Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Характеристика клинических штаммов грамотрицательных условно-патогенных бактерий

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Характеристика клинических штаммов грамотрицательных условно-патогенных бактерий"

/

На правах рукописи

ТЕМИРОВА КИЗТУМА СЕИТБИЕВНА

ХАРАКТЕРИСТИКА КЛИНИЧЕСКИХ ШТАММОВ ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫХ УСЛОВНО-ПАТОГЕННЫХ БАКТЕРИЙ

03.00.07 -Микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

0

Ростов-на-Дону -1995

Работа выполнена в Кабардино-Балкарском государственна университете.

Научный руководитель: Член-корреспондент РАЕН, доктор биологическ наук, профессор Габрилович И.М.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Васильева Л.И.,

доктор медицинских наук, старший научный сотрудник Соболева C.B.

Ведущая организация: Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии

Защита диссертации состоится "М" _1996

в " " часов на заседании диссертационного совета Д 084.53.01 п Ростовском государственном медицинском университете (3440: г.Ростовна-Дону, пер.Нахичеванский,29).

С диссертацией можноознакомиться в библиотеке Ростовской государственного медицинского института

Автореферат разослан " "__1996

Ученый секретарь диссертационного совета, доцент

Корганов Н.5

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность темы. В последние десятилетия резко возросло распространение внутрибольничных (госпитальных, нозокомиальных) инфекций, т.е. осложнений, обусловленных микроорганизмами, развивающимися у больных, находящихся в различных стационарах. Так, в США, Англии, Франции, Германии такие осложнения регистрируются у 5-12% больных, поступивших в стационар, примем летальность при таких заболеваниях может достигать 25% ( Lewis и Klein, 1979; Daschner, 1981; М.Эриксон и соавт., 1985; Wenzel, 1990; Bailly и Sollef, 1993). Имеются сведения, что у 47% умерших основной причиной смерти явились внутрибольничные инфекции (С.В.Прозоровский и Л.А.Генчиков, 1983, 1994; А.А.Воробьев и соавт., 1989).

По данным отечественных исследователей (Н.А.Семина и соавт., 1989), внутрибольничные инфекции выявляются у 6,6% больных с колебаниями от 2,8 до 7,9% на разных территориях. В зависимости от профиля стационара эти показатели могут достигать 20-30% (А.З.Смолянская,1989). В целом уровень заболеваемости внутрибольничными инфекциями колеблется в пределах 5-500 на 10000 госпитализированных (А.А.Воробьев и соавт.,1989).

Сниженная резистентность организма госпитализированных больных ведет к тому, что в лечебных учреждениях возможно возникновение заболеваний, вызванных не только облигатно патогенными, но и условно-патогенными микроорганизмами. Последние вызывают заболевания, как правило, лишь у контингентов со сниженной резистентностью, при попадании в обычно стерильные ткани и полости, при необычно большой инфицирующей дозе (С.Д.Воропаева, 1983; Р.ХЛфаев и Л.П.Зуева, 1989).

Внутрибольничные инфекции представляют собой одну из форм "госпитализма", которая по определению Kramer и соавт.(1984), рассматривается как заболевание, обусловленное больничными факторами. Их возникновению способствует циркуляция возбудителей в стационарах различного профиля, селекция антибиотикоустойчивых и вирулентных форм бактерий.

Внутрибольничные инфекции вызываются, как правило, госпитальными штаммами микроорганизмов, т.е. штаммами, адаптировавшимися к больничным учреждениям, но их возбудителями могут быть и бактерии, не адаптировавшиеся к этим учреждениям. Как указывают Kramer и со-авт.(1984), "госпитальными инфекциями являются эндогенные и экзогенные инфекции, приобретенные больными в медучреждениях под влиянием следующих факторов (в отдельности или в комбинациях): снижения сопротивляемости организма, обусловленного болезнью и (или) лечением, скопления и циркуляции возбудителей заболевания, селекции антибиотикоустой-

чивых и (или) высоковирулентных возбудителей болезни, а также повышенных возможностей контактов и заражения".

Внутрибольничные инфекции встречаются в самых разных отделениях больниц, однако могут быть выделены так называемые "группы риска", представляющие собой контингента, наиболее подверженные возможности инфицирования, к которым относятся послеоперационные, ожоговые, онкологические больные, новорожденные, роженицы, родильницы и др..

Внутрибольничные инфекции характеризуются различными клиническими проявлениями и представлены множеством нозологических форм.

Этиология внутрибольничных инфекций связана с самыми различными представителями микроорганизмов, которые могут быть занесены в медицинские учреждения. Причем, частота обнаружения этих возбудителей колеблется достаточно широко и отмечается периодическая смена доминирующих патогенов. Полагают, что в медицинских учреждениях происходит селекция микробов определенных вариантов, чаще всего устойчивых к лекарственным препаратам и к антимикробным средствам (Kramer и со-авт.,1984). Такие штаммы являются госпитальными. Однако, единых критериев для индикации госпитальных штаммов пока не выработано, хотя этот вопрос имеет большое значение для борьбы с внутрибольничными инфекциями.

Цель и задачи работы. Целью настоящей работы было изучение свойств циркулирующих в больничных стационарах условно-патогенных грамотрицательных бактерий и установление их "госпитализма". Для этого необходимо было решить следующие задачи:

1. Изолировать из различного клинического материала и из внешней среды стационаров культуры грамотрицательных бактерий и идентифицировать их.

2. Исследовать патогенные потенции выделенных культур путем определения у них факторов патогенности.

3. Выявить эпидемиологические маркеры таких "госпитальных" штаммов для их быстрой идентификации в практических условиях.

Работа проводилась в соответствии с основными направлениями НИР Кабардино-Балкарского государственного университета. Тема:"Разработкг] способов выявления и эпидемиологического маркирования условно-патогенных представителей энтеробактерий", зарегистрирована во ВНТИ-Центре, № гос.регистации 01.91.0044705.

Научная новизна. С помощью определения факторов патогенности выявлены потенциально патогенные штаммы грамотрицательных бактерий, преимущественно семейства Enterobacteriaceae, циркулирующие i: больничных стационарах разного профиля. Осуществлено патотипирова-ние таких штаммов.

Практическая ценность. Показана возможность идентификации "госпитальных" штаммов эшерихий, клебсиелл, энтеробактеров на основа-

нии комплекса свойств, включающего патотипирование, множественную устойчивость к антибиотикам, плазмидный профиль ДНК, фаговар.

Апробация работы. Материалы диссертации опубликованы в семи работах.

Полученные данные доложены:

1. На выездной сессии Президиума Академии естественных наук (Махачкала, 1993).

2. На научной конференции, посвященной 25-летию ветеринарного факультета КБАМИ (Нальчик, 1994).

3. На 2-ой Всероссийской научной конференции по програм-ме"Университеты России" раздел "Медицина" (Нальчик, 1994).

4. На научной конференции молодых ученых "Достижения медицинской науки - практическому здравоохранению" (Нальчик, 1995).

Положения, выносимые на защиту:

1. В отделениях различного профиля циркулируют грамотрицательные бактерии, среди которых преобладают Е.coli.

2. Путем определения факторов патогенности циркулирующих в стационарах бактерий в сочетании с другими признаками представляется возможным выявить потенциально-патогенные штаммы, которые могут быть отнесены к госпитальным.

3. Для характеристики госпитальных штаммов могут быть использованы эпидемиологические маркеры, к которым относятся патовар бактерий, множественная устойчивость к антибиотикам, плазмидный профиль ДНК, а в отдельных случаях фаговар.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 147 страницах машинописного текста, иллюстрирована 50 таблицами, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, 3 глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, указателя литературы, состоящего из 195 источников, из которых 71 отечественных и 124 зарубежных, и приложения.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

Материал и методы исследования.

При проведении исследований использованы 202 штамма грамотрица-тельных бактерий, выделенных из различного патологического материала от больных (178 штаммов) и из внешней среды больничных стационаров (24 штамма). Исследования проводились на материале Республиканской и Городской больниц г.Черкесска на протяжении 1992-1995 гг. Для наблюдений были отобраны, в первую очередь, больные из групп риска в отношении

внутрибольничной инфекции. От 166 больных, условно распределенных в : групп, были выделены 178 культур грамотрицательных бактерий.

Послеоперационные больные из хирургических отделений с гнойно септическими осложнениями (32 человека) составили 1 группу. Среди ни; были 8 больных с операциями на желчных путях, 6 - с операциями на желу дочно-кишечном тракте по поводу аппендицита, непроходимости кишеч ника и др., 8 - с операциями на конечностях (ампутации, экзартикуляции) 10 - с вскрытием различных гнойно-воспалительных процессов. Из отде ляемого послеоперационных ран больных этой группы больных были вы делены 35 культур грамотрицательных бактерий.

Вторая группа представлена 18 урологическими больными, из кото рых 7 оперированы по поводу мочекаменной болезни и рака мочевого пу зыря, а остальные 11 больных лечились консервативно по поводу мочека менной болезни, цистита и т.д. При исследовании мочи этих больных изо лирован 21 штамм.

Терапевтические больные в количестве 32 человек (3 группа) разделе ны на 2 подгруппы: 18 больных с острыми и хроническими заболеваниям! органов дыхания и 14 - с заболеваниями органов брюшной полости. И: мокроты, мочи, желчи больных этой группы выделены 34 штамма грамот рицательных бактерий. Четвертую группу составили беременные и гинеко логические больные - 39 человек. Сюда включены 17 беременных и 22 боль ные с различными гинекологическими заболеваниями, из них 4 оперирова ны по поводу миомы матки. Из мочи и отделяемого влагалища изолирова ны 39 штаммов бактерий.

Дети в возрасте от 1 дня до 14 лет составили пятую группу, котора: включала 45 детей, из которых у 14 имелись осложнения со стороны пупоч ной раны, у 9 отмечалось инфицирование кожи и слизистых, 5 детей госпи тализированы по поводу дисбактериозов и у 17 наблюдались различны! заболевания мочевыводящих путей. От этих больных из отделяемого пу почной раны, глаз, кожных пустул, кала, мочи выделены 49 штаммов гра мотрицательных бактерий.

Кроме этого, исследовались 24 штамма грамотрицательных бактерий выделенных из смывов с различных объектов внешней среды (мебель, пе ленки, аппаратура, инструментарий и т.д.) в указанных выше отделения; стационаров. Эти штаммы составили отдельную 6 группу.

В работе использовались обычные питательные среды производств; Дагестанского научно-производственного объединения "Питательные сре ды" (Махачкала): 1,5% и 0,7% питательный агар, а также питательный бу льон. Культивирование бактерий проводилось в течение 18-24 часов npi температуре 37оС.

Выделение бактерий из исследуемого материала и их идентификаци) производились общепринятыми методами бактериологического исследова ния. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам проводил!

дискодиффузионным методом с помощью стандартных дисков. Результаты учитывали согласно соответствующей Инструкции.

Для исследования профиля плазмидной ДНК использовали метод вертикального электрофореза в 0,7% агарозе (Eckhardt,1978). Для установления молекулярной массы выявляемых плазмид использовались релерные плазмиды: PR-4 (38 МД), Rmsl48 (95 МД), pBR 322 (2,8 МД), RSFI010 (5,5 МД).

Адгезивную способность бактерий определяли по методике В.И.Брилиса и соавт. (1986) с использованием формалинизированных эритроцитов человека группы 0(I)Rh+. Устанавливали средний процент адгезии, коэффициент участия эритроцитов и индекс адгезивности микроорганизмов ( ИАМ ), на основании чего бактерии считались неадгезивными (ИАМ < 1,75), низкоадгезивными (ИАМ = 1,76-2,5), среднеадгезивными (ИАМ = 2,51-4,0) и высокоадгезивными (ИАМ > 4,0). Подсчет вели на 50 эритроцитах.

Гемагглютинирующую активность определяли в реакции гемагглюти-нации на плексигласовых панелях с 3% взвесью свежих эритроцитов человека группы 0(I)Rh+ и барана. D-Маннозорезистентная гемагглютинация выявлялась при добавлении к взвеси эритроцитов 1,5% D-маннозы. Способность бактерий адсорбировать краситель конго красный устанавливали на 1,5% питательном arage с 0,02% казаминовых кислот и 0,01% конго красного.

Антилизоцимную активность определяли по методике О.В.Бухарина и соавт.(1984). Определения проводили в диапазоне концентраций от 1 до 6 мкг/мл. Тест-культурой служил штамм Micrococcus luteus var. lysodeikticus N2665.

Гемолитическую активность бактерий изучали на питательном агаре с 3-5% взвесью отмытых в растворе Хенкса эритроцитов кролика. Для выявления тиолзависимых гемолизинов использовали питательный агар с 0,002% L-цистеина. Культуры засевались уколом, гемолиз учитывали через 24-48 часов.

Патотипирование бактерий проводили согласно разработанной проф.И.М.Габриловичем рабочей схемы определения патоваров, для чего учитывали факторы патогенности, представляющие 3 различные группы по механизму их действия: факторы адгезивности, факторы персистенции и факторы токсичности бактерий.

Адгезивность устанавливали на основании комплексного изучения показателей этого процесса. Адгезивными считались культуры, обладавшие сочетанием 2 и более показателей адгезивных свойств, из которых один -ИАМ > 2,5, а второй - гемагглютинирующая способность либо адсорбция конго красного. Кроме того, к адгезивным относили культуры только по величине ИАМ, если она превышала 4,0:

Показателем персистенции бактерий служила антилизоцимная активность не ниже уровня 3-4 мкг/мл.

В качестве критерия токсичности была избрана гемолитическая способность бактерий: продукция ими а- гемолизинов и тиолзависимых гемолизинов. При наличии тиолзависимых гемолизинов патовар обозначали знаком "t". Схема учитывает также множественную устойчивость бактерий к антибиотикам ( г или s). Фаготипирование клебсиелл и энтеробактеров проводили согласно схемы, предложенной Я.С.Усаевой (1995), с использованием типовых фагов Klebsiella и Enterobacter.

Полученные результаты при необходимости подвергали статистической обработке, для которой использовали общепринятые методики. Проводили определение средней арифметической, ошибки средней арифметической. При обработке по альтернативной изменчивости также вычисляли среднюю ошибку. Достоверность различий показателей определяли по критерию Стьюдента.

Результаты и их обсуждение.

Этиология внутрибольничной инфекции. Из различного клинического материала выделены 178 штаммов грамотрицательных бактерий, отнесенных при идентификации к 7 родам, из которых 6 (Escherichia, Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter, Serratia. Proteus) входят в семейство Enterobacteriaceae. Кроме того, выделялись представители рода PseudomonasPs.aeruginosa (таблица 1).

ТАБЛИЦА 1

Результаты идентификации грамотрицательных бактерий

(число штаммов)

Группа Esche- Kleb- Entero- Citro- Serratia Proteus Pseudo- Всего

richia siella bacter bacter monas

1 18 2 8 4 0 1 5 35

2 14 2 3 0 0 1 t 21

3 9 7 8 7 0 2 1 34

4 36 0 2 1 • 0 0 0 39

5 21 8 2 3 1 7 7 49

- 6 8 1 8 0 2 0 5 24

Среди выделенных бактерий преобладали культуры Е.соИ, которые составляли 52,5% всех исследованных штаммов. Эти бактерии высевались от больных всех изученных нами групп, а также из объектов внешней средь отделений. Чаще всего их выделяли из мочи и влагалищного отделяемой беременных женщин и гинекологических больных - 36 из 39 культу}

(92,3%). Значительно реже эшерихии высевались из патологического материала терапевтических больных - 26,5%.

Из других бактерий следует отметить довольно высокую частоту обнаружения клебсиелл и энтеробактеров, которые составляли соответственно 9,9 и 15,3%о. На долю этих микроорганизмов приходится 44,1% выделенных от терапевтических больных культур, причем у контингентов с патологией органов дыхания чаще высевались клебсиеллы, а у больных с заболеваниями органов брюшной полости в исследуемом материале преобладали энтеробактеры. Клебсиеллы составили 16,3% культур, выделенных от детей.

Обращает на себя внимание сравнительно частое выделение из патологического материала Рэ.аеп^тоза, которые составили 9,4% исследованных культур. Эти бактерии высевались от больных всех групп (за исключением беременных женщин и гинекологических больных).

Цитробактеры составили 5,9% исследованных культур, протеи - 5,4% и серрации - 1,5%. Цитробактеры высевались в 20,5% случаев у терапевтических больных, а серрации в 2 случаях обнаружены в смывах из процедурного кабинета хирургического отделения.

Среди культур, высеянных из смывов с объектов внешней среды, по 1/3 составляли эшерихии и энтеробактеры, а на долю псевдомонад приходилось 20,8% этих культур.

Большинство идентифицированных культур было выделено из мочи -90 штаммов (50,6%). Среди эшерихии такие штаммы составили 66,3%, среди энтеробактеров - 52,2%. Из гнойного отделяемого были изолированы 56 культур (31,5%о), которые принадлежали ко всем выделенным группам бактерий. Из этого материала выделены 85,7% псевдомонад, 45,4% протеев, 16,7-36,8% - остальных бактерий. Цитробактеры чаще высевались из мокроты - 58,3%.

Факторы патогенности возбудителей внутрибольничных инфекций.

Выделенные у больных и из внешней среды штаммы грамотрицатель-ных бактерий исследованы на наличие у них факторов патогенности.

Для установления адгезивной способности бактерий проводилось комплексное определение свойств, связанных с этой способностью: адге-зивности на эритроцитах человека группы 0(1)1111+, гемагглютинирующей способности в отношении эритроцитов человека и барана и способности адсорбировать краситель конго красный. Суммарные результаты этих исследований приведены в таблице 2.

ТАБЛИЦА 2

Адгезивные свойства выделенных грамотрицательных бактерий

Род Число Число / процент штаммов

бактерий штаммов Адгезивно-активные штаммы (ИАМ >2,5) Агглютинация эритроцитов человека Агглютинация эритроцитов барана Адсорбция конго красного

Escherichia 106 74/69,0 48/45,3 41/38,7 53/50,0

Klebsiella 20 12/60,0 3/15,0 5/25,0 8/40,0

Enterobacter 31 23/74,2 10/32,2 11/35,5 18/58,1

Citrobacter 12 10/83,3 5/41,7 5/41,7 10/83,8

Serratia 3 2 1 1 3

Proteus 11 10/90,9 5/45,4 6/54,5 7/63,6

Pseudomonas 19 13/68,4 5/26,3 2/10,5 18/94,7

Всего: 202 144/71,3 77/38,1 71/35,1 117/57,9

Адгезивноактивные штаммы (ИАМ > 2,5) среди исследованных составили 71,3 ± 3,2%, причем среди представителей различных родов удельный вес таких культур был близким и составлял от 60,0 ± 10,9% (клебсиеллы) до 90,9 ± 8,7% (протеи). Высокоадгезивные штаммы (ИАМ > 4.0) среди исследованных культур составили 13,8%. Всего выявлено 28 таких штаммов. Высокоадгезивные штаммы отмечены среди всех выявленных представителей грамотрицательных бактерий, за исключением серраций, причем их доля колебалась от 5 до 18,2%.

Средние значения ИАМ у всех изученных культур составляли 3,1 ± 0,06, т.е. находились на уровне среднеадгезивных штаммов. Колебания средних значений ИАМ у представителей отдельных родов были в пределах 2,7 - 3,38 и существенно не различались.

Способность агглютинировать эритроциты у изученных культур выражена слабее - такими свойствами обладали 100 штаммов (49,5%), причем эритроциты человека группы 0(1)КЬ+ агглютинировали 77 штаммов

(38,1%), а эритроциты барана - 71 (35,1%). Результаты агглютинации бактериями эритроцитов человека и барана совпадали у 48 штаммов (23,8% исследованных культур).

Гемагглютинирующая способность была выражена у представителей разных родов по-разному. Так, у клебсиелл такими свойствами обладали 5 штаммов (25%), у псевдомонад - также 5 штаммов (26,3%), у энтеробакте-ров - 13 (41,8%), у цитробактеров - 6 (50%), у эшерихий - 62 (59%), у протеев - 7 (63,6%) и у серраций - 2 штамма из 3 изученных.

Эритроциты человека агглютинировали 15% культур клебсиелл, 45,4% протеев, 45,3% эшерихий, среди остальных бактерий такие штаммы составляли 26,3-41,7%. Эритроциты барана агглютинировали 10,5% псевдомонад, 25% клебсиелл и 35,5-54,5% остальных бактерий.

Обнаруженные у изученных бактерий гемагглютинины относились к разным группам по чувствительности к маннозе. Так, маннозорезистентные в отношении эритроцитов человека гемагглютинины выявлены у 24 штаммов, или у 31,2% гемагглютинирующих культур. Штаммы с такими ге-магглютининами не обнаруживались у цитробактеров, серраций, протеев, у остальных бактерий они составляли около 1/3 агглютинирующих эритроциты культур.

Гемагглютинины в отношении эритроцитов барана были в подавляющем большинстве случаев маннозочувствительными - маннозорезистентные гемагглютинины обнаружены лишь у 13 штаммов (18,3% гемагглютинирующих культур). Такими гемагглютининами обладали 10 штаммов эшерихий (из 41 дающего гемагглютинацию), 2 штамма энтеробактеров (из 11) и 1 - клебсиелл (из 6).

Способностью адсорбировать конго красный обладали 57,9% исследованных культур. Это свойство было лучше всего выражено у серраций (все 3 штамма), у псевдомонад (94,7%), цитробактеров (83,3%) и у протеев (63,6%). У эшерихий, клебсиелл и энтеробактеров штаммы, способные адсорбировать краситель, составляли 40-58,1%. Адгезивная активность бактерий, изолированных из различного материала, была близкой - адгезивно-активные штаммы составляли 66,7-81,8%. Высокоадгезивные штаммы об, наруживались среди выделенных групп с близкой частотой -18,4-21,4%. Исключением явились культуры, выделенные из испражнений, среди кото. рых количество высокоадгезивных штаммов было сниженным - 1 штамм из 9 адгезивноактивных. Средние значения ИАМ у культур, выделенных из разных источников, соответствовали среднеадгезивным штаммам и были близкими: у штаммов, изолированных из гнойного отделяемого, - 3,07 ± 0,13; из мокроты - 2,98 ±0,17; их испражнений - 3,11 ± 0,2; из мочи - 3,18± 0,09; га смывов - 3,02 ±0,15.

Гемагглютинирующая способность культур, выделенных из разных источников несколько различалась. Так, штаммы, выделенные из мокроты,

обладали более низкой способностью агглютинировать эритроциты человека и барана по сравнению с другими группами, причем различия со штаммами, выделенными из мочи и из смывов, были достоверными (Р < 0,05).

Способность адсорбировать краситель конго красный была лучше всего выражена у культур, выделенных из внешней среды - у 83,3%, тогда как в остальных группах - у 45,4-66,7%.

Частота выявления адгезивноактивных штаммов среди культур различного происхождения была близкой и колебалась в пределах 62,8-76,9%. Гемагглютинирующая способность в отношении эритроцитов человека и барана, а также адсорбция конго красного не зависели от происхождения культур - эритроциты человека агглютинировали 23,8-51,3% штаммов, эритроциты барана - 19,0-48,7%», конго красный адсорбировали 48,7-61,8%.

В качестве показателя персистирующей способности бактерий была выбрана антилизоцимная активность. Такой способностью обладали 144 штаммов, или 71,3%. Среди представителей разных родов частота обнаружения антилизоцим'активных штаммов была близкой, за исключением псевдомонад, у которых такие штаммы составили 26,3+ 10,1%, что достоверно ниже, чем у остальных бактерий (кроме энтеробактеров). У последних антилизоцимная активность встречалась реже, чем у других энтеробак-терий - 48,4%о против 65,0-86,8%.

Проведено определение у бактерий двух типов гемолизинов -а- гемолизинов и тиолзависимых гемолизинов. Гемолитическая способность обнаружена у 64 исследованных штаммов (31,7%), из них а - гемолизины выявлены у 42 культур (20,8%), тиолзависимые гемолизины - у 22(10,9%).

Эпидемиологические маркеры возбудителей внутрибольничных инфекций.

С целью выяснения значимости таких маркеров нами предпринято изучение возможностей разграничения выделенных бактерий по чувствительности к антибиотикам, на основании комплекса продуцируемых ими факторов патогенности, а также по плазмидному профилю ДНК.

На чувствительность к антибиотикам исследованы 199 штаммов (1 штамм E.coli и 2 штамма Ps.aeruginosa были потеряны). Определяли чувствительность бактерий к 17 антибиотикам, относящимся к 9 группам по химической структуре.

Исследованные штаммы грамотрицательных бактерий были в основном устойчивыми к использованным антибиотикам. Наибольшую устойчивость изученные культуры проявляли к антибиотикам группы пенициллина (77,4-91,9%) штаммов), к макролидам (87,9-90,9%) и к ристомицину (83,4%). а наименьшую устойчивость - к полимиксину (46,2%), гентамицину (50,7%) левомицетину (53,3%) и канамицину (57,8%). К остальным аминоглико-

зидам, тетрациклинам, цефалексину, рифампицину устойчивыми были 62,8-73,9% исследованных культур.

Наиболее высокой устойчивостью к антибиотикам обладали культуры псевдомонад, среди которых устойчивые к большинству антибиотиков штаммы составляли 76,5-94,1%. К левомицетину и полимиксину устойчивых культур этих бактерий было меньше - 58,8%, но и эти величины превышали показатели для других бактерий. Также высокая устойчивость к антибиотикам выявлена у эшерихий - 63,8-94,3% устойчивых к большинству препаратов культур. К гентамицину, левомицетину и полимиксину устойчивых культур эшерихий было меньше - 43,8-54,3%. У протеев устойчивыми к большинству исследованных антибиотиков оказались 63,6-81,8% штаммов. К стрептомицину, гентамицину, левомицетину и полимиксину устойчивых культур протеев было меньше - 45,4-54,5%.

На основании результатов определения чувствительности бактерий к антибиотикам была установлена множественная устойчивость их к антибиотикам. К множественно устойчивым штаммам мы относили культуры,устойчивые не менее чем к 6 группам использованных антибиотиков. Результаты такого анализа представлены в таблице 3.

ТАБЛИЦА 3

Множественно устойчивые грамотрицательных бактерий

Род бактерий Число штаммов Множественно устойчивы штаммы

Число В %% (х±т)

Escherichia 105 54 51,4 4,9

Klebsiella 20 13 65,0 10,6

Enterobacter 31 15 48,4 8,9

Citrobacter 12 5 41,7 14,2

Serratia 3 1 -

Proteus 11 9 81,8 11,6

Pseudomonas 17 10 58,8 11,9

Всего: 199 107 53,8 3,5

Частота обнаружения множественно устойчивых культур, выделенных из различного материала, была близкой и составляла 33,3-63,3%. Реже всего такие штаммы обнаруживались среди культур, выделенных из внешней среды.

Также не отмечено значительных различий в распространении множ ственно устойчивых штаммов среди культур разных групп. Более част такие культуры обнаруживались среди штаммов, выделенных у терапевт! ческих больных, беременных женщин и гинекологических больных, а так» у детей. Реже всего они выявлялись среди культур, выделенных из внешне среды.

На основании результатов определения факторов патогенности иссл( дованных бактерий осуществлено распределение их на патовары согласи критериям, изложенным выше (таблица 4).

Среди выделенных культур грамотрицательных бактерий выявлен! представители всех 16 патоваров. Кроме того, обнаружены 7 патоваро) характеризующихся способностью бактерий продуцировать тиолактив; русмые гемолизины. Всего, таким образом, 202 изученных штамма прина/ лежали к 23 патоварам (таблица 4).

ТАБЛИЦА

Патотипирование выделенных культур грамотрицательных бактериГ

Пато- Число / процент штаммов

вар Esche- Kleb- Entero- Citro- Serratia Proteus Pseudo- Всего

richia siella bacter bacter monas

1 г 3/2,8 0/0 0/0 0/0 0 0/0 1/5,3 4/2,0

lrt 1/0,9 1/5,0 0/0 0/0 0 2/18,2 0/0 4/2.0

Is 5/8,9 0/0 0/0 0/0 0 0/0 0/0 5/2,5

2r 17/16,0 1/5,0 0/0 1/8,3 1 5/45,4 1/5,3 26/12;

2s 14/13,2 0/0 1/3,2 1/8,3 0 0/0 1/5,3 17/8,4

3r 0/0 1/5,0 0/0 3/25,0 0 0/0 1/5,3 5/2,5

3rt 4/3,8 2/10,0 0/0 0/0 0 2/18,2 0/0 8/4,0

3s 4/3,8 0/0 0/0 1/8,3 0 0/0 0/0 5/2,5

3st 0/0 1/5,0 1/3,2 2/16,7 0 0/0 0/0 4/2,0

4r 6/5,7 0/0 2/6,5 1/8,3 0 о/о 2/10,5 11/5,4

4rt 0/0 0/0 1/3,2 0/0 0 о/о 0/0 1/0,5

4s 1/0,9 0/0 - 2/6,5 0/0 1 о/о 2/10,5 6/3,0

4st 0/0 0/0 1/3,2 0/0 0 о/о 0/0 1/0,5

5r 5/4,7 3/15,0 8/25,8 0/0 0 о/о 1/5,3 17/8,4

5s 6/5,7 1/5,0 3/9,7 0/0 0 1/9,1 0/0 11/5,4

6r 14/13,2 2/10,0 1/3,2 0/0 0 ' о/о 1/5,3 18/8,9

6s 7/6,6 4/20,0 2/6,5 0/0 0 о/о 0/0 13/6,4

7r 1/0,9 0/0 0/0 0/0 0 о/о 0/0 1/0,5

7rt 1/0,9 0/0 0/0 0/0 0 о/о 0/0 1/0,5

7s 2/1,9 0/0 1/3,2 0/0 0 1/9,1 3/15,8 7/3,5

7st 0/0 0/0 0/0 0/0 0 0/0 1/5,3 1/0,5

8r 3/2,8 3/15,0 3/9,7. о/о 0 о/о 2/10,5 11/5,4

8s 12/11,3 1/5,0 5/16,1 3/25,0 1 о/о 3/15,8 25/12,'

К отдельным патоварам относилось от 1 до 26 штаммов. Больше всего культур отнесено к патовару 2 - 43, из которых 26 были множественно устойчивыми (патовар 2г). Культуры этого патовара обладали адгезивными свойствами и антилизоцимной активностью. В патовар 8 (8г и 8s) включены 36 штаммов, у которых не были выявлены факторы патогенности. К патовару 6 (6г и 6s) принадлежала 31 культура, обладавшая антилизоцимной активностью, к патовару 5 (5r, 5s) - 28 штаммов, характеризовавшихся адгезивностью.

Всего, таким образом, хотя бы одним фактором патогенности обладали 166 штаммов (82,2%). Адгезивная способность установлена у 103 культур (51%), антилизоцимная активность - у 109 (54%) и гемолитическая способность - у 64 (31,7%).

Определение плазмидного профиля ДНК выделенных штаммов обнаружило плазмиды у 88 культур, или 43,6%. Содержащие плазмиды штаммы высевались из различного патологического материала с близкой частотой -36,4-51,1%. Лишь у культур, выделенных из внешней среды, содержание плазмид было несколько ниже - у 29,2%. Наиболее часто плазмидосодер-жащие штаммы выявлялись среди культур, выделенных из мочи. При этом из мочи выделены 6 из 7 штаммов, содержащих по 2 плазмиды.

С помощью наборов типовых фагов согласно схем Я.С.Усаевой (1995) проведено типирование выделенных культур клебсиелл и энтеробактеров. При использовании типовых фагов Klebsiella типировались 14 штаммов клебсиелл, а типовых фагов Enterobacter - лишь 6 штаммов. Фагами обоих наборов типировались 15 штаммов. Типируемые культуры клебсиелл отнесены к 7 фаговарам. Из этих культур 3 принадлежали к фаговару 13, 4 - к фаговару 5, 2 - к фаговару 6, 2 - к фаговару 10. К остальным фаговарам отнесены по 1 штамму.

Культуры энтеробактеров также лучше типировались фагами Klebsiella по сравнению с фагами Enterobacter. Обоими наборами типировались 22 штамма. Выявлено 8 фаговаров. К фаговару 5 отнесены 6 штаммов энтеробактеров, к фаговару 4-5 штаммов, к фаговарам 3 и 6 - по 2 штамма, а к остальным фаговарам отнесены по 1 штамму.

Выводы

1. От 166 стационарных больных различных отделений и из внешней среды выделены 202 штамма грамотрицательных бактерий, среди которых преобладали эшерихии (52,5%), энтеробактеры(15,3%), клебсиеллы (9,9%) и псевдомонады (9,4%).

2. Из выделенных культур 166 (82,2%) обладали факторами патогенности, причем адгезивная способность отмечена у 35,1-71,3% штаммов,

антилизоцимная активность - у 71,3%, гемолитическая способность -31,7%. Частота обнаружения факторов патогенности у культур различны родов и происхождения была близкой.

3. Исследование чувствительности бактерий к 17 антибиотикам ра: личных групп показало высокую устойчивость бактерий. У 58,3% культу установлена множественная устойчивость к антибиотикам, которая чаш всего отмечалась у протеев (81,8%).

4. У 88 исследованных штаммов (43,6%) выявлены плазмиды, 69 из ни (74,4%о плазмидосодержащих штаммов) содержали плазмиды молекулярно массы 60 МД.

5. Эпидемиологическими маркерами выделенных при внутрибольни1 ных инфекциях штаммов грамотрицательных бактерий могут служить ш товары, множественная устойчивость к антибиотикам, плазмидный прс филь ДНК и фаговары.

6. Определение эпидемиологических маркеров позволило выявить го< питальные штаммы грамотрицательных бактерий - возбудителей внутри больничных инфекций.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. К вопросу об этиологии гнойно-септических осложнений у хирурп ческих больных / Пилипенко Т.Д./-// Вопросы теоретической и клиническо медицины. Материалы юбилейной конференции, посвященной 25-летш медицинского факультета.-Нальчик,1993.-С.93-94.

2. Адгезивная способность эшерихий различного происхождени /Накова Л.В., Бозиев В.Б., Габрилович М.И., Габрилович И.М. /-//Вестни Кабардино-Балкарского государственного университета. Серия медицш ские науки,- 1994.-Вып.1.-С.23-26.

3. Адгезивные свойства некоторых представителей условнс патогенных энтеробактерий /Габрилович И.М., Блиева Л.З., Габрилови М.И., Накова Л.В., Пилипенко Т.Д., Усаева Я.С./-//Фундаментальные осн< вы жизнедеятельности организма в норме и патологии.-Нальчик,1994.-С.4< 44.

4. Фаготипирование в контроле за внутрибольничными инфекциям] обусловленными условно-патогенными энтеробактериями / Габрилови И.М., Бакова Ф.Т., Блиева Л.З., Бозиев В.Б. и др./-// Фундаментальные прикладные вопросы естественных наук (региональные проблемы) Махачкала, 1994.-Т.1,- С.88-89.

5. Биологические свойства клинических штаммов условно-патогенны энтеробактерий, выделенных из мочеполовой системы /Бакова Ф.Т./-// Дс стижения медицинской науки-практическому здравоохранению Нальчик, 1995.-С. 15-16.

6. Использование фагов в диагностике условно-патогенных энтеро-бактерий /Алакаев А.Б., Какова Ф.Т., Блиева Л.З., Габрилович И.М. и др./ // Материалы научно-практической конференции Кабардино-Балкарской государственной сельскохозяйственной академии. - Нальчик, 1995.-Ч.1.-С.173-174.

7. Выявление потенциально-патогенных штаммов эшерихий в клиническом материале /Абукова В.В., Габрилович М.И., Габрилович И.М., На-кова Л.В. и др./-// Материалы научно-практической конференции Кабардино-Балкарской государственной сельскохозяйственной академии. - Нальчик, 1995.-Ч. 1 .-С Л 75-176.