Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Гаплоиды неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов, мягкой пшеницы и ячменя

ВАК РФ 06.01.05, Селекция и семеноводство

Автореферат диссертации по теме "Гаплоиды неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов, мягкой пшеницы и ячменя"

На правах рукописи

РГб од

Чистякова Валентина Николаевна

2 8 МАР 2000

ГАПЛОИДЫ НЕПОЛНЫХ ПШЕНИЧНО-ПЫРЕЙНЫХ АМФИДИПЛОИДОВ, МЯГКОЙ ПШЕНИЦЫ И ЯЧМЕНЯ: ПОЛУЧЕНИЕ И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ

06.01.05 - селекция и семеноводство, 03.00.15 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Немчиновка-1 Московская область - 2000 г.

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте сельского хозяйства Центральных районов Нечерноземной зоны РФ в 1967-1999 гг.

Научный консультант: академик РАСХН, доктор сельскохозяйственных наук, профессор Г.В.Гуляев

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

И.М. Молчан,

доктор биологических наук С.Л. Каранова,

доктор сельскохозяйственных наук Н.И. Тимин

Ведущее учреждение: Главный ботанический сад РАН

Защита состоится «¿0у> г. в «£0 » часов

на заседании диссертационного </овста Д 020.19.01 в Научно-исследовательском институте сельского хозяйства Центральных районов Нечерноземной зоны РФ по адресу: 143026, Московская область, Немчиновка-1, ул. Калинина, д. 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Научно-исследовательского института сельского хозяйства Центральных районов Нечерноземной зоны.

Автореферат разослан О» ^¿Л^ггг^' 2000 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат сельскохозяйствен»

и

Лапочкин

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Важнейшей задачей селекции по-прежнему остается со-щение сроков создания новых сортов. Широкие перспективы в интенсификации екционного процесса открывает применение современных методов прикладной етики и прикладной биотехнологии в сочетании с гибридизацией и отбором. 1ЫНОЙ теоретический и практический интерес представляет, в частности, использо-ше гаплоидии. Удвоение числа хромосом у гаплоидов, получаемых на основе гиб-*ов Fi, обеспечивает возможность наиболее быстрого создания гомозигот, резкого ращения объема работы при отборе и повышения его эффективности (Карпеченко, >9; East, 1930; Вавилов, 1932; Навашин, 1933; Chase, 1952; Nei, 1963; Хохлов, 1968; ig, Park, Reinbergs et al., 1978; Петров, 1979 и др.). На уровне диплоидизированных [лоидов расщепление по генотипу в потомстве гетерозигот совпадает с расщепле-:м по фенотипу и ограничивается гомозиготными классами. Число единиц расщеп-шя сокращается до числа типов гамет, вместо числа комбинаций гамет при обыч-х методах селекции.

Реализации потенциальных возможностей гаплоидии препятствует отсутствие щей методологии использования данного явления, а также — простых и надежных эсобов массового получения, идентификации и диплоидизации гаплоидных расте-й у большинства сельскохозяйственных культур. Их разработка и совершенствова-е принадлежат к числу наиболее актуальных проблем. Дальнейшего изучения тре-ют вопросы генетической детерминации гаплоидии у представителей разных видов эодов, сравнительного анализа гаплоидных растений в таксономически различных /ппах покрытосеменных. Вместе с тем необходимы всесторонние исследования тлоидов и получаемых из них гомозиготных линий в сравнении с исходными |рмами и материалом, создаваемым традиционными методами. Постоянную акту-ьность сохраняет исследование мейоза у гаплоидов, систем его генетической регу-ции, привлечение гаплоидов для анализа геномной структуры исходных видов и >рм, путей эволюции и направлений селекционного использования последних.

Цель и задачи работы. Цель наших исследований - разработать теоретические, учно-методические и прикладные основы использования гаплоидии в интенсифи-ции генетико-селекционных программ у трех видов зерновых злаков; неполных 56-омосомных шненично-пырейных амфидиплоидов, мягкой пшеницы и ячменя.

В процессе ее осуществления предстояло решить следующие задачи:

1 - обобщить и критически проанализировать работы отечественных и зарубеж-IX авторов по экспериментальному получению гаплоидов покрытосеменных расте-[й и их использованию в генетике и селекции;

2 - исследовать микроспорогенез у гаплоидов константных форм неполных пше-[чно-пырейных амфидиплоидов (2п=8х=56), данные по конъюгации хромосом в :йозе гаплоидов использовать для расширения возможностей геномного анализа у лополиплоидов и уточнения геномной структуры исходных форм неполных пше-[чно-пырейных амфидиплоидов;

3 - произвести «ресинтез» гомозиготных линий из гаплоидов константных форм полных пшенично-пырейных амфидиплоидов, исследовать содержание анеуплои-IB и озерненность колоса в линиях гаплоидного происхождения и популяциях нежных пшенично-пырейных амфидиплоидов;

4 - найти простые и эффективные способы индуцирования гаплоидного апомик-:са у Fi внутривидовых гибридов мягкой пшеницы и неполных пшенично-пырейных

амфидиплоидов, разработать методику идентификации апомиктов и технологии создания гомозиготных линий;

5 - усовершенствовать и применить к конкретным гибридным комбинациям ме тод получения гаплоидных растений ячменя на основе селективной элиминации хро мосом гаплопродюсера Н. bulbosum (2п=2х=14) и культивирования изолированны: зародышей in vitro на искусственной питательной среде (метод Bulbosum);

6 - исследовать влияние эндогенных и экзогенных факторов на частоту экспери ментально полученных гаплоидов мягкой пшеницы, неполных пшенично-пырейны: амфидиплоидов и ячменя;

7 - отработать оптимальные режимы удвоения числа хромосом у гаплоидны: растений с помощью колхицина, на основе диплоидизированных гаплоидов создат гомозиготные линии, лучшие линии включить в селекционные программы НИИ С!] ЦРНЗ и других научных учреждений страны;

8 - провести сравнительное изучение гаплоидов, полученных из них гомозигот ных линий и исходных форм по некоторым морфобиологическим и хозяйственн важным признакам, выявить характер наследственной изменчивости у представите лей разных видов и родов при смене уровней плоидности;

9 - определить пути наиболее эффективного использования гаплоидии для ускс рения и упрощения генетико-селекционных программ у автогамных видов возделы ваемых растений.

Материал, методика и условия проведения исследований. Работа посвяще на получению и использованию гаплоидов неполных гапенично-пырейных амфидиг лоидов Triticum agropyrotriticum Cicin (2п~8х~56), мягкой пшеницы Т. aestivum I (2п=6х=42) и ячменя культурного Hordeum vulgare L. (2n=2x=14). Исследования прс ведены в 1967-1999 гг. в лабораториях: генетики и цитологии, искусственного климг та и селекции ярового ячменя - Научно-исследовательского института сельского хс зяйства Центральных районов Нечерноземной зоны РФ (Немчиновка-1, Московска обл.). Работа выполнена в соответствии с тематическим планом научных исследов; ний НИИСХ ЦРНЗ по целевым комплексным программам: 0.51.03, ОЦ.032.0 0.СХ.03.02, 0.СХ.01.01, 5.1.1.Г.7.1 КП НШ СЭВ, 5.1.1.7.01 КП НТП СЭВ и проект «Хлеба России».

Экспериментальное получение гаплоидов осуществляли методами индуцир< ванного апомиксиса и селективной элиминации хромосом одного из родителей в ги( ридном зародыше с последующей эмбриокультурой in vitro. Исходным материале служили внутривидовые гибриды Fj от скрещивания лучших отечественных и зар; бежных сортов, образцов мировой коллекции ВИРа, форм селекции НИИСХ ЦРНЗ полученных нами линий. При индуцировании партеногенеза внутривидовые гибрид пшеницы и неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов от скрещивания сортов форм разновидностей lutescens, milturum, graecum, erythrospermum, erythroleucon, fe rugineum использовали в качестве семенного родителя. Пыльцевым родителем сл; жили главным образом сорта-маркеры озимой и яровой пшеницы разновидности р rothrix - Пиротрикс 6 и Пиротрикс 28. При индуцировании андрогенеза гибриды ] использовали в качестве пыльцевого родителя, а сорта Пиротрикс 6 и Пиротрикс 28 в качестве семенного.

Апомиктическое развитие матроклинных зародышей вызывали путем опылеш кастрированных колосьев гибридов Fi пыльцой сортов Пиротрикс 6 и Пиротрикс 2 1) облученной у-излучением 60Со, 2) обработанной N-нитрозометилмочевинс (НММ) или 3) колхицином. Развитие андрогенных зародышей индуцировали обр

гкой кастрированных колосьев сортов-маркеров Пиротрикс 6 и Пиротрикс 28 рас-ором гаметоцида 2-хлорэтилфосфиновой кислоты (этрела) в водном растворе диме-лсульфоксида (ДМСО) и опылением пыльцой внутривидовых гибридов. При инду-ровании гаплоидии у мягкой пшеницы и неполных пшенично-пырейных амфидип-идов методом селективной элиминации хромосом одного из родителей в гибрид-м зародыше с последующей эмбриокультурой in vitro в качестве гаплопродюсера пользовали облученную пыльцу сорта Пиротрикс 28*.

Гаплоиды ячменя культурного Ii. vulgare L. получали на основе селективной иминации хромосом ячменя луковичного Н. bulbosum L. (2п=2х=14) и культивиро-ния изолированных зародышей in vitro на искусственной питательной среде - мето-м Bulbosum. Исходным материалом служили гибриды Fi Н. vulgare от скрещивания ртов и форм разновидностей nutans, medicum, nudum, viridi, pallidum, ricotense, par-elum и др. Внутривидовые гибриды Н. vulgare использовали в качестве семенного дителя. Пыльцевым родителем служили клоны диплоидного Н. bulbosum из ¡мбриджа и Уэльсской селекционной станции (Великобритания), предоставленные м С.Ф. Лукьянюк (ВСГИ, Одесса) и В.А. Катковым (ВНИИ кормов, Московская ¡ласть). Колосья, опыленные с целью получения гаплоидов, как правило, ¡рабатывали фитогормонами: гибберелловой кислотой (ГК), 2,4-дихлорфенок-[уксусной кислотой (2,4-Д), 6-бензиламинопурином (6-БАП) и др.. Для льтивирования in vitro юолированных зародышей ячменя, пшеницы и неполных ценично-пырейных амфидиплоидов использовали среду Р-8 (Лукьянюк, Игнатова, >80, 1983) без витамина Е. В основу работы с эмбриокультурой была положена медика К. Енсена (Jensen, 1975).

Идентификацию гаплоидных растений проводили с применением генетического гализа (метода генетического маркирования) и подсчета числа хромосом в меристе-; корешков и спорогенной ткани пыльников. Подробному цитогенетическому ;учению, с позиций геномного анализа, были подвергнуты гаплоиды константных зрм неполных 56-хромосомных пшенично-пырейных амфидиплоидов, полученных инее Н.В. Цициным и Г.Д. Лапченко в результате гибридизации мягкой пшеницы Т. ,'Stivum L. с пыреем сизым Agropyron glaucum (Desf.) Roem. et Schult. = A. interme-um (Host) P.B. (2n=6x=42) и A. elongatum (Host) P.B. (2п=10х=70). Исследовали шъюгацию хромосом в мета-анафазе первого деления мейоза гаплоидов и механизм формирования нередуцированных микроспор. В процессе отработки технологии шучения гаплоидов пшеницы и неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов зоводили цитогенетический анализ зародышей зерновок и исследование пыльцы, эрешки, колосья и зерновки фиксировали по Карнуа (3:1) и Нькжомеру, пыльцу - в 1еси спирта с глицерином (1:1). Подсчет числа хромосом в корешках, пыльниках и родышах, исследование мейоза и пыльцы проводили на давленых ацетокарминовых эепаратах.

Число хромосом у гаплоидных растений удваивали с помощью колхицина. Ди-юидизированные гаплоиды использовали для создания гомозиготных линий. Опыт->ш материал выращивали в естественных условиях и искусственном климате. Комп-жсную оценку линий диплоидизированных гаплоидов (ДГ-линий) ячменя в полевых ;ловиях осуществлял отдел селекции яровых зерновых культур НИИСХ ЦРНЗ совестно с Рязанским НИИП'ГО АПК по общепринятым в селекционных и научно-

Особенности всех разработанных и усовершенствованных методик будут отражены в юцессе изложения экспериментальных данных.

исследовательских учреждениях методикам и схемам. Лучшие линии оценивали так-жсцгцддкупдном испытании Владимирского и Кпаснояпского НИИСХ. НПО «Нив:

: Татарстана» и других научных учреждениях России. Биохимические анализы зернг выполнены в аналитической лаборатории, электрофоретические исследования гор деинов - в лаборатории технологии зерна НИИСХ ЦРНЗ.

Математическую обработку экспериментальных данных проводили с использо ванием вариационного, корреляционного, дисперсионного анализов (Снедекор, 1961 Плохинский, 1967; Рокицкий, 1973, 1974; Доспехов, 1973) и пакетов программ дл: ЭВМ «Мир-1» и персонального компьютера «Matstatistic». Достоверными считал! данные при вероятности безошибочных прогнозов В > 0,95.

Научная новизна и теоретическая значимость работы. Усовершенствован! методология генетико-селекционного использования гаплоидии у неполных пшенич но-пырейных амфидиплоидов, мягкой пшеницы и ячменя, применимая ко всем видан возделываемых растений (Чистякова, 1984, 1998а). Экспериментально доказано, чт< метод диплоидизированных гаплоидов в сочетании с гибридизацией, отбором и био технологическими приемами - эффективное средство ускоренного выведения новы: сортов и создания ценного исходного материала в селекции на высокую продукгив ностъ, устойчивость к полеганию, скороспелость, иммунитет и другие ценные при знаки.

Установлено, что удвоение числа хромосом у гаплоидов, получаемых на основ> внутривидовых гибридов, обеспечивает возможность не только наиболее быстрой создания гомозигот, сокращения объема изучаемого материала и повышения резуль тативности отбора, но и реального управления формообразовательным процессом ! потомстве гибридов, а также - быстрого и точного прогнозирования рекомбинацион ной способности и селекционной ценности исходных сортов и форм, от скрещивани которых возникли гибриды Fi. «Способ определения рекомбинационной способност) и селекционной ценности исходных форм ячменя» защищен патентом № 207342' (Нетгевич, Чистякова, Смолин и др., 1997).

Показано, что генотип исходного габрида Fi - главный фактор, определяющи выход гаплоидов, частоту их диплоидизации и перспективы использования гомози готных линий (Чистякова, 19786, 1987а, б, 1996; Чистякова, Неттевич, Гуляев, 199С 1994). Линии диплоидизированных гаплоидов целесообразно вовлекать в новый цик получения такого рода форм в качестве одного или двух компонентов скрещивани при создании исходных гибридов: они обладают наследственно обусловленно склонностью к гаплоидии и существенно облегчают дальнейшую работу по получе нию новых гаплоидов. Частота гаплоидов контролируется обычно системой адцитив но взаимодействующих доминантных генов; их совмещение в одном генотипе вызы вает эффект гетерозиса по выходу гаплоидов.

Установлено, что изучение конъюгации хромосом в мейозе гаплоидов сущест веино дополняет возможности геномного анализа у неполных пшенично-пырейны амфидиплоидов. Выявлено (Чистякова, 1972а, б), что добавочные геномы пырея в ка риотипах этих форм не имеют заметной гомологии с геномами мягкой пшеницы. Н Основе полученных данных и современных представлений об аутоаллоплоидной при роде A. glaucimi (Desf.) Roem. et Schult. = A. intermedium (Host) P.B. (2n=6x=42) и A elongatum (Host) P.B. (2n=10x=70) предложены формулы для обозначения геномно структуры неполных 56-хромосомных пшенично-пырейных амфидиплоидов. Пох робно исследованы механизмы формирования у гаплоидов нередуцированных микрс спор (Чистякова, 19726, 1974). Показано, что первое деление мейоза у гаплоидов мс

;т быть не только редукционным, но также - семигетеротипным и псевдогомсотип-

[М. :•

Разработан метод ускоренной стабилизации генотипов в потомстве внутриви-вых гибридов мягкой пшеницы и неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов с. мощью индуцированного апомиксиса (Чистякова, 1978в, 1982, 1984) и селективной иминации облученных хромосом в сочетании в эмбриокультурой in vitro. Установ-но, что, наряду с гаплоидами, при индуцировании апомиксиса могут быть получе-I гомозиготные диплоиды матроклинного или андрогешюго типа. Их возникнове-[е связано, по всей вероятности, с псевдодиплоидным апомиксисом - удвоением :сла хромосом в первом делении апомиктически развивающейся гаплоидной клетки ast, 1930; Terao, 1934; Nei, 1963; Horn, 1972). Предложены эффективные способы лучения и идентификации гаплоидов и псевдодиплоидных апомиктов. Способ по-чения апомиктичных растений с помощью колхицинированной пыльцы защищен торским свидетельством № 520957 (Чистякова, 1976). Разработана методика созда-

[я гомозиготных линий. .■" ; . ,,!:;>

Технология получения гаплоидов ячменя методом Bulbosum модифицирована едением дополнительных опрыскиваний опыленных колосьев фитргормонами и кодовой предобработки зародышей in vivo перед эксплантацией на искусственную ггательную среду. На «Способ получения гаплоидов ячменя» с использованием ходовой предобработки зародышей получено авторское свидетельство: N° 1662443; [истякова, 1991). Показано, что радикальные способы повышения производительно-и метода Bulbosum - использование клонов Н. bulbosum 4 (Св 2920/4) и (Св 2929/1) ¡ коллекции Р. Пикеринга (R. Pickering), обладающих максимальной способностью к плопродукции, и повторное вовлечение линий дипловдизированных гаплоидов яч-;ня с комплексом хозяйственно ценных признаков и хорошей рекомбинационной гособностью в новый биотехнологический цикл в качестве одного или двух компо-;нтов скрещивания при создании исходных гибридов (Чистякова, Неттевич, Гуляев, )90,1994; Чистякова, 1996, 19986). '

В процессе сравнительного изучения гаплоидных растений, полученных из них ^зиготных линий и исходных форм установлено, что при смене уровней плоддно-и у исследованных нами объектов: неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов,. х-»4х-»8х), мягкой пшеницы (6х->3х->6х) и ячменя (2х->-х—>2х) - наблюдается па-шлелизм в изменчивости всех признаков, связанный с кратным изменением дозы :нов, хромосом и геномов (Чистякова, 1998в). Переход на гаплоидный уровень выдает, как правило, уменьшение размеров всех органов и полную самостерильность; íoiio колосков и цветков в колосе сохраняют обычно прежние значения, тогда как юсобность к кущению многократно возрастает. Удвоение числ^ хромосом у гаплои-)в вызывает увеличение размеров всех органов, восстановление фертильности и со-гветствующее уменьшение числа побегов на растение. Генотипическая и фенотипи-;ская вариабельность гаплоидов и полученных из них гомозиготных линий находят-I при этом в прямой зависимости от гетерозиготности исходного материала. Воз-ценовение гаплоидных спорофитов в таксономически различных группах покрыто-¡менных растений, способность последних не только к деполиплоидизации, но и к шьнейшей полиплоидизации свидетельствуют об универсальности основных гене-1ческих механизмов и параллелизме их изменчивости, как у близких, так и :отдален-ых видов и родов, давно разошедшихся между собою на эволюционном пути. • .

Практическая ценность. Показано, что усовершенствованная нами методоло-м использования гаплоидии на 2-4 года сокращает сроки выведения новых сортов и

s

обеспечивает возможность наиболее быстрого получения исходного материала да гибридизации, совмещающего высокую продуктивность, неполегаемость, иммушш и другие ценные признаки. Методология может быть эффективно использована комбинационной селекции всех возделываемых видов покрытосеменных растени: Способ определения рекомбинационной способности и селекционной ценности и ходных сортов и форм с помощью диплоидизированных гаплоидов применим к авт( гамным видам зерновых культур.

Уточнение геномной структуры неполных 56-хромосомных пшеничн пырейных амфидиплоидов, проведенное нами с использованием гаплоидов, позвол ет выбрать наиболее рациональные способы интрогрессии генов пырея в геноп пшеницы. Отсутствие гомогологии между добавочными геномами пырея и гснома\ мягкой пшеницы в кариотипах неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов ук зывает на трудность получения естественных рекомбинаций между ними в скрещив ниях пшеницы с неполными пшенично-пырейными амфидиплоидами. Для переда1 пшенице полезных признаков, контролируемых добавочными геномами пырея, цел сообразно идти по пути получения нере1улярных рекомбинаций типа транслокаций.

Метод ускоренной стабилизации генотипов в потомстве внутривидовых гибр дов мягкой пшеницы и неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов с помощь индуцированного аломиксиса и селективной элиминации облученных хромосом в с четании с эмбриокультурой in vitro может служить составной частью селекционнь программ, обеспечивающей со1фащение сроков выведения сортов. При его использ вании у внутривидовых гибридов мягкой пшеницы и неполных пшенично-пырейш амфидиплоидов получены 379 гаплоидов и 336 псевдодиплоидных апомиктов. На с нове гаплоидов и хозяйственно ценных форм псевдодиплоидного происхожден созданы 142 гомозиготные линии, лучшие из которых включены в селекционные пр граммы НИИСХ ЦРНЗ и других научных учреждений России.

Экспериментально доказано, что усовершенствованный с помощью экзогенш и эндогенных факторов метод Bulbosum существенно повышает частоту получаем! в эмбриокультуре in vitro гаплоидов ячменя. Максимальный выход зеленых гаплои ных растений составляет при этом 30,0 % от числа опыленных цветков, 44,3 % числа завязавшихся зерновок и 86,2 % от числа эксплантированных зародышей. Д сравнения заметим, что максимальный выход гаплоидов ячменя, получаемых ми дом Bulbosum, в исследованиях С.Ф. Лукьянюк и С.А. Игнатовой (1983) достигал 2'. % от числа завязавшихся зерновок.

Показано, что усовершенствованная технология метода Bulbosum позволяет г лучать гаплоиды, а из них - гомозиготные диплоиды ячменя практически от любе генотипа. За период 1983-1995 гг. нами получены в общей сложности 8268 зелен гаплоидных растений ярового ячменя от 128-и внутривидовых гибридов отдела ( лекции яровых зерновых культур НИИСХ ЦРНЗ. На основе гаплоидов с номощ: колхицина созданы 3105 гомозиготных диплоидных линий, лучшие из которых и роко используются в генетико-селекционных программах НИИСХ ЦРНЗ и друг научных учреждений страны.

На защиту выносятся следующие основные положения:

1. В результате многолетних экспериментальных исследований, анализа лиге] туры и теоретических обобщений усовершенствована методология использования : плоидии в интенсификации генетико-селекционных программ, позволяющая зна1 тельно сократить сроки выведения новых сортов и создания ценного исходного маг риала для гибридизации, совмещающего высокую продуктивность, скороспелое

¡полегаемость, комплексную устойчивость к болезням и генетическую стабиль-)сть. Использование гаплоидии в сочетании с традиционными методами селекции и ютехнологическими приемами обеспечивает возможность не только ускоренного шучения гомозигот, сокращения объема работы при отборе и повышения его эф-зктивности, но и реального управления формообразовательным процессом в потом-ве гибридов, быстрого и точного прогнозирования рекомбинациошюй способности селекционной ценности исходных родительских форм.

2. На основе данных по конъюгации хромосом в мейозе гаплоидов уточнена ге-)мная структура константных форм неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов. оказано, что добавочные геномы пырея в кариотипах этих форм не имеют заметной 1мологии с геномами мягкой пшеницы. Для передачи пшенице «пырейных» призна->в в скрещиваниях с неполными амфидиплоидами следует идти по пути получения ¡регулярных рекомбинаций типа транслокаций. Распределение частот всех типов юмосомных ассоциаций в мейозе гаплоидов свидетельствует об эффективности Ph -[стемы хромосомы 5В мягкой пшеницы, ограничивающей гомеодогичцую цонъюга-по у неполных гапенично-пырейных амфидиплоидов. Тем не менее, добавочные ге->мы пырея оказывают некоторое дестабилизирующее влияние на процесс генетиче-;ой регуляции мейоза в гемизиготном состоянии, слегка ослабляя функцию 5В-юмосомы.

3. Разработан метод ускоренной стабилизации генотипов в потомстве внутри-щовых гибридов мягкой пшеницы и неполных 56-хромосомных пшенично-лрейных амфидиплоидов с помощью индуцированного апомиксиса и селективной гаминации облученных хромосом опылителя в сочетании с эмбриокультурой in tro, включающий способы получения гаплоидов и псевдодиплоидных апомиктов у [бридов Fi, методику их идентификации и технологию создания гомозиготных лига. Для индуцирования апомиксиса у внутривидовых гибридов мягкой пшеницы и ¡полных пшенично-пырейных амфидиплоидов наиболее эффективны опыление ис->дных материнских растений пыльцой сорта-маркера яровой пшеницы Пиротрикс >, колосья которого в период гаметогенеза облучены у-излучением 60Со в дозе 15 Гр ш обработаны 0,1-0,3 %-ным раствором колхицина в 2 %-ном водном растворе VICO. Для получения гаплоидов на основе селективной элиминации хромосом с по-едующей эмбриокультурой наиболее эффективно опыление исходных гибридов .шьцой сорта Пиротрикс 28, облученной у-излучением 60Со в дозе 35 Гр.

4. Метод получения гаплоидов ячменя путем гибридизации исходных растений Н. vulgare с гаплопродюсером Н. bulbosum (2п=2х=14) и культивирования изолиро-нных зародышей in vitro (метод Bulbosum) усовершенствован с помощью факторов зогенной и эндогенной природы. Среди экзогенных факторов наиболее эффективны [рыскивание опыленных колосьев смесью ГК и 2,4-Д и холодовая предобработка родышей in vivo перед эксплантацией на искусственную питательную среду. Ради-льное повышение эффективности метода Bulbosum обеспечивают два других преданных нами способа: использование клонов Н. bulbosum 4 (Св 2920/4) и 1 (Св 29/1), обладающих максимальной способностью к гаплопродукции, и повторное влечение линий диплоидизированных гаплоидов ячменя с комплексом хозяйствен-I ценных признаков и хорошей рекомбинационной способностью в новый биотех-логический цикл в качестве одного или двух компонентов скрещивания при созда-и исходных гибридов. Отработаны оптимальные режимы удвоения числа хромосом -аплоидов ячменя и технология создания гомозиготных линий.

а ашшци л

Типы гаплоидов и псевдодиплоидных апомиктов, полученных в данной работе, 1967-1995 гг.

№ п/п Способ получения гаплоидов и псевдодиплоидных апомиктов и возможные механизмы их возникновения Исходная форма

неполный пшенично-пырейньш амфидиплоид (2п=8х=56) мягкая пшеница (2п=6х=42) ячмень культурный (2п=2х=14)

1 Скрещивание разных константных форм между собой - спонтанный гаплоидный апомиксис менторального типа (партеногенез, апогамия) +

2 Опыление исходных внутривидовых гибридов Fi облученной пыльцой сорта-маркера - индуцированный гаплоидный и псевдодиплоидный апомиксис менторального типа (партеногенез, апогамия) + +

3 Опыление исходных гибридов F[ пыльцой сорта-маркера, обработанной НММ - индуцированный гаплоидный и псевдодиплоидный апомиксис менторального типа (партеногенез, апогамия) + +

4 Опыление исходных гибридов Fi пыльцой сорта-маркера, обработанной колхицином - индуцированный гаплоидный и псевдодиплоидный апомиксис менторального типа (партеногенез, апогамия) + +

5 Реципрокные скрещивания исходных гибридов F, с сортом-маркером при задержанном опылении - индуцированный гаплоидный и псевдодиплоидный апомиксис менторального типа (партеногенез, апогамия, андрогенез) + +

6 Обработка кастрированных колосьев сорта-маркера этрелом и опыление нормальной пыльцой исходных гибридов Fi - индуцированный гаплоидный и псевдодиплоидный апомиксис менторального типа (андрогенез) + +

7 Гибридизация исходных растений Fj с гаплопродюсером в сочетании эм-бриокультурой in vitro - половой процесс с последующей селективной элиминацией хромосом гаплопродюсера в гибридном зародыше + + +

Конъюгация хромосом у гаплоидов константных форм неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов, 1968 г.

Гаплоид Число хромосом (2п) Номер фиксации Исследовано клеток Число ассоциаций на клетку

унивалентов x±s; бивалентов X трива-лен-тов X квадри-вален-тов X

3 28 1 503 27,5 7±0,043 0,22 - -

2 451 27,4710,050 0,26 - -

Многолет-

няя пшени-

ца М-2:

№ 1 28 1 450 26,84±0,078 0,58 - -

2 438 26,68+0,071 0,65 0,01 -

№2 28 1 673 26,84+0,058 0,57 0,01 -

2 767 26,6710,067 0,66 0,01 -

№3 28 1 688 26,84+0,051 0,58 0,01 -

2 548 26,65±0,068 0,66 0,01 -

121:

№1 28 1 500 25,91+0,067 1,02 0,02 -

2 487 25,80+0,089 1,07 0,02 -

№2 28 1 611 25,70±0,084 1Д2 0,02 _

2 596 25,6510,088 1,16 0,01 -

199 28 1 528 25,37+0,117 1,21 0,07 _

2 567 24,6010,139 1,57 0,08 0,01

698 26 1 602 25,9810,006 0,01 _

2 532 25,9610,010 0,02 -

153 26 1 705 24,4510,100 0,65 0,08 _

I 2 656 22,93+0,108 1,35 0,11 0,01

ветствовала 0, а в ряде случаев - одному биваленту. Среднее число хромосомных ш социаций у разных гаплоидов находилось в пределах 0,01-1,57 бивалента, 0-0,11 тр! валента и 0-0,01 квадривалента на клетку (см. табл. 2). Биваленты, как правило, был открытого типа; «закрытые» биваленты встречались редко. Помимо первичных аса циаций хромосом, у всех гаплоидов обнаружены вторичные ассоциации унивалентс - «конец в конец» и «бок о бок». Общее число хромосом, связанных в первичные вторичные ассоциации, не превышало 21 на одну МКП.

Распределение МКП гаплоидов по количеству конъюгирующих хромосом, 1968 г.

Гаплоид Номер фиксации Частоты классов, %

0 2-4 5-7 8-10 11-13 14-16

1 81,7 18,3 - - - -

2 78,5 21,5 - - - -

иоголетняя

пеница М-2:

№ 1 1 60,9 36,0 2,9 0,2 - -

2 48,4 49,8 1,6 0,2 - -

№2 1 55,4 42,4 2,1 од _ _

2 48,5 49,7 1,7 0,1 ■ - -

№3 1 51,0 48,4 0,4 0,2 _ _

2 50,9 46,7 2,2 0,2 -

>1: № 1 1 38,8 52,0 7,8 1,4

2 32,6 56,3 10,3 0,8 - -

№2 1 34,4 52,3 12,8 0,5 _

2 34,6 50,3 14,4 0,7 - -

>9 1 36,7 43,8 11,0 8,5 - _

2 34,2 34,6 16,6 12,5 1,6 0,5

»8 1 99,5 0,5 _ _

2 98,1 1,9 - - -

;з 1 68,1 15,7 9,4 6,8 _ _

2 33,5 37,5 19,8 9,0 0,2 -

Анализируя полученные данные, мы исходим из того, что в основе конъюгации экит структурная гомология хромосом. Составляющие бивалента имеют, по мень-ей мере, отдельные гомологичные сегменты. Поэтому конъюгация хромосом в мей-;е может рассматриваться как показатель их гомологии (Kihara, 1924; Сорокина, >34; Фадеева, 1966). Характер мейотической конъюгации находится под контролем нов (Gaul, 1954; Riley, Law, 1965). Конъюгация хромосом у Т. aestivum контроли-'ется сложной полигенной системой, включающей хромосомы 5В, 5D, 5А, ЗВ, ЗА, ) и 2А (Riley, 1966; Sears, 1969). Вторичные ассоциации унивалентов обоих типов, i наш взгляд, также являются показателем частичной (хотя и незначительной) го-злогии хромосом. Это подтверждают результаты цитогенетического изучения гап->идов Т. aestivum, свидетельствующие о том, что оба типа вторичных ассоциаций (ивалентов: «конец в конец» и «бок о бок» - находятся в обратной зависимости от

частоты образования бивалентов и могут быть связаны с профазной конъюгацией хромосом (Natarajan, Ray, Swaminathan, 1961).

Конъюгация хромосом у гаплоидов неполных пшенично-пырейных амфидип-лоидов может быть интерпретирована как фенотипическое выражение частичной гомологии хромосом. Исследованные нами гаплоиды довольно сходны по характер} конъюгации хромосом в мейозе с описанными в литературе гаплоидами мягкой пшеницы. У последних Д. Костов (Kostoff, 1943) наблюдал от 0 до 2 бивалентов на клетку, Н. Кришнавами (Krishnawamy, 1939) - от 0 до 6, а в одной из клеток он обнаружи; даже 9 бивалентов. По данным Р. Райли (Riley, 1960), у одного из гаплоидо! наблюдалось в среднем 1,69 бивалента и 0,05 тривалента на клетку. Как показал! исследования М. Окамото и Э. Сирса (Okamoto, Sears, 1956,1962) у гаплоидов T. aes-tivum биваленты и тривалента образуются в основном за счет конъюгации гомеоло гичных хромосом геномов А, В и D. Гомеологачная конъюгация генетически огра ничена хромосомой 5 В. В отсутствие этой хромосомы уровень мейотической конъю гации у гаплоидов мягкой пшеницы существенно повышается (Riley, 1960). Числ< конъюгирующих хромосом доходит до 19, причем до 15 хромосом может включатьс; .в триваленгные ассоциации. Генетическая система, предотвращающая конъюгации гомеологичных хромосом T. aestivum (обозначенная впоследствии символом Ph), ло кализоваиа в длинном плече 5В-хромосомы. Следует заметить, что образование бива лентов и тривалентов у нормальных гаплоидов мягкой пшеницы указывает все же н; неполноту ограничения гомеологичной конъюгации в гемизиготном состоянии.

Неполные пшенично-пырейные амфидиплоиды (2п=8х=56), полученные в ре зультате гибридизации Т. aestivum с A. glaucum (2п=6х=42) и A. elongatun ,(2п=10х=70), содержат в своем гаплоидном наборе три генома мягкой пшеницы i ;один геном пырея (Ohlendorf, 1952, 1955, Любимова, 1963; Хвостова, Ячевская Лункина 1963; Ячевская, Лапченко, 1966). Конъюгация хромосом у изученных нам! гаплоидов, как правило, не выходит за пределы межгеномной конъюгации, котора: имеет место у обычных гаплоидов Т. aestivum. Поэтому можно считать, что образова-; ние бивалентов, тривалентов и вторичных ассоциаций унивалентов у гаплоидов не полных пшенично-пырейных амфидиплоидов происходит в основном за счет конъю ! гации гомеологичных хромосом мягкой пшеницы. Добавочные геномы пырея не про являют заметной гомологии с геномами мягкой пшеницы.

На основе экспериментальных данных по конъюгации хромосом в мейозе ran лоидов и геномной формулы A. glaucum syn. A. intermedium EjE2N, предложенной Г Стеббинсом и Ф. Паном (Stebbins, Pun, 1953), геномная структура неполных шпенич но-пырейных амфидиплоидов промежуточно-пшеничной подгруппы: НППАД 3 Многолетняя пшеница М-2, 121, 153 и 698 - обозначена нами формулой ABDE (Чис тякова, 1972; Гуляев, Лапченко, Чистякова, 1973). При этом допускается, что разны амфидиплоиды могут различаться по составу хромосом добавочного генома пырея Е представленных смесью хромосом близкородственных геномов Ei и Е2 A. glaucurr Геномная структура неполного пшенично-пырейного амфидиплоида 199 промежу точно-пырейной подгруппы, возникшего при участии A. elongatum, исходя из геном ной формулы B2E1E2F1F2 этого вида (Stebbins, Pun, 1953), нами обозначена формуле: ABDF. Он обладает морфологическими признаками, характерными для геномов Fi : F2 A. elongatum, в частности, - узкими, жесткими листовыми пластинками с резко вы раженным жилкованием (Любимова, 1970). В мейозе гаплоидов добавочные геном! пырея Е и F, как правило, не конъюгируют с геномами Т. aestivum. Отсутстви конъюгации указывает на трудность получения естественных рекомбинаций межд

ими в скрещиваниях пшеницы с неполными пшенично-пырейными мфидиплоидами. Следовательно, для передачи пшенице полезных признаков, онтролируемых добавочными геномами пырея, необходимо идти по пути получения ерегулярных рекомбинаций типа транслокаций.

Распределение частот всех типов хромосомных ассоциаций и их суммы у всех зутенных нами гаплоидов, за исключением 199 и 153, подчиняется закону Пуассона служит критерием эффективности РЬ - системы хромосомы 5В мягкой пшеницы, граничивающей гомеологичиуга конъюгацию. Большинство гаплоидов не имело су-1ественных различий в характере конъюгации хромосом при изменении средней емпературы воздуха от 15 до 20 С (см. табл. 2 и 3). Но все они проявили тенденцию повышению уровня конъюгации во второй фиксации. Одинаковая реакция гаплои-,ов иа изменение условий окружающей среды указывает на то, что они обладают од-отшшой системой генетической регуляции мейоза, препятствующей конъюгации омеологичных хромосом. Гаплоиды 199 и 153 значительно повысили уровень конъюгации хромосом во второй фиксации. Система генетической регуляции мейоза двух казанных гаплоидов оказалась наименее стабильной. У гаплоида 153 это связано, ¡езусловно, с отсутствием двух хромосом, а у гаплоида 199-е дестабилизирующим лиянием генома Б, определяющего вместе с тем наибольшее количество пырейных гризнаков в фенотипе исходного амфидиплоида.

Мейотическая редукция на стадии мета-анафазы I у исследованных нами гап-;оидов наблюдалась в 72,8-93,2 % МКП (табл. 4). В процессе редукционного деления ниваленты располагались по всему веретену, тогда как биваленты и триваленты бы-м сосредоточены в экваториальной плоскости. Распределение унивалентов между юлюсами клетки, как правило, происходило случайно. После первого деления мейо-а в большинстве случаев формировались диады с клетками разной величины и мик-юядрами. Наряду с диадами возникали полиады - триады, тетрады и пентады кле-ок. Количество нарушенных диад у разных гаплоидов варьировало от 91,4 до 96,3 'о. Обилие нарушений в первом делении и наличие их во втором приводило к тому, гго у гаплоидов образовывалось 93,0-97,0 % ненормальных микроспорад. Большин-ггво тетрад имело микроядра и содержало микроспоры разной величины. Встречаясь спорады, содержащие до 8 микроспор в одной оболочке. Разобщение хромосом штлоидного набора в редукционном делении мейоза приводило к формированию ге-гетачески несбалансированных ядер. Пыльца гаплоидов на 95,4-99,6 % была сте-1илыюй. При этом между фертильностью пыльцы и частотой нормальных тетрад шкроспор существовала отрицательная корреляция (г = -0,71).

Высокая положительная корреляция (г = +0,84) была обнаружена нами 1ежду количеством фертильной пыльцы и частотой диад нередуцированных мик-юспор. В связи с этим был проведен подробный цитогенетический анализ механизме их формирования (Чистякова, 1974). Нами установлено, что одним из источников (иад нередуцированных микроспор у гаплоидов неполных пшенично-пырейных ам-зидиплоидов служили монады клеток с реституционными ядрами. Их количество в ависимости от генотипа гаплоида варьировало в пределах 0,4-5,7 %. Монады клеток рормировались в результате нерасхождения хромосом в первом делении мейоза. В сдельных МКП разбросашше по всему веретену униваленты расщеплялись на хро-сатиты, связанные в области центромеры. На стадии телофазы I они объединялись в >дно реституционное ядро, и возникала монада, из которой после второго деления «ейоза образовывалась диада нередуцированных микроспор. Формирование реститу-щонных ядер у исследованных нами гаплоидов фенотипически не отличалось от яв-

Типы первого деления мейоза у гаплоидов неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов, 1968 г.

Число Частота деления, %

Гаплоид хромосом Редукцион- семигете ротипного псевдогомеотипного

2п ного без нарушений с нарушениями без нарушений с нарушениями

3 28 72,8±0,31 4,2±0,14 5,0±0,15 5,6±0,16 12,4±0,23

Многолетняя Пшеница М-2: № 1 28 76,9±0,30 5,1±0,16 7,3±0,18 2,2±0,10 8,5±0,20

№2 28 81,6±0,27 3,4±0,13 5,9±0,17 3,0±0,12 6,1±0,17

№3 28 84,4±0,26 2,3±0,11 6,7±0,18 1,7±0,09 4,9±0,15

121: № 1 28 82,7±0,27 1,9±0,10 5,4±0,16 2,8±0,12 7,2±0,18

№2 28 84,8±0,25 0,7±0,06 6,8±0,18 2,4±0,11 5,3±0,16

199 28 93,2±0,18 0,2±0,03 3,1±0,12 0,9±0,07 2,6±0,11

698 26 73,9±0,31 6,3±0,17 8,5±0,20 3,5±0,13 7,8±0,19

153 26 91,3±0,20 0,5±0,05 4,2±0,14 1,3±0,08 2,7±0,11

ения, открытого О. Розенбергом (Rosenberg, 1927) у партеногепетических видов Hi-racium и названного семигетеротипным делением. У гаплоидов неполных пшенично-ырейных амфидиплоидов частота МКП с правильным семигетеротипным делением олебалась от 0,2 до 6,3 % (см. табл. 4).

Другим источником нередуцированных микроспор у исследованных нами гап-оидов служили диады нередуцированных клеток, возникавшие после первого деле-ия мейоза с частотой 1,6-4,9 %. В процессе этого деления униваленты собирались на кваторе клетки, образуя правильную метафазную пластинку. Унивалентные хромо-омы, в отличие от митотических, были сильно спирализованы. В анафазе I происхо-ило эквационное деление унивалентов. Дочерние хроматиды расходились к проти-оположным полюсам, и формировались ядра с гаплоидным набором хромосом. За елофазой I следовал цитокинез, который заканчивался образованием нормальной иады клеток. Ядра клеток диады в дальнейшем уплотнялись и формировалась диада ередуцированных микроспор. Образование унивалентами метафазной пластинки с оследующим расхождением дочерних хроматид в анафазе I аналогично псевдогоме-типному делению, описанному А. Густафссоном (Gustafsson, 1935) у апомиктичных идов Taraxacum и Hieracium. Частота нормального псевдогомеотипного деления у аплоидов неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов составляла 0,9-5,6 % (см. абл. 4).

Семигетеротипное и псевдогомеотипное деления - основные пути мейотиче-кой реституции у исследованных нами форм. Благодаря им в мейозе гаплоидов фор-шровалось 0,3-6,5 % диад нередуцированных микроспор. Коэффициент корреляции [ежду суммой частот семигетеротипного и псевдогомеотипного делений и частотой :ормальных диад микроспор достигал +0,93. Механизмы формирования нередуциро-анных микроспор у изученных нами и других описанных в литературе (Chipman, loodspeed, 1927; Lesley, Frost, 1928; Иванов, 1937) гаплоидов идентичны процессам [ейотической реституции у видов с регулярным апомиксисом (Rosenberg, 1927; iustafsson, 1935) и отдаленных гибридов (Карпеченко, 1927; Kihara, 1931; Щапова, Готапова, Кравцова, 1987 и др.). Выпадение редукции числа хромосом в первом де-ении мейоза во всех указанных случаях сопряжено с высоким асиндезом. Специфика тих процессов у разных форм сводится к частоте их осуществления и характеру де-ерминации. Способность к формированию нередуцированных спор и гамет у видов с егулярным апомиксисом закреплена генотипом. У гаплоидов и отдаленных гибридов на обусловлена прежде всего унивалентным состоянием хромосом и может рассмат-иваться как адаптивный механизм, обеспечивающий возможность семенного разложения. Частота нередуцированных спор и гамет у подобных форм в нормальных словиях оказывается довольно низкой, но может быть значительно увеличена при кстремальных воздействиях на мейоз, в частности, - при использовании температур-:ых шоков (Bleier, 1930; Карпеченко, 1935).

Ресинтез гомозиготных линий. Перед обработкой колхицином 28-хромосом-;ые гаплоиды были расклонированы на множество отдельных растений. Воздействию олхицина подвергалось, таким образом, по 4-18 гаплоидных растений каждого гено-ипа. В общей сложности были обработаны 70 гаплоидных растений. Выживаемость аплоидов после обработки колхицином колебалась от 75,0 до 100,0 % при среднем начении 92,9 %. Ткани с удвоенным числом хромосом удалось получить у 54 расте-ий, что составляло 77,1 % от общего числа обработанных колхицином гаплоидов, [астота диплоидизации у разных генотипов варьировала в пределах 44,4-100,0 % от исла обработанных колхицином растений. Наилучшие результаты по выживаемости

и частоте диплоидизированных гаплоидов получены при концентрации колхицина 0,05 % и экспозиции 48 часов. В указанном варианте эти показатели достигали соответственно 97,6 и 80,5 %.

Растения Сд представляли собой гаплоидно-диплоидные химеры. Мозаичность по числу хромосом наблюдалась у них не только в пределах одного колоса, но даже в пределах одного пыльника: на одном и том же препарате можно было видеть и окто-ллоидные, и тетраплоидные клетки. Наряду с эуплоидными микроспороцитами встречались анеуплоидные. Степень диплоидизации гаплоидов, как и частота, варьировала в зависимости от генотипа и характера обработки колхицином. Озерненность, как правило, была неполной. Число зерен на колос колебалось от 0 до 56.

Потомство диплоидизированных гаплоидов обнаружило значительную неоднородность по числу хромосом. Линии гаплоидного происхождения, как и исходные амфидиплоиды, были представлены не только эуплоидными (2п=56) растениями, но и анеуплоидами с числом хромосом от (2п=51) до (2п=55), а у формы 199 - и (2п=57). Содержание анеуплоидов в Ci линий гаплоидного происхождения, как правило, было значительно выше, чем в популяциях исходных неполных пшенично-пырейных ам-фидиплоидов и варьировало от 19,1 до 71,4 %. Озерненность* линий в Ci колебалась от 40,5 до 83,5 %. У исходных амфидиплоидов процент анеуплоидных растений составлял 11,1-41,2, при озерненности 64,5-95,7 %.

Анеуплоидия в потомстве обработанных колхицином аллополигаплоидов имеет двоякую природу. Одна из причин появления анеуплоидов - -генетическая несбалансированность исходных форм экспериментально полученных аллополиплоидов. Другая причина - потеря отдельных хромосом в обработанном колхицином материале. По данным E.H. Сидорова и H.H. Соколова с соавторами (1965), она связана с блокадой веретена деления и дезориентацией хромосом в К-метафазе. Беспорядочный разброс хромосом по всей клетке на стадии метафазы приводит к утере их пространственной близости и формированию множества отдельных ядер на стадии телофазы. В интерфазе происходит лизис хромосом, объединенных в дополнительные ядра, неспособные к дальнейшему прохождению полного ядерного цикла.

Известно, что у 56-хромосомных пшенично-пырейных амфидиплоидов анеуплоидия вызывает тенденцию к снижению озерненности (Голубовская, 1969). Поэтому для посева на С2 и С3 мы использовали только потомства эуплоидных растений с наиболее высокой озерненностью. Таким путем нам удалось значительно снизить содержание анеуплоидов у большинства полученных линий и существенно повысить их озерненность. Уже в С3 лучшие линии гаплоидного происхождения имели 5,3-10,0 "Л анеуплоидов и озерненность колоса на уровне 90,1-96,4 %. Наряду с анеуплоидами е потомстве обработанных колхицином гаплоидов (Ci и С2) были обнаружены разнообразные мутанты: компактоиды, скверхеды, хлорофильные мутанты, формы с повышенной частотой вторичных гаплоидов (1,2 % против 0,15 %) и близнецовых растений (27,6 % против 2,5 %) в потомстве и другие.

* Озерненность у мягкой пшеницы и неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов рассчитывали по отношению числа зерен в колосе к сумме зерен и боковых стерильных цветков

Гспользоваиие индуцированного апомиксиса н селективной элиминации облу-енных хромосом в сочетании с эмбриокультурой in vitro для ускореппой стабилизации генотипов в потомстве внутривидовых гибридов мягкой пшеницы и неполных пшеничпо-пырейных амфидиплоидов

У большинства видов покрытосеменных растений описаны апомиктичные гап-)иды. Они происходят, как правило, из редуцированной, но не оплодотворенной яй-:клетки - гаплоидный партеногенез, синергиды - гаплоидная апогамия* или яйце-[етки, ядро которой замещено ядром гаплоидного спермия - гаплоидный андрогенез [оддубная-Арнольди, 1940, 1976; Магешвари, 1954; Петров, 1964, 1979; Ноглер, >90). Иногда в ходе первого митотического деления апомиктически развивающейся плоидной яйцеклетки происходит спонтанное удвоение числа хромосом - явление, вванное псевдодиплоидным партеногенезом (East, 1930; Terao, 1934; Nei, 1963; опт, 1972). Под диплоидным партеногенезом обычно понимают апомиктическое веитис нередуцированной яйцеклетки. При отсутствии цигоэмбриологических иных, свидетельствующих о том, из какой клетки гаметофита развивается апомик-[чный зародыш, с нашей точки зрения, целесообразно употреблять более широкие рмины: «гаплоидный апомиксис», «диплоидный апомиксис» и «псевдодиплоидный юмиксис». Формирование гаплоидов в культуре изолированных пыльников и мик->спор называют андрогенезом in vitro, в культуре неоплодотворенных завязей и мяпочек - гиногенезом in vitro. Независимо от путей возникновения гаплоидов (in vo или in vitro) механизм генетической детерминации гаплоидии бывают довольно :одны.

Необходимым условием апомиктического развития зародыша у покрытосемен-лх растений, за исключением видов с регулярным автономным апомиксисом, явля-ся опыление и оплодотворение центрального ядра зародышевого мешка, приводя-ее к формированию гибридного эндосперма (Магешвари, 1954; Хохлов, 1958, 1967; етров, 1964, 1979; Поддубная-Арнольди, 1976, Ноглер, 1990). Это относится и ко :ем формам индуцированного апомиксиса, под которым мы понимаем эксперимен-льно вызываемый нерегулярный апомиксис. Таким образом, индуцирование нере-лярного апомиксиса связано с необходимостью опыления и оплодотворения цен-1ального ядра зародышевого мешка - явления, определяемого многими авторами [етров, 1964, 1979; Канделаки, 1969; Поддубиая-Арнольди, 1976; Ноглер, 1990) как :евдогамия. С.С. Хохлов (1967) назвал акт оплодотворения вторичного ядра заро-,плевого мешка менторальным оплодотворением, а те формы апомиксиса, при кото-.ix этот акт оплодотворения сохраняется - менторальным апомиксисом.

Способы индуцирования апомиксиса у гибридов При индуцировании юмиксиса у внутривидовых гибридов мягкой пшеницы и неполных пшенично-лрейных амфидиплоидов нами получены 315 гаплоидов и 332 псевдодиплоидных юмикта. Их происхождение в большинстве случаев связано с гаплоидным и :евдодиплоидным партеногенезом, реже - гаплоидной и псевдодиплоидной югамией, гаплоидным и псевдодиплоидным андрогенезом менторального типа (см. бл. 1, №№ 2-6). Сравнительные данные об эффективности различных способов щуцирования апомиксиса представлены в таблице 5. Способы индуцирования апо-1ксиса с использованием колхицина, НММ и этрела для злаков нами (Чистякова, 176, 1977, 19786,в, 1982, 1984; Гуляев, Чистякова, 1979) предложены впервые. За ды исследований были опылены с целью индуцирования апомиксиса 76514 1етков.

Апогамия бывает сопряжена с формированием зародышей-близнецов.

Эффективность различных способов индуцирования апомиксиса у внутривидовых гибридов мягкой пшеницы и неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов, 1974-1981 гг.

Способы индуцирования апомиксиса

Годы проведения исследований

Общее число опыленных цветков

Максимальная частота апомиктичных растений _ у разных исходных форм, %_

гаплоидов

псевдодиплоидных апомиктов

гаплоидов и псевдодиплоидных апомиктов

Опыление пыльцой, облученной •у-излучением 60Со

Опыление пыльцой, обработанной НММ

Опыление пыльцой, обработанной колхицином

Задержанное опыление необработанной пыльцой

Обработка кастрированных колосьев этрелом и опыление нормальной пыльцой

1974-1980 1974-1976 1974-1981 1974-1980

1978-1981

31807

6615

20701

11874

5517

0,55-1,61

0,00-1,38

1.71-5,11

0,00-0,76

0,00-1,15

0,55-0,65

0,00-0,27

2,06-7,66

0,00-0,08

0,00-2,31

1,1-2,3 0,0-1,6 3,8-12,8 0,0-0,8

0,0-3,5

Облучение пыльцы сортов-маркеров Пиротрикс 6 и Пиротрикс 28 и обработку : НММ проводили в колосьях, срезанных в период гаметогенеза и в фазе зрелой мльцы. Для облучения и обработки пыльцы в период гаметогенеза использовали эбеги с двумя верхними листьями. Испытывали 5 доз -/-излучения 60Со - 15 Гр, 25 р, 35 Гр, 45 Гр и 55 Гр (мощность дозы: 496-593 Р/мин) и 4 концентрации водного 1створа НММ - 0,03 %, 0,06 %, 0,09 % и 0,12 % (экспозиция - 48 часов). Обработку ыльцы колхицином проводили в период второго митоза, в колосьях, срезанных с зумя верхними листьями. Колоски и цветки, пыльца которых находилась на другой гадии развития, перед началом обработки удаляли. Использовали водный 0,1-, 0,2- и 3 %-ный раствор колхицина в 2 %-иом водном растворе ДМСО при экспозиции 72 1са. В опытах с обработкой кастрированных колосьев маркеров Пиротрикс 6 и иротрикс 28 0,1- и 0,2 %-ным раствором этрела в 2 %-ном водном растворе ДМСО пя приготовления растворов использовали гаметоцид с 40 %-ным содержанием гйствующего вещества. Раствор этрела наносили в помощью пипетки - по одной тле на завязь каждого кастрированного цветка, через сутки после кастрации. В опытах с у-излучением, НММ, колхицином и этрелом колосья опыляли в птимальные сроки - третий-пятый день после кастрации - путем нанесения пыльцы а рыльце каждого цветка в условиях строгой изоляции. Задержанное опыление еобработанных завязей нормальной пыльцой на 10-14-й день после кастрации спользовали как для индуцирования партеногенеза, так и для индуцирования ядрогенеза. В разных вариантах опыляли по 300-900 цветков.

В опытах с облученной пыльцой максимальная частота апомиктичных астений у разных исходных форм варьировала от 1,1 до 2,3 % от числа опыленных ветков (см. табл. 5). Максимальная частота гаплоидов составляла при этом 0,55-1,61 о, псевдодиплоидных апомиктов - 0,55-0,65 %. Наилучшие результаты у всех ябридов 1Г1 были получены при опылении облученной пыльцой Пиротрикса 28, дозе ■излучения в 15 Гр и облучении пыльцы во время гаметогенеза. Частота помиктичных растений при облучении зрелой пыльцы Пиротрикса 28 была в .3-4 аза ниже. Доза излучения в 25 Гр для облучения пыльцы Пиротрикса 28 оказалась енее эффективной, а дозы в 35-55 Гр были непригодны: всхожие семена при этих озах не завязывались. Пыльца Пиротрикса 6 обеспечивала наибольший выход помиктичных растений при дозе у-излучения в 25 Гр, но в целом была менее ^фсктивной, чем пыльца Пиротрикса 28. Дозы у-излучения в 45-55 Гр для облучения ыльцы Пиротрикса 6 были непригодны, а доза в 35 Гр оказалась малоэффективной.

Опыление гибридных растений пыльцой колосьев, обработанных НММ, ндуцировало апомиксис с частотой 0,0-1,6 % (см. табл. 5). Наилучшие результаты ыли получены при использовании пыльцы Пиротрикса 28 и обработке колосьев в ериод гаметогенеза 0,12 %-ным раствором НММ. Максимальная частота гаплоидов разных материнских форм в этих вариантах составляла 0,00-1,38 %, апомиктичных иплоидов - 0,00-0,27 %. Пыльца Пиротрикса 6 обеспечивала наибольший выход юмиктичных растений при обработке колосьев в период гаметогенеза 0,06 %-ным аствором НММ и, по сравнению с пыльцой Пиротрикса 28, была менее ^фективной.

Способ индуцирования апомиксиса с помощью колхицинированной пыльцы казался наиболее производительным как для гибридов мягкой пшеницы, так и для -горидов неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов. Максимальная частота яомиктичных растений у разных исходных форм в лучших вариантах находилась в ределах 3,8-12,8 % от числа опыленных цветков (см. табл. 5). Доля гаплоидов

составляла при этом 1,71-5,11 %, псевдодиплоидных апомиктов - 2,06-7,66 % Наиболее эффективным для индуцирования апомиксиса у гибридов пшеницы быис опыление пыльцой колосьев Пиротрикса 28, обработанных 0,2- и 0,3 %-ным раствором колхицина. При индуцировании апомиксиса у гибридов неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов наилучшие результаты получены при опылении пыльцо{ Пиротрикса 28, колосья которого были обработаны 0,1 %-ным раствором колхицина Пыльца маркера Пиротрикс 6 обеспечивала наибольший выход апомиктичных растений у всех материнских форм при обработке колосьев 0,1 %-ным раствором колхици на и была менее эффективной, чем пыльца Пиротрикса 28.

Изучение действия колхицина на гаметогенез сорта Пиротрикс 28 показало, чт< в колосьях, обработанных 0,1-0,3 %-ным раствором колхицина в 2 %-ном водно», растворе ДМСО, вместо нормальной трехъядерной пыльцы, формируется 76-92 двуядерных пыльцевых зерен с вегетативным ядром и одним реституционные, спермием. Образование реституционных спермиев при прорастании обработайте колхицином пыльцы диких видов картофеля ранее наблюдали X. Монтелонго Эскобедо и П. Роув (Montelongo-Escobedo, Rowe, 1969). Помимо реституционноп спермия, обработанная колхицином двуядерная пыльца Пиротрикса 28 нередко со держала одно или несколько микроядер. Опыление двуядерной пыльцой исключав-возможность двойного оплодотворения и может вызывать апомиктическое развили зародышей у материнской формы. В обработанных колхицином колосьях пшениць формируется также 3-9 % многоядерных пыльцевых зерен. Такая пыльца может со держать дефективные спермин, неспособные к участию в оплодотворении. Присутст вие в пыльцевом зерне одного нормального спермия обеспечивает возможность оди нарного оплодотворения и апомиктического развития зародыша. Количество трехъя дерной и стерильной пыльцы в обработанных колхицином колосьях Пиротрикса 21 при концентрации 0,1-0,3 % не превышает 7-15 %. Те же аномалии, но с меньшей час тотой возникают и при облучении пыльцы во время гаметогенеза, и при обработке о НММ. При облучении зрелой пыльцы видимых цитологических изменений не обна ружено.

Максимальная частота апомиктичных растений у разных исходных форм npi задержанном опылении находилась в пределах 0,0-0,8 % (см. табл. 5). Частота ran лоидов колебалась при этом от 0,00 до 0,76 % от числа опыленных цветков, частот: апомиктичных диплоидов - от 0,00 до 0,08 %. Положительные результаты по инду цированию партеногенеза у гибридов пшеницы были получены при опылении пыль цой маркеров Пиротрикс 6 и Пиротрикс 28 на 10-12 день после кастрации, у гибридо; неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов - на 12-14 день после кастрации Следует заметить, что опыление внутривидовых гибридов мягкой пшеницы на 10-1! день после кастрации пыльцой гибридов F, от скрещивания разных форм 56 хромосомных пшенично-пырейных амфидиплоидов: (НППАД 139 х ЛГП 46), (ЛГ1 Многолетняя пшеница М-2 х НППАД 153), (ЛГП 121 х ЛГП 3) и др. - для индуциро вания партеногенеза оказалось более эффективным, чем опыление пыльцой сорто . Пиротрикс 6 и Пиротрикс 28. Частота матроклинных гаплоидов и псевдодиплоидны: апомиктов в одном из таких вариантов достигала 0,8 % от числа опыленных цветков Андрогенные растения были получены нами при опылении кастрированных колосье Пиротрикса 6 и Пиротрикса 28 пыльцой внутривидовых гибридов пшеницы и непол ных пшенично-пырейных амфидиплоидов на 10-12 день после кастрации. Частот индуцированного андрогенеза в большинстве случаев приближалась к 0 и только одном из вариантов достигала 0,35 %.

В некоторых случаях частоту индуцированного андрогенеза удалось повысить [утем обработки кастрированных колосьев маркеров Пиротрикс 6 и Пиротрикс 28 ОД [ 0,2 %-ным раствором этрела в 2 %-ном водном растворе ДМСО и опыления этих :олосьев в оптимальные сроки гибридной пыльцой. Максимальная частота андроген-1ых растений у разных исходных форм в опытах с этрелом варьировала от 0,0 до 3,5 4> (см. табл. 5). При этом возникало 0,00-1,15 % гаплоидов и 0,00-2,31 % гомозигот-[ых диплоидов от числа опыленных цветков. Наилучшие результаты по индуцирова-шю андрогенеза с использованием этрела нами получены при обработке колосьев Тиротрикса 28 0,1 %-ным, а колосьев Пиротрикса 6 - 0,2 %-ным раствором данного •аметоцида. Развитие завязавшихся зерновок улучшалось при двукратном опрыски-¡ании колосьев, через один и два дня после опыления, смесью индолил-З-уксусной сислоты (ИУК) - 100 мг/л, ГК - 50 мг/л и кинетина - 20 мг/л.

Кастрация колосьев без последующего опыления, проведенная нами у всех исходных материнских форм с целью выявления способности к автономному апомикси-;у, принесла отрицательные результаты. По каждому гибриду Fi было прокастриро-¡ано, а затем изолировано по 700-1000 цветков. При этом ни в одном цветке не на-злюдалось завязывания зерновок без опыления. Ни один из исследованных нами гиб-зидов не обладал способностью к автономному апомиксису. Индуцированный раз-1ичными способами гаплоидный и псевдодиплоидных апомиксис всегда носил мен-горальный (псевдогамный) характер. Об этом же свидетельствует и тот факт, что обученная пыльца использованных нами опылителей при высоких дозах у-излучения 'для Пиротрикса 28 - это 55 Гр, а для Пиротрикса 6 - более, чем 55 Гр) не обеспечи-зает завязывания не только всхожих, но и беззародышевых зерновок. Следовательно, у изученных нами гибридов эндосперм не способен к автономному развитию. Дефективность эндосперма зерновок от опыления облученной пыльцой, которая нередко имеет место даже при оптимальных дозах излучения, вызывает дегенерацию значительной части апомиктичных зародышей, уменьшая частоту индуцированного апо-миксиса. Выход гаплоидных и псевдодиплоидных апомиктов при опылении облученной пыльцой может быть существенно увеличен при использовании современных эиотехнологических методов, в частности, - эмбриокулыуры in vitro. Такого рода ис-:ледования, с нашей точки зрения, наиболее перспективны.

В последние годы предпринимаются многочисленные попытки использования эблученной пыльцы для передачи потомству отдельных генов опылителя путем трансформации яйцеклеток in vivo (Pandey, 1975, 1980, 1983; Моргун, Ларченко, Василева, Ткаченко, 1985; Петров, Сухарева, 1985 и др.). К. Панди (Pandey, 1975, 1980) первым сообщил об экспериментальном переносе специфических генов отцовского родителя в партеногенетическое псевдогамное потомство видов рода Nicotiana при облучении пыльцы высокими дозами радиации (50 и 100 кР). По его мнению, трансформация сопровождалась диплоидным партеногенезом, индуцированным включением фрагментов пульверизованных отцовских хромосом в материнскую яйцеклетку. Автор считал (Pandey, 1983), что трансформация яйцеклеток с помощью облученной пыльцы имеет большое значение для селекции, поскольку открывает возможность генетической реконструкции определенных генотипов при партеногенезе и позволяет получать большое количество семян материнского типа с изменениями единичных признаков.

Однако, переисследование этого явления (Werner, Dunkin, Comisch, Jones, 1984; Cornisch, Werner, 1985; Chyi, Sanford, 1985; Engvild, 1985) не подтвердило данных Панди о высокой частоте (50 %) трансформации яйцеклеток, индуцированной облу-

ченной пыльцой табака. Я. Чай и Дж. Сенфорд (Chyi, Sanford, 1985) при анализе 995 растений, выращенных го 9052 семян, обнаружили лишь 4 измененных формы, появление которых было связано с генетическим засорением исходных линий, в том числе - и полученных от К. Панди. Опыты по индуцированию трансформации яйцеклеток с помощью облученной пыльцы у кукурузы, томата (Sanford, Chyi, Reisch, 1984а, б), капусты, рапса и яблони (Chyi, Sanford, Reisch, 1984) тоже не принесли положительных результатов. Исследователи пришли к выводу, что, если это явление и встречается у изученных объектов, то очень редко, и не может быть использовано в селекционной работе.

Невозможность переноса не только отдельных генов, но и хромосомных фрагментов с помощью облученной пыльцы у обычных сексуальных видов растений связана с тем, что при высоких дозах радиации, вызывающих фрагментацию ядерногс материала (они различны для разных видов), пыльца оказывается неспособной оплодотворить центральное ядро зародышевого мешка и обеспечить нормальное развитие эндосперма. Поэтому не оплодотворенная, хотя и трансформированная яйцеклетка не имеет стимула к апомшсгическому развитию. Работу в этом плане следует сосредоточить на апомиктичных видах и, прежде всего, - формах с автономным апомиксисом список которых приведен в монографии С.С. Хохлова с соавторами (1978). Болыно? интерес представляет, например, работа Д.Ф. Петрова и Н.Б. Сухаревой (1985) по передаче генетической информации регулярным апомикгам Fragaria при опылент пыльцой, облученной тяжелыми дозами радиации. Что касается сексуальных видо! растений, то здесь, по-видимому, перенос фрагментов хромосом с помощью облученной пыльцы может оказаться успешным лишь при оплодотворении in vitro и исполь зовании эмбриокультуры.

Методика идентификации апомиктичных растений. Для выявления экспе риментально полученных гаплоидов и псевдодиплоидных апомиктов нами разработа на методика их идентификации. Она включает предварительную идентификации апомиктичных растений - по рецессивному фенотипу (среди гибридов, маркирован ных комплексом доминантных признаков: антоциановая окраска колеоптиля, опу шенность листовой пластинки, яровой тип развития, красная окраска колоса, отсутст вия остей и опушенность колосковых чешуи) и окончательную идентификацию ran лоидов - по числу хромосом, псевдодиплоидных апомикгов - по константности из потомства. При использовании в качестве маркера сорта яровой пшеницы Пиротрию 28 гибридное потомство может выбраковываться в фазе 7-дневных сеянцев по интен сивной опушенности листовой пластинки. При маркировании гибридных растенш признаком «яровой тип развития» материал, полученный на основе озимых гибридов необходимо высевать весной. Растения, прекратившие свое развитие в фазе кущения могут быть отобраны как предполагаемые апомикты и подвергнуты искуственно! яровизации. Предварительная «идентификация апомиктичных растений по окрасю колеоптиля может быть проведена лишь в том случае, если исходные гибриды полу чены от скрещивания линий с бесцветным колеоптилем: многие сорта по этому при знаку обнаруживают гетерогенность. Признаки колоса могут быть использованы дл предварительной идентификации апомиктичных диплоидов. Гаплоидные растени необходимо выявлять до выхода в трубку, так как они подлежат обработке колхици ном в фазе кущения.

При индуцировании апомиксиса с помощью разного рода экспериментальны воздействий на пыльцу и яйцеклетки весьма важно, чтобы гибридное потомство был< маркировано несколькими доминантными признаками. Полученные нами данны

видетельствуют о том, что в потомстве от опыления как облученной, так и колхици-ированной пыльцой, наряду с эуплоидными матроклинными и гибридными расте-мями, могут возникать анеуплоидные гибриды с отсутствием нескольких хромосом. )уплоидные гибриды обладают обычно полным комплексом маркерных признаков, включение составляют появляющиеся иногда растения с рецессивными мутациями ю отдельным признакам. У анеуплоидных гибридов маркерные признаки отсутству-эт довольно часто. Это связано с элиминацией части хромосомного материала отцов-кого родителя при облучении пыльцы и обработке ее колхицином. Возможность отвинченной передачи потомству генов отцовского родителя при опылении облучен-юй пыльцой Дж. Снейп с соавторами (Snape et al., 1983) совершенно правильно федлагают использовать в практических целях особенно - для передачи потомству Рецессивных аллелей, так как при этом отпадает необходимость возвратных скрещи->аний и самоопыления. Происхождение такого рода растений они объясняют пронесем обычного оплодотворения.

Получение гаплоидов на основе селективпой элимипапни облученных :ромосом с последующей эмбриокультурой и их идентификация. Исходные рас-ения внутривидовых гибридов пшеницы и неполных пшенично-пырейных амфидип-гоидов выращивали в полевых условиях. Через 3-5 дней после кастрации гибридные ;олосья опыляли пыльцой сорта-маркера Пиротрикс 28, облученной у-излучением °Со в дозах 35, 45 и 55 Гр. В течение трех дней после опыления колосья опрыскивали :месыо ГК (75 мг/л) и 2,4-Д (100 мг/л). Эта процедура улучшала развитие зародышей i формирующихся зерновках. Через 18-19 дней после опыления половину колосьев шпользовали для пересадки зародышей in vitro, а другую половину оставляли в поле ! качестве контроля до полного созревания.

От «контрольных» колосьев в конечном счете не было получено ни одного гап-юида (табл. 6). Единичные зерновки с недоразвитым, деформированным эндоспер-юм завязывались лишь при дозах облучения пыльцы в 35 и 45 Гр, но все они оказа-гись невсхожими. Следовательно, при дозах радиации в 35 и 45 Гр происходила почти полная дегенерация эндосперма и полная денегерация зародышей, а при дозе в 55 "р полная денегерация как эндосперма, так и зародышей. Цитологический анализ 7-9-щевных зародышей позволил обнаружить в них следы элиминации хромосом: отдавшие хромосомы, мосты и фрагменты в анафазе и микроядра в телофазе. При подаете числа хромосом в клетках 18-дневных зародышей было установлено, что они шеют гаплоидный «статус». Стало ясно, что облученные хромосомы опылителя претерпели полную или почти полную элиминацию как в эндосперме (он был представши к этому времени жидким содержимым), так и в зародышах, и для сохранения последних необходима эмбриокультура.

Максимальный выход гаплоидов мягкой пшеницы и неполных пшенично-пырейных мфидиплоидов в эмбриокультуре in vitro нами достигнут при опылении исходных гибридов ыльцой Пиротрикса 28, облученной у-излучением 60Со в дозе 35 Гр (см. табл. 6). Процент шлоидов от числа опыленных цветков у разных материнских форм при этой дозе колебался т 8,0 до 14,0. При дозе облучения пыльцы в 45 Гр частота получаемых гаплоидов находи-ась в пределах 3,6-5,6 %, а при дозе в 55 Гр составляла лишь 0,8-2,7 %. Таким образом, доза -излучения в 35 Гр наиболее приемлема для облучения пыльцы Пиротрикса 28 с целью мас-ового получения гаплоидов пшеницы и неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов на снове селективной элиминации облученных хромосом опылителя в гибридном зародыше с оследующей эмбриокультурой. Методика идентификации полученных таким путем галлонов (и гомозиготных диплоидов) аналогична описанной выше методике идентификации апо-шсшчных растений.

Частота гаплоидии у внутривидовых гибридов мягкой пшеницы и неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов при опылении облученной пыльцой сорта Пиротрикс 28 и последующей эмбриокультуре, 1982 г.

Доза Число

Исходная материнская форма у-из-луче-ния, Гр Вариант опыленных цветков экс-план-тированных зародышей полученных гаплоидов % гаплоидов от числа опыленных цветков

35 без эмбриокультуры в эмбриокультуре 135 147 65 0 17* 0,0 11,6

Р| (Кавказ х Краснодарская 39) 45 без эмбриокультуры в эмбриокультуре 110 115 29 0 5 0,0 4,4

55 без эмбриокультуры в эмбриокультуре 123 130 18 0 2 0,0 1,5

35 без эмбриокультуры в эмбриокультуре 126 137 50 0 11 0,0 8,0

Б] (Сиете Церрос х Московская 35) 45 без эмбриокультуры в эмбриокультуре 108 112 25 0 4 0,0 3,6

55 без эмбриокультуры в эмбриокультуре 130 125 10 0 1 0,0 0,8

35 без эмбриокультуры в эмбриокультуре 140 129 79 0 18* 0,0 14,0

(ЛГП Многолет-ка-2 х НППАД 153) 45 без эмбриокультуры в эмбриокультуре 118 125 44 0 7 0,0 5,6

55 без эмбриокультуры в эмбриокультуре 104 111 21 0 3 0,0 2,7

*В этих вариантах наряду с гаплоидами получены по два гомозиготных растения матроклин ного типа (2п=42) и (2п=56) - в таблице суммированы с гаплоидами.

Сопоставляя эти данные с результатами индуцирования апомиксиса, можно заточить, что тенденция к элиминации хромосомного материала опылителя (как в за-эдыше, так и в эндосперме) при опылении облученной пыльцой возникает уже при ззах у-излучения в 15-25 Гр, усиливается при дозах в 35-45 Гр и при дозе в 55 Гр гализуется полностью - у Пиротрикса 28 или почти полностью - у Пиротрикса 6. ледовательно для «спасегам» апомиктичных зародышей, максимум которых имеет есто при дозах облучения пыльцы в 15 и 25 Гр, эмбриокультура in vitro также необ-эдима. Заслуживает внимания и то обстоятельство, что максимальную склонность к шлоидии, несмотря на разные способы ее индуцирования, проявляют одни и те же сходные формы, в частности, - гибриды F¡ (Кавказ х Краснодарская 39) и (ЛГП 1ноголепса-2 х НППАД 153). Это указывает на высокую генотипическую обуслов-енность способности к деполиплоидизации и однотипность ее детерминации у пред-гавителей разных видов и разных генотипов одного и того же вида.

В заключение отметим, что гаплоиды мягкой пшеницы и неполных пшенично-ырейных амфидиплоидов, получаемые методом селективной элиминации облучен-ых хромосом и последующей эмбриокультуры in vitro (см. табл.1, №7), изредка (Два пучая из'68-и) обнаруживали маркерный признак пыльцевого родителя - опушен-ость колосковых чешуй, безостость. Это объясняется, по-видимому, включением |рагментов претерпевающей элиминацию ДНК опылителя в геном материнского ро-ителя в процессе редупликации хромосом в развивающемся зародыше. Отмечен и лучай возникновения химерного гаплоида (появление остистых колосьев у безостого астения), полученного на основе остистых гибридов, что связано, скорее всего, с коечной элиминацией включенного фрагмента на более поздних этапах формирования астения. Аналогичные явления нами обнаружены и у гаплоидов ячменя, полученных [етодом селективной элиминации хромосом Н. bulbosum в сочетании с эмбриокуль-урой, о чем в дальнейшем пойдет речь.

Включение в геном яйцеклетки хромосомных фрагментов опылителя в процессе елективной элиминации генетического материала последнего не вызывает сомнений. )тот процесс может происходить как при опылении облученной пыльцой, так и при пылении пыльцой отдаленных видов и родов. Последующая эмбриокультура in vitro беспечивает возможность сохранения генетической информации донора в геноме еципиента. У автономных апомиктов такое сохранение обеспечивается формирова-[ием материнского эндосперма, которое не зависит от опыления и оплодотворения торичного ядра зародышевого мешка. Однако данные К. Панди (Pandey, 1975, 1980, 983) о получении партеногенетического трансформированного потомства in vivo у (бычных сексуальных видов растений при опылении пыльцой, облученной высокими юзами радиации, без последующей эмбриокультуры являются неубедительными и ребуют дальнейших генетических и цитоэмбриологических исследований. В данном лучае остается невыясненным механизм формирования эндосперма. Наличие апо-гаксиса у исследованных К. Панди объектов могло бы послужить «ключом» к реше-(ию изложенной выше противоречивой проблемы.

Полученные нами экспериментальные данные, о которых шла речь в настоящем >азделе, позволяют предполагать, что метод селективной элиминации облученных :ромосом опылителя в гибридном зародыше с последующей эмбриокультурой in vitro южет оказаться универсальным для массового получения гаплоидов у всех видов по-;рытосеменных растений. Специфичными для разных видов будут, конечно, дозы обучения пыльцы, состав питательной среды, условия культивирования in vitro и т.п.. Три этом среда Р8 (Лукьянюк, Игнатова, 1980, 1983) без витамина Е, использованная

Технология создания гомозиготных линий и их особенности. Лучшие из полученных нами апомиктичных растений (устойчивые к полеганию и болезням) были использованы для создания гомозиготных линий. Для удвоения числа хромосом у гаплоидов наиболее эффективной оказалась обработка растений в фазе кущения через корневую систему 0,05 %-ным раствором колхицина в 2 %-ном водном растворе ДМСО, при экспозиции - 24 часа. Использование ДМСО, играющего, как известно, активную подь.в переносе колхипина через клеточные мембраны (Sanders. Hull. 1970: Савельева, 1975), позволило сократить продолжительность обработки 0,05 %-ным раствором колхицина с 48 до 24 часов. Такая обработка обеспечивала завязывание семян в изолированных колосьях в среднем у 64,9 % обработанных колхицином гаплоидов. Использование 0,05 %-ного раствора колхицина без ДМСО при той же экспозиции позволяло получать диплоидизированные ткани лишь у 31,8 % обработаных колхицином гаплоидов. Выживаемость растений в первом случае составляла в среднем 77,9 %, во втором - 86,4 %.

Исследован уровень цитогенегической стабильности - частота эуплоидных растений и количество нормальных тетрад - в первых поколениях линий гаплоидного и псевдодигоюидного происхождения. Установлено, что частота эуплоиДных растений (2п=42) в Ci диплоидизированных гаплоидов пшеницы не превышает 80,0 %, а количество нормальных тетрад - 85,3 %. В С] диплоидизированного гаплоида неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов содержится 66,7 % эуплоидных растений (2п=56) и формируется 75,1 % нормальных тетрад. Двукратный индивидуальный отбор по числу хромосом, мейозу и озерненности в С] и С2 существенно повышает уровень цитогенетической стабильности в С3. Частота эуплоидных растений в Сз линий гаплоидного происхождения пшеницы, по нашим данным, составляет не менее 96 %, а количество нормальных тетрад - не менее 93,4 %. В линии гаплоидного происхождения неполных пшенично-пырейных амфидиплидов эти показатели после двукратного отбора повысились соответственно до 88,9 и 86,2 %. Такие линии можно считать достаточно стабильными и пригодными для практических целей.

Использование псевдодиплоидных апомикгов не требует отбора и существенно облегчает процесс создания гомозиготных линий. Потомства таких растений гомозиготны и стабильны по числу хромосом уже в Si - первом поколении от самоопыления. Частота эуплоидных растений и количество нормальных тетрад в S]-S3 псевдодиплоидных апомиктов находятся на высоком уровне и существенно не меняются. Линии SrS3 псевдодиплоидных апомиктов пшеницы на 95,0-100,0 % состоят из эуплоидов и имеют 90,8-97,2 % нормальных тетрад. В SrS3 псевдодиплоидного апомикга неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов содержится 90,0-94,6 % эуплоидных растений и формируется 88,3-91,7 % нормальных тетрад.

Некоторые линии гаплоидного (ЛГП) и псевдодиплоидного (ЛПП) происхождения проявили положительные трансгрессии по отношению к лучшему родителю по диаметру стебля, элементам продуктивности и показателям главного колоса (числу и массе зерен, озерненности). При этом они отличались, как правило, высокой феноти-пической выравненностью и генетической стабильностью. Лучшие из них, а также -доноры генов карликовости, многоцветковости, скороспелости, засухоустойчивости использованы в генетико-селекционных программах НИИСХ ЦРНЗ и Института биохимической физики РАН при создании новых форм и сортов.

Получение гаплоидов на основе межсортовых гибридов ярового ячменя и их использование для создания гомозиготных диплоидных линий

Исходные растения Fi Н. vulgare, опыленные пыльцой Н. bulbosum, выращивали в естественных условиях и искусственном климате. В первом случае эксплантацию зародышей на искусственную питательную среду производили через 18-19 дней после опыления. В условиях искусственного климата опыленные растения выращивали при температуре 25-27°С, относительной влажности воздуха 70-80 %, освещенности 30-35 тыс. люкс и 18-часовом фотопериоде в течение 8-9 дней. Затем часть растений подвергали холодовой предобработке при температуре 10°С в течение 12-14 дней, а контрольные растения переносили в обычные условия (14-16° ночью, 21-23° днем). Пересадку зародышей на питательную среду в опытных вариантах производили по окончании холодовой предобработки, в контроле - через 14-15 дней после опыления. До появления проростков зародыши культивировали в темноте, а затем - на свету.

Помимо гаплоидов (см. табл.1, №7), в эмбриокультуре in vitro с различной частотой возникали гибриды (Fi Н. vulgare х Н. bulbosum). Тем не менее, идентификация гаплоидов по фенотипу не представляла никаких трудностей даже на первых этапах развития растений: гибриды с Н. bulbosum были маркированы доминантным признаком гаплопродюсера «опушенность листовых влагалищ». Выращивание межсортовых гибридов ячменя, опыленных пыльцой Н. bulbosum, при температуре 2527 С в течение первых 8-9 дней после опыления в большинстве случаев позволяло уменьшить частоту гибридов с Н. bulbosum до 0,0-1,7 %. Это подтверждает данные Р. Пикеринга (Pickering, 1984) о существовании критической стадии в развитии зародышей (Н. vulgare х Н. bulbosum), по достижении которой дальнейшее течение эмбрионального развития становится необратимым, и его данные о влиянии температуры на скорость селективной элиминации хромосом Н. bulbosum. Наряду с зелеными растениями в эмбриокультуре in vitro возникали также альбиносы и желтые растения. Количество альбиносов в разные годы варьи^ровало от 16,8 до 21,2 %, количество желтых растений не превышало 1,5-2,2 %.

Совершенствование метола Bulbosum: повышение частоты гаплоиаии с помощью генетических факторов. Полученные нами экспериментальные данные показывают что скрещиваемость межсортовых гибридов ячменя с гаплопродюсером и частота зеленых гаплоидных растений в эмбриокультуре in vitro имеют высокую ге-нотипическую обусловленность и в наибольшей степени зависят от генотипа исходного гибрида (Чистякова, 1987а, б, 1996; Чистякова, Нетгевич, Гуляев, 1990, 1994; Чистякова, Неттевич, Гуляев, Астащенко, 1991). Максимальной величины эти показатели достигают у гибридов с участием ДГ-линий ячменя, полученных ранее методом Bulbosum. Так, по данным 1986-1989 гг., скрещиваемость обычных гибридов ярового ячменя с Н. bulbosum составляла в среднем 77,8 %, гибридов, полученных с участием одной линии гаплоидного происхождения, возрастала до 83,9 %, с участием двух таких линий - до 89,4 % (табл. 7). Частота зеленых гаплоидных растений у гибридов первой группы составляла 12,5 %, у гибридов второй группы увеличилась до 23,5 %, у гибридов третьей группы - до 25,7 % от числа опыленных цветков. Процент гаплоидов от числа зародышей, эксплантированных на питательную среду, возрастал соответственно от 53,1 до 61,5 и 66,6.

Очевидно, на всех этапах работы по получению гаплоидов ячменя методом Bulbosum по этим показателям идет жесткий негативный отбор на уровне гаплоидных

1аолица /

Эффективность метода Bulbosum в зависимости от генотипа исходного гибрида Н. vulgare, 1986-1989 гг.

№ Исходная форма

п/п (гибрид р! Число Завязыва- Число % гаплоидов от числа

ярового ячменя) опылен- завязав- емостъ, экспланти- зеленых опылен- экспланти-

ных шихся % рованных гаплоидных ных рованных

цветков зерновок зародышей растений цветков зародышей

1 (Тамина х Московский 2/383) 575 412 71,6 48 16 2,8 33,3

2 (1533/75 хКМА-10) 487 381 78,2 95 36 7,4 37,9

3 (Визит х Московский 2/389) 1018 788 77,4 275 149 14,6 54,2

4 (Дина х Риск) 624 523 83,8 219 137 22,0 62,6

Сумма, х по гибридам 1-4 2704 2104 77,8 637 338 12,5 53,1

5 (Риск х ДГ 2 Н2498) 595 511 85,9 252 156 26,2 59,5

6 (Дина х ДГ 1 Н6) 663 542 81,8 246 152 22,9 61,8

7 (Московский 121 х ДГ 1 Н6) 665 489 73,5 267 184 27,7 68,9

8 (779/1 хДГ 1 Н2937) 747 697 93,3 246 136 18,2 55,3

Сумма, х по гибридам 5-8 2670 2239 83,9 1021 628 23,5 61,5

9 (ДГ 2 Н2498 х ДГ 1 Н2937) 1074 968 90,1 482 327 30,4 67,8

10 (ДГ Одесский 115 х ДГ 20Н2498) 593 550 92,8 249 138 23,3 55,4

11 (ДГ 1 Н6 х ДГ 1 Н2937) 1001 931 93,0 292 191 19,1 65,4

12 (ДГ1Н6хДГ21Н3619) 900 742 82,4 354 261 29,0 73,7

Сумма, х по гибридам 9-12 3568 3191 89,4 1377 917 25,7 66,6

гамет и зародышей. В конечном счете сохраняются генотипы, обеспечивающие высокие значения указанных параметров.

Высокая способность к гаплоидизации у внутривидовых гибридов ячменя контролируется, по всей вероятности, системой аддитивно взаимодействующих доминантных генов; их совмещение в одном генотипе вызывает эффект гетерозиса по выходу гаплоидов. В максимальной степени это проявляется у гибридов Fj от скрещивания ДГ-линий. Отсюда следует вывод о том, что частоту гаплоидов ячменя в эм-бриокультуре in vitro можно существенно повысить включением линий диплоидизи-рованных гаплоидов, полученных ранее методом Bulbosum, в новый биотехнологический цикл в качестве одного или двух компонентов скрещивания при создании исходных гибридов (Чистякова, Нетгевич, Гуляев, 1990, 1994; Чистякова, 1996, 19986). Разумеется, включение ДГ-линий в новый биотехнологический цикл имеет смысл лишь в том случае, если они обладают комплексом хозяйственно ценных признаков или несут эффективные гены устойчивости к болезням, совмещая эти характеристики с хорошей комбинационной способностью.

Производительность метода Bulbosum в значительной мере зависит и от генотипа гаплопродюсера. На способность к гаплопродукции нами испытаны 27 клонов Н. bulbosum (2п=2х=14). Наилучшей скрещиваемостью с гибридами ярового ячменя и максимальной способностью к галлопродукции обладали клоны I (Св 2929/1) и 4 (Св 2920/4) из коллекции Р. Пикеринга (табл. 8). Первое место по всем показателям занимал клон 4 (Св 2920/4). Он обеспечивал скрещиваемость с Н. vulgare (в среднем по 15-и исходным гибридам Fi) на уровне 85,8 % и частоту зеленых гаплоидных растений ячменя в эмбриокультуре in vitro на уровне 19,8 % от числа опыленных цветков и 61,4 % от числа эксплантированных зародышей. У клона I (Св 2929/1) эти параметры достигали соответственно 82,3 %, 14,9 % и 52,0 %. При использовании пыльцы других клонов завязываемость находилась в пределах 56,5-79,9 %, а частота гаплоидов не превышала 2,9-12,0 % от числа опыленных цветков и 26,6-44,1 % от числа высаженных зародышей. Следовательно, для повышения эффективности метода Bulbosum в гибридизацию с Н. vulgare необходимо включать прежде всего клоны Н. bulbosum 4 (Св 2920/4) и I (Св 2929/1), обладающие наилучшей скрещиваемостью и наибольшей способностью к гаплопродукции.

Применение фитогормонов. Частоту получаемых в эмбриокультуре гаплоидов ярового ячменя удалось повысить и с помощью разного рода внешних воздействий на растения Fj H. vulgare, опыленные пыльцой H. bulbosum. Нами испытаны различные варианты обработки опыленных колосьев фитогормонами, в сравнении с общепринятым опрыскиванием ГК (75 мг/л) через 1-2 дня после опыления. Наилучшие результаты получены при опрыскивании колосьев через один-три дня после опыления смесью ГК (75 мг/л) и 2,4-Д (100 мг/л). Трехкратная обработка опыленных колосьев смесью ГК и 2,4-Д заметно улучшала развитие зерновок, замедляла старение и отмирание зародышей. По данным 1993 г., она увеличила выход гаплоидов в среднем по семи исходным гибридам ярового ячменя на 9,2 % - от числа опыленных цветков, 9,4 % - от числа завязавшихся зерновок и 14,6 - от числа эксплантированных зародышей. Разность опытных и контрольных частот была высоко достоверной (В > 0,99-0,999). Аналогичные результаты получены и в последующие годы (1994-1995). Они полностью согласуются с данными других авторов по опрыскиванию колосьев раствором 2,4-Д (Sun, Lu, Xin, 1995) и смесью ГК и 2,4-Д (Pickering, Wallace, 1994).

Эффективность метода Bulbosum в зависимости от генотипа гаплопродюсера, 1985-1989 гг.

Клон гаплопродю- Число Завязы- Число % гаплоидов от числа

сера Н. bulbosum (2п=2х -14) опыленных цветков гибридов Б! ярового ячменя завязавшихся зерновок ва- емость, % Экспл актированных зародышей зеленых гаплоидных растений опыленных цветков эксплактированных зародышей

1 1805 1486 82,3 517 269 14,9 52,0

4 2310 1981 85,8 746 458 19,8 61,4

14 2092 1573 75,2 384 154 7,4 40,1

15 1274 1018 79,9 347 153 12,0 44.1

20 1106 625 56,5 173 68 6,2 39,3

26 1210 904 74,7 180 70 5,8 38,9

30 1095 744 67,9 192 51 4,7 26,6

32 1080 624 57,8 132 48 4,4 36,4

36 1629 1059 65,0 219 75 4,6 34,2

52 1023 597 58,4 90 30 2,9 33.3

Холодовая предобработка зародышей in vivo перед эксплантацией на питательную среду. Другой, предлагаемый нами способ повышения производительности метода Bulbosum, отличается тем, что растения Н. vulgare, опыленные пыльцой Н. bulbosum, перед эксплантацией зародышей in vitro подвергают холодовой предобработке при температуре 10°С (Чистякова, 1991, 19986; Чистякова, Попова, 1991; Чистякова, Нетгевич, Гуляев, Астащенко, 1991). Методика холодовой предобработки описана выше (в начале раздела по получению гаплоидов ячменя). Холодовая предобработка осуществляется по истечении критического периода в развитии зародышей, когда полностью завершен процесс элиминации хромосом гаплопродюсера. Она приводит с синхронизации митотических делений в клетках развивающихся зародышей, благоприятствует их дифференциации и увеличению размеров. Вследствие этого возрастает доля зародышей, способных к дальнейшему развитию и прорастанию на питательной среде. В среднем за 4 года холодовая предобработка зародышей in vivo

■ увеличила частоту гаплоидов ярового ячменя в эмбриокульутре in vitro на 10,2 % от числа опыленных цветков, 12,5 % от числа завязавшихся зерновок и 17,6 % от числа зародышей, эксплантированных на питательную среду (табл. 9). Достоверность разности опытных контрольных частот установлена нами с высшей степенью надежности (при В > 0,999) в среднем по каждому году в отдельности и суммарно по всем трем годам. Способ получения гаплоидов ячменя с использованием холодовой предобработки зародышей in vivo предложен нами впервые.

Таблица 9

Эффективность холодовой предобработки зародышей в повышении производительности метода Ви1Ьозшп, 1986-1989 гг.

Годы прове- Частота гаплоидов ярового ячменя в эмбриокультуре in vitro, % от

дения ис- числа

следований опыленных завязавшихся эксплантированных

цветков зерновок зародышей

опыт контроль опыт контроль опыт контроль

1986 11,7 3,1 15,2 4,7 38,3 17,6

1987 23,9 13,5 28,3 14,2 54,9 32.5

1988 22,0 12,6 26,7 15,0 65,8 44,4

1989 22,8 ПД 28,6 15,1 64,9 56,4

В среднем 20,5 10,3 24,9 12,4 57,8 40,2

Выход гаплоидов ячменя культурного при культивировании зародышей (Н. vulgare х Н. bulbosum) в первых опытах К. Каши и К. Као (Kasha, Као, 1970) в среднем составлял 11,0 % от числа высаженных зародышей, а в одном из лучших вариантов - 18,4 %. Позднее Н. Субраманьям и К. Каша (Subrahmanyam, Kasha, 1973) сообщили о получении 23,0 % гаплоидов от числа эксплантированных на питательную среду зародышей. П.А Дьячук с соавторами (1986) получили 21-56 %, а в отдельных случаях 73 % гаплоидов. В проработанном нами материале максимальный выход зеленых гаплоидных растений составлял 86,2 % от числа высаженных зародышей при среднем значении по всему опыту 65,8 % (данные 1988 г.).

Морфологическая характеристика экспериментально полученных гаплоидов ячменя. Гаплоиды ячменя имели те же морфологические особенности, что и описанные выше гаплоиды мягкой пшеницы и неполных пшенично-пырейных амфи-диплоидов: уменьшенные размеры всех органов, полную самостерильность и повышенную кустистость. Следует заметить, что во всех комбинациях скрещивания получены гаплоиды ячменя с положительными трансгрессиями по числу колосков в главном колосе. У гаплоидов из гибрида F! (Одесский 115 х ДГ 1362) максимальное числе колосков достигало 38, тогда как у Одесского 115 в тех же условиях оно не превышало 27, а у ДГ 1362 - 30. После удвоения числа хромосом из многоцветковых гаплоидов получены наиболее продуктивные ДГ-линии. Следовательно, предварительны? отбор на продуктивность в селекционных программах можно начинать на уровне гаплоидов, отдавая предпочтение трансгрессивным по числу колосков в главном колос< формам. По числу побегов на растение гаплоиды ярового ячменя в среднем в 2-3 раз; превышали исходные диплоиды. Среднее число побегов на растение у гаплоидов и: разных гибридных комбинаций варьировало от 23 до 31, тогда как у исходных дип , лоидов, от скрещивания которых возникли соответствующие гибриды, оно не превы

шало 8-12. При этом уровень плоидности определял, главным образом, среднюю величину данного признака. Вместе с тем его чрезвычайно высокая изменчивость у гаплоидов одной и той же гибридной комбинации (от 10 до 59, от 4 до 76, от 7 до 80 и т.д.) указывает и на его значительную генотипическую обусловленность. Поэтому отбор наиболее кустистых гаплоидов в одинаковых условиях внешней среды (а важная роль среды в становлении данного признака общеизвестна) также может быть использован для выявления наиболее ценных, уникальных комплексов генов, определяющих высокие значения получаемых трансгрессий. Большой интерес в этом плане представляет изучение корреляций различных признаков на уровне гаплоидов и дип-поидгоировашшх гаплоидов. По нашим наблюдениям, многостебельные гаплоиды были наиболее устойчивы к разного рода стрессовым воздействиям, в том числе - к колхицину, и послужили источником наиболее продуктивных гомозиготных диплоидных линий.

Улвоенпе числа хромосом у гаплоидов и создание гомозиготных диплоидных линий ярового ячменя. С этой целью в период 1983-1995 гг. обработаны колхицином 6717 гаплоидных растений ячменя. Обработку осуществляли в фазе трех листьев перед высадкой растений из пробирок в почву. Синхронизиацию клеточных делений перед колхицинированием проводили с помощью пониженных температур в течение 10-14 дней. Диплоидизировашше гаплоиды ячменя (Со), как и других изученных нами объектов, представляли собою миксоплоидные химеры. Их озерненность варьировала от единичных зерен до 100 %, и только в С] наблюдалось полное или почти полное восстановление фертильности.

Наиболее эффективным способом экспериментального удвоения числа хромосом у гаплоидов ячменя оказалось погружение растений с корнями на 3 часа в раствор 0,2 %-ного колхицина в 2 %-иом водном растворе ДМСО с добавлением папаина

- 0,02 % или пара-аминобензойной кислоты (ПАБК) - 0,02 %. Выживаемость растений после обработки колхицином в этих вариантах составляла 78,6 и 83,4 % (в контроле -71,8 %). Частота диплоидизированных гаплоидов от числа обработанных колхицином растений соответствовала 61,0 и 66,1 % (против 52,8 % - в контроле). Очевидно, добавление в 0,2 %-ный раствор колхицина 0,02 % папаина или ПАБК при обработке гаплоидов ячменя ослабляет повреждающее действия колхицина, повышая выживаемость гаплоидов и частоту их диплоидизации. Защитный эффект ПАБК при обработке гаплоидов колхицином связан, по-видимому, с ее способностью оказывать репара-генное действие на генетический аппарат (Рапопорт, Васильева, Давниченко, 1979) и хлоропласта клетки (Белецкий, Прихоженко, Сизова, 1986), снижать уровень повреждения хромосом (Шнайдер, Прийлшш, Тохвер и др. 1988) и повышать адаптивные свойства растений (Эйгес, 1989). Положительное влияние папаина при обработке колхицином гаплоидов ячменя, возможно, имеет аналогичную природу. Однако его защитный эффект по всем показателям слабее, чем эффект ПАБК.

При обработке гаплоидов ячменя путем вакуум-инфильтрации целесообразно использовать 0,15 %-ный раствор колхицина в 2 %-ном водном растворе ДМСО. Применение 4 %-ной концентрации ДМСО, которую рекомендуют С.Ф. Лукьяшок и С.А. Игнатова (1980, 1983), оказывает, по нашим данным, слишком сильное токсическое действие, снижая выживаемость растений на 5,7 %, а частоту их диплоидизации

- на 15,1 % от числа обработанных колхицином гаплоидов. Следует заметить, что все указанные параметры в значительной степени зависели от генотипа гаплоидов. Так, при удвоении числа хромосом с помощью 0,15 %-ного раствора колхицина в 2 %-ном водном растворе ДМСО выживаемость гаплоидов в зависимости от генотипа ис-

ходного гибрида р! варьировала от 68,2 до 80,7 %. Частота диплоидизации от числа обработанных колхицином гаплоидов колебалась при этом от 46,2 до 65,2 %.

Линии диплоидизированных гаплоидов ярового ячменя: морфобиологическая характеристика и значимость для генетико-селекционных программ

За период 1983-1998 гг. нами, совместно с отделом селекции яровых зерновых культур (Э.Д. Нетгевичем, Л.М. Молчановой, В.П. Смолиным) были изучены и оценены по хозяйственно важным признакам 2797 линий диплоидизированных гаплоидов ячменя. Лучшие линии были использованы далее в генетико-селекционных программах НИИСХ ЦРНЗ и других научных учреждений России: Владимирского и Красноярского НИИСХ, Рязанского НИИПТИ АПК, Курского НИИ АПП, НПО «Нива Татарстана» и др..

Степень гомозиготности экспериментально полученпых ДГ-линий ячменя. Частично озерненные колосья обработанных колхицином гаплоидов С0 нередко различались в пределах одного и того же растения не только по числу зерен, но и другим признакам: длине колоса, числу колосков, плотности колоса и т.п.. Однако, анализ С] и С2 диплоидизированных гаплоидов по морфологическим и фенологическим признаками, элементам продуктивности, массе зерна с 1 м2, содержанию белка и лизина в зерне, устойчивости к полеганию и болезням (пыльной головне, мучнистой росе и разного рода пятнистостям)* показал, что потомство каждого гаплоидного растения представляет собой генетически однородный, гомозиготный материал и характеризуется высокой фенотипической выравненностью (Чистякова, Молчанова, 1985). Потомства разных колосьев диплоидизированного гаплоида не имели достоверных различий ни по одному из исследованных признаков. Вариабельность частично озер-ненных колосьев отдельных гаплоидов Со по всем параметрам носила характер мор-фозов и не наследовалась. Хлорофильные мутации, возникшие под действием колхицина и обнаруженные нами в Со и Сх с частотой 0,6-1,7 %, оказались летальными и не нарушали генотипической и фенотипической однородности ДГ-линий.

, Четко выраженная гомозиготность ДГ-линий выявлена и в последующих поколениях по всем изученным признакам, включая спектр гордеионов (Неттевич, Смолин, Молчанова, Чистякова, Погорелова, 1993). Электрофоретический анализ 500 ДГ-линий показал, что каждая из них имеет только один спектр гордеинов А, Вир. При этом лишь некоторые линии сочетали компоненты гордеинов А, В и Б обеих родительских форм, участвовавших в происхождении исходных гибридов Большая же часть ДГ-линий имела формулу гордеинов, типичную для одной из родительских форм (Неттевич, Молчанова, Чистякова и др., 1989). Не исключено, что рекомби-нантные по данному признаку линии представляют для селекции наибольшую ценность. Вполне возможно, что они обладают большей продуктивностью и экологической пластичностью. Изучение такого рода корреляций представляет несомненный интерес.

Генетико-селекционное использование ДГ-линий: линии диплоидизированных гаплоидов в качестве новых сортов. Жесткий отбор в популяциях ДГ-линий ячменя, полученных на основе внутривидовых гибридов Б], по продуктивности, __

* Фенологические наблюдения, учеты анализы и оценки проводили в соответствии с «Международным классификатором рода Ногёеит Ь.» (1983).

стой'швости к полеганию и пыльной головне Ustilago nuda Kell.et Sw. проводили же в С). В дальнейшем внимание акцентировали на оценке продуктивности, пла-тичности и устойчивости к болезням, в том числе к листостебелышм: мучнистой рое Erisiphe graminis f. sp. hordei Em. Marchai, сетчатой пятнистости Pyrenophora teres )rechs. и др.. Оценку линий диплоидизированных гаплоидов на устойчивость к пыль-юй головне и мучнистой росе проводили на фоне искусственного заражения популя-(иями патогенов. Эффективность заражения контролировали по эталонным для мест-[ых условий сортам-индикаторам.

Лучшие по всем селектируемым признакам ДГ-линии С2 (приблизительно 'А от тела линий СО изучали далее на более крупных делянках (3-5 м ). Особое внимание >бращали при этом на стабильность урожайности. Лучшие ДГ-линии уже на первых тапах селекционной работы испытывали параллельно в двух пунктах: НИИСХ ЦРНЗ i Рязанском НИИПТИ АПК. На заключительных этапах селекции на протяжении рех лет их оценивали в конкурсном сортоиспытании на делянках 12 м2 при четырех-ратной повторности. По данным отдела селекции яровых зерновых культур НИИСХ Ц'НЗ, в конкурсное сортоиспытание включали в среднем 5,2 % изучаемых линий при ;арьировании по годам (1983-1995) от 0 до 23 %.

Результаты параллельной оценки в конкурсном испытании НИИСХ ЦРНЗ и Ря-анского НИИПТИ АПК двух линий диплоидизированных гаплоидов приведены i таблице 10. Урожайность линии ДГ 1325, в родословную которой входят сорта За-ерский 85 и Первенец, в благоприятный 1986 г. в Рязанском НИИПТИ АПК была на

Таблица 10

Урожайность линий диплоидизированных гаплоидов ярового ячменя при оценке в двух пунктах, т/га

Линия, сорт НИИСХ ЦРНЗ Рязанский НИИПТИ АПК

1986 г. 1987 г. 1988 г. 1986 г. i 1987 г. 1988 г.

IX 1325 4,37 5,92 3,50 8,41 7,65 4,68

\Т 1421 4,79 8,00 3,47 9,36 9,63 6,08

!азерский 85 4,94 6,89 3,95 8,67 8,47 5,56

1осовский 9 (ст.) 4,64 7,53 3,60 - - -

Московский 2 (ст.) - - - 8,40 9,14 6,16

НСРо.» 0,65 0,55 0,25 0,53 0,35 0,46

ta уровне лучших стандартных сортов и достигала 8,41 т/га. Однако линия «проигры-,ала» по стабильности урожайности, обладая при этом иммунитетом к пыльной го-:овне и мучнистой росе и высокой устойчивостью к полеганию. Более высокую и табильную урожайность проявила линия ДГ 1421, в происхождении которой участ-овали сорта Московский 2 и Боратинский. Преимущество этой линии в обоих пунк-

тах состояло также в меньшей поражаемое™ разного рода листовыми пятнистостями и неполегаемости. В конечном счете она стала сортом Биос-1.

Сорт ярового ячменя Биос-1 выведен НИИСХ ЦРНЗ совместно с Рязанским НИИПТИ АПК и ВНИИ сельскохозяйственной биотехнологии за 5 лет, включая создание исходного гибрида F¡ (Боратинский х Л. 5343), опыленного затем пыльцой га-плопродюсера Н. bulbosum. Это сорт интенсивного типа с потенциалом урожайности до 8 т/га, среднеспелый, устойчивый к полеганию. От поражения пыльной головней защищен эффективным геном Run 15. Мучнистой росой и листовыми пятнистостями поражается средне и слабо - на уровне стандартных сортов. Сорт принадлежит к разновидности nutans. Обладает хорошими пивоваренными, крупяными и кормовыми качествами зерна. Электрофоретическая формула гордеина - А2 В8 F2. Биос-1 - первый в Российской Федерации сорт ярового ячменя, созданный с участием прикладной генетики (метода диплоидизированных гаплоидов) и прикладной биотехнологии (метода Bulbosum).

Другой сорт ярового ячменя, созданный за 7 лет НИИСХ ЦРНЗ совместно с НПО «Нива Татарстана» при использовании гаплоидии и биотехнологии, - Рахат. Это ДГ-линия 33 Н508, полученная нами на основе гибрида F¡ (Визит х ДГ 1 Н6), опыленного пыльцой Н. bulbosum. Линия ДГ 1 Н6 была получена ранее таким же путем от скрещивания {(Дефрах ДГ 1325) F! х Н. bulbosum}, а ДГ 1325, о которой уже шла речь выше, - от скрещивания {(Первенец х Зазерский 85) F, х Н. bulbosum 1. Рахят-сорт интенсивного типа с потенциалом урожайности до 7-8 т/га, среднеспелый, устойчивый к полеганию. Обладает генетической защитой от поражения пыльной головней - геном Run 8. Листостебельными болезнями поражается слабо. Относится к разновидности nutans. Имеет зерно с хорошими пивоваренными свойствами. Электрофоретическая формула гордеина Al 8 В66 F1. Сорт Рахат обладает достаточно широкой адаптивностью и не уступает стандартным сортам в самых различных природных и почвенно-климатических условиях (табл. 11).

Таблица 11

Урожайность сортов ярового ячменя, полученных с применением гаплоидии

и биотехнологии, в трех пунктах экологического испытания, 1998 г.

Урожайн ость, т/га

Сорт НИИСХ ЦРНЗ ± к среднему стандарту Рязанский НИИПТИ АПК + к среднему стандарту Владимирский НИ ИСХ ± к среднему стандарту

Рахат 5,43 + 0,52 8,59 +1,53 6,14 +0,98

Эльф 5,20 +0,29 8,46 +1,40 5,83 +0,67

Суздалец 4,91 0,0 7,79 +0,73 5,35 +0,19

Средний стандарт Зазерский 85 4,91 7,06 5,16

HCPf)9S 0,48 0,60 0,49

Необходимо иметь в виду, что получаемые in vitro гаплоиды и производные от их гомозиготные диплоиды при выращивании в искусственном климате не испыты-цот давления отбора местных почвенно-климатических и других природных факто-эв. В связи с этим большой практический интерес представляет их использование в ^лекционных программах экологически различных регионов страны. В условиях сономического и финансового кризиса, когда создание новых ДГ-линий во многих аучных учреждениях России стало проблематичным, целеобразна повторная селек-ионная проработка созданного в предыдущие годы материала с учетом его адаптив-ости и стабильности урожая в широком диапазоне условий возделывания. Однако, 1 стелю оценки и полевых испытаний линий диплоидизированных гаплоидов требует ^щественной корректировки. Чрезмерная растянутость этого процесса, как и неадек-шшй выбор критериев отбора, резко снижают преимущества селекционного ис-ользования гаплоидии.

Линии диплоидизированных гаплоидов как доноры хозяйственно ценных ризнаков. В наибольшей степени созданные нами ДГ-линии используются в каче-гве исходного материала для гибридизации, совмещающего высокую продукгив-ость, неполегаемость, скороспелость и другие ценные признаки с комплексной ус-зйчивостью к наиболее вредоносным болезням: пыльной головне, мучнистой росе и ззного рода пятнистостям. Доля селекционного материала, полученного с участием Г-линий ячменя, в отделе селекции яровых зерновых культур НИИСХ ЦРНЗ (табл. 2) уже к 1988 г. возросла среди гибридных популяций до 81 %, селекционного пи-эмника первого года - до 68 %, селекционного питомника второго года - до 51 %, энкурсного сортоиспытания - до 22 % (Нетгевич, Молчанова, Чистякова и др., Э89).

Таблица 12

Использование линий диплоидизированных гаплоидов в качестве

исходного материала в селекции ярового ячменя в НИИСХ ЦРНЗ

Показатель 1986 г. 1987 г. 1988 г.

бьем прорабатываемого селекционного атериала (число номеров): Гибридные популяции 190 162 113

Селекционный питомник 1-го года 3200 5320 3040

Селекционный питомник 2-го года 200 - 331 344

Конкурсное сортоиспытание 28 30 45

том числе - с участием в скрещиваниях Г-линий: Гибридные популяции 75 11 92

Селекционный питомник 1-го года 480 2020 2080

Селекционный питомник 2-го года 4 65 176

Конкурсное сортоиспытание 3 9 10

Как показали наши исследования, быстрое создание ДГ-линий, обладающи) высокой продуктивностью, неполегаемостью и комплексной устойчивостью к болез ням, позволяет в значительной мере опередить формообразовательный процесс в по пуляциях патогенов и облегчить выведение сортов традиционными методами селек ции на основе полученных доноров. За период 1985-1998 гг. в отделе селекции яро вых зерновых культур НИИСХ ЦРНЗ в гибридизации с другими сортами и формам! использованы более 50-и гомозиготных линий гаплоидного происхождения. В от дельные годы (1989, 1992, 1993) в скрещиваниях участвовали по 12-15 наиболее цен ных по комплексу хозяйственно важных признаков и устойчивости к болезням ДГ линий. В результате НИИСХ ЦРНЗ совместно с другими научными учреждениям) РФ выведены высокопродуктивные, толерантные к патогенам сорта ярового ячменя Рамос, Суздалец и Эльф. Сорта Суздалец и Эльф обладают к тому же и широко] адаптивностью Урожайность этих сортов в трех пунктах экологического испытани (1998 г.) представлена в таблице 11. Из нее видно, что сорт Эльф превысил по уро жайности средний стандарт в двух пунктах экологического испытания, а Суздалец -: одном, оказавшись в остальных пунктах - на уровне среднего стандарта.

Следует заметить, что в родословной четырех указанных выше сортов: Рахат Рамос, Суздалец и Эльф - присутствует гомозиготная диплоидная линия ДГ 1325 (си ноним ДГ 2 Н2498). Это один из лучших доноров, который на протяжении шести ле наиболее широко использовался в генетико-селекционных программах НИИСХ ЦРН при создании гибридов Fi для получения новых линий диплоидизированных гаплои дов ячменя и проработки гибридных популяций по методу педигри. ДГ-линия 132 объединяет в себе целый комплекс хозяйственно важных признаков: высокую про дуктивность, неполегаемость, устойчивость к пыльной головне (несет ген Run 8) i мучнистой росе - с высокой сортообразующей способностью. Она получена нами ме тодом Bulbosum на основе гибрида F] (Первенец х Зазерский 85). Причем, ни один и исходных сортов не обладал полной резистентностью к мучнистой росе: сорт Перве нец в условиях Центра Нечерноземья относится к группе сравнительно устойчивы сортов, а Зазерский 85 - сильно восприимчивых. Вероятнее всего, что резистентност к мучнистой росе у ДГ 1325 происходит от использованного в качестве гаплопродю сера клона Н. bulbosum, абсолютно иммунного к данному патогену. Косвенным дока зательством интрогрессии генетического материала гаплопродюсера Н. bulbosum геном ДГ-линии 1325 может служить и тот факт, что по формуле гордеина она отли чается от обоих исходных сортов: в локусе F у данной линии присутствует новы; компонент.

Ишрогрессия генетического материала Н. bulbosum L. (2п=2х=14) в геном Н vulgare L. (2п=2х=14) происходит, по всей вероятности, в процессе селективной эли минации хромосом гаплопродюсера в гибридном зародыше. В отдельных случая: фрагменты претерпевающих элиминацию хромосом Н. bulbosum включаются, по видимому, в геном Н. vulgare и возникают гаплоиды Н. vulgare с признаками Н. bulbo sum. Это происходит, очевидно, на молекулярном уровне - в процессе редупликаци: хромосом в клетках развивающегося зародыша. Эмбриокультура in vitro обеспечивае возможность сохранения полученной информации и передачи ее потомству. Наряду интрогрессией гена резистентности к мучнистой росе от Н. bulbosum в геном гаплои дов Н. vulgare включались, как мы предполагаем, и другие гены, детерминирующи распластанный тип куста у молодых растений, опушенность листовых влагалин озимый тип развития и отсутствие остей. Гаплоиды Н. vulgare с одним из указанны:

1ше признаков Н. ЬиНэоБит в проработанном нами материале встречались с частой 0,1-0,3%.

Способ определения рскомбипапиопиой способности и селекционной пеп-1сти исходных Форм ячменя на основе гаплоидии. Известно, что правильный 1бор исходного материала - это «отправной пункт» селекционного процесса, опре-ляющий в значительной мере конечный результат. Необходимо, чтобы скрещиваете сорта не только дополняли друг друга по комплексу хозяйственно важных при-аков, но и обладали хорошей рекомбинационной способностью. Рекомбинацион-ле возможности исходных форм - чрезвычайно важный показатель, который необ-(димо учитывать при подборе родительских пар для скрещивашш (Жученко, Ко-шь, 1985). Овладение рекомбинационным процессом, эксперимецтальное регулиро-ние частоты и спектра генетических рекомбинантов позволяют поднять на качест-нно новый уровень эффективность всей комбинационной селекции.

Выявление форм с высокой рекомбинационной способностью представляет со->й весьма сложную задачу и связано с большим объемом многолетних исследова-ш. Цель разработанного нами способа (Неттевич, Чистякова, Смолин и др., 1993, >97) состоит в ускорении и упрощении этого процесса и повышении точности полу-емой информации. Поставленная цель достигается тем, что определение рекомби-щионной способности и селекционной ценности компонентов скрещивания прово-т по индексу интегральной оценки продуктивности линий диплоидизированных га-юидов ячменя, созданных на основе гибридов Б,, и частоте передачи линиям важ-:йших хозяйственных и биологических признаков. Потомства диплоидизированных помощью колхицина гаплоидов ячменя (ДГ-лишш) каждой комбинации скрещива-и высевают в поле на шестирядковых делянках, длиною в один метр при норме вы-ва 300 зерен на м2. Сравнение ведут с исходными формами и стандартными сорта-1. Фенологические наблюдения, учеты, оценки, анализы; проводят по общепринятым ттодикам. Устойчивость к пыльной головне и мучнистой росе выявляют при искус-венном заражении популяцией патогена. ........

Рекомбинационную способность и селекционную ценность исходных форм по шзнаку «продуктивность» определяют по индексу интегральной оценки, который ссчитывают как средний показатель продуктивности линий диплоидизированных плоидов конкретной гибридной комбинации относительно лучшего родителя и андартного сорта. Индекс интегральной оценки продуктивности (ИИОП) вычисля-г по формуле: _

х,+ х2

ИИОП =---------------, где

2

- средняя продуктивность гомозиготных диплоидных линий конкретной комбина-ш скрещивания относительно (в %) лучшей родительской формы; :2 - средняя продуктивность гомозиготных диплоидных линий конкретной комбина-[И скрещивания относительно (в %) стандартного сорта.

В соответствии с «Международным классификатором СЭВ рода Ногскит Ь.» 983) значения ИИОП > 135,0 % считают очень высокими; 115,1-135,0 % - высоки-1; 105,1-115,0 % - хорошими; 95,1-105,0 % - средними; 85,1-95,0 % - ниже среднего; ,0-85,0 % - низкими; < 65,1 % - очень низкими. При выявлении рекомбинационной особности и селекционной ценности по признаку «устойчивость к пыльной голов» принимают во внимание соотношение иммунных и восприимчивых линий в каж-|й гибридной комбинации. Частоту иммунных линий в 50 % и более считают пока-

зателем высокой рекомбинационной способности и селекционной ценности, в 40-49 % - хорошей, в 30-49 % - средней и менее 30 % - низкой. Аналогичным образом оценивают рекомбинационную способность и селекционную ценность компонентов скрещивания по длине вегетационного периода и другим количественным и качественным признакам.

Использование разработанного способа выявления рекомбинационной способности и селекционной ценности исходных форм ячменя в конкретных селекционных программах можно продемонстрировать на следующих примерах. Проведена оценка продуктивности 404 линий диплоидизированных гаплоидов 14 комбинаций скрещивания. Средняя продуктивность линий каждой гибридной комбинации относительно лучшего родителя и стандартного сорта Зазерский 85 представлена в таблице 13. Она варьировала от 67 до 152 % относительно лучшего родителя и от 85 до 179 % относительно стандартного сорта. На основании этих данных рассчитан индекс интегральной оценки продуктивности, который в зависимости от комбинации скрещивания колебался от 81 до 165 %. Частота высокопродуктивных линий в разных комбинациях скрещивания варьировала от 0 до 21 %. Наибольшей величины она достигала в комбинации (Дина х JI. 86), которая характеризовалась очень высоким индексом интегральной оценки, составлявшим 165 %. Заслуживает внимания и тот факт, что в потомстве данного гибрида получены максимальные трансгрессии по продуктивности: средняя продуктивность ДГ-линий по отношению к лучшему родителю достигала 152 %. В комбинациях с высоким индексом интегральной оценки продуктивности (126133 %) высокопродуктивных линий было 15,8 %. Комбинации с хорошим и средним индексом интегральной оценки продуктивности (100-109 %) имели в среднем 10,2 °/с высокопродуктивных линий. В комбинациях с уровнем индекса интегральной оценки продуктивности ниже среднего и низким выход высокопродуктивных линий не превышал 1,7 %. Приведенные данные свидетельствуют о том, что между индексом интегральной оценки продуктивности линий диплоидизированных гаплоидов ячменя и частотой высокопродуктивных линий в той или иной гибридной комбинации существует довольно тесная положительная корреляция. Следовательно, данный показатель можно считать надежным критерием рекомбинационной способности и селекционной ценности компонентов С1фещивания при внутривидовой гибридизации ячменя. С учетом индекса интегральной оценки продуктивности можно заключить, что хорошей рекомбинационной способностью и селекционной ценностью по признаку «продуктивность» обладают: сорта Дина, линии 87 и 927, линии диплоидизированных гаплоидов ДГ 5 и ДГ 24. Во всех случаях гомозиготные линии гаплоидного происхождения, полученные с участием в скрещиваниях указанных форм, имели индекс интегральной оценки продуктивности более 95 %.

Оценку рекомбинационной способности и селекционной ценности компонентов скрещивания по устойчивости к пыльной головне и другим патогенам проводят на основании частот передачи этого признака линиям диплоидизированных гаплоидов ячменя данной гибридной комбинации. У использованных нами исходных родительских форм устойчивость к пыльной головне контролируется одним доминантным геном - Run 8 или Run 15. В потомстве от скрещивания устойчивых ( R ) и восприимчивых ( S ) форм теоретически ожидаемое соотношение гомозиготных диплоидных линий должно соответствовать в абсолютных значениях - 1 Run 8 Run 8 : 1 run 8 run 8 или 1 Run 15 Runl5 : 1 run 15 run 15, в процентах - 50 % Run 8 Rim 8 : 50 % run 8 run 8 или 50 % Run 15 Run 15 : 50 % run 15 run 15. Однако фактически наблюдаемое соотношение доминантных и рецессивных гомозигот в разных комбинациях скрещивания.

Результаты оценки рекомбинационной способности и селекционной ценности исходных форм ярового ячменя по продуктивности с использованием линий диплоидизированных гаплоидов, 1992 г.

Комбинации скрещивания (гибрид F[ ярового ячменя) Изучено линий диплоидизированных гаплоидов Количество высокопродуктивных линий, % Средняя продуктивность линий относительно (%) Индекс интегральной оценки продуктивности, %

лучшего родителя стандартного сорта

Динах ДГ 21 38 13 79 121 100

Дина х Л. 86 19 21 152 179 165

Дина х Риск 18 17 98 154 126

Динах J1. 1542 29 17 110 157 133

Визит х Л. 86 17 0 92 85 88

Визит х Л. 927 35 20 88 130 109

Визит х Л. 1542 24 • 4 67 95 81

Л. 87 х ДГ21 50 14 86 166 126

Л. 87 х Л. 86 44 9 95 118 106

ДГ5 х ДГ21 40 2 89 123 106

Л.86 х ДГ 21 20 0 88 89 88

ДГ 24 х Л. 86 27 15 101 161 131

Oboe х Московский 3 29 3 72 103 87

ВГ - 1 х Л. 927 14 7 91 113 101

Таблица 14

Характер наследования устойчивости к пыльной головне линиями диплоидизированных гаплоидов ярового ячменя, созданными на основе гибридов Б) различных комбинаций скрещивания, 1992 г.

Комбинация скрещивания (гибрид F[ ярового ячменя) Генетические особенности исходных родительских форм по признаку «устойчивость к пыльной головне» Получено гомозиготных диплоидных линий Соотношение устойчивых и восприимчивых линий (R: S) Частота устойчивых линий, %

устойчивых восприимчивых фактически наблюдаемое теоретически ожидаемое

Динах ДГ 21 в х Я (Яип 15) 22 16 1,4 1 1 1 58

Дина х JI. 86 Б х II (Кип 15) 14 5 2,8 1 1 1 74

Динах Л. 1542 Б х Я (Яип 15 или Кип 8) 36 14 2,6 1 1 1 72

Визит х Л. 86 8хЯ(Кип15) 8 9 0,9 1 1 1 47

Визит х Л. 927 Б х Я (Яип 8) 15 21 0,7 1 1 1 42

Визит х Л. 1542 в х Я (Яип 15 или Яип 8) 13 12 1Д 1 1 1 52

ДГ5хДГ21 8хЯ(Яип 15) 26 15 1,7 1 1 1 63

ДГ 24 х Л. 86 Б х II (Яип 15) 18 9 2,0 1 1 1 67

Oboe х Московский 3 Б х К (Лип 15) 18 13 1,4 1 1 1 58

о нашим данным, может колебаться от 0,7 : 1 до 2,8 : 1 (табл. 14). Частота устойчи-ых линий в потомстве от скрещивания устойчивых и восприимчивых родителей на-одилась в пределах 42-74 %, что свидетельствует о хорошей рекомбинационной спо-обноста и селекционной ценности исходных форм по признаку «устойчивость к ыльной головне». В семи случаях из девяти частота устойчивых линий превышала О %. Преобладание иммунных линий в большинстве гибридных комбинаций можно бъяснить тремя причинами: селективной элиминацией гамет, обладающих рецессив-ыми генами восприимчивости к пыльной головне; сцеплением генов, детермини-ующих устойчивость к U. nuda и высокую склонность к гаплоидизации с последующей диплоидизацией зародышей (Н. vulgare х Н. bulbosum); плейотропным действием ¡.un - генов на способность зародышей к гаплоидизации и последующей диплоидиза-;ии.

Рекомбинационную способность и селекционную ценность компонентов скрещивания по длине вегетационного периода оценивают в потомстве габридов от скрещивания скороспелых сортов с формами, созревающими на 7-13 дней позднее. По [ашим данным, использование в гибридизации скороспелого сорта ячменя Дина по-воляет получать 47-61 % линий диплоидизированных гаплоидов, созревающих одно-ременно с этим сортом (табл. 15). Наряду со скороспелыми получено также 30-42 % [иний промежуточного типа и 2-23 % линий позднеспелого типа. Приведенные дан-ше свидетельствуют о хорошей рекомбинационной способности и селекционной (енности сорта ячменя Дина по признаку «скороспелость».

Предложенный способ определения рекомбинационной способности и селек-(ионной ценности исходных форм ячменя с использованием гаплоидии позволяет: ¡ыявить рекомбинационную способность и селекционную ценность компонентов крещивания за 2-3 года; резко сократить объем изучаемых линий (до V п, где п - чис-[о линий, подвергаемых испытанию при обычных методах селекции); существенно ювысить точность оценки. Его использование облегчает селекционный процесс, по-;ышает точность подбора родительских пар для скрещивания и ускоряет сроки выве-(ения новых сортов на 4-5 лет. Способ надежен и хорошо воспроизводим, что иод-верждают результаты изучения одного и того же материала в разные по условиям оды, а также - многолетний анализ итогов селекционной работы.

Таблица 15

Распределение линий диплоидизированных гаплоидов ячменя по длине вегетационного периода, 1991-1992 гг.

Комбинация скрещивания (гибрид Fi ярового ячменя) Частоты Классов по группам спелости, %

Скороспелая промежуточная позднеспелая

|инах ДГ21 47 30 23

}ина х JL 86 61 33 5

1инахЛ. 1542 56 42 2

Заключение

Осуществление настоящей работы было вызвано запросами селекции. Выпол-шя заказ селекции, мы вышли на научно-методические разработки и теоретические >бобщения по гаплоидии у неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов, мягкой

пшеницы и ячменя культурного. При этом возникла необходимость уточнения и доработки общей методологии использования гаплоидии для геномного анализа и решения самых разнообразных генетических и селекционных проблем. Наглядно продемонстрировано, что привлечение биотехнологии, в частности - эмбриокультуры in vitro, многократно повышает частоту получаемых гаплоидов. С внедрением методов прикладной биотехнологии в значительной степени связан прогресс и в области гене-тико-селекционного использования гаплодии. 7

Экспериментальная гаплоидия особенно интенсивно применяется в селекции ячменя. На территории бывшего СССР практически значимые результаты ее использования с выходом новых сортов получены во Всесоюзном селекционно-генетическом институте (Наволоцкий, Сечняк, Лукьянюк и др., 1985; Наволоцкий; 1995), НИИСХ ЦРНЗ (Нетгевич, Молчанова, Чистякова и др., 1989; Чистякова, Нет-тевич, Молчанова и др., 1993; Нетгевич, Чистякова, 1998; Чистякова, Нетгевич, Смолин, 1998) и НИИСХ Северо-Востока им. Н.В. Рудницкого (Родин, Родина, Сюткиш и др., 1995). По нашим данным, для ярового ячменя метод Bulbosum достаточно технологичен и приемлем в плане селекционного использования. К такому же вывод) пришли Дж. Снейп и И. Симпсон с соавторами (Snape, Simpson, 1986), анализируй различные технологии получения гаплоидов. Для многорядного и озимого ячменя возможно, более перспективным окажется метод пыльниковых культур. Для неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов, мягкой пшеницы и многих других растений (автогамных и ксеногамных) большой интерес, на наш взгляд, представляет ме тод получения гаплоидов на основе селективной элиминации облученных хромосом i гибридном зародыше с последующей эмбриокультурой in vitro.

Линии диплоидизированных гаплоидов всех изученных нами объектов облада ют, как правило, наследственно обусловленной склонностью к гаплоидии. Их вовле чение в новый цикл получения такого рода форм в качестве компонентов скрещива ния при создании исходных гибридов F] существенно облегчает дальнейшую работ; по получению новых гаплоидов. В процессе получения гаплоидов разных видов и ро дов, независимо от способов индуцирования гаплоидии, происходит, по-видимому отбор однотипных генов, контролирующих высокую способность к гаплоидизацш (деполиплоидизации). Однотипность характера генетической детерминации гагоюдш у представителей различных таксономических групп покрытосеменных, как и широ кая распространенность гаплоидии в растительном мире - яркое подтверждение уни версальности закона гомологических рядов в наследственной изменчивости, сформу лированного Н.И. Вавиловым (1920). Другое доказательство этой общебиологичесмм закономерности - параллелизм в изменчивости признаков при смене уровней плоид ности у представителей разных видов и родов, в том числе - у неполных пшенично пырейных амфидиплоидов (8х -> 4х -> 8х), мягкой пшеницы (6х -» Зх 6х) и ячме ня (2х -> х -> 2х), связанный с кратным изменением дозы генов, хромосом и геномов

Осповные выводы

I 1. В процессе экспериментального получения, генетического, цитогенетическо го и селекционного изучения гаплоидов и созданных на их основе гомозиготных ли ний разработаны теоретические, научно-методические и прикладные основы исполь зования гаплоидии как средства интенсификации генетико-селекционных программ трех видов зерновых злаков: неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов Т. agre pyrotriticum Cicin (2п=8х=56), мягкой пшеницы Т. aestivum L. (2п=6х=42) и ячмен культурного Н. vulgare L. (2п=2х=14). Сформулирована общая методология использс

шия гаплоидии, разработаны и усовершенствованы способы получения гаплоидных 1стений и их диплоидизации, созданы гомозиготные линии, которые прорабатывался в разных звеньях селекционного процесса НИИСХ ЦРНЗ, Института биохими-;ской физики Российской Академии Наук, Владимирского и Красноярского НИ-СХ, Рязанского НИИПТИ АПК, Курского НИИ АПП, НПО «Нива Татарстана» и эугих научных учреждений страны.

2. Исследование мейоза у гаплоидов позволило уточнить геномную структуру входных форм неполных 56-хромосомных пшенично-пырейных амфидиплоидов, $учить систему генетической регуляции мейоза у этих форм и выявить механизмы ормировалия у гаплоидов нередуцироваппых микроспор.

2.1. Конъюгация хромосом в мейозе гаплоидов неполных пшенично-пырейных лфвдиплоидов находится на уровне межгеномной конъюгации хромосом гаплоидов ягкой пшеницы. На основе полученных данных и современных представлений об ггоаллоплоидной природе А. glaueum - syn. А intermedium (2п=6х=42) и А. elongatum :п=10х=70) предложены формулы для обозначения геномной структуры неполных ленично-пырейных амфидиплоидов (2п=8х=56). Геномная структура 56-эомосомных амфидиплоидов промежуточно-пшеничной подгруппы, возникших в ззультате гибридизации Т. aestivum с А. glaueum, обозначена формулой ABDE. При -ом допускается, что амфидиплоиды могут различаться по составу хромосом доба->чного генома пырея и степени замещения хромосом пшеницы пырейными хромо->мами. Геномная структура неполного амфидиплоида, полученного при участии А. ongatum, обозначена формулой ABDF.

2.2. Образование бивалентов и тривалентов у гаплоидов неполных пшенично-■лрейных амфидиплоидов происходит в основном за счет конъюгации гомеологич-ых хромосом Т. aestivum. Добавочные геномы пырея Е и F не обнаруживают замет-ш гомологии с геномами мягкой пшеницы. Для передачи пшенице «пырейных» шзнаков в скрещиваниях с неполными пшенично-пырейными амфидиплоидами [едует идти по пути получения нерегулярных рекомбинаций типа транслокаций.

2.3. Распределение частот всех типов хромосомных ассоциаций у большинства ялоидов подчиняется закону Пуассона и служит критерием эффективности Ph -1стемы хромосомы 5В мягкой пшеницы, ограничивающей гомеологичную конъюга-оо у неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов. Тем не менее хромосомы пы-:я оказывают некоторое дестабилизирующее влияние на процесс генетической регу-гции мейоза в гемизиготном состоянии, слегка ослабляя функцию 5В-хромосомы. бнаружена закономерность: чем больше пырейных признаков в фенотипе исходного 1фидиплоида, тем выше конъюгация хромосом у гаплоида.

2.4. Первое деление мейоза у гаплоидов неполных пшенично-пырейных амфи-шлоидов может проходить не только по типу редукционного, но и семигетеротип-)го, и псевдогомеотипного. Последние служат источником нередуцированных га-гт. Способность к мейотической реституции контролируется генотипом гаплоида и эжет рассматриваться как адаптивный механизм, обеспечивающий возможность се-гнного размножения.

3. Разработан метод ускоренной стабилизации генотипов в потомстве внутри-[довых гибридов мягкой пшеницы и неполных пшенично-пырейных амфидиплои->в, включающий способы получения гаплоидов и гомозиготных диплоидов у гибри->в Fi, методику их идентификации и технологию создания гомозиготных линий.

3.1. Предложены способы индуцирования гаплоидии на основе нерегулярного юмиксиса. Выявлена способность обоих видов: Т. aestivum L. и Т. agropyrotriticum ein к индуцированному апомиксису менторального (псевдогамного) типа. Способ-

ность к автономному апомиксису у всех исследованных гибридов отсутствует. Установлено, что, наряду с гаплоидами, при индуцировании апомиксиса могут быть полу чены гомозиготные диплоиды матроклинного или андрогенного типа, возникающие по всей вероятности, в результате псевдодиплоидного апомиксиса - удвоения числ; хромосом в первом делении апомиктически развивающейся гаплоидной клетки.

3.2. Частота апомикгичных растений определяется генотипами семенного i пыльцевого родителей, способом индуцирования апомиксиса, характером и дозо) воздействия. Наибольшее количество гаплоидов и псевдодиплоидных апомикгов ; всех исследованных гибридов возникает при опылении исходных материнских расте ний пыльцой сорта-маркера яровой мягкой пшеницы Пиротрикс 28, колосья которог в период гаметогенеза облучены у-излучением 60Со в дозе 15 Гр или обработаны 0,1 0,3 %-ным раствором колхицина в 2 %-ном водном растворе ДМСО. Способ индувд рования апомиксиса у мягкой пшеницы и неполных пшенично-пырейных амфидиг лоидов с помощыо колхищшированной пыльцы предложен нами впервые (а.с. J» 520957).

3.3. Пыльца сорта-маркера озимой мягкой пшеницы Пиротрикс 6 обеспечивае наибольший выход апомикгичных растений при дозе у-излучения в 25 Гр и конце! трации колхицина в 0,1 %, но, в целом, для индуцирования апомиксиса у внутривид( вых гибридов мягкой пшеницы и неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов mi нее эффективна, чем пыльца сорта-маркера яровой пшеницы Пиротрикс 28.

3.4. Доза у-излучения 60Со в 25 Гр для облучения пыльцы Пиротрикса 28 с ц лью получения апомикгичных гаплоидов и гомозиготных диплоидов мягкой пшен] цы in vivo также достаточно эффективна, тогда как дозы в 35,45 и 55 Гр не пригодн для всех исходных форм: всхожие семена при этих дозах не завязываются. Для обл чения пыльцы Пиротрикса 6 непригодны дозы у-излучения в 45 и 55 Гр, а доза в 35 I - малоэффективна. Для «спасения» значительной доли апомиктичных зародышей повышения выхода апомиктичных растений, максимум которых имеет место при д зах облучения пыльцы в 15 и 25 Гр, необходима эмбриокультура.

3.5. Показано, что при опылении внутривидовых гибридов мягкой пшеницы неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов пыльцой Пиротрикса 28, облученш у-излучением 60Со в дозе 35 Гр, возникает возможность массового получения га лоидов на основе селективной элиминации облученных хромосом опылителя в ги ридном зародыше с последующей эмбриокультурой in vitro. Выход гаплоидных рг тений в эмбриокультуре in vitro в 10-140 раз превышает частоту гаплоидов и гомоз готных диплоидов в оптимальных вариантах индуцирования апомиксиса in vivo, увеличением дозы радиации частота получаемых in vitro гаплоидов резко уменьпш ся, так как возрастает вероятность более ранней дегенерации эндосперма, а, следо] тельно, - и более раннего отмирания зародышей.

3.6. Идентификацию гаплоидов и псевдодиплоидных апомикгов мягкой пше* цы и неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов рекомендуется проводить в i этапа, включающих 1) предварительную идентификацию по рецессивному фенотип среди гибридов, маркированных комплексом доминантных признаков: антоциано! окраска колеоптиля, опушенность листовой пластинки, яровой тип развития, край окраска колоса, отсутствие остей и опушенность колосковых чешуй - и 2) окон тельную идентификацию гаплоидов - по числу хромосом, псевдодиплоидных алом) тов - по константности их потомства.

3.7. Для удвоения числа хромосом у гаплоидов мягкой пшеницы и неполн пшенично-пырейных амфидиплоидов наиболее эффективна обработка растений в < зе кущения через корневую систему 0,05 %-ным водным раствором колхицина i

¿позиции 48 часов или 0,05 % раствором колхицина в 2 %-ном водном растворе ЛСО при экспозиции 24 часа. При создании гомозиготных линий на основе дип-идизированных гаплоидов мягкой пшеницы и неполных пшенично-пырейпых ам-щиплоидов необходимо использовать семенное потомство эуплоидных растений с рмальным мейозом и озерненностыо. Двукратный индивидуальный отбор по числу омосом, мейозу и озернешюсти в С] и С2 дигшоидизированных гаплоидов обеспе-вает получение генетически стабильных гомозиготных линий в С3. Потомства евдодиплоидных апомиктов гомозиготны и стабильны по числу хромосом уже в

4. Метод получения гаплоидов ячменя культурного Н. vulgare L. на основе се-ктивной элиминации хромосом гаплопродюсера Н. bulbosum L. (2п=2х=14) и куль-вирования изолировашшх зародышей in vitro (метод Bulbosum) усовершенствован [томощью факторов эндогенной и экзогенной природы. Максимальный выход зеле-jx гаплоидных растений составляет при этом 30 % от числа опыленных цветков, 44

от числа завязавшихся зерновок и 86 % от числа эксплантированных зародышей,

0 вполне достаточно для эффективного использования гаплоидии.

4.1. Частота гаплоидов, получаемых методом Bulbosum, имеет высокую геноти-гческую обусловленность: она зависит от генотипа гаплопродюсера и, в наибольшей епени, - от генотипа исходного гибрида Fr Н. vulgare. Наибольшей склонностью к плоидизации обладают гибриды с участием линий диплоидизированных гаплоидов [меня, созданных ранее методом Bulbosum.

4.2. Радикальные способы повышения эффективности метода Bulbosum - ис-шьзование клонов гаплопродюсера 4 (Св 2920/4) и 1 (Св 2929/1), обладающих мак-шальной способностью к гаплопродукции, и повторное вовлечение линий диплои-иированных гаплоидов ячменя с комплексом хозяйственно ценных признаков и хо->шей рекомбинационной способностью в новый биотехнологический цикл в качест-: одного или двух компонентов скрещивания при создании исходных гибридов.

4.3. Среди внешних воздействий на растения Ft Н. vulgare, опыленные пыльцой . bulbosum, наиболее эффективны опрыскивание колосьев через 1-3 дня после опы-жия смесью ГК-75 мг/л и 2,4-Д - 100 мг/л, а также холодовая предобработка заросшей in vivo перед эксплантацией на искусственную питательную среду. Способ элучения гаплоидов ячменя с использованием холодовой предобработки зародышей

1 vivo защищен авторским свидетельством № 1662443.

5. Полученные на основе внутривидовых гибридов Fi гаплоиды ярового ячменя ¿пользованы нами для создания гомозиготных линий и включения таким путем в се-гкционный процесс и генетические исследования.

5.1. Показано, что для удвоения числа хромосом у гаплоидов ячменя наиболее |}фективны: погружение растений с корнями на 3 часа в 0,2 %-ный раствор колхици-а в 2 %-ном водном растворе ДМСО с добавлением ПАБК - 0,02 % и вакуум-нфильтрация 0,15 %-ного раствора колхицина в 2 %-ном водном растворе ДМСО. ыживаемость гаплоидов ячменя и частота их диплоидизации при обработке колхи-ином в значительной мере зависят от генотипа.

5.2. Семенное потомство обработанных колхицином гаплоидов ячменя (С!) редставляer собой генетически чистые, гомозиготные линии, характеризующиеся ысокой фенотипической однородностью.

5.3. На основе линий диплоидизированных гаплоидов НИИСХ ЦРНЗ, в ком-лексе с другими научными учреждениями страны, в короткий срок созданы новые енные сорта ярового ячменя Биос-1 и Рахат, которые отличаются высоким потен-иалом продуктивности, устойчивостью к полеганию, поражению пыльной головней

и генетической выравненностью. С участием в скрещиваниях линий диплоидизиро-ванных гаплоидов выведены высокопродуктивные, толерантные к патогенам сорта ярового ячменя Рамос, Суздалец и Эльф. Сорта Суздалец и Эльф обладают к тому же широкой адаптивностью.

5.4. В соавторстве с отделом селекции яровых зерновых культур НИИСХ ЦРНЗ разработан способ определения рекомбинационной способности и селекционной ценности исходных форм ячменя по индексу интегральной оценки продуктивности линий диплоидизированных гаплоидов, созданных на основе гибиридов F1; и частоте передачи линиям важнейших хозяйственных и биологических признаков. Способ надежен и хорошо воспроизводим, ускоряет оценку сортообразукмцей способности исходного материала на 4-5 лет, защищен патентом № 2073424 РФ.

6. У всех исследованных нами объектов: неполных пшенично-пырейных амфи-диплоидов, мягкой пшеницы и ячменя, - несмотря на их специфику, получены сходные результаты и выявлены общие закономерности в плане экспериментального получения, морфобиологических особенностей и генетико-селекционного использования гаплоидных растений.

' 6.1. Генотип исходного гибрида - решающий фактор, от которого зависит эффективность генетико-селекционного использования гаплоидии. Линии диплоидизированных гаплоидов неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов, мягкой пшеницы и ячменя обладают однотипными генами, контролирующими высокую способность к гаплоидизации (деполиплоидизации) и последующей диплоидизации (поли-плоидизации). Включение такого рода генов в генотип исходного гибрида путей скрещивания с линиями гаплоидного происхождения значительно облегчает дальнейшую работу по получению новых гаплоидов и гомозиготных диплоидов.

6.2. Гаплоиды неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов, мягкой пшеницк и ячменя, получаемые методом селективной элиминации хромосом с последующе! эмбриокультурой in vitro, изредка проявляют отдельные признаки опылителя. Этс объясняется, по-видимому, включением фрагментов претерпевающей элиминацик ДНК опылителя в геном семенного родителя. Эмбриокультура in vitro выступает i данном случае как механизм сохранения полученной генетической информации и передачи ее потомству.

6.3. Смена уровней плоидности у всех исследованных нами объектов сопровож дается аналогичной изменчивостью морфобиологических признаков и свойств. Спо собность различных видов и родов покрытосеменных растений к гаплоидизации и по следующей диплоидизации свидетельствуют об общности основных генетически) механизмов и параллелизме их изменчивости не только у близких, но и отдаленны) систематических единиц, давно разошедшихся между собою в процессе эволюции.

6.4. Метод диплоидизированных гаплоидов, в сочетании с гибридизацией, от бором и биотехнологическими приемами, значительно сокращает сроки выведеню новых сортов и создания ценного исходного материала, совмещающего высокук продуктивность, иммунитет, устойчивость к полеганию, скороспелость, широкук адаптивность и генетическую стабильность.

7. На основе многолетних экспериментальных исследований и анализа литера туры установлено, что использование гаплоидии - эффективный метод интенсифика ции геиетико-селекционных программ, обеспечивающий возможность не только ус коренного получения гомозигот, сокращения объема работы при отборе и повышении его надежности, но и реального управления формообразовательным процессом в по

: томстве гибридов, быстрого и точного прогнозирования сортообразующей способно сти исходного материала.

Методические рекомендации н предложения для селекционной практики п производства

1. Метод диплоидизированных гаплоидов предлагается использовать для ин-еисификации генетико-селекционных программ - ускоренного выведения новых сор-ов и создания ценного исходного материала для гибридизации, совмещающего вы-окую продуктивность, иммунитет, устойчивость к полеганию, скороспелость и гене-ическую стабильность.

2. Экспериментальную гаплоидшо, в сочетании с гибридизацией, отбором и -иотехнолошческими приемами, целесообразно привлекать в селекцию на комплекс-[ую устойчивость к болезням с целью опережения формообразовательного процесса ; популяциях патогенов.

3. Использовать гаплоидию для быстрого и точного прогнозирования сортооб->азующих потенций исходного материала - его рекомбинационной способности и се-[екционной ценности - по индексу интегральной оценки продуктивности линий дип-юидизированных гаплоидов, созданных на основе гибридов Fi, и частоте передачи [иниям важнейших хозяйственных и биологических признаков.

4. Метод ускоренной стабилизации генотипов в потомстве внутривидовых гиб-шдов мягкой пшеницы и неполных 5б-хромосомных пшенично-пырейных амфидип-юидов с помощью индуцированного апомиксиса, включающий способы получения шомиктичных растений матроклинного и андрогенного типа у гибридов Fb методику щентификации гаплоидных и псевдодиплоидных апомиктов и технолоппо создания омозиготных линий, применять для интенсификации селекционного процесса у этих сультур.

5. Способ получения гаплоидных растений на основе селективной элиминации )блученных хромосом опылителя в гибридных зерновках и последующей эмбрио-сультуры in vitro использовать у мягкой пшеницы, неполных пшенично-пырейных шфидиплоидов и всех видов покрытосеменных растений, у которых имеет место двойное оплодотворение.

6. Для повышения эффективности метода получения гаплоидов ячменя на осно-se селективной элиминации хромосом гаплопродюсера Н. bulbosum и последующей шбриокультуры in vitro рекомендуется применять следующие эндогенные и экзоген-ше факторы:

а) использование клонов гаплопродюсера Н. bulbosum 4 (Св 2920/4) и 1 (Св 1929/1), обладающих максимальной способностью к гаплопродукщш;

б) повторное вовлечение линий диплоидизированных гаплоидов ячменя с высокой рекомбинационной способностью и селекционной ценностью в новый биотехно-тогический цикл в качестве одного или двух компонентов скрещивания при создании исходных гибридов;

в) трехкратное опрыскивание колосьев Н. vulgare, опыленных пыльцой Н. bul-Dosum, смесью ГК-75 мг/л и 2,4-Д -100 мг/л через 1-3 дня после опыления;

г) холодовую предобработку растений Н. vulgare, опыленных пыльцой Н. bulbosum, при температуре 10°С, которая осуществляется через 8-9 дней выращивания этих эастений при температуре 25-27°С, в течение 12-14 дней - до эксплантации зародышей на искусственную питательную среду in vitro.

7. При удвоении числа хромосом у гаплоидов мягкой пшеницы, неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов и ячменя использовать варианты обработки колхи-

цином, обеспечивающие, по нашим данным, наилучшую выживаемость растений j максимальную частоту их дипл'оидизации. : " i i- -

8. Полученные нами гомозиготные линии ярового ячменя включать в генетико селекционные программы экологически различных регионов страны как родоначаль ники новых сортов и доноры высокой продуктивности, скороспелости, неполегаемо сти, устойчивости к болезням, высокой рекомбинационной способности и селекцион ной ценности; возделывать в производстве, согласно Госреестру селекционных дос тижений РФ, сорта ярового ячменя Биос-1 и Рахат, созданные на основе гаплоидов,; также сорта Суздалец и Эльф, выведенные с участием в скрещиваниях линий диплои дизированных гаплоидов.

9. Исходя из данных по конъюгации хромосом в мейозе гаплоидов константны: форм неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов, передачу пшенице полезны признаков, контролируемых добавочными геномами пырея, в скрещиваниях пшени цы с неполными пшенично-пырейными амфидиплоидамй рекомендуется осущестЕ лять путем получения нерегулярных рекомбинаций типа транслокаций.

Список основных работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Чистякова В.Н., Данченко Г.Д., Ячевская Г.Л. К вопросу о повышении плс довитости промежуточных пшенично-пырейных гибридов (2п=56) // 3-е Всесоюз! совещ. по полиплоидии 15-18 декабря 1970: Тез. докл. - Минск, 1970. С. 60-6.1.

2. Чистякова В.Н. Цитогенетическое изучение полигаплоидов неполных пш( нично-пырейных амфидиплоидов (2п=56). Сообщение I. Конъюгация хромосом мейозе // Генетика. - 1972а. - Т. 8, № 8. - С. 20-32.

3. Чистякова В.Н. Исследование полигаплоидов неполных пшеничнс пырейных амфидиплоидов (2п=56) // 2-й съезд ВОГИС им. Н.И. Вавилова 31 январ - 5 февраля 1972: Тез. раб.-М.: Наука, 19726. Вып. 2. С. 252.

4. Гуляев Г.В., Лапченко Г.Д., Чистякова В.Н. Использование гаплоидии в г нетике и селекции пшенично-пырейных гибридов // Улучшение селекциошк семеноводческой работы с зерновыми и зернобобовыми культурами: Тез. докл. Рес науч. конф. 23-25 мая 1972.-М., 1972. С. 29-31. : ' "

5. Гуляев Г.В., Лапченко Г.Д., Чистякова В.Н. Пути использования гаплощц // Труды конф. по улучшению селекционно-семеноводческой работы с зерновые культурами в РСФСР.-М.: Московский рабочий, 1973. С. 132-144.

6. Чистякова В.Н. Цитогенетическое изучение полигаплоидов неполных пш нично-пырейных амфидиплоидов (2п=56). Сообщение И. Формирование микроспор Генетика. - 1974. - Т. 10, № 8. - С. 5-16.

7. Чистякова В.Н. Авторское свидетельство № 520957 на изобретение. Спос< получения апомиктичных форм мягкой пшеницы // Бюл. - 1976. - № 26. - 4 с.

8. Чистякова В.Н. Получение и использование гаплоидов пшеницы Triticu aestivum L. 3-й съезд ВОГИС им. Н.И. Вавилова 16-20 мая 1977: Тез. докл. - Л.: На ка, 1977. С. 508.

9. Чистякова В.Н. Исследование микроспорогенеза у полигаплоидов неполш пшенично-пырейных амфидиплоидов (2п=56) // Апомиксис и цитоэмбриология ра тений. - Изд-во Сарат. ун-та, 1978а. Вып. 4. С. 127-128.

10. Чистякова В.Н. Экспериментальное получение полигаплоидов мягкой пше-щы // Апомиксис и цитоэмбриология растений. - Изд-во Сарат. ун-та, 19786. Вып. 4.

129-131.

11. Чистякова В.Н. Нерегулярный апомиксис в селекции пшеницы и неполных '-хромосомных пшенично-пырейных амфидиплоидов // 14-й Международ, генети-ский конгресс 21-30 августа 1978: Тез. докл. - М.: Наука, 1978в. Ч. И. Секции 21-32.

195.

12. Гуляев Г.В., Чистякова В.Н. Перспективы селекционного использования га-юидного и псевдодиплоидпого апомиксиса на примере пшеницы // Селекционно-нетические и цитогенетические исследования гибридов, мутантов и полиплоидов рновых и кормовых культур. - М., 1979. С. 3-14.

13. Чистякова В.Н. Использование гаплоидоного и псевдодиплоидного апомик-(са - эффективный метод стабилизации генотипов в потомстве внутривидовых гиб-[дов пшеницы // 4-й съезд ВОГИС им. Н.И. Вавилова 1-5 февраля 1982: Тез. докл. -дшинев: Штиинца, 1982. Ч. III. С. 255.

14. Чистякова В.Н. Метод ускоренного получения гомозиготных линий мягкой неницы и неполных 56-хромосомных пшенично-пырейных амфидиплоидов при 1утривидовой гибридизации // Совершенствование селекционно-генетических мето-)в при выведении сортов зерновых и кормовых культур для Нечерноземья. - М., >84. С. 12-30.

15. Чистякова В.Н., Молчанова JIM. Изучение потомств отдельных колосьев тлоидизированных гаплоидов ярового ячменя // Селекционно-генетические иссле->вания зерновых, зернобобовых и кормовых культур в Центральном районе Нечер->земья.-М., 1985. С. 17-25.

16. Чистякова В.Н. Использование гаплоидов для ускорения селекционного юцесса у ярового ячменя // Гаметная и зиготная селекция растений: Матер. Респ. >нф. 23 июня 1986. - Кишинев: Штиинца, 1987а. С. 194-196.

17. Чистякова В.Н. Гаплоидия в интенсификации селекционного процесса у шеня // 5-й съезд ВОГИС им. Н.И. Вавилова 24-28 ноября 1987: Тез. докл. - М., >876. Т. IV. Ч. 2. С. 234-23518. Пухальский В.А., Чистякова В.Н., Астащенко А.М., Денисова Л.В.

ффективность метода Bulbosum в селекции ярового ячменя // Биология культиви-/емых клеток и биотехнология: Тез. докл. Междунар. конф. 2-6 августа 1988. - Но->сибирск, 1988. С. 215-216.

19. Нетгевич Э.Д., Молчанова Л.М., Чистякова В.Н., Пухальский В.А., Смолин .П., Денисова Л.В., Внучкова В.А. Гаплоидия как метод создания исходного мате-гала в селекции ячменя //Веста, с.-х. науки. - 1989. - № 7. - С. 93-99.

20. Чистякова В.Н., Нетгевич Э.Д., Гуляев Г.В. Экспериментальная гаплоидия 1к средство интенсификации генетико-селекционных работ // Совершенствование ;лекционно-генетических процессов при выведении сортов зерновых и зернобобо->ix культур в Нечерноземной зоне. - М., 1990. С. 3-12.

21. Чистякова В.Н. Авторское свидетельство № 1662443 СССР на изобретение Способ получения гаплоидов ячменя. // Бюл. - 1991. - № 26. - 6 с.

22. Чистякова В.Н., Попова О.В. Технология in vitro в решении проблем экспс римептальной гаплоидии // Современные проблемы генетики и селекции сельскохс зяйственных растений: Тез. докл. Всесоюзной науч.-техн. конф. молодых ученых 22 26 апреля 1991. - Одесса, ВСГИ, 1991. С. 151.

23. Чистякова В.Н., Нетгевич Э.Д., Гуляев Г.В., Астащенко A.M. Биотехнолс гические аспекты экспериментальной гаплоидии у ячменя // Ученые Нечерноземья развитию сельского хозяйства зоны: Докл. науч.-практ. конф. 26-28 февраля 1991. М., 1991. С. 142-144.

24. Чистякова В.Н., Нетгевич Э.Д., Молчанова JI.M., Смолин В.П., Денисо! Л.В., Власенко Н.М., Пухальский В.А., Беркутова Н.С., Рыжков Т.Ф., Внучкова В.А Чеботарева Т.М., Ханаев Н.Я., Жаркова Н.М. Авторское свидетельство Ks 6000 РФ i сорт ячменя ярового Биос 1 от 3.03.1993.

25. Неттевич Э.Д., Смолин В.П., Молчанова Л.М., Чистякова В.Н., Погорело! Л.Г. Особенности семеноводства сортов ярового ячменя, созданных методом гапло) дни // Современное семеноводство полевых культур / Науч. труды НИИСХ ЦРНЗ. М., 1993. С. 171-177.

26. Неттевич Э.Д., Чистякова В.Н., Смолин В.П., Молчанова Л.М., Космаче] И.А. Использование гаплоидии для оценки рекомбинационной способности и селе ционной ценности исходных форм ячменя // Докл. Рос. акад. с.-х. наук. - 1993. - № 3 С.3-8.

27. Чистякова В.Н., Нетгевич Э.Д., Гуляев Г.В. Возможности генотипа в пов: шении эффективности метода Bulbosum: [Докл.] 1-й съезд Вавиловского о-ва генет ков и селекционеров (ВОГИС) 20-25 декабря 1994 // Генетика. - 1994. - Т. 30, Прил жение. - С. 178.

28. Чистякова В.Н. Генотип как фактор эффективности экспериментальной г плодии у ячменя // Принципы и методы селекции и семеновод, зерн. и зернобс культур в Нечерноземье (25 лет Московскому селекценгру). - М., 1996. С. 215-231.

29. Неттевич Э.Д., Молчанова Л.М., Смолин В.П., Денисова Л.В., Власен Н.М., Чистякова В.Н., Пухальский В.А., Беркутова Н.С., Рыжков Т.С., Внучкова В./ Чеботарева Т.М., Ханаев Н_Я., Жаркова Н.М. Патент на селекционное достижение 0003 РФ. Ячмень яровой Биос 1. Зарегистрировано в Госреестре РФ 25.07. 1996.

30. Неттевич Э.Д., Чистякова В.Н., Смолин В.П., Молчанова Л.М. Патент 2073424 РФ на изобретение. Способ определения рекомбинационной способности селекционной ценности исходных форм ячменя // Бюл. - 1997. - № 5. -16 с.

31. Чистякова В.Н. Методология генетико-селекционного использования п лоидии // Теоретические и прикладные проблемы генетики, селекции и семеноводе] зерновых культур: Тез. докл. научно-пракг. конф. 24-27 марта 1998. - Немчиновка Москов. обл., 1998а. С. 92.

32. Чистякова В.Н. Прикладная биотехнология в решении генетш селекционных проблем // Новые методы селекции и создание адаптивных сорт

ц>скохозяйственных культур: результаты и перспективы: Тез. докл. научи, сес. 1-3 шя 1998. - Киров, 19986.С. 86-87.

33. Чистякова В.Н. Экспериментальная гаплоидия у неполных пшенично-[рейных амфидиплоидов, мягкой пшеницы и ячменя: параллелизм в наследствен-й изменчивости // Теоретические и прикладные проблемы генетики, селекции и се-новодства зерновых культур: Тез. докл. науч.-практ. конф. 24-27 марта 1998. - Нем-новка 1, Москов. обл., 1998в. С. 91.

34. Нетгевич Э.Д., Чистякова В.Н. Результаты и перспективы использования плоидизированных гаплоидов в селекции ячменя // Теоретические и прикладные облемы генетики, селекции и семеноводства зерновых культур: Тез. докл. науч,-акт. конф. 24-27 марта 1998. - Немчиновка 1, Москов. обл., 1998. С. 57.

35. Чистякова В.Н., Неттевич Э.Д., Смолин В.П. Метод диплоидизированных ллоидов в селекции на адаптивность // Научные проблемы создания новых сортов льскохозяйственных культур, адаптированных к современным условиям производ-ва и переработки: Матер, науч. сес. 21-22 июля 1998. - Санкт-Петербург, 1998. С. 836. Чистякова В.Н., Нетгевич Э.Д., Смолин В.П., Молчанова JI.M. Возможно-

и гаплоидии в комбинационной селекции на примере ярового ячменя // Новые ме-ды селекции и создание адаптивных сортов сельскохозяйственных культур: резуль-гы и перспективы: Тез. докл. науч. сес. 1-3 июля 1998. - Киров, 1998. С. 87-88.

37. Чистякова В.Н., Нетгевич Э.Д., Смолин В.П., Молчанова JI.M., Ерошенко М. Место гаплоидии в селекции на адаптивность // Теоретические и прикладные новы устойчивости региональных агроэкосистем в многоукладном сельскохозяйст-нном производстве. - М., 1998. С. 96-100.

38. Чистякова В.Н., Блохин В.И., Ерошенко Л.М., Кожемякин Е.В., Молчанова М., Неттевич Э.Д., Смолин В.П. Авторское свидетельство № 29095 РФ на яч-:нь яровой Рахат от 23.04.1998.

39. Блохин В.И., Ерошенко Л.М., Кожемякин Е.В., Молчанова Л.М., Неттевич Д., Смолин В.П., Чистякова В.Н. Патент на селекционное достижение № 0316 РФ. 1мсш> яровой Рахат. Зарегистрировано в Госреестре РФ 05.04.1999 г.

40. Чистякова В.Н. Место гаплоидии в интенсификации генетико-селекцион-.ix программ // 2-й съезд Вавиловского общества генетиков и селекционеров ЮГИС) 1-5 февраля 2000 г.: Тез. докл. - Санкт-Петербург, 2000. Т.1. С. 167.

Издательство АО "Диалог-МГУ".

ЛР N 063999 от 04.04.95 г. Подписано к печати 02.03.2000 г. Усл.печ.л.3,5. Тираж 125 экз. Заказ 217. Тел. 939-3890, 939-3891, 928-1042. Тел./факс 939-3891. 119899, Москва, Воробьевы горы, МГУ.

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Чистякова, Валентина Николаевна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ГАПЛОИДИЯ КАК СРЕДСТВО ИНТЕНСИФИКАЦИИ ГЕНЕТИКО-СЕЛЕКЦИОННЫХ РАБОТ.

1.1. Методы получения гаплоидов у покрытосеменных растений.

1.1.1. Получение гаплоидов in vivo на основе нерегулярного апомиксиса, семигамии и соматической редукции хромосом

1.1.2. Получение гаплоидов с использованием гаплопродюсера и эмбриокультуры in vitro.

1.1.3. Культура in vitro изолированных пыльников и микроспор, неоплодотворенных завязей и семяпочек.

1.2. Эффективность использования гаплоидных растений в генетико-селекционных программах.

1.2.1. Роль гаплоидов в изучении геномной структуры видов и систем генетической регуляции мейоза у аллополиплоидов

1.2.2. Гаплоиды как исходный материал при создании анеушю-идных серий.

1.2.3. Деполиплоидизация - способ преодоления нескрещиваемости при отдаленной гибридизации.

1.2.4. Возможности гаплоидии в мутационной селекции.

1.2.5. Использование гаплоидов для ускоренного получения гомозиготных диплоидных линий и сокращения объема работы при отборе.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Гаплоиды неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов, мягкой пшеницы и ячменя"

Важнейшей задачей селекции по-прежнему остается сокращение сроков создания новых сортов. На протяжении многих лет, с начала 60-ых до середины 80-ых годов, усилия селекционеров были направлены главным образом на выведение сортов растений интенсивного типа, отзывчивых на широкое применение высоких доз минеральных удобрений, пестицидов и благоприятные условия возделывания. Резкий спад промышленного и сельскохозяйственного производства Российской Федерации в последние годы, негативные последствия техногенного подхода к решению проблем АПК и связанный с этим высокий уровень загрязнения и разрушения природной среды выдвигают на передний план проблему адаптивной интенсификации растениеводства и прежде всего - селекционных программ (Жученко, 1985, 1990, 1994, 1998). Необходимы сорта, сочетающие высокую потенциальную продуктивность с устойчивостью к болезням, вредителям и неблагоприятным факторам окружающей среды: экстремальным температурам, засухе, засолению, повышенной кислотности почв, недостатку элементов минерального питания и др. Новые сорта должны обладать также хорошим качеством продукции и способностью противостоять резким изменениям погодных условий (Гуляев, 1996). Вместе с тем следует иметь в виду, что в некоторых регионах нашей страны, в том числе Центральном Нечерноземье, стратегия селекции должна быть ориентирована не только на создание сортов с высоким потенциалом продуктивности - более 5 т/га у зерновых культур, но и на создание менее требовательных к условиям возделывания сортов для массового производства со стабильной урожайностью на уровне 2-3 т/га (Неттевич, 1998).

Решение всего комплекса подобных проблем традиционными методами требует длительного времени и огромных масштабов работы. Известно, что для получения одного районированного сорта приходится прорабатывать сотни гибридных комбинаций и десятки тысяч селекционных номеров. На это уходит, как правило, 8-10 лет. Широкие перспективы в интенсификации селекционного процесса открывает применение современных методов прикладной генетики и прикладной биотехнологии в сочетании с гибридизацией и отбором. Большой теоретический и практический интерес представляет, в частности, использование гаплоидии. Отказ от нее в кризисной экономической и экологической ситуации был бы непростительной ошибкой. Метод диплоидизированных гаплоидов обеспечивает возможность значительного ускорения селекционного процесса у всех возделываемых растений (Карпеченко, 1929; East, 1930; Вавилов, 1932; Навашин, 1933 и др.). Мощный импульс использованию гаплоидов в селекционных целях дан разработкой и внедрением биотехнологических методов получения этих форм в культуре in vitro, таких как: метод селективной элиминации хромосом в гибридном зародыше с последующей эмбриокультурой (Као, Kasha, 1969; Symko, 1969; Kasha, Као, 1970), культивирование изолированных пыльников и микроспор (Guha, Maheshwari, 1964; Bourgin, Nitsch, 1967; Niizeki, Oono, 1968), неоплодотворенных завязей и семяпочек (San Noeum, 1976; Zhu, Wu, 1979; Zhou, Jang, 1981). К настоящему времени метод диплоидизированных гаплоидов нашел применение в практической селекции более, чем 20-и стран мира. С его участием созданы сорта кукурузы, картофеля, риса, табака, рапса, ячменя, пшеницы, тритикале и многих других культур.

Диплоидизация гаплоидов, получаемых на основе гибридов Fi, теоретически, - "кратчайший путь" создания гомозиготных линий, сокращения объема работы при отборе и повышения его эффективности. На уровне диплоидизированных гаплоидов расщепление по генотипу в потомстве гетерозигот совпадает с расщеплением по фенотипу и ограничивается гомозиготными классами. Число единиц расщепления при независимом наследовании признаков сокращается, например, до 2П - числа типов гамет, вместо 4П - числа комбинаций гамет, где п - число генов, по которым гетерозиготны исходные гибриды. Эти закономерности следует использовать в комбинационной селекции всех культур - автогамных и ксеногамных. Особую актуальность они приобретают в селекции полиплоидов, в частности - мягкой пшеницы Triticum aestivum L. (2п=6х=42) и неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов Т. agropyrotriticum Cicin (2п=8х=56), имеющих сложную, полигенную детерминацию большинства хозяйственно важных признаков. У ячменя Hordeum vulgare L. (2п=2х=14), который относится к автогамным диплоидным видам, метод "удвоенных" гаплоидов особенно ценен в селекции на иммунитет. Быстрое создание гомозигот, обладающих комплексной устойчивостью к наиболее вредоносным болезням: пыльной головне, мучнистой росе и различного рода пятнистостям - позволяет надежно опережать формообразовательный процесс в популяциях патогенов.

Однако, проблемы экспериментальной гаплоидии и методологии ее использования в генетико-селекционных программах требуют интенсивных исследований. Реализации потенциальных возможностей гаплоидии препятствует, в частности, отсутствие простых и надежных методов массового получения, идентификации и диплоидизации гаплоидных растений у большинства сельскохозяйственных культур. Их разработка и совершенствование принадлежат к числу первоочередных задач. Вместе с тем необходимы всесторонние исследования гаплоидов и получаемых из них гомозиготных линий в сравнении с исходными формами и материалом, создаваемым традиционными методами. Весьма актуально исследование мейоза у гаплоидов, систем его генетической регуляции, привлечение гаплоидов для анализа геномной структуры исходных видов и форм, путей эволюции и направлений селекционного использования последних.

Цель наших исследований - разработать теоретические, научно-методические и прикладные основы использования гаплоидии в интенсификации генетико-селекционных программ у трех видов зерновых злаков: неполных 56-хромосомных пшенично-пырейных амфидиплоидов, мягкой пшеницы и ячменя.

В процессе ее осуществления предстояло решить следующие задачи:

1. Обобщить и критически проанализировать работы отечественных и зарубежных авторов по экспериментальному получению гаплоидов покрытосеменных растений и их использованию в генетике и селекции.

2. Исследовать микроспорогенез у гаплоидов константных форм неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов (2п=8х=56); данные по конъюгации хромосом в мейозе гаплоидов использовать для расширения возможностей геномного анализа у аллополиплоидов и уточнения геномной структуры исходных форм неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов.

3. Произвести "ресинтез" гомозиготных линий из гаплоидов константных форм неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов; исследовать содержание анеуплоидов и озерненность колоса в линиях гаплоидного происхождения и популяциях неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов.

4. Найти простые и эффективные способы индуцирования гаплоидов и псевдодиплоидных апомиктов у Fi внутривидовых гибридов мягкой пшеницы и неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов; разработать методику их идентификации и технологию создания гомозиготных линий.

5. Усовершенствовать и применить к конкретным гибридным комбинациям метод получения гаплоидных растений ячменя на основе селективной элиминации хромосом гаплопродюсера Н. bulbosum (2п=2х=14) и культивирования изолированных зародышей in vitro на искусственной питательной среде (метод Bulbosum).

6. Исследовать влияние эндогенных и экзогенных факторов на частоту экспериментально полученных гаплоидов мягкой пшеницы, неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов и ячменя.

7. Отработать оптимальные режимы удвоения числа хромосом у гаплоидных растений с помощью колхицина; на основе диплоидизированных гаплоидов создать гомозиготные линии, лучшие из которых включить в селекционные программы НИИСХ ЦРНЗ и других научных учреждений страны.

8. Провести сравнительное изучение гаплоидов, полученных из них гомозиготных линий и исходных форм по некоторым морфобиологическим и хозяйственно важным признакам; выявить характер наследственной изменчивости у представителей разных видов и родов при смене уровней плоидности.

9. Определить пути наиболее эффективного использования гаплоидии для ускорения и упрощения генетико-селекционных программ у автогамных видов возделываемых растений.

Научная новизна и теоретическая значимость работы. Усовершенствована методология генетико-селекционного использования гаплоидии у неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов, мягкой пшеницы и ячменя, применимая ко всем видам возделываемых растений (Чистякова, 1984, 1998а). Экспериментально доказано, что метод диплоидизированных гаплоидов в сочетании с гибридизацией, отбором и биотехнологическими приемами - эффективное средство ускоренного выведения новых сортов и создания ценного исходного материала в селекции на высокую продуктивность, устойчивость к полеганию, скороспелость, иммунитет и другие ценные признаки.

Установлено, что удвоение числа хромосом у гаплоидов, получаемых на основе внутривидовых гибридов, обеспечивает возможность не только наиболее быстрого создания гомозигот, сокращения объема изучаемого материала и повышения результативности отбора, но и реального управления формообразовательным процессом в потомстве гибридов, а также - быстрого и точного прогнозирования рекомбинационной способности и селекционной ценности исходных сортов и форм, от скрещивания которых возникли гибриды Бь "Способ определения рекомбинационной способности и селекционной ценности исходных форм ячменя" защищен патентом № 2073424 (Неттевич, Чистякова, Смолин и др., 1997).

Показано, что генотип исходного гибрида Г1-главный фактор, определяющий выход гаплоидов, частоту их диплоидизации и перспективы использования гомозиготных линий (Чистякова, 19786, 1987а, б, 1996; Чистякова, Неттевич, Гуляев, 1990, 1994). Линии диплоидизированных гаплоидов, по нашим данным, целесообразно вовлекать в новый цикл получения такого рода форм в качестве одного или двух компонентов скрещивания при создании исходных гибридов: они обладают, как правило, наследственно обусловленной склонностью к гаплоидии и существенно облегчают дальнейшую работу по получению новых гаплоидов. Частота гаплоидов контролируется обычно системой аддитивно взаимодействующих доминантных генов; их совмещение в одном генотипе вызывает эффект гетерозиса по выходу гаплоидов.

Установлено, что изучение конъюгации хромосом в мейозе гаплоидов существенно дополняет возможности геномного анализа у неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов. Выявлено (Чистякова, 1972а, б), что добавочные геномы пырея в кариотипах этих форм не имеют заметной гомологии с геномами мягкой пшеницы. На основе полученных данных и современных представлений об аутоаллоплоидной природе Agropyron glaucum (Desf.) Roem. et Schult. = A. intermedium (Host) P.B. (2n=6x=42) и A. elongatum (Host) P.B. (2n=10x=70) предложены формулы для обозначения геномной структуры неполных 56-хромосомных пшенично-пырейных амфидиплоидов. Подробно исследованы механизмы формирования у гаплоидов нередуцированных микроспор (Чистякова, 19726, 1974). Показано, что первое деление мейоза у гаплоидов может быть не только редукционным, но также - семигетеротипным и псевдогомеотипным.

Разработан метод ускоренной стабилизации генотипов в потомстве внутривидовых гибридов мягкой пшеницы и неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов с помощью индуцированного апомиксиса (Чистякова, 1978в, 1982, 1984) и селективной элиминации облученных хромосом в сочетании в эмбрио-культурой in vitro. Установлено, что, наряду с гаплоидами, при индуцировании апомиксиса могут быть получены гомозиготные диплоиды матроклинного или андрогенного типа, возникающие, по всей вероятности, в результате псевдодиплоидного апомиксиса - удвоения числа хромосом в первом делении апомикти-чески развивающейся гаплоидной клетки. Предложены эффективные способы получения и идентификации гаплоидов и псевдодиплоидных апомиктов. Способ получения апомиктичных растений с помощью колхицинированной пыльцы защищен авторским свидетельством № 520957 (Чистякова, 1976). Разработана методика создания гомозиготных линий.

Технология получения гаплоидов ячменя методом Bulbosum модифицирована введением дополнительных опрыскиваний опыленных колосьев фито-гормонами и холодовой предобработки зародышей in vivo перед эксплантацией на искусственную питательную среду. На "Способ получения гаплоидов ячменя" с использованием холодовой предобработки зародышей получено авторское свидетельство № 1662443 (Чистякова, 1991). Показано, что радикальные способы повышения производительности метода Bulbosum - использование клонов Н. bulbosum 4 (Св 2920/4) и (Св 2929/1) из коллекции Р. Пикеринга (R. Pickering), обладающих максимальной способностью к гаплопродукции, и повторное вовлечение линий диплойдизированных гаплоидов ячменя с комплексом хозяйственно ценных признаков и хорошей рекомбинационной способностью в новый биотехнологический цикл в качестве одного или двух компонентов скрещивания при создании исходных гибридов (Чистякова, Неттевич, Гуляев, 1990, 1994; Чистякова, 1996,19986).

В процессе сравнительного изучения гаплоидных растений, полученных из них гомозиготных линий и исходных форм установлено, что при смене уровней плоидности у исследованных нами объектов: неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов (8х-»4х-»8х), мягкой пшеницы (6х—>3х—>6х) и ячменя (2х-»х-»2х) - наблюдается параллелизм в изменчивости всех признаков, связанный с кратным изменением дозы генов, хромосом и геномов (Чистякова, 1998в). Переход на гаплоидный уровень вызывает, как правило, уменьшение размеров всех органов и полную самостерильность; число колосков и цветков в колосе сохраняют обычно прежние значения, тогда как способность к кущению многократно возрастает. Удвоение числа хромосом у гаплоидов вызывает увеличение размеров всех органов, восстановление фертильности и соответствующее уменьшение числа стеблей на растение. Генотипическая и фенотипическая вариабельность гаплоидов и полученных из них гомозиготных линий находятся при этом в прямой зависимости от гетерозиготности исходного материала. Возникновение гаплоидных спорофитов в таксономически различных группах покрытосеменных растений, способность последних не только к деполигоюидиза-ции, но и к дальнейшей полиплоидизации свидетельствуют об универсальности основных генетических механизмов и параллелизме их изменчивости как у близких, так и отдаленных видов и родов, давно разошедшихся между собою на эволюционном пути.

Практическая ценность. Показано, что усовершенствованная нами методология использования гаплоидии на 2-4 года сокращает сроки выведения новых сортов и обеспечивает возможность наиболее быстрого получения исходного материала для гибридизации, совмещающего высокую продуктивность, неполегаемость, иммунитет и другие ценные признаки. Методология может быть эффективно использована в комбинационной селекции всех возделываемых видов покрытосеменных растений. Способ определения рекомбинацион-ной способности и селекционной ценности исходных сортов и форм с помощью диплоидизированных гаплоидов применим к автогамным видам зерновых культур.

Уточнение геномной структуры неполных 56-хромосомных пшенично-пырейных амфидиплоидов, проведенное нами с использованием гаплоидов, позволяет выбрать наиболее рациональные способы интрогрессии генов пырея в генотип пшеницы. Отсутствие гомогологии между добавочными геномами пырея и геномами мягкой пшеницы в кариотипах неполных гапенично-пырейных амфидиплоидов указывает на трудность получения естественных рекомбинаций между ними в скрещиваниях пшеницы с неполными пшенично-пырейными ам-фидиплоидами. Для передачи пшенице полезных признаков, контролируемых добавочными геномами пырея, целесообразно идти по пути получения нерегулярных рекомбинаций типа транслокаций.

Метод ускоренной стабилизации генотипов в потомстве внутривидовых гибридов мягкой пшеницы и неполных гапенично-пырейных амфидиплоидов с помощью индуцированного апомиксиса и селективной элиминации облученных хромосом в сочетании с эмбриокультурой in vitro может служить составной частью селекционных программ, обеспечивающей сокращение сроков выведения сортов. При его использовании у внутривидовых гибридов мягкой пшеницы и неполных пшенично-лырейных амфидиплоидов получены 379 гаплоидов и 336 псевдодиплоидных апомиктов. На основе гаплоидов и хозяйственно ценных форм псев до диплоидного происхождения созданы 142 гомозиготные линии, лучшие из которых включены в селекционные программы НИИСХ ЦРНЗ и других научных учреждений России.

Установлено, что усовершенствованный с помощью экзогенных и эндогенных факторов метод Bulbosum существенно повышает частоту получаемых в эмбриокультуре in vitro гаплоидов ячменя. Максимальный выход зеленых гаплоидных растений составляет при этом 30,0 % от числа опыленных цветков, 44,3 % от числа завязавшихся зерновок и 86,2 % от числа эксплантированных зародышей. Для сравнения заметим, что максимальный выход гаплоидов ячменя, получаемых методов Bulbosum в исследованиях С.Ф. Лукьянюк и С.А. Игнатовой (1983) достигал 25,0 % от числа завязавшихся зерновок.

Показано, что усовершенствованная технология метода Bulbosum позволяет получать гаплоиды, а из них - гомозиготные диплоиды ячменя практически от любого генотипа. За период 1983-1995 гг. нами получены в общей сложности 8268 зеленых гаплоидных растений ярового ячменя от 128-и внутривидовых гибридов отдела селекции яровых зерновых культур НИИСХ ЦРНЗ. На основе гаплоидов с помощью колхицина созданы 3105 гомозиготных диплоидных линий, лучшие из которых широко используются в генетико-селекционных программах НИИСХ ЦРНЗ и других научных учреждений страны.

Реализация результатов исследований. Основные результаты наших исследований опубликованы для использования в генетических, селекционных и биотехнологических центрах Российской Федерации и стран ближнего зарубежья. "Способ получения апомиктичных форм мягкой пшеницы" с помощью колхицинированной пыльцы внедряется в НИИСХ ЦЧП им. В.В. Докучаева и ВНИИ селекции и семеноводства овощных культур, модификация метода Bul-bosum введением дополнительных опрыскиваний опыленных колосьев фито-гормонами - в НИИСХ Северо-Востока (бывшем НПО "Луч"), "Способ получения гаплоидов ячменя" с использованием холодовой предобработки зародышей in vivo - в Казахском государственном университете и Институте экспериментальной биологии АН Эстонии. Клоны диплоидного Н. bulbosum (2п=2х=14) с наилучшей способностью к гаплопродукции используются в НИИСХ Северо-Востока, Биотехнологическом центре Казахстана, Казахском государственном университете, Киргизском НПО земледелия, Институте биологии АН Латвии, Институте растениеводства, селекции и генетики Украины, Институте экспериментальной биологии АН Эстонии и других научно-исследовательских учреждениях.

Гомозиготные линии пшеницы и неполных 56-хромосомных пшенично-пырейных амфидиплоидов включены в генетические и селекционные программы НИИСХ ЦРНЗ и Института биохимической физики Российской Академии Наук. Линии диплоидизированных гаплоидов ячменя пополнили генетическую коллекцию ВНИИР им. Н.И. Вавилова и проработаны в разных звеньях селекционного процесса НИИСХ ЦРНЗ, Владимирского и Красноярского НИИСХ, Рязанского НИИПТИ АПК, Курского НИИ АПП, НПО "Нива Татарстана" и др.

В итоге, совместно с Рязанским НИИПТИ АПК и ВНИИ сельскохозяйственной биотехнологии выведен сорт ярового ячменя Биос-1 (авторское свидетельство № 6000, патент № 0003 РФ), внесенный в Государственный реестр сортов Российской Федерации с 1993 г. и рекомендованный для Центрального, Волго-Вятского, Северо-Западного и Средневолжского регионов России. Совместно с НПО "Нива Татарстана" нами создан сорт ярового ячменя Рахат (авторское свидетельство № 29095, патент № 0316 РФ), который с 1996 г. проходат Государственное испытание и уже включен в Госреестр РФ по Средне-волжскому и Центральному регионам. Оба сорта - и Биос-1, и Рахат - линии диплоидизированных гаплоидов, полученные с использованием метода Ви1Ьо-биш.

С участием в скрещиваниях созданных нами линий диплоидизированных гаплоидов НИИСХ ЦРНЗ в комплексе с другими научными учреждениями страны выведены сорта ярового ячменя Рамос, Суздалец и Эльф. При этом сорт Эльф с 1997 г. внесен в Государственный реестр РФ по Северо-Западному, Центральному, Центрально-Черноземному, Средневолжскому, Волго-Вятскому и Западносибирскому регионам, а сорт Суздалец с 1998 г. - по Северо-Западному, Центральному и Центрально-Черноземному регионам.

На защиту выносятся следующие основные положения;

1. В результате многолетних экспериментальных исследований анализа литературы и теоретических обобщений усовершенствована методология использования гаплоидии в интенсификации генетико-селекционных программ, позволяющая значительно сократить сроки выведения новых сортов и создания ценного исходного материала для гибридизации, совмещающего высокую продуктивность, скороспелость, неполегаемость, комплексную устойчивость к болезням и генетическую стабильность. Использование гаплоидии в сочетании с традиционными методами селекции и биотехнологическими приемами обеспечивает возможность не только ускоренного получения гомозигот, сокращения объема работы при отборе и повышения его эффективности, но и реального управления формообразовательным процессом в потомстве гибридов, быстрого и точного прогнозирования рекомбинационной способности и селекционной ценности исходных родительских форм.

2. На основе данных по конъюгации хромосом в мейозе гаплоидов уточнена геномная структура константных форм неполных гапенично-пырейных амфидишюидов. Показано, что добавочные геномы пырея в кариотипах этих форм не имеют существенной гомологии с геномами мягкой пшеницы. Для передачи пшенице "пырейных" признаков в скрещиваниях с неполными амфиди-плоидами следует идти по пути получения нерегулярных рекомбинаций типа транслокаций. Распределение частот всех типов хромосомных ассоциаций в мейозе гаплоидов свидетельствует об эффективности Ph - системы хромосомы 5В мягкой пшеницы, ограничивающей гомеологичную конъюгацию у неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов. Тем не менее добавочные геномы пырея оказывают некоторое дестабилизирующее влияние на процесс генетической регуляции мейоза в гемизиготном состоянии, слегка ослабляя функцию 5В-хромосомы.

3. Разработан метод ускоренной стабилизации генотипов в потомстве внутривидовых гибридов мягкой пшеницы и неполных 56-хромосомных пшенично-пырейных амфидиплоидов с помощью индуцированного аломиксиса и селективной элиминаци облученных хромосом опылителя в сочетании с эм-бриокультурой in vitro, включающий способы получения гаплоидов и псевдодиплоидных апомиктов у гибридов Fb методику их идентификации и технологию создания гомозиготных линий. Для индуцирования апомиксиса у внутривидовых гибридов мягкой пшеницы и неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов наиболее эффективны опыление исходных материнских растений пыльцой сорта-маркера яровой пшеницы Пиротрикс 28, колосья которого в период гаме-тогенеза облучены у-излучением 60Со в дозе 15 Гр или обработаны ОД-0,3 %-ным раствором колхицина в 2 %-ном водном растворе диметилсульфоксида. Для получения гаплоидов на основе селективной элиминации хромосом с последующей эмбриокультурой наиболее эффективно опыление исходных гибридов пыльцой сорта Пиротрикс 28, облученной у-излучением б0Со в дозе 35 Гр.

4. Метод получения гаплоидов ячменя путем гибридизации исходных растений Fi Н. vulgare с гашюпродюсером Н. bulbosum (2п=2х=14) и культивирования изолированных зародышей in vitro (метод Bulbosum) усовершенствован с помощью факторов экзогенной и эндогенной природы. Среди экзогенных факторов наиболее эффективны опрыскивание опыленных колосьев смесью гибберелловой и 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты и холодовая предобработка зародышей in vivo перед эксплантацией на искусственную питательную среду. Радикальное повышение эффективности метода Bulbosum обеспечивают два других предложенных нами способа: использование клонов Н. bulbosum 4 (Св 2920/4) и 1 (Св 2929/1), обладающих максимальной способностью к гапло-продукции, и повторное вовлечение линий диплоидизированных гаплоидов ячменя с комплексом хозяйственно ценных признаков и хорошей рекомбинаци-онной способностью в новый биотехнологический цикл в качестве одного или двух компонентов скрещивания при создании исходных гибридов. Отработаны оптимальные режимы удвоения числа хромосом у гаплоидов ячменя и технология создания гомозиготных линий.

5. Непосредственное применение в генетико-селекционных программах НИИСХ ЦРНЗ и других научных учреждениях страны нашли 2853 созданные нами гомозиготные линии неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов, мягкой пшеницы и ячменя. На основе диплоидизированных гаплоидов в короткий срок созданы сорта ярового ячменя Биос-1 и Рахат, которые отличаются высоким потенциалом продуктивности, устойчивостью к полеганию, поражению пыльной головней и генетической выравненностью. С участием в скрещиваниях линий диплоидизированных гаплоидов выведены высокопродуктивные, толерантные к патогенам сорта ярового ячменя: Рамос, Суздалец и Эльф.

6. Установлено, что генотип исходного гибрида Fi - решающий фактор, от которого зависит эффективность генетико-селекционного использования гап-лоидии. Линии диплоидизированных гаплоидов мягкой пшеницы, неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов и ячменя обладают, по всей вероятности, сходными генами, контролирующими высокую способность к гаплоидизации (деполиплоидизации) и последующей диплоидизации (полиплоидизации). Включение такого рода генов в генотип исходного гибрида путем скрещивания линий гаплоидного происхождения значительно облегчает дальнейшую работу по получению новых гаплоидов и гомозиготных диплоидов.

7. Смена уровней плоидности у всех исследованных объектов сопровождается аналогичной изменчивостью морфобиологических признаков и свойств. Способность различных видов и родов покрытосеменных растений к гаплоиди-зации и последующей диплоидизации свидетельствуют об общности основных генетических механизмов и параллелизме их изменчивости не только у близких, но и отдаленных систематических единиц, давно разошедшихся между собою в процессе эволюции.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научных исследований НИИ сельского хозяйства Центральных районов Нечерноземной зоны (Немчиновка-1, Московская обл.) по целевым комплексным программам: 0.51.03 (тема 04.15 - номер госрегистрации 77000269, тема 03.01.01.10.Р8 - номер госрегистрации 0186114835), ОЦ.032.01 (тема 02.Н2в -номер госрегистрации 01826044767), 0.СХ.03.02, 0.СХ.01.01, 5.1.1.Г.7.1 КП НТП СЭВ, 5.1.1.7.01 КП НТП СЭВ, проекту "Хлеба России" (тема 02.Р.01 - номер госрегистрации 01910046854).

Работа выполнена лично автором, поэтапно, за период 1967-1999 гг. в рамках исследований по разделам:

1. Изучить гаплоиды константных форм неполных 56-хромосоных пше-нично-пьфейных амфидиплоидов и отработать технологию "ресинтеза" гомозиготных линий для использования в генетико-селекционных программах.

2. Разработать способы массового получения, идентификации и диплоидизации гаплоидных форм пшеницы и использовать их в селекции.

3. Разработать метод ускоренной стабилизации генотипов в потомстве внутривидовых гибридов мягкой пшеницы и неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов с помощью индуцированного апомиксиса и использовать его при создании исходного материала для практической селекции.

4. Разработать и усовершенствовать методы геномной и хромосомной инженерии на основе использования гаплоидных форм.

5. Разработать и применить способы получения гаплоидных форм основных сельскохозяйственных культур и на их основе создать методы хромосомной и геномной инженерии.

6. Разработать технологию селекции и создания сортов с повышенной продуктивностью и устойчивостью к стрессовым воздействиям методом гап-лоидии с использованием эмбриокультуры при отдаленной гибридизации.

7. Создать с помощью гаплопродюсера Н. bulbosum и эмбриокультуры in vitro линии диплоидизированных гаплоидов ярового ячменя на базе гибридов от скрещивания лучших отечественных и зарубежных сортов, коллекционных и селекционных образцов, источников и доноров.

8. Создать гомозиготные линии ячменя методом гаплоидии в количестве, достаточном для использования в селекционных программах.

9. Создать линии диплоидизированных гаплоидов ячменя и изучить особенности рекомбиногенеза по важнейшим хозяйственно ценным признакам с целью повышения эффективности использования генетических ресурсов.

За помощь и поддержку в осуществлении работы автор благодарит научного консультанта доктора сельскохозяйственных наук, профессора, академика РАСХН Г.В. Гуляева, доктора биологических наук, профессора, академика РАСХН Э.Д. Нетгевича, доктора биологических наук, профессора Т.С. Фадееву, доктора биологических наук, профессора Г.Д. Лапченко, коллектив Московского селекцентра и бывших сотрудников НИИСХ ЦРНЗ: В.И. Гримова, С.Р. Корнейчук, О.В. Попову.

Заключение Диссертация по теме "Селекция и семеноводство", Чистякова, Валентина Николаевна

ВЫВОДЫ

1. В процессе экспериментального получения, генетического, цитогенети-ческого и селекционного изучения гаплоидов и созданных на их основе гомозиготных линий разработаны теоретические, научно-методические и прикладные основы использования гаплоидии как средства интенсификации генетико-селекционных программ у трех видов зерновых злаков: неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов Т. agropyrotriticum Cicin (2п=8х=56), мягкой пшеницы Т. aestivum L. (2п=6х=42) и ячменя культурного Н. vulgare L. (2п=2х=14). Сформулирована общая методология использования гаплоидии, разработаны и усовершенствованы способы получения гаплоидных растений и их диплоидиза-ции, созданы гомозиготные линии, которые прорабатываются в разных звеньях селекционного процесса НИИСХ ЦРНЗ, Института биохимической физики Российской Академии Наук, Владимирского и Красноярского НИИСХ, Рязанского НИИПТИ АПК, Курского НИИ АПП, НПО «Нива Татарстана» и других научных учреждений страны.

2. Исследование мейоза у гаплоидов позволило уточнить геномную структуру исходных форм неполных 56-хромосомных пшенично-пырейных амфидиплоидов, изучить систему генетической регуляции мейоза у этих форм и выявить механизмы формирования у гаплоидов нередуцированных микроспор.

2.1. Конъюгация хромосом в мейозе гаплоидов неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов находится на уровне межгеномной конъюгации хромосом гаплоидов мягкой пшеницы. На основе полученных данных и современных представлений об аутоаллоплоидной природе А. glauclШl - Буи. А нйегте-<1шт (2п=6х=42) и А. екн^аШт (2п=10х=70) предложены формулы для обозначения геномной структуры неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов (2п~8х=56). Геномная структура 56-хромосомных амфидиплоидов промежуточно-пшеничной подгруппы, возникших в результате гибридизации Т. аевйуит с А. glaucum, обозначена формулой АЕЮЕ. При этом допускается, что амфидип-лоиды могут различаться по составу хромосом добавочного генома пырея и степени замещения хромосом пшеницы пырейными хромосомами. Геномная структура неполного амфидиплоида, полученного при участии А. еки^аШт, обозначена формулой АЕШР.

2.2. Образование бивалентов и тривалентов у гаплоидов неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов происходит в основном за счет конъюгации гомеологичных хромосом Т. аевйушп. Добавочные геномы пырея Е и Г не обнаруживают заметной гомологии с геномами мягкой пшеницы. Для передачи пшенице «пырейных» признаков в скрещиваниях с неполными пшенично-пырейными амфидиплоидами следует идти по пути получения нерегулярных рекомбинаций типа транслокаций.

2.3. Распределение частот всех типов хромосомных ассоциаций в мейозе гаплоидов подчиняется закону Пуассона и служит критерием эффективности РЬ - системы хромосомы 5В мягкой пшеницы, ограничивающей гомеологичную конъюгацию у неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов. Тем не менее хромосомы пырея оказывают некоторые дестабилизирующее влияние на процесс генетической регуляции мейоза в гемизиготном состоянии, слегка ослабляя функцию 5В-хромосомы. Обнаружена закономерность: чем больше пырейных признаков в фенотипе исходного амфидиплоида, тем выше конъюгация хромосом у гаплоида.

2.4. Первое деление мейоза у гаплоидов неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов может проходить не только по типу редукционного, но и семи-гетеротипного, и псевдогомеотипного. Последние служат источником нередуцированных гамет. Способность к мейотической реституции контролируется генотипом гаплоида и может рассматриваться как адаптивных механизм, обеспечивающий возможность семенного размножения.

3. Разработан метод ускоренной стабилизации генотипов в потомстве внутривидовых гибридов мягкой пшеницы и неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов, включающий способы получения гаплоидов и гомозиготных диплоидов у гибридов Б], методику их идентификации и технологию создания гомозиготных линий.

3.1. Предложены способы индуцирования гаплоидии на основе нерегулярного апомиксиса. Выявлена способность обоих видов: Т. аезйуит Ь. и Т. а^оругоЦ-Шсит Скт к индуцированному апомиксису менторального (псевдо-гамного) типа. Способность к автономному апомиксису у всех исследованных гибридов отсутствует. Установлено, что, наряду с гаплоидами, при индуцировании апомиксиса могут быть получены гомозиготные диплоиды матроклинно-го или андрогенного типа, возникающие, по всей вероятности, в результате псевдодиплоидного апомиксиса - удвоения числа хромосом в первом делении апомиктически развивающейся гаплоидной клетки.

3.2. Частота апомиктичных растений определяется генотипами семенного и пыльцевого родителей, способом индуцирования апомиксиса, характером и дозой воздействия. Наибольшее количество гаплоидов и псевдодиплоидных апомиктов у всех исследованных гибридов возникает при опылении исходных материнских растений пыльцой сорта-маркера яровой мягкой пшеницы Пирот-рикс 28, колосья которого в период гаметогенеза облучены у-излучением 60Со в дозе 15 Гр или обработаны 0,1-0,3 %-ным раствором колхицина в 2 %-ном водном растворе диметилсульфоксида (ДМСО). Способ индуцирования апомикси-са у мягкой пшеницы и неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов с помощью колхицинированной пыльцы предложен нами впервые (а.с. № 520957).

3.3. Пыльца сорта-маркера озимой мягкой пшеницы Пиротрикс 6 обеспечивает наибольший выход апомиктичных растений при дозе у-излучения в 25 Гр и концентрации колхицина в 0,1 %, но, в целом, для индуцирования апомик-сиса у внутривидовых гибридов мягкой пшеницы и неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов менее эффективна, чем пыльца сорта-маркера яровой пшеницы Пиротрикс 28.

3.4. Доза у-излучения 60Со в 25 Гр для облучения пыльцы Пиротрикса 28 с целью получения апомиктичных гаплоидов и гомозиготных диплоидов мягкой пшеницы in vivo также достаточно эффективна, тогда как дозы в 35, 45 и 55 Гр не пригодны для всех исходных форм: всхожие семена при этих дозах не завязываются. Для облучения пыльцы Пиротрикса 6 непригодны дозы у-излучения в 45 и 55 Гр, а доза в 35 Гр - малоэффективна. Для «спасения» апомиктичных зародышей и повышения выхода апомиктичных растений, максимум которых имеет место при дозах облучения пыльцы в 15 и 25 Гр, необходима эмбрио-культура.

3.5. Показано, что при опылении внутривидовых гибридов мягкой пшеницы и неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов пыльцой Пиротрикса 28, облученной у-излучением 60Со в дозе 35 Гр, возникает возможность массового получения гаплоидов на основе селективной элиминации облученных хромосом опылителя в гибридном зародыше с последующей эмбриокультурой in vitro. Выход гаплоидных растений в эмбриокультуре in vitro в 10-140 раз превышает частоту гаплоидов и гомозиготных диплоидов в оптимальных вариантах индуцирования апомиксиса in vivo. С увеличением дозы радиации частота получаемых in vitro гаплоидов резко уменьшается, так как возрастает вероятность более ранней дегенерации эндосперма, а, следовательно, - и более раннего отмирания зародышей.

3.6. Идентификацию гаплоидов и псевдодиплоидных апомиктов мягкой пшеницы и неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов рекомендуется проводить в два этапа, включающих 1) предварительную идентификацию по рецессивному фенотипу - среди гибридов, маркированных комплексом доминантных признаков: антоциановая окраска колеоптиля, опушенность листовой пластинки, яровой тип развития, красная окраска колоса, отсутствие остей и опушенность колосковых чешуй - и 2) окончательную идентификацию гаплоидов - по числу хромосом, псевдодиплоидных апомиктов - по константности их потомства.

3.7. Для удвоения числа хромосом у гаплоидов мягкой пшеницы и неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов наиболее эффективна обработка растений в фазе кущения через корневую систему 0,05 %-ным водным раствором колхицина при экспозиции 48 часов или 0,05 % раствором колхицина в 2 %-ном водном растворе ДМСО при экспозиции 24 часа. При создании гомозиготных линий на основе диплоидизированных гаплоидов мягкой пшеницы и неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов необходимо использовать семенное потомство эуплоидных растений с нормальным мейозом и озерненностью. Двукратный индивидуальный отбор по числу хромосом, мейозу и озерненности в Ci и С2 диплоидизированных гаплоидов обеспечивает получение генетически стабильных гомозиготных линий в С3. Потомства псевдодиплоидных апомиктов гомозиготны и стабильны по числу хромосом уже в Si.

4. Метод получения гаплоидов ячменя культурного Н. vulgare L. на основе селективной элиминации хромосом гаплопродюсера Н. bulbosum L. (2п=2х=14) и культивирования изолированных зародышей in vitro (метод Bulbosum) усовершенствован с помощью факторов эндогенной и экзогенной природы. Максимальный выход зеленых гаплоидных растений составляет при этом 30 % от числа опыленных цветков, 44 % от числа завязавшихся зерновок и 86 % от числа эксплантированных зародышей, что вполне достаточно для эффективного использования гаплоидии.

4.1. Частота гаплоидов, получаемых методом Bulbosum, имеет высокую генотипическую обусловленность: она зависит от генотипа гаплопродюсера и, в наибольшей степени, - от генотипа исходного гибрида Fi Н. vulgare. Наибольшей склонностью к гаплоидизации обладают гибриды с участием линий дип-лоидизированных гаплоидов ячменя, созданных ранее методом Bulbosum.

4.2. Радикальные способы повышения эффективности метода Bulbosum -использование клонов гаплопродюсера 4 (Св 2920/4) и 1 (Св 2929/1), обладающих максимальной способностью к гаплопродукции, и повторное вовлечение линий диплоидизированных гаплоидов ячменя с комплексом хозяйственно ценных признаков и хорошей рекомбинационной способностью в новый биотехнологический цикл в качестве одного или двух компонентов скрещивания при создании исходных гибридов.

4.3. Среди внешних воздействий на растения Fi Н. vulgare, опыленные пыльцой Н. bulbosum, наиболее эффективны опрыскивание колосьев через 1-3 дня после опыления смесью ГК-75 мг/л и 2,4-Д - 100 мг/л, а также холодовая предобработка зародышей in vivo перед эксплантацией на искусственную питательную среду. Способ получения гаплоидов ячменя с использованием холодо-вой предобработки зародышей in vivo защищен авторским свидетельством № 1662443.

5. Полученные на основе внутривидовых гибридов Fi гаплоиды ярового ячменя использованы нами для создания гомозиготных линий и включения таким путем в селекционный процесс и генетические исследования.

5.1. Показано, что для удвоения числа хромосом у гаплоидов ячменя наиболее эффективны: погружение растений с корнями на 3 часа в 0,2 %-ный раствор колхицина в 2 %-ном водном растворе ДМСО с добавлением ПАБК - 0,02 и вакуум-инфилырация ОД 5 %-ного раствора колхицина в 2 %-ном водном растворе ДМСО. Выживаемость гаплоидов ячменя и частота их диплоидизации при обработке колхицином в значительной мере зависят от генотипа.

5.2. Семенное потомство обработанных колхицином гаплоидов ячменя (СО представляет собой генетически чистые, гомозиготные линии, характеризующиеся высокой фенотипической однородностью.

5.3. На основе линий диплоидизированных гаплоидов НИИСХ ЦРНЗ, в комплексе с другими научными учреждениями страны, в короткий срок созданы новые ценные сорта ярового ячменя Биос-1 и Рахат, которые отличаются высоким потенциалом продуктивности, устойчивостью к полеганию, поражению пыльной головней и генетической выравненностью. С участием в скрещиваниях линий диплоидизированных гаплоидов выведены высокопродуктивные, толерантные к патогенам сорта ярового ячменя Рамос, Суздалец и Эльф. Сорта Суздалец и Эльф обладают к тому же широкой адаптивностью.

5.4. В соавторстве с отделом селекции яровых зерновых культур НИИСХ ЦРНЗ разработан способ определения рекомбинационной способности и селекционной ценности исходных форм ячменя по индексу интегральной оценки продуктивности линий диплоидизированных гаплоидов, созданных на основе гибиридов и частоте передачи линиям важнейших хозяйственных и биологических признаков. Способ надежен и хорошо воспроизводим, ускоряет оценку сортообразующей способности исходного материала на 4-5 лет, защищен патентом № 2073424 РФ.

6. У всех исследованных нами объектов: неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов, мягкой пшеницы и ячменя, - несмотря на их специфику, получены сходные результаты и выявлены общие закономерности в плане экспериментального получения, морфобиологических особенностей и генетико-селекционного использования гаплоидных растений.

6.1. Генотип исходного гибрида - решающий фактор, от которого зависит эффективность генетико-селекционного использования гаплоидии. Линии дип-лоидизированных гаплоидов неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов, мягкой пшеницы и ячменя обладают однотипными генами, контролирующими высокую способность к гаплоидизации (деполиплоидизации) и последующей диплоидизации (полиплоидизации). Включение такого рода генов в генотип исходного гибрида путем скрещивания с линиями гаплоидного происхождения значительно облегчает дальнейшую работу по получению новых гаплоидов и гомозиготных диплоидов.

6.2. Гаплоиды неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов мягкой пшеницы и ячменя, получаемые методом селективной элиминации хромосом с последующей эмбриокультурой in vitro изредка «приобретают» отдельные признаки опылителя. Это объясняется, по-видимому, включением фрагментов претерпевающей элиминацию ДНК опылителя в геном семенного родителя. Эм-бриокультура in vitro выступает в данном случае как механизм сохранения полученной генетической информации и передачи ее потомству.

6.3. Смена уровней плоидности у всех исследованных нами объектов сопровождается аналогичной изменчивостью морфо-биологических признаков и свойств. Способность различных видов и родов покрытосеменных растений к гаплоидизации и последующей диплоидизации свидетельствуют об общности основных генетических механизмов и параллелизме их изменчивости не только у близких, но и отдаленных систематических единиц, давно разошедшихся между собою в процессе эволюции.

6.4. Метод диплоидизированных гаплоидов, в сочетании с гибридизацией, отбором и биотехнологическими приемами, значительно сокращает сроки выведения новых сортов и создания ценного исходного материала, совмещающего высокую продуктивность, иммунитет, устойчивость к полеганию, скороспелость, широкую адаптивность и генетическую стабильность.

7. На основе многолетних экспериментальных исследований и анализа литературы установлено, что использование гаплоидии - эффективный метод интенсификации генетико-селекционных программ, обеспечивающий возможность не только ускоренного получения гомозигот, сокращения объема работы при отборе и повышения его надежности, но и реального управления формообразовательным процессом в потомстве гибридов, быстрого и точного прогнозирования сортообразующей способности исходного материала.

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ И ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ СЕЛЕКЦИОННОЙ ПРАКТИКИ И ПРОИЗВОДСТВА

1. Метод диплоидизированных гаплоидов предлагается использовать для интенсификации генетико-селекционных программ - ускоренного выведения новых сортов и создания ценного исходного материала для гибридизации, совмещающего высокую продуктивность, иммунитет, устойчивость к полеганию, скороспелость и генетическую стабильность.

2. Экспериментальную гаплоидию, в сочетании с гибридизацией, отбором и биотехнологическими приемами, привлекать в селекцию на комплексную устойчивость к болезням с целью опережения формообразовательного процесса в популяциях патогенов.

3. Использовать гаплоидию для быстрого и точного прогнозирования сортообразующих потенций исходного материала - его рекомбинационной способности и селекционной ценности - по индексу интегральной оценки продуктивности линий диплоидизированных гаплоидов, созданных на основе гибридов Бь и частоте передачи линиям важнейших хозяйственных и биологических признаков.

4. Метод ускоренной стабилизации генотипов в потомстве внутривидовых гибридов мягкой пшеницы и неполных 56-хромосомных пшенично-пырейных амфидиплоидов с помощью индуцированного апомиксиса, включающий способы получения апомиктичных растений матроклинного и андрогенного типа у гибридов Fi, методику идентификации гаплоидных и псевдодиплоидных апо-миктов и технологию создания гомозиготных линий, применять для интенсификации селекционного процесса у этих культур.

5. Способ получения гаплоидных растений на основе селективной элиминации облученных хромосом опылителя в гибридных зерновках и последующей эмбриокультуры in vitro использовать у мягкой пшеницы, неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов и всех видов покрытосеменных растений, у которых имеет место двойное оплодотворение.

6. Для повышения эффективности метода получения гаплоидов ячменя на основе селективной элиминации хромосом гаплопродюсера Н. bulbosum и последующей эмбриокультуры in vitro рекомендуется применять следующие эндогенные и экзогенные факторы: а) использование клонов гаплопродюсера Н. bulbosum 4 (Св 2920/4) и 1 (Св 2929/1), обладающих максимальной способностью к гаплопродукции; б) повторное вовлечение линий диплоидизированных гаплоидов ячменя с высокой рекомбинационной способностью и селекционной ценностью в новый биотехнологический цикл в качестве одного или двух компонентов скрещивания при создании исходных гибридов; в) трехкратное опрыскивание колосьев Н. vulgare, опыленных пыльцой Н. bulbosum, смесью ГК-75 мг/л и 2,4-Д - 100 мг/л через 1-3 дня после опыления; г) холодовая предобработка растений Н. vulgare, опыленных пыльцой Н. bulbosum, при температуре 10°С, которая осуществляется через 8-9 дней выращивания этих растений при температуре 25-27°С, в течение 12-14 дней - до эксплантации зародышей на искусственную питательную среду in vitro.

7. При удвоении числа хромосом у гаплоидов мягкой пшеницы, неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов и ячменя использовать варианты обра

308 ботки колхицином, обеспечивающие, по нашим данным, наилучшую выживаемость растений и максимальную частоту их диплоидизации.

8. Полученные нами гомозиготные линии мягкой пшеницы, неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов и ячменя включать в генетико-селекционные программы научных учреждений страны как доноры высокой продуктивности, скороспелости, неполегаемости, устойчивости к болезням высокой рекомбинационной способности и селекционной ценности; возделывать в производстве, согласно Госреестру селекционных достижений РФ, сорта ярового ячменя Биос-1 и Рахат, созданные на основе гаплоидов, а также сорта Суз-далец и Эльф, выведенные с участием в скрещиваниях линий диплоидизиро-ванных гаплоидов.

9. Исходя из данных по конъюгации хромосом в мейозе гаплоидов константных форм неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов, передачу пшенице полезных признаков, контролируемых добавочными геномами пырея, в скрещиваниях пшеницы с неполными пшенично-пырейными амфидиплоидами рекомендуется осуществлять путем получения нерегулярных рекомбинаций типа транс локаций.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Осуществление настоящей работы было вызвано запросами селекции. Выполняя заказ селекции, мы вышли на научно-методические разработки и теоретические обобщения по гаплоидии у трех видов зерновых злаков: неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов Т. agropyrotriticum Cicin (2n=8x=56), мягкой пшеницы Т. aestivum L. (2п=6х=42) и ячменя культурного Н. vulgare L. (2п=2х=14). При этом возникла необходимость уточнения и доработки общей методологии использования гаплоидии для геномного анализа и решения самых разнообразных генетических и селекционных проблем. На обширном экспериментальном материале показано, что использование гаплодии - это наиболее эффективный путь ускорения и упрощения генетико-селекционных программ. Совершенно очевидно, что диплоидизация гаплоидов, получаемых на основе гибридов Fi, обеспечивает возможность не только наиболее быстрого создания гомозигот, сокращения объема работы при отборе и повышения его эффективности, но и реального управления формообразовательным процессом в потомстве гибридов, быстрого и точного прогнозирования сортообразующих потенций исходного материала - его рекомбинационной способности и селекционной ценности.

Критический анализ литературы и многолетние экспериментальные исследования позволили разработать и усовершенствовать способы получения гаплоидных растений на основе индуцированного апомиксиса и селективной элиминации хромосом одного из родителей в гибридном зародыше. Возможные механизмы возникновения гаплоидов установлены с применением генетического, цитогенетического и селекционного анализа. Наглядно продемонстрировано, что использование биотехнологии, в частности, - эмбриокультуры in vitro, многократно повышает частоту получаемых гаплоидов. Отработаны оптимальные режимы диплоидизации гаплоидов трех разных видов покрытосеменных и созданы широко используемые в генетико-селекционных программах гомозиготные линии. Исследовано влияние эндогенных и экзогенных факторов на выход гаплоидов и их диплоидизацию у неполных пшенично-пырейных амфиди-плоидов, мягкой пшеницы и ячменя. Установлено, что генотип исходного гибрида Fi - главный фактор, от которого в наибольшей степени зависит не только выход гаплоидов и частота их диплоидизации, но и перспективы использования гомозиготных линий.

Линии диплоидизированных гаплоидов всех изученных нами объектов обладают, как правило, наследственно обусловленной склонностью к гаплои-дии. Их вовлечение в новый цикл получения такого рода форм в качестве компонентов скрещивания при создании исходных гибридов Fi существенно облегчает дальнейшую работу по получению новых гаплоидов. В процессе получения гаплоидов разных видов и родов, независимо от способов индуцирования гап-лоидии, происходит отбор однотипных генов, контролирующих высокую способность к гаплоидизации (деполиплоидизации). В свете этих данных можно считать вполне обоснованным использование культуры in vitro завязей кукурузы (Тырнов, Алаторцева, 1990) в качестве модельной системы для изучения партеногенеза. Об этом же свидетельствуют и данные французских исследователей (Henry, Vain, Buyser, 1994, показавших, что способность растения к культуре in vitro генетически обусловлена и «гены, детерминирующие реакцию на культуру тканей, не являются специализированными генами культуры тканей». Аналогичное заключение может быть сделано и в отношении генов, контролирующих способность гаплоидов к диплоидизации (полиплоидизации).

Однотипность характера генетической детерминации гаплоидии у представителей различных таксономических групп покрытосеменных, как и широкая распространенность гаплоидии в растительном мире - яркое подтверждение универсальности закона гомологических рядов в наследственной изменчивости, сформулированного Н.И. Вавиловым (1920). Другое доказательство этой общебиологической закономерности - параллелизм в изменчивости признаков при смене уровней плоидности у представителей разных видов и родов, в том числе - у неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов (8х —> 4х —>• 8х), мягкой пшеницы (6х Зх -» 6х) и ячменя (2х -»• х -> 2х), связанный с кратным изменением дозы генов, хромосом и геномов. Касаясь данной проблемы, считаем необходимым отметить большой вклад, который внесли в исследование генетической природы параллелизма, гомологичной и аналогичной изменчивости наши отечественные ученые и, прежде всего, - научная школа кафедры генетики и селекции Санкт-Петербургского государственного университета (Фадеева, 1967; Смирнов, Ватта, 1974; Фадеева, Соснихина, Иркаева, 1980; Смирнов, 1989 и др.). На основе этих работ и данных частной генетики сформировалась важнейшая составляющая генетики - сравнительная генетика растений.

Большие возможности в решении многих генетических и селекционных проблем открывает применение современных методов, основанных на технологии in vitro, таких как: клональное микроразмножение, криосохранение клеток и тканей, слияние протопластов, генная инженерия, клеточная селекция, культура зародышей, пыльников и семяпочек и других (Бутенко, 1983; Шевелуха, 1986; Эрнст, 1986). Большинство из них еще нуждается в значительной доработке. Однако исследования в этом плане весьма перспективны. Они создают предпосылки для сохранения генетических ресурсов, расширения генного пула, управления рекомбиногенезом, быстрого выявления ценных генотипов и их гомози-готизации, а, в конечном счете, - для сокращения сроков выведения сортов. Методы прикладной биотехнологии необходимо поэтому максимально приблизить к решению практических задач селекции. Наибольший прогресс в селекции, по-видимому, может быть достигнут при сочетании современных методов с традиционными - гибридизацией и отбором.

С внедрением методов прикладной биотехнологии в значительной степени связан прогресс и в области генетико-селекционного использования гаплои-дии. Метод диплоидизированных гаплоидов особенно интенсивно применяется в селекции ячменя. На территории бывшего СССР практически значимые результаты использования данного метода с выходом новых сортов получены во Всесоюзном селекционно-генетическом институте (Наволоцкий, Сечняк, Лукь-янюк и др., 1985; Наволоцкий, 1995), НИИСХ ЦРНЗ (Неттевич, Молчанова, Чистякова и др., 1989; Чистякова, Неттевич, Молчанова и др., 1993; Неттевич, Чистякова, 1998; Чистякова, Неттевич, Смолин, 1998) и НИИСХ Северо-Востока им. Н.В. Рудницкого (Родин, Родина, Сюткина и др., 1995). Вместе с тем следует признать, что эффективность использования метода диплоидизиро-ванных гаплоидов в значительной степени зависит от специфики конкретной селекционной программы и особенностей селектируемого объекта. Высказано предположение (Крупное, 1989), что в тех случаях, когда необходимо не только объединить нужные гены из разных генотипов, но и разорвать нежелательные сцепления, метод SSD (ОСП) может оказаться все же более предпочтительным по сравнению с методом удвоенных гаплоидов, и в первую очередь - у скороспелых культур. Однако у ячменя проведенные ранее исследования (England, 1981 - цитир. по Choo, Reinbergs, Kasha, 1985) уже показали, что вероятность получения лучшего сорта при использовании метода удвоенных гаплоидов выше, чем при использовании SSD-метода. Это связано с тем, что последний требует гораздо большего объема выборки для получения необходимого количества лучших линий, чем метод диплоидизированных гаплоидов. Для того, чтобы увеличить вероятность появления ценных рекомбинантов при сцепленном наследовании, целесообразно, по-видимому, получать гаплоиды и гомозиготные диплоиды не из Fi, а из отобранных элитных растений F2 (Snape, Simpson, 1981; Choo, Reinbergs, Kasha, 1985; Yonezawa, Nomura, Sasaki, 1987).

Результаты проведенных нами исследований показывают, что для ярового ячменя метод селективной элиминации хромосом в сочетании с эмбриокульту-рой in vitro (метод Bulbosum) достаточно технологичен и приемлем в плане селекционного использования. К такому же выводу пришли Дж. Снейп и И.

Симпсон с соавторами (Snape, Simpson, 1986),анализируя различные технологии получения гаплоидов. Для многорядного и озимого ячменя, возможно, более перспективным окажется метод пыльниковых культур. Об этом свидетельствуют успехи, которых достигли в данной области В. Фридт и Б. Форуги-Вер (Friedt, Foroughi-Wehr, 1983). Андрогенез in vitro - потенциально наиболее перспективный метод массового получения гаплоидов. С его помощью у пшеницы и риса уже сейчас можно создавать сорта гаплоидного происхождения (Sage, 1987). Однако этому, как уже говорилось, препятствует высокая частота альбиносов в культуре пыльников и микроспор и хромосомная нестабильность зеленых регенерантов. Не лишены оснований и опасения в том (Крупнов, 1989), что андрогенные дигаплоиды могут оказаться неравноценными матроклинным ди-гаплоидам «по генетическому потенциалу ДНК ядра, пластид и митохондрий, по стабильности урожайности в различных стрессовых условиях». В этом смысле матроклинные формы, возникшие в результате партеногенеза, апогамии, селективной элиминации хромосом пыльцевого родителя в гибридном зародыше и гиногенеза in vitro, имеют важное преимущество перед андрогенными формами. Тем не менее, в результате полевых испытаний андрогенных линий удвоенных гаплоидов ярового ячменя, полученных из гибридов Fb в сравнении с родственными линиями неандрогенного происхождения, между ними в целом не обнаружено значительных различий по урожайности и массе 1000 зерен (Friedt, Foroughi-Wehr, 1986). При этом андрогенные линии были лучше обычных по устойчивости к мучнистой росе, что, по мнению авторов, указывает на преимущества селекции in vitro.

Для неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов, мягкой пшеницы и многих других культур весьма перспективен, на наш взгляд, метод получения гаплоидов на основе селективной элиминации облученных хромосом в гибридном зародыше с последующей эмбриокультурой in vitro. Следует к тому же иметь в виду, что получаемые in vitro гаплоиды и производные от них гомозиготные диплоиды при выращивании в искусственном климате не испытывают давления отбора местных почвенно-климатических и других природных факторов. В связи с этим большой практический интерес представляет их использование в селекционных программах экологически различных регионов страны. В условиях жесткого экономического и финансового кризиса, когда создание новых линий диплоидизированных гаплоидов во многих научных учреждениях России стало проблематичным, целесообразна, по-видимому, повторная селекционная проработка созданного в предыдущие годы материала с учетом его адаптивности и стабильности урожая в широком диапазоне условий возделывания. Система оценки и полевых испытаний линий диплоидизированных гаплоидов требует, на наш взгляд, существенной корректировки. Чрезмерная растянутость этого процесса, как и неадекватный выбор критериев отбора, резко снижают преимущества селекционного использования гаплоидии.

Не подлежит сомнению, что все методы получения гаплоидов и гомозиготных диплоидов, о которых шла речь в настоящей работе, требуют дальнейшего совершенствования. В наибольшей степени это относится к способам ди-плоидизации гаплоидов: их производительность у большинства объектов продолжает оставаться низкой. В этом плане необходимы исследования по привлечению новых полиплоидизирующих агентов, таких, как закись азота N20, которая, по некоторым данным (Hansen, Andersen, Due, Olesen, 1988), оказалась более эффективной и менее токсичной, по сравнению с колхицином, при удвоении числа хромосом у молодых гаплоидных растений пшеницы. Большой интерес, с нашей точки зрения, представляют режимы холодовой предобработки зародышей, пыльников и семяпочек перед эксплантацией на искусственную питательную среду: во многих случаях они способствуют повышению уровня спонтанной диплоидизации. Метод диплоидизированных гаплоидов необходимо шире вовлекать в селекционный процесс и генетический анализ, в частности -для создания форм, обладающих комплексным иммунитетом, изучения наследования количественных признаков, взаимодействия генотипа с условиями окружающей среды, исследования рекомбинационного процесса и наиболее важных аспектов гаметной и зиготной селекции. Вместе с тем необходимы дальнейшие поиски рациональных путей привлечения гаплоидии к решению наиболее трудных теоретических и прикладных проблем генетики, селекции, физиологии, эмбриологии и биотехнологии, в том числе - генетической инженерии на клеточном, геномном, хромосомном и генном уровнях.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, доктора биологических наук, Чистякова, Валентина Николаевна, Немчиновка-1, Московской обл.

1. Алиханян С.И. Становление генетической инженерии (исторический аспект) // Биотехнология. - М.: Наука, 1984. С. 160-167.

2. Ауземус Э.Р., Мак-Нил Ф.Х., Шмидт Ю.У. Генетика и наследование // Пшеница и ее улучшение. М.: Колос, 1970. С. 250-295.

3. Баранов П.А., Дубинин Н.П, Хаджинов М.И. Проблема гибридной кукурузы (Основные задачи и методы их разрешения) // Бот. журнал. 1955. -Т. 40, №4.-С. 481-507.

4. Белецкий Ю.Д., Прихоженко Э.Я., Сизова Л.И. Репарагенное влияние ПАБК на вызываемые НММ повреждения пластид у подсолнечника // Химический мутагенез в создании сортов с новыми свойствами. М.: Наука, 1986. С. 146-149.

5. Блохин В.И., Ерошенко Л.М., Кожемякин Е.В., Молчанова Л.М., Неттевич Э.Д., Смолин В.П., Чистякова В.Н. Патент на селекционное достижение № 0316 РФ. Ячмень яровой Рахат. Зарегистрировано в Госреестре РФ 05. 04.1999 г.

6. Бовкис E.H. Индуцированный гаплоидный партеногенез у ППГ // Тр. ин-та / НИИСХ ЦРНЗ.-М.: Московский рабочий, 1971. Т. 2. Вып. 16. С. 53-60.

7. Бовкис E.H. Гаплоиды пшенично-пырейных гибридов (методы получения и использования в селекции): Автореф. дис. канд. биол. наук. М., 1972.-25 с.

8. Бовкис E.H. Некоторые вопросы использования облученной пыльцы в генетике и селекции озимой мягкой пшеницы (Triticum aestivum) // Генетика. 1978. - Т. 14, № 7. - С. 1237-1246.

9. Бовкис E.H. Материнский радиобиологический эффект и ускорение селекции //Вестн. Рос. акад. с.-х. наук. 1997. N 5. С. 31-33.

10. Бовкис E.H. Материнский радиобиологический эффект и ускорение селекции // Вестн. Рос. акад. с.-х. наук. 1997. № 5. С. 31-33.

11. Бороевич С. Принципы и методы селекции растений. М.: Колос, 1984.-344 с.

12. Бояджиев П. Мариана, нов сорт ориз, получен по метода на антер-ните култури // Растениевъд. науки. 1990. - Т. 27, № 6. - С. 111-113.

13. Бриггс Ф., Ноулз П. Научные основы селекции растений. М.: Колос, 1972. - 399 с.

14. Будин К.З. Межвидовая гибридизация картофеля // Пром. тех-нол. пр-ва картофеля в Волго-Вят. зоне. Киров, 1983. С. 6-11.

15. Будин К.З. Использование межвидовой гибридизации в селекции картофеля // 5-й съезд ВОГИС им. Н.В. Вавилова 24-28 ноября 1987: Тез. докл.-М., 1987. Т. 6. С. 110.

16. Бутенко Р.Г. Технология in vitro в сельском хозяйстве // Сельскохозяйственная биология. 1983. -N 5. - С. 3-7.

17. Вавилов Н.И. Закон гомологических рядов в наследственной изменчивости. Саратов, 1920. - 16 с.

18. Вавилов Н.И. Генетика на службе социалистического земледелия, 1932 // Н.И. Вавилов. Избранные сочинения. М.: Колос, 1966. С. 32-56.

19. Валеева З.Т., Тимин Н.И., Пыжьянова Л.Г. Получение гомозиготных форм моркови на основе индуцированного апомиксиса // Апомиксис у раст.: состояние пробл. и перспективы исслед.: Тр. Междунар. симп. 21-24 июня 1994. Саратов, 1994. С. 24-25.

20. Велибеков М.Д., Малород В.И., Кузьмин H.A. Индуцированный апомиксис и создание константных селекционных линий яровой пшеницы // Новое в селекции и семеноводстве сельскохозяйственных культур / Науч. труды НИИСХ ЦЧП, Каменная степь. 1987. С. 9-13.

21. Гаркавый П.Ф., Наволоцкий В.Д. Использование гаплоидии в селекции ячменя // С. х. за рубежом. 1979. - № 6. - С. 18-23.

22. Герасимова E.H. Гаплоидное растение Crépis tectorum, полученное экспериментально // Биологич. журнал. 1936. - Т. 5, № 5. - С. 895-899.

23. Глеба Ю.Ю. Биотехнология растений // Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда: Тез. докл. VII Междунар. конф. 25-28 ноября 1997. М., 1997. С. 6-7.

24. Головин В.П. Эффективность использования гаплоидов в гетеро-зисной селекции // 4-й съезд генетиков и селекционеров Украины, Одесса, 1981: Тез. докл. Киев, 1981. С. 134-135.

25. Головин В.П., Серый А.П. Использование удвоенных гаплоидов в практической селекции кукурузы // Проблемы апомиксиса и отдаленной гибридизации. Новосибирск: Наука, 1987. С. 94-99.

26. Голубовская И.Н. Цитогенетический анализ анеуплоидии в популяциях различных форм 56-хромосомных неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов // Генетика. 1969. - Т. 5, № 8. - С. 32-45.

27. Грекова Н.П. Сравнительное изучение гомозиготных линий кукурузы, полученных из гаплоидов и путем длительного инбридинга // Проблемы апомиксиса у растений и животных. Новосибирск: Наука, 1973. С. 178-186.

28. Гриб О.М., Гриб С.И. Преимущества гаплоидии в селекции ярового ячменя // Состояние и перспективы развития сельскохозяйственной биотехнологии: Матер. Всесоюзн. конф., Москва, 1986. Л., 1986. С. 116-118.

29. Гриб С.И. Селекция интенсивных сортов ярового ячменя в Белорусской ССР: Автореф. дис. . докт. с.-х. наук . Немчиновка, Моск. обл., 1988. - 32 с.

30. Гриб С.И., Кадыров М.А., Батуро Ф.М. Селекционная ценность компонентов скрещивания у ярового ячменя // Теоретические и практические аспекты селекции и семеноводства ржи, ячменя и тритикале: Сб. резюме Ме-ждунар. науч. конф. Прага, 1986. С. 63.

31. Гришина Е.В. Селекция на гетерозис и гаплоидия // Гаплоидия и селекция. М.: Наука, 1976. С. 191-200.

32. Гришина Е.В., Зайцева М.И. Получение гаплоидов у кукурузы при воздействии химическими мутагенами и физиологически активными веществами // Апомиксис и цитоэмбриология растений. Изд-во Сарат. ун-та, 1968. С. 65-68.

33. Гришина Е.В., Комарова П.И., Абузярова З.И. Частота встречаемости гаплоидов и близнецов при задержанном опылении кукурузы // Апомиксис и цитоэмбриология растений. Из.-во Сарат. ун-та, 1975. Вып. 3. С. 53-64.

34. Гужов Ю.Л., Фукс А., Валичек П. Селекция и семеноводство полевых культур. М.: ВО «Агропромиздат», 1991. - 463 с.

35. Гуляев Г.В. Генетика. М.: Колос, 1977. - 360 с.

36. Гуляев Г.В. Селекция растений в преддверии XXI века // Принципы и методы селекции и семеноводства зерновых и зернобобовых культур в Нечерноземье. М., 1996. С. 13-21.

37. Гуляев Г.В., Гужов Ю.Л. Селекция и семеноводство полевых культур. М.: Агропромиздат, 1987. -447 с.

38. Гуляев Г.В., Лапченко Г.Д., Чистякова В.Н. Пути использования гаплоидии // Труды конф. по улучшению селекционно-семеноводческой работы с зерновыми культурами в РСФСР. М.: Московский рабочий, 1973. С. 132-144.

39. Давоян Н.И., Тырнов B.C. Закономерности диплоидизации гаплоидов // Гаплоидия и селекция. М.: Наука, 1976. С. 179-191.

40. Давоян Э.И. Получение гаплоидов у риса методом культивирования неоплодотворенных завязей в условиях in vitro // Докл. ВАСХНИЛ. -1985. -№3. -С. 15-16.

41. Данвелл Дж. М. Культуры гаплоидных клеток //Биотехнология растений: культура клеток. / Пер. с англ. Негрука В.И., под ред. Р.Г. Бутенко. -М.: ВО Агропромиздат, 1989. С. 33-51.

42. Добрецова Т.Б., Лутков А.Н., Манжос А.М. О возможности получения полиплоидных и гаплоидных форм сахарной свеклы из близнецовых растений // Полиплоидия и селекция. М. Л.: Наука, 1965. С. 232-238.

43. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта. М.: Колос, 1973. - 336 с.

44. Дубинин Н.П., Щербаков В.К. Теоретические вопросы и достижения при использовании полиплоидии в селекции растений // Полиплоидия и селекция: Тр. второго совещ. по полиплоидии 14-18 января М. - Л.: Наука, 1965. С. 18-42.

45. Дьячук П.А., Дьячук Т.И., Кудашкина C.B., Сафронова Н.Ф., Давыдов С.Д. Получение гаплоидных растений мягкой яровой пшеницы саратовских сортов в культуре пыльников // Докл. ВАСХНИЛ. № 10. - С. 3-4.

46. Дьячук П.А., Дьячук Т.И., Прокофьева И.Г., Тучин C.B. Возможности и перспективы использования гаплоидии в селекции пшеницы и ячменя // Селекция и семеноводство зерновых культур. Саратов, С. 46-50.

47. Ефейкин А.К., Васильев Б.И. Получение гаплоидов у твердых пшениц путем опыления рентгенизированной пыльцой // Тр. по прикл. бот., генет. и селекц. 1936 (1935). Сер. 2. № 9. С. 39-45.

48. Жданов Н.В. Получение мутаций путем воздействия химическими мутагенами на черенки гаплоидной и диплоидной форм томата: Автореф. дис. канд. биол. наук. Л., 1974. - 18 с.

49. Жученко A.A. Теория и практика адаптивной интенсификации растениеводства // Экономика сельского хозяйства. 1985. - № 5.

50. Жученко A.A. Адаптивное растениеводство (эколого-генетические основы). Кишинев, 1990. - 432 с.

51. Жученко A.A. Стратегия адаптивной интенсификации сельского хозяйства (Концепция). Пущино, 1994. - 148 с.

52. Жученко A.A., Король А.Б. Рекомбинация в эволюции и селекции. -М.: Наука, 1985. 400 с.

53. Забирова Э.Р., Шацкая O.A., Щербак B.C., Чумак М.В. Использование автодиплоидных линий кукурузы в селекции гетерозис // Апомиксис у растений: состояние, проблемы и перспект. исслед.: Труды Междунар. симп. 21-24 июня 1994. Саратов, 1994. С. 60-62.

54. Звержанская JI.C. Некоторые особенности мейоза у гаплоидов кукурузы // Апомиксис и цитоэмбриология растений. Изд-во Сарат. ун-та, Вып. З.С. 145-153.

55. Иванов М.А. Экспериментальное получение гаплоидов у Nicotiana rustica (с специальным рассмотрением гаплоидии у цветковых растений) // Изв. биол.-геогр. науч.-иссл. ин-тапри Вост.-Сиб. гос. ун-те. Иркутск. 1937. Т. 7. №3-4. С. 71-156.

56. Иванов Ю.А. Перспективы гибридизации промежуточных пшенич-но-пырейных гибридов (2п=56) с озимыми пшеницами // Говорят молодые ученые: Докл. на первой Московской областной конф. молодых ученых. М.: Московский рабочий, 1966. С. 173-175.

57. Иванов Ю.А. Получение гаплоидов при скрещивании пшеницы с пыреем // Селекция и семеновод. 1974. - № 5. - С. 69-70.

58. Иванов Ю.А. О частичном включении генетического материала пырея в геном яйцеклетки при скрещивании Triticum aestivum с Agropyron glaucum // 3-й съезд ВОГИС им. Н.И. Вавилова 16-20 мая 1977: Тез. докл. Л.: Наука, 1977. С. 207.

59. Ивановская Е.В. Гаплоидное растение Solanum tuberosum L. // Докл. АН СССР. 1939. - Т. 24, № 5. - С. 488-491.

60. Игнатова С.А., Лукьянюк С.Ф. Исследование диплоидизации гаплоидов ячменя и тритикале // Цитология и генетика. 1980. - Т. 14, № 5. -С. 60-63.

61. Инге-Вечтамов С.Г. Генетика с основами селекции. М.: Высшая школа, 1989. - 592 с.

62. Искакова К.М., Азимова Е.Д. Влияние AgNC>3 на процессы морфогенеза в длительно культивируемых андрогенных структурах ячменя // Матер. Всесоюзн. науч. конф. по с.-х. биотехнол., Целиноград, 25-28 июня, 1991: Тез. выступ. Целиноград, 1991. - С. 66-67.

63. Кадыров М.А., Гриб С.И., Батуро Ф.Н. Проблема информативности селекционного процесса самоопыляемых культур // С.-х. биология. № 4. -С. 98-105.

64. Кадыров М.А., Гриб С.И. Батуро Ф.Н. Селекционный процесс как объект исследований // Проблемы и перспективы селекции и семеноводства зерновых, зернобобовых и кормовых культур в XII пятилетке: Тез. докл. науч. конф. Жодино, 1985. С. 6-8.

65. Канделаки Г.В. Отдаленная гибридизация и ее закономерности. -Тбилиси: Мецниереба, 1969. С. 30-59; 105-128.

66. Канделаки Г.В. Отдаленная гибридизация и явление псевдогамии // Апомиксис и селекция. М.: Наука, 1970. С. 171-182.

67. Канделаки Г.В. Формы апомиксиса у некоторых культурных растений семейства Роасеае // Цитогенетические основы селекции растений. -Новосибирск: Наука, 1977. С. 134-141.

68. Карпеченко Г.Д. Полиплоидные гибриды Raphanus sativus L. X Brassica oleraceae L. // Тр. по прикл. бот., генет. и селекц. Л., 1927. С. 305.

69. Карпеченко Г.Д. Успехи генетики в области формообразования // Достижения и перспективы в области прикладной бот., генет. и селекц. Л., 1929. С. 71-86.

70. Карпеченко Г.Д. Теория отдаленной гибридизации. М. - Л.: ОГИЗ - Сельхозгиз, 1935а. С. 3-63.

71. Карпеченко Г.Д. Экспериментальная полиплоидия и гаплоидия // Теоретические основы селекции растений. М. - Л.: Сельхозгиз, 19356. С. 397-434.

72. Карпеченко Г.Д. О поперечном делении хромосом под влиянием колхицина// Докл. АН СССР. 1940. - № 29. - С. 402-404.

73. Кириллова Г.А. Получение индуцированных мутаций у томата путем использования гаплоидной формы: Автореф. дис. . канд. биол. наук. -Л., 1966а. -19 с.

74. Кириллова Г.А. Явление гаплоидии у покрытосеменных растений // Генетика. 19666. - № 2. - С. 137-147.

75. Кириллова Г.А., Богданова E.H. Получение мутантной формы у гаплоидного томата // Исследования по генетике. Л., ЛГУ, 1964. Сб. 1. С. 86-89.

76. Кириллова Г.А., Богданова E.H. Сравнительное изучение длительно существующей гаплоидной формы томата и гомозиготной диплоидной, полученной от нее // Генетика. 1978. - Т. 14, № 6. - С. 1030-1037.

77. Киру С.Д. Использование диплоидов и дигаютоидов в селекции картофеля для генеративного размножения: Докл. 1-й съезд Вавиловского о-ва генетиков и селекционеров (ВОГИС) 20-25 декабря 1994 // Генетика. -1994. Т. 30, Приложение. - С. 69.

78. Кихара X. Цитоплазматическая мужская стерильность и селекция пшеницы // С.-х. биология. 1967. - Т. 2, № 2. - С. 214-225.

79. Кихара X. Цитоплазматическая мужская стерильность и селекция пшеницы // Гетерозис: теория и практика. Л.: Колос, 1968. С. 87-102.

80. Константинов A.B. К вопросу о механизмах мейоза // Вопросы генетики и селекции. Минск: Наука и техника, 1970. С. 223-233.

81. Костов Д. Частота полиэмбрионии и хлорофилльных вариаций у ржи // Докл. АН СССР. 1939. - Т. 24, Вып. 5. - С. 468-471.

82. Крупнов В.А. Сравнительная оценка биотехнологических методов в селекции злаков // Вестн. с.-х. науки. 1989. - № 3 (391). - С. 24-29.

83. Лаптев Ю.П. Гетероплоидия в селекции растений. М.: Колос, 1984. С. 148-204.

84. Лаптев Ю.П., Макаров П.П. Использование гаплоидов картофеля в селекции и генетических исследованиях // С.-х. биология. 1975. -№ 3. -С. 330-333.

85. Лапченко Г.Д. Гибридизация пшенично-ржаных амфидиплоидов с пшенично-пырейными гибридами промежуточного типа (2п = 56) // Гибриды отдаленных скрещиваний и полиплоиды. М.: Изд-во АН СССР, 1963. С. 151-160.

86. Лапченко Г.Д. Использование промежуточных 11111 (2п = 56) в селекции озимой пшеницы // Тр. конф. по улучшению селекционно-семеноводческой работы с зерновыми культурами в РСФСР. М.: Моск. рабочий, 1973. С. 17-28.

87. Лапченко Г.Д., Бовкис E.H. Полиэмбриония у пшенично-пырейных гибридов (2п=42) и (2п=56) // Генетика. -1971. Т. 7, № 7. - С. 17-20.

88. Лапченко Г.Д., Ячевская Г.Л., Корнейчук С.Р. Гибриды пырея сизого с пшеницей (2п=63) // 3-е Всесоюзн. совещ. по полиплоидии 15-18 декабря 1970: Тез. докл. Минск, 1970. С. 59-60.

89. Лиорек С.И. Гаплоидия и ее значение для экспериментального индуцирования диплоспорического апомиксиса у картофеля // С.-х. биология. -1987,-№4.-С. 113-115.

90. Лобашев М.Е. Что такое генетика. Л.: Знание, 1969. С. 76-92.

91. Лобашев М.Е. Генетика. 2-е изд. Изд-во Ленингр. ун-та, 1967.751 с.

92. Лукьянюк С.Ф. Разработка приемов in vitro для получения гаплоидов ячменя и тритикале: Автореф. дис. . канд. биол. наук. М., 1983. -18 с.

93. Лукьянюк С.Ф., Игнатова С.А. Методы культуры тканей и органов в селекции растений (Методич. рекомендации). Одесса, 1980. - 21 с.

94. Лукьянюк С.Ф., Игнатова С.А. Факторы, определяющие морфогенез и выход гаплоидов в культуре пыльников тритикале // Теоретические и прикладные аспекты селекции и семеноводства пшеницы, ржи, ячменя и тритикале. Одесса: ВСГИ, 1981. С. 34-35.

95. Лукьянюк С.Ф., Игнатова С.А. Получение гаплоидов ячменя с помощью гаплопродюсеров (Методич. рекомендации). Одесса, - 21 с.

96. Лукьянюк С.Ф., Игнатова С.А., Наволоцкий В.Д., Шеремет A.M. Использование гаплоидов для интенсификации процесса получения исходного материла в селекции ячменя II Докл. ВАСХНИЛ. 1983 - № 7. - С. 9-11.

97. Любимова В.Ф. О генетической связи между многолетней пшеницей Triticum agropyrotriticum Cicin и мягкой Т. vulgare Host // Гибриды отдаленных скрещиваний и полиплоиды. М.: Изд-во АН СССР, 1963. С. 60-74.

98. Любимова В.Ф. Зернокормовые и многолетние пшеницы // Докл. симпоз. по отдаленной гибридизации растений. София, 1965. С. 23-30.

99. Любимова В.Ф. Цитогенетические исследования гибридов, полученных от скрещивания Agropyron glaucum Roem. et Schult, с Agropyron elon-gatum (Host) P.B. // Генетика. 1970. Т. 6, № 19. - С. 5-14.

100. Любимова В.Ф., Белов В.И. Биологические особенности многолетней пшеницы и использование ее хозяйственно ценных признаков // Теоретические и практические аспекты отдаленной гибридизации. М.: Наука, 1986. С. 38-50.

101. Магешвари П. Эмбриология покрытосеменных. М.: ИЛ, 1954.439 с.

102. Манзюк В.Т., Наумова Л.Н. Создание исходного материала в селекции ячменя методом бульбозум // С.-х. биол. 1987. - № 7. - С. 3-7.

103. Международный классификатор СЭВ рода Hordeum L. Л., 1983.54 с.

104. Мейстер Н.Г., Тюмяков И.А. Первое поколение ржано-пшеничных гибридов прямого и реципрокного скрещивания // Журнал опытной агрономии Юго-Востока. 1927. - Т. 4, № 1. - С. 87-97.

105. Модилевский Я.С. Цитогенетическое изучение рода Nicotiana. IX. Цитология и эмбриология гаплоида N. rustica // Журн. ин-та бот. АН УССР. 1939. Вып. 21-22 (29-30). С. 201-215.

106. Молканова О.И., Ковалева И.С., Коновалова Л.Н., Слюсаренко А.Г. Индукция гаплоидных растений в культуре in vitro пыльников межвидовых гибридов пшеницы // Бюл. Гл. ботан. сада АН СССР. 1990. № 156. С. 73-78.

107. Моррис Е.Р., Сире Э.Р. Цитогенетика пшеницы и родственных форм // Пшеница и ее улучшение. М.: Колос, 1970. С. 33-110.

108. Мухсинов В.Х. Использование различных методов индукции гаплоидов в селекции ячменя //Селекция и семеновод. 1986. - № 6. - С. 54-56.

109. Мюнтцинг А. Генетические исследования. М.: ИЛ, 1963. - 487 с.

110. Навашин М.С. Новая возможность в селекции // Семеноводство. -1933.-№2.-С. 11-16.

111. Навашин М.С. Новая возможность в селекции (об использовании гаплоидов) // Бот. журн. 1934. - Т. 19, № 4. - С. 640-641.

112. Наволоцкий В.Д. Направления и перспективы использования гаплоидии в селекции ячменя // Науч.-техн. бюл. Всес. селекц.-генет. ин-та. 1986. № 3/61. С. 14-18.

113. Наволоцкий В.Д. Гаплоидия в селекции ячменя: результаты и перспективы // Физиол. и биохимия культ, раст. 1995. - Т. 27, № 1-2,, -С. 99-102. '

114. Наволоцкий В.Д., Сечняк Л.К., Лукьянюк С.Ф., Игнатова С.А. Новая технология селекции ячменя с использованием гаплоидии // Вестн. с.-х. науки. 1985. - № 5. - С. 34-35.

115. Нежевенко Г.И., Шумный B.K. Близнецовый метод получения гаплоидных растений // Генетика. 1970. - Т. 6, № 1. - С. 173-180.

116. Неттевич Э.Д., Смолин В.П., Молчанова JI.M. Новое в селекции ячменя на устойчивость к пыльной головне // Вестн. Рос. акад. с.-х. наук. -1994.-№1.-С. 15-17.

117. Неттевич Э.Д., Чистякова В.Н., Смолин В .П., Молчанова Л.М. Патент № 2073424 РФ на изобретение. Способ определения рекомбинаци-онной способности и селекционной ценности исходных форм ячменя // Бюл. -1997.-№5.-16 с.

118. Неттевич Э.Д., Смолин В.П., Молчанова Л.М., Чистякова В.Н., Погорелова Л.Г. Особенности семеноводства сортов ярового ячменя, созданных методом гаплоидии // Современное семеноводство полевых культур / Науч. труды НИИСХ ЦРНЗ. М., 1993. С. 171-177.

119. Неттевич Э.Д., Чистякова В.Н., Смолин В.П., Молчанова Л.М., Космачева И.А. Использование гаплоидии для оценки рекомбинационной способности и селекционной ценности исходных форм ячменя // Докл. Рос. акад. с.-х. наук. 1993. - № 3. - С. 3-8.

120. Неттевич Э.Д., Молчанова Л.М., Чистякова В.Н., Пухальский В.А., Смолин В.П., Денисова Л.В., Внучкова В.А. Гаплоидия как метод создания исходного материала в селекции ячменя // Вестн. с.-х. науки. 1989. - № 7. - С. 93-99.

121. Никончик Л.И., Гриб С.И. Повышение выхода гаплоидов у ярового ячменя на основе Н. ЬиШоБшл Н Состояние и перспективы развития сельскохозяйственной биотехнологии: Матер. Всесоюзн. конф., Москва, 1986. -Л, 1986. С. 116-118.

122. Ницше В., Венцель Г. Гаплоиды в селекции растений / Пер. с англ. Попова В.В. М.: Колос, 1980. - 127 с.

123. Павлова М.К. Культура Неоплодотворенных завязей и семяпочек: возможности и перспективы (обзор) // С.-х. биология. 1987. - № 1. - С. 27-33.

124. Петров Д.Ф. Генетически регулируемый апомиксис. Новосибирск: Наука, 1964. С. 5-187.

125. Петров Д.Ф. Нерегулярный апомиксис в свете генетической теории апомиксиса // Симп. по апомиксису растений: Тез. докл. Тбилиси: Мец-ниереба, 1971. С. 28-30.

126. Петров Д.Ф. Генетические основы апомиксиса. Новосибирск: Наука, 1979. С. 204-259.

127. Петров Д.Ф., Юдин Б.Ф. Гаплоидный апомиксис и его значение для селекции гибридной кукурузы // Изв. Сибирского отделен. АН СССР. Сер. биологич. наук. 1973. Вып. 1. № 5. С. 52-62.

128. Пирузян Э.С. Основы генетической инженерии растений / Отв. Ред. Р.Г. Бутенко. М.: Наука, 1988. - 303 с.

129. Писарев В.Е., Виноградова Н.М., Поддубная-Арнольди В.А. Гаплоид ячменя, полученный в результате отдаленной гибридизации // Докл. АН СССР. 1945. - Т. 49, Вып. 5. - С. 381.

130. Платонова Р.Н., Сахаров В.В., Катрыш Л.И., Ольховенко В.П. Мутационное последействие колхицина (цитологические исследования). Сообщение I //Генетика. 1968. - Т. 4, № 10. - С. 5-13.

131. Плохинский H.A. Алгоритмы биометрии. Изд-во Моск. ун-та, 1967.-81 с.

132. Поволочко П.А. Экспериментальное получение гаплоидных растений в роде Nicotiana// Тр. по прикл. бот. 1937. Сер. 7. С. 175-190.

133. Поддубная-Арнольди В.А. Современное состояние вопроса о бесполом размножении у покрытосеменных растений // Ботан. журн. Т. 25, № 1.-С. 75-91.

134. Поддубная-Арнольди В.А. Цитоэмбриология покрытосеменных растений. М.: Наука, 1976. С. 357-402.

135. Раджабли Е.П., Рудь В.Д. Получение полиплоидных форм и их использование в селекции // Генетические методы в селекции растений 1 Под ред. Н.В. Турбина. М.: Колос, 1974. С. 52-82.

136. Рапопорт И.А. Действие ПАБК в связи с генетической структурой // Хим. мутагены и парааминобензойная кислота в повыш. урожайности с.-х. раст. М.: Наука, 1989. С. 3-37.

137. Рапопорт И.А., Васильева C.B., Давниченко J1.C. Роль п-амино-беизойной кислоты в репарации повреждений, индуцированных ультрафиолетовыми и у-излучениями // Докл. АН СССР. 1979. - Т. 247. - С. 231-235.

138. Родин Е.А., Родина H.A., Сюткина В.А., Кокина Л.П. Создание гомозиготных дигаплоидных линий ячменя и их использование в селекции // С.-х. наука Сев.-Вост. европ. части России / НИИ с.-х. Сев.-Вост., Киров. 1995. Т. 1.С. 139-144.

139. Рокицкий П.Ф. Биологическая статистика. Минск: Вышэйшая школа, 1973. - 320 с.

140. Савельева Т.И. Действие колхицина совместно с диметилсульфо-ксидом на полиплоидизацию проростков кукурузы // Вопросы ботаники и генетики. Саратов, 1975. С. 38-39.

141. Сассон А. Биотехнология: свершения и надежды / Пер. с англ. Мехедова С.Л. и Миркина С.М. под ред. В.Г. Дебабова. М.: Мир, - 411 с.

142. Селиванов A.C. Многозародышевость семян и селекция. Ч. I. Перспективы использования и пути создания многозародышевых форм культурных растений. Изд-во Сарат. ун-та, 1983. - 83 с.

143. Селиванов A.C., Тырнов B.C. Опыт получения поли- и моноэм-брионных гаплоидов у перца (Capsicum arniuum L.) // Вопросы интродукции и акклиматизации растений / Сб. работ молодых ученых ботанич. садов СССР. -М.: Наука, 1971. С. 66-67.

144. Селиванов A.C., Тырнов B.C. Полиэмбриония и гаплоидия у перца Capsicum annuum L. // Апомиксис и цитоэмбриология растений. Изд-во Сарат. ун-та, 1975. Вып. 5. С. 109-122.

145. Селиванов A.C., Тырнов B.C. Полиэмбриония и гаплодия // Гаплодия и селекция. М.: Наука, 1976. С. 77-87.

146. Сечняк Л.К., Лыфенко С.Ф. Научно-технический прогресс в селекции растений // Вестн. с.-х. науки. 1986. - № 2 (353). - С. 87-94.

147. Сидоров Б.Н., Соколов H.H., Вакуленко H.A., Огородникова А.Р. Блокада веретена и гипоплоидный рост при колхициновом митозе // Полиплоидия и селекция. Тр. второго совещ. по полиплоидии 14-28 января 1963. -М. Л.: Наука, 1965. С. 109-122.

148. Склярова Н.П., Кучумов В.О. Гаплоиды и диплоидные виды картофеля в создании форм, пригодных для генеративного размножения // Селекция и семеноводство картофеля. М., 1985. С. 17-26.

149. Смирнов В.Г. Анализ генетической природы параллелизма в наследственной изменчивости // Вавиловское наследие в современной биологии. М.: Наука, 1989. С. 15-37.

150. Смирнов В.Г., Ватти К.В. Гомологичность генов и их эволюция // Успехи современной генетики. Вып. 5. / Под ред. Н.П. Дубинина. М.: Наука, 1974. С. 182-199.

151. Снедекор Дж. У. Статистические методы в применении к исследованиям в сельском хозяйстве и биологии. М.: Сельхозгиз, 1961. - 448 с.

152. Созинов A.A. Полиморфизм белков и его значение в генетике и селекции. М.: Наука. 1985. - 272 с.

153. Созинов A.A., Лаптев Ю.П. Генетика и урожай. М.: Наука, 1986. -167 с.

154. Соколов В.А., Шумный В.К. Технология гаплоидов в генетике и селекции растений // Вавиловское наследие в современной биологии. М.: Наука, 1989. С. 247-269.

155. Солнцева М.П. О поведении ядер половых клеток при семигамии и оплодотворении у Rudbeckia laciniata // Проблемы апомиксиса у растений и животных. Новосибирск: Наука. 1973. С. 161-168.

156. Солнцева М.П. Гемигамия у растений // Цитогенетические основы селекции растений. Новосибирск: Наука, 1977. С. 114-121.

157. Солнцева М.П., Жидкина Л.И. Семигамия у Zephyrantes carinata Herb. // Симп. по апомиксису растений: Тез. докл. Тбилиси: Мецниереба, 1971. С. 32-35.

158. Сорокина О.Н. Гибридизация эгилопса с пшеницей // Труды по прикл. бот., генет. и селекции. Л., 1934. С. 7.

159. Соснихина С.П., Смирнов В.Г. Мейоз у спонтанного гаплоида ржи // Вестн. Ленингр. ун-та. 1981. № 3. С. 110-112.

160. Суриков И.М., Дунаева С.Е. Элиминация хромосом при отдаленной гибридизации в семействе злаков и ее использование для получения гаплоидов // Ж. общ. биол. 1989. - Т. 50, № 2. - С. 158-170.

161. Суханов В.М. Андроклиния и ее особенности у пшеницы: Авто-реф. дис. канд. биол. наук. М., 1984. - 17 с.

162. Суханов В.М., Тырнов B.C. Получение гаплоидов in vitro из гаметических клеток // Гаплоидия и селекция . М.: Наука, 1976. С. 99-110.

163. Сытник K.M., Галкин А.П. XIII Международный ботанический конгресс 21-28 августа 1981, Сидней, Австралия // Молекулярная биология. -1982. Т. 16, Вып. 3. - С. 649-655.

164. Тарасенко Н.Д. Экспериментальная наследственная изменчивость у растений. Новосибирск: Наука, 1980. С. 58-89.

165. Тивари Ш. Морфогенез в культуре пыльников и изолированных микроспор ячменя: Автореф. дис. канд. биол. наук. М., 1989. - 25 с.

166. Тодуа В.А., Тавдумадзе K.P., Терновский М.Ф., Сарычев Ю.Ф. Индуцированный партеногенез у Nicotiana tabacum L. // Докл. АН СССР. -1967. Т. 177, № 2. - С. 448-449.

167. Турков В.Д., Дубров А.П. Сравнительная эффективность гамма-и ультрафиолетового облучения в получении гаплоидных семян у томатов Lycopersicum esculentum // Докл. АН СССР. 1968. - Т. 181, № 2. - С. 486-487.

168. Турков В.Д., Шелепина Г.А. Мутации кариотипа у близнецовых форм огурца (Cucumis sativus L.) // Генетика. 1973. - T. 9, № 8. - С 161-163.

169. Тырнов B.C. Встречаемость и тип близнецов у кукурузы, склонной к гаплоидии // 2-ое совещ. по проблемам апомиксиса у растений и животных, Новосибирск, 1968: Тез. докл. Новосибирск: Наука, С. 61-62.

170. Тырнов B.C. Генетическое исследование гаплоидов у кукурузы (Zea mays L.): Автореф. дис. канд. биол. наук. Саратов, 1970. - 28 с.

171. Тырнов B.C. Эмбриологические механизмы возникновения гаплоидов // Гаплоидия и селекция. М.: Наука, 1976а, С. 66-76.

172. Тырнов B.C. Использование гаплоидов в генетических исследованиях//Гаплоидия и селекция. М.: Наука, 19766. С. 140-151.

173. Тырнов B.C., Алаторцева Т.А. Культура завязей кукурузы in vitro как модельная система для изучения партеногенеза // Генетика развития: Тез. докл. 2 Всесоюзн. совещ. 29-31 августа 1990. Ташкент, 1990. Т. 1. Ч. 2. С. 164-166.

174. Тырнов B.C., Хохлов С.С. Андрогенез // Гаплоидия и селекция. -М.: Наука, 1976. С. 87-99.

175. Тырнов B.C., Суханов В.М., Хохлов С.С. Перспективы использования гаплоидов покрытосеменных растений в мутационной селекции // Генетика. 1973. - Т. 9, № 11. - С. 38-46.

176. Фадеева Т.С. Проблемы сравнительной генетики растений. I. Принципы геномного анализа // Генетика. 1966. - Т. 2, № 1. - С. 12-28.

177. Фадеева Т.С. Проблемы сравнительной генетики растений. VI. Параллелизм в наследственной изменчивости и его генетическая обусловленность // Исследования по генетике. Л.: ЛГУ, Сб. 3. С. 77-96.

178. Фадеева Т.С., Соснихина С.П., Иркаева Н.М. Сравнительная генетика растений. Л.: Изд-во Ленингр. ун-та, 1980. - 248 с.

179. Федорова Т.Н., Поленова И.Н. Цитологические аспекты селекции тритикале // Селекционно-генетические и цитогенетические исследования гибридов, мутантов и полиплоидов зерновых и кормовых культур. М., 1979. С. 106-113.

180. Харченко П.Н., Шкловский В.Н. Использование метода культуры пыльников в ускорении селекционного процесса // Докл. ВАСХНИЛ. 1982. -№9.-С.24-25.

181. Хватова М.Н. Изучение некоторых признаков у линий гаплоидного происхождения, исходной формы и инбредной линии кукурузы // Проблемы апомиксиса у растений и животных. Новосибирск: Наука, 1973. С. 178-186.

182. Хвостова В.В., Ячевская Г.Л., Лункина А.Н. Анализ генетической структуры константных 56-хромосомных пшенично-пырейных гибридов // Изв. СО АН СССР. Сер. биол. мед. 1963. Вып. 1. № 4. С. 76-78.

183. Хижняк В.А. Формообразование у пшенично-пырейных гибридов. Изв. АН СССР. Сер. биол. 1938. № 3. С. 597-626.

184. Хинковски Ц., Стоянова Й., Атанасов А.И. Преустройетво на селекцията при отделяйте култури на основата на постиженията на генетика-та и на генетичното инженерство // Сельскостопанска наука (Болгю). 1986. -Т. 24, № 3. - С. 24-29.

185. Хохлов С.С. Классификация апомиксиса у покрытосеменных // Докл. АН СССР. 1958. - Т. 119, № 4. - С. 812-815.

186. Хохлов С.С. Апомиксис: классификация и распространение у покрытосеменных // Успехи совр. генетики. Вып. 1. М.: Наука, С. 43-105.

187. Хохлов С.С. Явление апомиксиса и селекция растений // Сельское хозяйство России. 1968. - № 10. - С. 10-11.

188. Хохлов С.С. Гаплоидия основа аналитической селекции // Гаплоидия и селекция. - М.: Наука, 1976. С. 164-171.

189. Хохлов С.С., Гришина Е.В., Комарова П.И. Высокая частота гаплоидии в потомстве диплоидизированного гаплоида кукурузы // Генетика. - 1975. - Т. 11, № 11. - С. 153-154.

190. Хохлов С.С., Зайцева М.И., Куприянов П.Г. Выявление апомик-тичных форм во флоре цветковых растений СССР. Изд-во Сарат. ун-та, 1978. С. 24-87.

191. Хохлов С.С., Гришина Е.В., Зайцева М.И., Тырнов B.C., Мальппе-ва-Шишкинская H.A. Гаплоидия у покрытосеменных растений. Ч. I. -Изд-во Сарат. ун-та. 1970. 137 с.

192. Хохлов С.С., Гришина Е.В., Тырнов B.C., Давоян Н.И., Звержан-ская JI.C., Малышева-Шишкинская H.A. Гаплоидия у покрытосеменых растений. Ч. II. Под ред. С.С. Хохлова. Изд-во Сарат. ун-та, 1974. - 178 с.

193. Хохлов С.С., Тырнов B.C., Гришина Е.В., Давоян Н.И., Зайцева М.И., Звержанская JI.C., Селиванов A.C., Суханов В,М., Шишкинская H.A., Гусева А.И. Гаплоидия и селекция / Под ред. В.А. Крупнова. М.: Наука, 1976. - 221 с.

194. Цицин Н.В. Новый вид и новые разновидности пшеницы // Гибриды отдаленных скрещиваний и полиплоиды. М.: Изд-во АН СССР, 1963. С. 25-30.

195. Цицин Н.В., Любимова В.Ф. К вопросу о формировании 56-хромосомных пшениц // Гибриды отдаленных скрещиваний и полиплоиды. -М.: Изд-во АН СССР, 1963. С. 49-59.

196. Чалык Т.С. Создание стерильных аналогов линий кукурузы методом андрогенеза // Генетика. 1965. - № 5. - С. 135-141.

197. Чернин Л.С. Первые шаги в будущее: генная инженерия растений. М.: Агропромиздат, 1990. - 256 с.

198. Чистякова В.Н. Цитогенетическое изучение полигаплоидов неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов (2п=56). Сообщение I. Конъюгация хромосом в мейозе // Генетика. 1972а. - Т. 8, № 8. - С. 20-32.

199. Чистякова В.Н. Исследование полигаплоидов неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов (2п=56) // 2-й съезд ВОГИС им. Н.И. Вавилова 31 января 5 февраля 1972: Тез. раб. - М.: Наука, 19726. Вып. 2. С. 252.

200. Чистякова В.Н. Цитогенетическое изучение полигаплоидов неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов (2п=56). ообщение II. Формирование микроспор // Генетика. 1974. - Т. 10, № 8. - С. 5-16.

201. Чистякова В.Н. Авторское свидетельство № 520957 на изобретение. Способ получения апомиктичных форм мягкой пшеницы // Бюл. 1976. -№26.-4с.

202. Чистякова В.Н. Получение и использование гаплоидов пшеницы Triticum aestivumL. 3-й съезд ВОГИС им. Н.И. Вавилова 16-20 мая 1977: Тез. докл. Л.: Наука, 1977. С. 508.

203. Чистякова В.Н. Исследование микроспорогенеза у полигаплоидов неполных пшенично-пырейных амфидиплоидов (2п=56) // Апомиксис и цито-эмбриология растений. Изд-во Сарат. ун-та, 1978а. Вып. 4. С. 127-128.

204. Чистякова В.Н. Экспериментальное получение полигаплоидов мягкой пшеницы // Апомиксис и цитоэмбриология растений. Изд-во Сарат. ун-та, 19786. Вып. 4. С. 129-131.

205. Чистякова В.Н. Нерегулярный апомиксис в селекции пшеницы и неполных 56-хромосомных пшенично-пырейных амфидиплоидов // 14-й Международ. генетический конгресс 21-30 августа 1978: Тез. докл. М.: Наука, 1978в. Ч. П. Секции 21-32. С. 195.

206. Чистякова В.Н. Использование гаплоидов для ускорения селекционного процесса у ярового ячменя // 1>аметная и зиготная селекция растений: Матер. Респ. конф. 23 июня 1986. Кишинев: Штиинца, 1987а. С. 194-196.

207. Чистякова В.Н. Гаплоидия в интенсификации селекционного процесса у ячменя // 5-й съезд ВОГИС им. Н.И. Вавилова 24-28 ноября 1987: Тез. докл. М., 19876. Т. IV. Ч. 2. С. 234-235.

208. Чистякова В.Н. Авторское свидетельство № 1662443 СССР на изобретение. Способ получения гаплоидов ячменя. // Бюл. 1991. - № 26. -6 с.

209. Чистякова В.Н. Генотип как фактор эффективности экспериментальной гаплодии у ячменя // Принципы и методы селекции и семеновод, зерн. и зернобоб. культур в Нечерноземье (25 лет Московскому селекцентру). -М., 1996. С. 215-231.

210. Чистякова В.Н. Прикладная биотехнология в решении генетико-селекционных проблем // Новые методы селекции и создание адаптивных сортов сельскохозяйственных культур: результаты и перспективы: Тез. докл. научн. сес. 1-3 июля 1998. Киров, 19986.С. 86-87.

211. Чистякова В.Н., Молчанова JIM. Изучение потомств отдельных колосьев диплоидизированных гаплоидов ярового ячменя // Селекционно-генетические исследования зерновых, зернобобовых и кормовых культур в Центральном районе Нечерноземья. М., 1985. С. 17-25.

212. Чистякова В.Н., Лапченко Г.Д., Ячевская Г.Л. К вопросу о повышении плодовитости промежуточных пшенично-пырейных гибридов (2п=56) // 3-е Всесоюзн. совещ. по полиплоидии 15-18 декабря 1970: Тез. докл. -Минск, 1970. С. 60-61.

213. Чистякова В.Н., Неттевич Э.Д., Гуляев Г.В. Возможности генотипа в повышении эффективности метода Bulbosum: Докл. 1-й съезд Вавилов-ского о-ва генетиков и селекционеров (ВОГИС) 20-25 декабря 1994 // Генетика. -1994. Т. 30, Приложение. - С. 178.

214. Чистякова В.Н., Неттевич Э.Д., Гуляев Г.В., Астащенко А.М. Биотехнологические аспекты экспериментальной гаплоидии у ячменя // Ученые Нечерноземья развитию сельского хозяйства зоны: Докл. науч.-практ. конф. 26-28 февраля 1991. -М., 1991. С. 142-144.

215. Чистякова В.Н., Блохин В.И., Ерошенко JI.M., Кожемякин Е.В., Молчанова JI.M., Неттевич Э.Д., Смолин В.П. Авторское свидетельство № 29095 РФ на ячмень яровой Рахат от 23.04.1998.

216. Чумак М.В. Спонтанная и индуцированная полиэмбриония у кукурузы и ее связь с гаплоидией // Тр. молод, науч. сотрудников (селекция, биохимия, биофизика). Краснодар. Вып. 3. 1971. Ч. I. С. 60-65.

217. Шамина З.Б. Андрогенез и получение гаплоидов в культуре пыльников и микроспор // Культура клеток растений. М.: Наука, 1981. С. 124136.

218. Шевелуха B.C. Проблемы новой биотехнологии в селекции и растениеводстве // Вестн. с.-х. науки. 1986. - № 2 (353). - С. 95-100.

219. Шерер Н.В. Влияние условий выращивания донорных растений пшеницы на эффективность пыльниковой гаплопродукции // Всесоюзн. науч. конф. по с.-х. биотехнол. 25-28 июня 1991: Тез. выступл. Целиноград, 1991. С. 57-58.

220. Шнайдер Т.М., Прийлинн О.Я., Тохвер М.Н., Раудсепп А.Д., Дорохова Т.В. Реакция генотипов пшеницы на воздействие НММ, НЭМ и ПАБК // Новые сорта, созданные методом химического мутагенеза. М.: Наука, 1988. С. 128-131.

221. Щапова А.И., Потапова Т.А., Кравцова JI.A. Причины отсутствия редукции числа хромосов в гаметах пшенично-ржаных полигаплоидов // Цитология. 1987. - Т. 29, № 7. - С. 838-840.

222. Эллиот Ф. Селекция растений и цитогенетика. М.: ИЛ, 1961.447 с.

223. Эйгес Н.С. Особенности влияния ПАБК на фенотип яровой пшеницы и других зерновых культур Я Хим. мутагены и парааминобензойная кислота в повыш. урожайности с.-х. раст. М.: Наука, 1989. С. 64-86.

224. Эрнст Л.К. Перспективы прикладной биотехнологии // Вестн. с.-х. науки. 1986. - № 2 (353). - С. 120-126.

225. Ячевская Г.Л. Уточнение генетической структуры неполных пше-нично-пырейных амфидиплоидов (2п=:56) // Совершенствование селекц.-генетич. методов при выведении сортов зерновых и кормовых культур для Нечерноземья. М., 1984. С. 94-102.

226. Ячевская Г.Л., Лалченко Г.Д. Изучение геномного состава 56-хромосомных пшенично-пырейных гибридов // Говорят молодые ученые: Докл. на первой Московской областной конф. молодых ученых. М.: Московский рабочий, 1966. С. 168-172.

227. Abdalla M.M.F., Hermsen J.G.Th. Diploid parthenogenesis and andro-genesis in diploid Solanum // Euphytica. 1972. - V. 21, N 3. - P. 426.

228. Abel B. Eine Methode zur Erhaltung von homozygoten Chlorophyllmutanten //Naturwiss. 1955. - Bd 42, H. 12. - S. 372-373.

229. Ahokas H. A mutant of barley: triploid inducer // Barley Genet. Neewslett. 1977. - V. 7. - P. 4-6.

230. Al-Yasiri S., Rogers O.M. Chemical induction of haploidy in Lycoper-sicon esculentum // Proc. XII Intern. Hort. Congr. 1966. V. 1. P. 643.

231. Anamthawat-Jonsson K., Schwarzacher Т., Heslop-Harrison J.S. Behaviour of parental genomes in the hybrid Hordeum vulgare x H. bulbosum // J. Hered. 1993.-V. 84, N1.-P. 78-82.

232. Ao G.M., Zhao S.X., Li G.H. Induction of haploid plantlets from un-pollinated maize ovaries in vitro // Acta Genetica Sinica. 1982. - V. 9, N 4. - P. 281-283.

233. Badr M., Horn W. Ein Beitrag zur Züchtung von Pelargonium zonale -Hybriden // Z. Pflanzenzucht. -1971. Bd 66. - S. 278-292.

234. Bains G.S., Howard H.W. Haploid Solanum demissum plants // Nature (Lond.). 1950. - V. 166. - P. 795.

235. Bains N.S., Singh J.R., Gosal S.S. Production of wheat haploids through embryo rescue from wheat x mayze crosses // Curr. Sei. (India). 1995. -V. 69,N7.-P. 621-623.

236. Barclay I.R. High frequencies of haploid production in wheat (Triticum aestivum) by chromosome elimination // Nature (Lond.). 1975. - V. 256, N 5516. -P. 410-411.

237. Barclay I.R., Shepherd K. W., Sparrow D.B.H. Control of chromosome elimination in Hordeum vulgare H. bulbosum hybrids // Barley Genet. Newslett. - 1972. - V. 2. - P. 22-24.

238. Battaglia E. Fenomeni citologici nuovi nella embriogenesi (semigamia) e nella microsporogenesi («Doppio nucleo di restitutione» di Rudbeckia laciniata L. (notapreventiva) // Nuovo Giorn. Bot. Ital. n. s. 1945. - V. 52, N 1. - P. 34-38.

239. Beard J. Electricity switches plants onto new genes // Virology. 1990. - V. 176, N2.-P. 36.

240. Beckert M., Lucas H., Franche C. Vers une transformation universelle du vivant? // Recherche. -1991. V. 22, N 229. - P. 236-240.

241. Belling J., Blakeslee A.F. The reduction division in haploid, diploid, triploid and tetraploid Daturas // Proc. Nat. Acad. Sei., USA. 1923. - V. 60. - P. 106-111.

242. Bender K. Über die Erzeugung und Entstehung dihaploider Pflanzen bei Solanum tuberosum//Z. Pflanzenzücht. 1963. - Bd 50, H. 2. - S. 141-166.

243. Bennett M.D., Finch A.A., Barclay I.R. The time rate and mechanism of chromosome elimination in Hordeum hybrids // Choromosoma (Berl.). 1976. - V. 54, N 2. - P. 175-200.

244. Berg K.H. Cytologische Untersuchungen an den Bastarden des Triticum turgidovillosum und an einer Fi Triticum turgidum x villosum // Z. indukt. Abstämmlings und Vererbungslehre. 1934. - Bd 68, H. 1. - S. 94-126.

245. Bingham E.T., Binek A. Comparative morphology of haploids from cultivated alfalfa, Medicago sativa L. // Grop. Sei. 1969. - V. 9. - P. 749-751.

246. Bingham E.T., Dunbier M.W. Current research with haploids and hap-loidy in alfalfa Medicago sativa // Haploids in higher plants / K.J. Kasha (ed.). -Univ. of Guelph, Guelph, Ontario, 1974. P. 274.

247. Bingham E.T., Gillies C.B. Chromosome pairing, fertility and crossing behaviour of haploids of tetraploids alfalfa Medicago sativa L. // Can. J. Genet. Cytol. -1971. V. 13, N 2. - P. 195-202.

248. Blakeslee A.F., Avery A.G. Methods of inducing doubling of chromosomes in plants by treatment with colchicine // Heredity. 1937. - V. 28. - P. 393411.

249. Blakeslee A.F., Avery A.G. The induction of diploids from haploids by colchicine treatment // Genetica. 1939. - V. 24. - P. 95.

250. Blakeslee A.F., Belling J. Chromosomal mutation in the Jimson weed, Dature stramonium // Heredity. 1924. - V. 15. - P. 195-206.

251. Blakeslee A.F., Belling J., Farnham M.E., Bergner A.D. A haploid mutant in Dature stramonium // Science. 1922. - Y. 55. - P. 646-647.

252. Blaydes D.F. Interaction of kinetin and various inhibitors in the growth of soybean tissues // Physiol. Plant. 1966. - V. 19. - P. 748-753.

253. Bleier H. Experimentell cytologische Untersuchungen . I. Einfluss abnormaler Temperatur auf die Reduktionsteilung // Z. für Zellforschung und mikroskopische Anatomie. - 1930. - Bd 11. - S. 218-236.

254. Bourgin J.P., Nitsch J.P. Obtention de Nicotiana haploides a partir d'etamines cultivees in vitro // Ann. Physiol. Veg. 1967. - V. 9. - p. 377-382.

255. Breukelen E.W.M., Ramanna M.S., Hermsen J.G.Th. Monohaploids (n=x=12) from autotetraploid Solanum tuberosum (2n=4x=48) through two successive cycles of female parthenogenesis //Euphytica. 1975. - V. 24. - P. 567-574.

256. Buyser J., Henry Y., Lonnet P., Hertzog R., Hespel A. 'Florin': a doubled haploid wheat variety development by the anther culture method // Plant Breed. 1987. - V. 98, N 1. - P. 53-56.

257. Buyser J., Henry Y., Taleb G. Wheat androgenesis: cytogenetical analysis and agronomic performance of doubled haploids // Z. Pflanzenzucht. -1985.-V. 95, N1.-P. 23-24.

258. Cameron D.K. Inheritance inNicotiana tabacum. XXII. Investigations on multiple seedlings // Amer. J. Bot -1949. V. 36, N 7. - P. 526-529.

259. Campbell K.W., Brawn R.I., Ho K.M. Rodeo barley // Can. J. Plant. Sei. 1984. - V. 64. - P. 203-205.

260. Campos F.F., Morgan D.T. Haploid pepper from a sperm. An androge-netic haploid of Capsicum frutescens // J. Heredity. 1958. - V. 49, N 4. - P. 134137.

261. Campos F.F., Morgan D.T. Genetic control of haploidy in Capsicum frutescens L. following crosses with untreated and X-rayed pollen // Cytologia. -1960. V. 25, N 3-4. - P. 362-372.

262. Catcheside D.G. The chromosomes of a new haploid Oenothera // Cytologia. 1932. - V. 4. - P. 68-113.

263. Cauderon Y. Etude cytogenetique du genre Agropyrum // Rev. Cyt. et. Biol, vege'tales. 1962. V. 25. - P. 287.

264. Chase S.S. Techniques for isolating monoploid maize plants // Amer. Jour. Bot. 1947. - V. 34. - P. 582.

265. Chase S.S. Monoploids in maize // Heterosis / J.W. Gowen (ed.). -Iowa State College Press, Amer., 1952. P. 389-399.

266. Chase S.S. Analytic breeding of Solanum tuberosum L. // Can. J. Genet. Cytol. 1963a. - V. 5, N 4. - P. 359-363.

267. Chase S.S. Androgenesis its use for transfer of maize cytoplasm // Heredity. - 1963b. - V. 54, N 4. - P. 152-158.

268. Chase S.S. Monoploids and monoploid derivatives of maize (Zea mays L.) // Bot. Rev. - 1969. - V. 35, N 2. - P. 117-167.

269. Chase S.S. Breeding diploid species // Haploids in higher plants / KJ. Kasha (ed.). Univ. ofGuelph, Guelph, Ontario, 1974. P. 211-230.

270. Chase S.S. Plant cell culture technology in relation to plant breeding // Plant Cell Cult. Crop. Improv: Proc. Int. Symp., Calcutta, 1981. New York, London, 1983. P. 1-7.

271. Chase S.S., Nanda D.K. Comparison of variability in inbred, lines and monoploid derived lines of maize (Zea mays L.) //Crop. Sci. - 1965. V. 5, N 3. - P. 275-276.

272. Chen C.H., Ross J.G. Colchicine induced somatic reduction in sorghum. V. Diploidization of the stem apex after treatment of tetraploid seedlings // Can. J. Genet. Cytol. - 1965. - V. 7. - P. 21-30.

273. Chen C.C., Tsay H.S., Huang C.R. Rice (Oryza sativa L.): factors affecting androgenesis // Crops. Berlin, 1986. P. 123-138.

274. Chen Z.Z. Snyder S., Fan Z.G., Loh W.H. Efficient production of doubled haploid plants through chromosome doubling of isolated microspores in Bras-sica napus // Plant Breed. 1994. - V. 113, N 3. - P. 217-221.

275. Chipman R.H., Goodspeed T.H. Inheritance in Nicotiana tabacum. VIII. Cytological features of the purpurea haploid // Univ. Cal., Publ. Bot. 1927.- V. 40. -P. 141-158.

276. Choo T.M., Reinbergs E., Kasha KJ. Use of haploids in breeding barley // Plant Breed. Rev. 1985. - V. 3. - P. 219-252.

277. Choo T.M., Reinbergs E., Park S.J. Comparisons of frequency distributions of doubled haploid and single seed descent lines in barley // Theor. and Appl. Genet. 1982. - V. 61. - P. 215-218.

278. Chu Y. Pachytene analysis and observations of chromosome associations in haploid rice // Cytologic 1967. - V. 32. - P. 87-95.

279. Chyi V.S., Sanford J.C. «Egg transformation» induced by irradiated pollen in Nicotiana: a re-examination // Theor. and Appl. Genet. 1985. - V. 70, N 4.-P. 433-439.

280. Chyi V.S., Sanford J.C., Reisch B.I. Further attempts to induce «egg transformation» using irradiated pollen // Theor. and Appl. Genet. -1984. V. 68, N 3. - P. 277-283.

281. Clapham D. Haploid Hordeum plants from anthers in vitro I IZ. Pflanzenzucht. 1973. - V. 69. - P. 142-155.

282. Clausen R.E., Lammerts W.E. Interspecific hybridization in Nicotiana. X. Haploid and diploid merogony // Amer. Natur. 1929. - V. 63. - P. 279-282.

283. Clausen R.E., Mann M.C. Inheritance in Nicotiana tabacum. V. The occurence of haploid plants in interspecific progenies // Proc. Nat. Acad. Sei. -1924.-V. 10.-P. 121-124.

284. Clulow S.A., Rousselle-Bourgeois F. Widespread introgression of Solanum phureja DNA in potato (S. tuberosum) dihaploids // Plant Breed. 1997, - V. 116,N4.-P. 347-351.

285. Coe E.H. A line of maize with high haploid frequency // Amer. Natur. -1959. V. 93, N 873. - P. 381-382.

286. Collins G.B., Sadasivaiah R.S. Meiotic analysis of haploid and doubled haploid forms of Nicotiana otophora and N. tabacum // Chromosoma. 1972. - V. 38,N4.-P. 387-404.

287. Cooper D.C. Haploid-diploid twin embryos in Lilium and Nicotiana // Amer. J. Bot. 1943. - V. 30, N 6. - P. 408-413.

288. Cornish M.A., Werner C.P. Gene transfer in Nicotiana rustica by means of irradiated pollen. V. Quantitative characters // Heredity. 1985. - V. 55, N 3.-P. 321-326.

289. Cornu A., Maizonnier D. Origine et comportement meiotique d'un Petunia haploide // C.R. Acad. Sei. 1970. - V. 270, N 2. - P. 310-313.

290. Daniel G. Vergleichende Untersuchungen zur Erzeugung vor Doppel-haploiden über Antherenkultur und Bulbosum Methode bei Wintergerste (Hordeum vulgare L.) // Bayer, landwirt. Jahrb. - 1989. - Bd 66, H. 6. - S. 757-768.

291. Datta S.K., Potrykus J. Artificial seeds in barley: encapsulation of microspore derived embryos // Theor and Appl. Genet. - 1989. - V. 77, N 6. - P. 820824.

292. Davies D.R. Male parthenogenesis in barley // Heredity. 1958. - V. 12,N4.-P. 493-498.

293. Davies D.R. Chromosome elimination in interspecific hybrids // Heredity. 1974. - V. 32, N 2. - P. 267-269.

294. Day A., Ellis T.H.N. Chloroplast DNA deletions associated with wheat plants regenerated from pollen: possible basis for maternal inheritance of chloro-plasts // Cell. -1984. V. 39, N 2. - P. 359-368.

295. Deanon J.R. Treatment of sweet corn silks with maleic hydrazyde and colchicine as a means of increasing the frequency of monoploids // Philipp. Agr. -1957.-V. 41.-P. 364-377.

296. Devaux P. Investigations to improve doubled haploid production efficiency in a winter barley breeding programme // Cereal Res. Commun. -1991. V. 19,N1-2.-P. 51-58.

297. Devaux P., Huebner F., Burnouf T., Bietz J. Comparative inheritance of hordeins in doubled haploids of barley obtained by the Hordeum bulbosum and anther culture techniques // Bull. Soc. Bot. Fr. Actual. Bot. 1990. - V. 137, N 3-4. -P. 143.

298. Devreux M. Ottenimento ed irraggiamento di aploidi // Agr. Italia. -1970.-V. 16,N12.-P. 28-30.

299. Devreux M., Saccardo F. Mutazioni sperimentali osservate su piante aploidi di tobacco ottenute per culture in vitro di antere irradiate (Riassunto) // Atti. Assoc. Genet. Ital. 1971. - V. 16. - P. 69-71.

300. Dewey D.R. The genome structure of intermediate wheatgrass // Heredity. 1962. - V. 53, N 6. - P. 282-289.

301. Dodds K.S. Polyhaploid of Solanum demissum // Nature (Lond.). -1950.-V. 166.-P. 795.

302. Dore C. Production de plantes homozygotes males et femelles a partir d'antheres d'asperge, cultivees in vitro (Asparagus officinalis L.) // C.R. Acad. Sci. 1974. - V. 278, N 17. - P. 2135-2138.

303. Dore C. Die Anwendung der in vitro Kultur bei der Spargelziichtung inFrenkreich. - Arch. Ziichtungsforsch. - 1982. - Bd 12, H. 5. - S. 335-338.

304. Dunford R., Walden R. Plastid genome structure and plastid related transcript levels in albino barley plants derived from anther culture // Curr. Genet. -1991.-V. 20, N4.-P. 339-347.

305. East E.M. The production of homozygotes through induced parthenogenesis // Science. 1930. - V. 72. - P. 148-149.

306. East E.M., Jones D.F. Inbreeding and outbreeding , their genetic and sociological significance. Philadelphia, London, 1919, - 285 p.

307. Ehrensberger R. Versuche zur Auslesung von Haploidie bei Blutenpflanzen // Biol Zentralblatt. 1948. - Bd 67. - S. 537-546.

308. Elliott F.C., Wilsie C.P. A fertile polyhaploid of Bromus inermis // Heredity. 1948. - V. 39. - P. 377-380.

309. Emerson S.H. The reduction division in a haploid Oenothere // La Cellule. 1929. V. 39. - P. 159-165.

310. Endrizzi J.E. Use of haploids in Gossypium barbadense as a source of aneuploids // Current Sci. 1966. - V. 35, N 2. - P. 34-35.

311. Engvild K.C. Pollen irradiation and possible gene transfer in Nicotiana species // Theor. and Appl. Genet. 1985. - V. 69, N 5-6. - P. 457-461.

312. Falk D.E., Kasha K.J. Comparison of the crossability of rye (Secale cereale) and Hordeum bulbosum onto wheat (Triticum aestivum) // Can. J. Genet. Cytol. -1981. V. 23, N 1. - P. 81-88.

313. Falk D.E., Kasha K.J. A study of hormones on cross-incompatibility of wheat with rye and Hordeum bulbosum // Gereal. Res. Commun. 1982. - V. 10, N 3-4. - P. 233-234.

314. Falque M. Pod and seed development and phenotype of the Mi plants after pollination and fertilization with irradiated pollen in cacao (Theobroma cacao L.) // Euphytica. -1994. V. 75, N 1-2. - P. 19-25.

315. Fedak G. Haploids from barley x rye crosses // Can. J.Genet. and Cytol. -1977. V. 19. - P. 15-19.

316. Fedak G. Haploid in Triticum ventricosum via intergeneric hybridization with Hordeum bulbosum // Can. J. Genet, and Cytol. 1983. - V. 25, N 2. - P. 104-106.

317. Finch R.A. The hap gene causes facultative pseudogamy in barley // Barley Genet. Newslett. 1983. - V. 13. - P. 4-6.

318. Finch R.A., Bennett M.D. Action of triploid inducer (tri) on meiosis in barley (Hordeum vulgare L.) // Heredity. 1979. - V. 43. - P. 87-93.

319. Foroughi-Wehr B., Friedt W. Agronomic performance of androgenetic doubled haploid lines of Hordeum vulgare // Plant. Tissue Cult.: Proc. 5 Int. Congr. Plant Tissue and Cell. Cult., Tokyo and Lake Yamanaka, 1982. Tokyo, 1982. P. 557-558.

320. Foroughi-Wehr B., Mix G., Gaul H., Wilson H.M. Plant production from cultured anthers of Hordeum vulgare L. // Z. Pflanzenzucht. 1976. - V. 77. -P. 198-204.

321. Frandsen N.O. Haploidproduction aus einem Kartoffelzüchtmaterial mit intensiver Wildarteinkreuzung // Zuchter. -1967. Bd 37. - S. 120-134.

322. Frandsen N.O. Polyembryonic bei der Kartoffel // Z. Pflanzenzucht. -1968. Bd 59, H. 4.-S 343-358.

323. Franzke C.J., Ross J.G. Colchicine-unduced variants in sorghum // Heredity. 1952. - V. 43. - P. 107-115.

324. Friedt W., Foroughi-Wehr B. Field performance of androgenetic doubled haploid spring barley from Ft hybrids // Z. Pflanzenzucht. 1983. - V. 90, N 3. -P. 177-184.

325. Friedt W., Foroughi-Wehr B. Agronomic value of androgenetic doubled haploid lines as compared to conventionally selected spring barley // Gen. Manipulat. Plant Breed.: Proc. Int. Symp., Berlin (West), 1985. Berlin, New York, 1986. P. 299-302.

326. Furusho Masahiko, Suenaga Kazuhiro, Nakajima Kousuke. Production of haploid barley plants from barley x maize and barley x italian ryegrass crosses // HicycioraKy jpaccn = Jap. J. Beed. -1991. V. 41, N 1. - P. 175-179.

327. Gaines E.F., Aase H.C. A haploid wheat plant // Amer. J. Bot. 1926. -V. 13,N6.-P. 373-385.

328. Gamborg O.L. Plant cell cultures: nutrition and media. Cell culture and somatic cell genetics of plants (Laboratory procedures and their applications) // Acad. Press. Inf. 1984. - V. 1. - P. 19-26.

329. Gamborg O.L., Miller R.A., Ojima K. Nutrient requirements of suspension cultures of soybean root cells // Exp. Cell. Res. 1968. - V. 50. - P. 151-158.

330. Gamborg O.L., Murashige T., Thorpe T.A., Vasil J.K. Plant tissue culture media I I In Vitro. 1976. - V. 12, N 7. - P. 473-478.

331. Gaul H. Genomanalytische Untersuchungen bei Triticum x Agropyrum intermedium unter Berücksichtigung von Seeale cereale x A. intermedium // Z. in-dukt. Abstämmlings und Vererbugslehre. - 1953. - Bd 85. - S. 505-546.

332. Gaul H. Asynapsis und ihre Bedeutung fur die Genomanalyse // Z. in-dukt. Abstämmlings und Vererbugslehre. - 1954.- Bd 86. - S. 69-100.

333. Gaul H. A critical survey of genome analysis // Proc. I Inter. Wheat Genet. Symp. Winnipeg, 1958. P. 194-206.

334. Gauthier F.M., Mc Ginnis R.C. The meiotic behaviour a nullihaploid plant in Avena sativa L. // Can. J. Genet. Cytol. 1968. - V. 10, N 1. - P. 186-189.

335. Goodsell S.F. Male sterility in corn by androgenesis // Crop. Sei. -1961.-V. 3.-P. 227-228.

336. Gorea T. Fertilität und Kreuzbarkeit der Dihaploiden von Solanum tuberosum L. und deren Fi Bastarden // Z. Pflanzenzucht. - 1970. - Bd 64. - S. 201220.

337. Gorge L. Use of haploids in mutation breeding // FAO / IAEA Reg. (RCA) Train. Course Adv. Mutat. Breed. Trop. Crop Plants, Bombay, Nov. 16-27, 1992: Synopses Lect. and Exp. Protocols. Bombay, 1992. - P. 101-107.

338. Gresshoff P.M., Day C.H. Haploid Arabidopsis thaliana callus and plants from anther culture // Austral. J. Biol. Sei. 1972. - V. 25, N 2. - P. 259-264.

339. Griffmg B. Concept of general and specific combining ability in relation to diallel crossing systems //Aust. J. Biol. Sei. 1956. - V. 9, N 4. - P. 463-493.

340. Griffmg B. Efficiency changes due to use of doubled-haploids in recurrent selection methods // Treor. and Appl. Genet. 1975. - V. 46. - P. 367-386.

341. Guha S., Iyer R.D., Gupta N., Swaminathan M.S. Totipotency of gametic cells and the production of haploids in rice // Current Sei. 1970. - V. 39. - P. 174-176.

342. Guha S., Maheshwari S.C. In vitro production of embryos from anthers ofDatura//Nature (Lond.). 1964. - V. 204. P. 497.

343. Gupta S.B. Duration of mitotic cycle and regulation of DNA replication in Nicotiana plumbaginifolia and a hybrid derivative of N. tabacum showing chromosome instability // Can. J. Genet. Cytol. 1969. - V. 11. - P. 133-142.

344. Gustafsson A. Studies on the mechanism of parthenogenesis // Heredi-tas. 1935.-V.21.-P. 1-111.

345. Hagberg A., Hagberg G. High frequency of spontaneous haploids in the progeny of an induced mutation in barley // Hereditas. 1980. - V. 93, N 2. - P. 341-343.

346. Hagberg G., Hagberg A. Haploidy initiator gene in barley // Barley genetics IV. Edinburgh Univ. Press. Edinburgh, 1981. P. 686-689.

347. Hair J.B. Subsexual reproduction in Agropyron // Heredity. 1956. - V. 10 (2). - P. 129-160.

348. Halluin K., Keimer B. Production of haploid sugarbeets (Beta vulgaris L.) by ovule culture // Gen. Manipulat. Plant Breed: Proc. Int. Symp., Berlin (West), 1985. Berlin, New York, 1986. P. 307-309.

349. Hanneman R.E., Peloquin S.J. Use of Phureja and haploids to enhance the yield of cultivated tetraploid potatoes // Amer. Potato J. 1969. - V. 46. - P. 437.

350. Hansen F.L., Andersen S.B., Due I.K., Olesen A. Nitrous oxide as a possible alternative agent for chromosome doubling of wheat haploids // Plant Sci. -1988. V. 54, N 3. - P. 219-222.

351. Harland S.C. Haploids in polyembryonic seeds of Sea Island cotton // Heredity. 1936. - V. 27, N 6. - P. 229-231.

352. Harini I., Lakshmi N., Prakash N.S. A note on colchicine-induced interchance heterozygosity in Capsicum annuum L. // Curr. Sci. (India). 1987. - V. 56, N20.-P. 1075-1076.

353. Hassawi D.S., Liang G.H. Antimitotic agents: effects on double haploid production in wheat // Crop. Sci. -1991. V. 31, N 3. - P. 723-726.

354. Hayman B.J. The theory and analysis of diallel crosses // Genetics. -1954. V. 39, N 6. - P. 789-809.

355. Henry Y., Snape J.W., Buyser J. Differential segregation of the Bi gene for awning among microspore-derived progenies of wheat crosses // J. Genet, and Breed. 1993. V. 47, N 4. - P. 347-351.

356. Henry Y., Vain P., Buyser J. Genetic analysis of in vitro plant tissue culture responses and regeneration capacities // Euphytica. 1994. - V. 79, № 1-2. -P. 45-58.

357. Hermsen J.G.Th. Induction of haploids and aneuhaploids in colchicine-induced tetraploid Solanum chacoense Bitt. // Euphytica. 1969. - V. 18. - P. 183189.

358. Hermsen J.G.Th. The potential of meiotic polyploidization in breeding allogamous crop. // Jowa State U. Res. 1984. - V. 58, - P. 435-448.

359. Hermundstadt S.A., Peloquin S.J. Germplasm enhancement with potato haploids // Hereditas. 1985. - V. 76, N 6. - P. 463-467.

360. Ho K.M. Genetic control of chromosome elimination in interspecific hybrids leading to haploid formation in barley (Hordeum vulgare L.) // Ph. D. Thesis Unit, of Guelph. Guelph, Ontario, 1973. P. 66.

361. Ho K.M., Kasha K.J. Genetic control of chromosome elimination during haploid formation in barley // Genetics. 1975. - V. 81. - P. 263-275.

362. Ho K.M., Jones G.E. Mingo barley // Can. J. Plant Sei. 1980. - V. 60. - P. 279-280.

363. Hollingshead L. A cytological study of haploid Crepis capillaris plants // Univ. Calif., Pub. Agr. Sei. 1930. - V. 6. - P. 107-134.

364. Horn W. Induktion und züchterische Nutzung der Parthenogenese // Z. Pflanzenzucht 1972. - Bd 67. - S. 39-44.

365. Hosemans D., Bossoutrot D. Intuction of haploid plants from in vitro culture of unpollinated beet ovules (Beta vulgaris L.) // Z. Pflanzenzucht. 1983. -V. 91, N1.-P. 74-77.

366. Hougas R.W., Peloquin S.J. Crossability of Solanum tuberosum haploids with diploid Solanum species // Europ. Potato J. 1960. - V. 3, N 4. - P. 325.

367. Hougas R.W., Peloquin S.J., Cabert A.C. Effect of seed-parent and pollinator on frequency of haploids in Solanum tuberosum // Crop. Sci. 1964. - V. 4. - P. 593-595.

368. Hougas R.W., Peloquin S.J., Ross R.W. Induced haploid in Solanum tuberosum // Amer. Potato J. 1958. - V. 35. - P. 441.

369. Hu G., Liang G.H., Wasson C.E. Chemical induction of apomictic seed formation im maize // Euphytica. -1991. V. 56, N 2. - P. 97-105.

370. Hu H. Crop improvement by anther culture // XV Intern. Congr. Genet., New Delhi, 1983: Plenary Symp. Ses. New Delhi e. a., 1983. P. 121-122.

371. Hu H. Use of haploids in crop improvement // Biotechnology in international agricultural research. International Rice Research Institute, 1985. P. 75-84.

372. Hu H. Wheat improvement through anther culture // Biotechnology in agriculture and forestry. Crops 1. / Y. P. S. Bajaj (ed.). Berlin: Springer - Verlag, 1986. P. 55-72.

373. Hu H., Shui H. The present status of investigations of plant tissue and cell culture in China // Plant Cell Cult.: Results and Perspectives. Amsterdam e. a., 1980. P. 89-104.

374. Hu H., Xi Z. et. al. Генетическое изучение образовавшихся из пыльников растений пшеницы (Triticum aestivum) // Ичуань сюэ бао. Acta Genet. Sinica. 1979. - V. 6, N 3. - P. 322-330.

375. Hu H., Xi Z., Jing J., Wang X. Production of aneuploids and hetero-ploids of pollen-derived plants И Plant Tissue Cult: Proc. 5 Int. Congr. Plant Tissue and Cell. Cult., Tokyo and Lake Jamanaka, 1982. Tokyo, 1982. P. 421-424.

376. Huang В., Sunderland N. Temperaturestress pretreatment in barley anther culture // Ann. Bot. 1982. - P. 77-88.

377. Huang Q.F., Yang H.Y., Zhou C. Embryological observations on ovary culture of unpollinated young flowers in Hordeum vulgare L. (in Chinese) // Acta Bot. Sinica. 1982. - V. 24, N 4. - P. 295-300.

378. Humphrey L.M. The meiotic divisions of haploid, diploid and tetraploid tomatoes with special reference to prophase // Cytologia. 1934. - V. 5. - P. 278300.

379. Humphreys M.W. Chromosome instability in Hordeum vulgare x H. bulbosum hybrids // Chromosoma. 1978. - V. 65. - P. 301-307.

380. Inagaki M., Tahir M. Comparison of haploid production frequencies in wheat varieties crossed with Hordeum bulbosum L. and maize // HxycioraKy #3ac-ch = Jap. J. Breed. 1990. - V. 40, N 2. - P. 209-216.

381. Inagaki M., Tahir M. Production of haploid wheat through intergeneric crosses // Hereditas. 1992. - V. 116, N 1-2. - P. 117-120.

382. Iyamabo O.E., Hayes P.M. Effects of selection and opportunities for recombination in doubled-haploid populations of barley (Hordeum vulgare L.) // Plant Breed. 1995. - V. 114, N 2. - P. 131-136.

383. Jauhar P.P. Haploid meiosis and its bearing on the phylogeny of pearl millet Pennisetum typoides stapf, et Hubb. // Genetica. 1970. - V. 41. - P. 532540.

384. Jenkins B.C. The addition of an Agropyron genome to the common wheat variety Chinese Spring // Wheat Inform. Serv. 1957. - V. 5. - P. 14.

385. Jensen C.J. Chromosome doubling techniques in haploids // Haploids in higher plants / K.J. Kasha (ed.). Univ. of Guelph, Guelph, Ontario, 1974, P. 153190.

386. Jensen C.J. Barley monoploids and doubled monoploids: techniques and experience // Barley genetics III / H. Gaul (ed.). Verlag K. Thiemig, Mönchen, 1975. P. 316-345.

387. Jinks J.L. The analysis of continuous variation in a diallel cross of Nicotiana rustica varieties // Genetics. 1954. - V. 39, N 6. - P. 767-788.

388. Jörgensen C.A. The experimental formation of heteroploid plants in the genus Solanum// J. Genet, 1928. - V. 19. - P. 133-211.

389. Kao K.N., Kasha K.J. Haploidy from interspecific crosses with tetra-ploid barley // Barley Genetics II / R.A. Nilan (ed.). Wash. State Univ. Press, 1969. P. 82-88.

390. Kappert H. Erbliche Polyembryonie bei Linum usitatissimum // Biol. Zbl. 1933. - Bd 53, H. 5-6. - S. 276-307.

391. Kappert H. Botanische Untersuchungen zur Erblichkein der Polyembryonie //Moderne Biologie. F.W. Peters. Berlin, 1950. S. 180-194.

392. Kasha K.J. Haploids from somatic cells // Haploids in higher plants / K.J. Kasha (ed.). Univ. of Guelph, Guelph, Ontario, 1974. P. 67-87.

393. Kasha K.J. Production of haploids in cereals // Curr. Options Cereal Improv. Dordrecht etc., 1989. P. 71-80.

394. Kasha K.J., Kao K.N. High frequency haploid production in barley (Hordeum vulgare L.) // Nature (Lond.). 1970. - V. 225, N 5235. - P. 874-876.

395. Kasha K.J., Sadasivaiah R.S. Genome relationships between Hordeum vulgare L. and H. bulbosum L. // Chromosoma (Berl.). 1971. - V. 35. - P. 264287.

396. Kasha K.J., Jao Q., Simion E., Hu T., Oro R. Production and application of doubled haploids in crops // Induced Mutat. and Mol. Techn. Crop Improv.: Proc. Int. Symp. 19-23 June 1995. Vienna, 1995. P. 23-37.

397. Kasha K.J., Reinbergs E., Johns W.A., Subrahmanyam N.C., Ho K.M. Barley haploid studies // Barley Genet. Newslett. 1972. - V. 2. - P. 36-41.

398. Katayama Y. Haploid formation by X-rays in Triticum monococcum // Cytologia. 1934. - V. 5, N 2. - P. 235-237.

399. Katayama Y. Karyological comparisons of haploid plants from Aegilo-tricum and diploid wheat // Jap. J. Bot. 1935. - V. 7, N 3-4. - P. 349-380.

400. Kato K., Tomo S., Jamazaki S., Hayashi K. Simplified culture method of detached ears and its application to vernalization in wheat // Euphytica. 1990. V. 49,N2.-P. 161-168.

401. Kehr A.E. Monoploidy in Nicotiana // Heredity. 1951. - V. 42. - P. 107-112.

402. Keller B. Gentechenik und unser tagliches Brot: Traditionelle und gentechnische Nutzung der Biodiversität von Wildgräsern in der Weizenzüchtung // Vierteljahresschr. Naturforsch. Ges. Zurich. 1966. - Bd 141, H. 4. - S. 153-160.

403. Kermicle J.L. Androgenesis conditioned by a mutation in maise // Science. 1969. - V. 166, N 3911. - P. 1422-1424.

404. Kermicle J.L. Pleiotropic effects on seed development of the indeterminate gametophyte gene in maize // Amer. J. Bot. -1971. V. 58, N 1. - P. 1-7.

405. Kihara H. Cytologische und genetische Studien bei wichtigen Getreidearten mit besonderer Rücksicht auf das verhalten der Chromosomen und die Sterilität in den Bastarden // Mem. Coll. Sei. Univ. Kyoto, 1924. Ser. Bl. P. 200.

406. Kihara H. Genomanalyse bei Triticum und Aegilops. II. Aegilotricum und Aegilops cylindrical Cytologia, 1931. - Bd 2, H. 2. - S. 106-156.

407. Kihara H. Ein diplo-haploides Zwillingspaar bei Triticum durum // Agr. and Hort. (Tokyo). 1936. - V. 11. - P. 1425-1433.

408. Kihara H. Formation of haploids by means of delayed pollination in Triticum monococcum//Bot. Mag. (Tokyo). 1940. - V. 54. - P. 178-185.

409. Kihara H., Tsunewaki K. Use of alien cytoplasm as a new method of producing haploids // Jap. Jour, Genet. 1962. - V. 37, N. 4. - P. 310-313.

410. Kihara M., Fukuda K., Funtasuki H., Kishinami I., Aida Y. Plant regeneration throught anter culture of three wild species of Hordeum (H. murinum, H. marinum and H. bulbosum) // Plant Breed. -1994. V. 112, N 3. - P. 244-247.

411. Kimber G. The basis of the diploidlike meiotic behaviour of polyploid cotton//Nature (Lond.). -1961. V. 191. - P. 98-100.

412. Kimber G., Riley R. Haploid Angiosperms II Bot. Rev. 1963. - V. 29, N4.-P. 480-531.

413. Knight R.L., Hamilton A.P., Keep E. Somatic reduction of chromosome number in a ribes hybrid following treatment with para-fluorophenylalanine // Nature (Lond.). 1963. - Y. 200. - P. 1341-1342.

414. Koba T., Shimada T. Crossability of common wheat with Aegilops squarrosa // Wheat Inf. Serv. 1993. - N 77. - P. 712.

415. Koba T., Handa T., Shimada T. Efficient production of wheat barley hybrids and preferential elimination of barley chromosomes // Theor. and Appl. Genet. - 1991. - V. 81, N 1. - P. 285-292.

416. Koba T., Shimada T., Otani M. Diallel analysis of the performances on pollen embryo formation and plant regeneration in anther culture of common wheat Triticum aestivum L. // Bull. Res. Inst. Agr. Resour. / Ishikawa Agr. Coll. 1993. -N3.-P. 8-13.

417. Kopecky F. Experimentelle Erzeugung von haploiden Weiß päppeln (Populus alba L.) // Silvae Genetica. 1960. - Bd 9, H. 4. - S. 102-105.

418. KostofF D. An androgenic Nicotiana haploid // Zschr. Zellforsch. -1929. V. 9. - P. 640-642.

419. Kostoff D. A haploid planta Nicotiana silvestris // Nature. 1934. - V. 133 - P. 949-950.

420. Kostoff D. Haploide Triticum vulgare und die Variabilität ihrer diploi-den Nachkommenschaften//Züchter. 1943. - Bd 15. - S. 121-125.

421. Krishnaswamy N. Cytological studies in a haploid plant of Triticum vulgare // Hereditas. 1939. - V. 25. - P. 77-85.

422. Kruse A. Polyembryony in Brassica napus v. rapifera L. and Beta vulgaris L. // Royal Vet. and Agrin. Coll. Yearbook. Copenhagen, 1960. P. 37-46.

423. Kruse A. Pure lines and their hybrids in beets, Beta vulgaris L. // Royal Vet. and Agrin. Coll. Yearbook. Copenhagen, 1963. P. 42-53.

424. Kruse A. The potential use of heterosis in Beta vulgaris // Arsskr. Yearbook Annuaire. Kobenhavn, 1980. P. 117-137.

425. Kuhlmann U., Foroughi-Wehr B. Production of doubled haploid lines in frequencies sufficient for barley breeding programs // Plant Cell Repts. 1989. -V. 8, N 2. - P. 78-81.

426. Kuhn E. Pseudogamie und Androgenesis bei Pflanzen // Züchter. -1930.-Bd2.-S. 124-136.

427. Lacadena J.R. Spontaneous and induced parthenogenesis and andro-genesis // Haploids in higher plants / K.J. Kasha (ed.). Univ. of Guelph, Guelph, Ontario, 1974. P. 13-32.

428. Lamm R. Notes on a haploid potato hybrid // Hereditas. 1938. - V. 24. -P. 391.

429. Lange W. Cytigenetical and embryological research on crosses between Hordeum vulgare and H. bulbosum//Yersl. Landbouwk. Onderz. 1969. - N 719. -P. 162.

430. Lange W. Crosses between Hordeum vulgare L. and H. bulbosum L. I. Production, morphology and meiosis of hybrids, haploids and dihaploids // Euphytica. 1971a. - V. 20. - P. 14-29.

431. Lange W. Crosses between Hordeum vulgare L. and H. bulbosum L. II. Elimination of chromosomes in hybrid tissues // Euphytica. 1971b. - V. 20. - P. 181-194.

432. Larsen E.T., Tuvesson I.K.D., Andersen S.B. Nuclear genes affecting percentage of green plants in barley (Hordeum vulgare L.) anther culture // Theor. andAppl. Genet. -1991. Y. 82,N4. -P. 417-420.

433. Laurie D.A., Bennet M.D. The production of haploid wheat plants from wheat xmayze crosses // Can. J. Genet, and Cytol. 1977. - V. 19. - P. 15-19.

434. Laurie D.A., Bennet M.D. Wheat x maize hybridization // Can J. Genet. Cytol. 1986. - V. 28, N 2. - P. 313-316.

435. Laurie D.A., Bennet M.D. The effect of the crossability loci Krl and Kr2 on fertilization frequency in hexaploid wheat x maize crosses // Theor. and Appl. Genet. 1987. - V. 73, N 3. - P. 403-409.

436. Legro R.A.H. The cytological background of Cyclamen breeding // Meded. Landbouwhogesch., Wageningen. 1959. - V. 59 (8). - P. 1-51.

437. Leike H. Bedeutung der Haploiden fur die Pflanzenziichtung // Fortschrittsberichte fur die Landwirtschaft und Nahrungsguterwirtschaft. 1985. -Bd 23, H. 5. - S. 1-52.

438. Lesins K. Cytogenetic study on a tetraploid plant at the diploid chromosome level // Can. J. Bot. 1957. - V. 35. - P. 181-196.

439. Lesins K. Interspecific crosses involving alfalfa. 1. Medicago dzha-wakhetica (Bordz.) Vass. x M. sativa L. and its peculiarities // Can. J. Genet Cytol. -1961. V. 3.-P. 135-152.

440. Lesley M.M., Frost H.B. Two extreme «small» Mathiola plants a haploid with one and a diploid with two additional chromosome fragments // Amer. Nat. - 1928. - V. 62. - P. 22-33.

441. Levan A. Studies on the meiotic mechanism of haploid rye // Hereditas. -1942. V. 28.-P. 171-211.

442. Levan A. A haploid sugar beet after colchicine treatment // Hereditas. -1945.-V. 31.-P. 399-410.

443. Lindstrom E.W., Koos K. Cytogenetic investigations of a haploid tomato and its diploid and tetraploid progeny // Amer. J. Bot. 1931. - V. 18. - P. 398-410.

444. Linsmaier E.M., Skoog F. Organic growth factor requirements of tobacco tissue cultures // Physiol. Plant. 1965. - V. 18. - P. 100-127.

445. Luckett D.J., Smithard R.A. Barley anther culture using membrane rafts // Plant Cell, Tissue and Organ Cult. 1995a. - V. 42, N 3. - P. 287-290.

446. Luckett D.J., Smithard R.A. A comparison of several published methods for barley anther culture // Plant Cell Repts. 1995b. - V. 14, N 12. - P. 763767.

447. Mackey J. Genetic and evolutionary principles of heterosis // Heterosis in Plant Breeding: Proc. 7 th Congr. EUCARPIA, Budapest, 1974. Budapest, Akad. Kiado, 1976. - 71 p.

448. Magoon M.L., Khanna K.R. Haploids // Caryologia. 1963. - V. 16, N l.-P. 191-235.

449. Maheshawari S.C., Rashid A., Tyagi A.K. Haploids from pollen grains-retrospect and prospect // Amer. J. Bot. 1982. - V. 69, N 5. - P. 865-879.

450. Marcs G.E. Cytogenetic studies in tuberous Solanum species. I. Genomic differentiation in group Demissa // J. Genet. 1955. - V. 53, N 2. - P. 262-269.

451. Marsolais A. The commercial application of cereal haploidy // Curr. Options Cereal Improv. Dordrecht etc., 1989. P. 211-214.

452. Masson M.-F. Utilisation des gametes 2n et perspectives de creation de variétés de pomme de terre (Solanum tuberosum L.) reproductibles par graines // C. r. Acad. agr. Fr. 1987. - V. 73, N 8. - P. 19-39.

453. Mather D.E., Patel J.D., Reinbergs E. Early identification of superior barley crosses: a comparison of methods H Cereal Res. Commun. 1987. - V. 15, N 2-3. - P. 89-94.

454. Matsumura S. Genetics of some cereals // Ann. Rev. Nat. Inst. Genet., Japan. 1951. V. 1 (1949-1950). P. 22.

455. Matzinger D.F., Burk L.C. Cytoplasmic modification by anther culture inNicotiana tabacum L. // J. Hered. 1984. - V. 75, N 3. - P. 167-170.

456. Matzk F., Mahn A. Improved techniques for haploid production in wheat using chromosome elimination // Plant Breed. 1994. - V. 113, N 2. - P. 125129.

457. Mazoti L.B., Muhlenberg G.E. Haploides naturales en maiz. Rev. Argent. Agron. - 1958. - V. 25. - P. 171-178.

458. Me Ginnis R.S., Unrau J.A study of meiosis in a haploid of T. vulgare and ist progeny // Can. J. Bot. 1952. - V. 30. - P. 40-49.

459. Melchers G. Haploid higher plants for plant breeding // Z. Pflanzenzucht. -1972. V. 67. - P. 19-32.

460. Mendiburu A.O., Peloquin S.J. High yielding tetraploids from 4x-2x and 2x-2x matings // Amer. Potato. J. -1971. V. 48. - P. 300-301.

461. Mendiburu A.O., Peloquin S.J., Mok D.W.S. Potato breeding with haploids and 2n gametes // Haploids in higher plants / K.J. Kasha (ed.). Univ. of Guelph, Guelph, Ontario, 1974. P. 249-258.

462. Meynet J., Sibi M. Haploid plants from in vitro culture of unfertilized ovules in Gerbera jamersonii//Z. Pflanzenzücht. 1984. - Y. 93, N 1. - P. 78-85.

463. Miller C.O. Kinetin and kinetin like compounds // Moderne Methoden der Pflanzenanalyse. Springer Verlag Berlin, Heidelberg, New York, 1963. V. 6. P. 194-202.

464. Mix G., Wilson H.M., Foroughi-Wehr. The cytological status of plants of Hordeum vulgare L., regenerated from microspore callus // Z. Pflanzenzücht. -1978.-V. 80.-P. 89-99.

465. Moav R. Genetic instability in Nicotiana hybrids. II. Studies of the Ws (pbg) locus of N. plumbaginifolia in N. tabacum nuclei // Genetics. -1961. V. 46. -P. 1069-1088.

466. Mogensen H.L. Double fertilization in barley and the cytological explanation for haploid embyo formation, embrioless caryopses, and ovule abortion // Carlsberg Res. Commun. 1982. - V. 47, N 6. - P. 313-354.

467. Möllers C., Ighal M.C.M., Röbbelen G. Efficient production of doubled haploid Brassica napus plant by colchine treatment of microspores // Euphytica. -1994. V. 75, N 1-2. - P. 95-104.

468. Montelongo-Escobedo H., Rowe P.R. Haploid induction in potato: Cytological basis for the pollinator effect // Euphytica. 1969. - V. 18, N 1. - P. 116123.

469. Montezuma-de-Carvalho J. The effect of N20 on pollen tube mitosis in styles and its potential significance for inducing haploidy in potato // Euphytica. -1967.-V. 16,N2.-P. 190-198.

470. Morgan D.T., Rappleye R.D. Twin and triplet pepper seedlings. A study of polyembryony in Capsicum frutescens L. // Heredity. 1950. - V. 41, N 4. -P. 91-95.

471. Morrison G. The occurence and use of haploid plants in the tomato with special reference to the variety Marglobe // Proc. 6 th Intern. Congr. Genet. 1932. V. 2. P. 137-139.

472. Multani D.S., Virk D.S., Virk P.S., Verma M.M. Production of homo-matromorphs through pollen treatment in Pisum sativum L. // Plant Breed. 1989. -V. 102,N2.-P. 169-172.

473. Müntzing A. Polyploidy from twin seedlings // Cytologia. 1937a. - V. 8.-P. 211-227.

474. Müntzing A.Note on a haploid rye plant // Hereditas. 1937b. - V. 23, N3.-P. 401-404.

475. Müntzing A. Characteristics of two haploid twins in Dactylis glomerata // Hereditas. 1943. - V. 29. - P. 134-140.

476. Müntzing A., Prakken R. The mode of chromosome pairing in Phleum twins with 63 chromosomes and its cytogenetic consequence // Hereditas. 1940. -V. 26.-P. 463-501.

477. Murashige T., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioas-says with tobacco tissue culture //Physiol. Plant. -1962. V. 15. - P. 473-497.

478. Natarajan A.T., Swaminathan M.S. Haploidy induced by radiations in wheat // Experientia. 1958. - V. 14, N 9. - P. 336-337.

479. Natarajan A.T., Ray M., Swaminathan M.S. Cytogenetics of some haploid and aneuploid derivatives of Triticum aestivum // Caryologia. 1961. - V. 14, N 13. - P. 349-373.

480. Nei M. The efficiency of haploid method of plant breeding // Heredity. -1963.-V. 18, N1.-P. 95-100.

481. Nettancourt D., Stokes C.W. Haploidy in tobacco //Heredity. 1960. -V. 51, N2.-P. 102-104.

482. Niizeki H., Oono K. Induction of haploid rice plant from anther culture // Proc. Jap. Acad. 1968. - V. 44, N 6. - P. 554-557.

483. Nishiyama I., Tabata M. Cytogenetic studies in Avena. XII. Meiotic chromosome behaviour in a haploid cultivated oat // Jap. J. Genet. 1964. - V. 38, N5-6.-P. 311-316.

484. Nitsch C. Pollen culture a new technique for mass production of haploid and homozygous plants // Haploids in higher plants / K.J. Kasha (ed.). - Univ. of Guelph, Guelph, Ontario, 1974. P. 123-125.

485. Nitsch J.P. Experimental androgenesis in Nicotiana // Phytomorpho-logy. -1969. V. 19, N 4. - P. 389-404.

486. Nitsch J.P., Nitsch C. Haploid plants from pollen grains // Science. -1969. V. 163, N 3862. - P. 85-87.

487. Nitzsche W. Mitotische Chromosomenreduction in höheren Pflanzen durch 3-Fluor-phenylalanin //Naturwiss. 1973. - Bd 60. - S. 390.

488. Nordenskiold H. Studies of a haploid rye plant // Hereditas. 1939. -V. 25.-P. 204-210.

489. Norrel B. Etude cytologique des l'androgenese experimentale chez Nicotiana tabacum et Datura innoxia // Bull. Soc. bot. France. 1970. - V. 117. - P. 461-478.

490. Novak F.J., Ognoutkova L. Die entfernte Hybridization als methode zur Gewinnung von Haploiden von Gerste und Weizen // Tagungsber. Acad. Land-wirtschaftswiss. DDR, Berlin, 1980. Bd 171. S. 157-162.

491. Ohlendorf A. Cytologische Untersuchungen an Weizen-Queckenbas-tarden//Züchter. 1952. Bd 22, H. 1/2. - S. 34-58.

492. Ohlendorf A. Weitere cytologische Untersuchungen an Weizen-Queckenbastarden//Züchter. 1955. -Bd25, H. 11/12. - S. 331-351.

493. Okamoto M., Sears E.R. Structural relationships between non-homologous chromosomes // Wheat Inform. Serv. 1956. - V. 3. - P. 6.

494. Okamoto M., Sears E.R. Chromosomes involved in translocations obtained from haploids of common wheat // Can. J. Genet. Cytol. 1962. - V. 4, N 1. -P. 24-30.

495. Oono K. Production of haploid plants of rice (Oryza sativa) by anther culture and their use for breeding // Bull. nat. Inst. Agr. Sei. 1975. - V. 26D. - P. 139-222.

496. Pai R.A., Swaminathan M.S. Cytological behaviour of a nullihaploid of bread wheat // Naturwiss . 1959. V. 46. - P. 584-585.

497. Pandey K.K. Theory and pract'ice of induced androgenesis // New Phytol. 1973. - V. 72, N 5. - P. 1129-1140.

498. Pandey K.K. Sexual transfer of special genes without genetics fusion // Nature (Lond.). 1975. - V. 256. - P. 310-313.

499. Pandey K.K. Further evidance for egg transformation in Nicotiana // Herediry. 1980. - V. 45, N 1. - P. 15-29.

500. Pandey K.K. Irradiated pollen-induced eggs transformation in plants: prospects for rapid plant improvement // Pollen: biol. and implic. plant breed.: Proc. Symp., Lake Garda, 1982. New York e. a., 1983. P. 117-123.

501. Park S.J., Walsh E.J., Reinbergs E., Song L.S.P., Kasha K.J. Field performance of doubled haploid barley lines in comparison with lines develo ed by the pedigree and single seed descent methods // Can. J. Plant Sei. 1976. - V. 56. -p. 467-474.

502. Peloquin S.J., Gabert A.C., Ortiz R. Nature of «pollinator» effect in potato (Solanum tuberosum L.) haploid production // Ann. Bot. (USA). 1996. - V. 77,N5.-P. 539-542.

503. Person C. An analytical study of chromosome behaviour in a wheat haploid // Canad. J. Bot. 1955. - V. 33, N 1. - P. 11-30.

504. Peto F.H. Hybridization of Triticum and Agropyron. II. Cytology of male parents and the Fj generation // Can. J. Res. 1936. - V. 14. - P. 203-214.

505. Picard E., Buyser J. Nouveaux résultats concernant la culture d'antheres in vitro de ble tendre (Triticum aestivum L.). Effects d'un choc thermique et la position de l'anthere dans l'epi // C.R. Acad. Sei. Paris. 1975. - V. 281D. - P. 127130.

506. Pickering R.A. The influence of genotype and environment on chromosome elimination in crosses between Hordeum vulgare L. x Hordeum bulbosum L. // Plant Sei. Lett. 1984. - V. 34. - P. 153-164.

507. Pickering R.A., Wallace A.R. Gibberellic acid + 2,4-D improves seed quality in Hordeum vulgare L. x H. bulbosum L. // Plant Breed. 1994. - V. 113, N 2.-P. 174-176.

508. Pochard E. Desription des trisomiques du piment (Capsicum annuum L.) obtenus dans la descendance d'une plante haploide // Ann. Am^ior. Plantes. -1970.-V. 20.-P. 233-256.

509. Powell J.B., Burton G.W. Polyembryony in pearl millet, Pennisetum typhoides // Crop. Sei. 1968. - V. 8, N 6. - P. 771-773.

510. Prakash S. Haploidy in Brassica nigra Koch. // Euphytica. 1973. - V. 22, N3.-P. 613-614.

511. Raja Rao K.G., Kumar 0. Aniel. Colchicine induced interchanges in chillies (Capsium annuum L.) // Experientia. 1983. - V. 39, N 1. - P. 76-77.

512. Ramiah K., Parthasarathy N., Ramanujam S. Haploid plant in rice Oiyza sativa // Current, sci. 1938. - V. 1, N 9. - P. 277-278.

513. Randall T.E., Rick C.M. A cytogenetic study of polyembryony in Asparagus officinalis L. // Amer. J. Bot. 1945. - V. 32, N 9. - P. 560-569.

514. Randolph L.F. Some effects of high temperatures on polyploidy and other variations in maize // Proc. Nat. Acad. Sci. (USA). 1932. - V. 18. - P. 222229.

515. Randolph L.F. Note on haploid frequencies // Maize Genetics, Coop. Newsletter. 1938. - V. 12. - P. 12.

516. Rao P.N., Stokes G.W. Genetic analysis of the Fi of haploid x diploid tobacco // Genetics. 1963. - V. 48, N 10. - P. 1423-1433.

517. Rasmusson J. Genetically changed linkage values in Pisum // Hereditas. 1927.-V. 10, N1.-P. 1-152.

518. Reddi V.R. Chromosome aberrations in two haploid derivatives of Sorghum // Cytologia. -1971. V. 36. - P. 377-381.

519. Reinbergs E., Song L.S.P., Choo T.M., Kasha K.J. Yield stability of doubled haploid lines of barley // Can. J. Plant Sci. 1978. - V. 58. - P. 929-933.

520. Renard M. Winter rapeseed breeding // GCIRC bull. 1986. - V. 3. - P.24.25.

521. Rieger R. Inhomologenpaarung und meioseablauf bei haploiden formen von Antirrhinum majus L. // Chromosoma. 1957. Bd 9. - S. 1-38.

522. Riley R. The diploidisation of polyploid wheat // Heredity. 1960. - V. 15. - P. 407-429.

523. Riley R. Cytogenetics and plant breeding// Genet. Today. 1965a. - V. 3.-P. 681-688.

524. Riley R.Cytogenetics and the evolution of wheat // Essays on crop plant evolution. Cambridge, 1965b. P. 101.

525. Riley R. Genotype environmental interaction affecting chiasma frequency in Triticum aestivum// Chromosomes Today. - Edinburg, London, 1966a. N 1. P. 57-66.

526. Riley R. The genetic regulation of meiotic behaviour in wheat and its relatives // Prog. II Intern. Wheat Genet. Symp. Lund. 1966b. P. 395.

527. Riley R., Chapman V. Haploids and polyhaploids in Aegilops and Triticum // Heredity. 1957. - V. 11, N 2. - P. 195-207.

528. Riley R., Chapman V. Genetic control of the cytologycally diploid behaviour of hexaploid wheat //Nature. 1958. - V. 182. - P. 713-715.

529. Riley R., Law C. Genetic variation in chromosome pairing // Adv. Genet. 1965. -V. 13. - P. 57-114.

530. Rines N.W., Dahleen L.S. Haploid oat plants produced by application of maize pollen to emasculated oat florets // Crop Sei. 1990. - V. 30, N 5. - P. 1073-1078.

531. Rogers O.M., Ellis J.H. Pollen nuclear division prevented with toluidine blue in Vinca rosea L. // Hortscience. 1966. - V. 1. - P. 62-63.

532. Rosenberg O. Die semiheterotypische Teilung und ihre Bedeutung fur die Entstehung verdoppelter Chromosomenzahlen // Hereditas. 1927. - Bd 8. - S. 305-338.

533. Ross J.G., Atkinson G.F. Colchicine-induced somatic chromosome reduction in sorghum. VI. Nuclear volume changes within diploid stem apices after colchicine application//Can. J. Genet. Cytol. 1965. - V. 7. - P. 31-36.

534. Rothacker D. Einige Möglichkeiten und die Problematic der Erzungung und Verwendung dihaploider Kartoffeln für die Züchtung // Tagungsbericht. 1970. - Bd 101. - S. 233.

535. Rothacker D., Schäfer G. Some nvestigations on haploid plants of S. tuberosum//Züchter. 1961. - Bd 31. - S. 289-297.

536. Rothacker D., Schäfer G. Einige Untersuchungen über haploide Pflanzen von Solanum tuberosum L. // Züchter. 1964. - Bd 31, H. 7. - S. 289.

537. Rothacker D., Schreiter J., Junges W. Untersuchungen zur Erzeugung und Auslese dihaploider Sämlinge bei Solanum tuberosum L. // European Potato J. -1966.-Bd9,H.2.-S. 99-110.

538. Roux J.-B. L'haploi'die chez le cotonnier // Coton et fibres trop. 1958. -V. 13,N2.-P. 289-292.

539. Rutishauser A. Embryologie und Fortplanzungsbiologie der Angiospermen// Springer. Wien - New York, 1969.

540. Sadasivaiah R.S. Haploids in genetic and cytological research // Hap-loids in higher plants. / K.J. Kasha (ed.). Univ. of Gueplh, Gueplh, Ontario, 1974. P. 355-386.

541. Sadasivaiah R.S., Kasha K.J. Meiosis in haploid barley An interpretation of non-homologous chromosome associations // Chromosoma. - 1971. - V. 35. - P. 247-263.

542. Sadasivaiah R.S., Kasha K.J. Non-homologous associations of haploid barley chromosomes in the cytoplasm of Hordeum bulbosum L. // Can. J. Genet. Cytol. 1973. - V. 15. - P. 45-52.

543. SdgiF. In vitro modszerek alkalmazasa a gabonafeîék nemesiteseben. II. Haploid indukcio, gametoklonalis variacio // Novenytermeles. - 1987. - V. 36, N 5. - P. 385-394.

544. San Noeum. Haploides d'Hordeum vulgare L. par culture in vitro d'ovaires nonfecondes // Ann. Amelior. Plants. 1976. - V. 26. - P. 751-754.

545. Sanders H., Hull J.W. Dimethyl sulfoxide as an adjuvant of colchicine in the treatment of Rubus seeds and shoot apices // Hort. Sei. 1970. - V. 5. - P. 111-112.

546. Sanders M.E., Franzke C.J. Somatic reduction of tetraploid Sorghum to diploid mutants following colchicine treatment//Nature (Lond.). 1962. - V. 196. -P. 696-698.

547. Sanford J.C., Chyi Y.S., Reisch B.J. Attempted «egg transformation» in Zea mays L., using irradiated pollen // Theor. and Appl. Genet. 1984a. V. 68, N 3. - P. 269-275.

548. Sanford J.C., Chyi Y.S., Reisch B.J. An attempt to induce «egg transformation» in Lycopersicon esculentum Mill, using irradiated pollen // Theor. and Appl. Genet. 1984b. - V. 67, N 6. - P. 553-558.

549. Santos J.L., Jimeneiz M.M., Diez M. Meiosis inhaploid rye. Extensive synapsis and low chiasma frequency // Heredity. 1994. - V. 73, N 6. - P. 580-588.

550. Satkar K.R. Coe E.H. A genetic analysis of the origin of maternal hap-loids in maize // Genetics. 1966. - V. 54, N 2. - P. 453-464.

551. Seaney R.R. Studies on monoploidy in maize: Doct. Diss. Cornell. Univ., 1955.

552. Sears E.R. Cytogenetic studies with polyploid species of wheat. 1. Chromosomal aberrations in the progeny of a haploid of Triticum vulgare // Genetics. 1939. - V. 24, N 4. - P. 509-523.

553. Sears E.R. The cytology and genetics of the wheats and their relatives // Adv. Genet. 1948. - Y. 2. - P. 239-270.

554. Sears E.R. The aneuploids of common wheat // Missouri Agr. Exp. Sta. Res. Bull. 1954. - N 572. - 58 p.

555. Sears E.R. Wheat cytogenetics // Ann. Rev. Genet. 1969. - V. 3. - P. 451-468.

556. Sears E.R., Okamoto M. Genetic and structural relationships of nonhomologous chromosomes in wheat // Proc. Intern. Genet. Symp. 1956 (Cytologia Suppl.), 1957. P. 332-335.

557. Sears E.R., Okamoto M. Intergenomic chromosome relationships in hexaploid wheat (Abstr.) // Proc. 10 th Intern. Congr. Genet., 1958. V. 2. P. 258259.

558. Senaratha T., Kott L., Beversdorf W.D., McKersie B.D. Desiccation of microspore derived embryos of oilseed rape (Brassica napus L.) // Plant Cell Repts. 1991. - V. 10, N 6-7. - P. 342-344.

559. Shepherd K.W. Chromosomal control of endosperm proteins in wheat and rye // Proc. 3rd Intern, wheat genet, symp. Canberra, Austral. Acad. Sci., 1968. P. 86-96.

560. Silow R.A., Stephens S.C. «Twinning» in cotton//J. Heredity. 1944. -V. 35, N 3. - P. 76-78.

561. Simantel G.M., Ross J.G. Colchicine induced somatic chromosome reduction in sorghum. III. Induction of plants homozygous for structural chromosome markers in four pairs // J. Heredity. 1963. - V. 54. - P. 277-284.

562. Simpson E., Snape J.W. Cross prediction for yield using doubled haploid lines II Barley Genet. Newslett. 1979. - V. 9. - P. 95-97.

563. Simpson E., Snape J.W., Finch R.A. Variation between Hordeum bul-bosum genotypes in their ability to produce haploids of barley, Hordeum vulgare // Z. Pflazenziicht. 1980. - V. 85, N 3. - P. 205-211.

564. Skiebe K. Polyploidie und Fertilität // Z. Pflanzenzucht. 1966. - Bd 56. - S. 301-342.

565. Skiebe K. Genetische Voraussetzungen für die Samenbildung bei Angiospermen // Biol. Ges. DDR Mitt. Sekt. Genetik u. Züchtung. 1968. - H. 1. - S. 3-23.

566. Skovsted A. Cytological studies in twin plants // Comp. Rend. Lab. Carlsberg, 22a-Serie Physiol. - Copenhagen, 1939. N 27. P. 427-446.

567. Smith H.H. Studies on induced heteroploids of Nicotiana // Amer. J. Bot.- 1943.-V. 30.-P. 121-130.

568. Smith L. Haploidy in eincorn // J. Agr. Res. 1946. - V. 73, N 7-8. - P. 291-301.

569. Snape J.W. A theoretical comparison of diploidised haploid and single seed descent populations // Heredity. 1976. - V. 36, N 2. - P. 275-277.

570. Snape J.W., Simpson E. Use of dihaploid lines of barley for predicting the potential of crosses // Ann. Rept. Plant Breed. Inst., Trumpington, s. a., 1978. P. 131-133.

571. Snape J.W., Simpson E. The genetical expectations of doubled haploid lines derived from different filial generations // Theor. and Appl. Genet. 1981. -V. 60. - P. 123-128.

572. Snape J.W., Parker B.B., Simpson E., Ainsworth C.C., Payne P.J., Law C.N. The use of irradiated pollen for differential gene transfer in wheat (Triticum aestivum) // Theor. and Appl. Genet. 1983. - V. 65, N 2. - P. 103-111.

573. Snyder L.A. Asyndesis and meiotic non-reduction in microsporoge-nesis of apomictic Paspalum secans // Cytologia. -1961. V. 26. - P. 50-61.

574. Song L.S.P., Park S.J., Reinbergs E., Choo T.M., Kasha K.J. Doubled haploid vs. the bulk plot method for production of homozygous lines in barley // Z. Pflanzenzucht. 1978. - V. 81. - P. 271-280.

575. Stadler L.J. The experimental modification of heredity in crop plants. I. Induced chromosomal irregularities // Sei. Agric. -1931. V. 11. - P. 557-572.

576. Stöger E., Fink Ch., Pfosser M., Heberle-Bors E. Plant transformation by particle bombardment of embryogenic pollen // Plant Cell Repts. 1995. - V. 14, N 5. - P. 273-278.

577. Straub J. Die genetische Variabilität haploider Petunien // Z.Pflanzenzucht. 1973. Bd 70. - S. 265-274.

578. Stringam G.R., Bansal V.K., Thiagarajah M.R., Degenhardt D.F., Te-wan J.P. Development of an agronomically superior blackleg resistand canola cultivar in Brassica napus L. using doubled haploidy // Can. J. Plant Sei. 1995. - V. 75, N 2. - P. 437-439.

579. Subrahmanyam N.C., Kasha К J. Selective chromosomal elimination during haploid formation in barley following interspecific hybridization // Chromo-soma (BerL). 1973. - V. 42. - P. 111-125.

580. Subrahmanyam N.C., Kasha K.J. Chromosome doubling of barley haploids by nitrous oxide and colchicine treatments // Can. J. Genet. Cytol. 1975. -V. 17. - P. 573-583.

581. Subrahmanyam N.C., Но K.M., Kasha K.J. Chromosome elimination in interspecific crosses of Hordeum vulgare by H. bulbosum // Genetics. 1972. - V. 71, N3.-P. 63.

582. Suchtelen Van N.J. Investigation of dihaploid potatoes in the Netherlands // European Potaro J. -1966. V. 9, N 2. - P. 64-68.

583. Suchtelen Van N.J. Valenzkreuzungen bei der Kartoffelzuchtung // Tagungsbericht. 1970. - H. 101. - S. 225-231.

584. Suchtelen N.J., Verdenius J. Use of dihaploid potatoes in breeding for ground frost resistance // Euphytica. 1964. - V. 13, N 3. - P. 236.

585. Suenaga Kazuhiro, Tamaki Manabu, Nakajima Kousuke. Influence of wheat (Triticum aestivum) and mayze (Zea mays) genotypes on haploid wheat pto-duction in crosses between wheat and maize // Bull. Nat. Inst. Agrobiol. Resour. 1991. N6. P. 131-142.

586. Sun J.S., Lu T.G., Liu H. Частота оплодотворения и образования гаплоидов пшеницы в скрещиваниях пшеница-сорго // Shiyan shengwu xuebao = Acta Biol. Exp. Sinica. 1996. - V. 29, N 2. - P. 191-195.

587. Sun J.S., Lu T.G., Xin H.W. Индукция гаплоидных растений твердой пшеницы опылением пыльцой кукурузы // Zhiwu xuebao = Acta Bot. Sinica. 1995. - V. 37, N 6. - P. 452-457; 501-502.

588. Sun J.S., Lu T.G., Wang J.L., Sun X.H., Jang C., Wang X.Y. Гибридизация голозерного овса с кукурузой // Zhiwu xuebao = Acta Bot. Sinica. -1995.-V. 37, N4.-P. 255-258.

589. Sunderland N. Anther culture as a means of haploid induction // Haploids in higher plants / K.J. Kasha (ed.). Univ. of Guelph, Guelph, Ontario, 1974. P. 91-122.

590. Sunderland N., Wicks F.M. Cultivation of haploid plants from tobacco pollen//Nature (Lond.). 1969. - V. 224, N 5225. - P. 1227-1229.

591. Sunderland N., Wicks F.M. Embryoid formation in pollen grains of Nicotiana tabacum // J. Exp. Bot. -1971. V. 22, N 70. - P. 213-226.

592. Swaminathan M.S., Singh M.P. X-ray induced somatic haploidy in watermelon // Current. Sci. -1958. V. 27, N 2. - P. 63-64.

593. Symko S. Haploid barley crosses of Hordeum bulbosum (2x) x H. vul-gare (2x) // Can. J. Genet. Cytol. 1969. - V. 11. - P. 602-608.

594. Tanaka S. Comparison between radiation-induced and spontaneous diploid lines derived from a haploid rice plant // Techn. Repts. Ser. Int. Atom. Energy Agency. -1971. -N 131. P. 171-181.

595. Terao H. Induction of parthenogenesis by means of interspecific crosses and its significance for plant breeding // Agr. and Hort. Japanese. 1934. - V. 9. - P. 1-10.

596. Thevenin L. Haploids in Asparagus breeding // Haploids in higher plants / K.J. Kasha (ed.). Univ. of Guelph, Guelph, Ontario, 1974. P. 279.

597. Thomas H.M., Pickering R.A. Chromosome elimination in Hordeum vulgare x H. bulbosum hybrids. 1. Comparisons of stable and unstable am-phidiploids // Theor. and Appl. Genet. 1983a. - V. 66. - P. 135-140.

598. Thomas H.M., Pickering R.A. Chromosome elimination in Hordeum vulgare x H. bulbosum hybrids. 2. Chromosome behaviour in secondary hybrids // Theor. and Appl. Genet. 1983b. - V. 66. - P. 141-146.

599. Thompson D.L. Combining ability of homozygous diploids of corn relative to lines derived by inbreeding // Agron. J. 1954. - V. 46, N 3. - P. 133136.

600. Thompson K.F. Production of haploid plants of marrowsten kale // Nature. -1956. V. 178.-P. 748.

601. Thompson K.F. Homozygous diploid lines from naturally occuring haploids //IV. Int. Rapskongr. Giessen, 1974. P. 119-124.

602. Ting Y.C. Duplications and meiotic behaviour of the chromosomes in haploid maize (Zeamays L.) // Cytologic 1966. - V. 31, N 3. - P. 324-329.

603. Ting Y.C. Fate of the synaptonemal complex during microsporocyte divisions of haploid maize // Amer. J. Bot. -1971. V. 58. - P. 461.

604. Tiwari S.P., Khanorkar S.M. Colchicine-induced true breeding miniature mutant in groundnut // Curr. Sci. 1984. - V. 53, N 23. - P. 1262-1263.

605. Truno-Andre J., Demarly Y. Obtaining plants by in vitro culture of unfertilized maize ovaries (Zea mays L.) and preliminary studies on the progeny of gy-nogenetic plant // Z. Pflanzenzucht. 1984. - V. 92. - P. 309-320.

606. Tsuji Kenkou, Nagaoka Masaaki, Oda Masayuki. Encapsulation of somatic embryos of carrot and promotive effects of the growth of plantlets in vitro // JARQ.: Jap. Agr. Res. Quart. 1993. - V. 27, N 2. - P. 116-121.

607. Tsunewaki K., Noda K., Fujisawa T. Haploid and twin formation in a wheat strain Salmon with alien cytoplasms // Cytologia. 1968. - V. 33, N 3-4. - P. 526-538.

608. Turcotte E.L., Feaster C.Y. Haploids: high-frequency production from single-embryo seeds in a line of Pima cotton // Science. 1963. - V. 140, N 3574. -P. 1407-1408.

609. Turcotte E.L., Feaster C.V. Semigamy in Pima cotton // J. Hered. -1967.-V. 58, N2.-P. 55-57.

610. Turcotte E.L., Feaster C.V. Semigametic production of haploids in Pima cotton// Crop. Sci. 1969. - V. 9, N 5. - P. 653-655.

611. Turcotte E.L., Feaster C.V. The origin of 2n and n sectors of chimeral Pima cotton plants // Crop. Sci. 1973. - V. 13, N 11. - P. 111-112.

612. Turcotte P., st-Pierre C.A., Ho K.M. Comparison entre des lignees pedigrées et des lignees haploides doublées chez l'orge (Hordeum vulgare L.) // Can. J. Plant. Sci. 1980. - V. 60. - P. 79-85.

613. Ushiyama Tomohiko, Shimizu Takao, Kuwabara Tatsuo. High frequency of haploid production of wheat through intergeneric cross with teosinte // HicycioraKy #3accH = Jap. J. Breed. -1991. V. 41, N 2 - P. 353-357.

614. Vassileva-Dryanovska O.A. The induction of haploid embryos and tet-raploid endosperm nuclei with irradiated pollen in Lilium // Hereditas. 1966. - V. 55,N2-3.-P. 160-165.

615. Wagenaar E.B. Meiotic restitution and the origin of polyploidy. I. Influence of genotype on polyploid seedset in a Triticum crassum x T. turgidum hybrid // Can. J. Genet, and Cytol. 1968a. - V. 10, N 4. - P. 836-843.

616. Wagenaar E.B. Meiotic restitution and the origin of polyploidy. II. Prolonged duration of metafase I as caused factor of restitution induction // Can. J. Genet, and Cytol. 1968b. - V. 10, N 4. - P. 844-852.

617. Walsh E.J. Efficiency of the haploid method of breeding autogamous diploid species: a computer simulation study // Haploids in higher plants / K.J. Kasha (ed.). Univ. of Guelph, Guelph, Ontario, 1974. P. 195-209.

618. Wang C.C., Kuang B.J. Induction of haploid plants from the female gametophyte of Hordeum vulgare L. (in Chinese) // Acta Bot. Sinica. 1981. - V. 23. - P. 329-330.

619. Wangenheim K.H., Peloquin S.J., Hougas R.W. Embryological investigations on the formation of haploids in the potato (Solanum tuberosum) // Z. Ver-erbungsl. 1960. - V. 91. - P. 391-399.

620. Webber J.M. Cytological features of Nicotiana glutinosa haploids // Jour. Agr. Res. 1933. - V. 47. - P. 845-867.

621. Wenzel G., Thomas E. Heretozygous microsporederived plants in rye // Theor. and Appl. Genet. 1976. - V. 48. - P. 205-208.

622. Werner C.P., Dunkin I.M., Cornish M.A., Jones G.H. Gene transfer in Nicotiana rustica by means of irradiated pollen. II. Cytogenetical consequences // Herediry. 1984. -V. 52. N 1. - P. 113-119.

623. Wernicke W., Kohlenbach H.W., Versuche zur Kultur isolierter Mikrosporen von Nicotiana und Hyoscyamus // Z. Pflanzenphysiol. 1977. - Bd 81. - S. 330-340.

624. White Ph. R. A handbook of the plant tissue culture. Ronald Press, New Jork, 1943.

625. Wilkinson M,J., Bennett S.T., Clulow S.A., Allainguillaume J., Harding K., Bennett M.D. Evidence for somatic translocation during potato dihaploid induction// Heredity. 1995. - V. 74, N 2.

626. Wilson J.A., Ross W.M. Haploid in twin seedling of winter wheat, Triticum aestivum// Crop. sci. -1961. V. 1, N 1. - P. 82.

627. Winzeier H., Schmid J., Fried P.M. Field performance of androgenetic doubled haploid spring wheat lines in comparison with lines selected by pedigree system// Plant Breed. 1987. - V. 99, N 1. - P. 41-48.

628. Yamasaki K. Some observations on the microsporogenesis of the haploid plant of Triticum vulgare // Jap. J. Bot. 1936. - V. 8, N 2. - P. 151-153.

629. Yamasaki K. The haploid plant of common wheat, Triticum vulgare Host // Cytologia. 1937. - V. 5. - P. 305-387.

630. Yang H.Y., Zhou C. In vitro induction of haploid plant from unpollinated ovaries and ovules // Theor. and Appl. Genet. 1982. - V. 63, N 2. - P. 97104.

631. Yen B.P., Peloquin S.J. Pachytene chromosomes of the potato (Solanum tuberosum, group andigena) //Amer. J. Bot. 1965. - V. 52. - P. 1014-1020.

632. Yin K.Ch., Hsii Ch., Chu Ch.Y., Pi F.Y., Wang S.T., Liu T.Y., Chu Ch.Ch., Wang Ch.Ch., Sun Ch.S. A study of the new cultivar of rice raised by haploid breeding method // Schientia Sinica. 1976. - V. 19. - P. 227-242.

633. Yonezawa K., Nomura Т., Sasaki Y. Conditions favouring doubled haploid breeding over conventional breeding of self-fertilizing crops // Euphytica. -1987. V. 36,N2.-P. 441-453.

634. Yoshida H., Yamaguchi H. Arrangement and association of somatic chromosomes induced by chloramphenicol in barley// Chromosoma (Berl.). 1973. - V. 46. - P. 399-407.

635. Yuce S. Haploide bei der Zuckerrübe: Inaugural-Dissert. Univers. Gießen, 1973.

636. Zhang H., Zhang Т., Pan J. Эмбриологическое исследование полового процесса семигаметической линии Gossypium barbadense // Zuowu xue-bao = Acta Agron. Sinica. 1996. - T. 22, N 2. - C. 156-160; 259-260.367

637. Zhao Z., Gu M. Получение диплоидных чистых линий кукурузы через партеногенез, индуцированный химическим путем // Ичуань сюэбао = Acta Genet. Sin. 1984. - V. 11, N 1. - P. 39-46.

638. Zheng Y., Luo M.,Yan J., Yang J. Наследование скрещиваемости нового материала J-11 мягкой пшеницы с рожью // Yichuan xuebao = Acta Genet. Sin. 1993. - V. 20, N 2. - P. 147-154.

639. Zhou C., Yang H.Y. Induction of haploid rice plantlets by ovary culture // Plant. Sci. Lett. -1981. V. 20, N 3. - P. 231-237.

640. Zhu Z.C., Wu H.S. In vitro induction of haploid plantlets from the un-pollinated ovaries of Triticum aestivum and Nicotiana tabacum // Acta Genetica Sinica. 1979. - V. 6. - P. 181-183.

641. СОЮЗ СОВЕТСКИХ СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИК

642. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СОВЕТА МИНИСТРОВ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

643. Председатель Госкомитета, Начальник отдела,1. МГ№Г. 1976. Зак. 76-3083.370ена Трудового Красного Знамени ^учно-исследовательскнй институтсельского хозяйства Центр ально-Чер вгсземной полосы им. В. В." Докучаева

644. Изучение линий в течение 7-и лет показало, что они обладают такими хозяйственно ценными признаками, как: высокая продуктивность, неполегаемость, устойчивость к к^учнистой росе.

645. Зав. лабораторией""бшекции озимой пшеницы доктор сельскохозяйственных наук1. Б.И. Сандухадзе

646. СОЮЗ СОВЕТСКИХ СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИК ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ ПРИ ГОСУДАРСТВЕННОМ КОМИТЕТЕ СССР ПО НАУКЕ И ТЕХНИКЕ (Г0СК0МИ30БРЕТЕНИЙ)

647. На основании полномочий, предоставленных Правительством СССР,

648. Госкомизобретений выдал настоящее авторское свидетельствона изобретение: "Способ получения гаплоидов ячменя"

649. Автор (авторы): Чистякова Валентина Николаевна

650. НАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННОЕ ОБЪЕДИНЕНИЕ

651. ПОДМОСКОВЬЕ" ОТДЕЛЕНИЯ ПО НЕЯЕРНОЗЕМНОК ЗОБЕ Заявитель: ВА.С2Ш1. Заявка №4671178 Приоритет изобретения 10 марта 1989г.

652. Зарегистрировано в Государственном реестре изобретений СССР15 марта 1991г.

653. Действие авторского свидетельства распространяется на всю территорию С<5ю§а. ССР.1. Председатель Комитета