Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Гонадотропные и половые стероидные гормоны у крупного рогатого скота в различные периоды воспроизводительного цикла и их рецепция в желтом теле

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Гонадотропные и половые стероидные гормоны у крупного рогатого скота в различные периоды воспроизводительного цикла и их рецепция в желтом теле"

1 О \ г. о П

ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ФИЗИОЛОГИИ, БИОХИМИИ И ПИТАНИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ животных

На правах рукописи АЛИЕВ АДИЛ АЛИЕВИЧ

УДК 636.2.082.4:612.43:612.63

ГОНАДОТРОПНЫЕ И ПОЛОВЫЕ СТЕРОИДНЫЕ ГОРМОНЫ У КРУПНОЮ РОГАТОГО СКОТА В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ВОСПРОИЗВОДИТЕЛЬНОГО ЦИКЛА И ИХ РЕЦЕПЦИЯ В ЖЕЛТОМ ТЕЛЕ

03.00.13 ■» физиология человека и животных

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Боровск 1992

Работа внпшиана в лаборатория клаточво! юпюверш а трансплантации эмсриовой Всероссийского научво-воолвдоватвльского института фавиололш, Сиошда в питания сельскохоаяйствешшх животных.

Научные руководители! кандидат сельскохозяйственных наук, профессор Григорьев А.Д., кандидат биологических наук Рябых Б.П.

Официальные оппоненты» доктор биологически! наук,

заслужаюшй деятель неук РСФСР,профессор ШянсхкЗ О.Д.

доктор Сиологичесхнх наук, професоор Тверской Г.Б.

Ведущее предприятие - Санкт-ПэгврбургсхнЗ ватеранаряый институт.

Завдта состоится - Ы* ¿^-^ »А^ 19955 годе ва аасвдавви специализированного совета Д.020Л7.01 про Всероссийской научно-

исследовательском институте физиология, Овопааи в питания сельскохозяйственных животных.

Адрес! 249010, Боровск, Кадувсхая овлаоть, внюкш1 с.-х. вивотных.

С диссертацией ыохво оаваксшвться в библиотеке института. Автореферат разослан •//>• <Яс //1> - С^— 1992 года.

г

Учение секретарь специализированного оовета В.М.Дудан.

общая штгтнт работы,

¿ет?альгае*ь работа. Перевод животноводства на прошилонную оозоо? рэшго нвшнил условия оодерванжя штвотннх. Высокая концен-трацзя крупного рогатого скота на комплексах, преш^ущественно сто&швое оодерзание» ьгашшальныЗ контакт обслумвавдвго персонала о коровснз провали к снеийешо выхода телят а потребовала еоенх ютодов организации воспроизводства п регулирования репро-дртшшоЗ фщсщт аивотных. Для разработка новых гормональных кэтодоз рэгулировашш н пориаягаадаа Еоспроавведешя с.-х. пюот-тт. ЕзобходЕЗ глубока) внашм апдокрлншх ьиханнаыов регуляции ташЕого циш, ошюдотворэншз о периода становления берешннос-73, поторыЗ является репащш дяя дальнейпего развития плода, а тесэ т ндрупэшЗ, обуславлзвагщах разлпчше шожхш фушщва госпрспБзэдзшгл. Баз этого трудао понять сущность процасоа воо-щхшсодстм п цэлепалравяенш па управлять. К тому еэ различные парупзндл оплодотворения п становлэная бервнэнноста могут быть ^нзвйнн хш однш, а цэла рядом гормональных тшгзнаннй, что отавит пзрзд псслэдовотагеи слознуэ аадйчу как шаю более полного авали-па пх шшдая на то зли шыо функциональные проявления.

Щи Езученш прзчзш, ограшгшващих воспроизводство установлено, что ошюдотшряошсть после искусственного осекенешя составляет 020x0 953 /Полег р.».,1990/ н теоретически не является причиной, сдергаващеа репродуктивную способность швотных. Однако стальны-т от первого осеменения становится только около 62-64* кивотшх /Полянцев Н.И. 1984/. Выяснение причин аыбриовальнш: потерь и их предотвращение является одной из важнейших проблем в биологии воспроизведения. в связи с тем, что процессы воспроизведения находятся под строгим контролем эндокринной системы не лишено оснований

предположение, что среди причин, вызывающих эмбриональные потери у коров особое место могут ааниыать различные нарушения ендокрин-шх механизмов регуляции функция размножения. При атом, потерн плода после плацентации составляют в средней 7-8* /Икйрсэпп С.П., 1988/, а основная доля эмбриональных потерь приходится,по-видимому, па.более ранний период становления беременности.

Научение причин ембриональной смертности у коров показало, что одними на них могут сыть стойкие нарушения во взаимодействии гор-ионов, ответственных sa становление беременности и создание благоприятных условий для развития эмбриона в матке. В проведенных до настоящего временя исследованиях основное внимание уделялось иау-яению динамики гормонов, однако, в опытах на лабораторных животных установлено, что степень воздействия гормонов на репродуктивную

функцию в внатательной мере зависит от количества в состояния рецепторов К ЭТИМ гормонам /Richard« Л., 1976, Btoraehek F.,1907/

До последнего времени изучение регуляции функции воспроизведения у гошотшсг главный образом проводилооь путем определения динамика концентраций гормонов, в то время как другая сторона механизма эндокринной регуляции, а именно состояние и количество рецепторвых мест связывания гормонов, оставалась малоизученное. Исходя на »того возникает необходимость в исследовании гормон-роцепторшх механизмов регуляции процессов, происходящих в репродуктивной системе самок в ранние период беременности.

Даль и »ядачя исследования. Целью исследований являлось изучение динамики горыонально-рецепторных взаимоотношений в период охоты и в ранний период после осеменения в связи со становлением беременности.

Исходя из втого Сшш поставлены следующие задачи«

1. Провести сравнительный анализ дгнамики гонадотрошых гормонов

- лютеинизирувдего и фолли{улосттулирущвго - у коров в течение полового цикла и в ранний период беременности, до 25-го дня после плодотворного осеменения.

2. Изучить состоянинв рецепторов к гонадотронын гормонам В еэлт0м

теле телок п их динамику в течение полового цикла п в ранний период беременности.

3. Определить взашэсявязь кевду дин&микой содержания гонадо-

тропных п половых стероидных горюнов в крови телок в период охота и результативность» осеменения.

Научная новизна. Получены конкретные данные о количестве рецепторов гонадотрошых горюнов в аелтом теле и их динамике в течение полового цикла и в ранний период беременности. Впервые проведено комплексное изучение гормонального профиш а динамики рецепторов в период охоты; полового цикла и раннего периода беременности в связи с результативностью осеменения. Получены ноше данные о ашшии взаимоотношений между гонадотропными и половыми стероидными горюнами в период охоты у телок на результативность осеменения.

Практическое значение работа. Результаты работы могут быть использованы при разработке новых биотехнических методов регуляции воспроизводительной функции и сокращения эмбриональных потерь. А также они могут быть использованы в работе научно-исследовательских' институтов биологического направления и в курсе лекций по -физиологии и эндйкринологии в сельскохозяйственных вузах.

Дпробпдо po87«bïfiToa сссходшп^а. Уагорааш даосэртацзлга-ной работы долокэш на васадоши отдела рзгудяциз кэтеболазаа п продуктивности еивотных Всероссийского ваучно-последоватольского института физиологии, Спохтаз s питания о.-х. швотшх /Борове:: 19Э2.А

Пуйвшщая шигврашяэ. По иагараадЕм днеоэртацш опубликшш три статьи.

Объем и структура дцссортвцза. Дкссвртацлошшя работа ооотоas из слэдуодих разделов« введение, обзор литература, ообстЕЗПННэ исследования, Обсуждение, ваклтевнэ, вывода, практнчвекш прэд-лоаения. Работа наложена па страницах »азикогшеного токегга,

оодерзэи1 12 таблиц п 18 раоушов. Спкоок литература вдшчаот 88D источников, В *ГО£Л ЧЕСЯЭ 316 ЕЕООТрШШНХ.

Полоеатя, вавостаа» es вщщ»

1. Динамика концентрации гонадотропшх горионоз в крова коров в ранний период беременности ш имеет существенных отлпчиЗ от ша-логичного периода полового цикла.

2. Концентрация рецепторов лютеншгаирущего гормона в бэлтом теш в ранний период беременности остается на уровне сервданы люгэ-альной фазы полового цикле.

3. Динамика содержания гонадотроотых и половах стероидных горшков в крови в период охота имеют различный характер у телок, которыэ впоследствии прохолоставли или стали стельными в результате осеманэнЕя

i. ыаготшш ш мятода шхлщшт.

Для решения поставленных задач было проведено три опыта. О целью кзуч&ния динашки содержания JET и ФСГ в крови в период

готового цикла а после дущей беременности (до 25-го дня после оозкэненая) первый опыт проводили в условиях вивария института, еэ пятя клинически здоровых коровах черно-пестрой порода, в возрасте трвх-чвтырах лет, о продуктивностью по первой лактации сппэ четырех тысяч кг молока. Коршение тавотных осуществлялось в соответствия о ворнаш ВАСХШИ /1965/, с учетом уровня продук-

зшззш. Латные обеспечивались ояэдневным двухчасовым моционом О П2Г0ПЭ.

Пробн кровн брага из ярёиноЗ вены через катетер, начиная за дэпь до опщаешй охоты, о интервалом четыре часа до наступления охота, во прэмя охота а ег?,э сутки после ее окончания. О таким ае гштервалои кровь фала с 11-го ш 14-й дна цикла. Со второго по дзслтнЗ я о 16-го по 20-а дан цшш кровь брали с интервалом 8 часов. Црз наступления посладувдвй охота енвотных осеменяла рзтшмдерввк&яьши способом и продолжала взятие крови в такой ке сосгэдователыюстн как п в течение предадут го полового цикла до 25-го да после плодотворного осеизнения. Кровь центрифугировала п отделяла плазму, которая хранили при -20°С до момента ис-олэдовашм гормонов.

Второй опыт проводила с целью определения концентрации рецепторов яютеинизирущего гориона в еелтом тела я ее взаимосвязи с уровнем циркулирующего в крови ЛГ и интенсивностью секрацил прогестерона в течение полового цикла и в ранний период барменности.

Ошт проводили на базе спецхоза "Россия" Белгородского районе Белгородской области. Средняя молочная продуктивность коров по хозяйству за год составила Б,б тыс. литров. Опыт проводили на племенных телках черно-пестрой порода в возрасте 18 месяцев, живой массой 380-410 кг., содержание телок беспривязное. В ошт было

взято свиь групп телок» кмавзих спонтанную охоту, ш трз голова в каждой. Желтив тела от толок получала на Б-Е, 10-£ в 15-2 дни полового цикла (животных не осеменяла) а на 6-й, 10-8, 15-а в 25-й дан после осеменения. Еелтые тела получала хирургически« путей трансвагннально по разработанное вами штодаке. Непосредственно шрвд операцией у телок Орала кровь для определения концентрации ЛГ в прогестерона. Пробы лютевновой ткани сразу после вввлэчешш помещали в садкий азот, где хранили до иоиэнта исследования. Из крови получали плазму в хранили как указано вше.

Третий опыт проводила с целью выявления аависшоств ыэвду да-ваыикой содержания гонадотрошшх в соловых стеровданх гормонов в период охоты и результативностью осеменения. Опыт таю» проводался ва базе спецгоза "Россия". В ошт было взято 80 плеценшх телок случного возраста черно-пестрой порода гввой массой 330-410кг. Все поголовье разделили ва группы по 20 телок п по группам синхронизировали охоту синтетическим аналогом простагдавдана - встроенном. Через 24 часа посла введешя препарата начинали взятие кровз с интервалом 12 часов до обнаружения признаков охоты (стадаш воз- . бувдзння), после этого кровь брала с интервалом 6 ч до окончания охоты в затеи ег\в сутки с щггерв&пои 12ч. Стада возбуждения в фазу неподвижности охот определял» визуально каядаэ 4ч. Осешненне проводам в фазу неподвижности охоты двукратно о интервалом 12ч ректо-цервикалъным способом. Пробы крови брали вз яремной вены, отделяла-плазму в хранили до анализа при -20°0.

Концентрацию встрадаола в плазме крови определяла радаоиымуво-логическнм методом с поыощьв наборов вв евтя /франция/ после екст-ракции гормона даэгаювьт ефироы. Коэффициент вариации в пределах -опыта составил 78, меаду опытами - 12«.

Концентрацию прогестерона определяли прямым безэкстракционным

кетодоа наборами института бнооргашгческой химия ан бсср "стерон"-П12б1- согласно инструкции.

Концентрацию лвтеинизирущего гормона определяли в гетероло-гачной неравновесной системе двойных антител радиовшунологическо-го анализа о использованием реагентов, полученных от Национального Института Здоровья США» васокоочиаенного препарата овечьего ЛГ «пхмхж -вш-1-3» для получения меченного гормона» кроличьей анти-снвороткя против ЛГ овец (ШАЮВк-«п«~сиы> и стандарта ЛГ крупного рогатого скота (ши-им»4> для построения калибровочной кривой. В качества вторых антител использовала ослиную сыворотку против гач-ца-глобулшов кролика. Коэффициент варзащш составил в пределах опыта 43, !эпду опнташ 103.

Определение ®СГ проводшш радиоикмунологическим методом по сэн о.л. /1чвз/ с использованием полученных от него реагентов! ОСТ крупного рогатого скота (иБОА-ыш-срз), для радаоиодирования, отандарт <9СГ крупного рогатого скота (1«оа-ьрбн-вп для построения калибровочной кривоа и антисыворотка против р-субьеданицы ФСГ крупного рогатого скота (шпачгсн-

• Ейчение гонадотропных гормонов проводили радио актавнш изото- . пом 125х с помощью подогена.

Определение рецепторов к лютеинизирущему гормону в желтом теле телок проводили с помощью меченого 1231 очищенного пропарата хорионического гонадотрошша человека. Содержание бэлка в гомоге-иате тканей определяла по ивигу С1<к»>.

Определение свободных (неоккупированных эндогенным гормоном) ' рецепторов к ЛГ проводили го методу гммскмА /хпв/ в нашей модификации. Мембранную фракцию желтых тел инкубировали в присутствии насыщаицйй дозы меченого лиганда (1*:51 ХГч) в течение 16 ч при рй 7,2. Разделение.связавшейся с рецептором и свободной метки про-

водой центрифугированием при 22 ООО г е. 30 шш. Опрэделзнш на- " специфического связывания проводили пра добавлении в пробы 100-кратного избытка немеченого лиганда. Степень песпевдфзческого связывания составляла 7-95 от количества внесеннноа радаоактшао-ста, общее связывание в пробе (без добавления немеченого лиганда) составляло около 30-35%. Для определения спецЕфхчностп иэтодз проводили его оценку по связыванию метка в неспецифической ткшз и по конкуренции избытка немеченых ЛГ, вСГ, пролистина & ХГч о меченым ХГч за связывающие места в мембранах лютоеноеоЗ ткана. 1251 ХГч специфически связывался тканью желтого тела, ССГ к про-

лактин не влияли на степень связывания, в немеченые ЛГ п ХГч

конкурировали за связываание места мембранной фракции ткани.

Определение занятых (оккупированных ©ндогенным горшаоц) ра-цепторов к ЛГ проводила по методу впшхеу /хчаьг путем вышвашш ендогенно связанного гормона из мест связывания посредством инкубирования мембранной фракции келтого тела в кислом цитратнш буфере (рН 3,0), при этом показано, что обработанный цитратным буферш ЛГ не теряет своих иммунологических свойств и ыоевт быть опродэгэа обычным радаоишунологнчэскиы мэтодоы. Контроль степени вашвашя эндогенного ЛГ проводила путем вымывания предварительно свявоше-гося меченного ХГч. Степень вымывания составляла около 90-958.

РЕЗУЛЬТАТ ЕССУВДСЯШШ Н Ш СБСЛДЦШ.

£х!х Дядрмим! кртеядаш дах9Ш?йРШ9Г9 штш й шва шш в тшъ шшп шш д в радмй туюй ъъштчш,

Анализ результатов исследований показал, что динамика концентрации ЛГ в крови коров имела пульсирующий характер в оставалась на базалыюм уровне (0,8+0,3 нг/мл) в течение всей лютеальной Фазы

полового цикла, Небольшой пик секреции ЛГ (до 2,8+.!,О иг/ил) шяв~ лялоя на в-10-й день после охоты как в течение полового цикла, та« н н рнннмй период беременности.У *«осемененмык животных за 4 дня до п{1вдонуляторного пика ЛГ средняя концентрация гормона увеличивалась. Динамика концентрации ЛГ в этот период характеризовалась частыми пиками (до 2,3+0,1 нг/мл). Затем наблюдалась ироовулятор-ияя волна ЛГ (Рис.!.).

Гио.Т. Динамика концентрации ЛГ в крови коров в течении полового цикла и раннего период» беременности.

По оси ординат - концентрация ЛР в крови (нг/чл)

По оси абсцисс - дни цикла/б^»м«ннооти (день охотн/огздмонения - 0)

Обозначения: ■-----концентрации ЛГ в течение полсного цикла!

'----концентрами ЛГ в ранний период беременности.

После ЙЛОДОТВОрИОГО ОСвМЮТЙНИЯ ДИНвНУКЯ КОН'СНГрЭЦИИ гормона

«•рак гобличалась о? вь течение цикла ^о 17 дня

стадьностЕ, однако посла этого средняя вонцэвтрацш ЛГ в проза коров шела текденщш к снгаганшо относительно уровня в еяалогач-ный период полового цикла ва счет уменьшения ашлитуда пульсов в оставалась ва в том уровне бег существенных дошвевнЗ до 25 дня после плодотворного осе«6нения ( Рно.1.).

Д$ШШШ ЕШШШШ Ж В ШШ1 ВШ 1 Ш2Ж8

пшш в ш5ш иш2м

Дан&чика концентрации ССГ в крова коров таи» шела цульсиру-

вдмй характер, во о иеньсей аушнтудоЯ паков. Концентрация горьюпа волнообразно повышалась в теченш цикла. Пра втш отиэчево три водны ссг| первая шала вэсто ев 4-6-й дни шслэ окончания охота, ыак~ сшальпая концентрация горшаа прп етш составила 1,4+0,3 пг/ыл ща шошызльвоё концэнтращш гормона в спадах волн 0,¡>¿0,1 нгАлл. Вторая волна появлялась на Э-10-й день в достегала такой сз веда-чины. Наибольшую величину <1,8+р,Заг/ыл) шэла третья ваша секреции «СГ поднявшаяся ва 15-18-ё да цикла, поело чего концентрация (ЕСТ снижалась до базальвого уровня п ватеи происходил прэ-овудя торный выброс гордона, совпадавши по вреиеии с выбросом ЛГ (Рис.2.) .

Динамика концентрации ФСГ в крови в ранний период,беременности не имела существенных отличив от таковой в течение полового цикла. Однако волнообразного увеличения содержания гормона в крови коров на 15-18-й день после плодотворного осеменения не отмечено, концентрация гормона оставалась аа базальиом уровне (0,510,1 кг/мл) с некоторыми колебаниями до 25-го дня беременности. Отсутствие подъема уровня ССГ у стельных коров, видимо, объясняется сохраивг

О 5 Ю /5 го 25"

Рис.2. Дттшна концентрация ФСГ в крови торов в течении полового цикла п раннего периода беременности.

По оси орданат - концентрация ФСГ в крови (нг/мл)

По оси абсцисс - дни цикла/беременности (дань охоты/осеменения - О)

Обозначения* —;--концентрация ОСТ в половом цикле»

- - —концентрация ®СГ в ранний период 'лпеменности.

пиеи функционально активного желтого тела и наличием прогестеро-ронового блока, подавлящего секрещ» фсг.

При сравнений динамики концентрации ЛГ и ОТ* в крова в течение-полового цикла обращает на себя внимание несовпадение дан8Ш-ки изменения уровней того и другого гормона. Так, за два-три дня до появления предовуляторной волнн уровень ФСГ снижается, тогда как уровень ЛГ увеличивается (Рис. X и 2.). Этот факт дает основание предполагать, что выделение ЛГ И ФСГ у коров контролируются малозаЕИсшага друг-от друга механизмами. 1То~вкдаж>му, при достажа-

шз фолушнулаэ цакскшиьшго развитая сокроцш вСГ подавляется 88 счет выработка гаи нкгнбшш, тогда как содэрзшшш ЛГ наоборот уво-дичшзается ввиду более штевсазлоЗ сакрещш острадаолв в снятия прогесторшового блока.

дящнкй вйшнчнцщ юдоптрюй д 1 зш. шст

и тшш №,гшх9. ишт в в шшпЕ твш Шшзшши

Коацэнтрацвя как свободам, так н вваякя рецепторов к ЛГ в ¡ездаоа я-олз тахок бистро увэетшваэтся по шрэ развитая вэлтого тала-от 1,93^0,04 % 10-1%/цг яатешоюЁ тише ев Б-2 день цикла

да шсвд-ш (6,45*0,16 х 10-1%/цг жпвшоъо® ткани) на 10-1 день

в сохраняется на твкоа уровне до 1&-го да. Црз уотсшвданш бе-рвшвности концапграцдо рецепторов к ЯГ с салтш тадэ сохраняется ш> уровне, характерной да гшвосш) равшшэйся лэтошюео2 ткана в сэрэдаа лютеашюй фаза. Каа едщо ш табгщ I к 2 шлечостбо

рецвптор&ш шст, ашзтггх епдогешю связашшся горьюнои в рас-

счето на иг ткана еэлтого тела очень еэездеко (0,93-6,0х10~17У)

по сравшюш о шшиеотвш свободах рэцаоторов (1,93-€,0х10"1ВМ).

Концентрация их составит праэрно 0,8- 1,0§ от об^го количества рецепторов. Показано, что при увалвчевш количества как свободных, так в ваяя тех рецепторов ЛГ в Еалтои тела пх вф|яяность (сродство к гормону) не увеличивается, сохраняясь на. уровне 1,110,1 х Ю10ГХ во все исследованные периоды.

Коадентрацая ЛГ в крови телок всех груш на момент взятия кал-

тих тая находилась иа низком уровне (0,5-0,6 вг/ыл) и не имела су-австввнных различий по дням цикла или беременности. В то *е время

Теблзща г.

. Оодераанве рецепторов к ЛГ в аалтом теле телок в течение полового цикла.

ПОКАЗАТЕЛЬ ДНИ ЦИКЛА

б 10 IB

1. Количество

животных, гол. 3

2. Цасса авлтого

тела, г 3,510,4

3. Концентрация прогестерона в

крова, нг/вя 2,1Б±0,35

4. Концентрация

ЛГ в крови, нг/Мл 0,7±0,2

5. Количество свободны! рецепторов к ЛГ«

а) па иг лютвЕновой

теанн.х Ю"1БН 1,93±р,04

б) на сэлтоо тело,

X Ю~12а 6,77^0,14

6. Количество_ занятых рецепторов к ЛГ*

а) на мг лютеиновоЗ

ткани,х Ю~17И 0,93±0,16

б) на еелтое тело,

X Ю"14и 3,27£0,63

7. Константа

ассоциации, х Ю10!/-1 1,2210,12

5,1*0,2

в,8Б±0,1б' 0«7Б±0,15

6,4Б±0,1б

хх

XX

3

Б,4±0,1

8,35+0,16' 0,7810,13

6,0210,26

32,6710,25х* 32,4411,50

хх

3,2610,13 4,4710,59 16,5110,66** 23,5513,20 0,92+0,12 I.OOiO.IT

Примечание. достоверность к поедыдущему показателю: - Р< 0,Oft

хх- р<0,01

концентрация прогестерона быстро увеличивалась по мере становления велтого тела с 2,15 нг/мл не Б-а день цикла до 6,85 нг/мл на 10-8 день и находилась на максимальном уровне (8,35-9,75 нг/мл)

3

Тебхада 2.

Содержание рецепторов к ЛГ в зюлтоы геле телок в ранний период стельности

показатель

Д И й ЦИКЛА б 10 15 25

1. Количество

животных, гол. 3 3 3 3

2. Масса желтого

тела, г 4,1±0,2 Б,0±0Д Б,6±0,4 ■ 6,5^0,4

3. Концентрация прогестерона в

крови, нг/Ш! 3.60±0,?Б 6,8Б±Р,1БХ 9,25+0,75 9,7Б±1,3

4. Концентрация

ЛГ в крови, нг/ил 0,7Б±0,1 О,80^0,15 0,7Б±0,13 0,55+0,11 Б. Количество свободных рецепторов к ЛГ«

а) на мг лвтеиновой

ткани,х Ю-Щ 2,1Э±0,Ю 5,88+0,33 Х Б,7Б±0,65 6,44*0,10

б) на желтое тело, <х

X 10~121* 9,01^.0,14 24,44^1,82 28,44+2,60 29,22+1,20

6. Количество

занятых рецепторов к ЛГ» а) на мг лютеиновой

ткаяи.х Ю~17и 2,22£.0,Б1 3,33±0,23 4,37*0,59 6.0^0,40 0) на желтое тело,

X Ю~14Ы 9.23^2,60 16,6Б±1,00Х 24,55+6,ЮХ 27,61^3,70

7. Константа ": ассоциадаи.х ТО10«"1 1,17±0,25 I,16*0,22 0,96+0,12 1,05+0,11

Примечание. Достов-шость к поедыдушему показателю: х - р<0,0й,

ИС Р<0,01.

«а 15-й день полового цикла, сохраняясь в этих пределах на 25-й

день стельности. - ■ -Уровень концентрации ЛГ в плазме крови в лютеальну» фазу

цшв в&ходпся на самом ннвком уровне. Сродство к гормону (выраяенное как константа ассоциации горыон-рецепторного комплекса) существенно ва меняется на протяжении полового цикла и в изучаемый период беременности. Значит для усиления двтеотропной воддардасга я стимуляции секреции прогестерона должно увеличиваться количество рецепторов к ЛГ. Такое повышение количества рецепторов является главны» фактором в регуляции секреции прогестерона желтым толо;!. Поскольку офдее количество «отвальных рецепторов к ЛГ увеличивается без изменения константы ассоциации происходит соответствуйте увелачониэ количества занятых рецепторов ЛГ ( с 0,93+ 0,15 x10"I5M/kt ва в-а день до 4,Б±0,6 х10~15Ы/ыг на 15-й дань цикла). Пасса яотетаовоа ткана таю» возрастает ш мере развитая желтого тела. Повнзэша концентрации а облиго количества оккупированных рецепторов ЛГ ва аелтоэ тело шооко коррелировали с увеличением концентрации прогестерона s плазме (г*0,98), что предполагает /доозавншлю взашоотношення.

Общее палачество рецепторов ЛГ на гелтое тело Сало в пять раз шзе па 10 дань (32,7£Э,25 xI0~I2îl) да сравнению о 5-ым днем (6,8+0,16 хЮ"12Ы) полового цикла. Число оккупированных рецепторов также выросло примерно в пять раз ( о 3,27£0,53.xl0~14u до 16,51 +0,66 х 10"14Ы) ва те же дан. Соответственно, концентрация прогестерона в крова возросла в 3 раза (о 2,15 нг/мл на 5-й день до 6,85 нг/мл на IO-а день. Ютя на 10-й день цикла/беременности было оккупировано эндогенным гормоном только около 0,7* общего количества лютеальных рецепторов и этого, видимо, достаточно для стимуляции максимальной секреции стероидов. Регрессионный анализ данных таблицы I и 2 показал, что концентрация занятых рецепторов к ЛГ в желтом теле высоко коррелирует с концентрацией прогестерона в крови, тогда как между концентрацией прогестерона и уровнем

свободных рецепторов к ЛГ аашотшость была деньвеЗ (г=0,85). Уро-вань прогестерона не коррелирует с оодеряанием ЛГ в пера&зричес-кой крови в лютеальяую фазу (г«-0,24). Концентрация рецепторов к ЛГ в юлтои теле не связана корреляционной аависимостью с уровней ЛГ в крови. Концентрация как свободных, так и ваяятах рецепторов к ЛГ в ранний период беременности существенно не отличалась от таковой у нестельных етвотных в аналогичные дни полового цикла. Уровень рецепторов к ЛГ в шлтом теле телок сохранялся, высоким на 2&~й день стельности при атом наблюдалась тенденция в поваиеншо количества занятых ендогенным ЛГ рецепторов. Соответственно, у стельных телок уровень прогестерона был тага» выае.

Таким образом, быстрое накопление в оелтом теле числа рецепторов в ЛГ играет важную роль в стимуляции секреции прогестерона при наличии визких уровней лютешговрующего горшва в периферической крови. Причем, количество секретируемого прогестерона находится в прямое зависимости от количества занятых рецепторов с ЛГ в желтом теле. Однако, ввиду значительного преобладания свободных рецепторов к ЛГ, количество связывающих мест видаю не является лимитирующим звеном в механизме ендокринной регуляции секреции прогестерона лютешизирующим гормоном. Цри установлении беременности уровень рецепторов к ЛГ в желтом теле сохраняется в пределах характерных для полностью развитого желтого тела полового цикла. Константа ассоациации гормон-рецепторного комплекса сохраняется практически постоянной.

2д1А 2ШКЖШИ& Р9ЕР№0РЯйИ ш двддвдсрй ШМ ГШг

л&шгаж а шдоза етвжт шшш в крови що£ § шиш

®1 в результативностью рсеменетая.

Для определения взаимосвязи профиля гормонов с результативно-

стьэ ошэпэкпл техся прсзодгст сравшгхольЕыЗ апагзгз уроспя п диня-г.тзш горзопов в хюртад охота у еехвотннх варогуллвзпх п отакпх отелшаш посла осз1ЯЕопш1. Результата псаяедованй показали,, что концентрация лэгзкгизпрукгдго горг-кэна п крош толок досглгала ?!вк~

сгааяьпого значения в пэрглд оши. Пкк ЛГ всегда о-хл позгя начало проявления прззшкоз стадаз возбуздэшм п э болышнствэ случсов совпадал с оо ошвчашш ша начало« фазн езподвшшоотя охота (Табл.3.).

?сбгща 3.

Кояцоптращш гсшдотрошшх гормонов в крови стельшх а прохолостекэх телоз в пзр"од продиеотвуадей охота.

ПОКШТВШ Стодышэ те лет НЗстелыше телки

тол з ГОЛ %

I. Всего телок 44 100 23 100

2. Отвоаешэ пика ЛГ

к фазе шподвзаноста охот: 1 1

- оперекает 19 43,2 6 28,1

чао. 3,Б±0,9

- совпадает 10 36,4 7 30,4

- запаздавает 9 20,5 10 43,5

чао. 4,7±*,2 4,3±1,2

3. Величина пика ЛГ«

- менее Б нг/ыл 6 13,6 9 39,15

- от Б до 25 ш'Ли 10 22,7 Б 21,7

в среднем нг/мл 18,4±3,68 12,3+2,48

- вше 25 нг/мл 28 63,7 9 39,15

в среднем нг/нл 48,9±10,7 36,5£8,4

4. Величина пика ®СГ,нг/мл 3,6+1,0 2,7*0,8

Высота roma ЯГ у толок такса ииэла значите лышз колэбання, что» по-видгашу, OTpasEOT щдивадуальшэ особенности евдокрегавоа системы.

Для удобства анализа пэрегулявшх п отавзих отельными посла осеменения телок распределили на трз группы соответственно обнару-

итаемой шсоте пшса ЛГ» Б нг/ш, от Б до 25 нг/ыл в более 25 яг/мл. Оказалось, что пв числа тарэгулякшх телок 39,155 смола высоту пика ЛГ менее Б нг/мл, 21,73 - от Б до 25 иг/ил п 39,I5S isa-ли высоту пика шее 25 нг/ил. Тогда как ш числа телок, ставших стельными, высоту шка до S нгДш ю^згз 13,645, от В да 25 егДзл -22,7S И cbhs38 25 нг/мл - 63,7S.

Определенные различая в данепкэ ССГ огаэчэны шзду стольнн-мв н прохолостовзюш тедааан. Так, перше сиз ли болэо высокий уровень горцона в праовулятораш гшко (3,6±1,0 нг/ил), который совпадал по вреьанн с пшеои ЛГ п щшодвлся па начало спада шш шш волны естрадиола. У прохолосгевшах телок пак ССГ (2,6±0,8 нг/ця) бал нгагэ и »а нее четко Енрагон, в некоторых случаях он сиэл два наболь-

ша всплеска шш не выявлялся совсеы.

. В период охоты уровень прогестерона у всех швотных бил ш-

нимяльным и составлял от 0,1 до 0,8 нг/ил. Однако отмечено различие в уровне этого гормона во время охота у оплодотворившихся и перегулявших телок. Условно в качестве границы разделения групп была внАраяа концентрация прогестерона в крови 0,3 нг/мл. Для сравнения брали три временные точки» 12 часов до наступления пика ЛГ, во время пика ЛГ н 12 час после пика ЛГ (Рис.З.).

Как видно из данных, представленных на рисунке, телки, перегу-лякле посла осемянения, имели более высокий уровень прогестерона ъ кр^и все рассматриваемые периоды и в среднем за период охоты по срагиешт. с телк&хи, ставшми стельными. Так, концентрацию прогестерона за 12ч zi пика IT Maüíe 0,3 нг/мл имела 75й телок, став-

,00% во.

го.

706050. 40-

зо-го. ю-

_г__ _ | ^ ¿гл /7

-12 О

Рис.3. Распределение телок соответственно уровни пх^геотерош в крови в период охоты.

По оса абсцисс - время от момента преовудяторного пика ЛГ (ч.) По оси ординат - количество каютных ( % ).

ОЗоаннЧйнин: с - телки, стаьшие стельны.'«* после осгм»*и«*нин| п - телки, перегулявшие после осеменения. ЗмтрЯ-Юйачны* отолбцы-концеитреция прогестерон» в крови более 0,3 нг/ю; незйштрмхоийн-оте - концентрация прогестерона ненчв 0,3 нг/мл.

по сравнению с телкьш, ставшими стельными. Так, концентрацию прогестерона за 12ч до пика ЛГ м»явв 0,3 яг/мл имели 753 тел он, ччин-иих отельными после осеменения против 45% перегулявших телок; ни момент пика атот показатель составил 78 и Б6£ соответственно и ни Т2ч после гака ЛГ - 80 и 6ЯЗ& ставших сильными и шрегуляинаи ть~ лок соотввтотьенео. По-ьидшому, пондаеннлй уровень прогестерона в период охоты может оказывать неблнгафия гное нли.нние на онж>до-

ТВС.рЯнМОСТЬ ЯЙЦ«КЛ»Т0К или развитие ЗИГОТЫ.

Шаг острадаоха-Нр бал доеольео вродоеттЕьшсз и проявлялся, ¡гшьеэ пла совпадал по враиэшз о шкяупшшеи преовуляторвюС волей ЛГ (Тебл.4.).

Тгд.тгщз 4«

Коац0нтрацая есзрадпода-Г?^ пгЛш) с пэрщд охоты в кровл ч®шл, прохашстсшэх с оставлася отодыг^з посла освшввшш.

ПроявлзхЕа шаш естрадзмш.

Стадышэ теши. ез кш. 6

Щхшшкзтевзпэ №ш. Е, гол £

I. Всего телои 44 ГШ 23 100

2. До шсш ЛГ 16,4716,Б 20 45,4 8,413,8 10 43,6

3. Совпадает о

пикш ЛГ 16,413,7 22 60,1 11,213.3 ¡2 52,1

4. Иосхэ пика Ж* 7,011,0 2 4,5 0,0 I 4,3

Начало стадщ возбуздешя соотезтстеоваю рззкогау поееэш» кон-цетрацда астраднола-17р, фаза шподашностп совпадала по времени о падавшем уровня етого горсгава. Окачено, что во всех случаях, двеэ у телок без варагэшюй волш сстрадаола после овуляторного пика Ж1 происходило резкое снивешз концентрации стероида. Существенных различий между перегулявшими а ставшими.стельными телками по взаимоотношению пиков ЛГ в естрадиола не отмечено. Однако, как в в случае с гонадотротшами отмечено, что прохолостевшие телки имели более низкий уровень встрадаола по сравнению с телками, ставшими стельными. Такое наблюдение поддерживает утверждение о положительной роли встрадиола в индуцировании овуляции и связи

содзрзгшш! еотрэдама в прзовудягорзо'л фоллпкулэ о фушотшро-вгнпса овргзутогооя ез отого ®аяяшцглз пэлтого тояэ.

Таят обрагсу, у тэяоз, отагют отолшза и пэрэгулявзях поо-лэ осзкзшшя П.СЗЭТСЯ спрт^етпсп различия в горяэпапьпсм проЭз- • гэ в горюд прэ^эстзугг.оЯ охота» Ш онз Енрзяаэтся скорее пэ а разетшси зрзгэпз пастушпгпя того ша иного пкпз» а в пэпдокпзг-EOJ.I урогзгэ СОТфЗЩШ горазпов, ЧТО ГОСЭТ ПрЛЕОДЯТЬ к ыювулятор-Ш21 ТОЯОВНа ШШ32У, ПЭНОр^ЗЛтЯЗУ рСЗЕПТПЭ ООЦПТО КО вр01'?1П огсодотпорэпзл, кэдостаотшо рзаптапу пшоиу толу шп a слгккг» усгорошоау прохогщзшэ пСцзксгеш ш яЗцэводу а од праздевртип-п&ду плод? о {¿этау.

ПОВОДУ«,

1. йжашз сокрэщза Ж* вазе? цуаснрукшй характер. В паря-од шмювого цикла msso шделта тра уровня секреция» I) базаяь-енЗ уропзнь сзгфзцпя з лэгэалшуа ®ззу о нобольшм пиком (трехкратное увзлячэпгэ от срэдкого уровня > па a-10-il день цикла»

2) шоокоя шшштуда пульсов п, соответственно повышение среднего уровня горешз оа 3-4 да до охота а 3) преовуляторннй пак ЛГ (10-ти и богзе кратное умлпченш уровня горюна).

2. Динамика секрэщш ЛГ в раннШ период берттоостп до 17-го дня посла осокзнэшхя не ш.язт оущзствэшшх различий с таковым в аналогичный период полового цикла, а о 17-го я до 25-го дня - ЛГ определяется в небольшое концентрациях в вадэ пульсов малой амплитуды.

3. Динамика секреции 8СГ таете шее» пульсируадяй характер в

в период полового цикла шделяются четыре уровня секреции: I) пуль-сирущая секреция на бвзальном уровне в лвтеальну» фазу; 2) волнообразное повышение концентрации гормона ва 4-5-й, 9-10-й и ie-10-й

дни цикла (три волны); 3) понижение уровня секреции за 1-2 суток ДО ОХОТЫ Е 4) Преовряторян! пик гормона. В начальный период стельности (до 25 дня) динамике секреция ФСГ не имеет существенных отличий от динамики секреции гормона в лютеальную фазу полового цикла.

4. Рецепторы клеток еэлтого тела коров с высокой аффинностью связывают ХГч, ЛГ крупного рогатого скота и ЛГ овец.

5. Количество рецепторов к ЛГ аанятых вндогенннм гормоном в халтом теле телок составляет около 0,3-1,0« от общего количества связываицих мест. Количество как занятых, так н свободных рецепторов к ЛГ в желтом теле увеличивается по мере его развития.

6. Константа ассоциации рецепторов ЛГ в желтом теле остается постоянной о не изменяется на протяжении лютеалыюй стадии цикла шш первых 25 дней беременности. В период имплантации вмбриона обвдее количество рецепторов в селтом теле сохраняется на уровне, характерном для лзотеальвой ©азы полового цикла.

7. Количество рецепторов ЛГ не является лимитирующим фактором для поддержания желтого тела и стимуляции секреции прогестерона у крупного рогатого скота, о чем свидетельствует наличие избыточного количества свободных рецепторов к ЛГ в Евлтом теле во все периоды его развития.

8. Концентрация прогестерона в крови зависит от концентрации аанятых рецепторов к ЛГ (г«=0,98), но не зависит от содержания ЛГ в периферической крови в лютеальную фазу цикла.

Э. Пик встрадиола-17р появляется раньше или совпадает с максимальной концентрацией волш ЛГ и резко снижается после преовулятор-ного пика ЛГ.*

10. Динамика содержания гормонов в период охоты в крови телок, прохолостевшх посла первого осеменения отличвлась задержкой пика ЛГ относительно начала фазы неподвижности охоты, Солее низкой кон-

центрацией встрадаола-17р в преовуляторной волне, меньшей высотой пика гонадотропных гормонов и более высоким уровнем прогестерона в период охоты.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРВДЛОШШ.

1. Предлагаемый тренсвагшалышй способ биопсии яэлтого тела, сберегагаяй воспроизводительную способность подопытных гивотных,

а варианты методики определения свободных и занятых рецепторов ЛГ рекомендуются для использования в исследовательской работе.

2. Ыатериалы диссертации по изучении рецепторов ЯР в селтом теле коров могут Сыть использованы как базовые данные для оценки применения различных гонадотропннх стимуляторов.

3. Результаты, полученные в работе предлагается использовать в дальнейших исследованиях по проблеме ранней эмбриональной смертности н становления беременности у крупного рогатого скота.

4. Результаты исследований могут Сыть попользованы в учебном курсе по физиологии и эндокринологии сельскохозяйственных гивотных.

По тела диссертация спубяшзавш слэдувпне работа:

!. Эндокринология имплантации а распознавание беременности материнским организмов. // Сельскохозяйственная биология.- 1991.-N6.- С.107-120.

2. Динамика концентрации лютеинизируюцего горюна, прогестерона и эстрадиола-17р в крови коров в периода полового цикла а начальных стадий стельности. // Доклада ВАСЯШ.- 1991.-

0.-36-39. (в соавторстве с Петровым Г.Е. и Григорьевым A.A.).

3. Динамика концентрации гонадотропных и половых стероидных клонов в крови коров в течение голового цикла и в ранний период берменности. / Бюллетень ВНИИЕЗйП, Боровск.- 1992.- n.-2-З (103-10t). (в соавторстве с Петровым Г.Е.)