Факторы персистенции Helicobacter pylori

Кириллов, Виссарион Арчилович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Факторы персистенции Helicobacter pylori
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Факторы персистенции Helicobacter pylori"

КИРИЛЛОВ ВИССАРИОН АРЧИЛОВИЧ

ФАКТОРЫ ПЕРСИСТЕНЦИИ HELICOBACTER PYLORI

03.00.07 - «Микробиология»

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Оренбург - 2004

Работа выполнена в Институте клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения Российской Академии наук

Научный руководитель: член-корреспондент РАН, академик

РАМН,

доктор медицинских наук, профессор Бухарин Олег Валерьевич

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Карташова Ольга Львовна доктор медицинских наук, профессор Каган Юда Давидович

Ведущая организация: Челябинская государственная медицинская академия

Защита состоится «е&Р» ел-СЛсЛ 2004 г. в « часов на заседании диссертационного совета Д. 208.066.03 при Оренбургской государственной медицинской академии по адресу: 460014, г. Оренбург, ул. Советская 6.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Оренбургской государственной медицинской академии

Автореферат разослан 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук,

профессор Н. В. Немцева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Гастроэнтерологи и исследователи всего мира начали изучать проблему хеликобактериоза с 1983 года, когда австралийскими учеными B.Marshall и J.Warren был впервые описан новый микроорганизм H.pylori (B.Marshall, J.Warren, 1984). За прошедшее время были изучены его свойства, описаны многие звенья патогенеза заболеваний, развивающиеся при инфекции Н. pylori, определены методы диагностики и оптимальные схемы лечения (Marshall В., 2002). Не вызывает сомнения этиологическая роль Н. pylori в механизмах индукции воспаления в слизистой оболочке желудка. Многочисленными исследованиями показана связь между перси-стенцией Н. pylori и риском развития язвенной болезни, аденокар-циномы, В-клеточной мальтомы и хронического гастрита (Соггеа P., 1992,Blaser M. J., 1990, Parsonnet J., 1997).

Однако многие аспекты проблемы хеликобактериоза до настоящего времени недостаточно изучены и освещены. Несмотря на более чем 20 летний период изучения Helicobacter pylori, недостаточно изученным остается вопрос о механизмах персистенции данного микроорганизма в слизистой оболочке желудка и двенадцатиперстной кишки (Бухарин О. В., 2002). Эрадикация Helico-bacter pylori в слизистой оболочке инфицированных лиц представляет собой проблему клинической гастроэнтерологии (Ивашкин В. Т., 1999). Несмотря на достижения современной фармакотерапии, постоянно растет число сообщений о возрастании резистентности этого микроорганизма к антибактериальным препаратам, увеличивается частота рецидивов и реинфекции (Leal-Herrera Y., 2003, Feydt-Schmidt A., 2002, Parsonnet J., 2003). Открытым остается вопрос о влиянии компонентов антибактериальной терапии на феномен персистенции хеликобактерий. Изучение механизмов бактериальной персистенции хеликобактерий может способствовать как раскрытию патогенетических особенностей заболеваний, так и наметить новые подходы к диагностике и лечению этих заболеваний.

Поиску ответов на постай щена пред'

ставленная диссертационная работа.

Цель работы - изучение биологической роли факторов пер-систенции Helicobacter pylori у инфицированных лиц (больных язвенной болезнью и хроническим гастритом) и их использование в бактериологической диагностике хеликобактерной инфекции. Для достижения этой цели поставлены следующие задачи:

1. Изучить механизмы персистенции Н. pylori, ответственные за инактивацию гуморальных факторов неспецифической резистентности макроорганизма и обеспечивающие антагонистические эффекты в биоценозе.

2. Оценить роль факторов персистенции Н. pylori в процессе фагоцитоза полиморфноядерными лейкоцитами.

3. Изучить действие антибактериальных препаратов, компонентов современных схем эрадикационной терапии, на факторы персистенции Н. pylori.

4. Выявить связь биологических свойств Н. pylori с морфологическими изменениями в слизистой оболочке желудка.

5. Разработать методические подходы по улучшению бактериологической диагностики хеликобактерной инфекции.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Персистенция Н. pylori в слизистой оболочке желудка определяется наличием комплекса биологических свойств, ответственных за инактивацию эффекторных механизмов естественного резистентности и обеспечивающих антагонистические эффекты в биоценозе.

2. Признаки хеликобактерий, обеспечивающие противодействие факторам естественной противоинфекционной резистентности, являются информативными маркерами патоморфологических изменений в тканях.

Научная новизна»

Разработан-новый способ бактериологической диагностики хеликобактерной инфекции, основанный на способности лизоцима осуществлять гйдролиз мукополисахаридов слизи в биопсийном

образце, что способствует выходу микроорганизмов в жидкую питательную среду.

Н. pylori обладает комплексом биологических свойств, ответственных за инактивацию механизмов естественной резистентности макроорганизма - антилизоцимной, антикомплементарной и анти-интерцидной активностями. Антилизоцимная и антикомплементарная активности хеликобактерий играют протективную роль в процессе фагоцитоза полиморфноядерными фагоцитами. Гетерогенные штаммы хеликобактерий способны вступать между собой в антагонистические взаимоотношения.

Установлено, что предлагаемые с целью эрадикации хелико-бактерной инфекции антибактериальные препараты разнонаправ-лено действуют на экспрессию персистентных свойств Н. pylori. Метронидазол приводит к повышению уровня антилизоцимной и антикомплементарной активностей выделенных клинических изо-лятов хеликобактерий. Снижение антилизоцимной и антикомплементарной активностей наблюдается при добавлении амоксицил-лина и кларитромицина. Ципрофлоксацин, норфлоксацин, эритромицин и тетрациклин на факторы персистенции хеликобактерий влияния не оказывают.

Антилизоцимная и антикомплементарная активности Н. pylori являются информативными маркерами степени активных воспалительных изменений в слизистой оболочке желудка.

Разработан способ прогнозирования пренеопластических осложнений гастроэзофагеальной рефлюксной болезни, основанный на определении антилизоцимной активности Н. pylori, выделенного со слизистой пищевода (Положительное решение о выдаче патента на изобретение №2003104928/14(005111) от 11.02.2003).

Теоретическая и практическая значимость работы

Впервые оценена роль персистентного потенциала Н. pylori в патогенезе хеликобактерной инфекции. Персистенция возбудителя в слизистой оболочке желудка определяется наличием комплекса биологических свойств, ответственных за инактивацию эффектор-ных механизмов естественной резистентности и обеспечивающих

антагонистические эффекты в биоценозе.

Практическое значение исследования заключается в возможности использования факторов персистенции хеликобактерий в качестве информативных маркеров степени активности воспалительного процесса в слизистой оболочке желудка. Предложен способ прогнозирования пренеопластических осложнений гастроэзо-фагеальной рефлюксной болезни, основанный на определении ан-тилизоцимной активности Н. pylori, выделенного со слизистой пищевода. Способ позволил выявить пренеопластические осложнения гастроэзофагеальной рефлюксной болезни на ранней стадии их проявления при отсутствии клинических симптомов и эндоскопических признаков, провести своевременно дополнительные методы исследования, начать адекватное лечение и предотвратить утяжеление заболевания.

Разработан новый способ бактериологической диагностики хеликобактерной инфекции, основанный на способности лизоцима. осуществлять гидролиз мукополисахаридов слизи в биопсийном образце, что способствует выходу микроорганизмов в жидкую питательную среду. Способ позволил сократить длительность бактериологической диагностики хеликобактерной инфекции, в среднем до 3,5 дней, снизить ее трудоемкость и себестоимость.

Апробация работы

Результаты проведенных исследований доложены XVIII-й Всероссийской конференции с Международным участием «Физиология и патология пищеварения» (Геленджик, 2002), 1-м Всероссийском Съезде Российского общества эндоскопии пищеварительной системы (Москва, 2002), 6-го Московского международного конгресса по эндоскопической хирургии (Москва, 2002), Восьмой Российской Гастроэнтерологической неделе, (Москва, 2002), IV Всероссийской конференции «Персистенция микроорганизмов» (Оренбург, 2003).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ.

Объем и структура диссертационной работы

Диссертация изложена на 141 странице машинописного текста и содержит введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, 3 главы собственных исследований, заключение, выводы, а также указатель литературы, включающий 35 отечественных и 131 зарубежных источника. Иллюстрации представлены 13 таблицами и 23 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

Материалы и методы исследования

Материалом для исследования послужили 156 клинических изолятов Helicobacter pylori, выделенных при проведении фибро-эзофагогастроскопии от 174 пациентов с различной патологией верхнего отдела пищеварительного тракта (гастрит, эзофагит, язвенная болезнь, пищевод Барретта, рак желудка и др.)

Выделение и идентификацию микроорганизмов проводили общепринятыми методами в соответствии с «Рекомендациями по диагностике и лечению инфекции Helicobacter pylori у взрослых при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки» (Москва, 1997). Факторы персистенции изучали по методам; разработанным О. В. Бухариным с соавт. (1984, 1992, 1997). Изучение внутривидового антагонизма Н. pylori проводили путем определения маркеров бактерициногенности и бактерициночувствительно-сти хеликобактерий. Бактериоциногенность исследуемых культур определяли по методу Мюррея - Шервуда (1947; 1949) в модификации Б.Я. Усвяцова (1967). Определение фагоцитарной активности сегментоядерных нейтрофилов в периферической крови проводили по методике Е. А. Кост (1975). Морфологические изменения в биоптатах оценивали с помощью полуколичественного метода с применением визуально-аналоговой шкалы (Аруин Л. И. с соавт, 1998). Полученные результаты обработаны статистическими методами (Лакин Г. Ф., 1990) с использованием программы «Биостатистика».

Результаты исследования и их обсуждение

Современная бактериологическая диагностика хеликобактер-ной инфекции. включает три этапа: транспортировку в бактериологическую лабораторию биоптата, гомогенизацию его, посев и культивирование на селективной питательной среде в микроаэро-фильных условиях в течение 3-7 дней (Murakami К., 2003, Taj Y., 2003). В результате, метод относится к дорогостоящим, трудоемким и не дает возможности ответить на вопрос о наличии Н. pylori ранее, чем через неделю. Это влечет за собой промедление с назначением соответствующей терапии и делает бактериологическую диагностику хеликобактерной инфекции недоступной для практического здравоохранения (Корсунский АЛ. с соавт., 2002). В связи с этим, на первом этапе нами был разработан новый способ бактериологической диагностики хеликобактерий. В способе была использована способность лизоцима осуществлять ферментативную дезинтеграцию мукополисахаридов в биопсийном образце (Бухарин О. В., Васильев Н. В., 1974), что способствовало выходу бактерий из биоптата питательную среду. Для этого биоптаты со слизистой желудка, полученные при проведении фиброэзофагогастроскопии, помещались непосредственно в питательную среду Шедлер-бульон (BBL, США) с добавлением 10% бараньей сыворотки, лизоцима в концентрации 10 мкг/мл и селективной добавки из антибиотиков (амфотерицин-В 10 мг/мл, ванкомицин 10 мг/л, триметоприм 5 мг/мл, сульфометокса-зол 25 мг/мл) и через 48-72 часа культивации в микроаэрофильных условиях учитывался результат посева. Чувствительность предложенного способа существенно не отличалась, и составила 82,4±6,5% при первичной диагностике пилорического хеликобакте-риоза и 80±20% при диагностике эрадикации (таб. 1.). Способ позволил сократить длительность бактериологической диагностики хеликобактерной инфекции в среднем до 3,5 дней, снизить ее трудоемкость и себестоимость.

Таблица 1

Сравнительная характеристика известного и нового способов бактериологической диагностики Н. pylori.

Признак Известный способ Новый способ

Выделение возбудителя из биопсийного образца Механическая Гомогенизация биоптата Ферментативная дезинтеграция мукополисаха-ридов • в биоптате

Этапы диагностики Транспортная. среда, Механическая Гомогенизация Посев Посев •» ч 4

Длительность »5 дней «3,5 дня

Себестоимость* 80 у.е. 43 у.е.'

Чувствительность 85,3±6,1% 82,4±6,5%

Примечание: * - расчет себестоимости проводился с использованием Инструкции по расчету стоимости медицинских услуг (утверждена Минздравом РФ и Российской академией медицинских наук 10 ноября 1999 г. NN 01-23/4-10,01-02/41).

Основу патогенеза хеликобактерной инфекции составляет персистенция микроорганизма в слизистой оболочке желудка (ШrscЫ A. M., 2002). Как известно, основными условиями перси-стенции микроорганизмов в той или иной эконише являются (Бухарин О. В., 1999): состояние их индифферентности к воздействиям внешних факторов физико-химической природы; обеспечение стабильных антагонистических эффектов в биоценозе; сохранение жизнеспособности популяции за счет приобретения устойчивости к защитным механизмам хозяина.

В связи с этим, на следующем этапе у выделенных штаммов

H. pylori определены экспрессия и пенетрантность антилизоцим-ной (АЛА), антиинтерцидной (АИА) и антикомплементарной активностей (АКА), изучен внутривидовой антагонизм хеликобакте-рий. Установлено, что из факторов персистенции наибольшую распространенность среди выделенных клинических изолятов имела АЛА - 85,4±12,5%, антикомплементарная и антиинтерцид-ная активности определялись у 65,4±8,5% и 25,6±6,2% клинических изолятов хеликобактерий соответственно. Средний уровень антилизоцимной активности составил 1,23±0,3 мкг/мл. Средний уровень антиинтерцидной активности составил 1,19±0,2 ед. Антикомплементарная активность у выделенных штаммов хеликобакте-рий в среднем составляла 0,43±0,1 анти-ЛЕК 106/с. Распространенность и экспрессия факторов персистенции Н. pylori согласуются с ранее полученными данными для анаэробных микроорганизмов (Елагина Н. Н., 2000).

Внутривидовую антагонистическую активность проявляли 65±14,5% штаммов Н. pylori. Распространенность бактерициночув-ствительности клинических изолятов Н. pylori составила 84+8,6 %. Средний уровень маркера бактерициногенности изученных клинических изолятов Н. pylori составил 0,33±0,2 ед. Средний уровень маркера бактерициночувствительности клинических изолятов хеликобактерий составил 0,34±0,2 ед. Таким образом, гетерогенные штаммы хеликобактерий способны вступать между собой в антагонистические взаимоотношения, что, по-видимому, способствует персистенции возбудителя, обеспечивая селекцию антагонистически активных штаммов в той или иной экологической нише.

В ходе развития инфекционного процесса в слизистой оболочке желудка хеликобактерий фагоцитируют как профессиональные, так и непрофессиональные фагоциты (Andersen L. P., Blom J., Nielsen H., 1993). Исследования in vitro (Rautelin H., 1994) показали, что Н. pylori обладает способностью выживать внутриклеточно в нейтрофилах, по крайней мере, в течение трех часов (что превышает данные по другим видам бактерий) при условии преобладания количества бактерий над фагоцитами.

По мнению (Hazell S. Т., Evans Jr. D. J., Graham D. Y., 1991), в основе этого феномена лежит способность хеликобактерий синтезировать в окружающую среду ряд протективных экзоферментов -уреазу, каталазу, супероксиддисмутазу, которые подавляют «ней-трофильный кислородный взрыв» (Czinn S. J., Nedrud J. G., 1997). Однако, наряду с кислород-зависимым киллингом микроорганизмов в фаголизосомах полиморфноядерных лейкоцитов, бактерии сталкиваются с эффекторами кислород-независимого киллинга бактерий - лизоцимом и интерцидом. Кроме того, важную роль в процессе фагоцитоза микробных клеток играет система комплемента, активация которой происходит при связывании С1-субъединицы с Fc-фрагментом антител-опсонинов у серопозитивных лиц (Allen L. А., 2001). В связи с этим, нами изучена роль антилизоцимной, антикомплементарной и антиинтерцидной активностей выделенных штаммов Н. pylori в процессе фагоцитоза полиморфноядерными лейкоцитами. Для этого были использованы клоны хеликобактерий по изучаемым признакам. Учитывая роль антител-опсонинов в процессе фагоцитоза хеликобактерий (Кононов А. В., 1999, Тепе-berg S., 2000, Allen L. A., 2001), в работе использовалась кровь пациентов 2-х групп - серонегативных и серопозитивных. Клоны, обладающие антилизоцимной, антикомплементарной активностями, по сравнению с клонами, не инактивирующими лизоцим, комплемент, длительнее находились внутри полиморфноядерных фагоцитов, что проявлялось более высокими значениями ицдексов Гамбургера и Райта спустя 2 часа культивирования внутри нейтро-филов. Наличие антиинтерцидной активности у хеликобактерий на показатели фагоцитоза влияния не оказывало.

Были выявлены различия при использовании в эксперименте серопозитивной и серонегативной крови. Ицдексы Райта и Гамбургера для клонов, обладающих антилизоцимной активностью, по отношению к клонам, не инактивирующим лизоцим, достоверно не отличались как при использовании серопозитивной, так и при се-ронегативной крови. При использовании серопозитивной крови в эксперименте отмечались более высокие значения индексов Райта и Гамбургера для клонов хеликобактерий, обладающих антиком-

плементарной активностью, в отличие от клонов, не инактивирую-ших комплемент (рис. 1). Таким образом, антилизоцимная и антикомплементарная активности хеликобактерий играют протектив-ную роль для хеликобактерий в процессе фагоцитоза полиморф-ноядерными фагоцитами. Выявленные различия уровней индексов Гамбургера и Райта при использовании в эксперименте крови от серонегативных и серопозитивных пациентов расширяют представления о роли антикомплементарной активности хеликобактерий в процессе фагоцитоза полиморфноядерными лейкоцитами.

ш 1 ь 1 *

• 4 t

■

1 Ii*" jp '

ЗОмпн бОмпн 90 мин 120 мин ИАКА - НАКА +

Рис. 1. Влияние антикомплементарной активности Н. pylori на динамику индекса Райта при использовании серопозитивной крови в эксперименте (* - р<0,05).

Метронидазол приводил к повышению уровня антилизоцим-ной и антикомплементарной активностей выделенных клинических

Рис. 2. Влияние метронидазола на факторы персистенции Н. pylori (концентрация антибиотика в среде У2 МПК) (** - р<0,05, * -р<0,01).

Снижение антилизоцимной и антикомплементарной активностей наблюдалось при добавлении амоксициллина и кларитроми-цина (рис. 3). Ципрофлоксацин, норфлоксацин, эритромицин и тетрациклин на факторы персистенции хеликобактерий влияния не оказывали. На экспрессию антиинтерцидной активности все исследованные препараты оказывали индифферентное влияние. Проведенный популяционный анализ факторов персистенции штаммов до и после их взаимодействия с антибактериальными препаратами выявил изменение соотношения клонов в популяции с различным уровнем признака.

Рис. 3. Влияние амоксициллина (А) и кларитромицина (В) на факторы персистенции Н. pylori (концентрация антибиотика в среде1/ МПК) (** - р<0,05, * - р<0,01).

Использование факторов персистенции микроорганизмов в качестве критерия выбора схем антибактериальной терапии при

инфекционно-воспалительных заболеваниях предложено ранее (Челпаченко О. Е., 1993). Было установлено, что использование антибиотиков, в субингибиторных концентрациях подавляющих пер-систентный потенциал возбудителя, приводит к наступлению кли-нико-лабораторной ремиссии у большего числа пациентов с хронической персистирующей инфекцией.

Учитывая высокую изменчивость и генетическую гетерогенность штаммов, значительно затрудняющую типирование хелико-бактерий и проведение эпидемиологического мониторинга анти-биотикорезистентности Н. pylori (Домарадский И. В., 2002), нам представляется наиболее рациональным подбор схемы эрадикаци-онной терапии с учетом подавления персистентного потенциала хеликобактерий.

Доступность слизистой-оболочки желудка для проведения-биопсий при проведении эндоскопического исследования сделало возможным не только выделение и изучение свойств Н. pylori, но и параллельное изучение патоморфологических изменения в биопта-тах. Это позволило выявить среди биологических свойств хелико-бактерий информативные маркеры, отражающие характер и степень морфологических изменений в тканях.

Проведенные исследования. по изучению связи биологических свойств Н. pylori с морфологическими изменениями в био-птатах слизистой желудка выявили дискретный характер изменения свойств хеликобактерий в зависимости от вида патоморфологиче-ского процесса. Усиление активности воспалительных изменений в биоптатах сопровождалось выделением хеликобактерий с более высоким уровнем антилизоцимной и антикомплементарной активностей (рис. 4).

Лимфоплазмоцитарная инфильтрация тканей на персистент-ном потенциале выделяемых штаммов Н. pylori не отражалась -уровни антилизоцимной, антикомплементарной и антиинтерцид-ной активностей хеликобактерий с увеличением степени хронического воспаления не отличались.

Указанные свойства возбудителя. могут использоваться в качестве информативных маркеров степени активности воспали-

тельного процесса в слизистой оболочке желудка. При наличии пренеопластических изменений в биоптатах со слизистой пищевода антилизоцимная активность Н. pylori была ^ 2 мкг/мл.

АЛА АКА АИА

□ I степень И Д степень Р Ш степень

Рис. 4. Связь факторов персистенции Н. pylori со степенью активности воспалительных изменений в биоптатах (степенью полиморфно-ядерной клеточной инфильтрации тканей) (** -р<О,О5,*-р<О,О1).

Эти данные использованы при разработке «Способа диагностики пренеопластических осложнений гастроэзофагеальной реф-люксной болезни», выявляющего пренеопластические осложнения гастроэзофагеальной рефлюксной болезни на ранней стадии их проявления при отсутствии клинических симптомов и эндоскопических признаков. Способ включает проведение фиброэзофагога-строскопии с биопсией, взятие биоптатов со слизистой пищевода дистальнее зубчатой линии. Далее проводят бактериологическое исследование биоптатов на наличие Helicobacter pylori, у выделенной культуры определяют антилизоцимную активность и при уровне выраженности данного признака равном или более 2 мкг/мл диагностируют пренеопластическое осложнение гастроэзофагеаль-ной рефлюксной болезни. Это позволяет провести своевременно

дополнительные методы исследования, начать адекватное лечение и предотвратить утяжеление заболевания.

Оценивая фактический материал в целом, следует выделить два основных момента. Во-первых, персистенция Н. pylori в слизистой оболочке желудка определяется наличием комплекса биологических свойств, ответственных за инактивацию эффекторных механизмов естественной резистентности и обеспечивающих антагонистические эффекты в биоценозе. Во-вторых, признаки хелико-бактерий, обеспечивающие противодействие факторам естественной противоинфекционной резистентности, являются информативными маркерами патоморфологических изменений в тканях.

Выводы:

1. Предложен новый способ бактериологической диагностики хеликобактерной инфекции, основанный на способности лизо-цима осуществлять гидролиз мукополисахаридов слизи в биопсий-ном образце, что способствует выходу микроорганизмов в жидкую питательную среду.

2. Персистенция Н. pylori в слизистой оболочке желудка определяется наличием комплекса биологических свойств, ответственных за инактивацию эффекторных механизмов естественного иммунитета и обеспечивающих антагонистические эффекты в биоценозе.

3. Антилизоцимная и антикомплементарная активности играют протективную роль для хеликобактерий в процессе фагоцитоза полиморфноядерными фагоцитами.

4. Экспериментальная проверка используемых с целью эра-дикации- хеликобактерной инфекции антибактериальных препаратов выявила их разнонаправленное действие на экспрессию перси-стентных свойств возбудителя: метронидазол повышал уровень антилизоцимной и антикомплементарной активностей выделенных клинических изолятов хеликобактерий, амоксициллин и клартиро-мицин снижали персистентные признаки возбудителя мицин, а ци-профлоксацин, норфлоксацин, эритромицин и тетрациклин оказались индифферентны в отношении факторов персистенции хели-

кобактерий.

5. Антилизоцимная и антикомплементарная активности Н. pylori являются информативными маркерами степени активных воспалительных изменений в слизистой оболочке желудка.

6. Предложен способ прогнозирования пренеопластических осложнений гастроэзофагеальной рефлюксной болезни, основанный на определении антилизоцимной активности Н. pylori, выделенного со слизистой пищевода.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Дронова О. Б. Роль Helicobacter pylori в развитии гастроэзофагеальной рефлюксной болезни / О. Б. Дронова, В. А. Кириллов, Ф. Г. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и коло-проктологии. Материалы 7-й Российской гастроэнтерологической недели.- 2001.-№5(прил.).-С. 11.

2. Бухарин О. В. Некоторые механизмы персистенции Helicobacter pylori / О. В. Бухарин, В. А. Кириллов // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. - 2002. - №2. - С. 79-83.

3. Кириллов В. А. Антилизоцимная активность Helicobacter pylori /В. А. Кириллов, О. Б. Дронова // Физиология и патология пищеварения: материалы 18 Всероссийской конференции с международным участием, Геленджик, - 2002. - С. 78.

4. Дронова О. Б. Гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь у детей / О. Б. Дронова, В. А. Кириллов // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. Материалы 8-й Российской гастроэнтерологической недели. - 2002. - №5 (прил. 17). -С. 5.

5. Кириллов В. А. Факторы персистенции Helicobacter pylori / В. А. Кириллов, О. Б. Дронова, О. В. Бухарин // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. - 2003. - №4. - С. 8-11.

Кириллов Виссарион Арчилович

Факторы персистенции Helicobacter pylori

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано в печать 23.04.2003. Формат 60x84/16. Тираж 100 экз. Оригинал-макет изготовлен с помощью текстового редактора Microsoft Word 2003. Гарнитура Таймс. Печать офсетная. Усл. печ. ед. 1,0.

»-9 1 62

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Кириллов, Виссарион Арчилович

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ХАРАКТЕРИСТИКА БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ HELICOBACTER PYLORI (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1. Общая характеристика микроорганизма Helicobacter pylori

1.2. Факторы патогенности Н. pylori

1.2.1. Факторы вирулентности Н. pylori.

1.2.2. Особенности патогенеза хеликобактерной инфекции

1.2.3. Механизмы персистенции Helicobacter pylori

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Характеристика культур микроорганизмов

2.2. Методы выделения и идентификации Helicobacter pylori

2.3. Методы определения факторов персистенции Н. pylori

2.3.1. Определение антилизоцимной активности хеликобактерий

2.3.2. Определение антиинтерцидной («антиинтерфероновой») активности хеликобактерий

2.3.3. Определение антикомплементарной активности хеликобактерий

2.4. Метод изучения внутривидового антагонизма Helicobacter pylori

2.5. Метод получения изогенных клонов Н. pylori по изучаемому признаку

2.6. Метод изучения влияния факторов персистенции Н. pylori на фагоцитоз полиморфноядерными лейкоцитами

2.7. Определение чувствительности Н. pylori к антибиотикам

2.8. Метод определения влияния антибиотиков на факторы персистенции Н. pylori

2.9. Статистическая обработка результатов

ГЛАВА 3. СПОСОБ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ХЕ-ЛИКОБАКТЕРНОЙ ИНФЕКЦИИ

ГЛАВА 4. ФАКТОРЫ ПЕРСИСТЕНЦИИ HELICOBACTER PYLORI

4.1. Способность Н. pylori к инактивации факторов естественной резистентности макроорганизма

4.2. Внутривидовой антагонизм Н. pylori

4.3. Роль факторов персистенции Н. pylori в процессе фагоцитоза полиморфноядерными лейкоцитами

4.4. Регуляция факторов персистенции Н. pylori антибактериальными препаратами

ГЛАВА 5. СВЯЗЬ ФАКТОРОВ ПЕРСИСТЕНЦИИ Н. PYLORI С ПАТО

МОРФОЛОГИЧЕСКИМИ ИЗМЕНЕНИЯМИ В ТКАНЯХ

5.1. Связь биологических свойств Н. pylori с воспалительными изменениями в тканях

5.2. Связь биологических свойств Н. pylori с пренеопластическими изменениями в тканях

5.3. Разработка способа прогнозирования пренеопластических осложнений гастроэзофагеальной рефлюксной болезни

Введение Диссертация по биологии, на тему "Факторы персистенции Helicobacter pylori"

Актуальность проблемы

Ведущее место среди гастродуоденальной патологии в настоящее время занимают болезни органов пищеварения, ассоциированные с инфекцией Helicobacter pylori [24]. Гастроэнтерологи и исследователи всего мира начали изучать проблему хеликобактериоза с 1983 года, когда австралийскими учеными B.Marshall и J.Warren был впервые описан новый микроорганизм H.pylori [120]. За прошедшее время были изучены его свойства, описаны многие звенья патогенеза заболеваний, развивающиеся при инфекции Н. pylori, определены методы диагностики и оптимальные схемы лечения [119]. Не вызывает сомнения этиологическая роль Н. pylori в механизмах индукции воспаления в слизистой оболочке желудка. Многочисленными исследованиями показана связь между персистенцией Н. pylori и риском развития язвенной болезни, аденокарцино-мы, В-клеточной мальтомы и хронического гастрита [67, 57, 141].

Однако многие аспекты проблемы хеликобактериоза до настоящего времени недостаточно изучены и освещены. Несмотря на более чем 20 летний период изучения Helicobacter pylori, недостаточно изученным остается вопрос о механизмах персистенции данного микроорганизма в слизистой оболочке желудка и двенадцатиперстной кишки. Как известно, основными условиями персистенции микроорганизмов в той или иной эконише являются: состояние их индифферентности к воздействиям внешних факторов физико-химической природы; обеспечение стабильных антагонистических эффектов в биоценозе; сохранение жизнеспособности популяции за счет приобретения устойчивости к защитным механизмам хозяина [9]. Описана способность хеликобактерий противостоять действию соляной кислоты в слизистой оболочке желудка за счет продукции уреазы, обеспечивающей гидролиз мочевины с образованием аммиака, и наличия униполярно расположенных жгутиков, обеспечивающих подвижность микроорганизма [73, 89]. Неисследованными остаются вопросы межклеточного взаимодействия Н. pylori в биоценозе и способность инакти-вировать гуморальные факторы естественной резистентности хозяина.

Одной из проблем клинической гастроэнтерологии является эрадикация Helicobacter pylori в слизистой оболочке инфицированных лиц [20]. Несмотря на достижения современной фармакотерапии, постоянно растет число сообщений о возрастании резистентности этого микроорганизма к антибактериальным препаратам, увеличивается частота рецидивов и реинфекции [112, 80, 140]. Открытым остается вопрос о влиянии компонентов антибактериальной терапии на феномен персистенции хеликобактерий.

Изучение механизмов бактериальной персистенции хеликобактерий может способствовать как раскрытию патогенетических особенностей заболеваний, где Н. pylori принадлежит ведущая роль, так и наметить новые подходы к диагностике и лечению этих заболеваний.

Поиску ответов на поставленные вопросы посвящена представленная диссертационная работа.

Цель и задачи исследования

Цель работы - изучение биологической роли факторов персистенции Helicobacter pylori у инфицированных лиц (больных язвенной болезнью и хроническим гастритом) и их использование в бактериологической диагностике хеликобактерной инфекции.

Для достижения этой цели поставлены следующие задачи:

2. Оценить роль факторов персистенции Н. pylori в процессе фагоцитоза полиморфноядерными лейкоцитами.

4. Выявить связь биологических свойств Н. pylori с морфологическими изменениями в слизистой оболочке желудка.

5. Разработать методические подходы по улучшению бактериологической диагностики хеликобактерной инфекции.

Научная новизна

Н. pylori обладает комплексом биологических свойств, ответственных за инактивацию механизмов естественной резистентности макроорганизма - ан-тилизоцимной, антикомплементарной и антиинтерцидной активностями. Ан-тилизоцимная и антикомплементарная активности играют протективную роль для хеликобактерий в процессе фагоцитоза полиморфноядерными фагоцитами.

Гетерогенные штаммы хеликобактерий способны вступать между собой в антагонистические взаимоотношения.

Установлено, что предлагаемые с целью эрадикации хеликобактерной инфекции антибактериальные препараты разнонаправлено действуют на экспрессию персистентных свойств Н. pylori. Метронидазол приводит к повышению уровня антилизоцимной и антикомплементарной активностей выделенных клинических изолятов хеликобактерий. Снижение антилизоцимной и антикомплементарной активностей наблюдается при добавлении амоксициллина и кларит-ромицина. Ципрофлоксацин, норфлоксацин, эритромицин и тетрациклин на факторы персистенции хеликобактерий влияния не оказывают.

Разработан способ прогнозирования пренеопластических осложнений га-строэзофагеальной рефлюксной болезни, основанный на определении антилизоцимной активности Н. pylori, выделенного со слизистой пищевода (Положительное решение о выдаче патента на изобретение №2003104928/14(005111) от 11.02.2003).

Практическая ценность

Впервые оценена роль персистентного потенциала Н. pylori в патогенезе хеликобактерной инфекции. Персистенция возбудителя в слизистой оболочке желудка определяется наличием комплекса биологических свойств, ответственных за инактивацию эффекторных механизмов естественной резистентности и обеспечивающих антагонистические эффекты в биоценозе.

Практическое значение исследования заключается в возможности использования факторов персистенции хеликобактерий в качестве информативных маркеров степени выраженности инфекционного процесса. Предложен способ прогнозирования пренеопластических осложнений гастроэзофагеальной реф-люксной болезни, основанный на определении антилизоцимной активности Н. pylori, выделенного со слизистой пищевода. Способ позволил выявить пре-неопластические осложнения гастроэзофагеальной рефлюксной болезни на ранней стадии их проявления при отсутствии клинических симптомов и эндоскопических признаков, провести своевременно дополнительные методы исследования, начать адекватное лечение и предотвратить утяжеление заболевания.

Разработан новый способ бактериологической диагностики хеликобактерной инфекции, основанный на способности лизоцима осуществлять гидролиз мукополисахаридов слизи в биопсийном образце, способствуя выходу микроорганизмов в жидкую питательную среду. Способ позволил сократить длительность бактериологической диагностики хеликобактерной инфекции в среднем до 3,5 дней, снизить ее трудоемкость и себестоимость.

Положения, выносимые на защиту

1. Персистенция Н. pylori в слизистой оболочке желудка определяется наличием комплекса биологических свойств, ответственных за инактивацию эффекторных механизмов естественной резистентности и обеспечивающих антагонистические эффекты в биоценозе.

Апробация работы

Публикации

По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ, получено Положительное решение о выдаче патента на изобретение №2003104928/14(005111) от 11.02.2003 «Способ диагностики пренеопластических осложнений гастроэзофа-геальной рефлюксной болезни».

Объем и структура диссертационной работы

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Кириллов, Виссарион Арчилович

ВЫВОДЫ:

1. Персистенция Н. pylori в слизистой оболочке желудка определяется наличием комплекса биологических свойств, ответственных за инактивацию эф-фекторных механизмов естественного иммунитета и обеспечивающих антагонистические эффекты в биоценозе.

2. Антилизоцимная и антикомплементарная активности играют протективную роль для хеликобактерий в процессе фагоцитоза полиморфноядерными фагоцитами.

3. Экспериментальная проверка используемых с целью эрадикации хеликобактерной инфекции антибактериальных препаратов выявила их разнонаправленное действие на экспрессию персистентных свойств возбудителя: метронидазол повышал уровень антилизоцимной и антикомплементарной активностей выделенных клинических изолятов хеликобактерий, амоксициллин и клартиромицин снижали персистентные признаки возбудителя ми-цин, а ципрофлоксацин, норфлоксацин, эритромицин и тетрациклин оказались индифферентны в отношении факторов персистенции хеликобактерий.

4. Антилизоцимная и антикомплементарная активности Н. pylori являются информативными маркерами степени активных воспалительных изменений в слизистой оболочке желудка.

5. Разработан новый способ бактериологической диагностики хеликобактерной инфекции, основанный на способности лизоцима осуществлять гидролиз мукополисахаридов слизи в биопсийном образце, способствуя выходу микроорганизмов в жидкую питательную среду.

6. Разработан способ прогнозирования пренеопластических осложнений гастроэзофагеальной рефлюксной болезни, основанный на определении антилизоцимной активности Н. pylori, выделенного со слизистой пищевода.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Гастроэнтерологи и исследователи всего мира начали изучать проблему хеликобактериоза с 1983 года, когда австралийскими учеными B.Marshall и J.Warren был впервые описан новый микроорганизм H.pylori [120]. За прошедшее время были изучены его свойства, описаны многие звенья патогенеза заболеваний, развивающиеся при инфекции H.pylori, определены методы диагностики и оптимальные схемы лечения. Не вызывает сомнения этиологическая роль Н. pylori в механизмах индукции воспаления в слизистой оболочке желудка. Многочисленными исследованиями показана связь между персистенци-ей Н. pylori и риском развития язвенной болезни, аденокар-циномы, В-клеточной мальтомы и хронического гастрита [67, 57,141].

Однако многие аспекты проблемы хеликобактериоза до настоящего времени недостаточно изучены и освещены. Несмотря на более чем 20 летний период изучения Helicobacter pylori, недостаточно изученным остается вопрос о механизмах персистенции данного микроорганизма в слизистой оболочке желудка и двенадцатиперстной кишки [11]. Эрадикация Helicobacter pylori в слизистой оболочке инфицированных лиц представляет собой проблему клинической гастроэнтерологии [20]. Несмотря на достижения современной фармакотерапии, постоянно растет число сообщений о возрастании резистентности этого микроорганизма к антибактериальным препаратам, увеличивается частота рецидивов и реинфекции [112, 80, 140]. Открытым остается вопрос о влиянии компонентов антибактериальной терапии на феномен персистенции хеликобактерий. Изучение механизмов бактериальной персистенции хеликобактерий может способствовать как раскрытию патогенетических особенностей заболеваний, так и наметить новые подходы к диагностике и лечению этих заболеваний.

Целью настоящей работы явилось изучение биологической роли факторов персистенции Helicobacter pylori у инфицированных лиц (больных язвенной болезнью и хроническим гастритом) и их использование в бактериологической диагностике и лечении хеликобактерной инфекции.

Для достижения этой цели были поставлены и решены следующие задачи: разработан новый способ бактериологической диагностики хеликобактерной инфекции. Изучены механизмы персистенции Н. pylori, ответственные за инактивацию гуморальных факторов неспецифической резистентности макроорганизма и обеспечивающие антагонистические эффекты в биоценозе. Оценена роль факторов персистенции Н. pylori в процессе фагоцитоза полиморф-ноядерными лейкоцитами. Изучено действие антибактериальных препаратов -компонентов современных схем эрадикационной терапии, на факторы персистенции Н. pylori. Исследована связь факторов персистенции хеликобактерий с морфологическими изменениями в слизистой оболочке желудка и разработан способ диагностики пренеопластических осложнений гастроэзофагеальной рефлюксной болезни, основанный на уровне антилизоцимного признака хеликобактерий, выделенных со слизистой пищевода.

Материалом для исследования послужили 156 клинических изолятов Helicobacter pylori, выделенных при проведении фиброэзофагогастроскопии от 174 пациентов с различной патологией верхнего отдела пищеварительного тракта (гастрит, эзофагит, язвенная болезнь, пищевод Барретта, рак желудка и др.)

Выделение и идентификацию микроорганизмов проводили общепринятыми методами в соответствии с «Рекомендациями по диагностике и лечению инфекции Helicobacter pylori у взрослых при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки» (Москва, 1997). Факторы персистенции изучали по методам, разработанным О. В. Бухариным с соавт. [8, 12, 13]. Изучение внутривидового антагонизма Н. pylori проводили путем определения маркеров бакте-рициногенности и бактерициночувствительности хеликобактерий. Бактерио-циногенность исследуемых культур определяли по методу Мюррея - Шервуда в модификации Б.Я. Усвяцова. Определение фагоцитарной активности сег-ментоядерных нейтрофилов в периферической крови проводили по методике Е. А. Кост [25]. Морфологические изменения в биоптатах оценивали с помощью полуколичественного метода с применением визуально-аналоговой шкалы [2]. Полученные результаты обработаны статистическими методами [14, 29].

Современная бактериологическая диагностика хеликобактерной инфекции включает три этапа: транспортировку в бактериологическую лабораторию биоптата, гомогенизацию его, посев и культивирование на селективной питательной среде в микроаэрофильных условиях в течение 3-7 дней [132, 155]. В результате, метод относится к дорогостоящим, трудоемким и не дает возможности ответить на вопрос о наличии Н. pylori ранее, чем через неделю. Это влечет за собой промедление с назначением соответствующей терапии и делает л бактериологическую диагностику хеликобактерной инфекции недоступной для практического здравоохранения [24]. В связи с этим, на первом этапе нами был разработан новый способ бактериологической диагностики хеликобактерий. В способе была использована способность лизоцима осуществлять ферментативную дезинтеграцию мукополисахаридов в биопсийном образце [10], что способствовало выходу бактерий из биоптата питательную среду. Для этого биоптаты со слизистой желудка, полученные при проведении фиброэзофагогастроскопии, помещались непосредственно в питательную среду Шедлер-бульон (BBL, США) с добавлением 10% бараньей сыворотки, лизоцима в концентрации 10 мкг/мл и селективной добавки из антибиотиков (амфотерицин-В 10 мг/мл, ванкомицин 10 мг/л, триметоприм 5 мг/мл, сульфометоксазол 25 мг/мл) и через 48-72 часа культивации в микроаэрофильных условиях учитывался результат посева. Чувствительность предложенного способа существенно не отличалась и составила 82,4±6,5% при первичной диагностике пилорического хеликобактериоза и 80±20% при диагностике эрадикации. Способ позволил сократить длительность бактериологической диагностики хеликобактерной инфекции в среднем до 3,5 дней, снизить ее трудоемкость и себестоимость.

Основу патогенеза хеликобактерной инфекции составляет персистенция микроорганизма в слизистой оболочке желудка [101]. Как известно, основными условиями персистенции микроорганизмов в той или иной эконише являются: состояние их индифферентности к воздействиям внешних факторов физико-химической природы; обеспечение стабильных антагонистических эффектов в биоценозе; сохранение жизнеспособности популяции за счет приобретения устойчивости к защитным механизмам хозяина [9]. По данным Josenhans С. с соавт. [106] хеликобактерии способны противостоять действию соляной кислоты в слизистой оболочке желудка за счет продукции уреазы, обеспечивающей гидролиз мочевины с образованием аммиака, и наличия униполярно расположенных жгутиков, обеспечивающих подвижность микроорганизма. Неисследованными остаются вопросы межклеточного взаимодействия Н. pylori в биоценозе и способность инактивировать гуморальные факторы естественной резистентности хозяина.

В связи с этим, на следующем этапе у выделенных штаммов Н. pylori определены экспрессия и пенетрантность антилизоцимной, антиинтерцидной и I антикомплементарной активностей, изучен внутривидовой антагонизм хеликобактерий. Установлено, что из факторов персистенции наибольшую распространенность среди выделенных клинических изолятов имела АЛА - 85,4%, антикомплементарная и антиинтерцидная активности определялись у 65% и 25,6% клинических изолятов хеликобактерий соответственно. Средний уровень антилизоцимной активности составил 1,23±0,3 мкг/мл. Средний уровень антиинтерцидной активности составил 1,19±0,2 ед. Антикомплементарная активность у выделенных штаммов хеликобактерий в среднем составляла 0,43±0,1 анти-ЛЕК 106/с. Распространенность и экспрессия факторов персистенции Н. pylori согласуются с ранее полученными данными для анаэробных микроорганизмов [19].

Внутривидовую антагонистическую активность проявляли 65±14,5% штаммов Н. pylori. Распространенность бактерициночувствительности клинических изолятов Н. pylori составила 84±8,6 %. Средний уровень маркера бакте-рициногенности изученных клинических изолятов Н. pylori составил 0,33±0,2 ед. Средний уровень маркера бактерициночувствительности клинических изолятов хеликобактерий составил 0,34±0,2 ед. Таким образом, гетерогенные штаммы хеликобактерий способны вступать между собой в антагонистические взаимоотношения, что, по-видимому, способствует персистенции возбудителя, обеспечивая селекцию антагонистически активных штаммов в той или иной экологической нише.

В ходе развития инфекционного процесса в слизистой оболочке желудка хеликобактерии фагоцитируют как профессиональные, так и непрофессиональные фагоциты [45]. Исследования in vitro [148] показали, что Н. pylori обладает способностью выживать внутриклеточно в нейтрофилах, по крайней мере, в течение трех часов (что превышает данные по другим видам бактерий) при условии преобладания количества бактерий над фагоцитами. По мнению Hazell S. Т. с соавт. [98], в основе этого феномена лежит способность хеликобактерий синтезировать в окружающую среду ряд протективных экзоферментов - уреазу, каталазу, супероксиддисмутазу, которые подавляют «нейтрофильный кислородный взрыв» [69]. Однако, наряду с кислород-зависимым киллингом микроорганизмов в фаголизосомах полиморфноядерных лейкоцитов, бактерии сталкиваются с эффекторами кислород-независимого киллинга бактерий — лизоци-мом и интерцидом. Кроме того, важную роль в процессе фагоцитоза микробI ных клеток играет система комплемента, активация которой происходит при связывании С1-субъединицы с Fc-фрагментом антител-опсонинов у серопози-тивных лиц [40,41]. В связи с этим, нами изучена роль антилизоцимной, антикомплементарной и антиинтерцидной активностей выделенных штаммов Н. pylori в процессе фагоцитоза полиморфноядерными лейкоцитами. Для этого были использованы клоны хеликобактерий по изучаемым признакам. Учитывая роль антител-опсонинов в процессе фагоцитоза хеликобактерий [22, 157, 41], в работе использовалась кровь пациентов 2-х групп - серонегативных и серопозитивных. Клоны, обладающие антилизоцимной, антикомплементарной активностями, по сравнению с клонами, не инактивирующими лизоцим, комплемент, длительнее находились внутри полиморфноядерных фагоцитов, что проявлялось более высокими значениями индексов Гамбургера и Райта через 2 часа культивирования внутри нейтрофилов. Наличие антиинтерцидной активности у хеликобактерий на показатели фагоцитоза влияния не оказывало. Были выявлены различия при использовании в эксперименте серопозитивной и серонегативной крови. Индексы Райта и Гамбургера для клонов, обладающих антилизоцимной активностью, по отношению к клонам, не инактивирующим лиi зоцим, достоверно не отличались как при использовании серопозитивной, так и при серонегативной крови. При использовании серопозитивной крови в эксперименте спустя 2 часа культиврования внутри нейтрофилов отмечались более высокие значения индексов Райта и Гамбургера для клонов хеликобактерий, обладающих антикомплементарной активностью, в отличие от клонов, не инактивирующих комплемент. Таким образом, антилизоцимная и антикомплементарная активности хеликобактерий играют протективную роль в процессе фагоцитоза полиморфноядерными фагоцитами. Выявленные различия при использовании в эксперименте крови от серонегативных и серопозитивных пациентов расширяют представления о роли секреторных факторов персистенции хеликобактерий в процессе фагоцитоза полиморфноядерными лейкоцитами. i

Определение влияния антибактериальных препаратов, входящих в состав современных схем эрадикационной терапии, на факторы персистенции Н. pylori, позволило распределить антибактериальные препараты на 3 группы по характеру их влияния на факторы персистенции — повышающие, снижающие и индифферентные. Метронидазол приводил к повышению уровня антилизоцимной и антикомплементарной активностей выделенных клинических изолятов хеликобактерий. Снижение антилизоцимной и антикомплементарной активностей наблюдалось при добавлении амоксициллина и кларитромицина. Ципрофлоксацин, норфлоксацин, эритромицин и тетрациклин на факторы персистенции хеликобактерий влияния не оказывали. На экспрессию антиинтерцидной активности все исследованные препараты оказывали индифферентное влияние. Проведенный пОпуляционный анализ факторов персистенции штаммов до и после их взаимодействия с антибактериальными препаратами выявил изменение соотношения клонов в популяции с различным уровнем признака. Использование факторов персистенции микроорганизмов в качестве критерия выбора схем антибактериальной терапии при инфекционно-воспалительных заболеваниях предложено ранее [9, 35]. Было установлено, что использование антибиотиков, в субингибиторных концентрациях подавляющих персистент-ный потенциал возбудителя, приводит к наступлению клинико-лабораторной ремиссии у большего числа пациентов с хронической персистирующей инфекцией [35]. Учитывая высокую изменчивость и генетическую гетерогенность штаммов, значительно затрудняющую типирование хеликобактерий и проведение эпидемиологического мониторинга антибиотикорезистентности Н. pylori [18], нам представляется наиболее рациональным подбор схемы эрадикацион-ной терапии с учетом подавления персистентного потенциала хеликобактерий.

Доступность слизистой оболочки желудка для проведения биопсий при проведении эндоскопического исследования сделало возможным не только выделение и изучение свойств Н. pylori, но и параллельное изучение патоморфо-логических изменения в биоптатах. Это позволило выявить среди биологических свойств хеликобактерий информативные маркеры, отражающие характер и степень морфологических изменений в тканях. Проведенные исследования по изучению связи биологических свойств Н. pylori с морфологическими изменениями в биоптатах слизистой желудка выявили дискретный характер изменения свойств хеликобактерий в зависимости от характера патоморфологи-ческого процесса. Усиление активности воспалительных изменений в биоптатах сопровождалось выделением хеликобактерий с более высоким уровнем антилизоцимной и антикомплементарной активностей. Лимфоплазмоцитарная инфильтрация тканей на персистентном потенциале выделяемых штаммов Н. pylori не отражалась - уровни антилизоцимной, антикомплементарной и анти-интерцидной активностей хеликобактерий с увеличением степени хронического воспаления не отличались. Указанные свойства возбудителя могут использоваться в качестве информативных маркеров степени выраженности инфекционного процесса. При наличии пренеопластических изменений в биоптатах со слизистой пищевода антилизоцимная активность Н. pylori была > 2 мкг/мл. Эти данные использованы при разработке «Способа диагностики пренеопластических осложнений гастроэзофагеальной рефлюксной болезни», выявляющего пренеопластйческие осложнения гастроэзофагеальной рефлюксной болезни на ранней стадии их проявления при отсутствии клинических симптомов и эндоскопических признаков. Это позволяет провести своевременно дополнительные методы исследования, начать адекватное лечение и предотвратить утяжеление заболевания. t

Оценивая фактический материал в целом, следует выделить два основных момента. Во-первых, персистенция Н. pylori в слизистой оболочке желудка опi ределяется наличием комплекса биологических свойств, ответственных за инактивацию эффекторных механизмов естественного иммунитета и обеспечивающих антагонистические эффекты в биоценозе. Во-вторых, признаки хеликобактерий, обеспечивающие противодействие факторам естественной проти-воинфекционной резистентности, являются информативными маркерами па-томорфологических изменений в тканях. Эти данные использованы при разработке «Способа диагностики пренеопластических осложнений гастроэзофагеальной рефлюксной болезни», выявляющего пренеопластические осложнения гастроэзофагеальной рефлюксной болезни на ранней стадии их проявления при отсутствии клинических симптомов и эндоскопических признаков.

124

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Кириллов, Виссарион Арчилович, Оренбург

1. Аруин Л. И. Апоптоз в механизме поражений желудка, обусловленных Helicobacter pylori // Helicobacter pylori: революция в гастроэнтерологии/ Род ред. Ивашкина В. Т., Мегро Ф., Лапиной Т. Л. М.: Триада-Х, 1999. -С. 54-61.

2. Аруин Л. И. и др. Морфологическая диагностика болезней желудка и кишечника / Капулер Л. Л., Исаков В. А. М.: Триада-Х, Москва, 1998. -180с.

3. Андерсен Л., Норгаард А., Беннедсен М. Клеточный иммунный ответ организма на инфекцию Helicobacter pylori // Рос. журн. гастроэнтерол., гепа-тол., колопроктол. 1999. - №2. - С. 22-26.

4. Беляков И. М. Иммунная система слизистых // Иммунология. 1997. - №4.- С. 7-12.

5. Бигон М. И др. Экология. Особи, популяции и сообщества: Пер.с англ. / Харпер Дж., Таунсенд К. М.: Мир, 1989 - с. 118-121.

6. Биргер М. О. Справочник по микробиологическим и вирусологическимметодам исследования. М.: Медицина, 1982. - 464 с.

7. Бондаренко В. М., Червинец В. М., Воробьев А. А. Роль персистирующих условно-патогенных бактерий в патогенезе язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки // Журн. микробиол., эпидемиол., имунобиол. 2003. -№4.-С. 11-17.

8. Брудастов Ю.А. Антикомплементарная активность бактерий: Автореф. дис. канд. мед. наук. Челябинск, 1992. - 24с.

9. Бухарин О. В. Персистенция патогенных бактерий. М.: Медицина, 1999. -365 с.

10. Бухарин О. В., Васильев Н. В. Лизоцим и его роль в биологии и медицине.- Томск, 1974.- 210с.

11. Бухарин О. В., Кириллов В. А. Некоторые механизмы персистенции Helicobacter pylori // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2002. -№2. - С. 79-83.

12. Бухарин О. В, Соколов В. Ю. Способ определения антиинтерфероновой активности микроорганизмов. А. с. СССР № 1564191 // Открытия. 1990. -№ 18.

13. Бухарин О. В., Усвяцов Б. Я., Малышкин А. П., Немцева Н. В. Метод опIределения антилизоцимной активности микроорганизмов. Журнал микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1984. - №2. - С. 27-28.

14. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М.: Практика. - 1998. - 459с.

15. Годжелло Э. А. Пищевод Баррета: эндоскопическая диагностика, стратегия наблюдения и лечения // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. -2002.-№5.-с. 67-71.

16. Диагностика и лечение инфекции Helicobacter pylori: современные представления. Доклад Второй конференции по принятию консенсуса в Маах-стрихте 21-22 сентября 2000 года // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. 2000. - №6. - С. 7-9.

17. Домарадский И. В. Вопросы патогенности Helicobacter pylori // IX тематическая сессия Российской группы по изучению Helicobacter pylori: Тез. докл. Саратов, 2000. - С. 8-13.

18. Домарадский И. В. Молекулярно-биологические основы изменчивости Helicobacter pylori // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2002. - №3. - С. 79-84.

19. Елагина Н. Н. Факторы персистенции неспорообразующей анаэробной микрофлоры кишечника человека: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Оренбург, 2000. 24 с.

20. Ивашкин В. Т. и др. Helicobacter pylori: революция в гастроэнтерологии / Мегро Ф., Лапина Т. Л. М.: Триада-Х, 1999. - С.11.

21. Кишкун А. А. Современные методы диагностики и оценки эффективности1лечения инфекции Helicobacter pylori (литературный обзор) // Клин, лабо-раторн. диагностика. 2002. - № 8. - С. 6-9.

22. Кононов А. В. Местный иммунный ответ на инфекцию Helicobacter pylori // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. 1999. - №2. — С. 1522.

23. Коровина Н. А., Спирина Т. С., Левицкая С. В. с соавт. Эндоскопические и микробиологические параллели при гастродуоденальном кампилобакте-риозе // Патология системы пищеварения, М., - 1988. - С. 27-32.

24. Корсунский А. А. и др. Хеликобактериоз и болезни органов пищеварения у детей / Щербаков П. Л., Исаков В. А. М.: Медпрактика-М, 2002. - 168с.

25. Кост Е.А. Справочник по клиническим лабораторным методам исследования. -М., «Медицина», 1985. 383 с.

26. Кубышкин В. А., Корняк Б. С. Гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь. -М.: Спрос, 1999.-95 с.

27. Кудрявцева Л. В., Исаков В. А, Щербаков П. Л. с соавт. Динамика резистентности штаммов Helicobacter pylori к антибиотикам у городского населения России // Росс. журн. гастроэнтерол., гепатолог., колопроктол. — 1999.-№4.-С. 66-69.

28. Кэбот Е., Мейер М. Экспериментальнгая иммунохимия. М.: Мир, 1698. — С. 140-246.

29. Лакин Г. Ф. Биометрия. М.: Высш. шк., 1990. — 352с.

30. Лыкова Е. А., Бондаренко В. М., Сидоренко С. В. с соавт. Комбинированная антибактериальная и пробиотическая терапия Helicobacter pylori-ассоциированных заболеваний у детей // Журн. микробиол. эпидемиол. и иммунобиол. 1999. - №2. - С. 76-81.

31. Моминалиев К. Т., Смирнова О .В., Кудрявцева Л. В. с соавт. Сравнительный анализ геномов штаммов Helicobacter pylori // Мол. Биол. 2003. -№4.-С. 625-633.

32. Пасечников В. Д., Чуков С. 3. Значение геномной гетерогенности штаммов Helicobacter pylori в развитии ассоциированной патологии гастродуоде-нальной зоны // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. 2000. -№3.-С. 7-11.

33. Трухманов А. С. Пищевод Баррета: эпидемиология, патогенез, клиническое течение и профилактика // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. 2002. - №5. - С. 59-62.

34. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Иммунная система и заболевания желудочно-кишечного тракта // Вестн. РАМН. 1997. - № 11. - С. 13-17.

35. Челпаченко О. Е. Экспериментальное обоснование рациональной терапии пиелонефрита у детей под контролем маркеров персистенции возбудителя. Автореф. . дисс. канд. мед. Наук . Челябинск, 1993. - 22 с.

36. Ackermark P., Kuipers Е. J., Wolf С. et al. Colonization with cagA-positive Helicobacter pylori strains in intestinal metaplasia of the esophagus and the esophagogastric junction // Am. J. Gastroenterol. 2003. - №98(8). - P. 17191724.

37. Adler G. Evaluation of gene expression for cag A in strains of Helicobacter pylori colonizing gastric mucosa // Ann. Acad. Med. Stetin. 2000. -№46. - P. 87-96.

38. Adrian A. L., Тег H. C., Cassidi M. J. et al. High resolution endoluminal sonography is a sensitive modality for the identification of Barrett's metaplasia // Gastrointest. Endoscopy, 1997. Vol. 46. - P. 147-151.

39. Albertson N., Wenngren I., Sjoestroem J. E. Growth and survival of Helicobat-cer pylori in defined medium and susceptibility to Brij 78 // J. Clin. Microbiol. -1998.-№36.-P. 1232-1235.

40. Allen L. A. The role of the neutrophil and phagocytosis in infection caused by Helicobacter pylori // Curr. Opin. Infect. Dis. 2001. - №14(3). - P. 273-277.

41. Allen L. A. Mechanisms of pathogenesis: evasion of killing by polymorphonuclear leukocytes // Microbes Infect. 2003. - №5( 14). - P.1329- 1335.

42. Allen L. A., Allgood J. A. Atypical protein kinase C-zeta is essential for delayed phagocytosis of Helicobacter pylori // Curr. Biol. 2002. - №12(20). - P. 17621766.

43. Amsterdam K., van Vliet A. H., Kusters J. G. et al. Induced Helicobacter pylori vacuolating cytotoxin VacA expression after initial colonisation of human gastric epithelial cells // FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2003. - №39(3). - P. 251-256.

44. Andersen L. P., Blom J., Nielsen H. Survival and ultrastructural changes of Helicobacter pylori after phagocytosis by human polymorphonuclear leukocytes and monocytes // Apmis. 1993. - Vol. 101. - P. 61-72.

45. Aspinall G., Moran A. Unique structural and biological features of Helicobacter pylori lipopolysaccharides // Prog. Clin. Biol. Res. 1998. - Vol. 397. - P. 3749.

46. Atherton J.C., Cao P., Peek P.M. Mosaicism in vacuolating cytotoxin alleles of Helicobacter pylori. Association of specific vacA types with cytotoxin production and peptic ulceration // J. Biol. Chem. 1995. - №270. - P. 17771 -17777.

47. Ayhan S., Demir M. A., Kandiloglu A. R. et al. Features of chronic inflammation at the gastric cardia and the relationship with Helicobacter pylori infection and oesophagitis // Acta Gastroenterol. Belg. 2003. - №66(2). - P. 144-149.

48. Banaissa M., Babin N., Quekkard L. et al. Changes of Helicobacter pylori ultras-ructure and antigens during conversion from the bacillary to the coccoid form // Infect. Immunol. 1996.- Vol. 64. - P. 2331-2335.

49. Barratt J., Bailey E. M., Buck K. S. et al. Exaggerated systemic antibody response to mucosal Helicobacter pylori infection in IgA nephropathy // Am. J. Kidney Dis. 1999. - №33(6). - P. 1049-1057.

50. Beji A., Megraud F., Vincent F. et al. GC content of DNA of Campylobacter pylori and others species belonging or related to the genus Campylobacter // Ann. Inst. Pasteur Microbiol. 1998.- Vol. 139. P. 527-534.

51. Bjorkholm В., Zhukhovitsky V., Lofman C. et al. Helicobacter pylori entry into human gastric epithelial cells: A potential determinant of virulence, persistence, and treatment failures // Helicobacter. 2000. - Vol. 5(3). - P. 148-154.

52. Bjorkholm В., Salama'N. R. Genomics of helicobacter 2003 // Helicobacter. -2003. №8 Suppl 1. -P. 1-7.

53. Blaser M. J. Ecology of Helicobacter pylori in the human stomach // J. Clinical Investigation. 1997. - Vol. 100. - P. 759-762.

54. Blaser M. J. Hypothesis: the changing relationships of Helicobacter pylori and humans: implications for health and disease // J. Infect. Dis. 1999. - Vol. 79(6)-P. 1523-1530.i

55. Blaser M. J. Helicobacter pylori and the pathogenesis of gastroduo-denal inflammation // J. Infect. Dis. 1990. - №161. - P. 626-633.

56. Blaser, M. J., Parsonnet J. Parasitism by the "slow" bacterium Helicobacter pylori leads to altered gastric homeostasis and neoplasia // J. Clin. Invest. — 1994.-№94.-P. 4-8.'

57. Bode G., Mauch F., Malfertheiner P. The coccoid forms of Helicobacter pylori. Criteria for their viability // Epidemiol. Infect. 1993. -Vol. 111. - P.483-490.

58. Boren Т., Falk P., Roth K. A. et al. Attachment of Helicobacter pylori to human gastric epithelium mediated by blood group antigens // Science. 1993. - Vol. 262.-P. 1892-1895.

59. Burns B. P., S. L. Hazell, G. L. Mendz. Acetyl-CoA carboxylase activity in Helicobacter pylori and the requirement of increased C02 for growth // Microbiology. 1995.-№141.-P.3113-3118.

60. Bytzer P., Havelund Т., Hansen J. M. Interobserver variation in the endoscopic diagnosis of reflux esophagitis // Scand. J. Gastroenterol. 1993. - №28(2). - P. 119-125.i

61. Caselli M., A. Aleotti, P. Boldrini, M. Ruina, V. Alvisi. Ultra-structural patterns of Helicobacter pylori // Gut 1993. - №34. - P.1507-1509.

62. Cederbrant G., Kahlmeter G., Ljungh A. Proposed mechanism for metronidasole resistance in Helicobacter pylori // J. Antimicrob. Chemoter. 1992. - №29. - P. 11S-20.

63. Chan W. Y. et al. Coccoid form of Helicobacter pylori in the human stomach // Am. J. Clin. Pathol. 1994. Vol. 102. - P. 503-507.

64. Clark G. W. Effect of Helicobacter pylori infection in Barrett's esophagus and the genesis of esophageal adenocarcinoma // World J. Surg. 2003. -№27(9). -P. 994-998.

65. Correa P. Human gastric carcinogenesis: a multistep and multifactorial processfirst American Cancer Society Award lecture on cancer epidemiology and prevention // Cancer Res. 1992. - №52. - P. 6735-6740.

66. Crowe S. E., Alvares L., Dytoc M. et al. Expression of interleukin 8 and CD54 by human gastric epithelium after Helicobacter pylori infection in vitro // Gastroenterol. 1995. - Vol. 108. - P. 65-74.

67. Czinn S. J., Nedrud J. G. Immunopathology in Helicobacter pylori infection and disease // Springer Semin. Immunopathol. 1997. - Vol. 18. - P. 495-513.

68. Dewhirst F. E., Fox J. G., On S. L. W. Recommended minimal standarts for describing new species of the genus Helicobacter // International Journal of Systematic and Evolutionari Microbiology. 2000. - №50. - P. 2231-2237.

69. Donahue J. P., Israel D. A., Peek R. M. et al. Overcoming the restriction barrier to plasmid transformation of Helicobacter pylori // Mol. Microbiol. 2000. -Vol. 37(5).-P. 1066-1074.

70. Donahue J.P., Peek R.M., van Doom L.-J., et al. Analysis of iceAl transcription in Helicobacter pylori // Helicobacter. 2000. - №5. - P. 1-12.

71. Dunn В. E., Campbell G. P., Perez-Perez G. I. et al. Purification and characterization of urease from Helicobacter pylori // J. Biol. Chem. 1990. - Vol. 265. -p. 9464-9469.

72. Dunn В. E. et al. Localization of Helicobacter pylori urease and heat shock protein homolog in human gastric biopsies // Infect. Immun. 1997. - Vol. 65. -P. 1181-1188.

73. Eaton K. A., Morgan D. R., Krakowka S. Motility as a factor in the colonization of gnotobiotic piglets by Helicobacter pylori // J. Med. Microbiol. 1992. -Vol. 37.-P. 123-127.

74. Eaton K. A. et al. Virulence of coccoid and bacillary forms of Helicobacter pylori in gnotobiotic piglets // J. Infect. Dis. 1995. - Vol. 171. - P. 459-462.

75. Ernst J. D. Bacterial inhibition of phagocytosis // Cell. Microbiol. 2000. - № 2(5).-P. 379-386.

76. Evans D.G., Queiroz D.M.M., Mendes E.N., Evans D.J.-Jr. Helicobacter pylori cagA status and s and m alleles of vacA in isolates from individuals with a variety of H.pylori-associated gastric diseases // J. Clin. Microbiol. 1998. - №36. -P. 3435-3437.

77. Falk P., Roth A. K., Boren T. et al. An in vitro adherens assay reveals that Helicobacter pylori exhibits cell lineage-specific tropism in the human gastric epiithelium // Proc. Natl. Acd. Sci. USA. 1993.- Vol. 90. P. 2035-2039.

78. Feydt-Schmidt A., Kindermann A., Konstantopoulos N. et al. Reinfection rate in children after successful Helicobacter pylori eradication // Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 2002. - №14(10). - P. 1119-1123.

79. Fennerty M. B. The continuum of GERD complications // Cleve Clin. J. Med. — 2003. №70 (Suppl 5). - P. S33-S50.

80. Figura N. Determinants of pathogenicity of Helicobacter pylori // J. Chemother. 1999. - №11 (Suppl 2). - P. 22.

81. Figura N. Are Helicobacter pylori differences important in the development of Helicobacter pylori-related diseases? // Ital. J. Gastroenterol. Hepatol. 1997. -№ 29. — P.367-374.

82. Figura N. Helicobacter pylori exotoxins and gastroduodenal diseases associated with cytotoxic strain infection // Aliment. Pharmacol. Ther. 1996. - №10 (Suppl.l). - P. 79-96.

83. Geis G., S. Suerbaum, B. Forsthoff, H. Leying, W. Opferkuch. Ultrastructure and biochemical studies of the flagellar sheath of Helicobacter pylori // J. Med. Microbiol. 1993. - №38, - P. 371-377.

84. Gerrits M. M., Berning M., Van Vliet A, H., Kuipers E. J. et al. Effects of 16SrRNA gene mutations on tetracycline resistance in Helicobacter pylori // Antiimicrob. Agents Chemother. 2003. -№47(9). - P. 2984-2986.

85. Goddard A. F., Logan R. P. Diagnostic methods for Helicobacter pylori detection and eradication // Br. J. Clin. Pharmacol. 2003. - №56(3). - P. 273-283.

86. Goodwin, C. S., J. A. Armstrong. Microbiological aspects of Helicobacter pylori (Campylobacter pylori) // Eur. J. Clin. Microbiol. 1990. - №9. - P. 1-13.

87. Goodwin C. S., McCuloch R. R., Armstrong J. A. et al. Unusual cellular fattyacids and distinctive ultrastructure in a new spiral bacterium (Campylobacteripyloridi) from the human gastric mucosa // J. Med. Microbiol. 1989.- Vol.19, -p. 257-267.

88. Graham D. Y. Complete genomic sequence of Helicobacter pylon: implications for the clinician // Current opinion in gastroenterology. 1998. - №11 (Suppl.l). -P. S7-S8.i

89. Gunn M. C., Stephens J. C, Stewart J. A., et al. The significance of cagA and vacA subtypes of Helicobacter pylori in the pathogenesis of inflammation and, peptic ulceration // J. Clin. Pathol. 1998. - №51. - P. 761-764.

90. Surg. 2004. -№6. - P. 375-381.

91. Hancock W.W. Chemokines and the pathogenesis of T-cell-dependent immune responses // Amer. J. Pathol. 1996. - Vol. 148, № 3. - P. 681-684.

92. Haringsma J., Tytgat G.N.J. Fluorescence and autofluorescence // Baillierre's Clin. Gastroenterology. 1999. - №1. - P. 1-10.

93. Hatz R. A., Meimarakis G., Bayerdorffer E. et al. Characterization of lymphocytic infiltrates in Helicobacter pylori-associated gastritis // Scand. J. Gastroenterol. 1996. - Vol.31. - P.222-228.

94. Hazell S. Т., Evans Jr. D. J., Graham D. Y. Helicobacter pylori catalase // J. Gen. Microbiol. 1991. - Vol. 137. -P. 57-61.

95. Hessey S. J., Spenser J. Bacterial adhesion and disease activity in Helicobacter associated chronic gastritis. // Gut. -1990. №31. - P. 134-138.

96. Hirschl A. M., Makristathis A. Helicobacter pylori: virulence factors, resistance and diagnosis. Wien Med. Wochenschr. 2002, 152(5-6): 123-127.

97. Hou P., Xu G., Gong Y. et al. The genotype of vac A gene of Helicobacter pylori (Hp) and its correlation with the gastroduodenal diseases associated with Hp // Zhonghua Nei Ke Za Zhi. -1999. №38(11). - P. 744-746.

98. Imase K., Takahashi S. Diagnosis of Helicobacter pylori infection by culture method // Nippon Rinsho. 2002. - №60 (Suppl 2). - P. 315-318.

99. Iwao E., Yokoyama Y., Yamamoto K., Hirayama F. et al. In vitro and in vivo anti- Helicobacter pylori activity of Y-904, a new fluoroquinolone // J. Infect. Chemother. 2003. - №9(2).- P. 165-171.

100. Josenhans C., Suerbaum S. The role of motility as a virulence factor in bacteria // Int. J. Med. Microbiol. 2002. - №291(8). - P.605-614.

101. Juhasz M., Herszenyi L., Tulassay Z. et al. Helicobacter pylori and molecular mechanisms of gastric carcinogenesis: targets for prevention and therapy // Expert. Rev. Anticancer Ther. 2003. - №4(1). - P. 97-103.

102. Kelly D. J. The physiology and metabolism of the human gastric pathogen Helicobacter pylori // Adv. Microb. Physiol. 1998. - №40. - P. 137-189.

103. Kleanthous H., Clayton C. L., Tabaqchali S. Characterization of a plasmid from Helicobacter pylori encoding a replication protein common to plasmids in gram-negative bacteria // Mo. Microbiol. 1991. - Vol. 5.- P. 2377-2388.

104. Kwon D. H., Dore M. P., Kim J. J., Kato M. et al. High-level beta-lactam resistance associated with acquired multidrug resistance in Helicobacter pylori // Antimicrob. Agents Chemother. 2003. - №47(7). - P. 2169-2178.

105. Leal-Herrera Y., Torres J., Monath T. P. et al. High rates of recurrence and of transient reinfections of Helicobacter pylori in a population with high prevalence of infection // Am. J. Gastroenterol. 2003. - №98(11). - P. 2395-2402.

106. Lederberg J. Cell genetics and hereditary symbiosis // Physiol Rev. 1952. №32(4).-P. 403-430.

107. Lee S. К., Stack A., Katzowitsch E. et al. Helicobacter pylori flagellins have very low intrinsic activity to stimulate human gastric epithelial, cells via TLR5 // Microbes Infect. 2003. - №5(15). - P. 1345-1356.

108. Ley C., Mohar A., Guarner J. et al. Helicobacter pylori eradication and gastric preneoplastic conditions: a randomized, double-blind, placebo-controlled trial // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. -2004. №13(1). - P. 4-10.

109. Lingwood C. A., Wasfy H., Han H. et al. Receptor affinity purification of a lipid-binding adhesin from Helicobacter pylori // Infect. Immun. 1993 .-Vol. 61.-P. 2474-2478.

110. Loffeld R. J., Fijen C. A. Antibiotic resistance of Helicobacter pylori: a cross-sectional study in consecutive patients, and relation to ethnicity // Clin. Microbiol. Infect. 2003. - №9(7) - P. 600-604.

111. Marais A., George L. Mendz, Hazell S. L. et al. Metabolism and genetics of Helicobatcer pylori: the genome era // Microbiology and Molecular Biology Reviews. 1999. - №63. - P. 633-642.

112. Marshall B. Helicobacter pylori: 20 years on // Clin. Med. 2002. - №2(2). - P. 147-152.

113. Marshall, B. J., and J. R. Warren. Unidentified curved bacilli in the stomach of patients with gastritis and peptic ulceration // Lancet. — 1984. P 1311-1315.

114. Malfertheiner P., Megraud F., O'Morain C. at al. Current concepts in the management of Helicobacter pylori infection—the Maastricht 2-2000 Consensus Report //Aliment. Pharmacol. Ther. -2002.-№16(2).-P. 167-180.i

115. Mendz, G. L., S. L. Hazell. Evidence for a pentose phosphate pathway in Helicobacter pylori // FEMS Microbiol. Lett. 1991. - №84. - P.331-336.

116. Mendz, G. L., B. P. Burns, and S. L. Hazell. Characterisation of glucose transport in Helicobacter pylori // Biochim. Biophys. Acta 1995. - 1244. - P. 269276.

117. Mobley H. L. T. Helicobacter pylori factors associated with disease development // Gastroenterology. 1997. - №113. - P. 21-28.

118. Montecucco C., de Bernard M. Molecular and cellular mechanisms of action of the vacuolating cytotoxin (VacA) and neutrophil-activating protein (HP-NAP) virulence factors of Helicobacter pylori // Microbes Infect. 2003. - №5(8). - P. 715-721.

119. Moss S. F., Sood S. Helicobacter pylori // Curr. Opin. Infect. Dis. 2003. -№16(5).-P. 445-451.'

120. Moran A. P. Pathogenic properties of Helicobacter pylori // Scand. J. Gastroenterol. 1996. - Vol.31, suppl. 215.-P. 22-31.

121. Moss S. F., Sordillo E. M., Abdalla A. M. et al. Increased gastric epithelial cell apoptosis associated with colonization with cagA + Helicobacter pylori strains // Cancer Res.-2001.- Vol.61(4)-P. 1406-1411.

122. Moran A. P. Helicobacter pylori introduction and historical perspective. // Pathogenesis and host response in Helicobacter pylori infections. Ed. By A. P. Moran C. A. O'Moran. Galway.: National University of Ireland. - 1997. - P. 1-5.

123. Moran A. P. Pathogenic properties of Helicobacter pylori // Scand. J. Gastroenterol. 1996. - Vol. ЗГ. - P. 222-228.

124. Murakami K., Kimoto M., Nasu M. Culture method for H. pylori // Nippon Rin-sho. 2003. - №61(1). - P. 84-87.

125. Ndip R. N., MacKay W. G., Farthing M. J. Culturing Helicobacter pylori from clinical specimens: review of microbiologic methods // J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 2003. - №36(5). - P. 616-622.

126. Nedenskov P. Nutritional requirements for growth of Helicobacter pylori //i

127. Appl. Environ. Microbiol. 1994. - №60(9). - P. 3450-3453.

128. Nilius M., Strohle A., Bode G., Malfertheiner P. Coccoid like forms (elf) of Helicobacter pylori // Int. J. Med. Microbiol. Virol. Parasitol. Infect. Dis. — 1993.-Vol. 325.-P. 259-272.

129. Nunes J. P., Faria M. S., Monteiro M. C. et al. IgA nephropathy and pernicious anemia // Clin. Nephrol. 1997. - №47(3). - P. 204.

130. Occhialini A., Urdaci M., Doucet-Populaire F et al. Helicobatcer pylori resistance to macrolides. Confirmation of point mutatition and detection by PCR-RFLP // Gut. 1996. - №36 (Suppl. 2). - P. 1-20.

131. Oliva M. M., A. J. Lazenby, J. A. Perman. Gastritis associated with Gastrospi-rillum hominis in children. Comparison with Helicobacter pylori and review of the iterature // Mod. Pathol. 1993. - №6. - P. 513-515.

132. Palmer E. D. Investigation of the gastric mucous spirochetes of the human // Gasroenterol. -1954. №27. - P. 218-220.

133. Parsonnet J. What is the Helicobacter pylori global reinfection rate? Can J Gasitroenterol. 2003 Jun;17 Suppl B:46B-48B.

134. Parsonnet J., Friedman G.D., Orentreich N., Vogelman H. Risk for gastric cancer in people with cagA positive or cagA negative Helicobacter pylori infection // Gut 1997. - №40. - P.297-301.

135. Peppoloni S., Mancianti S., Volpini G. et al. Antibody-dependent macrophage-mediated activity against Helicobacter pylori in the absence of complement // Eur. J. Immunol. 2002. - №32(10). - P. 2721-2725.

136. Perri F., Qasim A., Marras L., O'Morain C. Treatment of Helicobacter pylori infection // Helicobacter. 2003. - №8 (Suppl. 1). - P. 53-60. .

137. Plecko V., Kalenic S., Presecki V. Helicobacter pylori bacteriologic diagnosis and antibiotic sensitivity tests // Lijec Vjesn. - 2002. - №124 (Suppl 1). - P. 2023.

138. Qiao W., Hu J., Wu K. The relationship between vacA genotype of Helicobacter pylori clinical isolate and gastric cancer and precancer // Zhonghua Nei Ke Za Zhi. 2000. - №39(11). - P.729-31.

139. Ramarao N., Gray-Owen S. D., Backert S. Helicobacter pylori inhibits phagocytosis by professional phagocytes involving type IV secretion components // Mol. Microbiol. 2000. №37(6). - P. 1389-1404.

140. Rautelin H., Sipponen P., Seppala K. et al. Gastric inflammation and neutro-phil-activating and cytotoxin-producing Helicobacter pylori strains // Scand. J. Gastroenterol. 1996. - №31(7). - P.639-642.

141. Rautelin H., von Bonsdorff С. H., Blomberg В., et al. Ultrastructural study of two patterns in the interaction of Helicobacter pylori with neutrophils // J. Clin. Pathol. 1994. - Vol. 47. - P. 667-669.

142. Rerksuppaphol S., Hardikar W., Midolo P. D., Ward P. Antimicrobial resistance in Helicobacter pylori isolates from children // J. Paediatr. Child. Health. 2003. -№39(5).-P. 332-335.

143. Schirm M., Soo E. C., Aubry A. J. et al. Structural, genetic and functional characterization of the flagellin glycosylation process in Helicobacter pylori // Mol. Microbiol. 2003. - №48(6). - P. 1579-1592.

144. Schlemper R. J., Riddel R. H., Kato Y. et al. The Vienna, classification of gastrointestinal epithelial neoplasia // Gut. 2000. - №47. - P. 251-255.

145. Skouloubris S., De Reuse H., Labigne A. Bacteriology and pathogenicity of Helicobacter pylori // Бlev. Prat. 2000. №50(13). - P. 1409-1413.

146. Sheu B. S., Sheu S. M., Yang H. B. et al. Host gastric Lewis expression determines the bacterial density of Helicobacter pylori in babA2 genopositive infection // Gut. 2003. - №52(7). - P. 927-932.

147. Smith M. A., Edwards D. I. The influence of microaerophilia and anaerobiosis on metronidasole uptake in Helicobacter pylori // J. Antomicrob. Chemother. -1995.-№36.-P. 453-461.

148. Taj Y., Essa F., Kazmi S. U., Abdullah E. Sensitivity and specificity of various diagnostic tests in the detection of Helicobacter pylori // J. Coll. Physicians Surg. Рак. 2003. - №13(2). - P. 90-93.

149. Takesmura Т., Grander D.N., Evans D.J. et al. Extract of Helicobacter pylori induces neutrophils to injure endothelial cells and contains antielastase activity // Gastroenterol. 1996. -Vol. 110. - P. 21-29.

150. Teneberg S., Jurstrand M., Karlsson K. A. Inhibition of nonopsonic Helicobacter pylori-induced activation of human neutrophils by sialylated oligosaccharides // Glycobiology. 2000. - №10(11). - P. 1171-1181.

151. Testerman T. L., McGee D. J., Mobley H. L. T. Helicobacter pylori growth andiurease detection in the chemically defined medium Ham's F-12 Nutrient Mixture // Journal of Clinical Microbiology. 2001. - Nov. - P. 3842-3850.

152. Torres A., Perez-Perez G., Goreia Buey M., Pajares J. Immunological adhesion molecules on gastric mucosa. Does H.pylori, and specifically cagA+ strains influence its expression?// Gut. 1995. - №37(Suppl. 1). - P. A34.

153. Toracchio S., Marzio L. Primary and secondary antibiotic resistance of Helicobacter pylori strains isolated in central Italy during the years 1998-2002 // Dig. Liver Dis. 2003. - №35(8). - P. 541-545.

154. Van Doom L.-J., Figueiredo C., Megraud F., et al. Geographic distribution of vacA allelic types of Helicobacter pylori // Gastroenterology. 1999. -№116.-P.823-830.

155. Versalovich J., Shortridge D. Kibler K. et al. Mutatitions in 23 S rRNA are associated with clarithrimycin resistance in Helicobacter pylori // J. Antimicrob. Agents Chemother. 1996. - №40. - P. 447-480.

156. Yamaoka Y., El-Zimaity H.M.T., Gutierrez O., et al. Relationship Between the cagA 3' Repeat Region of Helicobacter pylori, Gastric Histology, and Susceptibility to Low pH // Gastroenterology. 1999. - №117. - P. 342-349.

157. Zhang J., Chen X. L., Wang К. M. Relationship of gastric Helicobacter pylori infection to Barrett's esophagus and gastro-esophageal reflux disease in Chinese // World J. Gastroenterol. 2004. - №1;10(5). - P. 672-675.

Информация о работе

Кириллов, Виссарион Арчилович
кандидата медицинских наук
Оренбург, 2004
ВАК 03.00.07

Диссертация

Факторы персистенции Helicobacter pylori - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы