Иммунобиологическая характеристика препарата "Микростим" на основе метаболитов лактобактерий

Чистохина, Лариса Павловна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Иммунобиологическая характеристика препарата "Микростим" на основе метаболитов лактобактерий
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Иммунобиологическая характеристика препарата "Микростим" на основе метаболитов лактобактерий"

На правах рукописи

ЧИСТОХИНА Лариса Павловна

ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕПАРАТА «МИКРОСТИМ» НА ОСНОВЕ МЕТАБОЛИТОВ ЛАКТОБАКТЕРИЙ

03.00.07 Микробиология 14.00.36 Аллергология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Пермь - 2004

Работа выполнена в филиале ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ «Пермское НПО «Биомед»

Научные руководители:

кандидат медицинских наук Несчисляев Валерий Александрович

кандидат биологических наук Сафонова Галина Михайловна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Горовиц Эдуард Семенович кандидат медицинских наук, доцент Шилов Юрий Иванович

Ведущая организация:

Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских и иммунобиологических препаратов имени Л.А. Тарасевича, Москва

Защита состоится « 24 » С/ЮНЯ 2004 г. в на заседании

диссертационного совета Д 004.019.01 в Институте экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН по адресу: 614081, г. Пермь, ул. Голева, д. 13. Факс (3422) 44-67-11.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН.

Автореферат разослан «

» 2004 г.

Ученый секретарь диссеотапионного совета.

Ившина И.Б.

ОБШДЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Современные условия жизнедеятельности человека характеризуются постоянным влиянием неблагоприятных факторов, интенсивность воздействия которых часто превышает компенсаторные возможности экологической системы «организм хозяина - его микрофлора» (Калмыкова, 2001; Шендеров, 2002). В связи с этим особую актуальность приобретают исследования в области создания препаратов, предназначенных для поддержания и восстановления симбиотических микробиоценозов (Бондаренко, Воробьев, 2004; Elmer, 2001; Chermesh, Eliakim, 2002). При разработке пробиотиков нового поколения в качестве перспективных рассматривают препараты на основе биологически активных метаболитов бактерий - представителей нормальной микрофлоры организма человека (Вахитов, Петров, 2002). Экзометаболиты индигенных бактерий стимулируют рост резидентной микрофлоры, подавляют патогенные микроорганизмы, способствуют регенерации эпителия слизистой оболочки и оказывают иммуномодулирующее действие (Шендеров, 1998; Воробьев, Лыкова, 1999; Orrhage, Nord, 2000; Perdigon et al., 2001). Из пробиотиков этой группы в России до настоящего времени применялся только импортный лекарственный препарат «Хилак форте», содержащий продукты жизнедеятельности четырех видов микроорганизмов, в том числе лактобактерий (Леонтьева и др., 2002; Грачева, Партии, 2003).

Дисбактериозы и кишечные инфекции неизменно сопровождаются нарушением иммунного статуса (Куваева, Ладодо, 1991; Бурмистрова, 1997; Федотова и др., 2001). Поэтому в комплексную терапию данных патологических состояний рекомендуют включать иммунокорригирующие препараты (Горская, 1994; Барановский, Кондрашина, 2000). Несмотря на интенсивное развитие исследований, направленных на создание новых иммуномодулирующих средств, в широкой клинической практике количество используемых иммуномодуляторов, в том числе бактериального происхождения, относительно невелико (Караулов и др., 2000; Маркова, Чувиров, 2001; Мосиенко и др., 2002; Хаитов, Пинегин, 2003).

В связи с известной биологической активностью метаболитов лактобактерий (Бондаренко и др., 1998; McAuliffe et al., 2001) и потребностью практической медицины в препаратах, обладающих пробиотическим и иммуномодулирующим действием, является актуальной разработка нового лекарственного средства на основе продуктов жизнедеятельности лактобактерий и оценка его бактерио- и иммунотропной активности.

Цель настоящего исследования - получение и изучение иммунобиологических свойств нового

J !дНАЯ|

Основные задачи исследования:

1. Разработать эффективный способ выделения низкомолекулярных метаболитов лактобактерий. Создать на их основе препарат «Микростим».

2. Изучить острую, хроническую токсичность и аллергенность препарата «Микростим».

3. Исследовать бактериотропное (пробиотическое и антибактериальное) действие препарата «Микростим».

4. Оценить иммуномодулирующее действие препарата «Микростим» в экспериментах in vivo и in vitro.

Научная новизна. Разработан и запатентован способ выделения и стабилизации метаболитов лактобактерий (патент на изобретение РФ № 2224018, приоритет от 21.11.2001 г.). По разработанному способу впервые получен препарат «Микростим». Охарактеризованы его физико-химические свойства и проведена оценка безопасности, включающая характеристику острой, хронической токсичности и аллергенных свойств. Изучено действие препарата «Микростим» на бактерии нормофлоры и патогенные микроорганизмы. Разработан оригинальный метод оценки антибактериального действия пробиотиков, содержащих бактериальные метаболиты, на основе реакции угнетения микробиолюминесценции (патент на изобретение РФ № 2187801, приоритет от 10.07.2000 г.). Исследовано иммуномодулирующее действие препарата «Микростим».

Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные данные расширяют существующее представление о возможности использования метаболитов лактобактерий в качестве сырьевого источника для получения лекарственных препаратов, обладающих пробиотической и иммуномодулирующей активностью. Показано стимулирующее влияние препарата «Микростим» на рост, активность кислотообразования и антагонистическую активность лакто- и бифидобактерий. Выявлено антибактериальное действие препарата «Микростим» на патогенные и условно-патогенные микроорганизмы и способность повышать их антибиотикочувствительность. Охарактеризовано влияние препарата «Микростим» на показатели гуморального иммунного ответа, активность фагоцитирующих клеток и пролиферативную активность лимфоцитов. Проведена оценка иммунотропной активности препарата «Микростим» в условиях экспериментального иммунодефицита. Практическая значимость работы заключается в том, что получен новый препарат, расширяющий спектр лекарственных средств для нормализации микроэкологического и иммунного статуса человека. Способ его изготовления из культуральной жидкости лактобактерий штамма Lactobacillus plantarum 8P-A3 является составной частью комплексного технологического процесса в производстве пробиотиков.

На препарат «Микростим» разработана нормативная документация (экспериментально-производственный регламент, проект фармакопейной статьи предприятия, проект инструкции по применению).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Новый препарат «Микростим», содержащий низкомолекулярные метаболиты лактобактерий, нетоксичен, не обладает аллергенными свойствами, стабилен при контакте с секретами желудочно-кишечного тракта и в процессе хранения.

2. Препарат «Микростим» обладает стимулирующим влиянием на рост и функциональную активность лакто- и бифидобактерий, антибактериальным действием по отношению к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам и повышает их чувствительность к антибиотикам.

3. Иммунотропная активность препарата «Микростим» характеризуется стимуляцией фагоцитарной активности нейтрофилов и макрофагов, гуморального иммунного ответа, способностью восстанавливать сниженные показатели иммунитета при экспериментальном иммунодефиците и влиянием на пролиферативную активность Т-лимфоцитов.

Апробация работы и публикации. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на Юбилейной межвузовской научно-практической конференции «Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы», Пермь, 2000; Всероссийской конференции «Актуальные вопросы разработки, производства и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов», Томск, 2001; Пленарном заседании Пермского филиала Всероссийского научно-практического общества микробиологов, эпидемиологов и паразитологов, Пермь, 2001; Международной научно-практической конференции «Пробиотические микроорганизмы - современное состояние вопроса и перспективы использования», Москва, 2002; Всероссийской научной конференции «Актуальные вопросы вакцинно-сывороточного дела в XXI веке», Пермь, 2003; VII Всероссийском научном Форуме с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге», Санкт-Петербург, 2003; Всероссийской научной конференции молодых ученых «Актуальные вопросы инфекционной патологии человека, клинической и прикладной иммунологии», Уфа, 2004. Диссертация апробирована на расширенном заседании научно-технического совета филиала ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ «Пермское НПО «Биомед» и расширенном заседании научной проблемной комиссии по микробиологии, аллергологии и иммунологии Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН и рекомендована к защите.

По теме диссертации опубликовано 14 печатных работ. Полученные результаты исследования защищены двумя патентами на изобретения РФ.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 176 страницах, содержит 36 таблиц, 18 рисунков и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, четырех глав экспериментальных исследований, обсуждения, выводов, списка литературы, включающего 287 источников, из них 147 отечественных и 140 иностранных, трех приложений.

Связь работы с научными программами. Диссертационная работа выполнена на базе лаборатории пробиотиков в соответствии с планом НИР НИИ вакцин и сывороток филиала ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ «Пермское НПО «Биомед» (номер госрегистрации 01.200.108829).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В экспериментальных исследованиях использовали восемь производственных штаммов лакто- и бифидобактерий из коллекции специализированной лаборатории ГИСК им. Л.А. Тарасевича: Lactobacillus plantarum 8P-A3, L.fermentum 90T-C4, L. acidophilns К3Ш24, L. acidophilns NK,, L. acidophilus 100АШ, Bifidobacterium bifidum 1, B. bifidum 791, B. adolescentis MC-42. Для оценки биологической активности получены фильтраты и ультрафильтраты культуральных жидкостей (КЖ) данных штаммов. По оригинальной технологии из КЖ лактобактерий штамма L. plantarum 8P-A3 изготовлено 7 экспериментально-производственных серий препарата «Микростим». Бактериотропное действие препарата «Микростим» оценивали на 4 штаммах лакто и бифидобактерий и 26 штаммах патогенных и условно-патогенных микроорганизмов музейных и выделенных из клинического материала в лечебных учреждениях г. Перми. Общетоксическое действие, аллергенную и иммуномодулирующую активность препарата «Микростим» изучали на 138 самцах и 60 самках белых беспородных мышей массой 18-22 г; 26 самцах и 10 самках белых беспородных крыс массой 150-250 г; 33 пестрых морских свинках обоего пола массой 200-250 г, полученных из отделения подопытных животных «Пермского НПО «Биомед». Все исследования проводили в соответствии с международным соглашением о соблюдении правил гуманного отношения к животным. В экспериментах in vitro использовали лейкоциты периферической венозной крови, полученной от 20 практически здоровых людей добровольцев в возрасте от 25 до 60 лет.

Физико-химические свойства препарата «Микростим» изучали с использованием методов, изложенных в XI Государственной Фармакопее и Фармакопейной статье 42-344ВС-90 «Физико-химические, химические, физические и иммунохимические методы контроля медицинских

иммунобиологических препаратов». Анализ фракционного состава проводили методом жидкостной хроматографии низкого давления с использованием прибора «LKB» (Швеция). УФ-спектр исследовали на спектрофотометре СФ-46 в диапазоне длин волн 240-350 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм при разведении препарата в 50 раз водой очищенной. Элементный состав изучали методом рентгено-флюоресцентной спектроскопии в отделе охраны природы ЕНИ при 111 У и в ОАО «Уральская центральная лаборатория».

Острую и хроническую токсичность препарата «Микростим» исследовали в соответствии с требованиями Фармакологического комитета МЗ РФ (Москва, 1992, 2003). Опыты по изучению острой токсичности выполняли на 120 мышах обоего пола массой 18-20 г. Препарат вводили однократно внутрижелудочно, подкожно и внутрибрюшинно в дозах 50, 25 и 25 мл/кг массы тела животного соответственно. Оценивали внешний вид животных, поведенческие реакции и прирост массы тела. Через 14 суток мышей забивали и проводили патоморфологический и гистологический анализ внутренних органов на базе КМСЧ № 1 г. Перми совместно с к.м.н. Ю.А. Горбуновым. Для определения LD50 жидкий препарат лиофильно высушивали. Полученную сухую массу растворяли в 0,9% растворе натрия хлорида и вводили мышам внутрибрюшинно и per os в восьми дозах (от 2000 до 30000 мг/кг). Средне-смертельную дозу рассчитывали по методу Кербера в модификации Ашмарина (Ашмарин, Воробьев, 1962). Определение класса токсичности проводили по классификации К.К Сидорова (1973). Хроническую токсичность препарата «Микростим» исследовали на 20 крысах обоего пола с исходной массой тела 150-200 г. Препарат вводили per os ежедневно 1 раз в сутки натощак с помощью зонда в течение 3 месяцев в дозе 1,4 мл/кг. Оценивали внешний вид, поведенческие реакции, прирост массы тела, функциональное состояние ЦНС в тесте «открытое поле», показатели общего и биохимического анализа крови и мочи. Данные регистрировали до введения препарата (исходный уровень), далее с интервалом в 2-4 недели и по окончании исследования. Одновременно с оценкой общетоксического действия изучено влияние препарата «Микростим» на иммунную систему по показателям фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови, которые исследовали в начале и в конце эксперимента. Через 3 месяца от начала введения препарата «Микростим» крыс забивали, определяли массовый коэффициент внутренних органов и проводили их патоморфологическое и гистологическое исследование. Аллергенные свойства препарата «Микростим» изучали в соответствии с методическими рекомендациями Фармакологического комитета МЗ РФ (Москва, 1999) в конъюнктивальной пробе на морских свинках, реакции

гиперчувствительности замедленного типа на мышах и непрямой реакции дегрануляции тучных клеток крыс in vitro.

Динамику роста культуры лакто и бифидобактерий оценивали по изменению оптической плотности бактериальной взвеси в кювете с толщиной поглощающего слоя 3 мм при 540 нм на фотоэлектроколориметре КФК-2. Изучение активности кислотообразования и определение количества жизнеспособных клеток в бактериальных культурах проводили регламентированными методами (ФС 42-0054-00 «Лактобактерин сухой», ФС 42-3947-00 «Бифидумбактерин сухой», ФС 42-3365-00 «Колибактерин сухой»). Антагонистическую активность лактобактерий исследовали методом отсроченного антагонизма на плотной питательной среде. Минимальную подавляющую и минимальную бактерицидную концентрации (МПК и МБК) препарата «Микростим» по отношению к патогенным микроорганизмам определяли методом разведений в жидкой и плотной питательной средах (Биргер, 1982). Влияние препарата «Микростим» на метаболизм энтеробактерий оценивали по степени угнетения микробиолюминесценции тест-штамма согласно методическим рекомендациям, утвержденным Государственным комитетом санэпиднадзора России (Москва, 1996). Использовали препарат МИТ (микробиолюминесцентный индикатор токсичности), изготовленный в ИЭГМ УрО РАН на основе генно-инженерного штамма Escherichia coli Z-905 lum+ (Красноярский институт биофизики СО РАН). Исследования выполнены совместно с Заслуженным деятелем науки РФ, д.м.н., проф. Р.А. Пшеничновым. Чувствительность патогенных микроорганизмов к антибиотикам определяли дискодиффузионным методом в соответствии с методическими указаниями (Москва, 1983). Препарат «Микростим» добавляли в питательную среду в концентрации, не оказывающей бактериостатического действия на исследуемые микроорганизмы (10% от объема среды). Для оценки стабильности препарата в секретах желудочно-кишечного тракта «Микростим» смешивали с соком желудочным натуральным «Эквин» («Иммунопрепарат», г. Уфа) или желчью медицинской консервированной (ОАО «Омский мясокомбинат») в соотношении 1:1 и инкубировали при 37°С в течение 2 ч, затем оценивали пробиотическое действие препарата «Микростим» по влиянию на активность кислотообразования и антагонистическую активность лактобактерий.

Исследование иммуномодулирующей активности препарата «Микростим» in vivo проводили в соответствии с «Методическими рекомендациями по оценке иммунотоксических свойств фармакологических средств» (Москва, 1992) и методическими указаниями Фармакологического комитета МЗ РФ «Экспериментальное изучение иммунотропной активности фармакологических препаратов» (Москва, 1999) на моделях системного

иммунного ответа и иммунного ответа на фоне индуцированной циклофосфамидом иммуносупрессии. В экспериментах использовали мышей самцов. Препарат «Микростим» вводили в дозе 0,14 мл/кг один раз в день внутрижелудочно с помощью зонда в течение 5 дней. Препараты сравнения («Хилак форте» и ультрафильтрат казеиново-дрожжевой питательной среды) вводили в той же дозе по аналогичной схеме. Контрольные животные получали воду очищенную. Через 1 ч после последнего введения препаратов мышей иммунизировали внутрибрюшинно эритроцитами барана (ЭБ) в оптимальной дозе (108 на мышь). На 5-е сутки после иммунизации мышей забивали, собирали кровь, выделяли тимус, селезенку и паховые лимфатические узлы. Определение количества лейкоцитов, показателей лейкоформулы, массы и клеточности органов проводили стандартными методами. Для оценки числа антителообразующих клеток (АОК) в селезенке использовали метод локального гемолиза в геле агарозы (Jeme, Nordin, 1963). Титр антител к ЭБ устанавливали в реакции активной гемагглютинации (Зигль, 1979). Влияние препаратов на фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови оценивали по модифицированному методу В.Н. Каплина (Каплин, 1996; Шилов и др., 1998; Шилов, Гейн, 1998; Шилов, Орлова, 2000). Оценку показателей фагоцитоза в клеточных суспензиях лимфатических узлов проводили по методу Ю.И. Шилова и СВ. Гейна (1998). Экспериментальный иммунодефицит моделировали введением мышам внутрибрюшинно однократно циклофосфамида (ЦФ) в дозе 100 мг/кг. Препарат «Микростим» начинали вводить через сутки после инъекции ЦФ один раз в день в дозах 0,14 и 1,4 мл/кг внутрижелудочно с помощью зонда в течение 3 дней. Через 1 ч после последнего введения препарата мышей иммунизировали внутрибрюшинно оптимальной дозой ЭБ. Показатели опытных групп животных сравнивали с результатами двух групп мышей, не получавших препарат «Микростим»: животных без иммунодефицита и мышей с иммунодефицитом, индуцированным той же дозой ЦФ. На 5-й день после иммунизации оценивали влияние препарата «Микростим» на количество лейкоцитов периферической крови, клеточность костного мозга, массу, клеточность тимуса и селезенки, выраженность гуморального иммунного ответа к ЭБ и фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови по вышеописанным методам.

При исследовании влияния препарата «Микростим» на фагоцитарную активность нейтрофилов in vitro использовали кровь 12 практически здоровых людей добровольцев обоего пола. Проводили предварительную инкубацию цельной венозной крови с препаратом в концентрациях от 2 до 0,0002 мг/мл (по сухому остатку) в течение 1 ч при 37°С. Действие препарата «Микростим» на пролиферативный ответ лимфоцитов in vitro оценивали в культуре клеток

крови 8 практически здоровых мужчин добровольцев. Культивирование лимфоцитов проводили в пластиковых круглодонных 96-луночных планшетах. Каждая культура содержала 2x105 клеток в 0,2 мл полной питательной среды на основе среды 199, включающей 10% аутоплазмы, 2мМ L-глютамина, 10 мМ HEPES и 100 мкг/мл гентамицина. В качестве Т-клеточного митогена использовали фитогемагтлютинин П (ФГА, «Sigma», США) в концентрациях от 1,25 до 40 мкг/мл. Сразу после внесения ФГА в культуры клеток добавляли препарат «Микростим» в концентрациях от 2 до 0,00002 мг/мл. Интенсивность пролиферации оценивали по включению /метил-3Н/тимидина на жидкостном сцинтилляционном счетчике «Бета-2» в подразделении радиоизотопных исследований аналитической лаборатории ИЭГМ УрО РАН.

Статистическую обработку экспериментальных данных проводили методами вариационной статистики (Гланц, 1999). Статистическую значимость различий между группами оценивали с использованием t-критерия Стьюдента. Различия считали статистически значимыми при р<0,05. Результаты во всех таблицах и на рисунках представлены в виде средней арифметической и ее стандартной ошибки (М±т).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Получение препарата «Микростим» из культуральной жидкости

лактобактерий

Препарат «Микростим» получен из культуральной жидкости лактобактерий штамма L. plantarum 8P-A3, выбор которого обусловлен более высокой иммунобиологической активностью его метаболитов в сравнении с другими исследованными штаммами лакто- и бифидобактерий. Отделение низкомолекулярной фракции КЖ осуществляют по окончании фазы логарифмического роста культуры путем концентрирования бактериальной взвеси методом ультрафильтрации. Концентрат биомассы предназначен для изготовления различных лекарственных форм «Лактобактерина», поэтому разработанный способ получения препарата «Микростим» является составной частью комплексной технологии пробиотиков. Полученный ультрафильтрат КЖ подвергают стерилизации при 110°С в течение 30 мин. Проведенные исследования показали, что такая термическая обработка обеспечивает стабильность биологических свойств препарата «Микростим» на протяжении 4 лет хранения, а также повышает его специфическую активность (табл. 1). По окончанию фазы логарифмического роста в бактериальной культуре преобладают метаболиты, лимитирующие дальнейшее увеличение численности микробов. Термическая обработка, использованная нами для стерилизации препарата, вероятно, вызывает инактивацию именно супрессорных

метаболитов, не влияя на стимуляторы роста бактерий, которые, по данным ряда исследователей, устойчивы к нагреванию и воздействию других неблагоприятных факторов (Sanders et al, 1999; Diep et al, 2000; Scheunemann, Poquet, 2003).

Таблица 1

Влияние термической стерилизации на биологическую активность ультрафильтрата культуральной жидкости лактобактерий

Ультрафильтрат культуральной жидкости

Показатели лактобактерий

До термообработки После термообработки

Коэффициент стимуляции роста лактобактерий

Коэффициент стимуляции кислотообразования лактобактерий Коэффициент стимуляции антагонистической активности лактобактерий по отношению к Е. coli 157

2,12±0,07 1,52±0,04

1,23 ±0,03

2,68±0,21* 1,67±0,05*

1,40±0,04**

Примечание. * - р<0,05; ** - р<0,01 по ^критерию Стьюдента в сравнении с ультрафильтратом до термообработки.

Препарат «Микростим» представляет собой прозрачную жидкость светло-коричневого цвета, которая содержит 10-11 мг/мл сухих веществ, в том числе 4,5-5,5 мг/мл пептидов. Тяжелые металлы в препарате не обнаружены. Максимум поглощения в УФ-спектре равен 265±5 нм. При гельхроматографии на сефадексе 0-25 в препарате «Микростим» определяются 2 пика с молекулярной массой менее 1450 Д (рис. 1, А), которые не выявляются при исследовании фракционного состава ультрафильтрата казеиново-дрожжевой питательной среды, используемой для культивирования лактобактерий. Последнее свидетельствует о том, что наличие данных пиков обусловлено присутствием бактериальных метаболитов (рис. 1, Б).

Оценка безопасности препарата «Микростим»-

При введении препарата «Микростим» мышам однократно внутрижелудочно, подкожно и внутрибрюшинно в дозах 50, 25 и 25 мл/кг массы тела животного гибели животных не наблюдалось, поведенческие реакции не изменялись, отличий в динамике прироста массы тела контрольных и опытных групп мышей не обнаружено.

Номер фракции

Рис. 1. Хроматографический профиль препарата «Микростим» (А) и ультрафильтрата питательной среды (Б) на сефадексе С-25.

Стандарты: У0 - свободный объем колонки (голубой декстран); 1 - иншбитор трипсина (6500 Д); 2 бациграцин (1450 Д); 3 - Б ис-А1а-А1а-А1а-рЫа (415 Д).

Изменений внутренних органов экспериментальных животных при патоморфологическом и гистологическом исследованиях не выявлено. Таким образом, максимально переносимая доза жидкого препарата «Микростим» не выявлена. 1Л>5о лиофильно высушенного препарата «Микростим» при внутрижелудочном введении составила 17470 мг/кг, а при внутрибрюшинном -3930 мг/кг. Проведенные исследования позволяют заключить, что «Микростим» является относительно безвредным препаратом (VI класс токсичности по классификации К.К. Сидорова). При ежедневном пероральном введении препарата крысам в течение 3 месяцев в дозе 1,4 мл/кг не выявлено каких-либо признаков отрицательного воздействия препарата «Микростим» на организм подопытных животных. В ходе оценки хронической токсичности установлено, что длительное введение препарата не вызывает угнетения иммунной системы. Напротив, по окончании эксперимента отмечено увеличение ряда показателей фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови крыс. Исследования аллергенных свойств показали, что введение препарата «Микростим» не приводит к развитию ГЗТ у мышей ни в одной из использованных доз. Препарат не вызывает реакции в конъюнктивальной пробе у морских свинок и не обнаруживает активности в тесте дегрануляции тучных клеток.

Исследование бактериотропного действия препарата «Микростим»

Эксперименты in vitro показали, что препарат «Микростим» стимулирует рост и активность кислотообразования лакто- и бифидобактерий (табл. 2).

Таблица 2

Стимулирующее влияние препарата «Микростим» на рост и активность кислотообразования лакто- и бифидобактерий

Исследуемые штаммы

Контроль

Микростим

Величина прироста оптической плотности через 24 ч, Ц540

Ь. рШагит 8Р-АЗ 0,14Ю,01 0,3510,02***

Ь./егтепЫт 90Т-С4 0,1310,01 0,34Ю,01***

В. Ъфйит 1 0,20±0,03 0,31Ю,04*

Величина прироста кислотности через 24 ч, °Т

I. рШагит 8Р-АЗ 16,92±0,62 27,38+0,90* * *

Ь./егтепШт 90Т-С4 21,33±0,84 34,00±1,53***

В. Ы/1(1ит 1 5,1310,77 8,8811,36***

Примечание. Здесь и в табл. 3,' * - р<0,05; *** - р<0,001 по 1-критерию Стьюдента относительно контроля.

В присутствии препарата «Микростим» значительно повышается антагонизм лактобактерий к патогенным микроорганизмам (табл. 3).

Таблица 3

Влияние препарата «Микростим» на антагонистическую активность Ь. р1аМагиш 8P-A3 к патогенным микроорганизмам

Тест-пггаммы

Зона задержки роста тест-штаммов, мм

Контроль

Микростим

S. sonnei 177 б S./ferner/337 Е. coli 157 Р. vulgaris 177 P. mirabilis 249 S. aureus 209

26,80±0,41 25,80±0,58 26,8310,60 27,80±0,37 28,1710,60 29,00±0,52

42,6010,65*** 39,6011,50*** 37,5011,09*** 36,40Ю,51*** 35,6710,33*** 38,1710,87***

Необходимо отметить, что препарат «Микростим» стимулирует гетероаптагонизм лактобактерий, достоверно не изменяя показатели гомо- и изоантагонизма.

Культуральная жидкость лактобактерий содержит комплекс антимикробных метаболитов (Бухарин и др., 2002; Блинкова, 2003), поэтому представляло интерес оценить антибактериальное действие препарата «Микростим». Исследования показали, что препарат «Микростим» оказывает антибактериальное действие на патогенные и условно-патогенные микроорганизмы, такие как шигеллы, кишечная палочка, протей, клебсиеллы, синегнойная палочка, фекальный энтерококк, золотистый, эпидермальный стафилококк и другие. К действию препарата чувствительна как грамотрицательная, так и грамположительная микрофлора. Минимальная подавляющая концентрация препарата «Микростим» при внесении препарата в МПБ составляет - 30-50%, а при внесении в МПА - 10-30%. Бактерицидный эффект препарата «Микростим» развивается быстро. Уже через 5 мин после контакта кишечной палочки с препаратом количество живых бактерий снижается на 4 порядка, а через 4 ч инкубирования жизнеспособные клетки не обнаруживаются (рис. 2).

0 5 мин 30 мин 4 ч 24ч

Время инкубации

Рис. 2. Кинетика бактерицидного действия препарата «Микростим» на Е. coli Z-905 lum+.

а - контрольная проба (инкубация без препарата); б - 10% препарата в среде культивирования; в - 30%; г - 40%; д - 50%; е - инкубация в цельном препарате.

Резистентность патогенных микробов к антибактериальным веществам обусловлена различными механизмами (Бухарин, 2000). Факторами патогенности бактерий являются антилизоцимная и антиинтерфероновая активность, образование каталазы, выработка ферментов, разрушающих антибиотики, и прочее (Черкасов и др., 2001; Barker, 1999). Поэтому важным показателем антибактериального действия препарата является угнетение метаболизма микробов, что приводит к снижению их патогенности.

Проведенные нами исследования показали, что препарат «Микростим» угнетает общий метаболизм энтеробактерий что проявляется

снижением интенсивности биолюминесценции данного тест-штамма (рис. 3).

Время инкубации

Рис. 3. Влияние препарата «Микростим» па биолюминесценцию Е. coli Z-905 lum+.

ИАА - индекс антибактериальной активности (процент угнетения биолюминесценции). а - 40% препарата в среде культивирования; б - 30%; в - 20%; г-10%;д-1%.

Бактерицидная и бактериостатическая концентрации препарата «Микростим» вызывают быстрое и необратимое угнетение биолюминесценции. Даже 1% препарата в среде культивирования достоверно снижает интенсивность свечения тест-штамма. Между угнетением биолюминесценции и снижением количества жизнеспособных бактерий тест-штамма Е. coli Z-905 lum+ выявлена прямая корреляция (г=0,79). Полученные данные явились обоснованием для разработки способа контроля антибактериальной активности пробиотиков, содержащих бактериальные метаболиты, на основе реакции угнетения микробиолюминесценции.

Установлено, что «Микростим» является препаратом, способным повышать чувствительность патогенных микробов к антибиотикам (рис. 4). Степень влияния препарата «Микростим» на антибиотикочувствительность зависит от механизма действия антибактериального средства, вида патогенного микроба и его устойчивости к антибиотику. В наибольшей степени «Микростим» усиливает антибактериальный эффект Р-лактамных антибиотиков на грамположительные бактерии (рис. 4, А), что подтверждает преимущественное влияние препарата на клеточную стенку микроорганизма. Именно такой механизм действия имеют большинство лантибиотиков (Holo et ol., 2001; Heidaii et ol., 2002). Важным является тот факт, что препарат «Микростим» повышает чувствительность грибов Candida albicans к нистатину и клотримазолу (рис. 4, Б).

Рис. 4. Влияние препарата «Микростим» на антибиотикочувствительность Staphylococcus aureus 209 (А) и Candida albicans АТСС 885-653 (Б).

По оси ординат: диаметр зоны задержки р о *** - р<0,001 о t-критерию Стьюдента относительно контроля.

Положительный эффект получен при использовании препарата «Микростим» в качестве растворителя сухих пробиотиков. «Микростим» повышает биологическую активность «Лактобактерина сухого» и «Бифидумбактерина сухого», а также увеличивает резистентность бифидобактерий к желудочному соку и желчи (рис. 5).

Пробиотическое действие препарата «Микростим» сохраняется после инкубации в желудочном соке и желчи. В комплексе с желудочным соком препарат оказывает более выраженное стимулирующее влияние на функциональную активность лактобактерий. Таким образом, при пероральном приеме возможно повышение пробиотической активности препарата «Микростим».

Рис. 5. Влияние препарата «Микростим» на устойчивость бифидобактерий к секретам желудочно-кишечного тракта.

♦♦ - р<0,01; *** - р<0,001 по ^критерию Стьюдента в сравнении с исходным показателем; ш - р<0,001 в сравнении с показателем в контроле после инкубации в желудочном соке и желчи.

Характеристика иммуномодулирующей активности препарата

«Микростим»

Проведенные нами исследования свидетельствуют, что препарат «Микростим» обладает иммуномодулирующим действием. Пероральное введение препарата экспериментальным животным оказывает стимулирующее влияние на системный гуморальный иммунный ответ, что проявляется увеличением относительного и абсолютного количества АОК в селезенке и титра гемагглютининов в сыворотке крови мышей (табл. 4).

Важной характеристикой иммуномодулирующей активности препарата является его действие на фагоцитирующие клетки, которые играют большую роль в обеспечении естественной резистентности организма, а также в реализации иммунного ответа (Долгушин, Бухарин, 2001). Установлено, что пероральное введение препарата «Микростим» экспериментальным животным вызывает стимуляцию фагоцитарной активности нейтрофилов крови и макрофагов лимфатических узлов (табл. 5,6).

По выраженности иммуноадьювантного действия и степени активации фагоцитоза «Микростим» превосходит препарат сравнения «Хилак форте», содержащий продукты жизнедеятельности Е. coli, S. faecalis, L. acidophilus и L helveticus. Иммуностимулирующей активностью обладают метаболиты

лактобактерий штамма Ь. р1аШагиш 8Р-А3, составляющие основу препарата «Микростим», а не компоненты казеиново-дрожжевой питательной среды, присутствующие в нем (табл. 4, 5,6).

Таблица 4

Влияние препарата «Микростим» и препаратов сравпения на показатели гуморального иммунного ответа (п=Ю в каждой группе)

Экспери- Доза, мл/кг Ьо£ю числа Ьозю числа Титр гемаг-

ментальное АОК на 106 АОК на глютининов,

воздействие ЯСК селезенки селезенку (-1о£г титра)

Контроль Микростим

Хилак форте

Питательная среда

0,14 0,14 0,14

1,7190±0,1111

(52,36) 1,981110,0516* (95,75)

1,7008±0,1159 (50,21)

1,657810,1102 (45,47)

4,2447±0,1286

(17568,87) 4,654910,0604** (45179,28)

4,3639±0,1002 (23114,39)

4,291510,1150 (19564,66)

9,20±0,49 11,6010,48**

10,7010,50*

10,3010,42

Примечание. ЯСК - ядросодержащие клетки. Здесь и в табл. 10, 12, в скобках указана средняя геометрическая числа АОК (антилогарифм из средней арифметической 1о^]о числа АОК). Здесь и в табл. 5, 6, * - р<0,05; ** - р<0,01; по Меритерию Стьюдента относительно контроля.

Таблица 5

Влияние препарата «Микростим» и препаратов сравнения на фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови мышей

в каждой группе)

Показатели Контроль Микростим Хилак Питатель-

фагоцитоза форте ная среда

Процент фагоцитоза 39,7012,93 62,8012,67*** 50,2011,41** 34,2013,04

Фагоцитарное число 0,7110,Об 1,2710,09*** 0,87+0,04* 0,6210,06

Фагоцитарный индекс 1,7610,05 2,00Ю,06** 1,7310,04 1,8110,06

Процент активных 18,3012,20 33,6012,68*** 23,0011,62 15,1012,08 фагоцитов

Таблица 6

Влияние препарата «Микростим» и препаратов сравнения на фагоцитарную активность макрофагов паховых лимфатических узлов мышей (п=10 в каждой группе)

Показатели фагоцитоза

Контроль

Микростим

Хилак форте

Питательная среда

Процент фагоцитоза 19,10±1,46 31,9013,04** 24,80+1,86* 20,60±1,36 Фагоцитарное число 0,28±0,03 0,53±0,06** 0,38±0,03* 0,29±0,03

Фагоцитарный индекс 1,44±0,07 1,64±0,05* 1,52±0,07 1,38+0,05 Процент активных

фагоцитов 7,1041,18 14,60±2,07** 8,70±1,08 6,60±1,12

Поскольку дисбактериозы и кишечные инфекции неизменно сопровождаются нарушением функционирования иммунной системы (Куваева, Ладодо, 1991), представляло интерес исследовать иммунотропное действие препарата «Микростим» на модели индуцированного иммунодефицита.

Однократное введение ЦФ мышам привело к снижению общего количества лейкоцитов периферической крови, клеток костного мозга, а также к выраженной супрессии гуморального иммунного ответа и фагоцитарной активности нейтрофилов (табл. 7-10). Иммунодефицит характеризовался снижением абсолютного количества лимфоцитов практически в два раза, количество нейтрофилов и моноцитов периферической крови при этом возросло (табл. 7), что связано с защитно-приспособительной реакцией организма экспериментальных животных в ответ на угнетение костномозгового кроветворения (Дыгай и др., 2000).

Пероральное введение препарата «Микростим» после инъекции ЦФ способствовало устранению негативного влияния цитостатика на клеточность костного мозга, общее количество лейкоцитов и абсолютное количество лимфоцитов периферической крови. При этом четко прослеживается дозозависимое действие препарата «Микростим». Более высокая доза препарата (1,4 мл/кг) уже после трех дней введения восстанавливает общее количество лейкоцитов и клеток костного мозга до уровня показателей в группе животных без иммунодефицита (табл. 7, 8). Препарат «Микростим» усилил процесс регенерации гранулоцитов в костном мозге, что проявилось повышением абсолютного количества нейтрофилов крови даже в большей степени, чем у мышей с иммунодефицитом (табл. 7).

Таблица 7

Влияние препарата «Микростим» на количество и состав лейкоцитов периферической крови мышей на фоне индуцированного иммунодефицита

Экспериментальное воздействие

Доза, мл/кг

Число наблюдений

Кол-во лейкоцитов крови, хЮ9/л

Количество форменных элементов крови, х109/л

неитро-филы

эозино- моно-

филы циты

лимфоциты

Контроль - 10

ЦФ - 9

Микростим 0,14 9

1,4 10

8,42± 0,70 б,53± 0,46*

7,24± 0,56

8,65± 0,79*

1,90± 0,17 2,79± 0,21**

3,43+ 0,25***

3,91± 0,50**

0,12+ 0,02 0,13± 0,02

0,10± 0,01

0,14± 0,03

0,27± 0,04 0,61± 0,07* **

0,20± 0,03'**

0,22± 0,06"*

6,13± 0,53 3,00+ 0,37***

3,51± 0,35***

4,38+ 0,30*'

Примечание. Здесь и в табл. 8-10, * - р<0,05; ** - р<0,01; *** - р<0,001 по

^критерию Стъюдента относительно контроля; * - р<0,05; ** - р<0,01;- р<0,001 относительно ЦФ.

Таблица 8

Влияние препарата «Микростим» на клеточность костного мозга мышей на фоне индуцированного иммунодефицита

Экспериментальное воздействие Доза, мл/кг Число наблюдений Количество ЯСК в костном мозге, х 106/бедренная кость

Контроль - 10 20,05±1,24

ЦФ - 9 15,46±1,52*

Микростим 0,14 9 19,52±0,88#

1,4 10 20,19+1,19*

Введение ЦФ экспериментальным животным привело к снижению более чем в 2 раза процента фагоцитирующих нейтрофилов, фагоцитарного числа и процента активных фагоцитов. Обе использованные дозы препарата «Микростим» восстанавливают сниженные показатели фагоцитарной активности нейтрофилов, а более высокая доза даже стимулирует фагоцитоз (табл. 9).

Таблица 9

Влияние препарата «Микростим» на относительные показатели фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови мышей на фоне индуцированного иммунодефицита

Экспериментальное Доза, мл/кг Число наблю- Процент фагоци- Фагоцитарное Фагоцитарный Процент активных

воздействие дений тоза число индекс фагоцитов

Контроль - 10 35,41 0,621 1,711 15,71

4,55 0,09 0,07 2,84

ЦФ - 9 17,671 0,291 1,551 7,331

3,70** 0,06* 0,12 1,77*

Микростим 0,14 9 40,891 1,36 ш 0,751 0,03 **' 1,841 0,05* 19,781 1,04 ""

1,4 10 52,001 0,961 1,851 26,101

1,96** ш 0,05** т 0,05* 1,53** т

Пероральное введение препарата «Микростим» полностью отменяет депрессию гуморального иммунного ответа, индуцированную ЦФ, о чем свидетельствует восстановление относительного и абсолютного количества АОК в селезенке и титра гемагглютининов в сыворотке крови мышей (табл. 10).

Таблица 10

Влияние препарата «Микростим» на показатели гуморального иммунного ответа на фоне индуцированного иммунодефицита

Экспери- Доза, мл/кг Число числа Ьо§ю числа Титр гемаг-

ментальное наблю- АОК на 10е АОК на глютининов,

воздействие дений ЯСК селезенки селезенку (-1о£г титра)

Контроль ЦФ

Микростим 0,14 1,4

10 2,1598±0,0267 4,6042±0,0538 9,4010,34 (144,49) (40199,98)

9 1,944010,0587*« 4,302010,0890* 7,2210,40** (87,90) (20045,72)

9 2,133310,0612' 4,555810,0764' 8,6710,47'

(135,92) (35957,53)

10 2,180710,0837* 4,583810,0862* 9,3010,45"

(151,60) (38353,66)

С целью оценки возможного прямого действия препарата «Микростим» на клетки иммунной системы проведен ряд экспериментов в системе in vitro. Установлено, что препарат «Микростим» в широком диапазоне концентраций повышает фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови практически здоровых людей (табл. И). Ни одна из исследованных концентраций препарата не вызвала угнетения фагоцитоза.

Таблица 11

Влияние препарата «Микростим» на фагоцитарную активность нейтрофилов крови in vitro (n=12)

Экспериментальное Процент Фагоцитар- Фагоцитар-

воздействие фагоцитоза ное число ный индекс

Без преинкубации Преинкубация с ППС, контроль Теофиллин, 3 мМ

0,0002 мг/мл 0,002 мг/мл 0,02 мг/мл 0,2 мг/мл 2 мг/мл

41,1712,35** 53,00±2,85 34,9213,51**« Микростим 58,67±3,20 68,83±2,44*** 74,83±2,21*** 70,42±2,42*** 67,42±2,77**

0,59±0,05* 0,81 ±0,08 0,54±0,08*

1,11 ±0,07* 1,30±0,07*** 1,47±0,07*** 1,41 ±0,06*** 1,40±0,06***

1,42±0,05** 1,67±0,07 1,50±0,06

1,88±0,06* 1,91 ±0,07* 1,96±0,07** 1,9910,07** 2,09±0,07***

Примечание. * - р<0,05; ** - р<0,01; *** - р<0,001 по t-критерию Стъюдеита относительно пробы с преинкубацией.

Препарат «Микростим» оказывает влияние in vitro на пролиферативный ответ лимфоцитов периферической крови практически здоровых людей (табл. 12). Эффект зависит как от концентрации препарата, так и от степени стимуляции лимфоцитов митогеном. Максимально возможная концентрация препарата «Микростим» (2 мг/мл) угнетает пролиферацию клеток крови, индуцированную ФГА Добавление 0,02 мг/мл препарата снижает действие только гипероптимальной концентрации митогена (40 мкг/мл). Поскольку пролиферация лимфоцитов усилилась при внесении препарата «Микростим» в диапазоне от 0,002 до 0,00002 мг/мл в культурах с концентрацией ФГА 1,25 мкг/мл, которая сама по себе не оказала митогенного эффекта, можно предположить, что «Микростим» обладает костимулирующим действием.

Необходимо отметить, что препарат «Микростим» в широком диапазоне исследуемых концентраций не проявил самостоятельной митогенной активности.

Таблица 12

Влияние препарата «Микростим» на пролиферативный ответ лимфоцитов периферической крови людей в культурах с ФГА (1с^10 имп/мин)

Концен- Концентрация ФГА, мкг/мл

трация Без ми-

препара- тоге на 1,25 2,5 5 10 20 40

та, мг/мл

Контроль 3,6159± 3,5593± 3,9040± 3,8873± 4,2626± 4,2343± 4,2680±

0,0617 0,0765 0,1070 0,0892 0,0736 0,0473 0,0219

(4129) (3625) (8017) (7714) (18306) (17152) (18534)

0,00002 3,4250± 3,7430± 3,8060± 4,0162± 4,2307± 4,1211± 4,1877±

0,0991 0,0205* 0,0723 0,1024 0,1360 0,0749 0,0598

(2661) (5533) (6397) (10381) (17009) (13217) (15405)

0,0002 3,4016± 3,7783± 3,7628± 4,0120± 4,1685± 4,1519± 4Д304±

0,1584 0,0201* 0,0387 0,0817 0,1264 0,1088 0,0675

(2521) (6002) (5792) (10281) (14740) (14187) (16997)

0,002 3,5869± 3,8839± 3,9321± 4,0258± 4,2409± 4,2309± 4,2899±

0,1176 0,0543** 0,0799 0,1026 0,1112 0,1115 0,0647

(3863) (7654) (8552) (10612) (17414) (17017) (19492)

0,02 3,4182± 3,5306± 3,8708± 3,9392± 4,3231± 4Д168± 4,0256±

0,1190 0,0875 0,0939 0,0832 0,1087 0,0684 0,0660* *

(2620) (3393) (7427) (8694) (21042) (16475) (10607)

0,2 3,4914± 3,6232± 3,7664± 3,9466± 4,2726± 4,0294± 4,1078±

0,1093 0,1508 0,0675 0,1318 0,0418 0,0615* 0,0690*

(3100) (4200) (5840) (8844) (18732) (10699) (12817)

2 3,4215± 3,6422± 3,4283± 3,5126± 3,6828± 3,5545± 3,3107±

0,1254 0,1143 0,0539** 0,1052* 0,1038*** 0,1199*** 0,1505***

(2640) (4387) (2681) (3255) (4818) (3585) (2045)

Примечание. Число наблюдений в контроле и во всех опытных выборках равно 8. * - р<0,05; ** - р<0,01; *** - р<0,001 по парному t-критерию Стьюдента относительно контроля (без препарата «Микростим»).

Таким образом, низкомолекулярные метаболиты лактобактерий, содержащиеся в препарате «Микростим», обладают способностью воздействовать на клетки иммунной системы. Данный факт можно объяснить наличием специфических рецепторов к продуктам жизнедеятельности бактерий нормофлоры на макрофагах, нейтрофилах и лимфоцитах (Иванов и др., 1996; Medzhitov, Janeway, 2000; Cross et al.t 2001). Препарат оказывает более выраженное влияние на фагоцитирующие клетки. Подобная направленность действия метаболитов лактобактерий на поддержание, прежде

всего, естественной резистентности организма человека неоднократно отмечена в литературе (Хавкин, 2003; Matsuzaki, Chin, 2000).

Материалы исследований бактерио- и иммунотропного действия препарата «Микростим» позволяют отметить высокую активность и широкий спектр биологических эффектов, что является предпосылкой для использования данного препарата в клинике. Прежде всего, «Микростим» перспективен как препарат для лечения и профилактики дисбактериозов различной этиологии. В настоящее время нормативная документация и образцы экспериментально-производственных серий препарата «Микростим» проходят экспертную оценку в Государственном институте стандартизации и контроля им. Л.А. Тарасевича (Москва).

ВЫВОДЫ

1. Новый препарат «Микростим», полученный оригинальным способом из культуральной жидкости лактобактерий, стабилен при контакте с секретами желудочно-кишечного тракта и в процессе хранения.

2. Показано, что препарат «Микростим» при пероральном введении не оказывает общетоксического действия и не обладает аллергенными свойствами.

3. Выявлено, что препарат «Микростим» стимулирует рост, кислотообразование и антагонизм лакто- и бифидобактерий; оказывает антибактериальное действие на патогенные и условно-патогенные микроорганизмы и повышает их антибиотикочувствительность. Впервые разработан метод оценки антибактериальной активности препарата «Микростим» по степени угнетения биолюминесценции тест-штамма.

4. Установлено, что препарат «Микростим» при пероральном введении обладает иммуномодулирующей активностью. Применение препарата стимулирует накопление антителообразующих клеток в селезенке, вызывает увеличение титра антител к эритроцитам барана, повышает фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови и макрофагов лимфатических узлов.

5. Показано, что в условиях экспериментального иммунодефицита, индуцированного циклофосфамидом, введение препарата «Микростим» способствует восстановлению общего количества лейкоцитов крови и клеток костного мозга, фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови и показателей гуморального иммунного ответа на эритроциты барана.

6. Выявлено влияние препарата «Микростим» на пролиферативную активность лимфоцитов крови in vitro, направленность и выраженность иммуномодулирующего действия при этом зависит от концентрации препарата и митогена.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Чистохина Л.П., Несчисляев В.А., Сафонова Г.М. Разработка биологически активных препаратов на основе культуральных жидкостей лакто-и бифидобакгерий//В кн.: Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы: Матер. Юбилейной межвуз. научно-практ. конф. - Пермь, 2000. - С. 168-168.

2. Несчисляев ВА, Сафонова Г.М., Чистохина Л.П. Изучение иммунобиологической активности культуральных жидкостей лактобактерий in xitrolfB кн.: Роль лабораторной диагностики в современных медицинских технологиях: Матер. Юбилейной научно-практ. конф. УГМА. - Екатеринбург, 2000. -С. 164-169.

3. Несчисляев В.А., Сафонова ГМ., Чистохина Л.П. К вопросу о влиянии препарата, полученного из культуральной жидкости лактобактерий на систему иммунитета//В кн.: Актуальные вопросы разработки, производства и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов: Матер, конф. - Томск, 2001. - С. 56-57.

4. Сафонова Г.М., Несчисляев В.А., Перевозчиков А.Б., Старцева Н.В., Хилько М.Г., Чистохина Л.П. Иммунологическая характеристика некоторых препаратов природного происхождения, разрабатываемых Пермским НПО «Биомед»//В кн.: Актуальные проблемы создания новых лекарственньрс препаратов природного происхождения: Матер. V Междунар. съезда. - Санкт-Петербург, 2001. - С. 285-289.

5. Чистохина Л.П. Оценка влияния препарата «Микростим» на иммунный ответ при экспериментальном иммунодефиците//В кн.: Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы: Матер, межвуз. научно-практ. конф., посвященной 85-летию высшего образования на Урале. - Пермь, 2001. - С. 177-177.

6. Несчисляев В.А., Сафонова Г.М., Чистохина Л.П. Новый пробиотический препарат «Микростим»//В кн.: Пробиотические микроорганизмы - современное состояние вопроса и перспективы использования: Матер. Междунар. научно-практ. конф. - Москва, 2002. -С. 49-49.

7. Несчисляев В.А., Пшеничнов Р.А., Чистохина Л.П. Влияние метаболитов лактобактерий на рост и интенсивность биолюминесценции Escherichia coli Z-905 lum+//B кн.: Актуальные вопросы вакцинно-сывороточного дела в XXI веке: Матер. Всерос. научи, конф. - Пермь, 2003. -С. 270-273.

8. Чистохина Л.П., Сафонова ГМ., Несчисляев В.А. Изменение фагоцитарной активности нейтрофилов крови при длительном введении препарата «Микростим»//Там же. - С. 317-319.

9. Чистохина Л.П. Влияние микростима на фагоцитарную активность нейтрофилов крови//Медицинская иммунология. - 2003. - Т. 5, N. 3-4. -С. 220-221.

10. Чистохина Л.П., Моховикова В.Б. Влияние метаболитов лактобактерий на биологические свойства бифидобактерий//В кн.: Актуальные вопросы инфекционной патологии человека, клинической и прикладной иммунологии: Матер. Всерос. научн. конф. молодых ученых. - Уфа, 2004. -С. 205-206.

11. Несчисляев В.А., Чистохина Л.П., Моховикова В.Б. Пути повышения биологической активности пробиотиков//В кн.: Человек и лекарство: Тез. докл. XI Рос. национального конгресса. - Москва, 2004. -С. 464-464.

12. Чистохина Л.П., Сафонова Г.М., Несчисляев ВА Иммунокорригирующее действие микростима при экспериментальном иммунодефиците//Иммунопатология, аллергология, инфектология. - 2004. -N. 2.-С. 31-33.

13. Несчисляев ВА, Чистохина Л.П. О способности препарата «Микростим» влиять на чувствительность ряда патогенных микроорганизмов к антибиотикам/Пермский мед. журнал. - 2004. - Т. 21, N. 2. - С. 60-62.

14. Сафонова Г.М., Несчисляев В.А., Чистохина Л.П. Оценка безопасности нового пробиотика, содержащего метаболиты лактобактерий//Сибирский мед. журнал. - 2004. - Т. 19, N. 2. - С. 38-40.

15. Несчисляев В А, Пшеничное Р.А., Арчакова Е.Г., Чистохина Л.П., Фадеева И.В. Способ определения антагонистической активности пробиотиков. Патент на изобретение РФ № 2187801 от 20.08.2002. Приоритет от 10.07.2000.

16. Несчисляев В.А., Чистохина Л.П. Способ получения биологического стимулятора. Патент на изобретение РФ № 2224018 от 20.02.2004. Приоритет от 21.11.2001.

ЧИСТОХИНА Лариса Павловна

ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕПАРАТА «МИКРОСТИМ» НА ОСНОВЕ МЕТАБОЛИТОВ ЛАКТОБАКТЕРИЙ

Автореферат

Лицензия ПД-11-0002 от 15.12.99.

Подписано в печать 17.05.2004. Тираж 100 экз. Усл. печ. л. 1,0 Формат 60X84/16. Набор компьютерный. Заказ № 383/2004.

Отпечатано на ризографе в отделе Электронных издательских систем ОЦНИТ Пермского государственного технического университета 614600, г. Пермь, Комсомольский пр., 29, к. 113, т.(3422) 198-033

i 13 2 4 9

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Чистохина, Лариса Павловна

Список основных сокращений

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА МЕТАБОЛИТОВ

ЛАКТОБАКТЕРИЙ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ) И 1.1.ч Лактобактерии - облигатные представители нормальной микрофлоры организма человека

1.2. Антибактериальные метаболиты лактобактерий

1.3. Иммуномодуляторы на основе лактобактерий

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

ГЛАВА 3. ПОЛУЧЕНИЕ ПРЕПАРАТА «МИКРОСТИМ» ИЗ

КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ ЛАКТОБАКТЕРИЙ

3.1. Разработка способа получения препарата

3.2. Изучение физико-химических параметров препарата «Микростим»

3.3. Оценка стабильности препарата

3.4. Исследование устойчивости препарата «Микростим» в секретах желудочно-кишечного тракта

ГЛАВА 4. ОЦЕНКА БЕЗОПАСНОСТИ ПРЕПАРАТА 77 «МИКРОСТИМ»

4.1. Исследование общетоксического действия препарата

4.2. Характеристика аллергенных свойств

ГЛАВА 5. ИССЛЕДОВАНИЕ БАКТЕРИОТРОПНОГО

ДЕЙСТВИЯ ПРЕПАРАТА «МИКРОСТИМ»

5.1. Изучение пробиотической активности препарата

5.2. Оценка антибактериального действия препарата 95 «Микростим»

ГЛАВА 6. ХАРАКТЕРИСТИКА ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕЙ

АКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТА «МИКРОСТИМ»

6.1. Влияние препарата на показатели первичного иммунного ответа

6.2. Исследование действия препарата «Микростим» на фагоцитоз in vitro и in vivo

6.3. Характеристика иммунотропной активности препарата при экспериментальном иммунодефиците

6.4. Оценка влияния препарата «Микростим» на пролиферацию Т-лимфоцитов in vitro 123 ОБСУЖДЕНИЕ 127 ВЫВОДЫ 140 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 141 ПРИЛОЖЕНИЯ

СПИСОК ОСНОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АОК - антителообразующие клетки

ГЗТ - гиперчувствительность замедленного типа

ГМДП - глюкозаминилмурамилдипептид (Ы-ацетилглюкозаминил

М-ацетилмурамил-Ь-аланил-Б-изоглютамин)

ГФ - Государственная Фармакопея

ЖКТ - желудочно-кишечный тракт

ИАА - индекс антибактериальной активности

КЖ - культуральная жидкость

КОЕ - колониеобразующие единицы

КС - коэффициент стимуляции

КСФ - колониестимулирующий фактор

МБК - минимальная бактерицидная концентрация

МДП - мурамилдипептид (Ы-ацетил-мурамил-Ь-аланил-Б-изоглютамин)

МИТ - микробиолюминесцентный индикатор токсичности

ММ - молекулярная масса

МПА - мясо-пептонный агар

МПБ - мясо-пептонный бульон

МПК - минимальная подавляющая концентрация

ПАФ - полный адьювант Фрейнда

ПДТК - показатель дегрануляции тучных клеток

ППС - полная питательная среда

РОК - розеткообразующие клетки

ТУ - технические условия

ФГА - фитогемагглютинин

ФС - фармакопейная статья

ФСП - фармакопейная статья предприятия

ФЭБ - формалинизированные эритроциты барана

ЦФ - циклофосфамид

ЭБ -эритроциты барана

ЯСК - ядросодержащие клетки

ЦТЛ - цитотоксические лимфоциты

Т - градусы Тернера

D - оптическая плотность

HEPES - К[-2-гидроксиэтилпиперазин-К'-2-этансульфоновая кислота

Ig - иммуноглобулин (immunoglobulin)

IL - интерлейкин (interleukin)

IFN - интерферон (interferon)

NK -естественные киллеры (normal killer)

TGF - трансформирующий фактор роста (transforming grows factor)

Th - Т-лимфоциты хелперы (T-helper)

TNF - фактор некроза опухоли (tumor necrosis factor)

LD50 -минимальная доза препарата, вызывающая гибель половины экспериментальных животных п - количество животных в экспериментальных группах р - уровень значимости t - коэффициент Стьюдента г - коэффициент корреляции Пирсона

Введение Диссертация по биологии, на тему "Иммунобиологическая характеристика препарата "Микростим" на основе метаболитов лактобактерий"

Актуальность проблемы. Современные условия жизнедеятельности человека характеризуются постоянным влиянием неблагоприятных факторов, интенсивность воздействия которых часто превышает компенсаторные возможности экологической системы «организм хозяина — его микрофлора» [6, 25, 45, 135]. В связи с этим особую актуальность приобретают исследования в области создания препаратов, предназначенных для поддержания и восстановления симбиотических микробиоценозов [11, 136, 142, 159, 167, 185, 204, 264]. При разработке пробиотиков нового поколения в качестве перспективных рассматривают препараты на основе биологически активных метаболитов бактерий - представителей нормальной микрофлоры организма человека [17, 34, 90, 249]. Экзометаболиты индигенных бактерий стимулируют рост резидентной микрофлоры, подавляют патогенные микроорганизмы, способствуют регенерации эпителия слизистой оболочки и оказывают иммуномодулирующее действие [7, 21, 122, 224, 225]. Из пробиотиков этой группы в России до настоящего времени применялся только импортный лекарственный препарат' «Хилак форте», содержащий продукты жизнедеятельности четырех видов микроорганизмов, в том числе лактобактерий [33, 85, 92, 104, 143].

Дисбактериозы и кишечные инфекции неизменно сопровождаются нарушением иммунного статуса [14, 59, 80, 84, 114, 135, 250]. Поэтому в комплексную терапию данных патологических состояний рекомендуют включать иммунокорригирующие препараты [6, 30, 66, 71]. Несмотря на интенсивное развитие исследований, направленных на создание новых иммуномодулирующих средств, в широкой клинической практике количество используемых иммуномодуляторов, в том числе бактериального происхождения, относительно невелико [49, 68, 79, 86, 123, 127, 145, 247].

В связи с известной биологической активностью метаболитов лактобактерий [12, 62, 201, 225, 229] и потребностью практической медицины в препаратах, обладающих пробиотическим и иммуномодулирующим действием, является актуальной разработка нового лекарственного средства на основе продуктов жизнедеятельности лактобактерий и оценка его бактерио- и иммунотропной активности.

Цель настоящего исследования — получение и изучение иммунобиологических свойств нового препарата «Микростим».

Основные задачи исследования:

2. Изучить острую, хроническую токсичность и аллергенность препарата «Микростим».

3. Исследовать бактериотропное (пробиотическое и антибактериальное) действие препарата «Микростим».

4. Оценить иммуномодулирующее действие препарата «Микростим» в экспериментах in vivo и in vitro.

Научная новизна. Разработан и запатентован способ выделения и стабилизации метаболитов лактобактерий (патент на изобретение РФ № 2224018, приоритет от 21.11.2001). По разработанному способу впервые получен препарат «Микростим». Охарактеризованы его физико-химические свойства и проведена оценка безопасности, включающая характеристику острой, хронической токсичности и аллергенных свойств. Изучено действие препарата «Микростим» на бактерии нормофлоры и патогенные микроорганизмы. Разработан оригинальный метод оценки антибактериального действия пробиотиков, содержащих бактериальные метаболиты, на основе реакции угнетения микробиолюминесценции (патент на изобретение РФ № 2187801, приоритет от 10.07.2000). Исследовано иммуномодулирующее действие препарата «Микростим».

Практическая значимость работы заключается в том, что получен новый препарат «Микростим», расширяющий спектр лекарственных средств для нормализации микроэкологического и иммунного статуса человека. Способ его изготовления из культуральной жидкости лактобактерий штамма Lactobacillus plantarum 8Р-АЗ является составной частью комплексного технологического процесса в производстве пробиотиков. На препарат «Микростим» разработана нормативная документация (экспериментально-производственный регламент, проект фармакопейной статьи предприятия, проект инструкции по применению).

Основные положения, выносимые на защиту

2. «Микростим» обладает стимулирующим влиянием на рост и функциональную активность лакто- и бифидобактерий, антибактериальным действием по отношению к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам и повышает их чувствительность к антибиотикам.

3. Иммунотропная активность «Микростима» характеризуется стимуляцией гуморального иммунного ответа и фагоцитарной активности нейтрофилов и макрофагов, способностью восстанавливать сниженные показатели иммунитета при экспериментальном иммунодефиците и влиянием на пролиферативную активность Т-лимфоцитов.

Апробация работы и публикации. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на Юбилейной межвузовской научно-практической конференции ПГФА «Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы», Пермь, 2000; Всероссийской конференции «Актуальные вопросы разработки, производства и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов», Томск, 2001; Пленарном заседании Пермского филиала Всероссийского общества микробиологов, эпидемиологов и паразитологов, Пермь, 2001; Международной научно-практической конференции памяти Г.И. Гончаровой «Пробиотические микроорганизмы - современное состояние вопроса и перспективы использования», Москва, 2002; Всероссийской научной конференции «Актуальные вопросы вакцинно-сывороточного дела в XXI веке», Пермь, 2003; VII Всероссийском научном Форуме с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге», Санкт-Петербург, 2003; Всероссийской научной конференции молодых ученых «Актуальные вопросы инфекционной патологии человека, клинической и прикладной иммунологии», Уфа, 2004.

Диссертация апробирована на расширенном заседании научно-технического совета филиала ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ «Пермское НПО «Биомед» и расширенном заседании научной проблемной комиссии по микробиологии, аллергологии и иммунологии Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН и рекомендована к защите.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 176 страницах, содержит 36 таблиц и 18 рисунков и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, четырех глав экспериментальных

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Чистохина, Лариса Павловна

ВЫВОДЫ

3. Выявлено, что препарат «Микростим» стимулирует рост, кислотообразование и антагонизм лакто- и бифидобактерий; оказывает антибактериальное действие на патогенные и условно-патогенные микроорганизмы и повышает их ' антибиотикочувствительность. Впервые разработан метод оценки антибактериальной активности препарата «Микростим» по степени угнетения биолюминесценции тест-штамма.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Чистохина, Лариса Павловна, Пермь

1. А.с. 1295557 СССР, А 61 К 37/02. Способ получения пептидной фракции кумыса, обладающей иммуностимулирующим действием / А .Я. Шурыгин, Э.И. Злищева, М.А. Тынянова и др. Заявл. 05.06.84. Опубл. 30.03.89. Бюл. N. 12.

2. А.с. 1638156 СССР, С 12 N 1/00, 1/38, С 12 R 1:19. Способ получения аутоактиватора роста для культивирования Escherichia coli / Т.Я. Вахитов, О.Ю. Яшина. Заявл. 06.12.88. Опубл. 30.03.91. Бюл. N. 12.

3. А.с. 491691 СССР, С 12 b 3/14, С 12 К 1/06. Стимулирующая добавка к синтетической питательной среде для культивирования микроорганизмов / С.Я. Барихин, А.Г. Ткаченко, Р.А. Пшеничнов, В.М. Колотов. Заявл. 22.03.74. Опубл. 15.11.75. Бюл. N. 42.

4. Андронова Т.М. Ликопид новый отечественный высокоэффективный иммуномодулятор / Т.М. Андронова, Б.В. Пинегин // Медицинская картотека. - 1999. - N. 4. - С. 22-27.

5. Ашмарин И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях / И.П. Ашмарин, А.А. Воробьев. Ленинград: Медгиз, 1962. -180 с.

6. Барановский А.Ю. Дисбактериоз и дисбиоз кишечника / А.Ю. Барановский, Э.А. Кондрашина. Санкт-Петербург: Питер, 2000. - 224 с.

7. Белобородова Н.В. Метаболиты анаэробных бактерий (летучие жирные кислоты) и реактивность макроорганизма / Н.В. Белобородова, С.М. Белобородов // Антибиотики и химиотерапия. 2000. - N. 2. - С. 28-36.

8. Беседнова Н.Н. Иммуноторопные свойства 1-3; 1-6-Р-Б-глюканов / Н.Н. Беседнова, Л.А. Иванушко, Т.Н. Звягинцева, Л.А. Елякова // Антибиотики и химиотерапия. 2000. - Т. 45, N. 2. - С. 37-44.

9. Блинкова Л.П. Бактериоцины: критерии, классификация, свойства, методы выявления / Л.П. Блинкова // Журн. микробиол. 2003. - N. 3. - С. 109-113.

10. B.М. Бондаренко, А.А. Воробьев // Журн. микробиол. 2004. - N. 1.1. C. 84-92.

11. Бондаренко В.М. Иммуностимулирующее действие лактобактерий, используемых в качестве основы препаратов пробиотиков /

12. B.М. Бондаренко, Э.И. Рубакова, В.А. Лаврова // Журн. микробиол. 1998. -N. 5.-С. 107-112.

13. Бочков И.А. Бактериальная колонизация и сукцессия у новорожденных детей в аспекте проблемы госпитальных инфекций / И.А. Бочков, Н.М. Овчарова// Журн. микробиол. 1991. - N. 8. - С. 71-74.

14. Бурмистрова A.JI. Иммунный гомеостаз и микросимбиоценоз. Метаморфозы и пути развития воспалительных заболеваний кишечника / A.JI. Бурмистрова. Челябинск: «Челябинский дом печати», 1997. - 216 с.

15. Бухарин О.В. Межбактериальные взаимодействия / О.В. Бухарин, Б.Я. Усвяцов, JI.M. Хуснутдинова // Журн. микробиол. 2003. - N. 4. —1. C. 3-8.

16. Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий: теория и практика / О.В. Бухарин // Журн. микробиол. 2000. - Прилож. к N. 4. - С. 4-7.

17. Вахитов Т.Я. Влияние препаратов Актофлор на выживаемость Escherichia coli М-17 и Salmonella enteritidis при голодании и в смешанных культурах / Т.Я. Вахитов, О.В. Добролеж, JT.H. Петров // Журн. микробиол. 2000. -N. 6. - С. 67-68.

18. Вахитов Т.Я. Действие препарата аутостимуляторов роста Escherichia coli М-17 (Актофлор) на рост чистых и смешанных культур бактерий / Т.Я. Вахитов, О.Ю. Яшина, JT.H. Петров, A.M. Королюк // Журн. микробиол.- 2000. N. 3. - С. 20-24.

19. Воробьев A.A. Бактерии нормальной микрофлоры: биологические свойства и защитные функции / A.A. Воробьев, Е.А. Лыкова // Журн. микробиол. -1999.-N. 6.-С. 102-105.

20. Воробьев A.A. Исследование пристеночной микрофлоры кишечника человека / A.A. Воробьев, Ю.В. Несвижский, Е.М. Липницкий и др. // Журн. микробиол. 2003. - N. 1. - С. 60-63.

21. Воробьева Л.И. Антимутагенные свойства бактерий (обзор) / Л.И. Воробьева, С.К. Абилев // Прикл. биохимия и микробиол. 2002. -Т. 38, N. 2. - С. 115-127.

22. Воспяков В.Г. Гликопептиды лактобацилл регуляторы гемопоэза и иммунитета / В.Г. Воспяков, Л.Н. Петров, И.М. Калинина и др.// Рус. журн. «ВИЧ/СПИД и родств. пробл.». - 2000. - N. 1. - С. 31-32.

23. Габриэлян Р.И. Функции микрофлоры желудочно-кишечного тракта и последствия ее нарушения после хирургических вмешательств / Р.И. Габриэлян, Е.М. Горская, Н.Д. Снегова // Антибиотики и химиотерапия.- 2000. Т. 45, N. 9. - С. 24-29.

24. Гинцбург А.Л. «Quorum sensing» или социальное поведение бактерий / А.Л. Гинцбург, Т.С. Ильина, Ю.М. Романова // Журн. микробиол. 2003. -N. 5.-С. 86-93.

25. Гланц С. Медико-биологическая статистика: Пер. с англ. / С. Гланц. -Москва: Практика, 1999. 459 с.

26. Горин С.Е. Получение иммунологически активных фрагментов пептидогликана бактериальной клеточной стенки / С.Е. Горин, В.В. Есипова, С.М. Навашин // Иммуномодуляторы: Сб. тр. ЦНИИВС им. Мечникова. Москва, 1987. - С. 77-88.

27. Горовиц Э.С. Неспорообразующие анаэробы в норме и патологии: Учебно-методич. пособие / Э.С. Горовиц, Т.И. Карпунина. Пермь, 1999. - 139 с.

28. Государственная Фармакопея СССР. Вып. 2. 11-е изд., доп. -Москва: Медицина, 1990. - 400 с.

29. Государственный реестр лекарственных средств (по состоянию на 1 января 2000 г.): Официальное издание. Минздрав РФ, 2000. - 1202 с.

30. Грачева Н.М. Применение современных лечебных препаратов из метаболитов нормальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта при дисбактериозах кишечника / Н.М. Грачева, О.С. Партии // Новые лекарственные препараты. 2003. - N. 7. - С. 47-48.

31. Данилов B.C. Сенсорные биолюминесцентные системы на основе lux-оперонов разных видов люминесцентных бактерий / B.C. Данилов, А.П. Зарубина, Г.Е. Ерошников и др. // Вест. Моск. университета. Сер. 16. Биология. 2002. - N. 3. - С. 20-24.

32. Доклинические испытания новых медицинских иммунобиологических препаратов: Руководящий документ 42-28-8-89. Москва, 1989. - 31 с.

33. Долгушин И.И. Нейтрофилы и гомеостаз / И.И. Долгушин, О.В. Бухарин. — Екатеринбург: УрО РАН, 2001. 279 с.

34. Дранник Г.Н. Лиофилизат «Солкотриховак» в лечении генитальных инфекций у женщин / Г.Н. Дранник // Еженедельник Аптека. 2002. - N. 4 (325). - С. 12-18.

35. Дыгай A.M. Участие костномозговых фибробластов в восстановлении гранулоцитопоэза при цитостатических миелосупрессиях / A.M. Дыгай, В.В. Жданов, Н.С. Поженько и др. // Бюлл. экспер. биол. и мед. 2000. -N.5.-C. 528-531.

36. Иммунологические методы: Пер. с нем. / Под ред. X. Фримеля. Москва: Мир, 1979.-518 с.

37. Кайдалов A.A. Специфическое связывание мурамилпептидов с мембранами мозга крысы / A.A. Кайдалов, Ю.Н. Уткин, Т.М. Андронова и др. // Биоорганическая химия. 1987.-Т. 13, N. 11.-С. 1523-1529.

38. Калмыкова А.И. Пробиотики: терапия и профилактика заболеваний. Укрепление здоровья / А.И. Калмыкова. Новосибирск: НПФ «Био-Веста», 2001.-208 с.

39. Калюжин О.В. Производные мурамилдипептида в эксперименте и клинике / О.В. Калюжин // Журн. микробиол. 1998. - N. 1. - С. 104-108.

40. Калюжин O.B. Амфифильный дериват мурамилдипептида в терапии мышиной лимфомы EL-4 / О.В. Калюжин, М.В. Нелюбов, Ф.Н. Кузовлев и др. // Вопр. биол. мед. и фарм. химии. 2001. - N. 1. - С. 45-46.

41. Каплин В.Н. Нетрадиционная иммунология инфекций / В.Н. Каплин. -Пермь: Изд-во Перм. гос. мед. академии, 1996. 163 с.

42. Караулов A.B. Направленная регуляция иммунных реакций в профилактике и лечении заболеваний человека / A.B. Караулов, С.И. Сокуренко, О.В. Калюжин, И.В. Евсегнеева // Иммунопатология, аллергология, инфектология. 2000. - N. 1. - С. 7-13.

43. Кафарская Л.И. Микробная экология влагалища / Л.И. Кафарская, О.В. Коршунова, Б.А. Ефимов и др. // Журн. микробиол. 2002. - N. 6. — С. 91-99.

44. Каширская Н.Ю. Значение пробиотиков и пребиотиков в регуляции кишечной микрофлоры / Н.Ю. Каширская // Рус. мед. журн. 2000. - Т. 8, N. 13-14.-С. 572-756.

45. Квасников Е.И. Молочнокислые бактерии и пути их использования / Е.И. Квасников, O.A. Нестеренко. Москва: Наука, 1975. - 384 с.

46. Кетлинский С.А. Эндогенные иммуномодуляторы / С.А. Кетлинский,

47. A.C. Симбирцев, A.A. Воробьев. Санкт-Петербург: Гиппократ, 1992. — 256 с.

48. B.М. Колотов, С.Я. Барихин, А.Г. Ткаченко // Экология и популяционная генетика микроорганизмов: Сб. статей УНЦ АН СССР. Свердловск, 1975. -С. 31-34.

49. Колпаков А.И. Влияние термической обработки рибонуклеазы Bacillus intermedius на ее каталитическую активность и биологические свойства /

50. A.И. Колпаков, О.Н. Ильинская, О.Б. Иванченко и др. // Микробиология. -2001.-Т. 70,N. 1.-С. 24-28.

51. Коробов В.П. Изменение антибиотикочувствительности стафилококков в условиях реализации эффекта пептидного антибактериального фактора /

52. B.П. Коробов, A.B. Титова, JIM. Лемкина, И.И. Механошина // Антибиотики и химиотерапия. 2002. - Т. 47, N. 2. - С. 11-15.

53. Куваева И.Б. Микроэкологические и иммунологические нарушения у детей / И.Б. Куваева, К.С. Ладодо. Москва: Медицина, 1991. - 240 с.

54. Кудлай Д.Г. Бактериоциногения / Д.Г. Кудлай, В.Г. Лиходед. Ленинград:' Медицина, 1966.-201 с.

55. Курепина Н.Е. Микроцины: природа и генетическое детерминирование / Н.Е. Курепина, И.А. Хмель // Молекул, генетика, микробиол. и вирусол. -1986.-N. 4.-С. 3-10.

56. Ленцнер A.A. Лактофлора и колонизационная резистентность /

57. A.A. Ленцнер, Х.П. Ленцнер, М.Э. Микельсаар и др. // Антибиотики и химиотерапия. 1987. - N. 3. - С. 173-179.

58. Лобанок А.Г. Биотехнология микробных ферментов / А.Г. Лобанок, Н.И. Астапович, Р.В. Михайлова. Минск: Наука и техника, 1989. - 205 с.

59. Лозовой В.П. О зонах распределения иммунологических показателей /

60. B.П. Лозовой, В.В. Губарев, E.H. Наумова, Т.В. Елисеева // Иммунология. -1989.-N. 2.-С. 50-53.

61. Лопатина Т.К. Иммуномодулирующее действие препаратов-эубиотиков / Т.К. Лопатина, М.С. Бляхер, В.Н. Николаенко, М.Н. Ниловский // Вестн. РАМН, 1997. N. 3. - С. 30-33.

62. Лыкова Е.А. Нарушения микрофлоры кишечника и иммунитета у детей с аллергическими дерматитами и их коррекция / Е.А. Лыкова, А.О. Мурашова, В.М. Бондаренко и др. // Рос. педиатр, журн. 2000. - N. 2. - С. 20-24.

63. Мальцева H.H. Иммуномодулирующие свойства некоторых микробов -представителей нормальной микрофлоры кишечника / H.H. Мальцева, М.М. Шкарупета, Б.В. Пинегин, В.М. Коршунов // Антибиотики и химиотерапия. 1992. - Т. 37, N. 12. - С. 41-43.

64. Манько В.М. Иммуномодуляция: история, тенденции развития, современное состояние и перспективы / В.М. Манько, Р.В. Петров, P.M. Хаитов // Иммунология. 2002. - Т. 23, N. 3. - С. 132-138.

65. Маргитич В. Лиофилизат «Солкотриховак»: доказанная эффективность в лечении и профилактике рецидивов урогенитальных инфекций у женщин / В. Маргитич // Еженедельник Аптека. 2002. - N. 18-19 (339-340). - С. 4-9.

66. Маркова Т.Н. Бактериальные иммуномодуляторы / Т.Н. Маркова, Д.Г. Чувиров // Рус. мед. журн. 2001. - Т. 9, N. 16-17. - С. 703-706.

67. Масная Н.В. Чувствительность иммунокомпетентных клеток мышей линии DBA/2 и C57BL/6 к циклофосфану / Н.В. Масная, A.A. Чурин, О.С. Борсук, Е.Ю. Шерстобоев // Бюлл. экспер. биол. 2003. - N. 4. - С. 427-431.

68. Методические рекомендации по использованию поведенческих реакций животных в токсикологическом эксперименте / Сост.: E.H. Буркацкая, В.Ф. Витер, Л.А. Тимофеевская и др. Киев, 1980. - 11 с.

69. Методические рекомендации по оценке иммунотоксических свойств фармакологических средств. Москва: Фармакологический комитет МЗ СССР, 1992.-39 с.

70. Методические рекомендации по экспериментальному (доклиническому) изучению лекарственных препаратов для местного лечения гнойных ран. — Москва: Фармакологический комитет МЗ СССР, 1989. 21 с.

71. Методические указания по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом диффузии в агар с использованием дисков. Москва: МЗ СССР, 1983. - 16 с.

72. Морозов В.Г. Тималин и его иммунобиологическая активность / В.Г. Морозов, В.Х. Хавинсон // Иммунобиология гормонов тимуса / Под ред. Ю.А. Гриневича, В.Ф. Чеботарева. Киев, 1989. - С. 125-142.

73. Мосиенко B.C. Властен новый иммуномодулятор биологического происхождения / B.C. Мосиенко, М.Д. Мосиенко, З.Д. Савцова и др. // Журн. АМН Украины. - 1999. - N. 5. - С. 79-86. - На укр. яз.

74. Мосиенко B.C. Эффективность иммуномодулятора бластен в профилактике и лечении лучевой и химической цитосупрессии / B.C. Мосиенко, З.Д. Савцова, Т.А. Менек и др. // Иммунология и аллергология. 1999. -N. З.-С. 54-56.

75. Мотавкина Н.С. Иммунный статус у детей с кишечными инфекциями различной этиологии / Н.С. Мотавкина, Г.И. Чубенко, Н.В. Сильчук // Иммунопатология, аллергология, инфектология. 2001. - N. 2. - С. 91-97.

76. Назарова Е.К. Микробиоценоз влагалища и его нарушения. Этиология, патогенез, клиника, лабораторная диагностика / Е.К. Назарова, Е.И. Гиммельфарб, Л.Г. Созаева // Антибиотики и химиотерипия. 2002. — Т. 47, N. 4. - С. 34-42.

77. Определение токсичности воды и водных экстрактов из объектов окружающей среды по интенсивности биолюминесценции бактерий: Методические рекомендации. Москва: Государственный комитет санэпиднадзора России, 1996. - 9 с.

78. B.П. Фисенко // Ведомости Фармакологического комитета. 1999. - N. 2. —1. C. 15-21.

79. Панин А.Н. Иммунология и кишечная микрофлора / А.Н. Панин, Н.И. Малик, Е.В. Малик. Москва, 1998. - 47 с.

80. Парфенов А.И. Лечение дисбактериоза кишечника препаратом Хилак-форте / А.И. Парфенов, Ю.К. Калоев, Н.Г. Федотова // Провизор. 1998. - N. 9. -С. 12-15.

81. Патент 20509 Украина, А 61 К 35/74, С 12 1/20. Биотехнологический способ получения иммуномодулирующего препарата / В. А. Болоховская, М.Ю. Волкова, В.Г. Воспяков и др. Заявл. 28.08.95. Опубл. 15.07.97. -На укр. яз.

82. Патент 2090612 Россия, С 12 N 1/38. Стимулятор роста бактериальной культуры / Т.Я. Вахитов, Л.Н. Петров, О.Ю. Яшина. Заявл. 17.02.93. Опубл. 20.09.97. Бюл. N. 26.

83. Патент 2151796 Россия, С 12 N 1/20, С 12 Р 1/04. Штамм Lactococcus lactis -продуцент бактериоцина низина / М.Б. Биттеева, В.В. Бирюков, И.Н. Щеблыкин и др. Заявл. 08.02.99. Опубл. 27.06.00. Бюл. N. 18.

84. Петров Л.Н. Методы выделения пептидогликанов из различных видов лактобацилл, их идентификация и биологическая активность / Л.Н. Петров, В.Г. Воспяков, С.Б. Гришняков и др. // Рус. журн. «ВИЧ/СПИД и родств. пробл.». 2000. - N. 1. - С. 32.

85. Петухов В.А. Нарушение функций печени и дисбиоз при липидном дистресс-синдроме Савельева и их коррекция пребиотиком Хилак-форте /

86. B.А. Петухов //Рус. мед. журн. -2002. Т. 10, N. 4. - С. 158-164.

87. Пинегин Б.В. Мурамилдипептиды иммунотропные средства нового поколения / Б.В. Пинегин, Т.М. Андронова // Мед. картотека. - 1999. - N. 3. - С. 26-29.

88. Пинегин Б.В. Определение естественных антител к N-ацетилглюкозаминил-N-ацетилмурамилдипептиду (ГМДП) в сыворотке крови здоровых людей / Б.В. Пинегин, А.В. Кулаков, Е.А. Макаров // Иммунология. 1995. - N. 1.1. C. 42-45.

89. Полянцева JI.P. Осложнения цитостатической терапии / JI.P. Полянцева, Н.Б. Гордовская, Т.Н. Краснова и др. // Тер. архив. 1989. - N. 12. - С. 63-66.

90. Прокопенко В.Д. Иммунологические аспекты эффективности бактериальных препаратов при заболеваниях слизистой полости рта / В.Д. Прокопенко, Г.В. Скрипкина, В.П. Мудров и др. // Рус. мед. журн. 2002. - Т. 10. N. 3. -С. 129-138.

91. Пшеничнов P.A. Микробная популяция саморегулируемая система / P.A. Пшеничнов, В.М. Колотов, С.Я. Барихин и др. // Экология и популяционная генетика микроорганизмов: Сб. статей УНЦ АН СССР. — Свердловск, 1975. - С. 3-13.

92. Рабинович И.М. Опыт клинического применения препарата Имудон при лечении заболеваний слизистой оболочки рта / И.М. Рабинович, О.Ф. Рабинович // Клиническая стоматология. 2000. - N. 3. - С. 64-65.

93. Ронин B.C. Руководство к практическим занятиям по методике клинических лабораторных исследований / B.C. Ронин, Г.М. Старобинец, H.JI. Утевский. Москва: Медицина, 1982. - 320 с.

94. Семикоз Н.Г. Применение лекарственного препарата Хилак при лечении поражений кишечника, вызванных лучевой терапией / Н.Г. Семикоз, Л.И. Мокан, В.П. Фефелова и др. // Еженедельник Аптека. 2000. - N. 39 (260).-С. 4-5.

95. Соколова H.A. Некоторые вопросы экологии антагонизма лактобактерий / H.A. Соколова, О.Д. Гольдина // Экология и популяционная генетика микроорганизмов: Сб. статей УНЦ АН СССР. Свердловск, 1975. -С. 42-46.

96. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / Под ред. М.О. Биргера. Москва: Медицина, 1982. - 464 с.

97. Суворова К.Н. Атопический дерматит: иммунопатогенез и стратегия иммунотерапии / К.Н. Суворова // Рус. мед. журн. 1998. - Т. 6, N. 6. — С. 344-347.

98. Телешева Л.Ф. Механизмы противоинфекционной защиты репродуктивного тракта женщин / Л.Ф. Телешева, В.Ф. Долгушина, И.И. Долгушин // Журн. микробиол. 1998. - N. 4. - С. 85-90.

99. Токсикология новых промышленных химических веществ. — Москва: Медицина, 1973. С. 47.

100. Трахтенберг И.М. Проблема нормы в токсикологии (современные представления и методические подходы, основные параметры и константы) /

101. И.М. Трахтенберг, P.E. Сова, В.О. Шефтель, Ф.А. Оникиенко. Москва: Медицина, 1991.-208 с.

102. Тюрин М.В. К механизму антагонистической активности лактобацилл / М.В. Тюрин, Б.А. Шендеров, Н.Г. Рахимова и др. // Журн. микробиол. — 1989. -N. 2.-С. 3-8.

103. Федотова Т.А. Роль дисбактериоза кишечника в формировании иммунной недостаточности у детей / Т.А. Федотова, A.A. Михайленко, С.Ф. Сергеева и др. // Иммунология. 2001. - N. 3. - С. 41-45.

104. Филатова C.B. Особенности клинико-иммунологического действия ликопида при некоторых хронических заболеваниях лор-органов / C.B. Филатова, A.B. Симонова, М.Е. Артемьев, Н.М. Голубева // Иммунология. 2001. - N.2. - С. 37-42.

105. Филиппов В.А. Бактериоциногения лактобацилл полости рта /

106. B.А. Филиппов: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. Москва, 1982. - 27 с.

107. Фоменко Д.Э. Новые пептидные антибиотики микроцины типов В и С: структура и генетические детерминанты синтеза / Д.Э. Фоменко, А.З. Мелицкая, Г.С. Катруха и др. // Молекул, биол. - 1998. - N. 2.1. C. 382-386.

108. ФС 42-3947-00 Бифидумбактерин сухой.

109. ФС 42-3365-00 Колибактерин сухой.

110. ФС 42-0054-00 Лактобактерин сухой.

111. ФС 42-3874-99 Физико-химические, химические, физические и иммунохимические методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов.

112. Хавкин А.И. Микробиоценоз кишечника и иммунитет / А.И. Хавкин // Рус. мед. журн. 2003. - Т. 11, N. 3. - С. 122-126.

113. Хаитов P.M. Иммуномодуляторы: механизм действия и клиническое применение / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. 2003. - N. 4. -С. 196-202.

114. Хайдуков C.B. Макрофаги главная мишень дисахарид-содержащих мурамилпептидов / C.B. Хайдуков, Р.Л. Комалева, В.А. Несмеянов // Иммунология. - 1995. - N. 3. - С. 26-30.

115. Хмель И.А. Микроцины пептидные антибиотики энтеробактерий: генетический контроль синтеза, структура, механизм действия / И.А. Хмель //Генетика. - 1999. - Т. 35, N. 1. - С.5-16.

116. Хоробрых В.В. Методы постановки реакции бласттрансформации в микромодификации / В.В. Хоробрых, A.B. Пронин, А.Ф. Киркин, A.B. Санин // Иммунология. 1983. - N. 3. - С. 76-79.

117. Хурнова JI.M. Низкомолекулярные иммуномодуляторы микробного происхождения / JI.M. Хурнова, Л.П. Иваницкая // Антибиотики и химиотерапия. 1989. - Т. 34, N. 10. - С. 786-792.

118. Цой И.Г. Иммуностимулирующее действие лактобактерий на цитотоксичность естественных клеток киллеров и продукцию интерферона / И.Г. Цой, А.С. Сапаров, И.К. Тимофеева и др. // Журн. микробиол. 1994. -N. 6.-С. 112-113.

119. Чахава О.В. Микробиологические и иммунологические основы гнотобиологии / О.В. Чахава, Е.М. Горская, С.З. Рубан. Москва: Медицина, 1982. - 152 с.

120. Черкасов С.В. Роль биологических свойств вагинальных лактобацилл в процессах колонизации / С.В. Черкасов, Т.М. Забирова, А.В. Сгибнев, И.В. Черкасов // Журн. микробиол. 2003. - N. 4. - С. 61-64.

121. Чернецова Л.Ф. Иммунотерапия сопровождения ликопидом больных распространенными формами злокачественных новообразований / Л.Ф. Чернецова, П.Б. Зотов // Рос. онкол. журн. 2001. - N. 5. - С. 49-53.

122. Чумакова М.М. Иммуномодулятор ликопид в лечении хронического рецидивирующего фурункулеза / М.М. Чумакова, Т.М. Андронова // Terra medica. 2001. - N. 4. - С. 16-17.

123. Шендеров Б.А. Медицинская и микробная экология и функциональное питание: В 3 т. Т. I: Микрофлора человека и животных и ее функции / Б.А. Шендеров. Москва: «ГРАНТЪ», 1998. - 288 с.

124. Шендеров Б.А. Медицинская и микробная экология и функциональное питание: В 3 т. Т. II: Социально-экологические и клинические последствия дисбаланса микробной экологии человека и животных / Б.А. Шендеров. -Москва: «ГРАНТЪ», 1998. 416 с.

125. Шендеров Б.А. Медицинская и микробная экология и функциональное питание: В 3 т. Т. III: Пробиотики и функциональное питание / Б.А. Шендеров. Москва: «ГРАНТЪ», 2001. - 288 с.

126. Шепелева И.Б. Изменение естественного иммунитета мышей при введении бластолизина гликопептида клеточной стенки Lactobacillus bulgaricus / И.Б. Шепелева, Н.С. Захарова, Т.Н. Ремова и др. // Антибиот. и мед. биотехнол. - 1985. - N. 6. - С. 442-446.

127. Шилов Ю.И. Некоторые методические подходы к оценке показателей общего и дифференцированного фагоцитоза лейкоцитов периферической крови. Характеристика различий у здоровых людей / Ю.И. Шилов,

128. B.П. Владыкина, А.Т. Атнагузина // Пермский мед. журн. 1998. - Т. 15, N. 2.-С. 3-9.

129. Шмырина И.Л. Люминесцентный микробиотест: возможные пути его оптимизации и расширение сферы использования / И.Л. Шмырина: Дис. . канд. биол. наук. Пермь, 2000. - 171 с.

130. Шульпекова Ю.О. Применение пробиотиков в клинической практике / Ю.О. Шульпекова // Болезни органов пищеварения. 2003. - Т. 5, N. 1.1. C. 28-32.

131. Щербаков И.Т. Применение пребиотика хилак-форте в комплексном лечении больных ОКИ и хроническими заболеваниями ЖКТ у взрослых / И.Т. Щербаков, Н.А. Малышев, Н.М. Грачева и др. // Новые лекарственные препараты. -2003. -N. 7. С. 51-59.

132. Юшков В.В. Иммунокорректоры: Руководство для врачей и провизоров / В.В. Юшков, Т.А. Юшкова, А.В. Казьянин. Екатеринбург: ООО «ИРА УТК», 2002.-255 с.

133. Ярилин А.А. Апоптоз: природа феномена и его роль в норме и при патологии / А.А. Ярилин // Актуальные проблемы патофизиологии (избранные лекции) / Под ред. Б.Б. Мороза. Москва, 2001. - С. 13-56.

134. Adam A. Muramyl peptides: immunomodulators, sleep factors and vitamins / A. Adam, E. Lederer // Med. Research Rev. / Ed. D.G. Stevens. New York: Academic Press, 1984. - Vol. 4. - P. 111 -152.

135. Adorns M.R. Growth ingibition of food-borne pathogens by lactic and acetic acids and their mixtures / M.R. Adorns, C.I. Hill // Intern. J. Food Sci. Technol. -1988.-Vol. 23.-P. 287-292.

136. Amant D.C.St. Inhibition of Neisseria gonorrhoeae by Lactobacillus species that are commonly associated with the female genital tract / D.C.St. Amant, I.E. Valentin-Bon, A.E. Jerse // Infection and Immunity. 2002. - Vol. 70. -P. 7169-7171.

137. Anderson R. The significance and potential molecular mechanisms of gastrointestinal barrier homeostasis / R. Anderson // Scand. J. Gastroenterol. -1997.-Vol. 32, N. l.-P. 1073-1083.

138. Andronova T.M. The structure and immunolocical function of glucosaminylmuramyl peptides / T.M. Andronova, V.T. Ivanov // Sov. Med. Rev. D. Immunol. 1991. - Vol. 4. - P. 1-63.

139. Annuk H. Antagonistic activity of Lactobacilli against urinary Escherichia coli / H. Annuk, I. Vainumae, K. Aimla et al. // Microb. Ecol. Health and Disease. -1999.-Vol. 11,N. 2.-P. 117.

140. Ashar M.N. Intestinal microflora, fermented milks and their role in human health / M.N. Ashar, J.B. Prajapati // Everyman's Sci. 1999. - N. 1. - P. 4-7.

141. Atrin A. Mode of action, purification and amino acid sequence of plantaricin CI9, an anti-Listeria bacteriocin produced by Lactobacillus plantarum CI9 / A. Atrin, N. Rekhif, A.J. Moir et ol. // Intern. J. Food Microbiol. 2001. -Vol. 68.-P. 93-104.

142. Audibert F. Adjuvants for vaccines, a quest / F. Audibert // Intern. Immunopharmacol. 2003. - Vol. 3, N. 8. - P. 1187-1193.

143. Aumerich M.T. Bacteriocin-producing in Spanish-style fermented sausages: Characterization of bacteriocins / M.T. Aumerich, M. Garriga, J.M. Monfort et al. //Food Microbiol.-2000.-Vol. 17, N. 11.-P. 33-35.

144. Baquero F. The microcins / F. Baquero, F. Moreno // Microbiol. Lett. 1984. -Vol. 23.-P. 117-124.

145. Barker K.F. Antibiotic resistanse: A current perspective / K.F. Barker // Brit. J. Clin. Pharmacol. 1999. - Vol. 48, N. 2. - P. 109-124.

146. Bengmark S. Colonic food: pre- and probiotics / S. Bengmark // Am. J. Gastroenterol. 2000. - Vol. 95, N. 1. - P. 5-7.

147. Bin Hafeez B. Immunomodulatory effects of fenugreek (Trigonella foenum graecum L.) extract in mice / B. Bin Hafeez, R. Haque, S. Parvez et ol. // Intern. J. Immunopharmacol. 2003. - Vol. 3, N. 2. - P. 257-265.

148. Bogovic M.B. Bacteriocinogenic activity of lactobacilli isolated from cheese and baby faeces / M.B. Bogovic, I. Rogelj // Food Technol. and Biotechnol. -1999.-N. 2.-P. 93-100.

149. Borriello S.P. Microbial flora of the gastrointestinal tract / S.P. Borriello // Microbial metabolism in the digestive tract / Ed. MJ. Hill. New York: Academic Press, 1986. - P. 3-15.

150. Brashears M.M. Bile salt deconjugation and cholesterol removal from media by Lactobacillus casei / M.M. Brashears, S.E. Gilliland, L.M. Buck // J. Dairy Science. 1998. - Vol. 36, N. 3. - P. 281-301.

151. Brock T.D. Biology of Microorganisms / Ed. M.T. Madigan, J.N. Martinko, J. Parker. London: Prentice Hall Internacional, 1997. - 997 p.

152. Calewaert R. Bacteriocinproduction with Lactobacillus amylovorus DCE 741 is improved and stabilized by fed-batch fermentation / R. Calewaert, L. De Vuyst // Appl. and Environ. Microbiol. 2000. - Vol. 66, N. 2. - P. 606-613.

153. Castellano P. Mode of action of lactocin 705, a two-component bacteriocin from Lactobacillus casei CRL705 / P. Castellano, R. Raya, G. Vignolo I I Inter. J. Food Microbiol. 2003. - Vol. 85, N. 1-2. - P. 35-43.

154. Chermesh I. Probiotics scope and promise in inflammatory bowel disease / I. Chermesh, R. Eliakim // IMAJ. - 2002. - N. 4. - P. 353-356.

155. Chhabra R.S. Intestinal absorption and metabolism of xenobiotics in laboratory animals / R.S. Chhabra, W.C. Eastin // Intestinal Toxicology / Ed. C.M. Schiller. -New York: Raven Press, 1984. P. 28-34.

156. Chowdhury A.R. A highly convergent approach for the synthesis of disaccharide repeating units of peptidoglycan / A.R. Chowdhury, A. Siriwardena, G.J. Boons // Tetrahedron Lett. 2002. - Vol. 43, N. 43. - P. 7805-7807.

157. Christl S.U. Production, metabolism and extretion of hidrogen in the large intestin / S.U. Christl, P.R. Murgstroyd, G.R. Gibson, J.H. Cummings // Gastroenterol. 1992. - Vol. 102, N. 2. - P. 498-503.

158. Chung T.C. In vitro studies on reuterin synthesis by Lactobacillus reuteri / T.C. Chung, L. Axelsson, S.E. Lindgren et ol. // Microb. Ecol. Health and Disease. 1989. - Vol. 2. - P. 137-144.

159. Cohen L.Y. Modulation of expression of class II MHC and CD40 molecules in murine B cells by various muramyl dipeptides / L.Y. Cohen, G.M. Bahr, B.C.A. Darcissac, M.A. Parant // Cell. Immunol. 1996. - N. 1. - P. 75-84.

160. Cross M.L. Anti-allergy properties of fermented foods: an important immunoregulatory mechanism of lactic acid bacteria? / M.L. Cross, L.M. Stevenson, H.S. Gill // Intern. J. Immunopharmacol. 2001. - Vol. 1, N. 5. -P. 891-901.

161. Cummings J.H. Role of intestinal bacteria in nutrient metabolism / J.H. Cummings, G.T. Macfarlane // Am. J. Clin. Nutr. 1997. - N. 16. - P. 3-11.

162. Darcissac E.C.A. Selective potentiation of cytokine expression in human whole blood by myrabytide, a myramyl dipeptide analogue / E.C.A. Darcissac, G.M. Bahr, P.R. Pouillart et al. // Cytokine. 1996. - Vol. 8, N. 8. - P. 658-666.

163. Diep D.B. A bacteriocin-like peptide induces bacteriocin synthesis in Lactobacillus plantarum Cll / D.B. Diep, L.S. Havarstein, I.F. Nes // Mol. Microbiol.- 1995.-Vol. 18.-P. 631-639.

164. Doeschel M.A. Antimicrobial substances from lactic acid bacteria for use as food preservatives / M.A. Doeschel // Food Thechnol. 1989. - Vol. 43. -P. 164-167.

165. During K. The non-enzymatic microbicidal activity of lysozymes / K. During, P. Porsch, A. Mahn et ol. // FEBS Lett. 1999. - N. 2-3. - P. 93-100.

166. Dutta R.C. Peptide immunomodulators versus infection, an analysis / R.C. Dutta // Immunol. Lett. 2002. - Vol. 83, N. 3. - P. 153-161.

167. Ehrmann M.A. A gene cluster encoding plantaricin 1.25beta and other bacteriocin-like peptides in Lactobacillus plantarum TMW1.25. / M.A. Ehrmann, A. Remiger, V.G. Eijsink, R.F. Vogel // Biochim. Biophys. Acta. 2000. -Vol. 1490, N. 3.-P. 355-361.

168. Elliott S.N. Bacteria rapidly colonize and modulate haeling of gastric ulcers in rats / S.N. Elliott, A. Buret, W. McKnight et al. // Am. J. Physiol. 1998. - N. 3, Pt. l.-P. 425-432.

169. Elmer G.W. Probiotics: «living drugs» / G.W. Elmer // Am. J. Health Syst. Pharm. 2001. - Vol. 58, N. 12. - P.l 101-1109.

170. Enan G. Inhibition of Bacillus cereus ATCC 14579 by plantaricin UG1 in vitro and in food / G. Enan // Nahrung. 2000. - Vol. 44. - P. 364-367.

171. Ganzle M.G. Caracterization of reutericyclin produced by Lactobacillus reuteri LTH2584 / M.G. Ganzle, L. Holtzel, W. Jens et al. // Appl. and Environ. Microbiol. 2000. - Vol. 66, N. 10. - P. 4352-4333.

172. Garneau S. Two-peptide bacteriocins produced by lactic acid bacteria / S. Garneau, N.I. Martin, J.C. Vederas // Biochim. 2002. - Vol. 84, N. 5-6. -P. 577-592.

173. Gary D.M. Cell-cell communicition in gram-positive bacteria / D.M. Gary, L.A.B. Bettina// Annu. Rev. Microbiol. 1997. - Vol. 51. - P. 527-564.

174. Gibson G.R. Aspects of in vitro and in vivo research approaches directed toward identifying probiotics and prebiotics for human use / G.R. Gibson, R. Fuller // J. Nutr. 2000. - Vol. 130, N. 2. - P. 391-395.

175. Gionchetti P. Oral bacteriotherapy as maintenance treatment in patients with chronic pouchitis: a double blind, placebo-controlled trial / P. Gionchetti, F. Rizzello, A. Venturi et al. // Gasrtoenterol. 2000. - Vol. 119. - P. 305-309.

176. Guenonou M. Interleucin-1 a mediator of immunoadjuvant peptidoglycans / M. Guenonou, T. Vacheron, C. Nauciel // Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. 1985. -N. 3-4.-P. 273-284.

177. Hancock R.E.W. Cationic peptides: A new source of antibiotics / R.E.W. Hancock, R. Lehrer // Trends Biotechnol. 1998. - N. 2. - P. 83-88.

178. Harty D.W.S. Patogenic potencial of lactobacilli / D.W.S. Harty, H.J. Oakey, M. Partikakis et al. // Intern. J. Food Microbiol. 1994. - Vol. 24, N. 1/2. -P. 179-189.

179. Hauge H.H. Membrane-mimicking entities induce structuring of the two-peptide bacteriocins plantaricin E/F and plantaricin J/K / H.H. Hauge, D. Mantzilas, V.G. Eijsink, J. Nissen-Meyer // J. Bacterid. 1999. - Vol. 181, N. 3. - P. 740-747.

180. Havell E.A. The role of the flora in cytokine responses / E.A. Havell // Microb. Ecol. Health and Disease. 1999. - N. 2. - P. 104.

181. Heidari M. Antimicrobial anionic peptide binds in vivo to Mannheimia (Pasteurella) haemolytica attached to ovine alveolar epithelium / M. Heidari, A. Hamir, R.C. Cutlip, K.A. Brogden // Intern. J. of Antimicrob. Agents. 2002. -Vol.20,N. l.-P. 69-72.

182. Holdeman L.V. Recent changes in identification and classificacion of some anaerobes / L.V. Holdeman, E.P. Cato, W.E.C. Moore // Anaerobic bacteria selected topics / Ed. D.W. Lambe. New York, 1980. - P. 25-38.

183. Holo H. Plantaricin W from Lactobacillus plantarum belongs to a new family of two-peptide lantibiotics / H. Holo, Z. Jeknic, M. Daeschel et ol. // Microbiol. -2001.-Vol. 147.-P. 643-651.

184. Holton W.C. Fresh ideas for food safety / W.C. Holton // Environ Health Perspect. 2000. - Vol. 108, N. 11.-P. 516-519.

185. Ishibashi N. Probiotics and safety / N. Ishibashi, S. Ymazaki // Am. J. Clin. Nutr. 2001. - N. 73.-P. 465-470.

186. Isolauri E. Probiotics in the management of atopic eczema / E. Isolauri, T. Arvola, Y. Sutas et ol. // Clin. Exp. Allergy. 2000. - Vol. 30, N. 11. -P. 1604-1610.

187. Jerne N.K. Plaque formation in agar by single antibody-producing cells / N.K. Jerne, A.A. Nordin // Science. 1963. - Vol. 140, N. 3365. - P. 405.

188. Kailasapathy K.A. Survival and therapeutic potential of probiotic organisms with reference to Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium spp. / K.A. Kailasapathy, J. Chin // Immunol, and Cell. Biol. 2000. - Vol. 78. - P. 80-88.

189. Kalliomaki M. Probiotics during pregnancy and breast-feeding might confer immunomodulatory protection against atopic disease in the infant / M. Kalliomaki, E.J. Isolauri // Allergy Clin. Immunol. 2002. - Vol. 109, N. 1. -P. 119-121.

190. Kalliomaki M. Probiotics in primary prevention of atopic disease: a randomised placebo-controlled trial / M. Kalliomaki, S. Salminen, H. Arvilommi et ol. // Lancet. 2001. - Vol. 357, N. 9262. - P. 1076-1079.

191. Kanatani K. Isolation and characterization of acidocin A and cloning of the bacteriocin gene from Lactobacillus acidophilus / K. Kanatani, M. Oshimura, K. Sano // Appl. Environm. Microbiol. 1995. - Vol. 61, N. 3. - P. 7-14.

192. Kim S.E. Anticancer activity of hydrophobic peptides from soy proteins / S.E. Kim, H.H. Kim, J.Y. Kim et ol. // Biofactors. 2000. - Vol. 12. -P. 151-155.

193. Kleerebezem M. Quorum sensing by peptide pheromones and two-component signal-transdution systems in Gram-positive bacteria / M. Kleerebezem, L.E.N. Quadri, O.P. Kuipers, W.M. de Vos // Mol. Microbiol. 1997. - Vol. 24. -P. 895-904.

194. Korpela M.T. Recombinant Esherichia coli sensor strain for the detection of tetracyclines / M.T. Korpela, J.S. Kurittu, J.T. Karvinen, M.T. Karp // Anal. Chem. 1998. -N. 6. - P. 4457-4462.

195. Kubota T. Intrapreoptic microinjection of TNF-a enhances non-REM sleep in rats / T. Kubota, N. Li, Z. Guan et ol. // Brain Research. 2002. - Vol. 32, N. 1. -P. 37-44.

196. Lidbeck A. Lactobacilli, anticarcinogenic activites and human intestinal microflora / A. Lidbeck // Eur. J. Cancer. Prev. 1992. - Vol. 1, N. 5. -P. 341-353.

197. Lilley D.M. Probiotics: Growth promoting factors produced by microorganisms / D.M. Lilley, R.H. Stillwell // Science. 1965. - Vol. 147. -P. 747-748.

198. Link-Amster H. Modulacion of a specific humoral immune response and changes in intestinal flora mediated through fermented milk intake / H. Link-Amster // FEMS Immunol. Med. Microbiol. 1995. - Vol. 11, N. 3-4. - P. 273.

199. Luckey T.D. Overview of gastrointestinal microecology / T.D. Luckey // Die Nahrung. 1987. - Vol. 31, N. 5-6. - P. 142-148.

200. MacFarlane G.T. Human colonic microbiota: ecology, physiology and metabolic protential of intestinal bacteria / G.T. MacFarlane, S. MacFarlane // Scand. J. Gastroenterol. 1997. - Vol. 32, Suppl. 222. - P. 3-10.

201. Mack D.R. Probiotics inhibit enteropathogenic E. coli adherence in vitro by inducing intestinal mucin gene expression / D.R. Mack, M. Sonia, W. Shu et al. // Am. J. Physiol. 1999. - Vol. 276, N. 4, Pt. 1. - P. 941-950.

202. Majamaa H. Probiotics: a novel approach in the management of food allergy / H. Majamaa, E. Isolauri // J. Allerg. and Clin. Immunol. 1997. - Vol. 99, N. 2. -P. 179-185.

203. Masek K. Neuroendocrine immune interactions in health and disease / K. Masek, P. Slansky, P. Petrovicky, J.W. Hadden // Intern. J. Immunopharmacol. 2003. - Vol. 3, N. 8. - P. 1235-1246.

204. Masihi K.N. Immunomodulators in infectious diseases: panoply of possibilites / K.N. Masihi // Intern. J. Immunopharmacol. 2000. - Vol. 22, N. 12. -P. 1083-1091.

205. Matsuzaki T. Modulating immune responses with probiotic bacteria / T. Matsuzaki, J. Chin // Immunol, and Cell. Biol. 2000. - Vol. 78, N. 1. -P. 67-73.

206. McAuliffe O. Lantibiotics: structure, biosynthesis and mode of action / O. McAuliffe, C. Hill, R.P. Ross // FEMS Microbiol. Rev. 2001. - Vol. 25, N. 3. -P. 285-308.

207. McAuliffe O. Regulation of immunity to the two-component lantibiotic,lacticin 3147, by the transcriptional repressor LtnR / O. McAuliffe, T. O'Keeffe, i

208. C. Hill, R.P. Ross // Mol. Microbiol. 2001. - Vol. 39, N. 4. - P. 982-993.

209. McGroarfy I.A. Anti-tumor activity of lactobacilli in vitro / I.A. McGroarfy, L.A. Hawthorn, G. Reid // Microbiol. Lett. 1988. - Vol. 39. - P. 105-112.

210. Medzhitov R. Innate immunity / R. Medzhitov, C. Janeway // New England J. Medicine. 2000. - N. 3. - P. 338-344.

211. Meniok T.A. Effect of immunomodulator from Lactobacillus Delbrueckii on therapeutic efficacy of cyclophosphamide in mice with Levis carcinoma / T.A. Meniok, I.M. Voyejkova, O.Y. Yudina et ol. // Exper. Oncol. 2000. -N. 22.-P. 211-214.

212. Meshcheryakova E. Prevention of experimental septic shock by pretreatment of mice with muramyl peptides / E. Meshcheryakova, S. Guryanova, E. Makarov et al. // Intern. J. Immunopharmacol. 2001. - Vol. 1, N. 9-10. - P. 1857-1865.

213. Messens W. Inhibitory substances produced by Lactobacilli isolated from sourdoughs a review / W. Messens, L.D. Vuyst // Intern. J. Food Microbiol. -2002.-Vol. 72, N. 1-2.-P. 31-43.

214. Messi P. Detection and preliminary characterization of a bacteriocin (plantaricin 35d) produced by a Lactobacillus plantarum strain / P. Messi, M. Bondi, C. Sabia et ol. // Int. J. Food Microbiol. 2001. - Vol. 64. - P. 193-198.

215. Metchnikoff E. The Prolongation of Life: Optimostic Dtudies / E. Metchnikoff. -New York: GPPutmen's Sons, 1908.-P. 161-183.

216. Mogensen G. Functional aspects of pro- and prebiotics. A literature review on immune modulation and influence on cancer / G. Mogensen, I. Rowland, T. Midtvedt, R. Fonden // Microb. Ecol. Health and Disease. 2000. - Vol. 12, N. 2.-P. 40-44.

217. Moll G.N. Complementary and overlapping selectivity of the two-peptide bacteriocins plantaricin EF and JK / G.N. Moll, E. Akker, H.H. Hauge et ol. // J. Bacterid. 1999. - Vol. 181. - P. 4848-4852.

218. Mosienko M.D. The protective action of immunomodulator of bacterial origin and melatonin in mice with cyclophosphamide-induced myelosuppression / M.D. Mosienko, L.S. Lyniv, S.S. Kireeva et ol. // Exp. Oncol. 2002. - N. 24. -P. 145- 149.

219. Muller-Adolf H. Comparative cytokine inducing pattern of lactic acid bacteria for mucosal vaccine development / H. Muller-Adolf, C. Grangette, D. Goudercourt et al. // Immunol. Lett. 1999. - N. 1. - P.33.

220. Nacajima K. Antihypertensive efect of extract of Lactobacillus casei in patients with hypertension / K. Nacajima, Y. Hata, Y. Osono et al. // J. Clin. Biochem. Nutr. 1995. -Vol. 18.-P. 181-187.

221. Narushima S. Human intestinal bacteria and bile acid transformación in gnotobiotic mice / S. Narushima, K. Iton, K. Kuruma, K. Uchida // Microb. Ecol. Health and Disease. 1999.-Vol. 11,N. 2.-P. 122.

222. Nattress F.M. Effects of treatment with lysozyme and nisin on the microflora and sensory properties of commercial pork / F.M. Nattress, L.P. Baker // Intern. J. Food Microbiol. 2003. - Vol. 85, N. 3. - P. 259-267.

223. Navarro L. Bacteriocin production by lactic acid bacteria isolated from Rioja red wines / L. Navarro, M. Zarazaga, J. Sbenz et al. // J. Appl. Microbiol. 2000. -Vol. 88, N. l.-P. 44-51.

224. Okada M. The influence of intestinal flora on the healing of intestinal anastomosis in rats / M. Okada, C. Bothin, K. Kanazawa, T. Midtvedt // Microb. Ecol. Health and Disease. 1999. -N. 2. - P. 114.

225. Orrhage K. Bifidobacteria and lactobacilli in human health / K. Orrhage, C.E. Nord // Drugs Exp. and Clin. Res. 2000. - N. 3. - P. 95-111.

226. Ouwehand A. Prebiotics and probiotics: safety aspects and risk assessment / A. Ouwehand, S. Salminen // Microb. Ecol. Health and Disease. 1999. - N. 2. — P. 109.

227. Papagianni M. Ribosomally synthesized peptides with antimicrobial properties: biosynthesis, structure, function, and applications / M. Papagianni // Biotechnol. Ad. 2003. - Vol. 21, N. 6. - P. 465-499.

228. Patent 4238478 USA, A 61 K 39/02. Heterovaccine against the trichomonas syndrome and process for its preparation / L. Stojkovic. Filed Dates: 03.04.79. Issued Dates: 09.12.80.

229. Patent 5662900 USA, A 01 N 63/00, C 12 N 1/20. Method of increasing interferon production in humans / K. Tsunataro. Filed Dates: 19.06.96. Issued Dates: 02.09.97.

230. Patent 5895758 USA, A 01 N 63/00, C 12 N 1/20. Strain of Lactobacillus plantarum / J.J. Majnarich, T.J. O'Brien. Filed Dates: 10.06.97. Issued Dates: 20.04.99.

231. Patent 5929109 USA, A 61 K 39/02, A 61 K 45/00. Enhancing and stabilizing agent of the activity of Bifidus factor / M. Hiroharu, I. Kakuhei, K. Tsutomu. -Filed Dates: 03.10.97. Issued Dates: 27.07.99.

232. Perdigón G. Lactic acid bacteria and their effect on the immune system / G. Perdigón, R. Fuller, R. Raya // Curr. Issues Intest. Microbiol. 2001. - Vol. 2, N. l.-P. 27-42.

233. Pessi T. Interleukin-10 generation in atopic children following oral Lactobacillus rhamnosus GG / T. Pessi, Y. Sutás, M. Hurme, E. Isolauri // Clin. Exp. Allergy. 2000. - Vol. 30, N. 12. - P. 1804-1808.

234. Rafter J.J. The role of probiotic bacteria in colon prevention / J.J. Rafter // Microb. Ecol. Health and Disease. 1999. - Vol. 11, N. 2. - P. 111.

235. Roediger W.E.W. Interrelationship bitween bacteria and mucosa of the gastrointestinal tract / W.E.W. Roediger // Microbial metabolism in the digestive tract / Ed. M.J. Hill. New York: Academic Press, 1986. - P. 29-32.

236. Rowland J. Gut microflora metabolism what can the microbes do? / J. Rowland // Microb. Ecol. Health and Disease. - 1999. - Vol. 11, N, 2. -P. 105-106.

237. Russel A.D. Do biocedes select for antibiotic resistence? / A.D. Russel // J. Pharm. and Pharmacol. 1999. - Vol. 51, Suppl. - P. 29-31.

238. Sablón E. Antimicrobial peptides of lactic acid bacteria: mode of action, genetics and biosynthesis / E. Sablón, B. Contreras, E. Vandamme // Adv. Biochem. Eng. Biotechnol. 2000. - Vol. 68. - P. 21-60.

239. Salminen S. Gut flora in normal and disorderd states / S. Salminen, E. Isolauri, T. Onnela // Chemother. 1995. - Vol. 41. - P. 5-15.

240. Sanders J.W. Environmental stress responses in Lactococcus lactis / J.W. Sanders, G. Venema, J. Kok // FEMS Microbiol. Rev. 1999. - Vol. 23, N. 4.-P. 483-501.

241. Savada H. Purification and characterizacion of an antihypertensive compound from Lactobacillus casei / H. Savada, M. Furushiro, K. Hirai et al. // Agric. Biol. Chem. 1990. - Vol. 54. - P. 3211-3216.

242. Savage D.C. Microorganisms associated with epithelial surfaces and stability of the indigenous gastrointestinal microflora / D.C. Savage // Nahrung. 1987. -Vol. 31,N. 5-6.-P. 383-394.

243. Saxelin M. Dose respons of the faecal colonisation of Lactobacillus strain GG administered in two different formulations / M. Saxelin, M. Ahokas, S. Salminen // Microb. Ecol. Health and Disease. 1993. - Vol. 6. - P. 119-122.

244. Scheunemann C. F. HtrA is a key factor in the response to specific stress conditions in Lactococcus lactis / C.F. Scheunemann, I. Poquet // FEMS Microbiol. Lett. 2003. - Vol. 224, N. 1. - P. 53-59.

245. Schrezenmair J. Probiotics, prebiotics, synbiotics approaching a definition / J. Schrezenmair, M. De Verse // Am. J. Clin. Nutr. 2001. - N. 73. - P. 361-364.

246. Shalev E. Ingestion of probiotics: optimal treatment of bacterial vaginosis in pregnancy / E. Shalev // IMAJ. 2002. - N. 4. - P. 357-360.

247. Simon G.L. Intestinal flora in health and disease / G.L. Simon, S.L. Golbach // Gastroenterol. 1984. - Vol. 86. - P. 358-364.

248. Strus M. In vitro antagonistic effect of Lactobacillus on organisms associated with bacterial vaginosis / M. Strus, M. Manilovska, P.B. Heczko // J. Reprod. Med.- 2002. -N. 1.-P. 41-46.

249. Sutter V.L. Anaerobes as normal oral flora / V.L. Sutter // Rev. Infect. Dis. -1984. Vol. 6, Suppl. 1. - P. 16-24.

250. Tagg J.R. Bacteriocins of Gram-Positive Bacteria / J.R. Tagg, A.S. Dajani, L.W. Wannamaker // Bacterid. Rev. 1976. - Vol. 40, N. 3. - P. 722-756.

251. Tannock G.W. The normal microflora: new concepts in health promotion / G.W. Tannock//Microbiol. Sci. 1988.-N. l.-P. 663-673.

252. Taranto M.P. Evidence for hypocholesterolemic effect of Lactobacillus reuteri in hypercholesterolemic mice / M.P. Taranto, M. Medici, G. Perdigon et al. // J. Dairy Science. 1998. - Vol. 81, N. 9. - P. 2336-2340.

253. Thompson M.H. Metabolism of neutral steroides / M.H. Thompson // Microbial metabolism in the digestive tract / Ed. M.J. Hill. New York: Academic Press, 1996. - P. 33-35.

254. Todorov S. Influence of growth medium on bacteriocin production in Lactobacillus plantarum ST31 / S. Todorov, B. Gotcheva, X. Dousset et al. // Biotehnol. and Biotehnol. Equip. 2000. - Vol. 14, N. 1. - P. 50-55.

255. Turner D.L. Solution structure of plantaricin C, a novel lantibiotic / D.L. Turner, L. Brennan, H.E. Meyer et ol. // Eur. J. Biochem. 1999. - Vol. 3. -P.833-839.

256. Twomey D.P. Protection against Staphylococcus aureus mastitis in dairy cows using a bismuth-based teat seal containing the bacteriocin, lacticin 3147 / D.P. Twomey, A.I. Wheelock, J. Flynn et ol. // Dairy Sci. 2000. - Vol. 83, N. 9. -P. 1981-1988.

257. Ueda H. Induction of tumor necrosis factor-a in solid tumor region by the orally administered synthetic muramyl dipeptide analogue, romurtide / H. Ueda, M. Yamazaki // Intern. J. Immunopharmacol. 2001. - Vol. 1, N. 1. - P. 97-104.

258. Uguen P. Lantibiotic biosynthesis: interactions between prelacticin 481 and its putative modification enzyme / P. Uguen, J.P. Le Pennec, A. Dufour // J. Bacterid. 2000. - Vol. 182, N. 18. - P. 5262-5266.

259. Van der Waaij D. Colonisation resistanse of the digestive tract: mechanism and clinical consequences / D. Van der Waaij // Nahrung. 1987. - Vol. 31, N. 5-6. -P. 507-517.

260. Van der Waaij D. Evidens of immunoregulation of the composition of intestinal microflora and its parcial conserquences / D. Van der Waaij // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 1988. - Vol. 7. - P. 103-106.

261. Van der Waaij D. The immunoregulation of the intestinal flora: experimentl investigations on the developement and composicion of the microflora in normal and thymusless mice / D. Van der Waaij // Microbiol. Therapy. 1984. - Vol. 14. -P. 63-74.

262. Van Kraaij C. Lantibiotics: biosintesis, mode of action and applicacions / C. Van Kraaij, M. De Vos Willem, RJ. Siezen, O.P. Kuipers // Naur. Prod. Repts. 1999. - Vol. 16, N. 5. - P. 575-587.

263. Vidaver A.K. Bacteriocins: the lure and reality / A.K. Vidaver // Plant Dis. -1983. Vol. 67, N. 5. - P. 471-475.

264. Wagner R.D. Potencial hazards of probiotic bacteria for immunodeficient pacients / R.D. Wagner, E. Balish // Bulletin Inst. Pasteur (France). 1998. -Vol. 96, N. 3. - P. 165-170.

265. Waters R. Lactobacillus reuteri and intestinal integrity / R. Waters, N. Carbajal, I. Casas // Microb. Ecol. Health and Disease. 1999. - Vol. 11, N. 2. -P. 126-127.

266. Wesselbord S. Induction of activation driven death (apoptosis) in activated but not resting peripheral blood T cells / S. Wesselbord, O. Janssen, D. Kabelitz // J. Immunol. 1993. - Vol. 150. - P. 4338-4345.

267. Zambonelli C. Aytolysis of yeasts and bacteria in fermented foods / C. Zambonelli, S. Rainieri, C. Chiavari et al. // Ital. J. Food Sci. 2000. - Vol. 12, N. l.-P. 9-21.

Информация о работе

Чистохина, Лариса Павловна
кандидата медицинских наук
Пермь, 2004
ВАК 03.00.07

Диссертация

Иммунобиологическая характеристика препарата "Микростим" на основе метаболитов лактобактерий - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы