Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Иммунологические и цитологические показатели вакцинированных подсвинков, трансгенных по рилизинг - фактору гормона роста человека

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Костерева, Наталия Владимировна

Введение

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Перспективы биотехнологии.

1.2. Общая характеристика трансгенных по рилизинг-фактору 9 СТГ человека свиней 4 поколения.

1.3. Нейро - гормональная регуляция иммунитета.

1.4. Воздействие стресса на показатели иммунитета.

1.5. Иммунная реактивность свиней. 17 1.5.1 Некоторые особенности иммунной реактивности

1.5.2. Взаимосвязь иммунной реактивности с развитием 18 кроветворно - лимфоидной системы.

1.5.3. Взаимодействие клеток в иммунном ответе.

1.5.4. Особенности противобактериального и противовирусного 22 иммунитета

1.6. Гистологическая картина иммунного ответа в 25 лимфоидных органах.

1.7. Ядрышковый организатор (ЯОР) и его значение.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 32 2.1. Молекулярно-генетический анализ животных на трансгенность и наличие точкозой мутации в гене РУР-1.

2.1.1. Отбор проб и экстракция ДНК из ткани.

2.1.2. Параметры ПЦР-анализа для определения присутствия 34 рекомбинантной генной конструкции в геноме тМТ1-ЬСКР и наличие точковой мутации в гене

2.2 Определение уровня Экспрессии гена гормона роста 35 свиней иммуноферментным анализом.

2.3 Приготовление сыворотки для исследований 35 2.4. Определение неспецифических и специфических факторов защиты организма.

2.4.1. Исследование уровня им^укоглобулинов О и М.

2.4.2. Определение уровней лнзоцимной и бактерицидной 36 активности.

2.4.3. Определение уровня антител к возбудителям бактериальных и виру болезней.

2.4.4. Приготовление мазков и подсчет лейкограммы.

2.5. Цитологический анализ подопытных групп.

2.5.1. Отбор проб для постановки культур клеток 37 периферической крови и тканей.

2.5.2. Постановка клеточной культуры для получения 38 цитологических препаратов хромосом.

2.5.3. Приготовление цитологических препаратов.

2.5.4. Окрашивание и методика подсчета уровня ЯОР.

2.5.5. Методика морфометрии ядрышек.

2.6. Анализ клеточных культур из тканей.

2.6.1. Приготовление и окрашивание препаратов клеточных 40 культур.

2.6.2. Методика описания ,.нр Оологии культур клеток.

2.7. Гистологический анализ лимфоидных органов.

2.7.1. Взятие проб, фиксация и приготовление гистологических 40 препаратов.

2.7.2. Гистохимическое окрашивание.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Трансгенностьи стрессустойчивость в группах.

3.2. Концентрация гормона роста свиней в подопытных 44 группах.

3.3. Показатели естественной резистентности при вирусной и 46 бактериальной вакцинации.

3.3.1. Уровни иммуноглобулинов С и М, бактерицидной и лизоцимной активности.

3.3.2. Титры антител к возбудителям.

3.3.3. Лейкограммы подог. . .-кивотных.

3.4. Характеристика клеточных культур трансгенного и 53 контрольного подсвинков.

3.5. Характеристика активности ядрышковых организаторов.

3.6. Гистологическая картина иммунной реактивности 62 лимфоидных органа^ .^гюгенного и контрольного подсвинков после иммунизации.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Иммунологические и цитологические показатели вакцинированных подсвинков, трансгенных по рилизинг - фактору гормона роста человека"

Развитие биотехнологии и успешные работы по получению трансгенных животных выдвинули на первый план вопрос о взаимодействии экзогенных конструкций с геномом реципиентов, в том числе с наследственными системами, контролирующими иммунитет.

Изучение данной проблемы представляет несомненный интерес, так как с помощью генной инженерии е.: ловится возможным создание линий трансгенных сельскохозяйственных животных, генетически устойчивых к различного рода заболеваниям (67.117,126,127,136). Ведутся интенсивные работы по получению животных, органы и ткани которых можно будет использовать для ксенотрасплантации человеку (¡3). Одновременно, широко развивается использование трансформированы/, культур клеток в биотехнологии (26,48,59).

Генетические исследования ряда лабораторий мира показали дестабилизирующее действие чужеродных генов на состояние хромосомного аппарата и появление, связанных с этим, генных мутаций (38,119). Возможно, что экзогенная конструкция в резу: ; т^ синтеза чужеродного продукта и мутагенным взаимодействием прямо или опосредованно влияет на состояние иммунной системы трансгенных животных.

Совместными усилиями российских и немецких ученых в ВИЖе были получены свиньи, трансгенные по конструкции тМТ1- ГЮ!^. Рекомбинантная генная конструкция ппМТ1-!1С[ЧР содержит структурную часть рилизинг фактора гена гормона роста человека (ИСКР) и металлотионеиновый промотор 1 мыши (тМТ1). В ряде предыдущих исследований по проблеме "Генноинженерные животные " было начато изучение хозяйственно-полезных, физиолого-биохимических параметров и иммунного статуса этих транс, 1 озиней. Дальнейшее изучение этих животных выдвинуло на первый план необходимость определения у них особенностей гуморального иммунитета и состояния генома в норме и при повышенной иммунной нагрузке.

Наиболее важными показателями, характеризующими естественную резистентность являются бактерицидная, лизоцимная активность сыворотки крови, титр нормальных и поствакцинальных антител, морфологический состав крови, уровень иммуноглобулинов 1д М и ¡д е (54).

Цели и задачи исследований Цель исследований - изучить особенности иммунного статуса и некоторые цито - и гистологические характеристик,, нсгенных по рилизинг - фактору гормона роста человека (mMT1-hGRF) подсвинков до и после вакцинации бактериальными и вирусными вакцинами. Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Протестировать все группы подсвинков на трансгенность по mMT1-hGRF и стрессчувствительность (MHS - тест);

2. Изучить активность иммунной системы у трансгенных и контрольных подсвинков до и после вакцинации;

3. Изучить динамику концентрации эндогенного соматотропина (СТГ) и зависимость титров антител от уровня с",, ^ группах животных (до и после иммунизации вакциной ОКЗ);

4. Изучить активность ядрышковых организаторов (ЯОР) свиней в норме и при повышенной иммунной нагрузке (после иммунизации вакциной с вирусными антигенами);

5. Сравнить морфологию культур клеток внутренних органов и активность ядрышковых организаторов (ЯОР) в этих культурах и крови, полученных от иммунизированных трансгенного и контрольного животных;

6. Провести гистологическое сравнение картины иммунологической реактивности в лимфоидных органах от живо , двух групп и от невакцинированного животного.

Научна,, новизна работы Впервые изучены особенности иммунного статуса, показатели ядрышковых организаторов культур клею, ленных свиней, с интегрированной в геном конструкцией рилизинг - фактора гормона роста человека (hGRF) до и после иммунизации поливалентными бактериальной и вирусной вакцинами, показавшие определенные различия в иммунных и цитологических (ЯОР) характеристиках трансгенных животных от нэтрансгенных до и после иммунизации, а также различие показателей ядрышковых орга.,.,. : торов в различных тканях исследуемых животных.

Практическая значимость работы В результате проведенных • чентов у трансгенных по рилизинг - фактору гормона роста человека подсвинков были определены показатели естественного иммунитета, активность ядрышковых организаторов до и после иммунизации бактериальными и вирусными поливакцинами, дано культурально морфологическое сравнение , п клеток внутренних органов от трансгенного и контрольного животных и активности ядрышковых организаторов в этих культурах, описаны иммунологические изменения в лимфоидных органах после иммунизации животных.

Пологэния, выносимые на защиту Иммунологические особенности и сравнение концентраций эндогенного гормона роста у подсвинков, трансгенных по рилизинг - фактору гормона роста человека до и после иммунизаций вакцинами против бактериальных и вирусных болезней. Уровень активности ядрышковых организаторов (ЯОР) в группах до и после иммунизаци.; вакцине эржащей вирусные антигены. Особенности активности ядрышковых организаторов в клетках внутренних органов трансгенного и контрольного животных после иммунизации вакциной, содержащей вирусные антигены. Гистологическая картина иммунного ответа в лимфоидных органах трансгенного и контрольного ■ ь:х после иммунизации вакциной, содержащей вирусные антигены.

Апробация работы

Материалы диссертации были представлены на заседании отдела биотехнологии ВИЖа и научной конференции ВИЖз «Достижения молодых ученых в области животноводства» (. онь 2000г. ; . . лериалам диссертации опубликовано 2 статьи.

Структура л объем работы Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, обсуждения .-•.ных результатов, выводов, практических

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Костерева, Наталия Владимировна

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что иммунная реактивность и цитологические показатели трансгенных животных на бактериальные и вирусные антигены отличаются от аналогичных показателей контрольных.

2.Титр антител к бактериальным антигенам у трансгенных животных во все периоды эксперимента были выше по сравнению с контролем. До иммунизации разница между группами по титру антител к Proteus составила 30%; к Salmonella -35,4% (р>0,01); к Klebsiella - 46,3% (р>0,05); к E.Coli - 21,2%; через 14 дней после иммунизации разница соответственно составила: 57,2% (р>0,01); 45,5% (р>0,05); 50,6% (р>0,05); 49,4% (р>0,05). К концу эксперимента титр антител у трансгенных . животных, также как в контроле снизился, но все еще превосходил первоначальный уровень: разница между группами оставалась на уровне 49,4% (р>0,05); 43,7%; 41,6% (р>0,01); 49% (р>0,01), соответственно.

3. Исследования по иммунизации групп подсвинков поливалентной бактериальной вакциной показали, что бактерицидная активность сыворотки крови, а также уровни иммуноглобулинов G и М у трансгенных по рилизинг - фактору гормона роста человека и контрольных животных несколько снизились к концу эксперимента, тогда как лизоцимная активность заметно возрастала на 14 день после иммунизации, особенно у трансгенных подсвинков (разница между группами составила 15,6%), к 30 дню после иммунизации, как и другие показатели, снизилась практически до первоначального уровня.

4.Исследования по иммунизации вакциной, содержащей вирусные антигены показали, что бактерицидная активность сыворотки крови трансгенных животных через 30 дней после иммунизации снизилась в 3,2 раза при 1,5 - кратном снижении в контроле, титр антител ко всем антигенам вакцины в этот период возрос в обеих группах. При этом отмечена определенная специфика: у трансгенных он был выше -к вирусу болезни Тешена и возбудителю лептоспироза, соответственно на 11,1 и 33,3%, а у контрольных выше - к вирусу болезни Ауески и парвовирусу, соответственно на 29,3 и 20,6%. б.Трансгенные подсвинки имели более высокий уровень эндогенного гормона роста (СТГ) по сравнению с контролем: до иммунизации разница между группами составила 26,2%; через 14 дней после иммунизации - 45,3% (р>0,01); в конце опыта -49,6% (р>0,01).

6. Анализ зависимости между уровнем СТГ и титром антител показал, что в группе трансгенных животных выявлена определенная связь между изучаемыми признаками по всем антигенам вакцины: отрицательная - до вакцинации и в конце эксперимента; положительная - на 14 день после иммунизации, тогда как в контроле такой закономерности не наблюдалось.

7. Активность ядрышковых организаторов (ЯОР) в культурах лимфоцитов трансгенных подсвинков после иммунизации вакциной, содержащей вирусные антигены оставалась стабильной в течение всего периода эксперимента, тогда как в контроле наблюдалось снижение активности ЯОР.

8. В отдельных клетках подопытных животных были обнаружены активные ЯОР на 16 хромосоме. При этом частота встречаемости ЯОР - 16 у трансгенных подсвинков до иммунизации была выше, чем в контроле на 71,8%. После иммунизации их количество в клетках у трансгенных подсвинков увеличилось в 2,77 раза , у контрольных - в 4 раза, вместе с тем этот показатель оставался более высоким у трансгенных на 59,4%.

9. Исследование ассоциаций хромосом, несущих ЯОР, в группах показало, что у трансгенных подсвинков они встречались как до, так и после иммунизации, причем их число к концу эксперимента увеличилось незначительно, тогда как в контрольной группе ассоциации появились только после иммунизации, их частота составила -5,92% и была значительно выше, чем у трансгенных: разница между группами была на уровне 78%.

10. Наиболее высокая активность ядрышковых организаторов наблюдалась в культурах клеток внутренних органов (особенно в клетках почки) как в опыте, так и в контроле. В культуре клеток почки трансгенного животного было обнаруженс наибольшее количество ЯОР (8 на клетку).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Костерева, Наталия Владимировна, п. Дубровицы, Московской обл.

1. Апбертс Б., Брей Д., Льюис Дж., Рэфф М., Роберте К., Уотсон Дж. /Молекулярная биология клетки. В 3-х т.т.// Москва "Мир", 1994.

2. Аршавский И.А. /Биология периода новорожденности у млекопитающих. В кн.: Биологические основы периода новорожденности.//Москва, Наука, 1968, с.7-16.

3. Анализ генома. Методы.Пер. с англ. Под редакцией К.Дейвиса.// М.: Мир, 1990.

4. Анохин Б.М., Жаков А.Д. /Методические указания по исследованию крови животных.// Воронеж, 1988.б.Бакай A.B. /Кариотипическая изменчивость у крупного рогатого скота и ее использование в селекции.//Автореф. дисс.докт. с.-х.наук.

5. Берман В.М. /Возрастная реактивность в инфекционных процессах. В кн.: Вопросы возрастной реактивности в инфекционных и иммунологических процессах.// Л., Медицина, 1955, с.5-12.

6. Бернет Ф. /Клеточная иммунология.// М. «Мир», 1971

7. Э.Бермант М.В., Гаркави Л.В., Захарова Н.Г. /Регуляция иммунного гомеостаза.// Л., 1983.

8. Бродовская З.И. /Развитие костного мозга у позвоночных животных и человека.// Тр. Всес. съезда анатомов, гистологов и эмбриологов, 1958, т.1, с.404-409.

9. Брондз Б.Д. /Иммунологическое распознавание и реакции клеточного иммунитета.//Успехи современной биологии, 1972, т.73, вып.1, с.42-58.

10. Бузлама B.C. /Общая резистентность животных при стрессе и ее регуляция адаптогенами.//Доклады РАСХН, 1996, №1, с.36-38.

11. Вишневская С.С., Всеволодов Э.Б. /Индивидуальная изменчивость и наследование числа и размеров ядрышкообразующих районов хромосом у домашних свиней.// Генетика, 1986, т.22, №4.

12. Геллер J1.И. /Физиология и патология селезенки.// М.: Медицина, 1964.

13. Герберт У.Д. /Ветеринарная иммунология.//М.: Колос, 1974.

14. Графодатский A.C., Раджабли С.И./ Хромосомы сельскохозяйственных и лабораторных млекопитающих.//Атлас "Наука", Новосибирск, 1988,с. 15-16.

15. Гольдман И.Л., Кадулин С.Г., Букаров Н.Г., Гнучев Н.В. /Ксенотрансплантация свинья человек.// Биотехнология, 1998, №2, с.3-17.

16. Гурвич Г.А., Шумакова Г.В. /L'action immunologique des organs lymphoides et les principes généraux de l'immanogenese.// Rev. Immunol., 1960, v.24,№4.

17. Дозорцев Д.И., Сорокин A.B., Курышев В.Ю., Перевозчиков А.П. и др. /Трансгенные кролики как модель некоторых форм атеросклероза.// Тез. Докл. Всесоюзн. Конф.: "Новые направления биотехнологии", Пущино, 1990.

18. Доклад научной группы ВОЗ №448. Факторы, регулирующие иммунный ответ.// Женева, 1971.

19. Дыбан А.П., Северова Е.Л., Нониашвили Е.М./ Цитологическое исследование аргентофильных ядрышкообразующих районов метафазных хромосом у партеногенетических зародышей мышей.//Онтогенез, 1991, т. 22, №5.

20. Дыбан А.П., Городецкий С.И. /Трансгенные млекопитающие: изучение фенотипических эффектов гена гормона роста человека, интродуцированного животным.//Биотехнология, 1987, т.З, с.352-357.

21. Дьяконов Л.П., Поздняков A.A./ Исследования по совершенствованию методов культивирования клеток из тканей животного происхождения.//Труды ВИЭВ, 1978.

22. Дьяконов Л.П., Глухов В.Ф., Поздняков A.A. и др./ Культура клеток и тканей животных.// Учебно-методическое пособие, 1980.

23. Дьяконов Л.П. /Гибридные и генетически трансформированные культуры клеток в биотехнологии и ветеринарной медицине.// Сельскохозяйственная биология, 1994, №4.

24. Емельяненко П.А. /Методические указания по тестированию факторов естественной резистентности.//Москва, 1980.

25. Жаков М.С., Карпуть И.М., Вель Л.П. /Особенности иммуноморфологических реакций при вирусных и бактериальных заболеваниях свиней.// Тр. 5 Всес. конфер. по патанотомии с.х. жив-х., 1973, с.265-266.

26. Захаров А.Ф., Бенюш В.А., Кулешов Н.П. /Хромосомы человека. Атлас.// М.: Медицина, 1982.

27. ЗО.Здродовский П.Ф. /Современное состояние экспериментальной иммунологии и ее ближайшие задачи.// Москва, 1956.31.3дродовский П.Ф., Гурвич Г.А. /Физиологические основы иммуногенеза и его регуляция.//Москва: Медицина, 1972.

28. Зиновьева H.A., Попов А.Н., Эрнст J1.К. и др. /Методические рекомендации по использованию метода полимеразной цепной реакции в животноводстве.// Дубровицы, 1998.

29. Иммунология. В 3-х т.т.Пер. с англ. Под редакцией У.Пола// М: Мир, 1987-88.

30. Карпуть И.М. /Возрастная реактивность кроветворно лимфоидных органов у вакцинированных и больных паратифом поросят и влияние на нее антибиотиков.// Тр. 5 Всесоюз. Конф. по патологической анатомии с/хжив., 1973, с.268-271.

31. Карпуть И.М. /Динамика Т и В - лимфоцитов у свиней в онтогенезе.// Ветеринария, 1977, №4.

32. Карпуть И.М. /Кроветворение и иммунологическая реактивность у свиней.// Ветеринария, 1975, №2.

33. Квиткин Ю.П., Федорченко Н.Г., Кривцов И.Л. /Стресс сельскохозяйственной птицы.//Москва, 1977.

34. Кленовицкий П.М. /Влияние генетических и средовых факторов на кариотип и распространенность хромосомных аномалий у сельскохозяйственных животных.// Автореф.дисс.докт.биолог.наук, 1997.

35. ЗЭ.Кленовицкий П.М., Завада А.Н., Живалев И.К., Некрасов A.A./ Ядрышкообразующие районы у трансгенных свиней (mT1-hGRF)// В кн.: Генноинженерные сельскохозяйственные животные. /Сборник научных трудов (Выпуск 1). Москва, 1995.

36. Кленовицкий П.М., Завада А.Н., Живалев И.К. и др. /Полиморфизм ядрышкообразующих районов (ЯОР) у свиней.// Молекулярно генетические маркеры животных, Киев, 1996, с.83-84.

37. Кленовицкий П.М., Моисейкина Л.Г., Живалев И.К. /Лабораторный практикум по цитогенетике животных.// Элиста, 1997.

38. Коляков Я.Е. /Иммунитет животных.// Москва "Колос", 1975.

39. Кондрахин И.П., Курилов Н.В., Малахов А.Г. и др. /Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии. Справочное издание.//Агропромиздат, 1985.

40. Крокер Дж. /Районы ядрышкового организатора и фибриллярные центры.// Молекулярная клиническая диагностика. Методы. Москва "Мир", 1999.

41. Лежава Т.А. /Активность ядрышкообразующих районов хромосом человека в зависимости от возраста.// 1982.

42. Миллер Д., Дукор П. /Биология тимуса.// М.: Мир, 1967.

43. Мусиенко М.И. /Культура клеток трансгенных животных и тестирование физиологически активных веществ (соматотропин, интерферон) иммуноферментным анализом.//Кандидатская диссертация, 1992.

44. Мусиенко М.И., Макаревич A.B., Эрнст Л.К., Гольдман И.Л., Дьяконов Л.П., Стрельченко Н.С., Смирнов O.K., Матвеев В.А. /Культура клеток из ткани легкого трансгенного кролика продуцент гормона роста крупного рогатого скота.// Доклады ВАСХНИЛ, 1991, №1.

45. Носсел Г. /Антитела и иммунитет.// М.: Медицина, 1973.

46. Основы цитогенетики человека. Под общей редакцией Прокофьевой Бельговской A.A.// М.: Медицина, 1969.

47. Петров Р.В. /Иммунология и иммуногенетика.// М.: Медицина, 1976.

48. Петров Р.В. /Иммунология.// М.: Медицина, 1978.

49. Плященко С.И., Сидоров В.Т. /Воздействие стрессовых факторов на здоровье и продуктивность сельскохозяйственных животных.// Минск, 1981.

50. Плященко С.И., Сидоров В.Т. /Естественная резистентность организма животных.//Л.: Колос, Ленинградское отделение, 1979.

51. Прокофьева Бельговская A.A. /Природа ассоциации акроцентрических хромосом человека.// Цитология, 1966, т.8, №2.

52. Радченков В.П., Бутров Е.В., Матвеев В.А. /Определение гормонов в крови молодняка крупного рогатого скота и его гормональный статус: Методические указания.//Боровск, 1980.

53. Роскин Г.И. /Микроскопическая техника.// Москва, 1946.

54. Ромейс Б./Микроскопическая техника.// Москва изд. Иностранной литературы, 1953.

55. Савченкова И.П. /Создание модельных систем культур клеток млекопитающих для решения проблем биологии и биотехнологии.// 1997.

56. Сапин М.Р., Юрина Н.Ф., Этингер Л.Е. /Лимфатический узел.// М.: Медицина, 1978.61 .Симонян Г.А., Хисамутдинов Ф.Ф. / Ветеринарная гематология.// Москва, Колос, 1995.

57. Сиротинин H.H. /Реактивность и резистентность организма. Многотомное руководство по патологической физиологии.// Москва, Медицина, 1966, т.1.

58. Смирнов O.K., Гольдман И.Л., Живалев И.К. и др. /методические рекомендации по цитогенетическому исследованию сельскохозяйственных животных.// Дубровицы, 1986.

59. Смородинцев A.A., Лузьянина Т.Я., Смородинцев A.A. /Основы противовирусного иммунитета.//М.: Медицина, 1975.

60. Стефанова В.Н. /Изучение районов ядрышковых организаторов в лимфоцитах свиней.// Бюлл. ВНИИРГЖ В.51. - Л. -1981, с.3-7.

61. Стефанова В.Н. /Количественная характеристика ядрышкообразующих районов хромосом свиней.// Бюлл. ВНИИРГЖ. В.67. - Л. - 1983, с.6-10.

62. Сураева Н.М. /Получение трансгенных кроликов с встроенными генами соматотропина и антисмысловой РНК против аденовируса.// 1989.

63. Сюрин В.Н., Белоусова Р.В., Фомина Н.В. /Справочник. Диагностика вирусных болезней животных.// Москва, ВО Агропромиздат, 1991.

64. Техвер Ю.Т. /Гистология сердечно сосудистой системы и кроветворных органов домашних животных.// Тарту, 1970.

65. Устинов Д.А. / Стресс факторы в промышленном животноводстве.// Москва, Россельхозиздат, 1976.

66. Учитель И.Я. /Макрофаги в иммунитете.// М.: Медицина, 1978.

67. Учитель И.Я., Хасман Э.Л. /Влияние веществ катаболического и анаболического действия на образование антител. В кн.: Вопросы инфекционной патологии и иммунологии.//Москва, 1968, №4.

68. Учитель И.Я., Хасман Э.Л. /Интенсивность синтеза специфических и неспецифических белков в организме на различных этапах иммуногенеза. В кн.: Вопросы инфекционной патологии и иммунологии.//Москва, 1965, №3.

69. Фаворская Ю.Н., Крымский Л.Д., Нестойко Г.В. /Поверхностная структура макрофагов и лимфоцитов при их взаимодействиях.// Архив патологии, 1975, №8, с.33-39.

70. Федоров А.И., Жаков М.С., Карпуть И.М. /Особенности иммуноморфологических реакций при некоторых инфекционных болезнях животных.//Сб. работ Ленингр. вет. Института, 1973, т.34, с. 153-160.

71. Федоров H.A., Суханов Ю.С., А.Мобархан А.Х., Артемьев М.И. /Полимеразная цепная реакция (ПЦР). Методическое пособие для начинающих.//1996.

72. Фитко Р. /Вопросы стресса и адаптации у животных: Новости фармации и медицины.// Варшава: Агполь, 1976, т. 10, с.42-52.

73. Флоренсов В.А. /Кроветворная функция лимфатических узлов в онтогенезе и эволюции позвоночных.//Архив анатомии, гистологии и эмбриологии, 1966, №9, с.48-60.

74. Фонталин Л.Н. /Иммунологическая реактивность лимфоидных органов иклеток.//M.: Медицина, 1967.

75. Фриденштейн А.Я., Чертков И.Л. /Клеточные основы иммунитета.// М.: Медицина, 1969.

76. Хрущев Н.Г. /Современные экспериментальные данные о происхождении клеток соединительной ткани.//Архив патологии, 1973, №4, с.7-14.

77. Хэм А., Кормак Д. /Гистология В 5-ти т.т.// М: Мир, 1983.

78. Чертков И.Л., Фриденштейн А.Я. /Клеточные основы кроветворения.// М.: Медицина, 1977.

79. Ширшев C.B. /Роль гормонально цитокиновых взаимодействий в формировании гуморального иммунного ответа.// Проблемы эндокринологии, 1995, т.41.

80. Эрнст Л.К. /Современные проблемы генной инженерии и перспективы селекции сельскохозяйственных животных.//Сельскохозяйственная биология, 1994, №4.

81. Эрнст Л.К., Гольдман И.Л., Семенова В.А. и др./ Фенотипический эффект трансгенности по гену гормона роста крупного рогатого скота у кролика.// Доклады ВАСХНИЛ, 1990, №6.

82. Эрнст Л.К., Кузин Б.А., Ениколопов Г.Н. и др. /Перенос гена поверхностного антигена вируса гепатита В человека в зиготу свиньи и исследование тканеспецифичности его экспрессии.//Доклады ВАСХНИЛ, 1990, №9.

83. Allison A.C. /Ineraction of Т and В - lymphocytes and macrophages in recovery from virus infections.// Proc.Roy.Soc.Med., 1973, v.66, №12, p.1151-1154.

84. Archibald A.L., McClenaghan M., Hornsey V., Simons J.P., Clark A.J. /High level expression of biologically activ human .- antitripsin in the milk of transgenic mice.// Proc. Natl. Acad. Sei., 1990, v.87, p.5178-5182.

85. Arrenbrechts, Sorkin/ Growth hormone induced T - cell differentiation.// Eur.J.Immunology , 1973, v.3,№9, p.601-604.

86. Binns R.M. /Cellular immunology in the pig.// Proc. Roy. Soc. Med., 1963, v.66, №12, p.1155-1160.

87. Beerman W. /Nuclear differentiation and functional morphology of chromosomes.// Gold Spring Harbor Symp. guant biol., 1956.

88. Bosma A.A., de Haan N.A., Mellink C.H. /Ribosomal RNA genes located on chromosom 16 of the domestic pig.// Cytogenetic and Cell Genetic., 1991, v.58, № 3-4, p.2124.

89. Brem G. /Transgenic animals.// Biotechnology, 1993, v.2, p.745-832.

90. Bunler Th.A., Bruyere Th., Went D.F., Stranzinger G., Burki K. /Rabbit B casein promoter directs secretion of human interleukin - 2 to the milk of transgenic rabbit.//, Biotechnology, 1990, v.8, p.140-143.

91. Busch H., Smetana K. /The nucleolus.// New York, Academic Press, 1970.

92. Cannon P. /Protein metabolism and acquired immunity.// J. Am. Diet.,1944, v.20.

93. Cantor H., Simpson E. /Regulation of the immune response by subclasses T -lymphocytes.//Europ.J. Immunol., 1975, v.5, №4, p.330-336.

94. Clever J.F. /The effect of acdysone on gene activity pattern in giant chromosomes. In: Mechanisms of hormone action.// Stuttgart, 1965.

95. Coleman J., Hirashima A., Inokuchi Y., Green P.J., Inoye M. /A novel immune system against bacteriophage infection using complementary RNA (mic RNA).// Nature,1985, v. 315, p. 601-603.

96. Cooper M.D., Peterson R.D.A., Good R.A. /Delineation of the thymus and bursal lymphoid systems in the chicken.// Nuture, 1965, v.205, p. 143.

97. Costantini F., Radoce G., Lee G. /Insertional mutations in transgenic mice.// Progr.Nucl.Acid Res. and Mol.Biol. San Diego, 1989, v.36, p.159-169.

98. Duquesnoy R., Mariani T., Good R. /Effect of hypophysectomy on immunological recovery after sublethal irradiation of adult rats.// Proc. Soc. Exp. Biol., 1969, v. 131, №4, p. 1176.

99. Gahmberg N., Pajunen L., De La Chapelle A. /NOR activity in two families with balanced D;D translocations and numerous consecutive miscarriages.// Hereditas, 1980, v.92, p.217-221.

100. Good R.A. et al. /The role of the thimus in development of immunologic capacity in rabbits and mice.//Exp. Med., 1962, v.116, №5, p.773-781.

101. Grumet F.C., McDevitt H.O./Nature of the represponding organism.// Contemp.Topics Immunobiol., 1973, v.2, p.63-76.

102. Hammer R.E., Brinster R.L., Rosenfeld M.G., Evans R.M., Mayo K.E. /Expression of human growth releasing factor in transgenic mice.// Nature, 1985, v.315.

103. Hammer R.E., Pursel V.G., Rexroad C.E., Wall R.J., Bolt D., Ebert K.M., Palmiter R.D., Brinster R. /Production of transgenic rabbits, sheep and pigs by microinjection.// Nature, 1985, v.315.

104. Hammerling G.J., McDevitt H.O. /Antigen binding T and B - lymphocytes.// Immunol., 1974, v.112, №5, p.1726-1733.

105. Jaroskova L et al. /Immunoglobulin determinants on lymphocytes in germfree piglets.// Eur. J. Immunol., 1973, v.3,№12, p.818-824.

106. Kalden J., Evans M., Irvine W. /The effect of hypophysectomy on the immune response.// Immunology, 1970, v.18, №5.

107. Karlson P. /Mechanisms of hormone action.// Stuttgart, N.Y., 1965.

108. Kawasaki E.S. /Sample preparation from blood, cell and other fluids.// In: Innis M.A., Gelfand D.H., Sninsky J.J., White T.J. PCR protocols, a guide to methods and applications. Academic press. - San Diego, N.-Y., 1990, h. 146-152.

109. Linderman J. /Inheritance of resistance to influenza virus in mice.// Proc.Soc.Exp.Biol.Med., 1964, v.116, p.506-509.

110. Magram J., Chada K., Costantini F. /Developmental regulation of a cloned adult B -globin gene in transgenic mice.// Nature, 1985, v.315.

111. Mahon K.A., Overbeek P.A., Westphal H./ Prenatal letality in a transgenic mouse line is the result of achrosomal translocation.// Proc. Nat. Acad. Sci USA, 1988, v.85, p.1165-1168.

112. Mac Manus J.P., Whitfield J.F./Mediation of the mitogenic action of growth hormone by adenosine 3"5" mono phosphate (cyclic AMP).// Proc. Soc.Exp.Biol.Med., 1969, v.132, №3, p.409-412.

113. Manchini G. /Immunochemical quantitation of antigens by single redial immunodiffusion.// Immunochemistry, 1965, v.2 , p.235-254.

114. Mc Millan R. et al. /Immunoglobulin synthesis by human lymphoid tissues.// Immunolog., 1972, v.109, №6, p.1386-1394.

115. Mellink C.H.M., Bosma A.A., de Haan N.A. et al. /Distribution of rRNA genes in breeds of domestic pig studied by non radioactive in sity hybridization and selective silver-staining.//Genet. Select. Evol., 1991, v.23, №1, p.168-172.

116. Miller J.F. /Immunological function of the thymus.//Lanset, 1961, №11, p.748-749.

117. Muller M. /Molekulargenetische Charakterisierung der porcinen Mx und IGF - I -Gene und functionelle Undersuchung transgener Mx - Schweine.// Diss.med.vet., 1989, München.

118. Muller M., Brem G./Disease resistance of farm animals.// Experiential 991, v.47,p.923-934.

119. Schwarzacher H.G., Wachtier F. /Nucleolus organizer regions and nucleoli: citological findings.// Chromosomes today, 1987, v.9, p.252-260.

120. Selye H. /General adaptation syndrome.// Montreal, 1950.

121. Staeheli N C., Haller O., Boll W., Lindemann J., Weissmann C. /Mx protein: Constitutive expression on 3T3 cells transformed with cloned Mx cDNA confers selective resistance to influenza virus.//Cell, 1986, v.44, p.147-158.

122. Taussing M.J. /T cell factor which can replace T cells in vivo.// Nature, 1974, v.248, №5445, p.234-236.

123. Tikchonenko T.I. /Antisensing polinycleotids and possibility their use for resistance against viruses.// Molecular Biology (Russia), 1989, v.23 (3), p.629-638.

124. Watchtler F., Schwarzacher /Nucleolus organizer regions and nucleoli: cytological findings.//Chromosomes today, 1987, v.9, p.252-260.

125. Weidle U.H., Lenz H., Drem G. /Genes encoding a mouse monoclonal antibody are expressed in transgenic mice, rabbit and pigs.// Gene, 1991, v.98, p. 185-191.

126. White A. /Nature and biological activities of thymus hormones.// Ann.N.Y.Acad.Sei., 1975, v.249, p.523-530.