Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Helicobacter pylori при гастродуоденальной патологии: выделение, микроэкология и чувствительность к антимикробным факторам

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Helicobacter pylori при гастродуоденальной патологии: выделение, микроэкология и чувствительность к антимикробным факторам"

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН

НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСТКИЙ ИНСТИТУТ ЭПИДЕМИОЛОГИИ, МИКРОБИОЛОГИИ И ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

УДК/ 616.33-002.2+616.33-002.44/-02:579.835.12(048.8)

HELICOBACTER PYLORI ПРИ ГАСТРОДУОДЕНАЛЬНОЙ ПАТОЛОГИИ: ВЫДЕЛЕНИЕ, МИКРОЭКОЛОГИЯ И ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ К АНТИМИКРОБНЫМ ФАКТОРАМ

03.00.07-микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степеш! доктора медицинских наук

На правах рукописи

БАЖЕНОВ Леонид Григорьевич

Ташкент - 1998

Работа выполнена в научно-лабораторном отделе Научного центра хирургии им. академика В.Вахидова Министерства здравоохранения Республики Узбекистан

Официальные оппоненты

Доктор медицинских паук,

профессор H.A. Закиров Доктор медицинских наук,

профессор И.В. Рахимова Доктор медицинских наук,

профессор А.Ю. Юлдашев

Ведущая организация: Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Н.Ф.Гамалеи РАМН

Л^

Защита состоится_1998 г. ъ'/ часов на заседании специализированного совета Д 087.11.01. при НИИЭМИЗ Министерства здравоохранения Республики Узбекистан по адресу: 700133, г. Ташкент, ул. Решетова, 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Научно-исследовательского института эпидемиологии, микробиологии и инфекционных заболеваний МЗ РУз.

Т2 » Ш

Автореферат разослан " 7 " у"1^ . 1998 г.

Ученый секретарь специализированного совета, доктор медицинских наук

С.Н. Бабаходжаев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.

Заболевания органов пищеварения широко распространены среди населения Республики Узбекистан и в других странах, особешю им подвержены лица молодого и трудоспособного возраста. Наибольший удельный вес среди них имеют хронический гастрит (ХГ), язвенная болезнь желудка (ЯБЖ) и 12-перстной кишки (ЯБДПК) (У.А.Аскаров с соавт., 1985; А.Т.Алимов с соавт., 1994; Ю.И.Калган, В.В.Вахидов, 1994; АЛ.Гребнев, А.А.Шегтгулин, 1995; S.Caldwell, R. McCallum, 1988; J.Smith, B.Garner, 1993). Однако, несмотря на длительный период изучения этих заболеваний, многие аспекты их этиологии, патогенеза, клиники, лечения и профилактики остаются недостаточно исследованными, а полученные результаты - спорными.

В последние годы появились многочисленные публикации, посвященные спиралевидному микроорганизму Helicobacter pylori (HP), частота обнаружения которого при указанных гастродуоденальных заболеваниях (ГДЗ) достигает 70-95% (Л.И.Аруин, 1990; И.М.Байбеков с соавт., 1992; Ф.Ю.Гариб с соавт., 1993; И.Э.Нарбаева, 1994; В.М.Бон-даренко с соавт., 1995; S.Caldwell, R.McCallum, 1988; G.Gasbarrini et al., 1995). Результаты бактериологических, гистологических и иммунологических исследований достаточно убедительно доказывают важную роль HP в этиологии и патогенезе ГДЗ, об этом свидетельствуют также опыты по успешному самозаражешпо добровольцев чистой культурой HP (М.А.Рожавин, В.И.Струк, 1989; C.Bohemen et al., 1989; M.Blaser, 1990; J.Holton, 1995). Описанные случаи выявления хеликобактеров у практически здоровых лиц не противоречат сведешшм об их патоген-ности, а говорят лишь о возможности инаппаратного или легкого течения болезни, что имеет место при большинстве инфекционных заболеваний (Л.И.Аруин, 1990; C.Goodwin et al., 1985; A.Lee, S. Hazell, 1988).

Однако, несмотря на значительное 'гасло публикаций, проблема взаимосвязи HP с болезнями органов пищеварения далека еще от своего окончательного решения и требует проведения дальнейших исследований. В частости, основополагающим в этиологической диагностике хеликобактериоза остается вопрос усовершенствования имеющихся, а также разработки и внедрения новых методов обнаружения HP и определения их антибиотикограммы, более простых и окономичных. В связи с опасностью для больного частого проведешш гастродуодено-скопий и взятия биоптатов слизистой оболочки желудка (СОЖ) для исследования, предпочтительнее будут менее инвазивные методики. Весьма актуальным является дальнейшее изучение вирулентности выделяемых культур HP и корреляции ее с тяжестью вызываемых этими микроорганизмами ГДЗ.

Недостаточно изученным является состояние местных защитных механизмов в желудке и 12-иерстной кишке при наличии НР в слизистой оболочке, особенно в динамике, хотя именно их повреждение играет, по-видимому, основную роль в ульцерогенезе и заживлении язвы наряду с другими факторами.

Практически отсутствуют работы, посвященные изучению микроэкологии НР, в частности, их взаимодействию с другими микроорганизмами, обнаруживаемыми в желудке.

Весьма противоречивы данные о хронобиологических аспектах НР-инфекции, частоты выделения и обсемененности этими микроорганизмами СОЖ, тогда как такие данные очень важны для прогнозирования обострений ГДЗ и проведения своевременных профилактических мероприятий.

Необходимо продолжение изучения чувствительности клинических штаммов НР к различным антимикробным средствам, а также другим антимикробным факторам для повышения эффективности антимикробной терапии хеликобактериоза и проведения оперативной ее коррекции при появлении резистентных культур возбудителя.

Следует также отметить, что в Республике Узбекистан до сих пор не было сообщешш о выделении чистых культур НР от больных с ГДЗ и, следовательно, изучении их биологических свойств и сравнении этих данных с результатами исследователей из других стран.

Наличие вышеперечисленных нерешенных вопросов данной проблемы и обусловило актуальность и необходимость выполнения настоящей работы.

Цель работы:

Разработка эффективной системы микробиологической диагностики хеликобактериоза и на ее основе изучение микроэкологии возбудителя и его чувствительности к антимикробным факторам.

Задачи исследования:

1. Изучить частоту обнаружения и обсемеиениость НР СОЖ и желудочного сока при гастродуоденалыюй патологии при использовании традиционных методов и провести сравнительную оценку их эффективности.

2. Модифицировать известные и разработать новые методы определения НР применительно к условиям практических лабораторий.

3. Оценить эффективность модифицированных и разработанных методов по сравнению с известными при исследовании патологического материала от больных с ГДЗ и в модельных опытах с лабораторными штаммами НР ин витро.

4. Провести анализ частоты выявления НР при гастродуоденалыюй патологии в зависимости от различных факторов (вида материала, пола и возраста больных, нозологии, состояния неспецифической резистентности, сопутствующей микрофлоры, месяца исследования).

5. Изучить микроэкологические связи НР с некоторыми эндоген-

нымн и экзогенными факторами (с фуктуры СОЖ, факторы несиеци-фичсской резистентности, сорбенты), а также основные биологические свойства этих микроорганизмов и их вирулентность.

6. С помощью разработанного методического обеспечения изучить чувствительность выделенных штаммов НР к антимикробным факторам (антибиотики, эубиотики, химически модифицированные материалы, лазерное излучение, умеренная гипертермия, электроактивированные водные растворы) и предложить наиболее перспективные из них для лечения и профилактики хеликобактериоза.

Научная новизна.

Разработана эффективная система микробиологического определения НР при ГДЗ, которая, благодаря усовершенствованию всех звеньев микробиологического анализа (забор и доставка материала, экспресс-диагностика, культивирование, идентификация, тестирование антимикробной чувствительности) и рациональному их применению, позволила не только достоверно повысить высеваемость НР, но и получить количественную характеристику обсеменеиности исследуемого материала.

Доказана пригодность исследования желудочного сока больных с ГДЗ для определения их пораженное™ НР. Установленная высокая обсемененность этого материала хеликобактерами обусловила постановку вопроса об его потенциальной опасности в качестве фактора передачи НР-инфекцни.

Впервые изучена частота обнаружения и степень обсеменеиности НР желудочного сока у больных с ГДЗ и влияние на эти показатели различных факторов (пол и возраст больных, вид заболевания, сопутствующая флора, хронобиологические факторы, содержание лизоцима в слюне и соке).

Впервые проведено комплексное изучение микроэкологических связей НР, включающее их взаимодействие с морфологическими структурам! СОЖ, факторами неспецифической резистентности, грибами рода Кандида, угольными сорбентами.

Впервые в Республике Узбекистан (1989 г.) выделены чистые культуры НР и изучены их основные биологические свойства, включая определение вирулентности.

Впервые произведено комплексное изучение чувствительности клинических штаммов НР к широкому ряду антимикробных факторов при использовании оригинального метода определения резистентности НР (Патент № 2346 РУз). Протестированы антимикробные препараты, биологически активные вещества, эубиотики, лазерное излучение, химически модифицированные материалы, умеренная гипертермия, электроактивированные водные растворы (ЭАВР), на основании чего предложены перспективные пути для лечения и профилактики хеликобактериоза (Патент № 2731 РУз).

Практическая значимость.

Разработанная система микробиологического определения НР и его антибиотикограммы позволяет усовершенствовать диагностику ГДЗ, ассоциированных с НР, делает ее более доступной для практических лабораторий.

Представленные данные о чувствительности НР к широкому ряду антимикробных факторов могут быть использованы для проведения адекватной антимикробной терапии хеликобактериоза.

Учет полученных данных о влиянии хронобиологических факторов и неспецифической резистентности на течение хеликобактериоза позволяет целенаправленно планировать и проводить профилактические и лечебные мероприятия и контролировать их эффективность.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Разработанная система микробиологической диагностики хеликобактериоза проста, доступна и эффективна.

2. Исследование желудочного сока больных с ГДЗ позволяет получить полноценную информацию о наличии и степени обсеменен-иости пилорическими хеликобактерамн и состоянии факторов неспецифической резистентности, а также контролировать эффективность проводимой антимикробной терапии.

З.Частота обнаружения и обсемененность НР желудочного сока больных с ГДЗ связаны с уровнем факторов неспецифической резистентности и изменяются под влиянием хронобиологических факторов

4. Высокая чувствительность НР к ряду антимикробных факторов (эубиотики, лазерное излучение, умеренная гипертермия,ЭАВР) расширяет возможности для повышения эффективности и адекватности антимикробной терапии и профилактики ГДЗ, ассоциировашгых с НР.

Апропация работы.

Материалы и основные положения диссертационной работы доложены: на межотделенческой конференции Ташкентского филиала ВНЦХ (Ташкент, 1988 ), семинаре врачей-бактериологов (Ташкент,1989), научно-практической конференции "Хроническое воспаление и заболевашш органов пищеварения" (Харьков,1991), научной конференции "Профилактика и диагностика инфекционных заболеваний" (Ташкент,1991), научной конференции "Микробиология, иммунология, эпидемиология, профилактика инфекционных заболевашш" (Ташкент, 1991), научной конференции Института медицинской микробиологии Университета г.Галле (Галле,ФРГД991), конференции по химии и физике высокомолекулярных соединений (Ташкент,! 993), международной конференции "Современные проблемы науки о полимерах"(Таш-кент,1995), Республиканской конференции "Медицинское обеспечение населения в чрезвычайных ситуациях" (Ташкент,1995), заседаниях Ученого совета НЦХ им.академика В.Вахидова (Ташкент, 1992,1996), научной конференции научно-лабораторного отдела НЦХ им.академика В.Вахидова (Ташкент,1996), Республиканской научной конференции с международным участием "Новые аспекты диагностики,

лечения и профилактики заболеваний органов пищеварения" (Ташкент, 1996). Республиканской научной конференции с международным участием "Новое в диагностике и лечении заболеваний органов пищеварения" (Ташкент, 1997), межлабораторном семинаре ТашНИИВС (Ташкент, 1997), Ученом совете НИИ микробиологии АН РУз (Ташкент, 1997), научном семинаре II ТашГосМИ (Ташкент, 1997), апроба-ционном совете НИИЭМИЗ МЗ РУз (Ташкент, 1997).

Публикации.

По материалам диссертации опубликованы 62 печатные работы.

Внедрение и практику.

По результатам исследований подготовлены, утверждены Минздравом Республики Узбекистан и изданы методические рекомендации "Выделение и идентификация Хеликобактер гашори при гастродуо-денальной патологии", которые внедрены в процесс преподавания и практическую деятельность I ТашГосМИ (кафедра микробиологии, кафедра госпитальной терапии), ИТашГосМИ (лаборатория научно-диагностического центра), ТашИУВ (кафедра микробиологии), НЦХ им.академика В.Вахидова (бактериологическая лаборатория, отделение желудочно-кишечной хирургии), Центральной клинической больницы N2 МСО при МЗ РУз, Бухарской областной клинической больницы, Хорезмской областной больницы.

На разработанные методы получено 3 патента Республики Узбекистан и 14 удостоверений на рационализаторские предложения. Результаты исследований были отражены в приказе МЗ РУз № 42 от 30.01.97 г. (Приложение 2).

Настоящая работа выполнена в соответствии с планом НИР Научного центра хирургии им.академика Вахидова МЗ РУз в рамках комплексной темы: "Морфологические основы барьерно-защитной функции органов пищеварительной системы, их изменения при патологии, эн-теросорбщш и лазерном воздействии" (номер гос.регистрации 0192.00063) и входит в Программу фундаментальных исследований 6ФО: "Исследования актуальных проблем современной биологии (молекулярной, клеточной биологии, микробиологии, биохимии, физиологии, генетики, ботаники, зоологии) и почвоведения в части задания 2.36.5.2.

Объем и структура диссертации.

Диссертация написана на 222 страницах машинописного текста. Состоит из введения, 6 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций. Библиографический указатель включает 272 (из них 122 на русском языке) источника. Работа иллюстрирована 27 таблицами и 15 рисунками.

Материалы представленной работы получены, обработаны и проанализированы лично автором.

Автор считает приятным долгом выразить глубокую благодарность доктору медицинских наук, профессору Халиде Ильха-мовне Исхаковой за всестороннюю поддержку и научное консул-

ьтирование при работе над диссертацией.

Автор выражает глубокую признательность директору НЦХ им. академика В.Вахидова МЗ РУз профессору Ф.Г.Назырову за предоставленную возможность для выполнения данной работы.

Он благодарен также руководителю научно-лабораторного отдела НЦХ им. академика В.Вахидова МЗ РУз профессору И.В. Овчинникову за всемерное содействие в работе и всем сотрудникам группы микробиологии с лабораторией иммунологии этого отдела за помощь в проведении исследований.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении отражены актуальность работы, цель и задачи исследования, представлены сведения о научной новизне, практической значимости, апробации работы, публикациях, внедрении в практику, объеме и структуре диссертации, изложены основные положения, выносимые на защиту.

Первая глава посвящена обзору литературных источников, в ней последовательно раскрываются вопросы классификации, эпидемиологии, патогенеза, клиники, диагностики, лечения и профилактики хели-кобактериоза. Приведены новейшие сведения о свойствах и распространении возбудителя. Особое внимание уделено лабораторной диагностике хеликобактериоза, преимуществам и недостаткам имеющихся методов. Указаны основные нерешенные вопросы рассматриваемой проблемы, явившиеся основанием для проведения настоящей работы.

Во второй главе представлены материалы и методы исследования. Материалом для диссертации послужили результаты микробиологического исследования 983 проб материала (слюна, желудочный сок, биоптаты СОЖ) от 729 больных с различными ГДЗ (ХГ, ЯБЖ, ЯБДПК, тумор желудка, другие). Обследовано также 27 практически здоровых лиц (163 пробы). Изучены биологические свойства 190 штаммов HP, выделенных от больных с ГДЗ, из них 78 штаммов протестировано на чувствительность к различным антимикробным факторам (антибиотики, сульфаниламиды, антисептики, антимикробные химически модифицированные материалы, пищевые и биологически активные вещества, гастроэнтерологические препараты, эубиотики, лазерное излучение, ЭАВР, умерештя гипертермия).

При этом пыли использованы следующие методы:

Методы выделения и идентификации ///'.Использовали как традиционные методы (в основном на 1-м этапе исследований: 1989, 1990 гг., 1-е полугодие 1991 г.), так и разработанные и модифицированные нами (Ы-й этап исследований: П-е полугодие 1991 г., 1992-1994 гг.). Описание последних представлено в главе III. Из традиционных методов нами использованы: транспортировка биоптатов СОЖ в физрастворе, экспрессдиагностика хеликобактериоза с помощью бактериоскопии грампрепаратов из биоптатов СОЖ и уреазного теста ("Rohm Pharma",

ФРГ), культивирование HP на 5% кровяном агаре и на сердечно-мозговом агаре ("Serva", ФРГ) в микроаэрофильных условиях, идентификация HP по морфологии, культуральным свойствам, наличию ка-талазной, оксидазной и уреазной активности.

Методы определения чувствительности HP к антимикробным факторам. Использовали метод диффузии в агар (классический и в модификации автора) и метод серийных разведений в жидкой среде (С.М.Навашин, И.П.Фомина, 1982).

Антагонизм микроорганизмов по отношению к HP изучали с помощью модифицированного нами метода диффузии в агар (луночный вариант).

Антимикробные химически модифицированные материалы (АХММ) получали путем обработки хлопчатобумажной ткани и марли вместе с антимикробными агентам! (соли меди, серебра, цинка и др.) и акриловой кислотой пучком ускоренных электронов с помощью ускорителя "Аврора-3" (совместно с с.н.с. А.Валиевым).

Электроактивированные водные растворы (ЭАВР) получали с помощью аппаратов "СТЭЛ-1М"(католит, нейтральный анолит), "Эс-перо-1" (католит, анолит), "ЭЛМА-1М" (гипохлорит натрия) по прилагаемым к ним инструкциям.

Влияние лазерного излучения. Определяли действие на HP излучения азотного (ЛГИ-21) (АЛ), гелий-неонового (ЛГ-75) (ГНЛ), полупроводникового ("Узор")(ППЛ) лазеров ин витро (совместно с с.н.с. Р.А.Садыковым). При этом испытывали дозировки, применяемые в клинике.

Влияние умеренной гипертермии на HP изучали путем выдерживания взвеси HP в физрастворе и проб желудочного сока при изучаемых температурах (38,5 - 40 С) и различных экспозициях и определения жизнеспособности микробных клеток при высеве на питательные среды.

Вирулентность HP определяли с помощью простейших (парамеции) по методике, первоначально предложенной для тестирования дизентерийных бактерий (Галикеев Х.Л., Потатуркина-Нестерова Н.И., 1987).

Изучение взаимодействия HP с угольньши сорбентами. Испытывали активированный уголь ("Карболен") (АУ), косточковый активированный уголь ("Карбовит") (КАУ), угольный гемосорбвнт (СКН) (ГС), активированный уголь лигшшовый (АУЛ-2) (АУЛ) путем добавления их к микробной взвеси и пробам желудочного сока до конечных концентраций 1% и 5% и определения после инкубации изменений в содержании жизнеспособных клеток HP и лизоцима (желудочный сок).

Onpedcjunue содержания лизоцима в слюне и желудочном соке проводили методом диффузии в агар (А.С.Лабинская, 1978).

Определение влияния HP на фагоцитарную активность нейт-рофилов проводили со взвесью клеток грибов рода Кандида в присутствии HP и без них (контроль). Затем рассчитывали общепринятым

способом фагоцитарный шздекс (ФИ) и фагоцитарное число (ФЧ).

Морфологические исследования проводили с помощью световой, сканирующей и трансмиссионной электронной микроскопии (совместно с д.м.н. Р.Ш.Мавлян-Ходжаевым). Препараты из биоптатов СОЖ для исследования готовили общепринятыми методами.

Прочие методы. Параллельно с определением НР проводили выделение из исследуемого материала сопутствующих аэробных, факультативно-анаэробных и строго анаэробных микроорганизмов с использованием общепринятых методов.

Анализ полученных результатов выполняли с учетом хронобиоло-гических факторов. Данные статистически обрабатывали с применением критериев Стьюдента и х (кси-квадрат).

Третья глава посвящена разработке и оценке эффективности системы микробиологической диагностики хеликобактериоза.

Сложность, трудоемкость и недостаточная эффективность имеющихся методов работы с хеликобактерами обусловили необходимость модификации и разработки ряда новых методов и приемов с целью усовершенствования микробиологической диагностики хеликобактериоза и адаптации их к условиям практических лабораторий.

Произведенная модернизация коснулась всех основных звеньев микробиологического анализа: выбора материала для исследования, доставки его в лабораторшо, экспресс-диагностики, культивировашш, идентификации и определения антибиотикограммы возбудителя.

В качестве альтернативного материала для исследования предложено использовать желудочный сок, который ранее считался бесперспективным для микробиологического определения НР. Однако, как нами было доказано, при адекватном его изучении, он мало уступает по информативности тестированию биоптатов СОЖ, а по некоторым показателям (доступности, инвазивностн, равномерности распределения хеликобактеров) и превосходит их.

Логическим итогом проведенной работы явилось создание микробиологической системы диагностики хеликобактериоза. Она включает использование ряда оригинальных разработок, в частности, транспортной среды с КАУ (повышает выживаемость НР), модифицированного уреазного теста (определение продуктов гидролиза мочевины не только в жидкой, но и в газообразной фазе), селективно-индикаторной питательной среды (кровяной эритрит-агар с ристомицином, амфотерицином В и трифенилтетразолием хлоридом (ТТХ), микроаэрофильной газовой среды, приготовляемой из смеси воздуха, балонного углекислого газа и природного магистрального газа (конечная концентрация компонентов: 5% кислорода, 10% углекислого газа, 20% азота, 65% природного газа), бумажных дисков с ТТХ и клисталлографического метода (для идентификации НР), метода определения антибиотикограммы НР.

Использовашге системы позволило получать качествеш!ую и количественную характеристику обсемененности НР не только биоптатов СОЖ, но и желудочного сока, при этом частота обнаружения НР у

больных с ГДЗ возросла с 59,0% (при использовании традиционных методов) до 77,1% (при применении разработанной системы) (Р<0,01).

В четвертой главе представлены результаты изучения частоты обнаружения НР при ГДЗ и влияния на нее различных факторов.

Всего при обследовании 729 больных с различными ГДЗ НР были обнаружены у 533 (73,1%). В бноптатах СОЖ частота выявления этих микроорганизмов составила 93,9%, в желудочном соке - 67,9 %. Эти данные характеризуют все количество обследованных больных. Однако, как было отмечено выше, наши исследования проводились в два этапа, на 1-м использовались известные методы, на II - м -разработанная система микробиологической диагностики хеликобактериоза. При этом частота обнаружения НР в биоптатах возросла незначительно (с 93,5 % до 94,4%), т.к., по-видимому, она уже на 1-м этапе была близка к предельному уровню. При изучении же проб желудочного сока высевае-мость НР поднялась с 11,8% до 75,3% (Р< 0,001), т.е. был достигнут достоверный рост высеваемости хеликобактеров. Таким образом, учитывая то, что установленная нами обсеменешюсть НР желудочного сока существенно уступает таковой биоптатов СОЖ (8,6*104 ±4,1 хН}3 КОЕ/мл против 1,1х 0 6±0,5хЮ5КОЕ/г), усовершенствование методического обеспечения исследований способствовало повышению чувствительности микробиологического анализа по определению НР.

Анализ результатов изучения влияния различных факторов на частоту обнаружения НР показал следующее:

Отсутствие достоверных различий в высеваемости НР в зависимости от пола больных, что подтверждает мнение, что оба пола в равной мере восприимчивы к инфекционным агентам.

При рассмотрении возрастных особенностей больных с хелн-кобактериозом, несмотря на отсутвие достоверных различий, выявлена тенденция к более частому поражению инфекцией лиц молодого (3039 лет) и пожилого возраста (свыше 60 лет). Эти дшшые частично подтверждаются литературными сведениями, отмечающими увеличение частоты выявления НР по мере увеличения возраста больных.

НР чаще всего обнаруживались у больных с сочетанием ЯБЖ с ЯБДПК (100%), у больных только с ЯБЖ НР выявлены в 81,5%, только с тумором желудка - в 77,8%, при ЯБДПК - в 72,0%, при иострезекцио1шых состояниях - в 64,3%. Однако эти данные суммарные, полученные как при изучении биоптатов СОЖ, так и желудочного сока. Анализ полученных данных в зависимости от вида исследованного материала показал, что в биоптатах НР чаще обнаруживались при ЯБДПК (96,7%) чем при ЯБЖ (88,2%). Высеваеиость НР из желудочного сока была примерно на одном уровне как при ЯБЖ (70,0%), так и при ЯБДПК (67,9%).

Известная сезонность обострений ЯБЖ и ЯБДПК обусловила целесообразность изучения влияния хронобиологических факторов на обсемешюсть хеликобактерами организма больных с ГДЗ. При этом установлено, что наиболее выраженные подъемы инфицированности

приходились на начало осеннего и весеннего периодов обострений ГДЗ, а снижение отмечалось в периоды спада частоты рецидивов ГДЗ. Обращает на себя внимание весьма выраженный параллелизм показателей частоты обнаружения НР и степе™ обсемененности им больных, особенно их снижение в августе (максимальное в течении года) и затем резкий подъем в сентябре (Р<0,05). Представленные данные служат дополнительным аргументом в пользу этиопатогенетического значения НР при ГДЗ, т.к. подъем инфицированности хеликобактерами предшествует росту числа обострений ГДЗ, а не наоборот.

Установление окологодовых ритмов поражения больных НР вызвало появление вопроса о факторах, контролирующих хеликобактер-ную агрессию. К ним, по-видимому, следует отнести факторы неспецифической резистентности (ФНР). Нами, в качестве условного маркера состояния неспецифической резистентности организма,выбран лизоцим, выполняющий ряд важных иммунологических функций и оказывающий прямое антимикробное действие. Изучение окологодовых ритмов содержания лизоцима показало, что его уровень в слюне здоровых лиц и больных ГДЗ подвержен колебаниям в зависимости от месяца и сезона года и имеет различия в направленности. Так, у здоровых лиц содержание лизоцима во все сезоны превышает таковое у больных. Весной у здоровых наблюдается рост, а у больных - снижение активности лизоцима, осенью - наоборот, снижение у здоровых и рост у больных. Анализ данных в зависимости от налитая у больных с ГДЗ хеликобактерной инфекции показал, что содержание лизоцима в слюне инфицированных зимой и весной было ниже, а летом и осенью выше, чем у неинфицированцых. В желудочном соке уровень лизоцима во все сезоны был выше у инфицированных, чем у неинфицированных. При сравнении частоты выделения НР с содержанием лизоцима в желудочном соке по ежемесячным показателям отмечена достаточная близость кривых, свидетельствующая об явной заинтересованности лизоцима при хеликобактериозе.

Как известно, в норме желудочное содержимое натощак бесцветно или имеет беловатый цвет. Изменешю цвета сока указывает на наличие примесей. Поэтому, представляло определенный интерес изучение связи цвета желудочного сока с частотой обсемененности его хеликобактерами. При этом нами установлено, что НР чаще всего обнаруживались в соке бурого и желто-зеленого цвета (83,3% и 81,7%, соответственно), а реже всего в соке коричневого цвета (50,0%, Р<0,05)-.При прочей окраске высеваемость НР колебалась от 71,9% (серо-бельш) до 77,6% (зеленый). Обращает на себя внимание достаточно высокая частота обнаружения НР при наличии примесей желчи (оттенки цвета сока от желтого до зеленого), т.к. известно иншбирующее действие желта на НР ин витро. Таким образом, нолученныс данные свидетельствуют о том, что эти микроорганизмы ин виво более устойчивые к действию желта и ее компонентам, чем ин витро.

Кроме хеликобактеров при ГДЗ обнаруживались и другие микро-

организмы, так, в биоптатах СОЖ наиболее часто выявлялись энтеро-бактерии и стафилококки (16,4% и 9,7%, соответственно), в желудочном соке - кандиды, стафилококки и аэробные грамиоложительные палочки (32,6%, 12,2%, 9,3%, соответственно). Среди ассоциантов НР в соке превалировали кандиды (61,8% случаев). При этом помесячная частота выделения кандид имела обратную зависимость от частоты обнаружения НР.

Представленные результаты свидетельствуют о высокой частоте обнаружения и значительной обсеменности НР не только СОЖ, но и желудочного содержимого больных с ГДЗ, при этом данные показатели не постояш1ы, их величина зависит от вида заболевания, сезона, уровня неспецифической резистентности, наличия сопутствующей микрофлоры, цвета желудочного сока. Учет этих сведений может быть полезен при диагностике хеликобактериоза, а также при планировании и проведении профилактических и лечебных мероприятий.

Пятая глава посвящена изучению микроэколопш НР, его биологических свойств и вирулентности.

Как известно, желудок и 12-перстная кишка являются экологической нишей для НР. Это обуславливает важность изучения экологических связей этого микроорганизма, касающихся его взаимоотношений с элементами СОЖ, ФНР, различными физическими и химическими факторами, как эндогенного, так и экзогенного происхождения. Существенным в понимании инфекционного процесса, индуцированного НР, является, также, определение патогенных свойств хеликобактеров, детерминированных, в частности, ферментативной активностью микроорганизмов, кроме того, весьма важным представляется установление вирулентности отдельных штаммов и ее корреляция с тяжестью заболевания.

Локализация НР в области межклеточных контактов СОЖ во многом определяет патогенетическое значение этих микроорганизмов. Разрушая межклеточные соединения, они проникают вглубь СОЖ, нарушая нормальное функционирование эпителиоцитов и повышая проницаемость СОЖ, на этом фоне, вероятно, включаются уже и другие звенья патологического процесса.

Наряду с выраженной инвазивной активностью, НР обладают, по-видимому, и определимыми механизмами защиты от ФНР и иммунного ответа организма. Так, по нашим данным, присутствие НР достоверно снижало фагоцитарную активность нейтрофилов. Кроме того, НР оказались устойчивы к прямому действию лизоцима. В то же время не выявлена антилизоцимная активность НР и их способность к продукции этого агента. Однако, вместе с тем, обнаружена корреляция между содержанием лизоцима в желудочном соке и обсемененностью его хеликобактерами. Это, вероятно, обусловлено опосредованным влия-шюм лизоцима на другие ФНР и иммунного ответа, контролирующие НР-инфекцгао.

Иллюстрацией к взаимосвязи содержашм лизоцима с обсеменен-

ностыо НР может служить действие угольных сорбентов в желудочном соке. При добавлении к соку АУ до концентрации 1% и 5% наблюдалось достоверное снижение уровня лизоцима, КАУ подобным эффектом обладал только в концентрации 5%. 1 % ГС также снижал уровень лизоцима, тогда как АУЛ в той же концентрации аналогичного действия не оказывал. Анализ выживаемости НР показал, что в присутствии АУ, КАУ и ГС она возросла (в 3,2,2 раза, соответственно) по сравнению с контролем (без сорбента). Тогда как АУЛ способствовал снижению выживаемости НР (в 1% растворе - почти в 3 раза).

Данный феномен действия сорбентов использован нами при разработке транспортной среды для доставки и кратковременного хранения проб желудочного сока и биоптатов СОЖ при лабораторной диагностике гастродуоденального хеликобактериоза. При этом КАУ добавляли в физраствор (для биоптатов) или непосредственно в пробу желудочного сока до концентрации 1-5% (вес/объем) (Удостоверение на рацпредложение №163 от 29.06.1994 г., НЦХ МЗ РУз).

Этиологическая роль НР в развитии ГДЗ практически не вызывает сомнений. Однако степень патогенности, характеризуемая вирулентностью, у разных культур, вероятно, различна. Для проверки этого предположения нами изучена вирулентность клинических культур НР с помощью простейших (парамеции). Установлено, что среднее время, в течение которого погибали все парамеции составило 3 мин 49 сек ± 37 сек, тогда как в контроле (физраствор) 8 мин 7 сек ± 39 сек (Р< 0,001). По вирулентности все испытанные культуры НР были разделены на 4 группы. В 1-ю группу (наиболее вирулентные) вошло 6,7%, во 2-ю -53,3%, в 3-ю -20% и в 4-ю (наменее вирулентные) - 20% протестированных штаммов. Таким образом, клинические культуры обладают различной вирулентностью, причем превалируют (60%) более вирулентные микроорганизмы (1-я и 2-я группы).

Выделенные нами культуры НР - это первые штаммы хеликобак-теров, изолировашшю на территории Республики Узбекистан, поэтому представляло определенный интерес изучение их основных биологических свойств и сравнение с таковыми, культур, выделенных в других странах.

Изученные штаммы НР росли только в микроаэрофильных условиях, видимый рост колоний при инкубации при 37° С на плотных питательных средах появлялся на 4-6 сутки. Колонии были очень мелкие, полупрозрачные, напоминали "капельки росы", их величина не превышала обычно 1-1,5 мм в диаметре. При микроскопии выросших микроорганизмов по Граму обнаруживались тонкие изогнутые грамот-рицательные палочки с большим или меньшим количеством грамотри-цательных кокковых форм НР. Доля последних была прямо пропорциональна возрасту культуры, количеству предыдущих пассажей и степени нарушения условий культивирования.

Практически все тестированные культуры обладали оксидазной, каталазной и уреазной активностью.

Другие биологические свойства HP, в частности, ростовые свойства и чувствительность к антимикробным факторам представлены в главах III и VI, соответствешю.

Таким образом, культуры HP, впервые выделенные нами в Республике Узбекистан, по своим основным биологическим свойствам практически не отличались от описанных аналогов, изолированных в других странах.

Шестая глава посвящена изучению чувствительности HP к антимикробным факторам.

Установление важной роли HP в развитии ГДЗ позволило существенно изменить наши представления об этиологии и патогенезе этих заболеваний. Весьма актуальной стала проблема этиотрогшых подходов к их терапии. При этом большое значение имеет предварительное определение антихеликобактерного эффекта изучаемого антимикробного фактора ин витро. Однако невозможность использования традициошгых методов для тестирования HP (метод диффузии в агар из дисков) побудила нас к разработке специального метода для определения чувствительности HP к антимикробным препаратам. Этот метод представляет собой модификацию метода диффузии в агар и заключается в приготовлении засеянных хеликобактерами агаровых блоков, каждый из которых предназначен для тестирования одного препарата (Патент № 2346 РУз). Метод прост, экономичен и достаточно информативен.

При испытании антимикробных препаратов (более 50 наименований) установлено, что изученные культуры HP оказались высо-ко-чувствительны к большинству испытанных антимикробных агентов. Среди активных препаратов следует отметить нистатин, нитроксолин и интетрикс, об антихеликобактерном действии которых мы не нашли сведений в литературе. Эти препараты интересны еще тем, что подавляют рост грибов рода Кандида, которые часто обсеменяют желудок в сочетании с HP, а также другие отделы пищеварительного тракта и при нерациональной антибиотикотерапии могут вызывать серьезные заболевания - кандидозы. Обращает на себя внимание также, значительное количество штаммов HP, резистентных к оксациллину (37,5%), довольно часто применяемому в различных схемах антимикробной терапии хеликобактериоза. В отношении леворша, 1Шзорала, амфотерицина В, полимиксина М, налидиксовой кислоты, ристомищша хеликобактеры были устойчивы.

Изучена также чувствительность HP к некоторым сульфаниламидам, антисептикам, красителям, металлам и их солям, к большинству из которых изученные штаммы оказались чувствительными.

Локализация HP в СОЖ и в просвете желудка обуславливает их непосредственный контакт с различными пищевыми продуктами, слюной, лекарственными препаратами при их пероралыюм применении, желчыо, забрасываемой из 12-перстной кишки, с другими веществами. В этой связи представляло несомненный шггерес определение характера воздействия этих агентов на хеликобактеры. Среди терапевтичес-

ких препаратов наиболее эффективными против НР оказались ацетилсалициловая кислота и кальцекс, достаточно активным был кофеин, остальные средства характеризовались умеренной активностью. Лимонная кислота угнетала рост всех культур НР. Биологически активные продукты (мумие, мед, прополис) подавляли жизнедеятельность от 40% до 57,1% штаммов НР. Среди биологических субстратов животного и человеческого происхождения наиболее активными были компонент желчи - таурохолат нария, а также сама желчь (4,8% и 16,7% устойчивых штаммов, соответственно), мочевина и нативная моча (14,3% и 28,6%), слюна и интерферон (по 25% устойчивых штаммов). Практически индифферентными были лизоцим и желудочный сок (83,3% и 100% устойчивых штаммов, соответственно).

Об антагонистическом действии микроорганизмов на НР имеются лишь единичные сообщения. Нашими исследованиями установлено наличие микроорганизмов с выраженной антихеликобактерной активностью. Среди них представлены как культуры давно используемые в производстве бактерийных препаратов (колибактерин, лактобактерин), так и недавно выделенные (лактобактерии: 925 аг, 902 65, кишечная палочка К-1, прогаюнобактерии №1, аэробные бациллы В-1, бактероиды Т-1), на основе которых могут разрабатываться бактерийные препараты и эффективные методы их применения для профилактики и лечения хеликобактериоза.

При изучении влияния лазерного излучения на НР выявлено, что ГНЛ и ППЛ не оказывали ингибирующего влияния на НР даже при максимально допустимых в клинике лучевых нагрузках. В то же время АЛ обладал выраженным хеликобактерицидным эффектом. На основании полученных результатов совместно с сотрудниками НЦХ им.академика В.Вахидова МЗ РУз Р.А.Садыковым и Л.П.Струсским разработан метод лечения язвенной болезни 12-перстной кишки с использованием комбинации ГНЛ и АЛ, сочетающих благотворное действие на трофику СОЖ излучения ГНЛ с антихеликобактерным эффектом АЛ (Патент №2731 РУз).

Температура среды обитания - один из важнейших физических факторов, определяющих возможность и интенсивность развития микроорганизмов. В литературе нет убедительных данных о влияют на НР умеренно повышенной температуры (38-40° С), не установлен верхний порог температурной чувствительности НР и нет сведений о динамике отмирания этих микроорганизмов при данной температуре, что и явилось основанием для проведения соответствующего исследования. При этом было установлено, что по мере повышения температуры (от 38,5 до 40,5° С) резко сокращается выживаемость НР, значительно снижается их вирулентность. Полученные результаты явились основой для разработки гипертермического метода инактивации НР. Он, вероятно, применим и ин виво, при этом, наряду с гибелью хеликобактеров и снижением вирулентности оставшихся живых микробных клеток, под действием умеренно повышенной температуры про-

исходит стимуляция защитных сил организма, что повышает адекватность воздействия и усиливает положительный эффект. Перспективным, по-видимому, может стать использование данного феномена при обеззараживании материалов и аппаратуры, контактирующих с больными хеликобактерлозом и их патологическими субстратами (эндоскопы, рН-метры и др.).

В последнее время все более широкое распространение получают ЭАВР (анолит, католит, гипохлорит натрия), применяемые в качестве антисептических, дезинфицирующих и стерилизующих растворов. Нами установлено также их, в частности, нейтрального анолита, выраженное антихеликобактерное действие, значительно превосходящее таковое в отношешш других микроорганизмов (МИК 3,5-7 мг/л активного хлора). Поэтому эти растворы могут найти применение в лечении и профилактике хеликобактериоза. Например, при деконтаминации зараженных НР материалов и аппаратуры.

Учитывая инфекционный характер ГДЗ, ассоциированных с НР, наряду с проблемой их этиотропной терапии, важное значе1ше имеют профилактические мероприятия, снижающие и исключающие опасность распространения возбудителя в окружающей среде и заражения здоровых лиц. Определенную роль в этом могут сыграть АХММ. Марля и хлопчатобумажная ткань, специальным образом обработанные рядом антимикробных агентов, испытаны на антихеликобактерную активность. Наиболее эффективными оказались образцы, обработанные сульфатом меди, сульфатом цинка и их комбинациями. Умеренная активность была у нитрата серебра. АХММ с антихеликобактерной активностью могут быть использованы в профилактических целях, например, для изготовления спецодежды (или ее обработки) для персонала гастроэнтерологических отделений и кабинетов, для обработки других изделий, контактирующих с больными ГДЗ и / или их выделениями (слюна, желудочный сок).

Таким образом, разработана эффективная микробиологическая система диагностики гастродуоденального хеликобактериоза, адаптированная к условиям практических лабораторий, с помощью которой изучена роль НР в развитии ГДЗ и их течении, микроэкологические связи возбудителя и предложены перспективные пути его эрадикации и блокирования распространения во внешней среде.

ВЫВОДЫ

1.Разработана эффективная система микробиологической диагностики хеликобактериоза, адаптированная к условиям практических лабораторий, позволяющая на основашш изучения биоптатов СОЖ и/ или желудочного сока получать качественную и количественную характеристики инфицировашюсти больных хеликобахтерами.

2. Частота выявления НР у больных с гастродуоденалыюй патало-гией составляет: при исследовании биоптатов СОЖ - 94,4%, желудоч-

нош сока - 75,3%, при средней обсемененностн 1ДхЮ6±0,5х105 КОЕ/г и 8,6х104±4Дх103 КОЕ/мл, соответственно.

3. Выявлены окологодовые биоритмы частоты обнаружения и обсемененностн хеликобактерами желудочного сока, при этом подъемы этих показателей приходятся на начало осеннего и весеннего сезонов, являющихся периодами обострений язвенной болезни и, соответственно, их снижение отмечается в периоды спада частоты этих заболеваний и их рецидивов.

4. Установлено наличие сезонных изменений содержания лизоцима в слюне и желудочном соке больных с ГДЗ, коррелирующих с высе-ваемостью НР, что свидетельствует о лимитирующей роли факторов неспецифической резистентности при хеликобактерной инфекции.

5. Клинические культуры НР характеризуются различной вирулентностью, при этом наиболее вирулентные преобладают (60%).

6. Угольные сорбенты оказывают различное влияние на выживаемость НР в желудочном соке, зависящее от способности сорбентов связывать лизоцим. При наличии таковой высеваемость НР достоверно повышается (сорбенты АУ и КАУ), а при отсутствии - понижается (АУЛ).

7. Кроме НР при ГДЗ достаточно часто обнаруживаются грибы рода Кандида (17,6%), при этом их сезонная частота выделения обратна таковой НР.

8. Выделенные культуры НР характеризовались высокой чувствительностью к большинству испытанных антимикробных агентов, включая нистатин. К оксациллину, метициллину, полимиксину Е, фосфоми-цину они были умеренно устойчивы; к леворину, полимиксину М, налидиксовой кислоте - устойчивы.

9. Установлена высокая чувствительность НР к ряду эубиотиков, излучению УФ-лазера, умеренной гипертермии, ЭАВР, а также к некоторым АХММ. Эти факторы могут быть использованы для инактивации НР ин виво, а также для профилактики инвазии и распространения возбудителя во внешней среде.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Целесообразно расширить показания к проведению исследований на наличие НР при ГДЗ (гастриты, ЯБЖ, ЯБДПК, тумор желудка),используя для этого как биоптаты СОЖ, так и пробы желудочного сока.

2. При проведении микробиологической диагностики ГДХ необходимо применять предложенные методы качественного и количественного определения НР ввиду их комплексности, доступности и достаточной эффективности.

3. В зависимости от материально-тех!шческих возможностей лаборатории определение НР может осуществляться по расширенной и сокращенной схемам микробиологического исследования. Экспресс-

индикация HP при изучении биоптатов СОЖ может ограничиваться постановкой модифицированного уреазного теста, а при исследовании желудочного сока - бактериоскопией грампрепарата.

4. Необходимо учитывать данные о наличии и динамике обсеме-ненности хеликобактерами оргашгема больного в процессе его лечения для оценки эффективности проводимой терапии и ее коррекции в случае необходимости.

5. Учитывая наличие сезонных снижений уровня неспецифической резистентности организма, сопровождающихся подъемами обсеменен-ности хеликобактерами, провоцирующими обострения ГДЗ, целесообразно в предшествующие им периоды проводить профилактические мероприятия (назначение иммуномодуляторов, бактерийных препаратов с антихеликобактерной активностью и др.) и усилить соответствующий микробиологический контроль.

6. При консервативном лечении хеликобактериоза необходимо учитывать данные антибиотикограммы выделенной культуры HP и использовать наряду с антибиотикотерапией другие адекватные методы, основанные на учете биологических особенностей HP (УФЛИ, умеренная гипертермия, антихеликобактерные эубиотики).

7. При антимикробной терапии хеликобактериоза важно ушпывать достаточно частое сочетание HP с грибами рода Кандида, при этом можно использовать препараты одновременно с антихеликобактерной и антикандидозной активностью (нитроксолин, нистатин) или же вклю-ча 1ъ антигрибковые препараты в схему антимикробной терапии, особенно при ее большой продолжительности.

8. При хирургическом лечении ГДЗ, ассощтрованных с HP, целесообразно проводить предварительную эрадикацию возбудителя с целью профилактики послеоперационных осложнений и рецидивов заболевания.

9. Для предупреждения распространения HP в окружающей среде, профилактики заражения персонала и больных целесообразно использовать химически модифицированные материалы с антихеликобак-терным действием (в виде спецодежды, полотенец и т.д.) и ЭАВР (анолит, гипохлорит натрия) для обработки зондов, эндоскопов, рук персонала, помещения, обеззараживания биоптатов и желудочного сока больных с ГДЗ.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи:

1. Усовершенствование микроанаэростатов МИ-752 и изготовление простых микроанаэростатных устройств для культивирования анаэробов // Лабораторное дело.-1989.-1Ч.10-С.72-74. (соавт. Исхакова Х.И., Каримов Г.З., Вайман М.А., Коробейников A.B.).

2. Определение Кампилобактер пплори у больных с гастродуо-денальной патологией II Лабораторное дело. - 1990. -№.10 - С.71-73 (соавт. Саидханов Б.А., Ходжаева Н.У.).

3. Методы выделения и идентификации Кампилобактер пилори // Лабораторное дело.-1991.-№.1-С.48-53.

4. Ускоренная индикация Хеликобактер шшори у больных с гастро-дуоденальной патологией // Лабораторное дело. - 1991. -№.10 - С.55-56.

5. Лабораторная диагностика геликобактериоза II Мед. журнал Узбекистана.-1992.-№ 11-12.- С.41-43 (соавт. Лаптева Т.А., Садыков P.A., Тажиев А., Ходжаева Н.У.).

6. Выделение Helicobacter pylori из желудочного сока II Клиническая лабораторная диагностика.-1993.-№.5-С.19-22 (соавт. Ходжаева Н.У., Садыков P.A., Саидханов Б.А.).

7. Хеликобактер пилори при гастродуоденальной патологии: лабораторное определение и чувствительность к антимикробным препаратам // Анналы НЦХ МЗ РУз,- Ташкент, 1994.- Т.1. - С.13-18.

8. Микрофлора желудка у больных с гастродуоденальной патологией II Мед. журнал Узбекистана.-1994.-№ 6.- С.33-34 (соавт. Лаптева Т.А., Туляганов И.А.).

9. Хеликобактер пилори у больных с гастродуоденальной патологией юношеского возраста //Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.-1994.- №6.- С.8-9 (соавт. Юлдашев Р.Ш.).

10. Грибы рода Кандида у хирургических больных // Мед. журнал Узбекистана.-1995.-№ 5.- С.27-29 (соавт.Перепелова И.Н., Трофимова Н.П., Шабанова Н.Г.).

11. Изучение прививочной полимеризации акриловой кислоты к целлюлозным материалам под действием ускоренных электронов // Доклады Академии наук Республики Узбекистан. - 1996.- №.6.-С. 5153 (соавт. Валиев А., Асамов М.К., Сагатов Э.А.).

12. Определение антагонистического действия микроорганизмов на Хеликобактер пилори II Актуальные вопросы диагностики, лечения и реабилитации больных на этапах длительного наблюдешш.- Ташкент, 1995.-С. 63-65 (соавт. Огай Д.К., Григорьянц С.Н.).

13. Изучение антагонистического действия лактобацилл на Helicobacter pylori //Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобио-логии.-1997.- №.3.- С.89-91 (Бондаренко В.М., Лыкова Е.А., Огай Д.К.).

14. Helicobacter pylori и грибы рода Candida при гастродуоденальной патологии //Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммуно-биолопш.-1997.- №.3.- С. 100-101 (соавт. Перепелова И.Н.).

Изобретения:

15. Способ диагностики хеликобактериоза у больных язвенной болезнью желудка. Патент Республики Узбекистан N 2077 от 02.02.94 (соавт. Гариб Ф.Ю., Нарбаева И.Э., Петрова Т.А., Хусаинова H.III,

Церетели С.З., Гариб В.Ф.).

16. Способ определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам. Патент Республики Узбекистан № 2346 от 06.05.94.

17. Способ лечения язвенной болезни двенадцатиперстной кишки.-ПатентРеспублики Узбекистан№2731 от 14.12.94 (соавт. Садыков P.A., Струсский Л,П.).

18. Способ профилактики послеоперационных осложнений при пластике пищевода. Положительное решение Патентного ведомства РУз на изобретение (1НДР 97003761ГФ от 15.05.97). (соавт. Хаджибаев A.M., Низамходжаев З.М., Ганиходжаев С.С.).

Тезисы докладов и другие публикации:

19. Кампилобактер пилоридис у больных с язвенной болезнью // В кн.: Актуальные вопросы реконструктивной и восстановительной хирургии,- Иркутск.-1989.- Ч.1.-С.141-142 (соавт. Саидханов Б.А., Ходжаева Н.У.).

20. Индикация и выделение Кампилобактер пилори при гастродуо-денальной патологии // В кн.: Профилактика и диагностика инфекционных заболеваний.- Ташкент, 1990.-С.29-30 (соавт. Саидханов Б.А., Лаптева Т.А.).

21. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на пристеночную микрофлору топкой кишки // В кн.: Новое в лазерной медицине,- М„ 1990,- Ч.1.- С.208-209 (соавт. Мавлян-Ходжаев P.III.).

22. Indication and Isolation of Helicobacter pylori // 5 (h Eur. Congr. Clin. Microbiol, and Infec. Diseases.-Oslo, Sept. 9-11.-1991.-P.75 (соавт. Садыков P.A.. Саидханов Б.А.)

23. Питательная основа и среда для Хеликобактер пилори // В кн.: Микробиология, иммунология, эпидемиология, профилактика инфек-цио1шых заболеваний.- Ташкент, 1991,- С.51-52 (соавт. Сшшшш Н.И.).

24. Морфология альтеративно-воспалительных процессов при взаимодействии эпителиоцитов с кампилобактерами // В кн.: Хроническое воспаление и заболевания органов пищеварения.-Харьков, 1991,- 4.1.- С.17 (соавт. Мавлян-Ходжаев Р.Ш., Садыков P.A.).

25. Гастродуоденальный хеликобактериоз: лабораторная диагностика и эффективность лазеротерапии // В кн.: Заболевания органов пищевареши с точки зрения терапевта и хирурга.- Донецк, 1992.-С.37 (соавт. Туляганов И.А., Лаптева Т.А., Сорочинская И.Н.).

26. Возможности ультрафиолетового лазера в хирургии пищевода и желудка // В кн.: Лазеры в медицинской практике.- Видное, 1992.-С.120 (соавт. Садыков P.A., Тажиев А.).

27. Влияние НИЛИ на Геликобактер пилори у больных язвенной болезнью // В кн.: Перспективные направления лазерной медицины.-Одесса, 1992.-С.264 (соавт. Садыков P.A., Тажиев А.).

28. Целлюлозные материалы с антимикробной активностью против гноеродной микрофлоры и Хеликобактер пилори // Конференция молодых ученых по химш! и физике высокомолекулярных соединений.-

Ташкент, 1993.-С.45 (соавт. Валиев А., Миразизов X., Асамов М.К.).

29. Определение чувствительности Helicobacter pylori к антимикробным препаратам // В кн.: Проблемы биотехнологии, микробиологии и профилактики инфекционных заболеваний.- Ташкент, 1993.-С.179-180.

30. Микрофлора желудка с учетом геликобактерий у больных с гастродуоденальной патологией // В кн.: Проблемы биотехнологии, микробиологии и профилактики инфекционных заболеваний.- Ташкент, 1993.-С.26-28 (соавт. Лаптева Т.А., Струсский Л.П.).

31. Лабораторное определение Геликобактер пилори и некоторые вопросы его экологии II В кн.: Проблемы биотехнологии, микробиологии и профилактики инфекционных заболеваний.- Ташкент,

1993.-С.183-185 (соавт. Садыков Р.А.).

32. Использование комбинированного лазерного облучения при гастродуоденальном хеликобактериозе // В кн.: Актуальные вопросы лазерной медицины и оперативной эндоскопии.- Видное, 1994.-С.264 (соавт. Садыков Р.А., Тажиев А.).

33. К вопросу о воздействии некоторых энтеросорбентов на лизо-цим и Хеликобактер пилори у больных с гастродуоденальной патологией // В кн.: Перспективные проблемы в гастроэнтерологии.- М.,

1994.-T.III.-C.81-82 (соавт. Трофимова Н.П., Касымов А.Х.).

34. Хеликобактер пилори и грибы рода Кандида при язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки // В кн.: Перспективные проблемы в гастроэнтерологии.- М.Д994.-Т.П.-С.176. (соавт. Перепелова И.Н.).

35. К вопросу о взаимосвязи гастродуоденального хеликобак-териоза с патолошей пародонта // В кн.: Перспективные проблемы в гастроэнтерологии.- М., 1994.-T.I.-C.105-106 (соавт. Акбарова Ю.А., Гафуров Ф.Х.).

36. Гастродуоденальный хеликобактериоз: выделение возбудителя и его чувствительность к лазерному излучению, антимикробным, терапевтическим и бактерийным препаратам // В кн.: Перспективные проблемы в гастроэнтерологии.- М, 1994.- T.I.- С. 24-25 (соавт. Огай Д.К., Садыков Р.А., Перепелова И.Н.).

37. Биоритмы изменений активности лизоцима и обсемененности Хеликобактер пилори при гастродуоденальном хеликобактериозе II В кн.: Перспективные проблемы в гастроэнтерологии,- М., 1994.-T.III.-С.61-62 (Сорочинская И.Н., Долгушкин А.Н.).

38. Взаимодействие энтеросорбентов с лизоцимом и Хеликобактер пилори у больных с гастродуоденальной патологией // I Конгресс по внутренней медицине стран Центральной Азии.-Ташкент, 28-30 сентября 1994.-С.214 (соавт. Трофимова Н.П., Касымов А.Х).

39. Хеликобактер пилори при гастродуоденальной патологии: выделение и чувствительность к антимикробным факторам /II Конгресс по внутренней медицине стран Центральной Азии.-Ташкент, 28-30

сентября 1994 .-С.162-163 (соавт. Огай Д.К., Садыков P.A., Перепелова И.Н.).

40. Хирургические и микробиологические аспекты гастродуо-денального хеликобактериоза // В кн.: Вопросы восстановительной и реконструктивной хирургии,- Ташкент, 1994.-С.86 (соавт. Садыков P.A., Струсский Л.П., Гафуров Ф.Х.).

41. Выделение и идентификация Хелякобактер пилори при гастро-дуоденальной патологии: Методические рекомендации // Ташкент, 1994. - 14 с. (соавт. Перепелова И.Н.).

42. Энтеросорбция и ее влияние на факторы неспецифической резистентности // В кн.: Проблемы медицины.- Самарканд, 1994.-С.62 (соавт. Трофимова Н.П., Касымов А.Х.).

43. Хеликобактер пилори и гастродуоденалыия патология // В кн.: Проблемы медицины.- Самарканд, 1994.-С.13-14.

44. Изменения активности лизоцима и обсемененности хеликобак-териями при гастродуоденальной патологии с позиций хронобиологии // В кн.: Проблемы медицины.- Самарканд, 1994.-С.59-60 (соавт. Соро-чинская И.Н.).

45. Создание антимикробных материалов с использованием лучей лазера и ускорешшх электронов // В кн.: Взаимодействие ионов с поверхностыо.-М.,1995.- Т.2.- С.177-179 (соавт. Валиев А., Асамов М.К., Сагатов Э.А.).

46. Разработка методов инактивации Хеликобактер пилори ин виво// Российский журнал гастроэнтерологии, гепатолопш, колопроктологии. -1995.-JVS.3.-C.13-14 (соавт. Садыков P.A., Огай Д.К.).

47. Повторные реконструктивные операции при болезнях оперированного желудка //Российский журнал гастроэнтерологии, гепа-тологии, колопроктологии. - 1995.-№.3.-С.224 (соавт. Хаджибаев Б.А., Саидханов Б.А., Янгиев Б.А.).

48. Влияние лазерного излучения на аэробные, микроарофильные и анаэробные микроорганизмы// В кн.: Новое в лазерной медицине.-Бишкек, 1995,- С.63-64 (соавт. Садыков P.A.).

49. Роль Хеликобактер пилори при воспалительных процессах в желудочном трансплантате пищевода // В кн.: Актуальные вопросы реконструктивной и восстановительной хирургии.-Ташкент, 1996.-С. 152-153 (соавт. Хаджибаев A.M., Низамходжаев З.М., Ганиходжаев С.С., Ризаева Е.В.).

50. Гастродуоденальный хеликобактериоз: рациональная диагностика и пути повышения эффективности его антимикробной терапии и профилактики // В кн.: Актуальные вопросы реконструктивной и восстановительной хирургии.-Ташкент, 1996.-С. 254-255.

51. К вопросу о вирулентности Хеликобактер пилори // В кн.: Актуальные вопросы реконструктивной и восстановительной хирургии.-Ташкент, 1996.-С. 320-321 (соавт. Таирова Л.С.).

52. Антимикробные свойства электрохимически активированных растворов и перспективы их использования в хирургии // В кн.:

Актуальные вопросы реконструктивной и восстановительной хирур-гии.-Ташкент, 1996.-С. 365 (соавт. Ризаева Е.В., Овчинников И.В.).

53. Хронобиологические аспекты гастродуоденалыюго хеликобак-терпоза и некоторых других хирургических инфекций // В кн.: Актуальные вопросы реконструктивной и восстановительной хирургии.-Таш-кент, 1996.-С. 370-371 (соавт. Таирова Л.С.).

54. Антимикробные свойства нового химически модифицированного материала суперсорбицида // В кн.: Актуальные вопросы реконструктивной и восстановительной хирургии.-Ташкент, 1996.-С.269 (соавт.Касьмов А.Х.,Алимов М.М., Гутникова А.Р.).

55. Перспективные пути эрадикации Хеликобактер пилори при гастродуоденальной патологии // В кн.: Новые аспекты диагностики, лечения и профилактики заболеваний органов пищеварения.-Ташкент,1996.-С.41-42.

56. Хронобиологические аспекты патогенеза гастродуодеональ-ного хеликобактериоза// В кн.: Новые аспекты диагностики, лечения и профилактики заболеваний органов пищеварения.-Ташкент,1996.-С.62.

57. Клинико-микробиологические параллели гастродуоденального хеликобактериоза и заболеваний пародонта// В кн.: Новые аспекты диагностики, лечения и профилактики заболеваний органов пищеварения.-Ташкент,1996.-С.18-19 (соавт. Мамедова Ф.М., Акбарова Ю.А., Гафуров Ф.Х.).

58. Выделение и идентификация Хеликобактер пилори при гастродуоденальной патологии:Информационный листок // МЗ РУз.,ГУНИНТ РОНМИ.-Ташкент,1966.-2 с.(соавт.Перепелова И.Н.).

59. Функциональное состояние защитного барьера слизистой оболочки оперированного желудка при рецидиве язвенной болезни//Россий-ский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. Приложение 3.- 1996.-№.4.-С.72 (соавт. Саидханов Б.А., Хаджибаев A.M.).

60. Влияние электрохимически активированных растворов на хеликобактерш и другие микроорганизмы пищеварительного тракта// В кн.: Электрохимическая активация.- М., 1997.-С.230-231 (соавт. Ризаева Е.В., Ганиходжаев С.С., Битюцков О.П., Баженова И.Л., Абрамов Н.В.).

61. Эффективный мониторинг хеликобактерной инфекции у больных с гастродуоденальной патологией// В кн.: Новое в диагностике и лечении заболеваний органов пищеварения.- Ташкент, 1997.-С.25-26.

62. Применение дезинфицирующих средств в лечебно-профилактических учреждениях и контроль их эффективности: Методические рекомендации// Приказ МЗ РУз N42 от 30.01.97 г., Приложение N2.-Ташкент, 1997. - 12 с. (соавт. Маматкулов И.Х., Атабеков Н.С., Касы-мов А.Х.).

Л.Г.Баженовнинг "Гастродуоденал патология: Helicobacter pylori тонилиши микроэкологияси ва микробга к,арши омилларга сезгирлиги" номли 03.00.07 - микробиология ихтисослиги буйича тиббиёт фанлари доктори унвонини олиш учун диссертация ишининг

ХУЛОСАСАСИ

Иш мацсади: Хелекобактериознинг микробиологик диагностика-сининг самарали тизимини ишлаб чик,иш ва унииг асосида микроэкология кузатувчининг микрозкологиясини урганиш, унинг микробга к,арши омилларга сезгирлигини аниклаш.

Утказилган тадк,ик,отлар иатижасида Helicobacter pylori (HP) к,уз-гогган гастродуоденал касалликларининг (ГДК) микробиологик диагно-стикаси услубий ишлаб чищлди.

Муаллиф таклиф этган усуллар воситасида HP га микробиологик текширишнинг барча боск,ичлари такомиллаштирилди. Уни тадбик этиш HP топиш х,оллари купайишига ва хатто текширилаётган моддада HP микдорини аникдашга имкон беради. Гастродуоденал касалликларда илк бор ошк,озон ширасида HP к,анчалиги аник,ланди ва бу курсаткичга иккиламчи микроб флораси, лизоцим микдори, сурункали касаллик холатлари ва бошк,а омиллар к,андай таъсир курсатиши аник,ланди. Меъда ширасини HP га текшириш амалиётда к,оник,арли натижа бериши исботланди. HP нинг ош^озон шиллик, к,аватининг морфологик тузи-лиши, организмнинг носпецифик иммунитета омиллари, Candida турига мансуб замбуруглар, кумирдан тайёрланган сорбентлар билан мутаносиб равишда микроэкологик хусусиятлари илк бор мажмуавий холда урга-нилди. Меъданинг шиллик, к,авати ва унинг ширасидаги микрофлора аэроб, анэроб ва микроаэрофил микроблар таъсирида к,андай узгариши илк бор к,иёсий даражада урганилди. HP нинг микробга царши воси-таларга сезгирлигини аник,лашнинг к,улай ва информатив усули ишлаб чи^илди (УзР нинг 2346 ракдмли патента).

Диссертация рус тилида 222 бетда чоп эталган. 27 жадвал ва 15 раем билан бойитилган. 272 адабий манбадан фойдаланилган.

RESUME

The Thesis on "Helicobacter pylory in gastroduodenal pathology: isolation, microecology and susceptibility to antimicrobic factors" made by Bajenov L.G. for the scientific Degree of Doctor of Medical Sciences in the field of Microbiology 03.00.07.

The object of the work: Development of effective system for microbiological diagnosis of helicobacteriosis and stady of microecology of the agent and its susceptibility to antimicrobic factors.

As a result of investigations effective system of microbiological detection of Helicobacter pylori (HP) in gastroduodenal diseases (GD) has been developed. Thanks to the improvement of all the stages of microbiological analisis and their racional application significant increase in isolation of HP and quantitative characteristic of material dissemination have been obtained. Frequency and intensity of gastric juice with HP in patients syffering from GD and influence of various factors (contominant flora, chronobiological factors, lysozyme content etc.) on these indices have been studied for the first time. An expediency of stady of this material for the presense of HP has been proved. For the first time complex stady of microbiological links of HP including interactions with morphological structures of gastric mucous membrane (GMM) factors of unspecific resistance, fungi of species Candida, coal sorbents has been carried out. For the first time pure cultures of HP have been isolated and their main biological properties have been studied in the Republic of Uzbekistan.

Comparative stady of microflora of GMM and gastric content was carried out for the first time. Aerobic, anaerobic and microaerophylic components and their alterations depending on chronobiologic factors have been investigated.

Assessible and informative method of detection of HP susceptibility to antibiotic has been worked out (Patent N 2346, the Republic of Uzbe-kistan).Susceptibility of isolated HP strains to a variety of antimicrobic factors (antimicrobic and therapeutic preparations, eubiotics, laser irradiation, moderate hyperthermia, electroactivated aqueous solurions). Obtained data permitted to offer a promising ways of prophylaxis and treatment of helicobacteriosis (Patent N 2731, the Republic of Uzbekistan).

The thesis has been written in Russian, it is presented of 222 pages of typescript, it is illustrated with 27 tables and 15 figures. Bibliography includes 272 scientific publications.