Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Идентификация нейроспецифических кардиоактивных белок-гормональных комплексов в организме крысы в норме и при экспериментальном инфаркте миокарда

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Идентификация нейроспецифических кардиоактивных белок-гормональных комплексов в организме крысы в норме и при экспериментальном инфаркте миокарда"

АКАДЕМИЯ НАУК АРМЕНИИ ИНСТИТУТ ШОХИМШ им. Г.Х.БУШ7ТЯНА

На правах рукописи

ГАБРИЕЯЯН СИРАНУШ КАРЛЕНОША

• УДК 577.112

ИДЕНТИФИКАЦИЯ НЕЙРОСПЕШФИЧЕСКИХ КАРДЮАКТИВНЫХ БЕЛОК-ГОРМОНАЛЬНЫХ КОМПЛЕКСОВ В ОРГАНИЗМЕ КРЫСЫ Б НОРМЕ И ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ИНФАРКТЕ МИОКАРДА

03.00.04 - биохимия

Автореферат

диссертации на соискание ученэй степени кандидата биологических наук

Ереван - 1992

Работа выполнена в Институте биохимии АН Армении (директор - академик АН Армении, профессор А.А.Галоян).

Научный руководитель: доктор биологических наук

Р.М.Срапионян

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор Г.С.Хачатрян

доктор биологических наук Г.К.Парсаданян

Ведущее учреждение - Ереванский государственный университет.

Защита состоится "//" ССЮЬОСУ 1992 г. в /г ч. на .заседании специализированного совета Д 00515 01 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора биологических наук при Институте биохимии АН Армении (375044, Ереван, ул. П.Севака, 5/1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института биохимии АН Армении.

¿&ТО РЕФ£ РЛТ РАЗОСЛАН- "Л?

Ученый секретарь

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Развитию нового перспективного направления функциональной нейрохимии особенно способствовали систематические исследования уникальных для нервной ткани .белков (Moore, 1965, Hyden, 1978).

В настоящее время известно свыше ICO нейроактявных белков, большинство из которых идентифицировано только в 80-х • годах. (laobe, 1984). Разрабатываются новые, более спеиифи-' ческие высокочувствительные методы идентификации этих белков, их количественного определения. Интенсивно изучаются возможные иммунологические, ферментативные, регуляторные, трансмит-терныеГ нейрогуморальные я другие свойства нейроспецифических белков. Однако, выяснение функциональных возможностей этих белков для большинства из них пока не завершено.

К нейроспепифическим белкам, известным еще в 60-х годах и идентифицированным биохимически, относятся кардиоактивные белок-гормональные комплексы, образуемые в магнопеллюлярних Ядрах гипоталамуса (Галоян A.A., 1964; Галоян A.A., Срапионян P.M., 1965,- 1966). На основе накопленного большого экспериментального материала, характеризующего макромолекулярнне свойства, функциональные возможности, тканеспенифичяость, региональную и субклеточную локализацию этих соединений, была сформулирована концепция (Suloján, Srapionian, 1933) о наличии в гипоталамусе рдца животных и человека новых систем, осуществляющих химическую регуляций метаболизма и функций нз только в мозгу, но'и в ряде висцеральных органов, в особенности в сердце. Однако, изучение метаболических превращений этих белок-гормональных комплексов, я особенности уластие в патологических процессах, например, в ишемйческих. болезнях сердца, решалось менее успешно. Между"тем, сравнительное изучение кардиоактив-ных белок-гормональных комплексов в организме в норме и при сердечной патологии может быть полезным как в выяснении их функционального предназначения, так и в их возможном прикладном применении.

Цель настоящей работы, заключалась в изучении нейроспеиифических кардиоактивных белок-гормональных комплексов в орга-

низме крысы в норме и при экспериментальном инфаркте миокарда, В связи с этим задачи настоящей работы сводились к следующему :

1. выделить и очистить три кардиооктивных белок-гормональных комплекса (НТК) из гипоталамуса крупного рогатого скота,

2. получить специфические кроличьи антисыворотки к бычьим индивидуальным БГК; исследовать их иммунохимические свойства ,

3. изучить региональное и клеточное распределение кардиэ-активных БГК методами иммунохимического и радиоимглунологическо-го анализа (РИА) в организме крысы в норме,

4. охарактеризовать распределение кардиоактивных БГК в условиях моделирования экспериментального инфаркта в организме крысы.

Научная новизна и практическое значение. Получены высокоспецифические антисыворотки к бычьим гипоталамическим кардио-активным БГО. Впервые показана динамика распределения искомых ЕГО в норме в организме крысы. Продемонстрирована корреляция в содержании Б1К в мозгу крысы и быка, которая на три порядка превышает таковые в любом периферическом органе, что позволяет считать их специфическими для нервной ткани. Выявлено также совпадение в распределении кардиоактивных ЕГК между видами в различных регионах мозга, а именно - их высокое содержание в гипоталамусе, в убывающей последовательности в мозжечке для БНС и БНК, а для БНГ - в коре больших полушарий мозга.

Иммуноцитохямические исследования клеточной локализации БНК в мозгу подтвердили высокое его содержание в мозжечке, в частности, в клетках Пуркинье. Выявлено также четкое окрашивание цитоплазмы, нервных отростков, синаптических окончаний, что может свидетельствовать о возможной его миграции вдоль нервного волокна я последующей секреции в кровяное русло. Дан- . ные РИА продемонстрировали значительное содержание Б1К в крови (от 10 до 25 нг/мл).

Впервые показано становление нового гомеостаза кардиоактивных БНГ при инфаркте миокарда (ИМ). У крыс с коронароокклю-зионным ИМ выявлено резкое уменьшение иммунореактивных БГК в различных регионах мозга, с одновременным многократным (от 6

до 17 раз) увеличением в периферической крови. Исследование сдвигов п содержании БГК показало также их многократное увеличение в ряде периферических органов, в особенности в сердиа и селезенке.

Впервые показано увеличение содержания кардиоактивных БГК в сыворотке инфарктных больных, примерно в 8-12 раз.

Полученные данные позволяют считать целесообразным использование кардиоактивных БГК в качестве маркеров в сердечно-сосудистых патологиях. Применение же специфических антисывороток к ним гложет явиться новым подходом в диагностике определенных изменений при отих патологиях.

Апробация работы. Материалы диссерташш были представлены: на ХУI конференции ФЕЮ (Москва, 1984); У Всесоюзном съезде биохимиков (Киев, 1586); X Всесоюзной конференции по биохимии нервной системы (Горький, 1988); Щ Всесоюзной конференция по нейроэндокринмогий (Харьков, 1988); X собрании Европейского общества нейрохимиков (Лейпциг, 1990).

Диссертационная работа рассмотрена и одобрена на заседании ученого совета Института биохимии АН РА (Ереван, 1992).

Структура и объем диссертационной работы. Диссертация изложена на' 90 страницах машинописного текста и состоит из введения, трех глав (обзор литературы, материалы и метода, результаты собственных исследований и их обсуждение), общего заключения, выводов. Диссертация иллюстрирована 8 таблицами и II рисунками. Список литературы содержит 174 наименования на русском и английском языках.

/ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ .

В экспериментах использовали белые беспородные крысы массой 180-200 г, кролики массой 2,5-3,0 кг и гипоталамус крупного рогатого скота для получения препаративных количеств кардиоактивных соединений.

Для изучения распределения и локализации коронароактив-ных соединений были взяты следующие отделы ЦНС: кора больших полушарий мозга, гипоталамус, мозжечок, продолговатый мозг. Из висцеральных органов взяты ткани сердечной и скелетной мышцы, легкие, печень, почки, селезенка, поджелудочная железа и плазма крови.

По методу, описанному ранее (Налоян, Срапионян, 1966) был получен экстракт водорастворимых белков, который и фракционировали сульфатом аммония. .В качестве источника коронаро-активных белков использовали фракцию, высаленную в пределах насыщения 75-100$.

Гель-фильтрацию белковых соединений проводили на колонке сефадекса Ц-100, предварительно уравновешенном борно-Ооратным буфером рН 7,4 со скоростью 60 мл/ч.

Ионообменную хроматографию (ИОХ) проводили на ДЭЛЭ-иеллхь лозе с применением градиентной элюшш, где значительный градиент концентрации соли ЫаС1 (от 0,02 М до 0,5 М) сочетался с небольшим понижением рН фосфатного буфера от 6,5 до 5,0.

Изоэлектрофокусирование (ИЭФ) проводили в градиенте амфо-линов на приборе фирмы ЖБ (Швеция), модель 8 100, в термостатированной при 4° колонке объемом 110 мл.

Электрофорез в 7,5^-ном ПААГ проводили по методу 1964), а в Ш-ном ПААГ-ДДС ..натрия (;.еЬег,19б9).

Экспериментальный ИМ вызывали у беспородных крыс-сампов массой 180-200 г путем лигирования нисходящей ветви левой коронарной артерии по методу Зе1уе (1960). О максимальном развитии ИМ к 4-му дню судили по регистрации ЭКГ на аппарате 6 НЕК-3. .' (электроды игольчатые, крыса не фиксирована).

Иммунные сыворотки получали методом многократной инъекции соответствующими антигенами кроликам массой 2,5-3 кг по ранее разработанной схеме Абелян и соавт. (1981) в ваде коллоидной смеси с полным адъювантом Фрейнда (1:1 по объему), включающей внутрякожные, внутримышечные и внутривенные инъекции в течение 10 недель. Кавдое животное получало по I мг белка. Реиммуниза-ция была сделана в.виде повторного одноразового внутривенного введения животному по I мг соответствующего антигена без адъ-юванта. Кровь брали из ушной вены на 4, 7, 9, 14 и 20 дни иммунизации. Взаимодействие антигенов с антисывороткой ригистри-ровалось:

а) сочетанным методом двойной иммунодиффузии по 0ис1^ег1опу, (1967) и иммуноэлектрофорезом в 1,5$ агаре по Грабару

(1969),

б) количественной реакцией связывания комплемента в радиоиммунологическом анализе по методу Огеегшооа (1963) в модифи-

- ? _

каиии аоИ;оп (1973),

в) иммунопероксидазным окрашиванием

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Выделение и очистка карлиозкт^пных белок-гормональных комплексов гипоталамуса

Кардиоактивные БГК концентрировали сульфатом аммония в пределах насыщения 75-100$ из супернатанта (х 500 д ) водного гомогената гипоталамуса быка. Дальнейшую .очистку БГК проводили по схеме, разработанной ранее Срапионян и соавт. (1976), включающей в себя последовательно этапы гель-фильтрации на се-фадексе 0-100, ионообменную хроматографию на ДЭАЭ-целлшозе, изоэлектрофокусирование в градиенте амфолинов с рН 5-7, электрофорез в 7,5$ ПААГ.

Использование комплекса указанных методов позволяет получить примерно 10-И мг электрофоретически гомогенных БГК из I кг сырой гипотаяамической ткани. Среди изученных БГК содержание комплекса белок-нейрогормон "К" (БГК) составляет примерно 40$ от общей коронароактивности. Почти в таком же количестве выделяется комплекс белок-нейрогормон Т' (БКГ); им значительно уступает комплекс белок-нейрогормон "С" (БНС), составляя лишь 14$ от общей суммы коронароактивности.

Иммунохимическая характеристика выработанных у кроликов специфических антисывороток к бычьим кардио-ацтирнцм Щ

Для получения антисывороток (АС) были иммунизированы 6 кроликов (по два животных) конъюгатами БНС, БЙК, БНГ. У всех кроликов после I цикла иммунизации (на 7-й день после первой инъекции) уже обнаруживаются антитела к соответствующим акти-геновым БГК. Однако, наиболее эффективными оказались сыворотки, взятые посла последнего цикла иммунизации и реиммунизадаи.

Опенка специфичности полученных антисывороток была проведена по результатам двойной иммунодиффузии в агаровом геле. Результаты реакции препипятапии кроличьих АС и бычьих антигенов (БГК), в частности, выявление во всех трех случаях единственной дуги преципитации, свидетельствовали об их антиген-

' - 8 -■

ной гомогенности и, в равной мере, о высокой специфичности образовавшейся АС. Моноспейифичность искомых АС была установлена при использовании в качестве антигенов экстрактов гипогала-иической ткани крисы, которые давали положительную реакци:п со ьсшя АС. Qqhoko, против водныхгомогеийтов различных органов (печень, сердяе, легкие, почка, поджелудочная железа, селезенка) крысы, взятых в качестве антигена не удалось получить реакции преципитации. Помимо высокой специфичности полученные АС характеризуются достаточной чувствительностью, позволяющей определить до 10 пг в пробе (0,1 мл).

Пригодность иммунных сывороток для радиоиммунологических экспериментов оценивалась по их способности конкурировать с соответствующими мечеными ^I-белками за связывание с неме-ченными антигенами. Дозы немеченых антигенов, ингибирующих 50^-ное связывание 1251-ШС, -Б1ЕГ, -БНК составляют от 50 до 100 пг. Одновременно бал установлен низкий процент перекрестных реакций, как правило, непревышающий 0,1$.

Распределение каояиоактивных БГК в ноше в организме

КРЫСЫ

Используя РИА в качестве метода для изучения распределения кардиоактивных БЩ в организме крысы и опенки их количественного содержания в различных тканях, удалось выявить корре-ляпию меаду этими данными и результатами, полученными ранее Срапвонян я соавт. в 1978-1980 г. в отношении специфичности этих БГК для нервной ткани ряда животных (бык, кошка, кролик). Содержание исследуемых БГК в мозгу у крысы превышает в различных регионах мозга на три порядка таковые в любом периферическом органе (табл.I). Высоким содержанием (нг/г сырой ткани) отличается гипоталамус: БНС - 1500; БНГ - 1400, БНК - 1075. Несколько меньше содержание БНС выявляется в мозжечке, но БНГ в этом регионе находится в заметно малых количествах, содержание ШК, в противоположность, в мозжечке несколько выше, чем в гипоталамусе,

Данные иммуноиитохимических исследований по изучению клеточной локализации БНК в мозгу коррелятивно с результатами РИА подтвердили его высокое содержание в мозжечке: в особенности интенсивная реакция на исследуемый комплекс была выявлена в

Табяяма

Содержание кардиоактявных БГК в различных «гаюяс (М+м, п=8)

Ткань, орган Уровень ЕГК, нг/г сырой ткани

вне ВНГ ВПК

Регионы мозга коса больших полушарий мозга (затылочная) 110+5,0 1000+13 885+8,0

Гипоталамус 1500+30,0 1400+25 ' 1075+10,0

Продолговатый мозг 50+2,0 60±2,7 236+600

Мозжечок. 840+15,0 50+2,7 1270+13,0

Сердце 0,42+0,09 0,6+0,02 0,86+0,12

Легкие . 0 0,2±0,01 0,42±0,25

Почки 0 0 0,97^0,80

Печень 0,08+0,01 0,3^,03 0,50+0,14

Селезенка 0,23+0,08 0,3±0,02 0,29+0,14

Поджелудочная железа 0 0,3±0,09 0.29±0,14

Скелетная мыша 0,41±0,07 0 С),43±0,05

Кровь 10±Т ,74 25+4,63 13,0+0,5

клетках Яуркинье. Наиболее четкое выявление реакции наблюдалось также в оупрахиазматическом ядре гипоталамуса, в составе которого встречаются: • небольшие группы нервных клеток, проявляете положительную реакцию на антитела к НОС. При этом четко окрашиваются цитоплазма и нервные отростки. По-видимому, обнаружение в последних изучаемого комплекса может свидетельствовать также о:возможности его миграции вдоль нервного волокна и последующей секреции в кровяное русло. Определение содержания кардиоактивннх БГК в периферической крови выявили значительные (от 1С до 25 нг/мл) их концентрации.

-.Исследование-субклеточной'-.локализации БГК в мозгу показало преимущественное их накопление в сннаптосомашюй фракции (примерно 70%) и около 3055 иммунореактивных (ИР) БГК в нейро-секреторпых гранулах. В ядерной, миелиловой, митохондриальной

-10-

фракциях таковые ИР не были обнаружены.

Сопоставление определяемых концентраций ИР кардиоактив-ных Б1К в ряде висцеральных органов свидетельствовало об органной специфичности последних (табл). Так, БНС-подобная ИР была обнаружена в сердце, скелетной мышце, селезенке в значительных количествах, а высокое содержание ЕНК отмечалось кроме сердца и скелетной мышцы в почках, печени, легких.

Результаты экспериментов, в которых было изучено действие М-холиномиметикоз, в частности, ареколина, свидетельствовали о том, что внутривенное введение этого агента, провоцируя выход БНГ из гипоталамуса, увеличивает его содержание в v .vertebra'-lie с 6,0+0,6 до 16,0+2,8 нг/мл.

Исходя из вышеприведенных данных можно допустить возможность выхода кардиоактивных БГК из мозга в кровяное русло л дальнейшей направленности в определенные ткани-мишени.Альтернативно можно допустить также существование в этих тканях

нервных клеток типа aíud способных к синтезу коронароактив-ностей, специфических для мозга.

Становление нового гомеостаза кардиоактивных БГК

при экспериментальном инфаркте миокарда у крысы

Открытие новых пептидных и полипептидных регуляторных систем ставит вопрос и о пересмотре традиционных представлений о генезе сердечно-сосудистых заболеваний. Изучение химизма крови и тканей на этапе возникновения и развития, например, инфаркта миокарда, расширяет патогенетическую характеристику заболевания, его осложнений и способствует пониманию ряда биохимических сдвигов, отражающих глубокие расстройства метаболических процессов в организме.

В свете сказанного и с учетом высокой активности физиологического действия исследуемых БГК (расширение периферических сосудов, в особенности коронарных, стабилизация кровяного давления, усиление кровотока, повышение проницаемости капилляров, избирательное действие на сердце, повышение ударного минутного объема и частоты сердечных сокращений) небезинтересно было исследование их возможного участия при ишемических состояниях сердца.

В избранной модели экспериментального инфаркта миокарда

крыс был использован метод обратной окклюзии левой коронарной артерии. О максимальном развитии ИМ и 4-му дню судили по регистрации ЭКГ, электрокардиографическая картина которой соответствовала таковой перегородочного инфаркта левого желудочка. Как показали результаты экспериментов в различных регионах мозга происходит опустошение БНГ и КПК. Наибольшее понижение уровня БНГ выявляется в коре и гипоталамусе, примерно в 130 и 7Ü раз соответственно (рис.1). В мозжечке и продолговатом мозге уменьшение содержания БНГ происходит значительно слабее (в 4 и 5 раз) по сравнению с отмеченными сдвигами в коре и гипоталамусе. .'АМ сопровождается значительным (примерно з 8 раз) увеличением содержания, ШГ в периферической крови. При исследования экстрактов сердечной ткани у таких крыс на предмет определения коронароактивности оказалось, что они обладают высоким коронарорасширяюиим действием по сравнению с нормальными крысами. Не исключается, что сниженная, активность БНГ в норме в сердце может при ИМ в значительной степени увеличиваться не только за счет его выведения из гипоталамуса, но и компенсироваться продуцированием в сердце. Так, в инфарцированном серд- . це содержание БНГ увеличивается примерно в 20 раз, а в селезенке его уровень примерно в 150 раз превосходит исходную величину. При сравнении уровня БНГ в печени и легких крыс с ИМ о таковыми у янтактных крыс выявилось достоверное различие (около 75 и 45 раз соответственно). Таким образом, некроз миокарда, по-видимому. является фактором, влияющим на распределение содержания БНГ в ряде органов и тканей (рис.1).

Количественный анализ другого антигенного комплекса - БВК, проводимый в различных регионах мозга, выявил резкое уменьшение его содержания, в особенности, в коре больших полушарий примерно в 110 раз (рис.2).

Слабее уменьшается содержание ЕНК в гипоталамусе (примерно в 70 раз), далее в убывающей последовательности - в мозжечке (около 60 раз) и в продолговатом мозгу - примерно в 18 раз. ИМ не только значительно ускоряет выброс БНК из мозга, но и приводит к значительному увеличению его содержания в крови о I3¿0,08 до 620+3,9 нг/мл.

Из висцеральных органов, так же как и в случае с БНГ, именно в селезенке отмечается максимальный уровень БНК, при-

ее

»

ио

ео

30

*

100

60

ъе

115

тпт

ж

ЛИ

Рио.Г. Распределение кардиоактивного БНГ в организме крысы

с ИМ. Обозначения: - корй больших полушарий мозга, ¡353 - гипоталаму с, [ЦЗ - мозжечок , ШВ - продолговатый мозг, ШТТТТП - сердце, МО - легкие, (яла- печки, ^^ - печень, ВШ - селезенка, Е«£| - поджелудочная желоза, ¡Ш -скелетная юша.-.'щщ!- кровь.

6

30

1Со

Рис.2. Распределение кардиоактивного БНК в организме крыоы с ИМ: Обозначения: уятя - кото болыаях полушагай. 123 - гипоталамус, Ш331- мозжечок, ■■ - продолговатый мозг, ШПШ- сердце, И_1- легкие, мдш

- почки, - печень, 8ШЭ - селезенка, ЯЗВ -

- поджелудочная железа, - скелетная мышца,

- кровь.

- 14 -

мерно в 190 раз превосходящее исходный (рис.2). От БНГ БНК, однако, отличается своим высоким содержанием в легких, где выявляется его 50-ти кратное увеличение. Исходя из приведенных данных можно допустить, что наблюдаемые перераспределения содержания БНК - снижение в мозгу я резкое увеличение в ряде органов и тканей, в частности» в селезенке, сердце, направлено, по-видимому,'на повышение периферического тканевого, в том числе и маокапдиального кровотока.

Наблюдаемая при ИМ динамика перераспределения содержания ЕНС в различных органах мозга сильно отличается от описанных двух БГК. Уменьшение содержания БНС в гипоталамусе значительно слабее, составляет 20 и 12 раз соответственно, а а коре больших полушарий - лишь в 2 раза. В продолговатом мозгу наблюдается далее тенденция к некоторому увеличению концентрации БНС. Впрочем приведенные данные и в равной мере, увеличение содержания БНС в крови с 10±1,74 до 65+5,8 нгЛш крови, позволяет судить о его высвобождении из мозга при ИЛ. Тем более, что в ряде висцеральных органов, происходит аномально многократное увеличение содержания БНС (рис.3). "

Так, выявлено максимальное увеличение содержания БНС в печени, примерно в 820 раз превосходящий исходный. Многократно (примерно в 340 раз) повышается содержание БНС в селезенке. Значительно и примерно близкое в 1Ш и 170 раз повышение содержания БНС также в сердце и скелетной мышце. Следовательно, сниженное до следовых количеств содержание ЕНС в норме а ряде висцеральных органов молет при ИМ в значительной степени компенсироваться как выведением их из мозга, так и одновременным увеличением синтеза в этих тканях. Ранее полученные данные, . указывающие на высокую биологическую активность БНС, а именно: эффективное и пролонгированное коронарорасширяющее действие, значительное улучшение кровоснабжения в условиях ИМ и, следовательно, увеличение доставки кислорода к сердцу, участие в регуляции различных обменных процессов в этом органе, и, наконец, непосредственное влияние на изолированные клетки сердечной мышцы (СрашюняиР.М. и соавт., 1987). Учитывая вышеизложенное, а также факт его многократного увеличения в сердце при ИМ, можно предположить его реальное участие в метаболических процессах в этом органе при сердечной патологии, допустить.

Рис.3. Распределение кардиоактивного БНС в организме крыон с ИМ. Обозначения: ^^^ - кора больших полушарий,

Е23 - гипоталамус, ЕКЮ - мозжечок, ЯЩ-^продолговатый мозг, гттош - сердце, - легкие, - почки, Е=1 - печень, - селезенка, ЮЗ] - поджелудочная железа, ййЗ- скелетная мнш-ца, - кровь. '

. -. 16 - .

что он имеет непосредственное отношение к рубцеванию зоны некроза и считать ШЮ маркером поврездснных остовов миокарда.

Участке БНК в патогенезе Ш пока не ясно. Однако, полученные данные относительно многократного увеличения кардиоак-тивиых ЕГО в различных периферических органах крысы при ИГЛ по сравнению с интактными животными представляют интерес уже в том плане, что предполагают возникновение при этой патологии нового гомоосгатического уровня нейроспепифических БГК.

ВЫВОДЫ

1. Выделены из гипоталамусов быка в элеотрофоретически гомогенном виде три кардиоактивных белок-гормональных комплекса.

2. Получены к искомым БГК, охарактеризованы и использованы в проведении иммунохямических, радиошмунологических и им-муногистохимичсских исследованиях специфические кроличьи антисыворотки.

3. Изучено распределение иммунореактивных Б1К в организме крысы в норме. Получены данные, свидетельствующие о высоком (на три порядка) содержании БГК в мозгу по сравнению с таковым в периферических органах. Показано отсутствие ввдовых (крыса, бык) различий в содержании кардиоактивных БГК в различных висцеральных органах.

4. Иммуноэлектронношкросколическим методом изучено субклеточное распределение кардиоактивных БГК. Выявлено преимущественной содержание их з синаптосомах (около 70$ иммуноре-актиснасти) а в нейрооекреторных гранулах - примерно 30?. Им-муногистохямически показано наличие БГК в клетках Цуркинье (мозжечок) и в нервных отростках цитоплазмы (гипоталамус).

5. Показано становление нового гомоостатичоокого уровня кардиоактивных ЕГО у крыс с коронароокклюзионным инфарктом миокарда. Характерным для нового гамеосгаза является резкое опустошение НТК в мозгу, в особенности в кори больших полушарий мозга (о? 2 до 120 раз) и одновременно значительное (от 6 до 47 раз) их увеличение в периферической крови и многократное - в различных органах, в частности в селезенке (от 140 до 340 раз), в сердце (от 30 до 190 раз) и в скелетной шише (от 92 до 170 раз).

6. Выявлено увеличение (примерно в 8-12 раз) содержание кардио-активных Б1ТС в сыворотке бальных стенокардией й острым инфарктом миокарда.

7. Совокупность экспериментальных данных позволяет считать перспективным использование специфических антисывороток к кардиоактивным БГК в качестве маркеров в диагностике определенных изменений при ишемических болезнях.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТБМЕ ДОССЕРТАЦИИ

1. Срапионян P.M., Абелян Ж.Г., Ростомян М.А., Габриелян С.К. Радиоиилунологическое исследование кардиоактивного белок-гормонального комплекса гипоталамуса. "Нейрохимия, т.7, № 4, с.532-537, 1988.

2. Габриелян С.К., Срапионян P.M., Абелян Е.Г., Галоян А.А. Распределение нейроспеиифического кардиоактивного белок-гормонального комплекса в организме крысы при экспериментальной ишемии миокарда. - "Бюллетень экспериментальной биохимии и медицины", т.IX, № 2, с.447-448, I99Q.

3. Габриелян С.К., Срапионян P.M., Абелян К.Г., Саакян Ф.М., Галоян А.А. Определение содержания нейроспеиифического белок-гормонального комплекса в организме крысы о экспериментальны?.! инфаркте».! миокарда. - "Нейрохимия", т.Э, й 3,

с.438-442, 1990.

4. ora^iionian «.т., i»belian J.0., Gabrieliim 3.K.,tiaXoyau А.А. Dib eribution of neuroepecific cardioactive protein-hormonal complex ea in rat organism in experimental myocardial ischeela. bth General bSN meeting, beipzig, 1990, p.90.

5. Габриелян С.К. Изучение изменений содержания кардиоактивного белок-гормонального комплекса у крыс при эксперименталь- ■ ном инфаркте. - Тез. докл. У1-й надч. тех. конф..молодых ученых и спец., 1990, Ереван, о.86.

6. Срапионян P.M., Габриелян С.К., Абелян Х.Г., Еалоян А.А. Сравнительная оценка эффективности количественного нейроспеиифического белок-гормонального комплекса в норме и при экспериментальном инфарктемиокадда у крысы. - "Экспериментальная и клиническая медицина", т.31, Я I, 0.672-677, 1991.

'• -18- ■ ; ■

7. Srupionian HJu», Gabrielian 5.K., AbeXisn J.G., Oaloyan A.A. Mearospeoiiic cardloactive protain-hormonal complexes ho-meostasla In rat with eipericaatal uyocardlal infarotlon. "Molecular and Chemical Keuropathology" (ibid.).

«6T