Иммунобиологические свойства термолабильного энтеротоксина бактерий рода Enterobacter в системе взаимодействия "патоген-хозяин"

Ахтариева, Айгуль Атласовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Иммунобиологические свойства термолабильного энтеротоксина бактерий рода Enterobacter в системе взаимодействия "патоген-хозяин"
ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Иммунобиологические свойства термолабильного энтеротоксина бактерий рода Enterobacter в системе взаимодействия "патоген-хозяин""

На правах рукописи

ÜÜ46Ö464

Ахтариева Айгуль Атласовна

ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ТЕРМОЛАБИЛЬНОГО ЭНТЕРОТОКСИНА БАКТЕРИЙ РОДА ENTEROBACTER В СИСТЕМЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ "ПАТОГЕН - ХОЗЯИН"

03.02.03 - микробиология 14.03.09 - клиническая иммунология, аллергология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

- з июн 2010

Челябинск 2010

004604642

Работа выполнена на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет Росздрава» и на кафедре микробиологии, вирусологии, иммунологии ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Росздрава».

Научные консультанты: Заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор

Заслуженный деятель науки РФ, член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор

Официальные оппоненты: Заслуженный деятель науки РФ, член-корреспондент РАН, академик РАМН,

доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор

Габидуллин Зайнулла Гайнулинович Долгушин Илья Ильич

Бухарин Олег Валерьевич Бурмистрова Александра Леонидовна Сигуширцев Андрей Семенович

Ведущая организация: Институт экологии и генетики микроорганизмов УроРАН, г. Пермь

Защита диссертации состоится _2010 года в _

часов на заседании Диссертационного Совета Д 208.117.03 при ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Росздрава» по адресу: 454092, г. Челябинск, ул. Воровского, 64.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Росздрава».

Автореферат разослан« 3 » 2010 года

Ученый секретарь

диссертационного совета,

доктор медицинских наук, профессор

Л.Ф. Телешева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

В настоящее время пристальное внимание уделяется проблеме инфекционных заболеваний, вызываемых условно-патогенными энтеробактериями (УПЭ), патогенез которых недостаточно изучен. В развитии инфекционного процесса, ассоциируемого с УПЭ, безусловно, основополагающую роль играют токсины возбудителя, среди которых особый интерес представляет термолабильный (LT) энтеротоксин бактерий рода Enterobacter.

Известно, что LT-энтеротоксины УПЭ имеют сходный механизм токсического эффекта на желудочно-кишечный тракт как человека, так и животных, к разряду основных клинических проявлений которого относят диарейный симптомокомплекс на фоне выраженной интоксикации организма (Horstman A.L., Kuehn M.J., 2000; Al-Majali А.М. et al., 2000; Khursigara С. et al., 2001; Field M., 2003; Mundy R. et al., 2005; Weckamp J. et al., 2005). Их местное воздействие способствует закреплению инфекта и повышает вероятность инвазии; они инициируют системные реакции, достаточно удаленные от зоны первичной локализации (Qadri F. et al., 2005; Kenneth P.A. et al., 2006; Borenshtein D. et al., 2008; Masuda A. et al., 2008). Кроме того, выявлено, что LT-энтеротоксины УПЭ иммунологически схожи, в частности, определены сходства LT-энтеротоксинов Enterobacter cloacae и Escherichia coli (Klipstein F.A., Engert R.F., 1977; Jiwa S.F. et al., 1981; Klipstein F. A. et al, 1983; Pagotto F. J. et al., 2003; Hajishengallis G. et al., 2004; 2005). Вместе с тем, комплексный анализ иммунобиологических характеристик в системе "патоген-хозяин" LT- энтеротоксина Enterobacter spp. не проводился.

Течение любого инфекционного процесса тесным образом взаимосвязано с факторами и механизмами иммунной реактивности, поэтому понимание глубины патогенеза заболевания невозможно без раскрытия иммунологического контекста этой проблемы.

В преодолении защитной функции системы иммунореактивности при инфекционных процессах важную роль играют особенности реагирования клеточных факторов врожденного иммунитета в ответ на возбудителя. Одними из главных клеток врожденного иммунитета, осуществляющих первую линию защиты организма от инфекции, являются фагоциты - макрофаги, нейтрофилы, натуральные киллеры, дендритные клетки и др. (Тотолян A.A., Фрейдлин И.С., 2000; Ахматова Н.К., Киселевский М.В., 2008; Фрейдлин И.С., 2008; Долгушин И.И. и др., 2009; Pasare S., Medzhitov R., 2005; Hausmann M. et al., 2005; Levy O., 2005; Kenneth C.B. et al., 2006; Kopitar A.N. et al., 2006; Uematsu S. et al., 2006; Talati A.J. et al., 2008).

В основе защитной функции указанных эффекторов лежит фагоцитарный процесс, заключающийся в их способности поглощать и уничтожать чужеродный материал (Ляшенко В.А., 1995; Кетлинский С.А., Калинина Н.М., 1995; Тотолян A.A., Фрейдлин И.С., 2000; 2008; Долгушин И.И. и др., 2009; Janeway С.А. Jr., Medzhitov R., 2002).

Функциональные возможности фагоцитов могут меняться при действии разных объектов фагоцитоза (Долгушин И.И., Бухарин О.В., 2001; Пащенков М.В, Пинегин Б.В., 2006; Плехова Н.Г., 2006; Сомова Л.М., 2006; Ильинская А.Н. и др., 2007; Карсонова М.И. и др., 2007; Пинегин Б.В., Маянский А.Н., 2007; Пинегин Б.В., Кирсанов М.И, 2009; Sing А. et al., 2000; Paraje M.G. et.al, 2005; Heumann D. et al, 2006; Eisenbarth S.C, Flavell R.A, 2006; Kawai T, Akira S, 2006; ParkS. etal, 2009).

Кроме того, чрезмерное воспаление, сопровождающееся избыточной продукцией и секрецией агрессивных молекул и радикалов, может привести к массивным повреждениям клеток и тканей организма (Stunczuk G.A. et al, 2003; Borenshtein D. et al, 2008).

Процесс взаимодействия патогена с клеткой хозяина вызывает развитие каскада иммунологических реакций, сопровождающихся продукцией цитокинов, спектр секреции которых зависит не только от вида бактерий, но и от их факторов патогенности (Симбирцев A.C., 2004; Ковальчук Л.В. и др, 2005; 2008; Маянский А.Н. и др, 2007; Meserli С. et al, 1981; Meroni P.L. et al, 1987; Comelis G.R, Van Gijsegem F, 2000; Qiensue S.W. et al, 2001; Kandimalla E.R. et al, 2003; Levy О, 2005; Talati A.J. et al, 2008). Бактерии, со своей стороны, также используют разные возможности манипулирования цитокинами для своей выгоды (Бухарин О.В. и др, 2005; Merrell D.S., Folkow S, 2004).

В настоящее время существуют убедительные доказательства о том, что клинический исход заболевания во многом зависит от баланса секреции про- и противовоспалительных медиаторов (Stunczuk G.A. et al, 2003; Xanthoulea S. et al, 2004; Borenshtein D. et al, 2008; Mateolli G. et al, 2008).

Современное понимание особенностей иммунной реакции при инфекционных заболеваниях, вызванных энтеротоксигенными УПЭ, в частности, бактериями рода Enterobacter, невозможно без оценки функциональной активности Т- и B-лимфоцитов, так как направление дифференцировки Т-клеток в Т-хелпер - 1 (ТЫ)/ Т-супрессор - 1 (Tel) или Т-хелпер - 2 (Th2)/ Т-супрессор - 2 (Тс2) тип, переключение B-клеток на продукцию классов иммуноглобулинов определяет характер и течение заболевания (Симбирцев A.C., 2002; Швыдченко И.Н. и др, 2005; Железникова

Г.Ф., 2006; Суслов А.П. и др., 2006; Пономарева Е.Г. и др., 2007; Маянский А.Н. и др., 2007; Klapproth J.M.A. et al., 2000; Feng B.S. et al., 2008).

В настоящее время внимание исследователей привлекают вопросы изучения апопотоза эукариотических клеток, поскольку многие патогенные микроорганизмы выработали совершенные механизмы управления гибелью клеток хозяина в целях выживания (Moss J. et al., 1980; Ding W.X. et al., 2000; Arce С. et al., 2005; Kamado N. et al., 2008). Вместе с тем, нарушение процессов инициации и реализации летальной программы клеток иммунной системы часто становится основополагающей в определении характера и тяжести течения патологического процесса. Поэтому изучение влияния LT-энтеротоксина Enterobacter spp. на апоптоз клеток иммунной системы хозяина также является актуальным.

Исходя из вышеизложенного, представляет научный и практический интерес изучение характеристики иммунобиологических возможностей LT-энтеротоксина Enterobacter spp. и сопряженных с ним иммунных реакций организма. Полученные данные помогут глубже проникнуть в фундаментальные механизмы патогенеза инфекционных заболеваний, вызываемых энтеротоксигенными Enterobacter spp., и откроют новые возможности управления ими.

На наш взгляд, представления о взаимоотношениях между паразитом и хозяином можно расширить, изучив морфологические особенности Enterobacter spp., характеристику факторов патогенности и генетические детерминанты патогенности.

Цель исследования

Дать комплексную характеристику иммунобиологическим свойствам термолабильного энтеротоксина бактерий рода Enterobacter в системе взаимодействия "патоген-хозяин".

Задачи исследования

1. Оценить фенотипические проявления факторов патогенности штаммов рода Enterobacter, выделенных от больных с желудочно-кишечными, урологическими и гнойно-воспалительными инфекциями.

2. Провести комплексное тестирование биологических свойств клинических штаммов рода Enterobacter и определить штаммы, обладающие факторами патогенности и являющиеся суперпродуцентами термолабильного энтеротоксина.

3. Изучить генотипическую характеристику "островков патогенности" бактерий рода Enterobacter, специфичных генам, входящим в состав патогенных кластеров E.coli и ответственных за разные этапы взаимодействия возбудителя с макроорганизмом.

4. Определить особенности иммунного реагирования на разных этапах взаимодействия энтеротоксигенных представителей рода Enterobacter в системе "патоген-хозяин".

5. Изучить механизмы патогенного действия термолабильного энтеротоксина бактерий рода Enterobacter на этапах формирования иммунного ответа организма хозяина.

6. Определить влияние термолабильного энтеротоксина бактерий рода Enterobacter на апоптоз перитонеальных фагоцитов мышей.

Научная новизна

Из-коллекции культур Enterobacter spp. были выделены новые 3 штамма, обладающие комплексом факторов патогенности: Enterobacter gergoviae ГИСК №259 (патент РФ №2161197 от 18.11.1999), Enterobacter cloacae ГИСК №258 (патент РФ №2164942 от 13.03.2000), Enterobacter agglomerans ГИСК №257 (патент РФ №2162485 от 13.03.2000).

Впервые получены данные, характеризующие фенотипические особенности бактерий рода Enterobacter, коррелирующие с их патогенностью. Установлены различия между клетками Enterobacter spp., образующими центр колоний и имеющими размеры 1,9±0,59 мкм в длину и 0,7±0,03 мкм в ширину, и формирующими на периферии колонии так называемые "швермеры" (бродяги). Эти высокоподвижные длинные клетки имеют избыточное количество жгутиков. У высокоадгезивных штаммов Enterobacter spp. обнаружены по периметру реснички длрной 297,8±30,57 нм и шириной 4,9±0,11нм.

Впервые проведена молекулярно-биологическая характеристика клинических штаммов Enterobacter spp. в свете новых представлений о генетических основах патогенности микроорганизмов: обнаружены гены, аналогичные с "островками патогенности" E.coli.

На основе комплексного системного анализа выявлены особенности изменения иммунной системы животных, включая оценку феномена апоптоза клеток воспалительного экссудата.

Впервые выявлен эффект иммуносупрессивного влияния термолабильного энтеротоксина на антигенпрезентирующую и процессинговую функции перитонеальных макрофагов, расшифрованы молекулярные механизмы подавления указанных функций у макрофагов, опосредованных ложной индукцией трансформирующего фактора роста-/? (TGF-ß).

В патогенезе инфекционного процесса, связанного с термолабильным энтеротоксином, впервые определен характер модулирующего влияния токсина на макрофаги и нейтрофилы. Он способен несколько снижать продукцию интерферона-7 (IFN-7). В то же время исследование состояния

внутриклеточных механизмов микробиоцидной активности перитонеальных фагоцитов под влиянием термолабильного энтеротоксина бактерий рода Enterobacter выявило негативное действие токсина на активность ферментов гексозомонофосфатного шунта фагоцитов, что характеризовалось резким снижением образования супероксидных анионов.

Теоретическая и практическая значимость работы

Полученные экспериментальные данные дополняют и углубляют представления о молекулярных механизмах действия • термолабильного энтеротоксина бактерий рода Enterobacter на иммунную систему хозяина, раскрывают патогенез инфекционных процессов, обусловленных токсинпродуцирующими штаммами энтеробактерий, и создают основу для разработки этиопатогснстичсских принципов лечения и целенаправленной профилактики инфекционных заболеваний. Полученные данные будут полезны для своевременной коррекции иммунологических нарушений, связанных с энтеротоксинпродуцирующими штаммами условно-патогенных энтеробактерий.

Установлены маркеры вирулентности у штаммов Enterobacter spp, что позволит разработать пути целенаправленной профилактики и лечения инфекционных заболеваний, вызванных бактериями рода Enterobacter.

Отработаны оптимальные подходы для выяснения этиологической значимости бактерий рода Enterobacter, выделенных при желудочно-кишечных, урологических и гнойно-воспалительных заболеваниях.

Результаты работы расширяют экспериментальную базу для изучения патологических процессов, происходящих при острой энтеробактерной инфекции.

Основные положения, выносимые на защиту

1.Патогенетические возможности клинических штаммов рода Enterobacter определяются их способностью к адгезии, продукции цитолизинов, токсинообразованию и персистентными свойствами.

2.Генотипическая характеристика "островков патогенности" бактерий рода Enterobacter детерминирована HlyA, HlyB, рарАН, рарС, sfaA, sfaG генами E.coli.

3. Бактерии рода Enterobacter, выделенные из очагов поражения, включают генетически разнородные варианты, что имеет ценность для эпидемиологической оценки.

4.Патогенетическое действие термолабильного энтеротоксина бактерий рода Enterobacter связано с его действием на различные этапы формирования иммунного ответа хозяина, в первую очередь, на антигенпрезентирующую функцию перитонеальных макрофагов и продукцию ими цитокинов TGF-/3, TNF-a и IFN-7.

Внедрение результатов исследования

Депонированные в ФГУН ГНИИСК имени Л.А. Тарасевича 3 штамма Enterobacter spp. (патенты РФ: №2161197 от 18.11.1999; №2164942 от 13.03.2000; №2162485 от 13.03.2000) используются в работе лаборатории анатоксинов «Иммунопрепарат» ФГУП «НПО «Микроген» МЗ и CP РФ в качестве токсигенных тест - культур.

Результаты исследования используются в бактериологических лабораториях Детской Республиканской клинической больницы и Республиканской клинической больницы им. Г.Г. Куватова г.Уфы.

Материалы исследования внедрены в учебный процесс на кафедрах микробиологии, вирусологии и иммунологии; эпидемиологии и детских инфекционных болезней ГОУ ВПО «БГМУ Росздрава»; на кафедре микробиологии, вирусологии, иммунологии ГОУ ВПО «ЧелГМА». Издано учебное пособие для врачей - бактериологов и клинических лаборантов «Условно-патогенные энтеробактерии» (Уфа, 2006; 2009).

Апробация работы

Материалы диссертации докладывались на VIII съезде Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2002); VI конференции иммунологов Урала (Челябинск, 2005); конференции «Актуальные вопросы современной фармации и фармацевтическое образование» (Уфа, 2006); конференции, посвященной 25-летию ЦНИЛ ЧелГМА «Актуальные вопросы инфекционной патологии человека и прикладной иммунологии» (Челябинск, 2006); V Российской научной конференции «Персистенция микроорганизмов» (Оренбург, 2006), Республиканской конференции молодых ученых Республики Башкортостан «Медицинская наука - 2007» (Уфа, 2007); Республиканской конференции молодых ученых Республики Башкортостан «Медицинская наука-2008» (Уфа, 2008); 73-й итоговой Республиканской Научной конференции студентов и молодых ученых БГМУ «Вопросы теоретической и практической медицины» (Уфа, 2008), IX съезде Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2007), обсуждены на совместном заседании кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет Росздрава», кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Росздрава», Башкирского отделения Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов и ведущих сотрудников уфимского филиала «Иммунопрепарат» ФГУП «НПО «Микроген» МЗ и CP РФ.

Публикации

По теме диссертации опубликованы 45 печатных работ.

Структура и объем диссертации

■Диссертация изложена на 227 страницах, иллюстрирована 31 таблицей и 28 рисунками, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 3 глав собственных исследований, заключения и выводов. Список литературы включает 95 отечественных и 320 иностранных источников.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Клинический материал бактерий рода Enterobacter получали из бактериологических лабораторий Республиканской клинической больницы им. ГГ.Куватова, Городской клинической больницы №21, Детской Республиканской клинической больницы и Больницы скорой медицинской помощи №22 г. Уфы в период с 1998 по 2008 год.

В качестве эталонных штаммов использовали E.gergoviae ГИСК №259 (патент РФ №2161197 от 18.11.1999), E.cloacae ГИСК №258 (патент РФ №2164942 от 13.03.2000) и E.agglomerans ГИСК №257 (патент РФ №2162485 от 13.03.2000). В настоящее время Enterobacter agglomerans (Pantoea agglomerans) выделен в новый род Pantoea.

Эксперименты выполнены на 1130 беспородных белых мышах-самцах, 14 кроликах, 36 белых мышах - сосунках. Животные содержались в условиях вивария БГМУ с естественным световым режимом на стандартной диете лабораторных животных (ГОСТ Р50258-92) с соблюдением Международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых при экспериментальных исследованиях (1997), а также правил лабораторной практики при проведении доклинических исследований в РФ (ГОСТ 3 51000.3-96 и 51000.4-96). Животные (мыши и кролики) получены из питомника лабораторных животных уфимского филиала «Иммунопрепарат» ФГУП «НПО «Микроген» МЗ и СР РФ и из питомника ГОУ ВПО БГМУ Росздрава.

В соответствии с целью диссертационной работы экспериментальная часть выполнялась в 3 этапа.

На первом этапе оценивались фенотипические признаки патогенности клинических штаммов Enterobacter spp. in vitro.

Объектом изучения служили 218 клинических штаммов бактерий рода Enterobacter, выделенных из проб клинического материала, полученного от больных с желудочно-кишечными, урологическими и гнойно-воспалительными инфекциями - 132 штамма и здоровых лиц - 86 штаммов.

Биохимическую идентификацию культур осуществляли с использованием тест-систем «Enterotest» фирмы «Lachema» (Чехия) и компьютерной биохимической тест-системы типа API фирмы «BioMeruiox».

Изучение бактериальных колоний и особенностей клеточной структуры бактерий рода Enterobacter проводили с помощью оптического («Биолам», Россия) и электронного («JEM-100B», Япония) микроскопов.

Адгезивную активность изучали в реакции гемагглютинации с эритроцитами птиц (Габидуллин З.Г. и др, 1987) и 1(0) группы крови системы ABO (Брилис В.И. и др, 1986). Продукцию а-гемолизина, тиолзависимого и энтерогемолизина определяли по рекомендациям З.Г. Габидуллина (1978), Albesa J. et al. (1985) и Beutin L. et al. (1988) соответственно. Определение лецитиназной активности проводили на желточном агаре Чистовича Ю.Н. (1961), антилизоцимную активность (AJIA) определяли по методу Бухарина О.В. и др. (1984), антиинтерфероновую активность (АИА) - по методу Соколова Ю.В. (1990), антикомплементарную активность (АКА) - по методу Бухарина О.В. (2000), ДНК-азную активность - по Jeffries C.D. et al. (1957). Патогенность и вирулентность штаммов Enterobacter spp. оценивалась in vivo с определением протистоцидной активности на простейших - Paramecium caudatum (Галикеев X.JI, 1987), по способности вызывать гибель белых мышей (Войно-Ясенецкая М.К, 1957), токсигенности бактериальных культур Enterobacter spp. на моделях лигированной петли тонкого кишечника кролика, на мышах-сосунках (Gianella R. et al, 1976) и в плантарном тесте (Вартанян Ю.Н. и др, 1978).

На втором этапе изучали генотипические признаки патогенности бактерий. Для этого выделяли бактериальную ДНК лизоцимом («Serva» США) с добавлением протеиназы, плазмидную ДНК по методу Kado С.Т, Liu S.T. (1981), проводили избирательную амплификацию участков ДНК "островков патогенности" методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Для амплификации использовали специфические праймеры, подобранные на определенные участки генов для E.coli и ответственные за разные этапы взаимодействия патогена с клеткой хозяина (Мавзютов А.Р, 2001; Boyd E.F, 1998).

На третьем этапе изучали патогенетические механизмы термолабильного энтеротоксина бактерий рода Enterobacter в системе взаимодействия "патоген-хозяин" in vivo.

Модель острой энтеробактерной экспериментальной инфекции воспроизводили в 3 экспериментальных группах:

- экспериментальная 1: осуществляли внутрибрюшинным введением бульонной культуры E.cloacae, содержащей LT-энтеротоксин в дозе LDso -5 •Ю,0КОЕ/мл.

- экспериментальная 2: осуществляли внутрибрюшинным введением бульонной культуры изогенной пары E.cloacae в дозе LD50-5 -108 КОЕ/мл.

- экспериментальная 3: осуществляли внутрибрюшинным введением супернатанта бульонной культуры E.cloacae в дозе LDso-5 -Ю12КОЕ/мл.

- контрольная: введение 0,9%-й физиологический раствор NaCl.

При введении дозы LD50 развивался инфекционный процесс, сопровождающийся выраженными изменениями активности животных, массы и состояния шерстяного покрова.

Оценку всех тестируемых параметров проводили на 1-е, 3-й, 5-е и 15-е сутки.

Перитонеальные макрофаги (ПМф) мышей получали после внутрибрюшинного введения 2 мл 1 % пептонного бульона.

Селезенку после извлечения и взвешивания разрезали ножницами на несколько частей, размельчали в стеклянном гемогенизаторе Поттера и путем 23 тракций выдавливали клеточную массу в охлажденную среду 199.

Мононуклеарные клетки периферической крови выделяли на двойном градиенте плотности стерильных растворов фиколл-верографина. Плотность верхнего слоя градиента составляла 1,075-1,077, а нижнего - 1,093-1,095 (Wong L., 1975).

На третьем этапе проводили: 1)оценку способности ПМф поглощать частицы полистирольного латекса (Фрейдлин И.С. и др., 1976); 2)изучение антигенпрезентирующей и процессинговой функции перитонеальных макрофагов (Галактонов В.Г., Анфалова Т.В., 1974); 3)НСТ-тест (Маянский А.Н., Виксман М.Е., 1979); 4)изучение уровня суммарного свечения лизосом в цитоплазме ПМф (Фрейдлин И.С., 1984); 5)определение числа антителообразующих клеток (Jerne N.K., 1963); 6)определение интерлейкинов Мф и нейтрофилов воспалительного перитонеального экссудата методом ПЦР; ДНК-гибридизации с праймерами и ДНК-зондом, подобранным по Takano М. (1998); 7)исследование апоптоза клеток воспалительного перитонеального экссудата в проточном цитофлюориметре (FL3, >600 нм) по структурным изменениям ядерной ДНК клеток, окрашенных йодистым пропидием (Сибиряк С.В. и др., 2008).

Методы статистической обработки

Статистическая обработка проводилась с применением компьтерных программ BIOSTAT, STATISTICA v.5.11, Microsoft Excel v.2000.

Для анализа данных использовали методы описательной статистики и дисперсионного анализа. При сравнении 2-х групп применяли парный

критерий t Стьюдента для независимых выборок; для множественных сравнений - критерий t Стьюдента с поправкой Бонферрони, тест Ньюмена -Кейлса и метод Крускала - Уоллиса. При сравнении результатов опытов с альтернативной формой реакции использовался точный критерий Фишера для четырехпольных таблиц. Для сравнения категориальных переменных проводился анализ таблиц сопряженности с использованием критерия

Для оценки степени (доли) влияния фактора проводился одно- и двухфакторный дисперсионный анализ, где были рассчитаны коэффициенты (т}2) и уровень их статистической значимости. Отличия считали статистически значимыми при р<0,05 (Ашмарин И.П., 1962; Реброва О.Ю., 2002; Зайцев В.М. и др., 2006).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исследование проб клинического материала, полученного от больных с инфекционными процессами различной локализации, показали, что наиболее часто штаммы Enterobacter spp. выделяются при желудочно-кишечных инфекциях - 49 шт. (37%) (рис. 1).

□ желудочно-кишечные инфекции 0 урологические инфекции 88 гнойно-восналительные процессы

Рис.1. Распределение штаммов Enterobacter spp. по источникам выделения (%)

По видовому составу из 218 клинических штаммов Enterobacter spp. 63 шт. (28,9%) относились к E.cloacae, 59 шт. (27,1%) - E.aerogenes, 52 шт. (23,9%) -E.gergoviae, 39 шт. (17,8%) - E.sakazakii и 5 шт. (2,3%) - Е. agglomerans.

Среди бактерий рода Enterobacter подавляющее большинство культур (86,2%) составляли прототрофы, а 13,8% - ауксотрофы. При сравнительном анализе частоты встречаемости прототрофов в зависимости от источника выделения было установлено, что при желудочно-кишечных инфекциях прототрофы обнаруживаются в 87,7% случаев против 91,3% контроля (^=0,62;

р=0,365), при инфекциях мочевыделительной системы - в 81,9% против 91,3% контроля (х^=0,08; р=0,78) и при гнойно-воспалительных процессах - в 82,1% случаев против 83,3% контроля (X =0,001; р=0,996)

Полученные результаты свидетельствуют о высокой экологической пластичности указанных бактерий, что позволяет адаптироваться им в различных полостях организма хозяина.

Электронно-микроскопические исследования показали, что колонии Enterobacter spp. способны к клеточной специализации и многоклеточной организации. У бактерий хорошо заметны различия между вегетативными клетками, образующими центр колонии и имеющими размеры длиной 1,9±0,59 мкм и шириной 0,7±0,03 мкм, и локализованными на периферии колонии высокоподвижными длинными клетками - "швермерами" (бродягами), имеющими избыточное количество жгутиков, среднее число которых колеблется от 7 до 60.

Электронограмма отпечатков колоний Enterobacter spp. убедительно показала наличие между клетками контактов двух типов: плотное слипание клеток между собой и контакты "конец в конец" (рис.2а).

Рис.2. Электронограмма снимков колоний бактерий Enterobacter spp.: а) 1 - плотное слипание клеток между собой - "Байеровские зоны" (ув. х 10000); 2 - контакты "конец в конец"; б) клетки, формирующие "швермеры" (ув.х 10000); в)внутриплазматические мостики и перемычки (ув. х20000)

По данным Bayer М.Е. (1975), через липидные слои мембран проходят соприкасающиеся белковые структуры, часто называемые "Байеровскими зонами" (рис.26). В результате соединения двух таких белковых структур образуется непрерывный водный канал, связывающий цитозоли двух взаимодействующих клеток. Это своего рода аналог примитивной "циркуляторной системы", доставляющей питательные субстраты и убирающей продукты метаболизма (Costerton J.W. et al, 1995).

В колониях бактерий имеются перемычки, внутриплазматические мостики, поры и каналы (рис.2в), а также более специализированные структуры ("газовые баллоны"), окруженные своеобразной "мембраной" и содержащие внеклеточные гемопротеины. Предположительно, такие структуры способствуют транспорту Ог к клеткам в колониях (агрегатах) и являются аналогами дыхательной системы органов (Дуда В.И. и др., 1995).

В настоящее время сформировалась тенденция рассматривать межклеточные коммуникации у микроорганизмов с позиций кворума клеток в системе (Бухарин О.В. и др., 2005; Allen K.P. et al., 2006; Towsend S.et al., 2006). Существующие сложные системы межклеточных контактов, способствуют распространению сигнальных молекул в популяции, особенно если речь идёт о недиффундирующих в среде факторах "коммуникации" (Crane J.K. et al., 1999). Вероятно, в эффектах кворума принимают участие все три канала коммуникации (химический, механический, опосредованный физическими полями), но наиболее изучена химическая сигнальная система, в которой внеклеточная концентрация ауторегуляторов отражает плотность микробных популяций. Например, показана способность штаммов E.sakazakii синтезировать сигнальные молекулы "чувства кворума" (quorum sensing), регулирующие экспрессию факторов патогенности. К ним относят молекулы N-гексаноил-Ь-гомосеринлактонов двух типов, выявленные методом тонкослойной хроматографии (Lehner A. et al., 2005; Gunduz G.T., Tuncel G. , 2006).

Наличие определенных структур на внешней поверхности бактериальной клетки определяет их адгезивность к чувствительным клеткам хозяина, и обеспечивает быструю колонизацию самых разнообразных поверхностей, в том числе мембран клеток. Их фенотипическая экспрессия строго коррелирует с образованием пилей разных типов и обусловливает РГА (Old D.C. et al., 1983; 1984; Jean-Philippe M. et al., 2006).

Анализ результатов показал, что из 218 клинических штаммов Enterobacter spp., 141 (64,7%) являются маннозочувствительными и 77 (35,3%) -маннозорезистентными.

При сравнительном анализе маннозорезистентных и маннозочувствительных клинических штаммов Enterobacter spp. в зависимости от источника выделения чаще обнаруживались маннозочувствительные штаммы Enterobacter spp., выделенные при гнойно-воспалительных процессах (87,2% против 29,2% в контроле; х*= 19,53; р=0,001).

В следующей серии опытов мы провели оценку адгезивной активности -средний показатель адгезивности (СПА) штаммов Enterobacter spp. в реакции

гемагглютинации с формалинизированными эритроцитами I (0) группы крови системы АВО.

Результаты исследования показали, что из 218 клинических штаммов Enterobacter spp. 132 (60,6%) обладали адгезивной активностью.

У штаммов Enterobacter spp., выделенных от больных с желудочно-кишечными инфекциями, адгезивные свойства встречались чаще и были выражены сильнее (рис.3).

высокий СПА

средний СПА

низкий СПА

SU-

отсутствует

0 Больные с желудочно-кишечными инфекциями □ Контрольная группа

Рис.3. Распределение показателей адгезивности клинических штаммов Enterobacter spp., выделенных от больных с желудочно-кишечными

инфекциями, и в контрольной группе (%) Результаты дисперсионного анализа показали, что коэффициент влияния экологического фактора на адгезивные свойства бактерий рода Enterobacter spp., выделенных при желудочно-кишечных инфекциями, составил 7)2=14,9% (F=22,9; р<0,01). Этому способствует наличие развитого аппарата адгезии, обеспечивающего способность бактерий выдерживать воздействие перистальтической волны или тока мочи (Theander T.G. et al., 1998).

Наименьшей экологической зависимостью обладали культуры Enterobacter spp., изолированные от больных с урологическими инфекциями (77 =9,1%; F=9,3; р<0,05), а у штаммов Enterobacter spp., выделенных при гнойно-воспалительных процессах, коэффициент влияния экологического фактора составил rj2= 14% (F=14,7; р<0,05).

Способность к адгезии, зависящей от условий экониш, позволяет расценивать адгезивность, как существенный детерминант, необходимый возбудителю для быстрого размножения и колонизации. Способность к адгезии обеспечивает выживаемость бактерий на разных этапах инфекционного процесса, особенно в начальной его фазе (Theander T.G. et al., 1998).

Изучение ультраструктуры внешней поверхности бактериальной клетки высокоадгезивных штаммов Enterobacter spp. показало наличие ресничек длиной 297,8±30,57 нм и шириной 4,9±0,11 нм.

Таким • образом, адгезия бактерий рода Enterobacter spp. обусловлена наличием фимбриальных структур, с помощью которых происходит специфическое взаимодействие микроба с определенными рецепторами клеток хозяина.

В целях самосохранения бактериальные клетки обладают защитными механизмами дистанционного действия, которые благоприятствуют их выживанию. В этом отношении были изучены фенотипические признаки способности инактивировать лизоцим, лейкоцитарный интерферон и комплемент.

Фенотипический признак инактивации лизоцима был обнаружен у 87 (40%) клинических штаммов Enterobacter spp.

Штаммы Enterobacter spp. с АЛА были выделены преимущественно от больных с желудочно-кишечными инфекциями - 33 (67,4%) против 3 (8,1%) контроля (^=12,33; р=0,001).

При этом результат дисперсионного анализа показал, что коэффициент влияния экологического фактора на АЛА штаммов Enterobacter spp., выделенных при желудочно-кишечных инфекциях, был слабым и составил ?/2=0,6% (F=3,5; р>0,05), а для штаммов Enterobacter spp., изолированных при гнойно-воспалительных процессах и урологических инфекциях, был г)2=24,6% (F=43,l; р<0,001) и r)2=4,4% (F=7,5; р<0,05) соответственно. Таким образом, экологический фактор существенное влияние оказывает на АЛА Enterobacter spp., изолированных при гнойно-воспалительных процессах.

АИА обладали 56 (25,7%) клинических штаммов Enterobacter spp.

Наибольшую способность инактивировать интерферон проявляли штаммы Enterobacter spp., выделенные от больных с желудочно-кишечными инфекциями, - 22 (44,6%) против 3 (8,1%) контроля (^=6,79; р=0,009) и с гнойно-воспалительными процессами - 22 (56,4%) против 4 (16,7%) (X*=3,4; р=0,065). При этом в большей зависимости от экологических условий по указанному признаку находились штаммы Enterobacter spp., изолированные при гнойно-воспалительных процессах (г?2=13,5%; F=15,3; р<0,001), а в меньшей - штаммы Enterobacter spp., выделенные при желудочно-кишечных инфекциях (J?2=5,2%; F=12,8; р<0,05).

АКА была определена у 65 (29,8%) культур Enterobacter spp. Распространенность и экспрессия АКА варьировали. Наибольшей активностью обладали штаммы Enterobacter spp, выделенные при желудочно-кишечных инфекциях, - 38 (77,6%) против 5 (13,5%) контроля (^=11,48; р=0,001). Значения признака распределились следующим образом: штаммы Enterobacter spp. с высокой активностью составили 15 (30,6%) против 0 контроля, со средней активностью - 16 (32,7%) против 0 контроля, с низкой активностью - 7 (14,3%)

против 5 (13,5%) контролен (^=0,05; р=0,82), не активные - 11 (22,4%) против 32 (86,5%) контролей (^=10,1; р=0,001).

При этом коэффициент влияния экологического фактора на АКА культур Enterobacter spp., выделенных от больных с желудочно-кишечными инфекциями, составил ))2=20% (F=33; р<0,001).

Колонизация эпителиальных поверхностей бактериальными клетками параллельно сопровождается секрецией гемолизинов. Среди них наиболее известны а-гемолизин, тиолзависимый гемолизин и энтерогемолизин.

Из 218 клинических штаммов Enterobacter spp. 35 (16,1%) продуцировали а-гемолизин, 76 (34,9%) - тиолзависимый гемолизин и 20 (9,2%) -энтерогемолизин.

В зависимости от источника выделения штаммов Enterobacter spp. частота встречаемости а-гемолитической активности была различной и колебалась в широких пределах. Штаммы Enterobacter spp. с а-гемолитической активностью наиболее часто выделялись от больных с желудочно-кишечными инфекциями и составили 12 (24,5%) при 4 (10,8%) в контроле (р>0,11).

По степени активности преобладали штаммы с высокой активностью - 6 (12,3%) при 0 контроля. В контрольной группе обнаруживались штаммы Enterobacter spp. с низкой активностью - 4 (10,8%) и неактивные штаммы - 33

Рис.4. Показатели а-гемолитической активности штаммов Enterobacter spp, выделенных от больных с желудочно-кишечными инфекциями, и в контрольной группе (%): 1 - отсутствует, 2 - низкая активность, 3 - средняя активность и 4 - высокая активность

Среди штаммов Enterobacter spp, продуцирующих тиолзависимый гемолизин, преобладали культуры, изолированные при желудочно-кишечных

(89,2%).

Результаты представлены на рис.4.

Больные с желудочио -кишечными инфекциями

Контрольная группа

инфекциях, и составили 30 (61,3%) против 4 (10,8%) контроля (^=9,24; р=0,002). При этом штаммов с высокой активностью было 7 (14,3%), со средней - 11 (22,5%) и с низкой - 12 (25,5%), неактивные составили 19 (38,8%) против 37 (100%) контроля.

Следует отметить, что штаммы Enterobacter spp. с энтерогемолитической активностью были выделены только при желудочно-кишечных инфекциях. Результаты согласуются с данными Beutin I. et al. (1988).

Проведенный сравнительный анализ гемолитической активности Enterobacter spp. выявил их своеобразие, по всей видимости, отражающее результат приспособления бактериальных популяций к специфическим условиям среды экониш.

Итоги дисперсионного анализа показали, что коэффициент влияния экологического фактора на тиолзависимую активность Enterobacter spp. был выше, чем на а- и тиолзависимую гемолитическую активности.

Данные влияния экологического фактора на тиолзависимую активность Enterobacter spp. представлены в таблице 1.

Таблица 1

Сила экологического влияния на тиолзависимую гемолитическую активность штаммов Enterobacter spp.

Нозология Сила влияния фактора, г,2 (%) F Р

Желудочно-кишечные инфекции 16,5 35,5 р<0,001

Урологические инфекции 5,1 8,1 р<0,001

Гнойно-воспалительные процессы 11,4 13,8 р<0,001

Изучение лецитиназной и ДНК-азной активностей Enterobacter spp. показали, что 59 (27,1%) и 22 (10,1%) штаммов, соответственно, обладают указанными свойствами.

Наиболее высокими значениями ДНК-азной активности характеризовались штаммы Enterobacter spp., изолированные от больных с желудочно-кишечными инфекциями. При этом высокая активность отмечалась у 13 (26,5%) штаммов против 0 контроля, средняя - у 10 (20,4%) против 1 (2,7%) контроля (р=0,0171), низкая - у 7 (14,3%) против 3 (8,1%) контроля (р=0,377) и неактивными были - 19 (38,8%) против 33 (89,2%) (^=4,63; р<0,001). Полученные результаты согласуются с данными Поликарпова H.A. и др. (1990).

Результаты дисперсионного анализа показали, что коэффициент влияния экологического фактора на ДНК-азную активность штаммов Enterobacter spp., выделенных от больных с инфекциями желудочно-кишечного тракта, составил 772=1 1,8% (F=19,5; р<0,001), а штаммов Enterobacter spp., изолированных при

гнойно-воспалительных процессах, - r]2=2,5% (F=5; р<0,05). Существенно ниже оказался коэффициент влияния экологического фактора на ДНК-азную активность штаммов Enterobacter spp., изолированных при урологических инфекциях (т}2=0,6%; F=l,2; р>0,05).

В зависимости от источника выделения, лецитиназная активность была выше среди культур Enterobacter spp., выделенных от больных с гнойно-воспалительными процессами. При этом культуры с высокой активностью составили 4 (10,3%) против 0 контроля, средней активностью - 3 (7,7%) против 0 контроля, низкой активностью - 2 (5,1%) против 0 контроля, неактивные - 30 (76,9%) против 24 (100%) контроля (р=0,013).

Изучение силы экологического влияния на лецитиназную активность Enterobacter spp. показало, что более подверженными экологической детерминации оказались штаммы Enterobacter spp., выделенные при инфекциях желудочно-кишечного тракта (jj2=22%, F=24,8; р<0,001). Это, возможно, отражает результат приспособления бактериальных популяций к специфическим условиям среды экониш.

Способность бактерий продуцировать токсин тесным образом связана с патогенетической значимостью возбудителя при развитии ряда инфекционных заболеваний. В литературе имеются сообщения об энтеротоксигенной способности Enterobacter spp. (Мамоткулов И.Х. и др., 1997), при этом исследования, направленные на выявление способности Enterobacter spp. вырабатывать токсины, немногочисленны и противоречивы (Баркус М.М. и др., 1986). Рутинным подходом к определению токсигенности и вирулентности служат биологические пробы, которые, однако, имеют ряд недостатков, связанных с необходимостью использования лабораторных животных, трудоемкостью, но, вместе с тем, достаточно полно отражают этиологическую значимость предполагаемого возбудителя. В связи с этим было проведено тестирование клинических штаммов Enterobacter spp. с использованием модели "плантарного теста", "интраназального инфицирования" беспородных белых мышей и определение протистоцидной активности на токсигенность и вирулентность.

В результате постановки теста "отек лап" у мышей лишь 17 (7,8%) исследованных культур Enterobacter spp. давали положительный результат. Наибольшей активностью в этом тесте характеризовались 9 (18,4%) культур, выделенных от больных с желудочно-кишечными инфекциями. Показатели у культур Enterobacter spp., выделенных при урологических инфекциях, были сопоставимы с результатами культур, изолированных при гнойно-воспалительных процессах, соответственно 4 (9,1%) и 4 (10,3%) (^=1,607;

р=0,446). Ни один из штаммов Enterobacter spp,, изолированных от здоровых людей, не вызывал появления визуально определяемой отечности лап.

Полученные результаты свидетельствуют о способности клинических штаммов Enterobacter spp. синтезировать термолабильное токсическое вещество, обусловливающее развитие "отека лапки" у белых мышей, что совпадает с вирулентностью, поэтому плантарный тест может быть использован в качестве биологической модели для выявления энтеротоксигенности бактерий рода Enterobacter.

Среди клинических штаммов Enterobacter spp, давших "отек лапки", центрифугат 3 штаммов оказался способным давать отек лапки мышей с разницей к интактной лапке до 80 мг. На основании полученных результатов 3 штамма Enterobacter spp. были депонированы в ФГУН ГНИИСК им. Л.А.Тарасевича, как продуценты LT-энтеротоксина (патент РФ №2161197 от 18.11.1999, патент РФ №2164942 от 13.03.2000, патент РФ №2162485 от 13.03.2000).

В следующей серии опытов для подтверждения способности клинических штаммов Enterobacter spp. продуцировать LT-энтеротоксин мы использовали метод "лигированная петля тонкого кишечника кролика". Результат опыта определялся по способности центрифугата 20-часовых бульонных культур Enterobacter spp. при введении в просвет тонкого кишечника кролика вызывать накопление экссудата, с последующим измерением отношения V/L (объема экссудата к длине лигированного участка). За положительную реакцию принимали показатель V/L=l,0-1,2.

Было выявлено 20 (9,2%) культур Enterobacter spp, вызывающих накопление экссудата в просвете тонкого кишечника кролика. При этом наибольшей активностью обладали штаммы Enterobacter spp, выделенные от больных с желудочно-кишечными инфекциями - 9 (18,4%). Так, у 1 (8,2%) штамма Enterobacter spp. против 0 в контроле V/L = 1,1-1,3, у 5 (10,2%) штаммов против 0 контроля V/L = 1,2, у 3 (6,1%) штаммов против 0 в контроле V/L = 1,0 и неактивные - 37 (75,5%) штаммов против 37 (100%) в контроле.

Среди штаммов Enterobacter spp, выделенных при гнойно-воспалительных процессах, преобладали штаммы с VfL = 1,2. Так, 1 (2,7%) штамм против 0 контроля обладал V/L = 1,1-1,3; 3 (7,7%) штамма против 0 в контроле -V/L = 1,2; 2 (5,1%) штамма против 0 контроля -V/L = 1,0 и неактивные 33 (84,6%) штамма против 24 (100%) в контроле (р=0,151).

Штаммы Enterobacter spp, изолированные от больных с урологическими инфекциями, обладали наименьшей активностью. Так, 3 (6,8%) штамма против 0 контроля'вызывали V/L = 1,2; 2 (4,6%) штамма против 0 контроля вызывали V/L = 1,0 и неактивными были 39 (88,6%) штаммов против 25 (100%) в

контроле (р=0,074). Как показали результаты, ни один из штаммов, выделенных от здоровых людей, указанным свойством не обладал.

Сила влияния экологического фактора на показатели V/L была низкой и не имела статистически значимых различий.

На легочной модели 54 (24,8%) клинических штамма Enterobacter spp. вызывали гибель экспериментальных мышей.

Патогенный потенциал был наиболее выражен среди культур, выделенных при желудочно-кишечных инфекциях, поскольку больший процент указанных культур - 4 (8,2%) вызывал гибель животных в ранние сроки и 15 (30,8%) штаммов обусловливали летальную инфекцию. Среди культур Enterobacter spp., выделенных при урологических инфекциях, 2 (4,6%) штамма вызывали раннюю гибель животных и 11 (25%) - летальную инфекцию. Штаммы Enterobacter spp., выделенные при гнойно-воспалительных процессах, раннюю гибель животных обусловливали в 3-х (7,7%) случаях, а летальную инфекцию - в 4-х (10,2%). При этом показатели гибели в ранние сроки и летальной инфекции относительно штаммов Enterobacter spp., выделенных при инфекциях желудочно-кишечного тракта, не имели статистически значимых различий и составили соответственно х2=0,544; р=0,762 и ^=5,318; р=0,070.

При определении силы влияния экологического фактора на показатели интраназального теста обнаружено, что штаммы Enterobacter spp., выделенные от больных с желудочно-кишечными инфекциями и гнойно-воспалительными процессами, находились в одинаковой зависимости от условий обитания, где сила влияния экологического фактора составила соответственно rj2=8,6% (F=16,8; р<0,001) и ?72=8,6% (F=13,5; р<0,001).

Проведенные нами исследования на различных биологических моделях экспериментальной инфекции показали, что интраназальное заражение и плантарный тест требуют значительного количества экспериментальных животных, поэтому не всегда выполнимы в условиях бактериологической лаборатории.

Метод, предложенный для выявления степени патогенности дизентерийных палочек на модели P.caudatum, вполне применим и для выявления патогенности УПЭ. Это связанно с тем, что P.caudatum относятся к эукариотическим клеткам, и могут быть чувствительны к действию токсических субстанций бактерий.

На модели P.caudatum был выявлен 61 (27,9%) клинический штамм Enterobacter spp., вызывающий гибель простейших.

Наибольшей активностью в этом тесте характеризовались штаммы Enterobacter spp., выделенные при желудочно-кишечных инфекциях. Так, 1 (2,1%) штамм Enterobacter spp. против 0 контроля вызывал гибель P.caudatum в

течение 0,5-14 мин, 6 (12,3%) штаммов против 0 контроля - в течение 1,5-3,4 мин, 16 (32,7%) штаммов против 3 (8,1%) в контроле - в течение 3,5-5,5 мин (^=3,80; р=0,008), неактивными были 24 (52,9%) штамма против 34 (91,9%) контролен (р<0,001). Среди штаммов Enterobacter spp., выделенных от больных с урологическими инфекциями, в течение 0,5-1,4 мин угнетали жизнедеятельность P.caudatum 4 (9,1%) штамма против 0 контроля, в течение 1,5-3,4 мин - 3 (6,8%) штамма против 0 контроля, в течение 3,5-5,5 мин - 7 (15,9%) штаммов против 6 (24%) контроля 0^0,256; р=0,613), неактивными были 30 (68,2%) штаммов против 19 (76%) в контроле 0^=0,17; р=0,680). Штаммы Enterobacter spp., изолированные от больных с гнойно-воспалительными процессами, характеризовались следующими значениями: 3 (7,7%) штамма против 0 контроля инактивировали Р. caudatum в течение 0,5-1,4 мин, 4 (10,3%) штамма против 0 контроля - в течение 1,5-3,4 мин, 8 (20,5%) штаммов против 3 (12,5%) в контроле в течение 3,5-5,5 мин (р=0,193), неактивными были 24 (61,5%) штамма против 34 (87,5%) в контроле (р=0,003).

Гибель P.caudatum в ранние сроки вызывали культуры Enterobacter spp., одновременно показавшие высокую патогенность при интраназальном инфицировании мышей, а также продуцировавшие термолабильные токсические вещества, выявляемые в тесте "отек лап" на мышах.

Итоги дисперсионного анализа показали, что экологический фактор оказывал крайне слабое влияние на протистоцидный тест. Так, коэффициент влияния экологического фактора на ' протистоцидный тест штаммов Enterobacter spp., изолированных от больных с желудочно-кишечными инфекциями, составил т)2=0,2% (F=0,8; р<0,05), выделенных от больных с инфекциями мочевыделительного тракта, - т?2=0,8% (F=l,2; р<0,05), изолированных при гнойно-воспалительных процессах, - Tj2=2,9% (F=4,l; р<0,05).

Результаты исследований дают основание полагать, что время, в течение которого происходит гибель P.caudatum, зависит от биологических свойств клинических штаммов Enterobacter spp., в частности, от их способности продуцировать токсические вещества, наличие которых у бактерий сочетается с их способностью вызывать гибель интраназально зараженных мышей. Протистоцидный тест на P.caudatum может быть рекомендован для выявления потенциально патогенных клинических штаммов Enterobacter spp.

Таким образом, изолируемые при инфекционных процессах различной локализации штаммы Enterobacter spp. характеризуются свойствами, определяющими их потенциальную способность выживать в условиях внутренней среды макроорганизма благодаря возможности противостоять факторам врожденного иммунитета.

Известно, что фенотипические проявления экспрессируемого фактора патогенности заложены в геноме бактериальной клетки. При этом гены, определяющие патогенность, могут находиться в составе как хромосомы, так и плазмиды, а также могут быть фланкированы в состав IS-последовательносгей и транспозонов.

В связи с этим перспективным является исследование плазмидного профиля ДНК для характеристики клинических штаммов бактерий рода Enterobacter. Наличие в бактериальной клетке плазмидной ДНК дает микроорганизму широкие адаптационные возможности в различных экологических нишах. Планируя проведение соответствующих опытов, мы основывались на том, что плазмиды различаются на: кодирующие устойчивость к лекарственным препаратам - R-плазмиды; отвечающие за фертильность бактериальной клетки - F-плазмиды, а также плазмиды бактериоциногении и патогенности. Вирулентные свойства энтеробактерий, чаще всего, контролируются плазмидой патогенности.

Анализ полученных данных позволил отобрать 132 клинических штаммов Enterobacter spp, обладающих Д-маннозочувствительной и Д-маннозорезистентной гемагглютинирующей активностью. Из 132 культур энтеробактеров 45 штаммов несли плазмиды, что составило 34,1%. При сравнительном анализе частоты встречаемости плазмидонесущих штаммов было установлено, что в 19 (42,2%) случаях относительно контроля плазмидонесущие штаммы были выделены от больных с желудочно-кишечными (х2=4,95; р=0,03), в 16 (35,6%) - урологическими инфекциями (Х2=3,46;р=0,06), в 7 (15,6%) - гнойно-воспалительными процессами (х^О.М; р=0,75) и 3 (6,6%) - здоровых людей.

Молекулярные массы плазмид значительно различались. Так, электрофоретически было установлено, что бактерии рода Enterobacter, вне зависимости от источника выделения, могут нести плазмиды с мол.м. 120; 60; 38; 3,2; 1,4 МД и другие. При изучении плазмидного профиля штаммов с высокой адгезивностью было установлено, что они вообще не имели внехромосомной ДНК.

В следующей серии опытов у штаммов с адгезивной активностью провели элиминирование плазмид в бульоне Хоттингера, содержащем 5% додецилсульфата натрия. Тестирование изогенных пар на их способность давать MS- и MR-реакции гемагглютинации с эритроцитами цыпленка показало, что штаммы в одинаковой степени агглютинируют эритроциты. Результаты исследований дают основание полагать, что генетической детерминантой, контролирующей MS и MR реакцию гемагглютинации с эритроцитами

цыпленка у Enterobacter spp., являются, возможно, структурные элементы хромосомной природы.

Известно, что продукция LT-энтеротоксина у E.coli детерминируется Ent плазмидами с мол.м. 55 - 61 МД (Lee P.K. et al.,1991; Qadri F. et al., 2005). В то же время энтеротоксин Vibrio cholerae является иммунологически родственным LT-энтеротоксину E.coli и C.freundii, контролируется структурными элементами хромосомной природы (Lesseva M.I. et al., 1995).

Из 17 культур энтеробактеров, продуцирующих LT-энтеротоксин, 13 штаммов оказались плазмидонесущими. В 8 случаях плазмидонесущие штаммы были выделены от больных с желудочно-кишечными, в 2 - урологическими инфекциями и в 3 - гнойно-воспалительными процессами. Среди штаммов Enterobacter spp., выделенных от здоровых людей, LT-энтеротоксин продуцирующих штаммов не оказалось.

В связи с этим было проведено электоофоретическое исследование штаммов Enterobacter spp., продуцирующих LT-энтеротоксин, на предмет обнаружения внехромосомных факторов наследственности. Для этого были выделены 2 группы штаммов: первую группу составили штаммы Enterobacter spp., суперпродуценты LT-энтеротоксина, способные вызывать "отек лап" мышей с разницей между контрольной лапкой 95 мг и более, вторую -культуры, не продуцирующие LT-энтеротоксин и дающие в опытах "отек лапки" разницу не более 35 мг. Все изученные 12 штаммов первой группы являлись носителями плазмиды мол.м. 60 МД. Среди 3 штаммов второй группы 2 культуры были бесплазмидными и 1 штамм нес плазмиды с мол.м. 120; 38; 3,2 МД.

Элиминирование плазмид у штаммов, продуцирующих LT-энтеротоксин, показало, что бесплазмидные изогенные пары токсигенных штаммов не вызывали гибель P.caudatum.

Из 10 отобранных клонов каждого штамма Enterobacter spp., утративших свойство продуцировать LT-энтеротоксин, у двух на фореграмме просматривалась плазмида мол.м. 60 МД, остальные клоны оказались не несущими данной плазмиды и в биологических пробах не обладали активностью.

Опыты по фенотипическому определению гемолитической активности Enterobacter spp. указывают на то, что гемолизины являются одним из ведущих факторов патогенности клинических штаммов Enterobacter spp. В связи с этим было проведено электрофоретическое исследование гемолитически активных штаммов Enterobacter spp. для обнаружения природы детерминант.

Из 35' культур Enterobacter spp., способных гемолизировать эритроциты, 21 (60%) несли плазмиду мол.м. 120 МД. В 8 случаях плазмидонесущие

штаммы были выделены от больных с желудочно-кишечными, в 5 -урологическими инфекциями, в 6 - гнойно-воспалительными процессами и в 2 -здоровых людей. Различия в частоте обнаружения указанных плазмид относительно контроля носили статистически не значимый характер (р>0,05).

Полученные результаты, таким образом, говорили в пользу плазмидной природы детерминирования гемолитической активности штаммов Enterobacter spp. Существование бесплазмидных вариантов гемолитических энтеробактеров не исключало этого предположения, так как при этом на результатах могло сказаться небольшое число копий этих плазмид, которые не обнаруживались исследуемым методом.

Для проверки этой рабочей гипотезы путем обработки акридиновым оранжевым были получены 2 генетически родственные изогенные пары штаммов Enterobacter spp., различающихся по наличию плазмиды с молекулярной массой 120 МД. При этом клоны 2 штаммов не продуцировали а-гемолизин, а клоны 2 штаммов - продолжали его продуцировать.

Эти данные, по нашему мнению, свидетельствуют в пользу хромосомной природы детерминирования указанного признака. Установление этого факта представляется существенным и, по нашему мнению, заслуживает самостоятельного изучения.

Проведенные нами опыты по изучению профиля плазмидной ДНК, элиминации и конъюгативной передачи плазмид не привели к выявлению новых плазмид, контролирующих синтез энтерогемолизина, ДНК-азную, лецитиназную, антилизоцимную и антиинтерфероновую активности клинических штаммов Enterobacter spp.

Следует отметить, что сила влияния экологического фактора во всех исследованиях была низкой и варьировала от 1 до 2,5 % (р>0,05).

Таким образом, результаты изучения плазмидного профиля дают основание полагать, что генетической детерминантой адгезивной активности бактерий рода Enterobacter, возможно, являются структурные элементы хромосомной природы, продукции LT-энтеротоксина - плазмида мол.м. 60 МД, а- гемолизина -120 МД.

Наличие у ряда клинических штаммов Enterobacter spp. генетических детерминант, контролирующих факторы патогенности, свидетельствует о том, что среди культур Enterobacter spp. встречаются штаммы, которые следует рассматривать не как условно-патогенные, а как конкретные патовары бактерий рода Enterobacter.

Учитывая, что штаммы легко могут терять плазмиду с утратой, соответственно, фенотипического признака, мы провели серию опытов по их конъюгативной передаче от доноров реципиентам. Причем реципиентами были

представители как одного рода, так и других, в том числе был использован

универсальный реципиент E.coli K^G^Ri!. В качестве доноров служили штаммы Enterobacter spp, имеющие плазмиды мол.м. 60 и 120 МД с выраженными фенотипическими признаками синтезировать высокоактивный LT-энтеротоксин и а-гемолизин, соответственно. Опыты по скрещиванию родственных и неродственных представителей Enterobacteriaceae показали, что tox плазмида Enterobacter spp. может конъюгативно передаваться внутри рода Enterobacter, что объясняет трансформацию нетоксигенного реципиента в токсигенный патовар. Тогда как опыты по конъюгативной передаче tox' плазмиды между неродственными представителями Enterobacteriaceae не увенчались успехом. Hly* плазмида конъюгативно не перемещалась между штаммами, и это, на наш взгляд, может быть обусловлено большой мол.м. плазмиды (120 МД) или сложностью создания соответствующих условий для "интимных" процессов, либо же она является неконъюгативной.

Среди методов диагностики инфекционных заболеваний в последнее время все шире используется детекция генетических маркеров, ассоциируемых с патогенностью, к которым, в частности, относятся "островки патогенности".

В этой связи нами проведена амплификация с бактериальной ДНК Enterobacter spp. с праймерами к генам "островков патогенности" E.coli, контролирующими их способность к образованию фимбрий типа S (sfaA, sfaG), типа Р (рарС, рарАН), капсулообразованию (kpsMT), продукции гемолизинов (hlyA, hlyB) и термолабильного энтеротоксйна (Lth).

Удалось установить факт наличия у протестированных микроорганизмов фрагментов ДНК, специфичных известным генам кластеров патогенности E.coli. В частности, из 34 исследованных штаммов образование искомых ампликонов при использовании специфических праймеров к hly А имело место в 7 случаях (20,5%), hly В - в 8 (23,5%), рар АН - в 4 (11,8%), рар С - в 5 (14,7%) случаях, sfa G и sfa А обнаружены у 2 (5,9%) и 8 (23,6%) штаммов соответственно (рис.5). Фрагменты, специфичные генам kps МТ и Lth, обнаружены не были.

2 0,5 23,5 I я 23,6

14.7

i i

1 ц

1—II,

hlyA hlyB рарАН рарС sfaA sfaG

Рис.5. Частота обнаружения (%) фрагментов ДНК генов "островков патогенности" у клинических штаммов Enterobacter spp.

Результаты исследования показали, что количество обнаруженных генов у штаммов, выделенных при инфекциях желудочно-кишечного тракта, относительно здоровых людей составляет - 9 (^=4,38; р=0,04), у штаммов, изолированных при инфекциях мочевыделительного тракта, - 7 (х2=2,92; р=0,09), а у штаммов, выделенных при гнойно-воспалительных процессах, - 10 (Х2=7,64; р=0,01), т.е. имеются различия по источникам выделения в генах "островков патогенности".

Среди штаммов Enterobacter spp., изолированных от здоровых людей, встречались гены, специфичные только hlyA, hlyB, рарС и sfaA.

Таким образом, среди штаммов Enterobacter spp., вне зависимости от источника их выделения, обнаруживаются гены hlyA, hlyB, рарАН, рарС, sfaG и sfaA. Полученные результаты исследования дают основание полагать, что штаммы, относящиеся к разным видам и даже родам, содержат гены, кодирующие их токсигенность и вирулентность, фланкированные в состав кластеров "островков патогенности". Это указывает на универсальный тип кодирования факторов патогенности и, соответственно, на схожий механизм развития патогенеза инфекционного процесса, обусловленного разными патоварами УПЭ.

Резюмируя выше изложенное, можно констатировать, что фенотипические признаки ряда факторов патогенности и наличие генетических детерминант, входящих в состав общих "островков патогенности", позволяет клинические штаммы Enterobacter spp. рассматривать как конкретные патовары. Их богатый патогенный потенциал дает возможность Enterobacter spp. выживать в экологической нише, прикрепляться и колонизировать эпителиальные поверхности, способствуя противостоянию механизмам поддержания гомеостаза хозяина.

Изучение фенотипических проявлений факторов патогенности, экспрессируемых генетическими детерминантами хромосомной и нехромосомной природы, конечно, не исчерпывает всех аспектов, связанных с механизмами их патогенного действия, и констатирует факт только их этиологической значимости.

Как известно, возбудитель инфекционного процесса отличается значительной сложностью и неспецифичностью, что определяет многообразие клинических проявлений. Выяснение этих вопросов позволит определить наиболее уязвимые звенья иммунной системы хозяина и, возможно, связать их с локальными особенностями в цепи патогенеза заболевания и разработать наиболее рациональный этиопатогенетический принцип лечения инфекционных болезней и профилактики дизбиотических состояний, связываемых с УПЭ.

В качестве модели для изучения закономерностей функционирования системы "патоген-хозяин" мы использовали штамм Е.с1оасае ГИСК №258, депонированный нами в ФГУН ГНИИСК им. Л.А. Тарасевича, обладающий продукцией термолабильного энтеротоксина. Выбор энтеротоксигенного штамма Е.с1оасае был обусловлен тем, что в патогенезе инфекционных заболеваний, вызванных УПЭ, ведущим фактором является его токсин.

Для выявления и характеристики дифференциального действия [>Т-энтеротоксина Е.с1оасае на клетки хозяина в инфекционном процессе был использован и липополисахарид клеточной стенки, который, наряду с термолабильным энтеротоксином, является мощным, но отличным по своей антигенной структуре иммуномодулятором.

Как известно, фагоцитоз является эффективным фактором специфической защиты организма.

Поэтому нами проведены исследования фагоцитарного звена иммунитета, позволившие констатировать факт нарушения функции макрофагов, которое сопровождалось снижением активности и интенсивности фагоцитоза в экспериментальных группах.

Результаты представлены на рис. 6.

Активность фагоцитоза

1 сутки

3 сутки

■ первая группа ■третья группа

5 сутки 15 сутки

— А* -вторая группа 9 контроль

Интенсивность фагоцитоза

1 сутки

3 сутки

— *- - первая группа ° третья группа

5 сутки 15 сутки — А- - вторая группа "О контроль

Рис.6. Показатели активности (%) и интенсивности (усл.ед.) фагоцитоза перитонеальных макрофагов мышей в динамике *-данные статистически достоверны по q-кpитepию Ньюмена-Кейлса при р<0,001.

Процесс фагоцитоза сопровождается активацией лизосомальных ферментов. Результаты наших исследований показали, что в I группе мышей, зараженной бульонной культурой Е.cloacae, содержащей LT-энтеротоксин, прослеживается своеобразная динамика. Максимальная активация лизосомальных гранул происходит в 1 день, а быстрое "опустошение" ферментов лизосом - на 3 день исследования.

Результаты отражены на рис.7.

2 юоо

Б 900 800 700 ё. 600 £ 500 R 400 " 300 200 100 0 -100 -200 -300

'4*

¡N

1 сутки 3 сутки 5 сутки 15 сутки

■ первая группа

с 1000-j D 900

Й 500 400 300 200 100 0

Я -100

S -200

2 -300

■ ч \

Ч--1

1 сутки Зсутки 5сугки 15 сутки •■вторая группа

Рис.7. Лизосомальная активность перитонеальных макрофагов мышей в разные сроки исследования (усл.ед.) *-данные статистически достоверны по ц-критерию Ньюмена-Кейлса при р<0,001.

Как видно из рис. 7, термолабильный энтеротоксин Е.с1оасае уменьшает число лизосом в перитонеальных макрофагах, что приводит к снижению их переваривающей способности.

Фагоцитоз сопряжен с наработкой активных форм кислорода (АФК) с последующим внутриклеточным киллингом патогена (Тотолян A.A. и др., 2000; Долгушин И.И., Бухарин О.В., 2001; Олиферук Н.С. и др., 2005). Наиболее доступным и часто используемым подходом для оценки активности кислородзависимых систем бактерицидности фагоцитов является HCT- тест (спонтанный и индуцированный).

Так, исследование СЬ-зависимого метаболизма фагоцитов в динамике показало активацию генерации АФК в 1 день и резкое снижение количества образования супероксиданиона в последующие дни исследования, особенно в клетках мышей I и III групп.

Показатели индуцированного латексом HCT отражают резервные возможности фагоцитов к усиленной продукции АФК.

Установлено, что искусственная активация латексом приводит к снижению восстановления HCT в клетках мышей, контактировавших с LT-энтеротоксином. Учитывая полученные результаты, можем констатировать факт о предельных возможностях работы ГМФШ-клеток под действием токсина, что, по-видимому, отражает недостаточность антиоксидантной системы фагоцитов, поскольку показатели количества образования свободных радикалов без индукции были намного выше. Близкие результаты были получены в работах Олиферук Н.С. и др. (2005), Гончарук Ю.Н. и др. (2006), Сомовой Л.М. и др. (2006). Результаты отражены в таблице 2.

Таблица 2

Динамика НСТ-редуцирующей способности перитонеальных макрофагов мышей в разные сроки исследования (М±ш)

Показатели Группа животных п=10 Сроки исследования, сутки

1-е 3-й 5-е 15-е

Спонтанная НСТ-активность в% I 52,28±1,01** 51,68±1,61** 47,5б±0,95** 39,92±0,59**

II 40,76±1,13** 39,44±0,82** 35,96±0,20 37,92±0,98**

III 55,32±0,69** 30,64±1,04** 33,16±1,05** 26,32±0,49**

Контроль 36,20±0,25 36,40±0,25 35,88±0,32 33,44±1,85

Индуцированная НСТ-активность в% I 64,60±2,03** 53,76±0,78** 42,44±0,62** 45,44±0,22**

II 58,60±2,13** 52,44^0,49** 50,04±1,08 45,76±0,28**

III 46,60±0,61** 45,76±0,77** 44,36±0,61** 42,32±0,43

Контроль 53,04±0,28 41,52±1,19 49,08±1,22 40,80±0,36

Примечание. ** - данные статистически достоверны по q-критерию Ньюмена-Кейлса при р<0,05.

Таким образом, у мышей, инфицированных LT-энтеротоксином E.cloacae, нарушалась способность перитонеальных макрофагов к восстановлению HCT, что отражает дефекты кислородзависимых механизмов бактерицидное™.

Исход фагоцитарной реакции, где участвуют фагоциты и бактерийные патогены, далеко не всегда заканчивается в пользу фагоцита. В ряде ситуаций микробной клетке удается, несмотря на ее поглощение фагоцитом, избежать последующего киллинга, что связано с различными приемами, выработанными патогеном в процессе микроэволюции. Как показывают приведенные данные, важным инструментом такой защиты от фагоцитов является LT-энтеротоксин E.cloacae.

Заключительным этапом функции антигенпредставляющих клеток является представление и определение направленности иммунного ответа (Тотолян A.A. и др., 2000; Теплова С.Н. и др., 2002; Топтыгина А.П., 2008).

Исследования показали, что в селезенке I и III группы мышей выработка антителообразующих клеток (АОК) снижается, что может зависеть от подавления антигенпроцессинговой и антигенпрезентирующей функций фагоцитов на этапе фагоцитарного звена иммунитета. Различия с контролем в группе экспериментальных животных были статистически значимы (р<0,001). Результаты представлены на рис. 8.

i 200

| 150

I 100

I 50

I 0

НЕа

■и

200 5 150 \ 100 I 50 5 0

1 сутки 3 сутки 5 сутки 15 сутки □ первая группа

1 сутки 3 сутки 5 сутки 15 сутки

О третья группа

S 600

» 500

S 400

£ 300

2 200

1 100 О

г 600

5 500

г 400

f 300

г 200

; 100

! 0

tm.

Lad

1 сутки 3 сутки 5 сутки 15 сутки О вторая группа

1 сутки 3 сутки 5 сутки 15 сутки □ контроль

Рис. 8. Антигенпредставляющая функция перитонеальных макрофагов мышей в разные сроки исследования (АОК-102 на селезенку) *-данные статистически достоверны по д-критерию Ньюмена-Кейлса при р<0,001.

Данный факт послужил основанием к расшифровке механизма иммунной супрессии и проведению дальнейших опытов, характеризующих Т- и В- звено иммунитета.

Важнейшим показателем влияния стимулирующего агента на иммунную систему является пролиферативная активность лимфоцитов.

В результате проведенных исследований установлено, что LT-энтеротоксин Е.cloacae обладает трансформирующим эффектом на Т-лимфоциты мышей. Следует отметить, что спонтанная пролиферативная активность лимфоцитов несколько отличалась от стимуляции ФГА и КонА. Результаты отражены на рис. 9 и 10.

ФГА

1 сутки Зсутки 5сутки 15 сутки

О первая группа О третья группа

О вторая группа В контроль

КонА

1 сутки Зсутки

О первая группа Ртретья группа_

5 сутки 15 сутки

Я вторая группа В контроль

при

Рис. 9. Индуцированная митогенами (КонА, ФГА) пролиферативная активность Т-лимфоцитов мышей в динамике (%) ** - данные статистически достоверны по q-кpитepию Ньюмена-Кейлса р<0,05.

1 сутки Зсутки 5 сутки 15 сутки

а первая группа В третья группа

В вторая группа В контроль

Рис.10. Спонтанная пролиферативная активность Т-лимфоцитов мышей в динамике(%)

Как видно из рис. 9 и 10, ЬТ-энтеротоксин Е.с1оасае стимулирует митотическую активность Т-лимфоцитов, подтверждением чему явились показатели индекса стимуляции.

Гуморальный иммунный ответ является специфической ТЬ-2-зависимой формой реакции на внедрение чужеродных антигенов. Эффекторное звено такого отклика - это антигенспецифичные иммуноглобулины (Топтыгина А.П, 2008).

Иммунный ответ организма имеет некоторые отличия, когда в роли патогена выступают внеклеточные или внутриклеточные паразиты. Поскольку ведущая роль в антиинфекционной защите организма от внеклеточной группы паразитов преимущественно принадлежит нейтрофилам, иммуноглобулинам и комплементу, в то время как в элиминации вторых - решающую роль играют Т-лимфоциты и макрофаги, хотя механизмы межклеточных коопераций в обоих случаях тесно взаимосвязаны друг с другом.

В связи с этим нами были проведены серии опытов по определению числа антителообразующих клеток к эритроцитам барана в селезенке, характеризующих гуморальный иммунный ответ хозяина.

Результаты исследований представлены на рис.11.

Рис. 11. Динамика количества АОК-ЭБ в селезенке мышей (АОК-Ю2 на селезенку) (усл.ед.)

*-данные статистически достоверны по q-критерию Ньюмена-Кейлса при р<0,001; ** - данные статистически достоверны по q-критерию Ньюмена-Кейлса при р<0,05.

Как видно из рис.11, оценка В-звена иммунитета свидетельствует о снижении количества АОК в селезенке экспериментальных животных. Наиболее низкие показатели АОК отмечаются в I группе животных, зараженных LT-энтеротоксином E.cloacae.

Таким образом, полученные результаты позволяют сделать вывод о том, что LT-энтертоксин Е. cloacae угнетает иммунный ответ мышей на ЭБ.

Кроме микробицидной и цитотоксической функции генерация супероксиданионрадикала способствует и иммунорегуляторному действию активированных фагоцитов, в частности, секреции цитокинов. Было установлено, что супероксидный анионрадикал участвует в выработке хемотаксических пептидов и индукции синтеза IL-1-подобного фактора (Schmidt Н. et al., 2004), этому также свидетельствует большой спектр секретируемых макрофагами интерлейкинов, имеющих отношение к регуляции иммунного ответа (Дуда И.В. и др., 1978; Кетлинский С.А. и др., 1995; Карсонова М.И. и др., 2007). Функциональная активность цитокинов определяет направление дифференцировки Т-клеток в Thl/Tcl, Th2/Tc2 тип, а также определяет класс иммуноглобулинов, на продукцию которого переключаются B-клетки (Швыдченко И.Н. и др., 2005).

В связи с этим было изучено влияние LT-энтеротоксина Е. cloacae на уровень провоспалительных цитокинов (IL-6, IL-12, IFN-y, TNF-a), противовоспалительных цитокинов (TGF-ß, IL-10) и цитокинов, регулирующих специфические иммунные реакции (IL-2, IL - 4, IL -15).

Изменения реактивности внутриклеточных механизмов макрофагов перитонеального экссудата подтвердили факт нарушения секреции интерлейкинов, регулирующих в последующем каскад иммуннологических реакций. В частности, в опытах по детекции посттранскрипционной экспрессии мРНК-интерлейкинов методом ПЦР с последующей амплификацией кДНК и дот-гибридизацией синтезированных ампликонов, удалось выявить существенные нарушения экспрессии отдельных цитокинов под влиянием LT-энтеротоксина E.cloacae.

В первой серии опытов мы изучали секрецию провоспалительных цитокинов, в частности, IL-6, IL-12, IFN-y и TNF-a

Результаты экспериментов показали, что транскрипция мРНК IL-6 в клетках отмечается лишь на 3-й сутки. Так, радиографические сигналы наблюдались в клетках нейтрофилов контрольной и I группы животных, тогда как макрофаги сигнализировали их только у животных II группы.

IL-6 повышает бактерицидность нейтрофилов без достоверных изменений показателей фагоцитоза, так как действует в постактивационный период жизни гранулоцита, запуская внутриклеточные механизмы бактериолиза и продлевая жизнь гранулоцита. IL-6 в синергизме с IL-2 участвует также в активации и индукции пролиферации Т-лимфоцитов, является индуктором синтеза острофазных белков (Тотолян A.A., 2000).

В экспериментах IL-12 транскрибировался в клетках макрофагов и нейтрофилов во всех группах животных как на 1-е сутки, так и на 15-е сутки исследования.

Транскрипция TNF-a отмечалась слабо на 5-е сутки исследования, как в опытных, так и в контрольной группе животных. У нейтрофилов сигнализировала радиографическая метка в контроле, а в макрофагах - только в опытных группах животных.

Существенные изменения наблюдались в транскрипции мРНК IFN-y. Установлено, что транскрипция мРНК в нейтрофилах III группы животных происходила во все сроки исследования, но пик транскрипции мРНК приходился на 5-е сутки. В I группе животных радиометка сигнализировала только в 1-й день исследования. В остальных группах мышей радиографического сигнала не наблюдалось.

В макрофагах I группы животных экспрессия IFN-y наблюдалась на 1-е сутки опытов и указывала на раннюю, возможно, ложную стимуляцию, поскольку в последующие дни экспериментов сигнала радиографической метки не наблюдалось. В I и II группах животных интенсивность радиографического сигнала усиливалась на 3- и сутки. В контрольной группе мышей транскрипция мРНК IFN-y не обнаружена.

В следующей серии экспериментов была изучена транскрипция мРНК TGF-(íhIL-10.

Отличия в транскрипции мРНК отмечались в TGF-/3. Как показали исследования, экспрессия TGF-/3 определялась макрофагальными клетками только в 1-е сутки опытов в I группе мышей. В контрольной группе животных наблюдались слабые сигналы.

В экспериментах транскрипция мРНК IL-2, IL-4 и IL-10 как у макрофагов, так и у нейтрофилов, не наблюдалась. Однако, важная роль в дифференцировке клеточного и гуморального типа иммунного ответа хозяина принадлежит именно IL-2 и IL-4 (Pasare S., Medzhitov R., 2004).

Изучение экспрессии мРНК IL-15 показало появление радиографического сигнала во всех изучаемых группах мышей на 1-й день опытов, как в нейтрофилах, так и в макрофагах. При этом интенсивность радиографического сигнала в макрофагах была выше в контроле и в I группе мышей.

Следует отметить, что, по литературным данным, IL-15 вырабатывается только макрофагами и по своему действию близок к IL-2. При участии IL-15 осуществляется пролиферация активированных Т-клеток и дифференцировка цитотоксических Т-лимфоцитов, а также активация NK-клеток (Talati A.J. et al., 2008), что противоречит полученным нами результатам.

Таким образом, можно заключить, что LT-энтеротоксин E.cloacae, способствуя повышенной экспрессии TGF-/J, подавляет в целом иммунологические реакции организма хозяина. Ранняя ложная индукция экспрессии IFN-y макрофагами, возможно, имеет иммунокомпрометирующее

значение, поскольку IFN-y обладает плейотропным действием. Отсутствие в нейтрофилах транскрипции мРНК ключевых цитокинов указывает на то, что они как бы выключаются из цитокиновой регуляции иммунного ответа в инфекционном процессе.

Макрофаги определяют первую линию защиты организма и испытывают на себе влияние факторов как бактериальной природы, так и образующихся в процессе иммунного ответа, причем патогены способны индуцировать их апоптоз.

Представления о спектре механизмов бактерийного выживания при инфекции в последнее время расширились за счет установления способности микробных патогенов регулировать процесс апоптоза. В условиях инфекционной патологии обычно апоптоз выполняет функцию защиты макроорганизма, где гибель инфицированных клеток с последующей их элиминацией из организма предотвращает распространение инфекции. Однако некоторые патогены, в частности, облигатные внутриклеточные паразиты в условиях инфицированного организма «отменяют» клеточную гибель, поддерживая жизнь клеток хозяина, тем самым способствуя собственному выживанию и персистенции (McGee D.W. et al, 1992; Mathias S. et al, 1993; Reise C.S. et al, 1999). В связи с этим, представлялось целесообразным изучить влияние LT-энтеротоксина Е.cloacae на программированную клеточную гибель клеток хозяина.

Цитометрический анализ клеток перитонеального экссудата (КПЭ) с использованием двух видов светорассеяния (малого и под углом 90° С) показал, что КПЭ содержит две основные субпопуляции клеток, различающихся размерами и гранулярностью цитоплазмы.

Результаты исследования представлены на рис.12.

1 суш 3 сутки S сутем IS счггж

Оперваягруппа Овтораягруппа Q третья группа □ контроль

Рис.12. Уровень апоптоза клеток перитонеального экссудата мышей в динамике (усл.ед.) *-данные статистически достоверны по ц-критерию Ньюмена-Кейлса при р<0,001; - данные статистически достоверны по ц-критерию Ньюмена-Кейлса при р<0,05.

Из рис.12 видно, что во всех опытных группах отмечается появление апоптотических клеток. Однако, статистически достоверные различия по сравнению с контролем наблюдались только в 1 группе мышей. Установлено, что в I группе мышей, зараженной LT-энтеротоксином E.cloacae, количество ушедших в апоптоз клеток было значительно больше по сравнению с другими опытными группами. При этом количество апоптотических клеток в указанных группах были сопоставимы с показателями контрольной группы.

Данные Yankelevich В. et al. (1997) свидетельствуют о факте запуска программированной смерти CD4+ лимфоцитов, индуцируемого Ext В фрагментом термолабильного энтеротоксина E.coli и CD8+-холерогеном.

Таким образом, результаты изучения апоптоза клеток перитонеального экссудата, показывают, что термолабильный энтеротоксин E.cloacae может влиять на процесс апоптоза клеток перитонеального экссудата мышей.

Обобщая полученные результаты, можно заключить, что LT-энтеротоксин Enterobacter spp. является важным фактором патогенности, определяющим особенность развития инфекционного заболевания. Мишенями для его действия являются иммунокомпетентные клетки. Характеристика термолабильного энтеротоксина создает основу для разработки рациональных подходов в диагностике и лечении патологий, вызванных энтеротоксигенными Enterobacter spp.

ВЫВОДЫ

1. Штаммы рода Enterobacter, выделенные при желудочно-кишечных, урологических и гнойно-воспалительных инфекциях, фенотипически характеризуются свойствами патогенности (способностью к адгезии, продукции цитолизинов, токсинообразованию и персистентными свойствами).

2.Колониальная организация микроорганизмов рода Enterobacter характеризуется морфологической гетерогенностью, входящих в её состав клеток: обнаружены активно делящиеся формы с образованием клеточных кластеров; покоящиеся; спонтанно аутолизирующиеся клетки. В концентрических зонах колоний микробы преимущественно представлены клетками, образующими "швермеры", с избыточным количеством жгутиков, не способных к делению. Адгезивная активность бактерий рода Enterobacter обусловлена наличием ресничек длиной 297,8±30,57 нм и шириной 4,9±0,11 нм, способных агглютинировать эритроциты птиц.

3.Выявление у бактерий рода Enterobacter генетических фрагментов, определяющих их патогенность и токсигенность, идентичных с генами, входящими в состав "островков патогенности" E.coli, свидетельствует о едином генетическом механизме изменения патогенности и токсигенности.

4. В основе патогенетического механизма инфекционных процессов, обусловленных энтеротоксинпродуцирующими штаммами бактерий рода Enterobacter, лежит иммуносупрессивное действие термолабильного энтеротоксина на антигенпроцессинговую и антигенпрезентирующую функцию макрофагов, которое отражается на развитии иммунных реакций как алло-, так и аутогенных антигенов снижением числа антителообразующих клеток.

5. Механизм супрессивного действия термолабильного энтеротоксина может быть связан с ложной индукцией трансформирующего ростового фактора-ß макрофагами перитонеального экссудата, основная функция которого заключается в подавлении пролиферативной активности антигенспецифических клеток. Термолабильный энтеротоксин нарушает экспрессию интерферона-у макрофагами и нейтрофилами, что может оказывать иммунокомпрометирующее плейотропное действие на развитие иммунных реакций хозяина.

6. Термолабильный энтеротоксин бактерий рода Enterobacter нарушает функцию ферментов гексозо-монофосфатного шунта фагоцитов, что проявляется снижением образования супероксиданионов, с последующим уменьшением микробиоцидной функции макрофагов и нейтрофилов.

7. Термолабильный энтеротоксин бактерий рода Enterobacter усиливает реакцию бласттрансформации лимфоцитов, в основе которой лежит нарушение проницаемости лизосомальных мембран, характеризующееся "опустошением" лизосомальных гранул клеток.

8. В результате действия энтеротоксинпродуцирующего штамма рода Enterobacter прекращется транскрипция мРНК фактора некроза опухоли-а нейтрофилами. Это явление может служить причиной дизрегуляции запрограммированной клеточной смерти под влиянием фактора некроза опухоли-а, секретируемого нейтрофилами.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Штаммы Enterobacter gergoviae ГИСК №259, Enterobacter cloacae ГИСК №258, Enterobacter agglomerans ГИСК №257 рекомендуется использовать в качестве эталонных культур при идентификации выделенных штаммов от больных и в биотехнологии в качестве суперпродуцентов термолабильного энтеротоксина.

2.Для установления этиологической значимости штаммов Enterobacter spp. выделенных от больных с желудочно-кишечными, урологическими и гнойно-воспалительными инфекциями, рекомендуется определение их факторов патогенности.

3.Для расшифровки инфекций, вызванных УПЭ, а также бактериями рода Enterobacter, рекомендуется определение генетических маркеров патогенности: HlyA, HlyB, рарАН, рарС, sfaA, sfa G.

4.'3нания об иммуномодулирующих свойствах термолабильного энтеротоксина Enterobacter spp. рекомендуется использовать при подборе лечебно-профилактических препаратов в терапии инфекций, вызванных токсигенными условно-патогенными энтеробактериями, в частности, бактериями рода Enterobacter.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Ахтариева, A.A. О некоторых биологических свойствах бактерий рода Enterobacter [Текст] / A.A. Ахтариева, З.Г. Габидуллин, Д.Т. Гашимова, А.Р. Мавзютов // Идеи Пастера в борьбе с инфекциями: материалы второй международной конференции, посвященной 75-летию института им. ЛЛастера. - СПб., 1998. - С. 124.

2. Ахтариева, A.A. Об антибиотикорезистентности бактерий рода Enterobacter [Текст] / A.A. Ахтариева, З.Г. Габидуллин, Д.Т. Гашимова, А.Р. Мавзютов // Вопросы теоретической и практической медицины: тезисы докладов Республиканской научной конференции молодых ученых. - Уфа, 1999.-С. 13.

3. Ахтариева, A.A. К вопросу о патогенном потенциале бактерий рода Enterobacter [Текст] / A.A. Ахтариева, Д.Т. Гашимова, М.М. Туйгунов // Вопросы теоретической и практической медицины: тезисы докладов Республиканской научной конференции молодых ученых. - Уфа, 1999. - С. 13.

4. Ахтариева, A.A. Продукция энтеробактерами энтеротоксина [Текст] / A.A. Ахтариева, Д.Т. Гашимова, М.М. Туйгунов // Вопросы теоретической и практической медицины: тезисы докладов Республиканской научной конференции молодых ученых. - Уфа, 1999. - С. 13.

5. Ахтариева, A.A. Адгезивная способность бактерий рода Enterobacter [Текст] / A.A. Ахтариева, A.A. Камалова // Вопросы теоретической и практической медицины: тезисы докладов Республиканской научной конференции молодых ученых. - Уфа, 1999. - С. 13.

6. Пат. №2161197 Рос. Федерация Штамм бактерий Enterobacter gergoviae ГИСК №259, обладающий комплексом факторов патогенности / A.A. Ахтариева, М.М. Алсынбаев, З.Г. Габидуллин, Р.Х. Хананова, А.К. Булгаков, В.Ф. Кулагин, Р.З. Суфиярова, Ю.З. Габидуллин, М.М. Гафаров, P.A. Очилова (Российская Федерация). - №99124328; заявл. 18.11.1999, опубл. 27.12.2000, Бюл. №36. - 6с.

7. Пат. №2162485 Рос. Федерация Штамм бактерий Enterobacter

« agglomerans ГИСК №257, обладающий комплексом факторов патогенности / A.A. Ахтариева, З.Г. Габидуллин, М.М. Алсынбаев, В.Ф. Кулагин, О.В. Кунягина, В.В. Ленгесова, А.А.Гарифуллин, А.Р. Мавзютов, М.М. Гафаров, P.C. Суфияров, Д.Т. Гашимова (Российская Федерация). -№2000106136; заявл. 13.03.2000, опубл. 27.01.2001, Бюл. №3. - 6с.

8. Пат. №2164942 Рос. Федерация Штамм бактерий Enterobacter cloacae ГИСК №258, обладающий комплексом факторов патогенности / A.A. Ахтариева, З.Г. Габидуллин, М.М. Алсынбаев, В.Ф. Кулагин, В.В. Ленгесова, Р.Х. Хананова, А.К. Булгаков, А.А.Гарифуллин, Ю.З. Габидуллин, Р.З. Суфиярова, А.Б. Бакиров (Российская Федерация). -№2000106268; заявл. 13.03.2000, опубл. 10.04.2001, Бюл. №10. - 6с.

9. Ленгесова, В.В. Некоторые биологические свойства бактерий рода Enterobacter [Текст] / В.В. Ленгесова, A.A. Ахтариева, Р.К. Хананова, З.Г. Габидуллин, Ю.З. Габидуллин // Дерматовенерологической службе Республики Башкортостан - 80 лет: сборник трудов Республиканской конференции. - Уфа, 2000.-С. 67-68.

10. Ахтариева, A.A. Ауксо- и прототрофность бактерий рода Enterobacter [Текст] / A.A. Ахтариева, A.A. Камалова, А.Н. Ишмухаметова // Вопросы теоретической и практической медицины: тезисы докладов 65-й юбилейной научной конференции студентов и молодых ученых Башкирского государственного медицинского университета. - Уфа, 2000. - Т. 1. - С. 16.

11. Ахтариева, A.A. Антилизоцимная и антиинтерфероновая активность бактерий рода Enterobacter [Текст] / A.A. Ахтариева, A.A. Камалова, А.Н. Ишмухаметова // Вопросы теоретической и практической медицины: тезисы докладов 65-й юбилейной научной конференции студентов и молодых ученых Башкирского государственного медицинского университета. - Уфа, 2000. - Т. -С. 16-17.

12. Ахтариева, A.A. Гемолитическая активность бактерий рода Enterobacter [Текст] / A.A. Ахтариева, A.A. Камалова, А.Н. Ишмухаметова Н Вопросы теоретической и практической медицины: тезисы докладов 65-й юбилейной научной конференции студентов и молодых ученых Башкирского государственного медицинского университета. - Уфа, 2000. - Т. 1. - С. 17.

13. Ишмухаметова, А.Н. Некоторые персистирующие свойства штаммов провиденция и энтеробактер [Текст] / А.Н. Ишмухаметова, A.A. Ахтариева // Вопросы теоретической и практической медицины: тезисы докладов 65-й юбилейной научной конференции студентов и молодых ученых Башкирского государственного медицинского университета. - Уфа, 2000. - Т. 1. - С. 19.

14. Ахтариева, A.A. Некоторые персистентные свойства бактерий рода Enterobacter [Текст] / A.A. Ахтариева, A.A. Камалова // Здравоохранение

Башкортостана. - 2000. - № 2: спец. вып. - С.15-17.

15. Ахтариева, A.A. Антибиотикорезистентность штаммов Enterobacter, выделенных в городе Уфе [Текст] / A.A. Ахтариева, Д.Т. Гашимова, A.A. Камалова // Вопросы теоретической и практической медицины: тезисы докладов научной конференции студентов и молодых ученых Башкирского государственного медицинского университета. - Уфа, 2001, - С. 16.

16. Ахтариева, A.A. Роль бактерий рода Enterobacter в патологии экстрагенитальных заболеваний [Текст] / A.A. Ахтариева, З.Г. Габидуллин, A.A. Камалова // Актуальные проблемы материнства в медицине труда: материалы докладов российской научно-практической конференции. - Уфа, 2001.-С. 251-253.

17. Ахтариева, A.A. Распространенность бактерий рода Enterobacter в больничных стационарах г. Уфы [Текст] / A.A. Ахтариева, З.Г. Габидуллин, A.A. Камалова // Материалы VIII съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. - М., 2002. - Т. 3. - С. 137138.

18. Ахтариева, A.A. Лекарственная устойчивость штаммов Enterobacter spp., выделенных на территории Республики Башкортостан [Текст] / A.A. Ахтариева, З.Г. Габидуллин, A.A. Камалова, И.Ш. Хурамшина, А.Р. Мурзаганеева // Материалы VIII съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. - М., 2002. - Т. 4. - С. 78-80.

19. Ахтариева, A.A. Изучение антибиотикорезистентности бактерий рода Enterobacter, выделенных на территории Республики Башкортостан [Текст] / A.A. Ахтариева, Р.З. Саляхов, Т.А. Савченко // Здравоохранение Башкортостана. - 2002. ~№ 3: спец. вып. - С. 14-16.

20. Ахтариева, A.A. Анализ распространенности бактерий рода Enterobacter в экологически неблагоприятных регионах Башкирии [Текст] / A.A. Ахтариева, З.Г. Габидуллин, A.A. Камалова // Наука-Образование-Производство в решении экологических проблем: материалы международной научно -технической конференции. - Уфа, 2002. - Т. 2. - С. 349-351.

21. Ахтариева, A.A. Адгезивная активность клинических штаммов Enterobacter spp. [Текст] / A.A. Ахтариева, З.Г. Габидуллин, Т.А. Савченко, A.A. Камалова // Гомеостаз и инфекционный процесс: III общероссийская конференция с международным участием. - Сочи, 2002. - С. 11.

22. Нигматуллина, P.A. Показатели иммунного статуса у больных с гнойно-воспалительными заболеваниями [Текст] / P.A. Нигматуллина, A.A. Ахтариева, М.М. Туйгунов, З.Г. Габидуллин, Т.А. Савченко, Р.З. Саляхов, A.A. Камалова // Иммунология Урала. - 2003. - Вып.1, №3: Материалы III конференции иммунологов Урала. - С. 67-68.

23. Саляхов, Р.З. Антибиотикочувствительность условно-патогенных энтеробактерий, выделенных при инфекциях мочевыводящих путей [Текст] / Р.З. Саляхов, З.Г. Габидуллин, В.З. Галимзянов, А.К. Булгаков, A.A. Ахтариева, М.М. Туйгунов // Иммунология Урала. - 2003. - Вып.1, №3: Материалы III конференции иммунологов Урала. - С. 109.

24. Ахтариева, A.A. Гемолитическая активность бактериий рода Enterobacter [Текст] / A.A. Ахтариева, Т.А. Савченко, Р.З. Саляхов, A.A. Камалова // Успехи современного естествознания. - 2003. - №8: Гомеостаз и инфекционный процесс: материалы III общероссийской конференции с международным участием: - С. 72.

25. Ахтариева, A.A. Факторы патогенности клинических штаммов Enterobacter [Текст] / A.A. Ахтариева, Т.А. Савченко, Р.З. Саляхов, A.A. Камалова, Ю.З. Габидуллин // Современные проблемы диагностики и лечения дисбактериозов: материалы конференции, посвящ. 10-летию НПЦ лечения дисбактериозов НИИ иммунологии ЧелГМА и 60-летию ГОУ ВПО «Челябинская Государственная медицинская академия МЗ РФ». - Челябинск, 2004.-С. 10-11.

26. Габидуллин, З.Г. Гемолитическая активность клинических штаммов бактерий рода Enterobacter, Citrobacter, Klebsiella, Proteus, E.coli, Shigella dysenteriae, Serratia, St.aureus, Str. pneumoniae, выделенных в виде смешанных и монокультур [Текст] / З.Г. Габидуллин, А.К. Булгаков, Р.З. Саляхов, Ю.З. Габидуллин, М.М. Туйгунов, A.A. Ахтариева // Актуальные вопросы инфекционной патологии человека, клиники и прикладной медицины: материалы Всероссийской научной конференции молодых ученых. - Уфа, 2004.

- С. 43-44.

27. Нигматуллина, РР. Сгруюура высеваемости и антибиотикорезистеншость бактерий рода Enterobacter, выделенных от пациентов урологического отделения ГКБ №8 за 2003 год [Текст] / Р.Р. Нигматуллина, Д.В. Шемагонов, A.A. Ахтариева, Р.З. Саляхов, Ю.З. Габидуллин, Т.А. Савченко, A.A. Камалова II Материалы 69-ой межвузовской научной конференции. - Курск, 2004. - Ч. 1.

- С. 224-225.

28. Ахтариева, A.A. Влияние термолабильного энтеротоксина Enterobacter cloacae на отдельные звенья иммунной системы [Текст] / A.A. Ахтариева, И.И. Долгушин, З.Г. Габидуллин, A.A. Камалова // Иммунологая Урала. - 2005. -Вып. 1, № 4: Материалы VI конференции иммунологов Урала. - С. 2-3.

29. Габидуллин, Ю.З. Некоторые особенности факторов патогенности бактерий рода Enterobacter spp, Serratia spp. в виде моно - и ассоциированных культур [Текст] / Ю.З. Габидуллин, З.Г. Габидуллин, A.A. Ахтариева, А.К. Булгаков, М.М. Туйгунов, Р.З. Саляхов, Э.Ф. Мамбетова, H.H. Гибазов //

Здравоохранение Башкортостана. - 2005. - № 3: Актуальные вопросы урологии, заболевания предстательной железы. Новые технологии в урологии: материалы Респуб. науч. конф. - С. 322-323.

30. Ахтариева, A.A. Роль термолабильного энтеротоксина бактерий рода Enterobacter в системе "патоген - хозяин" [Текст] / A.A. Ахтариева, З.Г. Габидуллин, А.А Камалова // Медицинский вестник Башкортостана. - 2006. -№ 1: Актуальные вопросы современной фармации и фармацевтического образования: сборник научных трудов юбилейной конференции, посвящ. 25-летию фармацевтического факультета Башкирского государственного медицинского университета. - С. 218-220.

31. Ахтариева, A.A. Изучение влияния термолабильного энетротоксина бактерий рода Enterobacter spp. на функциональную активность перитонеальных макрофагов в эксперименте [Текст] / A.A. Ахтариева, И.И. Долгушин, З.Г. Габидуллин, Ю.З. Габидуллин, Н.Г. Насибуллин // Известия Челябинского научного центра: электронный журнал. - 2006. - Вып. 2, № 32. -С. 120-122.

32. Ахтариева, A.A. Патогенетическое значение термолабильного энтеротоксина и антикомплементарной, антиинтерферояовой и антилизоцимной активности бактерий рода Enterobacter в условиях выживания в организме хозяина [Текст] / A.A. Ахтариева, З.Г. Габидуллин, Ю.З. Габидуллин, Ф.С. Билалов, Э.Ф. Мамбетова, A.A. Камалова // Новые лабораторные технологии в диагностике и лечении заболеваний человека: материалы конференции, посвящ. 25-летию ЦНИЛ ЧГМА. - Челябинск, 2006. - С. 98-100.

33. Ахтариева, A.A. Изучение влияния JIT-энтеротоксина некоторых представителей бактерий семейства Enterobacteriaceae на лизосомальную активность перитонеальных макрофагов в эксперименте [Текст] / A.A. Ахтариева, Э.Ф. Мамбетова, Ф.С. Билалов, З.Г. Габидуллин // Здоровье семьи -XXI века: материалы X международной научной конференции (Бангкок -Паттайя, Тайланд, 2006 г.). - М., 2006. - С. 25-26.

34. Габидуллин, З.Г. Характеристика свойств, определяющих персистенцию мои о- и ассоциированных культур условно - патогенных энтеробактерий [Текст] / З.Г. Габидуллин, Ю.З. Габидуллин, A.A. Ахтариева, М.М. Алсынбаев, Э.Ф. Мамбетова, М.М. Туйгунов, Д.Т. Гашимов, Ф.С. Билалов, H.H. Гибазов, P.M. Ахмадеев, А.К. Булгаков // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. - 2006. - № 4. - С. 62-64.

35. Ахтариева, A.A. Функциональная активность перитонеальных фагоцитов и энтеротоксигенные бактерии рода Enterobacter [Текст] / A.A. Ахтариева, З.Г. Габидуллин, Т.А. Савченко, P.A. Кудакаева, Д.Н. Аскарова, Т.С. Корюкова, A.A. Камалова // Медицинская наука - 2007: материалы Респуб. конф. молодых

ученых Республики Башкортостан, посвящ. году единства Башкортостана с Россией, 75-летию БГМУ, Дню медицинского работника. - Уфа, 2007. - С. 6-7.

36. Ахтариева, A.A. Влияние термолабильного энтеротоксина Enterobacter cloacae на фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов мышей [Текст] / A.A. Ахтариева, И.И. Долгушин, З.Г. Габидуллин, Ю.З. Габидуллин, A.A. Камалова // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. - 2007. - № 4. - С. 58-61.

37. Ахтариева, A.A. Состояние некоторых звеньев иммунной системы мышей, инфицированных энтеротоксинпродуцирующими штаммами бактерий рода Enterobacter [Текст] / A.A. Ахтариева, И.И. Долгушин, Ю.З. Габидуллин, З.Г. Габидуллин, Т.А. Савченко, Г.К Давлетшина, Д.М. Галимова, М.Ф. Газизова // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. -2007.-№5.-С. 84-87.

38. Ахтариева, A.A. Оценка влияния энтеротоксинпродуцирующих Enterobacter cloacae на внутриклеточный кислородзависимый метаболизм перитонеальных макрофагов мышей [Текст] / A.A. Ахтариева, Ю.З. Габидуллин, З.Г. Габидуллин, Т.А. Савченко, Ф.С. Билалов, Э.Ф. Мамбетова, А.А Камалова // Материалы IX съезда Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. - М., 2007. - Т. 2. -С. 209.

39. Ахтариева, A.A. Влияние энтеротоксина Enterobacter на клеточное звено иммунитета [Текст] / A.A. Ахтариева, И.И. Долгушин, З.Г. Габидуллин, Ю.З. Габидуллин A.A. Камалова // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. - 2008. - № 3. - С. 96-98.

40. Ахтариева, A.A. Изучение действия термолабильного энтеротоксина Enterobacter cloacae на экспрессию генов цитокинов мышей [Текст] / A.A. Ахтариева, И.И. Долгушин, З.Г. Габидуллин, Ю.З. Габидуллин, A.A. Камалова, P.M. Ахмадеев II Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. -2009,-№5.-С. 62-66.

41. Ахтариева, A.A. Влияние термолабильного энтеротоксина Enterobacter cloacae на иммунную систему мышей [Текст] / A.A. Ахтариева, И.И. Долгушин, З.Г. Габидуллин, Ю.З. Габидуллин, A.A. Камалова, P.M. Ахмадеев // Журн. микробиол., эпидемиол* и иммунобиол. -2009.-№6.-С. 98-104.

42. Габидуллин, З.Г. Взаимодействие бактерий семейства Enterobacter!асеае с антигенпрезентирующими клетками иммунной системы организма [Текст] / З.Г. Габидуллин, A.A. Ахтариева, М.М. Туйгунов, P.C. Суфияров, В.Г. Туйгунова,' Н.Х. Насибуллин, Р.Р. Суфияров, Ю.З. Габидуллин, Г.А.

Идиатуллина, В.М. Изикаев // Медицинский вестник Башкортостана. - 2009. -Т. 4,№5.-С. 78-86.

43. Габидуллин, З.Г. Факторы патогенности бактерий семейства Enterobacteriacae, обеспечивающие выживание в организме хозяина [Текст] / З.Г. Габидуллин, A.A. Ахтариева, М.М. Туйгунов, Р.С.Суфияров, В.Г.Туйгунова, Р.Р. Суфияров, Ю.З. Габидуллин, В.М. Изикаев, Г.А. Идиатуллина // Медицинский вестник Башкортостана. - 2009. - Т. 4, № 5. - С. 86-94.

44. Габидуллин, З.Г. Регуляция апоптоза бактериальными клетками семейства Enterobacteriaceae [Текст] / З.Г. Габидуллин, A.A. Ахтариева, М.М. Туйгунов, P.C. Суфияров, В.Г. Туйгунова, P.P. Суфияров, Ю.З. Габидуллин, Г.А. Идиатуллина, В.М. Изикаев, A.A. Габдрахманова // Медицинский вестник Башкортостана. - 2009. - Т. 4, № 6. - С. 68-76.

45. Ахтариева, A.A. Влияние термолабильного энтеротоксина Enterobacter cloacae на уровень каспаз 3,7,10 при экспериментальной инфекции [Текст] / A.A. Ахтариева, И.И. Долгушин, З.Г. Габидуллин, Ю.З. Габидуллин, A.A. Камалова, P.P. Суфияров, В.Г.Туйгунова // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. - 2010. - № 2. - С. 90-93.

Ахтариева Айгуль Атласовна

Иммунобиологические свойства термолабильного энтеротоксина бактерий рода Enterobacter в системе взаимодействия "Патоген - хозяин"

03.02.03 - микробиология 14.03.09 - клиническая иммунология, аллергология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Лицензия № 0177 от 10.06.96 г. Подписано к печати 26.04.2010 Бумага офсетная. Отпечатано на ризографе. Формат 60x84 V^. Усл.-печ. л. 3,0. Уч.-изд. л. 3,0. Тираж 100 экз. Заказ № 37.

450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3, ГОУ ВПО «Башгосмедуниверситет Росздрава»

Содержание диссертации, доктора медицинских наук, Ахтариева, Айгуль Атласовна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Бактерии рода Enterobacter и их роль в инфекционной патологии человека.

1.2. Факторы патогенности бактерий рода Enterobacter как механизмы выживания в организме хозяина.

1.3. Взаимоотношения в системе "патоген-хозяин" и особенности иммунного ответа.

1.4. Взаимодействие бактерий с антигенпрезентирующими клетками иммунной системы хозяина.

1.5. Цитокиновая регуляции иммунного ответа в системе "патоген-хозяин".

1.6. Регуляция апоптоза микробными клетками.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Микробиологические методы исследования.

2.2. Молекулярно-генетические.

2.3. Иммунологические.

2.4. Статистическая обработка результатов.

ГЛАВА 3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Фенотипическая характеристика биологических свойств бактерий рода Enterobacter

3.1.1. Морфологическая и культуральная характеристика бактерий рода Enterobacter.

3.1.2. Биохимическая характеристика бактерий рода Enterobacter.

3.1.3. Питательная потребность бактерий рода Enterobacter (ауксо- и прототрофность).

3.1.4. Адгезивные свойства бактерий рода Enterobacter.

3.1.5. Факторы, коррелирующие с патогенностью бактерий рода Enterobacter.

3.1.6. Персистирующие свойства бактерий рода Enterobacter.

3.1.7. Тестирование токсигенности и вирулентности бактерий рода Enterobacter на биологических моделях.

3.2. Генотипическая характеристика биологических свойств бактерий рода Enterobacter

3.2.1. Плазмидный профиль клинических штаммов Enterobacter

3.2.2. "Островки патогенности" бактерий рода Enterobacter, детерминированные генами E.coli.

3.3. Взаимоотношения в системе взаимодействия "патоген -хозяин"

3.3.1. Влияние термолабильного энтеротоксина бактерий рода Enterobacter на фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов мышей.

3.3.2. Влияние термолабильного энтеротоксина бактерий рода Enterobacter на лизосомальную активность перитонеальных макрофагов мышей.

3.3.3. Влияние термолабильного энтеротоксина бактерий рода Enterobacter на внутриклеточный кислородзависимый метаболизм перитонеальных макрофагов мышей.

3.3.4. Влияние термолабильного энтеротоксина бактерий рода Enterobacter на антигенпрезентируюгцую функцию перитонеальных макрофагов мышей.

3.3.5. Влияние термолабильного энтеротоксина бактерий рода '- Enterobacter на пролиферативную активность лимфоцитов мышей.

3.3.6. Влияние термолабильного энтеротоксина бактерий рода Enterobacter на гуморальный иммунитет мышей.

3.3.7. Влияние термолабильного энтеротоксина бактерий рода Enterobacter на экспрессию мРНК цитокинов макрофагами и нейтрофилами перитонеального экссудата мышей.

3.3.8. Изучение влияния термолабильного энтеротоксина бактерий рода Enterobacter на феномен апоптоза клеток перитонеального экссудата в системе "патоген-хозяин".

Введение Диссертация по биологии, на тему "Иммунобиологические свойства термолабильного энтеротоксина бактерий рода Enterobacter в системе взаимодействия "патоген-хозяин""

Известно, что LT-энтеротоксины УПЭ имеют сходный механизм токсического эффекта на желудочно-кишечный тракт как человека, так и животных, к разряду основных клинических проявлений которого относят диарейный симптомокомплекс на фоне выраженной интоксикации организма [171,205,298]. Их местное воздействие способствует закреплению возбудителя и повышает вероятность инвазии; они инициируют системные реакции, достаточно удаленные от зоны первичной локализации [238,328]. Выявлено, что LT-энтеротоксины УПЭ имеют иммунобиологическое сродство, в частности, определены сходства LT-энтеротоксинов Enterobacter cloacae и Escherichia coli [161,191,192,228,247,248,411]. Вместе с тем, комплексный анализ иммунобиологических характеристик в системе «патоген-хозяин» LT- энтеротоксина Enterobacter spp. не проводился.

Течение любого инфекционного процесса тесным образом взаимосвязано с факторами и механизмами иммунной системы, поэтому понимание глубины патогенеза заболевания невозможно без раскрытия иммунологического контекста этой проблемы.

В преодолении защитной функции иммунной системы при инфекционных процессах важную роль играют особенности реагирования клеточных факторов врожденного иммунитета в ответ на возбудителя. Одними из главных клеток врожденного иммунитета, осуществляющих первую линию защиты организма от инфекции, являются фагоциты — макрофаги, нейтрофилы, натуральные киллеры (NK-киллеры), дендритные клетки и др. [24,82,85, 89,196,238,251,262,314,385,395]. В основе защитной функции указанных эффектов лежит фагоцитарный процесс, заключающийся в их способности поглощать и уничтожать чужеродный материал [24,33,38,59,82,224].

Функциональные возможности фагоцитов могут меняться при действии разных объектов фагоцитоза [24,31,32,56,59,60,61,76,87,311].

Процесс взаимодействия патогена с клеткой хозяина вызывает развитие каскада иммунологических реакций, сопровождающихся продукцией цитокинов, спектр секреции которых зависит не только от ансамбля клеток хозяина, участвующих в иммунном ответе на конкретный возбудитель, но и от вида бактерий, их принадлежности к патовару и от экониш проживания [106,136,154,302,306,385]. Бактерии со своей стороны, также используют разные возможности манипулирования цитокинами для своей выгоды [11,279].

В настоящее время существуют убедительные доказательства о том, что клинический исход заболевания во многом зависит от баланса секреции про- и противовоспалительных цитоинов [275,409].

Современное понимание особенностей иммунной реакции при инфекционных заболеваниях, вызванных энтеротоксигенными УПЭ, в частности, бактериями рода Enterobacter, невозможно без оценки функциональной активности Т- и B-лимфоцитов, так как направление дифференцировки Т-клеток в Thl/Tcl или Th2/Tc2 тип, переключение Вклеток на продукцию классов иммуноглобулинов определяет характер и течение заболевания [28,43,66,73,170,245].

В настоящее время внимание исследователей привлекают вопросы изучения апоптоза эукариотических клеток, поскольку многие патогенные микроорганизмы выработали совершенные механизмы управления гибелью клеток хозяина в целях выживания [106,287,302]. Вместе с тем, нарушение процессов инициации и реализации летальной программы клеток иммунной системы часто становится основополагающей в определении характера и тяжести течения патологического процесса. Поэтому изучение влияния LT-энтеротоксина Enterobacter spp. на апоптоз клеток иммунной системы хозяина также является актуальным.

Цель исследования

Задачи исследования

2. Провести комплексное тестирование биологических свойств клинических штаммов рода Enterobacter и определить штаммы, обладающие факторами патогенности и являющиеся продуцентами термолабильного энтеротоксина.

3. Изучить у бактерий рода Enterobacter генетические фрагменты, определяющие патогенность и токсигенность, идентичных с генами, входящими в состав "островков патогенности" E.coli.

Научная новизна

Впервые получены данные о колониальной организации микроорганизмов рода Enterobacter, характеризующиеся морфологической гетерогенностью: обнаружены активно делящиеся формы с образованием клеточных кластеров; покоящиеся; спонтанно аутолизирующиеся клетки. В концентрических зонах колоний микробы преимущественно представлены клетками, образующими "швермеры", не способных к делению. Адгезивная активность бактерий рода Enterobacter обусловлена наличием пилей длиной 297,8±30,57 нм и шириной 4,9±0Д1 нм, способных агглютинировать эритроциты птиц.

На основе комплексного изучения изменений параметров иммунной системы в ходе экспериментальной энтеробактерной инфекции, вызванной бактериями ( Ent+ и Ent-) рода Enterobacter, установлены следующие свойства: супрессия фагоцитоза и продукция кислородных радикалов макрофагами; подавление антигенпрезентирующей функции макрофагов; угнетение бласттрансформации лимфоцитов под действием неспецифических активаторов; снижение антетелообразующей функции на эритроциты барана.

Оценка динамики экспрессии мРНК цитокинов иммунокомпетентными клетками впервые показала, что спектр экспрессии мРНК цитокинов про- и противовоспалительной направленности зависит от вида клеток (макрофаги, нейтрофилы), от времени детекции (1-е, 3-й, 5-е и 15-е сутки) воздействующего микробного агента и принадлежности условно-патогенных микроорганизмов к патовару.

Теоретическая и практическая значимость работы

Полученные экспериментальные данные дополняют и углубляют представления о молекулярных механизмах действия термолабильного энтеротоксина бактерий рода Enterobacter на иммунную систему хозяина, раскрывают патогенез инфекционных процессов, обусловленных токсинпродуцирующими штаммами энтеробактерий, и создают основу для разработки этиопатогенетических принципов лечения и целенаправленной профилактики инфекционных заболеваний. Полученные данные будут полезны для своевременной коррекции иммунологических нарушений, связанных с энтеротоксинпродуцирующими штаммами условно-патогенных энтеробактерий.

Установлены маркеры вирулентности у штаммов Enterobacter spp., что позволит разработать пути целенаправленной профилактики и лечения инфекционных заболеваний, вызванных бактериями рода Enterobacter.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Патогенетические возможности клинических штаммов рода Enterobacter определяются их способностью к адгезии, продукции энтеролизинов, токсинообразованию и персистентными свойствами.

2. Генотипическая характеристика "островков патогенности" бактерий рода Enterobacter детерминирована hlyA, hlyB, рарАН, рарС, sfaA, sfaG генами E.coli.

4. В основе иммунобиологического действия термолабильного энтеротоксина бактерий рода Enterobacter лежат следующие свойства: супрессия фагоцитоза и продукция кислородных радикалов макрофагами; подавление антигенпрезентирующей функции макрофагов; угнетение бласттрансформации лимфоцитов под действием неспецифических активаторов; снижение антителообразующей функции на эритроциты барана; изменение экспрессии мРНК цитокинов про- и противовоспалительной направленности, в зависимости от вида клеток (макрофаги, нейтрофилы), времени детекции (1-й, 3-й, 5-е и 15-е сутки) и принадлежности условно-патогенных микроорганизмов к патовару.

Внедрение результатов исследования

Депонированные в ФГУН ГНИИСК имени J1.A. Тарасевича 3 штамма Enterobacter spp. (патенты РФ: №2161197 от 18.11.1999; №2164942 от 13.03.2000; №2162485 от 13.03.2000) используются в работе лаборатории анатоксинов «Иммунопрепарат» ФГУП «НПО «Микроген» МЗ и СР РФ в качестве токсигенных тест - культур.

Материалы исследования внедрены в учебный процесс на кафедрах микробиологии, вирусологии и иммунологии; эпидемиологии и детских инфекционных болезней ГОУ ВПО «БГМУ Росздрава»; на кафедре микробиологии, вирусологии, иммунологии ГОУ ВПО «ЧелГМА Росздрава». Издано учебное пособие для врачей - бактериологов и клинических лаборантов «Условно-патогенные энтеробактерии» (Уфа, 2006; 2009).

Апробация работы

Материалы диссертации докладывались на VIII съезде Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2002); VI конференции иммунологов Урала (Челябинск, 2005); конференции «Актуальные вопросы современной- фармации и фармацевтическое образование» (Уфа, 2006); конференции, посвященной 25-летию ЦНИЛ ЧелГМА «Актуальные вопросы инфекционной патологии человека и прикладной иммунологии» (Челябинск, 2006); V Российской научной конференции «Персистенция микроорганизмов» (Оренбург, 2006), IX съезде Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2007); Республиканской конференции молодых ученых Республики Башкортостан «Медицинская наука - 2007» (Уфа, 2007); Республиканской конференции молодых ученых Республики Башкортостан «Медицинская наука-2008» (Уфа, 2008); 73-й итоговой Республиканской Научной конференции студентов и молодых ученых БГМУ «Вопросы теоретической и практической медицины» (Уфа, 2008); обсуждены на совместном заседании кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет Росздрава», кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Росздрава», Башкирского отделения Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов и ведущих сотрудников уфимского филиала «Иммунопрепарат» ФГУП «НПО «Микроген» МЗ и CP РФ.

Публикации

По теме диссертации опубликованы 45 печатных работ.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 227 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 31 таблицей и 28 рисунками, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 3 глав собственных исследований, заключения и выводов. Список литературы включает 95 отечественных и 320 иностранных источников.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Ахтариева, Айгуль Атласовна

182 ВЫВОДЫ

1. Штаммы рода Enterobacter, выделенные при желудочно-кишечных, урологических и гнойно-воспалительных инфекциях, фенотипически характеризуются свойствами патогенности (способностью к адгезии, продукции энтеролизинов, токсинообразованию и персистентными свойствами).

2. Колониальная организация микроорганизмов рода Enterobacter характеризуется морфологической гетерогенностью: обнаружены активно делящиеся формы с образованием клеточных кластеров; покоящиеся; спонтанно аутолизирующиеся клетки. В концентрических зонах колоний микробы преимущественно представлены клетками, образующими "швермеры", не способных к делению. Адгезивная активность бактерий рода Enterobacter обусловлена наличием пилей длиной 297,8±30,57 нм и шириной 4,9±0,11 нм, способных агглютинировать эритроциты птиц.

3. Выявление у бактерий рода Enterobacter генетических фрагментов, определяющих их патогенность и токсигенность, идентичных с генами, входящими в состав "островков патогенности" E.coli, свидетельствует о едином генетическом механизме изменения патогенности и токсигенности.

4. В основе иммунобиологического действия термолабильного энтеротоксина бактерий рода Enterobacter лежат следующие свойства: супрессия фагоцитоза и продукции кислородных радикалов макрофагами; подавление антигенпрезентирующей функции макрофагов; угнетение бласттрансформации лимфоцитов под действием неспецифических активаторов; снижение антетелообразующей функции на эритроциты барана.

5. На основании оценки динамики экспрессии мРНК цитокинов иммунокомпетентными клетками можно сделать вывод о том, что спектр экспрессии мРНК цитокинов про- и противовоспалительной направленности зависит от вида клеток (макрофаги, нейтрофилы), от времени детекции (1-е, 3-й, 5-е и 15-е сутки) воздействующего микробного агента и принадлежности условно-патогенных микроорганизмов к патовару.

6. Результаты изучения апоптоза клеток воспалительного перитонеального экссудата мышей, свидетельствуют о возможной способности термолабильного энтеротоксина бактерий рода Enterobacter различно влиять на процесс апоптоза иммунокомпетентных клеток мышей.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

2. Для установления этиологической значимости штаммов Enterobacter spp. выделенных от больных с желудочно-кишечными, урологическими и гнойно-воспалительными инфекциями, рекомендуется определение их факторов патогенности.

3. Для расшифровки инфекций, вызванных УПЭ, а также бактериями рода Enterobacter, рекомендуется определение генетических маркеров патогенности: ЫуА, hlyB, рарАН, рарС, sfaA, sfa G.

4. Знания об иммунобиологических свойствах термолабильного энтеротоксина Enterobacter spp. рекомендуется использовать при подборе лечебно-профилактических препаратов в терапии инфекций, вызванных токсигенными условно-патогенными энтеробактериями, в частности, бактериями рода Enterobacter.

Библиография Диссертация по биологии, доктора медицинских наук, Ахтариева, Айгуль Атласовна, Челябинск

1. Ахматова, Н.К. Врожденный иммунитет: противоопухолевый и противоинфекционный Текст. / Н.К. Ахматова, М.В. Кислелевский. М.: Практическая медицина, 2008. - 256 с.

2. Бабский, В.Г. Явление самоорганизации у бактерий на клеточном и популяционном уровнях Текст. / В.Г. Бабский // Нелинейные волны. Динамика и эволюция. М., 1989. - С. 299-303.

3. Баркус, М.М. Энтеротоксигенность бактерий рода Klebsiella и Enterobacter, определяемые иммунологическими методами Текст. / М.М. Баркус, В.М. Бондаренко, Ф.С. Флуер // Лаб. дело. 1986. - № 9. - С. 556-558.

4. Бондаренко, В.М. Влияние гемолитических плазмид на развитие «бьющего эффекта» у энтеробактерий разных видов Текст. / В.М. Бондаренко, А.В. Голубева, И.П. Корягина // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1983. - № 9. - С. 50-53.

5. Бондаренко, В.М. Термостабильные энтеротоксины условно-патогенных представителей Enterobacteriaceae Текст. / В.М. Бондаренко, А.Р. Мавзютов, З.Г. Габидуллин // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1998. - № 3. - С. 104-107.

6. Бондаренко, В.М. Факторы патогенности бактерий и их роль в развитии инфекционного процесса Текст. / В:М. Бондаренко // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1999. - №5. - С.34-39.

7. Бондаренко, В.М. Энтеротоксигенная способность Klebsiella и Enterobacter, выделенных при острых кишечных заболеваниях у детей Текст. / В.М. Бондаренко, М.М. Баркус, Вл.М. Бондаренко // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1990. - № 10. - С. 28-32.

8. Брилис, В.И. Методика определения адгезивного процесса микроорганизмов Текст. / В.И. Брилис, Т.А. Ленцнер, A.A. Ленцнер // Лаб. дело. 1986. - № 4. - С. 210-212.

9. Будихина, A.C. сх-дефензины антимикробные пептиды нейтрофилов: свойства и функции Текст. / A.C. Будихина, Б.В. Пинегин // Иммунология. - 2008. - № 5. - С. 317-320.

10. Бухарин, O.B. V. Межбактериальные взаимодействия Текст. / О.В. Бухарин, Б.Я. Усвяцов, Л.М. Хуснутдинова // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2003. - № 4. - С. 3-8.

11. Бухарин, О.В. Антилизоцимный тест как маркер персистенции микроорганизмов Текст. / О.В. Бухарин // Теоретическая и прикладная иммунология: тез. докл. 1 всесоюзной конф. -М., 1982. С. 58-64.

12. Бухарин, О.В. Изучение антикомплементарной активности стафилококков Текст. / О.В. Бухарин, Ю.А. Брудастов, Д.Т. Дерябин // Клин. лаб. диагн. 1992. - № 11. - С. 68-70.

13. Валышев, A.B. Факторы персистенции энтеробактерий фекальной флоры при дисбактериозе кишечника Текст. / A.B. Валышев, В.Г. Гильмутдинова, C.B. Фомичева // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1996. - № 3. - С. 96-98.

14. Васильева, Г.И. Кооперативное взаимодействие моно- и полинуклеарных фагоцитов, опосредованное моно- и нейтрофилокинами Текст. / Г.И. Васильева, И.А Иванова, С.Ю. Тюкавкина // Иммунология -2005. -№ 5. С.11-17.

15. Вертиев, Ю.В. Токсин опосредованная обусловленность инфекционных заболеваний Текст. / Ю.В. Вертиев // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1987. - № 3. - С. 86-93.

16. Войно-Ясенецкая, M.K. Опыт изучения дизентерийной инфекции у лабораторных животных Текст. / М.К. Войно-Ясенецкая // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1957. - № 4. - С. 65-69.

17. Габрилович, И.М. Гетерогенность антилизоцимной активности в популяциях условно-патогенных энтеробактерий Текст. / И.М. Габрилович, В.Б. Бозиев, М.И: Габрилови // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1997.-№4.-С. 32-33.

18. Галактонов, В.Г. Сингенные и аллогенные отношения при макрофагальной индукции иммунного ответа у мышей разных генотипов Текст. / В.Г. Галактонов, Т.В. Анфалова // Журнал общей биологии. 1974. -Т. 35, №3.-С. 365-370.

19. Галикеев, X.JI. Изучение вирулентности дизентерийных бактерий с использованием инфузорий туфелек Текст. / X.JL Галикеев, Н.И. Потатуркина-Нестерова// Здравоохр. Казахстана. 1987. - № 1. - С. 34-46.

20. Долгушин, И.И. Нейтрофилы и гомеостаз Текст. / И.И. Долгушин, О.В. Бухарин.- Екатеринбург: УрО РАН, 2001. 277 с.

21. Долгушин, И.И. Нейтрофильные внеклеточные ловушки: метод обнаружения и оценка эффективности улавливания бактерий Текст. / И.И. Долгушин, Ю.С. Андреева // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. -2009. №2. - С.65-67.

22. Железникова, Г.Ф. Инфекция и иммунитет: стратегии обеих сторон Текст. / Г.Ф. Железникова // Мед. иммунол. 2006. - Т. 8, № 5-6. - С. 597614.

23. Зайцев, В.М. Прикладная медицинская статистика Текст. / В.М. Зайцев, В.Г. Лифляндский, В.И. Маринкин. СПб.: Фолиант, 2006. - 432 с.

24. Зеленин, A.B. Взаимодействие аминопроизводных акридина с клеткой Текст. / A.B. Зеленин. М.: Наука, 1971. - 231 с.

25. Изменение функциональной активности макрофагов под влиянием бактериальных мурамилпептидов Текст. / М.И. Карсонова, А.Н. Ильинская, В.Л. Львов, Б.В. Пинегин // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. -2007. № 4. - С. 34-37.

26. Ильинская, А.Н. Компонент бактериального пептидогликана как фактор созревания макрофагов Текст. / А.Н. Ильинская, Л.В. Пичугина, Н.С. Олиферук // Иммунология. 2005. - № 1. - С. 12-15.

27. Кетлинский, С.А. Цитокины мононуклеарных фагоцитов в регуляции реакции воспаления и иммунитета Текст. / С.А. Кетлинский, Н.М. Калинина // Иммунология. 1995. - № 3. - С. 40-42.

28. Клебанов, Г.И. Клеточные механизмы, прайминга и активации фагоцитов Текст. / Г.И. Клебанов, Ю:А. Владимиров // Успехи совр. биол. — 1999: Т. 119, № 5. - С. 462-475.

29. Ковальчук, Л.В. Рецепторы врожденного иммунитета: подходы к количественной и функциональной оценке То11-подобных рецепторов человека Текст. / Л.В. Ковальчук, М.В. Хорева, A.C. Варивода [и др.] /

30. Иммунология. 2008. - № 4 - С.223-227.

31. Ковальчук, JI.B. Учение о воспалении в свете новых данных: развитие идей И.И. Мечникова Текст. / JI.B. Ковальчук // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2008. - № 5. - С. 10-15.

32. Козлов, В.А. Гомеостатическая пролиферация лимфоцитов в аспекте иммунопатогенеза различных заболеваний Текст. / В.А. Козлов,// Иммунология. 2006. - № 6. - С. 378-382.

33. Ляшенко, В.А. Макрофаги в инфекционном процессе Текст. / В.А. Ляшенко // Иммунология 1995. - №4. - С.48-52.

34. Мавзютов, А.Р. «Острова патогенности» условно-патогенных энтеробактерий Текст. / А.Р. Мавзютов, C.B. Фиалкина, В.М. Бондаренко // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2002. - № 6. - С. 5-9.

35. Мавзютов, А.Р. Факторы патогенности оппортунистических энтеробактерий и их роль в развитии диареи Текст. / А.Р. Мавзютов, В.М. Бондаренко, Н.Ю. Жеребцова // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2007. - № 1. - С. 89-97.

36. Мамоткулов, И.Х. Этиологическая структура летальности токсико -септицемий новорожденных Текст. / И.Х. Мамоткулов, В.М. Бондаренко // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1997. - № 2. - С. 86-89.

37. Манских, В.Н. Натуральные киллеры отдельный класс иммунокомпетентных клеток или совокупность функциональных субпопуляций Текст. / В.Н. Манских // Иммунология. - 2006. - № 1. - С. 5657.

38. Маянский, А.Н. с соавт. Нуклеарный фактор-кВ и воспаление Текст. / А.Н. Маянский, H.A. Маянский, М.И. Заславская // Цитокины и воспаление. -2007.-№2.-С. 3-9.

39. Маянский, H.A. Поздний цитокин HMGB1: медиаторные функции и перспективы Текст. / А.Н, Маянский, H.A. Маянский // Иммунология -2009. №4. - С.232-237.

40. Медуницын, Н.В. Процессинг и презнтация антигена макрофагами

41. Текст. / Н.П. Медуницын // Иммунол. 1995. - №3. - С. 17-26.

42. Метод определения антилизоцимной активности микроорганизмов Текст. / О.В. Бухарин, А.П. Усвяцов, Н.В. Малышкин, Н.В. Намуева // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1984. - № 2. - С. 27-28.

43. Методические рекомендации по обнаружению и классификации R -плазмид у шигелл Текст. / Т.Н. Мамонтова, С.С. Белокрысенко, Е.Д. Тихомиров [и др.]; МЗ СССР. М., 1983.

44. Механизмы выживания бактерий Текст. / О.В. Бухарин, А.Л. Гинцбург, Ю.М. Романова [и др.]. М.: Медицина, 2005. - 367 с.

45. Миллер, Дж. Эксперименты в молекулярной генетике Текст. / Дж. Миллер. М.: Мир, 1976. - 325 с.

46. Митрохин, С.Д. Значение энтеробактерий в инфекциионной патологии человека Текст. / С.Д. Митрохин // Инфекция и антимикробная терапия. 2005. - Т. 7, № 2. - С. 20-27.

47. Митрохин, С.Д. Факторы персистенции условно-патогенных микроорганизмов при дисбактериозе желудочно-кишечного тракта Текст. / С.Д. Митрохин, В.И. Минаев, О.Н. Зайцева // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол 1997. - № 4. - С. 84-97.

48. Нестерова, И.В. Ососбенност активационного потенциала ядер нейтрофилных гранулоцитов в норме и патологии Текст. / И.В. Нестерова, А.А. Евглевский, У.В., Фомичева, В.В., Парфенов // Цитокины и воспаление 2004. -Т. 3, № 2. - С.223-241.

49. Нестерова, И.В. Пептидная регуляция продукции интерлейкина 8 нейтрофильными гранулоцитами в эксперименте in vivo Текст. / И.В. Нестерова, Е.Ю. Синельникова, И.Н. Швыдченко // Иммунология. - 2006. - № 5. - С. 275-278.

50. Новик, Г.И. Архитектоника популяции бифидобактерий: субмикроскопический аспект когезии клеток Bifidobacterium adolescentis и Bifidobacterium difidum Текст. / Г.И. Новик, В.В. Высоцкий // Микробиология. 1995. - Т. 64, № 2. - С. 222-227.

51. Образование бактериями экстрацеллюлярных структур, содержащих гемопротеины Текст. / В.И. Дуда, В.Г. Выпов, В.В. Сорокин [и др.] // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1995. - Т. 64, № 1. - С. 69-73.

52. Олиферук, Н.С. Оценка фагоцитарной и бактерицидной активности нейтрофилов, макрофагов и незрелых дендритных клеток Текст. / Н.С. Олиферук, А.Н. Ильинская, Б.В. Пинегин // Иммунология. 2005. - Т. 26, № 1.-С. 10-13.

53. Определитель бактерий Берджи: в 2-х т. пер. с англ. Текст. / под ред. Дж. Хоулта, Н. Грига, П. Сита, М. Уильямса. М., 1997. - 432 с.

54. Отек лап белых мышей тест для оценки активности энтеротоксинов Текст. / Ю.П. Вартанян, М.К. Северцева, О.И. Введенская, Е.С. Станиславский // Бюлл. эксп. биол. и медицины. - 1978. - № 2. - С. 150-152.

55. Пащенков, М.В. Физиология клеток врожденной иммунной системы: дендритные клетки Текст. / М.В. Пащенков, Б.В. Пинегин // Иммунология. -2006.-№6.-С. 368-377.

56. Пинегин, Б.В. Макрофаги: свойства и функции Текст. / Б.В. Пинегин, М.И. Кирсанов / Иммунология 2009. - № 4 - С. 241-249.

57. Пинегин, Б.В. Нейтрофилы: структура и функция Текст. / Б.В. Пинегин, А.Н. Маянский //Иммунология. -2007. № 6. - С. 374-382.

58. Плохинский, H.A. Биометрия Текст. / H.A. Плохинский М.: МГУ, 1970. - 367.

59. Подзолкова, Н.М. Тяжелые бактериальные инфекции в акушерстве и гинекологии Текст. / Н.М. Подзолкова, Т.И. Никитина // Инфекция и антимикробная терапия. 2004. - Т. 6, № 3. - С. 38-45.

60. Покровский, В.И. Энтеробактерии Текст. : руководство для врачей / В.И. Покровский; М.: Медицина, 1985. - 320 с.

61. Поликарпов, H.A. Некоторые количественные обсемененности испражнений нуклеазоположительными микроорганизмами у людей с нормальной микрофлорой и при дисбактериозе кишечника Текст. / H.A.

62. Поликарпов, А.Н. Викторов, М.Н. Зубков // Жури, микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1990. - № 4. - С. 117-119.

63. Пономарева, Е.Г. Воздействие бактериального лектина на функциональную активность лимфоцитов Текст. / Е.Г. Пономарева, Н.В. Емельянова, В.Е. Никитина // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2007. - № 2. - С. 60-65.

64. Принципы и методы выявления иммунопатологических состояний при инфекционных, аутоиммунных и аллергических заболеваниях: информ-метод. письмо. Уфа, 1987. — 51 с.

65. Рафалес Ламарка, Э.Э. Некоторые методы планирования и математического анализа, биологических экспериментов Текст./ Э.Э. Рафалес - Ламарка, В.Ф. Николаев - Киев.: Наука думка, 1971.-119с.

66. Реброва, О.Ю. Статистический анализ медицинских данных: применение пакета прикладных программ Statistica Текст. / О.Ю. Реброва. -М.: Медицина, 2002. 312 с.

67. Рябиченко, Е.В. Роль кишечной бактериальной аутофлоры и ее эндотоксина в патологии человека Текст. / Е.В. Рябиченко, В.М. Бондаренко // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2007. - № 3. - С. 103-111.

68. Сепиашвили, Р.И. Естественные киллеры и их рецепторы, специфичные к МНС-1 Текст. / Р.И. Сепиашвили, И.П. Балмасова // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2006. - № 1. - С. 46-51.

69. Сибиряк, C.B. Оценка апоптоза в иммунологических исследованиях Текст. / C.B. Сибиряк, C.B. Хайдуков, A.B. Зурочка. Екатеринбург, 2008. -48 с.

70. Симбирцев, A.C. Цитокины: классификация и биологические функции Текст. / A.C. Симбирцев // Цитокины и воспаление. 2004. - Т.З, №2:-С. 16-22.

71. Соколов, В.Ю. Антиинтерфроновая активность микроорганизмов Текст. / Ю.В. Соколов // Персистенция микроорганизмов. Куйбышев, 1990.-С. 83-93.s1. >

72. Соколова, К.Я. Методика оценки состояния микрофлоры толстой кишки с использованием ЭВМ Текст. / К.Я. Соколова, В.А. Лаврова // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1991. - № 12. - С. 13-14.

73. Сомова, Л.М. Кислородзависимая и нитроксидзависимая ферментные системы макрофагов при стафилококковой и листериозной инфекции Текст. / Л.М. Сомова, Н.Г. Плехова, Ю.Н. Гончарук // Иммунология. 2006. - № 3. -С. 39-43.

74. Способ определния энтеротоксигенных кишечных палочек на мышах сосунках: методические рекомендации. Л., 1980. - 54 с.

75. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования Текст. / под ред. М.О. Берге. М., 1982. — 462 с.

76. Сравнительная оценка монокининдуцирующей активности липополисахаридов Yersinia pestis EV и Escherichia coli Текст. / Г.И. Васильева, И.В. Иванова, И.А. Беспалова [и др.] // Иммунология. 2000. - № 6. - С. 27-28.

77. Теплова, С.Н. Секреторный иммунитет Текст. / С.Н. Теплова, Д.А. Алексеев. Челябинск: УрО РАН, 2002. - 200 с.

78. Топтыгина, А.П. Т клетки памяти Текст. / А.П. Топтыгина // Иммунология. - 2008. - № 5. - С. 311-316.

79. Тотолян, A.A. Клетки иммунной системы Текст. / A.A. Тотолян, И.С. Фрейдлин. СПб.: Наука, 2000 - 231 с.

80. Туйгунов, М.М. Механизмы расшифровки иммуносупрессивной активности термолабильного энтеротоксина бактерий рода Citrobacter Текст. / М.М. Туйгунов // Астма, аллергия и клиническая иммунология. 2003. - № 11.-С. 8-14.

81. Ушакова, Т.А. Цитокиновый профиль и модуляция апоптоза при термической травме Текст. / Т.А. Ушакова, А.Г. Глоба, A.A. Карелин // Иммунология. 2007. - № 4. - С. 226-230.

82. Фрейдлин, И.С. Ключевая позиция макрофагов в цитокиновой регуляции сети Текст. / И.С. Фрейдлин // Иммунология. — 2008. № 5. - С.317.320.

83. Фрейдлин, И.С. Методы изучения фагоцитирующих клеток при оценке иммунного статуса человека Текст.: учебное пособие / И.С. Фрейдлин. JL, 1986. - 261 с.

84. Функциональная активность перитонеальных макрофагов мышей, зараженных грамположительными бактериями Текст. / Ю.Н. Гончару к, Н.Г. Плехова, JI.M. Сомова [и др.] // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2006. - № 1. - С. 48-51.

85. Хаитов, P.M. Современные подходы к оценке основных этапов фагоцитарного процесса Текст. / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. -1995.-№4.-С. 3-8.

86. Хайдуков, С.В. Макрофаги -основная мишень дисахаридсодержащих мурамилпептидов Текст. / С.В. Хайдуков, P.JI. Комалева, В.А. Несмеянов // Иммунология. 1995. - № 3. - С. 26-32.

87. Хейфетц, Л.Б. Разделение форменных элементов крови человека в градиенте плотности верографин фиколл Текст. / Л.Б. Хейфетц, В.А. Абалакина// Лаб. дело. - 1973. - № 10. - С. 579-581.

88. Шапиро, Дж.А. Бактерии как многоклеточные организмы Текст. /

89. Дж.А. Шапиро // В мире науки. 1988. - № 8. - С. 46-54.

90. Швыдченко, И.Н. Цитокинсекретирующая функция нейтрофильных гранулоцитов Текст. / И.Н. Швыдченко, И.В. Нестерова, Е.Ю. Синельникова //Иммунология 2005. - № 1 - С. 31-34.

91. A distinct array of proinflammatory cytokines is expressed in human colon epithelial cells in response to bacterial invasion Text. / H.C. Jung, L. Eckmann, S.K. Yang [et al.] // Clin. J. Invest. 1995. - Vol. 95. - P. 55-65.

92. A genetic locus of enterocyte effacement conserved among diverse enterobacterial pathogens Text. / Т.К. McDaniel, K.G. Jarvis, M.S. Donnenberg, J.B. Kaper//Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1995. - Vol. 92. - P. 1664-1668.

93. A low molecular weight enterotoxic hemolysin from clinical Enterobacter cloacae Text. / A. Simi, G.V. Carboneil, R.M. Falcon [et al.] // Can. J. Microbiol. Rev. Can. Microbiol. 2003. - Vol. 49, N 7. - P. 479-482.

94. Abe, K. Distinct contributions of TNF and LT cytokines to the development of dendritic cells in vitro and their recruitment in vivo Text. / K. Abe, F.O. Yarovinsky, T. Murakami // Blood -2003. Vol. 101,N4.-P. 1477-1483.

95. Agace, W.S. Selective cytokine production by epithelial cells following exposure to Escherichia coli Text. /W.S. Agace, U. Hedges, U. Anderson // Infect. Immun. 1993. - Vol. 61. - P. 602-609.

96. Albesa, J. A tiol-activated hemolysin in gram-negative bacteria Text. / J. Albesa, L.J. Barberis, M.C. Pajaro // Can. J. Microbiol. 1985. - Vol. 31. - P. 297300.

97. An Apaf-1 cytochrome multimeric complex is a functional apoptosome that activates procaspase 9 Text. / H. Zou, Y. Li, X. Liu, X. Wang // J. Biol. Chem. -1999. - Vol. 274. - P. 1154-1156.

98. Anderson, E.L. An outbreak of gentamicin-resistant Enterobacter cloacae infections in a pediatric intensive care unit Text. / E.L. Anderson / Infect. Control. 1983.-N4.-P. 148-152.

99. Apoptosis of human intestinal epithelial cells after bacterial invasion Text. / J.M. Kim, L. Eckmann, T.C. Savidge [et al.] // J. Clin. Invest. 1998. - Vol. 102. -P. 1815-1823.

100. Appelbaum, H.C. Transductional analysis of nonmotile mutans in Proteus mirabilis Text. / H.C. Appelbaum, O.W. Prozecky // J. Gen. Microbiol. 1973. -Vol. 77, N1.-P. 89-97.

101. Babior, B.M. Investigating antibody catalyzed ozone generation by human neutrophils Text. / B.M. Babior, C. Tekuchi, J. Ruedi // Proc. Natr. Acad. Sei. USA. - 2003. - Vol. 100. - P. 3031-3034.

102. Ball, H.J. The detection of verocytotoxins in bacterial cultures from human diarrhoeal samples with miniclinal antibody-based ELISAs Text. / H.J. Ball, D. Finlay, A. Zafar, T. Wilson / J. Infect. Dis. 1996. - Vol.44, N.4 - P.273-276.

103. Ban, E. CpG motifs induce Langerhans cell migration in vivo Text. / E. Ban, L. Dupre, E. Hermann // Inf. Immunol. 2000. - N 12. - P. 737-45.

104. Bancherea, J. Dendritic cells and the control of immunity Text. / J. Banchereau, R.M. Steinman // Nature. 1998. - Vol. 392. - P. 245-252.

105. Bar-Oz, B. Enterobacter sakazakii infection in the newborn Text. / B. Bar-Oz, A. Preminger, O. Peleg // Acta Paediatr. 2001. - N 3. - P. 356-358.

106. Barrow, P. A. Invasion of Vero cells by Salmonella species Text. / P. A. Barrow, M.A. Lovell // J. Med. Microbiol. 1989. - Vol. 28. - P. 59-67.

107. Bauer, M.E. Characterization of an RTX toxin Enterohemorrahagic Escherichia coli 0157:H7 Text. / M.E. Bauer, R.A. Welch // Infect. Immun. -1996.-Vol. 64.-P. 167-175.

108. Bayer, M.E. Membrane biogenesis Text./M.E. Bayer. N.Y., 975. - 427p.

109. Beutin, L. Enterogemolyzin, a new type hemolyzin produced by some strains of enteropathogenic E.coli (EPEC) Text. / L. Beutin, J. Prada, S. Zamermann // Zbl. Bakt. Hyg. A. 1988. - Vol. 267. - P. 576-588.

110. Bhakdi, S. Staphylococcal alpha-toxin, streptolysin-« and Escherichia coli hemolysin: prototypes of pore-forming bacterial cytolysins Text. / S. Bhakdi, H. Bayley // Arch. Microbiol. 1996. - Vol. 165. - P. 73-79.

111. Biological characterization of an Enterobacter cloacae outer membrane protein (OmpX) Text. / J. Stoorvogel, J.A. Mario, W.M. van Bussel, J.A.M. van deKlundert//J.Bacteriol.- 1991. Vol. 173, N l.-P. 161-167.

112. Boldin, M.P. A novel protein that interacts with the death domain of Fas/Apo-1 contains a sequence motif related to the death domain Text. / M.P. Boldin, E.E. Varfomoleev, Z. Pancer // J. Biol. Chem. 1995. - Vol. 270. - P. 7795-7798.

113. Bonadio, W.A. Enterobacter cloacae bacteremia in children: a review of 30 cases in 12 years Text. / W.A. Bonadio, D. Margolis, M. Tovar // Clin. Pediatr. Philad. -1991. Vol. 30, N 5. - P. 310-313.

114. Bouvet, J.P. Diversity of antibody-mediated immunity at the mucosal barrier Text. / J.P. Bouvet, V. Fischetti // Infect. Immun. 1999. - Vol. 67. - P. 2687-2691.

115. Bowen, A.B. Invasive Enterobacter sakazakii Disease in Infants Text. / A.B. Bowen, C.R. Braden // EID J. Home. 2006. - N 8. - P. 4456-459.

116. Boyd, E.F. Chromosomal regions specific to the pathogenic isolates of Escherichia coli have a phylogenetically clustered distribution Text. / E.F. Boyd, D.L. Hartl // J. Bacteriol. 1998. - Vol. 180. - P. 1159-1165.

117. Budihardjo, I. Biochemical pathway of caspase activation during apoptosis Text. /1. Budihardjo, H. Oliver, M. Lutter // Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 1999. -Vol. 15.-P. 269-290.

118. Burdette, J.H. Enterobacter sakazakii brain abscess in the neonate: the importance of nuroradiologic imaging Text. / J.N. Burdette, C. Santos // Pediatr. Radiol. 2000. - Vol. 30. - P. 33-34.

119. Campos, L.C. Outbreak of Enterobacter hormaechei septicaemia in newborns caused by contaminated parenteral nutrition in Brazil Text. / L.C. Campos, L.E. Lobianco, L.M. Seki // J. Hosp. Infect. 2007. - N 9. - P. 65-72.

120. Casadevall, A. Host-pathogen interactions: redefine the basic concepts of virulence and pahtogenicity Text. / A. Casadevall, L.A. Pirofski // Infect. Immun. 1999. - Vol. 67. - P. 3703-3713.

121. Caux, C. Recent advances in the study of dendritic cells and follicular dendritic cells Text. / C. Caux, Y. Lui, J. Banchereau // Immunol. Today. 1995. -Vol. 16. - P. 2-4.

122. CDld is involved in T cell-intestinal epithelial cell interactions Text. / A. Panja, R.S. Blumberg, S.P. Balk, L. Mayer // J. Exp. Med. 1993. - Vol. 178. - P. 115-119.

123. Cella, M. Inflammatory stimuli induce accumulation of MHC class II complexes on dendritic cells Text. / M. Cella, A. Engering, V. Pinet // Nature. -1997. Vol. 388. - P. 782-787.

124. Chang, En-Pen Clinical characteristics and predictors of mortality in patients with Enterobacter aerogenes bacteremia Text. // En-Pen Chang, Dung-Hung Chiang, Mei-Lin Lin [et al.] / J. Microbiol. Immunol. Infect. 2009. -Vol.42,-P. 329-335.

125. Chang, H.Y. Proteases for cell suicide: functions and regulation of caspases Text. / H.Y. Chang, X. Yang // Microbiol. Mol. Biol. Rev. 2000. - Vol. 64. - P. 821-846.

126. Chen, Y. Apoptosis induced by bacterial pathogens Text. / Y. Chen, A. Zychlinsky // Microb. Pathogen. 1994. - Vol. 17. - P. 203-212.

127. Chensue, S.W. Molecular Machinations: Chemokine Signals in Host-Pathogen Interactions Text. / S.W. Chensue // Clin. Microbiol. Rev. 2001. -Vol. 14. - P. 821-835.

128. Chotpitayasunondh, T. Bacterial meningitis in children etiology and clinical features, an 11 year review of 618 cases Text. / T. Chotpitayasunondh // Southeast. Asian. J. TroP. Med. Pudlic. Health. 1994. - Vol. 25, N 1. - P. 107115.

129. Cleary, J. Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) adhesion to intestinal epithelial cells: role of bundle-forming pili (BFP), EspA filaments and intimin Text. /J. Cleary, Li-Ching Lai, R.K. Shaw // Microbiology. 2000. - Vol. 150. - P. 527-538.

130. Clinical comment on management of urosepsis in a general urological department Text. / E. Proca, R. Radulecu, C. Calin [et al.] // Acta. Urol. Belg. -1992. Vol. 60, N 1. - P. 41-56.

131. Comelis, G. R. Assembly and function of type III secretory systems Text. // G. R. Comelis, F. Van Gijsegem / Annu. Rev. Microbiol. 2000. - Vol.54. -P.1219-1226.

132. Corredor, J. Tumor necrosis factor regulates intestinal epithelial cell migration by receptor-dependent mechanisms Text. / J. Corredor, F. Yan, Sh.C. Christopher//Am. J. Physiol. Cell Physiol. -2003. Vol. 284. - P. 953-961.

133. Crane, J.K. Host cell death due to enteropathogenic Escherichia coli has features of apoptosis Text. / J.K Crane, M. Majumdar, D.F. Pickhardt // Infect. Immun. 1999. - Vol. 67. - P. 2575-2584.

134. Davis, I.J. Isolation of silver and antibiotic - resistant Enterobacter cloacae from teeth Text. / I.J. Davis, H. Richards, P. Mullany // Oral Microbial. Immunol. - 2005. - Vol. 20, N 3. - P. 191-194.

135. De Kort, G. Invasion of rebbit ileal tissue by Enterobacter cloacae varies with the concentration of OmpX in the outer membrane Text. // G. de Kort, A.Bolton, G. Martin [et al.] / Infec. Immunit. 1994. - Vol.46, N.ll - P.4722-4726.

136. Deal, E.N. Predictors of in-hospital mortality for bloodstream infections caused by Enterobacter species or Citrobacter freundii Text. / E.N. Deal, S.T. Micek, D.L. Ritchie // Pharmacother. 2007. - N 2. - P. 191-199.

137. Desinor, O.Y. Neonatal Sepsis and Meningitis in Haiti Text. / O.Y. Desinor, J.L. Zuazo, D.MJ. Menos // J. Trop. Pediatr. 2004. - Vol. 50, N 1. - P. 48-50.

138. Di Giovine, F.S. Immunoregulatory cytokines. Therapeutic modulation of cytokines Text. / F.S. Di Giovine, J.B. Mee, G.W. Duff ; eds. B. Henderson, M.W. Bodmer. CRC London Press, 1996. - P. 38-65.

139. Differential and regulated expression of C-X-C, C-C and C-chemokines by human colon epithelial Kagnoff Text. / S.K. Yang, L. Eckmann, A. Panja, M.F. Cells // Gastroenterology. 1997. - Vol. 113. - P. 1214-1223.

140. Divergent induction of apoptosis and IL-8 secretion in HT-29 cells in response to TNF-a and ligation of Fas antigen Text. / M.T. Abreu-Martin, A. Vidrich, D.H. Lynch, S.R. Targan // J. Immunol. 1995. - Vol. 155. - P. 41474154.

141. Dressler, K.A. Tumor necrosis factor-a activates the sphingomyelin signal transduction pathway in a cell-free system Text. / K.A. Dressler, S. Mathias, R.N. Kolesnick // Science. 1992. - Vol. 255. - P. 1715-1718.

142. Eberhart, C.E. Eicosanoids and the gastrointestinal tract Text. / C.E. Eberhart, R.N. Dubois // Gastroenterology. 1995. - Vol. 109. - P. 285-301.

143. Eckmann, L. Epithelial cells secrete the chemokine interleukin-8 in response to bacterial entry Text. / L. Eckmann, M.F. Kagnoff, J. Fierer // Infect. Immun. 1993. - Vol. 61. - P. 4569-4574.

144. Enterobacter bacteremia an analysis of 50 episodes Text. / E. Bouza, M.C. de la Terri, E.L.A. Erice, J.M. Diaz Berrege // Arch. Intern. Med. - 1985. -Vol. 145.-P. 1024-1027.

145. Enterobacter sakazakii: infectivity and enterotoxin production in vitro and in vivo Text. / F.J. Pagotto, M. Nazarowec-White, S. Bidawid, J.M. Färber // J. Food Prot. 2003. - Vol. 66, N 3. - P. 370-375.

146. Enterohemolysin, a new type hemolysin produced by some strains of enteropathogenic E.coli (EPEC) Text. / L. Buetin, J. Prada, S. Zamermann [et al.] // Zbl. Bact. Hyg. A. 1988. - Bd. 267. - S. 576-88.

147. Enterotoxigenic Escerichia coli in Developing Countries: Epidemiology, Microbiology, Clinical Features, Treatment, and Prevention Text. / F. Qadri, A.M. Svennerholm, A.S.G. Faruque, R.B. Sack // Clin. Microbiol. Rev. 2005. - Vol. 18, N3.-P. 465-483.

148. Epidemiology of extended-spectrum beta-lactamase-producing Enterobacter isolates in a Spanish hospital during a 12-year period Text. / R. Canton, A. Oliver, T.M. Coque [et al.] // J. Clin. Microbiol. 2002. - Vol. 40. - P. 1237-1243.

149. Epithelial glycosphingolipid expression as determinant of bacterial adherence and cytokine production Text. / M. Svensson, R. Lindstedt, N. Radin, C. Svanborg // Infect. Immun. 1994. - Vol. 62. - P. 4404-4410.

150. Excision of large DNA regions termed pathogenicity island from tRNA-specific loci in the chromosome of an Escherichia coli wild-type pathogen Text. / G. Blum, M. Ott, A. Lischewski // Infect. Immun. 1994. - Vol. 62. - P. 606-614.

151. Expression of the endogenous type II secretion pathway in Escherichia coli leads to chitinase secretion Text. / O. Francetic, D. Belin, C. Badaut, A.P. Pugsley // EMBO J. 2000. - Vol. 24, N 19. - P. 6697-6703.

152. FAP-1: a protein tyrosine phosphotase that associates with Fas Text. / T. Sato, S. Erie, S. Kitada, J. C. Reed // Science. 1995. - Vol. 268. - P. 411-415.

153. Feng, B.S. Investigation of the rol of cholera toxin in assisting rhe initiation of the antigen specific Th2 respons Text. / B.S. Feng, P.Y. Zheng, X. Chen [Et al.] / Immunol.Invest. - 2008. - Vol.37, N.8. - P.782-797.

154. Field, M. Intestinal ion transport and the pathophysiology of diarrhea Text. / M. Field // J. Clin. Invest. 2003. - Vol.111. - P. 931-943.

155. Fiore, A. Enterobacter sakazakii epidemiology, clinical presentation, prevention and control Text. / A. Fiore, M. Casale, P. Aureli // Ann. Inst. Super. Sanita. 2008. - Vol. 44, N 3. - P. 275-280.

156. Fuches, T.A. Novel cell death program leads to neutrohpil extracellular traps Text. / T.A. Fuches, U.Abed, C. Goosmann [et al.] // L. Cell Biol. 2007. -Vol.176, N.2. — P.231-241.

157. Functional conservation of the Salmonella and Shigella, effectors of entry into epithelial cells Text. / D. Hermant, R. Menard, N. Arricau [et al.] // Mol. Microbiol. 1995. - Vol. 17. - P. 781-789.

158. Gangliozide GDI is an essential coreceptor for toll like receptor 2 signalling in response to the B subunit of type II B enterotoxin Text. / S. Liang, M. Wang, R.I. Tapping [et al.] // J. Biol. Chem. - 2007. [Epub. Ahead of print].

159. Gao, L.Y. Activation of caspase 3 during Legionella pneumophila -induced apoptosis Text. / L.Y. Gao, Y. A. Kwaik // Infect. Immun. 1999. - Vol. 67.-P. 4886-4894.

160. Genetically manipulated bacterial toxin as a new generation mucosal adjuvant Text. / T. Yamamato, J.R. Mcghee, Y. Hagiwara [et al.] // Scand. J. Immunol. 2000. - Vol. 53. - P. 211-217.

161. Germain, R.N. The biochemistry and cell biology of antigen processing and presentation Text. / R.N. Germain, D.H. Margulies // Ann. Rev. Immunol. 1993. -Vol. 1, N 1. - P. 403-450.

162. Giron, J.A. Characterization of fimbria produced by enteropathogenic Eschirichia coli Text. / J.A. Giron, A.S. Yho, G.K. Schoolnik // J. Bacterid. -1993. Vol. 175. - P. 7391-3403.

163. Godaly, G. Role of epithelial interleukin-8 and neutrophil IL-8 receptor A in Escherichia coli induced transepithelial neutrophil migration Text. / G. Godaly, A.E. Proudfoot, R.E. Offord // Infect. Immun. - 1997. - Vol. 65. -P. 34513456.

164. Greaves, D.R. CCR6, a CC chemokine receptor that interact with macrophage inflammatory protein 3 a and is highly expressed in human dendritic cells Text. / D.R. Greaves, W. Wang, D.L. Dairaghi // J. Exp. Med. 1997. - Vol. 186.-P. 837-844.

165. Guarino, A. Production of Escherichia coli STa-lake enterotoxin by Citrobacter freundii isolated from humans Text. / A. Guarino, G. Capano, B. Malamisura // J. Clin. Microbiol. 1987. - Vol. 25. - P. 110-114.

166. Guarino, F. Citrobacter freundii produced an 18-amino heat-stable enterotoxin identical to the 18-aminoacid E.coli heat-stable enterotoxin STIa Text. / F. Guarino, R. Gianella, M. R. Thompson // Infect. Immun. 1989. - Vol. 236. - P. 649-652.

167. Gyles, C.L. Escherichia coli cytotoxins and enterotoxins Text. / C.L. Gyles // Can. J. Microbiol. 1992. - Vol. 38, N 7. - P. 734-746.

168. Hacker, J. Deletions of chromosomal regions coding for fimbriae and hemolysins occur in vitro and in vivo in various extraintestinal Escherichia coli isolates Text. / J. Hacker, L. Bender, M. Ott // Microboiol. Pathog. 1990. - N 8. -P. 213-225.

169. Hajishengallis, G. The type II heat-labile enterotoxins LT-IIa and LT-IIb and their regulate cytokine production in human monocyticl cells Text. / G. Hajishengallis, H.Nawar, R.I.Tapping [et al.] // Infect. Immun. 2004. - Vol.72, N.ll. - P.6351-6358.

170. Hajishengallis, G. Toll-like receptor 2 medites cellular activation by the B subunits of type II heat-labile enterotoxins Text. / G. Hajishengallis, R.I. Tapping, M.H. Martin [et al.] //Infect. Immun. 2005. - Vol.73. - P. 1343-1349.

171. Harnett, M.M. Analysis of G-proteins regulating signal transduction pathways Text. / M.M. Harnet // Methods Mol. Biol. 1994. -Vol. 27. - P. 199211.

172. Harrington, DJ. Bacterial collagenases and collagen-degrading enzymes and their potential role in human disease Text. / D.J. Harrington // Infect. Immun. 1996. - Vol. 64. - P. 1885-1891.

173. Hauser, A.R. Pseudomonas aeruginosa induced type -Ill-secretion mediated apoptosis of macrophages and epithelial cells Text. / A.R. Hauser, J.N. Engel // Infect. Immun. 1999. - Vol. 67. - P. 5530-5537.

174. Hausmann, M. Physiological role of macrophage inflammatory protein-3a: induction during maturation of intestinal macrophages Text. / M. Hausmann, F. Bataille, T. Spoettl // J. Immunol. 2005. - Vol. 175. - P. 1389-1398.

175. Hedges, S. Interleukin-6 response to deliberate colonization of the human urinary tract with Gram-negative infection Text. / S. Hedges, P. Anderson, G. Janson // Infect. Immun. 1991. - Vol. 59. - P. 421-427.

176. Hedlund, M. Role of the ceramide signalling pathway in cytokine responses to P fimbriated Escherichia coli Text. / M. Hedlund, M. Svensson, A. Nilson // J. Exp. Med. 1996. - Vol. 183. - P. 1037-1044.

177. Henderson, B. Bacterial induction of cytokines: beyond LPS Text. / B. Henderson, M. Wilson // Cytokine. 1996. - N 8. - P. 269-282.

178. Hersh, D. The Salmonella invasin SipB induces macrophage apoptosis by binding to caspase-1 Text. / D. Hersh, D.M. Monack, M.R. Smith // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1999. - Vol. 96. - P. 2396-2401.

179. Hirayama, T. Glycoprotein receptors for a heat-stable enterotoxin "STh" produced by enterotoxigenic Escherichia coli Text. / T. Hirayama, A. Wada, N. Ywata // Infect. Immun. 1992. - Vol. 60. - P. 4213-4220.

180. Holmgren, J. Action of cholera toxin and the prevention and treatment of cholera Text. / J. Holmgren //Nature. 1981. - Vol. 292. - P. 413-417.

181. Homologs of the shigella IpaB and IpaC invasins are required for Salmonella ty-phimurium entry into cultured epithelial cells Text. /K. Kaniga, S. Tucker, G.D. Trollin, J.E. Galan // J. Bacterid. 1995. - Vol. 177. - P. 3965-3971.

182. Horstman, A.L. Enterotoxigenic Esherichia coli secretes active heat-labile enterotoxin via outer membrane vesicles Text. / A.L. Horrstman, M.J. Kuehn // J. Biol. Chem. 2000. - Vol. 275, N 17. - P. 12489-12496.

183. Hunter, C J. Enterobacter sakazakii: An Emerging pathogen in infants and neonates Text. // C.J. Hunter, M. Petrosyan, H. R. Ford, N. V. Prasadarao / Surg. Infect. 2008. - Vol.9, N.5. - P.533-539.

184. Identification of sphingomyelin turn-over as an effector mechanism for the action of TNF — a and IFN y. Specific role in cell differentiation Text. / M. Y. Kim, C. Linardic, L. Obeid, Y.A. Hannum // Biol. J. Chem. - 1991. - Vol. 266. - P. 484-489.

185. IL-IB and Escherichia coli Text. / R. Porat, B.D. Clark, S.M. Wolf, C.F. Dinarello // Scince. 1992. - Vol. 258. - P. 1562-1563.

186. Imipenem resistance of Enterobacter aerogenes mediated by outer membrane permeability Text. / C. Bornet, A. Davin-Regli, C. Bosi [et al.] // J. Clin. Microbiol. 2000. - Vol. 38, N 3. - P. 1048-1052.

187. Immunoregulatory cytokines modify Escherichia coli induced uroepithelial cell IL-6 and IL-8 responses Text. / S. Hedges, V. Bjamadottir, W. Agace [et al.] // Cytokine. 1996. -N 8 - P. 686-697.

188. Infectious discitus caused by Enterobacter clocae Text. / R. Solans, P. Simeon, R. Cuenca [et al.] // Appl. Environ. Microbiol. 1992. - Vol. 51, N 7. - P. 867-872.

189. Interleukin 1 is released by murine macrophages during apoptosis induced by Shigella flexneri Text. / A. Zychlinsky, C. Fitting, J.M. Cavaillon, P J. Sansonetti // J. Clin. Invest. - 1994. - Vol. 94. - P. 1328-1332.

190. Interleukin 8 response in an Intestinal HCT-8 Cell Line Infected with Enteroaggregative and Enterotoxigenic Escherichia coli Text. / B.H. Huang, L. DuPont Herbert, Jiang Zhi-Dong [et al.] // Clin. Diagn. Lab. Immunol. - 2004. -Vol. 11,N3. —P. 548-551.

191. Interleukin (IL) 15 is a novel cytokine that activates human natural killer cells via components of the IL-2 receptor Text. / W.E. Carson, J.G. Giri, M.J. Lindemann [et al.] // J. Experim. Med. 1994. - Vol. 180. - P. 1395-1403.

192. Interspecific plasmid transfer and modification of hey-stable enterotoxin expressions by Klebsiella pneumoniae from infants with diarrhea Text. / M. Allesio, F. Albano, L. Tarralo, A. Guarino // Pediatr. Res. 1993. - Vol. 33. - P. 205-208.

193. Involvement of MACH, a novel MORT/FADD interacting protease, in Fas/Apo 1 - and TNF receptor-induced cell death Text. / M.P. Boldin, T.M. Goncharov, Y.V. Goltsev, D. Wallach // Cell. - 1996. - Vol.96. - P. 803-815.

194. Isasti, G. Community-acquired bacteremia and acute cholecystitis due to Enterobacter cloacae: a case report Text. // G. Isasti, L. More, V. Garcia [et al.] / J.Med. Case Reports. 2009. - Vol.3, - P.7417-7420.

195. Islam, D. In situ characterization of inflammatory responses in the rectal mucosae of patients with shigellosis Text. / D. Islam, D. Veress, P. K. Barhmann // Infect. Immun. -1997. Vol. 65. - P. 739-749.

196. Iversen, C. Risk profile of Enterobacter sakazakii, an emergent pathogen associated with infant mile formula Text. / C. Iversen, S.J. Forsythe // Trends Food Sei. Technol. 2003. - Vol. 14. - P. 443-454.

197. Jackes, T. Biochemical properties of E.coli low molecular-weight, heat-stable enterotoxin Text. / T. Jackes, B.L. Wu // Infect. Immun. 1974. - N 9. - P. 342-347.

198. Janeway, C.A.Jr. Approaching the asymptote? Evolution and revolution in immunology Text. // C.A. Janeway / Cold Spring Hard. Symp.Quant. Biol. -1989. Vol.54,-P.l-13.

199. Jeffries, C.D. Rapid method for determining the activity of microorganisms on nuclear acids Text. / C.D. Jeffries, D.F. Holtman, D.G. Gus // J. Bacterid. -1957. Vol. 73, N 4. - P. 590-591.

200. Jerne, N.K. Plague formation in agar single antibody-produsing cells Text. / N.K. Jerne, A.A. Nordin // Science. 1963. - Vol. 140. - P. 405.

201. Jiang, Jia-Horng Neonatal sepsis in the neonatal intensive care unit: characteristics of early versus late onset Text. / Jiang Jia-Horng, Chiu Nan-Chang, Huang Fu-Yang // J. Microbiol. Immunol. Infect. 2004. - Vol. 37. - P. 301-306.

202. Jiwa, S.F. Enterotoxigenic bacteria in food and water from an Ethiopian community Text. / S.E. Jiwa, K. Krovacek, T. Wadström // Appl. Environ. Microbiol. 1981. - Vol. 41, N4. - P. 1010-1019.

203. John, D. Production of the E. coli LT-B enterotoxin subunit Text. / D. John, H. Clements // J. Microbiol. 1994. - Vol. 139. - P. 850-867.

204. John, K. C. Host Cell Death due to Enteropathogenic Escherichia coli Has Features of Apoptosis Text. / K.C. John, M. Swastika, F.P. Donald // Infect. Immun. 1999. -N 5. - P. 2575-2584.

205. Jolivet-Gougeon, A. Production of Escherichia coli group I-like heat-labile enterotoxin by Enterobacteriaceae isolated from environmental water ELISAs

206. Text. / A. Jolivet-Gougeon, T. Tamanai-Shacoori, F. Sauvager, M. Cormier / Microbios. 1997. - Vol.90, N.364-365) - P.209-218.

207. Jones, B. Entry of microbes into the host: using M cells to break the mucosal barrier Text. / B. Jones, L. Pascopella, S. Falkow // Curr. Opin. Immunol. 1995. - N 7. - P. 474-478.

208. Jones, C.H. Fim H adhesin of type 1 pili is assembled into a fibrillar tip structure in the Enterobacteriaceae Text. / C.H. Jones, J.S. Pinkner, R. Roth // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1995. - Vol. 92. - P. 2081-2085.

209. Justesen, S. Functioanal recombinant MHC class II molecules and high-troughput peptide-binding assays Text. / S. Justesen, M. Harndahl, K. Lamderth [et al.] // Immunol. Resev. -2009-Vol.5, N.2 -P.1745-1765.

210. Kado, C.T. Rapid procedure for detection and isolation of large and small Plasmids Text. / C.T. Kado, S.T. Liu // J. Bacteriol. 1981. - Vol. 145. - P. 13651373.

211. Kelly, C.P. Human colon cancer cells express ICAM-1 in vivo and support LFA-1-dependent lymphocyte adhesion in vitro Text. / C.P. Kelly, J.C. O'Keane, F. Orellana // Am. Physiol. J. 1992. - Vol. 263. - P. 864- 870.

212. Khelef, N. Induction of macrophage apoptosis by Bordetella pertussis adenylate cyclase-hemolysin Text. / N. Khelef, N. Guiso // FEMS Microbiol. Lett. 1995.-Vol. 134.-P. 27-32.

213. Khurana, C.M. Prevalence of ciprofloxacin resistance in multiresistant gram-negative intensive care unit isolates Text. / C.M. Khurana, B.R. Wojack // Infection. 1994. - Vol. 22, N 2. - P. 99-104.

214. Kischkel, F.C. Cytotoxicity-dependent APO -1 (FAS/CD95) associated proteins from a death-inducing signalling complex (DISC) with the receptor Text. / F.C. Kischkel, S. Vilell-Bardt, I. Behmann // EMBO J. - 1995. - Vol. 14. - P. 5579-5588.

215. Klapproth, J.M.A. Large Toxin from Pathogenic Escherichia coli Strains That Inhibits Lymphocyte Activation Text. / J.M.A. Klapproth, I.C.A. Scaletsky, B.P. McNamara // Infect. Immun. -2000. Vol. 68, N 4. - P. 2148-2155.

216. Klemm, P. Bacterial adhesions: Function and structure Text. / P. Klemm, M.A. Schembri // Int. J. Med. Microbiol. 2000. - Vol. 290. - P. 27-35.

217. Klipstein, F.A. Immunological interrelationships between cholera toxin and the heat labile and heat - stable enterotoxins of coliform bacteria Text. / F.A. Klipstein, R. F. Engert // Infect. Immun. - 1977. - Vol. 18. - P. 110-117.

218. Klipstein, F.A. Partial purification and properties of Enterobacter cloacae heat-stable enterotoxin Text. / F.A. Klipstein, R.F. Engert // Infect. Immun. -1976.-Vol. 13, N5.-P. 1307-1314.

219. Klose, K.E. The suckling mouse model of cholera Text. / K.E. Klose // Trends Microbiol. 2000. - N 8. - P. 189-191.

220. Kochi, S.K. DNA fragmentation and cytolysis in U937 cells treated with diphtheria toxin or other inhibitors of protein synthesis Text. / S.K. Kochi, R. J. Collier // Exp. Cell Sei. 1993. - Vol. 208. - P. 296-302.

221. Kopitar, A.N. Commensal oral bacteria antigens prime human dendritic cells to induce Thl, Th2 or T differentiation Text. / A.N. Kopitar, I. Hren, A. Ihan // Oral Microbiol. Immunol. 2006. - Vol. 21. - P. 1-5.

222. Kühn, R. Interleukin-10-deficient mice develop chronic enterocolitis Text. / R. Kühn, J. Löhler, D. Rennick // Infect. Immun. 1993. - Vol. 75. - P. 263-274.

223. Kunkel, E.J CCR10 expression is a common feature of circulating and mucosal epithelial tissue IgA Ab-secreting cells Text. / EJ. Kunkel, H.H. Kim, N.H. Lazarus//Clin. Invest.-2003.-Vol. 111.-P. 1001-1010.

224. La Casse, E.C. Shiga-like toxin purges human lymphoma from bone marrow of severe combined immunodeficient mice Text. / E.C. La Casse, M.T. Saleh, B. Patterson//Blood. 1996. - Vol. 88. - P. 1551-1567.

225. Labro, M.T. Interference of Antibacterial Agents with Phagocyte Functions: Immunomodulation or "Immuno-Fairy Tales?" Text. / M.T Labro // Clin. Microbiol. Rev. 2000. - Vol. 13, N 4. - P. 615-650.

226. Laney, D.W. Novel sites for expression of an Escherichia coli heat-stable enterotoxin receptor in the developing rat Text. / D.W Laney, E.A. Mann, S.C. Dellon // Am. J. Physiol. 1992. - Vol. 263. - P. 821-834.

227. Lauw, F. Reduced Thl, but not Th2, cytokine production by lymphocytes after in vivo exposure of healthy subjects to endotoxin Text. / F. Lauw, T.T. Hove, P.E. Dekkers // Infect. Immun. 2000. - Vol. 68. - P. 1014-1018.

228. Leal-Berumen, L. Cholera toxin increases IL-6 synthesis and decreases TNF-a production by rat peritoneal mast cells Text. / L. Leal-Berumen, D.P. Snider//J. Immunol. 1996. - Vol. 156. - P. 316-321.

229. Levy, O. Innate immunity of the human newborn: distinct cytokine responses to LPS and other Toll-like receptor agonists Text. // O. Levy/ J. Endotoxin. Res. 2005. - Vol.11, N2. - P.l 13-116.

230. Lewis, K. Programmed death in bacteria Text. / K. Lewis // Microbiol. Molec. Biol. Rev. 2000. - Vol. 64. - P. 503-514.

231. Liles, W.C. Apoptosis: role in infection and inflammation Text. / W.C. Liles // Curr. Opin. Infect. Dis. 1997. - N 10 - P. 165-70.

232. Liu, J. Inhibiton of neutrophil apoptosis by verotoxin 2 derived from Escherichia coli 0157:H7 Text. / J. Liu, T. Akahoshi, T. Sasahana // Infect. Immun. 1999. - Vol. 67. - P. 6203-6205.

233. Lockman, H. Nucleotide sequence analysis of the A2 and B subunits of the Vibrio cholerae enterotoxin Text. / H. Lockman, J.B. Kaper // J. Biol. Chem. -1983. Vol. 258. - P. 13722-13726.

234. Luo, G. Tumor necrosis factor alpha binding to bacteria: evidence for a high-affinity receptor and alteration of bacterial virulence properties Text. / G. Luo, W. Niesei, R.A. Shaban // Infect. Immun. 1993. - Vol. 61. - P. 830-835.

235. Ma, L.P. Toll-like receptor 4 expression mediates the activation of platelets unduced by LPS Text. / L.P. Ma, J.X. Wei, J.X. Chang [et al.] / Microbios. -1997. Vol.90, N.364-365 - P. 1564-1568.

236. Mahmood, A. Neonatal sepsis high antibiotic resistance of the bacterial parhogens in neonatal intensive care unit in Karachi Text. / A. Mahmood, K.A. Karamat, T. Butt // J. Pak. Med. Assoc. 2002. - N 8. - P. 348-350.

237. Malaviya, R. Mast cell degranulation induced by type 1 fimbriated Escherichia coli in mice Text. / R. Malaviya, E.A. Ross, B.A. Jakschik // J. Clin. Invest. 1994. - Vol. 93. - P. 1645-1653.

238. Malaviya, R. Mast cell phagocytosis of Fim H expressing enterobacteria Text. / R. Malaviya, E.A. Ross, R. MacGregor // J. Immunol. 1994. - Vol. 152. -P. 1907-1914.

239. Mange, J.Ph. Adhesive properties of Enterobacter sakazakii to human epithelial and brain microvascular endothelial cells Text. / J.-Ph. Mange, R. Stephan, N. Borel [et al.] // BMC Microbiol. 2006. - N 6. - P. 1471-1480.

240. Mathias, S. Activation of the sphingomyelin signalling pathway in intact EL-4 cells and in a cell-free system by IL-lß Text. / S. Mathias, A. Younes, C.C. Kan// Science. 1993. - Vol. 259. -P. 519-522.

241. Matteoli, G. Role of IFN-gamma and IL-6 in a protective immune response to Yersinia enterocolitica in mice Text. / G. Matteoli, E. Fahl, P. Warnke // BMC Microbiol. 2008. -N 8. - P. 153-178.

242. Mazouari, E.L. F17-lake fimbriae from an invasive Eschirichia coli strain producing cytotoxic necrotizing factor type 2 toxins Text. / E.L. Mazouari, K.E. Osward, J.R. Hernalsteens// Infect. Immun. 1994. - Vol. 60. - P. 2800-2807.

243. McCormick, B. Salmonella typhimurium attachment to human intestinal epithelial monolayers: Transcellular signalling to subepithelial neutrophils Text. /

244. B. McCormick, S. Colgan, C. Delp-Archer // J. Cell Biol. 1993. - Vol. 123. - P. 895-907.

245. McGee, D.W. Transforming growth factor beta enhances IL-6 secretion by intestinal epithelial cells Text. / D.W. McGee, K.W. Beagley, W.K. Aicher // J. Immunol. - 1992. - Vol. 77. - P. 7-12.

246. Merrell, D.S. Frontal and stealth attack strategies in microbial pathogenesis Text. / D.S. Merrell, S. Folkow // Nature. 2004. - Vol.430. - P.250-256.

247. Michael, S.D. Whittam Pathogenesis and evolution of virulence in enteropathogenic and enterohemorrhagic Escherichia coli Text. / S.D. Michael, S.T. Whittam//J. Clin. Invest. 2001.-Vol. 107.-P. 539-548.

248. Mitochondrial and cell death Text. / A.P. Halestrap, E. Doran, J.P. Gillespie, A. O'Tool // Biochem. Soc. Trans. 2000. - Vol. 28. - P. 170-177.

249. Molecular cloning of an Escherichia coli plasmid determinant that encodes for the production of heat-stable enterotoxin Text. / M. So, H.W. Boyer, M. Betlach, S. Falkow // J. Bacteriol. 1976. - Vol. 128. - P. 463-472.

250. Molloy, A. Apoptosis, but not necrosis, of infected monocytes is coupled with killing of intracellular bacillus Calmette-Guerin Text. / A. Molloy, P.1.ochumroon-Vorapong, G. Kaplan // J. Exp. Med. 1994. - Vol. 180. - P. 14991509.

251. Moss, J. Mechanisms of activation of cyclase by cholerogen and E.coli heat-labile enterotoxin secretory diarrhea Text. / J. Moss, M. Vanghan // Infect. Immun. 1980. - N 5. - P. 107-126.

252. Multidrug-resistant bacteria in hospitalized children: a 5-year multicenter study Text. / J. Raymond, P. Nordmann, C. Doit [et al.] // Pediatrics. 2007. - N 4.-P. 798-803.

253. Mundy, R. Citrobacter rodentium of mice and man Text. / R. Mundy, T. T. MacDonald, G. Dougan [et al.] // Cell.Microbiol. 2005. - Vol.12, N7. - P. 1697-1706.

254. Murray, J.J. Regulation of neutrophil apoptosis by tumor necrosis factor-alpha: requirement for TNFR55 and TNFR75 for induction of apoptosis in vitro Text. / J.J. Murray, A.J. Barbara, S.A. Dunkleyet // Blood. 1997. - Vol. 90. -P. 2772-1783.

255. Nair, G.B. The heat-stable enterotoxins Text. / G.B. Nair, Y. Takeda // Microb. Pathog. 1998. - Vol. 24. - P. 123-131.

256. Nashar, T.O. Cross-linking of cell surface ganglioside GM1 induces the selective apoptosis of mature CD8+ T lymphocytes Text. / T.O. Nashar, N.A. Williams, T.R. Hirst // Int. Immunol. 1996. - N 8. - P. 731-736.

257. Nataro, J.P. Diarrheagenic Escherichia coli Text. / J.P Nataro, J.B. Kaper // Clin. Microbiol. Rev. 1998. -N 11. - P. 142-201.

258. Nathan, C. Reactive oxygen and nitrogen intermediates in the relationship between mammalian hosts and microbial pathogens Text. / C. Nathan, M. Shilon // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. - Vol. 97, N 16. - P. 8841-8848.

259. Neer, E.J. Heterotrimeric G proteins: organizers of trains -membrane signals Text. / E.J. Neer // Cell. 1995. - Vol. 80. - P: 249-257.

260. Neill, R.L. Synthesis of plasmid-coded heat-coded heat-labile enterotoxin in wild-type and hypertoxin in wild-type and hypertoxinogenic strains of

261. Esherichia coli and in other genera of Enterobacteriaceae Text. / R.L. Neill, E.M. Twiddy, R.K. Holmes / Infect. Immun. 1983. - Vol.41, N.3. - P. 1056-1061.

262. Nelson, K.L. Channels formed by subnanomolar concentration of the toxin aero-lysin trigger apoptosis of T lymphomas Text. / K.L. Nelson, R.A. Brodsky, J.T. Buckley // Cell Microbiol. 1999. - N 1. - P. 69-74.

263. Neonatal sepsis 1991-2001: prevalent bacterial agents and antimicrobial susceptibilities in Bahrain Text. / K.M. Bindayna, A. Jamsheer, E. Farid, G.A. Botta // Med. Princ. Pract. 2006. -N 2. - P. 131-136.

264. Neter, E. Enteropathogenicity: recent developments Text. / E. Neter // Klin. Wochenschr. 1982. - Bd. 60. - S. 699-701.

265. Niembuhr, K. Host cell-pathogen interactions in infectious disease Text. / K. Niembuhr, S. Dramsi // Cell Microbiology. 1999. - N1. - P. 79-84.

266. Nonpathogenic Escherichia coli strain Nissle 1917 inhibits signal transduction in intestinal epithelial cells Text. / N. Kamado, K. Maeda, N. Inoue [et al.] // Infect. Immun. 2008. - Vol. 76, N 1. - P. 214-220.

267. O'Connor, P.M. Role of the p53 tumor suppressor gene in cell cycle arrest and radiosensitivity of Burkitfs lymphoma cell lines Text. / P.M. O'Connor, J Jackman, D. Jondle // Cancer Res. 1993. - Vol. 53. - P. 4776-4780.

268. Occurrence of virulence associated properties in Enterobacter cloacae Text. / R. Keller, M.Z. Pedroso, R. Ritchmann, R.M. Silva // Infect. Immun. -1998. - Vol. 66, N 2. - P. 645-649.

269. Ogunshe, A.A.O. Bacterial profiles and consumer preference of some indigenous orally consumed herbal medications in Nigeria Text. / A.A.O. Ogunshe, T.R. Fasola, A. Egunyomi // J. Rural Tropical Pub. Health. 2006. - N5. - P. 27-33.

270. Old, D.C. A comparative immunoelectron microscopically study go fimbriae of Klebsiella and Enterobacter Text. / D.C. Old, R.A. Adegbola // System. Appl. Microbiol. 1984. - N 5. - P. 157-168.

271. Old, D.C. A new mannose-resistant haemaglutinin in Klebsiella Text. / D.C. Old, R.A. Adegbola // J. Appl. Bacterid. 1983. - Vol. 55. - P. 165-72.

272. Orrett, F.A. Bacteremia in children at a regional hospital in Trinidad Text. / F.A. Orrett, E. Changoor// Int. J. Infect. Dis. 2007. -N 2. - P. 145-151.

273. Osteomyelitis caused by Enterobacter cancerogenus infection following a traumatic injury Text. / S. Garazzino, A. Aprato, A. Maiello [et al.] // J. Clin. Microbiol. 2005. -N 3. - P. 1459-1461.

274. Paraje, M.G. An Enterobacter cloacae toxin able to generate oxidative stress and to provoke dose-dependent lysis of leukocytes Text. / M.G. Paraje, A.I. Barnes, I. Albesa // Intern. J. Medical Microbiol. 2005. - Vol. 295, N 2. - P. 109116.

275. Paraje, M.G. Pore formation, polymerization, hemolytic and leukotoxic effects of a new Enterobacter cloacae toxin neutralized by antiserum Text. / M.G. Paraje, A.J. Eraso, I. Albesa // Microbiol. Res. 2005. - Vol. 160, N 2. - P. 203211.

276. Pasare, S. Toll-like receptors: linking innate and adaptive immunity Text. // S. Pasare, R. Medzhitov // Microbes Infect. 2004. - Vol.60, N15 - P. 13821387.

277. Pathogenicity islands of virulent bacteria: structure, function and impact on microbial evolution Text. / J. Hacker, G. Oehler-Blum, I. Muhlodorfer, H. Tschape // Mol. Microbiol. 1997. - Vol. 23. - P. 1089-1097.

278. Paton, A.W. Enterobacter cloacae producing a Shiga like toxin II -related cytotoxin associated with a case of hemolytic syndrome Text. / A.W. Paton, J.C. Paten // J. Clin. Microbiol. - 1996. - Vol. 34, N 2. - P. 463-465.

279. Paton, J.C. Instability of a shiga toxin type 2 gene in Enterobacter cloacae Text. / C.J. Paton, A.W. Paton // J. Clin. Microbiol. 1998. - Vol. 35, N 7. - P. 1917.

280. Paton, J.C. Pathogenesis and Diagnosis of Shiga Toxin Producing Escherichia coli Infections Text. / C.J. Paton, A.W. Paton // Clin. Microbiol. Rev. 1998. -N 11. - P. 450-479.

281. Pei-Ching, Lin Characteristics of nosocomial bacterial meningitis in children Text. / Pei-Ching Lin, Nan-Chang Chiu, Wen-Chen Li // J. Microbiol. Immunol. Infect. 2004. - Vol. 37. - P. 35-38.

282. Perlman, S.E. Risk factor for late-onset health care-associated bloodstream infections in patients in neonatal intensive care units Text. / S.E. Perlman, L. Saiman, E.L. Larson [Text] // Am. J. Infect. Control. 2007. - Vol. 35, N 2. - P. 177-182.

283. Pickett, C.L. Genetics of Type Ha heat labile enterotoxin of Escherichia coli: operon fusion, nucleotide sequence, and hybridization studies Text. / C.L. Pickett, D. L. Weinstein, R.K. Holmes // J. Bacteriol. - 1987. - Vol. 169, N 11. - P. 5180-5187.

284. Pier, G. Role of mutant CFTR in hypersusceptibility of cystic fibrosis patients to lung infections Text. / G. Pier, M. Grout, T. Zaidi // Science. 1996. -Vol. 271.-P. 64-67.

285. Prada, J. Detection of Ecsherichia coli alha haemolysin genes and their expression in a human faecal of Enterobacter cloacae Text. / J.Prada, L. Beutin // FEMS Microbiol. Lett. -1991. - Vol. 63, N 1. - P. 111-114.

286. Prasad, G.S. Refined structures of three crystal forms of toxic shock syndrome toxin-1 and of a tetramutant with reduced activity Text. / G.S. Prasad, R. Radhakrishnan, D.T. Mitchel // Protein. Sei. 1997. -N 6. - P. 1220-1227.

287. Presence of endotoxin in powdered infant formula milk and the influence of endotoxin and Enterobacter sakazakii on bacterial translocation in the infant rat

288. Text. / S. Townsend, C.J. Barron, C. Loc-Carrilo, C. Forsythe // Food Microbiol. -2007. Vol. 24, N 1. - P. 67-74.

289. Production of Escherichia coli group I-like heat-labile enterotoxin by Enterobacteriaceae isolated from environmental water Text. / A. Jolivet-Gougeon, T. Tamanai—Shacoori, F. Sauvager, M. Cormier // Microbios. -1997.-Vol. 90.-P. 209-218.

290. Rabsch, W. The specificity of bacterial siderophore receptors probed by bioassays Text. / W. Rabsch, G. Winkelmann // Biol. Met. 1991. - Vol. 4, N 4. -P. 244-250.

291. Raghav, M. Purification and characterization of Enterobacter sakazakii enterotoxin Text. / M. Raghav, P.K. Aggarwal / J. Immunol. 2007. - Vol.53, N.6 - P.750-755.

292. Rago, J.V. Mechanisms of pathogenesis of staphylococcal and streptococcal superantigens Text. / J.V. Rago, P.M. Schlievert // Curr. Top. Microbiol. Immunol. 1998. - Vol. 225. - P. 81-97.

293. Raines, M.A. Sphigomyelinase and ceramide activate mitogen-activated protein kinase in myeloid HL-60 cells Text. / M.A. Raines, R.N. Kolesnick, D.W. Golde // Biol. J. Chem. 1993. - Vol. 268 - P. 14572-14575.

294. Ralph, A. Escherichia coli heat-stable enterotoxins, guanilins, and their receptors: What are they and what do they do? Text. / A. Ralph, R. Gianella, A. Ralph//J. Lab. Clin. Med. 1993. - Vol. 125. - P. 173-181.

295. Regulated production of the chemokine CCL28 in human colon epithelium Text. / H. Ogawa, M. Iimura, L. Eckmann, M.F. Kagnoff // Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 2004. - Vol. 87. - P. 1062-1069.

296. Reise, C.S. The role of dendritic cells in the induction and regulation of immunity to microbial infection Text. / C.S. Reise, A. Sher, P. Kaye // Curr. Opin. Immunol. 1999. - N 4. - P. 392-399.

297. Requirement of endogenous tumor necrosis factor/cachectin for recovery from experimental peritonitis Text. / B. Echtenacher, W. Falk, D.N. Mannel, P.N. Krammer // J. Immunol. 1990. - Vol. 145, N 11. - P. 3762-3766.

298. Resistans of aminoglycocides to bacteria in the Klebsiella, Enterobacter and Serracia groups Text. / A. Amor, F. Barguelli, A. Bouziani [et al.] // Tunis Med. 1992. - Vol. 70, N 1. - P. 35-38.

299. Retrospective analysis of bacteremia because of Enterobacter cloacae compared with Escherichia coli bacteremia Text. / D. Juanjuan, Z. Zhiyong, L. Xiaoju [et al.] // Int. J. Clin. Pract. 2007. - N 4. - P. 583-588.

300. Reyrat, J.M. When microbes and cells meet Text. / J.M. Reyrat, J.L. Telford // Trends. Microbiol. 1999. - N 7. - P. 187-190.

301. Roth, K.A. Epistatic and independent functions of caspase-3 and Bcl-XL in developmental programmed cell death Text. / K.A. Roth, C.Y. Kuan, T.F. Haydar // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 2000. - Vol. 97. - P. 466-471.

302. Saevarsdottir, S. The poteinal role of mannan-binding lectin in the clearance of self-components including immune complexes Text. / S. Saevarsdottir, T. Vikingsdottir, H. Valdimarsson // Scand. J. Immunol. 2004. -Vol.60,N1-2.-P. 23-29.

303. Salmonella typhimurium secreted invasion determinants are homologous to Shigella Ipa proteins Text. / C. Hueck, M. Hantaan, V. Bajaj [et al.] // Mol. Microbiol. 1995. - Vol. 18. - P. 479-490.

304. Salvesen, G.S. Caspase activation: The indused-proximity model Text. / G.S. Salvesen, V.M. Dixit // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1999. - Vol. 96. - P. 10694-10697.

305. Sanders, W.E. Enterobacter spP. : Pathogens Poised to Flourish at the Turn of the Century Text. / W.E. Sanders, C.C. Sanders // Clin. Microbiol. Rev. -1997. Vol. 10, N 2. - P. 220-241.

306. Schmidt, H. Pathogenicity islands in bacterial pathogenesis Text. / H. Schmidt, M. Hensel // Clin. Microboil. Rev. 2004. - Vol. 17, N 1. - P. 14-56.

307. Schulte, R. Yersinia enterocolitica-Induced Interleukin-8 Secretion by Human Intestinal Epithelial Cells Depends on Cell Differentiation Text. / R. Schulte, B.A. Ingo // Infect. Immun. 1998. - N 3. - P. 1216-1224.

308. Sears, C.L. Enteric bacterial toxins: mechanisms of action and linkage to intestinal secretion Text. / C.L. Sears, J.B. Kaper // Microbiol. Rev. 1996. - Vol. 60.-P. 167-215.

309. Seoane, A. Nucleotide sequence of the ampC-ampR region from the chromosome of Yersinia enterocolitica Text. / A. Seoane, M.V. Francia, J.M. Garcia Lobo // Antimicrob. Agents Chemother. 1992. - Vol. 36, N 5. - P. 10491052.

310. Sequential morphologic events during apoptosis of human neutrophils: modulation by lipoxygenase derived eicosanoids Text. / M.J. Hebert, T. Takano, H. Holthofer, H.R. Brady // J. Immunol. 1996. - Vol. 157. - P. 3105-3115.

311. Shapiro, J.A. Pattern and control in bacterial colonies Text. / J.A. Shapiro // Sei. Progr. 1994. - Vol. 76. - P. 399-424.

312. Shelley, N.L. Hartland Contribution of FliC to Epithelial Cell Invasion by Enterohemorrhagic Escherichia coli OH3:H21 Text. / N.L. Shelley, L. Badea, V. Bennett-Wood // Infect. Immun. 2006. - N 12. - P. 6999-7004.

313. Shutze, S. TNF activated NF-kB by phospholipase C-induced 'acidic' sphingomyelin breakdown Text. / S. Shutze, K. Potthoff, T. Machleidt // Cell. -1992.-Vol. 71.-P. 765-766.

314. Site of action of a Vero toxin (VT2) from Escherichia coli 0157:147 and Shiga toxin in eucaryotic ribosomes Text. / Y. Endo, K. Tsurugi, T. Yutsudo [et al.] // Eur. J. Biochem. 1988. - Vol. 171. - P. 45-50.

315. Sixma, T.K. Refined structure of Escherichia coli heat-labile enterotoxin, a close relative of cholera toxin Text. / T.K. Sixma, K.H. Kalk, B.A. van Zanten // J. Mol. Biol. 1993. - Vol. 230. - P. 890-928.

316. Smarda J. Occurrence of strains producing specific antibacterial inhibitory agents in five genera of Enterobacteriaceae Text. / J. Smarda, D. Smajs, H. Lhotova, D. Dedicova / Curr. Microbiol. 2007. - Vol.54, N.2: - P.l 13-118.

317. So, M. Nucleotide sequence of transposon Tnl681 encoding a heat- stable toxin (ST) and its identification in enterotoxigenic Escherichia coli strains Text. /

318. M. So, B.L. McCarthy // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1980. - Vol. 77. - P. 40114015.

319. Song, L. Structure of Staphylococcal alpha-hemolysin, a heptameric transmembrane pore Text. / L. Song, M.R. Hobaugh, C. Shustak // Science.1996. Vol. 274. - P. 1859-1866.

320. Songer, J.G. Bacterial phospholipases and their role in virulence Text. / J.G. Songer// Trends Microbiol. 1997. -N 5. - P. 156-161.

321. Soong, G. TLR2 is mobilized into an apical lipid raft receptor complex to signal infection in airway epithelial cells Text. // G. Soon, B. Reddy, S. Sokol [Et al.] /J.Clinic.Invest. 2007. - Vol.54, N.2. -P. 1482-1489.

322. Soriani, M. Escherichia coli enterotoxin B subunit trigger apoptosis of CD8+ T cells by activating transcription factor c-Myc Text. / M. Soriani, N.A. Williams, T.R. Hirst // Infect. Immun. 2001. - Vol. 69. - P. 4923-4930.

323. Sousa, C.R. In vivo microbial stimulation induced rapid CD40L-independent production of IL-12 by dendritic cells and their re-distribution to T cell areas Text. / C.R. Sousa, S. Hieny, T. Scharton-Kersten // J. Exp. Med.1997.-Vol. 186.-P. 1819-1829.

324. Sparwasser, T. Bacterial DNA and immunostimulatory CpG oligonucleotides trigger maturation and activation of murine dendritic cells Text. / T. Sparwasser, E.S. Koch, R.M. Vabulaset // Eur. J. Immunol. 1998. - Vol. 28. -P. 2045-54.

325. Sphingomyelin, glycosphingolipids and ceramide signalling in cells exposed to P fimbriated Escherichia coli Text. / M. Hedlund, A. Nilsson, R.D. Duan, C. Svanborg // Mol. Microbiol. 1998. - Vol. 29. - P. 1297-1306.

326. SseL Is a Salmonella-Specific Translocated Effector Integrated into the SsrB-Controlled Salmonella Pathogenicity Island 2 Type III Secretion System Text. / B.K. Coombes, M.J. Lowden, J.L. Bishop [et al.] // Infection Immunity. -2007.-N2.-P. 574-580.

327. Steiman, R.M. The dendritic cells system and its role in immunogenicity Text. / R.M. Steiman // Ann. Rev. Immunol. -1991. N 9. - P. 271-296.

328. Stein, P.E. The crystal structure of pertussis toxin Text. / P.E. Stein, A. Boodhoo, G.D. Armstrong // Structure. 1994. - N 2. - P. 45-57.

329. Steller, H. Artificial death switches: Induction of apoptosis by chemically induced caspase multimerization Text. / H. Steiler // Proc. Natl. Acad. Sei. USA.1998. Vol. 95. - P. 5421-5422.

330. Stephan, R. Enterobacter turicensis sP. nov. and Enterobacter helveticus sP. nov., isolated from fruit powder Text. / R. Stephan, S. Van Trappen, I. Cleenwerck // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2007. - N 4. - P. 820-826.

331. Stevens, D.L. Superantigens: their role in infectious diseases Text. / D.L. Stevens // Immunol. Invest. 1997. - Vol. 26. - P. 275-281.

332. Stockwin, L.H. Dendritic cells: Immunological sentinels with a central role in health and disease Text. / L.H. Stockwin, D. McGonagle, I. Martin, E. Blair // Immunol. Cell Biol. 2000. - Vol. 78. - P. 91-103.

333. Strasser, A. Apoptosis signalling Text. / A. Strasser, L. O'Connor, V.M. Dixit // Ann. Rev. Biochem. 2000. - Vol.69. - P. 217-245.

334. Studies of bacterial, rotaviral and Cryptosporidium etiology of acute diarrheal dises in hospitalized children Text. / S. Constanriniu, G. Avram, A. Ambarus, O. Zavate // Roum. Arch. Microbiol. Immunol. 1991. - Vol. 50, N1. -P. 53-60.

335. Suh, J.K. Shiga toxin attacks bacterial as effectively as eukaryotic ribosomes Text. / J.K. Suh, C.J. Hovde, J.D. Robertus // Biochemistry. 1998. -Vol. 37.-P. 9394-9398.

336. Sun, M. A new class of reverse signaling costimulators belongs to the TNF family Text. // M.Sun, P.J.Fank / J.Immunol. 2007. - Vol. 179. - P.4307-4312.

337. Svanborg, C. Cytokine responses during mucosal infections: role in disease pathogenesis and host defence Text. / C. Svanborg, G. Gobaly, M. Hedlund // Curr. Opin. Microbiol. 1999. -N 2. - P. 99-105.

338. Svingen, P.A. Evalution of Apaf-1 and procaspases -2, -3, -7, -8, and -9 as potential prognostic markers in acute leukemia Text. / P.A. Svingen, J.E. Karp, S. Krajewski // Blood. 2000. - Vol. 96. - P. 3922-3931.

339. Sylvia, S.M. Acquisition and maintenance of enterotoxin plasmids in with-type strains of E.coli Text. / S.M. Sylvia, P.D. Nigel, B. Rowe // J. Gen. Microbiol.- 1983. Vol. 129. -P. 3111-3120.

340. Szeto, C.C. Enterobacteriaceae peritonitis complicating peritoneal dialysis: a review of 210 consecutive cases Text. / C.C. Szeto, V.C. Chow, K.M. Chow // Kidney Int. 2006. - N 7. - P. 1245-1452.

341. Takano, M. Protective roles of T cells and interleukin-15 in Escherichia coli infection in mice Text. / M. Takano, H. Nishimura, Y. Kimura // Infect. Immun. 1998. - Vol. 66. - P. 3270-3278.

342. Talati, A.J. Role of bacterial DNA in macrophage activation by group B streptococci Text. / A.J. Talati, H.J. Rim, Y.-In Kim // Microb. Inf. 2008. - N 10.-P. 1106-1113.

343. Tampakaki, A.P. Conserved features of type III secretion Text. / A.P. Tampakaki, V.E. Fadouloglou, A.D. Gazi // Kokk. Cell. Microbiol. 2004. - Vol. 9,N6.-P. 805-816.

344. The pathogen spectrum and its resistance behavior in children with urinary tract infections in Angola Text. / W. Eggert, S. Eggert, E. Ferriera, L. Bernardion // Kinderarztl. Prax. 1992. - Vol. 60, N 2. - P. 46-48.

345. The pattern of respiratory infection in patients with lung cancer Text. / S. Kohno, H. Koga, M. Oka [et al.] // Tokohu J. Exp. Med. 1994. - Vol. 173, N 4. -P. 405-411.

346. Thirumalai, K. IpaB, a Shigella flexneri invasin, colocalizes with interleukin 1-converting enzyme in the cytoplasm of macrophages Text. / K. Thirumalai, K.S. Kim, A. Zychlinsky // Infect. Immun. 1997. - Vol. 65. - P. 787793.

347. Townsend, S. Virulence studies of Enterobacter sakazakii isolates associated with a neonatal intensive unit outbreak Text. / S. Townsend, E. Hurrell, S. Forsythe // BMC Microbiology. 2008. - N 8. - P. 64-72.

348. Tyas, L. Rapid caspase-3 activation during apoptosis revealed using fluorescence resonance Energy transfer Text. / L. Tyas, V. A. Brophy, A. Pope // EMBO. 2000. -N 1. - P. 266-270.

349. Uematsu, S. Toll-lake receptorsand innate immunity Text. / S. Uematsy, S. Akira / J. Mol. Med. 2006. - Vol.84, N.9 - P.712-725.

350. Vazquez-Torres, A. Extraintestinal dissemination of Salmonella by CD 18-expressing phagocytes Text. / A. Vazquez-Torres, A.J. Baumler, S. Falkow // Nature. 1999. - Vol. 21. - P. 804-808.

351. Ville, E. Characterization of Salmonella induced Cell death in human macrophage - like THP - 1 cell Text. / E. Valle, D.G. Guiney // Infec. Immun. -2005. - Vol. 73, N 5. - P. 2835-2840.

352. Walev, S. Poreforming toxins trigger shedding of receptors for interleukine-6 and lipopolysacharide Text. / S. Walev, P. Vollmer, M. Palmer // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1996. - Vol. 93. - P. 7882-7887.

353. Wallach, D. The yeast two-hibrid screening technique and its use in the study of protein-protein interactions in Apoptosis Text. / D. Wallach, M.P. Boldin, A.V. Kovalenko // Curr. Opin. Immunol. 1998. - N 10. - P. 131-136.

354. Weymer, A. Chloride secretory mechanism induced by prostaglandin El in a colonic epithelial cell line Text. / A. Weymer, P. Huott, W. Liu // J. Clin. Invest. 1985. - Vol. 76. - P. 1828-1836.

355. Wheeler, J.G. Microbial and pharmacological induction of neutrophil dysfunction Text. / J.G. Wheeler, J.S. Amramson. Oxford, 1993. - P. 139-181.

356. Wilson, M. Bacterial perturbation of cytokine networks Text. / M. Wilson, R. Seymour, B. Henderson // Infect. Immun. 1998. - Vol. 66. - P. 2401-2409.

357. Witko-Sarsat, V. Neutrophils: molecules, fiinctions~and pathophysiological aspects Text. / V. Witko-Sarsat, P. Rieu, B. Descamps-Latscha // Labor. Investig. -2000.-Vol. 80.-P. 617-653.

358. Wolf, M.A. Antibiotic therapy for enterobacter meningitis a retrospective review of 13 episodes and review of literature Text. / M.A. Wolf, C.L. Yoing, R: Ramphal // Clin. Infect. Dis. -1993. Vol. 16, N 6. - P. 772-777.

359. Yamamoto, T. Evolutionary origin of pathogenic determinants in enterotoxigenic Escherichia coli and Vibrio cholerae 01 Text. / T. Yamamoto, T. Gojobori, T. Yokota// J. Bacteriol. 1987. - Vol. 169. - P. 1352-1357.

360. Yang, J. Identification of proteins involved in infectivity and enterotoxin production in Enterobacter sakazakii Text. /J. Yang, L. Wei, M. Gu [et al.] // J. Rapid Methods Automat. Microbiol. 2009. - Vol.17, N2. - P. 164-181.

361. Yang, Y. Regulation of programmed cell death following T cell activation in vivo Text. / Y. Yang, D. Kim, C.G. Fathman // Inter. Immun. 2000. - N 10. -P. 175-183.

362. Yankelevich, B. Differential induction of programmed cell death in CD8 (1) and CD4 (1) T cells by the subunit of cholera toxin Text. / B. Yankelevich, V.A. Soldatenkov, J. Hodgson // Cell Immunol. 1996. - Vol. 168. - P. 229-234.

363. Yu, Wen-Liang Extended-spectrum beta-lactamases in Taiwan: epidemiology, detection, treatment and infection control Text. / Wen-Liang Yu, Yin-Ching Chuang, Jan Walther-Rasmussen // J. Microbiol. Immunol. Infect. -2006. Vol. 39. - P. 264-277.

364. Zychlinsky, A. In vivo apoptosis in Shigella flexneri infections Text. / A. Zychlinsky, K. Thirumalai, J. Arondel // Infect. Immun. 1996. - Vol. 64. - P. 5357-5365.

Информация о работе

Ахтариева, Айгуль Атласовна
доктора медицинских наук
Челябинск, 2010
ВАК 03.02.03

Диссертация

Иммунобиологические свойства термолабильного энтеротоксина бактерий рода Enterobacter в системе взаимодействия "патоген-хозяин" - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Иммунобиологические свойства термолабильного энтеротоксина бактерий рода Enterobacter в системе взаимодействия "патоген-хозяин" - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы