Интенсификация биотехнологических процессов получения дрожжевой биомассы повышенного качества

Максимова, Гальвина Николаевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Интенсификация биотехнологических процессов получения дрожжевой биомассы повышенного качества
ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Интенсификация биотехнологических процессов получения дрожжевой биомассы повышенного качества"

РГ б од

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ПО ВЫСШЕМУ ОБРАЗОВАНИЮ РОССИЙСКИЙ ХИМИКО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ии. Д.И. МЕНДЕЛЕЕВА

На правах рукописи

МАКСИМОВА ГАЛЬВИНА НИКОЛАЕВНА

ИНТЕНСИФИКАЦИЯ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ ПОЛУЧЕНИЯ ДРОШЕВОЙ БИОМАССЫ ПОВЫШЕННОГО КАЧЕСТВА

Специальность 03.00.23 - Биотехнология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени докюра биологических наук

Т20СХВА -'1994г.

Диссертационная работа выполнена в Государственном научно-исследовательском институте биосинтеза белковых веществ (ГосНИИсинтезбелок)

Научный консультант - Винаров Александр Юрьевич, доктор технических

наук, профессор ГосНИИсинтезбелок, чл.-корр. ШАН

Официальны« оппоненты:

Безбородов Алексей Михайлович - доктор биологически наук, профессор

института Биохимии РАН им. А.Н. Баха Грачёва Ирина Михайловна - доктор биологических наук, профессор

ЫГАПП

Побг тшзкий Дмитрий Глебович - доктор химических наук, профессор

МИТИ, академик РАТН

Ведущая организация:

Санкт-Петербургский Государственный Технологический институт ' (Технологический Университет) .

Защита диссертация состоится 'У199^7 в ¿0 ^ часов на заседании диссертационного совета в Российском химико-технологическом Университете имени Д.И. Менделеева по адресу:

' 125820, Москва, Миусская пл., 9. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке РХТУ им. Д.И.Меаделеез

Отзывы на автореферат (в 2-х экз., заверенные печатью,) просим на-

Об'Ъ.ЪУ. АЗ £ правлять в адрес диссертационного совета РГГУ им. Д.И. Менделеева

Автореферат разослан- 4 о 199/г.

Учёный секретарь диссертационного совета кандидат биол. наук ' Гусева И.И.

ВВЕДЕНИЕ . ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.. _

А^^ЗЛ^^ЗЗЗ^проблемн. Проблема полноценного питания людей постоянно оставалась актуальной для всего мира и для России, в част-"носмГ'ОсновишГисточником"полноцепного" белка -является мясо -нивот--ных. Растительный белок из-за низкого содержания в нём лизина, ме-тионина, триптофана и других аминокислот не может полностью запенить кивотный белок. По данным ФАО при ООН, суммарная потребность в белке к 2000 году достигнет 65 млн т/год; при этом енегодный мировой дефицит пищевого белка составляет 15-20 млн т, а для нашей ' страны - 1,7 шщ т. Меэду теы мировая потребность в полноценном белке.удовлетворяется лишь на 4-0^. При подходе к решению этой проблемы было обращено внимание на то, что многие микрооганизмы обладают высокими скоростями синтеза биомассы и белков. В этом плане значительный интерес представляют дрожки, поскольку для них характерны высокие темпы роста, быстрое накопление биомассы и белков, . а в связи с достаточно большими размерами их клеток они удобны для использования в промышленных масштабах. Белки дрошеей по аминокислотному составу соответствуют белкам ¿'квотных. Дрожки можно такие рассматривать как источник для получения ряда очень ценных препаратов медицинского и ветеринарного назначения.

Современный уровень развития биотехнологии позволяет использовать биомассу дрокжей лишь как кормовую добавку. Экономически выгоднее использовать биомассу дрожжей непосредственно в питании человека, т.е. не используя сельско-хозяйственных животных в качестве промежуточного трофи'. некого звена, поскольку это приводит к значительным потерям белка (до 90%). Однако,использование биомассы дрожлей для пищевых целой ограничено в связи о теи, что ола, кро2£е полноценных:, белковых веществ, ря.та других важных продуктоз, включает такжо л такие нежелательные иди содержащиеся в непропорционально высоких количествах компоненты, как нуклеиновые кислоты,

трудногидролизуеыые материалы югеточных стенок (КС), нирные кислоты с нечётным числом углеродных атомов и другие, которые могли бы" • снигать питательную ценность биомассы и оказывать неблагоприятное воздействие на организм человека.

В пашой стране слонились богатые традиции промышленного производства биомассы дровжей с использованием непищевого сырья, такого, как гидролизаты древесины и сельско-хозяйственные отходы, сульфитные щелокя. углеводороды нефти и отходы пищевых производств, т. е. дрокжи являются традиционным объектом исследования биотехнологических процессов^ Одним из наиболее крупнотонназпых производств в нашей стране являлось получение паприна - белково-витаынного концентрата (БШ) из парафинов нефми Парафины в качестве субстратов имеют ряд преимуществ перед древесными и растительными гидролизатаыи, поскольку они имеют относительно постоянный химический состав, хорошо хра--нятсп и транспортируются, что позволяет стабилизировать технологические поеазатели и качество готового продукта^ С учётом специфики углеводородного типа питания и высокого народно-хозяйственного эффекта от использования паприна в качестве кормовой добавки, на примере решения проблем именно этого крупнотоннажного производства оказалось возмоаным впервые разработать и испытать в промышленных условиях многие приёмы интенсификации роста и повышения биологической ценности биомассы1 '

Для интенсификации биосинтеза биомассы мы вводили в питательную среду биостимуляторы, отобранные.нами в процессе скрининга и наиболее перспективные с точки зрения крупнотонназного производства. Для целенаправленного изменения качества биомассы на постферментационных стадиях использовали химико-ферментетивную обработку биомассы, при этом осуществляли избирательный ферментативный гидролиз лолисахаридных компонентов КС^ При зтом .наш теоретический подход в процессе решения определённой практической задачи по разработке

.. интенсивных технологий получения биомассы улучшенного качества характеризовался особым вниманием к У.С дронкей (КСД), её структуре и ме-—таболизыу, поскольку в технологической_плане ваицое значение имеет, с одной стороны, динамизм в синтезе и распаде КС, а с другой стороны, условия посгфврментационных изменений качества биомассы доданы быть связаны с качественным составом и строением клеточных стенок. Для решения поставленной в данной работе цели необходимо было- разработать такие биотехнологические процессы, в которых в основе было би воздействие.различной интенсивности на КС, - её часткная дезинтеграция, автолиз, гидрояятичеекое расщепление литическиш: Сермептетт, тепловой шок и у', д/ При этом следует отметить, что как методически подходы, так и результаты исследований, полученные нами применительно к одному из наиболее крупных многотоннажных биотёхнодогических производств, как производство паприка, могут быть использованы и при • конверсии других субстратов« т^е,." при-решении.общих вопросов, относящихся к крупнотоиваяной биотехнологии, з иикробиологичсско!' ¡1 медицинской промышленности.

_Й£2£._1Шботы_ заключалась в разработке научных,основ п практической реализации высокопроизводительных, ресурсосберегающих, малоотходных биотехнологическнх процессов получения дрогеяевой биомассы повышенной биологической ценности.

В соответствии с поставленной целью решались следующие задачи: I. Исследовать роль КС, как первого барьера проницаемости :: боль- ■ - - того л о ыассе дошояеяга гжщх, в метаболизме дрозкоД, аарадеани:: на среде с парафинами;

- установить локализацию и динамику распределения отдельны:-; фракций углеводородов » .компонентах клеток в процессе кудьтг:'-акро2с.-г::л "дозревания" биомассы;

,изучить изменения химического состава КС к бкоиасса л::-:.:.:.), в зависимости от условий их культивирования;

- изучить структуру наиболее ригидного компонента клеточных стенок дрожжей глюкан-хитинового комплекса;

2. Провести скрининг биостимуляторов роста клеток среди органических и неорганических соединений, а также материалов сложного состава, в том числе отходов различных биологических производств., и экспериментально разработать проблему интенсификации процесса культивирования биомассы дрожжей, включающую решение следующих вопросов:

-увеличение скорости и эффективности роста культуры, увеличение производительности ферментёров, снижение расходных коэффициентов по субстрату и компонентам минерального питания;

- повышение качества готового продукта по ряду показателей, определяющих его биологическую цсность (увеличение содержания белка, улучшение его аминокислотного состава, снижение содержания углеводоро дов и липндов и др.);

- улучшение экологических характеристик процесса получения биомасс^

3. Разработать научные основы и технологию применения ферментативного гидролиза паприна путём предпочтительного воздействия на глюкановый компонент их клеточных стенок:

- исследовать роль протеаз, глюканаз и липаз в.лизисе клеточ- • дых сгенок дрожжей;

- исследовать специфику ферментативного, гидролиза интактной и ин-активир ланной биомассы и изучить возможность интенсификации этих процессов для получения биомассы повышенной биологической ценности ..

ряда продуктов переработки биомассы;

- разработать безотходную технологию комплексной химико-ферментативной обработки биомассы парафивокисляющих дрожжей для получения из неё белковых концентратов, универсальных компонентов питательных сред, биологически активных веществ (БАВ) и др.;

Апробировать основные результаты исследований в опытно-промышленных и промышленных условиях и организовать их внедрение в условиях крупнотоннажного производства биомассы.

Научная новизна работы заключается в создании нового направления в исследованиях, касащихся получения дроетевой биомассы повышенной биологической ценности, которое носит комплексный характ р и включает интенсификацию процесса культивирования биомассы, а такае целенаправленное изменение её качества как> процессе выращивания, "ад и на постферментационных стадиях. При этом получены новые результаты методического, теоретического а.прикладного характера:-

1. Установлено, что содержание и фракционный состав остаточных углеводородов, локализованных в клеточных стенках, протоплазме и ин-тантных клетках, массовая доля клеточных стенок в клетке, форма и размеры клеток, химический состав клеточных стенок и дроаневой биомассы, а также технологические- показатели процесса культивирования дрожжевых клеток на средах с парафинами не являются постоянной величиной к подвержены значительный изменениям в зависимости от стстаза среды и параметров процесса выращивания и дозревания биомассы: источник углерода, состав и количество подаваемых па фер:лектац:та парафинов, периодический или непрерывный процесс, белковый или жировой режимы, возраст культуры, скорость протока, введение в питательную среду стимуляторов, использование отработанной культуралъной жидкости (ОКЖ) и др.

2. Установлено, что стадия дозревания оказалась очень эффективной для улучшения качества биомассы (снижения в клеточных стенках и биомассе липидов и остаточных углеводородов, включая фракцию С^ и выше, увеличения содервания белка).

3. Выявлен широкий спектр стимуляторов, представляющих собой как индивидуальные соединения органической и неорганической природы, так и смеси сложного состава, включая отходы различных бкологичоск;::-: производств, позволяющие интенсифицировать процесс кудьгагарогац;;;: биомассы дрохзей, что проявлялось в увеличении скорости ;; эейеигг.^по.. .. роста культуры, увеличении производительности1ферментеров, скиноюш расходных коэффициентов по субстрату и компонентам минерального пи-

хания, повышении качества готового продукта и улучшении экологических < характеристик процесса, в частности, такие стимудяяоры.:

- сульфит на.трия, известный ранее как дезинфецирующее вещество, '' токсичное для микроорганизмов; впервые показано, что он при определё: ных условиях способен резко интенсифицировать рост дрожжевой, биоыас- ;

.................■ ■ .............................................■.■•■ I

са, увеличивать проницаемость клеточных стенок для углеводородов и других компонентов писания и резко увеличивать физиологическую активность клеток;

- гибберсиб - подигиббередлиновый препарат, полученный на основе гриба (ТиоЫО'^ыуг^; показано, что он действует па-рост дроакей, кал и'на высшие растения, а именно на проницаемость и состав клеточ- ' ных стенок и мембран, на белковый, углеводный, солевой и липиднай обмены;

- ферментные препараты преимущественно ^-гликаказного действия, позволяющие в результате частичного нарушения целостности клеточных стенок увеличивать их. проницаемость, количество почкующихся клеток' до 60/5 (отмечается множественное почкование) и скорость роста " ронже!

- метаболиты высших грибов, пйдучаеыссс в условиях глубинного куль-'-тивирования; •

- отходы биотехнодогических и биологических производств - произвс ства кристаллического л: зина , ксилита, протеиновых зелёных концентратов, активный ил и др. .

- оксидаты парафинов, полученные окислительной деструкцией пара-' финов в присутствии солевьвс катализаторов (солей марганца или железа) способствующие резкому сокращению продолзкительности лаг-фазы и увеличению скорости роста дроааей;

- гипохлорит калия;

- бактериородопсин и др.- ' . .

В процессе исследования биостимуляторов выявлены такие попутные эффекты, как резкое снижение.,ценообразования в процессе ферментации, например, на средах с глюкозой или этанолом, под действием

. - у -

предобработаниого активного илё;

5. Выявлены условия значительного повышения биологической активности и резкого снижения удельного расхода изученных стимуляторов за____,

счёт подачи их в виде композитов (синергический эффект) или химической модификацией их, например, выдерживанием в присутствии ионов ые- , таллов переменной валентности.

6. Обнаружено, явленно последействия грибных биостимуляторов, состоящее в том, что интенсификация дрожжей продолжается в течение длительного времени после прекращения, подачи стимуляторов.

7. Впервые для дроижей, выращиваемых на средах с пзрафипами, осуществлён лизис клеток под действием ферментов' гликаназного типа, растворяющих трудно расщепляемые полисахариды, формирующие опорный мате- ! риал клеточных ст-енок; при этом получены следующие результаты:

- доказана главная, роль ^-глюканаэ и протеаз в лизисе клеточных, стенок дрожжей; показала важная роль хатиназ в лазайе 1С;

- показано, что липазы не дейстзуют на инзактные плетки дрожаеи; .

- подобраны ферментные системы, действие которых избирательно направлено на ^-глюкановыв структуры клеточных стенок дрожжей;

- выявлены условия интенсификации лизиса как ицтактных, так и ш;-активированных дрожжевых клеток;

- впервые получены протопласты интактных клеток парафинпкисля;зщ::х дрожжей; _ '..............-. . . -

- выявлена'эффективность кратковременного высо-отемпсратурпого плазмолиза биомассы парафинокисляющих дрожией в аппаратах с ралнсс^ поверхностью фазового контакта и противоточным движением фаз для стабилизации её высокого качества, интенсификации ферментативного гпдро-'лиза и инактивации клеток дрожжей и сопутствующей шкроцаюрн;

8. Разработана технологическая схема комплексной переработки биомассы, включающая глубокое избирательное расщепление материалов псл:'.-сахаридов клеточной-стенки, для получения белковых концентратов повышенной биологической ценности, универсальных компонентов питатель-

пых сред, биологически активных веществ (БАБ) и др1;

9. Разработаны новые методы определённа углеводородов и-липидов в дропсевых клетках и их компонентах (весовые, объёмные, иорфометри-. ческис), а такае новые методы характеристики ферментных препаратоз и методы ферментативного гидролиза биомассы!

Практическая ценность и промышленная реализация результатов

исследований!

Практическая ценность работы заключается в том, что нами были разработаны высокопроизводительные, малоотходные и ресурсосберегающие-технологические процессы'культивирования дрожаевой биомассы повышенной биологической ценности с использованием биостимуляторов роста клеток, а также разработаны технологические схемы комплексной пост-^ормоитавдонной переработки биомассы, включающие сочетания стадий тсп-| ловой, химической и ферментативной обработки биомассы и позволяющие получать из неё биомассу и белковые концентраты повышенной биологической ценности, универсальные компоненты питательных сред для выращивания микроорганизмов, БАВ и другие ценные продукты:

1. Разработаны требования, предъявляемые'!: качеству паприна, на основе установленного нами 'факта, что биомасса парафинокисляющих дроетой всегда содервит та« называемые остаточные'углеводорода (ОУГВ), состав которых отличается и состава исходного парафина, и опредення "ест ественного.фона" углеводородов,' встречающихся в обычных кормах

и ппщо человека!

2. Показано, что практическое решение проблемы депарафинизации паприна еподует искать не только и не столько по пути химической очистки биомассы, например, экстрактивной, сколько по пути целенап-

' равленпого выращивания и дозревания в таких условиях, которые обеспечивают минимальное накопление углеводородов и липидов и максимальное содержание белка в клетках,

3. Внедрение разработанных технологических процессов получения паприна позволило на разных заводах улучшить технологические показа- ;

.тели, что проявилось в увеличении на 10-20$ выхода биомассы, на 5,0-8,От/сутки производительности промышленных ферментёров, на 10-40$ про дуктивности процесса, снижениям на 10-30$ расходных коэффициентов по парафину и на 5-15$ по компонентам минерального питания, а также улучшить качество биомассы по содержании бедка, остаточных углеводородов и другим показателям и получить значительный экономический эффект (более 7 млн. рублей, в ценах до 1991 года) лишь за счёт использования стимуляторов, а совершенствование стадии дозревания лишь в условиях БЕХК позволило сэкономить более I млн.210 тыс. рублей, в ценах до 1991 года).

Достигнуто существенное улучмение экологической обстановки на заводах БВК за счёт более полного потребления субстрата и продуктов метаболизма и, соответственно, снижения сброса загрязнений на очистные сооружения, а также на других биологических производствах, отходы которых использовали в качестве' биостимуляторов в производстве паприна;

5. Разработанная технология комплексной переработки биомассы позволяет освобождать такие ценные продукта, как молоко, мясо и солод лишь за счёт использования белковых компонентов в ЗЦЫ и униьерсага ных компонентов питательных сред для выращивания микроорганизмов.

6. Результаты выполненных исследований включены з отчёты Ш1Р института, лабораторию' и промышленные технологические регламенты, исходные данные; значительная часть разработок отражена ь авторски, свидетельствах и патентах и внедрена на действующих. биохимкокбилата;'..

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы з целом доложены на Межлабораторнон Коллоквиуме ГосНИИсинтсзбелок. Отдельные части работы доложены на Зсесскзных конференциях и симпозиумах (Минск, 1978; Щелково, 198?; Тбилиси, 1987; Кишинёз, 1988; Пущино-на-Оке, 1989; Тамбов, 1990;: Махачкала, 1990; Волгоград,199;':•; на микробиологических съездах (Рига, 19.80; Алма-Ата, 1986)'; на биохимических съездах (Ленинград, 1979);- на Международных симпозиумах

и Въездах по микробиологии,.биотехнологии и биохимии (Дельфт - Голландия, 1969; Хельсинки, 1973; Пущино-на-Оке, 1983).

Публикации. Общее количество публикаций - 132; материалы диссертации изложены в 97 основных работах (без' учёта тезисов докладов на Всесоюзных и Международных конференциях и ряда информационных сообщений); • защищены 54- авторскими свидетельствами и патентами. Опубликовано 3 обзора литературы.

Объём и структура работы. Диссертация состоит из введения, 7 глав,• общих выводов, библиографии из 551 литературного источника (из них на русском языке 364-) и приложения (том 2). Работа включает 141 таблицу, 59 рисунков. '

Основное содержание работы.

Во введении к диссертации Отражены актуальность проблемы, цель и задачи исследования, научная новизна и практическая ценность работы, апробация, структура и объём работы!

В главе I представлен обзор литературы по вопросам; окисления .. парафинов микрооганизмами; влияния специфики углеводородного тип питания и условий культивирования парафинокисляющих дрожжей на их рост и компонентный состав биомассы и КСД; интенсификации роста ' дрожжей с использованием биостимуляторов; действия сульфита на клетки микроорганизмов и кофе юры различных ферментов; получения белко-. вых продуктов повышенной биологической ценности, питательных сред и др.

Экспериментальная часть представлена в б-главах (2-7), резулыа- .. ты собственных исследований представлены в 5 главах (3-7).

В гле з 2 "Материалы и методы" представлены объекты исследования (микроорганизмы и условия их культивирования); характеристики стимуляторов р^ста дрожжевых клеток и ферментных предаратов, отобранных в.процессе скрининга; химико-аналитические и биохимические методы исследования состава и физиологической активности дрожжевых клеток, в Юм. числе и разработанные нами методики определения остаточных углеводородов и липидов в прессованной и сухой биомассе (объ-

ёыные, весовые, морфометрическйо); методики, касающиеся характеристики технических фераенткшс препаратов и методов ферментативного гидролиза биомассы. ------------------------------ ------ _ _ _

Глава 3 посвящена исследования« взаимосвязи между распределением углеводородов в клетках, технологическими показателями роста и компонентным составом биомассы и клеточных стенок паррфинокислякщих дрожжей»

В главе 4 представлены результаты исследования влияния биостимуляторов на зашшогпческив показатели роста и качество дронжевой биомассы.

В главе 5 представлены результаты исследований процесса ферментативного воздействия на изолированные клеточные стенки и биомассу парафинокислявщих дрожжей.

В главе 6 представлены результат исследований влияния условий термообработки {ТО) на качество и пизируакоежь. дрожаевой биомассы, а также на инактигацию клеток продуцента и сопутствующей микро'поры.

В главе 7 представлены результаты по разработке технологической схемы, позволяющей получать белковые концентраты с пониженным содзр-ганием нуклеиновых кислот, материалов клеточных стенок, осгаточнцх углеводородов и липидов, а такге универсальные компоненты питательных сред, биологически активные .вещества и др,

Каждой главе предшествует введение, какдый подраздел и кавдая глаза в целом заканчиваются заключением, в котором подводятся эс"озн'_!е итоги по полученным результатам. В конце работы даны выводы по работе в целом и список литературы.

В отдельный том (том 2) вынесены приложения, где представлены, в основном, акты испытаний и акты внедрения отдельных разработок, акты об использовании изобретений на различных заводах отрасли л ■ экономические аффекты (ЭЭ) от их внедрения.

РЕЗУЛЬТАТЫ И С С ЛЕД.О Б.А Н И Я

I. Влияние условий культивирования парафинокислявдих дроззей на локализацию УГВ (углеводородов) в клетках, компонентный состав клеточных стенок и биомасса, а таюке на технологические, показатели её роста (Гл. 3)

Исследования мы начинали, когда крупнотоннаяное производство кормовых дроЕней из парафинов нефти только создавалось. Отработка технологии получения такой биомассы была вплотную связана с решением задачи получения биомассы с минимальным содерааниек ОУГВ, для чего необходимо было решить ряд проблем, касающихся поступления парафинов в клетку и влияния условий культивирования на распределение и состав ОУГВ в компонентах клеток. Для решения зтих задач пренде всего были нунны подходящие методы анализа парафинов, трудности определения который заложены в их специфике, связанной с отсутствием в их молекулах функ-. циональкых групп. Нами были разработаны объёмные, весовые и корфомет-рические методы анализа.

Использование этих методов в процессе исследований давало возможность вести эффективный контроль за оптимизацией и интенсификацией процессов выращивания и "дозревания" биомассы парафинокисля'ющих дрок-кей, поскольку позволяло оценивать баланс мекду поступлением парафинов в клетку и их утилизацией,'что крайне важно для выявления природы'метаболического лимитирования, приводящего к неполно^ утилизации субстрата. Было показано, что паприн всегда содержит остаточные углеводороды, состав которых отличается от состава исходного парафина; установлен "естественный.фон" углеводородов (0,1-0,2$), встречающихся в традиционных кормах дивотных и пище человека, и разработаны требования, предъявляемые к качеству паприна; изучена локализация углеводородов в компонентах клеток. Установлено', что при подаче парафинов широкой фракции (С-^-С^) содержание ОУГВ в клеточных стенках более чем в 2-3 раза было выше, чем в биомассе в целом. При использовании парафинов облегчённой фракции содержание ОУГВ в КС не 'превышало их содержание в биомассе, однако в том и другом случае в КС имело место относи-

тельное накопление н-алканов фракции С^ и выше. Полученные данные свидетельствовали с тоы, что в обычных условиях культивирования, т.е. без дополнительного диспергирования парафинов, замедленный переход н-алкапов с длиной углеродной цепи больше С^ в зону интенсивного метаболизма, по всей вероятности, является лимитирующей стадией окисления парафинов.

Показана ванная роль КС парафинокисляющих дрожжей в их метаболизме.

Установлена прямая пропорциональная зависимость между подачей парафина и содержанием ОУГВ, определяемых химическим методом, в КС и биомассе, с одной стороны, и между подачей парафина а относительный количеством включений липидной природы, с другой. Аналогичной зависимости между количеством подаваемого парафина и общим содержанием липидоз но выявлено (рис. 1-4). Установление факта повышенного накопления парафина в биомассе к КС при подаче субстрата сверх оптимального значения, а также обнаружение относительного накопления н-алканов С^ и выше в КС свидетельствовали о той, что как транспортное возможности ХСД, так и окислительная способность клеток из достаточно реализуются да:::с при использовании парафинов облегчённой фракции, т.е. парафинов оптимального состава. В связи с этим нами было сделано заключение о г.ооо-ходимости такого дополнительного воздействия на клетки, которое позволило о'ы как увеличивать проницаемость КС для субстрата, так и активизировать кислородэависимый процесс внутриклеточной трансформации парафинов, поскольку одной из предпосылок разработки интенсивных технологических процессов получения биомассы.является корреляция между полнотой исчерпания субстрата и максимальной продуктивностью фермеатёрй.

Для решения этой задачи необходимо было прежде всего установить, как изменяются химический состав и доля КС з клетке, а также технологические показатели роста и качество биомассы в зависимости от услоз:::: выращивания: источник углерода, состав и количество подаваемых на ыонтацию парафинов, периодический или непрерывный процесс, белковый или жировой режимы, возраст культуры, скорость протока, добавление

»л

«А

о 10 л 6 ч г

0,5 Л

м «

0 со к

ш 80 60 чо но

<3 5

2,5

а з у з С, $6об.

Рис.1. Влияние концентрации парафина (С) в среде па содержание ОУГВ в биомассе (I) и клеточных стенках (2) дрожжей ВСБ-569.

Рис.2. Влияние концентрации парафина (С) в среде на содертание остаточных н- и изоалканов в клеточных стенках дрожжей ВСБ-569. I - алканы,'2 - изоалканы, 3 ^ их отношение.

.(А

&0 в . к

0,4 0,8 /г р ,)0 гр гг о5 ^ з 5

лип/вкл./ ад. ,056 / С, %об.

Рис. 3. Взаимосвязь между содержанием ОУГВ (С) в биомассе (I) и клеточных стенках (2) дрожжей ВСБ-569 и относительным содержанием включений липидной природы (ВЛП) в* клетках.' •

Рис. <!•. Зависимость содержания общих (I) и свободных (2) липи-дов в биомассе, ВНЕ в биомассе (3), общих липидов в клеточных стенках ('0 от концентрации парафина в среде.

стимуляторов , использование отработанной культуралыюй пидкости и др. Полученные в результате исследований данные общего химического состава изолированных_КСД.свидетельствуют. об_ их_ значительном влиянии uacü- _ мен веществ у дрогшей, растущих на парафинах. Было установлено, что, по всей вероятности, в связи с приспособлением клетки к меняющимся условиям выращивания иыеют место достаточно широкие i лебания компонентного состава КСД,%: масса КС з клетке - 6-40; белок - 8,5-28; ОУГВ -1,2-10; общие гексозы - 23-83; гексозамин - 2,5-15,3; наннаны - 27-35. Отмечено также высокое содержание в КС глыкан-Зситинового комплекса и хитина в нёи (23-35®-), Тот факт, что верхние границу указашшх нентов достигают достаточно -больших значений, свидетельствует об использовании при определённых условиях.значительного количества материала для построения КС, что, как правило, коррелировало с ухудшением технологических показателей и со снижением качества готового продукта в целом. ■"'..■.

2. Интенсификация процесса культивирования и улучшение качеиива биомассы с использованием биостимуляторов (глаза 4).

В работе показано, что ослаблению отмеченных выше неблагоприятны:; тенденций з процессе получения биомассы способствует введение в среду ферментации биостимуляторов роста клеток, которые позволяют изменять содержание КС в клетке, их состав и проницаемость, а тзк;::с изменять технологические показатели, в благоприятную сторону и целенаправленно изменять качество биомассы, что-проявляется в скоросг:;

глубины утилизации параванов, в увеличении в биомассе содеркакдп солка, снинении ОУГВ и липидов.

2.1. Скрининг биостимуляторов.

В процессе работы над этой проблемой'мы убегались в том, чт;- :::.;'•-,; зеществ или материалов, которые могут быть использованы как схимулнгии?. в технологии получения парафинокисляющих дрсакей, чрезвычайно Это свидетельствовало о том, что метаболизм дрошей, растущих на углеводородах, носит напрягённый характер, т.к. он протекает в условиях дефицита по многим, выполняющим разные функции, биологически, активным

веществам самой разной химической природы: органические кислоты, уг-лег^ды, белки, виры, нуклеиновые кислоты, витамины, коферменты и т.д!

.'мея в виду это положение, иокно было оаидать, что соответствующим под-;

■ ■ I

бором (скринингом) могно найти достаточно эффективные и дешёвые вещества, которые в нашом процессе сыграют роль стимуляторов. При отборе стимуляторов к ним предъявляли следующие требования: I) проявление достаточно высокой эффективности при сравнительно низких дозировках; 2) полная безвредность в условиях применения; 3) невысокая-стоимость; ■ 4). растворимость в воде; 5) устойчивость при хранении, транспортировке и применении в условиях крупнотоннажного производства биомассы. Исследования механизма действия стимуляторов проводили в. лабораторных и аморальных условиях в том объёме, который был необходим для'разработки интенсивных процессов получения биомассы повышенного качества и рекомендации их для внедрения в опытно-промышленных и промышленных условиях. При этом .использовали химические, физико-химические, электронно-; микроскопические и другие методы (изучены'состав и структура КС, ферментативные активности клеток, в частности, таких ключевых ферментов . цикла Кребса, как изоцитратдегидрогеназа, изменение' Н^-АТФазы, элект-рокинехкческие свойстве, поверхности,.-окислительно-восстановительный потенциал среды и т^д.

Значительная часть разработок.была внедрена в крупнохоннааное производство, другие, как например, полифункциональные кислоты из сапро-пелитовы углей,-для которых была установлена зависимость их биологической актизности от степени углёфикации сапропелитов, представляют скорее научный интерес, поскольку к настоящему времени их-полученив налааено лишь в лабораторных условиях. В автореферате приводятся лишь, выборочно количественные показатели интенсификации роста дроше.й при. использовании биостимуляторов, в наибольшей степени соответствующих указанным выше требованиям и'наиболее перспективных с точки зреиия использования в условиях крупнотоннааного производства биомассы.

2.2. Сульфит натрия в качестве биостимулятора'

Из изученных нами стимуляторов особое место занял сульфит натрия.

До наших работ сернистокислые соли, также как и сернистый газ, были __известны, в основном,-как-токсические-для живых организмов вещсстза^ которые и на микроорганизмы действуют как стерилизующие агенты. Сульфит известен как сильный восстановитель/ Он оказызает модифицирующее действие на НК, белки и кофераенты (флавины, пиридо:.саль, пиридоксаль-фосфат, ¡Укр'й и др.) .Экзогенный сульфит способен концентрироваться внутри клеток (Слратфорд, 1586) Хотя известно, что многие БАВ, провв--. ляющие иигибирующее действие на рост кякрооргашплог, пр:: иых могут играть роль биостимуляторов, в отношении сульфита такие тонные в литературе отсутствовали. В наших исследованиях было показано, что при добавлении в питательную среду парафинокисляющях дробей оч^пь небольших кличеств сульфита натрия (менее 0мМ) происходит резкая активизация процессов биосинтеза и роста биомассы. Превышение этих зЕ1а-чеий оказывает токсическое дейстзие .на'дрожжи (.таблЛ) 0 резко» активации метаболизма клеток з присутствии сульфита натрия свидетельство -вали данные об ускоренном проникновении парафина, азотсодержащих солси, микроэлементов ц других компонентов из питательной среды з клетку, а также данные о существенном повышении физиологической а:стпзнос:п, что проявляется в увеличении общей дегидрогеназной активности на 2050/1, изоцитратдегидрогоназной активности'на количества почкующихся клеток на 20-40%, почти двукратном'увеличении электрокинетического потенциала, увеличении относительно контроля на 20-5С/3 максимальной удельной скорости роста культуры;.при этом в условиях периодического культивирования наблюдали сокращение зремеки ферментации на З-б чаооз. В присутствии сульфита заявлены з более резко;; форме различия в содержании, пероксисом и митохондрий, ло сравлоллз с описанными ранее данными для парафинокислящпх и глюкозасс1".п:л;;ру::п::х дрожжей (Мейсель, 1973) Наиболее резкиа различия выявлены в строении' КОД, что проявлялось в нарушении целостности маннан-протеинового верхнего слоя и снижении на 5-22$ содержания маннана и на 33-55^ белка.

-Таблица'!:

Влияние сульфита натрия на рост биомассы разных штаммов дрожжей ЬлЖск ти&еа^ (БСБ^бад, ВСБ-777,_ВСБ-8?9, ВСБ-569). з лабораторных условиях (рН 5; среда "П",,30 час.)

Концентрация сульфита \Концентрашш био- I Прирост биомассы-(¿5 отно-натрия, мМ ■ } массы, г/л ¡сительно контроля)- -

0,00 (контроль) 0,03 / 4,12 * 0;02 4,15 ? 0,04, I

0,06 4,72 ^ 0,13 15

0,08 4,82 ¿0,11 17

0,1 4,99 .- 0,03 21

0,12 5,01* ОД5', . 22

0,16 . 4,72,4 0,22 15"

0,20 4,40.^ 0,10 7

0,40 4,00 0,12 . -3

0,80 3,4 ± 0,20' -16

1,6 ; 2,76 * 0,10. -33

3,9 2,08 ±0,07' • -49

7,8: . - - 1,62. 0,,07 .:. . -61

Примечание: Представлены усредненные, результаты на основании пяти- '• кратной повторности опытов для каждого из штаммов; (действие сульфита не зависит От использованного штамма) Сульфитный анион достаточно мал по размерам, что позволяет более определённо по сравнению о многокомпонентными материалами судить о механизме его влияния на клетки. Действие сульфита, по всей вероятности, объясняется частичным (за счёт малой дозы) разрывом ковалёнтных связей в КСД, необходимым для их роста;-КС утокьиается, становится в целом-более проницаемой для УГВ.и других компонентов питания. Частичное удаление фосфоманнопротеинового слоя в присутствии сульфита, возможно, является одной из причин ускорения роста дрожжевых клеток, поскольку жёсткие малодеформируемыа маннаны затрудняют почкование кле:ок (Каменев, Белов, 1986)..Кроме .этого, возможно действие сульфита непосредственно на парафинокисляющув систему ферментов в. качестве доцора электронов, поскольку в соответствии с электронным механизмом действия оксидаз со смешанной функцией в процессе первичног"

- íl -

, окисления u-парафинов безвозмездно расходуются электроны (Зстабрук, 1968), т.е. для окислеилл парафинов наряду с кислородом воздуха необходим такпс и восстановитель,"донор~элекУ^н0в1_Антиоксйдантные свойства сульфита, возмонно способствуют снятию возникающего за счёт пе-рекиспого окисления липидов отрицательного воздействия па лизиолсги-ческоо состояние клеток избытка кислорода при интенсивной аэрации. Клетки дрокней, получаемые в присутствии сульфита, более крупные, имеют округлый вид против круглоовальных в контроле. Снижение аэрации до 0,6-1,0 д/нин.л среды в присутствии сульфита приводит к образованию поликлоточных форм "псевдодендрион", состоящих из 10-50 и более клеток, причём всо клетки крупные, легко отделяется от культуральпой жидкость, что резко сиижает или полностью исключает потери биомассы па стадии соиарации. Выявлено значительное измепение качества биомассы дроккей но сроде спарафинами в присутствии сульфита: I) содержание белка возрастает иг Z-b,fa абс., больше в ней и-незаменимых- аминокислот; 2) скипается в 1,2-3 раза содержание ОУГВ; 3) изменяется фракционный зостап н-алканов из биомассы и КО; более резко (на 40-50/"5), чем в контрольна;: опытах, отмечоно снижение группы н-алканов выше Cjg в КС; 4) снижается содержание липидов и изменяется их состав - скипается относительное содержание фосфолипидов на I0-I5/Ó, мопо- и диглицеридоз - на 2530/5, содериание аирных кислот возрастает в 2,5 раза, в основном, за . счёт фракции насыщенных аирных кислот; 5) содернание углеводов нес-колкко снижастся.

• • 2.3. Синергическое действие стимуляторов в коип оз ициоиных

смесях.

В процессе исследований выявлен сииергизгг дсйстгия бкост^ял^ро: различных .типов на рост дрозисей, выраковщийся з сзсрхсу^арпо:.: те биомассы при одновременном улучшении её качества, резком j т. сличал:.: эффективности процесса, енпкении удельного расхода субстрата, 1:о::лс-нентов минерального питания и самих стимуляторов.

В этой плане наибольший интерес представляли композиции стимуляторов, включавшие сульфит натрия с такими стимулирующими рост дрогшей добавками, как коричневый сок велёных растений (КСЗР), отходы производства лизина (ОПКЛ), культуральная среда мицелия высших грибов (ШВГ), гидролизаты активного ила (ГАИ),гибберсиб (ГБС) и др., а также композиции из КСЗР и ПАВ, КСЗР и фосфолипидов, ГБС и ферментов гликаназно-го действия, ГБС и синтетических стимуляторов ауксинового типа идр!. Показано, что природа, концентрация и количественные соотношения стимуляторе в композициях оказывали существенное влияние на проницаемость клеточных стенок и мембран, на динамику роста, физико-химические показатели среды культивирования, технологические показатели процесса культивирования и качество биомассы, установлено; что эти показатели претерпевали изменения в целом в благоприятную сторону при определённых сочетаниях и количественных соотношениях стимуляторов в композиционных смесях, при существенно меньших их концентрациях, чем при раздельной подаче. Превышение оптимальные концентраций приводило к ингиби-рованию роста биомассы. Так, при использовании композиции.из суль^и-та натрия и ГБС в условиях периодического регима выращивания парафин- . • окисляющих ¡¡фожгей в аппарате интенсивного массообмвна при введении в среду смеси препаратов в тех количествах, при койорых проявлялось \ стимулирующее действие прт их раздельной подаче (1.10"^ ГБС и 8.10"$ сульфита натрия) наблюдали явный ингибирующий эффект, что выражалось в сниненм на 14% максимальной удельной скорости роста и.увеличении на 13 часов общей длительности культивирования по сравнению с контролен. При совместной подаче ГБС и 3.10"^ сульфита'натрия Мь^ возрастала на 52$, а время культивирования снижалось на 7 часов, причём существенное увеличение скорости роста начиналось усе в самом начале лог-фазы, при этом в конце процесса выращивания отмечалось увеличение выхода биомассы на 10-25$. Показано, что в присутствии повы-

' ........•• >' ' ..' * '' ;

пенных количеств стимуляторов в композициях культура быстро входит в |

область неблагоприятных значений Е/ь-потенциала и создает анаэробные |

условия среды, что и приводит,"по всей вероятности, к ингибированию роста культуры. Как видно из рис. 5-7, как амплитуда, так и профиль скачка Е^потенциала, а-тагосе изменения значений_р02_02рамли ммепе-ния ростовой активности дрожжевой популяции и прежде всего замедление таи интенсификации роста культуры и накопление биомассы в зависимости от концентрации стимуляторов в композиционных смесях.

Использование композиций стимуляторов, которые оказывал:» оинерги-ческое действие на рост биомассы, позволило существенно улучшить технологические показатели при выращивании дрожжей в лабораторных условиях и в аппаратах интенсивного массообмеиа (как в камеральных усилиях, так и в условиях крупнотоннажного производства биомассы) (табл-. 2,3). . •

Таблица 2.

Влияние ГБС и сульфита натрия на рост дрожжей Сал^/'е^ в лабораторных условиях (качалочние колбы). • ■

Концешу-рацил стимулятора! Концентрация био-Шиитзост био-!Выход био-в питательной среде, % ! массы, г/л ¡.кассы, % от !мас^ы, #

ГБС , Ыа^'о, ! ¡контроля !

О 0 5,0-9*0,04 (контроль)

т0-8 0 5,5 ±0,06

10"10 0 5,96-0,11

О 4.Ю4 6,03*0,07

Ю-8 4.10"4 7,08*0,07

Ю"10 . 4.Ю"4 7,89-0,12

57,0

8 72,4

15 78,4

19 7Э ,3

39 93,2

55 103,8

Примечание: проводили три серии опытов, в каждой из которых отдь;::. ные вариаиты - в трёх повторностях. В этой таблице приведены значении только одной серии опытов." В других опытах внутри каждой серии сохранялась тенденция изменения основных технологических показателей, однако для одних и тех же вариантов б различных сериях рязлйч::и достигали 20$.

Как видно из данных табл. 2,3 в присутствии стимуляторов дос-овор по возрастала концентрация биомассы, вследствие чего возрастала :: продуктивность.

г * г, я „ пни- г . / ю л гг"'и

» //МШ, »

Рис. 5. Кривые роста дрожжей С. ска&о*^ ВСБ-899 в присутствии, сульфита натрия и ГБС: I - контроль; 2 - сульфит натрия, 8 ыг/л; 3 -ГБС, 1.10~7#; 4 - ГБС, 1.10~7#, и сульфит натрия, 8 иг/л; 5 - ГБС, 5.1и~12^; б - ГБС, 5.10"*'% и сульфит натрия, 3 ыг/л.

Рис. 6. Изменение концентрации растворённого кислорода в культу-ральноИ среде при выращивании дрожжей С. ггкг£/с^$л, ВСБ-899 в присутствии сульфита натрия и ГБС при периодическом режиме. Обозначения I - б те же, что в подписи к рис. 5.

Рис. ?. Изменение окислительно-восстановительного потенциала куль-туральной спеды в процессе выращивания дрожжей тл&о&с, ВСБ-399 в присутствии ГБС и сульфита натрия. Обозначения 1-6 те же, что в подписи к рис. 5.

' Таблица 3

Влияние ГБС и сульфита натрия на технологические показатели -процесса непрерывного.культивирования дрожаей ianch'^ù, nnaifostu

Культура, показатели, ед.,Контроль | ГБС,56 ,Сульфит j ГБС и

1 • . •натрия,% -сульфит натрия

I. Камеральные условия (V раб. 5л; "Э? 0,2 ч-1; парафин 2,7 об. %.)

ВСБ - 777 - . . I.IO-8 8ЛО-'1' Их смесь

Концентрация биомассы, 14,6 17,8 16,3 19,9

г/л

Продуктивность процесса,. jt7Z 3,78 4,18

Выход биомасон, % 69,2 83,8 ' 85,3 94,2'

II. Камеральные условия (V раб. 5л; 0,25 ч"^; парафин 2,0 об. $ ) ВСБ - 899 - I.IO""10 8.10 Их смесь Концентрация биомассы, j'^q 15,4 14,0 17,3

• иродук1Ивнос1ЬсПроцесса,3>24. 5.85 ' 3j50 4f3I

Выход биомассы, % 84,3 . 100,1 .. • 91 112

III. Промышленные условия (V-раб. 480 м^;"êD 0,17 чГ*).

ВСБ - 928 .. . - . I.IO"9. I.IO-6 •' Их'смесь

Концентрация биомассы, g _ _ 2i о

Продуктивность пооцесса, 9 ' ? й

г/л час ' ~

Выход биомассы, fa 92,?' - - 94,3

Производительность >7 -, _ 57 s

ферментёра, т/сут ' •

Расход парафина Tn7q _ Tnfin

на I т продукта-, кг . хи'-7

Примечание: концентрацию, биомассы определяли в течение суток через каждые два часа (относительная ошибка приведенных данних -- рабочий объём ферментёра , скорость протока и концентр-.;:;:., парафина поддерживали постоянными.

При совместном действии стимуляторов в условиях интенсификации

роста биомассы изменялись также в благоприятную стироау п. оспа

показатели качества биомассы. Так, в камеральинх уело;;:п;х «¿u. v.- -

тельное содержание истинного белка возрастало на 3-15/.-, ,;

мых аминокислот на 2-9$,. лизина на 6-18$, содержание.ОУГл -

нем снижалось в 2 раза. Аналогичные закономерности были выявлены :

при выращивании дроняе'й на опытной установке, а также в услоьиях

крупнотоннажного производства биомассы, где в присутствии стимуляторов (ГБС - 1.10"^, суль^т натрия - относительное содержание*ис-

тинного белка по сравнению с его содержание)! в контроле было вше на 12/«, незаменимых аминокислот - на 11%, а лизина - на 15$. При исполь^ зовации композиционных стимуляторов прежде всего обращает на себя внимание повышение в опытных образцах на 25% содержания лоцитиновой фракции и четырёх-пятикратное увеличение содержания эргостеринов, которые играют важною роль в проницаемости клеточнйх стенок и мембран, микро-сон и митохондрий. Об изменении проницаемости.КС и мембран в присутствии стимуляторов свидетельствуют также данные об их влиянии на активный Н+ - транспорт в дрожжевых клетках, полученные измерением скорости глюкозо-индуцированного закисл^ния дрожжевой суспензии в среде. Полученные в работе экспериментальные данные указывают, что гибберелликы оказывают; что гибберелдины оказывают на рост парафинокисляющих дрожжей, так же как и .на растения,, разностороннее действие: влияют на проницаемость КС и мембран, на состав этих мембран, на белковый, углеводный и липидный обмен. Действие ГБС усиливается в присутствии сульфита натрия. Таким образом, проведённые исследования позвог^зэх.значительно интенсифицировать традиционные режимы культивирования парафинокисляющих дрожжей за счёт использования в составе питательных сред композиционных стимуляторов. . •

2Л. Повышение биологической активности биостимуляторов путём их химической модификации.

Существенного повышения активности, стабильности, эффективности действия и снижения удельного раехода ряда стимуляторов достигали также путём их химической модификации, а именно при выдерживании их в присутствии ионов металлов переменной валентности (железа, цинка,

марганца, меди) (табл. 4).

f '

Неожиданно обнаруженный "эффект последействия" грибного стимулятора (сохранение биологической активности до нескольких суток после-Дрек-ращения его подачи) позволил рекомендовать периодическое введение сти-

мулятора в питательную среду. '

■ Таблица 4

Действие автолизовь.ной-культуры гриба ВСБ-927 на рост дрожжей СапМе /»л&оь^ ВСБ-899 (Д - 0,27 час-1) : ' ^----------:

, - ",Контроль!Ш,-5Т10Г5 МВГ 5.10~5#об.

(без до- об.в раст- 1.10"*% в растворе м/э1 Параметры процесса бавок) воре м/э (по эле- Ге, Мп

(Ге.^п.Ып) менту Сч,

I. Подача парафина, г/л 16,5 16,5 15,7 16,4

2. Концентрация АСБ, г/л '16,5 , 18,1 ' 17,0 . 22,2

3. Выход биомассы, % 100 ПО . . 103 135

4. Продуктивность процес-

са, г/л час 4,45 4,70 / 4,76 5,77

Примечание: МВГ гыдерживали в растворе микроэлементов при pH 3,0;

Дрожжи выращивали в камеральных условиях.

На примере Новополоцкого завода БВК показано, что за счёт эффекта последействия достаточно лишь активации посевной популяции' для увеличения срока её поддержания в 5-10 раз в аппаратах чистой культуры, улучшения технологических показателей всего производственного цикла завода (увеличения производительности ферментёра на 8 т/сут. и др.) и улучшения качества биомассы, при значительном снижении удельного расхода стимуляторов (МВГ и сульфита натрия).По'всей вероятности, дрожжевая культура в присутствии метаболитов гриба как-то перестраивает свои метаболизм, и эту изменённую форму метаболизма способна сохранять достаточно длительное время. .

2.5. Интенсификация роста клеток при-частичном нарушении целостности клеточных стенок дрог эй ("разрыхлении" прочных материалов' КС)Достига-

лась также действием на них ферментных препаратов, обладающих достаточно высокой ^-глюканазной активностью и продуцируемых, например, грибами рода Трпходерма; при частично! восстановительной деструкции КС в присутствии сульфита натрия или частичной окислительной дест-рукцни КС з присутствии гипохлорита калия.

2.6. Использование в качество стимуляторов роста дрокясй отходов различных биологических производств ■

В одном из вариантов комплексных технологий в качестве стимулятора роста дрожжей использовали отходы производства паприна. Друго;: подход заключался в использовании для стимулирования роста-парафин-окиелнющих дроккей отходов других биологических/.производств (микро- : биологической, пищевой и сельскохозяйственной отраслей народного хозяйства). При использовании отходов в качестве стимуляторов одновременно решались две задачи: во-первых, технологическая, поскольку достигается повышение экономической эффективности промышленного производства за счёт интенсификации основной стадии - кулыквирова- ■ нип биомассы, во-вторых, экологическая, т^к. достигается существенное улучшение экологической обстановки как в основном производство за счёт более полного потребления субстрата и снияения продуктов метаболизма, так и за счёт утилизации отходов в иных производ- ■ отвах.

В качестве отходов производства паприна были испытаны и внедрены . в условиях-БЕХК технологические процессы с утилизацией'активного ила! (ЛИ) очистных сооруксний .дрокневого производства либо в виде его ! п;.сяот1ШХ гидролизатов', полученных действием серной кислоты, либо в виде щелочных гидролизатов, полученных в "мягких условиях",, в присутствии сульфита натрия, а таюсе в виде нативного активированного актив» :1о ила (НААИ). Получение НААИ основано на аэробной стабилизации ЛИ (улучшение биоценоза)'путем его выдеркивания в усл9виях аэрации в присутствии сульфита натрия и/или неио.ногениотю ПАВ..Использование НААИ обеспечивало повышение продуктивности процесса и' выхода биомассы.на 25-4-0$ при одновременном улучшении качества готового продукта по содержанию белка и ОУГВ. Ери этом достигалось интенсивное удаление из К метаболитов (снижение ХПК, органических кислот и др^) и улучшение микробиологических показателей: общая об-семсиёикость на уровне контроля, в то же время отмечается сшшзние

содержания псевдомонад на 2 порядка, снижение протеолитических аммоки-фикаторов на 3 порядка при сохранении энтеробактерий и еульфитредуци-_рующих_бактерий.Попутно обнаружено, что ШШ практически полностью - -— снимает пенообразование при ферментации дрожжей, особенно на средах с этанолом и глюкозой.

В качестве отходов других биологических производств с положительными результатами были испытаны отходы, получающиеся при выделении очищенных ферментов (увеличение выхода, биомассы иа 9-11%, снижение на 50% удельного расхода сульфата аммония); фильтраты или фугаты после отделения ЫВГ (увеличение выхода биомассы паприна до 30$, использование их в качестве заменителя биотина при выращиваний дрожжей на среде с метанолом); отходы производства кормового лизина (ОПКЛ), использование которых в условиях Кстовского ОПЗ БВК позволило снизить РК по парафину на 81 кг/т, увеличить выход биомассы на 7%, производительность ферментёров на 3,0 т/сут.); отходы, получаемые после денуклекнизации биомассы микроорганизмов в соответствии с разработанными нами схемами (отходы после денуклеикизации биомассы в "мягких" условиях на ББХК позволили увеличить выход биомассы на 15-20%, а'отходы, получаемые з соответствии с комплексной схемой переработки биомассы, в услохиях Дрогобычского ЗБВК позволили увеличить выход биомассы на 7%, продуктивность процесса на 10%); отходы после получения протеиновых зелёных концентратов - коричневый сок зелёных растений - (в условиях МЗКД достигнуто снижение РК по парафину на 92 кг/т, увеличение выхода биомассы на 7%, производительности ферментёров на 1 т/сутки). При этом во всех случаях имело место улучшение морфофизиологического состояния клеток и качества готового продукта - увеличение содержания белка, снижение содержания ОУГВ.

Таким образом, нами разработок ряд технологических процессов, направленных на интенсификацию образования биомассы и-улучшение её ка--чества на стадии культивирования. Полученные результаты были защищены авторскими свидетельст/-вами СССР и внедрены в крупнотоннажное произ-

водство паприна со значительным экономическим эффектом (табл. 5)

Таблица 5

Экономические эффекты от использования стимуляторов на заводах ББК'(в ценах до . 1991 года)

Биостимуляторы

! Завод

¡внедрения ¡мулятодт

, вши ТЗкономичёс-ТИторское

'расход сти-'кий эффект 'свидетель-

7Удс~ьн£1~

(кг/т)

|(тыс.^руб/г|

""бзоэн""

1116727 1412293

878791

1044033. 1028056 .1531482 1774656

1218656

Сульфит натрия ББХК 0,24-. 747855

Сульфит натрия + ОПКЛ КЭДЗ БВК 0,1-0,6* 854000

Сульфит натрия + ПАВ МЗКД 0,25-0,5 750000 Сульфит натрия + МВГ

(нативнь«!) АхБЗ 0,15-5,0 21000

Сульфит натрия •+ МВГ 5

(автолизат) НЗ БВК 0,3-2,5.10"^ 486400

Сульфит натрия + ГАИ ББХК ; 0,1-10 . 10550000

Сульфит натрия + ГБС

ГБС + карбогидразы ЫЗКД

Коричневый сок .

зелёных растений ЫЗКД 60 330000

КОПЗ БВК 5.1р"3-5.Ю"5 300000 5.10"8-5.Ю"5 860000

Примечание: Здесь и далее приведены количества каждого йз стимуляторов в композиции. •

3. Разработка безотходной технологической схемы комплексной

переработки дрояаевой биомассы для получения на её основе принципиально новых продуктов (Главы 5,6,7)

Выше показано, что многие вопросы качества паприна моино решать уке в процессе культивирования биомассы. Нами такке установлено, что-

большие возможности биотехнологического регулирования качества продукта

открываются при постферментационных обработках её путём создания более наукоё!. 'сих технологий. С экономической точки зрения наиболее целесообразно применение биомассы одноклеточных в.качестве заменителя таких ценных продуктов, как мясо или сусло, например, в питательных средах для выращивания микроорганизмов, либо прямое использование.в питании человека. В связи о-бтиы само понятие "качество" продуктов, получаемых на

основе биомассы парафинокисляющих дрожжей, необходимо дифференцировать в зависимости от требований потребителя. Совершенно очевидно, что про-

дукты, предназначенные для использования в качестве функциональной добавки, питательных сред для выращивания ыикрооганизыов, корца для рыб или животных^ а тем более для пищевых целей должны отвечать разныы требованиям.

Основная задача, которая стояла перед нами при постферментационной обработке биокассы, заключалась в изучении принципиальной возможности использования фзрментатвного гидролиза наиболее ригидных компонентов КС для регулирования качества дрожжевой биомассы, и прежде всего возможности получения белковых концентратов со сниженным количеством нежелательных компонентов до уровня, требуемого для пищевого продукта. Над вопросом получения белкового продукта пищевого назначения из дрожжевой биомассы работают исследователи разных напразлекий во многих странах, но общего решения у этой проблемы нет до настоящего времени.

Во ВНИИсинтезбедок разработана технология получония белковых изолятов (Безруков, 1989), которая-включает стадию разрушения клеток механической дезинтеграцией ели химическими методами. Поскольку механическая ., прочность КС дрожжей оценивается пределом в 109дин/см2 (Фихте, Гуревич, 1982), то и механическая дезинтеграция является достаточно энергоёмкой операцией, требующей специального производительного оборудования. Эти трудности особенно заметны при увеличении масштабов производства. Кроме того, механическая дезинтеграция позволяет производить лишь локальные нарушения целостности КС, для удаления которых необходимы дополнительные усилия. Значительные трудности связаны и с последующим выделением белка из водного раствора сложной смеси вешеств различной природы. Другое напрг ление - "облагораживание" биомассы одноклеточных, хотя и позволяет получать биомассу с пониженном содержанием КК, приводит' к значительной потере белка за счёт его растворения, а, глаьное, не решает остальных проблем (снижения содержания материалов КС, ОУГВ. и липидов).

Нами была разработана технологическая схема комплексной переработки биомассы, включающая стадии термического, химического и ферментативного воздействия на биомассу и последующего удаления липидной фрак-

ции иа белкового концентрата, позволяющая получать его непосредственно в виде твёрдых частиц после перевода в раствор значительной части НК, компонентов КС, низкомолеадлярных белков и пептидов. Остановимся на краткой характеристике отдельных стадий разработанной технологической схемы комплексной переработки биомассы.

3.1. Влияние условий термообработки суспензии дрошсевой биомассы на показатели её качества (содержание белка, ОУГВ в биомассе и стерильность суспензии)

Включение в схему стадии предварительной термообработки (ТО) биомассы оказалось целесообразным для максимально возможного сохранения белка в биомассе в процессе извлечения из неё НК, поскольку после неё имело мссто резкое (почти десятикратное) снижение растворимости дрожжевого белка и экстракции его в водную фазу, что, по всей вероятности,

связано с изменением его физико-химических свойств.

Термообработка (плазмолиз), как наиболее экономичный и технологичный метод стерилизации биомассы (Матвеев, 1985), широко используется в микробиологической промышленности;прежде всего для инактивации клеток как основного продуцёнта, так и.сопутствующей микрофлоры, что является одним из.показателей качества биомассы^В условиях крупнотоннажного производства биомассы плазмолиз осуществляется с использованием глухого пара в плазмолизаторах с неоднородным температурным полем, вследствие чего 'возможен проскок живых меток. С особенностями условий ■ ТО может быть связана также нестабильность качества биомассы по таким показателям, как белок и УГВ, поскольку на этой стадии происходит также частичное разрушение клеток и высвобождение связанных клеточными структурами УГВ, которые могли быть удалены на последующих стадиях вакуум-выпарка, сушка). В связи с этим необходимы были исследования по влиянии различных технологически параметров процесса на эффективность работы узла ТО. В сранительном плане-изучена ТО в плазмолизаю-ре с обогревом глухим паром и с использованием в качестве теплоносителя острого пара или подогретого воздуха в аппарате колонного типа с высокими тепломассообменными характеристиками, с развитой поверх-?-

ностью фазового контакта и про^ивоточныы движением фаз, что обеспечивав ет интенсивное перемешивание всего объёма обрабатываемой биомассы и

более эффективное извлечение и_удаление УГВ, существенное сниженке-вре----

меаи ТО и сохранение термолабильных компонентов, например, витаминов. Для решения поставленных перед нами задач необходимы били экспериментальные данные по влиянию режимов ТО на инактивацию клеток, скорость их отмирания, десорбцию УГЗ из биомассы, её качественный состаз.Было установлено, что графики выживаемости парафинокисляющих дрожжей СйгМсЬъ та£/о&и имеют.в полулогарифмических координатах вид прямых линий, т.е. кинетика процесса описывается уравнением 1-го порядка. Константы скорости отмирания клеток имели, гиперболическую зависимость от температур-Наиболее детальное изучение процесса инактивации клеток микрооганизмоз осуществляли с'использованием опытного колонного плазмолизатора, сконструированного в опытном цехе СКФ ВНИИсикгззбелок производительностью до 40 кг/час по.биомассе; одновременно-снимались показатели по выживаемости клеток, гидродинамические, массообменные и технологические, а также оценизалось качество готового продукта. Установлена условия полной стерилизации биомассы, в'которой, по сранению с контрольны!:;: образцами, содержание белка возрастало на 5-8%, содержание СУГЗ снижалось з 3-8 раз, при этом увеличивалось не только количество кззлакаемых из биомассы н-алканоз, но и изо-алканов, что способствует снижению их доли в готовом продукте; Существенное влияние на состаз отгоняемых н-алканов оказывала кратность 10, при однократно.. -О ли массы удаляются, в основном, фракции С^-С^, а после повторной - С^-С^, хотя общее количество УГВ в конденсате возрастало линь на 8-9%. Выбор кратности обработки, по зссй вероятности, дол„е:: .-иродлл,.:_-... составом исходного парафина. Включение з схелу ТО стыдил. л:л;зрлл; позволяло дополнительно снизить в готово:.: продукта содлрлаллл УГ., .. 30-35%.Однако отмечалось некоторое разСавленлс дро^го,; суо.ьнаии.

Интенсификация процзсса теплового воздействия на биомассу дро:::::-:ей

с использованием в качестве теплоносителя подогретого воздуха (240-260-С) показала, что обработка суспензии одинаковым объёмом'пара или воздуха приводила практически к одинаковым результатам по инактивации • клеток и снижению ОУГВ в биомассе, однако при обработке воздухом практически во всех случаях имело место- сгущение суспензии на 20-80$.

Из предварительно термообработанной биомассы извлекали НК при рН8,5, 75°С, 15-25 мин! Относительное содержание НК к белку на этой стадии снижалось в 3-3,5 раза. Дополнительное снижение содержания НК имело место и на следующих стадиях: ферментативный гидролиз и последующая промывка получаемого белкового концентрата■.

3.2. Ферментативный гидролиз ригидных компонентов ¡щеточных

стенок дрожжей. • • '

Отличительной особенностью разработанной нами схемы является то,что впервые для дрожжей, выращенных на парафинах, осуществлён лизис ¡слеток иод действием ферментов гликаназного типа! В отличие от прежних подходов к ферментативному гидролизу биомассы, где использовали проимущест- : вешю протеааы, приводящие к гидролизу и растворению белков протаплазмы'.-перед нами стояла задача разработки условий глубокой деполимеризации трудно гидролизуемых глюканов КСД до глюкозы, не растворяя значительной . части белковых компонентов^Для решения этой задачи .прежде всего необхо-• димо было подобрать цодхо^щие ферментные препараты, специфичные ь'р-глюкану дрожжей, т.е. способные гидролизовать глюкан-хитиновый комплекс КС до мономеров.'Необходимость расщепления гдюкансодержащего материала до глюкозы без сколько-нибудь заметных количеств олигосахаридов возникает в с"язи с тем, что водорастворимые фрагменты ^д-глюкана (олигоса-хариды) могут оставаться неутипизируемыми многими животными из-за отсутствия у лих /-глюкозидаз. Самостоятельную ценность могут представлять глюкозосодержащие компоненты питательных сред, для получения ко'^о- ; рых могут быть использованы,' например, КС-содержащие отходы, образующи- |

ссп в соответствии с различными схемами комплексной переработки дрожжей |

^ |

Поскольку эта проблема ставилась нами впервые, необходимо было решить !

• ряд методических и теоретических вопросов; преаде всего была необходи- .

ма разработка метода определения специфической (дрожжедитичеекок) --глюканазной активности (уЗ-ГА)поскольку ни._турбидинетрический метод, ни метод определенияуЗ-ГА по восстанавливающим группам оказались непригодными при использовании такого водонер'астворимого субстрата,как уд-глюкан парафинокислящих дрожжей. В основу разработанного нами метода было положено измерение степени растворения дрожжевого глюкзна под действием ферментов (по антрону).

■ 3.2.1. Выявление основных ферментативных активностей, ответственных за лпзис КС.

Исследования проводили с использованием з качестве субстратов КС и уй-глюкана.Прежде всего необходимо было оценить относительную роль ув-ГА и протеаз. Протеазы практически, всегда присутствуют в промыв1 .ен-ных ФП микробного происхождения, хотя в количественном отношенн; их содержание колеблется' в широких пределах. ФП была охарактеризованы по литической, протеолитической (ПА) и /~ГА активностям, для которых был установлен рН- и температурный оптимум, при этом ПА определяли как по казеину, так и по КС. Установлено, что лизис КС, измеряемый различными методами (турбидиметрией, определением растворимых продуктов белковой или углеводной природы), имеет место как при использовании ФП, проявляющих лишь ПА или лишь /-ГА, причём при наличии _д-ГА в препарате доля растворимых в ТХУ пептидных или'белковых материалов, выделяемых из КС дрожжей, возрастает, т.е. для максимального растворения КС дрс.::-■ жей, по всей.вероятности, необходимо действие как протенназы, так и р -глюканазы (табл. б). Обнаруженная нами первостепенная роль двух ферментов (п^-угеаз к'^-глунаназ) в растзорении КСД была позже подтверждена рядом авторов^б^й^ г? , '^У).

Существенным компонентом ригидного слоя КС, наряду с д-гдзгканэ::, является также хитин. Для его деструкции могут бжь использован;.; ::::-тиназы, которые представляют собой комплексные препараты, состоящие, в основном, из двух типов компонентов: эндохитиназ и дн-/у-ацетил-

"- ■ ' Таблица б

Характеристика ферментных препаратов, использованных

■ ■ для лизиса КС дрокжей .........

Ферментный | препарат I />- ГА ед./г ! А ГА ! ед./г 1 (Готическая ; ¡активность (турбидимет-1, рически) ; ; рН 7.0 х- ' ПА на ] рн 7,:

Протелин 195 - »» щтш, 0 г,1 • 35

Препарат из 121 . 0 -

1'1/С1 Амилосубгилин ГЮХ 33,3 0 0,43 7,8

Амилосубтилин ГЗХ 8,5 0 0,17 1,7

ФП из 4,65 2,59 0,15 1,3

Оризин П 2,0 0 0,05 0,5

Иротосубтилин ГЗХ 1,4 0 0,03 0,25

Пектаваморин П10Х 0,9? 3,26 0,06 0,6

Пектаваморин ПЮХ, дополнительно очищенный 7,72 13,3 0,165 3,3

Глюкаваморин ПХ 0,2 2,02 . . 0,014 0,13

Аваморин П 0,16 1,6 0,03 0,18

Улиточный фермент 0 ' 34,6 0,35 7,0

Примечание : к Рассчитывали по формуле Дисх. -ДпсхТ ГОТ 1 •где:

Дисх. - оптическая плотность исходного раствора;

- оптическая плотность раствора после инкубации КС с ФП в течение I часа; С - концетрация ФП в инкубируемой смеси, юг - не определяли.

хитобиазы.В наших иссле-дованиях мы использовали модельные смеси из следующих ФП: лизоцима и пектоаваморина, а также лизоцима и пек-тофоетидина. Установлена целесообразность использования смешанных препаратов, т.к. проявляемый смесью синергизм монет значительно сникать расход ФП и существенно увеличивать их литическуа активность Кроме того, смешанный ФП в качестве продуктов реакции гидролиза хитина давал только моносахариды.

Методом специфического ферментативного гидролиза было установлено, что лизоцим, гидролизующий преимущественно олигосахариды с 1,4-^

г;шкозидними связями между остатками /У-ацетил-^Э-гл/окозамина, 'способен гидролизовать так называемую "хитиновую" часть КС дрожжей,

но не действует на нативный_хитин,_выделенный. из_панцирей крабов.-----------

Из этого следует, что хитиновая часть КС дрожжей не имеет той упорядоченной структуры высокомолекулярного полисахарида, которая свойственна нативному хитину крао'ов. Её структура блине к структуре коллоидного хитина.

В связи с тем, что КС парафинокисляющих дрожжей имеют повышенное содержание липидов, играющих, видимо, важную роль в метаболизме, для их гидролиза мы предполагали использовать четвёртый тип ферыент-ных систем - липазы. Однако исследования показали, что добавление липолитических микробных препаратов не оказывало лизирующего действия на иптакт'иые клетки. Тот'факт,.что препарат липазы действовал на лииидние компоненты ¡слеток лишь при условии глубокого разрушения клеточных стенок и других компонентов ¡слетки, по всей вероятней, .объясняется структурой клеточных стенок пзрасдонокисляющих дробей, в которых липидные компоненты экранированы компонентами протеиновой и полисахаридной природы.

Поскольку КС дрожжей представляют собой многокомпонентную структуру, в состав которой входят ^з-глюкановый, хитиновый, белковый, шпнаповий и другие лоипоненты, то в процассе 'ферментативного лизиса при гидролизе одного из этих комйонентов в раствор переходили и другие. Так, иод действием лизоцима на нерастворимый глюкан-хитино-вый комплекс в раствор переходили не только аминосахара, являющиеся • продуктами лизоцимногг гидролиза хитинового компонента, но и гексозй _р-глюкана, измеряемые антроновым методом. Точно также под действием <Ш, выделенного из пищеварительного тракта виноградной улитки и содержащего богатый комплекс кар.бо~идраз, но не. имеет его протоаз (измеряемых по стандартной методике для ПА с казеиновым субстратом); на КС дрожжей, мы наблюдали не только растворение^гексоз ^-глюканового компонента,'но и белков. Пектоаваморин способен вызывать эффективней

гидролиз /З-глюкаиового компонента дрожлей; он ко вызывает и гидролиз их хитиновой части, что обнаруживается по приросту ^/-ацетил- , глюкоэаыина. Исследования показали, что в реальных технологичесг.-•' системах, где комплексные ФИ применяются по отношению к многокомпонентным субстратам (композитам) биохимические процессы имеют более сложный характер, чем это можно было ожидать из данных биохимических (энзимологических) исследований на индивидуальных ферментах и субстратах. Таким образом, полученные нами результаты свидетельствуют о сложном и взаимосвязанном действии отдельных ФЛ на такой многокомпонентный, субстрат, каким является КС дрожжей, которые могут бить эффективно прогидролизованы лишь мультиэнзимными композициями (МЭК) в состав которых входит не менее трёх их типов: про-теазы,у5-глюканазы и хитинагы. Между отдельными компонентами $ер-мснтных препаратов возможны синергические взаимоотношения и даже такой компонент, как /У-ацетил-2>-глюкозаминидаза, который в изолированном виде не способен действовать на хитин и лишь л незначительной степени гидролизует КС микроорганизмов, можёт оказывать эффективное содействие другим компонентам, ускоряя гидролиз субстрата и лизис КС. Нами было обнаружено, что при использовании ФП с /У-ГА экзо- и эндо-действия на у4-глюкан происходит синергическое увеличение общей скорости гидролиза глюкана. Хотя относительное-' содержание Глюкозы и олигосахаридов при действии пектофоетидина и НЭК одинаково, однако общий выход глюкозы при действии смеси ферментов возрастает на 10-50% при одновременном снижении расхода <Ш. На основании этих исследований были разработаны различные способы глубокого гидролиза дрожжевого ^-глюкана до глюкозы. Полученные результаты по подбору подходящих ферментных препаратов и установлению оп- ■ тимума их действия на КС и ^глюкан позволили перейти к ферментативному гидролизу непосредственно биомассы, как термообработанной, так ц интактной.

3.3. Влияние условий ТО на ферментативный лизис и качество биомассы парафинокисляющих дрокжой.

Установлено, что степень лизиса биомассы после предварительной ТО

острым паром в колонном плазмолизаторе (120 С, 5 мин.) была в 2-3 раза выше, чем после длительной Юз закрытом, сосуде (90°С, 45 мин.) при использовании как очищенных ФП, так и культур-продуцентов. Ферментативный гидролиз термообработанной биомассы способствует большему удалению ОУГВ на последующих стадиях, поскольку в образцах биомассы, подвергнутой ТО и ферментолизу с последующей сушкой на распылительной сушилке, содержание ОУГВ дополнительно снижалось на 37-56/ь, содержание

же белка как общего, так и истинного, наоборот, увеличивалось, на 2-3/ь

' . ' .i - • •

абс. Общее содержание липидов оставалось на уровне контроля.

Дополнительное увеличение скорости и глубчны лизиса биомассы имело мссто после щелочной обработки биомассы. Получаемый в результате щь'-лоче-гликаназной обработки денуклеинизированный белковый продукт (ДБП) .'содержал менее 2$ НК и на 15-2Оj? абс. больше истинного белка. В тс -с время испытания с помощью' тест-организма тетрахимена-пирпформис выявили, что часть таких образцов .оказалась либо с пониженной относительной биологической ценностью, либо токсичной. Было высказано предположение, что это связано с повышенным содержанием в ДБП фракции УГВ и липидов, которые могли претерпеть какие-то изменения в процессе обработки биомассы.

ЪЛ. Получение обезжиренного денуклеинизированнаго белкового

продукта (ОДБП).

После удаления из ДБП углеводородов и липидов органическими растворителями, например, изопропанолом или тройной смесью растворителе!! получали обезжиренный деиуклешшзированный 'белковый продукт (ОДБП). Химический состав исходной биомассы, ДБП, ОДБП, а также супернатан-тов, полученных в процессе выделения продуктов на стадиях щелочной и гликаназной обработки биомассы дрожжей представлен в табл. 7, па которой видно, что относительное содержание НК'в ОДБП снижалось

в 7-25 раз по сравнению с исходной биомассой; содераание. истинного белка достигало 65-80$; количество незаменимых аминокислот возрастало на 6-7#абс. по сравнению с их содержанием в обработанной растворителей исходной биомассе. В супернатанте после щелочной обра- ■ ботки содераание НК в 14 раз больше, УГВ в 2,5 раза, золы в 4 раза больше, а липидов в 1,7 раза и углеводов в 3 раза меньше, чем в су-пернатанте после ферментативного гидролиза.

Таблица 7

Химический состав дрогшей ВСБ-779 и полученных из них продуктов

¡2 партий и про- ! дугл-е !

Продукт

} НК.

1 !

!Белок!липи-! у™, ! Пг;п ¡Относит.

ш ! Vй-Л и£ц Iсод. НК

! кый ! % I ^ ! /" ! к бел

! £ ! I ! I ку)

I.1. . Дрожжи

2. То же после экстракции

3. ДБП

4. ОДШ

II.1. Дрожжи

2. То же после экстракции

3. ДЬП

4. - ОДБП

5. Супернатант после щелочной обработки

биомассы

6. Супернатант после ферментолиза биомассы

6,4 .36,0 13,9 1,6 61,0

10,3 1,3 . 1,9 7,9

8,0 1,8 2,2

17,8

43,2 следы следы 55,6 23,8

54.0 41,8. 5,3 хр. токе. 2,4

84.1 следы следы 84- 2,2 45,4-11,1 0,6 '17,4

39,2 9,9 0,2 50,9 21,0 2,9 '64,0 3,7 0,2

20,4 30,0 4,2 1,5

20,4 3,5 3,2

1,5 57,0 7,2 0,6 2,5

Примечание: I - лабораторные, условия; II - Дрогобычскап ОУ БВК

Из ДБП извлекается значительно большее количество липидных ком-

♦

понзнтов, чем из исходной биомассы, что, по всей вероятности, связано как с более высокой их относительной концентрацией в ДБП, так и с более лёгкой экстрагируемостью из биомассы после её щёлоче-гли-каназной- обработки. Отмечены также некоторые количественные различия в их фракционном составе, что проявляется в существенном сни-

жении в них содержания моно- и триглицеридов, увеличении содержания фосфолппидов, стеринов и свободных жирных кислот (ЖК). В липидной _____фракции, извлекаемой из ДШ, сумма ненасыщенных ЖК ниже, чем в исходной биомассе, главным образом, за счёт гептадеценозой кислоты, содержание же олеиновой, линолевой и линоленовой кислот увеличиваете: при этом относительное содержание незаменимых ЖК увеличивается почти в 20 раз.

3.5. Первичная медико-биологическая оценка ОДЕЛ на лабораторных животных.

Биологическая оценка включала определенна биологической ценности, возможного токсического действия и активности ряда органоспецифи-ческих ферментов в органах и сыворотке крови животных. Было выявлено увеличение скорости роста животных в опытной группе в 1,3 раза,

а.показателя чистой утилизации белка в 1,4 раза по сравнению с контрольной, что свидетельствует о достаточно высокой анаболической эффективности исследуемого продукта по сравнению с контрольной (исходной) биомассой. Скармливаниб животным ОДБП в токсикологическом эксперименте не выявило неблагоприятных реакций. Животные охотно потребляли корм, были активны, не наблюдалось нарушений со стороны желудочно-кишечного тракта. Масса тела опытных животных была достоверно выше, чем у контрольных. Макроскопические исследования внутренних органов крыс на выявили отклонений от-нормы, как в опытной, так и в контрольной группах. Ферментный спектр енворотки крови и ряда органов нз выявил достоверных различий значений активности меаду опытной и контрольной группами. .Таким образом, показано, что денуклеинизированная биомасса не.оказывает неблагоприятного воздействия на организм животных..

Использование отходов, получаемых после выделения ДБП, в качестве стимуляторов и компонентов питательных сред.

' В процессе выделения белкового продукта как- па стадии щелочной, так и гликаназной обработки значительное количество'компонентов

биомассы переходит в раствор - супернатанты. Использование объединённых супзрнатантов в качестве стимуляторов роста дрожжей позволило увеличить выход биомассы и продуктивность процесса на 1020% (табл.8 )

'Таблица 8

Технологические показатели процесса выращивания дрожжей ВСБ-777 в присутствии оупернацантов после щёлоче-гликанайной обработки этих ае дрожжей (рарафин- 2,1%об.s супернатант - 2,5%об. Д - 0,19 час"1, Дрогобычская 07 ББК)

---—........"' ■■ -'■" " -" ■r-""i" ——-•■—■-;— ■■■ " ..... ■■

Условия выращивания I Концентра-! Выход био4- Продуктиз

биомассы 1 ция биомассы массы,% ' цость

! г/л 1 кг/лггчас

I. Контроль (без'добавок супер-

иатанта и без возврата ОКХ 14,9 86,б 2,9

''Z. Возврат ОКЕ 60%, без добавки супернатанта 15,9 93,5 3,0

3. Возврат ОКЖ 60% + супернатант 18,6 109,4 3,5

Выявлено также улучшение качества биомассы дрожжей, выращиваемых в присутствии отходов производства ДЕЛ, а именно,, отмечено увеличение содержания истинного белка на 2-4%абс., снижение в 1,53 раза содержания ОУГВ.

Доследование указанных супериатантов в качестве компонентов питательной среды для выращивания различных видов микроорганизмов: бактерий (в сравнении с их ростом на млб), дрожжей и грибов (в сравнении с их ростом на жидком сусле) показало, что они являются полноценным универсальным компонентом питательной среды, пригод- ' ним для выращивания бактерий, дрожжей и грибов, что выгодно отличаем его от традиционно используемых- для выращивания только определённых групп микроорганизмов МБ, МПА, сусла*и сусло-агара..'

3.7. ферментативный лизис интактных клеток парафин-окисляющих дрогшей и способы его интенсификации. Лизис интактных клеток микроорганизмов заслуживает особого внимания, потому что это более сложная задача, чем лизис убитых клеток, а также потому, что этот процесс часто является единственно

приемлемым, например, для получения протопластов клеток, выделения достаточно лабильных внутриклеточных веществ в нативно« биологически активном состоянии. На основании исследований"ферментативного-------------

гидролиза интактных клеток парафинокисляющих дрожжей для изучения проникновения парафинов в клетку к локализации их в отдельных её компонентах была разработана методика получения протопластов этих дрожжей под действием ферментов иэ улиток 'Же^/сс, ¿ьогпаУ-;^ и из кулму'ральной жидкости • При этом было по-

казано, что для выделения протопластов этих дрожжей со 1С0$-ннм выходом необходимо строго стандартизовать как условия выращивания дрожжей, так и условия их лизиса.

Учитывая наличие в КС дрожжей значительного количества трудно гидролизуемых и неперевариваемых полисахаридных компонентов, лизис инт^ктных клеток может оказаться удобным для получения биомассы повышенной биологической ценности без её предварительной термообработки,, что позволяет избегать больших затрат энергии. Для лизиса интактных клеток микроорганизмов примекяит в дополнение к литя-ческим фзрыентаы также такие вещества, которые способны нарушать целостность их КС^ В наших исследованиях лизиса интактных клеток дрожжей, выращиваемых на парафинах, использованы следующие дополнительные вещества: ацетон, ПАВ'ы., сульфит натрия. Отмеченный нами синергический.эффект от действия смеси Ф1Г н одного из названных веществ составлял бгЮО раз (рис/ В, 9).

На следующем этапе установлено влияние предварительного'ферментативного гидролиза иь^актной биомассы на её качество. Препаративно наработаны 3 образца биокассы: I - контроль, плазмолизат (95°С, 45 ' мин.); 2 - ферментолизат (0,1$ пектаваморика П10Х, 0,5^об. ацето-. на, I час,); 3 - ферментолизат лектаваморина ПЮх, 0,04% суль-

фита натрия, I час). После ферментолиза биомассу обрабатывали острым паром и подвергали распылительной сушке. По-видимому, эа счёт частичного разрушения КС в процессе лизиса резко снижалось

hoo

iOO

I z i vactf Рис. 8

Z. 3 Wci/ '

30 60 SO НО мин. Ркс.9

Рис; o . Кинетические кривые лизиса интактных меток парафинокис-ллщих дрожжей tatvtüdfr /пс-Ыо^1 ВСБ-542, полученные измерением, водорастворимых углеводов по антрону (а) и белка по Лоури (б) при действии на биомассу ферментного препарата (ФП) пектоаваморина 1И0Х 12мг/ыл) присутствии ПАВ - сульфоуреида (1мг/мл): Кривая I - действие vil; ••

Кривал 2 - действие ДАВ; -• Кривая а - совместное действие ФП и ПАВ; Ассцисса - время инкубирования (часы);Ордината -а^углевода Ордината - tí) содержание бедка в растворе (по Лоури)

Рис. 9. Кинетические кривые лизиса интактных клеток парфин-окисляпцих дрожжей Candida. maMsn¡L> ВСБ-542, полученные измерением белка по Лоури в супернатанте при' действии на биомассу' ферментного препарата (ФП) пектоаваморина Ш.0Х в'присутствии ацетона:

Кривая I - действие на биомассу 6% ацетона;

Кривая 2 - действие на биомассу 0,2^ пектоаваморина П10Х;

Кривая 3 - совместное действие на биомассу ацетона к

0,2$, пектоаваморина; Абсцисса - время инкубирования (мин.); Ордината - содержание белка ц растворе (по Лоури)

содержание УГВ з биомассе (в 2-20 раз) в зависимости ст используемы-оп и интенсификаторов лизиса биомассы (табл. 9), Дополнительное снижение ОУГЗ имело место после обработки суспензии-острым паром,-_____________

Таблица 9.

Влияние ферментативного гидролиза интактной биомассы дрожжей

ВСБ-542 и последующей её ТО острым паром на содержание ".......- в ней ОУГЗ ....

Условия ферментативной обра- Содержание ОУГВ в биомассе^ _

Сотки биомассы * | ^ривймвд-1 дГосяряГаарюГазЕ

3,9 2,2 0,2

Примечания: к" 1,2 - 37иС, рН 4,0; 3 часа; 3 - 37°С, рН 6,0,-3 часа. не ••.температура."-рара —-130 С. • --

Анализ качества биомассы показал, что в ферментолизатах содержание истинного белка было на 7-8$ выше, чем в контрольных образцах. Биологическая ценность по Озеру превышала контрольные образцы на 311%. Испытанные образцы обладали высокой гидролизуемостыо белка под воздействием протеолитических ферментов (показатель перезаримости _ Переваримость контрольного образца составляла 75$.

Наибольший привес на 1г потреблённого белха (КЭБ) получен з группе животных, получавших биомассу, подвергнутую ферментативному гидролизу, в количестве-25$ от общего количества протеина в рационе. В соответствующей контрольной группе КЭБ был на 19$ ниже. В тс же • время следует отметить, что нами, изучена лишь принципиальная возможность использования ферментативного гидролиза интактной биомассы для регулирования качества готового продукта.

1. Контрольная биомасса (без

добавок ферментов) ■ .. . 4,3

2. Пектофоетидин П10Х + суль-

. сульфоуреид (0,1$) - 2,6

3. Целлолигнорий"П10Х + прото-

■ субтилин ГЗХ +-сульфоуреид 0,25

Таким образом, результатом исследований по ферментативному гидро-лг.зу паприна можно считать то, что впервые проведено целенаправленное и глубокое (до моносахарида) расщепление неусвояемых'(балластных) компонентов КС дрожжей, приспособленных к особым условиям, а именно к по-г треблению таких гидрофобных субстратов, как парафины. Совершенно очевидно, что приспособление клетки к такому необычному источнику питания должно было сказаться на КС, их составе, свойствах, в том числе, ферментирует юти. Наиболее общий вывод (наши экспериментальные результаты в сопоставлении с литературными данными) можно сформулировать таким образом, что нет принципиальных отличий в ферментируемости КС дрожжей, выращенных на парафинах, от КС дрожжей, выращенных, например, на 'средах с глюкозой. В обоих случаях ферментолиз КС является сложным биохимическим процессом, в котором определяющую роль играет, расщепление либо белковьг- либо /-глюкановых компонентов КС. Прямое действие липаз оказалось неэффективным, хотя КС парафинокисляющих дрожжей имеют высокое содержание липидов, которые играют важную роль в потреблении парафинов! Для выяснения возможности повышения биологической ценности биомассы с помощью избирательного ферыентатвного гидролиза КСД отдельнс • изучали ферментолиз КС, их наиболее трудно гидролизуемых фрагментов (глюкан, глюкан-хитиновый комплекс), интактной и инактивированной биомассы. При этом впервые широко изучен^ факторы, позволяющие интенсифицировать ферментативный гидролиз интактных клеток парафинокисляющих дрожжей (органические растворители, ПАВ, сульфит натрия)., и условия их температурной инактивации (установлена целесообразность проведения . кратковременной ТО биомассы таких дрожжей при повышенных значениях температуры в плазмолизаторах колонного типа). Технологический процесс получения белкового продукта повышенной биологической ценности, содержащего пониженные количества Ж', КС и липидов| в отличие от разрабог-танных параллельно с нами схем получения белковых" изолятов или авто-лизатов, не требует предварительного растворения или гидролиза белковой фракции, которую получают непосредственно в виде твёрдых-частиц

после перевода в раствор значительной части НК, компонентов КС, низкомолекулярных белков и пептидов, которые обладают высокой биологической активностью и могут являться причиной интенсивной сенсибилизации Показано, что получаемый белковый продукт как по хштТеЖбму составу, ^ так и по биологической 'ценности, может быть использован не только з качестве кормового продукта, но также и з качестве нового источника пищевого белка. Однако необходимы дальнейшие медико-биологические исследования, направленные на выявление отдалённых последствий. Разработанный нами способ проще, эффективнее и дешевле технологических процессов, предусматривающих экстракции или гидролиз белка с последующим выделением белковых продуктов из сложных смесей растворённых веществ. Кроме того, применение супернатактов в качестве биостимулятора или компонента питательной среды для выращивания микроорганизмов даст возможность сделать производство белкового концентрата практически безотходным, что будет способствовать решении вопроса, связанного с ох-. раной окружающей среды, поскольку отпадает вопрос об их утилизации или сброса в окружающую среду. Использование суперкатантоз з качестве стимулятора роста клеток микроорганизмов обеспечивает повышение выхода биомассы на 10-15$. Получаемая при этом биомасса содержит в 1,5-. 3 раза меньше ОУГВ и на 2$ абс. больсз истинного белка, что повышает питательную ценность готового продукта и его кондиционность. Биолипи-ды из ДБП могут представлять самостоятельную ценность. При снижении содержания моно- и тригдицеридов, в них увеличивается содержание фос-фолипидов, стеринов и свободных жирных.кислот, в том числе незаменимых , содержание которых увеличивается почти в 20 раз. Итак, нами была изучена принципиальная возможность использования ферментов карбогид-разного действия для получения новых продуктов на основе дрожжезой биомассы, хотя в настоящее врем ясно, что возможности схемы далеко не исчерпаны ни с точки зрения дальнейшего подбора перспективных ферментных препаратов и режимов их использования, ни с точки зрения её аппаратурного оформления^

ВЫВОДЫ

1. Устаноалено, что в клетках дрожкей, растущих на парафинах, суммарное количество.и фракционный состав углеводородов, локализованный . в шггакгных клетках, клеточных стенках и протоплазме, массовая доля-клеточных стенок в клетке, форма и размеры клеток, химический сосгав клеточных стенок и дрсшсевой биомассы, а таксе биотехнологические показатели процесса кулкэширования дрожжевых клехюк не является постоянной вели" • ной я подвержены значительным измененниям в зависимости

от состава среда и параметров процесса выращивания и дозревания биомассы: источник ^углерода, состав и количество подаваемых на ферменга-ци» парафинов, периодический или непрерывный процесс, белковый или жаровой режимы, возраст культуры,1 скорость протока, добавление стимуляторов, использование отработанной худьтуралъной жидкости и др,

2. Установлено относительное накопление в клеточных стенках н-ал-канов фракций С^ и выше при использовании в питательной среде парафинов как "тяжёлой" фракции (Сд-д- С27), так и "облегчённой" (Сзд-^д); при использовании тяжёлых парафинов содержание остаточных углеводородов в клеточных стенках в расчёте на их сухую массу в 2-3 раза превышало их содержание в биомассе целых клеток. Повышенное накопление остаточных углеводородов в клеточных стенках сопровождается ухудшением качества и снижением выхода биомассы. При интенсивном биосинтезе био- • массы снижение массовой доли клеточных стенок и остаточных углеводородов в них коррелирует с улучшением качества биомассы по таким показателям^ как содержание остаточных углеводородов, белка и др., я улучшением биотехнологичеоких показателей процесса культивирования.

3. Установлено, что стадия дозревания очень эффективна для снижения в клеточных стенках и биомассе лашцов и остаточных углеводородов, включая фракцию н-алканов щ выше, и для стабилизации качества биомассы.

4. Выявлен широкий спектр стимуляторов, представляющих собой как индивидуальные соединения органической и неорганической природы, так

ц сложные смеси биологически активных веществ, включая отхода разлк---— 1шх биологических производств: сульфит натрия, полигиббереллиновый препарат (гибберсиб), ферментные - препараты гликаназного;действия, бак-териородопсин, гипохлорит калля, полифункциональные кислоты на основе сапропелитовых углей, полученный нами на основе отёков ксилита препарат "ФЦ", биостимулятора на основе мицелия высшсс грибов, сксядаты парафинов, полученные окислительной деструкцией парафинов в присутствия солевых катализаторов, отхода различных биологических производств-производства кормового лизина, коричневый сок зелёных растений, активный лл я др. Установлено влияние стимуляторов на состав д структуру клеточных стенок, увеличение их проницаемости для субстрата и других компонентов питания,'-на размер и форму дрожжевых клеток, содержание в них пероксисом и митохондрий, повышение физиологической активности культуры, на интенсификацию процесса культивирования биомассы дрожкей, что проявлялось в увеличении'скорсйти и эффективности роста культуры, увеличении производительности ферментёров, снижении расходных-коэффа- .. цпентов, повышении качестве готового продукта и улучшении экологической обстановка на заводах.

5. Впервые выявлены синергаческие эффекты при.действия смесей стимуляторов различной химической природа на рост шрафкнокиеднпцих дрожжей; показано, что природа, концентрация и количественные соотношения

стимуляторов в композициях оказывали существенное влияние на проницаемость клеточных стенок и мембран, на динамику роста, физико-химические показатели среды культивирования, технологические показатели процесса культивирования и качо".тво биомассы. Установлено, что эти показатели претерпевали изменения в целом в благоприятную сторону при определённых сочетаниях и количественных соотношениях стимуляторов в композиционных смесях, при существенно меньших их концентрациях, чем при раздельной подаче.

6. Установлен эффект последействия стимуляторов, получаемых на основе мицелия высших грибов а оульфита натрия, который состоит в сояра-

...... - 5С - V.

нении повышенной скорости биосинтеза и выхода биомассы в течение нескольких суток после прекращения подачи стимуляторов, что позволяет осуществлять их периодическую подачу. Впервые также показано, что за счёт эффекта последействия достаточно лишь активации посевной популяции для увеличения срока её поддержания в 5-10 раз в аппаратах чистой культуры, увеличении производительности промышленных ферментёров и качества биомассы, при значительном снижении удельного расхода стимуляторов. Установлено резкое снижение удельного расхода и повышение эффективности их действия в результате их химической модификации, например, выдерживанием в присутствии ионов металлов переменной валентности.

7. Впервые осуществлён лизис клеток дрожжей, выращиваемых на парафинах, под действием ферментных препаратов гликаназного типа, 'растворяющих трудно расщепляемые полисахарида, форшрухщие' опорный материал клеточных станок. Доказано, что в их лизисе'главную роль играет, ув-глхн каназы и протеазы, важно также участие хитиназы, не играют сколько-нибудь существенной роли липазы .Впервые- получены протопласты -этих дрожжей. Показан слнергический эффект в действии эндо- и экзо- / '-^глюканаз, а • таксе эвдогликаназы (лизоцим) и гликозидазы ( /V-. ацетил-2>-глюхозами-

• нидазы); методогсспецифического ферментативного гидролиза показано, что. струытура "хитиновой" части глет очных стенок дрожаей ближе к структуре коллоидного хитина и не имеет упорядоченной структуры высокомолекулярного полисахарида.

8. Выявлены условия интенсификации ферментативного.лизиса как интак-тшх, так и инактивированных дрозжевых клеток; при этом показала эффек-тигмость кратковременной обработки дрожжевой биомассы в.аппаратах с развитой поверхностью разового контакта и _ противоточным движением фаз для инактивации клеток дрожжей и сопутствущей мшкрофлорз, для стабилизации высоко: о каче-лва биомассы и её ферментативного гидролиза.-

Э. Разработана безотходная технологическая схема' комплексной перера-боиси биомассы для получения белковых концентратов повышенной биологической ценности,~с пониженным содержавшем таких компонентов, как нуклс-

нновые 1ИЮЛ0ТЫ, материалы клеточных стенок, остаточные углеводороды, лшшда,- физиологически активных: веществ, универсальных компонентов' питательных сред и др.. Отличительной особенностью разработанного технологического процесса является глубокая деполимеризация трудногидро-ддоугшх /»--глюканов клеточных стенок дроготей до глюкозы без предва- .

рвдельного растворения или гидролиза, белковой фракции, которую выделяют непосредственно в виде твёрдых частиц после перевода в раствор значительной часта нуклеиновых кислот, компонентов клеточных стзнск, нязкомолекулярных белков а пептидов.

10. Разработаны новые метода, в той числе и .экспресс-метода, отделения остаточных углеводородов ивлишдов в прессованной а сухой биомассе паредшокаслящих дроджей: а) объёмный метод; б) кошшекс'ный метод весовой; в) морфометрические методы, в двух модификациях - визуаль-

- ный и метод оптикоструктурного машинного анализа (ОСЫА), а тагае новые '' метода характеристики ферментных препаратов а ферментолиза биомассы.

11. Основные результаты выполненных исследований отражены в 45 основных публикациях и обзорах, 54 авторских свидетельствах и патентах, 17 тезисах докладов на Всесоюзных и Международных,конференциях и съездах, а также Еаяючены в отчёты НИР.института, промышленные технологические регламенты, исходные данные, а часть разработок, направленных, на интенсификацию процессов культивирования дрожжей, внедрена на бпо-химкомбинатах.

12. Внедрение разработаяных технологических процессов получения паприна позволило на разных заводах улучшить технологические показатели, что проявилось в увеличений на 10-30% выхода биомассы, на 5,08,0 т/сутки производительности промышленных ферментёров, на 10-40^ продуктивности процесса, снижении на 10-30$ расходных кооф^ичаенфоз по парафину и на 5-15^5 по компонентам минерального питания, а таю.:-

■ улучшить качество, биомассы по содержанию белка, остаточных углеводородов я другим показателям и получить значительный экономический эффект (более 7 млн. рублей-- в ценах до 1991 года).

Материалы диссертации были долоаенн на:

П-ом Всесоюзном съеаде биохимиков (Ленинград, 1969г.);

III-ем Международной симпозиуме по дрогааы (Дельфт-Гаага, 1969г.)

III-ем Международном специализированной симпозиуме по дрокхсац (Хельсинки, 1973г.)

IV-ом Всесоюзном биохимическом съезде (Ленинград, 1979г^)

2-ом Всесоюзном совещании по фермешсям микроорганизмов (Минск, 197;

6-ом Всесоюзном съезде БМО "Микробиологический синтез, биотехнология и биоинненерия" (Рига, 1980)

7-ом съезде ВМО "Биотехнодогические основы микробиологических синтезов" (Алма-Ата, 1985) *

ФЕМО Международном симпозиуме "Регуляция микробного метаболизма факторами внешней среды" (СССР, Пущино, 1983)

Всесоюзной конференции "Биотрансформация.вторичного растительного . сырья в белко. ;е продукты" (Тбилиси, 1987)

III-ell Всесоюзная конференции "Научные основы технологии промышлнн-пого производства ветеринарных биопрепаратов" (Щёлково, 198?) Республиканской конференции "Микроорганизмы в сельском хозяйство" (Кишинёв, 1988)

Всесоюзной конференции "Регуляция микробного метаболизма" (ИБФМ - Пущино, 1989) ... .:.. .. - .

Научно-технической конференции "Биотехника и биотехнология", БиБ - 90 (Тамбов, 1990)

Всесоюзной конференции "Лимитирование и ингибирование роста микроорганизмов" ЙБФМ - Пущино, 1989)

Всесоюзной конференции "Разработка и производство препаратов медицинской биотехнологии" (Махачкала, 1990)

Всесоюзной конференции "Концепция создания экологически чистых регионов" (Волгоград, 1991)

Х1У-ои Менделеевском съезде по общей прикладной хиши (Ташкент, 1989)

Материалы диссертации опубликованы в работах:

1. Максимова Г.Н, Рожкова Ы.И., Воробьёва Г.И. Способ количественного определения углеводородов в содержащем их сырье.

A.C. .£175725.-5!.-1935.

2. Максимова Г.Н., Рожкова М.И., Воробьёва Г.И. Способ количественного определения углеводородов в содержащем их сырье. A.C. 175 731 .-Ш.-1965.

3. Максимова Г.Н., Абрамова З.К., Щёкина Ü.В..Способ извлечения углеводородов и липидов из БВК и определения этих веществ.// Макробпол. синтез .-IS66.-M. -С. 3-7. , . ...

4. Максимова Г.Н., Воробьёва Г.И., Григорьева С.П., Ласкова Н.Ф., щёкина' JS.B. О-локализации углеводородов в клетках дрежжеи, выращенных на средах с парафинами нефти.// Микробиологический синтез .-IS66.-M.-С.З-б.

5. Максимова Г.Н., Щёкина £¡.3»; Воробьёва Г.И. Методика определения лдпидов и углеводородов в сухих дрожжах.// Микробиологический синтез-.-1957.-М5.-1-3. .

6. Максимова Г.Н.', Воробьёва Г.И.; Щёкина ¿.В., Григорьева С.П., Ботникова Т.А. К вопросу о содержании углеводородов в дрожжах и растительных кормах.// Микроб:;ол.синтез.-1Э67 .-#10-11 .-С .5-12.

7. Максимова Г.Н., Воробьёва Г.И. Сравнительное действие ферментного препарата из улиток jofrvf'' на дрожжи t. ^u£UourLcad<'/ НП-2 и НП-4, выращенные па средах с глюкозой и с парафинами.// Микробиологические синтез.-1967.2j£9.-С.4-9.

8. Максимова Г.Н., Воробьёва Г.И. действие ферментного препарата из кулътуральнои жидкости S/'ef- ^Usevs на дрожжи С, уш tfrcAsnom/sV НП-4, выращенные на среде с глюкозол и на средах с парафинами.// ¡¿акробиол. синтез.-Ifc67.-ifJä2-I3.-C.I-4. • '

9. Максимова Г.Н., Воробьёва Г.И., Марилина A.C. Действие ферментного препарата из пищеварительного тракта улитокЛ.рсыКа. на дрол-■жи C,(fuitlit4sMrui;i НП-4, -выращенные на среде с парафинами.// Белог аз углеводородов .-1969 .-С .36-40..

10. Максимова Г.Н., Щёкина 'Е.В. Зоробьёва Г.И. Быстрый метод определения общего количества углеводородов и отдельно ароматических углеводордов в дрожжевых клетках, выращенных на средах с парафинами. // Микробкол. синтез.-1970.-JiEBA 4А.-С.60-66.

11. Максимова Г.Н., Воробьева Г.И., Маринина A.C. Выделение протопластов .дрожжея k<jwltemoi>ds! НП-4, выращенных на среде с пира. финами.// Микробкол. синтез.-I97I.-JK2.-С.31-33.

12. Максимова Г;Н., Воробьёва Г.И., Григорьева C.II. , Абдумалпков

А.X.Распределение углеводородов в клетках дрожке^ U^tütb'vunond/i ЫП-4, выращенных на среде с парафинам.//Микроб, синтез.-I97I-ji2.-С.34-3S.

13. Максимова Г.Н., Воробьёва Г.И., Аверин М.М.Состав н-алканов из структурных частей дрожжевых клеток, выращенных на средах с парафинами.// Ыякроб. синтез.(Труда ВНШсинтезбелок)-1971.-^.-С.40

14. Максимова Г.Н.', Воробьёва Г.11., Григорьева C.D.K вопросу о локализации углеводородов в клетках дроазе^^'&илв^/' ЫИ-4, взращенных на средах с парафинами.//Прикл. биох. и микроб.-1972.-т.8т2.-С.19.

15. Максимова Г.Н., Воробьёва ГЛ., Щёкина Е.В.,. Казанцев Э.Н., Григорьева С.П., Шуст С.Ы., Калашникова В.В., Марлнина А.С.Влияние различных'факторов на процесс "дозревания". //Микр. пром.-1970 .-3.-С. I

16 Максимова Г.Н., Воробьёва ГЛ., Матгшенко Л.А., Маринина A.C. Распределение и состав углеводородов в клетках парафинокислящях дрожжей С. tjuJ&'ouKJndj''' НП-4 в связи с процессом "дозревания"./Д1ик-робнат. синтез (Труда ВСБ).-1971.-£1.-С.20-23.

17. Максимова Г.Н., Воробьёва Г Л.Распространение углеводородов в живой природе (Обзор).// Мшсроб. пром.-1971.-Ы1.-С.1-5.

18. Максимова Г.Н., Воробьёва ГЛ., Казанцев Э.Н., Григорьева СЛ

Щёкина Е.В., Денис А.Д., Сстафиичук Н.Б., Тарасюк ГЛ., Старых Л.Б.,

Фришко Ы .Л .Изучение влияния pH среды в дозревателе на качество пара-финокаслявдих дрожжей при непрерывном дозревании.//Ыакробиоя. пром.-IS76.-IA.-25.

19.Казанцев ЭЛ., Максимова Г.Н., Щёкина Е.В., Воробьёва ГЛ. Способ количественного определения содержания углеводородов.// А.С MI52S3 .-S1.-IS75 .-¡Ь6>.

20. Максимова Г.Н., Воробьёва ГЛ.Локализация углеводородов в клетках парафинокаслящих дрожжей.//Микробиол. синтез (Труды ВСБ).--Ш. -С .31-33.

21. Максимова Г.Н., Воробьёва ГЛ., Гололобов А.Д., Казанцев Э.Н., Сильченко Н.В.Влияние содержания фосфора в процессе "дозревания", па-рафинокисляицих.дрожжей на их качество./Дикроб. пром.-1974.-1А(30).

Воробьёва Г.И., Максимова Г.Н., Щёкина Е.В., Григорьева'С.П., Маткшенко Л.А.Физиолого-биохимическне особенности процесса дозревания дролжей, выращенных на углеводородах нефти.//Ыикробиол. синтез (Труды ВНИИсинтезбелок).-1974.-^7.-0.39-50. . • ."■'•

23,Григорьева С.П., Воробьёва'Г.И., Максимова Г.Н., Выслоух В.Д, Кулаев,'ii.С.Изучение полифосфатов, полисахаридов к нуклеиновых кислот в клетках С, ршйь&гтсыЬ'/ , ассикшшрувдкх углеводороды нефти, при раз них. условиях культивирования. //Прикл. б дои. и микроб .-I973-9-6-C .30i

24.Максимова Г.Н., Воробьёва Г.И., Григорьева С.П.Взаимосвязь уг-

леводородов и полифосфатов в клетках6^ел&'»»«о>«6/'в- условиях "дозревания" ,/Дщкробиол. синтез (Труды ВСЕ).-1973.-В.5.-С.26-31.

25.Григорьева С. П., Воробьёва Г.и., Кулаев И.С., Максимова Г.Н. Сравнительное-изучение фосфорного-Обмена.при .выращивании дрояжел

на средах с парафинами или глюкозой.//Микробиол. пром.-1376.-Olk.-C720-25. . .

26. Максимова Г.Н., Воробьёва Г .И., Самойлова Л.П., Фёдорова Л.Д., Сергеева Л.М., Свиткан В.В., Игонпн П.Г., Галдана Л.В.Примененпе окис- . ленных парафинов в качестве сырья для получения кормовых дрогхеи.// Микробная. пром.-1974.-й2А(31).-С.23-28.

27. 2^аксимова Г.Н., Воробьёва Г,И., Щёкина Е.В., Самойлова Л.П., Матюшенко Л.А., Сергеева Л.М., Свиткин В.В., Галдана Л.В., Игонин П.Г. Изучение количественных дзмеданай содержания углеводородов в биомассе -дрогле*! Ь.^шШептлмЫ НП-4 в процессе выращивания их на средах с парафинами и оксндатами.// Микробиол. пром.-1979.-МА(37А).-С.6-10.

23. Казанцев З.Н., Щёкина Е.В., Максимова Г.Н'.,' Воробьёва Г.И.Определение относительного объёма включений липиддой природы /мкЖ'/ , культивируемых на углеводородах.//Прикл. биох. и мпкробиол.--1Э76 .-T.XI.-В75.-С.640-644.

25. Максимова Г.Н.,' Воробьёва Г.И., Ыосин В.А., Максимов В.И.Вли-

янпе условий лизиса на оезультаты турбидиметряческгк измерений действия ллтичесхих ферментов.//ОНТИТЭИ Микробиопром, депонирование.-IS7Ô.--j'.:2S.-flen. 17.12.75.Реф. ст. опубл. в л1лкробисл. пром.-i975.-;í3( 132).

30. 1даксамов В.И., Мосин В.А., Максимова Г.Н., Воробьёва Г.PI.Метод определения ^-глюхаяазноя активности.//Прикл. биох. и микроблол,--1975.-Т.П.-В.З.-С.455-459.

31. Максимова Г.Н., Воробьёза Г.И-., Чепиго C.B., Коновалов С.А., Павлович В.А.Способ получения биомассы.//A.C..S4556I5.-5Í.1974.-48.

32. Максимова Г.Н., Воробьёва Г .И., Щёкина Е.В., Мосин В.А., Матюшенко Л.А.Изучение степени аэрации в процессе дозревания парафанокис-лявдих дробей на их качество я фдадалогическую активность.//Мик-робиол. пром.-1973,-JfIA-C.3-9.

33.Максзмова Г.Н., ВоробьёваГ.И. .Ванникова Л.В., Симаев £.¿;.,He- . замов'P.A.Способ получения.биомассы.//А.С.507053.-Б1.-1576.-Ж). '

.34. Максимова Г.Н., Воробьёва-Г.И., Мосин ТЗ.'А., Максимов В ."И. Роль протеаз и /-глюкадаз в лизисе клеточных стенок дрожкея.//Прикл. tízox. и микробпол.-1976.-Т.XII.-В.3.-С.327-333.

35. ЬЗослн В.А., Максимова Г.К.', Воробьёва Г.И.Способ ферментной . дезинтеграции биомассы дроией./Д.С. .'¿542502.-ЕЙ.-1577

36. Максимов В.И., Мосин В.А., Максимова Г.Н., Воробьёва Г.И. Способ получения глюкозы.//A.C. Е547П4.-Ш.-1Э77.-й.6.

37. Максимова Г.Н., Воробьёва Г.И., Григорьева СЛ.. Щёкина 2.3.,

. ' .. , - , - -56.-.

Шарова В.М., Корягин В.В., Мосин В.¿.Изучение влияния аэрации и пере- ; мешивания в процессах дсюкисления углеводородов .дрожжами на их' физиологическую активность и состав, биошссы.//Микроб., пром.-1979.-ИА.

38. Максимова Г.Н., Воробьёва Г.И., Чирков И.М., Щёкина Е.В.,Григорьева С.П., Корягин В.В., Ыосин В.А.Изучение влияния различных режимов дозревания биомассы при непрерывном культивировании дроджей

на их физиологическую активность,//Сб. Технол. пр-ва корм, дражней

из парафинов.-1984.-С. 196. (ОРИСО Главмикробиопш.)

39. Ыосин ВеА., Максимова Г.Н., Кулачков B.C., Воробьёва Г.И.Спо-

ооб разрушения клеток дрожжей .//A.C. )£630915.-Ш.21973.-МЭ. .

40. Максимова Г.Hv Мосин В.А., Кулачков B.C., Воробьёва Г.И., Катруп"' Р.В., Скворцов А.Н., Горлов С.Н. Способ получения биомассы. //A.C. )56309I4.-Hd.-I978.-C.I84.-JS40. . .

41 . Максимова Г.Н., Воробьёва "Г.И. Пути снижения содержания углеводородов в кормовых дрожжах, выращиваемых на средах с парафинами. //Обзор. ШТИТЭИмикробйопром.-1977.-Серия III.-Москва..-

42. Максимова Г.Н. ,Ка1руш. Р.В., Морозова Г^Р., Сафонова Н.В., Чернуха Б,А., Фишер П.Н., Калунянц Н.П., Ерёмин В.А. Способ выращивания микроорган: змов.//A.C. К731815.-Ш.-1980.-ÜI6.

43. Минакова В.И., Воробьёва "ГЛ., Калашникова В.В. .Максимова . Г.Н.,. Сильченко Н.В., Катруш Р.В., Писарев АЛ., Столяров Б.А.Способ выращивания дрожжей.//А.С. £795011.-Щ.-1981.-М.-С.219. ....*.

. 44. Корягин В.В., Шафоростова Л.Д. , Максимова Г.Н., Воробьёва Г.И. Пушков A.B., Беленков В.Я. Способ автоматического управления процессом культивирования микроорганизмов.//А.С. J&799S07.-Bi.ISGI.-КЗ.

. 45. Максимов В.И., Мосин В.А., Максимова Г.Н.'Синергизм действия модельной смеси ферментов.//Микробиол. пром.-1930.-Ш.-С.8-10.-.

46. Максимов В.И., Мосин В.А., Максимова Г.Н.*, Воробьёва'Т.И. ,Ло-' сякова Л.С. Способ получения глюкозы.//A.C. 761563.-Ш.-IS30.-.№33..

47. Максимова Г.Н., ГалданаЛ.В., Сергеева"Л.М., Воробьева.Г."И., Григорьева С.П. Динамика роста дрожжей на средах с компонентами окисленных парафинов.//Микроб. пром.-1979.-йЗА.-С.4-7.

48.. Максимова.Г.Н., Воробьёва'Т.И., Кулачков B.C., Токарева Е.В., Влияние добавок мелассы и. сульфита натрия на доокисление углеводорода i парафинокисляхщими дрожками.//Михроб. пром.-1979.-ie2A.-С.26^27.'

. 49^ Корзин В.В., ЧекулаеваЛ.Н., Максимова Т.Н., Шафоростова Л.Д. Градова Н.Б. , .Морозова Г.Р. .Сафонова Н.В., £данкикова E.H. .Воробьёва Г.И.. Ильченко В.И. .Всеволодов'H.H., Гайнуллина.С.Ы.Способ культивирования микрооганизмов.//Ä.C. 78791 '.-Wi.-I98I.-lHI.-C.I0I. J.

. 50. Катруш Р.В., Фёдоров ..В .В.. ¿Бенкин А.Г.,Николаев.В.Х., .Воробьёве Г.И.,Максимова Г.Н., Мирошниченко И.И.,Акимова Л.Ф.,Скорик Л.Т..Цупко1 В.А.Способ очистки биомассы от ОГГВ.//А.С.886503.-ßi.-1931 .-.'544.

51. Сафонова Н.В..Максимова Г.Н..Морозова Г.Р., Воробьёва Г.И., Катруш Р.В., Эланидзе В.А.,Оскалов Т.С.,Конобри.» В.Н. .Логинова Н.М.,

"""~'¿'арапов-А~.П7,Шурупова -и.П.,Артова О.С..Лизерова Л.В..Набокова.Л.Ц.// A.C. И0230э6.-Б4.1333.-;й5.

52. 'Максимова Г.Н. .'Воробьёва Г .И., Зубец A.M.,Катруш Р.В.,ыосин З.А. //Способ получения белкового продукта.А.С. ;Й77929,-E'I.-IS3I.-;34Q.

53. Воробьёва Г.И.,Максимова Г.Нч .Катруш Р.В..Белогорцев А.Способ выращивания микроорганизмов.//А.С.'¡1051934.-БИ.-1533.-40.-0.^7

54. Максимова Г.Н.Досин В.А..Максимов'В.И.,Воробьёва Г.И.Глюкан-хитиновыц комплекс клеточных стенок парафиноклелящих дрожек.// 'Прякя. бпох. и микробиол.-1332.-Т.18.-В.4-С.529-534.

55. Пенкин А.Г. .Максимова Г.Н..Николаев В-.А. .Воробьёва Г.И. ,Ка?р7л; • Р.В..Баженов Ю.М.,Тихонов И.Д.,Глазман Б.А.,Пушков А.З..ЕэленковЕ.Я. Способ очистки биомассы микроорганизмов.//А.С. ;Я061462.-£И.-1£83.-46,

56. Максимова Г.Н..Заикина А.И. .Воробьёва Г .К. .Градова Н.Б.,Цыганкова Н.И..Христоева Л.И..Рогачёва P.A..Селифонтова В.С.Способ получения биомассы микроорганизмов.//А.С. Ш39093.-БИ.-19в5.-;Ж>.-С,247.

57., Максимова Г.Н..Сафонова Н.В..Воробьёва Г.И., Морозова Г.Р.,Кп-пареевская Т.В..Токарева-S.B..Катруа Р.В..Воловненко А.0..Белорусов И, П. .Лукьяненко А.Г..Матвеез В.К, .Платонов Ю.В.Способ получения бяо-массы//А.С. М044033.-БИ.-Ш3.-J535.-С.257.

53. Максимова Г.'Н. .Авчиеза 'П.Б. .Воро^ёва Г .И.Способ получения биомассы дрокяей//А.С.-Ш18059.-ЕИ.-1234.-$37.-С.205.

59. Максимова Г.Н..Цыганкова Н.И..Воробьёва Г.И.,'Пучков З.Н.,Нест-ратова М.2..Дубинекая A.B. .Еалахонцева В.Н.Способ получения белкового продукта//А,С. И129920.-БИ. -1984. -JÄ46. -С .208.

50-. Максимова Г.Н..Калашникова З.В..Сильченко К.В..Максимов В.И., Воробьёва Г .И., Тихонов И.Д.Способ' выращивания//А .С. J SI163634. -EL- ' -Ji23.-C.~32. '

61. Максимова Г.Н..Сороколетова Р.И..Авчиева П.Б.Исследование процесса выращивания дрожжей на среде с парафинами-с повышенным'содержанием примесей на среде с парафинами с повышенным содержанием при- ■ месел з условиях возврата отработанной культуральнои хсидкостл.// Млкробпол. пром.-IS33.-МА.-С.7-8.

62.Авчиева Ц.Б..Максимова Г.Н. .Воробьева Г.й. .^на'лсовски B.i>., Симаев U.M. .Низамов P.A. .Великорецкий Е.П..Саткова Г.гл.Спосб получе-

ш бдомассы//А,С. Ш143032.-Ш.-1985.-;^-С.Г91.

63. Сорокин Г.В..Айсаков,А.Т..Сороколетова Р.И..Соловьёв 'З.Н.. Хорошева Г.Н..Максимова Г.Н.'.Кривой Б.А..Куйбышев-Г.И.Способ выращивания дрокжей//А.С. j,»1040734.-БИ.-1933.-/'33.

64. Максимова-Г.Н».Серебрякова Т.А.,Авчиева П.Б..Зорооьёва Г.И.

Белогорцев Ю.i.,Катруш Р.В., -Токарева Е.В., Горлов С.Н., Сычёв А.Е., Громов Ю.Н.Способ получения биомассы./Д.С. ИП6727.-БИ.-1984.-Й36.

65. Максимова Г.Н., Авчиева П.Б..Виноградова И.Е.Действие сульфита натрия на рост парафинокисляющих дрожжей.//Микроб. пром.-1982.-¡«'¿CA.С.3.

66. Максимова Г.Н., Серебрякова Т.А.,Авчиева П.Б.Использование отходов производства лизина при выращивании арафинокисляющих дрожжей.// Микробиол. пром. -I983.-2A.-C.5-6.

67. Серебрякова Т.А., Максимова Г.Н., Авчиева П.Б., Воробьёва Г.И., Тихонов И.Д., Базарова О.В.,Кучер Р.В.Способ выращивания дрожжей.//

A.C. Ш11813Ю .-БИ.-1985.-¡¡235".-С.281.

68. Рахг'ова P.A., Максимова Г.Н.,Сиыаев ¡O.M.. Низаноз P.A.Способ выращивания дрожжей./Д.С. H285774.-EH.-Í987.~?¡í3.-C.266.

69. ...аксимова Г.Н.,8аикина А.И.,Цыганкова ,Н.И.,Денис А.Д., Воробьёва Г.И., Комарова H.H.Способ выращивания дрожжей./Д.С.№1212040.-1986.

70. Максимова Г.Н., Воробьёва Г.И.,Бескоровайный А.Г..Яковенко В.П., Белогорцев Ю.А.Способ выращивания дрожжей./Д.С. П92359.-БИ-1985.-г42.

71. Максимова Г.Н., Воробьёва.Г.И.,Катруш Р.В., Григорьев В.Г.,Котк-шов Е.К.,Новиков Ю.Ф..Скворцов А.Н.,Старшикова Л.В.,Василенко Л.И.Пи- ' тательная сре-д? для.выращивания дрожжей/Д.С.1218673.-БИ-1986.-10.

72. Максимова Г.Н., Воробьёва Г.И/, Скворцов А.Н., Василенко Л.И., Ибрагимов Ф.Б., Авчиева П.Б., Котишев Е.К., Григорьев В.Г., Коломыцев. Н.И.,Матвеев В.К.Способ получения биомассы^/Д.С. 1334712.-БИ-1987.22.

73. Серебрякова Т.А..Максимова Г.Н., Воробьёва Г.И.,Стеркин'В.Э., Сычёв А.Е.,Соболев.H.H.,Громов Ю.Н.,Бабурина В.Ф..Зеленков Г.П., Рошаль1

B.У.,Селифонтова В.С.Способ получения биомассы./Д.С.1309576.БИ.1987.

74. Максимова Г.Н., Винаров А.Ю.,Волох В.Я.,Воробьёва Г.И., Смирнов В.Н..Скворцов А.Н., Василенко Л.И.Способ получения биомассы.// -

A.C. №1412293.- БИ.-19В7. ...

75. Максимова Г.Н., Винаров А.Ю«,ВорЬьёва Г.И.«Скворцов А.Н., Василенко Л.И.,Григорьев В.Г., Котишов S.К.Питательная среда для выращивания дроажей./Д.С. №1498055.-БИ.-1988.

76. Максимова.Г.Н., .Симаев Ю.М.,Винаров А.Ю..Захарычев А.П.,Низамов Р.А.,А:чиева П.Б.,Рахимова.P.A..Гутман А.Ш..Серебрякова Т.А.,Сычёв А.Е. Способ выращивания биомассы./Д.С. (¡21443403.-БИ .-1988 .-!Й5 .-С.254,

77. Авчиева П.Б., Винаров А.Ю..Максимова Г.Н., Симаев Ю.М.,Низамов Р.А.,Гутман А.Ш.Способ выращивания микроорганизмов./Д.С. Ы412292.-БИ,-1988.-!1»27.-С.Н05.. . ..

78. Авчиева П.Б..Максимова Г.Н..Винаров А.Ю..Яровенко В.Л.Способ дезинтеграции дрожжей/Д.С. ¡£[477153.-БИ.-1988.

79. Винаров.А.Ю..Смирнов В.Н..Носов В.В.'.Битрих К.И..Рыжков В.М., Волох В.Я..Григорян А.Н..Сметанина С.Е., Максимова Г.Н.,Авчиева П.Б. Способ выращивания микрооганизмов.//А.С. М505017.-БИ.-1988

..... - 59 "

80. Иоффе МЛi, .Максимова Г.Н..Цыганкоза Н.И.,Кучков В.Н.Исследо^а-.; ние биологического дей вия денуклеинизированного продукта, полученного

. из_паприна.//Биотехнология.-1990.-№6.-0.70-72.

81. Серебряк0Уа-Т."АТ.Максимова. Г.Н. »Громов Ю.Н..Зелешсов Г.П.,Соболев Н.Н.,Винаров А.Ю.,Гордеева Е.И..Захарычев А.П..Карцева М.Г.,Ваги- """ чев А.Й.,Горлв А.С.,Бабурина В.Ф.Способ получения биомассы.//А.С. ,■¿1483943.-БИ.-1988.

82. Максимова Г.Н..Григорьев В.Г..Винаров А.Ю.,Коганов К.М.,Швайко Л.В.,Сухинин В.Н.,Носов В.В.,Рыжков В.М..Воробьёва Г.И.Способ получения биомассы.//A.C. №1503297.-БИ.-1988.

83. Максимова Г.Н.,Войнова И.А.,Винаров А.Ю.,Градова Н.Б..Заикина А.И.,Сычёв A.B.,Симаев Ю.М..Низамоз P.A..Рахимова P.A..Минина Т.С., Круглова А.А.Способ выращивания биомассы//А.С. И605509.-БИ.-1989.

84. Максимова Г.Н..Казанцев Ю.Е..Винаров А.Ю.,Чекуроз В.М.,Сычёв 'А.И Ралдугин В.А..Громов Ю.Н..Зеленков Г.И.,Соболев'H.H.,Миловидов Ю.В. //A.C. 1й1531482.-БИ.-1989.-№44.

85. Максимова Г.Н»,Григорьев В.Г..Казанцев Ю.Е..Винаров А.Ю.,Скворцов А.Н..Василенко Л.И.,Котишов'Е.К.,Захарычев А.П.,Волох B.R.Питательная среда для выращивания дрожжей//А.С. №1578188.-БИ.21988.

86. Максимова Г.Н.,Берестенникова Н.Д. .Анюхина В.И.Девацдовская Ю.Б.,Позмогова И .Н.Содержание включений липидной природы, свободных и связанных лилидов в кле тках дрожжей m^Mosa, при разных концентрациях парафина в среде//Прикл. биох и кикробиол.-1988.-Т.24.-В.4.-С.549.

870 Винаров А.¡0. .Максимова Г.Н..Воробьёва Г.И..Ксено^снтов Б.С.,Сычёв А.Е.цНизамов Р.А.Способ получения биомассы.//А.С.1692143.-БИ.1990. у- 88. Максимова Г.Н..Заикина А.И.,Винаров А.Ю.,Сычёв А.Е..Низамов P.A. Нургалиев Р.Ф.,Гутман А.Ш.Спосизб гашения пены в культуральной среде. //A.C. 1Ё1616993.-БИ.-1969.

89. Максимова Г.Н..Фадеева Е.Ю..Винаров А.Ю.Дорошева Г.Н..Николин C.W ..Конобрий В.Н.,Будревич З.В.,Бе-лорусов Й .П.Способ получения биомассы.//А.С. ÜI586 177.-БИ.-1989.

90. Максимова Г.Н., Казанцев.Ю.Е.,Винаров А.Ю.,Фаде ева ¿¡.¡и.,Король . S.В..Воронова Е.А..Гаврилов В.Б.Влияние гиббереллинов на рост и качество биомассы парафинокисляющих дрожжей рода Кандида.//Сб. статей.Передовой произв. опыт в микроб, и мед. пром.НПИ.-1990.-ЗЛО-II.-Москва.

91. Максимова Г.Н.,Винаров А 10.,Фадеева Е.Ю.,Король К.В, Даэанцевз Ю.Е.,Чекеров Б.М.,Скворцов А.Н..Василенко I.И..Ибрагимов Ф.Б.,Коломыце* Н.И .Способ получения биомассы//А.С. №1774656,-БИ.-1992.-Из40.-С .200.

92. Максимова Г.Н.Дучков В.Н..Самарина О.В..Захарычсв А.П.,Винаров А.Ю..Баух Иоахим, Хинч Рейнхарт, Де-линг'Гердт.Способ подготовки биомассы к экстракции/Д.С. Ш85Р.71.-БИ.-1992.-48.-С.192.

93. Винаров А.Ю.,Смирнов В.Н.,Носов В.В..Битрих.К.И.,Рыжков В.К.,

Волох В.Я., Григорян А.Н., Сметанина С.Е., Максимова Г.Н., Авчкева П.Б. Способ выращивания микроор'ганизнов//А.С. №1505017.-БИ. -1988.

94. Максимова Г.Н., Винаров А.Ю. Использование'биостимуляторов в про- ' цессе получения биомассы кормовых дрожжей.//Обзор. Микробиол.'.пр-во: * Обзорн. информ. - Ii с: ВНИИСЭНТИ. Миныедпроы СССР, 1990. - В.З.' '■"

95. Максимова Г.Н., Николин С.И., Винаров А.Ю.,_ Конобрий В.Н., Во-ловненко А.Ф., Платонов Ю.В., Будревич З^В., Морозова Г.Р.//Способ получения биомассы//.А.С. 1526223. - БИ. - 1988. •

96. Максимова Г.Н., Фадеева Е.Ю., Винаров.А.Ю., Трушуле Ы.А., Луке-виц Э.Я., Миронов ВЖ/Гар Т.К., Викторов H.A.// Способ получения биомассы.// A.C. М7202277.-БИ. - 1991.

. 97. Мг'ссимова Г.Н., 'Фадеева Е.Ю., Винаров АЛ)., Трушуле H.A., Луке-виц Э.Я., Миронов В.Ф., Гар Т.К., Викторов H.A. Способ получения биомассы. дрожжей//А.С. Кг1759024.- Бй. - 1991.

98. Максимова Г.Й. Действие сульфита на клетки микроорганизмов ( Обзор ).// Биотехнология. - 1994. - Ш.

99. Максимова Г.Н., Винаров А.Ю., Казанцев ¡O.E., Воронова Е.А., Гаврилов В.Б. Исследование действия полигиббереллинового препарата • и его композиции с сульфитом.натрия на рост парафинокиеляющих дрожжей.// Биотехнология. - 1994', -

Тира*.

ПИК НПО «.Чедбиоэмшомкка»

Информация о работе

Максимова, Гальвина Николаевна
доктора биологических наук
Москва, 1994
ВАК 03.00.23

Автореферат

Похожие работы