Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Характеристика вируса эукариотической зеленой водоросли Chlorococcum Minutum

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Веприцкий, Алексей Анатольевич

ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. Вирусы и вирусоподобные частицы эукариотических водорослей. . .II

1.1. Классификация и общие биологические свойства.II

1.1.1. Распространение .II

1.1.2. Вирусы или УЬР.

1.1.3. Специфичность

1.2. Размеры, морфология, структура

1.2.1. Размеры

1.2.2. Морфология и структура ,.

1.2.2.1. Палочкообразные вирусы ¿

1.2.2.2. Изометрические вирусы ',,'.'.

1.2.2.3. Фагоподобные вирусы

1.3. Физико-химические свойства.

1.3.1, Физико-химические свойства вируса

Chara.

1.3.2. Физико-химические свойства других вирусов.

1.3.2.1, Физические свойства

1.3.2.2. Химический состав

1.4. Взаимодействие вирусов с клетками водорослей

1,4.1, Путь вирусной инфекции и особенности внутриклеточного развития.

1.4.2. Цитологические изменения в инфицированных клетках водорослей.

1.5. Латентные инфекции вирусов эукариотических водорослей.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Характеристика вируса эукариотической зеленой водоросли Chlorococcum Minutum"

Трудно переоценить значение водорослей в природе. Их роль в общем балансе живого вещества на Земле огромна - около 30% вырабатываемой на планете органической массы приходится на долю водорослей ( Голлербах, 19776 ). Повсеместное распространение водорослей в природе и обильное, а подчас и массовое развитие их в водоемах разного типа, на надземных субстратах и в почве определяют огромное значение этих растений как в повседневной жизни человека, так и в его хозяйственной деятельности. И несмотря на то, что их искусственное разведение уже началось в ряде стран и у нас на Дальнем Востоке, все же имевдиеся возможности практического использования водорослей далеко еще не исчерпаны, а методы управления их жизнью только намечаются.

Особенности фотосинтетического, биохимического и генетического аппаратов водорослей, наличие наряду с относительно простыми одноклеточными формами форм с высоким уровнем клеточной дифференциации привлекают к водорослям внимание широкого круга исследователей и делают их объектом интенсивного и разностороннего экспериментального изучения.

Долгое время водоросли считали особой группой организмов, являющихся исключением среди обитателей животного и растительного мира, поскольку не было известно ни одного из их представителей, способного подвергаться вирусной инфекции. Лишь только в 1958 году Н.Б.Заварзина и А.Е.Проценко, изучая причины массового лизиса культур эукариотической зеленой водоросли Chlorella pyrenoidosa, впервые высказали предположение, что лизис водоросли может вызываться агентом вирусной природы. Обнарушенный ими альгологический агент напоминал некоторые известные колифаги. По аналогии его было предложено назвать хлореллофагом. Несмотря на то, что авторам, в силу ряда, причин, не удалось привести четких доказательств вирусной ¡природа хяореллофага, эта работа явилась первым шагом на пути к изучению вщзусов водорослей ( Заварзина, 1961; 1962; 1964; Тихоненко, Заварзина, 1966 ).

Хотя первый альголитиче ский агент был обнаружен у эука-риотической водоросли, дальнейший интерес к изучению вирусов водорослей был вызван обнаружением вируса, лизируицего про-кариотические сине-зеленые водоросли ( Safferman, Morris , 1963 ). С тех пор появилось огромное количество работ, посвященных цианофагам, интерес к которым объясняется как теоретическим, так и практическим значением их хозяев, а также и проблемами качества ВОДЫ (Brown, 1972; Padan, Shilo, 1973; Sherman, Brown, 1978 ).

Сообщения о вирусах и вирусоподобных частицах эукариоти-ческих водорослей постоянно стали появляться только с 1971 года« Однако большинство работ носило, и часто еще носит, чисто описательный характер и ограничивалось исключительно электрон-нонйикроскопическим изучением ультраструктуры зараженных клеток. Очень часто обнаружение вирусоподобных частиц было чисто случайным, в ходе изучения ультраструктуры той шеи иной водоросли ( Lenüoe, 1976; Sherman, Brown, 1978; Dodds, 1979 ). В результате, несмотря на более чем двадцатилетнюю историю, вирусы эукариотических водорослей являются на сегодняшний день одной из наиболее слабо изученных групп вирусов. Причины, вызвавшие такое отставание этой области вирусологии, по-видимому, состоят в том, что во-первых, вирусологи, изучающие вирусы растений вообще и вирусы водорослей в частности, интересуются, как правило, вирусами, имещими экономическое значение; во-вторых, это сложность культивирования водорослей и получения больших количеств биомассы с тем, чтобы выделить достаточное количество вируса для очистки и изучения; в-третьих, это сложность работы с культурами водорослей и неприменимость к ним обычных бактериологических методов ; и, наконец, в-четвертых, это, как правило, отсутствие контрольных культур, свободных от вирусной инфекции.

Появление в последние пять лет все возрастающего количества работ, посвященных вирусам эукариотических ^водорослей, со всей очевидностью свидетельствует о важности и перспективности исследования этой группы вирусов. Их изучение и понимание взаимодействия с клетками хозяев несомненно явится ценным инструментом не только для решения проблем физиологии эукариотических водорослей, но и ряда, проблем, касающихся их эволюции, филогенеза и систематики. Актуальность работ в этом направлении определяется также потребностями генной инженерии, поскольку система, вирус - эука-риотическая водоросль явится прекрасной моделью для изучения транскрипции, трансляции и репликации ДНК в клетках фотосинтезирухщих эукариотических организмов.

В течение ряда последних лет в лаборатории микробиологии Биологического научно-исследовательского института Ленинградского университета ведется работа по изучению строения и характеристике вируса эукариотической зеленой водоросли сыогососсит пипи-Ьш! . Целью настоящей работы явилось исследование биологических и физико-химических свойств этого вируса, а также изучение взаимодействия с клеткой хозяина.» Для этого были сформулированы следующие конкретные задачи исследования:

1 - разработать эффективный метод выделения вируса , позволяющий получать внсокоочшценнне и концентрированные препараты;

2 - разработать метод количественного определения вируса;

3 - изучить особенности взаимодействия вируса с зооспорами С.тд.ш^ит ;

4 - изучить устойчивость вируса к действию некоторых физических и химических факторов;

5 - определить спектральные и седиментационные характеристики В1фуса.;

6 - охарактеризовать белковый компонент вируса;

7 - охарактеризовать нуклеиновый компонент вируса«

Приношу глубокую благодарность моему научному руководителю профессору Громову Борису Васильевичу и консультанту к.б.н. Худякову Ивану Яковлевичу, а также всем сотрудникам лаборатории микробиологии Биологического НИИ ЛГУ за поддержку» внимание, ценные советы и помощь, оказанную при выполнении настоящей работы. Выражаю искреннюю признательность руководителю лаборатории молекулярной биологии Биологического НИИ ЛГУ ст.научн.сотр. А.В.Козлову за любезно предоставленную возможность использовать оборудование лаборатории и со трудникам этой лаборатории к.б.н. Дмитриевой Е.Ю., Кулыба Н.П. и Плавнику Ю.А. за помощь и дружеское содействие.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Веприцкий, Алексей Анатольевич

ВЫВОДЫ

1. Разработан простой и эффективный метод концентрирования и очистки вируса СЫогососсит , позволяющий получать вы-сокоочшценные препараты с концентрацией порядка 0,7 мг • мл""* и общим содержанием вируса около 35 мг.

2. Разработан метод количественного определения вируса СЫогососсит , в основе которого лежит метод серийных раЗВесэ дений. Очищенные препараты вируса содержат порядка 10

9 —Т

10 инф.ед.-мл .

3. Вирус СЫогососсит служит первым примером флагеллотропно-го вируса эукариотической клетки. Заражение зооспор вирусом происходит в процессе работы жгутиков, при этом активная работа жгутиков является необходимым условием эффективного заражения зооспоры.

4. Установлено, что первым результатом взаимодействия вируса с зооспорой является её обездвиживание.

5. Температурная инактивация вируса СЫогососсит наступает при 55°. Вирус наиболее стабилен при рН 8,0. Осмотический шок, вызванный 2 М раствором хлорида натрия, приводит к полной инактивации вируса, обусловленной деградацией частиц и высвобождением ДНК. Кратковременная обработка хлороформом приводит к полной потере инфекционности, что вызвано растворением липидов, входящих в состав мембран оболочки вируса.

6. Плавучая плотность частиц вируса СЫогососсит составляо ет 1,230 г* см . Молекулярная масса частиц, рассчитанная по их плавучей плотности и диаметру, равна 2,15 -2,62 х Ю9 дальтон.

7. В состав вируса СЫогососсит входит 30 полипептидов , причем 4 из них дают положительную реакцию на гликопро-теиды с реактивом Шиффа. Полипептид с молекулярной массой 42200 дальтон является главным, представляя значительную часть общего белка вируса.

8. Вирус СЫогососсит содержит двухспиральную ДНК. По содержанию гуанина и цитозина ДНК вируса относится к ГЦ-типу. Значение (Г+Ц), определенное по температуре плавления, оказалось равным 61,2 мол$ при плавлении в 0,1 Б8С и 60,1 тол% при плавлении в 0,01 М На -фосфатном буфере, рН 7,0 , содержащем 0,001М На^ЕМА . Значение (Г+Ц) по данным хроматографии кислотных гидролизатов ДНК составило 59,1 мол.$, что близко аналогичному значению для ДНК хозяина (62,1 мол.$ (Г+Ц)). Молекулярная масса ДНК вируса по предварительным оценкам составляет 200 -300 х Ю6 дальтон.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Результаты проведенной работы по характеристике вируса, эукариотической водоросли СЫогососсит т±хш£ит показывают, что этот вирус отличается от всех описанных ранее вирусов эукариот в целом и вирусов эукариотических водорослей в частности.

Вирус СЫогососсит является одним из наиболее крупных вирусов и имеет фагоподобное строение. Однако бактериофаги с направленным внутрь головки отростком, способным выворачиваться наружу, описаны не были. Вирус проникает в клетку хозяина своеобразным и пока, не описанным ни у каких других вирусов путем. Проникновение происходит через жгутиковые каналы зооспоры, где вирус, подобно бактериофагам, инъецирует свое содержимое через плазмалемму клетки ( Громов , Мамкаева, 1979 ). Заражение зооспор вирусом происходит в процессе работы жгутиков, при этом активная работа жгутиков является необходимым условием эффективного заражения зооспоры. Таким образом, вирус СЫогососсит может служить первым примером флагеллотропного вируса эукариотической клетки.

Геном вируса. СЫогососсит представлен двухспиральной ДНК, в состав которой входят четыре обычных основания. По содержанию гуанина и цитозина. ДНК вируса, относится к отчетливо выраженному ГЦ-типу. Молекулярная масса ДНК, по нашим оценкам, должна составлять 200 - 300 х Ю6 дальтон.

В состав вируса СЫогососсит входит 30 полипептидов, причем один из них по своему вкладу в общее содержание белка в вирионе является основным или главным. 4 из 30 вирусных полипептидов дают положительную реакцию на. гликопротеиды с реактивом Шиффа.

Среди вирусов растений ДНК-содержащие встречаются крайне редко. В настоящее время известий две небольшие группы таких вирусов - это, во-первых, группа очень мелких, так называемых вирусов-близнецов или спаренных вирусов, содержащих однонитчатую ДНК с молекулярной массой 0,66 - 0,95 х / fi

10 дальтон и максимальным диаметром изометрических частиц порядка 19 нм ( Goodman, 1977а,Ъ, с ; Harrison et al., 1977; Shepherd, 1979 ). Во-вторых, это вирусы, принадлежащие группе вируса мозаики цветной капусты, содержащие кольс цевую двухспиральную ДНК с молекулярной массой 4,4 х 10 дальтон и диаметром частиц 45 - 50 нм ( Shepherd , 1976, 1979). Несколько обособленно стоит вирус курчавости картофеля. По своей биологии этот вирус удивительным образом напоминает некоторые вирусы растений, содержащие однонитчатую РНК, однако вирус курчавости картофеля содержит двухспиральную ДНК с с молекулярной массой около 1,3 х 10 дальтон. Изометрические частицы вируса имеют диаметр около 23 нм ( Sarkar , 1973, 1976 ). Даже при таком беглом рассмотрении легко заметить, что вирус Chlorococcum резко отличается от ЛНК-содержащих вирусов высших растений.

С другой стороны, среди вирусов водорослей известно много представителей с фагоподобным строением, имеющих линейную двухспиральную ДНК. Это хорошо охарактеризованные к настоящему времени цианофаги. Однако диаметр капсиды самого крупного цианофага равен 100 нм, молекулярная масса ДНК различных цианофагов варьирует в пределах от 27 х I06 до 62 х I06 дальтон и, что самое важное, все известные цианофаги развиваются только в клетках прокариотических сине-зеленых водорослей ( Padan , Shilo , 1973; Sherman , Brown, 1978; Горю-шин, 1980; Худяков, Матвеев, 1981 ).

Из всех охарактеризованных вирусов эукариотических водорослей только два. можно сравнить с вирусом Chlorococcum • Это вирус Cylindrocapsa ( Hoffman , Stänker , 1976; Stänker et al.« 1981 ) и вирус HVCV-1 ( Meinte et al.t 1981; Van Btten et al«, 1981, 1982 ) Диаметр частиц вирусов Cylindrocapsa и HVCV-1 составляет 200 - 230 нм и 170 - 180нм соответственно. Оба вируса содержат двухспиральную ДНК с молекулярной массой 175 - 190 х Ю6 дальтон и 155 х I06 дальтон. В состав вирусов входит 10 и 19 полипептидов, причем один является главным. Вирус Cylindrocapsa поражает зооспоры зеленой нитчатой водоросли Cylindrocapsa geminella, а. вирус HVCV-1 реплицируется в клетках хлорококко-в о й водоросли Chlorella t причем в момент адсорбции вируса на, клеточной стенке у него появляется отросток, напоминающий отросток бактериофага. Однако более существенными оказываются различия этих двух вирусов с вирусом Chlorococcunu К ним прежде всего следует отнести то, что репликация обоих вирусов происходит в ядре, а не в цитоплазме. Помимо этого, у вируса Cylindrocapsa никогда не обнаруживался отросток. Биология этих двух вирусов практически не изучена. Поэтому сейчас было бы преждевременно объединять вирус Chlorocoocum и вирусы Cylindrocapsa и HVCV-1 в одну группу.

Насколько нам известно, из всех существующих групп вирусов есть только одна, к которой можно было бы отнести вирус Chlorococcum - это так называемая группа икосаэдрических цитоплазматических дезоксирибовирусов ( ИЦД-вирусы ). Для того, чтобы какой-либо вирус можно было поместить в эту группу необходимо и достаточно выполнение трех условий: I -вирус должен быть икосаэдрическим; 2 - его репликация должна осуществляться в цитоплазме; 3 - вирус должен содержать ДНК ( Kelly , Robertson , 1973; Goorha , Granoff , 1979 ). К этой группе относятся самые различные вирусы, инфицирующие многие виды организмов, включая млекопитающих, амфибий, рептилий, рыб, насекомых, моллюсков и простейших, а также высшие растения и грибы. Несмотря на то, что к этой группе относится более сорока вирусов, охарактеризованных среди них немного. Размеры ИЦЦ-вирусов варьируют от 50 нм до ЗООнм. Плавучая плотность вирусных частиц в хлориде цезия колеблетq ся около значения 1,3 г»см . Как следует ожидать из значительных различий в размерах ЩЦ-вирусов, молекулярная масса с их ДНК варьирует в весьма широких пределах от 4,3 х 10 до с

397 х 10 дальтон, при этом ДНК многих вирусов по содержанию гуанина и цитозина относится к АТ-типу. Число полипептидов, входящих в состав вирионов, также варьирует в широких пределах от 2-х до 28-и, однако, почти во всех случаях имеется главный полипептид.

Таким образом, вирус Chlorococcuat отвечает всем требовав ниям и, следовательно, может быть включен в группу ИЦЦ-вирусов. Тем не менее необходимо отметить, что ни один из ЖЩ -вирусов не имеет отростка, а проникновение в клетку осуществляется посредством пиноцитоза. Поэтому логичнее было бы считать вирус сыогососсиш первым и пока единственным представ вителем специфической, с точки зрения морфологии и биологии, группы вирусов эукариотических водорослей.

Простота и эффективность разработанного метода очистки и концентрирования, позволяющего получать большие количества высокоочищенного препарата вируса СЫогососсит , и наличие методов его количественного определения делают систему вирус - эукариотическая водоросль с.аЛшЛша весьма удобной моделью как для детальных биохимических исследований, так и для изучения различных аспектов развития ДНК-содержащих вирусов в клетках эукариотических фотосинтезирующих микроорганизмов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Веприцкий, Алексей Анатольевич, Ленинград

1. Агол В.И. Взаимодействие вируса и клетки. В кн.: Молекулярная биология вирусов. М. Наука., I97I, с. 189 408.

2. Атабеков И.Г. Строение вирусов. В кн.: Молекулярная биология вирусов, М, Наука, I97I, с. 99 188.

3. Булатов М.й., Калинкин И.П. Практическое руководство по колориметрическим и спектрофотометрическим методам анализа. М.-Л., Химия, 1965, 342 с.

4. Ванюшин Б.Ф. Определение нуклеотидного состава нуклеиновых кислот. В кн.: Современные методы в биохимии. М., Медицина, 1964, с. 236 250.

5. Воробьева Н.Н. Энтомопатогенные вирусы. Новосибирск, Наука, 1976, 288 с.

6. Габрилович Й.М. Методы получения и определения бактериофага, В кн.: Основы бактериофагии. 2-ое изд., Минск, Вышэйшая школа,, 1973а, с. 16 24.

7. Габрилович И,М, Методы изучения чувствительности фагов к инактивирущим агентам. В кн.: Основы бактериофагии. 2-ое изд., Минск, Вышэйшая школа, 19736, с.147-159.

8. Гендон Ю.З., Поглазев Б.Ф., Тихоненко Т.Н. Нуклеиновые кислоты и белки вирионов. М., Наука., 1975, 368 с.

9. Голлербах М.М. Отдел харовые водоросли Charophyta В кн.: Жизнь растений, т,3, М,, Просвещение, 1977 а, с, 338 350.

10. Голлербах М.М. Распространенность водорослей в современных водоемах, их биомасса, и продукция. В кн.: Жизнь растений, т.З, М., Просвещение, 19776, с, 360 364.

11. Горюшин В.А. Вирусы низших растений. В кн.: Итоги на уки и техн. ВИНИТИ, Защита растений, 1980, т.2, с. 6 72.

12. Громов Б.В. Коллекция культур водорослей Биологического института Ленинградского университета. Тр.Петергофск. биол.ин-та, 1965, 19, с. 125 130.

13. Громов Б.В., Мамкаева. К.А. Фагоподобный инфекционный вирус зеленой водоросли СЫогососсит Изв. АН СССР. Сер.биол., 1979, 2, с. 181 187.

14. Громов Б.В., Мамкаева. К.А. Динамика, развития вируса, в зооспорах зеленой водоросли Chlorococcum В кн.: Вирусы микроорганизмов. Тезисы докладов. Пущине, I98I с. 109 П О

15. Заварзина Н.Б. Литический агент в культурах Cblorelle руrenoidosa Prlngh Докл. АН СССР, I96I, т.137, J 2, с. 435 437.

16. Заварзина. Н.Б. Влияние антибиотиков на лизис купьтзФ С Ы о rella pyrenoidosa Prisgh Микробиология, 1962 T.3I, J 6, с. 1002 1006.

17. Заварзина Н.Б. Лизис культзф хлореллы в отсутствие бактерий. Микробиология, 1964, т.33, Ш 4, с.561 564.

18. Заварзина Н.Б., Проценко А.Е. О лизисе культур Cblorella pyrenoidosa PrAngh Докл. АН СССР, 1958, т. 122 J 5, 936 939.

19. Липская А.А. Выделение ДНК из хлоропластов высших растений и зеленых водорослей и ДНК из синезеленых водорос20. Лурия С Дарнелл Дж. Общая вирусология. М., Мир, 1970, 424 с.

21. Мандель М., Мармур Дж. Определение содержания гуанина и щтозина в ДНК с помощью кривых плавления. В кн.: Методы исследования нуклеиновых кислот. М., Мир, 1970, с. 183 192.

22. Мейнелл Дж., Мейнелл Э. Экспериментальная микробиология. М., Мир, 1967, 348 1976, 440 с.

23. Монцевичюте-Эрингене Е.В. Упрощенные математико-статистические методы в медицинской исследовательской работе.Патолог.физиол. и эксперим.терап., 1964, JI 4, с.71-79.

24. Московец С М Менджул М.Л., Жигирь В.В., Нестерова. Н.В., Хиль 0.0. О морфологии литического агента с. 98 100.

25. Мэтьюз Р. Вирусы растений. М., Мир., 1973, 600 с.

26. Остерман Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот: Электрофорез и ультрацентрифугирование практическое пособие М., Наука, I98I, 288 с.

27. Перфильев Б.В., Габе Д.Р. Капиллярные методы изучения микроорганизмов. М,-Л., Изд-во АН СССР, I96I, 534 с.

28. Петров Ю.Е. Отдел бурые водоросли (Pbaeophyta В кн.: Жизнь растений, т.З. М., Просвещение, 1977, с. 143-192.

29. Пименова М.Н., Гречушкина Н.Н., Азова Л.Г. Руководство к Chlorella pyrenoidosa Pringh Вопр. вирусологии, I97I, т.16, с

30. Миллер Дж. Эксперименты в молекулярной генетике. М., Мир,

31. Рундина Л.А. Класс конъюгаты или сцеплянки (condTjgatophyceae В кн.: Жизнь растений, т.З, М., Просвещение, 1977, с. 308 310.

32. Седова Т.В. Основы цитологии водорослей. Л., Наука, 1977, 172 с.

33. Спирин А.С. Спектрофотометрическое определение суммарного количества нуклеиновых кислот.- Биохимия, 1958, т.23, 5, с. 656 662.

34. Сурков В.В. Биохимия вирусов грибов.- В кн.: Итоги науки и техн. ВИНИТИ, Вирусология, 1978, т.7, с*75 101.

35. Тихоненко А.С., Заварзина Н.Б. Морфология литического агента Chlorella pyrenoidosa Мшфобиология, 1966, Т.35, 5, с. 850 852.

36. Френкель-Конрат X. Химия и биология вирусов. М., Мир, 1972, 336 с.

37. Худяков И.Я., Матвеев А.В. Сравнительная характеристика, цианофагов одноклеточной цианобактерии Synechococcus sp. 698. В кн.: Вирусы микроорганизмов. Тезисы докладов. Пущине, I98I, с. 104 105.

38. Хэйбл К., Зальцман Н.Р. (ред.) Методы вирусологии и молекулярной биологии. М., Мир, 1972, 444 с. 40* Andrews J*H. The pathology of marine algae*-> Biol.ReT», 1976, V» 51, H 2, p. 211 253. 41* Baker J*R*J«, Evans The ship fouling alga Sctocarpus. Ultrastract\ire and cytochemistry of pltirilocular reproductive stages*- Protoplasma, 1973, v»??» H 1,p.1-13.

39. Bodds J.A. Viruses of marine algae* Szperientia» 1979» V. 35» H 4, p* 440 442. 56* Bodds J.A*» Cole A. Microscopy and biblogy of Uronema gigas» a filamentous eucaryotic green alga» and its associated tailed virus-like particle. Virology 1980, V* 100, H 1, p. 156 165.

40. Bodds J.A., Stein J.R., Haber S* Characterization of a virus-like particle in a filamentous green alga* Froc.Can.phytopath*Soc*, 1975» v. 42, p* 26* 58* Fairbanks C Stock !C«b*, Wallach B*F*H* Electrophoretic analysis of the major polypeptides of the human erythrocyte membrane. Biochemistry, 1971» v*10, H 13» p. 2606 2617.

41. Franca S. On the presence of virus-like particles in

42. Goorha R., Granoff A. Icosahedral cytoplasmic deoxyriboviruses. In: Comprehensive Virology, v. 14, Hew York-London, Plenum Publ#Corp.,1979, p.347 3 9 9

43. Gromov B;V., llamkaeva K.A. A virus infection in the synchronized population of the Chlorococcim minutum zoospores. Arch.Bydrobiol.Suppl.(Algological Studies 28), 1981, V.60, S 3» p. 252 259.

44. Hoffman L.R. Observations on the fine structure of Oedogonium. III. Microtubiilar elements in the chloroplasts of Oe. cardiacum. J.Hiycol.,1967, v.3, H4, p.212 221.

45. Hoffman b.R. Virus-like particles in Цу-drurus Chrysophyceae J.Phycol., 1978, v.14, p.110 114. 73* Hoffman J.L., Goodenough U.W. Experimental dissection of flagellar surface motility in Chlaoomonas. J.Cell Biol., 1980, v.86, р.б5б 665. 74* Hoffman L.R., Stanker b.H. Virus-like particles in the green alga Cylindrocapsa. J.Phycol., 1975, v. 11 (suppl.), p.7.

46. Hoffman L.R., Stanker L.H. Virus-like particles in the green alga Cylindrocapsa. Can.J.Bot., 1976, v.54« H 24, p. 2827 2841. 47. Hoffman G. ed.) Iscotables. A Handbook of Data for Biological and Physical Scientists.- 7th ed., Lincoln, Instrumentation Specialties Company, 1977»52p.

48. EawaJcami И«, Eawakami I Behavi of a virus in a spiT biotic system, Paramecium hursaria Zoochlorella*J.Protozool», 1978, v«25, H 2, p. 217 225» 79* Kelly D.C., Robertson J«S* Icosahedral cytoplasmic deoiyriboviruses. -J»Gen»Virol», 1973, v»20(snppl,), p. 17-41. 80* Kirby £.S* Some new solvent systems for the paper chromatography of nucleic acid degradation products*Biochim.Biophys,Acta, 1955, v»18, H 4, p.575 576»

49. Lemke F.A. Viruses of eucaryotic microorganisms .-Ann. Rev.Hicrobiol», 1976, v. 30, p.105 145. 87. bemke F.A.,Hash G.H* Fungal viruses.-Bacteriol.Eev., 1974, V.38, Ш 1, p. 29 56.

50. Moestrup 0., Shomsen H.A. An ultrastructtiral stizdy of the flagellate Fyramimonas orientalis with particular emphasis on Golgi apparatus activity and the flagellar apparattis. Protoplasma, 1974, 81, H2-3, p. 247 269.

51. Moran P.A.F. Xhe dilution assay of viruses. J.Hyg., Camb., 1954a, v.52, p. 189.

52. Horan F.A.P. She dilution assay of viruses, II. J. Hyg», Camb., 1954b, v.52, p.444.

53. Horan P.A. P. Another test for heterogeneity of host resistance in dilution assays. J.Hyg., Camh., 1958, V. 56, p. 319. 104* Nichols H.W. Growth media fresh water* In: Handbook of Phycologioal Methods, Cambridge, Cambridge Univ.Press, 1973, p. 7 24. 105* Hoordam B. Identification of Plant Viruses. Methods and Eacperiments. Wageningen, Centre for Agricultu-

54. Prescott S.C., Winslow Б., McCrady M. Water Bacteriology, 6th ed», London, Chapman and Hall Ltd., 1946.

55. Rimon A., Oppenheim A.B. Heat induction of the bluegreen alga Plectonema boryanum lysogenic for the cyanophage SPIctsl. Virology, 1975» v. 64,p»454-463. 113* Safferman R.S., Morris M.E. Algal virus: Isolation.Science, 1963» v.140, p.679 680.

56. Sarkar S. ША-like properties of the nucleic acid of potato leafroll virus. Faturwissenschaften, 1973, V. 60, p.480 481.

57. Sarkar S. Potato leafroll virus contains a doublestranded Б М Virology, 1976, v.70, p.265-273.

58. Shepherd R.J. Ш А viruses of higher plants. Adv. Virus Res., 1976, v.20,p. 304 339.

59. Shepherd R.J. Ш А plant viruses. Ann.Rev.Plant. Physiol., 1979, v. 30, p. 405 423.

60. Shepherd R.J., Bruening G.E., Wakeman R.J. Doublestranded deoxyribonucleic acid from cauliflower mosaic virus. Virology, 1970,v.41, p.339-347.

61. Sherman Ь.А., Brown R.M.,Jr. Cyanophages and viruses of eucaryotic algae. In: Comprehensive virology, V.12, New-York-bondon, Plenimi Pabl.Corp., 1978, p. 145 234.

62. Skotnicki A.H., Gibbs A.J., Wrigley N.G. Further studies on Chara corallina virus. Virology, 1976, V. 75, N 2, p. 457 468.

63. Soyer M.-O. Particules de type viral et filaments trichocystoides chez les Dinoflagelles. Protistologica, 1978, V.I4, H 1, p. 53 58.

64. Stanker L.H., Hoffman L.R. A simple histological assay to detect virus-like particles in the green alga Cylindrocapsa( Chlorophyta Can.J.Bot., 1979, V. 57, 3r 7, p. 838 842. S

65. Stanker b.H., Hoffman L.R., MacLeod R. Isolation and partial chemical characterization of a virus-like particle from a eucaryotic alga. Virology, 1981, V. 114, H 2, p. 357 369.

66. Veua Etten J*L*, Meints R.H., Kuczmarski D», Burbank D«E., Lee Viruses of isymblotlc Chlorella-like algae isolated from Paramecium bursaria and Hydra viridls. Proc#]Sratl.Acad.Sci.USA,1982, 79, p. 3867 3871.

67. Weber E., Osbom H* Proteins and sodium dodecyl sulfate: molecular weight determination on polyacrylamide gels and related procedures. In: Xhe Proteins* 3rd ed*. New York, Academic Press, 1975, V* 1, p* 179 223* 136* Witman G*B*, Carlson E*, Berliner J., Rosenbaum J.L., Chlamydomonas flagella* J.Cell Biol., 1973, V. 54, p. 507 539.