Особенности штаммов Helicobacter pylori, циркулирующих в Ростовской области, и конструирование антигенного полимерного хеликобактерного диагностикума

Березняк, Елена Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Особенности штаммов Helicobacter pylori, циркулирующих в Ростовской области, и конструирование антигенного полимерного хеликобактерного диагностикума
ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Особенности штаммов Helicobacter pylori, циркулирующих в Ростовской области, и конструирование антигенного полимерного хеликобактерного диагностикума"

На правах рукописи ¿>

□□34а1зо1

БЕРЕЗНЯК

ЕЛЕНА АЛЕКСАНДРОВНА

ОСОБЕННОСТИ ШТАММОВ HELICOBACTER PYLORI,

ЦИРКУЛИРУЮЩИХ В РОСТОВСКОЙ ОБЛАСТИ, И КОНСТРУИРОВАНИЕ АНТИГЕННОГО ПОЛИМЕРНОГО ХЕЛИКОБАКТЕРНОГО ДИАГНОСТИКУМА

03.02.03 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

18 фев ?т

Ставрополь - 2010

003491961

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении здравоохранения «Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

Научный руководитель: доктор медицинских наук

Терентьев Александр Николаевич.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, доцент

Жарникова Ирина Викторовна;

доктор медицинских наук Харсеева Галина Георгиевна.

Ведущая организация: ФГУН «Государственный научный центр при-

кладной микробиологии и биотехнологии».

Защита диссертации состоится « » 2010 г. в /у часов

на заседании диссертационного совета ДМ ^12.256.09 в Ставропольском государственном университете по адресу: 355009, г. Ставрополь, ул. Пушкина, д. 1, корп. 2, комн. 506.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ставропольского государственного университета

Автореферат разослан (с° » 20Ю г.

Ученый секретарь I 1 (7) X

диссертационного совета [/' И.В. Ржепаковский

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Бактерия Helicobacter pylori сегодня является одной из наиболее изучаемых бактерий в мире. Примерно 60% населения земного шара инфицировано Я pylori (Кишкун А.А., 2002). Инфицированность взрослого населения России колеблется от 50 до 80%, а в некоторых регионах она приближается к 100% (Григорьев П.Я., с соавт, 1999; Пасечников В.Д. с соавт., 2001; Решетников О.В. с соавт., 2004; Ивашкин В.Т. с соавт., 2005). Я. pylori не является облигатным патогеном, для большинства инфицированных характерно бессимптомное носительство. Вместе с тем, эпидемиологические данные, полученные в различных странах, свидетельствуют о том, что практически 100% язв двенадцатиперстной кишки и более 80% язв желудка связаны с персистированием Н. pylori (Маев И.В. с соавт., 2006). Сегодня доказано, что инфекция Я. pylori является важнейшим этиопатогенетическим фактором не только язвенной болезни, но и хронического гастрита, ассоциированного с Н. pylori в 75-92% случаев, гастродуоденита, MALT-лимфомы и рака желудка (Аруин ЛИ.,1999; Исаков В.А. с соавт., 2003; Маев И.В. с соавт., 2006; Howden C.W., 1996; Kusters J.G. et al., 2006). В последние годы установлена связь этой инфекции и с рядом не гастроэнтерологических заболеваний (Бардахчьян Э.А. с соавт., 2005; Корниенко Е.А., 2009).

Я. pylori имеет широкий набор генетических факторов, которые обеспечивают ему способность адаптироваться и выживать в кислой среде, колонизируя слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки, и вызывать заболевание (Шкитин В.А. с соавт., 2002; Kusters J.G. et al., 2006). Основными среди них являются ферменты адаптации, цитотоксин ассоциированный белок CagA, вакуолизирующий цитотоксин VacA, белки, кодируемые генами iceA и ЬаЬА, внешние мембранные протеины. Определение факторов патогенности штаммов Н. pylori, выделенных от пациентов, проживающих в различных регионах России, расценивается как одна из определяющих составляющих в эпидемиологии и лечении Я. ду/оп-инфекции (Говорун В.М. с соавт., 2002; Кудрявцева JLB. с соавт., 2004; Пасечников В.Д. с соавт., 2005; Федоренко С.В., 2006; Абузарова Э.Р.,2008).

Современное лечение больных с хеликобактер-ассоциированными заболеваниями предусматривает проведение антихеликобактерной терапии, которая, как правило, осуществляется без определения чувствительности Я. pylori к антибактериальным средствам. Однако Маастрихтское соглашение-3, основной рекомендательный документ по диагностике и лечению заболеваний, ассоциированных с инфекцией Я. pylori, предполагает эмпирическое применение антибактериальных препаратов для терапии различных линий лишь при определенном, известном уровне резистентности Я. pylori к этим средствам в данном регионе или в данной популяции пациентов (Malfertheiner P. et al., 2005), что позволяет достаточно точно прогнозировать эффект терапии. В связи с этим актуальным является определение текущего состояния региональной антибиоти-корезистентности Я. pylori для выбора адекватной стартовой антибактериальной терапии (Boyanova L., 2009).

Диагностика хеликобактер-ассоциированных заболеваний осуществляется с помощью многих лабораторно-клинических методов исследования, их оптимальное сочетание для достоверного выявления Н. pylori остается предметом обсуждения (Кишкун A.A. с соавт., 2003; Барышникова Н.В., 2009; Megraud F. et al., 2007). Самым простым, наименее дорогим и наиболее доступным методом диагностики хеликобактериоза является серологический метод. Он также незаменим и наиболее информативен для выяснения инфицированности микроорганизмом больших групп людей при проведении эпидемиологических обследований (Malfertheiner Р. et al., 2005). В настоящее время большое внимание уделяется конструированию диагностических тест-систем на синтетических полимерных носителях для серологической диагностики (Мартынов А.И. с соавт., 2001; Станишевский Я.М., с соавт., 2006; Basinska et al, 2005). Технология конструирования антигенных и антительных полимерных препаратов для диагностики ряда инфекций в реакции агломерации объемной (РАО) была разработана в РостНИПЧИ (Наркевич А.Н. с соавт., 1988; Безуглова Е.В. с соавт., 1990; Карбышев Г.Л. с соавт., 2006; Телесманич Н.Р. с соавт., 2006; Симонова И.Р. с соавт., 2007; Веркина J1.M. с соавт., 2008). Диагностикумы на основе РАО дают возможность качественно и количественно оценивать состояние инфекционного процесса, что позволяет широко использовать их как для постановки диагноза, так и для скрининговых исследований. Отмечалось, что в ряде случаев ла-тексные тесты демонстрируют более высокую чувствительность и специфичность по сравнению с иммуно-ферментным анализом (ИФА) (Midolo P.D. et.al., 1995а). Кроме того, эти тесты являются экспрессными, они не требуют для своей постановки специального оборудования, а результат теста оценивается визуально. Широкая распространенность хеликобактериоза и наличие опасных осложнений обусловливают необходимость дальнейшего совершенствования методов диагностики заболеваний, ассоциированных с Н. pylori.

Цель работы. Охарактеризовать особенности штаммов H.pylori, циркулирующих в Ростовской области, и разработать технологию получения антигенного полимерного хеликобактерного диагностикума для экспрессного определения в реакции агломерации объемной уровня специфических антител в сыворотке крови.

Основные задачи исследования.

1. Исследовать генотипы клинических изолятов штаммов H.pylori, циркулирующих в Ростовской области, на присутствие генов патогенности cagA, vacA, iceA, babA.

2. Осуществить мониторинг уровней антибиотикорезистентности региональных штаммов H.pylori к применяемым антибактериальным средствам в период 2000-2009 гг.

3. Подобрать эффективные способы получения хеликобактерного клеточного растворимого антигена для конструирования полимерного диагностикума.

4. Провести оценку эффективности различных способов иммобилизации хеликобактерного растворимого сенситина на полимерном носителе.

5. Отработать схему получения кроличьей иммунной хеликобактерной сыворотки с высокими титрами специфических антител.

6. Провести оценку операционных характеристик и определить диагностический титр сконструированного антигенного полимерного хеликобактерно-го диагностикума.

Научная новизна. В результате проведенных исследований впервые:

- проведен анализ встречаемости генов патогенности cagA, vacA, iceA, babA и их сочетаний в штаммах H.pylori, выделенных от больных с гастродуо-денальной патологией в Ростовской области;

- получены антибиотикограммы штаммов H.pylori, выделенных от гастроэнтерологических больных. Выявлена динамика антибиотикорезистентности региональных штаммов в период с 2000г. по 2009г. Проанализированы изменения удельного веса чувствительных, моно- и полирезистентных штаммов H.pylori;

- разработана технология получения антигенного полимерного хелико-бактерного диагностикума для выявления антител в сыворотке крови пациентов с гастродуоденальной патологией.

Теоретическая и практическая значимость работы. Анализ динамики уровней антибиотикорезистентности региональных штаммов H.pylori в период с 2000 г. по 2009 г. осуществлен на 131 штамме, выделенном от гастроэнтерологических больных. Обнаружено существование в Ростовской области штаммов H.pylori, обладающих множественной устойчивостью к антибактериальным препаратам. Показано, что в настоящее время уровень региональной резистентности к кларитромицину не превышает пороговых значений (15 - 20%), определяемых Маастрихтскими рекомендациями, что позволяет эмпирически применять этот антибиотик в схемах антихеликобактерной эрадикационной терапии. Уровень первичной резистентности к метронидазолу не превышает порогового значения в 40%, но близок к нему, что требует осторожности при применении этого антибактериального препарата.

В результате проведенного типирования 33 региональных штаммов H.pylori по генам факторов патогенности (cagA, iceA, babA и аллелям ml, m2 и si, s2 гена vacA) обнаружено 19 разных генотипов. Доля высокопатогенных штаммов с генотипом vacAsl составила 85%. Инфицирование двумя и более штаммами имело место в 33% случаев.

Полученные новые факты могут быть полезны для более глубокого понимания механизмов патогенеза хеликобактер-ассоциированных заболеваний и выработки оптимальной региональной стратегии эрадикационной терапии.

При конструировании антигенного полимерного хеликобактерного диагностикума для определения специфических антител к H.pylori в сыворотке крови в РАО:

- определен способ дезинтеграции бактериальной массы референтного штамма H.pylori, обеспечивающий максимальный выход белка;

- показано, что белковый спектр растворимого антигена, полученного из бактериальной массы референтного штамма, содержит протеины, соответству-

ющие основным факторам патогенности H.pylori, что позволяет использовать этот антиген для сенсибилизации полимерных микросфер;

- отработаны условия сенсибилизации растворимого антигена на полимерном носителе;

- отработана схема иммунизации кроликов бактериальной массой H.pylori с целью получения гипериммунной хеликобактерной сыворотки для контроля аналитической чувствительности сконструированного диагностикума;

- предложен диагностический набор для определения уровня специфических антител к H.pylori в сыворотке крови, состоящий из сконструированного диагностикума и ингредиентов для постановки реакции объемной агломерации;

- составлена инструкция по изготовлению и контролю «Диагностикум хе-ликобактерный антигенный полимерный сухой для РАО», утвержденная директором РостНИПЧИ (протокол № 9 от 18.10.2001).

Диагностические характеристики сконструированного диагностикума, определенные в процессе исследования с использованием сывороток крови 224 гастроэнтерологических больных, позволяют применять его для диагностики хеликобактер-ассоциированных заболеваний и мониторинга больших групп населения с целью раннего выявления хеликобактериоза.

Результаты работы вошли в отчеты по бюджетной теме «Конструирование препаратов для диагностики хеликобактериоза у людей и идентификации возбудителя» за 2002-2005 гг. (рег.№ 01.200.2 12996.), инициативной теме «Генодиагностика Helicobacter pylori по локусам, содержащим вариабельные тан-демные повторы VNTR и по генам вирулентности» (№ 091-07), прошли апробацию на базе Ростовского областного консультативно-диагностического центра и используются при чтении лекций и проведении занятий на кафедре микробиологии и вирусологии №2 РостГМУ. Приоритетность проведенных исследований подтверждена патентами на изобретение №2308949 «Способ лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с Helicobacter pylori» и N»2324188 «Способ получения антигенного полимерного хеликобактерного диагностикума».

Основные положения, выносимые на защиту.

1. В Ростовской области циркулируют штаммы H.pylori различной генетической структуры, большинство из которых являются патогенными.

2. Анализ результатов мониторинга уровней антибиотикорезистентности региональных штаммов H.pylori в период с 2000 г. по 2009 г. дает основание эмпирически использовать кларитромицин в схемах эрадикационной терапии в соответствии с Маастрихтскими рекомендациями в настоящее время. Уровень резистентности к метронидазолу демонстрирует тенденцию к снижению, но остается близким к пороговому.

3. Сконструированный антигенный полимерный хеликобактерный РАО-диагностикум при точке разделения 1:160 обладает чувствительностью 94,9% и специфичностью 79,3%. При точке разделения 1:320 чувствительность диагностикума - 84,6%, специфичность - 86,2%.

4. Полученный диагностикум может быть использован для выявления иммунного ответа организма, свидетельствующего о хеликобактерной инфекции, и для скрининговых исследований.

Апробация работы: результаты исследования по теме диссертации были представлены на научных конференциях Ростовского-на-Дону научно-исследовательского противочумного института в 2002-2003 гг.; Международной конференции «Проблемы экологической безопасности» (Оболенск, 2000); 6-й российско-итальянской конференции «Инфекционные болезни: диагностика, лечение и профилактика» (Санкт-Петербург, 2000); научно-практической конференции «Инфекционные болезни в практике терапевта» (Харьков, 2001); Десятой и Тринадцатой Российских гастроэнтерологических неделях (Москва, 2004,

2007); 3-й Всероссийской научной конференции «Теоретические основы эпидемиологии. Современные эпидемиологические и профилактические аспекты инфекционных и массовых неинфекционных заболеваний» (Санкт-Петербург,

2008); IV съезде Российского общества биохимиков и молекулярных биологов (Новосибирск, 2008).

Публикация результатов исследования. По теме диссертации опубликованы 14 работ, в том числе одна из них в периодическом издании из перечня ведущих рецензируемых научных журналов, утвержденных ВАК Министерства образования и науки России и рекомендованных для публикации основных научных результатов диссертаций на соискание искомой ученой степени. Получены патенты РФ на изобретение № 2324188 от 10.05.2008 г., №2308949 от 19.06.2006.

План диссертационной работы утвержден на заседании Ученого совета ФГУЗ РостНИПЧИ Роспотребнадзора 8.09.2008 г. (протокол №11). Исследования выполнены в рамках плановых научных тем «Конструирование препаратов для диагностики хеликобактериоза у людей и идентификации возбудителя» за 2002-2005 гг. (per. № 01.200.2 12996.) и «Генодиагностика Helicobacter pylori по локусам, содержащим вариабельные тандемные повторы VNTR и по генам вирулентности» (№ 091-07).

Структура работы. Диссертация изложена на 156 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, пяти глав результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, включающего 332 библиографических источника, из которых 95 - отечественных, 237 - иностранных. Работа проиллюстрирована 25 таблицами и 17 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы

Штаммы: в работе использовали референтный штамм Helicobacter pylori NCTC 11637, полученный из музея живых культур РостНИПЧИ. Для определения региональной антибиотикорезистентности исследовали штаммы H.pylori, выделенные от больных с гастродуоденальной патологией, обратившихся в лечебные учреждения г. Ростова-на-Дону и Ростовской области.

Питательные среды: для транспортировки биопсийного материала на бактериологическое исследование применяли тиогликолевую среду (ФГУП «НПО Микроген» МЗ РФ). Для выделения и выращивания культур H.pylori использовали элективную питательную среду (среда элективная хеликобактерная, СЭХ) (Харабаджахян Г.Д. с соавт., 1999; Шелохович А.И., 2000). Посевы помещали в анаэростат, который заполняли газовой смесью: 025-6%, СОг - 8-10%, N3 -до 80-85% при температуре 37° С. При получении колоний по морфологии сходных с H.pylori, проводили их идентификацию, которая включала в себя окраску мазка по Граму и три биохимических теста -уреазный, каталазный и оксидазный.

Определение чувствительности H.pylori к антибактериальным препаратам: определение антибиотикорезистентности проводили на Колумбийском агаре (Columbia Blood Agar Base, Himedia) с использованием диско-диффузионного метода. Для определения диаметров зон задержки роста диско-диффузионным методом использовали коммерческие дики со стандартными концентрациями следующих АБП: амоксициллин, ампициллин, метронидазол, кларитромицин, азитромицин, рокситромицин, эритромицин, тетрациклин, фуразолидон, ципрофлоксацин. Критерии оценки результатов определения чувствительности (резистентности) штаммов H.pylori, выделенных от больных, в настоящей работе, были следующими: метронидазол - зона задержки роста меньше или равная 16 мм - резистентный штамм, больше 16 мм

- чувствительный; для остальных антибактериальных препаратов: зона задержки роста меньше или равная 30 мм - резистентный штамм, больше 30 мм

- чувствительный штамм (Boyanova L. et al., 2000; McNulty С. et al., 2002; MishraK. K. et al., 2006).

Молекулярно-генетические методы: Анализ выделенных штаммов на присутствие генов cagA, vacA, iceA и ЪаЪА осуществляли методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Серологические методы: В качестве референтных применяли коммерческие тест-системы для ИФА диагностики хеликобактериоза - тест-систему «ХеликоБест-антитела» производства ЗАО «Вектор-Бест» и тест-системы «ЭКОлаб-Хеликобактер JgA» и «ЭКОлаб-Хеликобактер JgG».

Статистическую обработку результатов осуществляли с помощью стандартных средств программы «Microsoft Office Excel». Статистическую значимость различий долей резистентных штаммов оценивали с помощью модуля «Basic statistics/Difference tests» программы «Statistica 6.0». Оценку эффективности сконструированного РАО диагностикума осуществляли на основе четырехпольных таблиц с использованием общепринятых операционных показателей диагностического теста (Флетчер Р. с соавт., 1998; Власов В.В., 2001).

Результаты исследований и их обсуждение

Особенности генотипов штаммов H.pylori, циркулирующих в Ростовской области. В настоящей работе исследованы генотипические особенности штаммов H.pylori, циркулирующих в Ростовской области. Объектом изуче-

ния были штаммы, полученные от 33 пациентов в возрасте от 13 до 69 лет. Диагноз (язвенная болезнь желудка или двенадцатиперстной кишки, хронический гастрит) был поставлен врачом-гастроэнтерологом на основании результатов дыхательного теста и гастродуоденоскопии, в процессе которой производилось взятие биоптата слизистой оболочки желудка.

Полученные культуры были проанализированы методом ПЦР на присутствие генов cagA, vac А (аллельные типы vacAsl и vacAs2 и аллельные типы vacAml и vacAm2), iceA (аллельные типы iceAl и iceA2) и ЬаЬА. В группе обследованных пациентов было обнаружено 19 разных генотипов Н. pylori. Доля пациентов, от которых были выделены cagA-позитивные штаммы, составляет 81,8±13,4%. Ген vacA встречался у всех исследованных штаммов. Доля пациентов с vacAsl штаммами составила 84,8±12,7%, vacAs2 штаммами - 21,2% ±14,5%. Частота обнаружения штаммов с генотипом vacAml составила 51,5±17,7%, генотип vacAm2 встречался в 66,7±16,7% случаев. Двадцать два штамма (66,7±16,7%), были iceAl позитивными, семнадцать (51,5±17,7%) -iceA2 позитивными. babA-положительный генотип выявлен у 17 штаммов (51,5±17,7%). При оценке степени патогенности штаммов Н. pylori существенными являются различия по vacA-генотипу. Высокопатогенными являются штаммы с генотипом vacAsl/ml или vacAsl/m2, как cagA-позитивные, так и cagA-негативные, тогда как vacA s2m2/cagA-ncraTvmHbie штаммы можно рассматривать как низкопатогенные, ассоциируемые с умеренной гастритной гистопатологией (Atherton J.C. et al., 1997; Guruge J.L. et al., 1998). В настоящем исследовании высокопатогенные штаммы были обнаружены в 85% случаев.

У 27 больных были зарегистрированы cagA-позитивные штаммы, из них инфицирование штаммом с генотипом cagA vacAsl имело место в 25 случаях. Генотип cagAvacAslml наблюдался у 17 больных (51,5%). У десяти пациентов из этой группы обнаружено инфицирование несколькими штаммами H.pylori. У одного пациента смешанный по vacA гену генотип обнаружен при инфицировании cagA-негативными штаммами. Таким образом, у 11 (33,3%) пациентов выявлены смешанные генотипы, свидетельствующие об инфицировании более чем одним штаммом H.pylori. В отдельных регионах России показатель инфицированное™ населения H.pylori достигает 90-100%, при этом смешанные генотипы встречаются в 30-40% случаев. Отмечается, что риск коинфекции смешанными штаммами может быть выше в регионах с высоким уровнем инфицирования населения H.pylori (Говорун В.М. с соавт., 2002). Высокая частота обнаружения смешанных генотипов H.pylori в Ростовской области позволяет предположить и высокий показатель инфицированности населения. Это согласуется с данными о том, что общая заболеваемость органов пищеварения в Ростовской области несколько выше, чем в среднем по России (Ткачев A.B., 2004).

Сравнительный анализ результатов, полученных нами для ростовского региона, с данными по другим регионам Российской Федерации (Говорун В.М. с соавт., 2002; Абузарова Э.Р., 2008) показывает, что имеются некоторые географические особенности в распределении генотипов H.pylori. Так, генотип vacAsl в центральном регионе РФ встречается в 100% клинических изолятов

H.pylori, в Казани - в 77% случаев. В нашем исследовании этот генотип был обнаружен у 84,8% штаммов. Частота встречаемости vacAml-генотипа варьирует от 20% в Казани до 33% в Красноярске и Уфе. В нашем исследовании доля штаммов с этим генотипом была несколько выше и составила 51,5%, причем все указанные штаммы были позитивными по sl региону. Полученные к настоящему времени сведения о частоте встречаемости cagA-негативных штаммов по регионам РФ неоднозначны. Так, по данным одних авторов cagA-негатив-ные штаммы не были обнаружены ни в одном из исследованных регионов РФ (Говорун В.М. с соавт., 2002), по данным других авторов такие штаммы обнаружены у 35% клинических изолятов (Абузарова Э.Р., 2008). В ростовском регионе cagA-негативные штаммы были выявлены нами в 18,2% случаев. Генотип iceAl варьирует в регионах России от 46% в Москве до 100% в Красноярске и Уфе (в Казани - 60%). В ростовском регионе доля таких штаммов составила 66,7%. Штаммы с генотипом iceA2 ранее не были выделены в исследованиях по РФ, в настоящей работе штаммы с таким генотипом были обнаружены в 17 случаях (51,5%), причем только у пяти обследуемых имело место инфицирование штаммами с генотипом, содержащим только iceA2 аллель, в 12 случаях имело место инфицирование смешанными штаммами по iceA гену. Генотип ЬаЬА2 был обнаружен нами у 51,5% клинических изолятов H.pylori в Ростовской области, данные по РФ составляют для Уфы и Казани - 33%, Красноярска - 100%. Таким образом, полученные нами результаты показывают, что в Ростовской области циркулируют штаммы различной генетической структуры, большинство из которых (85%) являются высокопатогенными. Следует также отметить, что достаточно часто, в 33% случаев, пациент оказывается инфицированным несколькими штаммами Я. pylori.

Динамика антибиотикорезистентности региональных штаммов H.pylori. В настоящей работе определение уровней резистентности штаммов H.pylori, циркулирующих в Ростовской области, к антибактериальным препаратам (АБП) осуществлялось в период с 2000 г. по 2009 г. В течение этого времени был исследован 131 штамм (31 - в 2000 г., 29 - в 2002/3 гг., 35 - в 2005/6 гг., 36 - в 2008/9 гг.), полученный в результате культивирования биоптатов слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки больных с заболеваниями пищеварительного тракта. Динамика уровней резистентности штаммов H.pylori, выделенных от больных Ростовской области к АБП в период 2000-2009 гг., показана в таблице 1. Особый интерес представляет динамика резистентности штаммов H.pylori к препаратам, используемых в стандартных схемах эрадикационной терапии: амоксициллину, кларитромицину и метронидазо-лу (рис. 1).

Как видно из таблицы 1 и графиков на рисунке 1, в 2000 г. доля штаммов, резистентных к кларитромицину, составила 3%, тогда как к 2002-2003 гг. она возросла до 41% (р = 0,0007). В дальнейшем к 2005-2006 гг. доля таких штаммов уменьшилась от 41% до 21% (р = 0,0899), а к 2008-2009 гг. - от 21% до 8% (р = 0,1253). В России уровни резистентности штаммов H.pylori к кларитромицину определяли в Москве, Санкт-Петербурге и Абакане (Кудрявцева Л.В. с соавт., 2004). В Абакане резистентные к кларитромицину штаммы H.pylori не

были обнаружены, а уровни резистентности в Москве и Санкт-Петербурге составили 13,8% и 13,3% соответственно. В настоящем исследовании точечная оценка уровня резистентности к кларитромицину в 2008-2009 гг. составила 8%, при том, что интервальная оценка была в пределах 0-17% (р < 0,05). Таким образом, полученные результаты согласуются с данными о том, что в настоящее время в регионах России уровень резистентности к кларитромицину составляет менее 20% (Лапина Т.Л., 2006; Самсонов A.A., 2008). Таблица 1 - Динамика уровней резистентности региональных штаммов

АБП У ровень резистентности, %

2000 г. 2002/3 гг. 2005/6 гг. 2008/9 гг.

амоксициллин 0 3 3 3

ампициллин 6 32 21 -

азитромиция - 4 20 3

кларитромицин 3 41 21 8

ципрофлоксацин - 20 23 19

рокситромицин - 16 6 3

тетрациклин 0 7 3 0

метронидазол 26 54 51 36

эритромицин - 8 17 0

фуразолидон 0 8 6 0

60% 50%

' к

30% 20% 10% 0%

4 W N

f ----Л

2000 2002/2003 2005/2006 2008/2009

|—АХС — -CLR—MTR]

Рисунок 1 - Динамика резистентности штаммов к амоксициллину, кларитромицину и метронидазолу

Штаммы, резистентные к амоксициллину, нами в 2000 г. зарегистрированы не были. Среди культур, выделенных в последующие годы, доля таких штаммов в Ростовской области составляла 3%. Низкие уровни резистентности Н.ру1оп к амоксициллину отмечаются также в исследованиях, выполненных как в России, так и в других странах Европы (Мегро Ф., 2002; Кудрявцева Л.В. с соавт., 2004).

Уровень резистентности к метронидазолу среди штаммов Н.ру1оп, выделенных нами от больных в Ростовской области, в 2000 г. составил 26%, а к 2002 - 2003 гг. увеличился до 54% (р =0,0320). В 2005 - 2006 гг. наблюдалось небольшое снижение доли таких штаммов до 51%, а в 2008-2009 гг. - до 36%.

При том, что достоверность различия долей резистентных штаммов в 2002-2003 гг. и 2008-2009 гг. оказывается относительно небольшой (р = 0,1550), прослеживается общая тенденция к снижению уровня резистентности к метронидазо-лу. По состоянию на 2004 г. резистентность H.pylori к метронидазолу в среднем по Росссии в 2,2 раза превышала среднеевропейский уровень, который в это время составлял 25,5% (Кудрявцева JI.B. и соавт., 2004). Данные о текущих уровнях резистентности штаммов H.pylori к метронидазолу в регионах России в доступной литературе отсутствуют.

Можно отметить, что тенденция к увеличению уровней резистентности в 2002 - 2006 гг. с постепенным их уменьшением к 2008-2009 гг. наблюдается и для остальных АБП, на чувствительность к которым были протестированы выделенные штаммы H.pylori.

Временная динамика удельного веса чувствительных, моно- и полирезистентных штаммов H.pylori, выделенных в разные годы, показана в таблице 2.

Таблица 2 - Удельный вес чувствительных, моно- и полирезистентных штаммов H.pylori, выделенных в период 2000-2008 гг. в Ростовской области

Штаммы 2000 г., абс. 2002/3 гг., абс. 2005/6 гг., 2008/9 гг.,

(%) (%) абс.(%) абс.(%)

Чувствительные 20 (64,5%) 6 (20,7%) 10(28,6%) 18(50%)

Монорезистентные 11 (34,5%) 8 (27,6%) 9 (25,7%) 10(27,8%)

Полирезистентные 0 15(51,7%) 16(45,7%) 8 (22,2%)

Обращает на себя внимание появление штаммов Н.ру1оп, обладающих множественной устойчивостью к АБП в период 2002-2006 гг. на фоне одновременного уменьшения доли чувствительных штаммов, при том, что частота встречаемости монорезистентных штаммов оставалась практически постоянной. В дальнейшем, к 2008-2009 гг., как видно из таблицы 2, удельный вес полирезистентных штаммов Н.ру1оп в Ростовской области уменьшается, практически, в 2 раза с 45,7% до 22,2 % (р = 0,0400) при одновременном увеличении доли чувствительных штаммов.

В заключение отметим, что в настоящее время уровень резистентности к кларитромицину не превышает пороговых значений в 15-20%, определяемых Маастрихтскими рекомендациями, что позволяет эмпирически применять этот антибиотик в схемах антихеликобактерной эрадикационной терапии. Точечная оценка уровня первичной резистентности к метронидазолу составляет 36%, не превышая порогового уровня в 40%, при этом интервальная оценка находится в пределах 20-52% (р < 0,05). Это обстоятельство следует учитывать при применении этого антибактериального препарата в ростовском регионе.

Конструирование антигенного полимерного хеликобактерного диа-гностикума. Одна из задач настоящего исследования заключалась в разработке технологии получения латексного антигенного хеликобактерного диагностику-ма и оценке его диагностических свойств. Схема получения антигенного полимерного хеликобактерного диагностикума для определения антител к возбуди-

телю Н.pylori в сыворотке крови людей включала в себя следующие основные этапы: выращивание бактериальной массы референтного штамма Н.pylori, используемой в дальнейшем для получения как растворимого антигена, так и специфической кроличьей сыворотки, применяемой в качестве положительного контроля; контроль качества растворимого антигена; иммобилизацию сенсити-на на полимерных микросферах; лиофилизацию полученных диагностикума и сыворотки. Полимерный носитель был получен методом анионной полимеризации акролеина в водно-щелочной среде в соответствии с Регламентом производства № 978-00 от 20.06.2000 (Наркевич А.Н. с соавт., 2000). Оптимальным вариантом получения растворимого антигена было использование ультразвуковой дезинтеграции бактериальной массы в сочетании с обработкой суспензии 1% раствором натрия дезоксихолата (УЗ-ДОХ), что приводило к увеличению выхода белка. В полученных при таком способе разрушения растворимом антигене концентрация белка варьировала от 0,77 до 2,05 мг/мл. Было установлено, что оптимальным для конструирования диагностикума является использование 0,1 М карбонатного буферного раствора pH 9,2. Сенсибилизирующая доза составила 200 мкг/мл. Исследование белкового спектра растворимого хе-ликобактерного антигенного комплекса методом диск-электрофореза в полиа-криламидном геле в присутствии 0,1% додецилсульфата натрия показало, что в нем присутствуют белки, молекулярные массы которых соответствуют молекулярным массам белков, наиболее часто рассматриваемых в качестве основных антигенов Н. pylori.

Аналитическую чувствительность сконструированного диагностикума проверяли в РАО микрометодом на трех сериях контрольной хеликобактерной кроличьей сыворотки (серии № 2, № 8, № 312), а также на трех сериях коммерческой контрольной положительной хеликобактерной сыворотки (серии №116, № 153, № 01). Аналитическая чувствительность диагностикума с позитивными экспериментальными кроличьими хеликобактерными сыворотками составляла 1:640 (серия № 2, № 312), 1:1280 (серия № 8), с коммерческими - 1:640 (серии № 116, № 153, № 01). Специфичность положительного результата, получаемого при взаимодействии диагностикума с контрольными хеликобактерными сыворотками, была подтверждена реакцией торможения агломерации.

Исследование аналитической специфичности диагностикума -способности обнаруживать только искомые антитела - проводили на панели гетерологичных гипериммунных коммерческих и экспериментальных кроличьих сывороток различных серий. Для этого были отобраны гипериммунные кроличьи сыворотки против возбудителей, ассоциированных с группой кишечных инфекций: кампилобактериозная Laridis, кампилобактериозная Jejuni, лептоспирозная групповая, эшерихиозная групповая, эшерихиозная поливалентная, холерная Эль-Тор 1316, холерная Эль-Тор 12214, шигеллезная, сальмонеллезная, псевдотуберкулезная, кишечно-иерсиниозная поливалентная, листериозная.

На рисунке 2 показаны результаты РАО, полученные при взаимодействии диагностикума с контрольной позитивной хеликобактерной сывороткой

(первый ряд планшета). Положительная специфическая реакция прослеживается вплоть до разведения 1:1280. Последние две лунки этого ряда демонстрируют четкий отрицательный контроль серологической реакции в виде точки. В нижней части планшета представлено взаимодействие РАО-диагностикума с гетерологичными сыворотками. Только с кампилобактерными сыворотками (С. laridis, С. jejuni) имела место перекрестная реакция в разведении 1:40 (первые две лунки третьего и четвертого рядов), с остальными гетерологичными сыворотками диагностикум не взаимодействовал, что является подтверждением высокой аналитической специфичности антигенного полимерного хеликобактерного диагностикума.

Чувствительность

Н. pylori

С. laridis C.jejuni

Лептоспи■ розная

Эшерихиоэная

групповая

Эшерихиозная

поливалентная

Холерная

Эль-Тор 1316

r>OOOC>CX<XXXXi

. „ ... Ä-f^AA-/---'- ..... ,.,

Контроль диагностикум

Холерная Эль-Тор 12214 Шигеллезная

Сальмонел-мзная

вр-кулезная Кишечно-иерсиниозная Листериозная

Специфичность

Рисунок 2 - Аналитические характеристики антигенного полимерного хеликобактерного РАО-диагностикума

Исследование диагностических операционных характеристик сконструированного антигенного полимерного хеликобактерного диагностикума. Сконструированный нами диагностикум предназначен для определения антител к Н.pylori в сыворотке крови, поэтому для оценки его диагностической эффективности в качестве референтного был выбран другой серологический метод. На первом этапе исследования были проанализированы сыворотки крови 142 гастроэнтерологических больных. Каждую сыворотку тестировали двумя методами (РАО-диагностикум и ИФА-тест-система «ХеликоБест-антите-ла» производства ЗАО «Вектор-Бест»). Поскольку РАО-диагностикум демонстрировал неспецифическую перекрестную реакцию с кампилобактерными сыворотками в титре 1:40, нами в качестве первой точки разделения было выбрано значение титра в РАО 1:80, в два раза превышающего верхнюю границу перекрестных реакций. Диагностические характеристики диагностикума, полученные для четырех точек разделения при использовании ИФА-тест-системы «ХеликоБест-антитела» в качестве референтной, приведены в таблице 3.

Таблица 3 - Диагностические операционные характеристики диагностикума

№ п/п Точка Диагностическая Диагностическая Точность,

(номер точки разделения чувствительность, специфичность, % %

разделения) %

1 1:80 94,8 30,8 65,5

2 1:160 90,9 80,5 85,2

3 1:320 80,5 84,6 82,4

4 1:640 51,9 93,8 71,1

Графики чувствительности, специфичности и точности диагностикума в зависимости от точки разделения представлены на рисунке 3.

100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 О

Рисунок 3 - Диагностические характеристики РАО-диагностикума

Как видно из графиков рисунка 3 оптимальные соотношения между чувствительностью, специфичностью и точностью РАО-диагностикума имеют место при точках разделения 1:160 и 1:320.

По нашим данным около 18% штаммов, циркулирующих в ростовском регионе, являются cagA-негативными. Поэтому на следующем этапе исследования в качестве референтных нами были взяты результаты, полученные при одновременном тестировании образцов сывороток крови с помощью тест-систем ИФА: «ЭКОлаб-Хеликобактер-IgA» и «ЭКОлаб-Хеликобактер-IgG», определяющих соответственно иммуноглобулины А и G к суммарным антигенам Н. pylori, и «ХеликоБест-антитела», способной определять специфические иммуноглобулины к антигену CagA Н. pylori. Такой подход позволил включить в группу сравнения и пациентов, инфицированных cagA-негативными штаммами. Материалом для исследования явились сыворотки крови 82 человек. Результат метода сравнения считался положительным, если положительными были одновременно результаты теста «ХеликоБест-антитела» и, по крайней мере, одного из указанных тестов «ЭКОлаб». Отрицательным результат метода сравнения считался при одновременных отрицательных результатах всех трех референтных тестов. Всего оказалось возможным провести сравнение для 68 образцов сывороток крови, для которых результаты реферетного метода были

однозначными. Диагностические операционные характеристики сконструированного антигенного полимерного хеликобактерного РАО-диагностикума для двух, представляющих интерес, точек разделения, приведены в таблице 4. Как видно из табл.4 для точки разделения 1:160 точность теста оказывается выше, прогностическая ценность положительного результата всего лишь на 3% ниже, а прогностическая ценность отрицательного результата на 11,5% выше, чем для точки разделения 1:320. С учетом вышесказанного представляется целесообразным предложить точку разделения 1:160 в качестве диагностического порога для сконструированного РАО-диагностикума.

Таблица 4 - Диагностические операционные характеристики

РАО- диагностикума

Операционная характеристика Точка разделения 1:160 Точка разделения 1:320

Чувствительность 94,9% 84,6%

Специфичность 79,3% 86,2%

Точность 88,2% 85,3%

Прогностическая ценность положительного результата 86,0% 89,2%

Прогностическая ценность отрицательного результата 92,0% 80,6%

Таким образом, проведенный анализ показывает, что сконструированный нами РАО-диагностикум является достаточно чувствительным, чтобы обнаружить большинство случаев заболевания, достаточно специфичным, чтобы не давать слишком много ложноположительных результатов, недорогим и простым в использовании. Это дает основания надеяться, что антигенный полимерный хеликобактерный РАО-диагностикум может занять свое место в ряду других серологических методов диагностики хеликобактериоза.

ВЫВОДЫ

1. Высокопатогенные штаммы Н.ру1оп с генотипом уасАз1/ш1 (или уасА51/ш2), как са§-позитивные, так и cag-нeгaтивныe обнаружены у 85% обследованных пациентов из г.Ростова-на-Дону и Ростовской области.

2. Смешанные генотипы, свидетельствующие об инфицировании более чем одним штаммом Н.ру1оп, выявлены у 33% обследованных.

3. Проведенный мониторинг антибиотикорезистентности региональных штаммов Н.ру1оп выявил изменения ее уровней в течение 2000-2009 гг. В 2008-2009 гг. уровень резистентности к кларитромицину составил 8%, к метро-нидазолу - 36%, что, в соответствии с Маастрихтскими рекомендациями, позволяет в настоящее время использовать эти антибактериальные препараты для эрадикационной терапии.

4. Разработана технология получения растворимого антигена Н.ру1оп, который может быть использован в качестве сенситина для конструирования антигенного диагностикума.

5. Сконструирован высоко специфичный антигенный полимерный хели-кобактерный РАО-диагностикум с аналитической чувствительностью 1:6401:1280.

6. Исследованы диагностические характеристики сконструированного диагностикума. При точке разделения 1:160 чувствительность диагностикума составляет 94,9%, специфичность - 79,3%, диагностическая эффективность -88,2%, что позволяет выбрать эту точку разделения в качестве диагностического титра.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для прогнозирования эффекта антихеликобактерной эрадикационной терапии в Ростовской области представляется целесообразным осуществление систематического мониторинга уровней резистентности региональных штаммов Н. pylori к АБП. Особое внимание следует обратить на состояние резистентности к метронидазолу, уровень которой в настоящее время близок к пороговому.

2. Для серологической диагностики хеликобактериоза в лабораторно-кли-нической практике и при скрининговых исследованиях может быть рекомендован антигенный полимерный хеликобактерный РАО-диагностикум, позволяющий экспрессно определять антитела к Н. pylori в сыворотке крови пациентов.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Березняк, Е.А. Разработка полимерного антигенного препарата для серологической диагностики Helicobacter pylori / Е.А. Березняк, Л.В. Ларионова, Г.Л. Карбышев, А.Н. Терентьев, А.И. Шелохович, Л.М. Веркина, А.Н. Наркевич // Международная конференция «Проблемы экологической безопасности». -Оболенск, 2000.-С. 163-164.

2. Березняк, Е.А. Серологическая диагностика Helicobacter pylori- инфекции с использованием латексного антигенного препарата / Е.А. Березняк, Г.Л. Карбышев, А.Н. Терентьев, Л.М. Веркина, А.Н. Наркевич // М-лы 6-й российско-итальянской конференции «Инфекционные болезни: диагностика, лечение и профилактика». - СПб., 2000. - С. 32.

3. Березняк, Е.А. Перспективы серологической диагностики хеликобак-терной инфекции / Е.А. Березняк, Л.В. Ларионова, Г.Л. Карбышев, А.Н. Терентьев // Материалы научно-практической конференции «Инфекционные болезни в практике терапевта». -Харьков, 2001. - С. 121-123.

4. Карбышев, Г.Л. Возможности инструментального пути передачи хели-кобактерной инфекции / Г.Л. Карбышев, А.Н. Терентьев, Т.М. Арзамасцева, Е.А. Березняк, Н.В. Сытник, И.Л. Егоренкова // Региональные проблемы гигиены окружающей среды и здоровья населения / Научные труды федерального научного центра гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана. - Ростов-на-Дону, 2002. - Вып. 7. -С. 192-193.

5. Карбышев, Г.Л. Сравнение двух методов серодиагностики хеликобак-терной инфекции / Г.Л. Карбышев, А.Н. Терентьев, Е.А. Березняк, С.А. Гаври-

нев, Н.А. Тимченко И Новости «Вектор-Бест». Информационный бюллетень. -2003. - № 1 (27). - С. 11-13.

6. Тимченко, Н.А. Эффективность антихеликобактерной терапии второй линии у больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки / Н.А. Тимченко, А.В. Ткачев, Т.О. Лаптева, Л.П. Кудрявцев, Б.А. Березняк // Рос. журн. гастроэнтерол. гепатол. колопроктол / Приложение № 23: Материалы десятой Российской гастроэнтерорлогической недели. - 2004. - Т. 14. - № 5. - С. 43.

7. Березняк, Е.А. Конструирование хеликобактерного антигенного полимерного диагностикума / Е.А. Березняк, Г.Л. Карбышев, А.Н. Терентьев, В.Н. Некляев, А.Н. Наркевич // Проблемы особо опасных инфекций - Саратов, 2005. -Вып. 2 (90).-С. 52-55.

8. Тимченко, Н.А. Оценка фармакоэкономической эффективности антиге-ликобактерной терапии 2 и 3 ряда язвенной болезни 12-перстной кишки / Н.А. Тимченко, А.В. Ткачев, Н.Л. Аванян, Н.К. Арутюнова, Т.О. Холодная, Л.П. Кудрявцев, Е.А. Березняк, Г.В. Шавкута // Известия высших учебных заведений. Северо-Кавказский регион. Гастроэнтерология Юга России. Естественные науки. Спецвыпуск. - 2005. - С. 56-58.

9. Наркевич, А.Н. Лабораторная диагностика инфекционных заболеваний с использованием иммуносуспензионных реакций / А.Н. Наркевич, Л.М. Верки-на, Г.Л. Карбышев, Е.В. Безуглова, А.П. Кочеткова, И.Р. Симонова, Е.А. Березняк, Л.В. Ларионова, Л.К. Лысова, Е.Ю. Люкшина, Г.Г. Шубин // Обмен веществ при адаптации и повреждении: Тр. VI Межвуз. конф. с междунар. участ. - Ростов н/Д„ 2007.-С. 148-151.

10. Березняк, Е.А. Генотипирование штаммов Helicobacter pylori, циркулирующих в Ростовской области / Е.А. Березняк, В.М. Сорокин, Е.К. Гончаров, Д.И. Симакова, Л.В. Ларионова, Г.Л. Карбышев, А.Н. Терентьев // Межд. мед.-сан. правила и реализ. глобал. стратегии борьбы с инф. бол. в гос-вах-учас. СНГ. Матер. VIII Межгос. науч.-практ. конф. - Саратов, 2007. - С. 176-177

11. Патент на изобретение № 2308949 РФ. Способ лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с Helicobacter pylor. / И.И. Таранов, Г.Л. Карбышев, В.Н. Игнатов, Е.А. Березняк, В.А. Петренко, В.А. Бондаренко, Э.А. Атрощенко. - Опубл. 27.10.2007. - Бюл. № 30.

12. Березняк, Е.А. Способ получения диагностикума хеликобактерного антигенного полимерного / Е.А. Березняк, А.Н. Наркевич, Е.В. Безуглова, Г.Л. Карбышев, А.Н. Терентьев // 3-я Всероссийская научная конференция, посвященная 210-й годовщине основания ВМА «Теоретические основы эпидемиологии. Современные эпидемиологические и профилактические аспекты инфекционных и массовых неинфекционных заболеваний». - СПб, 2008. - 4.1. - С. 219.

13. Патент на изобретение № 2324188 РФ. Способ получения диагностикума хеликобактерного антигенного полимерного / Е.А. Березняк, А.Н. Наркевич, Е.В. Безуглова, Г.Л. Карбышев, А.Н. Терентьев. - Опубл. 10.05.2008. -Бюл. № 13.

14. Сорокин, В.М. VNTR генотипирование Helicobacter pylori / В.М. Сорокин, Р.В. Писанов, Е.А. Березняк // IV съезд Рос. общества биохимиков и молекулярных биологов. - Новосибирск, 2008. - С. 509.

Подписано в печать 28.01.10. Формат 60x84/16. Бумага офсетная. Печать цифровая. Объем 1,0 печ.л. Тираж 150. Заказ № 29/01.

Отпечатано в типографии ООО "Диапазон-Плюс" 344011, г. Ростов - на - Дону, ул. Островского, 124 Лиц. ПЛД № 65-116 от 290.09.1997 г.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Березняк, Елена Александровна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Микробиологическая характеристика Helicobacter pylori.

1.2. Распространенность и пути передачи инфекции Н. pylori.

1.3. Факторы вирулентности и патогенности Н. pylori.

1.4. Резистентность Н. pylori к антибактериальным препаратам

1.4.1. Антибактериальные препараты, используемые для эрадикации Н. pylori.

1.4.2. Распространенность резистентности Н. pylori к антибактериальным препаратам.

1.5. Диагностика хеликобактериоза.

1.6. Реакция агломерации объемной.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Бактериологические методы.

2.1.1.Штамм ы.

2.1.2. Питательные среды.

2.1.3. Выделение Н. pylori из биоптатов.

2.1.4. Определение чувствительности Н. pylori к антибактериальным препаратам.

2.1.5. Учет результатов определения антибиотикорезистентности.

2.2. Молекулярно-генетические методы.

2.3. Биохимические методы.

2.3.1. Биохимическое типирование выделенных

Штаммов Н. pylori.

2.3.2. Получение растворимого хеликобактерного антигена из бактериальной массы.

2.4. Серологические методы.

2.4.1. Иммуноферментный анализ.

2.4.2. Получение хеликобактерной кроличьей сыворотки.

2.5. Постановка реакции агломерации объемной.

2.6. Оценка аналитических операционных характеристик диагностикума.

2.7. Статистическая обработка результатов и оценка диагностических операционных характеристик сконструированного антигенного полимерного хеликобактерного диагностикума.

ГЛАВА 3. ОСОБЕННОСТИ ГЕНОТИПОВ ШТАММОВ Я PYLORI, ЦИРКУЛИРУЮЩИХ В г.РОСТОВЕ-НА-ДОНУ И РОСТОВСКОЙ ОБЛАСТИ.

ГЛАВА 4. МОНИТОРИНГ УРОВНЕЙ АНТИБИОТИКОРЕЗИСТЕНТ

НОСТИ РЕГИОНАЛЬНЫХ ШТАММОВ Н. PYLORI.

ГЛАВА 5. КОНСТРУИРОВАНИЕ АНТИГЕННОГО ПОЛИМЕРНОГО ХЕЛИКОБАКТЕРНОГО ДИАГНОСТИКУМА.

5.1. Получение полимерного носителя.

5.2. Получение растворимого хеликобактерного антигена.

5.3. Иммобилизация антигенного хеликобактерного комплекса на полимерном носителе.

5.4. Характеристика растворимого антигенного комплекса.

5.5. Получение экспериментальных контрольных кроличьих хеликобактерных сывороток.

5.6. Оценка аналитических характеристик антигенного полимерного хеликобактерного РАО-диагностикума.

5.7. Лиофилизация антигенного полимерного хеликобактерного РАО-диагностикума.

5.8. Технологическая схема получения антигенного полимерного хеликобактерного диагностикума и контрольных кроличьих сывороток.

ГЛАВА 6. ИССЛЕДОВАНИЕ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ОПЕРАЦИОННЫХ ХАРАКТЕРИСТИК СКОНСТРУИРОВАННОГО АНТИГЕННОГО ПОЛИМЕРНОГО ХЕЛИКОБАКТЕРНОГО ДИАГНОСТИКУМА.

6.1. Предварительная оценка эффективности диагностикума для различных точек разделения.

6.2. Определение диагностического титра.

ГЛАВА 7. ПРАКТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ СКОНСТРУИРОВАННОГО АНТИГЕННОГО ПОЛИМЕРНОГО ХЕЛИКОБАКТЕРНОГО ДИАГНОСТИКУМА.

7.1. Сравнительный анализ результатов, полученных с помощью бактериологического метода и РАО-диагностикума.

7.2. Применение РАО-диагностикума в качестве скринингового теста.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Особенности штаммов Helicobacter pylori, циркулирующих в Ростовской области, и конструирование антигенного полимерного хеликобактерного диагностикума"

Актуальность проблемы

Бактерия Helicobacter pylori сегодня является одной из наиболее изучаемых бактерий в мире. Примерно 60% населения земного шара инфицировано Н. pylori (Кишкун А.А., 2002). Инфицированность взрослого населения России колеблется от 50 до 80%, а в некоторых регионах она приближается к 100% (Григорьев П.Я., с соавт, 1999; Пасечников В.Д. с соавт., 2001; Решетников О.В. с соавт., 2004; Ивашкин В.Т. с соавт., 2005).

Н. pylori не является облигатным патогеном, для большинства инфицированных характерно бессимптомное носительство. Вместе с тем, эпидемиологические данные, полученные в различных странах, свидетельствуют о том, что практически 100% язв двенадцатиперстной кишки и более 80% язв желудка связаны с персистированием Н. pylori (Маев И.В. с соавт., 2006). Сегодня доказано, что инфекция Н. pylori является важнейшим этиопатогенети-ческим фактором не только язвенной болезни, но и хронического гастрита, ассоциированного с Н. pylori в 75-92% случаев, гастродуоденита, MALT-лимфомы и рака желудка (Аруин Л.И.,1999; Исаков В.А. с соавт., 2003; Маев И.В. с соавт., 2006; Howden C.W., 1996; Kusters J.G. et al., 2006). В последние годы установлена связь этой инфекции и с рядом не гастроэнтерологических заболеваний (Бардахчьян Э.А. с соавт., 2005; Корниенко Е.А., 2009).

Н. pylori имеет широкий набор генетических факторов, которые обеспечивают ему способность адаптироваться и выживать в кислой среде, колонизируя слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки, и вызывать заболевание (Шкитин В.А. с соавт., 2002; Kusters J.G. et al, 2006). Основными среди них являются ферменты адаптации, цитотоксин ассоциированный белок CagA, вакуолизирующий цитотоксин VacA, белки, кодируемые генами iceA и ЬаЬА, внешние мембранные протеины.

Определение факторов патогенности штаммов Н. pylori, выделенных от пациентов, проживающих в различных регионах России, расценивается'как одна из определяющих составляющих в эпидемиологии и лечении Н. pyloriинфекции (Говорун В.М. с соавт., 2002; Кудрявцева JI.B. с соавт., 2004; Пасечников В.Д. с соавт., 2005; Федоренко С.В., 2006; Абузарова Э.Р.,2008).

Современное лечение больных с хеликобактер-ассоциированными заболеваниями предусматривает проведение антихеликобактерной терапии, которая, как правило, осуществляется без определения чувствительности Н. pylori к антибактериальным средствам. Однако Маастрихтское соглашение-3, основной рекомендательный документ по диагностике и лечению заболеваний, ассоциированных с инфекцией Н. pylori, предполагает эмпирическое применение антибактериальных препаратов для терапии различных линий лишь при определенном, известном уровне резистентности Н. pylori к этим средствам в данном регионе или в данной популяции пациентов (Mal-fertheiner P. et al., 2005), что позволяет достаточно точно прогнозировать эффект терапии. В связи с этим актуальным является определение текущего состояния региональной антибиотикорезистентности Н. pylori для выбора адекватной стартовой антибактериальной терапии (Boyanova L., 2009).

В настоящее время большое внимание уделяется конструированию диагностических тест-систем на синтетических полимерных носителях для серологической диагностики (Мартынов А.И. с соавт., 2001; Станишевский Я.М., с соавт., 2006; Basinska et al, 2005). Технология конструирования антигенных и антительных полимерных препаратов для диагностики ряда инфекций в реакции агломерации объемной (РАО) была разработана в Рост

НИПЧИ (Наркевич А.Н. с соавт., 1988; Безуглова Е.В. с соавт., 1990; Карбышев Г.Л. с соавт., 2006; Телесманич Н.Р. с соавт., 2006; Симонова И.Р. с соавт., 2007; Веркина Л.М. с соавт., 2008). Диагностикумы на основе РАО дают возможность качественно и количественно оценивать состояние инфекционного процесса, что позволяет широко использовать их как для постановки диагноза, так и для скрининговых исследований. Отмечалось, что в ряде случаев латексные тесты демонстрируют более высокую чувствительность и специфичность по сравнению с иммуно-ферментным анализом (ИФА) (Mi-dolo P.D. et.al., 1995a). Кроме того, эти тесты являются экспрессными, они не требуют для своей постановки специального оборудования, а результат теста оценивается визуально.

Широкая распространенность хеликобактериоза и наличие опасных осложнений обусловливают необходимость дальнейшего совершенствования методов диагностики заболеваний, ассоциированных с Н. pylori.

Цель работы

Охарактеризовать особенности штаммов Н. pylori, циркулирующих в Ростовской области, и разработать технологию получения антигенного полимерного хеликобактерного диагностикума для экспрессного определения в реакции агломерации объемной уровня специфических антител в сыворотке крови.

Основные задачи исследования

1. Исследовать генотипы клинических изолятов штаммов Н. pylori, циркулирующих в Ростовской области, на присутствие генов патогенности cagA, vacA, iceA, babA.

2. Осуществить мониторинг уровней антибиотикорезистентности региональных штаммов Н. pylori к применяемым антибактериальным средствам в период 2000-2009 гг.

6. Провести оценку операционных характеристик и определить диагностический титр сконструированного антигенного полимерного хеликобактерного диагностикума.

Научная новизна

В результате проведенных исследований впервые:

- проведен анализ встречаемости генов патогенности cagA, vacA, iceA, babA и их сочетаний в штаммах Н. pylori, выделенных от больных с гастро-дуоденальной патологией в Ростовской области;

- получены антибиотикограммы штаммов Н. pylori, выделенных от гастроэнтерологических больных. Выявлена динамика уровней антибиотикоре-зистентности региональных штаммов в период с 2000 г. по 2009 г. Проанализированы изменения удельного веса чувствительных, моно- и полирезистентных штаммов Н. pylori;

- разработана технология получения антигенного полимерного хеликобактерного диагностикума для выявления антител в сыворотке крови пациентов с гастродуоденальной патологией.

Теоретическая и практическая значимость работы

Анализ динамики уровней антибиотикорезистентности региональных штаммов Н. pylori в период с 2000 г. по 2009 г. осуществлен на' 131 штамме, выделенном от гастроэнтерологических больных. Обнаружено существование в Ростовской области штаммов Н. pylori, обладающих множественной устойчивостью к антибактериальным препаратам. Показано, что в настоящее время уровень региональной резистентности к кларитромицину не превышает пороговых значений (15 - 20%), определяемых Маастрихтскими рекомендациями, что позволяет эмпирически применять этот антибиотик в схемах антихеликобактерной эрадикационной терапии. Уровень первичной резистентности к метронидазолу не превышает порогового значения в 40%, но близок к нему, что требует осторожности при применении этого антибактериального препарата.

В результате проведенного типирования 33 региональных штаммов Н. pylori по генам факторов патогенности (cagA, iceA, babA и аллелям ml, m2 и si, s2 гена vac А) обнаружено 19 разных генотипов. Доля высокопатогенных штаммов с генотипом vacAsl составила 85%. Инфицирование двумя и более штаммами имело место в 33% случаев.

При конструировании антигенного полимерного хеликобактерного ди-агностикума для определения специфических антител к Н. pylori в сыворотке крови в РАО:

- показано, что белковый спектр растворимого антигена, полученного из бактериальной массы референтного штамма, содержит протеины, соответствующие основным факторам патогенности Н. pylori, что позволяет использовать этот антиген для сенсибилизации полимерных микросфер;

- отработаны условия сенсибилизации растворимого антигена на полимерном носителе;

- отработана схема иммунизации кроликов бактериальной массой Н. pylori с целью получения гипериммунной хеликобактерной сыворотки для контроля аналитической чувствительности сконструированного диагности-кума;

- предложен диагностический набор для определения уровня специфических антител к Н. pylori в сыворотке крови, состоящий из сконструированного диагностикума и ингредиентов для постановки реакции объемной агломерации;

- составлена инструкция по изготовлению и контролю «Диагностикум хеликобактерный антигенный полимерный сухой для РАО», утвержденная директором РостНИПЧИ (протокол № 9 от 18.10.2001).

Результаты работы вошли в отчеты по бюджетной теме «Конструирование препаратов для диагностики хеликобактериоза у людей и идентификации возбудителя» за 2002-2005 гг. (рег.№ 01.200.2 12996.), поисковой теме «Генодиагностика Helicobacter pylori по локусам, содержащим вариабельные тандемные повторы VNTR и по генам вирулентности» (№ 091-07), прошли апробацию на базе Ростовского областного консультативно-диагностического центра и используются при чтении лекций и проведении занятий на кафедре микробиологии и вирусологии №2 РостГМУ. Приоритетность» проведенных исследований подтверждена патентами на изобретение №2308949 «Способ лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с Helicobacter pylori» и №2324188 «Способ получения антигенного полимерного хеликобактерного диагностикума».

Основные положения, выносимые на защиту

1. В Ростовской области циркулируют штаммы Н. pylori различной- генетической структуры, большинство из которых являются патогенными.

2. Анализ результатов мониторинга уровней антибиотикорезистентно-сти региональных штаммов Н, pylori в период с 2000 г. по 2009 г. дает основание эмпирически использовать кларитромицин в схемах эрадикационной терапии в соответствии с Маастрихтскими рекомендациями в настоящее время. Уровень резистентности к метронидазолу демонстрирует тенденцию к снижению, но остается близким к пороговому.

4. Сконструированный диагностикум может быть использован для выявления иммунного ответа организма, свидетельствующего о хеликобактер-ной инфекции, и для скрининговых исследований.

Апробация работы:

Результаты исследования по теме диссертации были представлены на:

- научных конференциях молодых ученых Ростовского-на-Дону научно-исследовательского противочумного института в 2002-2003гг.;

- Международной конференции «Проблемы экологической безопасности», Оболенск, 2000г.;

- 6-й российско-итальянской конференции «Инфекционные болезни: диагностика, лечение и профилактика», Санкт-Петербург, 2000г.;

- научно-практической конференции «Инфекционные болезни в практике терапевта», Харьков, 2001г.;

- Десятой и Тринадцатой Российских гастроэнтерологических неделях, Москва, 2004, 2007 гг.

- 3-й Всероссийской научной конференции «Теоретические основы эпидемиологии. Современные эпидемиологические и профилактические аспекты инфекционных и массовых неинфекционных заболеваний», Санкт-Петербург, 2008г.

План диссертационной работы утвержден на заседании Ученого совета ФГУЗ РостНИПЧИ 8.09.2008 (протокол №11).

Публикация результатов исследования

По теме диссертации опубликованы 14 работ, в том числе одна из них в периодическом издании из перечня ведущих рецензируемых научных журналов, утвержденных ВАК Министерства образования и науки России и рекомендованных для публикации основных научных результатов диссертаций на соискание искомой ученой степени. Получены патенты РФ на изобретение №2324188 от 10.05.2008 г., №2308949 от 19.06.2006 г. Структура работы

Диссертация изложена на 156 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, пяти глав результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, включающего 332 библиографических источника, из которых 95 - отечественных, 237 - иностранных. Работа проиллюстрирована 25 таблицами и 17 рисунками.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Березняк, Елена Александровна

117 ВЫВОДЫ

1. Высокопатогенные штаммы Н. pylori с генотипом vacAsl/ml (или vacAsl/m2), как cag-позитивные, так и cag-негативные обнаружены у 85% обследованных пациентов из г. Ростова-на-Дону и Ростовской области.

2. Смешанные генотипы, свидетельствующие об инфицировании более чем одним штаммом Н. pylori, выявлены у 33% обследованных.

3. Проведенный мониторинг антибиотикорезистентности региональных штаммов Н. pylori выявил изменения ее уровней в течение 2000-2009 гг. В 2008-2009 гг. уровень резистентности к кларитромицину составил 8%, к метронидазолу - 36%, что, в соответствии с Маастрихтскими рекомендациями, позволяет в настоящее время использовать эти антибактериальные препараты для эрадикационной терапии.

4. Разработана технология получения растворимого антигена Н. pylori, который может быть использован в качестве сенситина для конструирования антигенного диагностикума.

5. Сконструирован высоко специфичный антигенный полимерный хе-ликобактерный РАО-диагностикум с аналитической чувствительностью 1:640-1:1280.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

2. Для серологической диагностики хеликобактериоза в лабораторно-клинической практике и при скрининговых исследованиях может быть рекомендован антигенный полимерный хеликобактерный РАО-диагностикум, позволяющий экспрессно определять антитела к Н. pylori в сыворотке крови пациентов.

119

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Березняк, Елена Александровна, Ростов-на-Дону

1. Абузарова, Э. Р. Особенности генотипов Helicobacter pylori и полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10) у больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки: автореф. дис. . . . канд. биол. наук / Э. Р. Абузарова. Казань, 2008. - 23 с.

2. Адамов, А. К. Суспензионные антигены, антитела и иммуносорбен-ты / А. К. Адамов, В. И. Агафонов. М.: 1969. - 175 с.

3. Аруин, Л. И. Хронический гастрит / Л. И. Аруин, П. Я. Григорьев, В. А. Исаков, Э. П. Яковенко. Амстердам: 1993. - 362 с.

4. Аруин, Л. И. Морфологическая диагностика болезней желудка и кишечника / Л. И. Аруин, Л. Л. Капуллер, В. А. Исаков. М.: Триада-Х, 1998. - 483 с.

5. Аруин, Л. И. Диагностика и лечение заболеваний, ассоциированных с Helicobacter pylori / Л. И. Аруин // 2-й Международный симпозиум «Современные проблемы физиологии и патологии пищеварения». М.,1999. - С. 3337.

6. Баранская, Е. К. Язвенная болезнь и инфекция Н. pylori / Е. К. Баранская // РМЖ, Болезни органов пищеварения. 2000. - Том 2.- №1. - С.8-13.

7. Бардахчьян, Э. А. Кокковидные формы Helicobacter pylori и их роль в патологии человека / Э. А. Бардахчьян, Н. Г. Харланова, Н. В. Камнева, С.

8. Ю. Ломов, С. Р. Саямов, Б. П. Голубев // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. 2003. - №6. - С. 11-15.

9. Бардахчьян, Э. А. Роль Helicobacter pylori при развитии экстрагаст-родуоденальных заболеваний / Э. А. Бардахчьян, С. Ю. Ломов, Н. Г. Харла-нова, Н. В. Камнева // Экпер. Клин, гастроэнтерол. 2005. - №3.- С. 20-27.

10. Барышникова, Н. В. Актуальные проблемы диагностики хеликобак-териоза / Н. В.Барышникова // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. 2009. - №2. - С. 50-54.

11. Безуглова, Е. В. Чумной иммуноглобулиновый диагностикум на основе полимерных микросфер / Е. В. Безуглова, А. Н. Наркевич, В. В. Король, А. П. Кочеткова // Вопросы противоэпидемической защиты. НИИЭМ им.Н.Ф.Гамалеи. - вып. 35. - 1990. - С. 28-33.

12. Владимирский, Б. М. Математические методы в биологии / Б. М. Владимирский. Ростов.: изд-во РГУ, 1983.- 304 с.

13. Власов, В. В. Оценки эффективности диагностического исследования при количественной связи результата с результатом референтного исследования / В. В. Власов // Лаб.дело. 1986. - № 1. - С. 59-63.

14. Власов, В. В. Эффективность диагностических исследований / В. В. Власов. М.: «Медицина», 1988. - 254 с.

15. Власов, В. В. Введение в доказательную медицину / В. В. Власов. -М.: «Медиасфера», 2001. 392 с.

16. Вялков, А. И. Медицина, основанная на доказательствах, клинико-экономический анализ и система стандартизации / А. И. Вялков, П. А. Воробьев // Основы стандартизации в здравоохранении. М., 2002. - С. 195-207.

17. Говорун В. М. Современные подходы к молекулярной диагностике и типированию клинических изолятов Helicobacter pylori в России / В. М. Говорун, К. Т. Момыналиев, О. В. Смирнова и соавт. // РЖГГК. 2002. - №3. -С. 57-65.

18. Грефф, М. Ятрогенный путь передачи инфекци H.pylori и стерилизация эндоскопического оборудования / М. Грефф // Helicobacter pylori: революция в гастроэнтерологии. Ред.: В. Т. Ивашкин, Ф. Мегро, Т. Л. Лапина. - Триада-Х. - Москва. - 1999. - С. 21-28.

19. Григорьев, П.Я. Helicobacter pylori: гастрит, дуоденит (гастродуо-денит), язвенная болезнь и другие геликобактерассоциированные заболевания / П. Я. Григорьев, Э. П. Яковенко // Российский гастроэнтерологический журнал.- 1999. №4. - С. 92-98.

20. Григорьев, П. Я. Рекомендации врачу по лечению больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки / П. Я. Григорьев. -ГМЦ МЗ РФ РГМУ МЗ РФ, 2002.- 4 с.

21. Губергриц, Н. Б. Новые неинвазивные тесты для диагностики инфекции Helicobacter pylori / Н. Б. Губергриц, О. В. Синяченко, Т. М. Бело-конь, В. Б. Файнерман // РЖГГК. 2008. - №3. - С. 77-84.

22. Даис, А. Л. Потребность в доказательной медицине и возможность ее внедрения в развивающихся странах / А. Л. Даис., Л. Ф. Даис // Между-нар. журн. мед. практ. 2001. - № 2.- С. 24-26.

23. Домарадский, И. В. Вопросы патогенности Helicobacter pylori / И. В. Домарадский // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и ко-лопроктологии. 2001. - №2. - Приложение №13.- T.XI. - С. 113.

24. Жуховицкий, В. Г. «Золотой стандарт» и алгоритм микробиологической диагностики хелибактериоза / В. Г. Жуховицкий, JI. В. Диденко, Н. Д. Константинова // Клин. лаб. диагн. 2005. - №9. - С.52-53.

25. Иваников, И. О. Проблема преодоления резистентности штаммов Helicobacter pylori / И. О. Иваников // Материалы 7-ой сессии Российской группы по изучению Helicobacter pylori. Нижний Новгород, 1999. - С. 34-36.

26. Ивашкин В. Т. Helicobacter pylori: революция в гастроэнтерологии / Ред.: В. Т. Ивашкин, Ф. Мегро, Т. JI. Лапина. М.: Триада-Х, 1999. - 255 с.

27. Ивашкин, В. Т. Гастроэнтерология XXI века / В. Т. Ивашкин, Т. Л. Лапина // РМЖ. 2000. -Том 8. - № 17. - С.697 -703.

28. Ивашкин, В. Т. Диагностика и лечение гастроэзофагеальной реф-люксной болезни / В. Т. Ивашкин, А. А. Шептулин, А. С. Трухманов, О. А. Склянская, М. Ю. Коньков. Пособие для врачей. - М., 2005.- 31 с.

29. Исаева, Г. Ш. Возможное участие бактерий рода Helicobacter в патогенезе гепатобилиарных заболеваний / Г. Ш. Исаева // РЖГТК. -2008. №4.- С. 14-22.

30. Исаков, В. А. Хеликобактериоз / В. А. Исаков, И. В. Домарадский . -М.: «ИД Медпрактика», 2003. 412 с.

31. Каральник, Б. В. Эритроцитарные диагностикумы / Б. В. Каральник.- М.: «Медицина», 1976. 163 с.

32. Каральник, Б. В. Эритроцитарные белковые диагностикумы / Б. В. Каральник, Ю. П. Царевский, В. А. Шамардин. Алма-Ата: изд-во "Наука" Казахской ССР, 1982. - 147 с.

33. Кишкун, А. А. Комплексная диагностика инфекции, вызываемой Helicobacter pylori у больных язвенной болезнью / А. А. Кишкун, О. И. Черняк, С. Л. Арсеин, А. А. Будзинский, Г. А. Кучин, А. М. Половой // Клин, лаб. диагн. -1999. №10. - С. 36-37.

34. Кишкун, А. А. Современные методы диагностики и оценки эффективности лечения инфекции, вызванной Helicobacter pylori (Обзор литературы) / А. А. Кишкун // Клиническая лабораторная диагностика. 2002. - №8. -С. 41-46.

35. Кожанова, М. Г. Helicobacter pylori: роль в развитии гастродуоде-нальных заболеваний и методы дигностики / М. Г. Кожанова // Клин. лаб. диагн. 1999. - №11.- С. 52-55.

36. Корниенко, Е. А. Современная диагностика инфекции Helicobacter pylori / Е. А. Корниенко. СПб., 2004. - 41 с.

37. Корниенко, Е. А. ХЕЛПИЛ-тест и ХЕЛИК-тест для диагностики хеликобактериоза. / Е. А. Корниенко, В. Л. Эмануэль, М. А. Дмитриенко, Л. А. Хоровская, О. Н. Нажиганов. Пособие для врачей. - СПб.: Изд-во СПбГМУ, 2005.- 20 с.

38. Корниенко, Е. А. Внежелудочные проявления инфекции Helicobacter pylori у детей. / Е. А.Корниенко // Гастроэнтерология.- 2009.- №1.- С. 67-69.

39. Корсунский, А. А. Инфекция Helicobacter pylori в педиатрической практике. / А. А. Корсунский. Helicobacter pylori: революция в гастроэнтерологии. - Ред. В. Т. Ивашкин, Ф. Мегро, Т. JI. Лапина.- М.: Триада-Х, 1999. -С. 224-242.

40. Кудрявцева, Л. В. Helicobacter /ту/о^-инфекция: современные аспекты диагностики и терапии (пособие для врачей) / Л. В. Кудрявцева, П. Л. Щербаков, И. О. Иваников, В. М. Говорун. М., 2004. - 41 с.

41. Лапина, Т. Л. Основные принципы диагностики Н. pylori / Т. Л. Лапина. Helicobacter pylori: революция в гастроэнтерологии. - Ред. В. Т. Ивашкин, Ф. Мегро, Т. Л. Лапина. -М., Триада-Х, 1999. - С. 107-116.

42. Лапина, Т. Л. Макролидный антибиотик кларитромицин в эрадика-ционной терапии инфекции Helicobacter pylori / Т. Л. Лапина // РМЖ БОП. -2006. т.8. - №1. - С.39-42.

43. Лапина, Т. Л. Эрадикационная терапия инфекций Helicobacter pylori / Т. Л. Лапина // Медицинский вестник. 2006. - №16. - С. 9-10.

44. Логинов, А. С. Язвенная болезнь и Helicobacter pylori. Новые аспекты патогенетической терапии / А. С. Логинов, Л. И. Аруин, А. А. Ильченко. -М., 1993.-230 с.

45. Логинов, А. С. Диагностика и лечение пенетрирующих язв желудка и двенадцатиперстной кишки / А. С. Логинов, Ю. В. Васильев, Э. С. Сиваш, А. В. Фарбер // Российский гастроэнтерологический журнал. -1996. N3. - С. 20-29.

46. Ломов, С. Ю. Ультраструктурные основы хронического хеликобактерного гастрита / С. Ю. Ломов, Э. А. Бардахчьян. Ростов-на-Дону, 1999. -240 с.

47. Маев, И. В. Современные подходы к лечению язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки / И. В. Маев // Лечащий Врач. 2003. -№> 5.- С. 4-8.

48. Маев, И. В. Современные стандарты лечения кислотозависимых заболеваний, ассоциированных с Н. pylori (материалы консенсуса Маастрихт-3) / И. В. Маев, А. А. Самсонов // Consilium Medicum. Гастроэнтерология. -2006. т.8. - №1. - С. 3-8.

49. Макаренко, Е. В. Клиническое значение факторов патогенности Helicobacter pylori / Е. В. Макаренко // РЖГТК. 2005. - №3. - С. 22-27.

50. Мегро, Ф. Резистентность Helicobacter pylory к антибиотикам / Ф. Мегро// РЖГГК. 2002.-№3.-С. 71-80.

51. Методические указания МУК 4.2. 1890-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам». Утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 04.03.2004.

52. Минаев, В. И. Проблемы диагностики Helicobacter pylori при гастроэнтерологических заболеваниях / В. И. Минаев, Ю. В. Несвижский, А. А.

53. Воробьев. Материалы 6 сессии Российской группы по изучению Helicobacter pylori. - Омск, 1997.- С. 10-18.

54. Моисеев, С. А. Медицина, основанная на доказательствах / С. А. Моисеев // Врач. 2000. - № 12. - С. 4-8.

55. Наркевич А. Н. Способ получения носителя иммуноглобулинов / А. Н. Наркевич, Е. В. Безуглова, А. П. Кочеткова. Авторское свидетельство №14458, опубл. 8.08.1988.

56. Наркевич, А. Н. Чумной иммуноглобулиновый полимерный диаг-ностикум для РАО / А. Н. Наркевич, Е. В. Безуглова, А. П. Кочеткова, В. В. Король, А. А. Козлова. Регламент производства №978-00 от 20.06.2000.

57. Пархоменко, JI. К. Частота выявления у подростков хеликобакте-риоза при гастродуоденальных заболеваниях и болезнях, не связанных с органами пищеварения / JI. К. Пархоменко, JI. И. Яруш, Т. А. Глебова // Клин, медицина. -1996. №4. - С. 50-51.

58. Пасечников, В. Д. Значение геномной гетерогенности штаммов Helicobacter pylori в развитии ассоциированной патологии гастродуоденаль-ной зоны / В. Д. Пасечников, С. 3. Чуков // Рос. журн. гастроэнтерол., гепа-тол., колопроктол., 2000. - №3. - С. 7-11.

59. Пасечников, В. Д. Роль внутрисемейного инфицирования в развитии Н /ту/огг-ассоциированной патологии гастродуоденальной зоны / В. Д.

60. Пасечников, С. 3. Чуков, М. Н. Злыднева, В. В. Зоркин // Рос. журн. гастроэн-терол., гепатол., колопроктол. 2001. - №1. - С. 26-29.

61. Передерий, В. Г. Доказательная медицина и эффект запаздывания в украинской гастроэнтерологии / В. Г. Передерий, С. М.Ткач // Сучасна гастроентеролопя. 2004. - № 3. - С. 4-7.

62. Пиманов, С. И. Эзофагит, гастрит и язвенная болезнь / С. И. Пима-нов. М .: Мед. кн., 2000. - 378 с.

63. Приказ № 535 Министерства здравоохранения СССР «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений» от 22 апреля 1985 г.

64. Самсонов, А. А. Антибиотики схем эрадикации Helicobacter pylori. Чем мы ограничены в выборе препаратов? / А. А. Самсонов // Рос. журн. га-строэнтерол. гепатол. колопроктол. 2008. - т. 18. - №4. - С. 63-68.

65. Сафонова, Н. В. Гастрит, язвенная болезнь и хеликобактериоз / Н. В. Сафонова, А. Б. Жебрун. СПб., 1995. - 39 с.

66. Склянская, О. А. Критерии диагностики пилорического хеликобактериоза при язвенной болезни / Склянская О. А. , Лапина Т. Л. , Мягкова Л. П., Юшков П. В. // Архив патологии. 1993.- т. 55. - №6. - С. 45-48.

67. Станишевский, Я. М. Тесты для экспресс-диагностики на основе латекс агглютинации / Я. М. Станишевский, И. И. Григорьевская, А. Н. Лобанов. Биомедицинские технологии: Материалы 1-й Всероссийской науч. конф. - М., 2003. - Вып. 20. - С. 72-80.

68. Ткачев, А. В. Опыт главного гастроэнтеролога региона в организации помощи больным с заболеваниями органов пищеварения / А. В. Ткачев // РЖГГК. 2004. - №6. - С. 56-58.

69. Фадеенко, Г. Д. Helicobacter pylori и внегастральные проявления / Г. Д. Фадеенко // Украшський тер. журн. 2004. - №2. - С. 95-99.

70. Флейс, Дж. Статистические методы для изучения таблиц долей и пропорций / Дж.Флейс.- М.: Финансы и статистика, 1989,- Пер. с англ.- 319 с.

71. Флетчер, Р. Клиническая эпидемиология. Основы доказательной медицины / Р. Флетчер, С. Флетчер, Э. Вагнер. М.:Медиасфера, 1998. -318 с.

72. Харабаджахян, Г. Д. Выращивание возбудителя хеликобактериоза на питательной среде без добавления крови / Г. Д. Харабаджахян, А. И. Ше-лохович, С. Ю. Ломов с соавт. Соврем, технологии диагностики и терап. инфекц. бол. - СПб., 1999. - С. 320.

73. Шаханина, Н. Л. Приготовление различных иммуносорбентов и их использование для выделения антигенов и антител / Н. Л. Шаханина, Б. В. Клеев, Ю. М. Федоров // Вопросы медицинской химии. 1976. - т.22. - №1. -С. 127-136.

74. Шкитин, В. А. Роль Helicobacter pylori в патологии человека / В. А. Шкитин, А. И. Шпирна, Г. Н. Старовойтов // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2002. - т. 4.- №2. - С. 128-145.

75. Щербаков, П. Л. Эпидемиология инфекции Н. pylori / П. Л. Щербаков. Helicobacter pylori', революция в гастроэнтерологии. - Ред. В. Т. Ивашкин, Ф. Мегро, Т. Л. Лапина.- М., Триада-Х, 1999. - С. 14-20.

76. Щербаков, П. Л. Антибактериальные препараты в схемах лечения хеликобактериоза у детей / П. Л. Щербаков // РМЖ БОП. 2003. - т. 5.- №2. -С. 49-51.

77. Ющук, Н. Д. Иммунный ответ при инфекции, вызванной Helicobacter pylori / Н. Д. Юшук, И. В. Маев, Г. К. Гуревич // Журн.микробиол.- 2003. №6. - С. 86-91.

78. Aldana, P. L. The relationship between consumption of antimicrobial agents and the prevalence of primary Helicobacter pylori resistance / P. L. Aldana, M. Kato, S. Nakagawa // Helicobacter. 2002. - Vol. 7.- P. 306-309.

79. Algood, H. M. S. Helicobacter pylori Persistence: an Overview of Interactions between H. pylori and Host Immune Defenses / H. M. S. Algood, T. L. Cover // Clinical Microbiology Reviews. 2006. - Vol. 19. - No. 4. - P. 597-613.

80. Aim, R. A. Genomic-sequence comparison of two unrelated isolates of the human gastric pathogen Helicobacter pylori / R. A. Aim, L. S. L. Ling, D. T. Moir //Nature.- 1999. Vol. 397 (6715). - P. 176-180.

81. Al-Qurashi, A. R. Evolution of metronidazole and tetracycline susceptibility pattern in Helicobacter pylori at a hospital in Saudi Arabia / A. R. Al-Qurashi, F. El-Morsy, A. A. Al-Quorain // Int. J. Antimicrob. Agents.- 2001. Vol. 17.-P. 233-236.

82. Appelmelk, B. J. Molecular mimicry between Helicobacter pylori and the host / B. J. Appelmelk, R. Negrini, A. P. Moran, E. J. Kuipers // Trends Microbiol. -1997. Vol. 5. - P. 70-73.

83. Appelmelk, B. J. Why Helicobacter pylori has Lewis antigens / B. J. Appelmelk, M. A. Monteiro, S. L. Martin, A. P. Moran, С. M. Vandenbroucke-Grauls // Trends Microbiol. 2000. - Vol.8. - P. 565-570.

84. Atherton, J. C. The clinical relevance of strain types of Helicobacter pyloriI J.C.Atherton // Gut. 1997. - Vol.40. - P.701-703.

85. Atherton, J. C. H.pylori virulence factors / J. C. Atherton // Br. Med. Bull. 1998. - Vol 54. - P. 105-120.

86. Baltrus, D. A. The Complete Genome Sequence of Helicobacter pylori Strain G27. / D. A. Baltrus, M. R. Amieva, A. Covacci et al. // Journal of Bacteriology. 2009. - Vol. 191. - No. 1. - P. 447-448.

87. Beales, I. L. Antibodies to CagA protein are associated with gastric atrophy in Helicobacter pylori infection / I. L. Beales, J. E. Crabtree, D. Scunes et al. // Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 1996. - Vol.8. - P.645-649.

88. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology / D. J. Brenner, G. M. Garrity, N. R. Krieg, J. M. Staley, editors. Springer, 2001.Vol. 2, part C. Helicobacter. - P. 1169-1188.

89. Betten, A. A. Proinflammatory peptide from Helicobacter pylori activates monocytes to induce lymphocyte dysfunction and apoptosis / A. Betten, J.

90. Bylund, Т. Cristophe, F. Boulay, A. Romero, K. Hellstrand, C. Dahlgren // J. Clin. Investig. 2001. - Vol. 108. - P. 1221-1228.

91. Birac, C. Six year follow-up of resistance to antibiotics of Helicobacter pylori in Bordeaux, France / C. Birac, S. Bouchard, C. Camou // Gut.- 1999 .- Vol. 45 .- Suppl. 3 .- P. 107.

92. Bjorkholm, B. Helicobacter pylori entry into human gastric epithelial cells: a potential determinant of virulence, persistence, and treatment failures / B. Bjorkholm, V. Zhukhovitsky, C. Lofman // Helicobacter. 2000. - Vol.5. - P. 148154.

93. Blaser, M. J. CagA and the outcome of Helicobacter pylori infection / M. J. Blaser, J. E. Crabtree // Am. J. Clin. Pathol. 1996. - Vol. 106. - P. 565-567.

94. Bode, G. The coccoid forms of Helicobacter pylori criteria for their viability/ G. Bode, F. Mauch, P. Malfertheiner // Epydemiol. Infect. - 1993. - Vol. 111.-P. 483-490.

95. Boncristiano, M. The Helicobacter pylori vacuolating toxin inhibits T cell activation by two independent mechanisms / M. Boncristiano, S. Paccani, C. Barone et al. // J. Exp. Med. 2003. - Vol. 198. - P. 1887-1897.

96. Boren, Т. Attachment of Helicobacter pylori to human gastric epithelium mediated.by blood group antigens / T. Boren, P. Falk, A. Roth, G. Larson, S. Normark // Science. 1993. - Vol. 262. - P.l 892-1895.

97. Boren, T. Helicobacter pylori: molecular basis for host recognition and bacterial adherence / T. Boren, S. Normark, P. Falk // Trends Microbiol. -1994.-Vol. 2.-P. 221-228.

98. Boyanova, L. Primary and combined resistance to four antimicrobial agents in Helicobacter pylori in Sofia, Bulgaria / L. Boyanova, I. Stancheva, Z. Spassova, N. Katzarov, I. Mitov, R. Koumanova // J. Med. Microbiol. 2000. -Vol. 49.-P. 415-418.

99. Boyanova, L. Prevalence of multidrug-resistant Helicobacter pylori in Bulgaria / L. Boyanova // Journal of Medical Microbiology. 2009,- Vol. 58. - P. 930. - Published online ahead of print on 5 June 2009 as doi:10.1099/jmm.0.009993-0.

100. Buzas, G. M. Nitrofuran-based regimens for the eradication of Helicobacter pylori infection / G.M. Buzas, J. Jozan // J. Gastroenterol. Hepatol. -2007. Vol. 22. -№10. - P. 1571-1581.

101. Cabrita, J. Features and trends in Helicobacter pylori antibiotic resistance in Lisbon area, Portugal (1990-1999) / J. Cabrita, M. Oleastro, R. Matos et al. // J. Antimicrob. Chemother. 2000. - Vol. 46. - P. 1029-1031.

102. Caner, V. H. pylori iceA alleles are disease-specific virulence factors / V. Caner, M. Yilmaz, N. Yonetci et al. // World J. Gastroenterol. 2007. - Vol. 13.-№ 18.-P. 2581-2585.

103. Cellini, L. Coccoid Helicobacter pylori not culturable in vitro revers in mice / L. Cellini, N. Allocati, D. Angellutti // Microbiol. Immunol. 1994. -Vol. 38. - P. 834-850.

104. Censini, S. Cag, a pathogenicity island of Helicobacter pylori, encodes type I-specific and disease-associated virulence factors / S. Censini, C. Lange, Z. Xiang et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. -Vol. 93. - P. 1464814653.

105. Chisholm, S. A. Mutations in Helicobacter pylori rdxA gene sequences may not contribute to metronidazole resistance / S. A. Chisholm, R. J. Owen // J. Antimicrob. Chemother. 2003. - Vol. 51. - P. 995-999.

106. Christie, P. J. Bacterial type IV secretion: conjugation systems adapted to deliver effector molecules to host cells / P. J. Christie, J. P. Vogel // Trends Microbiol. 2000. - Vol. 8. - P. 354-360.

107. Cohen, H. Endoscopic methods for the diagnosis of Helicobacter pylori / H. Cohen, L. Laine // Aliment. Pharmacol. Ther. -1997. -Vol. 11. Suppl.l. -P. 3-9.

108. Cover, T. L. Purification and characterization of the vacuolating toxin from Helicobacter pylori / T. L. Cover, M. J. Blaser // J. Biol. Chem. 1992. -Vol. 267.-P. 10570-10575

109. Cover, T. L. Serologic detection of infection with cagA+ Helicobacter pylori strains / T. L. Cover, Y. Glupczynski, A. P. Lage et al. // J. Clin. Microbiol. 1995. - Vol. 33. -P. 1496-1500.

110. Cover, T. L. The vacuolating cytotoxin of Helicobacter pylori / T. L. Cover // Mol. Microbiol. 1996. - Vol. 20. -P. 241-246.

111. Cover, T. L. Helicobacter pylori VacA, a paradigm for toxin multi-functionality / T. L. Cover, S. R. Blanke // Nat. Rev. Microbiol. 2005. -Vol. 3. -P. 320-332.

112. Dent, J. C. Evaluation of a new selective medium for Campylobacter pylori / J. C. Dent, C. A. McNulty // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. -1988. -№7. -P. 555-558.

113. Donahue, J. P. Analysis of iceAl transcription in Helicobacter pylori / J. P. Donahue, R. M. Peek, L. J. van Doom // Helicobacter. 2000. - № 5. - P. 112.

114. Donelli, G. The effect of oxygen on the growth and cell morphology of Helicobacter pylori / G. Donelli, P. Matarrese, C. Fiorentini et al. // FEMS Microbiol. Lett. 1998. - Vol. 168. - P. 9-15.

115. Dubois, A. Immunization against natural Helicobacter pylori infection in nonhuman primates / A. Dubois, С. K. Lee, N. Fiala et al. // Infect. Immun. -1998. Vol. 66. - №9. - P. 4340-4346.

116. Dunn, В. E. Helicobacter pylori / В. E. Dunn, H. Cohen, M. J. Blaser // Clin. Microbiol. Rev. 1997. - Vol. 10. - P. 720-741.

117. Enroth, H. In vitro aging of Helicobacter pylori: changes in morphology, intracellular composition and surface properties / H. Enroth, K. Wreiber, R. Rigo et al. // Helicobacter. 1999. - Vol. 4. - P. 7-16.

118. Ertem, D. Helicobacter pylori may influence height in children independent of socioeconomic factors / D. Ertem, E. Pehlivanoglu // J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 2002. - Vol. 35. - P. 232-233.

119. Eslick, G. D. Foetal intrauterine growth restrictions with Helicobacter pylori infection / G. D. Eslick, P. Yan, H. H. X. Xia // Aliment. Pharmacol. Ther.-2002. Vol. 16. - P. 1677-1682.

120. Fallone, C. A. Epidemiology of the antibiotic resistance of Helicobacter pylori in Canada / C. A. Fallone // Can. J. Gastroenterol. 2000. - Vol. 14. -P. 879-882.

121. Ferguson, D. A., Jr. Isolation of Helicobacter pylori from saliva / D. A. Ferguson, Jr., C. Li, N. R. Patel et al. // J. Clin. Microbiol. 1993. -Vol. 31. - P. 2802-2804.

122. Fiedorek, S. C. Factors influencing the epidemiology of Helicobacter pylori infection in children / S. C. Fiedorek, H. M. Malaty, D. L. Evans et al. // Pediatrics. 1991. -Vol. 88. - P. 578-582.

123. Figura, N. Helicobacter pylori exotoxins and gastroduodenal diseases associated with cytotoxic strain infection / N. Figura // Aliment. Pharmacol. Ther. -1996. Vol. 10. - Suppl. 1. - P. 79-96.

124. Figura, N. Are Helicobacter pylori differences important in the development of Helicobacter pylori-related diseases? / N. Figura // Ital. J. Gastroenterol. Hepatol. 1997. - Vol. 29. - P. 367-74.

125. Figura, N. Determinants of pathogenicity of Helicobacter pylori / N. Figura // J. Chemother. 1999. - Vol. 11.- Suppl 2 .- P. 22.

126. Figura, N. Helicobacter pylori infection and infertility / N. Figura, P. Piomboni, A. Ponzetto // Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 2002. - Vol. 14. - P. 663-669.

127. Fox, J. G. Helicobacter canis isolated from a dog liver with multifocal necrotizing hepatitis / J. G. Fox, R. Drolet, R. Higgins et al. // J. Clin. Microbiol. 1996. - Vol. 34. - No 10. - P. 2479-2482.

128. Fox, J. G. The поп-H. pylori helicobacters: their expanding role in gastrointestinal and systemic diseases / J. G. Fox // Gut. 2002. - Vol. 50. - P. 273-283.

129. Gan, V. N. Pharmacokinetics of a clarithromycin suspension in infant and children / V. N. Gan, S. Y. Chu // Antimicrob. Agents Chemother. 1992. -Vol. 36.-P. 2478-2480.

130. Gebert, B. Helicobacter pylori vacuolating cytotoxin inhibits T lymphocyte activation / B. Gebert, W. Fischer, E. Weiss, R. Hoffmann, R. Haas // Science. 2003. - Vol. 301. - P. 1099-1102.

131. Genta, R. M. Review article: after gastritis—an imaginary journey into a Helicobacter-free world / R. M. Genta // Aliment. Pharmacol. Ther. 2002. -Vol.16.-Suppl. 4.-P. 89-94.

132. Gerrits, M. M. Effects of 16S rRNA gene mutations on tetracycline resistance in Helicobacter pylori / M. M. Gerrits, M. Berning, A. H. van Vliet // Antimicrob. Agents Chemother . 2003. - Vol. 47. - P. 2984-2986.

133. Glupczynski, Y. European Multicentre survey of in vitro antimicrobial resistance in Helicobacter pylori / Y. Glupczynski, F. Megraud, M. Lopez Brea, L. P. Andersen // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 2001. - Vol. 20.- P. 820-823.

134. Godwin, M. Evidence-based medicine: science and art / M. Godwin, M. Daves // Can. Fam. Physician. 2001. - Vol. 47. - No 8.- P. 1527-1530.

135. Goodwin, С. Helicobacter pylori and duodenal ulcer / C. Goodwin, A. Gordon, V. Burke // Med. J. Aust. 1990. - Vol. 153. - P. 66-67.

136. Graham, D. Y. Clarithromycin for the eradication of Helicobacter pylori / D. Y. Graham, A. R. Opekun, P. D. Klein J. // Clin. Gastroenterol. 1993. -Vol. 16.-No 4.-P. 292-294.

137. Graham, D. Y. Helicobacter pylori: consensus reached: peptic ulcer disease is on the way to becoming an historic disease / D. Y. Graham, D. A. Peura // Am. J. Gastroenterol. 1994. - Vol. 89. - P. 1137-1139.

138. Graham, D. Y. Challenge model for Helicobacter pylori infection in human volunteers / D. Y. Graham, A. R. Opekun, M. S. Osata et al. // Gut. 2004. -Vol. 53.-P. 1235-1243.

139. Grignon, B. Validation of Diffusion Methods for Macrolide Susceptibility Testing of Helicobacter pylori / B. Grignon, J. Tankovic, F. Megraud et al. // Microbial. Drug Resistance. 2002. - Vol. 8. - No 1. - P. 61-66.

140. Guruge, J. L. Epithelial attachment alters the outcome of Helicobacter pylori infection / J. L. Guruge, P. G. Falk, R. G. Lorens et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. - Vol. 95. - № 7 - P. 3925-3930.

141. Hamlet, A. Duodenal Helicobacter pylori infection differs in cagA genotype between asymptomatic subjects and patients with duodenal ulcers / A. Hamlet, A. C. Thoreson, O. Nilsson et al. // Gastroenterology. 1999. - Vol. 116. -P. 259-268.

142. Hayashi, S. Analysis of immunoglobulin A antibodies to Helicobacter pylori in serum and gastric juice in relation to mucosal inflammation / S. Hayashi, T. Sugiyama, K.Yokota et al. // Clin. Diagn. Lab. Immunol. 1998. - Vol. 5.-P. 617-621.

143. Неер, М. Rifampin and rifabutin resistance mechanism in Helicobacter pylori / M. Heep, D. Beck, E. Bayerdorffer, N. Lehn // Antimicrob. Agents. Chemother. 1999. - Vol. 43. - P. 1497-1499.

144. Higashi, H. SHP-2 tyrosine phosphatase as an intracellular target of Helicobacter pylori CagA protein / H. Higashi, R. Tsutsumi, S. Muto et al. // Science. 2002. - Vol. 295. - P. 683-686.

145. Hildebrand, P. Risk among gastroenterologists of acquiring Helicobacter pylori infection: case-control study / P. Hildebrand, В. M. Meyer-Wyss, S. Mossi, C. Beglinger // Br. Med. J. 2000. - Vol. 321. - P. 149.

146. Hirschi, A. M. Methods to detect Helicobacter pylori: from culture to molecular biology / A. M. Hirschi, A. Makristathis // Helicobacter. 2007. - Vol. 12. - Suppl.2. — P. 6-11.

147. Ito, Y. Analysis and typing of the vacA gene from cagA-positive strains of Helicobacter pylori isolated in Japan / Y. Ito, T. Azuma, S. Ito et al. // J. Clin. Microbiol. 1997. - Vol. 35. - No 7. - P. 1710-1714.

148. Jaup, В. H. Antibiotic resistance among strains of Helicobacter pylori in Gothenburg. Bacteria resistant to metronidazole / В. H. Jaup, A. Brandberg, B. Stenquist, A. Norrby // Lakartidningen. 1998. - Vol. 95. - P. 279-281.

149. Jones, F. S. Agglutination by precipitin / F. S. Jones // J. Exp. Med. -1927.-Vol. 46.-P. 303-314.

150. Kabir, S. Detection of Helicobacter pylori DNA in feces and saliva by polymerase chain reaction: a review / S. Kabir // Helicobacter. 2004. - Vol. 9. - P. 115-123.

151. Kersulyte, D. Differences in genotypes of Helicobacter pylori from different human populations / D. Kersulyte, A. K. Mukhopadhyay, B. Velapatino et al. // J. Bacteriol. 2000. - 182. - P. 3210-3218.

152. Kirchner, T. Immunopathology of Helicobacter pylori gastritis / T. Kirchner, H. Steininger, G. Faller // Digestion. 1997. - Vol. 58.- Suppl 1.- P. 14 -16.

153. Kivi, M. Concordance of Helicobacter pylori strains within families / M. Kivi, Y. Tindberg, M. Sorberg et al. // J. Clin. Microbiol. 2003. - Vol. 41. - P. 5604-5608.

154. Koletzko, S. Prospective multicentre study on antibiotic resistance of Helicobacter pylori strains obtained from children living in Europe / S. Koletzko, F. Richy, P. Bontems et al.//Gut. 2006. - Vol. 55. - P. 1711-1716.

155. Kostrzynska, M. Identification, characterization, and spatial localization of two flagellin species in Helicobacter pylori flagella / M. Kostrzynska, J. D. Betts, J. W. Austin, T. J. Trust // J. Bacterid. 1991. - Vol. 173. - P. 937-946.

156. Kunin, С. M. Excessive use of antibiotics in the community is associated with delayed admission and masked diagnosis of infectious diseases / С. M. Kunin, Y.C. Liu // Journal of Microbiol. Immunol, and Infection. 2002. - Vol. 35. - №3. - P. 141-146.

157. Kuipers, E. Seroconversion for Helicobacter pylori / E. Kuipers, A. Pena, G. Van Kamp et al. // Lancet. 1993. - Vol. 342. - P. 328-331.

158. Kuipers, E. J. Helicobacter pylori and atrophic gastritis: importance of the cagA status / E. J. Kuipers, G. I. Perez-Perez, S. G. Meuwissen, M. J. Blaser // J.Natl. Cancer Inst. 1995.-Vol. 87.-P. 1777-1780.

159. Kusters, J. G. Coccoid forms of Helicobacter pylori are the morphologic manifestation of cell death / J. G. Kusters, M. M. Gerrits, J. A. Van Strijp, C. M. Vandenbroucke-Grauls // Infect. Immun. 1997. - Vol. 65. - P. 3672-3679.

160. Kusters, J.G. Pathogenesis of Helicobacter pylori infection / J. G. Kusters, A. H. M. van Vliet, E. J. Kuipers // Clinical Microbiology Reviews. -2006 . Vol. 19. - No. 3. - P. 449-490.

161. Kwon, D. H. Isolation and characterization of tetracycline-resistant clinical isolates of Helicobacter pylori / D. H. Kwon, J. J. Kim, M. Lee et al. // Antimicrob. Agents Chemother. 2000. - Vol. 44. - P. 3203-3205.

162. Laemmli, U. Cleavage of structural proteins during assembly of bac-teriphage T4 / U. Laemmli // Nature. 1970. - Vol. 222. - P. 293-298.

163. Laheij, R. J. F. Evaluation of commercially available Helicobacter pylori serology kits: / R. J. F. Laheij, H. Staatman, J. В. M. J. Jansen, A. L. M. Ver-beek // J. Clin. Microbiol. 1998 - Vol. 36. - No 10. - P. 2803.

164. Lambert, M. A. Differentiation of Campylobacter and Campylobac-ter-like organisms by cellular fatty acid composition / M. A. Lambert, С. M. Pat-ton, T. J. Barrett, C. W. Moss // J. Clin. Microbiol. 1987. - Vol. 25. - №4. - P. 706-713.

165. Lara, L. F. One-day quadruple therapy compared with 7-day triple therapy for Helicobacter pylori infection / L. F. Lara, G. Cisneros, M. Gurney // Arch. Intern. Med. 2003. - Vol. 163. - P. 2079-2084.

166. Larson, E. Community factors in the development of antibiotic resistance / E. Larson // Annual Rev. Public Health. 2007. - Vol. 28. - P. 435 - 447.

167. Lau, P. P. Phylogenetic diversity and position of the genus Campylobacter / P. P. Lau, B. De Brunner-Vossbrick, B. Dunn // Syst. Appl. Microbiol. -1987.-Vol.9.-P. 231-238.

168. Lee, A. Helicobacter muridarum, sp.nov., a microaerophilic helical bacterium with a novel ultrastructure isolated from the intestinal mucosa of rodents / A. Lee, M. W. Phillips, J. L. O'Rourke et al. // Int. Sist. Bacteriol. 1992. - Vol. 42.-P. 27-36.

169. Linden, S. Strain- and blood group-dependent binding of Helicobacter pylori to human gastric MUC5AC glycoforms / S. Linden, H. Nordman, J. He-denbro et al. // Gastroenterology. 2002. -Vol. 123. - P. 1923-1930.

170. Loo, V. G. In-vitro susceptibility of Helicobacter pylori to ampicillin, clarithromycin, metronidazole and omeprazole / V. G. Loo, C. A. Fallone, E. De Souza et al. // J. Antimicrob. Chemother. 1997. - Vol. 40. - P.881-883.

171. Lowry, O.H. Protein measurement with the Folin phenol reagent / O. H. Lowry, N. G. Rosebrough, A. L. Farr, R. J. Bandal // J. Biol. Chem. 1951. -Vol. 193.-№ l.-P. 265-275.

172. Lozniewski, A. Evaluation of Pyloriset Dry, a new rapid agglutination test for Helicobacter pylori antibody detection / A. Lozniewski, J. D. De Korwin, M. C. Conroy et al. // J. Clin. Microbiol. 1996. - Vol. 34. -No 7. - P. 17731775.

173. Magalhaes, P. Helicobacter pylori primary resistance to metronidazole and clarithromicin in Brazil / P. Magalhaes, D. Magalhaes, D. Vale Campos Barbosa // Antimicrob. Agents and Chemother. 2002. - Vol.46. - No.6. - P. 2021-2023.

174. Malaty, H. M. Importance of childhood socioeconomic status on the current prevalence of Helicobacter pylori infection / H. M. Malaty, D. Y. Graham // Gut. 1994. - Vol. 35. - P. 742-745.

175. Malfertheiner, P. Current concepts in the management of Helicobacter pylori infection the Maastricht 2-2000 / P. Malfertheiner, F. Megraud, C. O'Mo-rain et al. // Consensus Report. Aliment. Pharmacol Ther. - 2002. - Vol.16. - №.2.-P. 167-180.

176. Malfertheiner, P. Helicobacter pylori. Current concepts in the management of Helicobacter pylori infection: the Maastricht III Consensus Report / P. Malfertheiner, F. Megraud, C. O'Morain et al. // Gut. 2007. - Vol. 56. - P. 772781.

177. Marais, A. Characterization of the genes rdxA and frxA involved in metronidazole resistance in Helicobacter pylori / A. Marais , C. Bilardi, F. Cantet // Res. Microbiol.- 2003.- Vol. 154. P. 137-44.

178. McNulty, C. Helicobacter pylori susceptibility testing by disc diffusion / C. McNulty, R. Owen, D. Tompkins et al. // Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 2002.- Vol. 49. - P. 601-609.

179. Megraud, F. Rationale for the choice of antibiotics for the eradication of Helicobacter pylori / F. Megraud // Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 1995. -Vol.7. - Suppl.l.-P. 49-54.

180. Megraud, F. Helicobacter pylori and macrolides / F.Megraud. -Schonfeld W., Kirst H.A. Macrolide antibiotics. Berlin: Berkhauser Verlag., 2002. - P. 243-260.

181. Megraud, F. H pylori antibiotic resistance: prevalence, importance, and advances in testing / F. Megraud // Gut. -2004. Vol. 53. - P. 1374-1384.

182. Megraud, F. Helicobacter pylori Detection and Antimicrobial Susceptibility Testing / F. Megraud, P. Lehours // Clinical Microbiology Reviews. -2007. Vol. 20. - No. 2 . - P. 280-322.

183. Mendonca, S. Prevalence of Helicobacter pylori resistance to metronidazole, clarithromycin, amoxicillin, tetracycline, and furazolidone in Brazil / S. Mendonca, C. Ecclissato, M. S. Sartori et al. // Helicobacter. 2000. - Vol. 5. - P. 79-83.

184. Mendz, G.L. Is the molecular basis of metronidazole resistance in mi-croaerophilic organisms understood? / G.L. Mendz, F. Megraud // Trends Microbiol. 2002.-Vol. 10.-P. 370.

185. Midolo, P. D. A practical single sample dry latex agglutination test for Helicobacter pylori antibody detection / P. D. Midolo, J. R. Lambert, E. G. Russell, S. K. Lin // J. Clin. Pathol. 1995a . - Vol. 48. - No. 10. - P. 969-971.

186. Midolo, P. D. Antimicrobial resistance testing of Helicobacter pylori: a comparison of E-test and disk diffusion methods / P. D. Midolo, J. M. Bell, J. R. Lambert et al. // Pathology. 1997. - Vol. 29. - P. 411-414.

187. Midolo, P. D. Use of a dry latex agglutination test to measure eradication of Helicobacter pylori infection / P. D. Midolo, B. Dakic, L. Nicholson et al. // Journal of Gastroenterology and Hepatology . 2000. - Vol. 15. - No. 3. - P. 254-256.

188. Miehlke, S. Allelic variation in the cagA gene of Helicobacter pylori obtained from Korea compared to the United States / S. Miehlke, K. Kibler, J.G. Kim et al. // Am. J. Gastroenterol. 1996. - Vol. 91. - P. 1322-1325.

189. Mishra, К. K. Antibiotic Susceptibility of Helicobacter pylori Clinical Isolates: Comparative Evaluation of Disk-Diffusion and E-Test Methods // K. K. Mishra, S. Srivastava, A. Garg, A. Ayyagari // Current Microbiology. 2006. -Vol. 53.-P. 329-334.

190. Mitscher, L. A. Coevolution: mankind and microbes / L. A. Mitscher / J. Nat. Prod. 2008. - Vol. 71. - No. 3. - P. 497-509.

191. Moese, S. Helicobacter pylori induces AGS cell motility and elongation via independent signaling pathways / S. Moese, M. Selbach, T. Kwok et al. // Infect. Immun. 2004. - Vol. 72. - P. 3646-3649.

192. Mohammadi, M. Prevalence of Helicobacter pylori vacuolating cyto-toxin and its allelic mosaicism as a predictive marker for Iranian dyspeptic patients / M. Mohammadi, A. Oghalaie, N. Mohajerani // Bull. Soc. Pathol. Exot. 2003. -Vol. 96.-P. 3-5.

193. Molinari, M. Selective inhibition of Ii-dependent antigen presentation by Helicobacter pylori toxin VacA / M. Molinari, M. Salio, C. Galli et al. // J. Exp. Med. 1998. -Vol. -187. -P. 135-140.

194. Moore, R. A. Nucleotide sequence of the gyrA gene and characterization of ciprofloxacin-resistant mutants of Helicobacter pylori I R. A. Moore, B. Beckthold, S. Wong et al. // Antimicrob. Agents Chemother. 1995. - Vol. 39. -P.107-11.

195. Morales-Espinosa, R. Colonisation of Mexican patients by multiple Helicobacter pylori strains with different vacA and cagA genotypes / R. Morales

196. Espinosa, G. Castillo-Rojas, G. Gonzalez-Valencia et al. // J. Clin. Microbiol. -1999. Vol. 37. -P. 3001-3004.

197. Morris, A. J. Long-term follow-up of voluntary ingestion of Helicobacter pylori / A. J. Morris, M. R. Ali, G. I. Nicholson, G. I. Perez-Perez, M. J. В laser // Ann. Int. Med. 1991. - Vol. 114. - P. 662-663.

198. Muotiala, A. Low biological activity of Helicobacter pylori lipopoly-saccharide / A. Muotiala, I. M. Helander, L. Pyhala, T. U. Kosunen, A. P. Moran // Infect. Immun. 1992. - Vol. 60. - P. 1714-716.

199. Odenbreit, S. Translocation of Helicobacter pylori CagA into gastric epithelial cells by type IV secretion / S. Odenbreit, J. Puis, B. Sedlmaier et al. // Science. 2000. - Vol. 287. - P. 1497-1500.

200. Oh, J. D. The complete genome sequence of a chronic atrophic gastritis Helicobacter pylori strain: evolution during disease progression // J. D. Oh, H. Kling-Backhed, M. Giannakis et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2006. - Vol. 103.-P. 9999-10004.

201. Osato, M. S. Pattern of primary resistance of Helicobacter pylori to metronidazole or clarithromycin in the United States / M. S. Osato, R. Reddy, S. G. Reddy et al. // Arch. Intern. Med. 2001. - Vol. 161. - P. 1217-1220.

202. Parsonnet, J. Risk for gastric cancer in people with cagA positive or cagA negative Helicobacter pylori infection / J. Parsonnet, G.D. Friedman, N. Or-entreich, H. Vogelman // Gut. -1997. Vol. 40. - P. 297-301.

203. Parsonnet, J. Fecal and oral shedding of Helicobacter pylori from healthy infected adults / J. Parsonnet, H. Shmuely, T. Haggerty // JAMA. 1999. -Vol. 282.-P. 2240-2245.

204. Passaro, D.J. Growth slowing after acute Helicobacter pylori infection is age-dependent / D. J. Passaro, D. N. Taylor, R. H. Gilman, L. Cabrera, J. Parsonnet // J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 2002. - Vol. 35. - P. 522-526.

205. Patterson, M. M. Helicobacter aurati sp. nov., a urease-positive Helicobacter species cultured from gastrointestinal tissues of Syrian hamsters / M. M. Patterson, M. D. Schrenzel, Y. Feng et al. // J. Clin. Microbiol. 2000. - Vol. 38. - P. 3722-3728.

206. Paziak-Domanska, B. Potential role of CagA in the inhibition of T cell reactivity in Helicobacter pylori infections / B. Paziak-Domanska, M. Chmiela, A. Jarosinska, W. Rudnicka // Cell. Immunol. 2000. - Vol. 202. - P. 136-139.

207. Peek, R. M. Heightened inflammatory response and cytokine expression in vivo to cagA+ Helicobacter pylori strains / R. M. Peek, G. G. Miller, K. T. Tham et al. // Lab. Investig. 1995. - Vol. 73. - P. 760-770.

208. Pelerito, A. Analysis of Helicobacter pylori's penicillin-binding proteins natural polymorphism, therapeutical targets of the family of P-lactam antibiotics / A. Pelerito, M. Oleastro, A. Labigne // Helicobacter. 2003. - Vol. 8. - P. 394.

209. Perez-Perez, G. I. Epidemiology of Helicobacter pylori infection / G. I. Perez-Perez, D. Rothenbacher, H. Brenner // Helicobacter. 2004. - Vol. 9. -Suppl. l.-P. 1-6.

210. Perez-Perez, G. I. Seroprevalence of Helicobacter pylori in New York City populations originating in East Asia / G. I. Perez-Perez, A. Z. Olivares, F. Y. Foo et al. // J. Urban Health. 2005. - Vol. 82. - P. 510-516.

211. Peterson, W.L. Clarithromycin as monotherapy for eradication of Helicobacter pylori: a randomized, double-blind trial / W. L. Peterson, D. Y. Graham, B. Marshall et al. // Am. J. Gastroenterol. 1993. - Vol. 88. - No. 11. -P. 1860-1864.

212. Pilotto, A. Prevalence of Helicobacter pylori resistance to antibiotics in Northeast Italy: a multicentre study. GISU. Interdisciplinary Group for the Study of Ulcer // A. Pilotto, M. Rassu, G. Leandro // Dig. Liver Dis. 2000. -Vol. 32.-P. 763-768.

213. Pounder, R. E. The prevalence of Helicobacter pylori infection in different countries / R. E. Pounder, D. Ng // Aliment. Pharmacol. Ther.- 1995.-Vol.9. P. 33-39.

214. Pretolani, S. Epidemiology / S. Pretolani, R. Bonvicini, G. Gasbarrini // In: Helicobacter pylori. An atlas. Ed. By P. Malrertheiner, P. Michetti, A. Price. -London.- 1997. -P.21-26.

215. Radosz-Komoniewska, H. Pathogenicity of Helicobacter pylori infection / H. Radosz-Komoniewska, Т. Век, J. Jozwiak, G. Martirosian // Clinical Microbiology & Infection. 2005. - Vol.11. - No. 8. - P. 602-610. ,

216. Raymond, J. Genetic and transmission analysis of Helicobacter pylori strains within a family / J. Raymond, J. M. Thiberg, C. Chevalier et al. // Emerg. Infect. Dis. 2004. - Vol. 10.-No. 10.- P. 1816-1821.

217. Scott, D. R. Mechanisms of acid resistance due to the urease system of Helicobacter pylori / D. R. Scott, E. A. Marcus, D. L. Weeks, G. Sachs // Gastroenterology. 2002. - Vol. 123. - P. 187-195.

218. Selbach, M. The Helicobacter pylori CagA protein induces tyrosine dephosphorylation of ezrin / M. Selbach, S. Moese, S. Backert, P. R. Jungblut, T. F. Meyer // Proteomics. 2004. - Vol. 4. - P. 2961-2968.

219. Shames, В. Evidence for the occurrence of the same strain of Campylobacter pylori in the stomach and dental plaque / B. Shames, S. Krajden, M. Fuksa, C. Babida, J. L. Penner// J. Clin. Microbiol. 1989. - Vol. 27. - No. 12. -P. 2849-2850.

220. Shimoyama, T. Bacterial factors and immune pathogenesis in Helicobacter pylori infection / T. Shimoyama, J. E. Crabtree // Gut. 1998. - Vol. 43.-Suppl. l.-P. 2-5.

221. Skirrow, M. B. Campylobacter enteritis: a "new" disease / M. B. Skir-row // Br. Med. J. 1977. - Vol. 2. - P. 9-11.

222. Smith, S. I. Prevalence of Helicobacter pylori vacA, cagA and iceA genotypes in Nigerian patients with duodenal ulcer disease / S. I. Smith, C. Kirsch, K. S. Oyedeji // J. Med. Microbiol. 2002. - Vol. 51. - P. 851-854.

223. Solnick, J. V. Emergence of diverse Helicobacter species in the pathogenesis of gastric and enterohepatic diseases / J. V. Solnick, D. B. Schauer // Clin. Microbiol. Rev. 2001. - Vol. 14. - P. 59-97.

224. Stanley, J. Helicobacter canis sp. nov., a new species from dogs: an integrated study of phenotype and genotype // J. Stanley, A. H. Linton, F. E. Burnens // J. Clin. Microbiol. 1993. - Vol. 139. - P. 2495-2504.

225. Stein, M. Tyrosine phosphorylation of the Helicobacter pylori CagA antigen after cag-driven host cell translocation / M. Stein, R. Rappuoli, A. Co-vacci // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. - Vol.97. - P. 1263-1268.

226. Stingl, К. Acid survival of Helicobacter pylori: how does urease activity trigger cytoplasmic pH homeostasis? / K. Stingl, K. Altendorf, E. P. Bakker // Trends Microbiol. 2002. - Vol. 10. - P. 70-74.

227. Street, M. E. Antibiotic resistance and antibiotic sensitivity based treatment in Helicobacter pylori infection: advantages and outcome / M. E. Street, P. Caruana, C. Caffarelli et al. // Arch. Dis. Child. 2001. - Vol. 84. - No. 5. - P. 419-422.

228. Takahashi, M. Helicobacter pylori infection in patients with idiopathic short stature / M. Takahashi, H. Kimura, K. Watanabe // Pediatr. Intl. -2002. Vol. 44. - P. 277-280.

229. Thomson, L. M. Phylogenetic study of the genus Campylobacter / L. M. Thomson, R. M. Smibert, J. L. Johnson // Int. J. Syst. Bacteriol. 1988. - Vol. 38.-P. 190-193.

230. Tillenburg, B. Helicobacter pylori: pretherapeutic resistance status in Germany (Ruhr area) / B. Tillenburg, S. Siehoff, T. Becker, U. Peitz, G. Borsch, J. Labenz // Z. Gastroenterol. 1997. - Vol. 35. - P. 165-169.

231. Tomb, J. F. The complete genome sequence of the gastric pathogen Helicobacter pylori / J. F. Tomb, O. White, A. R. Kerlavage, R. A. Clayton et al. //Nature. 1997. - Vol. 388 (6642) - P. 539-547.

232. Torres, J. Increasing multidrug resistance in Helicobacter pylori strains isolated from children and adults in Mexico / J. Torres, M. Camorlinga-Ponce, G. Perez-Perez / J. Clin. Microbiol. 2001. - Vol. 39. - P. 2677-80.

233. Trieber, C. A. Mutations in the 16S rRNA genes of Helicobacter pylori mediate resistance to tetracycline / C. A. Trieber, D. E. Taylor // J. Bacterid. 2002.-Vol. 184.-P. 2131-2140.

234. Tsai, C. J. Helicobacter pylori infection in different generations of Hispanics in the San Francisco Bay Area / C. J. Tsai, S. Perry, L. Sanchez, J. Par-sonnet //Am. J. Epidemiol. 2005. Vol. 162. - P. 351-357.

235. Tummuru, M. K. R. Cloning and expression of a high molecular mass major antigen of Helicobacter pylori', evidence of linkage to cytotoxin production / M. K. R. Tummuru, T. L. Cover, M. J. Blaser // Infect. Immun. 1993. - Vol. 61.-P. 1799-1809.

236. Tytgat, G.N.J. Endoscopic transmission of Helicobacter, pylori / G.N.J. Tytgat // Aliment. Pharmacol. Ther. 1995. - Vol. 9. - Suppl. 2. - P. 105110.

237. Tytgat, G.N.J. Treatment of peptic ulcer / G.N.J. Tytgat // Digestion. -1998.-Vol. 59.-P. 446-452.

238. Vincent P. Epidemiologie de Г infection a Helicobacter pylori: quand et comment risque-t-on de sintecter? / P. Vincent // Lett. Infect., microbiol., clin. -1993.-Vol. 8.-No. 5-P. 184-189.

239. Vyas, S. K. Pre-endoscopy screening using serodiagnosis of Helicobacter pylori infection / S. K. Vyas, D. Sharpstone, J. Treasure, D. Fine, P. R. Hawtin // Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 1994 - Vol. 6 - P. 783-785.

240. Wang, J. Negative selection of T cells by Helicobacter pylori as a model for bacterial strain selection by immune evasion / J. Wang, E. G. Brooks, К. B. Bamford et al. // J. Immunol. 2001. - Vol. 167. P. 926-934.

241. Warren, J.R. Unidentified curved bacilli on gastric epithelium in active chronic gastritis / J. R. Warren, B.J. Marshall // Lancet. 1983. - P.1273-1275.

242. Westblom, T. U. Diagnosis of Helicobacter pylori infection in adult and pediatric patients by using pyloriset, a rapid latex agglutination test / T. U. Westblom, E. Madan, S. Gudipati et al. // J. Clin. Microbiol. 1992. -Vol. 30. - P. 96-98.

243. Wu, H. Resistance of Helicobacter pylori to metronidazole, tetracycline and amoxicillin // H. Wu, X. D. Shi, H. T. Wang, J. X. Liu // J. Antimicrob. Chemother. 2000. - Vol. 46. - P. 121-123.

244. Xu, Q. Functional analysis of iceAl, a CATG-recognizing restriction endonuclease gene in Helicobacter pylori / Q. Xu, R. D. Morgan, R. J. Roberts et al. // Nucleic Acids Research. 2002. - Vol. 30. - No. 17. - P.3839-3847.

245. Yamaoka, Y. Molecular epidemiology of Helicobacter pylori: separation of H. pylori from East Asian and non-Asian countries / Y. Yamaoka, M. S. Osato, A. R. Sepulveda et al. // Epidemiol. Infect. 2000. - Vol. 124. - P. 91-96.

246. Young, G. M. A bifunctional urease enhances survival of pathogenic Yersinia enterocolitica and Morganella morganii at low pH / G. M. Young, D. Amid, V.L. Miller//J. Bacteriol. 1996. - Vol.178. - No. 22. - P. 6487-6495.

247. Zhang, Y. Lack of correlation of vacA genotype, cagA gene of Helicobacter pylori and their expression products with various gastroduodenal diseases / Y.Zhang, H.Liu, K. Zhou // Chin. Med. J. 2001. - Vol. 114. - P. 703-706.

248. Zullo, A. Primaiy antibiotic resistance in Helicobacter pylori strains isolated in northern and central Italy / A. Zullo, F. Perna, C. Hassan et al. // Aliment. Pharmacol. Ther. 2007. - Vol. 25. - No. 12. -P. 1429-1434.

Информация о работе

Березняк, Елена Александровна
кандидата биологических наук
Ростов-на-Дону, 2010
ВАК 03.02.03

Диссертация

Особенности штаммов Helicobacter pylori, циркулирующих в Ростовской области, и конструирование антигенного полимерного хеликобактерного диагностикума - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы