Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Характеристика иммунобиохимических показателей радужной форели

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Характеристика иммунобиохимических показателей радужной форели"

Р! • од - & MAP 1935

MfflHCTEFCTBG СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ

РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ. САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ медицины

На. правах рукописи

ИВАНОВСКИЙ Владимир Станиславович

УДК 597.553.2: 577.27

ХАРАКТЕРИСТИКА КММУНСБИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ РАДУЖНОЙ ФСРЕГА

Специальность: 03.00.04 - Биохишя

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Санкт-Петербург 1925 г

Работа выполнена на кафедре биологической и органической химии и биотехнологии, и кафедре зоологии и экологии Петрозаводского государственного университета.

Научный руководитель:

заслуженный деятель науки РК, доктор биологических наук, профессор Болотников И.А.

Официальные оппоненты:

- доктор ветеринарных наук,профессор Конопатов Ю.В.

- кандидат биологических наук, старший научный сотрудник Аршаница Н.М.

Ведущая' организация - институт биологии Карельского научного центра РАН

Защита диссертации состоится — 1995 г

в 13 часов на заседании специализированного совета К I20.2C.02 в Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины по. адоесу: 196084, Санкт-Петербург,Черниговская ул.5

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургской государственной академии ветеринар -ной медицины.

Автореферат разослан 4.1595 г

Учёный секретарь Специализированного Совета

Дзцент Эйсымонт Т.А.

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Товарное рыбоводство является одаим из направлений рыбного хозяйства, которое во многом может решить проблема удовлетворения потребностей населения в разнообразных, в том числе и деликатесных видах рнбной продукции. Одним из путей реыения этой задачи является значительное расширение выращи вания радужной форели и близких « ней 4ори ръ'б (стальноголовый лосось и другие) в различного типа хозяйствах - прудовых, озерных, садковых и бассейновых. Однако, интенсификация садкового рыбоводства обусловила возникновение проблем предрасполагающих к снижению продуктивности, сохранности и качества продукции. В первую очередь, это часто действующие стресо-факторы: нарушение условий содержания и кормления, сверхплотные посадки, усиление антропогенного воздействия на водоёмы Северо-Запада и уяудшениь экологических условий в интенсивно эксплуатируемых водоёмах. В этих условиях снижается имьуный статус гидробионтов, повышается восприимчивость к условно-патогенным и сапрофитным микроорганиз мам, что приводит к возникновению инфекционных и инвазионных заболеваний, и в конечном итоге влечет за собой недополучение рыбной продукции.

В качестве критериев оценки популяции рыб в том или ином водоёме определяют обычно отдельно иммунологические и биохимические показатели особей. Совместное их использование может слу жить основой мониторинга за ростом и развитием гидробионтов. Кроме того, они отражают адаптивные возможности организма рыб в различные возрастные периоды.

При оценке уровня конституционального иммунитета и суждении о физиологическом статусе организма часто исследуют активность лизоцима, бета-лизина и комплемента, которые обеспечивают естественную устойчивость организма к неблагоприятным биотическим и абиотическим воздействиям внешней среды (Бухарин О.В., Васильев Н.В., 1974; Берестов В.А., Калинина Г.М., 1991).

В намей стране и за рубежом проводились отдельные исследова ния иммунобиохишческих показателей рыб, в частности изучение бактерицидной активности сыворотнки крови и тканей. Однако, био

технология выращивания радужной форели в условиях Карелии требу ет системного подхода в изучении её адаптивных и продуктивных возможностей, что позволяет оценить состояние гидробионта, его реакцию на изменение условий среды в водоёмах различного трофического статуса.

Цели и задачи исследования. Основная цель работы: На основе комплексного исследования представителей разных популяций радужкой форели, ихтиофауны ил водоёмов различного трофического статуса (олиготрофный, эвтрофный) изучить иммунологические и биохимические факторы резистентности гидробионтов.

В процессе исследований предстояло решить следуюидае задачи:

- изучить факторы естественной резистентности - уровень лизо циш., бета-лизинов и комплемента у различных популяций радужной форели в зависимости от возраста, сезона года и типа водоёма; установить доверительные границы активности данных факторов;

- определить уровень активности гуморальных факторов естественной резистентности и содержание общего белка в икре радужной форели, находящейся на разных стадиях развития, взятой от особей гидробионтов из водоёмов разного трофического статуса;

- исследовать бактерицидную активность кожи рыб;

- определить содержание общего белка и комплекса белков сыворотки крови и тканей рыб, адсорбирующихся на зимоаане;

- изучить белковый спектр сыворотки крови радужней форели, содержание ДНК и РНК в тканях рыб;

- изучить цитотоксические свойства сыворотки крови радужной форели;

- провести сравнительный анализ влияния гидрохимического состава воды различных водоёмов на имцунобиохимические показатели гидробионтов.

Научная новизна работа« В результате выполненных экспериментов получены следующие данные, составляющие научную новизну исследований:

- принципиально новым в решении поставленной цели является комплексное изучение факторо^естественного ишунитета у радужной форели в возрастном и сезонном аспекте, что позволило дать конкретную оценку состояния рыб в зависимости от возраста,

сезонности, физиологического состояния, кормовых факторов.

- впервые получены подробные данные об активности лизоци-ма, бета-лизинов, комплемента у разных популяций радужной форели. Прослежено влияние возраста, трофики водоёмов и смены сезонов года на иммунобиохимические показатели организма.

- впервые представлены хронологические данные, характеризующие барьерные функции кожи радужной форели (бактерицидная активность).

- впервые изучена имлунобиохимическая характеристика комплекса белков сыворотки крови и тканей адсорбирующихся на з»-моэане у радужной форели в возрасте 1+ и 2+,

- изучены возрастные и сезонные концентрации общего белка и нуклеиновых кислот К ДНК) и (РНК) в органах и тканях радужной форели.

- получено рационализаторское предложение "Метод определения активности бета-лизинов у холоднокровных животных",

№ 1055, 14.02.94. ПГУ, Петрозаводск.

Практическое значение работы. Результаты, полученные в ходе проведённых исследований расширяют и углубляют наши представления о неспецифических механизмах защиты организма радужной форели и открывают новые возможности для изучения естественной резистентности рыбв норме и патологии.

Установленные константы основных гуморальных факторов есте ственной резистентности организма могут быть использованы в промышленном рыбоводстве для суждения о физиологическом статусе содержащихся в искусственных условиях рыб и, в перспективе для изучения влияния на них различных экстремальных условий, а также для определения конституционального иммунитета и адаптации естественных популяций радужной форели на разных стадиях развития.

Вопросы, выносимые на защиту.

1. Влияние возраста, сезона нода и трофики водоёма на уровень активности лизоцима, бета-лизинов и комплемента сыворотки крови и тканей различных популяций радужной форели.

2. Характеристика биохимических показателей : ДОК» ГНК в тканях и органах рыб у радужной форели в зависимости от условий

обитания, сезона года и возраста.

3. Содержание белка и белковый спектр сыворотки крови, бак терицидная активность кожи и цитотоксичность сыворотки крови у радужной форели в процессе выращивания.

Апробация работа. Основные материалы диссертации доложены

на:

- научных конференциях профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов Петрозаводского государственного университета (Петрозаводск, 1993-1994) ;

- 5-й межгосударственной межвузовской научно-практической конференции 'Новые фармакологические средства в ветеринарии" (Санкт-Петербург, Санкт-Петербургский ветеринарный институт,

1993 г.);

- межрегиональное научно-производственное координационное совещание "Проблемы ветеринарной профилактики в промышленном птицеводстве" (Петрозаводск - Санкт-Петербург - Ломоносов,

1994 г.).

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликована 3 научные статьи , в которых изложено основное её содержание.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, заключения, списка литрратуры и при лсжения. Работа иллюстрирована 27 таблицами, 3 рисунками и шестью фотографиями. Список литературы включает 164 источника, в том числе 55 зарубежных исследователей.

СОБСТВЕННЫЕ ИССВДОВАНИЯ

Материал и методы.

Объектом исследований служили икра, сеголетки, двухлетки и трёхлетки двух популяций радужной форели. Исследования ишуно логических и биохимических показателей проводили в одно и тоже вреуя на рыбах разных возрастных групп. Сеголеток радужной форели одинакового размера, стадий зрелости и пола группировали

по пять экземпляров и брали среднюю пробу из органов и тканей (0,5 - I гр). Пробы органов и тканей старших возрастных групп фиксировали от каждой особи отдельно. Исследовали ткьни шести органов (селезёнка, печень, почки, сердце, кишечник, жабры), а также слизь, икру и сыворотку крови радужной форели озёр Онежского и Нроиноэеро.

Условия выращивания в указанных водоёмах различны, так как вода в Онежском озере характеризуется низкой звтрофикаци-ей и низким содержанием биогенных веществ, напротив, второй водоём обладает высоким уровнем звтрофикации. В опыт использовали только здоровые особи, рыб, о чем судили по результатам ежемесячного взвеиивания и ряда других морфофизиологических показателей.

Изучение сезона динамики биохимических и иммунологических тестов радужной форели проводили зимой (январь, февраль), весной (март, алрель), летом (июнь, август)" и осенью (сентябрь, октябрь).

Кровь для анализа брали у рыб из хвостовой вены в одно и тоже время, утром перед кормлением. Пробирки с кровью выдерживали 2 часа при комнатной температура, после чего центрифугировали проба в течении 10 минут при 3000 об/мин. Экстракты готовили способом принятым для выделения лизоцлма из тканей (Черкасов с соавт., 1967), для чего отпрепарированные органы промывали физиологическим раствором, подсушивали, определяли их массу, измельчали и гомогенезировали, используя О, I// уксусную кислоту. Время определения активности лиэоциыа, бета-лизинов и комплемента, длительность и условия хранения образ- 1 цов, ах доэироэка определены в предварительной серии опытов.

. Активность лизоцима, сыворотки крови и тканей определяли нефелометрически, методом Дорофейчук В.Г. (1968), используя взвесь суточной агаровой культуры (М, iysodeiciicCCS ); активность бета-липинов сыворотки крови и тканей - нефелометрически по метод/ Бухарина O.B. (1972),используя в качестве тест-культуры сешт/л палочку. Активность комплемента сыворотки крови и тканей определяли фотометрически по методе Вагнера Г.Ф. (1963) и Руетова A.B. (1971), основанного на способности ком—

плекента в присутствии гемолитической сыворотки вызывать лизис эритроцитов баранов.

Бактерицидность кожи рыб, характеризующую защитные свойства кожи оценивали по методу Кхемпарской H.H. и Шальновой Г.А (1978) в модификации %бика В.М. (1979).

Концентрацию общего белка сыворотки крови и тканей определяли колометрически по биуретовой реакции ; количественное определение ДНК и РНК в указанных органах - спектрофотометри-чески, по методу Цанева Р.Г. и Маркова Г.Г. (i960) в модификации Конопатова Ю.В., 1990.

Концентрацию комплекса балков сыворотки крови и тканей, адсорбирующихся на аиыозане оценивали с помощью колориметрического метода (Погребняк Л.Л., 1976). »

Определение цитотоксических свойств сыворотки крови радужной форели проводили при помощи теста на парамециях по методу Матыцина А.П., Максименко В.А. (1979).

ЦифР°в°й материал подвергнут статистической обработке. Раз личия между относительными величинами оценивались с помощью критерия Стыщента, рассчитанного по формулам для относительных величин.

РЕЗУЛЬТАТЫ ЬССЩСВАНИЯ И ИХ 0БСОДЕНИЕ

Перед проведением основных исследований в серии предварительных опытов проводили оценку активности факторов естественной резистентности при разных температурных условиях, Это было обусловлено тем, что рыбы относятся к пойкилотермным организмам и температура их тела зависит от температуры воды, а методики направленные на выявление активности гуморальных факторов естественного иммунитета разработаны для теплокровных животных Установлено, что уровни активности лизоцима, бета-лизинов и комплемента, определяемые при 37°С более показательны, чем таковые, определённые при тенпера1уре равной 20, .10 и 4°С.

Кз полученных данных следует, что определение активности факторов естественной резистентности можно проводить при лобых выбранных нами температурах. Мы остановили свой выбор и в даль

нейшем все исследования проводили при 37°С, так кок абсолютные величины при атих условиях более показательны.

В ходе исследований установлено, что с возрастом у гидро-Зиоитов наблюдается тенденция к снижении активности факторов наспсцифкческой аащиты в сыворотки крови (рис.1)» ЛИЗОЦИМ. Возрастные изменения активности сывороточного лиэоци-уа, характенизовались наличием высокого уровня его у сеголоток радужной форели. В сыворотке крови в осенний период года активность лизоцима составила 5,5 £ 0,2$. У двухлеток выраженных в тех же условиях уровень лизоцима снижается до 4,7 - 0, а у трехлеток данный показатель составил 3,9 - 0,2% (р<0,1), БСТА-ЛИЭИНЫ. Динамика активности бета-лизинов сыворотки крови проявляется текяз в некотором снижении её уровня с возрастом . гидробионтов. Осенью в сыворотке крови у сеголеток радужной форели уровень бета-лизииов составлял 6,5 - 0,4%, а у трёхлеток колебался в пределах 4,1 - 0,4% (р^ОИ КОМПЛЕМЕНТ. Комплементарная активность сыворотки крови у радужной форели с возрастом гахжэ претерпевала несущественные изменения. В сыворотке крови сеголеток в осеннее врзмя активность комплемента соответствовала 2,2 1 0,06 ед., у двухлеток отмочалось достоверное её снижение до 1,97 - 0,07 ед. (р<0,05) а у трёхлеток характеризовалась минимальной активностью 1,79 1 0,06 ед. (р<0,1).

Таким образом, у радужной форели гуморальные факторы неспецифического иммунитета наиболее высокой ьктивномью характеризовались в раннем возрасте. Это свидетельствует об участии комплемента, лизоцима и бета-лиэинов в защитных реакциях организма и их большой роли в поддержании резистентности особенно у неполовозрелых осоСей.

ственно^о_иммщм!^

1ШШ

Сезонная динамика активности неспецифичяских гуморальных

СН|

50

х

<0

х I <а 1

о к

-_.fi

0> чэ

возраст ( лет )

О

I +

Рис. I. Возрастная дииэдлка активности гуморальных факторов в сыворотке крови радужкой форели

% СН„

%

зима

весна

лето

осень

Рис. 2. Сезонная динамика гуморальных факторов в сыворотке крови радужной форели

факторов сыворотки ;<равн отражена на рисунке 2.

■ЛИЭОЦИЬ*. Активность лизоцима сыворотки крови у гидробионтов бы

ла особенно высокой летом и осенью .

У двухлеток радужной форели, взятой для анализа из озера Нрошнозеро активность данного фактора в сыворотке крови в летнее время соответствовала 3,8- 0,2%, а осенью достигала 4,7 - 0,3?. В зимний период года происходила достоверное снк-жение её уровня до У - 0,(р <С 0,05). Наиболее низкая ак-тивнасть лизоцима была отмечена весной и сотавила 2,0 - 0,2 % (р <0,05).

Аналогичные закономерности в изменении активности факторов естественной резистентности установлены и у гидробионтов, выращенных в Онежском озере.

Из полученных экспериментальных данных следует, что уровень активности гуморальных факторов конституционального иммунитета в течении года подвергаются значительна изменениям, которые проявляются в цикличности и повторяются каждый год.

Активность гуморальных факторов неспецифической резистентности в органах и тканях радужной форели

Результаты исследований факторов естественной резистентности в органах и тканях представлены на рисунке 3. Сравнительный анализ полученных данных показал, что лигоцим, бвгв~ лизикы и комплемент во внутренних органах радужной форели имеют разные уровни активности.

Высокая активность лизоцима отмечена в почках, селезенке, печени и слизи кожи радужной форели. Вероятно, это свгзано с тем, что данные органы богаты лимфоидными клетками вследствие чего в них интенсивно протекают процессы фагоцитоза. Осуществляя барьерные функции, задерживая в себе антигены, эти органы препятствуют их дальнейшему распространению по организму. Активность лизоцима в сердце и жабрах была самая низкая.

По сравнению с лизоцимом бета-лизины имеют другие значения уровней активности. Наибольшие показатели отмечены в почках, слизи кожи и селезенке, что ло-видимоьу, связи но с бак-

терицвдными свойствами бетал-лизинов. В мышечных тканях, кишеч нике и икре активность бета-лизинов нами не обнаружена,

В ходе, .анализа выявлено неравномерное распределение уровня активности комплемента в органах и тканях гадробионтов. Вы сокая активность комплемента наблюдалась в сердце, кишечнике и почках, причем в разных отделах почки активность данного фактора различна, В жабрах комплементарная активность не выявлена а в икре находилась на низком уровне.

1-селезёнка, 2-печень, 3-почка, 4-слизь, 5-сыворотка крови, б-сердце, 7-жабры, В-нишечнмк, 9-икра

Рис. 3. Уровни активности гуморальных факторов естественной резистентности в органах и тканях радужной форели (I4)

I'-зменение уровня активности гуморальных факторов естественного иммунитета у радужной форели в зависимости f от трофического статуса водоёма

Анализ полученных данных показывает, что популяции радужной форели из разных по трофности водоёмов различаются по цело цу ряду показателей. Радужная форель и* Слежек ого озера отличается более высокими значениями уровня активности факторов естественной резистентности s сыворотке крови и тканях по сравнение с радужной форелью озера Кроши озеро.

Из результатов наших наблюдений следует, что бактерицидная активность лиэоцима бета-лизинов и комплемента у рыб зависит от фактора! загрязнённости окружающей среда (вода), что подтверждают литературные денные. Онежское озеро является олиг готрофным, по сравнению с озером Крошноэчро (эвтрофный водоём) Исследования показали, что в озере Кроьнозеро выше токсикологи ческая нагрузка, в частности это связано с 'поселением в водоём органических Еецеств с сельскохозяйственных угодий и производств. Выше и поступление бытовых стоков.

Влитие возраста, сезона года и типа водоёма ни

Для изучения барьерных свойств кожи использовали грудной отдел радужной форели, предварительно удалив с неё слизь. В качестве тест-куль ауры использовали грамм-отрицательный ытамм кишечной палочки и грамм-положительный шта^м сенной палочки.

Нами установлено, что с возрастом бактерицидный эффект кожи снижается/^табл.1)

вменения барьерных свойств кожи в зависимости от времени года у дчухлеток и трёхлеток радугиой форели аналогичны. Наивысший бактерицидный эффект наблюдается в летне-осенний период, зимой происходит постепенное снижение, а весной падает до минимальных значений.

Бактерицидный эффект особей радужной форели Снежского озера выше, чем в озере Крошнозеро. (Невидно, барьерные свойства кожи у гидробионтов зависят от фактора загрязнённости водной

среды и условий содержания.

Таблица I.

Бактерицидная активность кожи рыб (%) /Ы + т /

озеро Кроинозеро

возраст рыб грамм-отрицательный штамм оо У/ грамм-положительный штамм вое, 4ыМ/Я5

зима весна лето орень зима весна_ лето осень

1 + 2 + да/л имще И,»ЦП ялп /,23 шеа^в прцзз н.ыа.г*

I + гребца iWu.it 63,

Изменение содержания общего белка и комплекса белков адсорбирующихся на зимозане сыворотки крови и тканей гидробионтов в зависимости от возраста, сезона года и типа водоёма

С возрастом рыб содержание общего белка в сыворотке крови повышалось. В летний период у радужной форели (сеголетки) озера Крошозеро концентрация общего белка равнялась 2,33 г/100 мл., у двухлеток она увеличивалась до 3,65 г/100 мл., а у трёх летних особей составила 4,36 г/100 мл.

Вероятно, указанные изменения связаны с половым созреванием рыб в этот период и с возрастанием в процессе онтогенеза белок синтезирующих функций ряда органов. Наибольший уровень об щего белка" наблюдается в летне-осенний период в зимнее время года он снижается (ДЗ^р/у^ма), достигая минимальных значений весной

Низкое содержание общего белка в зимне-весенний период, по видимому может быть связано со снижением обменных процессов и использованием резервного белка сыворотки на формирование поло вых продуктов.

В сыворотке крови и тканях рыб Онежского озера данный показатель превышал таковой из озра Крошнозеро. В этом случае мы сталкиваемся с комплексным воздействием факторов среда и антропогенным влиянием.

Важнув роль в сохранении гомеостаяа организма играет комплекс белков, адсорбирующихся на аимозяне . В наших исследовании ях концентрация комплекса белков сыворотки крови, тканей и орга нов относительно общего белка была максимальной у сеголеток радужной форели ( В 'последующем их уровень незначительно снижался у двухлеток достигая минимального значения в период половозрелости в трёхлетнем возрасте ( • .

Полученные результаты показали, что изменения концентрации комплекса белков сыворотки крови, тканей и органов в зависимости от времени гора у рыб, изучаемых возрастов аналогичны дина мике содержания общего белка и сильно гависят от физиологического состояния и экологии рыб.

Наряду с этим установлено, что популяции радужной фсрели из разных водоёмов различается по уровню концентрации комплекса белков, адсорбирующихся на зимозане в сыворотке крови, тканях и органах. Так, у рыб из Онежского озера концентрация комплекса белков, адсорбирующихся на зш/озане была вьгае, чем у гидро-бионтов озера Крошнозеро.

Влияние возраста, сезона_годах_ трофического статуса водоёма на цитотоксические свойдтга сыворотки крови гидробионтов

Возрастные изменения цитотоксического эффекта характеризовались высоким уровнем у сеголеток радужной форели и снижением его с увеличением возрасти рыб. Неполовозрелые особи обладают большей иммунологической реактивностью, по-сравнению с половозрелыми.

Цитотоксические свойства сыворотки крови рыб подвержены сезонным колебания. Наиболее высокая цитотоксютость сыворотки у радужной форели сажного возраста наблюдалась в летне-осенний период года (I мин.5С сек.). Зимой её уровень незначительно

снижался и достигал минимального значения весной (2 шн,Обсек.)

Анализ влияния трофического статуса водоёма не. цитотокси-ческие свойства сыворотки крови двухлеток радужной форели показал, что у особей радужной форели (I +), взятых из ояиготрофно-го водоёма, время гибели,парамеций в сыворотке крови наступало быстрее, чем у рыб из ввтрофного водоёма.

Содержание нуклеиновых кислот в органах и тканях гидробионтов

Нами установлено, что содержание нуклеиновых кислот в органах и тканях рыб в течении года, претерпевает незначительные изменения.. Концентрация как ДНК, так и РНК в летне-осенний период года повышалась, а от зимы к весне плавно снижалась.

При изучении содержания нуклеиновых кислот в возрастном аспекте отмечено, что количество ДНК в печени, селезёнке и почке сеголеток наименьшее, у двухлеток несколько выше, а у трёхлетних рыб снова понижается. Содержание РНК у сеголеток и двухлеток в данных органах почти одинаковое и несколько увеличивается у особей рыб на третьем года жизни. В ходе исследований нуклеиновых кислот из шшечных тканей радужной форели обнаружена тенденция к уменьшению с возрастом, как количества ДНК, так и РНК.

Популяции радужной форели из разных водоёмов отличаются по содержанию нуклеиновых кислот в тканях. Для радужной форели из Онежского озера характерно более высокое содержание ДНК и РНК в изученных органах, по сравнению с особями из озера Кроынозеро.

Уровсть_активности„фак'горов естественной резистентности

и содержание общего белка на разных стадиях развития

икры радужной форели

Иссл дования проводили на неоплодотворенной икре на стадиях формирования глазка и образования кроветворных органов. В ходе анализов установлено, что по мере созревания в икре меняется уровень активности дизоцима и комплемента. Наибольшая активность данных факторов ¡¡^специфической резистентности обнару-

жена в неоподотворенной икре (3,05 и 2,18 ед.). В дальнейшем на более поздних стадиях развития икры уровень активности лизо цкма и комплемента понижался (1,78 и 1,83 ед.). Уровень общего содержания белка в икре изменялся в обратой последовательности, достигая максимального значения на стадии формирования кроветворных органов (5,88 г - ICO мл.).

Иммунологические характеристики икры рыб из олиготрофного водоёма были выше, по сравнению с эвтрофныы. В частности, уровень активности лизоцима и комплемента в неоплодотворенной икре из Онежского озера составили 3,05 и 2,1В ед., а в озеро Иро-шноаеро - 1,80 и 2,09 ед. Уровни общего белка в анализируемой ккрв в обоих озёрах были близки (5,66 г-100 мл. и 5,62 г-100 ил

Белковый спектр снворотки крови_радашой_$о£ели

Для радужной форели, выращигаемой ь садках на искусственных кормах характерно высокое содержание в сыворотке крови альбуминов - 43-49% и альфа-глобулинов U- I и d 2) - 30-34%. Другие фракции белков представлены бета-глобулинами - 17-26$ и незначительным количеством гамма-г.г.оСулинов - 2-3?. Альбуминовая фракция белков крови незначительно уменьшалась с возрастом рыб. Так, у трехлеток радужной форели она оказалась на 2% ниже, чем у двухлеток, находящихся б тех же условиях. Количество глобулинов с возрастом рыб несколько увеличивалось. Ио-видимоцу. это связано с возрастным снижением интенсивности обмена и темпа роста.

При исследовании белкового спектра сыворотки крови рыб из водоёмов разного трофического статуса отмечено, что альбуминовая фракция у гидробионтсв из олиготрофного водоёма составила 49,а из эвтрофного - 47,2?. Несмотря на незначительные различия в содержании альбуминов особи раду.чюй форели олиготрофного водоёма отличались болаим весо/.. и более интенсивным темпом ростг. по—сравнению с особями из эвтрофного водоёма.

Гидрохимический анализ водоёмов показал, что воды озера Кро шнозеро характери?уются повышенными запасами биогенных веществ, особенно минерального фосфора, определявших продуктивность водо ёма. По количеству органических Еецеств, нитрптов и нитритов, а

также аммонийного азота озеро Кроинозеро доминирует по-сравне нию с Онежским озером. Следовательно, растворенные органичео-кие вещества кормов, продукты жизнедеятельности рыб, органика, попадающая в водоём от прибрежных животноводческих ферм угнетает имцунобиохимические показатели гидробионтов, снижая естественную резистентность.

В Ц В О Д Ы

1. Возрастная динамика гуморальных факторов естественной резистентности у изученных популяций радужной форели в целом аналогична. С возрастом активность лизоцима, бета-лизинов и комплемента в сыворотке крови и тканях данного вида рыб - снижается.

2. Сезонная динамика гуморальных факторов естественного иммунитета у двух поцуляций ихтиофауны характеризуется значительным подъёмом активности лизоцима и комплемента летом и осенью по-сравнению с зимне-весенним периодом, а сезонная вариабиль-ность активности бета-лизинов у изучаемого вида рыб, не совпадает с динамикой лизоцима и комплемента. Наиболее высокий показатель активности-бета-лизинов выявленный в зимнее время года, весной резко снижался и вновь увеличивался летом и осенью.

3. Активность гуморальных факторов естественного иммунитета гидробионтов иа водоёмов различного трофического статуса неодинакова. Максимальная активность лизоцима, бета-лизинов и комплемента отмечена у рыб, содержащихся в олиготрофном водоёме, а минимальная в эвтрофном.

4. Сравнительный анализ полученных данных показал, что ахти вность лизоцима, бета-лизинов и комплемента во внутренних органах радужной форели имеет разный уровень.при максимальных значе ниях в почках, селезенке и печени и минимальных в сердце,:жабрах

5. Изучение уровня активности факторов естественной резисте нтности на разных стадиях развития икры показало, что наибольшая их активность обнаружена в неоплодотворенной икре, а по мере развития снижается. ССщее содержание белка в икре изменяется в обратной последовательности, достигая максимального значения :ia стадии формирования кроветворных органов.

6, Вэктерицидный эффект у изученного вида рыб зависит от загрязненности водной среды и условий содержания в сидках. Обнаружено, что бактерицидный эффект кожи выше на сенную пилочку, чем на кишечную.

Цитотоксические свойства сыворотки крови у радумюй форели подвержена сезонным колебаниям. Наибольшей выраженностью они обладали в летне-осенний период, понижаясь к зиме и достигая минимальных значений весной.

V. Содержание общего белка у 3-х популяций радужной форели с возрастом повышается, что связано с половым созреванием рыб в этот период и с возрастанием в процессе онтогенеза функций рада органов. Низкое содержание общего белка отмечено в зимне-весеннлй период а возрастание его в летне-осенний сезон. Концентрация комплекса белков, адсорбирующихся на зимозане в сыво ротке крови и тканях относительно общего белка была максимальной у сеголеток радужной форели и достигала минимального значения в период половоэрелости, в трёхлетнем возрасте. Установлено, что альбуминовая фракция белков крови незначительно уменьшается с позрастом рыб, а глойулиновая фракция несколько уве личивается.

8. Содержание нуклеиновых кислот в органах и тканях рыб за висит от сезона года и возраста, и по мере роста и развития концентрация нуклеиновых кислот (ДНК и РНК) в органах лиыфо-идно-макрофьгальной систеш достоверно увеличивается.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Предложена модификация метода определения бета-лизинов в сыворотке крови радужной форели.

2. Докагана возможность определения факторов естественной резистентности (лиэоцим,бета~лизины, комплемент) при различных температурах инкубации проб без снижения информативности указанных показателей.

3. Полученные данные по иммунобиохимическим показателем ра дажной форели, выращенных в различных по трофности водоёмах мо гут быть использованы в учебном процессе и при издании учебной и монографической литературы.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАНИЯ ПО TEIIE ДИССЕРТАЦИИ

1. В.С,Ивановский, И.А.Болотников. Некоторые юаунобиохиыи ческие показатели радужной форели в зависимости от наличия в водоёме токсикантов. -Тез,докл. 5-й межгосуд. межвуэ. науч. -практ. конф. "Новые фармакологические средства в ветеринарии". Санкт-Петербург, 1993. -С.75.

2. В.С.Ивановский, И.А.Болотников. Активность лизоциыа и бета-лизинов сыворотки крови и тканей радужной форели в водоёмах различного трофического статуса /} Биологические ресурсы внутренних водоёмов и их использование / Сб.работ ПТУ. - Петро ваводск. - 1993. -С. 60-69.

3. В.С.Ивановский, И.А.Болотников. Уровень активности комплемента сыворотки крови и тканей пойкилотермных организмов (радужной форели). -Tes.докл. межрегион, научно-производ. совещания. "Проблемы ветеринарной профилактики в промышленном птицеводстве'.' -Петрозаводск-Санкт-Петербург, Ломоносов. -1994. -С. 34-35.