Особенности генотипов Helicobacter pylori и полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10) у больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки

Абузарова, Эльмира Ренардовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Особенности генотипов Helicobacter pylori и полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10) у больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Особенности генотипов Helicobacter pylori и полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10) у больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки"

На правах рукописи

АБУЗАРОВА Эльмнра Ренардовна

ОСОБЕННОСТИ ГЕНОТИПОВ HELICOBACTER PYLORI И ПОЛИМОРФНЫХ ЛОКУСОВ ГЕНОВ ЦИТОКИНОВ (IL-1 И IL-10) У БОЛЬНЫХ ЯЗВЕННОЙ БОЛЕЗНЬЮ ЖЕЛУДКА И ДВЕНАДЦАТИПЕРСТНОЙ КИШКИ

03.00.04 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

ÜÜ344GiJÜÜ

Казаиь-2008

003446958

Работа выполнена в лаборатории молекулярных основ патогенеза Казанского института биохимии и биофизики Казанского научного центра Российской академии наук

Научный руководитель: доктор биологических наук

Чернова Ольга Александровна

Научный консультант: доктор медицинских наук

Абдулхаков Рустем Аббасович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

член-корреспондент АН РТ Киясов Андрей Павлович (Казанский государственный медицинский университет, г Казань)

доктор биологических наук, профессор Ишмухаметова Диляра Галимовна (Казанский Государственный Университет им Ульянова-Ленина, г Казань)

Ведущая организация: ГОУ ДПО «Казанская Государственная

Медицинская академия», г Казань

Защита состоится «.3» октября 2008 года в « /3 » часов на заседании диссертационного совета Д 212 081 08 при Казанском государственном университете им В И Ульянова-Ленина по адресу 420008, г Казань, ул Кремлевская, д 18, главное здание, ауд 211

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке им Н И Лобачевского Казанского государственного университета

Автореферат разослан « $ » сентября 2008 г

Ученый секретарь диссертационного совета, д, м Ва 3 И

доктор биологических наук

Актуальность проблемы. Helicobacter pylon является одной из наиболее изучаемых бактерий в мире в настоящее время Носителем H pylori является почти каждый второй житель планеты Инфицирование возможно как непосредственно от человека или животных, так и опосредованно, в том числе через эндоскопические аппараты и стоматологические инструменты [Fontham, 1995, Feldman, 1998, De Schryver et al, 2001]

Для большинства инфицированных характерно бессимптомное носительство Вместе с тем предполагается наличие взаимосвязи между инфекцией H pylori и рядом заболеваний у человека [Bohr et al, 2007] Однако пока доказана связь инфицирования слизистой оболочки желудка (СОЖ) человека H pylori с гастродуоденальной патологией - B-клеточной лимфомой, хроническим гастритом, а также язвенной болезнью (ЯБ) желудка и двенадцатиперстной кишки [Van Doom et al, 1998] - одним из наиболее распространенных заболеваний желудочно-кишечного тракта у человека [Ивашкин и др , 2003, Григорьев, Яковенко, 2004]

Основным документом, определяющим показания и подходы к лечению язвенной болезни желудка (ЯБЖ) и двенадцатиперстной кишки (ЯБДК), ассоциированной с H pylori, является Маастрихтский консенсус II и III [Malfertheiner et al, 2002, 2005] Однако в большинстве случаев результат применения соответствующих схем лечения не достигает необходимых 80% [Malfertheiner et al, 2005] Основными причинами недостаточной эффективности предлагаемых методов лечения считают неизученность молекулярно-генетических аспектов заболевания ЯБ, ассоциированной с H pylon, в том числе молекулярно-генетических основ восприимчивости и чувствительности к персистенции H pylori у разных индивидов [Ando et al, 2007], а также отсутствие учета региональных особенностей хеликобактерных инфекций [Абдулхаков, 2006]

Различия восприимчивости и чувствительности к персистенции H pylori связывают с вариабельностью генотипов хеликобактера в отношении факторов вирулентности, а также полиморфизмом генов иммунного ответа у носителей инфекционных агентов Предполагают, что развитие ЯБЖ и ЯБДК может быть ассоциировано с наличием у индивидов определенных генотипов хеликобактера (cagA, iceA, ЪаЪА и vac А), а также вариантов полиморфных локусов генов ключевых иммуномедиаторов про- и противовоспалительных реакций - 1L-1 (1L-1B-511C>T, IL-1B+3954C>T, IL-IRN(VNTR)) и IL-10 (IL-10-1082G>A) [Garcia-Gonzalez et al, 2001, 2003, Rad et al, 2003, 2004] Предполагается, что носители определенных генотипов полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10) могут колонизироваться специфичными в отношении факторов вирулентности штаммами H pylori, а распределение генотипов H pylori и полиморфных локусов генов цитокинов, а также их ассоциации у индивидов в разных регионах различаться [Garcia-Gonzalez et al, 2003, Rad et al, 2004] В последнее время появились сообщения, что существенным фактором развития гастродуоденальной патологии может быть колонизация СОЖ микоплазмами, в частности, Mycoplasma hyorhinis [Huang et al, 2001, Kwon et al, 2004] Одна™

систематические исследования для проверки всех вышеуказанных предположений в разных регионах мира не проводились

Цель данной работы - определить особенности генотипов Н pylori и полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10) у больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки в г Казани

Основные задачи исследования

1 Протестировать биоптаты больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки на наличие Helicobacter pylori и определить частоту встречаемости бактерий в исследуемых образцах

2 Выполнить типирование штаммов Н pylori по генам факторов вирулентности (cagA, iceA, ЪаЬА и аллелям ml, т2, sl, s2 гена vacA) у больных язвенной болезнью и провести анализ распределения генотипов Нpylori в обследуемой группе

3 Определить варианты полиморфных локусов генов 1L-1B (IL-1B-511С>Т, IL-1B+3954C>T, IL-IRN(VNTR)) и IL-10 (IL-10-1082G>A) у больных язвенной болезнью, а также в контрольной группе и провести анализ распределения частоты их встречаемости в обследуемых группах

4 Провести ассоциативный анализ генотипов Н pylori и полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10) у больных язвенной болезнью

5 Протестировать биоптаты больных язвенной болезнью на наличие М hyorhinis, определить частоту встречаемости сочетанной (Яpylori+M hyorhinis) инфекции СОЖ и провести ассоциативный анализ распределения генотипов Яpylori, а также полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и 1L-10) в отношении хеликобактерно - микоплазменной инфекции в обследуемой группе

6 Выполнить сравнитечьный анализ ультраструктуры эпителия СОЖ у больных ЯБЖ с разными генотипами Яpylori и полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и 1L-10) при наличии и отсутствии сочетанной (Яpylori+M hyorhinis) инфекции

7 Провести ассоциативный анализ морфометрических показателей язвенных дефектов и генотипов Я pylori, а также вариантов полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10) у больных язвенной болезнью при наличии и отсутствии сочетанной (Я pylori+M hyorhinis) инфекции

Научная новизна Впервые проведено исследование особенностей распределения генотипов штаммов Helicobacter pylori, определяющих вирулентность бактерий, и полиморфных локусов генов цитокинов ([IL-1 и ILIO) в группе больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки (жители г Казани) при наличии и отсутствии сочетанной сочетанной (Яpylori+M hyorhinis) инфекции Показано, что слизистая оболочка желудка всех больных ЯБ инфицирована Я pylori и установлено, что штаммы Я pylori с генотипами, определяющими высокую вирулентность хеликобактера, достоверно чаще встречаются в исследуемых образцах

У 19% больных ЯБ обнаружено сочетанное (Яpylori+M hyorhinis) инфицирование слизистой желудка Установлено, что хеликобактерно-микоплазменная инфекция достоверно чаще встречается у больных ЯБЖ и

ЯБДК с комбинацией генотипов IL-1B-511*Т/*Т, IL-1B+3954*C/C, ¡L-1RN2/2, IL-10-1082A/G (р<0,05)

Выявлены молекулярно-генетические маркеры предрасположенности к ЯБЖ и ЯБДК Обнаружено, что аллель IL-1B-511*C и генотип IL-1B-511*С/*С повышают риск развития язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с H pylori, а аллель IL-1B-511*T, генотип IL-1B-511*С/*Т - снижают вероятность формирования заболевания Показано, что больные язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с H pylori, являющиеся носителями сочетания генотипов IL-1В-511*Т/*С, IL-1B+3954*C/*C, IL-1RN*1/*1, IL-10-1082*G/*G, инфицированы преимущественно низковирулентными штаммами хеликобактера Установлено, что возможность самопроизвольного рубцевания язвенных дефектов больных ЯБДК ассоциирована с генотипами cagAvacAsl штаммов H pylori, а также IL-1RN(VNTR) индивидов

Впервые показано, что особенности патологических изменений ультраструктуры СОЖ у больных ЯБ различаются в зависимости от генотипов хеликобактера, полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10), а также наличия сочетанной (Яpylori+M hyorhims) инфекции

Научно-практическая значимость. Результаты работы вносят вклад в представление о молекулярно-генетических аспектах язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с H pylori, и их региональных особенностях Впервые выявлены генетические маркеры предрасположенности к заболеванию и его особенностям у индивидов в г Казани

Полученные данные могут быть использованы в научно-практических исследованиях механизмов формирования системы «паразит - хозяин» и связанной с ней гастродуоденальной патологии для разработки дифференцированных региональных программ, а также индивидуальных схем лечения и профилактики язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с H pylori Результаты работы могут быть также использованы в курсах лекций по биохимии, микробиологии, молекулярной генетике, гастроэнтерологии и молекулярной медицине в ВУЗах

Связь работы с научными программами и собственный вклад автора в исследование Работа в течение 2001-2008 гг проводилась в соответствии с планом научных исследований КИББ КазНЦ РАН по теме «Взаимодействие микоплазм с высшими организмами на молекулярно-генегическом уровне» (№ roc per 01200 603845) Исследования поддержаны грантами ФОНДа НИОКР РТ: 03-3.10-163 «Полиморфизм микроорганизмов, ассоциированных с заболеваниями желудочно-кишечного тракта в популяциях народов Республики Татарстан особенности ультраструктуры и генетической вариабельности клинических изолятов Helicobacter pylon и микоплазм», 2001-2003 гг и ФОНДа НИОКР РТ: 03-3.10-361/ 2005 «Генетический полиморфизм в популяциях народов Республики Татарстан вариабельность генов цитокинов у пациентов с гастродуоденальными и урогенитальными заболеваниями при персистенции хеликобактерий и микоплазм», 2002-2005 гг

Научные положения диссертации базируются на результатах собственных исследований автора Автор выражает благодарность к б н Акберовой Н И (каф биохимии Казанского государственного университета) за помощь в проведении статистического анализа полученных результатов, проф Борхсениусу С Н (зав лаб структурной организации генома Института цитологии РАН, г Санкт-Петербург) за предоставление образцов ДНК референтного штамма Мhyorhims М20, кбн Шаймардановой ГФ (КИББ КазНЦ РАН, г Казань) за проведение электронно-микроскопического исследования образцов СОЖ, к м н Сайфутдинову ИМ и Давлиеву М К (МКДЦ, г Казань) за предоставление биоптатов СОЖ, полученных в результате проведенной ими фиброгастродуоденоскопии, а также к б н Т А Акопиан (ФГУ НИИ физико-химической медицины Минздрава РФ, г Москва) за определение нуклеотидных последовательностей ампликонов

Положения, выносимые на защиту:

1 Большинство больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки (жители г Казани) является носителями высоковирулентных штаммов Н pylori

2 Аллель IL-1B-511*С и генотип IL-1B-511*C/*C повышают риск развития язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с Нpylori, а аллель IL-1B-511*Т, генотип IL-1B-511*C/*T - снижают вероятность формирования заболевания

3 Больные язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с Нpylori, являющиеся носителями сочетания генотипов IL-1В-511*Т/*С, IL-1B+3954*С/*С, IL-1RN*1/*1, IL-10-1082*G/*G, инфицированы преимущественно низковирулентными штаммами хеликобактера

4 Возможность самопроизвольного рубцевания язвенных дефектов больных ЯБДК ассоциирована с генотипами cagAvacAsl штаммов Н pylori, а также IL-IRN(VNTR) индивидов

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы были представлены на XVI Международном симпозиуме Европейской группы по изучению Helicobacter pylori (EHSG) (Швеция, 2003), VI Международном симпозиуме «Диагностика и лечение заболеваний, ассоциированных с Helicobacter pylori» (Екатеринбург, 2003), на 8-й Международной Путинской школе-конференции молодых ученых (Пущино, 2004), научно-практической конференции студентов и аспирантов "Молодежь ВУЗов Казани в решении актуальных проблем города" (Казань, 2004), VIII Международном Евроазиатском конгрессе гастроэнтерологов (Тбилиси, 2005), на ХХ1-ой Российской конференции по электронной микроскопии (Черноголовка, 2006), на ХХ-ом Международном симпозиуме Европейской группы по изучению Helicobacter pylori (EHSG) (Стамбул, 2007), Всероссийской научно-практической конференции "Молодые ученые в медицине" (Казань, 2004, 2007), Итоговой научной конференции КИББ КНЦ РАН (Казань, 2008), XXI Международном симпозиуме Европейской группы по изучению Helicobacter pylori (EHSG) (Рига, 2008)

Публикации. По теме диссертации опубликовано 17 научных работ

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 167 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, заключения, выводов, списка использованной литературы, а также приложения В работе представлено 23 таблицы и 33 рисунка Список цитируемой литературы содержит 261 источник, в том числе 32 - в отечественных изданиях

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

127 больных, пациентов 1-й городской клинической больницы и Межрегионального клинико-диагностического центра (МКДЦ) г Казани, в возрасте от 20 до 78 лет (средний возраст 42,3± 12,9, соотношение мужчины/женщины=66/57) составили группу обследования Диагноз (язвенная болезнь желудка или двенадцатиперстной кишки) устанавливался клиницистом на основании результатов гастродуоденоскопии, в процессе которой производился забор биоптата слизистой оболочки желудка У больных было получено согласие на участие в исследовании Биоптаты помещали в стерильные пробирки объемом 1,5 мл и хранили при -12 "С

Контрольная группа была сформирована из жителей г Казани, соответствующих выборке больных по возрасту и полу, отобранных по данным анамнеза (отсутствие язвенной патологии у них и их ближайших родственников) Общая численность группы составила 123 человека Обе группы были смешанными по этнической принадлежности

Экстракция и очистка ДНК из биоптатов осуществлялась с помощью коммерческого набора "ХЕЛИКОПОЛ" (НПФ "Литех", Москва), согласно инструкции изготовителя Экстракция и очистка ДНК из крови осуществлялась с помощью коммерческого набора реагентов для сорбентного выделения ДНК (НПФ "Литех", Москва), согласно инструкции изготовителя

Выявление Н pylori проводили посредством ПЦР с помощью коммерческого набора «Хеликопол II» (НПФ "Литех", Москва) с использованием специфичных праймеров на нуклеотидную последовательность гена игеС, согласно инструкции изготовителя Амплификацию проводили в приборе «Терцик» (ДНК-технология, Россия) Результаты документировали с помощью видеосистемы для регистрации гелей "DNA Analyzer" (НПФ "ЛИТЕХ", Москва) Генотипирование штаммов Н pylori в отношении нуклеотидных последовательностей cagA, vacA, iceA и babA2 осуществляли с помощью соответствующих наборов реагентов НПФ "ЛИТЕХ" (Москва), согласно инструкции изготовителя

Выявление M.hyorhinis осуществляли с помощью ПЦР с использованием видоспецифичных праймеров по Dussurget et al [1994] и Timenetsky et al [2000] В качестве положительного контроля использовали ДНК референтного штамма М hyorhinis М20, любезно предоставленного проф Борхсениусом С Н (Институт цитологии РАН, г Санкт-Петербург)

Определение нуклеотидных последовательностей ампликонов осуществляли с помощью автоматического секвенатора ABI 3130 (Applied

Biosystems, США) на базе лаборатории протеомного анализа ФГУ НИИ физико-химической медицины Минздрава РФ (г Москва) Для анализа данных использовали пакет программ Informax Vector NTI Suite 9

Определение генотипов полиморфных локусов генов IL-1 и IL-10 осуществляли методом ПЦР по El-Omar et al [2000], Garcia-Gonzalez et al [2003] и Karhukorpi [2005] Рестрикцию ампликонов IL-1B-511 и IL-1B+3954 проводили по Garcia-Gonzalez et al [2003], с использованием специфичных эндонуклеаз Aval и Taqï, соответственно

Электронно-микроскопическое исследование образцов слизистой оболочки желудка больных язвенной болезнью проводили на электронном микроскопе GM 1200 (Япония) Образцы слизистой оболочки из антрального отдела желудка больных язвенной болезнью фиксировали в 2,5% растворе глутарового альдегида, приготовленного на фосфатном буфере 0,1М, рН 7,2 Ультратонкие срезы получали на микротоме LKB-III (Швеция), монтировали на никелевые сеточки, окрашивали водным раствором уранилацетата и контрастировали цитратом свинца

Статистическую обработку данных выполняли с использованием программного обеспечения MS Excel (Microsoft), программы MedCalc (v 8 110) При сравнении частот генотипов и аллелей в группе инфицированных Helicobactei pylori больных язвенной болезнью и группе контроля использовался критерий х2 (р) с поправкой Йейтса на непрерывность Силу ассоциаций оценивали в значениях показателя отношения шансов (OR), а также рассчитывали его 95%-ный доверительный интервал (95% CI) [Бабич и др, 2005]

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Частота встречаемости Helicobacter pylori и генотипы штаммов хеликобактера у больных язвенной болезнью

В результате тестирования биоптатов больных язвенной болезнью с помощью ПЦР было установлено, что СОЖ всех обследованных пациентов инфицирована H pylori

Эпидемиологические данные, полученные в разных странах, свидетельствуют, что 100% ЯБДК и более 80% ЯБЖ связаны с персистенцией в желудке H pylori [Исаков, 2006] Отсутствие случаев ЯБЖ без ассоциации с хеликобактером в нашей работе может быть связано с особенностями выборки и/или региональными особенностями

У больных ЯБ (ЯБЖ и ЯБДК) достоверно чаще (р<0,05) встречаются штаммы H pylori с генотипами cagA* , vacAsl*, vacAml*, iceAl* (65%, 76,4%, 78,9%, и 60%, соответственно) (рис 1) Из 28 возможных комбинаций генотипов штаммов H pylori в отношении vacA, cagA, iceA и babA2 в исследованных образцах было обнаружено 10 и установлено, что в группе больных ЯБДК и ЯБЖ превалируют штаммы H pylori с комбинациями генотипов vacAsl/m2* iceAl* cagA+ и vacAsl/m2+ ice Ai* cagA+ babA2+, включающими все исследуемые гены вирулентности H pylori При этом в группе больных ЯБ (ЯБЖ и ЯБДК)

достоверно чаще встречаются штаммы Н.pylori с комбинацией генотипов cagA+vacAsl* (/><0,05), определяющей высокую вирулентность хеликобактера (рис. 2).

0.9 0,8 0,Г

-н

Iм « О-3

-ь

-h г+

садА* сэдА'

vacAsI+ vacAs2* vacAml* vacAmi*

Рис.]. Распределение генов вирулентности у штаммов Н.pylori больных язвенной болезнью (ЯБЖ и ЯБДК). * - р < 0,05

ЯБДК

язвенная болезнь

Рис.2. Распределение генотипов cagA*vucAsl+ и ccigA vacAsl у штаммов Н.pylori больных язвенной болезнью (ЯБЖ и ЯБДК). * - р<0,05

Таким образом, в обследуемой нами группе больных (ЯБЖ и ЯБДК) превалируют штаммы H.pylori с генотипами, определяющими высокую вирулентность хеликобактера. Выявленная нами встречаемость высоковирулентных штаммов H.pylori (cagA+vacAsl+) - 58,3% - в группе больных ЯБЖ и ЯБДК г. Казани несколько отличается от таковых в других регионах мира [Sillakivi et al., 2001; Andreson, 2002; Costa Lopes et al, 2006], что согласуется с предположением о наличии региональных особенностей распространения штаммов хеликобактера [Yamaoka et al., 1999].

2. Особенности генотипов полиморфных локусов генов цитокинов (1Ь-1 и 1Ь-10) у больных язвенной болезнью и представителей контрольной группы

В результате анализа распределения полиморфных локусов генов цитокинов (И-1 и 11.-10) было обнаружено, что в группе здоровых индивидов достоверно чаще встречается аллель 1Ь-!В-511*Т, тогда как в группе больных язвенной болезнью - аллель *С полиморфного локуса 1Ь- /В-51 /(у_2= 13,54, р<0,001). Генотип !Ь-1В-511*С/*С достоверно чаще обнаруживается у больных язвенной болезнью (х2=19,85( р<0,001); генотипы И-1В-511*С/*Т и 1Ь-1Ш*1/*2 достоверно реже встречаются в группе больных язвенной болезнью по сравнению с контролем (х2=8,42, р=0,004; х2=б,43, р=0,011, соответственно) (рис. 3 и 4).

-С/-С -СП ■тгт -с -т

генотип И-1в-5ИОТ

Рис.3. Распределение аллелей и генотипов полиморфного локуса гена И-1В (-511С>Т) в опытной и контрольной группах

Рис.4. Распределение аллелей и генотипов И-ШИ (УЫТЮ в опытной и контрольной группах

Результаты статистического анализа свидетельствуют, что аллель 1Ь-1В-511*С и генотип 1Ь-1В-511*С/*С ассоциированы с повышенным (ОЯ=2,09, 95%С1 1,42-3,06; ОЯ=4,80, 95%С1 2,38-9,69, соответственно), а аллель 11-1В-511 *Т и генотипы И-1В-511*Т/*С, 1ЫКЫ1/'2 - с пониженным риском возникновения ЯБ (0/?=0,48, 95%С1 0,33-0,70; 0/?=0,43, 95%С1 0,25-0,75, 0Д=О,48, 95%С1 0,28-0,83, соответственно) (рис. 3 и 4). Однако при разделении выборки выявленные закономерности сохраняются полностью только для

группы больных ЯБДК (рис. 5), а для группы больных ЯБЖ ассоциация генотипа И-ШЫ*1/*2 не достигает статистической значимости (ОИ=0,52, 95%С1 0,24-1,15) (рис. 6). Генотип И-1В-511*С1*С достоверно чаще встречается в группе больных ЯБЖ (х2=13,64, р<0,001, 0Л=5,47, 95%С1 2,24-13,36), а также в группе больных ЯБДК (*2=16,3, р<0,001, OR=4,56, 95%С1 2,18-9,56), чем в контрольной группе (рис. 5А, 6А). Генотип И-1В-511*С/*Т достоверно реже встречается в группе больных ЯБЖ и в группе больных ЯБДК, чем в контроле (Х"=6,17, Х2=5,55, 0Л=О,34, 95%С1 0,15-0,76; OR=0,47, 95%С1 0,26-0,85, соответственно, для всех р<0,05). Комбинация аллелей / и 2 гена /¿-/Л/У достоверно реже встречается в группе больных ЯБДК, чем в контрольной группе {£=5,1, р=0,017, 0/?=0,47, 95%С1 0,26-0,84) (рис. 5Б).

Рис.5. Распределение генотипов полиморфных локусов генов 1Ь-1В (-511С>Т) -А, и JL-IRN (УИТИ) - Б, в опытной (ЯБДК) и контрольной группах

Рис.6. Распределение генотипов полиморфных локусов генов IL-IB (-511С>Т) -А, и 1L-1RN (VNTR) - Б, в опытной (ЯБЖ) и контрольной группах

В отношении версий генотипов IL-1B+3954C>T и IL-10-1082G>A у больных ЯБ в целом и при разделении выборки на подгруппы (ЯБЖ и ЯБДК) достоверные различия не обнаружены.

Генотипически опосредованные реакции в отношении IL-1 и IL-10. обусловливающие деструктивные процессы, зависят от сочетания у индивидов генотипов полиморфных локусов соответствующих генов [Rad et а/., 2003, 2004]. В этой связи были определены частоты встречаемости разных комбинаций генотипов IL-1B-51 /ОТ-, IL-IB+3954C>T, IL-1RN (VNTR) и IL-10-

I082G>A у больных язвенной болезнью, ассоциированной с Н.pylori, а также у представителей контрольной группы.

В группе больных ЯБ по сравнению с контролем достоверно чаще встречается комбинация генотипов IL-1B-511*С/*С, IL-1B+3954*C/*C, IL-IRN*1/*1, IL-10-1082*А/*А (р=0,033, OR=11,40, 95%С1 0,63-205,60), которая, по данным исследователей [Turner, 1997; Hwang et al„ 2002; Rad, 2004], определяет повышенную секрецию провоспалительного цитокина, и достоверно реже -комбинация IL-1B-511*С/*Т, IL-1B+3954*C/*C, IL-]RN*l/*2, IL-10-1082*A/*G (р=0,038, OR=0,25, 95%CI 0,07-0,96), которая определяет повышенную секрецию про- и противовоспалительного цитокинов (рис. 7). При разделении выборки на группы ЯБЖ и ЯБДК выявленные закономерности сохраняются только для группы ЯБДК - в отношении комбинации IL-1B-511*C/*C, IL-1В+3954*С/*С, IL-1 RN*1/*1, IL-10-1082*A/*A (р=0,019), однако ассоциация не достигает статистической значимости (OR= 13,82, 95%С10,75-254,60).

Рис.7. Распределение комбинаций генотипов полиморфных локусов генов цитокинов IL-1 (-511С>Т] +3954С>Т. IL-1 RN(VNTR)) и 1L-10 (-1082G>A) в опытной и контрольной группах. * - р<0,05

Таким образом, полученные данные позволяют заключить, что у носителей аллели IL-1B-511*C и генотипа IL-1B-511*C/*C повышен риск развития ЯБ, ассоциированной с Н.pylori, а у носителей аллели IL-1B-511*Т и генотипа 1L-1B-511 *С/*Т, напротив, снижена вероятность формирования заболевания; у носителей генотипа IL-lRN*l/*2 понижена вероятность развития язвенной болезни двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с Н.pylori.

Результаты наших исследований в значительной мере совпадают с результатами аналогичных исследований для Центрально-Черноземного региона России [Иванов и др., 2006], но расходятся с таковыми для других регионов мира [Garcia-Gonzalez, 2001; Furuta et al., 2002]. Это согласуется с предположением о региональных особенностях связи полиморфных вариантов генов IL-1 и IL-10 с язвенной болезнью (ЯБЖ и ЯБДК), ассоциированной с хеликобактерной инфекцией [Furuta et al., 2002; Garcia-Gonzalez et al., 2001, 2003]. Гетерогенность группы ЯБ (ЯБЖ и ЯБДК) по полиморфным вариантам IL-1 и IL-10 может свидетельствовать об участии также других (помимо

исследованных) факторов в развитии соответствующей ГДП [Rad et al., 2003, 2004; Чернявский и др., 2005].

3. Ассоциация генотипов H.pylori с полиморфными вариантами генов цитокинов (IL-1 и IL-10) у больных язвенной болезнью

Клиническая картина инфекции определяется не только особенностями инфекционных агентов, но и иммунореактивности инфицированных индивидов [Ройт, 2000]. Бактериальные факторы вирулентности - важные детерминанты гистопатологических изменений, а гены IL-I и IL-10 критичны для потенцирования патогенных эффектов инфекционных агентов. Предполагается, что специфичные ассоциации генотипов H.pylori и полиморфных локусов генов цитокинов носителей инфекционных агентов могут определять разные формы ГДП [Figueiredo étal., 2002; Rad et ai, 2003, 2004].

В результате наших исследований было обнаружено, что у больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с H.pylori, являющихся носителями комбинации генотипов IL-1B-511*Т/*С, 1L-1В+3954*С/*С, IL-1RN*1/*1, IL-10-1082*G/*G, обусловливающих повышенную секрецию про- и противовоспалительного цитокинов [Turner, 1997; Hwang, et al.. 2002; Rad et al., 2004], достоверно реже встречаются высоковирулентные штаммы H.pylori (cagA+ vacAsl+) (р=0,008, OR= 0,05,95%CI 0,005-0,53) (рис.8).

Вопрос ассоциации генотипов H.pylori и полиморфных вариантов генов цитокинов (IL-1 и IL-1Ö) у больных с ГДП мало изучен. В литературе имеются единичные сведения о проведении подобных исследований, - в основном, для больных с кишечной метаплазией [Zambón et al., 2002; Rad et al., 2004; Leung et al., 2006]. Ассоциация генотипов H.pylori и комбинации полиморфных локусов IL-1 и IL-10 в случае ЯБЖ и ЯБДК впервые была исследована в нашей работе. Молекулярные механизмы синергизма соответствующих штаммов H.pylori и полиморфных вариантов генов цитокинов еще предстоит выяснить.

Рис.8. Распределение

штаммов H.pylori с генотипами cagA*vacAsl + и cagA'vacAsJ' в группе больных язвенной болезнью при носительстве разных комбинаций генотипов

полиморфных локусов генов IL-1 и IL-10. * - р<0,05

4. Частота встречаемости Mycoplasma hyorhinis в биоптатах больных язвенной болезнью и особенности генотипов H.pylori и полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и 1L-10) в случае сочетанной (H.pylori+M.hyorhinis) инфекции

В результате тестирования 123 биоптатов слизистой оболочки желудка больных язвенной болезнью на наличие M.hyorhinis у 19% больных была обнаружена сочетанная хеликобактерно-микоплазменная инфекция.

В литературе имеются сведения о проведении аналогичных исследований только для жителей Китая [Huang et al, 2001]. Выявленная нами встречаемость M.hyorhinis (19%) у больных ЯБЖ и ЯБДК г.Казани отличается от таковой в исследованной авторами группе, где M.hyorhinis обнаруживалась у 30% больных язвенной болезнью. Расхождение данных может быть связано с региональными особенностями.

В результате анализа распределения комбинаций генотипов IL-1 и 1L-10 в соответствующих группах было установлено, что СОЖ носителей генотипов IL-1В-51 ]*Т/*Т, IL-1B+3954*С/*С, IL-lRN*2/*2, IL-]0-1082*A/*G, определяющих, по данным литературы [Turner, 1997; Hwang et al., 2002; Rad et al, 2004], повышенный уровень секреции про- и противовоспалительного цитокинов, достоверно чаще инфицирована H.pylori в сочетании с M.hyorhinis (р=0,039) (рис. 9). Однако ассоциация данной комбинации генотипов с инфицированием H.pylori и M.hyorhinis не достигает достоверной величины (OR= 21,77; 95%С1 0,99-476,7). Достоверные различия относительно ассоциации генотипов H.pylori, а также отдельных аллелей и генотипов полиморфных локусов IL-1B-511С>Т, IL-1 В+3954С>Т. 1L-1RN (VNTR), IL-10-1082A>G и инфицирования M.hyorhinis в наших исследованиях тоже не выявлены.

Рис.9. Распределение комбинаций генотипов полиморфных локусов генов цитокинов IL-1 (-511С>Т, +3954С>Т, IL-IRN(VNTR)) и IL-10 (-10820А) в группе больных язвенной болезнью при сочетанной (H.pylori+M.hyorhinis) инфекции. * - р <0,05

Полученные данные позволяют заключить, что инфицирование СОЖ M.hyorhinis может быть у носителей разных генотипов 1L-1 и IL-10, инфицированных генотипически различными штаммами H.pylori [Борхсениус, 2001]. Это может быть связано с уникальными возможностями микоплазм

преодолевать иммунный контроль независимо от особенностей иммунореактивности хозяина, модулировать иммунный ответ и способствовать развитию сочетанных инфекций [Борхсениус и др., 2002; Razin etal., 2006].

5. Особенности ультраструктуры эпителия слизистой желудка у больных язвенной болезнью желудка с разными генотипами H.pylori и полиморфных локусов генов цитокинов (1L-1 и IL-10) при наличии и отсутствии сочетанной (H.pylori+M.hyorhinis) инфекции

Для сравнительного анализа ультраструктуры эпителия СОЖ были отобраны биоптаты больных ЯБЖ с комбинациями генотипов IL-1 и IL-I0. определяющими, по данным литературы [Turner, 1997; Hwang et ah. 2002; Rad et al., 2004], различный характер секреции про- и противовоспалительных цитокинов, и инфицированных штаммами H.pylori с генотипами, определяющими высокую (cagA+ vacAsl+) или низкую вирулентность (cctgA' vacAsl') хеликобактера. В анализ были также включены образцы от больных с сочетанной (H.pylori +M.hyorhinis) инфекцией.

В результате анализа трансмиссивных микрографий во всех исследованных образцах были выявлены клетки хеликобактера - в толще слизи (рис. 10А), а также в непосредственном контакте с эпителиоцитами (рис. 10Б). В образцах, инфицированных (по данным ПЦР) M.hyorhinis, клетки микоплазмы обнаруживались как на поверхности, так и внутри эпителиоцитов (рис. 10 В, Г).

Рис.10. Трансмиссивные микрографии эпителия слизистой желудка больных ЯБЖ в случае сочетанной (Н.ру1оп+М.ИуогМ/ш) инфекции. А - клетки хеликобактера в толще слизи желудка, Б - клетки хеликобактера в непосредственном контакте с эпителиоцитами, В - клетки микоплазм внутри эпителиоцита, Г - клетки микоплазм на поверхности муцинпродуцирующей клетки слизистой желудка, Хб - хеликобактер, Мк - микоплазма, Гр - гранулы муцина

Сравнительный анализ трансмиссивных микрографий проводился в отношении патологических изменений СОЖ, характерных для ЯБ, ассоциированной с Нpylori (разрушенность эпителиального пласта, отсутствие плотных клеточных контактов и десмосом, отсутствие микроворсинок на поверхности эпителиоцитов, отсутствие гранул муцина, разрушение митохондрий, разбухшая эндоплазматическая сеть, наличие вакуолей) [Goodwin et al, 1986, Hessey et al, 1990]

Наиболее выраженные патологические изменения эпителия наблюдались в образцах больных с генотипами IL-1 и IL-10, определяющими нормальную секрецию про- и противовоспалительного цитокинов, при инфицировании высоковирулентными штаммами Нpylori (cagA+ vacAsl*)

Умеренно выраженными оказались изменения эпителиального пласта в образцах больных с генотипами, характерными для повышенной секреции провоспалительного и нормальной секреции противовоспалительного цитокинов, а также повышенной секреции противовоспалительного и нормальной секреции провоспалительного цитокинов

Наименее выраженные патологические изменения эпителия наблюдались в образцах больных, являющихся носителями генотипов интерлейкинов, определяющих повышенную секрецию про- и противовоспалительного цитокинов, при инфицировании высоковирулентными штаммами Н pylori (tagA*vacAsl*) Однако в присутствии Mhyorhmis при соответствующих генотипах цитокинов и Нpylori деструктивные изменения оказывались весьма выраженными

Выявленные особенности ультраструктуры эпителия могут быть связаны с вариантами генетически опосредованной иммунореактивности организма-хозяина, индуцируемой соответствующими штаммами Н pylori При этом в случае сочетанной (Яpylori+Mhyorhinis) инфекции наблюдаемые изменения ультраструктуры могут быть обусловлены уникальной возможностью микоплазм ингибировать иммунореактивность хозяина и, таким образом, способствовать проявлению патогенности инфекционных агентов на фоне пониженной иммунореактивности организма [Прозоровский и др, 1995, Борхсениус и др, 2002, Razin et al, 2006] В этой связи больные ЯБ с соответствующими ассоциациями генотипов хеликобактера и полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10) при сочетанной (Яpylori+M hyorhinis) инфекции, вероятно, требуют особого внимания

Таким образом, результаты, полученные в нашей работе, позволяют заключить, что характер патологических изменений ультраструктуры в слизистой желудка при язвенной патологии может быть связан с генотипами Нpylori, а также полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10) и наличием сочетанной (Яpylori+M hyorhinis) инфекции Молекулярно-генетические механизмы этих явлений еще предстоит определить

6. Особенности морфометрических показателей язвенных дефектов у больных с различными генотипами полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10) и штаммов Н.pylori

В результате наших исследований было обнаружено, что больные ЯБ с двойными острыми язвами достоверно чаще инфицированы штаммами H.pylori, имеющими ген вирулентности vacAsl (р=0,005, OR=24,90, 95%С1 1,40-442,80), определяющий повышенную цитолитическую активность Н.pylori [Atherton et al„ 1995].

В результате анализа распределения комбинации генотипов, определяющих высокую или низкую вирулентность штаммов H.pylori, было обнаружено, что в группе больных ЯБ, инфицированных низковирулентными штаммами H.pylori {cagA'vacAsl'), достоверно чаще наблюдалось самопроизвольное рубцевание язвенных дефектов (/"=13,12, р<0,001), чем у инфицированных высоковирулентными штаммами (cagA* vacAsl+) (%2=5,26, р<0,022). У носителей штаммов H.pylori с генотипами cagA~vacAsl~ вероятность спонтанного рубцевания язвенных дефектов выше (OR=8,38, 95%С1 2,53-27,68), чем у носителей высоковирулентных штаммов с генотипами cagA* vacAsl* (OR=0,31, 95%CI 0,16-0,81).

При разделении выборки на больных ЯБЖ (п=33) и ЯБДК (п=80) закономерности сохраняются только для группы больных ЯБДК. Результаты статистического анализа позволяют заключить, что вероятность самопроизвольного рубцевания у больных ЯБДК при инфицировании СОЖ низковирулентными штаммами H.pylori (cagA vacAsl') выше, чем при инфицировании высоковирулентными штаммами хеликобактера (cagA* vacAsl*) (р=0,001, 0/?=18,75, 95%С1 2,26-155,35; р=0,017, 0я=0,27, 95%С1 0,10-0,74, соответственно) (рис. 11).

Рис.11. Распределение штаммов Н.р\1оп с генотипами cagA*vacAsl* и сацЛ' \4icAsl у больных ЯБДК с зарубцевавшимися и открытыми язвами

Результаты анализа морфометрических показателей язвенных дефектов и генотипов полиморфных локусов генов цитокинов (1Ь-1 и 1Ь-10) на возможность ассоциации свидетельствуют, что у носителей генотипа lL~¡RN1Ч/*l достоверно чаще наблюдается самопроизвольное рубцевание язвенных дефектов (р=0,045, 0Я=2,48, 95%С1 1,10-5,60), чем у носителей генотипа ¡L-lRN~■2/,>2 (р=0,029, ОК= 0,12, 95%С10,01-0,96).

При разделении выборки на больных ЯБЖ (п=34) и ЯБДК (п=87) выявленные закономерности сохраняются только для больных ЯБДК (рис. 12).

Вероятность самопроизвольного рубцевания язвенных дефектов у больных ЯБДК с генотипом IL-1RN*!/*!, определяющего нормальный уровень секреции провоспалительного цитокина (IL-1B) [Turner, 1997], выше, чем у носителей генотипа IL-]RN*2/*2, определяющего высокий уровень секреции провоспалительного цитокина (IL-1B) (р=0,015, 0Я=3,69, 95%С1 1,39-9,81, р =0,004, OR=0,05,95%С10,003-0,90, соответственно) (рис 12)

.. - V

Рис 12 Распределение генотипов Я,-/Л^УЛТЛ) больных ЯБДК с зарубцевавшимися и открытыми язвами

Достоверные различия в отношении полиморфных локусов IL-1B-511C>T, IL-1B+3954C>T и IL-10-1082G>A, комбинаций полиморфных вариантов генов IL-] и 1L-10, а также наличия или отсутствия сочетанной (Н pylori+M hyorhinis) инфекции у больных язвенной болезнью с открытыми и зарубцевавшимися язвенными дефектами в целом и при разделении выборки на подгруппы (ЯБЖ и ЯБДК) не выявлены Достоверные различия в отношении размеров язвенных дефектов у больных с различными генотипами полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10), а также наличия или отсутствия сочетанной (Яpylori+M hyorhinis) инфекции в целом и при разделении выборки на подгруппы (ЯБЖ и ЯБДК) тоже не обнаружены

Полученные нами данные свидетельствуют, что возможность самопроизвольного рубцевания язвенных дефектов больных ЯБДК ассоциирована с генотипами cagA vacAsl штаммов Я pylori, а также IL-IRN(VNTR) индивидов В этой связи значительный интерес представляют особенности ассоциаций морфометрических показателей язвенных дефектов с генотипами Нpylori и полиморфных локусов генов цитокинов в других регионах мира Однако сведения о проведении соответствующих исследований в литературе отсутствуют

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Большой интерес к Helicobacter pylori сегодня обусловлен, с одной стороны, уникальностью биологии этой бактерии, а с другой - диктуется практической необходимостью Колонизация слизистой оболочки желудка Яpylon может быть причиной развития хронического гастрита, пептической язвы и В-лимфомы Изучение вирулентных свойств Н pylori как основного этиопатогенного фактора ЯБЖ и ЯБДК, эпидемиологии хеликобактериоза и

разработка способов контроля инфекции Нpylori являются важнейшими задачами современной медицины [Исаков, Домарадский, 2003]

Большой объем экспериментальных данных и клинических наблюдений, в том числе успешная реализация геномных проектов в отношении штаммов Нpylori, значительно расширили представления о биологии и патогенности этой бактерии Однако молекулярные основы различия восприимчивости и чувствительности к персистенции Н pylori у разных индивидов пока недостаточно изучены

Предполагают, что вариабельность генотипов хеликобактера в отношении факторов вирулентности, а также полиморфизм генов иммунного ответа и особенности микробиоценозов индивидов могут в значительной мере обусловливать различия клинических последствий инфицирования СОЖ Н pylori Однако данные о систематических исследованиях указанных предположений в научной литературе отсутствуют

Известно, что генетический полиморфизм IL-1 (IL-1B-511С>Т, IL-1В+3954С>Т, IL-IRN(VNTR)) и IL-10 (IL-10-1082G>A), обусловленный единичными нуклеотидными заменами и/или изменениями числа копий повторяющихся последовательностей в промоторной и кодирующей зоне, может обусловливать различный уровень экспрессии генов интерлейкинов, и, соответственно, характер иммунного ответа В этой связи разные варианты полиморфных локусов IL-1 и IL-10 могут по-разному влиять на баланс про- и противовоспалительной реактивности, определяющей восприимчивость и чувствительность к персистенции бактерий

Нами впервые проведено исследование особенностей распределения генотипов штаммов Helicobacter pylori, определяющих вирулентность бактерий, и полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10) носителей хеликобактера в группе больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки (жители г Казани) при наличии и отсутствии сочетанной (Нpylori+M hyorhmis) инфекции; выявлены молекулярно-генетические маркеры риска развития ЯБ, ассоциированной с Н pylori и показано, что возможность самопроизвольного рубцевания ассоциирована с генотипами Н pylori, а также полиморфных локусов генов цитокинов В нашей работе впервые были исследованы ультраструктурные особенности СОЖ больных ЯБЖ с разными генотипами Нpylori и полиморфных локусов генов IL-1 и IL-10 при наличии и отсутствии сочетанной (Яpylori+M hyorhmis) инфекции и показано, что характер изменений эпителия СОЖ различается у индивидов в зависимости от генотипов хеликобактера, генов цитокинов, а также инфицируемости микоплазмой Учитывая результаты наших исследований ультраструктуры СОЖ у больных ЯБЖ, пациенты с «критичной» ассоциацией генотипов Н pylori и полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10) при инфицировании М hyorhmis, вероятно, требуют особого внимания Эффект сочетанных с микоплазмами инфекций описан в ряде работ, но молекулярные основы феномена сочетанной (Нpylori+M hyorhmis) при язвенной болезни еще предстоит выяснить

Результаты, полученные в нашей работе, подтверждают предположения, что встречаемость Яpylori и М hyorhinis, а также генотипов хеликобактера и полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10) у больных ЯБ в разных регионах имеют особенности Полученные нами данные могут быть использованы для определения индивидуальных и региональных особенностей ЯБЖ и ЯБДК, ассоциированных с Я pylori, а также разработки дифференцированных программ лечения и профилактики заболевания Однако очевидно, что разработка эффективных методов контроля язвенной болезни, ассоциированной с Я pylori, лежит на пути изучения молекулярно-генетических механизмов формирования системы «паразит-хозяин» и предполагает крупномасштабные исследования молекулярно-генетических основ этого заболевания в разных регионах мира

ВЫВОДЫ

1 Слизистая оболочка желудка всех обследованных больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки инфицирована Helicobacter pylori Штаммы Н pylori с комбинацией генотипов cagA* vacAsl+, определяющей высокую вирулентность хеликобактера, достоверно чаще встречаются у больных язвенной болезнью, ассоциированной с Нpylori

2 У носителей аллели IL-1B-511*C и генотипа IL-1B-511*C/*C повышен риск развития язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с Я pylori, а у носителей аллели IL-1B-511*Ти генотипа IL-1B-511*С/*Т, напротив, снижена вероятность формирования заболевания

3 У носителей генотипа IL-lRN*l/*2 понижена вероятность развития язвенной болезни двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с Я pylori

4 У больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с Я pylori, являющихся носителями комбинации генотипов IL-1В-511*Т/*С, IL-1B+3954*С/*С, IL-1RN*1/*1, IL-10-1082*G/*G, достоверно реже встречаются высоковирулентные штаммы хеликобактера (cagA* vacAsl+)

5 У больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с Нpylori, являющихся носителями генотипа IL-1RN*1/*1, и/или инфицированных низковирулентными штаммами хеликобактера (cagA vacAsl), вероятность самопроизвольного рубцевания язвенных дефектов выше, чем у носителей генотипа !L-lRN*2/*2, и/или инфицированных высоковирулентными штаммами хеликобактера (cagA* vacAsl+)

6 Слизистая оболочка желудка 19% больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциированной Я pylori, инфицирована Mycoplasma hyorhinis Сочетанная (Яpylori+M hyorhinis) инфекция достоверно чаще встречается у носителей комбинации генотипов IL-1B-511*Т/*Т, IL-1В+3954*С/*С, IL-lRN*2/*2, IL-10-1082*A/*G

7 Характер патологических изменений ультраструктуры СОЖ различается у больных язвенной болезнью в зависимости от генотипов Я pylori, полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10), а также наличия сочетанной (Яpylori+M hyorhinis) инфекции

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Чернова OA Инфекция Helicobacter pylori генотипы, реактивность и особенности патогенеза / О А Чернова, Р А Абдутхаков, Э.Р Насыбуллина (Абузарова), В М Чернов // Технологии генодиагностики в практическом здравоохранении Сб трудов - М , 2002 - С 274-276

2 Абдулхаков РА Инфекция Helicobacter pylori синергенты, генотипы, полиморфизм и иммунореактивность /РА Абдулхаков, О А Чернова, Э.Р Насыбуллина (Абузарова) и др //Педиатрия -2002 -№2 - С 19-22

3 Абдулхаков Р А Распространенность различных штаммов Helicobacter pylori у пациентов с язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки /РА Абдулхаков, В М Чернов, Э.Р.Насыбуллина (Абузарова) и др // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология -2002 - №1 -С 112

4 Abdulhakov R Prevalence of different Helicobacter pylori strains among the patients with peptic ulcer disease / R Abdulhakov, V Chernov, E.Nasybullina (Abuzarova) et al // Disease Progression and Carcinogenesis in the Gastrointestinal Tract (Falk Symposium) Abstracts of Symposium - Freiburg, 2002 - P 3

5 Насыбуллина (Абузарова) Э.Р Распространенность различных штаммов Helicobacter pylori у больных с гастродуоденальной патологией / ЭР Насыбуллина (Абузарова), Р А Абдулхаков, О А Чернова и др // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии мат VI Межд симпозиума «Диагностика и лечение заболеваний, ассоциируемых с Helicobacter pylori» 26-27 мая 2003 г - Екатеринбург, 2003 - Т XIII - №3 - С 10

6. Nassybullina (Abuzarova) Е Helicobacter pylori genotypes in patients with gastric and duodenal ulcer / E Nassybullina, V Chernov, R Abdulkhakov et al // XVIth International Workshop of European Helicobacter Study Group - Sweden, 2003 -P 136

7 Абдулхаков P А Распространенность различных штаммов Helicobacter pylori у пациентов с язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки /РА Абдулхаков, В М Чернов, Э.Р.Насыбуллина (Абузарова) и др // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология -2003 -№1 -С 78-79

8 Насыбуллина (Абузарова) Э.Р Распределение генотипов Helicobacter pylori среди пациентов с гастродуоденальной патологией / ЭР Насыбуллина (Абузарова), Р А Абдулхаков, О А Чернова и др // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология -2004 - №1 -С 126-132

9 Насыбуллина (Абузарова) Э.Р Особенности генетического полиморфизма геликобактерий при гастродуоденальной патологии у пациентов г Казани /ЭР Насыбуллина (Абузарова), Р А Абдулхаков, О А Чернова и др // Мат IX Всероссийской научн -практ конф «Молодые ученые в медицине» 20-21 апреля 2004г - Казань, 2004 - С 134

10 Насыбуллина (Абузарова) Э.Р Распределение генотипов Helicobacter pylori среди больных с гастродуоденальной патологией / ЭР Насыбуллина (Абузарова), О А Чернова, Р А Абдулхаков и др // Мат 8-й Межд Пущинской школы- конференции молодых ученых - Пущино, 2004 - С 156

11 Чернова О А Особенности полиморфизма генов вирулентности Helicobacter pylori и генов ИЛ-1 при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с Helicobacter pylori /ОА Чернова, Р А Абдулхаков, Э.Р.Насыбуллина (Абузарова) и др. // Бюллетень сибирской медицины - 2005, прилож 2 - С 31-36

12 Nassybullina (Abuzarova) Е. Interleukin-1 family genes polymorphysm among the patients with Helicobacter pylori-associated ulcer disease /ER Nasybullina, О V Gorshkov, R A Abdulhakov et al // VIII,h International Euroasian Congress of Surgeons and Gastroenterologists Book of Abstracts - Tbilisi, 2005 - P 38

13 Chernova О A Genotypes of the Helicobacter pylori isolates and the IL-1 genes in Kazan citizens (Kazan, Russia) with gastric and duodenal ulcer /OA Chernova, E.R.Nasybullina (Abuzarova), V M Chernov et al // Electron J Biomed - 2006 -Vol 1 -P 32-42

14 Шаймарданова ГФ Ультраструктура эпилеоцитов у больных язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки при сочетанной инфекции Нpylori и U urealyhcum / Г Ф Шаймарданова, Ф А Абдрахимов, Э.Р.Насыбуллина (Абузарова) и др // Мат XXI-ой Российской конференции по электронной микроскопии - Черноголовка, 2006 - С 278

15 Абузарова Э.Р Полиморфизм генов вирулентности Helicobacter pylori и цитокинов (IL-1 и IL-10) у носителей геликобактерий при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки /ЭР Абузарова, А Р Шакирова, А. А Музыкантов и др // Тез докл ХИ-ой Всеросс научн -практ конф с межд участием «Молодые ученые в медицине» - Казань, 2007 - С 79

16 Abuzarova E.R. Polymorphism of Helicobacter pylori genotypes and cytokines (IL-1 and IL-10) in patients with gastric and duodenal ulcer / E Abuzarova, R Abdulhakov, О Gorshkov et al //Helicobacter -2007 - Vol 12 -N4 -P401

17 Исаева Г Ш Выявление Helicobacter pylori у больных с гепатобилиарной патологией /ГШ Исаева, О К Поздеев, Э.Р.Абузарова // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология мат VIII съезда Научного общества гастроэнтерологов России Москва, 4-7 марта 2008 г - 2008 г - №1, прилож №1 -С 143-144

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

ГДП - гастродуоденальная патология

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ПЦР - полимеразная цепная реакция

СОЖ - слизистая оболочка желудка

ЯБ - язвенная болезнь

ЯБДК - язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки

ЯБЖ язвенная болезнь желудка

vac А - vacuolating cytotoxin А (ген, кодирующий

вакуолизирующий цитотоксин)

cagA cytotoxin-associated gene А (ген, кодирующий

маркер островка патогенности Нpylori)

induced by contact with epithelium (ген, кодирующий белок, индуцируемый контактом хеликобактера с эпитетием)

blood group antigen-binding adhesin (ген, кодирующий белок (адгезии), связывающий антигены группы крови) интерлейкин

полиморфизм гена IL-1B, обусловленный однонуклеотидными заменами в положении -511 и +3954, соответственно

полиморфизм гена IL-1B, обусловленный однонуклеотидными заменами в положении -1082 полиморфизм гена 1L-1RN, обусловленный изменениями числа копий повторяющихся последовательностей

Отпечатано в «Оперативная типография» ИПЛогазаЛС ИНН 166109345069 г Казань, ул Московская, 43/6 Подписано в печать 05 09 2008 Тираж 100 экз Формат 147*210мм бумага офсетная печать ризограф 6 печатных листов

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Абузарова, Эльмира Ренардовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Глава 1. Общая характеристика хеликобактерий.

1.1. История открытия, систематика и филогения Helicobacter pylori.

1.2. Особенности клеточной и молекулярной биологии Helicobacter pylori.

1.3. Факторы вирулентности и генетический полиморфизм штаммов Helicobacter pylori.

Глава 2. Феноменология язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с Helicobacter pylori.

2.1. Особенности микробиоценозов желудка у больных язвенной болезнью.

2.2. Особенности индуцированных Helicobacter pylori поражений слизистой оболочки желудка у больных язвенной болезнью: патофизиологические, цитологические и ультраструктурные аспекты.

2.3. Полиморфизм генов ключевых иммуномедиаторов {IL-1 и IL-10) и его особенности при язвенной болезни.

2.4. Контроль инфекций Helicobacter pylori: проблемы и перспективы.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

Глава 3. Материалы и методы.

3.1. Особенности клинического материала.

3.2. Выделение и очистка ДНК из проб.

3.3. Выделение ДНК из крови.

3.4. Выявление Helicobacter pylori в клиническом материале методом ПЦР.

3.5. Выявление генов патогенности клинических изолятов Helicobacter pylori методом ПЦР.

3.6. Выявление полиморфных вариантов генов IL-1 и IL

3.7. Выявление Mycoplasma hyorhinis в клиническом материале методом ПЦР.

3.8. Определение нуклеотидных последовательностей.

3.9. Электронно-микроскопическое исследование образцов слизистой оболочки желудка больных язвенной болезнью.

4.0. Статистическая обработка данных.

Глава 4. Результаты исследований и их обсуждение.

4.1. Частота встречаемости Helicobacter pylori и генотипы штаммов хеликобактера у больных язвенной болезнью.

4.2. Распределение генотипов IL-1 и IL-10 у больных язвенной болезнью и представителей контрольной группы.

4.3. Ассоциация генотипов H.pylori с полиморфными вариантами генов цитокинов IL-1 и IL-10 у больных язвенной болезнью.

4.4. Частота встречаемости Mycoplasma hyorhinis в биоптатах больных язвенной болезнью и особенности генотипов H.pylori и полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10) в случае сочетанной (H.pylori+M. hyorhinis) инфекции.

4.5. Особенности ультраструктуры эпителия слизистой желудка у больных язвенной болезнью желудка с разными генотипами H.pylori и полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10) при наличии и отсутствии сочетанной (H.pylori+M. hyorhinis) инфекции.

4.6. Особенности морфометрических показателей язв у больных с различными генотипами полиморфных локусов генов цитокинов {IL-1 и IL-10), штаммов H.pylori, а также в случае сочетанной (H.pylori+M.hyorhinis) инфекции.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Особенности генотипов Helicobacter pylori и полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10) у больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки"

Helicobacter pylori является одной из наиболее изучаемых бактерий в мире в настоящее время. Инфекция H.pylori сопутствует человеку с древних времен [Covacci, 1999]. Сегодня носителем H.pylori является почти каждый второй житель планеты [Feldman, 1998]. Инфицирование возможно как непосредственно от человека или животных, так и опосредованно, в том числе через эндоскопические аппараты и стоматологические инструменты [Fontham, 1995; Feldman, 1998; De Schryver et ah, 2001].

Для большинства инфицированных характерно бессимптомное носительство. Вместе с тем предполагается наличие взаимосвязи между инфекцией H.pylori и рядом заболеваний у человека [Bohr et ah, 2007]. Однако пока доказана связь инфицирования СОЖ человека H.pylori с гастродуоденальной патологией - В-клеточной лимфомой, хроническим гастритом, а также язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки. - одним из наиболее распространенных заболеваний желудочно-кишечного тракта у человека [Василенко, 1987; Van Doom et al., 1998 (I); Ивашкин и др., 2003; Григорьев, Яковенко, 2004].

Наибольший уровень заболеваемости язвенной болезнью в настоящее время зарегистрирован в Приволжском федеральном округе - 1423,4 на 100 тыс. населения. Доля больных с впервые выявленной язвенной болезнью за последние годы выросла с 18% до 26% [Заболеваемость населения России в 2003 году: статистические материалы. Часть I. - М.:ГЭОТАР-МЕД, 2004. -124 е.].

Основным документом, определяющим показания и подходы к лечению ЯБЖ и ЯБДК, ассоциированной с H.pylori, является Маастрихтский консенсус II (2000) и III (2005) [Malfertheiner et al., 2002, 2005]. Однако в большинстве случаев результат применения соответствующих схем лечения не достигает необходимых 80% [Malfertheiner et al., 2005]. Основными причинами недостаточной эффективности предлагаемых методов лечения считают неизученность молекулярно-генетических аспектов заболевания ЯБЖ и ЯБДК, ассоциированной с H.pylori, в том числе молекулярно-генетических основ формирования системы «паразит-хозяин», определяющих восприимчивость и чувствительность к персистенции H.pylori у разных индивидов [Ando et al., 2007], а также отсутствие учета региональных особенностей хеликобактерных инфекций [Абдулхаков, 2006].

Различия восприимчивости и чувствительности к персистенции H.pylori связывают с вариабельностью генотипов хеликобактера в отношении факторов вирулентности, а также полиморфизмом генов иммунного ответа у носителей инфекционных агентов. Предполагают, что развитие ЯБЖ и ЯБДК может быть ассоциировано с наличием у индивидов определенных генотипов хеликобактера (cagA, iceA, babA и vacA), а также вариантов полиморфных локусов генов ключевых иммуномедиаторов про- и противовоспалительных реакций - IL-1 (IL-1B-5110T, IL-1B+3954C>T, IL-IRN(VNTR)) и IL-10 (.IL-10-1082G>A) [Garcia-Gonzalez et al., 2001, 2003; Rad et al., 2003, 2004]. Предполагается, что носители определенных генотипов полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10) могут колонизироваться специфичными в отношении факторов вирулентности штаммами H.pylori, а распределение генотипов H.pylori и полиморфных локусов генов цитокинов, а также их ассоциации у индивидов в разных регионах различаться [Garcia-Gonzalez et al., 2003; Rad et al., 2004]. В последнее время появились сообщения, что существенным фактором развития гастродуоденальной патологии может быть колонизация СОЖ микоплазмами, в частности, Mycoplasma hyorhinis [Huang et al., 2001; Kwon et al., 2004]. Однако систематические исследования для проверки всех вышеуказанных предположений в разных регионах мира не проводились.

Цель данной работы - определить особенности генотипов H.pylori и полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10) у больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки в г. Казани.

Основные задачи исследования:

1. Протестировать биоптаты больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки на наличие Helicobacter pylori и определить частоту встречаемости бактерий в исследуемых образцах.

2. Выполнить типирование штаммов H.pylori по генам факторов вирулентности (cagA, iceA, babA и аллелям ml, т2, si, s2 гена vacA) у больных язвенной болезнью и провести анализ распределения генотипов H.pylori в обследуемой группе.

3. Определить варианты полиморфных локусов генов IL-1B (IL-1B-511С>Т, IL-1B+39540T, IL-1RN(VNTR)) и IL-10 (IL-10-1082G>A) у больных язвенной болезнью, а также в контрольной группе и провести анализ распределения частоты их встречаемости в обследуемых группах.

4. Провести ассоциативный анализ генотипов H.pylori и полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10) у больных язвенной болезнью.

5. Протестировать биоптаты больных язвенной болезнью на наличие M.hyorhinis, определить частоту встречаемости сочетанной {H.pyJori+M.hyorhinis) инфекции СОЖ и провести ассоциативный анализ распределения генотипов H.pylori, а также полиморфных локусов генов цитокинов (JL-1 и IL-10) в отношении хеликобактерно - микоплазменной инфекции в обследуемой группе.

6. Выполнить сравнительный анализ ультраструктуры эпителия СОЖ у больных ЯБЖ с разными генотипами H.pylori и полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10) при наличии и отсутствии сочетанной (H.pylori+M.hyorhinis) инфекции.

7. Провести ассоциативный анализ морфометрических показателей язвенных дефектов и генотипов H.pylori, а также вариантов полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10) у больных язвенной болезнью при наличии и отсутствии сочетанной (H.pylori+M.hyorhinisj инфекции.

Научная новизна. Впервые проведено исследование особенностей распределения генотипов штаммов Helicobacter pylori, определяющих вирулентность бактерий, и полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10) в группе больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки (жители г. Казани) при наличии и отсутствии сочетанной (H.pylori+M.hyorhinis) инфекции. Показано, что слизистая оболочка желудка всех больных ЯБ инфицирована H.pylori и установлено, что штаммы H.pylori с генотипами, определяющими высокую вирулентность хеликобактера, достоверно чаще встречаются в исследуемых образцах.

У 19% больных ЯБ обнаружено сочетанное {H.pylori+M.hyorhinis) инфицирование слизистой желудка. Установлено, что хеликобактерно-микоплазменная инфекция достоверно чаще встречается у больных ЯБЖ и ЯБДК с комбинацией генотипов IL-1B-511*T/*T, IL-1B+3954*C/C, IL-1RN2/2, IL-10-1082A/G (p<0,05).

Выявлены молекулярно-генетические маркеры предрасположенности к ЯБЖ и ЯБДК. Обнаружено, что аллель IL-1B-511*С и генотип IL-1B-511*С/*С повышают риск развития язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с H.pylori, а аллель IL-1B-511*Т, генотип IL-1B-511*С/*Т — снижают вероятность формирования заболевания. Показано, что больные язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с H.pylori, являющиеся носителями сочетания генотипов IL-1B-511*T/*C, IL-1B+3954*C/*C, IL-1RN*1/*1, IL-10-1082*G/*G, инфицированы преимущественно низковирулентными штаммами хеликобактера. Установлено, что возможность самопроизвольного рубцевания язвенных дефектов больных ЯБДК ассоциирована с генотипами cagAvacAsl штаммов H.pylori, а также IL-1RN(VNTR) индивидов.

Практическая значимость. Результаты работы вносят вклад в представление о молекулярно-генетических аспектах язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с H.pylori, и их региональных особенностях. Впервые выявлены генетические маркеры предрасположенности к заболеванию и его особенностям у индивидов в г. Казани.

Полученные данные могут быть использованы в научно-практических исследованиях механизмов формирования системы «паразит - хозяин» и связанной с ней гастродуоденальной патологии для разработки дифференцированных региональных программ, а также индивидуальных схем лечения и профилактики язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с H.pylori. Результаты работы могут быть также использованы в курсах лекций по биохимии, микробиологии, молекулярной генетике, гастроэнтерологии и молекулярной медицине в ВУЗах.

2004), научно-практической конференции студентов и аспирантов "Молодежь ВУЗов Казани в решении актуальных проблем города" (Казань, 2004), VIII Международном Евроазиатском конгрессе гастроэнтерологов (Тбилиси,

2005), на XXI-ой Российской конференции по электронной микроскопии (Черноголовка, 2006), на ХХ-ом Международном симпозиуме Европейской группы по изучению Helicobacter pylori (EHSG) (Стамбул, 2007), Всероссийской научно-практической конференции "Молодые ученые в медицине" (Казань, 2004, 2007), Итоговой научной конференции КИББ КНЦ РАН (Казань, 2008), XXI Международном симпозиуме Европейской группы по изучению Helicobacter pylori (EHSG) (Рига, 2008).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 17 научных работ, в том числе 4 статьи в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК.

Положения, выносимые на защиту:

1. Большинство больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки (жители г.Казани) является носителями высоковирулентных штаммов H.pylori.

2. Аллель IL-1B-511*C и генотип IL-1B-511 *С/*С повышают риск развития язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с H.pylori, а аллель IL-1B-511*Т, генотип IL-1B-5U*C/*T — снижают вероятность формирования заболевания.

3. Больные язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с H.pylori, являющиеся носителями сочетания генотипов IL-1В-511*Т/*С, IL-1B+3954*C/*C, IL-1RN*1/*1, IL-10-1082*G/*G, инфицированы преимущественно низковирулентными штаммами хеликобактера.

4. Возможность самопроизвольного рубцевания язвенных дефектов больных ЯБДК ассоциирована с генотипами cagAvacAsl штаммов H.pylori, а также IL-IRN(VNTR) индивидов.

Связь работы с научными программами и собственный вклад автора в исследование. Работа в течение 2001-2008 гг. проводилась в соответствии с планом научных исследований КИББ КазНЦ РАН по теме «Взаимодействие микоплазм с высшими организмами на молекулярно-генетическом уровне» (№ гос. per. 0120.0 603845). Исследования поддержаны грантами ФОНДа НИОКР РТ: 03-3.10-163 «Полиморфизм микроорганизмов, ассоциированных с заболеваниями желудочно-кишечного тракта в популяциях народов Республики Татарстан: особенности ультраструктуры и генетической вариабельности клинических изолятов Helicobacter pylori и микоплазм», 2001-2003 гг. и ФОНДа НИОКР РТ: 03-3.10-361/ 2005 «Генетический полиморфизм в популяциях народов Республики Татарстан: вариабельность генов цитокинов у пациентов с гастродуоденальными и урогенитальными заболеваниями при персистенции хеликобактерий и микоплазм», 2002-2005 гг.

Научные положения диссертации базируются на результатах собственных исследований автора. Автор выражает благодарность к.б.н. Акберовой Н.И. (каф. биохимии Казанского государственного университета) за помощь в проведении статистического анализа полученных результатов; проф. Борхсениусу С.Н. (зав. лаб. структурной организации генома Института цитологии РАН, г.Санкт-Петербург) за предоставление образцов ДНК референтного штамма M.hyorhinis М20; к.б.н. Шаймардановой Г.Ф. (КИББ КазНЦ РАН, г.Казань) за проведение электронно-микроскопического исследования образцов СОЖ; к.м.н. Сайфутдинову И.М. и Давлиеву М.К. (МКДЦ, г.Казань) за предоставление биоптатов СОЖ, полученных в результате проведенной ими фиброгастродуоденоскопии; а также к.б.н. Т.А.Акопиан (ФГУ НИИ физико-химической медицины Минздрава РФ, г.Москва) за определение нуклеотидных последовательностей ампликонов.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Глава 1. Общая характеристика хеликобактерий

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Абузарова, Эльмира Ренардовна

122 ВЫВОДЫ

1. Слизистая оболочка желудка всех обследованных больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки инфицирована Helicobacter pylori. Штаммы H.pylori с генотипами cagA+ vacAsl+, определяющими высокую вирулентность хеликобактера, достоверно чаще встречаются у больных язвенной болезнью, ассоциированной с H.pylori.

2. У носителей аллели IL-1B-511*С и генотипа IL-1B-511*С/*С повышен риск развития язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с H.pylori, а у носителей аллели IL-1B-511 и генотипа IL-1В-511 *С/*Т, напротив, снижена вероятность формирования заболевания.

3. У носителей генотипа IL-lRN*l/*2 понижена вероятность развития язвенной болезни двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с H.pylori.

4. У больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с H.pylori, являющихся носителями комбинации генотипов IL-1B-511 *Т/*С, IL-1B+3954*С/*С, IL-1RN*1/*1, IL-10-1082 *G/*G, достоверно реже встречаются высоковирулентные штаммы хеликобактера (cagA + vac As 1+).

5. У больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки, ассоциированной с H.pylori, являющихся носителями генотипа IL-1RN*!/*!, и/или инфицированных низковирулентными штаммами хеликобактера (cagA' vacAsl'), вероятность самопроизвольного рубцевания язвенных дефектов выше, чем у носителей генотипа IL-lRN*2/*2, и/или инфицированных высоковирулентными штаммами хеликобактера (cagA+ vacAsl+).

6. Слизистая оболочка желудка 19% больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки, ассоциированной H.pylori, инфицирована Mycoplasma hyorhinis. Сочетанная (Н.pyloricM.hyorhinis) инфекция достоверно чаще встречается у носителей комбинации генотипов IL-1B-511 *Т/*Т, IL-1B+3954*C/*C, IL-lRN*2/*2, IL-10-1082*A/*G.

7. Характер патологических изменений ультраструктуры СОЖ различается у больных язвенной болезнью в зависимости от генотипов H.pylori, полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10), а также наличия сочетанной (H.pylori+M.hyorhinis) инфекции.

124

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Большой интерес к Helicobacter pylori сегодня обусловлен, с одной стороны, уникальностью биологии этой бактерии, а с другой — диктуется практической необходимостью. Колонизация слизистой оболочки желудка H.pylori может быть причиной развития хронического гастрита, пептической язвы и В-лимфомы. Изучение вирулентных свойств H.pylori как основного этиопатогенного фактора ЯБЖ и ЯБДК, эпидемиологии хеликобактериоза и разработка способов контроля инфекции H.pylori являются важнейшими задачами современной медицины [Исаков, Домарадский, 2003].

Большой объем экспериментальных данных и клинических наблюдений, в том числе успешная реализация геномных проектов в отношении штаммов H.pylori, значительно расширили представления о биологии и патогенности этой бактерии. Однако молекулярные основы различия восприимчивости и чувствительности к персистенции H.pylori у разных индивидов пока недостаточно изучены.

Предполагают, что вариабельность генотипов хеликобактера в отношении факторов вирулентности, а также полиморфизм генов иммунного ответа и особенности микробиоценозов индивидов могут в значительной мере обусловливать различия клинических последствий инфицирования СОЖ H.pylori. Однако данные о систематических исследованиях указанных предположений в научной литературе отсутствуют.

Известно, что генетический полиморфизм IL-1 (IL-1B-511C>T, IL-1В+3954С>Т, IL-IRN(VNTR)) и IL-10 (IL-10-1082G>A), обусловленный единичными нуклеотидными заменами и/или изменениями числа копий повторяющихся последовательностей в промоторной и кодирующей зоне, может обусловливать различный уровень экспрессии генов интерлейкинов, и, соответственно, характер иммунного ответа. В этой связи разные варианты полиморфных локусов IL-1 и IL-10 могут по-разному влиять на баланс про- и противовоспалительной реактивности, определяющей восприимчивость и чувствительность к персистенции бактерий.

Нами впервые проведено исследование особенностей распределения генотипов штаммов Helicobacter pylori, определяющих вирулентность бактерий, и полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10) носителей хеликобактера в группе больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки (жители г. Казани) при наличии и отсутствии сочетанной {H.pylori^ M.hyorhinis) инфекции; выявлены молекулярно-генетические маркеры риска развития ЯБ, ассоциированной с H.pylori и показано, что возможность самопроизвольного рубцевания ассоциирована с генотипами H.pylori, а также полиморфных локусов генов цитокинов. В нашей работе впервые были исследованы ультраструктурные особенности СОЖ больных ЯБЖ с разными генотипами H.pylori и полиморфных локусов генов IL-1 и IL-10 при наличии и отсутствии сочетанной (Н.pyloric-M.hyorhinis) инфекции и показано, что характер изменений эпителия СОЖ различается у индивидов в зависимости от генотипов хеликобактера, генов цитокинов, а также инфицируемости микоплазмой. Учитывая результаты наших исследований ультраструктуры СОЖ у больных ЯБЖ, пациенты с «критичной» ассоциацией генотипов H.pylori и полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10) при инфицировании М. hyorhinis, вероятно, требуют особого внимания. Эффект сочетанных с микоплазмами инфекций описан в ряде работ, но молекулярные основы феномена сочетанной (H.pylori+M.hyorhinis) при язвенной болезни еще предстоит выяснить.

Результаты, полученные в нашей работе, подтверждают предположения, что встречаемость H.pylori и M.hyorhinis, а также генотипов хеликобактера и полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10) у больных ЯБ в разных регионах имеют особенности. Полученные нами данные могут быть использованы для определения индивидуальных и региональных особенностей ЯБЖ и ЯБДК, ассоциированных с H.pylori, а также разработки дифференцированных программ лечения и профилактики заболевания. Однако очевидно, что разработка эффективных методов контроля язвенной болезни, ассоциированной с H.pylori, лежит на пути изучения молекулярно-генетических механизмов формирования системы «паразит-хозяин» и предполагает крупномасштабные исследования молекулярно-генетических основ этого заболевания в разных регионах мира.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Абузарова, Эльмира Ренардовна, Казань

1. Аруин Л.И. Морфологическая диагностика болезней желудка и кишечника / Л.И. Аруин, Л.Л. Капуллер, В.А. Исаков. М.: Триада-Х, 1998. -496 с.

2. Бондаренко В.М. Роль персистирующих условно-патогенных бактерий в патогенезе язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки / В.М. Бондаренко, В.М. Червинец, А.А. Воробьев // Журн. микробиол. 2003. - №4. — С.11-17.

3. Борхсениус С.Н. Микоплазмы: молекулярная и клеточная биология, взаимодействие с иммунной системой млекопитающих, патогенность, диагностика / С.Н. Борхсениус, О.А. Чернова, В.М. Чернов, М.С. Вонский. СПб.: Наука, 2002. - 320 е., ил.

4. Букин Ю.В. Мол екулярно-био логические механизмы гастроканцерогенеза и подходы к профилактике рака желудка / Ю.В. Букин, В.А. Драудин-Крыленко // Успехи биол. химии. 2000. — Т.40. - С.329-356.

5. Василенко В.Х. Язвенная болезнь: современные представления о патогенезе, диагностике и лечении / В.Х. Василенко, А.Л. Гребенев, А.А. Шептулин. М.: Медицина, 1987. - 342 с.

6. Григорьев П.Я., Яковеико А.В. Клиническая гастроэнтерология: учебник для студентов медицинских ВУЗов / П.Я. Григорьев, А.В. Яковенко. -М.: Медицинское информационное агентство, 2004. 768 с.

7. Губергриц Н.Б. Клинико-патогенетические особенности и лечение гастродуоденальной патологии, ассоциированной с различными штаммами Helicobacter pylori / Н.Б. Губергриц, О. А. Прилуцкая // Сучасна гастроэнтерол. 2005. - №1(21). - С. 19-30.

8. Домарадский И.В. Вопросы патогенности Helicobacter pylori / И.В. Домарадский // Эпидемиология и инфекционные процессы. — 2001. — №2. С.45-47.

9. Домарадский И.В. О взаимоотношениях эпителиальных клеток слизистых оболочек с микробами внутриклеточными паразитами / И.В. Домарадский, В.Н. Бабин // Мед. паразитол. - 1996. — №4. - С.3-8.

10. Животовский JI.A. Популяционная биометрия / JI.A. Животовский. -М.: Наука, 1991.-271 с.

11. Заболеваемость населения России в 2003 году: статистические материалы. М.: ГЭОТАР-МЕД, 2004. - 4.1. - 124 с.

12. Ивашкин В.Т. Рациональная фармакотерапия заболеваний органов пищеварения: рук-во для практ. врачей / В.Т. Ивашкин, Т.Д. Лапина и др.; под ред. В.Т. Ивашкина. -М.: Литтерра, 2003. — 1046 с.

13. Имангулова М.М. Полиморфизм кластера гена IL-1 у больных туберкулезом легких / М.М. Имангулова, А.Р. Бикмаева, Э.К. Хуснутдинова // Цитокины и воспаление. 2005. - Т.4. — №1. - С.36-42.

14. Исаков В.А. Маастрихт-3 2005: Флорентийская мозаика противоречий и компромиссов / В.А. Исаков // Экспер. и клин, гастроэнтерол. - 2006. - №1. - С.78-83.

15. Исаков В.А. Хеликобактериоз / В.А. Исаков, И.В. Домарадский. — М.:Медпрактика, 2003. 412 е., ил.

16. Казимирова А.А. Микробиоценоз желудка при хроническом гастрите у детей / А.А. Казимирова, Д.К. Волосников, Л.И. Бахарева и др. // Журн. микробиол. 2007. - №2. - С.71-75.

17. Комаров Ф.И. Диагностика и лечение внутренних болезней: руководство для врачей, том 3 / Ф.И. Комаров, А.И. Хазанов, А.В. Калинин. -М.: Медицина, 1992. 528 с.

18. Кудрявцева JI.B. Резистентность Helicobacter pylori к метронидазолу, кларитромицину и амоксициллину в Москве, Санкт-Петербурге и Абакане в 2001 / JI.B. Кудрявцева, В.А. Исаков, И.О. Иваников и др. // Педиатрия. 2002. — Т.2.(приложение). - С.61-63.

19. Меркурьева Е.К. Генетика с основами биометрии: учеб. пособие для высш. с.-х. учеб. заведений / Е.К. Меркурьева, Г.Н. Шангин-Березовский-М.: Колос, 1983. 400 е., ил.

20. Момыналиев К.Т. Сравнительный геномный анализ штаммов Helicobacter pylori / К.Т. Момыналиев, О.В. Смирнова, JI.B. Кудрявцева и др. // Молекулярная биология. 2003. - Т. 37. - № 4. - С.625-633.

21. Насыбуллина Э.Р. Распределение генотипов Helicobacter pylori среди пациентов с гастродуоденальной патологией / Э.Р. Насыбуллина, Р.А. Абдулхаков, О.А. Чернова и др. // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. — 2004. №1. - С.126-132.

22. Решетилов Ю.И. Диагностика и лечение дуоденальных язв с неблагоприятным течением, ассоциированных с TORCH-инфекцией / Ю.И.

23. Решетилов, А.И. Олейник // Сучасна гастроентерол. 2003. - №4(14). - С.44-46.

24. Ройт А. Иммунология / А. Ройт, Дж. Бростофф, Д.М. Мейл. М.: Мир, 2000. - 582 с.

25. Симаненков В.И. CagA статус Helicobacter pylori и эффективность эрадикационной терапии / В.И. Симаненков, Н.В. Захарова, Д.И. Боваева и др. // Гастроэнтерология Санкт-Петербурга. - 2004. — №1. — С.11.

26. Тимаков В.Д., Каган Г.Я. L-формы бактерий и семейство Mycoplasmataceae в патологии / В.Д. Тимаков, Г.Я. Каган. М.,1973 - 392 с.

27. Фрейдин М.Б. Полиморфизм генов интерлейкинов и их рецепторов: популяционная распространенность и связь с атопической бронхиальной астмой / М.Б. Фрейдин, В.П. Пузырев, JI.M. Огородова и др. // Генетика. -2002. -Т.38. -№12. С. 1-9.

28. Фрейдлин И.С. Цитокины и межклеточные контакты в противоинфекционной защите организма / И.С. Фрейдлин // Соросовский образовательный журнал. — 1996. — № 7. С. 19-22.

29. Червинец В.М. Микрофлора слизистой оболочки ульцерозной зоны больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки / В.М. Червинец, В.М. Бондаренко, С.Н. Базлов // Ж. микробиол. 2001. - №5. -С.12-15.

30. Щербинина М.Б. Язвенная болезнь желудка: особенности морфогенеза / М.Б. Щербинина, А.С. Короленко // Морфология. 2007. - Т.1. -№1.- С. 124-129.

31. Akopyants N.S. Analyses of the cag pathogenicity island of Helicobacter pylori / N.S. Akopyants, S.W. Clifton, D. Kersulyte et al. // Mol. Microbiol. 1998. - Vol.28(l). - P.37-53.

32. Allen L.A. Virulent strains of Helicobacter pylori demonstrate delayed phagocytosis and stimulate homotypic phagosome fusion in macrophages / L.A. Allen, L.S. Schlesinger, B. Kang // J. Exp. Med. 2000. - Vol.191. - P. 115-128.

33. Amieva M.R. Disruption of the epithelial apical-junctional complex by Helicobacter pylori CagA / R.V. Amieva, R. Vogelmann, A. Covacci et al. // Science. 2003 - Vol.300. - P.1430-1434.

34. Amieva M.R. Helicobacter pylori enter and survive within multivesicular vacuoles of epithelial cells / M.R. Amieva, N.R. Salama, L.S. Tompkins et al. // Cell. Microbiol. 2002. - Vol.4. - P.677-690.

35. Andersen L.P. Possible evidence of invasiveness of Helicobacter pylori I L.P. Andersen, S. Hoick // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 1990. -Vol. 9. -P.138.

36. Anderson H. Association of cagA and vacA genotypes of Helicobacter pylori with gastric diseases in Estonia / H. Anderson, K. Loivukene, T. Sillakivi et al. // J. Clin. Microbiol. 2002. - Vol.40(l). - P.298-300.

37. Ando T. The interaction of host genetic factors and Helicobacter pylori infection / T. Ando, Y. Goto, K. Ishiguro et al. // Inflammopharmacology. 2007. -Vol.15.-P.10-14.

38. Asahi M. Helicobacter pylori CagA protein can be tyrosine phosphorylated in gastric epithelial cells / M. Asahi, T. Azuma, S. Ito et al. // J. Exp. Med. 2000. - Vol. 191 (4). - P.593-602.

39. Asante M. Gastric mucosal hydrophobicity in duodenal ulceration role of Helicobacter pylori infection density and mucus lipids / M. Asante, H. Ahmed, P. Patel et al. // Gastroenterology. 1997. - Vol.l 13(2). - P.449-454.

40. Ashour A.A. iceA genotypes of Helicobacter pylori strains isolated from Brazilian children and adults / A.A. Ashour, G.B. Collares, E.N. Mendes et al. // J. Clin. Microbiol. 2001. - Vol.39(5). - P.1746-1750.

41. Atherton J.C. CagA, the cag pathogenicity island and Helicobacter pylori virulence / J.C. Atherton // Gut. 1999. - Vol.44(3). - P.307-8.

42. Atherton J.C. Clinical and pathological importance of heterogeneity in vacA, the vacuolating cytotoxin gene of Helicobacter pylori / J.C. Atherton, R.M. Peek, K.T. Tham et al. // Gastroenterology. 1997. - Vol.112(1). - P.92-99.

43. Babior B.M. Oxygen dependent killing by phagocytes / B.M. Babior // N. Engl. J. Med. 1978. - Vol.298. - P.659-668.

44. Barber M. Bacteriology of stomach and duodenum in cases of peptic ulcer and gastric carcinoma / M. Barber, R.H. Franklin // Br. Med. J. 1946. -Vol.1. -P.951-953.

45. Benaissa M. Changes in Helicobacter pylori ultrastructure and antigens during conversion from the bacillary to the coccoid form / M. Benaissa, P. Babin, N. Quellard et al. // Infect. Immun. 1996. - Vol.64(6). - P.2331-2335.

46. Bendtzen K. Immune hormones (cytokines): pathogenic role in autoimmune rheumatic and endocrine diseases / K. Bendtzen // Autoimmunity. — 1989. Vol.2(2). - P. 177-189.

47. Berstad A. Controversies in dyspepsia / A. Berstad, S. Olafsson, S. Tefera et al. // Eur. J. Surg. Suppl. 2001. - Vol.586. -P.4-11.

48. Bidwell J. Cytokine gene polymorphism in human disease: on-line databases / J. Bidwell, L. Keen, G. Gallagher et al. // Genes and Immunity. 1999. -Vol.1.-P.3-19.

49. Bik E.M. Molecular analysis of the bacterial microbiota in the human stomach / E.M. Bik, P.B. Eckburg, S.R. Gill et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA -2006. Vol.l03(3). - P.732-737.

50. Bjorneklett A. Bacterial overgrowth / A. Bjorneklett, T. Hoverstad, T. Hovig // Scand. J. Gastroenterol. 1985. - Vol.20. - suppl.109. - P.123-132.

51. Blaser M.J. Where does Helicobacter pylori come from and why is it going away? / MJ. Blaser // J. Am. Med. Associat. 1999. - Vol.282. - P.2260-2262.

52. Bohr U.R.M. Extragastric manifestations of Helicobacter pylori infection other Helicobacters / U.R.M. Bohr, B. Annibale, F. Franceschi et al. // Helicobacter. - 2007. - Vol. 12. - suppl.l. - P.45-53.

53. Bohr U.R.M. Identification of enterogepatic Helicobacter species in patients suffering from inflammatory bowel disease / U.R.M. Bohr, B. Glasbrenner, A. Primus et al. // J.Clin. Microbiol. 2004. - Vol.42. - P.2766-2768.

54. Boneca I.G. A revised annotation and comparative analysis of Helicobacter pylori genomes / I.G. Boneca, H. de Reuse, J.-Ch. Epinat et al. // Nucl. Acids Res. 2003. - Vol. 31. - N.6. - P. 1704-1714.

55. Bowe P.S. Attempts to produce granulomatous colitis in boxer dogs with mycoplasma / P.S. Bowe, N.J. Van Kruiningen, S. Rosendal // Can. J. Сотр. Med. 1982. - Vol.46. - P.430-433.

56. Brzozowski T. Gastric secretion and ulcer healing in mouse stomach infected with cytotoxin expressing strain of Helicobacter pylori / T. Brzozowski, P.C. Konturek, S.J. Konturek et al. //J. Physiol. Pharmacol. 1998. - Vol.49 (3). -P.3 87-403.

57. Byrd J.C. Inhibition of gastric mucin synthesis by Helicobacter pylori / J.C. Byrd, C.K. Yunker, Q.S. Xu et al. // Gastroenterology. 2000. - Vol.118(6). -P. 1072-1079.

58. Ceelen L.M. Helicobacter pullorum in chickens, Belgium / L.M. Ceelen, A. Decostere, K. Van den Bulck et al. II Emerg. Infect. Dis. 2006. -Vol.12. - P.263-267.

59. Chang K.C. Identification of a putative VirB4 gene (HP0017), essential for natural competence of Helicobacter pylori ! K.C. Chang, T.L. Lin, J.T. Wangu // Gut. 2000. - Vol. 47. - suppl.l. - P.A1.

60. Chang Y.T. Association of polymorphisms of interleukin-1 beta gene and Helicobacter pylori infection with the risk of gastric ulcer / Y.T. Chang, M.S. Wu, C.T. Shun et al. // Hepatogastroenterology. 2002. - Vol.49. -№31.- P.531-536.

61. Chen G. Helicobacter pylori survival in gastric mucosa by generation of a pH gradient / G. Chen, R.L. Fournier, S. Varanasi et al. // Biophys Journal. -1997. Vol.73(2). - P.1081-1088.

62. Chen W. High prevalence of Mycoplasma pneumoniae in intestinal mucosal biopsies from patients with inflammatory bowel disease and control / W. Chen, D. Li, D. Paulus et al. // Digestive Diseases and Sciences. 2001. - Vol.46. -№11.- P.2529-2535.

63. Chernova O.A. Genotypes of the Helicobacter pylori isolates and the IL-1 genes in Kazan citizens (Kazan, Russia) with gastric and duodenal ulcer / O.A. Chernova, E.R. Nasybullina, V.M. Chernov et al. // Electron. J. Biomedicine. -2006.-Vol.l.-P.13-18.

64. Colbeck J. Genotypic profile of the outer membrane proteins BabA and BabB in clinical isolates of Helicobacter pylori / J. Colbeck, L.M. Hansen, J.M. Fong et al. //Infect. Immun. 2006. - Vol.74. - P.4375-4378.

65. Comtois S.L. Role of the thioredoxin system and the thiol-peroxidases Tpx and Bcp in mediating resistance to oxidative and nitrosative stress in Helicobacter pylori / S.L. Comtois, M.D. Gidley, D.J. Kelly // Microbiology. -2003. Vol.149. - P.121-129.

66. Covacci A. Helicobacter pylori virulence and genetic geography / A. Covacci, J.L. Telford, G. Del Guidice // Science. 1999. - Vol.284. - P. 1328-1333.

67. Covacci A. Tyrosine-phosphorylated bacterial proteins: Trojan horses for the host cell / A. Covacci, R. Rappuoli // J. Exp. Med. 2000. - Vol.191(4). -P.587-592.

68. D'Elios M.M. Helicobacter pylori inflammation, immunity, and vaccines / M.M. D'Elios, L.P. Andersen // Helicobacter. 2007. - Vol.12. - suppl.l - P.15-19.

69. Dallo S.F. Intracellular DNA replication and long-term survival of pathogenic mycoplasmas / S.F. Dallo, J.B. Baseman // Microbial Pathogenesis. -2000.-Vol.29.-P.301-309.

70. De Bock M. Peptic ulcer disease associated with Helicobacter felis in a dog owner / M. De Bock, K. Van den Bulck, A. Hellemans et al. // Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 2007. - Vol.19. - P.79-82.

71. De Schryver A.A. Helicobacter pylori infection: epidemiology and occupational risk for health care workers / A.A. De Schryver, M.A. Van Winckel // Ann. Acad. Med. Singapore. 2001. - Vol.30(5). - P.457-463.

72. Dinarello C. Biologic basis for interleukin-1 in disease / C. Dinarello // J. Am. Societ. Hematol. 1996. - Vol.87(6). - P.2095-2147.

73. Dinarello C. The role of interleukin -1 in disease / C. Dinarello, S. Wolff// N. Engl. J. Med. 1993. - Vol.328(2). - P. 106-113.

74. Dubois A. Helicobacter pylori is invasive and it may be a facultative intracellular organism / A. Dubois, T. Boren // Cell Microbiol. 2007. - Vol.9(5). -P.l 108-1116.

75. Dubois A. Host specificity of Helicobacter pylori strains and host responses in experimentally challenged nonhuman primates / A. Dubois, D. Berg, E. Incecik et al. // Gastroenterology. 1999. - Vol.116. - P.90-96.

76. Dussurget O. Rapid, sensitive PCR-based detection of Mycoplasma in simulated samples of animal sera / O. Dussurget, D. Roulland-Dussoix // Appl. Environm. Microbiol. 1994. - Vol.60. - №3. - P.953-959.

77. El-Omar E.M. Interleukin-1 polymorphisms associated with increased risk of gastric cancer / E.M. El-Omar, M. Carrington, W.H. Chow et al. // Nature. — 2000. Vol.404. - P.398-402.

78. El-Omar E.M. The importance of interleukin-1 in Helicobacter pylori associated disease // Gut. 2001. - Vol.48. - P.743-747.

79. Engelman R.M. Influence of steroids on complement and cytokine generation after cardiopulmonary bypass / R.M. Engelman, J.A. Rousou, J.E. Flack et al. // Ann. Thorac. Surg. 1995. - Vol.60(3). - P.801-804.

80. Ernst F.D. Iron-responsive regulation of the Helicobacter pylori iron-cofactored superoxide dismutase SodB is mediated by Fur / F.D. Ernst, G. Homuth, J. Stoof et al. // J. Bacteriol. 2005. - Vol.187. - P.3687-3 692.

81. Ernst P.B. The disease spectrum of Helicobacter pylori: the immunopathogenesis of gastroduodenal ulcer and gastric cancer / P.B. Ernst, B.D. Gold // Annu. Rev. Microbiol. 2000. - Vol.54. - P.615-640.

82. Erzin Y. Prevalence of Helicobacter pylori vacA, cagA, cagE, iceA, babA2 genotypes and correlation with clinical outcome in Turkish patients with dyspepsia / Y. Erzin, V. Koksal, S. Altun et al. // Helicobacter. 2006. - Vol.11. -P.574-580.

83. Eskdale J. Mapping of the human IL-10 gene and further characterization of the 5' flanking sequence / J. Eskdale, D. Kube, H. Tesch et al. // Immunogenet. 1997. - Vol.46. - P. 120-128.

84. Fallahi G.H. Helicobacter pylori culture and antimicrobial resistance in Iran / G.H.Fallahi, S. Maleknejad // Indian. J. Pediatr. 2007. - Vol.74. - P. 127130.

85. Falush D. Traces of human migrations in Helicobacter pylori populations / D. Falush, T. Wirth, B. Linz et al. // Science. 2003. - Vol.299. -P.1582-1585.

86. Feldman R.A. Epidemiology of Helicobacter pylori: acquisition, transmission, population prevalence and disease-to-infection ratio / R.A. Feldman, A.J.P. Eccersley, J.M. Hardie // Brit. Med. Bull. 1998. - Vol.54. - P.39-53.

87. Ferrero R.L. The urease enzymes of Campylobacter pylori and a related bacterium / R.L. Ferrero, S.L. Hazell, A. Lee // J. Med. Microbiol. -1988. -Vol.27. -P.33-40.

88. Fiddian-Green R.G. Helicobacter pylori eradication and L-dopa absorption in patients with Parkinson disease and motor fluctuation / R.G. Fiddian-Green //Neurology. 2007. - Vol.68. - P. 1085.

89. Figueiredo С. Helicobacter pylori and interleukin-1 genotyping: an opportunity to identify high-risk individuals for gastric carcinoma / C. Figueiredo, J.C. Machado, P. Pharoah et al. // J. Natl. Cancer Inst. 2002. - Vol.94. - P. 16801687.

90. Figura N. Helicobacter pylori exotoxins and gastroduodenal diseases associated with cytotoxic strain infection /N. Figura // Aliment. Pharmacol. Ther. — 1996. Vol. 10. -P.79-96.

91. Fiocca R. High incidence of campylobacter-like organisms in endoscopic biopsies from patients with gastritis, with or without peptic ulcer / R. Fiocca, L. Villari, F. Turpini et al. // Digestion. 1987. - Vol.38. - P.234-244.

92. Fischer W. Outer membrane targeting of passenger proteins by the vacuolating cytotoxin autotransporter of Helicobacter pylori / W. Fischer, R. Buhrdorf, E. Gerland et al. // Infect Immun. 2001. - Vol.69(l 1). - P.769-775.

93. Fontham E.T. Determinants of infection chronic gastritis / E.T. Fontham, B. Ruiz, A. Perez // Am. J. Gastroenterol. 1995. - Vol. 90(7). - P.1094-1101.

94. Ford A.C., Delaney B.C., Forman D., Moayyedi P. Eradication therapy for peptic ulcer disease in Helicobacter pylori positive patients. Cochrane Database Syst Rev 2006;2:CD003840. doi: 10.1002/14651858. CD003840.pub4.

95. Freedberg A.S. The presence of spirochaetes in human gastric mucosa I A.S. Freedberg, L.E. Barron // Am. J. Dig. Dis. 1940. - Vol.38. - P.443-445.

96. Friis N.F. Mycoplasma hyorhinis in the etiology of serositis among piglets / N.F. Friis, A.A. Feenstra // Acta. Vet. Scand. 1994. - Vol.35. - P.93-98.

97. Fujikawa A. Mice deficient in protein tyrosine phosphatase receptor type Z are resistant to gastric ulcer induction by VacA of Helicobacter pylori / A. Fujikawa, D. Shirasaka, S. Yamamoto et al. // Nat. Genet. 2003. - Vol.33. -P.375-381.

98. Fujimoto S. Helicobacter pylori BabA expression, gasric mucosal injury, and clinical outcome I S. Fujimoto, O. Olaniyi, A. Arnqvist et al. // Clin. Gastroenterol. Hepatol. 2007. - Vol.5. - P.49-58.

99. Furuta T. Interleukin 1(3 polymorphisms increase risk of hypochlorhydria and atrophic gastritis and reduce risk of duodenal ulcer recurrence in Japan. I T. Furuta, E.M. El-Omar, F. Xiao et al. // Gastroenterology. 2002. -Vol.123. -P.92-105.

100. Garcia-Gonzalez M.A. Association of interleukin 1 gene family polymorphisms with duodenal ulcer disease / M.A. Garcia-Gonzalez, A. Lanas, P.H.M. Savelkoul et al. // Clin. Exp. Immunol. 2003. - Vol.134. - N.3. - P.525-531.

101. Garcia-Gonzalez M.A. The polymorphic IL-1/3 and IL-1RN genes in the aetiopathogenesis of peptic ulcer / M.A. Garcia-Gonzalez, A. Lanas, S. Santolaria et al. // Clin. Exp. Immunol. 2001. - Vol. 125. -N.3. -P.368-371.

102. Garrity G.M., Bell G.A., Lilburn Т., Family I.I. Helicobacteraceae fam. nov. In: Brennen D.J., Kreig N.R., Staley J.T. (eds) Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, Vol.2, 2nd edn. New York, NY: Springer, 2005; 11681194.

103. Gebel J. Desinfectant activity against different morphological forms of Helicobacter pylori: first results / J.Gebel, V.Vacata, K.Sigler et al. // J. Hosp. Infect. -2001. Vol.48. - supplA. -P.S58-63.

104. Gerhard M. Clinical relevance of the Helicobacter pylori gene for blood-group antigen binding adhesin / M. Gerhard, N. Lehn, N. Neumayer et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999. - Vol.96(22). - P. 12778-12783.

105. Gibson A.W. Novel single nucleotide polymorphisms in the distal IL-10 promoter affect IL-10 production and enhance the risk of systemic lupus erythematosus / A.W. Gibson, J.C. Edberg, J. Wu et al. // J. Immunol. — 2001. -Vol.166. -P.3915-3922.

106. Glas J. Allel 2 of the interleukin-1 receptor antagonist gene is associated with early gastric cancer / J. Glas, H.-P. Torok, A. Schnider et al. // J. Clin. Oncology. 2004. - Vol.22. - P.4746-4752.

107. Gong M. P37 from Mycoplasma hyorhinis promotes cancer cell invasiveness and metastasisthrough activation of MMP-2 and followed by phosphorylation of EGFR / M. Gong, L. Meng, B. Jiang et al. // Mol. Cancer Therapeutics. 2008. - Vol.7. - P.530-537.

108. Gourlay R.N. Isolation of a Mycoplasma from the intestinal tract of cattle / R.N. Gourlay, S.G. Wyld // Vet. Rec. 1975. - Vol.97(19). - P.370-371.

109. Graham D.Y. Ablation of exaggregated meal-stimulated gastrin release in duodenal ulcer patients after clearence of Helicobacter pylori infection / D.Y. Graham, A. Opekun, G.M. Lew et al. // Amer. J. Gastroenterol. -1990. Vol.85. -P.394-398.

110. Han S.R. Helicobacter pylori: clonal population structure and restricted transmission within families revealed by molecular typing / S.R. Han, H.C. Zschausch, H.G. Meyer et al. // J. Clin. Microbiol. 2000. - Vol. 38(10). -P.3646-3651.

111. Han S.W. Transport and storage of Helicobacter pylori from gastric mucosal biopsies and clinical isolates / S.W. Han, R. Flamm, C.Y. Hachem et al. // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 1995. - Vol.14. - P.349-352.

112. Helminen M.E. Susceptibility to primary Epstein-Barr virus infection is associated with interleukin-10 gene promoter polymorphism / M.E. Helminen, S.Kilpinen, M.Vitra, M. Hurme // J. Infect Dis. 2001. - Vol.184. - P.777-780.

113. Hessey S.J. Bacterial adhesion and disease activity in Helicobacter pylori associated chronic gastritis / S.J. Hessey, J. Spenser, J.I. Wyatt et al. // Gut. -1990.-Vol.31.-P.134-138.

114. Heuermann D. Genetic organization of a small ciyptic plasmid of Helicobacter pylori / D. Heuermann, R. Haas // Gene. — 1995. — Vol.165. — P.17-24.

115. Huang S. Mycoplasma infections and different human carcinomas / S.H ng, J.Y. Li, J. Wu et al. // World J. Gastroenterol. 2001. - Vol.7. - P.266-269.

116. Huang Z. The protective effect of IL-1 beta on stress- induced gasteic mucosal damage in rats / Z. Huang, T. Li, J.R. Yu et al. // Sheng Li Hsueh Pao. -1995.- Vol.47(4). P.313-319.

117. Hwang I.R. Effect of interleukin 1 polymorphisms on gastric mucosal interleukin 1 beta production in Helicobacter pylori infection / I.R. Hwang, T. Kodama, S. Kikuchi et al. // Gastroenterology-2002. Vol. 123. -P.1793-1803.

118. Hynes S.O. Lewis-epitopes on outer membrane vesicles of relevance to Helicobacter pylori pathogenesis / S.O. Hynes, J.I. Keenan, J.A. Ferris et al. // Helicobacter. 2005. - Vol. 10(2). - P. 146-156.

119. Jacobs E. Mycoplasma pneumoniae virulence factors and the immune response / E. Jacobs // Rev. Med. Microbiol. 1991. - Vol.2. - P.83-90.

120. Jansson E. Mycoplasmas and arthritis / E. Jansson, A. Backman, K. Hakkarainen et al. // Z. Rheumatol. 1983. - Vol.42. - P.315-319.

121. Jeremias J. Relationship between Ureaplasma urealyticum vaginal colonization and polymorphism in the interleukin-1 receptor antagonist gene / J. Jeremias, P. Giraldo, S. Durrant et al. // J Infect Dis. 1999. - Vol.180. - P.912-914.

122. Kalia N. Helicobacter pylori water soluble extracts induce platelet aggregation in the gastric mucosal microcirculation in vivo / N. Kalia, S. Jacob, N.J. Brown et al. // Gut. 1997. - Vol.41(6). - P.748-752.

123. Kalia N. Toxigenic Helicobacter pylori induces changes in gastric mucosal microcirculation in rats / N. Kalia, K.D. Bardhan, J.C. Atherton et al. // Gut. 2002. - Vol.51. - P.641-647.

124. Karhukorpi J. The search for links between immunogenetic factors and recurrent miscarriage: Academic Dissertation / J. Karhukorpi; University of Oulu.-Oulu, 2005.-75 p.

125. Kazi J.L. Ultrastructural study of Helicobacter pylori associated gastrits / J.L. Kazi, R. Sinniah, V. Zaman et al. // Am. J. Pathol. - 1990. -Vol.l61(l). - P.65-70.

126. Kazor C.E. Diversity of bacterial populations on the tongue dorsa of patients with halitosis and healthy patients / C.E. Kazor, P.M. Mitchell, A.M. Lee et al. // J. Clin. Microbiol. -2003.-Vol.41.-P.558-563.

127. Keates S. Differential activation of mitogen-activated protein kinases in AGS gastric epithelial cells by cag+ and cag- Helicobacter pylori / S. Keates, A.C. Keates, M. Warny et al. // J. Immunol. 1999. - Vol.163 - №10. - P.5552-5559.

128. Kersulyte D. Emergence of recombinant strains of Helicobacter pylori during human infection / D. Kersulyte, H. Chalcauskas, D.E. Berg // Mol. Micribiol. 1999. - Vol.31. - P.31-43.

129. Ketcham C. p37 induces tumor invasiveness / C. Ketcham, S. Anai, R. Reutzel et al. // Mol. Cancer Ther. 2005. - Vol.4(7). - P.1031-1038.

130. Kim K.H. Production of IL-6 and IL-8 in human fibroblasts stimulated with Mycoplasma lysates and bacterial toxins / K.H. Kim, M.W. Chang // J. Korean. Soc. Microbiol. -1999. Vol.34. - P.573-582.

131. Kim S.S. The role of gastric acid in the Helicobacter pylori induced gastritis in mouse / S.S. Kim, Y.M. Lee, H.K. Kim et al. // Korean J. Gastroenterol. - 2007. - Vol.50. - P.363-369.

132. Koletzko S. Prospective multicentre study on antibiotic resistance of Helicobacter pylori strains obtained from children living in Europe / S.Koletzko, F.Richy, P.Bontems et al. // Gut. 2006. - Vol.55. - P.1711-1716.

133. Kountouras J. Alzheimer's disease and Helicobacter pylori infection: defective immune regulation and apoptosis as proposed common links / J. Kountouras, E. Gavalas, C. Zavos et al. // Med. Hypotheses. 2007. - Vol.68. -P.378-388.

134. Krienitz W. Auftreten von spirochaten verschiedener Form im Mageninhalt bei Carcinoma ventriculi / W. Krienitz // Dtsch. Med. Wochenschr. — 1906.-Vol.28.-P.872-889.

135. Kuipers E.J. Quasispecies developement of Helicobacter pylori observed in paired isolates obtained years apart from the same host / E J. Kuipers, D.A. Israel, J.G. Kusters et al. //J. Infect. Disease. 2000. - Vol. 181(1). - P.273-282.

136. Kusters J.G. Pathogenesis of Helicobacter pylori infection / J.G. Kusters, E.J. Kuipers, A.H. van Vliet // Clin. Microbiol. Rev. 2006. - Vol. 19(3). -P.449-490.

137. Kwon H.J. Presence of human mycoplasma DNA in gastric tissue samples from Korean chronic gastritis patients / H.J. Kwon, J.O. Kang, S.H. Cho et al. // Cancer Sci. 2004. - Vol.95. - P.311-315.

138. Lamarque D. Pathogenesis of Helicobacter pylori infection / D. Lamarque, R.M. Peek // Helicobacter. 2003. - Vol.8. - suppl.l - P.21-30.

139. Lee J.H. Inhibition of Helicobacter pylori adhesion to human gastric adenocarcinoma epithelial cells by acidic polysaccharides from Artemisia capillaris and Panax ginseng / J.H. Lee, E.K. Park, C.S. Uhm et al. // Planta Med. 2004. -Vol.70. -P.615-619.

140. Lenci C. Helicobacter pylori infection and systemic antibodies to CagA and heat shock protein 60 in patients with coronary heart disease / C. Lenci, A. Palazzuoli, N. Giordano et al. // World J. Gastroenterol. 2006. - Vol.12. -P.7815-7820.

141. Leung W.K. Helicobacter pylori genotypes and cytokine gene polymorphisms influence the development of gastric intestinal metaplasia in a Chinese population / W.K. Leung, M.C. Chan, K.F. To et al. // Am. J. Gastroenterol. 2006. - Vol.101. - P.714-20.

142. Li H. Inoculation of VacA- and CagA- Helicobacter pylori delays gastric ulcer healing in the rat / H. Li, B. Mellgard, H.F. Helander // Scand. J. Gastroenterol. 1997. - Vol.32 (5). - P.439-444.

143. Lin J.H. Mycoplasma hyorhinis in Taiwan: diagnosis and isolation of swine pneumonia pathogen / J.H. Lin, S.P. Chen, K.S. Yeh et al. // Vet. Microbiol. -2006. Vol.115.-P.l 11-116.

144. Lin L.-F. Comparative genomics of the restriction-modification systems in Helicobacter pylori / L.-F. Lin, J. Posfai, R.J. Robertset al. // PNAS. -2001. Vol.98. - P.2740-2745.

145. Linden S. Strain- and blood group- dependent binding of Helicobacter pylori to human gastric MUC5AC dlycoforms / S. Linden, H. Nordman, J. Hedenbro et al. // Gastroenterology. 2002. - Vol.123. - P. 1923-1930.

146. Lo S.-C. Mycoplasmas and AIDS // Mycoplasmas: Molecular Biology and Pathogenesis / R.N. Maniloff, L.R. Mcelhaney, J.B. Finch. Washington, DC.: ASM, 1992. — P.525-545.

147. Lu W. Genetic polymorphisms of interleukin (IL)-IB, IL-1RN, IL-8, IL-10 and tumor necrosis factor a and risk of gastric cancer in a Chinese population / W. Lu, K. Pan, L. Zhang et al. // Gastrogenesis. 2005. - Vol.26. -№3.-P.631-636.

148. Machado J.C. A proinflammatory genetic profile increases the risk for chronic atrophic gastritis and gastric carcinoma / J.C. Machado, C. Figueiredo, P. Canedo et al. // Gastroenterology. 2003. - Vol.125. - P.364-371.

149. Maeda Sh. Pathogenesis of Helicobacter pylori / Sh. Maeda, A.F. Mentis // Helicobacter. 2007. - Vol.12. - suppl.l - P. 10-14.

150. Malfertheiner P. Current concept in the management of Helicobacter pylori infection the Maastricht 11-2000 Consensus Report / P. Malfertheiner, F. Megraud, C. O'Morain et al. // Aliment. Pharmacol. Ther. - 2002. - Vol. 16(2). -P.167-180.

151. Malfertheiner P. Current concept in the management of Helicobacter pylori infection the Maastricht III Consensus Report / P.Malfertheiner, F.Megraud, C.O'Morain et al. //European Gastroenterol. Rev. - 2005.

152. Marais A. Metabolism and genetics of Helicobacter pylori: the genome era / A. Marais, G.L. Mendz, S.L. Hazell et al. // Microbiol. Mol. Biol. Rev. 1999. - Vol.63.-P.642-674.

153. Marshall В J. Attempt to fulfil Koch's postulates for pyloric Campylobacter / B.J. Marshall, J.A. Armstrong et al. // Med. J. Aust. 1985. -Vol. 142(8). -P.436-439.

154. Megraud F. How should Helicobacter pylori infection be diagnosed? // Gastroentherology. 1997. - Vol.113 - suppl.6. - S93-98.

155. Mendz G.L. Purine metabolism and the microaerophily of Helicobacter pylori / G.L. Mendz, AJ. Shepley, S.L. Hazell et al. // Arch. Microbiol. 1997. - Vol. 168. - P.448-456.

156. Mendz G.L. The Entner-Doudoroff pathway in Helicobacter pylori / G.L. Mendz, S.L. Hazell, B.P. Burns // Arch. Biochem. Biophys. 1994. -Vol.312. -№2. -P.349-356.

157. Minxin W. Cytokine responses and anti-inflamatory strategies in coronary artery bypass grafting : . academic dissertation / W. Minxin ; University of Tampere, Finland. — Tampere, 2001.

158. Mobley H. Molecular biology of microbial ureases / H. Mobley, M.D. Island, R.P. Hausinger // Micribiol. Rev. 1995. - Vol.59. - №3. - P.451-480.

159. Momynaliev K. Genotyping of Helicobacter pylori obtained from patients with duodenal ulcer and gastritis in Moscow region, Russia / K. Momynaliev, V. Govorun, L. Kudryavtseva et al. // Gut. 2002. - Vol.51 - A17.

160. Momynaliev K. Helicobacter pylori genotypes in Russia / K. Momynaliev, O. Smimova, L. Kudryavtseva et al. // Eur. J. Clin. Microbiol. Infec. Dis. 2003. - Vol.22. - P.573-574.

161. Monstein HJ. Differential virulence-gene mRNA expression in coccoid forms of Helicobacter pylori / HJ. Monstein, J. Jonasson // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2001. - Vol.285(2). - P.530-536.

162. Moran A.P. The role of lypopolysacharide in Helicobacter pylori pathogenesis / A.P. Moran // Aliment. Pharmacol. Ther. 1996. - Vol.10. — suppl.l. — P.39-50.

163. Morita T. Demonstration of Mycoplasma hyorhinis as a possible primary pathogen for porcine otitis media / T. Morita, H. Fukuda, T. Awakura et al. //Vet. Pathol. 1995.- Vol.32. -P.107-111.

164. Moss S.F. Induction of gastric epithelial apoptosis by Helicobacter pylori / S.F. Moss, J. Calam et al. // Gut. 1996.- Vol.38(4).-P.498-501.

165. Munday P.E. The prevalence of Ureaplasma urealyticum and mycoplasma in the cervix and anal canal of women / P.E. Munday, P.M. Furr, D. Taylor-Robinson // J. Infection. 1981. - Vol.3. - P.253-257.

166. Munson M.A. Molecular analysis of the microflora associated with dental caries / M.A. Munson, A. Banerjee, T.F. Watson et al. // J. Clin.Microbiol. -2004. Vol.42. - P.3023-3029.

167. Nedenskov P. Nutritional requirements for growth of Helicobacter pylori / P. Nedenskov // Appl. Environ. Microbiol. 1994. - Vol.60. - P.3450-3453.

168. Nguyen V.Q. Carboxy-terminal proteolytic processing of Helicobacter pylori vacuolating toxin / V.Q. Nguyen, R.M. Caprioli, T.L. Cover // Infect Immun. 2001. — Vol.69(l). - P.543-546.

169. Nimri L.F. Helicobacter pylori genotypes identified in gastric biopsy specimens from Jordanian patients / L.F. Nimri, I. Matalka, K. Bani Hani et al. // BMC Gastroenterol. 2006. - Vol.6. - P.27.

170. Ning J. Identification of antigens by monoclonal antibody PD4 and its expression in Escherichia coli / J. Ning, G.X. Sun, S. Huang et al. // World J. Gastroenterol. 2003. - Vol.9(10). - P.2164-2168.

171. Nishiya D. Evaluation of the clinical relevance of the iceAl gene in patients with Helicobacter pylori infection in Japan / D. Nishiya, T. Shimoyama, S. Fukuda et al. // Scand. J. Gastroenterol. 2000. - Vol.35(l). - P.36-39.

172. Noach L.A. Electron microscopic study of association between Helicobacter pylori and gastric and duodenal mucosa / L.A. Noach, T.M. Rolf, G.N. Tytgat // J.Clin.Pathol. 1994. - Vol.47. - P.669-704.

173. Nobusado A. Insertion with long target duplication: a mechanism of gene mobility suggested from comparison of two related bacterial genomes / A. Nobusado, I. Uchiyama, S. Ohashi et al. // Gene. 2000. - Vol.259. - P.99-108.

174. Nogueira C. Helicobacter pylori genotypes may determine gastric histopathology / C. Nogueira, C. Figueiredo, F. Carneiro et al. // Am. J. Pathol. -2001. Vol. 158(2). - P.647-654.

175. Odenbreit S. Translocation of Helicobacter pylori CagA into gastric epithelial cells by type IV secretion / S. Odenbreit, J. Puis, B. Sedlmaier et al. // Science. 2000. - Vol. 287. - P.1497-1500.i

176. Ojetti V. Helicobacter pylori re-infection in type I diabetes: a 5 years follow-up / V. Ojetti, A. Migneco, E.S. Nista et al. // Dig. Liver Dis. 2007. -Vol.39. - P.286-287.

177. Okui M. Helicobacter pylori infection affects gastric ulcer healing in Japanese monkeys / M. Okui, Y. Fukuda, I. Yamamoto et al. // J. Gastroenterol. — 1998. Vol.33(10). - P.26-30.

178. Olczak A.A. Association of Helicobacter pylori antioxidant activities with host colonization proficiency / A.A. Olczak, R.W. Seyler, J. W. Olson et al. // Infect. Immun. 2003. - Vol.71. -P.580-583.

179. Olczak A.A. Oxidative-stress resistance mutants of Helicobacter pylori / A.A. Olczak, J.W. Olson, R.J. Maier // J. Bacteriol. 2002. - Vol.184. - P.3186-3193.

180. Owen R.J. The genome: viewpoint of molecular biologist / R.J. Owen // Current Opinion in Gastroenterol. 1998. - Vol.14. - suppl.l. - P.S1-S4.

181. Parkers M. The management of severe Crohn's disease / M. Parkers, D.P. Jewel // Aliment.Pharmacol.Ther. 2001. - Vol.15. - P.563-573.

182. Pei Z. Bacterial biota in the human distal esophagus / Z. Pei, E.J. Bini, L. Yang et al. // Proc.Natl. Acad. Sci. USA. 2004. - Vol.101. - P.4250-4255.

183. Petersen A.M. Role of strain type, AGS cells and fetal calf serum in Helicobacter pylori adhesion and invasion assays / A.M. Petersen, J. -Blom, L.P. Andersen et al. // FEMS Immun. Med. Microbiol. 2000. - Vol.29. - P.59-67.

184. Rad R. Cytokine gene polymorphisms influence mucosal cytokine expression, gastric inflammation, and host specific colonization during Helicobacter pylori infection / R. Rad, A. Dossumbekova, B. Neu et al. // Gut. -2004. Vol.53. - P.1082-1089.

185. Razin Sh. Diagnosis of mycoplasmal infection // Molecular Biology and Pathogenicity of Mycoplasmas / Sh. Razin, R. Herrmann. NY.:Kluwer Academic / Plenum Publishers, 2002. - P.531-545.

186. Razin Sh. The Genus Mycoplasma and related genera (Class Mollicutes) / Sh.Razin // Procaryotes. 2006. - Vol.4. - P.836-904.

187. Reynolds D.J. Characteristics of Helicobacter pylori growth in a defined medium and determination of its amino acid requirements / D.J. Reynolds, C.W. Penn // Microbiology. 1994. - Vol.140. - P.2649-2656.

188. Romaniuk P.J. Campylobacter pylori, the spiral bacterium associated with human gastritis, is not a true Campylobacter sp / P.J. Romaniuk, B. Zoltowska, T.J. Trust et al. // J. Bacteriol. 1987. - Vol.169. - P.2137-2141.

189. Rozengarten R. The Vlp system of Mycoplasma hyorhinis combinatorial expression of dstinct size variant lipoproteins generating high frequency surface antigenic variation / R. Rosengarten, K. Wise // J. Bacteriol. -1991. Vol. 173. - P.4782-4793.

190. Segal E.D. Helicobacter pylori attachment to gastric cells induced cytoskeletal rearrangments and tyrosine phosphorylation of host cell proteins / E.D. Segal, S. Falkon, L.S. Tompkins // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. - Vol.93. -P.1259-1264.

191. Serin E. Serum positive cagA in patients with non ulcer dyspepsia and peptic ulcer disease from two centers in different regions of Turkey / E. Serin, U. Yilmaz, G. Kunefeci et al. // World J. Gastroenterol. - 2003. - Vol.9. - P.833-835.

192. Seyler R.W. Superoxide dismutase-deficient mutants of Helicobacter pylori are hypersensitive to oxidative stress and defective in host colonization / R.W. Seyler, J.W.Olson, R.J. Maier // Infect. Immun. 2001. - Vol.69. - P.4034-4040.

193. She F.F. Virulence and potential pathogenicity of coccoid Helicobacter pylori induced by antibiotics / F.F. She, D.H. Su, J.Y. Lin et al. // World.J. Gastroenterol. 2001. - Vol.7(2). - P.254-258.

194. Shimoyama T. Bacterial factors and immune pathogenesis in Helicobacter pylori infection / T. Shimoyama, J.E. Crabtree // Gut. 1998. - Vol. 43. - suppl.l. -P.2-5.

195. Shiiasaka D. Helicobacter pylori VacA and gastric ulcer / D. Shirasaka // Int. J. Hematol. 2006. - Vol.84. - P.316-318.

196. Sillakivi T. Diversity of Helicobacter pylori genotypes among Estonian and Russian patients with perforated peptic ulcer, living in Southern Estonia / T. Sillakivi, H. Aro, M. Ustav et al. // FEMS Microbiol. Lett. 2001. -Vol.195.-P.29-33.

197. Simuda Y. Influence of Helicobacter pylori infection on iron accumulation in hepatitis С / Y. Simuda, K. Kanemasa, Y. Yamaoka et al. // Liver Int. 2006. - Vol.26. - P.827-833.

198. Smoot T.D. Adherence of Helicobacter pylori to cultural human gastric epithelial cells / T.D. Smoot, I.H. Resan, T. Naab et al. // Infect. Immun. -1993.-Vol.61.-P.350-355.

199. Solnik J.V. Emergence of diverse Helicobacter species in the pathogenesis of gastric and enterogepatic diseases / J.V. Solnik, D.B. Shauer // Clin. Microbiol. Rev. 2001. - Vol.14. - P.59-97.

200. Steinkasserer A. The human IL-1 receptor antagonist gene (IL-1RN) maps to chromosome 2ql4-q21, in the region of the IL-1 alpha and IL-1 beta loci / A. Steinkasserer, N.K. Spurr, S. Cox et al. // Genomics. 1992. - Vol.13. - P.654-657.

201. Stingl K. Acid survival of Helicobacter pylori: how does urease activity trigger cytoplasmic pH homeostasis? / K. Stingl, K. Altendorf, E.P. Bakker // Trends Microbiol. 2001. - Vol. 10(2). - P.70-74.

202. Stolte M. A comparison of Helicobacter pylori and Helicobacter heilmannii gastritis. A matched control study involving 404 patients / M. Stolte, C. Kroher, A. Meining et al. // Scand. J. Gastroenterol. 1997. - Vol.32. -P.28-33.

203. Su B. Signal transduction-mediated adherence and entry of Helicobacter pylori into cultured cells / B. Su, S. Johansson, M. Fallman et al. // Gastroenterol. 1999. - Vol.117 (3). - P.595-604.

204. Suerbaum S. Free recombination within Helicobacter pylori / S. Suerbaum, J.M. Smith, K. Bapumia et al. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. -Vol. 95(21). -P.1219-1224.

205. Sugamata M. Ultrastructural study of antral G-cells in patients with duodenal ulcer: effect of Helicobacter pylori eradication / M. Sugamata, T. Ihara, A. Todate et al. // Helicobacter. 1997. - Vol.2(3). - P.2-3.

206. Suzuki N. Production and application of new monoclonal antibodies spesific for a fecal Helicobacter pylori antigen / N. Suzuki, M. Wakasugi, S. Nakaya et al. // Clin Diagn Lab Immunol. 2002. - Vol.9(l). - P.75-8.

207. Takahashi S. Regulation by endogenous interleukin -1 of mRNA expression of healing related factors in gastric ulcers in rats / S. Takahashi, N. Kobayashi, S. Okabe // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1999. - Vol.291 (2). - P.634-641.

208. Takahashi T. A novel in vitro infection model of Helicobacter pylori using mucin-producing murine gastric surface mucous cells / T. Takahashi, T. Matsumoto, M. Nakamura et al. // Helicobacter. 2004. - Vol.9. - №4. - P.302-312.

209. Tanaka Y. Impact of interleukin 1-p genetic polymorphisms on the developement of hepatitis С virus - related hepatocellular carcinoma in Japan / Y. Tanaka, T. Furuta, S. Suzuki et al. // J. Infect. Dis. - 2003. - Vol.187. - P.1822-1825.

210. Tang J. A polymerase chain reaction based method for detecting mycoplasma / acholeplasma contaminants in cell culture / J. Tang, M. Hu, S. Lee et al. // J. Microbiol. Meth. 2000. - Vol.39. - P. 121-126.

211. Telford J.L. Gene structure of the Helicobacter pylori cytotoxin and evidence of its key role in gastric disease / J.L. Telford, P. Ghiara, M. Dell'Orco et al. // J. Exp. Med. 1994. - Vol.179 (5). - P. 1653-1658.

212. Terebiznik M.R. Helicobacter pylori VacA toxin promotes bacterial intracellular survival in gastric epithelial cells / M.R. Terebiznik, C.L. Vazquez, K. Torbicki et al. // Infect. Immun. 2006. - Vol.74. - P.6599-6614.

213. Timenetsky J. Detection of multiple mycoplasma infection in cell cultures by PCR / J. Timenetsky, L.M. Santos, M. Buzinhani et al. // Braz. J. Mol. Biol. Research. 2006. - Vol.39. - P.907-914.

214. Tomb J.F. The complete genome sequence of the gastric pathogen Helicobacter pylori / J.F. Tomb, A.R. White, R.A. Kerlavage et al. // Nature. — 1997.-Vol.388.-P.539-547.

215. Tovey F.I. Helicobacter pylori virulence factors in duodenal ulceration: a primary cause or secondary infection cuasing chronicity / F.I. Tovey, M. Hobsley, J. Holton // World J. Gastroenterol. 2006. - Vol.l2(l). - P.6-9.

216. Tully J.G. Current status of the mollicute flora of humans / J.G. Tully // Clin. Infect. Dis. -1993. Vol.17. -P.S2-S9.

217. Turner D.M. An investigation of polymorphism in the interleukin-10 gene promoter / D.M. Turner, D.M. Williams, D. Sankaran et al. // Eur. J. Immunogenet. 1997. - Vol.24. - P. 1-8.

218. Van Doom L.J. Clinical relevance of cagA, vacA and iceA status of Helicobacter pylori / L.J. Van Doom, C. Figueiredo, R. Sanna et al. // Gastroenterol. 1998 (I). -Vol.115(1). -P.58-66.

219. Van Doom LJ. Distinct variants of Helicobacter pylori cagA are associated with vacA subtypes / L.J. Van Doom, C. Figueiredo, R. Sanna et al. // J. Clin. Microbiol. 1999. - Vol.37(7). - P.2306-2311.

220. Van Doom L.J. Expanding allelic diversity of Helicobacter pylori vacA / L.J. Van Doom, C. Figueiredo, R. Sanna et al. // J. Clin. Microbiol. 1998. - Vol.36.-P.2597-2603.

221. Van Vliet A.H. Nickel-responsive induction of urease expression in Helicobacter pylori is mediated at the transcriptional level / A.H. Van Vliet, E.J. Kuipers, B. Waidner et al. // Infect Immun. 2001. - Vol.69(8). - P.4891-4897.

222. Van Vliet A.H. NikR-mediated regulation of Helicobacter pylori acid-adaptation / A.H. Van Vliet, F.D. Ernst, J.G. Kusters // Trends Microbiol.2004.-Vol.12.-P.489-494.

223. Vilaichone R. Gatric mucosal cytokine levels in relation to host interleukin-1 polymorphisms and Helicobacter pylori cagA genotype / R. Vilaichone, V. Mahachai, S. Tumwasom et al. // Scandinavian J. Gasroenterol.2005. Vol.40. - P.530-539.

224. Voland P. Interactions among the seven Helicobacter pylori proteins encoded by the cluster / P. Voland, D.L. Weeks, E.A. Marcus et al. // Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 2003. - Vol.284. - P.96-106.

225. Wang X. Infection of BALB/c mice by spiral and coccoid forms of Helicobacter pylori / X. Wang, E. Sturegard, R. Rupar et al. // J. Med. Microbiol. — 1997. Vol.46 (8). - P.657-663.

226. Warren J.R. Unidentified curved bacilli on gastric epithelium in active chronic gastritis / J.R. Warren, B.J. Marshall // Lancet. 1983. - Vol.1. -P.1273-1275.

227. Werdmuller B.F.M. Helicobacter pylori has no role in the pathogenesis of reflux esophagitis / B.F.M. Werdmuller, R. J. L. F. Loffeld // Dig. Dis. Sci.- 1997.-Vol.42.-P.103-105.

228. Williams M.H. Possible role of Mycoplasma fermentans in pathogenesis of rheumatoid arthritis / M.H. Williams, J. Brostoff, I.M. Roitt // Lancet. 1970. - Vol.2(7667). - P.277-280.

229. Witkin S.S. Influence of interleukin-1 receptor antagonist gene polymorphism on disease / S.S. Witkin, S. Gerber, W.J. Ledger // Clin. Infect. Dis. 2002. - Vol.34. - P.204-209.

230. Wood N.C. In situ hybridization of interleukin-1 in CD14-positive cells in rheumatoid arthritis / N.C. Wood, E. Dickens, J.A. Symons // Clin.Immunol. Immunopathol. 1992. - Vol.62. - P.295-300.

231. Xu Q. Functional analysis of iceAl, a CATG-recognizing restriction endonuclease gene in Helicobacter pylori / Q. Xu, R.D. Morgan, R.J. Roberts et al. // Nucleic Acids Res. 2002. - Vol.30. - P.3839-3847.

232. Yamamoto K. Functional characterization in vitro of all two-component signal transduction systems from Escherichia coli / K. Yamamoto, K. Hirao, T. Oshima et al. // J. Biol. Chem. 2005. - Vol.280. - P.1448-1456.

233. Yamaoka Y. Disease- specific Helicobacter pylori virulence factors: the role of cagA, vacA, iceA, babA2 alone or in combination / Y. Yamaoka, D.Y. Graham // Helicobacter. 2000. - Vol.2. - P.37-42.

234. Yamaoka Y. Relationship between Helicobacter pylori iceA, cagA and vacA status and clinical outcome: studies in four different countries / Y.

235. Yamaoka, Т. Kodama, О. Gutierrez et al. // J. Clin. Microbiol. 1999. - Vol.37. -P.2274-2279.

236. Yamaoka Y. Variants of the 3'region of the cagA gene in Helicobacter pylori isolates from patients with different H.pylori-a.ssoc\ated diseases / Y. Yamaoka, T. Kodama, K. Kashima et al. // J.Clin.Microbiol. 1998. -Vol.36. -P.2258-2263.

237. Yang S.M. Ultrastructural observation on relation of Helicobacter pylori to gastric epithelia in chronic gastritis and peptic ulcer / S.M. Yang, B.Z. Lin, Y. Fang et al. // China Nat. J. New Gastroenterol. 1996. - Vol.3. - P. 152-154.

238. Yoshida N. Mechanisms involved in Helicobacter pylori-'mducQd inflammation / N. Yoshida, D.N. Granger, D.J. Evans et al. // Gastroenterology. -1993. Vol.105. - №5. - P.1431-1440.

239. Yu J. Relationship between Helicobacter pylori babA2 status with gastric epitelial cell turnover and premalignant gastric lisions / J. Yu, W.K. Leung, M.Y. Go et al. // Gut. 2002. - Vol.51. - P.480-484.

240. Zambon C.-F. Helicobacter pylori virulence genes and host IL-1RN and IL-1 В genes interplay in favouring the development of peptic ulcer and intestinal metaplasia / C.-F. Zambon, D. Basso, F. Navaglia et al. // Cytokine.2002.-Vol.18.-P.242-251.

241. Zambon C-F. Pro- and anti-inflammatory cytokines gene polymorphisms and Helicobacter pylori infection: interactions influence outcome / C-F. Zambon, D. Basso, F. Navaglia // Cytokine. 2005. - Vol.29(4). - P. 141-152.

242. Zheng P.Y. Helicobacter pylori strains expressing the vacuolating cytotoxin interrapt phagosome maturation in macrophages by recruiting and retaining TACO (corolin 1) protein / P.Y. Zheng, N.L. Jones // Cell Microbiol. —2003.- Vol.5. -P.25-40.

243. Zhou W. The diversity of vac A and cagA genes of Helicobacter pylori in East Asia / W. Zhou, S. Yamazaki, A. Yamakawa et al. // FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2004. - Vol.40. - P.81-87.

Информация о работе

Абузарова, Эльмира Ренардовна
кандидата биологических наук
Казань, 2008
ВАК 03.00.04

Диссертация

Особенности генотипов Helicobacter pylori и полиморфных локусов генов цитокинов (IL-1 и IL-10) у больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы