Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Гистологический и гистохимический анализ гаметогенеза и состояния гепатопанкреаса у Procambarus Clarkii при различных вариантах кормления

ВАК РФ 03.00.18, Гидробиология

Автореферат диссертации по теме "Гистологический и гистохимический анализ гаметогенеза и состояния гепатопанкреаса у Procambarus Clarkii при различных вариантах кормления"

.й'Ъъ-^

На правах рукописи

Пономарев Андрей Константинович

Гистологический и гистохимический анализ гаметогенкза и

состояния гепатопанкреаса у р110самваниб сьаякл при различных вариантах кормления

03.00.18 - Гидробиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва, 2003

Работа выполнена в Московской Государственной Технологической Академии (МГТА)

Научный руководитель доктор биологических наук,

профессор Симаков Ю.Г.

Официальные оппоненты

доктор биологических наук Микодина Е.В,

кандидат биологических наук, Полосьянц Т.Ю.

Ведущая организация - Всероссийский научно-исследовательский институт пресноводного рыбного хозяйства (ВНИИПРХ)

Защита состоится "ЛЬ " 2003 г. в часов, на заседании

дис;*гртр.:»я.т-" .... г* 7< 212.127.03 при Московской государственной -■->■-■■ -го 1 .-кг <ии (МГТА), по адресу: ■ I;, V1), г, Москва, , ^ Плотникове кая, д. 15

1 щссертацией можно ознам ¿я в библиотеке Московской государственной технол г: геской академии (МГТА)

Авторефе1 ат разослан "УУ' г.

Ученый секр арь диссертационно совета, кандидат биологичесюг ' _

^Николаева И.Ф.

Гистолога чес кий и гистохимический анализ гаметогенеза и состояния гепатопанкреаса у РгосатЬагиз ЫагкМ при различных вариантах

кормления.

Актуальносги» проблемы, Аквакультура асташш сталкивается с двумя очень существенными неблагоприятными факторами - с загрязнением рыбохозяйственных водоемов и с вспышками эпизоотических заболеваний, особенно «рачьей чумой». Это привело к резкому снижению производства продукции раков в Европе. Начиная с 50-х годов этот рынок стал заполняться переработанными продуктами из США, Значительное развитие получило производство (добыча и культивирование) прокамбарусов (РгосатЬагиз зр.). Основной объект американского производства - РгосатЬагоз с1агкп, обладает высокой скоростью роста.

Помимо этого, наличие значительных площадей для субтропической экстенсивной астакокульгуры и хорошее ее технологическое оснащение, позволили США увеличить ежегодные объемы Мирового производства красного рака на порядок, В среднегодовой ракопродукции (около 50 тыс, тонн/год) за последние годы камбарины в среднем составили 95 % (из них болотный или красный рак занимал 80 %), оставшиеся 5 % продукции давали все остальные виды культивируемых речных раков (Александрова, 1997, 1999).

Вспышки «рачьей чумы» привели к тому, что и в России произошло резкое снижение природных запасов раков. В последние 50 лет наша страна утратила роль поставщика раков в Западную Европу (Полосьянц 2002). Поэтому вопросы культивирования раков приобретают особую актуальность.

По данным астакологов, занимающихся исследованиями процессов культивирования раков, разведение американских раков рода РгосашЬагиэ является более выгодным по сравнению е культивированием аборигенных видов, например, астацин. В настоящий момент известен ряд оригинальных технологий выращивания американских раков в искусственных установках (Александрова, 1999; Киселев, 1995; Черкашина, 1991, Уитон, 1985; Цукерзис 1989).

Однако основные усилия в разрабатываемых технологиях направлены на техническое обеспечение процесса культивирования раков.

Другое направление - биологическое (интенсификация прироста биомассы культивируемых объектов, а также стимуляция их размножения) разрабатывается в меньшей степени, хотя оно и является определяющим в при воспроизводстве раков.

Цели и задачи исследования. Цель работы - исследование воздействия

различных кормов и крряттшесйГтпгтжетШШёОГростояние гепатопанкреаса,

поиск наиболее эф< )ективны^"тетий№гивных кормов, стимулирующих фока научйой литеоатуры

ЛЛЖ-

созревание гонад у красного болотного рака при индивидуальном культи вировании.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Провести сравнительный анализ процессов гаметогенеза и роста при групповом и индивидуальном содержании раков в культивационных установках.

2. Изучить влияние различных вариантов кормления на темп роста раков.

3. Изучить гистологические и гистохимические изменения в гепатопанкреасе красного болотного рака при использовании различных вариантов кормов и определить наиболее эффективные корма, способствующие секреторной стимуляции гепатопанкреаса.

4. Изучить процессы оогенеза и сперматогенеза при различных вариантах кормления РгосатЬагиз с1агкп и выявить наиболее оптимальные корма, ускоряющие созревание гонад.

5. На основе полученных данных выбрать наиболее оптимальные корма, способствующие быстрому созреванию гонад РгосашЬагиз с1агкн.

Научная новизна:

впервые исследуется оогенез и сперматогенез у РгосатЬаго5 с1агкн при культивировании на живых кормах и комбикормах на гистологическом и гистохимическом уровне;

впервые рассматривается влияние различных кормов на процессы секреции и морфологические показатели в гепатопанкреасе красного болотного рака; впервые изучена динамика роста и созревания красного болотного рака при культивировании в индивидуальных ячейках на различньк кормах.

Практическое значение: предложено содержание маточных стал американских раков в индивидуальных прозрачных ячейках общих емкостей, повышающие интенсивность их роста и созревания за счет исключения конкуренции и каннибализма среди особей и позволяющих сохранить количество особей, изначально посаженных в установку;

предложена рецептура кормления, основанная на результатах гистологического и гистохимического анализа состояния гепатопанкреаса и гаметогенеза. Использование данных исследований позволяет ускорить процесс созревания гонад.

Апробация. Результаты исследований были доложены на научной конференции «Водные экосистемы и организмы» МГУ, 2000, на расширенных коллоквиумах кафедры биоэкологи и ихтиологии МГТА, 2001 г. и 2002 г.

Публикации. По теме диссертации автором опубликовано 5 научных работ.

Объем и структура работы. Диссертация состоит из 1Л£> страниц машинописного текста, включая 3 таблицы и 18 рисунков.

Работа включает следующие разделы: введение, пять глав, заключение, выводы и список литературы, включающий 114 работ, из которых 57 -иностранных авторов.

Содержание работы

Глава 1. Влияние условий культивирования камбарин на гистологические изменения в их репродуктивной и пищеварительной системе (литературный обзор)

По мнению одних авторов созревание гонад у раков напрямую зависти от их размера, другие авторы считают, что скорость гаметогенеза зависит от скорости линек, по мнению третьих исследователей, важную роль при развитии гонад играет геяатопанкреас, так как - он непосредственно ответственен за процесс переваривания той или иной пищи, но так же воздействует на репродуктивную систему через гормональный обмен (Нае(пег, 1993; 1кес1а, 1992; 5раагдагеп,1998).

Из литературных данных известно, что семенник у рода РгосатЬагиз представляет собой ацинарную железу. В каждом аиннусе видны три доли с различными стадиями сперматогенеза. На периферии сперматогонии, следующим слоем расположены хорошо различимые сперматоцшы 1 и 2-го порядков и различные стадии их делений, наконец, а за ними отмечается наличие либо сперматид, либо зрелых сперматозоидов. Сперматозоиды атипичны, заключены в пито плазматическую массу и у них нет отчетливых границ (Рузен-Ранге, 1980; Костомарова и др., 1982; Данилова, 1993).

В отличие от оогенеза сперматогенез начинается в более раннем возрасте и не так синхронизирован как овогенез. Процесс синхронизации отмечается только в отдельных ацинусах, в которых клоны половых клеток четко ограничены в дольках (Рузен-Ранге, 1980).

У красного болотного рака (РгосатЬагиз с!агкн) развивающиеся ооциты классифицируются 7-ю стадиями по их морфологии;

I) оогонии, 2) незрелые ооциты, 3) авителлогенные ооциты, 4 - 6)ооциты в раннем, среднем, и позднем вителлогенезе, 7) и резорбирующиеся ооциты (после вителлогенсза).

Секреторная жидкость гепато панкреаса рака подобно желчи может эмульгировать жиры, пептонизнровать белки и переводить гликоген в сахар. Помимо этого клетки пищеварительной железы участвуют в лише варении.

захватывая мелкие частицы пищи (фагацитоз), Гепатопанкреас можно рассматривать как тест-орган, по которому можно судить о полноте и полноценности питания. Название "печень" у раков условное, так как ее клетки вырабатывают секрет, характерный как для печени, так и для поджелудочной железы высших позвоночных животных. По этой причине печень раков можно считать гепатопанкреасом, по аналогии с гепатопанкреасом рыб. В последнее время у высших раков найдена взаимосвязь между развитием яичника и гепатопанкреаса.

Изучено изменение содержания воды в гепатопанкреасе и яичнике креветки Crangon crangon (L.) в зависимости от массы и развития гонад. Яичники и гепатопанкреас претерпевают циклические, прогрессивные и регрессивные изменение веса и объема со сдвигом по фазе в развитии этих органов (Haefher et all., 1993), Именно с этой целью в данной работе проведено гистологическое исследование гепатопанкреаса красного болотного раки при выращивании на различных кормах.

Глава 2. Материал и методика исследований

Для исследований был взят вид: РгосашЬагиз с1агкн. Первоначально были взяты молодые особи в возрасте 2 месяца, при средней длине 2 см (от начала антенул до конца тельсона).

В работе исследовалось воздействие на созревание гонад и состояние гепатопанкреаса следующих кормов:

• осетровый комбикорм (МЭ 49/12) - как корм с оптимально сбалансированными компонентами (Полосьянц, 2002);

• хирономкды - как естественный кормовой объект для гндробионтов, в том числе и раков. В нашем случае представляющий интерес по содержанию гормона - экдизона;

• энхитреи - хотя к не являющиеся естественной пищей для раков, однако богатый жирами и необходимый для усвоения жирорастворимых компонентов прокомбарусами;

• спирулина - как источник компонентов растительного происхождения, в том числе белка и пигментов, необходимых для кальциевого обмена, но с повышенным содержанием нуклеиновых кислот;

• также различные комбинации между ними.

Культивирование раков осуществлялось в лабораторных условиях, в аквариумах емкостью 20 литров. Для культивирования использовалась водопроводная отстоянная вода и применялась дополнительная аэрация. В аквариумах поддерживалась концентрация кислорода 8 мг/л. Температура воды в

аквариумах составляла 24 +1 °С на протяжении всего эксперимента. Световой режим в аквариальной составлял 14 часов свет- 10 часов темнота.

Раки помещались по 6 штук в каждый аквариум. Для избежания каннибализма, и для равномерного распределения корма, каждый рак был посажен в двухлитровую пластиковую емкость, соответствующую высоте аквариума. Для нормального удаления метаболитов, в индивидуальных емкостях перфорировались отверстия диаметром 5 мм, которые занимали половину всей поверхности индивидуальной емкости. Общая продолжительность опытов для каждой группы составила 90 дней.

Для получения достоверных результатов опыты проводились в две серии: январь-март 2002 г, и май-июль 2002 г. Повторность опытов - трехкратная.

Прирост по длине тела измерялся еженедельно. Проводился визуальный контроль поедаемое™ корма и оценка общего состояния особей.

Кормление осуществлялось два раза в сутки, в 11 и 18часов.

В обшей сложности были поставлены следующие варианты кормления:

1. Кормление раков экхитреями. Энхитрей (Enchytraeus albicans) выращивали на манной каше с добавлением моркови и картофеля.

2, Раки получали в качестве корма личинок хирономия. В основном использовали Chironomus plumosus.

5. Кормление раков сухой спирулиной. Для кормления сухой спирулиной, использовались таблетки по 0,31 г, фармацевтического препарата «фитосплат». Содержание спирулины в одной таблетке составляла 0,298 г, вспомогательных веществ - 0,012 г.

4. Кормление раков спирулиной и энхитреями. В 11 часов утра ракам давалась спи рули на, а в 18 часов провозили кормление энхитреями.

5. Следующий вариант опыта характеризовался также смешанным кормлением. В те же часы выдавалась спирулина, но вместо энхитрей использовались личинки хирономид.

6. Раки получали комбикорма для осетровых рыб (продукционный MS 49/12). Кормление раков комбикормом MS 49/12 можно считать исходным экспериментом в виду стабильности компонентов корма (Полосьяни, 2002).

7. В данном варианте опыта раков содержали на комбикорме для аквариумных рыб «Sera Premium», изготовленном в Германии, В состав данного комбикорма входило 20 % спирулины.

8. Кормление раков комбикормом (продукционный MS 49/12) при групповом содержании, В этом варианте условия содержания соответствовали условиям содержания раков в других вариантах. Но раки содержались не в перфорированных пластиковых емкостях, а совместно. В качестве имитации нор использовались обрезки пластмассовых труб.

Для количественной оценки последствий воздействия различных видов кормов на гаметогенез и состояние гепатопанкреаса проводилась микрометрия на гистологических срезах. В качестве основных показателей измерялись; изменение диаметра ооцитов и отклонения в развитии при различных формах кормления раков.

Статистическая обработка полученных данных на определение достоверности разности средних проводилась по критерию Стьюлента с использованием компьютерной программы МаЛса<12000.

Для фотографирования срезов гонад раков и гепатопанкреаса использовалась цифровая камера N ¡коп 800 с ми крофотонасадкой.

Перечень экспериментов и распределение объектов исследования по каждому из них представлены на таблице I.

Таблица 1.

Объекты исследований и распределение экспериментального материала

Объект ж следован нй Кол-во ракой, шт. Вна эксперимента Количество препаратов

Procambarus ciarkii 36 Исследование гистологических и гистохимических особенностей гепатопанкреаса и гонад раков при кормлении энхитреями 36 гистологических, гистохимичес к их препаратов

36 Гистологические и гистохимические изменения в гепагопанкреасе и в гонадах при кормлении личинками хнрономид 34 гистологических, гистохимических препаратов

36 Гистологическая структура гонад и гепатопанкреаса при кормлении раков спирулнной 35 гистологических, гистохимических препаратов

36 Тканевые изменения в гонадах и гепатопанкреасе рака при смешанном кормлении энхитреями и спи рул иной 36 гистологических, гистохимических препаратов

36 Гистологическая структура гонад » гепатопанкреаса раков при кормлении личинками хирономидами и спнрулнной 36 гистологических, гистохимических препаратов

36 Гистология гепатопанкреаса и гонад раков при кормлении комбикормом (MS 49/12), предназначенным для осетровых 33 гистологических, гистохимических препаратов

36 Гистология гепатопанкреаса и гонад раков при кормлении комбикормом "Sera Premium", содержащим 20 % спирулнны, предназначенным для рыб 36 гистологических, гистохим нческих препаратов

36 Гистология гепатопанкреаса и гонад при групповом содержании раков 32 гистологических препаратов

Итого; 288 278

3. Результаты исследований

3.1. Влияние различных вариантов кормления на рост рака РгосатЬагиз с1агки

Средняя длина раков после завершения опытов по двум сериям в различных

вариантах представлена на рис 1.

варианты кормления

Рис, 1, Длина раков при различных вариантах кормления (при завершении

эксперимента).

Содержание раков в индивидуальных ячейках общих емкостей ускоряет рост раков. Прирост раков при содержании в отдельных емкостях и кормлении осетровым комбикормом (М5 49/12) больше на 15 % чем, при групповом содержании на этом же комбикорме.

Чистая спирулина негативно влияет на рост раков. В этом варианте средняя длина раков была наименьшей и составила 4,7 см, что на 30 % меньше, чем, при кормлении раков комбикормом.

Кормление раков хирономидами не стимулирует рост раков и полученные данные близки к контролю.

Кормление энхитреями также незначительно ускоряет рост раков.

Использование спирулины в качестве добавки к кормам ускоряет процесс роста раков. Так, наибольшую длину раки достигли при кормлении энхитреями со спирулиной и комбикормом с содержанием 20% спирулины. Длина раков при кормлении энхитреями со спирулиной на 26% больше чем в контроле, а при кормлении комбикормом, содержащим 20 % спирулины, больше контрольных на 15 %.

Добавка спирулины к энхитреям увеличивает прирост раков на 17 % в

сравнении с кормлением одними энхитреями.

Достоверность различия длины раков при кормлении различными кормами и при групповом содержании по отношению к контрольной группе, оценивалась методом Стьюдента: двухвыборочным 1-тесгом с различными дисперсиями. Вероятность совпадений выборок Р (Т <-1) приведены в таблице 2.

Таблица 1.

Вероятность совпадений выборок при различных вариантах кормления

Вариант Среднее Дисперсия P(T<=t)

Контроль (комбикорм) 6,7 0,08 -

Комбикорм (массовое содержание) 5,8 0,006 0,0002

Энхитреи со спирулиной 8,5 0,09 0,000001

Хнрономнаы со спирулиной 7,2 0,07 0,03

Комбикорм «Sera Premium» 7,7 0,07 0,0001

X кроном иды 6,6 0,04 0,2

Энхитреи 7,2 0,1 0,03

Спирулина 4,7 0,2 0,00001

3,2, Гистологическое строение печени красного болотного рака при различных вариантах кормления

При кормлении раков комбикормом для осетровых рыб не отмечается отклонений в гистологическом строении гепатопанкреаса. В пищеварительной железе наблюдается умеренная секреция, о которой можно судить по количеству вакуолей в эпителии канальцев. На гистохимических препаратах видно равномерное распределение гликопротеидов и гликогена (рис, 3).

Рис, 3, Срез гепетопанкреаса при Рис. 4, Срез гепатопанкреаса при

кормлении комбикормом (10x15). кормлении хирономнзами (10x15).

При групповом содержании и кормлении раков комбикормом (М5 49/12) высота эпителия трубочек гепатопанкреаса соответствует норме, однако секреция в клетках гепато панкреаса несколько снижена, по сравнению с секрецией, наблюдаемой при кормлении раков комбикормом.

При кормлении энхитреями без каких либо добавок, раки обладают умеренной секрецией в клетках пищеварительной железы, что соответствует норме.

При кормлении раков личинками хирономка пищеварительная железа приобретает зеленоватую окраску. Секреция в клетках гепатопанкреаса несколько снижена по сравнению с секрецией, наблюдаемой при кормлении раков комбикормом (рис. 4), что сказывается и на морфологии трубочек гепатопанкреаса (на препаратах отмечаются спадшие стенки эпителия трубочек гепатопанкреаса).

Кормление раков только одной спирулиной оказывает отрицательное влияние на состояние пищеварительной железы, В некоторых зонах отмечается отсутствие секреции гранул фермента, а стенки трубочек гепатопанкреаса резко спадшие (рис. 5а). Высота выстилающего их эпителия значительно уменьшилась.

В этой же серии опытов можно найти зоны в гепатопанкреасе рака, где видка резкая граница перехода от деградирующих участков печеночных трубочек к гиперсекреции (рис. 56).

а) б)

Рис. 5. Срез гепатопанкреаса при кормлении спирулиной (8x15),

Следующий вариант опыта - кормление раков двумя визами кормов -спирулиной и энхитреями.

При исследовании гистологических препаратов в указанном варианте можно отметить благоприятное воздействие на гепатопанкреас красных болотных раков указанного сочетания кормов.

Эпителий трубочек гепатопанкреаса высокий и содержит множество вакуолей с секретом (рис. б). Все это указывает на активную ферментативную деятельность печени.

Рис. 6. Срез гепатопанкреаса при кормлении энхитреями и спирулиной (10x15).

При кормлении раков личинками хирономид и спи рул иной наблюдаются морфологические сдвиги структуры эпителия канальцев гепатопанкреаса в сторону улучшения, в сравнении с использованием каждого из этих кормов в отдельности. Морфология печеночных трубочек близка к таковой в контрольной группе.

В последнем варианте опытов ракам давался комбикорм для рыб «Sera Premium». Исследование гистологических препаратов показало, что добавление спирулины к комбикорму для рыб улучшает его свойства, так как на микропрепаратах отмечается усиление секреции вакуолей в эпителии гепатопанкреаса. Структура канальцев не нарушена, печеночный эпителий увеличивается в высоту по сравнению с эпителием у раков, контрольной группы.

Степень образования вакуолей с ферментами в гепатопанкреасе при различных вариантах кормления приведена на рис. 7.

В*ришты норитния

Рис. 7, Степень образования вакуолей с ферментами в гепатопанкреасе, при различных вариантах кормления.

3.3. Исследования сперматогенеза у красного болотного рака при использовании различных кормов

В группе раков, выращенных на комбикормах для осетровых рыб, отмечается 5 стадий сперматогенеза.

В ацинусах можно встретить спермэтоциты на стадиях редукционного и эквационного деления, а также расхождение клеток и выстилание периферических стенок ацинусов (рис. 8).

Указанные изменения в ацинусах соответствуют стадиям развития и течению сперматогенеза без отклонений, выявленных в процессе сперматогенеза у десятиногих раков другими исследователями (Chow et all., 1991).

Рис. 8. Срез семенника при Рис. 9. Срез семенника при

кормлении раков комбикормом (МЭ кормлении энхитреями со

49/12) (40x15). спирулиной (40x15).

При кормлении раков энхитреями и энхитреями со спирулиной (рис. 9) созревание клеток в ацинусах усиливается. Во многих цистах вианы делящиеся сперматоциты первого н второго порядка. Много ацинусов наполнено слерматндамн.

В некоторых цистах происходит эквационное деление. Гистохимическая окраска на гликопротенды, указывает на высокое содержание гликогена в стволовых клетках и в растущих сперматоцитах 1-го порядка.

При кормлении исследуемых особей в течение 3-х месяцев энхитреями и смесью спирулины с энхитреями не отмечаются нарушения митотнческой активности при размножении сперматогоний и не обнаруживаются нарушения редукционного и эквационного делений.

Совершенно иная картина наблюдается при кормлении раков только одной спирулиной (рис. 10).

В семенниках можно отметить ацинусы со всеми стадиями сперматогенеза. Однако наполнение цист семенника созревающими клетками неполное, и видны ацинусы в большей части которых отмечаются начальные стадии размножения

шерматогоннй.

Рис. 10. Срез семенника при кормлении спирулнной (40x15).

Кормление раков хирономидами и комплексное кормление хирономидами со спирулиной не приводит к стимуляции процессов сперматогенеза и действует на процессы предзародышевого развития сходно с вариантом, где использовался комбикорм. Гистохимическая окраска показывает, что количество мукополисахаридов н гликогена в клетках ацинусов несколько понижено, что говорит о неблагоприятном воздействии на углеводный обмен при сперматогенезе.

В следующем варианте раки получали комбикорма для рыб, содержащие 20 % спирулнны. В этом случае, корм, содержащий спирулину, благоприятно влияет на процессы сперматогенеза. В семенниках виден активный рост сперм атоцитов 1-го и 2-го порядков, отмечена стимуляция делений созревания. Процессы спермиогенеза также активизированы.

У раков при групповом содержании в семенных дольках отмечается большее количество сперм атоцитов на стадиях редукционного деления, созревание семенников на одну стадию отстает по сравнению с контрольными особями при индивидуальном содержании. Максимальное количество клеток на стадии сперматогенеза при различных вариантах кормления раков приведены на рис. 11.

Вариант кормлйния

Рис.11. Максимальное количество клеток сперматогенеза при различных вариантах кормления.

3.4. Цитологические изменения в ооцитах красного болотного рака при использовании различных кормов

В контрольной группе раков получавших осетровый комбикорм, отмечаются ооциты 1-го порядка на стадии трофоплазматического роста. В ооцитах идет накопление мелкозернистых гранул желтка (рис. 12). Гистохимическая окраска препаратов ШИК- реакцией, показывает умеренное накопление гликопротеидов в ооцитах.

1 = - V

Г. .

Рис, 12, Срез яичника при кормлении комбикормом М5 49/12 (10x15).

Рис. 13, Срез яичника при кормлении энхитреями (10x15).

При кормлении раков энхитреями основной особенностью цитоплазмы ооиитов 1-го порядка можно считать наличие крупных гранул желтка. Ооциты в яичнике красных болотных раков выращенных при кормлении энхитреями представлены на рис. 13. Выявлено более интенсивное накопление гликопротеидов, чем в контроле.

При кормлении раков энхитреями и спирулиной, также отмечается наличие крупных гранул желтка. Ооциты в этом варианте, были самыми большими и ядро в них было сдвинуто к анимальному полюсу яйцеклетки, что указывает на созревание ооцита 1-го порядка и подготовку их к редукционному делению (рис. Н).

Рис. 14. Срез яичника при кормлении энхитрями и спирулиной (20x10),

Кормление раков хирономидами, не стимулирует процессы оогенеза, В ооцитач 1-го порядка идет синтез мелкозернистого желтка, как и в контрольной группе.

Совершенно другая картина наблюдается при кормлении раков спирулиной. Кормление раков спирулиной приводит к угнетению процессов оогенеза. Ооциты отстают в росте и в 1,5 раза меньше, чем при кормление раков комбикормом.

Гистохимические методы выявления гликогена и мукополисахаридов показывают (по степени окраски), что процессы накопления углеводного желтка задерживаются по сравнению с особями, выращенными на комбикорме. Гистологическая картина состояния ооцитов у раков, выращенных на спирулине, приставлена на рис, 15.

Рис. 15. Срез яичника при кормлении спирулиной (10x15).

Использование в качестве корма комбикорма «Sera Premium» положительно влияет на оогенез раков. В этом случае ооциты 1-го порядка накапливают мелкозернистые гранулы желтка, как и в контрольной группе, но они на 25 % больше.

Влияние совместного кормления спирулиной с личинками хнрономкц на оогенез, сходно с кормлением раков комбикормом.

При групповом содержании опытных раков ооциты за три месяца эксперимента отстают от созревания ооцитов при индивидуальном содержании. Гистохимическая окраска показывает понижение углеводного обмена в цитоплазме ооцитов, по отношению к контролю. Средний диаметр ооцитов в этом варианте на 20 % меньше контрольных.

Диаметр ооцитов при различных вариантах кормления раков представлены на рис. 16.

800 700 600 500 400 300 200 100 О

1—1

'i.

к: J: :

.к Ш л.7; ■ S? ii ■У-' ; . Л к

_ ; .'■Л '.:. S.

« _ -X :Г '

5

6

î

lî 4

s

H 31 fl

IS

варианты кормления

Рис 16. Диаметр ооцитов при различных вариантах кормления.

Глава 4. Обсуждение результатов

Результаты воздействия различных вариантов кормления на рост, гаметогенез и состояние гепатопанкреаса при завершении эксперимента (табл. 3).

Таблица 3.

Результаты воздействия различных вариантов кормления на рост, гаметогенез и

гепатопанкреас раков

Форма кормлении Длина раков, см Сперматогенез Оогенез Гепатопанкреас

Основная стадия сперматогенеза Желточные зерна Диаметр ООЦИТОВ, м км Вакуолизация ферментов в гепатопанкреасе

Комбикорм MS 49/12 (контроль) 6,7 Спермзтошты 2-ого порядка Мелкозернистые 370 Умеренная

Комбикорм MS 49/12 (групповое содержание) 5,г Сперматоцнты 1-ого порядка Мелкозернистые 296 Умеренная

Спирудина 4,7 Слерматогонии Мелкозернистые 254 Низкая

Хирономиды 6,5 Сперматоцнты 1-ого и 2-ого порядка Мелкозернистые 352 Пониженная

Эикнтрен 7,2 Слерматиды Круп нозернистые 664 Высокая

Хирономиды СО СП и рул н мой 7,2 Сперматоцнты 2-ого порядка Мелкозернистые m Умеренная

Комбикорм «Sera Premium» 7,7 Сперматоцнты 2-ого порядка и сперматнды Мелкозернистые 481 Высокая

Энхитреи со спирулиной 8,4 Сперматиды Крупнозернистые 756 Высокая

Анализ результатов показал, что лучшим репродуктивным кормом для красных болотных раков оказываются олигохеты-энхитреи, как в чистом виде, так и в смеси со спирулиной. Использование в качестве живых кормов энхитрей при культивировании красных болотных раков лучше отражается на их тканевом строении и на репродуктивной функции, чем кормление хирономидами, или рыбой, которые часто используются при искусственном выращивании камбарид. Вероятно, что энхитреи содержат органические соединения, которые ускоряют оогенез раков, а нами в этом случае отмечено и ускорение роста ооиитов под влиянием этих биологически активных веществ. Индийским исследователям удалось выделить из олигохет Pontodrilus bermudensis два органических соединения, которые ускоряют овогенез и откладывание яиц раками. К сожалению, разделив эти два вещества, обладающие стимулирующим свойством, они не установили их химический состав (Maheswarudu et all., ] 995).

Рост раков тесно связан с линькой. Размеры рака увеличиваются сразу после сброса карапакса до затвердевания нового. По видимому, при кормлении раков олигохетами снижается уровень гормона, ингибирующего линьку. Подобный гормон у красного болотного рака находится в синусной железе и его содержание колеблется в зависимости от концентрации экдистероида в гемолимфе (Nakatsuji et all., 1999). Возможно, при кормлении раков хирономидами, которые сами содержат экдистерон, концентрация этого гормона в гемолимфе повышается, что тормозит в свою очередь линьку. В отличие от хирономид энхитреи не содержат в своих тканях высоких концентраций экдистероидов и поэтому не сдерживают линьку раков.

Особый интерес вызывает использование в качестве корма синезезеленой водоросли Spirulina platensis. В наших опытах биологически активные вещества из спирулины попадали к ракам как при кормлении чистой спирулиной, так и при использовании спирулины как добавочного корма. Благодаря этому решается важная научно-практическая задача, а именно снижение содержания нуклеиновых кислот на единицу кормовой продукции. Повышенное содержание нуклеиновых кислот в корме может привести к нарушению метаболизма и даже к возникновению злокачественных опухолей. Высшие растения содержал1 1 - 2 % нуклеиновых кислот, одноклеточные водоросли и простейшие - 4 %, дрожжи - 10 %, а в спирулине до 6 %, В корме для позвоночных животных оптимальным следует считать содержание иуклеиновьсх кислот 1 - 2 %.

В нашем случае лучшие результаты получены тогда, когда кормление осуществлялось не чистой слнрулнной, а совместно с использованием других кормов, например энхитрей или комбикорма для рыб. При подобных условиях красным болотным ракам поступает меньше нуклеиновых кислот, а при использовании готового комбикорма со спирулиной уже заранее определено, что раки получат только 1/5 часть нуклеиновых кислот по отношению питания только

ОДНОЙ СП Иру ли ной.

По данным DaSilva (1978) у многих животных, в основном это крупный рогатый скот, весь белок, вырабатываемый спирулиной, обеспечивает нормальную скорость роста. При этом у них не наблюдается аномалий в развитии и патологических процессов.

Перспективы использования спирулины в качестве корма для культивируемых видов раков очень высоки, так как урожайность спирулины в десять раз выше, чем у пшеницы и соевых бобов. Однако, как показали каши эксперименты, красные раки плохо переносят кормление чистой спирулиной, что видимо, связано с высоким содержанием нуклеиновых кислот в спирулине и этим они eme раз подтвердили наличие сходной ферментативной системы у лошади и высших раков, выявленной за последнее время (Camba et all,, 1997).

Различные варианты кормления раков со спирулиной позволили нам сделать вывод, что другие корма, содержащие 1 - 2 % нуклеиновых кислот в сочетании со спирулиной доводят концентрацию нуклеиновых кислот в рационе красного болотного рака до 3 %, что значительно повышает кормовую ценность спирулины (Симаков, Пономарев, 2002).

В спирулине содержится 65 % белков, 19 % углеводов, 6 % пигментов, 4 % липидов, 3 % волокон и 3 % золы (Сассон, 1987). Для культивирования высших ракообразных требуется наличие в корме высокого содержания пигментов, в том числе и каротнноидов, особенно при построении панциря. Как раз этим требованиям удовлетворяет состав спирулины.

При добавлении спирулины к энхитреям, повышается их пищевая ценность. Это дает возможность использовать для раков живой корм большим содержанием жира, концентрация которого компенсируется большим содержанием белка и каротнноидов при добавлении спирулины. Так как энхитреи живут в почве, и практически не метаболизируют пигменты, добавка к энхитреи спирулины позволяет ракам получить необходимые для них пигменты из водорослей.

Основные выводы

1. Культивирование раков в индивидуальных ячейках общих проточных емкостей существенно ускоряет скорость роста раков и процессы их полового созревания.

2. Кормление раков одной спирулиной угнетает рост раков, а кормление раков с частичным использованием спирулины стимулирует рост раков. Так наибольшую интенсивность роста раков обеспечивает кормление энхитреями со спирулиной. Вторым по эффективности следует считать комбикорм для рыб "Sera Premium", содержащим 20 % спирулины.

4.

5.

6.

1.

2.

3.

4.

Кормление чистой спирулиной вызывает явное нарушение секреции гепатопанкреаса. Добавление спирулины к кормам способствует секреции гепатопанкреаса. Наибольшая секреция ферментов в клетках эпителия трубочек гепатопанкреаса - при кормлении раков энхитреями со спирулиной и комбикормом для рыб "Sera Premium". Анализ процессов оогенеза и сперматогенеза показал, что из исследуемых кормовых объектов наибольшую стимуляцию созревания гонад вызывают энхитреи, а энхиггреи со спирулиной вызывают максимальную стимуляцию в эксперименте. Кормление раков чистой спирулиной резко замедляет процессы гаметогенеза. Кормление раков одной спирулиной равно отрицательно как для полового созревания, так и для роста, при этом наблюдает нарушение секреции гепатопанкреаса. Спирулина в качестве единого корма не пригодна для выращивания Procombanis clarkii.

На основе проведенных исследований оптимальным репродуктивным кормом для Procambams clarkit является энхитреи со спирулиной.

Список работ опубликованных по теме диссертации

Пономарев А.К. Спирулина н ее воздействие на биологические структуры пищеварительной системы // Ж. Проблемы Биовалеотехнологии № 1 (2), 2002, С. 62-71,

Пономарев А.К. Симаков Ю.Г. Сперматогенез у красного болотного рака при культивировании на различных кормах // Сборник научных трудов молодых ученых МГТА - М.: МГТА, 2002 - Вып. II, С. 70-76. Пономарев А.К., Симаков Ю.Г. Оогенез у красного болотного рака при культивировании в индивидуальных емкостях на различных кормач // Сборник научных трудов молодых ученных МГТА - М.: МГТА, 2002 -Вып. II, С. 77-82.

Пономарев А.К,, Симаков Ю.Г. Перспектива содержания культивируемых видов раков в индивидуальных ячейках общих проточных емкостей // Сборник научных трудов молодых ученных МГТА - М.: МГТА, 2002 - Вып. П, С. 83-85.

Пономарев А.К. Биомониторинг по флуктуирующей асимметрии // Сбор. Водные экосистемы и организмы. М.: МАКСпресс 2000, С. 66-67.

МГТА. Заказ 7319. Тираж 100 экз.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Пономарев, Андрей Константинович

СОДЕРЖАНИЕ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ВЛИЯНИЕ УСЛОВИЙ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КАМБАРИН НА ГИСТОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ИХ РЕПРОДУКТИВНОЙ И ПИЩЕВАРИТЕЛЬНОЙ СИСТЕМЕ (ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР).

1.1 Систематика и ареалы распространения красного рака.

1.2. Особенности гаметогенеза у красного болотного рака и других ракообразных.

1.2.1. Сперматогенез.

1.2.2. Оогенез.

1.3. Гистологические и биохимические особенности гепатопанкреаса речных раков.„.„.

1.4. Механизмы линьки у красного болотного рака и других ракообразных.

1.5. Особенности биологии и культивирования красного американского рака.

1.6. Преимущества культивирования камбарин по сравнению с астацинами

1.7. Пути интенсификации роста раков при современных методах культивирования.

1.8. Сравнительные аспекты биотехники культивирования камбарин и астацинЗЗ

1.9. Об использовании американских речных раков в условиях России.

1.10. Основные пути культивирования речных раков в Росссии.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Воздействие различных вариантов кормления на рост рака Procambarus clarkii.

3.2. Гистологическое строение гепатопанкреаса красного болотного рака при различных вариантах кормления.

3.3. Сперматогенез у красного болотного рака при использовании различных вариантов кормления.

3.4. Цитологические изменения в ооцитах красного болотного рака при использовании различных кормов.

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

4.1. Влияние различных типов кормления на биологические показатели Procambarus ci.arkii.

4.2. Гистологические и гистохимические изменения в гепатопанкреасе красных раков при использовании различных кормов.

4.4. Гаметогенез у красных болотных раков при использовании различных кормов.

4.5. Особенности гаметогенез а и пищеварения красных болотных раков при индивидуальном и групповом содержании в культуре.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Гистологический и гистохимический анализ гаметогенеза и состояния гепатопанкреаса у Procambarus Clarkii при различных вариантах кормления"

Аквакультура астацин сталкивается с двумя очень существенными неблагоприятными факторами - с загрязнением рыбохозяйственных водоемов и с вспышками эпизоотических заболеваний («рачьей чумой»). В 1950-х годах, после резкого снижения производства продукции раков, рынок в Европе стал заполняться переработанными продуктами из США, где значительное развитие получило производство (добыча и культивирование) прокамбарусов (Procambarus sp.). Основной объект американского производства - Procambarus clarkii, обладает высокой скоростью роста. В 1970-ых гг. при осуществлении мероприятий по восстановлению европейских запасов раков и интродукции в водоемы Пиренейского п-ова американского рака P. clarkii, выяснилось, что эти раки - носители возбудителя афаномикоза или «рачьей чумы», сами же они устойчивы к указанному заболеванию, а аборигенные виды чаще всего гибнут от него. Вспышки «рачьей чумы» привели к тому, что и в России произошло резкое снижение природных запасов раков. В последние 50 лет и наша страна утратила роль поставщика раков в Западную Европу (Полосьянс 2002).

США же благодаря наличию значительных площадей для субтропической экстенсивной астакокультуры и хорошего ее технологического обеспечения увеличили ежегодные объемы Мирового производства красного рака на порядок. В среднегодовой ракопродукции (около 50 тыс. тон/год) за последние годы камбарины составили 95%, (из них болотный или красный рак занимал 80%), оставшиеся 5% продукции давали все остальные виды культивируемых речных раков (Александрова,

1997, 1999).

В настоящее время культивируют представителей примерно десяти видов из 450 известных видов речных раков и можно сделать вывод, что красные американские раки один из перспективных объектов для культивирования. Быстрый рост, короткий период созревания, повышенная устойчивость к загрязнению воды и резистентность к раковой чуме делают этот объект незаменимым при культивировании.

По данным астакологов, культивирование американских раков рода Procambarus является более выгодным по сравнению с культивированием аборигенных видов, например, астацин. В настоящий момент известен ряд оригинальных технологий выращивания американских раков в искусственных установках (Александрова, 1999; Киселев, 1995; Черкашина, 1991; Уитон, 1985; Цукерзис 1989). Однако основные усилия в разрабатываемых технологиях направлены на техническое обеспечение процесса культивирования раков. Другое направление, биологическое -интенсификация прироста биомассы культивируемых объектов, а также стимуляция их размножения, разрабатывается в меньшей степени, хотя оно и является определяющим в культивировании раков. Актуальность данной работы заключается в том, что в ней разрабатываются вопросы второго направления - поиск наиболее эффективных репродуктивных кормов способствующих созреванию гонад у красного болотного рака при культивировании и содержании его в отдельных емкостях при сохранении биохимической коммуникации.

В работе исследовался Procambarus clarkii, культивируемый в лабораторных условиях. Указанный вид раков может с успехом использоваться в экспериментах по интенсификации репродуктивной функции при подборе оптимальных кормов, способствующих интенсификации его роста и размножения.

В работе исследовалось воздействие на созревание гонад и состояние гепатопанкреаса следующих кормов:

• осетровый комбикорм (MS 49/12) - как корм с оптимально сбалансированными компонентами (Полосьянц, 2002);

• хирономиды - как естественный кормовой объект для гидробионтов, в том числе и раков. В нашем случае представляют интерес по содержанию гормона - экдизона;

• энхитреи - хотя и не являющиеся естественной пищей для раков, однако богатые жирами и необходимые для усвоения жирорастворимых компонентов прокомбарусами;

• спирулина - как источник компонентов растительного происхождения, в том числе белка и пигментов, необходимых для кальциевого обмена, но с повышенным содержанием нуклеиновых кислот;

• также различные комбинации между ними.

Важными показателями при культивировании красных болотных раков следует считать состояние репродуктивной и пищеварительной системы, так как именно они обеспечивают воспроизводство и прирост раковой продукции. Поэтому для контроля над указанными системами выбраны гистологические и гистохимические исследования, так как только на клеточном и тканевом уровне можно полноценно и относительно быстро оценить, насколько хорошо подходит красному болотному раку тот или иной корм или их комбинация. По этой причине в данной работе проводятся гистологические исследования: оогенеза, сперматогенеза и состояния гепатопанкреаса у раков при кормлении их живыми и комбинированными кормами.

Для исключения конкуренции, мешающей росту и созреванию красных раков, проведены исследования по культивированию Procambarus clarkii в индивидуальных ячейках общих емкостей. При этом сенсорные и биохимические взаимодействия между особями не нарушались, так как культивирование осуществлялось в прозрачных перфорированных сосудах.

Цель работы - исследование воздействия различных кормов и кормосмесей на гаметогенез и состояние гепатопанкреаса, поиск наиболее эффективных репродуктивных кормов, стимулирующих созревание гонад у красного болотного рака при индивидуальном культивировании.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Провести сравнительный анализ процессов гаметогенеза и роста при групповом и индивидуальном содержании раков в культивационных установках.

2. Изучить влияние различных вариантов кормления на темп роста раков.

3. Изучить гистологические и гистохимические изменения в гепатопанкреасе красного болотного рака при использовании различных вариантов кормов и определить наиболее эффективные корма, способствующие секреторной стимуляции гепатопанкреаса.

4. Изучить процессы оогенеза и сперматогенеза при различных вариантах кормления Procambarus clarkii и выявить наиболее оптимальные корма, ускоряющие созревание гонад.

5. На основе полученных данных выбрать наиболее оптимальные корма, способствующие быстрому созреванию гонад Procambarus clarkii.

Научная новизна данной работы заключается в следующем:

• впервые исследуется оогенез и сперматогенез у Procambarus clarkii при культивировании на живых кормах и комбикормах на гистологическом и гистохимическом уровне;

• впервые рассматривается воздействие различных кормов на процессы секреции и морфологические показатели в гепатопанкреасе красного болотного рака;

• впервые изучена динамика роста и созревания красного болотного рака при культивировании в индивидуальных емкостях на различных кормах.

Практическое же значение работы заключается в следующем:

• предложено содержание маточных стад американских раков в индивидуальных прозрачных ячейках общих емкостей, повышающее интенсивность их роста и созревания за счет исключения конкуренции и каннибализма среди особей и позволяющее сохранить количество особей, изначально посаженных в установку;

• предложена рецептура кормления, основанная на результатах гистологического и гистохимического анализа состояния гепатопанкреаса и гаметогенеза.

Использование результатов данных исследований позволяет ускорить процесс созревания гонад.

Заключение Диссертация по теме "Гидробиология", Пономарев, Андрей Константинович

6. Основные выводы

1. Культивирование раков в индивидуальных ячейках общих проточных емкостей существенно ускоряет скорость роста раков и процессы их полового созревания.

2. Кормление раков одной спирулиной угнетает рост раков, а кормление раков с частичным использованием спирулины стимулирует рост раков. Так наибольшую интенсивность роста раков обеспечивает кормление энхитреями со спирулиной. Вторым по эффективности следует считать комбикорм для рыб "Sera Premium", содержащим 20 % спирулины.

3. Кормление чистой спирулиной вызывает явное нарушение секреции гепатопанкреаса. Добавление спирулины к кормам способствует секреции гепатопанкреаса. Наибольшая секреция ферментов в клетках эпителия трубочек гепатопанкреаса - при кормлении раков энхитреями со спирулиной и комбикормом для рыб "Sera Premium".

4. Анализ процессов оогенеза и сперматогенеза показал, что из исследуемых кормовых объектов наибольшую стимуляцию созревания гонад вызывают энхитреи, а энхитреи со спирулиной вызывают максимальную стимуляцию в эксперименте. Кормление раков чистой спирулиной резко замедляет процессы гаметогенеза.

5. Кормление раков одной спирулиной равно отрицательно как для полового созревания, так и для роста, при этом наблюдает нарушение секреции гепатопанкреаса. Спирулина в качестве единого корма не пригодна для выращивания Procombarus clarkii.

104

6. На основе проведенных исследований оптимальным репродуктивным кормом для Procambarus clarkii является энхитреи со спирулиной.

5. Заключение

В настоящее время значительно сокращается наличие водоемов, пригодных для жизни речных раков. Одновременно с этим появляется ряд технологических разработок отечественных и зарубежных астакологов, позволяющих разводить и выращивать как астацин из родов Astacus и Pontastacus, так и новых видов, завезенных с американского континента из рода Procambarus. Большинство исследователей понимает, что перспективы развития производства астацин ограничиваются экологическими и экономическими факторами. К таким факторам следует отнести неудовлетворительное состояние водосборных территорий и сокращение пригодных для жизни раков биотопов из-за разрушения реликтовых озерных биоценозов и загрязнения рек; а также ухудшение санитарно-ветеринарной обстановки в естественных водоемах. В России положение может быть усугублено в случае допущения вселения в естественные водоемы северо-американских видов раков - Pacifastacus leniusculus и Procambarus clarkii - носителей возбудителя афаномикоза. В нашей стране отмечается недостаточная связь между научно-исследовательскими работами и производством, что тормозит создание рентабельных и адаптированных к местным условиям технологий культивирования раков.

Для сохранения аборигенных видов раков у нас должна быть запрещена интродукция в естественные водоемы экзотических видов раков - потенциальных носителей опасных заболеваний. Даже в Америке он наносит ущерб водным экосистемам и особенно местным видам рыб (Zames et all., 2001). Однако для промышленного культивирования в широких масштабах красные болотные раки во многих случаях подходят даже больше, чем астацины.

В данном случае проведенная работа показывает, насколько перспективно культивирование красного болотного рака (Procambarus clarkii) в промышленных установках. Вполне понятно, что для сохранения биоценозов указанный рак не может быть выпущен в естественные водоемы. Однако по сравнению с астацинами, которых часто пытаются культивировать в промышленном масштабе, преимущества красного рака неоспоримы. Он не настолько требователен к качеству воды как широкопалый или длиннопалый рак, обладает повышенной жизнестойкостью, ускоренным ростом и репродуктивный цикл у него в три раза короче, чем у наших аборигенных видов.

В данной работе ставилась задача найти эффективные репродуктивные корма для американских раков при искусственном выращивании. Помимо этого исследовался новый способ культивирования красных болотных раков в индивидуальном режиме в пластиковых емкостях. Различные виды корма подбирались экспериментально с учетом их воздействия на оогенез, сперматогенеза и состояние пищеварительной железы рака. Можно считать, что задача была выполнена, так как найдены лучшие корма, способствующие развитию репродуктивной системы раков, Procambarus clarkii. Ими оказались энхитреи и энхитреи со спирулиной. Одновременно с этим было определено, что кормление раков только спирулиной без добавок других компонентов приводит к подавлению гаметогенеза и отрицательно влияет на состояние тканей в гепатопанкреасе красного болотного рака. В результате выполнения работы было также определено, что индивидуальное содержание раков в пластиковых

102 емкостях позволяет исключить проявление агрессивности и случаи каннибализма.

Таким образом, проведенная работа позволяет преложить наиболее эффективные корма для выращивания красного болотного рака и новый способ индивидуального культивирования в перфорированных пластиковых емкостях, когда биохимические связи у выращиваемых раков сохраняются.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Пономарев, Андрей Константинович, Москва

1. Александрова Е.Н. Промышленное культивирование речных раков // Рыбоводство и рыболовство. -1994.-№4.-С. 27-29.

2. Александрова Е.Н. Перспективные направления восстановления и развития рачного хозяйства Центральной России. М.-1997. С. 1-24 // (Рыбн. хоз-во. Сер. Аквакультура: Информационный пакет/ВНИЭРХ-ВЫП. 1).

3. Александрова Е.Н. Раководство и условия для его развития в России // Рыбоводство и рыболовство. 1999.- № 4.-С.21-22.

4. Асанов А.Ю. Перспективы развития раколовства и раководства в Новгородской области // В сб. Проблемы охраны, рационального использования и воспроизводства речных раков.- Москва, Мединор, 1997.- С. 93-95.

5. Барнс Р., Кейлоу П., Олив П., Голдинг Д. Беспозвоночные. Новый обобщенный подход // М.: Мир 1992.-583 с.

6. Беерман В., Клевер У. Хромосомные вздутия. // Молекулы клетки. М.: Мир 1966 С. 145-158.

7. Бродский С .Я. Фауна Украши. Випц раки. // Речные раки.- Киев: Наукова думка, 1981 .-Т.26.-Вип.З.-21 Ос.

8. Воронин В.Н. Современное состояние изученности болезней и паразитов речных раков // Сб. научи. тр./ГосНИОРХ.-1989.-Вып.ЗОО.- С. 137-148.

9. Гессе Р. Тело животного, как самостоятельный организм. // С-П. А.Ф.Девриен 1913. - 714 с.

10. Гончаров А.Ю., Сокольский А.Ф. Зависимость выклева и выхода личинок речного рака (Astakus leptodaktylus eschort) от температуры воды // 8 Научн. конф. по экол. физиол. и биохимии рыб: Тез. докл., Петрозаводск, 1992, Т.1.- С.72-73.

11. Гралмане JI.K,, Кайре JI.Д. Инфекционные заболевания раков в озерах и реках Латвийской ССР // В сб.: Лимнология. Материалы 14-ой конф. по изучению внутренних, водоемов Прибалтики. 2. 2. Рига, 1968.-С. 24-26.

12. Догель В.А. Чума раков (исторический обзор). // Сб. научн. тр. ГосНИОРХ. Вып. 300.-1989.- С. 124-136.

13. Догель В.А. Зоология беспозвоночных. // М.: Высшая школа. -1975.-559 с.

14. Калмыков Е.В., Гончаров А.Ю., Ушивцев В.Б., Мальдов Д.Г., Кулинич А.В. Устройство для разведения молоди раков. Полезная модель КН 1405-16.01.1998, Бюл.№1.

15. Иванов Г.Ю. Универсальная установка для разведения гидробионтов (варианты).- Пет. Ки 2145477 С1 7 А01 К 61/00,20.02.2000, Бюл. №5.

16. Киселев А.Ю., Новосельцев Г.Е., Филатов В.И., Илясов А.Ю., Слепнев В.А., Богданова J1.H. Технология выращивания молоди раков до массы 1 кг в установках с замкнутым водоснабжением // Всерос. НИИ пруд. рыб. хоз. М.: 1995. С.12

17. Коханов Б.Т., Отрогов В .П., Маркин В.Т. Устройство для получения личинок ракообразных. А. с. СССР, № 904628 А01К 61/00.-4.01.1980.

18. Коханов Б.Т., Маркин В.Т., Строгов В.П. Устгановка для получения и подращивания личинок рыб и ракообразных. А.С. СССР, № 1600656-А1 А01 К 61/00-23.10. 1988.

19. Клейменов А.Н., Яковлев С.В., Козлов В.К. Способ разведения раков: Пат. 2115309 Россия, МПКб А01К61/00 № 96116956/13, 2000

20. Лаврентьева Г.М., Воронин В.Н. Диагностика и профилактика инфекционных заболеваний раков в условиях Северо-Запада России // Методич. указ. С-Пб.: ГосНИОРХ, 1994.- 10 с.

21. Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия // М.: Мир, 1969. 645 с.

22. Мажилис А.А. Эмбриональное развитие широкопалого рака // В кн. Биология речных раков водобмов Литвы. Вильнюс, 1979.- С. 28-40.

23. Мажилис А.А., Шяштокас И.А. Чума раков в естественном водоеме: В сб.: Лимнология. Материалы 14-ой конф. по изучению внутр. водоемов Прибалтики. 2. 2. Рига, 1968.- С. 6365.

24. Мацкявичене Г.Ю., Тамкявичене Е.А., Мицкенене JI.M. Некоторые эколого-физиологические условия обитания речных раков в аквакультуре. : Сб. науч. тр. // ГОСИИОРХ, 1995(1996), Вып. 314. -С. 321-324.

25. Микулин А.Е. Живые корма.- М.: Дельфин, 1994.- 104 с.

26. Милованова З.П., Лысенко Л.В. Приготовление гистологических срезов // Микроскопическая техника. М.: Медицина, 1996.- С. 26 -36.

27. Мицкевич О.И. О необходимости диапаузы в жизненном цикле Astacus Astacus L., выращенном в культуре.: Сб. науч. тр. // ГосНИИОРХ, 1995(1996), Вып. №314.-С. 314-320.

28. Москул Г.А. Состояние запасов длиннопалого рака в водоемах Краснодарского Края. // Материалы докладов на втором международном симпозиуме «Ресурсосберегающие технологии ваквакультуре»." Россия, Краснодар, 1996.- С. 122.

29. Мясищев Б.В. Акклиматизация и опыт заводского разведения американского сигнального рака: В сб. Аквакультура: Проблемы и достижения. // (Рыбн. хоз-во. Сер. Аквакультура: Информац. пакет // ВНИЭРХ. -1995.- Вып.2,- С.24-33).

30. Нефедов В.Н. Отечественный опыт культивирования раков // (Рыбн. Хоз-во. Сер. Аквакультура: Информ. мат./ВНИЭРХ.-1991. -Вып. 1).-80 с.

31. Нефедов В.Н., Мазанов Н.Н., Лабода В.Ф., Наумова Г.В. К вопросу о получении жизнестойких личинок длиннопалого рака в экспериментальных условиях // Тр. Волгоградск. отд. ГосНИОРХ.-1975- Т. 9.- С. 276-281.

32. Николаев С.Г., Рубцов М.В. Аналитический обзор: Современное состояние естественных популяций речных раков. Фонды ВНИИР, 1989.-80 с.

33. Пермниов Л.Г. Состояние популяций раков в некоторых водоемах Псковской области: Сб. научн. тр. // ГосНИОРХ.-1989.-Вып. ЗОО.- С. 39-4 Сб. научн. 1р./ГосНИОРХ.-1989.-Вып.ЗОО.-С. 24-38.

34. Пирс Э. Гистохимия. М.: ИЛ.-1962. 962 с.

35. Плохинский Н.А. Алгоритмы биометрии. М.: МГУ, 1967.- 80 с.

36. Полосьянс Т.Ю. Стимуляция роста и овогенеза у американских раков рода Procombarus при культивировании // Афтореферат насоискание ученой степени к.б.н. М.: МГТА, 2002, 22 с.

37. Пономарев А.К. Биомониторинг по флуктуирующей асимметрии // Сбор. Водные экосистемы и организмы. М.: МАКСпресс 2000, С. 66-67.

38. Пономарев О.А., Фесенко Е.Е. Свойства жидкой воды в электрических и магнитных полях // Биофизика 2000 - 45, №3 С. 389-398.

39. Ромейс Б. Микроскопическая техника. И.: ИЛ-1954. 718 с.

40. Рузен-Ранге Э. Сперматогенез у животных. М.: Мир 1980.-255 с.

41. Сассон А. Биотехнология: свершения и надежды.М.: Мир 1987. 411 с.

42. Симаков Ю.Г., Полосьянц Т.Ю. Пути интенсификации роста речных раков при современных методах культивирования // Проблемы и перспективы развития аквакультуры в России. Материалы докладов научно практической конференции. Краснодар, 2001. - С. 104 - 105.

43. Симаков Ю.Г. Пономарев А.К. Спирулина и ее воздействие на биологические структуры пищеварительной системы // Ж. Проблемы Биовалеотехнологии №1(2), 2002, С. 62-71.

44. Сыпко И.И. Кубинский голубой рак// Рыб. Хоз-во, 1993, №2 С. 44.

45. Терентьев A.JI. Особенности акклиматизации сигнального рака {Pacifastacinae leniusculus subfam.) в водоемах Литовской ССР.- В кн. Биология речных раков водоемов Литвы. Вильнюс. 1989.С. 136-142.

46. Уитон Ф. Техническое обеспечение аквакультуры.- Москва, Агро-промиздат, 1985.- 528 с.

47. Узденский А.Б., Кутько О.Ю. Реакции изолированных механорецепторных нейронов речного рака на слабые сверхчастотные магнитные поля // Биофизика. -1998.-43, №5 С. 797-802.

48. Хадорн Э., Венер Р. Общая зоология. М.: Мир 1989.-523 с.

49. Цукерзис Я. М. Речные раки.- Вильнюс: Мокслас, 1989а, 140 с.

50. Цукерзис Я.М. Использование перспективных видов речных раков водоемов Северо-Запада СССР для развития раководства: Сб. научи. тр./ГосНИОРХ.-1989Ь.-Вып.ЗОО- с. 5-10.

51. Цукерзис Я.М., Шяштокас И.А., Терентьев А.Л. Способ искусственного разведения молоди речных раков А.с. № 506356, заявл. 03.09. 1974.

52. Черкашина Н.Я. Способ культивирования речных раков. А.с. 1699392 AOl/K'61/ОО.-Заявл. 1989.-Бюл.№47.-23.12. 1991.

53. Шевцова Э.Е. Культивирование раков в некоторых зарубежных странах. // Состояние и перспективы культивирования некоторых видов раков, вып. 1., 1997, -С.27-33.

54. Шяштокас И. А. Заболевание широкопалых и длиннопалых раков в водоемах Литовской ССР: В сб.: Гидробиологические и ихтиологические исследования внутрен. водоемов Прибалтики. Вильнюс, 1968.

55. Шяштокас И.А., Цукерзис Я.М. Влияние химических препаратов на широкопалых и длиннопалых раков // Тр. АН Лит. ССР-Сер. В.- 1972. №-(60).-С. 119-123.

56. Anderson М., Jolibois К., George W. Bioaccumulation of lead nitrate in red swamp craufich (P. Clarkii) // J. Hazardous Mater 1997. - 54 P. 15-29.

57. Anastascio P.M. Margues J.C. Crayfisch (Proc. Clarkii) condition throughout the year in the lower Mondego river walley, portugal// Crustaceane.-1998, 71.-№ 6 P. 593 - 602.

58. Bollinger J., Bundy K., Anderson M., Millet L., Preslfn J., George W. Bioaccumulation of chromium in red swamp crayfich (P. Clarkii) // J. Hazardous Mater 1997 - 54 C. 1-13.

59. Bravo M., Duarte M., Montes С. Enviromental facrous controlling the life history of P. clarkii in a temporary march of the Donana National Park (SW Spain): Pap. Congr. Int. Assos. Theor. And Appl. // Limmol 1994 - 25 Pr.4 - C.2450-2453.

60. Brown K. The role of shell strength in selective foraging by crayfish for gastropod prey // Freschwater Biol., 1998 40, №2, C. 255-266.

61. Corotto F.S., Bonenberger D.M., Bounkeo J.M., Dukas C.C. Antennule ablation sex discrimination, and mating behavior in the crayfich P. Clarkii // J. Crustas. Biol.- 1999 19 C.708-712.

62. Cooper R. Development of sensory processes during limb regeneration in adult crayfich // J. Exp. Biol. 1998. - 201, N11. -c. 1745-1752.

63. Cronin T.W., Forward R.B. Jr., (1979). Tidal vertical migration: An endogenous rhythm in estuarine crab larvae. Science, 205,1020-1022.

64. Correia A. M. Seosonal and circadian fordging activiti of Procambarus clarkii (decapoda, cambaridae) in Portugal // Crustaceana, 1998-71, №2, C. 158-166.

65. Conzales M. R, Heras H. Pollero R. J; Enzyme activities involved in lipid metabolism during embryonic development of Macrobrachium borellii // J. Exp. Zool, 2000- 286, № 3, C. 231-237.

66. Castonon-Cervates O, Battelle В., Fanjue-Moles M.// Phythmic changes in the sepotonin content of the brain and eystalk of crayfish during development // J. Exp. Biol., 1999 202, №20, C.2823-2830.

67. Diener R. A., 1975. Cooperative Gulf of Mexico estuarine inventory and study-Texas: area description, NOAA Technical Report NMFS CIRC-393, Seattle.

68. Daniels W., Dabrato L.,Gravers K. Ovarion development of femall red swamp crayfich P. Clarkii as influenced by temperature and photoperiod//J. Crustas. Biol. 1994, 14 C.530-537.

69. DaSilva E.J., Olembo R.,Burgess A. Impact of Science on Society. Paris, Unesco 1978, 28, № 2. 182 p.

70. Dunham D., oh Yin. Chemical sex discrimination in the crayfisch Procambarus clarkii: role of antennults // J. Chem. Ecol., 1992 -18, №12, C. 2363 -2372.

71. Domecg C. Comparisons of selected body measurements of crawfish Procambarus clarkii // J. E. Mitchell Sci. Coc. 1992 - 108, №4, C. 194.

72. Enright J. Т., 1978. Migration and homing of marine invertebrates: A potpourri strategies. In: Animal Migration, Navigation, and Homing K. Schmidt-Koenig and W.T. Keeton, eds.). Springer-Verlag, Berlin, 1966. -pp. 440-446.

73. Ezure T, Ishida M. Shubata M. Ohoka Т. Crustacean hyperglycemic hormone receptor and guanylate cyclase in crayfish hepatopancreas // Zool. Sci., 1989 6, №6, С. 1183.

74. FautrezJ., Fautrez Firlefijn N. A propos de la chromatine et dans de nucleoles la visicule germinative de oocyte de quelques crustaces // Biol Jaarb, 1951,-18, 27 - P. 241 - 248.

75. Fry B. Natural stable carbon isotope tag trace Texas, USA, shrimp (Penaeus aztecus) migrations, U. S. Natl. Mar. Fish. Serv. Fish. Bull., 1981 -79,337-346.

76. Huner J. Farming freschwater crayfich in Finland // Fich Farm. Int. -1995 -22, 34-35.

77. Huner J. Louisiana craufich farms expect a good slasom // Fich Farm Int. 1996 - 23 pp. 44-45.

78. Huang Tien-sheng, Law J., Sijodnrhall K. Purification and CDNA coning of ferritin from the hepotopancreas on the freshwater crayfish Procambarus leniusculus // Eur. J. Biochem., 1996 -236, №2, C. 450 -456.

79. Haefner P., Spaargaren D. Interactions of ovary and hepotopancreas during the reproductive cycle of crandon Crandon (L). Weight and volume relationships //J. Crustac. Biol. -1993 13, №3 C. 523-531.

80. Hincsh G. The role of Sertoli cells in spermatid maturation in the testis of the crayfish, Procambarus paeninsulanus // Tissue and Cell., 1993 -25, №5, C. 743-749.

81. Issa F. A. Adamson D. Edward D. Dominance hierarchy formation in juvenile crayfish Procambarus clarkii // J. Exp. Biol., 1999 202, № 24, C. 3497 - 3506.

82. Ikeda M., Naya Y. Physiological significance of 3-degydroecdysone (3dhE) from crayfish, Procambarus clarkii // Zool. Sci., 1992 9, №6, C. 1270.

83. James C., Childs M. What role do exotic crayfich play in southwest aguatic systems? // Proc. Aiz. Nev. Acad. Sci - 2001 - 36 C.29.

84. Jonson D., Alexandor C., Yellowlees D. Epithelial cytology and function in the digestive gland of Thenus orientalis (Decapoda: Scyllaridae) // J. Crustas. Biol., 1998 -18, №2, C. 271 -278.

85. Kamba M., Sonobe Horuyuki, Adachchi-Yamada Takashi, Mizoguchi Akira, Tamura Tashiki. Cloning of molt-inhibiting hormone m-RNA in the eyestalk of the crayfisch, Procambarus clarkii // Zool. Sci. -1997-14, Suppl., C. 15.

86. Kulkarni Gunderao K., Glade Liso, Fingerman Milton. Oogenesis and effects of neuroendocrine tissue on in vitro syntesis of protein by the ovary of the red swamp crayfish Procambarus klarkii (Givard) // J. Crustac. Biol. 1991 - 11, №4, C. 513-522.

87. Kirschvink J. L., Gould J. L. Biogenic magnetite as a basis for magnetic field detection in animals // BioSystems, -1987 13, 181201.

88. Lee P.H., Weis J.S. Effects of magnetic fields on regeneration infiddler crabs, Biol. Bull., -1980- 159, 681-691.

89. Lohmann K.J. Magnetic remanence in the western Atlantic spiny lobster Panulirus argus // J. Exp. Biol., 1984 113, 29-41.

90. Maheswarudu G., Sharma H., Reddy P., Fingerman M. / Isolation of organic compounds from the litoral oligochaete, Pontodrilus bermuration in the red swamp crayfich, Procambarus clarkii. // Amer. Zool. 1995. - 35, N5, - c.25.

91. Maranhao P. Margues J. C. Madeira V.M. Zinc and cadmium concentrations in hte soft tissues of the red swamp crayfisch Pr. clarkii (Gigard, 1852) after exposure to zinc and cadmium // Environ. Toxical. And chem.- 1999.- 18, № 8. H. 1769 1771.

92. Nakatsuji Т., Nisyimura T.,Sonobe H. Fluctuation of the lewel of molt-inhibiting hormone in the sinus glend during one molt cycle of the Pr. Clarkii //Zool. Sci.- 1999.-16, Suppl.-P. 8.

93. Nagvi S.M., Nagvi N.H., Dtvalraju J. Coppes bioaccumulation and depuration by red swamp craufich P.ckarkii // Bull. Environ. Contam and Toxicol 1998 - 61, C. 65-71.

94. Nan F., Sheen S., Chen S. The effects of eystalk ablation on acid-base balanse and haemocyanin concent ration in grass shrimp Penaues monoden Fabricius// Crustaceana 1998 - 71, №4, C. 390-398.

95. Perez J.R., Celada J.D., Carral J.M., Saez- Royuella M., Sierra A. Metods basicos de cria de astacidos en Europa. 1997, vol 12, № 1/3 -p. 87 96.

96. Powell M., Watts S. Oxygen consumption in juvenili mudbugs // Abstr. Annu Meet. Amer. Soc. Zool., Chicago, 1995 35. 5 C.126.

97. Phippen M., Webster S., Chyng J. S., Dircksen H. Ecdysis of decapod crustaceans is associated with a dramatic release of crustacean radioactive peptide into the haemolymp // J. Exp. Biol. 2000- - 203, №3, C. 521-536.

98. Rimaila Ekia, Vennerstrqm Pia. Histopathological findings of cline call and macrosopically normal European crayfich (Astacus astacus) // gth. int. Conf. "Diseases Fich and Scheelfich", Phodes, 1999: Abstr. -Phodes, 1999, c. 24.

99. Reddy P., Mahesworudu G., Fingerman M. Morphological changes in the nepatopanreas of the rid swamp crayfisch, Procambarus clarkii, in a nighly polluted enmiranment // Amer. Zool 1995 -35, №5, c. 68.

100. Stich H. Das Vorkommen von Kohlenhidraten im Ruhekern und wahrend der Mitose. Cyromosoma, -1951. 4,. S 429-457.

101. Saker-Sampano, Vierra Q., Sampario, Theophilo. Caractericzcao de sistema enzimatico de hepatopancreas de eagosta do genero panulirus white. // Arg. Ceinc. Mar. 1989 - 28, C. 27-37.

102. Sarajini R., Nagabhushanam R, Fingerman M. A neurotransmitter role for red-pigment-concentrating hormone in ovarian maturation in the red swamp crayfich Procambarus clarkii // J. Exp. Biol. 1995, a, №6 C. 1253-1257.

103. Sarajini R., Nagabgushanam R., Fingerman M. In vivo inhibition by dopamine of 5-hydroxytryptamine-stimulated ovarian maturation in the red swamp crayfish, Procambarus clarkii // Experientia, 1995, b, №2, C. 156-158.

104. Sarajini R., Nagabhushanam R., Fingerman M. In virto inhibition by doramine of 5-hydraxytryptamine-stimulateol ovarian maturation in the swamp crayfish, Procambarus clarkii // Experientia, 1996 52, №7, C. 707-709.

105. Spaargaren D., Haefner P. Quantitative changes during ovarian development in the brown shrimp crangon crangon (Decapoda, Natantia) // Crustaceana, 1998 71, №3, C. 247-257.

106. Subramoniam Т., Keller R. A new look at the endocrine regulation of egg maturation in the decapod crustaceane // Curr. Sci. (India), 1993 -65, №8, C. 619-623.

107. Taneyeva A.I. Changes in the physiological processes of aquatic organisms under the influence of a constant magnetic field, Hydrobiol. J., 1978. 14(5), 48-54.120

108. Taneyeva A. I., Dolgdpol'skaya M.A. The biological effect of a constant magnetic field on Anemia salina, Hydrobiol. J., -1974. 10(4), -47-52.

109. Vasilyev A. S., Bednarskiy A.D., Vasil'yeva L.A., ChuburV.P. The reproduction and development of Daphnia magna in a magnetic field, Hydrobiol. J.,-1974- 10(2), 54-57.

110. Zames de vos C., Childs M.R. What role do exotic crayfich pley in sout hwest a guatic systems? Annal Meeting of the Arizona Nevada Academy of Scienses, Las Vegas // Proc. Aiz. -Nev. Acad Sci.-2001 -36. P.29.