма препарат повышает живую массу шплят-бройлеров на 6,2 %.

о.Кленбутерол способен существенно влиять на интенсивность и направленность метаболических потоков в организме цыплят. При его использовании повышается содержание в крови общих липидов, НЭ£К, глюкозы, белка в мышечной ткани и снижается концентрация мочевой кислоты.

7. При введении в рацион кленбутерола прослеживается четкий дозозависимый эффект его влияния на антиоксидантный статус крови цыплят. Минимальная из испытанных доз (0,3 мг/кг корма) поглотает антиокислительную активность липидов на 135 относительных единиц, при дозе 1,0 мг/кг корма она снижается на 82 относительные единицы.

' 8.Комплексное применение кленбутерола в дозе 1,0 мг/кг корма с гистидинатом цинка создает условия для активации свободнорадикальт!, них процессов. Повышается активность основных ферментов антиряди-кальной защиты с одновременным снижением количества цитохрома Р-450 на 36 %, антиокислительной активности липидов на 29 % и концентрации белка.

9.Включение в рацион цыплят-бройлеров кленбутерола в сочетании с СП-1 нормализует антиоксидантный статус организма, повышая антиокислительную активность липидов.

10.Применение кленбутерола в дозе 0,3 мг/кг корма увеличивает живую массу цыплят на 4,1 %, снижает содержание абдоминального жира на 17,2 %, а в сочетании с Ш-1 в дозе 0,3 мг селена/кг корма повышает живую массу на 4,6 %, снижая содержание абдоминального жира на 13,2 %. Затрата корма на единицу продукции уменьшаются на 6,4

11.Стоимость дополнительно полуденной продукции при использовании кленбутерола в дозе 0,3 мг/кг корма составила 43,11 рубля на I ООО голов цыплят-бройлеров, а кленбутерола в сочетании с СП-1 -63,22 рубля.

Практические предложения

С целью повышения продуктивности и резистентности цыплят-бройлеров рекомендуется вводить в корм птицы агонист Р-адренергичес-ких рецепторов кленбутерол в сочетании с селеноорганическим соединением СП-1. Оптимальные доьы введения кленбутерола с 28- до 49-суточного возраста составляют 0,3 мг/кг корма, а СП-1 - с суточного до 49-дневного возраста 0,3 мг селена/кг корма.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1.Боряев Г.И..Галочкин В.А..Блинохватов А.Ф. Функциональная активность монооксигеназной системы печени цыплят-бройлеров при введении в рацион селеноорганического соединения СП-1//Билл.ВНИИ ФБи11 с.-х. животных. -1950. -Вып. 3(99). -С. 70-73.

2Л'алочкиь В.А. .Боряев Г.И. Влияние комплексного использования кленбутерола с органическими соединениями цинка и селена на антиоксидантный статус и продуктивность цыплят-бройлеров// Бюлл.' ВШИФБиП с.-х. животных.-1992.-Вып.21103).-С.