Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Использование биотехнологических методов в генетическом мониторинге разведения крупного рогатого скота

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Использование биотехнологических методов в генетическом мониторинге разведения крупного рогатого скота"

На правах рукописи

ЩИНОВ Михаил Юрьевич

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ В ГЕНЕТИЧЕСКОМ МОНИТОРИНГЕ РАЗВЕДЕНИЯ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

03.00.23 - Биотехнология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Дубровицы, Московская область 2001

Работа выполнена во Всероссийском государственном научно-исследовательском институте животноводства (ВИЖ)

Научные руководители: доктор сельскохозяйственных наук,

академик РАСХН

Л* К. Эрнст

доктор биологических наук

Н. Г. Букаров

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор Н. И. Сергеев доктор биологических наук

А. И. Абилов

Ведущее учреждение: Российская академия менеджмента в

животноводстве

Запила диссертации состоится гМ/2.9 2001 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д. 006.013.01 во Всероссийском государственном научно-исследовательском институте животноводства.

Адрес института: 142132 Московская областьЛ^З^олыжий район,

пос. Дубровицы. -

С диссертацией можно ознакомиться

Автореферат разослан " 00 *>, г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических на; В. II. Губанова

" ^ II ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РЛБОТЬГ

, . Актуальностьработы.Обмен генетическим' материалом между странами сопровождается распространением различных, инфекционных болезней (например, лейкоз у крупного рогатого осота, губчатая энцефалопатия),. а также ¡заболеваний,"вызываемых редкими мутациями (ВЬАО-синдром).'В связи с этим возникла необходимость ^строгого генетического; контроля племенного мате- < -риала. '"-'■'V: '/'■/,■ ■ ■ V - \

Рентабельное высокопродуктивное молочное-скотоводство основывается на . использовании достижений науки и техники,^ ко-/ торые обогатили теорию и практику разведения крупного рогатого : скота методами анализа наследственности) генетического маркиро- -вания, и мониторинга с использованием маркеров первого'поколения (ЕА - эритроцнтарные антигены,-белки биожвдкостей). (Сороковой П, 1974, 1981; Машуров А. М., 1980; Букаров Н Г., 1995; Попов Н. А., 1998; Прохоренко П. Н. и др1,2000).. •:'..••

.V /Дальнейшие: разработки с использованием новых техноло-", гий разведения скота, учитывающих индивидуальные и групповые ' генетические и .биологические характеристики 'животных;' повы- -шающих эффективность генетического мониторинга, требуют' широкого использования биогехнологических приемов,-в частности . маркеров II поколеш™ (ДНК-маркеры).Они отражают полиморфизм генов.на уровне ДНК^ выявляемых-методомшолимёразной цепной реакции (ПЦР) (ЭрнстЛ.К., 1990; Марзанов Н. С." и др., 1997; Глазко.В. И.,-1998; Зиновьева Н/А и др4 1998; Попов А: Н. и др., 1998; Калашникова Л. А. и др.; 2000). : ••.!•:~ "•>•.

Выполненные эксперименты являлись , составной частью тематического плана (тема № 01.01.01) научно-исследовательских работ Всероссийского Государственного НИИ животноводства.

ЦЕНТРАЛЬНАЯ -НАУЧНАЯ САБЛИСТЕКА Моек; свльски^о-». анад«к!И" ; им.'ЬС А. "['нииояэваа ■

И на. №... —_......—

Цель ц задачи исследования. Цель исследований состояла в оценке возможности применения тест-системы для генетического мониторинга разведения крупного рогатого скота. Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

- .. дать оценку использования ЕАВ маркеров для сравнительного ■ . . анализа генетической структуры племенных стад; < - ;■ >■

оценить возможность использования эритроцитарных антиге-, • нов и генетических вариантов белков молока в качестве маркеров продуктивности;

- оценить возможность использования тест-системы на основе ПЦР для контроля наследственных аномалий у черно-пестрого

скота (на примере ВЬА1>); . ; ^ -- '; ■

- оценить точность молекулярно-генетического метода выявления лейкоза крупного рогатого скота на основе ПЦР в сравне-

; -нии с общепринятыми методами. :

: Научная новизна исследований заключается в оценке возможности использования биотехнологических методов при генетическом мониторинге оценки инфицированностн племенного материала, болезнетворными агентами (лейкоз), наличия у-животных генов отаетственных за : носительство наследственных аномалий (ВЬАО — дефицит адгезии лейкоцитов), обуславливающих «молекулярные» болезни, а также-ДНК маркеров, определяющих хозяйственно-полезные признаки. -- ; - Д ; '

Практическая значимость. Система генетического мони-; торинга, основанная на использовании маркеров I и II поколения, наиболее полно отвечает потребностям паспортизации и сертификации племенных животных и стад, использования полученной информации для повышения эффективности разведения скота. -

' ''Апробация работы. Результаты исследований по теме диссертации доложены и одобрены на международной научной конференции: "Эколого-генетические проблемы животноводства и эколо- • гическй безопасные технологии производства продуктов питания" (Дубровицы, 19 -23 октября 1998 г.); на научной конференции молодых ученых и аспирантов ВИЖа (Дубровицы, б июля 2000 г.); на третьей международной конференции: ''Актуальные' проблемы биологии в животноводстве" (Боровск,16 сентября 2000 г.); на меж-отдельской научно-практической конференции отделов сертификации и эколого-генетическнх исследований1 в животноводстве, биотехнологии и селекции молочного скота (30 октября 2000 г.)<

Положения, выносимые на защиту: г ^ . . ; .1 1. Усовершенствованная концепция генетического мониторинга животных с использованием биотехнологических маркеров I и И поколения при сертификации/ идентификации и. разведении крупного рогатого скота. Д 1 - ' ' \ : ■

■'''.■'■■■' 2. Новая техника контроля'племенного материала на инфи-цированность болезнетворными агентами с использованием ПЦР.'.

: у 3. Мониторинг генетической структуры стада по ДНК мар-, кёрам, сцепленными с хозяйственно-полезными признаками.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы; материалов и методов исследований, результатов ' собственных исследований, обсуждения выводов, практических предложений, списка'использованной литературы. Объем диссертации составляет 100 страниц машинописного текста, включающей 22 таблицы и-12 рисунков. Список литературы содержит 146 источников, в том числе 87 на иностранных языках.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

г Исследования проводили ; в опытно-производственном. хозяйстве (ОПХ) ВИЖа "Дубровицы" Подольского района Московской области, племенном заводе (ПЗ) "Новая жизнь" Щбкинского района - Тульской области и во Всероссийском - государственном НИИ животноводства в период с 1997, по 2000 год. Схема исследований представлена на рисунке 1. _. :

Для исследований были использованы коровы лакгировав-шие в период проведения .эксперимента, ; с привлечением данных зоотехнического учета ОПХ "Дубровины" и ПЗ "Новая жизнь". ■ ;: Выявление эритроцитарных антигенов проводили по методике П. Ф. Сорокового (1974) в лаборатории генетики животных. Аллели групп крови и генотипы определяли семейным анализом. Определяли , частоты маркерных генов, оценивали связи ЕАВ маркеров с показателями молочной продуктивности коров по I и III лактациям (ОПХ "Дубровицы") и по I лактации (ПЗ "Новая

' жизнь"). . ■ " ■ . ' ■. . , . - : - . v-..' j { ;..' - л'-■ ■

■-'■= - Изучали повторяемость показателей молочной продуктивности маркированных групп коров ОПХ "Дубровицы" по I и? III лактациям. • ,::-' • ■ -.'/Г-" : ) .-.г " - '.'■'

v Для оценки связи генетических маркеров с продуктивностью все. исследуемое поголовье было распределено по группам, связанным с наличием или отсутствием в их генотипах определенных аллелей групп крови ЕАВ локуса. V .-■.;. ,, ,

- - Sf ■■ ■ ■ . - - rf " И^ .Hll^í""^.:.- ■! , ■ г ,■ , „■ . , , J

Использование биотехнологическихметодов в генетическом (умониторинге,разведения крупного рогатого;скота.л j

±

ОПХ "Дубровины". Подоль-с ко го района ^Московской' области (п-329) ■

Меж- > и í внутри стадный7 генетический мониторинг у'е - использованием ЕАВмаркеров в стадах ОПХ "Дубровнцы" н ПЗ ,"Новая жизнь"-„от -

ПЗ "Новая жизнь" Щёкин-ского района -Тульской г об-" дасги(п=80) у i ■'■:'.

¡-■л;-

. . Vi1

Сове p tue не твование-"-традицноп . ного' ГМ с учетом У. достиженн .Й-.СТ

бнотехноло гнческих .'., методов, /., сертифнка '

UHHÍ vi1-

генетическ

ого--', " материала.

Скрининг, животных: стадаtна. но-снтельство дефицита лейкоцитарной адгезии (BLAD) ^

Сравнительный анализу ^ ^-'--У1 с с рол огн ческнх, и гематологических исследований .:,■ - с ПЦР-методом' .'■■■' •диагностикип-*' лейкоза КРС' - ■

Выявление генетических вариантов белков молока (CASK, • ^ a-La)

методом- . ДНК маркирования, -связь- ■/■'■' с

показателями ч продуктивности ■ *■

Характеристика и сравнительный ^ ; анализ ■ аллелофон-' да крупного рогатого скота иссле-' дуемых хозяйств ,<к'

Оценка . ^ сопряженности маркеров с удоем и выходом жира ¿ '--Г

Я!

Определение ■ -перспективности разведения , маркированных - ■*;* ; генотипов^.. скота для-! -каждого хозяйства: r "i i'.». -•.4 : ; и: • ' - ; ';:-•

з:.

Оптимизация структуры-.стад с использованием*

ВНуТри-'.''-'гС-'И

межстадных ;,-■*. к

генетических

резервов

Оценка-^ ■

.маркированных коров * для .использования, в качестве матерей ремонтных быков

Статистическая обработка материала и выработка. -

• • - - -'рекомендаций для производства ■ ■

, т ■ - ~ i S; ч •;л > г г-' - . ■■ ->, --, , ■ , •

' Рис. /.Схема исследований. j . г. ¿;

* Диагностику зараженности вирусом лейкоза крупного рога-: ... , : того скота (BJ1KPC) в; ОПХ "Дубровины'- проводили • реакцией' . - нммуиЬдиффузйй (РИД) : и".гематологическими"^исследованиями, > г ; J согласно Методическим указаниям (1989) в районной Подольской . . .;"■:•; -ветеринарной станции.1 V';? Л -.'Lr.J':

i По результатам предваретельных.Ъпннйко-1ёматологичес--: ких; и серологических исследований животных - разделилина 3 - категории: I (п 12) — больные лейкозом (РИД положительные и' 7;■-.: ' повышенное:' количество - лейкоцитов 1 в крови); И (п '•= .'■ 3) подозрительные на: заражение лейкозом (РИД положительные с ; / нормальными - показателями крови); HIтретья . (п « 15) — ! ; J отрицательные, .'по РИД с нормальными, .показа гелями крови (условно здоровые). nV '.-■■ ^'.'■;

О Диагностику. ВЛКРС и выявление., носителей . BLAD-

; мутации ПЦР-анализом,; а также очистку ДНК, методом солевой.

экстракции*(Miller S* A'. et al.," 1988),^проводили в лаборатории; g молекулярной генетики и цитогенетики животных.1 . ! ^

.v- .у. . Исследование полиморфизма.в*регуляторной области гена- .

а-лактальбумина: (a-La) и белка К-казейна (CASK) коровv- .: : * ■ : проводили совместно с ВНИИФБиП по методу Т. Gregory (1993). ' ' .. ■ -i; ; г' 4 - Получены ыематериалы обработаны статистически по Н. АЛ .

■ ■ ■ Плохинскому (1969) с помощью персонального компьютера IBM * -

■ рс ' - ' " * ' ' ■ "■:.'■•■ ■■•';: ,1 Г..'-.-i';.,-?--г-г ': ■ '. '

- - 3 ; РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ - ■v".' ""-"

. т . 1 3.1: Внутри- и межстздпыii генетический v v. . ' мониторинг по маркерам групп крови

; ;.„--'.-* Анализ частот аллелей у коров .ОПХ "Дубровицы" по ЕАВ-; локусу показал преобладание в стаде маркеров GiY2E'iQ'(32,5%), b

(8,8%), О, (8,1%), 0<Y2A\ (6,3%), Q1 (6,3%), I2 (5,6%), фл^ко- • : .'. (5,0%), B2Ot (3,8%). ~ ; • v V, - - Г . .V, f.'.;'i

В стаде ПЗ "Новая жизнь" выявлена сходная картина распределения ; аллелей ЕАВ локуса.. Наиболее распространенными маркерами оказались СЛЬЕ^СЗ' (14,4%), Ь (12%), ОдОЕ^^'О' (12%), О^АУ ]КО'(6,9%), Е( (6,3%), О, (5,6%), ВгО, (4,4%), 0*ЕзС

о,8%). ............... / :

Групповая гомозиготность (Са) для стада ОПХ "Дуброви-цы" равна 0,152; для стада ПЗ "Новая жизнь" - 0,056,- Ч

Результаты генетического' мониторинга стад по аллелям ЕАВ локуса представлены на рисунке 2. Частоты аллелей ЕАВ локуса в сравниваемых стадах имели аналогичное распределение. Это возможно связано с однотипностью селекционной работы. Незначительные различия выявлены по частотам аллелей йгУгЕ^; I], 04У2А-, и д: . > • - . '

Известно, что '"насыщение стада* одинаковыми- ЕАВ-аллелями допустимо до определенного предела, превышение которого может сузить генетическое разнообразие. Частота маркерного аллеля в линии не должна быть более 10 — 15% среди всего поголо-вья"(Вои\у 1. еГаЦ 1974; Машуров А. М.,1980). Поэтому, в ОПХ "Дубровины" ~ целесообразно" исключить использование быков-производителей, у которых в генотипе имеется аллель ОзУзЕ^О',

Сравнение генетической структуры стад показало на относительно слабую выраженность различий генофондов в ОПХ "Дубровины? и ПЗ "Новая жизнь". • : ; ; г- , ; г ' :

аллельные варианты ЕАВ л о куса ,

• О/Х "Дубровицы" • ПЗ "Новая жизнь"

Рис. 2. Частоты аллелей общих для ОПХ "Дубровицы" " н ПЗ «Новая жизнь

7 . Для изучения сопряженности генетических маркеров с уровнем продуктивности, исследуемое поголовье распределяли по группам в зависимости от наличия того или иного ЕАВ маркера ' (табл. 1,2). .

Достоверные различия по удою в ОПХ "Дубровицы" выявлены между животными с 1[ и ОгА'^КО'аллелями (Р<0,05). У коров-первотелок, маркированных аллелем Ь, отмечен самый низкий удой за лактацию (44б2±409,9 кг молока и 186,3±19,3 кг молочного жира). ' г: ..- ,';.■-■.;■." .

-Желательным маркером для данного хозяйства являлся аллель ОгАи^КО^ так как он связан с высокой молочной продуктивностью (548&±240,б кг молока и 205,3±9,7 кг молочного жира).

Таблица 1

Продуктивность коров ОПХ «Дубровнцы» по I лактации в зависимости оталлелей ЕАВ локуеа

1 • v ••• Аллель Частот '■ а аллеле ■ й Удой за 305 дн., • КГ Молочный жир, кг.

о^а^ко'; . 0,050 , 5488±240,6* . 205»2±9,73

0' 0,062 5081±276,5 195,6±12,64

о, 0,068 : 4906±239,8 197,2± 10,81

о4у2а*, 0,062 49021:284,0 198,0±11,49

в20," 0,031 4894±400,4 - ' 189,8*19,85

о2у2е',сг 0,318 ! 4883± 108,7 189,1 ¿34,11

1. 0,056 4462±409,9* 186,3±19,28

. * - Р<0,05 , . • •

В ПЗ "Новая .жизнь" также , выявлены статистически достоверные различия по удою и содержанию молочного жира у коров, маркированных разными ЕАВ аллелями. Высокой молочной. продуктивностью обладали коровы-первотелки, в генотипе которых выявили, аллель , О^УгВЕ^К^О' (удой ,6827±356 кг, молочный жир 271±9,7 кг). Самым низким удоем в ПЗ "Новая жизнь" обладали животные, маркированные аллелсм С^ОБ'зРгОО* (5588±248,5 кг молока и 221,3±9,56 кг молочного жира).

■■ : - ■ i. : ' v . ' ■■ Таблица 2 ■

Продуктивность коров ПЗ«Новая жизнь» по I лактации в за-

виснмости от аллелей ЕАВ локуса

Аллель Частота ал; л ел я Удой за 305 дн.,, кг Молочный жир, кг

OtD'E'iFjGOV 0,0370 6827±356,0* 271,03±9,69

G2Y2EiQ' 0,1312 5867±136,5 230,57±10,56

OiAU'iKO1 0,0562 5753*289,4 / 231,85±11,16

; .. А 0,0562 i 5727±258,6 226,79t 11,48

:. ' Е\ " 0,0625 5682±243,0 213,07±9,78

B2o, 0,0437 5659±210,3. 214,89±8,62

OiDEiFjGO' 0,0812 5588±248,5* , 221,28±9,56

* - Р<0,05

^ 3.2. Повторяемость показателей молочной продуктивности в группах маркированных коров по I и III лактацням

У коров ОПХ "Дубровины" III лактации обнаружено некоторое перераспределение маркированных групп по рангам в зависимости от величины удоя (рисЗ). Животные, маркированные ал-лелем Oi, имели лучшие показатели молочной продуктивности по III лактации 6114±246,1 кг (Р<0,01) молока и 248,8t 10,7 кг молочного жира. Коровы, маркированные аллелем ВгО/ (1П лактация), оказались низкоудойными (4956±185,7 кг <Р<0,01) и 201,7±13,05 кг ! молочного жира); * ■ '' ' '

Таблица 3

Продуктивность коров ОПХ «Дубровицы» по III лактаиип в ; зависимости от аллелей ЕАВ локуса ;

Аллель ,-■■ Частота аллелей удой за 305 ди., ;.., КГ ... ' . . Молочный жир, кг

о, 0,069 6114±246,1*. :. 248,84*10,68 :

oiyja'j . 0,063:. : -587б±183,4 - 245,62*6,96

q; 0,063 5827*181,1 236,58±9,42 v

g2y2e\q' .. 0,319 . 5726*129,5.. . . 232,48*5,69

oiauiko- 0,050 ;. 5272*231,5 204,03*8,17

.... i» 0,056 5263*204,9 222,62*9,08

в2о, 0,031 4956*185,7*. 201,71*13,05

Корреляция между рангами коров ОПХ, "Дубровицы" по удою за I и III лактацию в маркированных различными БАВ аллелями была неодинаковой (рис.3). Наибольшая корреляция отмечена у коров маркированных аллелями 04Y2A\ - 0,361; О] - 0,360 и G2Y3E\Q'- 0,33 (Р<0,01). Повторяемость в группах коров маркированныхаллелями Q'- 0,085; ОгА'^КО'- 0,05; I] - 0,01 была низ- . кой. Отрицатедьн)то корреляцию рангов (г — -0,4) выявили у коров маркированных аллелем B2Oj.

i'-V--

' ■ Рис. 3. Повторяемость удоя маркированных

групп коров по I ii III лактациям

•—-- 3.3. Идентификация г сноп шов н оценка сопряжснностн полиморфизма белков молока коров ОПХ "Дубровины" с показателями молочной продуктивности ^ ,' ^

Результаты ПЦР-анализа полиморфизма CASK и a-La представлены на рисунках 4 я 5. По CASK выявлен только один генотип АА. Варианту генотипа молочного белка CASK м соответствует; фрагмент в 216 п. н. (рекстриктазы Hind Ш, Bsur I) и 135, 93 п. н. (Hinf I). В наших исследованиях среди 23 высокоудойных коров ОПХ "Дубровицы" не удалось выявить другие генотипы CASK.

Очевидно, это связано с тем, что частота аллеля са5ка в черно-пестрой породе более чем вдвое превышает частоту альтернативного аллеля СА5Кв, а также селекцией направленной на увеличение удоя. '. -. ;■:■ " ■.;."'/

1 2 3 4 5 б 7 8

9 10 ii 12в 14 15 16 и 13 19 20 21 2213

216 П. Н

135 П. Н. 93 п. н.

Рис. 4. Электрофореграмма CASK крупного рогатого скота

По молочному белку a-La у исследованных животных были обнаружены три генотипа - a-La** (коровы под № 7, 10, 21), a-La*® (коровы под № 2, 3, 5, 8, И, 12, 13, 14, 17, 19, 20, 22) и a-La63 (коровыпод№ 1, 4, б, 9, 15, 16, 18, 23) с частотой 0,13, 0,52, 0,35 - соответственно. Частота аллеля А в исследованной популяции составила 0,39, аллеля В -0,61 (рис.5). Каждому варианту генотипа a-La

соответствовал определенный размер фрагмента. Для a-La** гено-

типа — 77, 50 и 40 п. н., для a-La генотипа 117 и 50 п. п., для а-La*3 генотипа 117, 77, 50 и 40 п. н.

. 1 2 3 4 5 б 7 8 9 101112

ш4151617181920212223

Рис. 5. Электрофореграмма a-La крупного рогатого скота

Для изучения взаимосвязи между генотипами а-Ьа и хозяйствен неполезны ми признаками определяли средние показатели удоя, процентного содержания жира и белка, а также величину мо- :'■ лочного жира и белка (табл. 4). .

■ ..;'■■''.■ Таблица 4

■ ,-■ Молочная продуктивность коров в зависимости

от генотипаа-Ьа :■■■,;„■

Показа- ■ Генотип по a-La Разность

тели * АА :-' АВ вв АА-АВ : АА-ВВ АВ-ВВ

Удой, кг 704Ü . 322 6531± 143 6823± , 253 511 219 293

Жир, % 4,18± 0Д1 4,14±. 0,08 4,14± 0,05 0,04 0,04 0

Белок, % 2,86± 0,15 12,98± 0,06 3,13± .. 0,05 -0,12 -0,27 -0,15

Мол оч- " ный жир, ■ ■'■. кг' "; " 293,3± 4,03 269, 6,34 281,5± .7,54 23,5** : '.i' 11,8 -11,7

Молоч- , ный белок, кг 203,8± 19,3 i 193,5± ; 5,03 213,3± 8,7; 10,3 У -Í . . - -9,5 • -19,8

Из данных таблицы 4 видно, что коровы'гомозиготные по генотипу a-La^ имели более высокую молочную продуктивность по сравнению с коровами генотипа a-La*?- н a-LaBB. Эти животные превосходили поудою остальных коров на 5J1 и 219 кг молока.

;' Установлены различия между группами коров по процентному содержанию жира. Высоким содержанием жира в молоке отличались животные гомозиготные по генотипу a-La^. Они превосходили коров с генотипами a-La^, a-LaBB, на 0,04%.

, 'vwü- Выявлена тенденция к увеличению белка в молоке у. коров с генотипом a-LaB® (3,13%),' что на 0,12 и 0,27.% выше, ,чем у коров с

• генотипом a-La-:., a-I^a : . v,

Наибольшим выходом молочного жира характеризуется группа коров маркированных a-La^* - 293 ± 4,03 (Р<0,01). У коров с гетерозиготным генотипом Уа-Ьа^ количество молочного жира составила 269,8 ± 6,34 юг, у коров с генотипом a-LaB?281,5 ± 7,54 кг. : ■ ■ ''■■-'-■'■." "■:■ ....-■.■' -г ■ .

, ■ - ' - Выявлена тенденция связи высокого содержания молочного белка с генотипом a-Lann (213,3 ± 8,70 кг). Эти животные п ре восход ил икоровс генотапом a-La** и a-La*5 на 9,5 и 19,8 кг..

- Г.' ~ - .3.4. Сравнительный анализ ПЦР-метода с • :; ' серологическими и гематологическими исследованиями - ; выявления инфицированных животных лейкозом ^ г. ' ^ Л : крупного рогатого скота V/ .

; > . ^В соответствии с действующими ' правилами '':. по профилактике и борьбе с лейкозом крупного рогатого скота (1999) первичный диагноз устанавливается на основании положительных

• результатов серологических . и гематологических или патоморфологических исследований ' ? * "7".V , т '

i ... OIIX "Дубровицы" среди,329 голов крупного.рогатого .*■ скота . серологическими . , и. гематологическими ; исследованиями ' обнаружили ..15 голов (4,6%) носителей j вируса лейкоза крупного 1 рогатого скота- Из ;них. 12; годов оказались больными лейкозом . (РИД+, Гем+) и 3 подозрительные (РИД+, Тем-) (табл.5). >..;,.:•. ¡_.< . ; . Методом ПЦР были повторно исследованы 30 животных, из них 15 - ,голов были .ранее выявлены . серологическими Ли : гематологическими исследованиями как больные и подозрительные и 15 голов свободные от вируса лейкоза крупного рогатого скота.;-,: '„ Из таблицы 5 видно, что уД коров (10%) из 30 результаты

РИД и гематологических исследований не совпали с результатами, : полученными ПЦРганализом. Однако, данные повторных исследо-

ваний (табл. 6) показали, что эти 3 коровы оказались свободными > от ВЛКРС.' Полученные результаты подтверждают, что ПЦР-метод дает более точную информацию об инфицированное^ животных

ВЛКРС. Ч . .." ••••••• .у. : ••.Ч'- '

¿'"''С- ' •">•-•'.• ...г V* 'Д^лО С ..Л У/" 1

■; Уабяица 5

■> . • результаты гематологических, серологических и ПЦР -'". ■ методов исследования крови коров. : V'.

V :••• • -'.¡Г; ' ■•^.¡..■^ < • • -- • • ■.■>;; '■-:' ^'. -'-У

.г: T-'-vb.-:-?*,. i i^;1* ■ - Категория животных ■ , '■ Iii.-,;!!; Коли честв :'-',-'" о а: : ,голов Результаты ПЦР.-.V,

положите L льные . отрицате - льные *

ГОЛ 6в; гол Ы

- ^ JI — больные лейкозом' * ' ; ' (РИД+, Гем;+). - V1- ; 1*1 92 ., 1 : 8

V £ -V П^--подозрительные fit; • . . - ; (РИД+,ГСМ, • . 3- * 1 ' >;£ч'-»»Г ;-33' v J • \ i 2" TT 67

■III— здоровые животные . : - '. ■ (РИДГем -). i .Г.;■}'< ■ *'•" 15 ■ ■ ТЧ 15 ■100,

о 1 'ч-лч Различия в' полученных результатах, очевидно, связаны с ■ несовершенством серологических исследований/ Гематологические исследования дали одинаковьге результаты'как в первом; так:и;во .втором случае.1 Исходя из.полученных'данных^ было установлено преимущество - ПНР ' -метода1' над''л гематологииескими; и * РИД исследованиями." ; •' •" - «Г.•:' '*'•' : ••: •'••'-•.•• V.-.

" ч ,;> Важно также отметить,' что продолжительность проведения ПЦР: анализа' на зараженность' животных стотавляст не более 48 часов; При этом'анализ можно проводить^'не зависимо от возраста : животного. Серологические и гематологические Исследования проводят в течение'4 дней.'Таким образом^-по'действующей методике на анализ й выдачу результатов уходит более 4 дней:":»

- ' Таблица 6

Сравнительные данные диагностики лейкоза крупного рогатого скота ПЦР-методом, РИД и гемато- •

логическим исследованием '■ у ■■.'...■

■ № № живот- I исследование II исследование

п/п ного РИД Гем. ПДР РИД Гем. ПЦР

1. ■ . 1236 + -.. ■V ; '+ . - ■.'■ + ■ ' + +

2. ■ .1936 ■; + '+ . . + " + : + ■'

3. 5980 + , + ' + '■ +

4. 1176 • + - ■"; 4- • • + • + ■■■ + -

5. 844 + у . + + +

6. 1196 ■ +, + ..

7. 1278 , + + +...

8. 1592 + . : : + ■■ + .+ ... . +. +

9. - 2056 • : - „ .

10. 1838 , + ■ .... - • ■ - .

11. ■■ 1442 + ■■.. + . - . ;. - .;

12:- 340 . ■ ■"+ - - :+ ■ : ■ + '+ • ■

13. 1890 . • + . ■■■■ + ■■ ■ .+ ' 1 +

14. 1928 :■, + ; ■ i . + ■ ■+ V

15.; 2440 . + • + ■ - ■ +

3.5. Выявление гена BLAD-снндрома у короп черно-пестрой породы

BLAD (дефицит адгезии лейкоцитов) — генетически детерминированное заболевание, которое наследуется по рецессивному ..типу.

Наибольшее количество племенных животных отягощенных геном BLAD поступило из Канады (быки Билл 187, Код 189, Жордан 48, Шейк 15632), США (быки Диез 1843, Сад 11), Германии (быкЖест750). ..... . ■':'■■■■■.

: В ОПХ "Дубровицы" было выявлено 8 потомков быка Жор- : дана 48, из них 5 дочерей и 3 внучки (рис. 6).

; Рис. 6. Потомки быка Жордана 48 в ОПХ "Дубровицы'* ! , (BL. —носитель; TL — ле носитель) :

i Данные ПЦР анализа на наличие BLAD мутации у потом-~ ков Жордана :48 ,представлены на рисунке 7. Из рисунка 7 видно,', что носителями гена BLAD-синдрома оказались дочери под номе-: рами'8)0, 820, 864 и 906. Они имели гетерозиготный генотип; D128/D128G (наличие двух полос размером 222 и 111 п. н.). Среди 1 потомков второго поколения быка Жордана 48 (2080, 2298, 3004)■ носителей гена BLAD-синдрома не обнаружено. Они имели гомозиготный генотип по нормальному гену-D128. - , ; * . '

; ? _ : «t0! ш 864 ! 844 20sq 906 22983004 ■' "'■'.<;

/.■-;. Рис. 7. Результаты ПЦР-апализа на носнтсльстьо гена КЛ АО-си ид рома. (ВЬ -носнтель;ТЬ - не носитель)

5 Таким образом," проведенные' исследования показали, что объединение генетических маркеров I и 11 поколений дает-, более

■■ ■■■ ... .. -;■:.;■• .■■■■.. 2i

полное'представление о продуктивной и племенной ценности скота, расширяет возможности прямой оценки генотипа и позволяет контролировать чистоту племенного материала.

выводы v :: ,.;!

1. Использование биотехнологического метода, ПЦР-анапиза, значительно"дополнило генетический мониторинг, основанный на ЕА-маркерах, при сертификации и генетической идентификации крупного рогатого скота. ' ■ -

2. Наибольшая устойчивость продуктивности по удою за I и П1 лактацию отмечена у коров маркированных аллелями O4Y2A1 — 0,361; Oí -0,360; GjYiEiQ'-0,33 (Р<0,01). Ншкая корреляция удоя выявлена у коров маркированных Q*— 0,085; OjA'tJ'iKO'- 0,05; .—... 0,01: Отрицательная ранговая корреляция отмечена у коров марки-! рованных аллелем В20| - - 0,4. : . . ;

3 Установлено, что перспективнымиtEAB маркерами для данных стад являются аллели OiA'iJ'iKO' (ОПХ "Дубровицы") и; 04Y2DEiF0(n3 "Новая жизнь"). Животные с такими маркерами обладали наивысшей молочной продуктивностью (5488±240,6 6827±356 кг молока). Анализ генетической ситуации в ОПХ "Дуб-ровицы" и ПЗ "Новая жизнь" позволил идентифицировать перспективные в вдеменном отношении ЕАВ ; генотипы, сопряженные с высокой молочной продуктивностью. >. . - : • ; /

4. Выявлены различия по продуктивности коров в зависи-

, мости, от генотипа молочного белка a-La. Коровы с генотипом а* дд до fia •

La превосходили коров с генотипами a-La и a-La по величине удоя на 511 и 219 кг молока и содержанию жира на 0,04%. Высоким содержанием белка в молоке отличались животные с генотипом а~ LaBB - 3,13%, что на 0,27% и 0,15% больше чем у коров с генотипа-■.'миа-ц^иа^.,;-., _ : г

1 5. На основднии проведенных/исследований установлено, что ПЦР-анализ является более надежным и быстрым тестом для

• • 22г-; •.•.-.. -г . . 7 -'..>:..\/;

выявления инфицированных ВЛКРС животных, в сравнении с клас-; ' ■ сическими методами.'. " " Л ... . и. _

V; ^ 6. Установлено, что носителями.гена ВЬАЮ '^.мутации в ге- : ^ терозигоге оказались 4 (№№ 810,' 820, 864, 906) из 5 дочерей быка } Жордана 48. Среди потомков второго поколения ¡гетерозигот по . .

• ;: 0128в не обнаружено. _ ,.:*-.'' - ' .-;- ". . ■•"■■' 1

: л • 5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ " • 'X

-'. "»'.г"- '1,*': ; ■ -*гил:: -:'К'-.'.'.А "1 .*"■-.'"

; 1. При контроле чистоты генетического материала в.отно-, ..'••.

у; шении вируса лейкоза крупного^рогатого скота в.ОПХ "Дуброви- • * • цы" рекомендуем дополнить.существующую методику выявления; : г ! ' ПЦР-анализом! V ' ' • ' ... . - ,, , '

. . ( 1 2. При сертификации племенного материала и мониторинге :. ... 7 разведениячерно-пестрого скота рекомендуем использовать марке-/. ры ЕАВ, СА5К, а-Ьа и ВЬАО локусов. • . . - .; " .

- ; 3. При разработке планов племенной работы в ОПХ "Дуб-

ровицы и других хозяйствах, использующих животных голштин-. ской по^ды предусмбтреть'кЬмплекс селекционных и биотехноло* ' гичес'ких мертприятий; направленньпс на профилактику распро-' странения^носнтелей ВЬАО-мутации.'.''^ :"" л,: 1

■ •¿.¿^;-ч. список'0,ПУБЛИКОВАНШ>КГРАБОТ " : ■'.'С^.^-^Л'-

■ ; _ .V>\ ^ •:'1 . ■■

; 1. Щинов М. Ю., Букаров Н. Г.гСовершенствование методов ге-; ^; " л- ; : нетического маркирования и мониторинга разведения крупно- ; . , :^ >го рогатого скота с испол^ованиеммоле^лярно-генетгических" | ■ : ,и информационных технологий / Сборник докладов и.тезисов Г ' Международной научно-нрактической конференции 4'Эколого- • ' .

- . • ,5 ;генетические проблемы животноводства и экологически безог^""^ .

Опасные технологии'Гфоизводства продуктов питания".- -7 Дуб: ; -ровицы! 1998.'—-С. 76-78.'.' Л' ';'. ; ' ь , • . л'.-. • ' •

2. : Букаров Н. Г., Щинов М. Ю. Кулибали Д. Методические ремь ^ / : .- мендащ1Й по биотехнологическог«|у обеспечению'генетическо- ./

го маркирования и мониторинга разведения крупного рогатого ■ ^ : ;; ' скота.//Дубровицы,ВИЖ-РУЦЭБТЖ.-2001.-36с. ^^ ; . ^

Издательство РУЦ ЭБТЖ 142132, Московская обл., Подольский р-н, п. Дубровицы Тел. (8 - 27) 65-14-24, (8 - 27) 65-14-07

Лицензия ЛР№ 021248 от 21.12.97

Сдано в набор 5.04.2001. Подписано в печать 10.04.2001 Заказ № 9. Печ. д. 0,1 . Тираж 100 экз.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Щинов, Михаил Юрьевич

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Генетические маркеры в разведении и селекции крупного рогатого скота

1.1.1. Группы крови ЕА (Erythrocyte Antigens) - генетические маркеры

1.1.2. Использование генов белков молока в разведении и селекции

1.1.3. Главный комплекс гистосовместимости у крупного рогатого скота (BoLA): его структура, полиморфизм и методы изучения

1.2. Генетический мониторинг в разведении и селекции крупного рогатого скота

1.3. Лейкоз крупного рогатого скота и методы диагностики

1.4. Мутация BLAD (иммунодефицита) у крупного рогатого скота

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1, Концентрация ЕАВ аллелей локуса в ОПХ "Дубровицы" и

ПЗ "Новая жизнь"

3.2. Сопряженность генетических маркеров с уровнем молочной продуктивности

3.3. Изучение взаимосвязи между селекционными признаками у коров I и III лактации

3.4. Различие уровней молочной продуктивности первотелок унаследовавших альтернативные аллели отцов

3.5. Сопряженность полиморфизма белков молока коров ОПХ "Дубровицы" с хозяйственно-полезными признаками

3.6. Подбор праймеров и оптимальных условий проведения ПЦР-анализа

3.7. Сравнительный анализ результатов ПЦР-метода с результатами гематологических и серологических исследований

3.8. Анализ и поток распространения гена BLAD в популяции

Введение Диссертация по биологии, на тему "Использование биотехнологических методов в генетическом мониторинге разведения крупного рогатого скота"

Актуальность работы. Обмен генетическим материалом между странами сопровождается распространением различных инфекционных болезней (например, лейкоз у крупного рогатого скота, губчатая энцефалопатия), а также заболеваний, вызываемых редкими мутациями (BLAD-синдром). В связи с этим возникла необходимость строгого генетического контроля племенного материала.

Рентабельное высокопродуктивное молочное скотоводство основывается на использовании достижений науки и техники, которые обогатили теорию и практику разведения крупного рогатого скота методами анализа наследственности, генетического маркирования и мониторинга с использованием маркеров первого поколения (ЕА - эритроцитарные антигены, белки биожидкостей). (Сороковой П. Ф., 1974, 1981; Машуров А. М., 1980; Букаров Н. Г., 1995; Попов Н. А., 1998; Прохоренко П. Н. с соавт., 2000).

Дальнейшие разработки с использованием новых технологий разведения скота, учитывающих индивидуальные и групповые генетические и биологические характеристики животных, повышающих эффективность генетического мониторинга, требуют широкого использования биотехнологических приемов, в частности маркеров II поколения (ДНК-маркеры). Они отражают полиморфизм генов на уровне ДНК, выявляемых, в частности, методом по-лимеразной цепной реакции (ПЦР) (Эрнст JI. К., 1990; Марзанов Н. С. с соавт., 1997; Глазко В. И., 1998; Зиновьева Н. А с соавт., 1998; Попов А. Н. с соавт., 1998; Калашникова JI. А. с соавт., 2000).

Выполненные эксперименты являлись составной частью тематического плана (тема № 01.01.01) научно-исследовательских работ Всероссийского Государственного НИИ животноводства.

Цель и задачи исследования. Цель исследований состояла в оценке возможности применения тест-системы для генетического мониторинга разведения крупного рогатого скота. Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

- дать оценку использования ЕАВ маркеров для сравнительного анализа генетической структуры племенных стад;

- оценить возможность использования эритроцитарных антигенов и генетических вариантов белков молока в качестве маркеров продуктивности;

- оценить возможность использования тест-системы на основе ПЦР для контроля наследственных аномалий у черно-пестрого скота (на примере BLAD);

- оценить точность молекулярно-генетического метода выявления лейкоза крупного рогатого скота на основе ПЦР в сравнении с общепринятыми методами

Научная новизна исследований заключается в оценке возможности использования биотехнологических методов при генетическом мониторинге оценки инфицированности племенного материала болезнетворными агентами (лейкоз), наличия у животных генов ответственных за носительство наследственных аномалий (BLAD - дефицит адгезии лейкоцитов), обуславливающих "молекулярные" болезни, а также ДНК маркеров, определяющих хозяйственно-полезные признаки.

Практическая значимость. Система генетического мониторинга, основанная на использовании маркеров I и II поколения, наиболее полно отвечает потребностям паспортизации и сертификации племенных животных и стад, использования полученной информации для повышения эффективности разведения скота.

Апробация работы. Результаты исследований по теме диссертации доложены и одобрены на международной научной конференции: "Эколого-генетические проблемы животноводства и экологически безопасные технологии производства продуктов питания" (Дубровицы, 19-23 октября 1998 г.); на научной конференции молодых ученых и аспирантов ВИЖа (Дубровицы, 6 июля 2000 г.); на третьей международной конференции: "Актуальные проблемы биологии в животноводстве" (Боровск, 6 сентября 2000 г.); на межотдельской научно-практической конференции отделов сертификации и эколого-генетических исследований в животноводстве, биотехнологии и селекции молочного скота (30 октября 2000 г.)

Положения, выносимые на защиту:

1. Усовершенствованная концепция генетического мониторинга животных с использованием биотехнологических маркеров I и II поколения при сертификации, идентификации и разведении крупного рогатого скота.

2. Новая техника контроля племенного материала на инфицирован-ность болезнетворными агентами с использованием ПЦР.

3. Мониторинг генетической структуры стада по ДНК маркерам, сцепленными с хозяйственно-полезными признаками.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Щинов, Михаил Юрьевич

5. ВЫВОДЫ

1. Использование биотехнологического метода, ПЦР-анализа, значительно дополнило генетический мониторинг, основанный на ЕА-маркерах, при сертификации и генетической идентификации крупного рогатого скота.

2. Наибольшая устойчивость продуктивности по удою за I и III лактацию отмечена у коров маркированных аллелями 04Y2A'i - 0,361; Oj - 0,360; G2Y2E'iQ'- 0,33 (Р<0,01). Низкая корреляция удоя выявлена у коров маркированных Q'- 0,085; 02A'iJ'iK0' - 0,05; Ii - 0,01. Отрицательная ранговая корреляция отмечена у коров маркированных аллелем B2Oi - - 0,4.

3 Установлено, что перспективными ЕАВ маркерами для данных стад являются аллели O2A1J1KO'(ОПХ "Дубровицы") и 04Y2DE*>FO(n3 "Новая жизнь"). Животные с такими маркерами обладали наивысшей молочной продуктивностью (5488±240,6 - 6827±356 кг молока). Анализ генетической ситуации в ОПХ "Дубровицы" и ПЗ "Новая жизнь" позволил идентифицировать перспективные в племенном отношении ЕАВ генотипы, сопряженные с высокой молочной продуктивностью.

4. Выявлены различия по продуктивности коров в зависимости от генотипа молочного белка a-La. Коровы с генотипом a-La^ превосходили коров с генотипами a-La^ и a-LaBB по величине удоя на 511 и 219 кг молока и содержанию жира на 0,04%. Высоким содержанием белка в молоке отличались животные с генотипом a-LaBB - 3,13%, что на 0,27% и 0,15% больше чем у коров с генотипами a-La^ и a-La^.

5. На основании проведенных исследований установлено, что ПЦР-анализ является более надежным и быстрым тестом для выявления инфицированных BJIKPC животных в сравнении с классическими методами.

6. Установлено, что носителями гена BLAD мутации в гетерозиготе оказались 4 (№№ 810, 820, 864, 906) из 5 дочерей быка Жордана 48. Среди потомков второго поколения гетерозигот по D128G не обнаружено.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. При контроле чистоты генетического материала в отношении вируса лейкоза крупного рогатого скота в ОПХ "Дубровицы" рекомендуем дополнить существующую методику выявления ПЦР-анализом.

2. При сертификации племенного материала и мониторинге разведения черно-пестрого скота рекомендуем использовать маркеры ЕАВ, CASK, a-La и BLAD локусов.

3. При разработке планов племенной работы в ОПХ "Дубровицы" и других хозяйствах, использующих животных голштинской породы предусмотреть комплекс селекционных и биотехнологических мероприятий, направленных на профилактику распространения носителей BLAD-мутации.

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Для создания комплексных QTL маркеров (качественные + количественные признаки), используемых в селекции и разведении, необходимо изучение биологических механизмов их взаимосвязи на геномном уровне. Для этого необходим учет локализации генов отдельных признаков у крупного рогатого скота на хромосомах и оценка их межлокусных взаимодействий (к примеру, трансферрины локализованы на 1 хромосоме, альбумины и казенны - на 6-й хромосоме).

В перспективе накопление информации по комплексному индексу (QTL - Quantitative Trait Locus) позволит повысить эффективность селекционно-племенной работы путем интеграции зоотехнических, биохимических, морфологических и других интерьерных маркерных признаков. J. Dvorak et. al., (1996) считают, что маркерные гены позволяют интенсифицировать селекционный процесс и повысить его результативность на 2 - 30% по сравнению с классическими вариантами.

Интенсивный отбор животных по молочности и максимальное использование небольшого количества производителей-улучшателей привел к ряду нежелательных последствий. В результате в наследственности различных пород и линий черно-пестрого корня крупного рогатого скота постепенно накопились нежелательные рециссивные гены, получившие следующие обозначения: BD - непропорциональное развитие челюстей (бульдожистость); BL - дефицит лейкоцитарной адгезии; Df - карликовость; NL - отсутствие шерсти у новорожденных телят; IS - очень тонкая кожа; MF - синдактилизм; РТ - кариес зубов; PG - удлиненный период стельности (более 329 дней). Носителями указанных генов, например в голштинской породе зачастую были ценные племенные быки: Шесфарм Стармейкер MF 1633509, Лайм-Хелоу Э. Р. Дин MF 1499772 и другие. Указанные шифры нежелательных генов вносятся в родословные животных.

Своевременное выявление носителей позволяет избежать спаривание двух гетерозиготных особей или наоборот использовать их в разведении под особым контролем в случае их высокой препотентности. И самое главное, можно локализовать животных, несущих мутацию, без значительного сужения генетического разнообразия той популяции, за которым закрепляется гетерозиготный бык-производитель.

Эффективность селекционной работы с крупным рогатым скотом требует развитие методов выявления и оценки генотипических особенностей животных (Кузнецов В. М., 1998). Острота этой проблемы в настоящее время обусловлена двумя основными обстоятельствами. Во-первых, в настоящее время уже выявлены продукты структурных генов, аллельные варианты которых могут рассматриваться как прямые хозяйственные ценные признаки. Современное развитие методов молекулярной генетики позволяет выявлять носителей разных аллельных вариантов в образцах крови животных любого пола и возраста, в семени быков, в эмбрионах (Dwyer et al., 1992; Schellander et al., 1992). Во-вторых, широкое использование импортных животных в племенной работе приводит к увеличению риска распространения рецессивных генетических заболеваний (Усенбеков Е. С., 1995; Костецкий И. Е. с соавт., 1997; Womack, 1992).

К сожалению, отбор и завоз импортного скота в нашу страну часто производили без учета генетических особенностей высокоспециализированного скота. Вследствие этого в племенную сеть попали производители, имеющие в своем геноме дефективные рецессивные гены (Меркурьева Е. К. с соавт., 1991).

Наиболее надежным и точным способом выявления рецессивных наследственных заболеваний в настоящее время являются молекулярно-генетические методы. Особенно эффективным можно назвать метод полиме-разной цепной реакции. (Вартапетян А. Б., 1991; Евграфов О. В., 1992; Linz et al., 1990). При этом достигается почти 100% точность диагностики молеку-лярно-генетических дефектов генотипа племенных животных. С помощью молекулярно-генетических методов можно также решать такие вопросы как анализ структуры генов их сцепление и локализация. (Thoronton et al., 1992).

Анализ ДНК при моногенных болезнях является составной частью мо-лекулярно-генетической диагностики. В большинстве европейских стран в последние годы созданы и выполняются широкомасштабные программы по выявлению и исключению из воспроизводства носителей ряда рецессивных генетических заболеваний, в частности у голштинофризов мутации BLAD (Глазко В. И., 1998). В этой связи считаем необходимым создание скринин-говой программы в Российской Федерации, аналогичной в развитых странах мира по животноводству, в которой учитывалась бы аттестация всех быков-производителей, племенной ремонтный молодняк, быкопроизводящих коров черно-пестрого корня с занесением этих данных в соответствующие племенные каталоги.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Щинов, Михаил Юрьевич, Дубровицы

1. Баев А. А., Смирнов И. К., Городецкий С. И. Первичная структура кДНК Р-казеина коровы // Молекуляр. биология. 1987. - Т. 21. - 255 с.

2. Баранов А. В. Генетическое маркирование и его использование при совершенствовании системы разведения молочного скота: Автореф. дис. . док. биол. наук / ВНИИплем. Лесные поляны. 1997. - 34 с.

3. Баскаков Н. И., Манько А. А. Некоторые аспекты эпизоотологии злокачественных опухолевых болезней крупного рогатого скота // Ветеринария.- 1991.-№ 10.-С. 9-11.

4. Бахмутова Т. В. Группы крови швицкого скота и их использование в селекции: Афтореф. дис. . канд. С.-х. наук/ВИЖ. Дубровицы.-1981.-26 с.

5. Бороздин Э. К., Охапкин С. К. Презиготический отбор в многоал-лельных локусах крупного рогатого скота // Генетика. 1984. - Т. 20. - № 2. -С. 330-336.

6. Букаров Н. Г. Использование полиморфизма антигенов эритроцитов и главного комплекса тканевой совместимости в разведении и совершенствовании крупного рогатого скота: Автореф. дис. . док. биол. наук. ВИЖ Дубровицы. 1995. - 33 с.

7. Букаров Н.Г. Генетическое маркирование линий нового московского типа крупного рогатого скота черно-пестрой породы./ I международная конференция по частной генетике сельскохозяйственных животных. Тезисы 18-20 мая 1993 года. Аскания-Нова. c.l 1.

8. Быковченко Ю. Г. Генетические маркеры и их использование в селекции алатауской породы скота: Автореф. дис. . док. С.-х. наук. Санкт-Петербург. - 1991. - 40 с.

9. Вартапетян А. Б. Полимеразная цепная реакция // Молекулярная биология. 1991.-Т. 25. -№4.-С. 926-936.

10. Георгиевский Ю. И. Физиология сельскохозяйственных животных. М.: Агропромиздат. - 1990. - 510 с.

11. Глазко В. И. Проблемы использования ДНК-технологий у животных. Сельскохозяйственная биология. 1998, № 4. - С. 33 - 42.

12. Глазко В. И., Глазко Г. В. Русско-англо-украинский толковый словарь по прикладной генетике, ДНК-технологии и биоинформатике. К.: Нора-принт. - 2000. - 464 с.

13. Дексне В. Я. Генетический полиморфизм эритроцитарных антигенов и некоторых белков крови бурого латвийского скота в связи с его использованием в селекции: Автореф. дис. . канд. С.-х. наук. JI. - Пушкин. -1981.-20 с.

14. Евграфов О. В. Картирование и изучение тонкой структуры некоторых генов человека и разработка на этой основе ДНК-диагостики наследственных заболеваний // Автореф. Дисс. Докт. Биол. наук. 1992. - 35 с.

15. Желтиков А.И., Кочнев Н.Н., Маренков В.Г. и др. Связь эритроци-тарных антигенов с резистентностью к некоторым болезням./ Молекулярно-генетические маркеры животных. Тезисы докладов II международной конференции. Киев: "Аграрна наука". 1996. - 53 с.

16. Жукова Н. М., Бороздин Э. К., Воробьев Э. Г. Использование данных иммуногенетики при оценке быков по качеству потомства // Животноводство. 1987. - № 12. - С. 17 - 20.

17. Зайцева Г. А. Диагностика лейкоза крупного рогатого скота. Методические указания. М.: Агропромиздат. 1989. - 29 с.

18. Зиновьева Н. А., Попов А. Н., Эрнст JI. К., Марзанов Н. С., Бочка-рев В. В., Стрекозов Н. И., Брем Г. Методические рекомендации по использованию полимеразной цепной реакции в животноводстве. - Дубровицы. -1998.-46 с.

19. Кукайн Р. А., Нагаева JI. И., Ложа В. П. и др. Вирус лейкоза крупного рогатого скота. Рига: Знание. 1982. 176 с.

20. Лакин Г. Ф. Биометрия. М.: Высш. Школа. 1980. 293 с.

21. Ларцева С. X., Муксинов М. К. Практикум по генетике. М., Агропромиздат. 1985.288с.

22. Маринчук Г. Е. Использование сцепленных генных казеиновых блоков для поиска маркеров молочной продуктивности красного степного скота // Цитология и генетика. 1983. - 17, № 4. - С. 44 - 49.

23. Маринчук Г. Е. Тесное сцепление казеиновых локусов у красного рогатого скота // Генетические основы селекции крупного рогатого скота. -Киев: Наук, думка. 1981. - С. 125 - 127.

24. Матоушек И. Группы крови крупного рогатого скота. Киев.: Урожай. - 1964. - 160 с.

25. Машуров А .М., Сухова Н. О. Иммуногенетическая паспортизация и экспертиза происхождения крупного рогатого скота (методические и практическое пособие). / РАСХН Сиб. Отд-ние СибНИИЭСХ. Новосибирск. -1997.- 100 с.

26. Машуров А. М. Генетические маркеры в селекции животных. М. Наука. 1980. -318 с.

27. Меркурьева Е. К., Абрамова 3. В., Бакай А. В., Кочиш И. И. Генетика. ВО "Агропромиздат". М.: 1991. - 446 с.

28. Павличенко В. П. Группы крови и молочная продуктивность. // С/х биология.- 1983. -№ 1.-С.113-117.

29. Павличенко В. П., Бердникова Н. Н., Пепина Г. Д., Милованов О. В. Методические рекомендации по использованию групп крови для повышения эффективности селекционно-племенной работы в молочном животноводстве. -Л.: 1982.-44 с.

30. Плохинский Н. А. Руководство по биометрии для зоотехников. М., Колос. 1969. - 256 с.

31. Подбора Б. Е., Винничук Д. Т., Ефименко М. Я. Применение генетических маркеров при ведении селекционной работы в заводском стаде крупного рогатого скота. // Цитология и генетика. 1992. Т. 26. - № 5. - С. 41 - 47.

32. Попов Н. А. Репродукция и использование быков-улучшателей в Подмосковье // Зоотехния. 1993. - № 1. - С. 10-14.

33. Попов Н.А., Иванов В.А. Пути разведения крупного рогатого скота малочисленных пород с использованием аллелей групп крови Дубровицы. -1999. 74 с.

34. Прохватилова Л. Б., Ломакин А. И., Колосов С. Н., Дрыгин В. В., Рыбаков С. С., Гусев А. А. Диагностика лейкоза КРС методом полимераз-ной цепной реакции. // Ветеринарная медицина. - 1997. - С. 65 - 68.

35. Семендеева Л. А., Бороздин Э. К., Джакаев С. Д. Генетические маркеры устойчивости к бруцеллезу крупного рогатого скота. / Молекулярно генетические маркеры животных. Тезисы докладов II международной конференции. Киев: "Аграрна наука". 1996. - С. 72.

36. Серебровский А. С. Генетический анализ. - М.: 1970. - 343 с.

37. Солдатов А. П., Белостоцкая Г. И. Скрещивание черно-пестрого скота с голштино-фризами // Международный с./х. журнал. 1984. - № 2. - С. 68-70.

38. Сороковой П. Ф. Методические рекомендации по исследованию и использованию групп крови в селекции крупного рогатого скота. Дубровицы.- 1974. -40 с.

39. Сороковой П. Ф. Методические рекомендации по исследованию и использованию иммуногенетических маркеров для контроля происхождения племенного крупного рогатого скота. Дубровицы. - 1981. - 25 с.

40. Сороковой П. Ф., Букаров Н. Г. Итоги и перспективные направления иммуногенетических исследований в племенном скотоводстве // Бюллетень научных работ / ВИЖ. 1986. Вып. 47. - С. 64 - 70.

41. Сороковой П. Ф., Букаров Н. Г., Чернушенко В. К. Использование молекулярно-генетических механизмов в селекции крупного рогатого скота // Молекулярные механизмы генетических процессов: Тез. докл. М. 1987. - С. 144- 145.

42. Сулимова Г. Е. ДНК-маркеры и возможности их использования в генетико-селекционных исследованиях. / Молекулярно-генетические маркеры животных. Тезисы докладов ^международной конференции. Киев: "Аг-рарна наука". 1996. - С. 20.

43. Сухова Н. О. Основные направления иммуногенетических исследований СибНИПТИЖа // Иммуногенетический анализ в селекциионно-племенной работе и повышение продуктивности животных. Новосибирск. -1984.-№25.-С. 3-10.

44. Сухова Н. О., Пьянов В. Д., Деева В. С. и др. Приживляемость трансплонтантов крупного рогатого скота с учетом иммуногенетического статуса производителей, доноров, реципиентов // Докл. ВАСХНИЛ. - 1992. -№11, 12-С. 27-30.

45. Тихонов В. Н. Использование групп крови при селекции животных. М., "Колос". 1967. 391 с.

46. Усенбеков Е. С. Генотипирование крупного рогатого скота по ло-кусам k-казеина, бета-лактоглобулина и мутации BLAD // Автореф. дисс. Канд. биол. наук Санкт-Петербург. - Пушкин. - 1995.

47. Фотиадис Ф. В., Смирнов О. К., Сороковой П. Ф., Будникова А. В., Евдокимов Ю. С. Использование иммуногенетических маркеров с селекции молочного скота//Животноводство. - 1983. - № 12.-С. 37-38.

48. Чернушенко В. К. Повышение эффекта селекции молочного скота при использовании иммуногенетических маркеров: Автореф. дис. . док. -С.-х. наук / ВИЖ. Дубровицы. 1992. - 50 с.

49. Эйснер Ф. Ф. Теория и практика племенного дела в скотоводстве. -Киев: "Урожай". 1981. - 192 с.

50. Эрнст Л. К. Крупномасштабная селекция в животноводстве // Достижения науки и техники АПК. 1989. - № 2. - С. 28 - 30.

51. Эрнст Л. К. Принципы применения пропуляционной и молекулярной генетики в селекции с.-х. животных / Сельхоз. биология. 1990. - № 2. -С. 3- 10.

52. Эрнст Л. К. Современные тенденции развития биологических исследований в животноводстве // Сельхоз. биология. Агропромиздат. 1989. - № 2. - С. 3 - 9.

53. Agerholm J. S., Houe H., Jorgensen С. В., Basse A. Bovine leukocyte adhesion deficiency in danish holstein-fresian cattle. II. Patho-anatomical description of affected calves // Acta vet. Scand. 1993. - V. 34.

54. Alexander J. A., Bailey E., Woodward J. Analiysis of equine lymphocyte antigen system by Southern blot hybridization // Immunogenetics. 1987. - V. 25. - P. 47-54.

55. Andersson L. Organization of the bovine MHC class II region as revealed by genomic hibridizations. // Animal genetics. 1988. - V. 19. - P. 32 - 34.

56. Aschaffenburg R., Drewry J. Occurence of differant p-lactoglobulins in cow's milk. //Na. 1955. - V. 176. - P. 218 - 219.

57. Askonas B. A. Crystalisation of goat (3-lactoglobulin. // Biochem. J. -1954.-V. 58.-P. 332-336.

58. Ballagi-Pardany A., Klintevall K., Merza M. et al. // J. Vet Med. B. -1992.-V. 39.

59. Bell J. I., Todd J. A., McDevitt H. O. The molecular basis of HLA-disease association // Advannces in human genetics / H. Harris, K. Hirschhorn. -№. Y. andL.: Plenum press. 1989. - V. 18. Ch. 1. - P. 1-42.

60. Bell K., Mckenzie H. A. P-lactoglobulin in the milk of banteng buffalo. // Aust. J. Biol. Sci. 1981. - V. 34. - P. 133 - 147.

61. Bell K., Mckenzie H. A., Shaw D. C. Amino acid composition and peptide maps of P-lactoglobulin variants. // Biochim. Biophis. Acta. 1968. - V. 154. -P. 284 - 294.

62. Blackburn D.E., Hobbs A.A., Rosen J.M. Rat B-casein: Sequense analysis and evolutionary comparisons // Nucl. Acids Res. 1982. - V. 10. - P. 2295.

63. Boichard D., Coquereau J. A., Amigues Y. et al // 46th Ann. Meet. Eur. Assoc. Animal Prod. Prague. - 1995. - P. 86.

64. Butler P. J. G., Harris J. I., Hartley B. S., Leberman R. Reveraible blocking of peptide amino groups by maleic anhidride. Biochem. J. 1967. - V. 103. -P. 78 - 79.

65. Calafat J., Hadermann P. C., Ressang A. A. Structure of С type virus particles in lymphocyte cultures of bovine origin. J. - №at. Cancer Inst. - 1974. -V. 52.-№4.-P. 1251 - 1257.

66. Callahan R., Lieber M. M., Todaro G. J. et al. Bovine leukemia virus genes in the DNA of leukemic cattle. Science. - 1976. - V. - 192. - № 4243. - P. 1005- 1007.

67. Cameron P. U., Tabarais H, A., Pulendran В., Robinson W., Dawkins R. L. Coservation of the central MHC genome: PFGE mapping and RFLP analysis of complement, HSP70, and TNF genes in the goat // Immunogenetics. 1990 b. - V. 31.-P. 253-264.

68. Conti A., Liberator J., Napolitano. L. Heterogenety of equine 3-lactoglobulin. // Milchwiss. 1982. - V. 37. - P. 338 - 340.

69. Cosgrove D., Gray D., Dierich A., Kaufman J., Lemeur M., Benoist C., Mathis D. Mice lacking MHC class II molecules // Cell. 1991. - V. 66. - № 5. - P. 1051 - 1059.

70. Deverson E. V., Wright H., Watson S., Ballingall K., Huskisson N., Diamond A. G., Howard J. C. Class II major histocompatibility complex genes of the sheep // Animal genetics. - 1991. - V. 22. - P. 211-227.

71. Eisenman R. №., Vogt V. M. The biosynthesis of oncovirus proteins. -Biochim. biophys. Acta. - 1978. - V. 473. № 3. P. 187 - 239.

72. Elliot Т. E., Townsend A., Cerundolo V. №aturally processed peptides //Nature. - 1990. - V. 384. - № 6296. - P. - 195 - 196.

73. Erlich P., Morgenroth J. Uber Haemolysine // Berline. Klin. Wo-chenschr. 1900. № 1. - P. 453 - 457.

74. Ferguson L. C. Heritable antigens in the erythrocytes of cattle. // J. of Immunology. 1941. - V. 40. - P. 213-242.

75. Figueroa F., Gutknecht J., Tyichy H., Klein J. Ciass II Mhc genes in rodent evolution // Immunological reviews. 1990. - № 113. - P. 27-46.

76. Flajnik M. F., Pasquier L. D. The major histocompatibility complex of frogs // Immunolgical reviews. 1990. - № 113. - P. 47-64.

77. Fujii J., Otsu K., Zorzato F., Deleon S., Khanna V.K., Weiler J.E.,O'Brien P.J., Maclennan D.H. Identification of a mutation in porcine ryanodin receptor associated with malignant hyperthermia // Science. 1991. - V. 253. - P. 448 - 451.

78. Germain R. №., Hendrix L. - P. MHC class II structure, occupancy and surface expression determined dy post-endoplasmic reticulum antigen binding // Nature. - 1991. - V. 353. - P. 134 - 139.

79. Gregory Т., Black and Robert D. Bremel. Correlation of the Lactalbumin (+15) Polimorphism to milk production and milk composition of holsteins // J. Dairy. Sci. 1993. - V. 76. - P. 2292 - 2298.

80. Grosclaude F., Pujolle J., Gamier J., Ribadeau-D-umes B. Genetic control of the k-casein of cow's milk; close linkage of the k-Cn locus with the as-Cn and (3-Cn loci // Anim. breed, abstr. 1966. - V. 34. - P. 189.

81. Holstein cattle // Proc. NatLAcad. Sci. USA. 1992. - V. 89. - P. 92259229.

82. Jeffeys A. J., Wilson J., Thein S. L. Hypervariable minisatellite regions in human DNA // Nature. 1985. - V. 314. - P. 67 - 72.

83. Jeness R. Inter-species comparison of milk proteins. // Applied Science Publishers. 1982. London. - P. 87 - 114.

84. Joosten I., Hensen E. J., Sanders M. F., Andersson L. Bovine MHC class II restriction fragment length polymorphism linked to expressed polimorhism // Immunogenetics. 1990. - V. 31. - P. 123-126.

85. Joosten I., Sanders M. F., Hensen E. J. MHC class I compatibility between dam and calf increases the risk of bovine retained placenta // Animal genetics. J. 1991.-V. 22. Suppl. l.-P. 114.

86. Kehrli M. E. Jr., Smalsteig F. C., Anderson D. C. et al. Molekular defection of the bovine granulocytopathy syndrome: Identification of deficiency of the Mac-1 (CD1 lb / CD 18) glycoprotein // Am. J. Vet. Res. 1990. - V. 51.

87. Kehrly M.E., Shuster D.E., Ackermann M.R. Leukocyte adhesion deficiency among Holstein cattle // Cornell Vet. 1992. - V. 82. - P. 103 - 109.

88. Kessler E., Brew K. The whey proteins of pigs milk. I. Isolation and characterization of a (3-lactoglobulin. // Biochim. Biophis. Acta. 1970. - V. 200. -P. 449-458.

89. Kettmann R., Burny A., Cleuter Y. et al. Distribution of bovine leukemia virus proviral DNA sequences in tissues of animals with enzootic bovine leukosis. -Arch. Intern. Physiol. Biochim. 1977. - V. 85. - № 5. - p. 989 - 991.

90. Klintevall K., Ballagi-Pardany A„ Naslund K., Belak S. // Vet. Microbiol. 1994. - V. 42.

91. Klintevall K., Berg A., Svedlund G. et al. // Veterinary Record. 1993. -V. 133.

92. Lalley P. Report of the committee on comparative gene mapping // cytogenet. Cell Genet. 1988. - V. 49. - P.228.

93. Landsteiner K. The specificity of serological reactions. Cambridge, Massachusetts, Harvard Univ. Press. 1946.

94. Liberatori J. (3-lactoglobulin. Chemical and structural studies. // Folia Vet. Lat. 1977. - V. 7. - P. 205 - 222.

95. Linderetrom-Lang K. Studies on casein. II. Is casein a homogeneous substance. C. r. Trav. Lab. Carlaberg.- 1925. V. 16. - P. 48 - 62.

96. Maijala K. Gene mapping in cattle // Proc. Inter. Symp. Slusovice. -1989. CSFR. P. 23 -33.

97. Maijala K., Lindstrom G. Frequencies of blood group genes and factors in the Finnish cattle breeds with special regard to breed comparisons. Ann. Agric. Finnial. 1966. V 5. - P. 76 - 93.

98. Marche P. №., Rebiere M. C., Laverriere A., English D. W., Le-Guern C., Kindt T. J. Definition of rabbit class I and class II MHC haplotypes us-ind molecular typing procedures // Immunogenetics 1989. - V. 29. - P. 273-276.

99. Mckenzi H. A., Sawyer W. H. Effect of pH on (Hactoglobulin. // Na.- 1967.-V. 214.-P. 1101-1104.

100. Mellander O. Electrophoretische Untersuchungen von Casein // Bio-chem. Z. 1939. - V. 329. - S. 240.

101. Mepham T.B., Gaye P., Mercier J.-C. Biosynthesis of milk proteins/Ed. Fox P.F. Developments in dairy chemistry-1. L.; N. Y.: Applied sci. Publ.- 1982.-P. 115.

102. Mercier J. C., Maubois J. L., Poznanski S., Ribadeau-Dumas B. Frac-tionnement preparatif des caseines de vache et de brebis par chromatographic sur

103. DEAE-cellulose, en milieu uree et 2-mercaptoethanol. Bull. Soc. Chim. Biol. -1968.-V. 50.-P. 521 -530.

104. Miller S. A., Dykes D. D., Polesky H. F. A simple salting out procedure for extracting DNA from human nucleated cells // Nucleic Acids Res. 1988. -V. 16. -№. 3. - P. 1215.

105. Nagasawa et al. Whey proteins of the milk of dogs. // J. Dairy Sci. -1972. V. 55. P. 1550- 1552.

106. Neelin J. M. Variants of k-casein revealed by improved starch gel electrophoresis // J. Dairy Sci. 1964. - V. 47. - P. 506.

107. Nei М/ Genetic distance between population. Amer. №ature. - 1972. -V. 106.-P. 283 -291.

108. Neimann-Sorensen A. Blood groups of cattle. Immunogenetics Studies on Danish Cattle Breeds. Kopenhaven. - 1958. - P. 45 - 59.

109. Neimann-Sorensen A., Robertson A. The association between blood groups and several production charactsristics in three Danish cattle breeds // Acta. Agr. Scand. 1961. - V. 11.-№ 12. -P. 163- 196.

110. Palmer A. H. The preparation of a cystalline globulin from the albumin fraction of cow's milk. // J. Biol. Chem. 1934. - V. 104. - P. 359 - 373.

111. Rask L., Andersson L., Gustafsson K., Jonsson A. K. Parsimony analysis of mammalian class II histocompatibiliy complex genes // Immunology reviews. 1990. -№ 113.-P. 187-205.

112. Rendel J.,Gahne B. Serological and biochemical methods for diagnosis of Zigosity in cattle twins. // Proc.EAAP meeting in Stockholm. 1960. № 8. -P. 162- 190.

113. Reynolds J., Weir B. S., Cockerham С. C. Estimation of the coances-try coefficient: Basis for a short-term genetic distance. / Genetics. 1983. - V. 105. -P. 767-779.

114. Robertson A. Blood-groupping in dairy cattle improvement // Prog. VII Intern. Congr. Anim. Breed. 1956. - № 2. - P. 79-83.

115. Saiki R.K., Gelfand D.H., Stoffel S., Scharf S.J., Higuchi R., Horn

116. G.T., Mullis K.B; Eriich H.A. Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA-polymerase // Science. -1988. V. 239. - P. 487 - 491.

117. Saiki R.K., Scharf S., Faloona F., Mullis K.M., Horn G. Т., Eriich

118. H.A., Arnheim N. Enzymatic amplification of b-globulin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia. -Science. 1985. - V. 230. -P. 1350- 1354.

119. Sambrook J., Fritsch E., Maniatis T. Molecular cloning. A laboratory manual. Cold Spring Harbour Laboratory Press. - 1989. - New York.

120. Sarmiento U. M., Sarmiento J. I., Storb R. Allelic variation in the DR subregion of canine major histocompatibility complex // Immunogenetics. 1990. -V. 32.-P. 13-19.

121. Schleger W., Mayrhofer G., Stur J. Relationships between marker gene heterozigosity and fitness in dairy cattle // Anim. Blood. Grps. Biochem. Genet.- 1977. Suppl. 1. -P. 42.

122. Schmidt D. C. Starch gel electrophoresis of k-casein. Biochem. Bio-phys. Acta. 1964. - V. 90. P 411 - 414.

123. Shmid D. O., Bushemann H. G. Blutgruppen bei Tleren. Stuttgard: Enke. 1985.428 p.

124. Shmid D. О., Rensmeyes W., Cwik S. Red cell associated antigens the B-blood group system on bovine and sheep lymphocytes // Anim. Blood Grps. Biochem. Genet. 1978. - V. 9. - P. 47 - 49.

125. Shuster D. E., Kehrli M. E., Ackermann M. R., Gilbert R. O. Identification and prevalence of a genetic defect that causes leukocyte adesion deficiency in holstein cattle // Proc. №atl. Acsd. Sci. USA. - 1992. - V. 89.

126. Stomont C. Erythrocyte mosaicism in a heifer recorder as singleborn. //J. anim. Science.- 1954.-V. 13. № 1.-P. 94-98.

127. Stomont C., Cumley R. W. Cellular antigens in cattle blood. // J. Heredity. 1943. - V. 34. - P. 34 - 41.

128. Takahashi M., Miyagawa K., Abe S. et al. Bovine granulucytopathy syndrome of Holstein-Friesian calves and heifers // Jpn. J. Vet. Sci. 1987. - V. 49. - № 1.

129. Tammen I. Weiterentwicklung des DNA-Tests auf BLAD (Bovine Leukozyten Adhasions defizienz) fur den Einsatz in Rinderzucht und klinscher Diagnostik. Hannover. 1994.

130. Teale A. J., Kaushal A. Q., MacHugh N., Toye P., Bensaid A. Bovine MHC class I cDNA clones: evidenece for expression of two loci. // Animal genetics. 1991. - V. 22. Suppl. 1. - P. 59.

131. Thompson M.P., Farrell H.M. In: Lactation/Larson B.L., Smith V.R., eds. №.Y.: Acad. Press. - 1974. - V. 3. - P. 109-132.

132. Todd C., White R. G. On the hemolytic immuno-isolysins of the ox, and their relation to the question of individuality and blood relationship. J. Hyg. -№. 10.-1910.

133. Todd C., White R. G. On the recognition of the individual by hemolytic methods. Proc. Roy. Soc. 82, London. 1910.

134. Wake R. G., Baldwin R. L. Analysis of casein fractions by zone ele-crophoresis in concentrated urea. Biochim. Biophis. Acta. 1961. - № 47. - P. 225 -239.

135. Winkler Ch., Schultz A., Cevario St., O'Brien St., Genetic characterization of FLA, the cat major histocompatibility complex // Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 1989. - V. 86. - P. 943-947.

136. Womack J. E. Molecular genetics arrives on the farm // Nature. -1998.-V. 360.-P. 108- 109.

137. Womack J. E. Strategies for development of a bovine gene map // XXI Intern. Conf. Anim. Blood Groups Bioch. Polimorph. 1988. - P. 13.

138. Woychik J. H., Polymorphism in k-casein of cow's milk. Biochem. Biophys. Res. Comm. 1964. P. 267-271.

139. Yhki N., O'Brien S. J. Molecular charcterization and genetic mapping of class I and class II genes for the domestic cat // Immunogenetics. 1988. - V. 27.-P. 414-425.

140. Yuhki N., O'Brien ST. J. DNA variation of the mammalian major histocompatibility complex reflects genomic diversity and population history // Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 1990. - V. 87. - P. 836-840.

141. Zoorob R., Behar G., Kroemer C., Auffray C. Polymorphism of class II MHC genes in the domestic fowl // Animal genetics. 1991. - V. 22. Suppl. 1. P. 62.5 х-