Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Иммуногенетическое исследование неидентифицированных Н-2 гаплоидов мыши

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Иммуногенетическое исследование неидентифицированных Н-2 гаплоидов мыши"

О,

АКАДЕМИЯ МКЗМ'НОТЯ НАУК СССР НЛГШО -Иа’ЛКЖ-ВАТКЛЪОКЛЯ ЛАРПГАТОПМ ЭКСШИШГГАЛШП РИОЛОГГКСНИХ МОДЕЛЕЙ

чв_ правах рукописи уди 57ь.6(6.0/7.1 «мл ст

ГАТЪКИН Александр Эдучрдоиич

ИМиЭТЮШ1ЕГГИ'ДХ:КОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ МЖЗЭТЗДЮШтАМШ Н-2 ГАПЛ^ПЯГ'В *М2ГЛ.

03.00.15. - генетик*

Автореферат

дг'тгертзции на соискание ученой степвна кпшшдвтв Сжхлопгезсхкх наут:

Моския - 1991 тд

^цоота ашюлнена в лаборатории эксдаримвитадьно-Оиологичвских ИОД»Л»в ШІ СССР и в лвоорьтории биомодалкй Институте Молекулярное гаиетшш ('Ыослоьакия).

Научные руководители:

кандидат Мыдицши:ш1 цаук А.и.Шшшанко кандидат мидишнсюи нцук [^.1[Г.І^.'іНдоь5~]

ифициальны«> оппонент и:'

доктор Оиолог»ч*(жмх иаук В.Г.Митрофанов кандидат Оиологичэсюи наук Л.С.Аят

Ьодуцае учр&ждение -Вовоошкий СжкодогмчвокиЯ Иьучкив ЦмНГр, НИИ Канцерогенезе

совета Д.002 иь 01 при шь'титугд Биологии Развития км.Н.К. Кольвдьа АН СССР по адресу:П7806, Ыойкьа, ул. Вавилова 26.

С дисс^ртицией чокаю оанакоынгьоя ь бяояиотеке НИЛЭШ АЫН ОССК і /1

Учаїшй с«кр«тцрь ашциадизироьишюги ооьети кандидат оиилигичиских ииук

Е.М.Протопопова

Акп-влыюсть проблема. Кзвэстко, что иммуншй статус сргшш- • М3 спрвдчлпетсг. рядом Г«К9ТИ>«?.СЮ!Х структур, иодущзо МО 010 С{'0Д« которых закачает основной комплекс гисгосовмеотимости. Ицоррио ооновкея система генов, стттотээикчя за шмунологачвсмий ототуо сргогашма и обозначенная как соноятгоЛ комплекс гиотооовмыотимоо-ти н-2, быса открыто з 1йЗб года Питером Гэрэром при иеолкдовп-ия проблем трансплантации оаухолэй у ммча <Ссгсг я.л. ,19.*? /. При ДОЛЬНЗЙШМ иоучомм К-2 ОКОЗОЛСЮЧ, ЧТО Г0КН ЭТОГО КМ/|ГЛ*ЭКСП Гшотвувт в определении целого ряда друпи Фушсций оргшшз;.г). грдди которая устойчивость или чуротвиголмость к рнзличмнм чи -{окцпонннм патогошм (Авербах М.М. к др. ,1925: вивсЬлгап е+. г.1., 1988), Формирования фпэиологйчоскнх прилавков к поввдвнч&ских реакций (БЛикг1! вЬ з1., 19;-0; УгтаяаН е* а1., 1980), рлит

мзвитиэ организма (и»1п1ок вЬ в1., 1981,- Еярмтав Р.С.,1?гп<,

гродзоо рэиорацки ДНК (К1Ло ЕИ1п;'г с к а!.. 1933) и т.д. ВМОО'М с ГОЛ;!ф‘уЦКЩГОЧа."ЬКССТЬЮ Г;ЫЛ открыт и нвобичейко жпский полпчор-

УЛПМ ЬТОГО ГвВбТЯЧЭОКСГО ЮМПЛЭКОВ. ,

В 1ШСГСЯЩЭ9 зрздя комплексы, ионтрэлируздие ЯММуНОЛОПЧЯчЧМ!! гсатус оргзиизмо, обнаружены у многих вяж» жпюгдмг: кр^с 51чг1с, Кгы«,19б-?; Ра1т, 5?11впл,1973), ПТКЦ (1Шз э1..197£). викеП (УаЪпэп в к вХ., 1 ?7 3 I, лоишге 'Кр>к1г.еп ,оЬ а1., 1 *>**9 >.

глагензв (ВаХпвг ей а!., 1971) и, что наиболее. важно, у человека иомплоко Н1- А) (Па'лая пЗ . , 1уЬ5} Во11?*зг*, Гчуг,о. 19*эЧ).

Гсотнфрояка структуры и функций комплекса н-а остаотся мету-:ау‘о11 и сегодня, особенно в связи с разработкой и примоИе-тюм эвых колвкулярно-гешэтачвских и гадмунолсппвсках М9ТОДОР. I 'С ий янт^рэз выэмвеет япучошю глваюго ясмплэкоо гнотосончоетп-зсти (ГКГ) мыыи з апологет о ГКГ человека (НЬ-А) (Илрпо.л-к

I а1.,1Э74; Ро,ег?гз,1985; Зкюш.Мв, 1956; Яа^еаи.ИеЛпсг, , эти би уже потону, что кавэстно Селе© 20 гомологичных хуомлгом ^x с9Г.м5Игов у чадювекв п лайэраторшх мвявй <№ми»и, Тау1.->г,

•’81) ,'1“2КТ НТ-Г^ЧИЯ У МИ'ПИ \\ Ч’^ДОБЭК*} Г^У^Л0Г1Г*ККЯ ХрОМО^-Г'М^их эгяепгов ужо геЯчэс позволяет использовать этот объект п 1чс>с1ве гэпвтич9''ка адекаотаой модели болощдай чоловонп. ,

Широкий Фронт иоаподсоаний, сшясвидал о куучоітм(,і «труитурн и функций ТїСГ привел :г созданию Оянка эксшрклонталь'ш': №: •

Ч0ОКИХ МОДОЛ9Й,ТО ЄСТЬ ІШбрвДННХ, конгенно-реаіютентлі'х'і1:!-’: .'ІІЧІІІ, мышей с мутантным или рекомбинантным гаплотішом н-5, котирчи позволяют •иоапедонать ряд фундаментальных прослем р таких об.гшс тях науки как гаазнологая, генетика, кадацвиа и других.

Оовдаияа новых модвл&й о иаолодств'энныкя изменениям II Г, ОПрОДЭЛбНИВ ЗЛЛО’ІЬІіОГО СО*’ТНКй Ц-2 У иПіЗЛИЧіШЛ ИПГіріЗДІМІГ- !ІІЇіПЇ»*» как и контроль гомозиготності! дігаоЗ иыиий являются акгуша.гоши аадачали із овяэи о н&оохадкмостыи дылыюйшего изучения отрукч^р-’цо-функіуюналькой орі'шішзецим Н-6, оспдшшя оолъб иилной, комплексной генетической характеристики линий, макоимадыюЯ сташгір-тиоация леборыторньх кивотнчх.

Задачи исследования. Цольи ' данной работа яи.чяо тс:н

ккмуногвштачэскоб исследование кекденгї!фпи'роЕаіш«х 11-2 Г8П.Л0-іипов мышей. Кошратішо отдачи сшдяюя к:

1. Иоаяэдозами» гомоэиготносот 13 шйрэднык и 12 поцташ» -

• резистошгних линий милой.

2. Изучению нового мутантного гшлотим н-2.

3. Проведению сравнительного анализа новой мутации о другими.

4. Идентификации гаилогшгав н-2 ряда'їжіредінх лини!! мышей. .

На.учная новизна результатов. Ь работе проведено шлмуіюг.ош<;-

тичеоиое лоидэдовани» новой спонтанной мутмуш гена осномюги комплекса гистосгавшотишоти кыш н-г.Разработана гедагкчсскчя и иммунологическая характерногика новой мутации.

Показано, что мутация произошла в н-2кь гене, относится к мутмци ям типа "замэиы”, не идентична и ка ютиплвмантарна с мутациями 1Г-2КЬ Ьш1, Ьшз и Ьт4, в результате мутации изменена ошцнфнчноо гі. н-а.39. При вявлявв мутации применялся новый метод типироваты с моноклональными антителами против специфичностей н-а!). Таким оо-' разом расширен полиморфизм комплекса н-2. .

Установлены, ранее не известные гшиогам н-г пяти шб^днч'. линий мышей. - . ,

■ І'оорвтичеокая и практическая цэннооть работ. ОирсД'-'Льчшо генетической однородности 13 ИЕбреДШХ И Ш КР ЛИНИЙ МЫШОЙ. Ш'-лользувмих в качества биологических ыоделой для модйко -оімппт-

'ШОКИХ, гене ,• ІЙІЛГИК К ИММуНОЛОГИЧЧОКШС иооледований,

гарантией генетической стандартности ятих линий и тлким 'Уі|'а"'тм определяет уровень научшх исследований по всзой строп». 1сш»>г-.панда ронво но ИЗВ90ТІШХ гагогстптоя II-2 пяти |ипбродшіх лиішй позволяет составить более полную, кошлоксиуп гвиотичоСкую ка-ршстзристику этих литій, соответственно общепринятой мпрсЛ’^іІ практики. Кроме того возможно новая интерпретация океппримгчі ' тплншх. дошшх, получению; с их использованном. .

. Известно, что мутштшч гаплотига Н-г кснольсуигсл как длл решения сугубо теоретических проблем иммунологии, ТПП І! ДЛИ ігрпктичаоких аодоч, например при ивуччтши отруїсіурпой oprswmm-tora ГКГ. В результата роботы продстпвлшіа иовпя мсонприн'мип.ныщ;! (Зиологпчоокчп модель - ICP линия о мутантним гпгштшом it ;■ -

B10.RITI-H-abm25 . 1

АпробоЦия роботи. Мотвриплн диссертации доклоянполиоі.:

1. На всесоюзной конференции "Актуалышо вмпроои отпнднрщпипя» лвбороторинх ЖИВОТНЫХ ДЛЯ МОДИКО-ОИОДОІ'ЙЧООКИ* ИООЛиДиРМ ний" (Москва,1938г.}.

2. На XXIV международном симпозиума по гЧплоппг.ским модолим

(Шгпшдлврув Млин, ЧССР,1Э88г.). ■

3. На рабочем совещании "Проблог.ч сог.ртптш и п'-ддорктния гоно-тичоекпх коллекции лабораторних киготннх" Шушиїю.ІЗОТг.).

4. Но 3 всесоюзном съезде медицинских генетикоп - отопдопоч сообщении (Алма-Ата ,1990г.).

Б. Ка всесоюзной конфэрэншш "ЛэСораторндо животные для медика-’, биологических и биотехнологических последоппний" (Москло, 1990г. ).

Структура и объем рзботц. Диссертация состоит на вподчппп. обзора литературы, рэоультптов експоримднтпльннх после до.панпй, обсуждения вкоперимонтвлышх до;пшх, выводов и описка ЛИТОрОТурН.

Материал диооертвции иадояеи на 95 страницах машинописного 1 трко'гп, включает 13 таблиц и 5 рисунков. ,

Список литератур» нвечятняшт 183 наимоноввпгЛ.

' : Материал и метода.

Характеристика иоходаогс? материала. Габотп гштолпопл по ,чч Рорвторни* мышах 23 шк'рощшх и 22 коигаїто-резистептннх ,'ІЇШПІІ ггн V-ч ттЛа!С”^С.,1П1СГО ^С'ІДП Кзу7ЧО~ЛССЛ9ДО1ШТ0ЛЫ’КОН лл^ср^торпп г*fг -гн^ршмнтольно-биологіпгешіих моделей AMI С'ЛСР. Boa дішш tiwn-.p

кивалиоь в конвенцйонвлытх. уоловиях на гранулированном к< >ры.->

ПК-120-3. '

Метод трансжлантации коиіи. Трансплантации ооущостшшлн на половозрелых киеотшх. Кожу парасагивали с хвоста на бок с правой отороны, в области грудной клетки, по общепринятой мотодико ( Billingliam, Ыэdavaj?, 1951 і МвДВЭДвВ Н.Н. , І9Є6 ). ІІ журнале регистрации результатов состоягоіе трансплантатов осюзна -чади по принятой шкале (Бландова и др., I9S3). Наблюдении on состоянием трансплантатов проводили ежедневно в течешю ЙО дней, затем - X раз в неделю до 100-160 дней. Прижившимися очит.члн трансплантата, которые ш отторглись и не полысели в течшшч воего срока наблюдения. .

' Метод иммунизации. Для получения шлионецифичесгщх н-2 зии-сывороток использовали метод иммунизации (Snell, 1953; Иней о і al., 1973). Иммунизацию проводили суспензией клеток c«i<>Duiir.n, тимуса, паховых и подмышечных лимфоузлов линии-донора игугрибрю-шинно ( один донор на 10 рэцшшентов). Животных «а ншушюищш Орали в возраста ш менее 2 месяцев. Введение суспензии ооущоеч -вляли с интервалом н 6-даой, 6 раз до первого забора крови н взятия сиворотки и 4 раза до .второго и последующих взятий. Полученную сыворотку подвергал!! лиофилизации. .

Микролямаишітотоксиче ский те от ■ Микроцитотокспчаскум реакшдо (Ріпоив, cordon, 1971) ставили о использованием питатолыгоЯ среда ниц или 19Э, антисывороток, суспензий лимфоцитов гшш -руемых ливий и активного и не токсичного крэли'гыэго комплемента. Тест отавили иод олоем вазелинового маола в панелях їароояіш. Реакцию оценивали по выделению красителя из клеток. ,Яля іЬїкопнни иополі •'овали 10% раотвор формалина.

В качестве контроля юсиользовали приготовленную еуамк-.и» клеток,' смешанную о питательной орадой ( вместо шдатнп'.'ртеки. как в опытах). Контроль активности сиворстеи проводили в ов рн акциях о'клетками линии-донора. , ,

. Абсорбции аатисивороток для мцкролшфацитотокоичосного тиото проводили in ?itt’0 (Снелл и др., 1979).

Fenmmu. ГбшанжтайЩЩ. Реакції» т«дштл«гтти;т лаіии*

С ПаЛИРІШІШШ[,р>чїГ,':!Г!И (!”,!' І ПО MlM’iv'ty ОтИМН'ЫШШ'П ',".1 Ills’.,

libl).

' Статистическую обработку материала проводили но счЗщ'щгзвоиг-ішм методикам (Шкшшсккй, 1970). ‘

. Результата експериментальних исследований.

Исследование генетической: однородности ІЗ ішбрвдних и 12 КГ. линий мышей (Таблица I) проводили методом траисплпнтошш кожи. У линии ВЮ.А 11 трансплантатов были отторгнута (ІЗ - Я2 дни).Это могло бить визвано мутационным, рекомбинацяшшнм процессом внут ■ ри н~2 или ке генетической контаминашшй. Паоло удаления иу. рчвмножения оублипии, вызвавшей реакции отторкадия, проворна ‘'п-ла повторена ( на Р47 ) - вое трвноплштвти прижились в тачшгта всего срока наблюдения { 23Э дней ). Гомззиротность віс.л -восстановлена. У линии ВЮ.йШ один трансплантат бил отторгнут по техническим причинам ( 7-8 Д9ЯЬ ). У ОСТАЛЬНЫХ ЛИНИЙ ГС" трансплантаты прижились в течение всего срока наблюдения. -Тпічім образом, в рэзультате проделанной работа подтриржданя гомомигот • иооть 13 кнбрэдаих и 12 НР линий машей.

' ' Тв'ІЛЯіІ') 1.

Исследование гсмо?игогаостя линий.

Линия 1 Ипбрэдный вогрчст инорвдннэ Лишл | конгеЯна Инбродний попрет -рэзистэиткнв

і;па,м лэв , В10.1£Э(бК) ,Р7 і , ’.

00577/ КМ! 3)0.83 ' г 54

ЙАІВ/0 Л 46 310. АСИ 719

НРХ Р22 БЮ.А ' ' ї'4-( ' '

І29/.І ДШ.А(ВЯ) " ' У45

МА/<?. Л 41 В10.ВЙУ Ї35

ЛКй ■ лес ■ Б10.Ы F4a

С57І- л 53 ' вю.ва Л»

СЗН/йп Л 21 шо.нш ?'51 -

Ш Ї65 ■ ' ВіО.Іі! . ?г:П

ЗЛ, 731 : СВД-ІЯПІ г V)

Ш ' Р44 Вб-Ьлй ' Г40

С 311А Л 08 ' ■ ' !

_ а _

Новая мутация била обнаружена при восстановлении lvt >л шш конгышооти линия Bio.fliii(7iriS) о инбрэдннм нпртп..‘р и ©7Ы./10 ИЗ коллекции ]ШШ!й МШШЙ НИЛ ЙЮМОДЙЛОЙ АМН IXY.I'. При обсдодованни потомков ВСЗ { бэккросс 3 ) поколения ч-г

скрвщивашш линий С57ВХ./Ю (вю) (н-г*3 ) и вю.ннктш.*;)

(RIIX) (н-2г ) , в опытах с трансплантацией кожи,

оыла обнаружена самка на которой приживались транонлг-штоти от линии ВЮ и отторгались от гетерозиготного донора ь, г. т.е. можно было предположить, что она имеет гашютии Н ?}' . Однако еэ трансплантата отторгались при 'грансшши'гац;;'.! in линию ВЮ. Возможность крооооворного нроиохождоты аномалии 0шт исключена трансплантацией кота ьч ( вю г.

HI1I ) и исоивдуемой оамни ь реципрошюй комбинации: п ооо-их направлениях трансплантаты били отторгнуты. Обнаруженная самка могла бить только мутантом. Поолэ шэсколыии Ойккроо-OOD О ВЮ ДО получения ПОДПОЙ КОШ'ОНИОС'ГИ и иослодумцнх ни ■ теркроооов под контролам трансплантации komi BJQ и оонору жэшюй самки били получены потомки, г.тмозшчэтшт но неизвестной аномалии гиотооошйотшлооти.

Посла обнарукошы новой мутации, как'и в случав с мутациниа Ыя 5 , Ьга 6 , Ь:а а ( Ко!;:;, -

Melvold, 1 974 ) и многими другими, остались не шнгимнннми два кардинальных вопроса: I. Где произошли мутация, и II шм другом Н-генэ?, 2. Если эта мутация Н-Я, то какой и::, гоплотмпов походных линий она витрону-ра?

Для локализации мутации в II-2 используют траисплантацшг) кожи исходной линии на гибридов 14 от скрещивания мутанта о КР-ЛИШШЙ, имеющей отличнуы от исходной гмкшгтаскуы оинову ( Hailey et ai., 1971 )• В атом случае» пршышлошю трансплантатов говорит о мутации в Н-2, т.к. имеат масго к-«лило ментация мутшшки о ганлотипа с нормальным. Если ли', трапе . штнгатц исходной линии отторгается, то еледуот глаоц •• мутации других 11-генов, не входящих к основной комшюкс гаатосошаотимости, поскольку отсутствупт качпг’молтаниа измошшноП ойлипчн <; нормальной. ■ .'

Нчш .. 4tt iujnyiRfia тйрида вншлошюй ыутывш о лишпили (J'iYBk’b и iMll.iW, нпсущш-ш II-S,} гашюгш. Пр.шшиьпнч тропе

плонтатов от лшши BIO но всех, гибридах F1 показало, тго имолв мэсто комплементация ИОМ9Н91ШОГЭ х'онв.Иовтому OUJ! сделан випод, что мутировал комплэко Н-Я. I

Чтобы СПреД9Л!ТЬ ИЗМ9НЭНШЙ МуТЕЦМЙ ГВПЛ0ТШ1 ЙНЛЛ П(?С-тпвлони рвпкция гемагглютинвции о пптисивороткоми г ?р ъ и Ьгаг. Если мутация произошла в гоплотипэ Н-2Г , то оямдп-лзсь реакция агглютинации эритроцитов видэленнсго мутанта о ннтисивороткой b vs г; в случае ке мутации Н-2Ь гашплиил рэвкцию гемогглвтинпции следовало ожидать с антисыппротклй г re Ь. Кпк покадал эксперимент, рэпкция ниблгсдпдвсь о ич-тисыворотксй г vs ь, следовательно измончгешм яиляотся глн-лотип Н-2Ь. .

. Теням образом, провэденннэ эксперимента позволили уст:)- ■ повить, что мутация затронула основной комплекс) люто • совместимости и мутировавшим яатяется гзплотил if-2!) ттт C57BL/10. Оставалось не выяснениям в каком р^Ппно II-?, комплекса проивошла мутация. .

Хотя к настоящему времени структура r.omtji^cn н -2 детально ещэ ш установлена и доволто слояче, большинство исследователей подразделяют глввннй комплекс гиотосопмести-мости ( ГКГ ) ня 3 иля 4 больпиэ области ( Атрбчх и др., 1985; БрондзБ.Д., 1997 ). Извостяо, что больтанетго мутаций H-Z локализована в Н-2К области ( Klein »t ai.,

1 ?Bj; Egorov O.E., Sgorov I .K., 1984 ). tfomo OUJIO ОКИДЛТЬ, что новая мутация звтрпгкваог зту та область. • Мы провели картирование мутантного свЯта с исппльзоввнп9н кошлементя-ЩЮННОГО ТЭСТВ, ПрЭДЛОКОННОГО Снэллом с сенаторами ( Сио.лл и др., 1979 ). Для скрэщияпний а мутантом выбирали КГ-лч-игстгт, гагогагют Н-2 которых тлел участки оОщэ с Н-2Ь . При. этим оявщалооь, что на гибридах;F1, гдо Оудэг иметь место комплементация измененного гаплотипя с норлалышм; трансплантаты от исходной линии ВЗО будут пригогаятьоя. Однако па гибридах F1 ( мутант х в.ю.D2(3iot)) кока исходной лтши

ВЮ оттергиляоь, ЧТО укпоыавет НО ОТСУГОТЕИЭ КОМШ19М0НТЯ-

щш. Поскольку B10.D2 (Н101) нэпе? рекомбинантный гаплотлл Н где обдам с Н-2Ь являэгся только н- 2D конец, пспятно, что мутация не затронула D область комплекса Ц-й. Протипо-

полокида результаты были получеш при трансплантации Ві.0 на гибридов jpi мутанта с линией bio.C2(rio7) , которая, также как и В1 o.D2 (Н101), имает ракомбинентный гагыютш Н-й. У ЭТОЙ ЛИНИИ ( В ОТЛИЧИИ ОТ EiO.E2(R101 )) ОХОДШІМИ С 11-2^ ПВЛЯК1Т0Я вое локуоы, кромэ Н - 2D - В данном ОЛ.УЧОЫ трансплантаты от ВІО примились, т.е. имела место кошл&шн-■ тация измененного сайта. Получвшшэ дашшв повволяш оаюш-чить, что мутация произошла в К-Б лонусах Н-2. В серии опитав по трансплантации кожи от ВІ0 ( Н-2Ь } на реципиентов,

F1 гибридов ( мутант х вю.а(5П)) вое трансплантаты прижились (ТяОл. 2 ). Эти дашшэ сузили круг поисков мутировавшего аайта до К-Ер локуоов.

■ Таблица ?..

Картирование мутантного гекв в комплемонтациошюм теото.

РвЦИПЛЄНТ F1(х мутант) Аллали локусов Н-2 Донор ВШ: отторгнутых/всего Локеіли зация мутант КОГО сайга

К Ар Аа ЕР Еа S D

В| G.D2 (R107) Ъ ь ъ Ь ь ь d 0/22 K-S

B10.A(5R) 1) D ь -Ь К d d 0/22 К-Ер

B10.D2 (R101) d d А d d d b 13/13 Нд Н

B10.MBR Ъ к к к к к ч 0/25 . К

Окончательно картировать мутацию в н-2кь позволили результаты, получэншв при трансплантации кош ШО на гибридов мутанта с линией бю.мбп. Эта Ш'-линия вше* тулы-.о одш! участок, общий с 1!-3Ь - Н-2К. Всэ трансплантаты 11 ^

пришшюь на гибридах, т.а. в дашюм случаа киышюыоитшни могла произойти толп» и II :4С1’ локусом линии ят.мвь. Таким образом сшш оПпарувгашшя н/шцил произошла п 11 ■'?' кгашп-шеп линии (;57ИЬ/111 и лоиптиюншкл н II ГК липусо.

І

Сравнительный анализ мутаций ![-2 с родительской линией проводится для опроделения типа мутации. По ляторптуртлл данным подавляющее большинство мутаций Н-2 являются мутациями типа "зомавд" ( Ко!ш оЪ а!., 1970 ). Полученное в наших опытах отторжение трансплантатов кота в рэцкпрогагой комби-коцяи 0СМ9Н0В мевду мутантом И исходной линией поаполлпт утвврвдать, что посол мутация твкжэ относится к типу "помо-1Ш” ( Табл. 3 ).

Таблица 3.

Обмен кожными трансплантатами мэвду мутантам

• и исходной ляняеЛ С57ИУЮЗпУ. .

РвЦЙПИвНТ Пол Донор Отторгау- Срок викйЕайия '

ТИХ/ВС0ГО трэнсп-ов средний (дни) М І га интервал» (дни)

мутант самки В10 15/16 26,8 ±4.0 15-150

мутант самцы 310 29/31 32,0 ± г,а 18-150

Б10 самот мутант 16/16 27,7 і 1,8* 17-40

ВІО самцы мутант 23/23 39,0 - 3,7* 19-72

мутант3 самки В10 17/17 12,0 і иг** б-19

ВІО* самцы мутант 7/7 20,3 ~ 1,3** Га-25

* ,♦* _ отатиотичеоші доотовэрние равличия ( £ < 0,01 ). '

х - однскратао йммушшировшш клетками сэлезошш донора.

Иовэотио, что ускоренное отторкштв трансшщнтотоп ком мышэй можэт быть вззезно иммунизацией реципиентов клетками другого гвплотшіа, если оба донора мшит некоторый охояпнч шітигеинна детерминанта ІГ—3, отсутствующи» у реципиента ( Брондз Б.Д., 1973; кіеіп, Мигрігу, 1973)., Исходя из втпго использование предварительной иммунизации позволяет о большой точностью определять качество произошедших наслодотр.он-

ші изменений ( природа мутаций ) при оравщшпи о роцпт.'чі. окай линией ( Апт и др., І97Б). Проьодонши исследования применением однократной иммунизации , когда штатных ліпшії BIO иммунизировали клетками мутанта, u мутантних, кивотних ■-клргками исходной ліпші ВІО, показали, что кожа ВШ оттор гштоя на мутанте достоверно быстрое , чем кожа мутанта пи DXO ( Табл. 3). 'Отсюда можно предпологать, что утрата антигенной специфичности у мутанта, очевидно, большая, чн.ч вставка ( Бландова З.К., Ратькин А.Э., 1987).Этот результат подтверждается и при орзшаяии мутанта а исходной лшный п смешанной культуре лимфоцитов (МІН). Позитивная MLIl била отмочена в комбинации мутант - стандартная линия, где клетки мутанта были ответчиками . Б обратном направлении, гдэ респондерами (ответчиками) являлись клетки ВЮ.на наблюдали МІЛ. Если мутация рассматривается, с точки вро-ш:я ев фенотипических проявлений, как то мутация "утрати", "аамэны” или "вотавки", результати MLR указывают на то, чти обнаруженная мутации - "утрата". Результаты рацппрокной трансплантации мекду мутантом и ВШ, гдэ отторкиїшв наб.имдп-лось в обоих направленнях ( Табл. 3 ) показывают, ощшко, что новая мутация на только мутация "утрати". •

Для дополнительной характеристики мутации мн такжы при вели исследования связанные с характером ее поведения р. по виоимооти от полового диморфизма. Ранее на мутации ЬийЗ ( Egorov O.S., Egorov I.К., 1984 ) было показано, что самки исходной линии и второ мутанти при раципрокной трансплантации отторгают коку ducapsa чом самцы. В аналоппшіх опитах с нашей мутацией достоверный различия в сроках отторжении обяэружани только в случав, когда на ВІО трансплантировали кожу мутанта, но не в обратной комбинации { Табл. 3 ), т.о. но данной характеристике есть различия мэжду этими мутантами .

Мутацни раэ-лтшл осіласгйіі ношівопса il-2 no pjf.iiouv npoHM.'iiuT’U'i a еероппгнчзсиш тпитта ( наиримэр и шиот.жси-ченл'.ои 1 ІИкіїашю. чш мутанті И области і! Я по ііроятоі.чит

он с шх г отлімии ‘1 т иц ганва II ( т-ні ut а і.,

І9Ш; 15 Н in є I al., І Ті -1-І ). U * Jl| ИІ.ІЧЧ шін і.міті.'льшиїІ-ІІНл

ілітиївл позволяло различать и мутации Н 2К ( Blue и U и-.- vt al., 1934; Egorov O.S., Egorov I.К., 1984; Cspteva el a]., 1903 ). Исследуемая нами мутация, при оболодовошш и і.шкро-Шйфзцитоюксичвском тоста проявлялась, как и слэдовало ожидать, подобно другім мутациям Н-2К. Слэдувг лишь отметить, что в реакциях с некоторыми поликланалышми сыворот -ками против И-2Ь и Н-2К.Ь клетки исходной линии ВІО реаги ровали в Солее высоких титрах нежели клэтни мутанта Предпринятая нами попытка получить актнвнш сиворотки при реципрокной иммунивации мутантной и исходной линий уо -пехэ не вмела. Это' еща раз свидетельствует о том, что новая мутация обладает низкой специфической активностью в серологических тестах. Существенные различия наблюдали в реакциях о моноклональными антителами НВ 41 и К9 173. Моноклональной антитело К9 178 било иалучэно против одной из специфичное -той Н-2КЬ района комплекса ІЇ-2 ( Gapkova J., устпоо сообще-ииэ ). Клетки исходной линии BIQ реагировали о бтим питито-лом в достаточно высоких титрах ( І280Х ), в то время как « клетками мутанта наблюдалось полное отсутствие реакции. ІЙалоги'ішю результати были получены и с моноклональным антителом НВ '41, полученным против специфичности Н-2.39. Полное отсутствие реакція! клеток мутанта с антителом ИВ 41 и реакция клеток исходной линии ( титр !280к ) позволяют сделать выеод, что в результате мутации произошла утрата или изменение' антиспациїячности Н-2.39. В дальнейшей мы ггроноли сравнение новой Мутации о тремя наиболее часто используемыми мутациями Н-2КЬ :B6.0-H-2bml (bm1 ); С5?БТ,/6-Н-2Ьт3

(ЪтЗ) И B6.C-H-2bm<t (Ьш4). Для исследования на идентичность эти мутации бшш переведены на генетическую основу лшши ВЮ путем скрещивания с КР-линией B10.D1 ( Н-24 ). В случае идентичности новой мутации с одной из нигсшьзовашшх для оравцзиия, ожидалось прижиалэпнз трзнсплонтптов от мутгшто на гибридах от скрещивания bm1, ЪтЗ или 1чп4 о biu.ui. О.штко вое трансплантаты били отторгнута гибридами 11, что .цпло основания утверждать не идентичность поной і'гіапші с трпмя другими ( Тайл. 4). Комшшлеитпрносгь попой плішиш с грлмл вито указпшшми, пропкрплн тршісплпіп nunoft ію«н ш.'ходпоЯ

ТябЛПЦЧ '1.

Тест на идентичность мутаций Н-2КЪ гона с bm25.

Реципиент ’ Доіюр Отторгну- тых/всего трансп-ов Средний срок вшаїваїшя (дни)

PI (btnl X В10.Р1 ) bm25 17/1? ‘ 25,5 і г.і

F1(ЬгаЗ х BIO.D1) bm2S 15/15 , 31,Г ± 3,6

ї ї (bm4 і ВІОЛИ ) bm25 • 16/16 2t,4 ± 1,5

Таблица б.

Комшеменгарность мутации Ьш25 с мутациями Н-гк геня.

Реципиент Г1 [X Ьга25) Аллели локусов Н-2 Донор BIO отторглось/ всего T -OD

К АР Аа Ер S D

E6,0-II~2bm1. . Ьш1 Ь ь ь ь ъ Ъ ■ 15/15

057В1/6~Н-2Ьїп3 bm3 b ь ъ ъ ъ ь ■ 13/13 .

B6.tHl-2bra4 Ьт4 Ь ь ъ ь ■ t Ъ 15/15

ІППШ 057BL/10 іш рещшшнтов, гибридов FI ОТ СКроЩШСШШІ свой мутации а мутациями brai, ЪтЗ и Ьга4. В этом случаи, ри комплемзнтарнооти новой мутация о любой из испольоовип их в эксперименте ожидалось приживление кожи BICJ іш шорних, полученных в окрощивании нового мутанта о комилемон -арной ему мутацией. Как видно иа твблицл Б , кожи сходной линии была отторгнута всеми тремя типами гибридов, з этого следует, что Ып1, ЬпО, Ьш4 и новый мутант Н-2К1) а комплементарны.

Таким образом в результата исследований показано, что роизошла спонтанная мутация Н-2^ гьплотіша линии ВТО, эторэя относится к мутациям типа "замены", не проявляется серологических тоотах о поливалентшми витисипороткіїми, э отличима от исходной линии при применении моноклональных этитвл. Новая мутация из идентична и не комплементарно о ^угими мутациями Н-2Н^ :ьгп1, ыо и Ьи4. В соответствии и экдународними правилами, принятыми на г рабочем совещании э мутациям Н-2 ( Kohn, 197а), новой мутации присвоен сим эл Н-2^11125 . Она поддерживается в коллекционном фонде

4ЛЭБМ АМН СССР как ЛИНИЯ B10.MII-Hr2bln25 .

Идентификацию на нослэдоаанних гаплотипов Н-2 проводили тесте гибридов Р1 под контролем трансплантации коки. Мнши Средних линий: о не определенным гагглотштом И-3 были скро->НЫ С ЛИНИЯМИ ВЮ/БпУ или Озн/Впї, которые являются инб-) дни ми партнерами воэх использованных КР-линий или о одной і КР-лшшй. На полученных реципиентов, Р1 гибридов, трапо-титироввли кожу КР-линий, несущих различные гаплотини ■2. По приживлении или отторжению кожних лайкутов судили о

Ъ ГВПЛ0ТИП9 иоіштуемой ЛІШИИ. В KQ48OTB0 контроля І1ЄПОЛІ’ -

'вали кожу испытуемой линии, пересажанную иа гибридов л.

Для типирошшия лішіш тгз, выведанной путем получшшн UIQit октагибридов от скрощивиния восьми неродотовшшх ли-ЇІ: A/GnY <11- 2а ); BALB/o (H-2d ); СВА/0а1,асУ (Н-21' );

7BL/6 (II-2b ); DBA/2 (U-2a ); GLF (H-2h )'; I/st (II-2^ ) И I/H (н-2*‘) с дальнейшей селокцшй im чупсгпитолыюоть і таї’впипму эффекту тиМ'ЗФ ( Милншвшю Д.М. п ;ір.. 1 М2 ), лучгиш гибридов ЇМ ЭТСЙ ЛИНИИ С ИТ ■ ЛИНИЯМИ НК).нм (|b;JV );

■ н Реципиент . Донор Н-2 Число трансплантатов Н-2

ошта ' ЛИНИЯ ■ донора ВС9Г0 отторглось (дни) прижилась гапл. линии

1. (В10.БМ. X ТР5)Р1 вю ь 9 9 (9-18) а не Ъ

вю.ог <1 9 Э (9-11) а не й

В10.А а 18 18 (10-21) 0 не а

Ф-рс: контроль 27 п 27

2, (В10.Ш X ТРБ)?1 вю.вн к 24 17 (34-100) 7 1с?

ТРЗ контроль 24 0 24

3. (СЗЯ г ТРБ)?! сзн.лс 3 12 12 (13-16) - 0 яэ 3

ТРБ контроль 12 о 12

4. (СЗН.ЗИ г: ТР5)Р1 СЗН ' к 20 . 0 20 к

. ТРБ контроль 20 о - 20

5. (ТО х В10.В2)3?1 ВЮ ь 24 0 24 Ь

отг контроль 24' 0 24

б. (ОТ х СЗН)Л СЗН.З?Г ь 15 0 1Н ь

те контроль . 15 0 15

В10.D1 (Н-213 ); C31I.SW (Н-2Ь ) И ЛШШОЯ U31I (1!-;-‘К )- Н'1 получошшх реципиентов, F1 гибридон, тршшплыггаринани i^., КР-ЛШШЙ С рОЗЛИЧШМИ ГаПЛОТИПОИИ Н-2, ОДНИ. ИЗ K.JT' ] их. прэдположитэльно, несла линия ТГЕ. При етом окн.цплооь hj -кивлоиио трансплантатов от той КГ-линии, которая ипгич идентичный с TF3 Н-2 ганлагш. Показано, что псыюдупт:! ли шш не нвсог гпплотилы Н-2Ь,15,а,т.к. трансплантат иг линии 010 (Н-2Ь); B10.D2 (II—2е1) и ВЮ.А (Н-2а) отторгались гибридами TPS с B10.SM ( Табл. 6,111). Трансплантаты (1)-.'^

ТШОЮ ОТГОргаЛИОЬ Гибридами ( ТРй X 0:ill )1'Ч , ГЛ>»Д|;1-!|Т..'Л| )!•:

линия TPS ш имоет [1-2^ .На гибридов Р1 от c;K[MniiiiaiM;i ( B10.D1 х l'PS ) шрееокивали кожу КР-лпшш lUo.ni! (и ). В атом случаэ большинство трансплантатов било итторшуто i П03ДНИВ сроки ПО типу ХрОЛИЧОСКОЙ рошции Ч иОЛНГОШШ. И |.| «а время часть трансплантатов иршишиь в г-чешп nr, г<;

срока НОбЛЮД91ШЛ ( ТпбЛ. 6,112). ОТОЮДО П^ОЛПиЛОЖИЛИ, 'i'i'u .Mi

ния TPS песет гаялотшт Н-?А Хроническое отюржыти чаши трансплантатов на гибридах ( вю.тл х тра )ьч п^жио k>oi.;i.j нить несовпадением по аллолю об.лцоти Т 1а модду снорл ц;шн л линией 1310.ВН ( Бланкова В.К. , Рубичони Т.Л. , Г.'ии /. Лли подтверждения предположения, ЧТО ЛШШИ Tl'S ИМиОТ ГПНЛиТШ! II -г*5- билм получош гибрида ( C3H.SW х tps )Р1. Пи них трчнеп лантировали кожу U3II ( Твбл. 6 ,Н4). Прижиилишш ц.;их грана плэктатов в тэчэнпи всего егюка наблюдения подп.уцняm на личме у линии TF3 Н-2^ гяшютипа. Анэлогичшм of)pa;iui/i, о применением ряда пГ-линий, били опрпдолшш гаиliwiiiun II ЛИНИЙ WR (Н-2Ь )(ТабЛ. 6.Н5.6); MRL (Н Йк ) (ТабИ.7 ,t!i 101 .А-С (11-2^ )(Табл.7 ,Н9,Ю) и 13ЯУ1Ш'Г (Л -&-1 )(Г!1!)л.7 ,

«11). ‘ .

Для подтверждения опрадвлошшх в отгтах и тран^плшп'аиш’й коки гаплотипов Н-2 линий glf, 101.a-c, tpu, mri, (bco II ;!K); m, YT (Н-2Ь ); PT (H-aP ); brsunt (h-2-1 i тщш.пона/ш шкролдафоцтогоксичаский тест о aimuunujrjrKwu, w>uyi> и ними Протип гаплотипов ll—а ,H-£jP ,fl 2*4 ,11 V1’. Дан;кч реакция клеток ишитуомой линии о антиииппр; н;и1 п кя’пчги •• донора дли получении которой всполья'mauuot. лшагл и ннин ТНЧШ1М I'BiiiioTHiititi 11 ;i. cwifiko в илучпо (! лишшии oip п чти

ГіЗСЛЗІІІЗ

Результаты опрэдэлэшгя гашіотипа н-2 линей мес., 101„д-о. вштага.

н Реципиент | Донор Н-2 донора Число трансплантатов Н-2 исшт. ЛИНИЙ

'опыта 1 линия ■ ! всего отторглось (дни) прижилось

Т. (ВІО.ШІ У МНЬ)ІЧ В10.С2 л 3 8 (13-20) ■0 нэ <1

310 ь 13 13 (11-24) 0 пэ Ь

B10.BR к 21 7 (57-66) 14 к

ми. . контроль 13 0 13

8. (иЗН.МВ х МШЇЧ СЗН.ЗЯ ъ 7 , 7 (10-13) 0 не о

сзн к ■гг 0 22 к

МНГі контроль 4 0 4

9. (Б10 х 101 .А-о)Р1 В10.А ■ а 10 10 (15-19) а нэ а

BI0.BR к 10 9 (33-51 ) 4 нэ к

1СИ.А-С контроль 10 0 10

« .Л ’^-_г Т 1П1 л ч С1 гра 25 0 ’ [Г

101.А-с контроль 25 0 25

М. (СЗК 2 ВВЗШГОП ' сзн.нв Р . 15 . 15 (9-14) 0 не р

СЗН.ЛК І 15 а 15 .1

С.ЇК.0К І К 15 :9-»4) 0 нз

-іР-ЗІЛТІ 'ГП'^-'^ПП гг а I 5 о !5

Антиоыворотка j Цитотоксическая реакция

гаплоташов) ) - 1 СІЇ1 101 „Д-0 І ТЇБ І ... І І І І І . . і_ BRSUNT І І та І WH HKL

КУЬ vs 3 » - НТ** 4 нт нт

1/15 vs p 4 нт 4 - нт 1 JIT’ ЕТ

a/b vs -K (Dk) д - ■ 4 - - нт - - о

d/Ь2 TS b <KbIb) - 7 . - - нт *+ і -

fc/й TS Ь2 (Db) НТ - - - нт нг -

b/d vs a (KkI*c! ят - - - кт ST - -

;i/15 vs р^зн"1*" - - - “ кт нг к? кт

GTwVTA,T2T,“’ ovTrTrr’

vw — W naiVVTf на •ПТГТТГГГ-'-'РО ТУГҐ’ L.

' ««І» *.*«* -4.- л UUUUi/UlV^ .

жжх — OUBCCOTKD 0С,^С,Т}‘":ІГГ|С,В2Н2 KiT^T^CuTH'' С2“

(П-2к) наблюдалась сильная реакция лимфоцитов отих линий и ингисыясроткой 1/15 -’п р ( Табл. 8 ). Такая реакция могла Пить олздоттнши больших порлкросгов МЧЖДУ Н-2 СПОЦИфИЧКОС-тями, которые несут гаплотипы И-2к и 11-гР . Для подтшрждо тот етого предположения провели абсорбцию онтненворотии Г/Ш va р клетками сэН (Н-2 ). Поставленная затем с этой

пнтиентроткой реакция показала, что клетки линий тгг>, .лііГ и 101 .А-с ( бсо Н-г11' ) но реагируют с абсорбированной аитн-сиворотко!!, в то время как клетки РТ (Н-гР ) реагируют с прежней силой ( Твбл..8). Таким обрапом было подтверждена предпожшение о пврекрэопюй реактивности клчток ТГС и сил? с пнтиоыворотко’й */І5 «о р. Иэ гшпіроспшінх О ВНТИОЫРОрО'Г -кой }:/ь vв ;) линий сильная цитотоксическая реакция нвблвда-

ЛПОЬ С ЇСЛ0ТІШШ! ЛИНИИ БВ31ШТ, что подтвврящаот наличия у

нов ІІ-2** гаплотша. Антисиворотка а/Ь ув 1с показала ШОП -ную ГН'ЗЭДЬ клеток ЛИНИЙ аи, 101 Л-С И ТГЗ И С0Л90 чем 00'?. -ную гибель клеток линии ыщ,. Это дало основания утпордпить правильность определения Н-2к гоплотшга этих линий к слштпл с трансплантацией кош. Максимальная ропкция линии ут с зн-тисивороткой й/ь2 ча ь подтвердило Н-21* гаплотаи отої! линии. Слабая реакция с внтигывороткой Ї/І5 Vв р обьясняетсп перекрестной реакпшюзтыо по общим для Н -г1’ и Н -25' гштигои-ным специфичностям. Полученные позднее антпеигоротки І-. н <п: , Ь2 и Ъ'/й уе а были протестированы с панелью Н-Я гешлчиион для определения содержащихся в них антител. Поагаг.'пшш'.' татом реакции этих внтисаворотгас с клетками линий иг. та.. Ю1 .А-с и ГТ подтвердили гаплотипы Н-2^ у линий 101.А-о и иг!ЫП1-2Ь у т. ' : 1 ‘ ’

Таким образом, методой трансплантации кожи опро..1; мнчш гэшотшга - Н-2^ у линий 101.л-с, тгз, ишь-, п-гь у у\\ и Н-2^ у вкзият. В шкроцнтотокпическом тосте с рядом вороток яропш Н-2^,11-2^,Н-2^ и Н-2Ь подтпрргдонн гяи.""пнін опік лигой и опредоленнчо рпн09 в отД9Л.:>ііші г-'ніотішн ы;.)|:<г-Н ЛЧН СССР гаплотипы Н-2к лиши сі,р, н-уГ лшиш п.\ И ;’ъ линии її. Идентификация н пэдтврржярпи.:? гмиюпшэв Ч ;■ у перо’-іи сланных лпшШ позволяет налотао і!гт'--р,іг,'.'«![’0ват: -

п-.ірі'мпігз-альнме дчямнп. получеичії» '.і •.••тик лі: п

целенаправленно испольыоБать их в качество сиол.л irtf'osuu модалчй в различных, иаопедэвениях.

■ выводи

1. Исследование) гочозигоглооги 13 инЗреднцх И II КСЫПЧШЬ--резистентных лкний шшвй пэ гэнам тканевой сошоотик-хти подтвордило геьвтичэокую однородность ЛИНИЙ CBA/J, 00'.'/VI. BAI.B/c, MRt, 129/J, ЬВА/г, АКК, C57I,, 0311/Su, H?,W. r>,U„ vm, CSiU, П)0.129(GM), BIG.HR, ВЮ.лОП, ШС1.Л;511). 131П.М. Б10.ВЯУ. Б1D.L'2, BIO.IUII, B10.D1, 08А-КШ1 . ПО-ЬяС.

2. Устранение кз илоиеиного ядра гетерозиготной едслшш поззолило восстановить гепетичоекую однородность коигип

. но-резисцентдай ЛИНИИ В!О.А.

3. Обнаружена ноаая спонтанная мутация Н-2^ гашютииа лшши

0?7ВЬ/10БпУ. '

4. Рагрвботана новая оксперимонгально-биологичееквя модзль-

■ конгншю-рвзистентная линия и мутантным гошюттюм Я-п-

B!a.RIIl-H-2bne5.

5. Новая мутация, относятся к мутациям типа "замена" и .локализована в Н -ЛК^ локусе. .

Ь. Пошпивиая рзшсцил смманноЯ культура лимфоцитов в комой ■ нации мутант - стандартная линия наблюдавтол только п т;-х случаях, когда клетки стандартной лилии являются отимуля торами.

7. Новая мутация не идентична и ни комплементарно с мутаци

ЯМЯ Н-2КЬ локуиа Ьт1, ЬтЗ и Ьт4. .

8. В результата мутации ирматгеча опоцифичность Н-2.39.

9 Устеясвлэш гашюгиш линий коллекции ШЛбяомодолой:'

101.A-с, IPS, ШИ, ( у всех гаплотчш H-2k );WU ( гаплотшг ,

. H-2b ); BRSUHT ( ГаШЮТШТ Н-2'1 ).

10.Серологическими методами подтвержден!! ганлотиш лтмй:

101.А-С, IPS, MRI>, GU ( у всех н-2к ); Ш, YV ( И-2Ь );

И? ( П-гР ); BKSUIIT ( Н-2J ).

Слисок опубликованных работ по теме диссертации.

I. Бландова З.К.,Р&тыаш А.Э."Спонтанная мутация il-i,b гашк>

типа линии csYRViosny. Гечзтикч, 100“, xxxii, кг. i"~-i 1 ; * .

£. Блендам S.K., Шмидт В.ф. , Ратысшг А.З. "11вслеЛ''ЬМ1?'' ' • МОЗИХ’ОТНОСТИ УКСвй ИПбрвДЕЫХ ЛШШЯ КСУШОМДОСШН-То .j. .ijii/i

ЩДОбиомодвлэй АМН СССР". Таз. iJ'jeo. копф. "Актуалышо uorfxvH С Т 2НД 2рТЛ3с)Ц!П! JISCCpSTQOIIKJt 23*230 Т*11*Х ДЛЛ rrI*?i,"'f'»’!»v ;In '

сллдомкиЛ. Mockus, 1-2 октября 1987г." 1988. К— вв.

Я. Твтъют А.Э..Чапковч Я. "Иссля.лов&кял епоитаиноД ыут-гшии н-211 гаплотипа шшей в серологические тестах".Трз. Все с. ксмф. "Актуальна» вопросы стандартизации лабораторшх животинх дли мэддно-гонотнчосклх исследований. Москва, I-Й октября 19в7г." 1983, 118-120. ч •

4. Chapaeva J. . Katkin A., BlJU’.dova Z. "Pcroloeio'sX •jiviI.vm'г <>I Bj^ntaneoue 1!-2^,п25 mutaticno". Pro^eedirv'.s of !.he /.;■ IVLli pympneiuni on biologioa.1 models, SpiniUtiruv Mlyn, 118?!, г?..

Tint,kin A.f Plandova S., Chijjko’-n J. "Е]юп1г>1и«[> in'V ■. ■ Г .• t. in II-P*3 hapldtyjiFj of CD’iBL/IC-SnY mi^e etrain”. Proooedine:; <• f i.i-.u XXIVtli Gjirpouium on biological models, JjJiJiicUctuv Mlyn. i г’ч.тп.

'6. Ратьадн A.S., Нлиггдово G.K. ’’ Контроль гянсппо^коИ oj-uc-родности инородных JiitHаЯ »й, Нсвпя спонтанная мутация :i гаплотипа линии 057КЬ/1 esnir, II Всесоюзный съезд мпд^чингтгх генетиков. Алма-Ата, 4-6 декабря 1ЭЭ0г. Тоэися; доиладог., b'.'i . ’

7. Jan« Oliaj-'kova, A.JE.Ratkin, V.Ifolan “Sorologioal jrj'vl.vr and mixed lyrciihscyfcc reactions cf ceJl carrying

H-2bm2b mutation". Folia Biologica, 19Э0, vol.3*3, £Hl

8. Гатыош А.Э., Блзндова З.К. "Идэнти^.итмг! галле nw:i и-,'' UdKOTOfUX -ЛШШЙ МЫШ*Й из коллекции ШШШ АМН СССР". СбОрЧЙК скучных трудов "Проблемы сохранения И ГГОДДРр!!: 1ИП Я rnil-.'Tfi'MT.pK кодлэкций лабораторных кийотинх". Шцдао, J9M’. ой-К?..

Подписано £ почать 26.06.91г, Заказ 562 Форшт 60xS0/I6 Тираж ISO

Тад.Ваехнял. Моо.кйа. •