Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Индикация ДНК вируса папилломы человека при кондиломатозе гениталий, папилломатозе гортани и мочевого пузыря, а также в опухолях этих органов

ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Лисицын, Федор Викторович

1) Введение

Актуальность проблемы. Цели и задачи исследования. Основные задачи исследования. Научная новизна работы. Научно-практическая ценность. Основные положения выносимые на защиту. Апробация работы.

2) Обзор литературы

2.1 Общие сведения о вирусах папилломы человека.

2.2 Структура генома и его организация.

2.3 Типы ВПЧ.

2.4 Роль ВПЧ в канцерогенезе.

2.5 Гистологические характеристики дисплазий и карцином шейки матки.

3) Материалы и методы

3.1 Клинические материалы от больных для идентификации ДНК ВПЧ.

3.2 Гистологическая характеристика материала.

3.3 Метод полимеразной цепной реакции.

3.4 Подбор праймеров для различных типов ВПЧ.

3.5 Метод гибридизации in situ.

4) Результаты и обсуждение

4.1 Кондиломатоз и рак шейки матки.

4.2 Папилломатоз гортани и плоскоклеточный рак гортани.

4.3 Папилломатоз и переходноклеточный рак мочевого пузыря.

4.4 Общее заключение по обсуждению.

5) Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Индикация ДНК вируса папилломы человека при кондиломатозе гениталий, папилломатозе гортани и мочевого пузыря, а также в опухолях этих органов"

Актуальность проблемы. Папилломавирусные инфекции приобретают все большее распространение в мире: по данным ВОЗ ежегодно в мире диагностируется около 2,5-3 миллионов случаев [90]. Помимо заболеваний (кондиломатоз, папилломатоз), которые являются прямым следствием репродуктивной папилломавирусной инфекции, имеются онкологические заболевания, вызываемые этим вирусом, (см. Рис.1).

Число ВП Ч и нфи ци ров а н н ы х Случаев кондиломато за Дисплазий шейки матки 1п з Л и карцином И нвазивный рак шейки матки 10 млн.

I 1 млн

11 млн 55 тыс.

15 тыс

Рис.1. Уровень распространенности ВПЧ инфекций и связанных с ними заболеваний в мире (из расчета на 10 миллионов случаев инфекции) [81] .

В 1976 году, на основе исследований более 25000 материалов новобразований шейки матки и индикации в них ДНК вируса папилломы человека (ВПЧ) Цур Хаузен (Zur Haussen) предположил, что ВПЧ отдельных типов являются этиологическими агентами рака шейки матки [96]. В последующих исследованиях было показано, что ; при интеграции генома ВПЧ в геном клетки при папилломавирусной инфекции происходит аномальная экспрессия ранних вирусных генов Е6 и Е7, продукты которых начинают активно воздействовать на регуляцию клетки (продукты генов р53 и ретинобластомы), что приводит сначала к клеточной трансформации, а затем к опухолевому росту [11,97]. Гипотеза Цур Хаузена, в настоящее время уже хорошо обоснованна, и в 1996 году ВОЗ признает высокоонкогенные типы ВПЧ основными этиологическими агентами рака шейки матки. Возможно, что подобная этиологическая роль ВПЧ имеет место не только для рака шейки матки, но и для других сходных онкозаболеваний, например, для эпителиальных опухолей некоторых других органов человека: мочевого пузыря [84], гортани [60,61] и т.д .

В 1995 году, Горздрав Москвы опубликовал данные о числе заболеваний раком шейки матки и смертельных исходов в городе: 790 случаев заболевания раком шейки матки и 319 смертельных случаев в год. Ниже на рисунке 2 представлены данные по заболеваемости раком шейки матки и смертельных исходов в некоторых странах Европы. Эти статистические данные показывают актуальность ранней диагностики, профилактики и лечения таких заболеваний в мире. и ¿иии чООО 6000 8000

Рис.2. Статистические сведения по заболеваемости раком шейки матки в некоторых странах Европы [21]

Важным моментом в исследованиях такого рода является возможность высококачественной идентификации нуклеиновых кислот Число Число заболевших в год смертельных случаев в год

ВПЧ в материале от больных и кроме этого, возможность определения типов ВПЧ в опухолевой и «нормальной» ткани. Основным методом, выявления ДНК ВПЧ в настоящее время является полимеразная цепная реакция (ПЦР). Несомненными преимуществами этого метода является высокая чувствительность индикации и точность типирования ДНК ВПЧ. С другой стороны, при использовании ПЦР метода мы получаем усредненные данные по содержанию ДНК ВПЧ в исследуемом материале, так как в нем могут быть как опухолевые клетки, так и инфицированные клетки, продуцирующие ВПЧ. Для того, чтобы определить присутствие ДНК только в опухолевых клетках, необходимо их выделить из биоптата и потом использовать для проведения ПЦР. Такая процедура является достаточно сложной и часто приводит к артефактам. В связи с этим, для подобного рода исследований представляется наиболее адекватным использование метода гибридизации in situ, который позволяет идентифицировать ДНК папилломавируса в клетках на том же гистологическом срезе, который был подвергнут обычному морфологическому исследованию. Несомненно, что сочетание ПЦР, гибридизации in situ и стандартного гистологического исследования, позволит не только точно идентифицировать и локализовать ДНК ВПЧ в опухолевых клетках и клетках, инфицированных вирусом, но также и типировать ДНК ВПЧ в них.

Цели и задачи исследования.

Цель данной работы - Оптимизация методов индикации ДНК, а также идентификация ДНК ВПЧ в биопсийном и операционном материале при репродуктивной вирусной инфекции (кондиломатоз, папилломатоз) и в опухолях, вызванных ВПЧ.

Основные задачи исследования

• Оптимизация сочетанного использования ПЦР-метода и гибридизации in situ для идентификации и типирования ДНК ВПЧ в материале от больных в рамках существующей клинической практики.

• Выявление, локализация и типирование ДНК ВПЧ при кондиломатозе и раке шейки матки.

• Выявление, локализация и типирование ДНК ВПЧ вируса при папилломатозе и раке гортани.

• Выявление, локализация и типирование ДНК ВПЧ вируса при папилломатозе и переходноклеточном раке мочевого пузыря.

Научная новизна работы.

В ходе работы впервые обнаружена локализация ДНК ВПЧ 16 типа в железистом компоненте аденоплоскоклеточного рака и в аденокарциноме шейки матки, что дополнило представление об инфицированности ВПЧ различных компонентов эпителиальной ткани шейки матки.

При работе с операционным материалом от больных с диагнозом «переходноклеточный рак мочевого пузыря» впервые обнаружена ДНК

ВПЧ 16 типа в опухолевых клетках. Учитывая трудности в получении такого материала для анализа, эти результаты имеют особую ценность, так как они способствуют выявлению одного из главных факторов опухолевого роста в эпителиальной ткани мочевого пузыря.

Научно-практическая ценность.

Впервые адаптирована для существующей клинической практики методика проведения in situ гибридизации на стандартном клиническом материале, дополняющая классические гистологические методы.

В работе показано, что использование метода ПЦР в сочетании с гибридизацией in situ позволяет повысить эффективность выявления и локализации ДНК ВПЧ при опухолях шейки матки, гортани и мочевого пузыря, что дает основание надеяться на эффективное применение такого подхода к исследованию и других опухолей эпителиальной природы (толстой кишки, пищевода, бронхов и т.д.).

Основные положения выносимые на защиту.

• Показано, что ДНК ВПЧ 16 типа локализована не только в плоскоклеточном, но и в железистом компоненте аденоплоскоклеточного рака шейки матки и в клетках аденокарциномы шейки матки.

• Установлено, что ДНК ВПЧ 11 типа присутствует не только в эпителиальной ткани гортани при папилломатозе гортани, но и в зонах с плоскоклеточным раком гортани.

• Идентифицирована ДНК ВПЧ 16 типа в опухолевых клетках при переходноклеточном раке мочевого пузыря.

Апробация работы.

Материалы диссертации доложены: на заседании отдела молекулярной вирусологии НИИ Вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН (июнь 2001г.), на 6-й (май 1998), 7-ой (май 1999) , 8-ой (май 2000), 9-й (май 2001) международных конференциях "СПИД, РАК, И РОДСТВЕННЫЕ ПРОБЛЕМЫ". (Санкт-Петербург), международной конференции «Electron Microscopy-98» (31августа.-4 сентября. 1998г. Cancun, Мексика), 12 Европейском конгрессе по электронной микроскопии (Брно, июль 2000), 3-ей международной конференция по цитологии (10-14 июня, 2001г. Великий Новгород).

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Лисицын, Федор Викторович

выводы

1) Впервые адаптирована и оптимизирована для существующей отечественной клинической практики методика проведения гибридизации in situ на стандартном клиническом материале, дополняющая классические гистологические методы.

2) Впервые установлена локализация ДНК папилломавируса человека 16 типа в железистом компоненте аденоплоскоклеточного рака и аденокарциномы шейки матки.

3) Показано, что ДНК папилломавируса человека 11 типа присутствует в зонах с плоскоклеточным раком гортани, а не только в эпителиальной ткани гортани при папилломатозе.

4) Впервые идентифицирована ДНК папилломавируса человека 16 типа в материале от больных с диагнозом переходноклеточный рак мочевого пузыря.

5) В работе показано, что комплексное использование методов ПЦР и гибридизации in situ позволяет повысить эффективность выявления, локализации и типирования ДНК папилломавирусов при опухолях шейки матки, гортани и мочевого пузыря, что дает основание надеяться на эффективное применение такого подхода в будущем.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Лисицын, Федор Викторович, Москва

1. Baker C.C., Howley P.M. Differential promoter utilization by the papillomavirus in transformed cells and productively infected wart tissues. EMBOJ 1987;6:1027-1035.

2. Baker TS, Newcomb WW, Olson NH, et al. Structures of bovine and human papillomaviruses: Analysis by cryoelectron microscopy and three-dimensional image reconstruction. BiophysJ 1991;60:1445-1456.

3. Baker TS, Newcomb WW, Olson NH, et al. Structures of bovine and human papillomaviruses: Analysis by cryoelectron microscopy and three-dimensional image reconstruction. Biophys J 1991,60:1445-1456.

4. Band V, DeCaprio J.A., Delmolino L., et al. Loss of p53 proteifl in human papillomavirus type 16 E6-immortalized human mammary epithelial cells. JVirol 1991;65:6671-6676.

5. Barbosa MS, Edmonds C, Fisher C, et al. The region of the HPVE7 oncoprotein homologous to adenovirus Ela and SV40 large T antigen contains separate domains for RB binding and casein kinase 11. EMBO ,/1990;9; 153-160.

6. Barbosa MS, Lowy DR, Schiller JT. Papillomavirus polypeptides E6 and E7 are zinc binding proteins. J Virol 1989;63:1404-1407.

7. Chan SY, Delius H, HalpernAL, etal. Analysis of genomic sequences of 95 papillomavirus types: Uniting typing, phylogeny, and taxonomy. J Virol 1995;69:3074-3083.

8. Chen JJ, Reid CE, Band V, et al. Interaction of papillomavirus E6 oncoproteins with a putative calcium-binding protein. Science 1995;269:529-531.

9. Chow LT, Hirochika H, Nasseri M, et al. Human papilloma virus gene expression. In: Steinberg BM, Brandsma JL, Taichman LB, eds. Papillomaviruses, 5. Cold Spring Harbor, NY: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1987:55-72.

10. Cobrinik D, Dowdy SF, Hinds PW, et al. The retinoblastoma protein and the regulation of cell cycling. Trends Biochem Sci 1992,17: 312-315

11. Coggin JR, zur Hausen H. Workshop on papillomaviruses and cancer Cancer Res 1979:39:545-546.

12. Cole ST, Danos O. Nucleotide sequence and comparative analysis of the human papillomavirus type 18 genome: Phylogeny of papillomaviruses and repeated structure of the E6 and E7 gene products. J MolBiol 1987:193:599-608 **33**

13. Crawford LV, Crawford EM. A comparative study of polyoma and papillomaviruses. Virology 1963:21:258-263.

14. Crum CP, Barber S, Symbula M, et al. Coexpression of the human papillomavirus type 16 E4 and LI open reading frames in early cervical neoplasia. Virology 1990:178:238-246.

15. Crusius K., Auvinen E, Alonso A. Enhancement of EOF- and PMA-mediated MAP kinase activation in cells expressing the human papillomavirus type 16 E5 protein. Oncogene 1997:15:1437-1444. **32**

16. Day PM, Roden RB, Lowy DR, et al. The papillomavirus minor cap-sid protein, L2, induces localization of the major capsid protein, LI, and the viral transcription/replication protein, E2, to PML oncogenic domains. J Virol 1998:72:142-150.

17. DeCaprio JA, Ludlow JW, Figge J, et al. SV40 large tumor antigen forms a specific complex with the product of the retinoblastoma susceptibility gene. Cell 1988:54:275-283.

18. Del Vecchio AM, Romanczuk H, Howley PM, et al. Transient replication of human papillomavirus DNAs. J Virol 1992:66:5949-5958.

19. DeVilliers EM. Human papillomavirus infection in skin cancer. Biomed Pharmacother 1998;52; :26-33

20. DeVilliers EM. Papillomavirus and HPV typing. Clin Dermatol 1997;15:199-206

21. Digene. Детекция ДНК вируса папилломы человека методом Hybrid Capture, буклет 1998.

22. DiMaio D, Guralski D, Schiller JT. Translation of open reading frame E5 of bovine papillomavirus is required for its transforming activity. Proc Nail Acad Sci USA 1986;83:1797-1801.

23. DiMaio D, Lai C-C, Mattoon D. The platelet-derived growth factor b receptor as a target of the bovine papillomavirus E5 protein. Cytoldne Growth Factor Rev 2000;! 1:283-293. ** 27**

24. DiMaio D, Metherall J, Neary K, et al. Nonsense mutation in open reading frame E2 of bovine papillomavirus DNA. J Virol 1986;57:475;80.

25. DiMaio D, Petti L, Hwang E-S. The E5 transforming proteins of the papillomaviruses. Semin Virol 1994:5:369—379.

26. DiMaio D, Settleman J. Bovine papillomavirus mutant temperature defective for transformation, replication and transactivation. EMBO J 1988;7:1197-1204.

27. Dollard SC, Wilson JL, Demeter LM, et al. Production of human papillomavirus and modulation of the infectious program in epithelial raft cultures. Genes Dev 1992;6:1131-1142.

28. Doorbar J, Campbell D, Grand RJA, et al. Identification of the human papillomavirus-la E4 gene products. EMBO J 1986;5:355-362.

29. Doorbar J, Ely S, Sterling J, et al. Specific interaction between HPV-16 E1-E4 and cytokeratins results in collapse of the epithelial cell intermediate filament network. Nature 1991;352:824-827.

30. Doorbar J, Foo C, Coleman N, et al. Characterization of events during the late stages of HPV 16 infection in vivo using high-affinity synthetic Fabsto E4. Virology 1997;238:40-52.

31. Dowhanick J J, McBride AA, Howley PM. Suppression of cellular proliferation by the papillomavirus E2 protein. J Virol 1995,69: 7791-7799.

32. Dvoretzky I, Shober R, Chattopadhyay SK, et al. A quantitative in vitro focus assay for bovine papilloma virus. Virology 1980,103:369-375.

33. Dyson N, Howley PM, Munger K, et al. The human papillomavirus-16 E7 oncoprotein is able to bind the retinoblastoma gene product. Science 1989;243:934-937.

34. El-Diery WS, Tokino T, Velculescu VE, et al. WAF1, a potential mediator ofp53 tumor suppression. Cell 1993 ;75:817-825.

35. ENZO набор для детекции папилломавирусов методом in situ гибридизации PathoGene HPV. Инструкция. 2000.

36. Favre M, Breitburd F, Croissant O, et al. Structural polypeptides of rabbit, bovine, and human papilloma viruses. J Virol 1975;15:1239-1247.

37. Flores ER, Lambert PF. Evidence for a switch in the mode of human papillomavirus DNA replication during the viral life cycle. J Virol. 1997;71:7167-7179.

38. Herrero R, Hildesheim A, Bratti C, et al. Population-based study of human papillomavirus infection and cervical neoplasia in rural Costa Rica. J Natl Cancer Inst 2000:92:464-474.

39. Hippelainen Ml, Hippelainen M, Saarikoski S, et al. Clinical course and prognostic factors of human papillomavirus infections in men.Sex Transm Dis 1994;21:272-279.

40. Ho GY, Burk RD, Klein S, et al. Persistent genital human papillomavirus infection as a risk factor for persistent cervical dysplasia see Comments., J Nati Cancer Inst 1995;87:1365-1371.

41. Howley P.M., Lowy D.R. Papillomaviruses and Their Replication. Field's Virology. 2001. Vol 2, Chapter 65. 2197-2228

42. Hybaid. A thermo BioAnalisis System. Percin Elmer Corporation. Руководство по проведению ПЦР анализа. 1995. p 1-72.

43. Jareborg N, Alderborn A, Burnett S. Identification and genetic definition of a bovine papillomavirus type 1 E7 protein and absence of a low-copy-number phenotype exhibited by E5, E6, or E7 viral mutants. J Virol 1992;66:4957-4965 **54**

44. Jewers RJ, Hildebrandt P, Ludlow JW, et al. Regions of human papillomavirus type 16 E7 oncoprotein required for immortalization of human keratinocytes. J Virol 1992;66:1329-1335.

45. Jives I, Kivi S, Ustav M. Long-term episomal maintenance of bovine papillomavirus type 1 plasmids is determined by attachment to host chromosomes, which is mediated by the viral E2 protein and its binding sites. J Virol 1999;73:4404-4412.

46. Jones DL, Alani RM, Miinger K. The human papillomavirus E7 oncoprotein can uncouple cellular differentiation and proliferation in human keratinocytes by abrogating p21waf-mediated inhibition of cdk2. Genes Dev. 1997,11:2101-2111.

47. Joyce JG, Tung JS, Przysiecki CT, et al. The LI major capsid protein of human papillomavirus type 11 recombinant virus-like particles interacts with heparin and cell-surface glycosaminoglycans on human keratinocytes. J Biol Chem 1999;274:5810-5822

48. Kanda T, Watanabe S.Yoshiike K. Immortalization of primary rat cells by human papillomavirus type 16 subgenomic DNA fragments controlled by the SV40 promoter. Virology 1988;165:321-325.

49. Kastan MB, Zhan Q, El Deiry W-S, et al. A mammalian cell cycle checkpoint pathway utilizing p53 and GADD 45 is defective in ataxia-telangiectasia. Cell 1992;71:587-597.

50. Kaur P, McDougall JK. Characterization of primary human ker-atinocytes transformed by human papillomavirus type 18. J Virol 1988;62:1917-1924.

51. Kennedy 1M, Haddow JK, Clements JB. A negative regulatory element in the human papillomavirus type 16 genome acts at the level of late mRNA stability. J Virol 1991;65:2093-2097 **55**

52. Kern SE, Pietenpol JA, Thiagalingam S, et al. Oncogenic forms of p53 inhibit p53-regulated gene expression. Science 1992,256:827-830.

53. KessisTD, Slebos RJ, Nelson WG, et al. Human papillomavirus 16 E6 expression disrupts the p53-mediated cellular response to DNA damage. Proc NatlAcadSci USA 1993,90:3988-3992.

54. Kirnbauer R, Booy F, Cheng N, et al. Papillomavirus LI major capsid protein self-assembles into virus-like particles that are highly immunogeme. Proc NatlAcadSci USA 1992.89:12180-12184.

55. Mellin H, Friesland S, Lewensohn R, et al. Human papillomavirus (HPV) DNA in tonsillar cancer: Clinical correlates, risk of relapse, and survival. IntJ Cancer2000:89:300-304.

56. Migaschi T. and Reed J. Cell, 1995;80,293-299.

57. Mounts P, Shah KV Respiratory papillomatosis; Etiological relation to genital tract papillomavimses. Prog Med Virol 1984;29:90-114.

58. Offord E., and Beard P., Papillomaviruses. J. Virol., 1990;64;4792-4798

59. Pan. H., Griep A., Genes. Dev., 1995; 9;2157-2169

60. Pfister H, Gissman L, zur Hausen H. Partial characterization of proteins of human papilloma viruses (HPV) 1-3. Virology 1977:83:131-137

61. Pirisi L, Yasumoto S, Feller M, et al. Transformation of human fibroblasts and keratinocytes with human papillomavirus type 16 DNA. J Virol 1987;61:1061-1066.

62. Putenvettil J., Frederickson S., and Reznikoff, C. Oncogene, 13:1123-1131

63. Rabson MS, Yee C, YangY-C, et al. Bovine papillomavirus type 1 3' early region transformation and plasmid maintenance functions. J Virol. 1986;60:626-634.

64. Romanczuk H.Thierry F, Howley PM. Mutational analysis ofcis-ele-ments involved in E2 modulation of human papillomavirus type 16 P97 and type 18 PI 05 promoters. J Virol 1990;64:2849-2859.

65. Rose RC, Bonnez W, Reichman RC, et al. Expression of human papillomavirus type 11 LI protein in insect cells: in vivo and in vitro assembly of virus like particles. J Virol 1993;67:1936-1944.

66. Sano T. Sakurai S. Detection of HPV's 6 and 11 for want of bladder cancer. Pathol Inf. 1997

67. Sato H, Furuno A, Yoshiike K. Expression of human papillomavirus type 16 E7 gene induces DNA synthesis of rat 3Y1 cells. Virology 1989;168:195-199.

68. Scheffner M, Huibregtse JM, Vierstra RD, et al. The HPV-16 E6 and E6-AP complex functions as a ubiquitin-protein ligase in the ubiquintination of p53. Cell 1993;75:495-505.

69. Scheffner M, Munger K, Byrne JC, et al. The state of the p53 and retinoblastoma genes in human cervical carcinoma cell lines. Proc NatlAcad Sci USA 1991;88:5523-5527.

70. Scheffner M, Werness BA, Huibregtse JM, et al. The E6 oncoprotein encoded by human papillomavirus types 16 and 18 promotes the degradation ofp53. Cell 1990;63:1129-1136.

71. Schiller JT, Vass WC, Lowy DR. Identification of a second transforming region in bovine papillomavirus DNA. Proc NatlAcad Sci U SA 1984;81:7880-7884.

72. Schiller JT, Vass WC, Vousden K.H, et al. The E5 open reading frame of bovine papillomavirus type 1 encodes a transforming gene. J Virol 1986,57:1-678. screen for cervicalcancer. JAMA 2000,284:39-40.

73. Seo Y, Muller F, Lusky M, et al. Bovine papilloma virus (BPV)-encoded El protein contains multiple activities required for BPV DNA replication. Proc NatlAcad Sci USA 1993:90:702-706

74. Seo Y-S, Muller F, Lusky M, et al. Bovine papillomavirus (BPV)-encoded E2 protein enhances binding of E 1 protein to the BPV replication origin. Proc NaflAcadSci USA 1993:90:2865-2869

75. Shamanin V, zur Hausen H, Lavergne D, et al. Human papillomavirus infections in nonmelanoma skin cancers from renal transplant recipients and nonimmunosuppressed patients see Comments., J Natl Cancer Inst 1996.88:802-811.

76. Sheer C. Science 1996, 274, 1672-1677

77. Shope RE, Hurst EV. Infectious papillomatosis of rabbits. J Exp Med. 1933;58;607-624

78. Simoneau M, LaRue H, Fradet Y. Low frequency of human papillomavirus infection in initial papillary bladder tumors. Urol Res. 1999;27:180-184.

79. Skiadopoulos MH, McBride AA. Bovine papillomavirus type 1 genomes and the E2 transactivator protein are closely associated with mitotic chromatin. J Virol 1998:72:2079-2088.

80. Smotkin D, Wettstein FO. Transcription of human papillomavirus type 16 early genes in cervical cancer and a cervical cancer derived cell line and identification of the E7 protein. Proc Nati Acad Sci USA 1986:83:46804684.

81. Swygart C. J. Biomed. sci. 1997, vol 12 n.54 **101**

82. Tsao S., Мок S. Fey E. Exp Cell. Res.:218,449-507

83. Weiss, R. Viruses and Human cancer. BioSci. Publ., London, pp1-17. 1999

84. WHO Official Press Release. # 9 .1996. from Clinical release, www.medscape.com.

85. WHO Official Press Release. 1975-95. from Clinical release, www.medscape.com.

86. Wright TC Jr, Kuhn L, Denny L. Human papillomavirus detectiol;,

87. Wright TC, Kurman RJ, Ferenczy A. Precancerous lesions of cervix. In: Kurman RJ, ed. Blaustein's pathology of the female tract. New York: Springer-Verlag, 1994:229-277.

88. Zwerschke W, Jansen-Durr P. Cell transformation by the E7 oncoprotein of human papillomavirus type 16: Interactions with nuclear and cytoplasmic target proteins. Adv Cancer Res 2000;78:1-29.

89. Андрева Ю.Ю. Клиническая морфология и классификация аденогенного ракак шейки матки. Диссертация на соискание ученой степени мед наук. Москва 2000г. 95.

90. Гистология. Учебник для высших медицинских учебных заведений. М, Мир. 1994. часть 3.

91. Киселев Ф.Л. Вирус-ассоцированные опухоли человека: рак шейки матки и вирусы папиллом. Биохимия. Т 65. вып 1, стр 79-91. 2000.

92. Франк Г.А., Андреева Ю.Ю., Завалишина Л.Э., Петров А.Н. «Аденокарцинома шейки матки»// «Архив патологии»., -т. 61, №5. -стр. 61-65.-1999.