Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Идентификация и биологическая характеристика поти- и тобамовирусов

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Идентификация и биологическая характеристика поти- и тобамовирусов"

№

^ I ГН*»

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК

ДАЛЬНЕВОСТОЧНОЕ ОТДЕЛЕНИЕ БИОЛОГО-ПОЧВЕННЫЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

ТОЛКАЧ Валентина Федосьевна

ИДЕНТИФИКАЦИЯ И БИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ИОТИ- И ТОБАМОВИРУСОВ (ДАЛЬНЕВОСТОЧНЫЕ ИЗОЛЯТЫ)

0 3.00.06 вирусология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Г^С'^ Владивосток 1995

Работа выполнена в лаборатории иммунохимии и биологии вирусов растений Биолого-почвенного института ДВО РАН

Научный руководитель - доктор биологических наук

Р.В. ГНУТОВА

Официальные оппоненты - доктор биологических наук

А.В. РЕУНОВ

кандидат биологических наук С.М. ФИСЕНКО

Ведущая организация - кафедра вирусологии Московского

Государственного Университета им. М.В.Ломоносова

К 003.97.01 по вирусологии в Биолого-почвенном институте ДВО РАН (690022, Владивосток-22, Биолого-почвенный институт проспект 100 лет Владивостоку, 159)

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной библиотеке ДВО РАН

Автореферат разослан " в " sCt-Cc-ft'iri/üs 1995 г.

Ученый секретарь Специализированного совета

Защита диссертации состоится " " (Х.-^М'г-СЛ^ 1995 г в •/часов на заседании Специализированного совета

1995 Г.

кандидат биологических наук

И.И. СИБИРЯКОВА

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность тепы. Идентификация вирусов является одной из наиболее трудоемких и до конца не освоенных разделов не только вирусологии, но и фитовирусологии. Фитопатогенные вирусы, как

составной компонент любой экологичргапй »"■» —----------__...„ „

.>«."; г*аи»'ении-хизмвя. »"<• ?r">rT~prrr¡r г Г Í^íi.W. фи i опиру-

сов прежде всего необходимы методы, основанные на их биологической характеристике. Накопление фундаментальных знаний о вирусах растений начинается с изучения и описания биологических свойств изолятов, которые сравниваются и группируются между собой по принятой международным комитетом системе классификации вирусов. Согласно этой системе биологические свойства вирусов растений являются определяющим критерием при отнесении их к определенной таксономической группе. Реакция растения на заражение вирусом может быть разнообразной: от отсутствия видимых проявлений - латентная форма болезни до появления ярких характерных признаков заболевания - симптомов. Может иметь место как системное поражение, когда вирус свободно распространяется по всему растению, так и локальное, когда вирус локализуется в месте проникновения. Поражение вирусами приводит к снижению устойчивости растения к неблагоприятный факторам, ухудшению способности его к развитию и размножению в естественных биоценозах, снижению урожайности сельскохозяйственных культур и понижению качества урожая в arpo-ценозах.

До наших исследований состав фитопатогенных вирусов на декоративных и овощных культурах Дальнего Востока России был изучен недостаточно (Чуян, Крылов, 1979; Чуян и др., 1989). Необходимость выявления и идентификации вирусных заболеваний вызвана потерями от вирусных болезней в овощеводстве и развивающемся в регионе цветоводстве. Проведенная работа по идентификации и таксономии вирусов является составной частью фундаментальных исследований классической фитовирусологии.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось выявление и идентификация на овощных и декоративных культурах новых, ранее не описанных не только на Дальнем Востоке, но и в

России, вирусов и изучение их биологических свойств с целью включения в определенную таксономическую группу по принятой международной классификации фитопатогенных вирусов. При выполнении работы были поставлены следующие задачи: 1) выявить экспериментальный круг растений-хозяев и характер симптомов, вызываемых исследуемыми вирусами на них; 2) изучить морфологию и размеры вирионов, вирус-индуцированные внутриклеточные включения; 3) получить данные о физических свойствах вирусных частиц; 4) определить возможность передачи и распространения вирусов семенами и насекомыми-переносчиками; 5) установить таксономическое положение новых патогенов.

Научная новизна. Впервые выявлены и идентифицированы новый вирус, поражающий традесканцию белоцветковую, а также не описанные ранее в России вирусы мозаики гиппеаструма и мозаики турнепса из группы потивирусов. Для быстрой диагностики и накопления вируса традесканции белоцветковой (ВТБ) нами рекомендовано растение Tinantia fugax.

Впервые в дальневосточном регионе идентифицированы вирус желтой мозаики фасоли на гладиолусе и вирус желтой карликовости лука из группы Potyvirus.

Впервые идентифицированы новый штамм ВТМ на ирисе и перцевый штамм из группы некротических штаммов ВТМ.

Практическая значимость ■ Полученные результаты существенно дополнили фундаментальные знания о биологическом разнообразии фитовирусов региона Дальнего Востока России.

Данные о биологии и физических свойствах выявленных фитопатогенных вирусов дали возможность получить иммунодиагностикумы для их дальнейшей диагностики, а также использовать их в качестве объекта для молекулярно-биологических исследований.

Показано, что декоративные растения являются естественными хозяевами вирусов, патогенных для овощных и плодово-ягодных культур и могут быть постоянными резерваторами инфекции.

Данные о составе и свойствах фитовирусов на овощных культурах необходимы для разработки и проведения защитных мероприятий.

Апробация работы. Результаты были представлены на 8 Всесоюзном совещании "Теория и практика исследования иммунитета сельскохозяйственных культур к вирусным болезням" (Вильнюс, ! 9 3 4 } , на конференции молодых ученых (Владивосток, 1985), конференции, посвященной 100-летию со дня открытия вирусов Д.И.Ивановским (Ростов-на- Дону, 1992), международна« "t -.о „иииг'»""

болезням куп«-тур {'-шхогялг-кил , i.у92), а также на

j-^f.oчих соп°«'(П1ш;1л но проекту "Безвирусное растениеводство" (Москва, МГУ, 1987-1994).

Публикации■ По материалам диссертации опубликовано 18 печатных работ.

Объем и структура диссертации ■ Работа изложена на 133 страницах, содержит 10 таблиц, иллюстрирована 27 рисунками, состоит из введения, обзора литературы (глава 1), материалов и методов (глава 2), экспериментальной части (глава 3), обсуждения результатов (глава 4), выводов и списка литературы, включающего 2 56 наименований, в том числе 1работы иностранных авторов.

КРАТКОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы. Материалом исследования являлись растения с вирусоподобными симптомами: гнппеаструм садовый (Híppea<=trur.i hortor игл Maatsch) с симптомами хлоротичной штрихов^тости; лук шаллот (Allium ascalonicum L.) с хлоротичной, щтриховатой мозаикой, морщинистостью, увяданием и надламыванием пера, усыха-нием аархушки; лоба {Raphanus sativus L. subsp. (Mill.) Sazón convar Loba Sazón) с морщинистой мозаикой; традесканция белоц-ветковая (Tradescantia albiflora Kunth) с признаками заболевания в виде хлоротичной мозаики; гладиолус (Gladiolus L.) и ирис (Iris L. ) со штриховатой мозаикой; перец (Capsicum L. ) с яркой светло-зеленой мозаикой. Круг растений-хозяев и симптоматологию заболеваний изучали на видах и сортах различных семейств. При изучении новых патогенов применяли собственную модификацию экспериментального подбора растений-индикаторов в тепличных условиях. Для механической инокуляции использовали листья растений,

зараженных исследуемым вирусом, которые растирали в ступке с раствором 0,01 М фосфатного буфера, pH 7,2. Полученной суспензией обрабатывали поверхность листьев. Фиксировали дату появления первых признаков поражения и описывали развитие симптомов заболевания. При отсутствии явных признаков поражения на инокулиро-ванных растениях проводили проверку на инфекционность путем обратной инокуляции тест-растений, четко реагирующих на исследуемый вирус. Определение физических свойств - точку термической инактивации (ТТИ), период сохранения инфекционности (ПСИ) проводили по методу А. Гиббса и Б. Харрисона (1975). Внутриклеточные включения у пораженных вирусами растений изучали под световым микроскопом при 200х увеличении, окрашивая эпидермис листьев 0,5% трипановым синим по методике М. Гольдина (1963). Морфологию вирионов исследовали электронномикроскопически на негативно-окрашенных препаратах, которые готовили методом разбавленной суспензии или методом погружения (Проценко, Легункова, 1960; Раз-вязкина, 1972). При изучении роли тли в передаче вирусной инфекции использовали персиковую тлю Myzus persicae Sulz. Антигенное родство вирусов определяли ракетным иммуноэлектрофорезом (РИЭФ) по методике Р.В. Гнутовой (1985) и реакцией двойной диффузии (РДД) с использованием 1% Бакто-агара в 0,15 М растворе хлористого натрия с добавлением 1,5% ПЭГ (м.м.6000).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ ИДЕНТИФИКАЦИИ'И БИОЛОГИЧЕСКОГО ТЕСТИРОВАНИЯ ИССЛЕДУЕМЫХ ПОТИ- И ТОВАМОВИРУСОВ■

Вирус мозаики турнепса (ВМТ) (Turnip mosaic virus) - изолят из лобы. Среди посевов лобы были обнаружены растения с симптомами морщинистой мозаики. Установлено, что заболевание вызывалось смешанной инфекцией, возбудителем которой являлись сферический вирус мозаики редиса и нитевидный вирус. С помощью персиковой тли удалось отделить нитевидный вирус. Для идентификации последнего и определения круга поражаемых растений инокулировали травянистые растения 60 видов и сортов из 15 семейств. Вирус уда-

лось передать на 23 вида и сорта растений. Системно он илражал » основном растения из сем. Вгаяз1сасеае (табя.1).

Таблица I

Реакция растений на заражение вирусом, изолированным из лобы.

| с»---- é ¡¡иИПЛ . Симптомы

j симпт (сут) поражения

Amaranthaceae Juss.

Amararithus caudatus L. 12 L NSp

Gomphrena globosa L. 6 L NSp

Asteraceae Dura.

Arabis alpina L. S О

Brassicaceae Burnett

Brassica campestris L. 7-17 S VC,Dis,M

Br.capitata Lizg. S 0

Br.cauliflora (Mili.)Lizg. CJ 0

Br.pekinensis Rupr. 16 s cm. Dis

Br.perviridis Bailey 8 L NSp

Br.rapa L. 14 S vc,ciM

Isatis tinctoria L. 6 L NSp

Iberis amara L. О 0

Raphanus sativas

L.subsp. radicóla DC.

сорт Дунганский пестный 14 S CIM

сорт Жара 14 S M

сорт Красный с белим кончиком 14 s CIM

сорт Красный великан 14 s \rr

сорт Рубин 14 s CIM

Raphanus cativus L .subsp.

(Mili.)Sazon convar Loba Sazón

сорт Октябрьская 12-17 s CIM

Sinapis alba L. 7-14 s VC,C1M

S.rtigra L. 8-14 L NSp, S : CIM, Dis

Chenopodiaceae Vent.

Chenopodium gigariteum Don. 6-13 L CISp,S :Sp

Ch.quinoa Willd. 13-24 L NSp

Ch.múrale L. 19 L NSp

Solanaceae Juss.

Nicotiana tabacum L. cu.Xaothi 4 L NDot

Аббревиатура :

L - локальное поражение M - мозаика

VC - посветление жилок NSp - некротические пятна Dis - деформация

Э - системное поражение О - бессимптомное заражение №оЪ - некротические точки С1М - хлоротичная мозаика

Наиболее яркие симптомы в виде обесцвечивания жилок листьев, деформации, хлоротичного рисунка проявлялись на Brassica рек i-nensis (сорт Хибинская), Br.campestris, Вг.rapa (сорт Петровская), Raphanus sativus (сортов Дунганский местный, Жара, Красный с белым кончиком, Красный великан. Рубин), Sinapis alba и лобе (сорт октябрьская). Невосприимчивыми к вирусу оказались 18 растений (проводилась проверка на наличие латентной инфекции). Не получено симптомов заболевания на 19 видах растений (инокулиро-ванные растения не проверялись на вирусоносительство).

Семенная передача не установлена. Проверено 155 растений ло-бы, полученных из зараженных семян. Ни в одном случае не было зафиксировано семенной передачи вируса. Вирус легко передавался M.persicae неперсистентно. ТТИ - 70°С, ПСИ - 2 сут. Вирусные частицы нитевидной формы, размер которых составлял 720-750 х 12 нм. В эпидермисе листа механически зараженной лобы под световым микроскопом наблюдали околоядерные аморфные образования - Х-тела.

На основании анализа литературных и наших данных по изучению круга растений-хозяев вируса, симптоматологии, способов передачи, размеров вирусных частиц, типа внутриклеточных включений нами получены достаточные доказательства того, что выделенный вирус является вирусом мозаики турнепса группы потивирусов, который не отличался от обычного штамма ВМТ. Принадлежность дальневосточного изолята к ВМТ нашла подтверждение в работах по изучению его физико-химических свойств (Моисеенко и др., 1991). Электрофоре-тический анализ капсидных белков вируса показал, что свежевыде-ленный препарат имел 2 полипептида с мол. массой 32,0 кД и 38,0 кД. Гетерогенность капсидного белка характерна и для других штаммов ВМТ (Papa, 1975; Hiebert, McDonald, 1976). Электрофорезом выявили один компонент РНК с мол.массой равной 3,5 мД. Эти данные согласуются с результатами зарубежных исследователей (Choi et al., 1979). Кроме того, важным доказательством в пользу отнесения выделенного нами патогена к ВМТ являлось то, что по результатам иммунохимического анализа (РДД, РИЭФ, ИФА, ИЭМ), вирус имел антигенное родство с другими вирусами группы Potyvirus, идентифицированными на Дальнем Востоке: мозаики сои (ВМС), желтой мозаики фасоли (ВЖМФ), желтой карликовости лука (ВЖКЛ),

традесканции белоцветковой (БТБ), А-вирусои картофеля (АВК) и У-вирусом картофеля (УВК). Так как антигенные свойства капсидных белков являются одним из надежных критериев классификации вирусов, объединяющих вирусы растений в определенную таксономическую группу, то полученные результаты антигенного родства дальневосточного игзолята ВМТ с другими вирусами и-» "-у:...^ ««» ^„«ji нам основание считав? i иапл«г ¡.гмггдв) полноп-ма««и" 't.-'-üoh гп«ппт1 r^t-yvirus и подтверждают наши результаты по оиологическому тестированию. В литературе описаны 2 группы штаммов ВМТ - капустные, продуцирующие суровые симптомы на Brassicae oleraceae L.var. capitata и Nicotiana glutinosa, и обычные, вызывающие слабые симптомы на этих хозяевах (Yoshi, 1963). На основании полученных нами результатов дальневосточный штамм (ВМТдв) отнесен к группе обычных. По данным зарубежных авторов ВМТ обладает низкой ТТИ (30-60° С) (Lisa, Lovisolc, 1976; Kobyko, May, 1989), а ТТИ исследуемого штампа довольно высокая - 70°С. Поэтому мы считаем ВМТдв одним из самых, термостабильных штаммов ВМТ.

Таким образом, впервые в дальневосточном регионе России выявлен изолят ВМТ, идентифицированный как обычный штамм ВМТ.

Вирус желтой мозаики фасоли (ВЖ№5>) (Bean yellow roosaic_virus) .

Изолят выявлен из гладиолуса с симптомами штриховатой мозаики. Этим вирусом удалось заразить 3 7 видов и сортов растений из 85 инокулированных (табл.2).

Одним из самых высокочувствительных к вирусу тест-растений являлись бобы (Faba bona). На 8-10 день после инокуляции на верхушечных листьях проявлялась крапчатость, на более поздних стадиях заболевания - яркая мозаика, которая сохранялась в течение всего вегетационного периода. Не восприимчивыми к вирусу оказались 43 вида и сорта растений. ТТИ - 65-70°C, ПСЦ-15 сут.

Реакция изучаемого изолята с антисывороткой специфичной к ВЖМФ, предоставленной М.А.Келдыш (ГБС, Москва), была положительной. Вирусные частицы имеют нитевидную форму, размер которых составляет 700-750 х 12 нм. В эпидермальных клетках листьев F.bona, зараженных вирусом, выявлены вирусные включения в виде Х-тел. Семенами механически зараженных растений F.bona и Phaseo-lus vulgaris вирус не передавался, однако его легко удалось передать персиковой тлей с инфицированных F.bona на здоровые.

Реакция растений на заражение вирусом, изолированным из гладиолуса

Вид и сорт растений Время появл. симпт. Симптомы поражения

локальные системные

Aizoaceae Rudolphi

Tetragonía expansa Murr. Asteraceae Dum.

Emilia sagittata (Vahl.)DC. Amaranthaceae Juss. Gomphrena globosa L. Chenopodiaceae Vent.

Chenopodium giganteum Don. Ch.foliosum Aschers. Ch.murale h. Ch.quinoa Willd. Ch.polyspermum h. Fabaceae Lindl. Cassia tora L. Faba bona Medic. Glycina max (L.)Merr. Lathyrus cicera h. L.clymenum L. Lupinus albus L. L.affinis L. L.luteus L. Melilotus albus Desr. M.indicus (L.) All. Phaseolus vulgaris L. cv.Prince cv.Perlicka cv.Beka cv.Pinto-5 cv.Kentucky Wounder cu.Black Turtle Soupe Ph. acutifolius A.Gray Pisum arvense b. P. sativum L.

cv.Alaska cv.Perfection cv.Wisconsin Perfection Trifolium incarnatum L. Tr.hybridum L.

Trigonella foenum-graecum L. Vicia narbonensis L. V. ervilia (L.) Willd. Labiatae Juss.

Ocimum basilicum L. Malvaceae Juss.

Malva sylvestris L. Solanaceae Juss.

Hyoscyamus niger L.

7 CISp W

7 CISp -

NSp -

6 NSP -

5 NSp -

7 NR -

7 CISp -

7 CISp VC

21 N -

12 - ClMot

23 - ClMot

18 - VC

28 - VC,N

9 - NDot.N

5-10 NSp ClMot

15 - ClMot

18 - VC

18 - VC

5 NSp C1M,NVe

5 NSP M

7 NSp -

12 N -

7 N -

7 CISp NVe

5 N -

11 - VC

7 CISp -

7 CISp -

14 - ClMot

15 CXRSp VC

15 - NM

28 - ClMot,VC

30 - C1M

16 - VC

30 - 0

15 - CISp

5 NSp -

Аббревиатура : ЫЭр - некротические пятна С12р - хлоротичные пятна УС - посветление жилок NDot - некротические точки ClMot - хлоротичная крапчатость ИБр - кольцевая пятнистость ЫИ - некротические кольца

О - бессимптомное N - некрозы И - увядание М - мозаика ЫУе - некроз жилок нет реакции

заражение

Анллич лит"рат урпы -' ланних и полученные нами pcrv/ш, гогы исследования симптоматики естественно пораженных растений, ропкмм:: травянистых тест-растений на заражение вирусом, а так» уч^т ¡.и зических свойств вируса, морфологии и размеров нирноног. »«пряности передачи вируса тлей и положительно»! реакции с специфичной

антисывороткой, позволяют изолированный нами из —. _____

ген считать BliDvrn» -—-г—". „oJrtnii"

::__• ts.f.M'P (ВЖМФдв) rio симптоматике на

тест-растениях был наиболее близок к обычному штамму (Bos, 1970). Реакция на вирус таких растений как Pisum sativum. Ph.vulgaris, F.bona, Chenopodium quinoa, Gomphrena globosa практически не отличалась. По физическим свойствам ВЖМФдв наиболее устойчив (ТТИ - 65-70°С, ПСИ-15 сут) по сравнению с обычным штаммом (50-60°С, 1-7 сут), ВЖМФ, выделенным Т.Поливановой (Юбг,) яд сое (55-60°С, 3 сут) и ВЖМФ, идентифицированный М . Макутопайго (i 994) на гладиолусе ( г>74 С. 1-2 сут). •/ ВЖМФдв семенной передачи мы не наблюдали в отличии от обычного и гамма НЖМФ, который н<;р<> дается семенами бобовых культур. Анализируя ли г^ратураь» • г i'ijii:" . мы пришли к выводу, что авторы относя г изолятм из гладиолусов п основном к обычному штамму (Кашгап, 1981). Что касается дальневосточного изолята, то, учитывая ого /.ара к торные осо&гчшоггп, считаем, что ВЖМФдв является самостоятельным штаммом.

Результаты проведенных нами биологическиу "^r.r.r-. ч.анчи полностью подтрир^денн работами по изучению дитпг'-чтпх лчнп-тв вируса (Гнутопа и др., 1990). Иммунохимичеекими методами показано наличие общих антигенных детерминант у ВЖМФдв, АВК, УВК и ВЖКЛ. Электрофоретический анализ позволил выделить два полипептида ВЖМФдв: основной, с мол. массой 32,1 кД, и минорный - 23,2 кД (Гнутова, 1993). Это полностью совпадает с данными для вирусов группы Potyvirus (Hollings, Brunt, 1981).

Вирус мозаики гиппеаструма (ВМГ) fHippeastrum j^osaic virus). Иэолят выделен из гиппеаструма с симптомами яркой хлоротичной штриховатости, покрывающей большую часть листа. Пораженные растения не отставали в росте, но цветонос у них был короче и цветы деформированы. Для изучения круга растений-хозяев вируса иноку-лировали 10 видов из 5 семейств. Симптомы поражения были обнаружены на 4 видах растений (табл.3).

Реакция растений на заражение вирусом, изолированным из гиппеаструма садового

Время появл. Симптомы

Вид растений симпт.(сут) поражения

Amaranthaceae Juss.

Gomphrena globosa L. 21 L: NR

Araaryllidaceae Jaume

Híppeastrum hortorum Maatsch 30 L:NR,S:CIStr

Chenopodiaceae Vent.

Chenopodium murale Willd. 18 L:NR

Solanaceae Juss.

Hyoscyamus niger L. 7 L: N

Аббревиатура:

L:NR - локальные некротические кольца

N - некрозы

S:ClStr - системная хлоротичная штриховатость

Вирус заражал H.hortorum, Hyoscyamus niger, G. globosa, Ch.murale, вызывая на инокулированных листьях точечную некроти-зацию. Невосприимчивыми к вирусу являлись : Carica papaya, Ch. giganteum, Ch.quinoa, Hyoscyamus aureus, H.albus, Tetragonia espansa, N. clevelandii. ТТИ - 60° С, ПСИ - от 1 до 2 сут. Вирусные частицы нитевидной формы, размером 720-750 х12 нм. В эпидермисе больных и экспериментально зараженных растений гиппеаструма под световым микроскопом обнаружены Х-тела. Всходы, полученные из семян больных растений, симптомов вирусного поражения не имели. К изучаемому вирусу приготовлена антисыворотка, которая показала в иммунохимических реакциях наличие группоспецифических эпитопов у исследуемого вируса и представителей группы Potyvi-rus - АВК и УВК, ВЖМФ, ВЖКЛ, ВМТ (Гнутова, 1993).

Анализ литературных данных и результатов, полученных нами при изучении симптомов естественно пораженного гиппеаструма, круга растений-хозяев и характера симптомов на них, формы и размеров вирионов, физических свойств патогена, типа цитоплазматических включений, возможности передачи вируса тлей и семенами, давали основание считать изучаемый изолят вирусом мозаики гиппеаструма. Выделенный нами изолят несколько отличался как от обычного (Brunt, 1973), так и от других, ранее описанных штаммов ВМГ

(Brant, Hueve! , 1965) тем, что имел более узкий круг эксперимен тально поражаемых растений. Некоторые исследователи, изучавшие биологические свойства этого вируса, отмечали, что у таких растений как Ch.quinoa, Т.expansa, N. Cleveland i i при заражении на инокулированных листьях появлялись очаги поражения в виде точечных некрозов (Brunt, 1973). В наших экспеоимом—;;

ленные тест-растенио —::г«„»ли ""Г'йишосп. » шпшеиуся виру-

су. "" ::иаинл г \ú«4uw,1972) H.niger и G.globosa являются

хорошо восприимчивыми тест-растениями. В наших опытах эти растения заражались с трудом. Принадлежность исследуемого иэоля-та к потивирусам доказана в результате изучения его антигенных и физико-химических свойств (Рублева и др., 1990). ИЭМ показала, что для ВМГ наиболее выражено антигенное родство с ВМС. Для исследуемого изолята определена мол.масса основного капсидного белка (30,0 кД) , что характерно для вирусов этой группы (Hollings, Brunt, 1931) .

Следовательно, комплексное изучение биологических, физико-химических и антигенных свойств дальневосточного изолята ВМГ дает возможность отнести его к группе Potyvirus.

Вирус желтой карликовости лука (ВЖКЛ) (Onion yellow dwarf virus) выделен из лука шаллота. Материал прислан из Института растениеводства и селекции СО ВАСХНИЛ с целью идентификации возбудителя, вызывающего большие потери урожая ->тон культуры. Симптомы болезни проявлялись в виде штриховатои хлоротичной мозаики, морщинистости, перо увядало, надламывалось, полегало, верхушки усыхали. Многие из таких растений погибали прежде, чем успевали сформировать замещенные луковицы.

Для изучения круга растений-хозяев патогена инокулировали 57 видов и сортов растений из 12 семейств. Вирус с трудом удалось передать механически на 15 видов и сортов рода Allium и 2 вида рода Chenopodium (табл.4). 40 видов и сортов растений не удалось заразить вирусом, из них 18 видов рода Allium.

Из всех видов лука, которые удалось заразить вирусом, самым чувствительным оказался лук алтайский Al.altaicum . Начальные признаки вирусного поражения в виде хлоротичной штриховатости появлялись на 8 день. ТТИ-65°С, ПСИ-2 сут. Вирионы нитевидные

размером 750 х 12 нм. В эпидермальных клетках больных растений обнаружены Х-тела. На 11 день после передачи вируса персиковой тлей на А1.аэса1оп1сиш появлялись симптомы в виде хлоротичной штриховатости.

Таблица 4

Реакция растений на заражение вирусом, выделенным из лука шаллота

Время появл. Симптомы

Вид и сорт растений СИМПТ (сут) поражения

Alliaceae J.G. Agardh.

Allium altaicum Pall. 8 S :CIStr

AI. азса1оп1сит Ь.

сорт. Кущевка Харьковская 34 S :C1M,Str, Stu

сорт Сибирские желтые 33 S:C1M,Str Stu

Al. сера Ь.

сорт Стригуновский 36 S :CIStr, Dis

сорт Арзамаский 30 S:ClStr, Dis

сорт Золотистый 22 S :CIStr, Dis

Al carinatum Ь. 10 S:ClStr

Al fistulosum Ь. 26 S : C1M

Al. гпсопярлсит \Zved. 10 S :CIStr

Al. ledebourianum Schult /et/Schult fil. 9 S.-C1M

Al. porrum L. 26 S:ClStr

Al. sphaerocephalon L. 36 S :C1M,Str Dis,Stu

Al. strictum Schrad. 30 SiCIStr

Al. triquetrum L. 35 S: WhStr

Al. vineale L. 19 S:ClM,Dis

Chenopodiaceae Vent.

Chenopodium giganteum Don. 7 L:NSp

Ch. quinoa Willd. 5-6 L:NSp

Аббревиатура :

L - локальное поражение S - системное поражение

Clstr - хлоротичная штриховатость Dis - деформация

WhStr - белая штриховатость Stu - задержка роста

NSp - некротические пятна С1М - хлоротичная мозаика

Сравнивая литературные данные, полученные при изучении вирусных заболеваний растений рода Allium L., с результатами, полученными нами при идентификации вируса из Al.ascaloriicum (симптоматика естественно пораженных растений, круг экспериментально поражаемых растений и их реакция на заражение, физические свойства, морфология и размеры вирионов, возможность передачи вируса тлей, способность образовывать внутриклеточные включения), мы

- 14

пришли к выводу, что изучаемый нами патоген является вирусом желтой карликовости лука. Исследование физико-химических свойств изолята подтвердили достоверность нашей идентификации (Лртюгопч и др-, 1990). Характеристики идентифицированного нами ВЖКЛ практически не отличались от свойств обычного штамма (Воз, 1976), за исключением того, что нарцисс тацетта >1= за-

ражался выявп»""":: „»пи ич'хтттс...

Га.чим ма лука шаллоте идентифицирован вирус группы

Potyvirus - обычный штамм вируса желтой карликовости лука.

Вирус традесканции белоцветковой (ВТЕ1 (ТгааевсапМа а1ЫС1о-га ухтин). Изолят выделен из традесканции белоцветковой с симптомами хлоротичной мозаики. Он имел узкий круг растений-хозяев, ограниченный видами из сек.СоттеНпасеае, причем только на 3 из 12 тестированных видов растений наблюдались симптомы поражения (табл.5).

Реакция растений на заражение вирусом из Tradescantia albiflora

Таблица

Вид и сорт растений Время появл. симпт.(сут) j Симптомы поражения

Commel iría filifolia K.Schum. H:0

Tinantia fugax Scheidw а -14 S:М,VC

Tradascnntia albiflora Kunth 14-1 6 S : C1M

Zebrina pendula Schnize 20 S:C1M,VC

Аббревиатура: S:0 - бессимптомное заражение М - мозаика

С1М - хлоротичная мозаика VC - посветление жилок

Coramelína filifolia являлась латентным носителем вируса. 7 видов растений из сем.Commelinaceae: Callisia repens, Commeli-na communis L., С.sikkimensis, C.tuberosa, Tradescantia Anderso-niana, Tr.fluminensis, Tr.virginiana, Rhoeo discolor были невосприимчивыми к изучаемому вирусу. ТТИ-50-55°С, ПСИ от 1 до 3 сут. Вирусные частицы нитевидной формы размером 750-780 х 12 нм. В зпидермальных клетках листьев пораженных растений Tr.albiflora и Т.fugax наблюдали вирусные включения в виде Х-тел (рис.1).

Рис.1 Х-тела, образованные ВТБ в эпидермальных клетках Tr.albiflora

Полученные данные о круге растений-хозяев, симптомах, вызываемых вирусом на естественно и искусственно поражаемых растениях, морфологии и размерах вирионов, возможности передачи вируса тлей, а также способности образовывать внутриклеточные включения, позволяют включить изучаемый вирус в группу потивирусов. По литературным данным растения сем.Commelinaceae поражаются такими вирусами из этой группы как Commelina mosaic (CMV); Tradescan-tia/Zebrina (T/ZV) и Aneilema virus (AV). CMV заражал Tr. albif-lora и Rh.discolor, вызывая крапчатость и линейный узор на листьях (Morales, Zettler, 1977). В наших экспериментах растение Rh.discolor было иммунным к изучаемому вирусу. T/ZV инфицировал Z.pendula, вызывая яркие симптомы поражения. Это тест-растение является индикатором на этот вирус (Lockhard et al., 1981). Мы не всегда могли перенести инфекцию на Z.pendula, а если растения удавалось заразить, то вскоре симптомы маскировались и заболевание протекало латентно. Aneilema virus не заражал растения родов Rhoeo, Tradescantia, Zebrina.

Таким образом, показано, что исследуемый изолят сильно отличается по кругу поражаемых тест-растений от CMV, T/ZV и AV и кы не смогли отнести его ни к одному из вирусов группы Potyvirus,

описанных ранее на рлстенп-'х сел. Commelinacoao. Кроне пл'о сссГю следует обратить внимание на то, что основное тест-растение для CMV Rh.discolor было невосприимчивым к вирусу, выделенному нами. Zebrina - индикаторное растение на T/ZV, иссл'.'дуомчм нами пиру -сом заражалось с трудом, симптомы с течением времени маскировались. Все это свидетельствует в пользу того, чтп я п •■••>-шем СССР выделен и и-fy:..,» r-ocyviius Iiaupof'-tia uibi' —. ,i,us. Исследования физико-химических (Аргюкова и др., 1988) и антигенных (Гнутова, 1993) свойств изучаемого вируса подтвердили принадлежность его к этой группе. Так, плавучая плотность вирионов в растворе хлористого цезия колебалась от 1,316 до 1,34 г/см3 в зависимости от способа получения и времени хранения очищенных препаратов. Из данных электро-1форетического анализа белкового компонента вириспа следует . что в свежеочищенных препаратах изучаемого вируса содержится один полипептид с мол. массой 34,0 кД и продукты его деградации (31,9 и 29,4 кД). Электрофоретический анализ препаратов сик »ируса показал наличие зоны с мол. массой 3,5 мД, что находите': пределах мол. масс РНК потивнрусов. Иммунохпмпческими методами вняиленн идентичные группоспецифичные зпитопы капсидных бел ко Fi у по-нии русов: ВЖМФ, ВМТ, АВК.УВК, ВМС, ВЖКЛ и ВТЬ (Гнуюиа, ¡901).

Таким образом, достоверность включения ВТБ на основании изученных нами биологических характеристик в группу rui yv irnr, подтверждена результатами физико-химических и антигенных исследований .

Вирус табачной мозаики (ВТМ-и) выделен из ириса с признаками вирусного поражения при обследовании декоративных культур в Ботаническом саду ДВО РАН. Образец со штрихопатой мозаикой на листьях вызывал на Nicotiana tabacum (cvs. Santsun, Xanthi), N. sylvestris, P.hybrida симптомы, характерные для вирусов группы Tobaraovirus. Он и послужил исходным материалом для дальнейшего выделения и изучения вируса. Чистоту изолята, свободного от возможных примесей других вирусов, обеспечивали 3-х кратными пассажами через N.tabacum cv.Xanthi и выделением вируса из отдельных некрозов этого растения. Электронно-микроскопическое изучение негативно-окрашенных препаратов, приготовленных из листьев пора-

женных растений, показало наличие в них палочковидных частиц длиной 300 нм. К этому изоляту была приготовлена специфическая сыворотка, которая реагировала со штаммами ВТМ, имеющимися в нашей коллекции, что свидетельствовало об антигенном родстве и наличии у исследуемого изолята ВТМ-специфических эпитопов.

Для определения круга растений - хозяев вируса инокулировали 39 видов и сортов растений из 8 семейств. На 29 видах и сортах тест-растений получены различные симптомы вирусного поражения (табл.6).

ТТИ-800 С, ПСИ-более 2-х месяцев. У N.tabacum cv.Sarasun, ино-кулированного вирусом из ириса, обнаружены гексагональные включения по морфологии не отличающиеся от включений, образующихся при заражении обычным штаммом ВТМ. На основании результатов, полученных при изучении биологических характеристик патогена, считаем, что заболевание на ирисе вызывает ВТМ. Если сравнивать ВТМ-и со штаммами, описанными на Дальнем Востоке (Гнутова и др., 1980; Чуян, Стрекозова, 1985) и обычным штаммом ВТМ (ВТМ-об) по симптомам на основных тест-растениях (P.hybrida, N. sylvestris), то ВТМ-и наиболее близок к ВТМ-об и ВТМ-216, выделенному нами из нарцисса. Вирусные включения в клетках табака, зараженного ВТМ-и, по внешнему виду сходны с включениями, обнаруженными в клетках растений, инфицированных ВТМ-об, ВТМ-216 и ВТМ из табака душистого. ВТМ-и и ВТМ, выделенный из ириса в Литве (ВТМ-лит.) (Макутенайте, 1994), имеют существенные различия по кругу растений-хозяев и реакции их на заражение ВТМ. Термическая устойчивость этих изолятов различна. ТТИ ВТМ-и - 80°С, ТТИ ВТМ-лит.-98°С. Исследуемый штамм ВТМ-и обладает низкой для ВТМ термоустойчивостью, что резко отличает его от других штаммов вируса. Более того, как показывает анализ литературных данных, это самая низкая точка термоустойчивости, известная для ВТМ. '

Таким образом, изолят, выделенный из ириса в дальневосточном регионе России, является новым штаммом вируса табачной мозаики.

Вирус табачной мозаики (ВТМ-пер.) выделен из перца с симптомами мозаики и деформации при обследовании посадок овощных культур. Для изучения круга растений-хозяев вируса инокулировали растения из 9 семейств. Соком пораженного растения удалось заразить 18 видов и сортов растений из 38 используемых (табл.7).

Реакция растений на заражение вирусом, выделенным из ириса

Симптомы поражение

локальные систр«"«" 1

д ¿abosa L . 6 NSp О

Aizoaceae Rudolphi

Tetragonia espansa Murr. 12 - 0

Asteraceae Dum.

Zinnia elegans Jacg. - О

Chenopodiaceae Vent.

Beta vulgaris L. сорт Односемянная 5 N О

Chenopodium giganteum Don. 5 NSp,NDot О

Ch.quinoa Willd. 6 CISp О

Ch.múrale L. 5 NSp M,N

Spinaceae olerácea L. cu. Matador О

Solanaceae Juss.

Capsicum annuum L. 14 - CISp

Datura stramonium L. 7 NSp -

Hyoscyamus niger L. 13 NR Die, СИ

Lycopersicon esculentum Mill.

сорт Алпатьева 16 - M

сорт Коралл 16 - M

сорт Невские 16 - M

сорт Ре вернун 16 - M

сорт Сибирские 16 - M

сорт Хабаровские 16 - M

Nicandra phisaloides (L.)Gaertn 3 NSp И , D i s

Wicotiana alata Linkot Otto

cu.Grand if lora 10 - Dis.ClM

N.cleuelandii Gray 7 NSp Dis,C1M

N.glutinosa L. 7 NSp -

N.rustica L. 12 - M

N.sylvestris Speg.et Comes 8 NSp VC

N.tabacum cv.Samsun 16 - M,CISp

cv.Trapezond 4 NSp -

cv.Xanthi 4 NSp -

cu.Yaua 8 CISp C1M

Petunia axillaris (Lam.)B.S.P. 10 - C1M

P.hybrida Vilm. 7 NSp ClM,Dis

Аббревиатура:

С1Бр - хлоротичная пятнистость ЫЭр - некротическая пятнистость ЫйоЪ - некротическая крапчатость С1М - хлоротичная мозаика Ш - некротические кольца

M - мозаика

N - некрозы

Dis - деформация

VC - посветление жилок

О - бессимптомное заражение

Реакция растений на заражение вирусом, изолированным из перца

Вид и сорт растений

Симптомы поражения

Amaranthaceae Juss.

Gomphrena globosa L. Asteraceae Dum.

Calendula officinalis h. Zinnia elegans Jacq. Chenopodiaceae Vent.

Chenopodium album L. Ch.giganteum Don. Cb.quinoa Willd. Ch.múrale L. Fabaceae Lindl.

Glycine max (L.)Merr. Solanaceae Juss.

Capsicum annuum L. сорт Золотая педаль

С .baccatum L.

С.frutescens L.

С .sinensis Jacq.

Nicotiana glutinosa L.

N.rustica L.

N.tabacum L. cu.Xanthi

Petunia hybrida Vilm.

Physalis floridana Rydb.

L:NR

S : 0 S:0

L:N L:N

LiCISp L:NR

S : 0

S :C1M, Dis, Stu

Dis, Stu S : C1M

S :NM, N : NR, S :C1M L:N L:N L:N

L:N, S:C1M, L:NR

Аббревиатура: Ь - локальное поражение ИМ - некротическая мозаика Бил - задержка роста NR - некротические кольца С1Бр - хлоротичные пятна

S - системное поражение Dis - деформация СХМ - хлоротичная мозаика О - бессимптомное поражение N - некрозы

Остальные 20 видов оказались невосприимчивыми к вирусу. ТТИ-95°С. Персиковой тлей инфекцию на растения С.аппиит передать не удалось, но вирус легко передавался прививкой больного растения С.апппиит на здоровое. Семенной передачи в опытах с данным изолятом не наблюдали (тестировалось 55 семян). При просмотре в электронном микроскопе препаратов, приготовленных из суспензии листьев зараженного С.аппиит, обнаружены палочковидные частицы длиной 300 нм. Анализ антигенных взаимоотношений в РДД выявил наличие идентичных эпитопов у вируса, выделенною из С.аппиит, со штаммами ВТМ, описанными на Дальнем Востоке: петуниевым (ВТМ-п), нарцисса (ВТМ-412 и ВТМ-216), ириса (ВТМ-и), душистого табака (ВТМ-т), белены (ВТМ-б) и обычным штаммом (ВТМ-об.) (рис.2). Результаты, полученные РИЭФ, позволили провести оценку антигенного родства (рис.3 а, б).

Рис. 2 П""

ялвити'»»": „.анно пп<"'"*г:-;„„л "ЛИТОПОН

м и"Л П ц&тральных лунках очищенный препарат (1мг/нл) штамма ВТМ-пер., в периферических - моно-штаммовые антисыворотки. Преципитат формировался при взаимодействии со штаммами: 1 - ВТМ-216, 2 - ВТМ-412, 3 - ВТМ-И, 5 - ВТМ-Т, б - ВТМ-б, 7 - ВТМ-К,

ю - втм-об; 4, 8, 9, 11, 12 -контрольная антисыворотка

&<

Г

Рис. 3 Иммуноэлектрофореграгиш при выявлении идентичных штац-моспецифичных эпитопов ВТМ, полученные РИЭФ: а - система ВТМ-412, в геле антисыворотка к ВТМ-412, в лунках: 1 - ВТМ-об, 2 - ВТМ-И, 3 - ВТМ-412, 4 -ВТМ-пер.;

б - система ВТМ-об, в геле антисыворотка к ВТМ-об, В лунках: 1 - ВТМ-об, 2 - ВТМ-И, 3 - ВТМ-412, 4 -ВТМ-пер.

Итак, результаты электронной микроскопии, исследование физических и антигенных свойств вируса, симптоматология давали все основания считать изучаемый вирус штаммом вируса табачной мозаики (ВТМ-пер.).

Характерной особенностью штамма являлось то, что ВТМ-пер. не заражал N.tabacum cv.Samsun и L.esculentum, а на большинстве тест-растений вызывал реакцию местного характера. Поэтому результаты, полученные нами, и данные литературы позволили отнести выделенный нами изолят из C.annuum к группе некротических штаммов ВТМ.

Таким образом, впервые в России на перце выявлен и описан новый некротический штамм ВТМ.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что заболевание, впервые выявленное в России на культурном растении рода Raphanus - лобе, вызывается вирусом мозаики турнепса - представителем группы Potyvirus. Исследованы биологические характеристики вируса, необходимые для идентификации: круг растений-хозяев, морфология и размер частиц, точка термической инактивации и сохранность вируса в соке при комнатных условиях, передача семенами и насекомыми, цитологические изменения в клетке, что позволило отнести его к группе обычных штаммов вируса.

2. Впервые на Дальнем Востоке на гладиолусе гибридном (Gladiolus hybridus) выявлен вирус желтой мозаики фасоли. Изучены экспериментальный круг растений-хозяев, форма и размер вирионов, физические свойства, передача семенами и насекомыми, вирусные включения.

3. Впервые в России на гиппеаструме садовом (Hippeastrum hor-torum) идентифицирован вирус мозаики гиппеаструма. С помощью биологических характеристик доказана принадлежность патогена к группе Potyvirus.

4. Впервые установлено, что мозаичное заболевание традесканции белоцветковой (Tradescantia albiflora) вызывается новым вирусом, названным нами вирусом традесканции белоцветковой, который идентифицирован как новый представитель группы Potyvirus.

5. На основании изученных биологических характеристик иэолята из лука шаллота (Allium ascalonicum) идентифицирован вирус желтой карликовости лука.

6. Впервые в России на ирисе идентифицирован новый штамм ВТМ, который среди изученных штаммов ВТМ имел самую низкую точку термической инактивации (80°С).

7. Установлено, что заболевание перца с симптомами мозаики и деформации вызывал штамм ВТМ, отнесенный нами к группе некротических штаммов. Изучен экспериментальный круг растений-хозяев вируса, определены физические свойства, морфология и размер ви-рионов. Оригинальность выявленного штамма ВТМ заключается в том, что он не заражает растения i.vr«vr»~—„i-un-nm» "i„„i.iaiirt »auacu» <-•« а Ь'оипни «r.-гтп^пцпри"ан впервые.

По материалам диссертации опубликовано 18 статей.

1. Чуян А.Х-, Стрекозова В.Ф., Крылов A.B. особенности вируса желтой мозаики фасоли, изолированного из гладиолуса в Приморье// В сб.'.Теория и практика иммунитета сельскохозяйственных культур к вирусным болезням (Тез. докл. 8 Всесоюз.совещ.Вильнюс, май 1984.). Вильнюс. 1984. С. 166-163.

2. Чуян А.Х., Стрекозова В.Ф. Сравнительная характеристика двух штаммов вируса табачной мозаики, изолированных из нарциссов в Приморском крае// В кн.: Взаимоотношения вирусов с клетками растения-хозяина. Владивосток: ДВНЦ АН СССР. 1985. С. 72-78.

3.Gnutova R.V., Sibiryakova I.Т., Kakareka N.N., kybleva N.V., Korzh V.G., Kozlovskaya Z.N., Tolkach V.F. Immunological characteristics of potex-, poty- and carlaviruses// Abstr. YII-th Internation. Congress of Virology. Edmonton. Alberta. Canada. 1987. P.1133.

4. 1'нутова P.B., Какарека H.H., Толкач В.Ф., Чуян А.Х., Рублева Н.В, Сибирякова И.И., Крылов A.B. Биологическая и серологическая характеристики вируса желтой карликовости лука// Докл. ВАСХНИЛ. 1983. N 11. С. 20-23.

5. Артюкова Е.В., Моисеенко Л.И., Толкач В.Ф., Крылов A.B. Выделение и некоторые свойства потивируса, изолированного из традесканции белоцветковой// Биол.науки. 198Я. N 8. С. 30-34.

6. Толкач В.Ф., Чуян А.Х., Шафрановсхая И.В., Крылов A.B. Биологическая характеристика ВТМ, изолированного из ириса в Приморском крае// Бюл. Гл.ботан. сада. 1988. ВыпЛ47. С. 82-87.

7. Гнутова Р.В., Какарека H.H., Толкач В.Ф., Чуян А.Х., Сибирякова И.И. Некоторые свойства вируса желтой мозаики фасоли, идентифицированного на юге Дальнего Востока// Вестник АН СССР, серия биол. 1989. N 3. С. 442-449.

8. Gnutova R.V., Sibiryakova I.X., Kakareka N.N., Tolkach V.F. Rubleva N.V., Korzh V.G., Kozlovskaya Z.N. Elucidation of common and individual antigenic determinants of potyviruses by various immunochemical methods// Abstr. Simposium "Recent Results in Plant Virology". 18-23 September 1989. Eberswalde. DDR. P.24-25.

9. Tolkach V.V. Virus mozaiky zornice pruhovane (Hippeastrum) na Dalnem Vychode// Abst. X Conf. of Czechoslovac plant virologists, 27-30 June. 1989. Prague-Suchodol. P.82.

10. Гнутова P.В., Какарека H.H., Сибирякова И.И., Толкач В.Ф., Рублева Н.В., Козловская З.Н., Корж В.Н. Подходы к выявлению общих и индивидуальных детерминант потивирусов, идентифицированных на Дальнем Востоке// Биол.науки. 1989. N 10. С. 20-26.

11. Толкач В.Ф. Вирус мозаики гиппеаструма, обнаруженный на Hippeastrum hortorum Maatsch в Приморском крае// Бюл.Гл.ботац. сада. 1990. Вып.157. С.72-76.

12. Толкач В.Ф., Чуян А. X. , Крылов А.В. Характеристика вируса из группы Potyvirus, выделенного из Tradescantia albiflora// Бюл.Гл.ботан. сада. 1990. Вып.157. С. 76-80.

13. Гнутова Р.В., Толкач В.Ф., Сибирякова И.И., Савина И.В., Самсонова С.И. Штаммы ВТМ, идентифицированные на юге Дальнего Востока//Тезисы Всесоюз.конф., посвящ. 100-летию со дня открытия вирусов Д.И.Ивановским. Ростов-на Дону. 1992. С. 78.

14. Толкач В.Ф. Вирус табачной мозаики, обнаруженный на декоративных культурах в Приморском крае// Тезисы Всесоюз.конф., посвящ. 100-летию со дня открытия вирусов Д.И.Ивановским. Рос-тов-на Дону. 1992. С. 32-33.

15. Tolkach V.F., Gnutova R.V. The virus found on Tradescantia albiflora (Russion isolate)// ISMS I international Working Group on Virus Diseases of Ornamental Plants. 8-th Symnposium, Praque. August 24-28, 1992. P.23-24.

16. Tolkach V.F., Volkov Y.G., Gnutova R.V. Biological and antigenic characteristics of the Far Eastern Pepper Strain of TMV// Abstr. Third international Positive Strand RNA Symposium. September 19-24, 1992. USA, Atlanta, Georgia State University. P.10-11.

17. Толкач В.Ф., Волков Ю.Г., Гнутова P.В. Характеристика дальневосточного штамма вируса табачной мозаики, обнаруженного на перце//Докл. ВАСХНИЛ. 1993. N 1. С. 30-35.

18. Gnutova R.V., Sibiryakova I Л., Tolkach V.F., Volkov Y,G. A role of capsid proteins for identification and classification of plant viruses// 7-th International Congress of Bacteriology and Applied Microbiology Division, 7-th International Congress of Mycology Devision. Praque. Czech. Republic. duly 3-8-th. 1994. P.25.