Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Гетерогенность популяций E. coli в процессе формирования кишечного микробного биоценоза у ребенка первого года жизни

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Гетерогенность популяций E. coli в процессе формирования кишечного микробного биоценоза у ребенка первого года жизни"

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МЕДИЦИНСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ РОСТОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

ГЕТЕРОГЕННОСТЬ ПОПУЛЯЦИЙ E.COLI В ПРОЦЕССЕ ФОРМИРОВАНИЯ КИШЕЧНОГО МИКРОБНОГО БИОЦЕНОЗА У РЕБЕНКА ПЕРВОГО ГОДА ЖИЗНИ

ОЗ. ОО. СЛ. - Микробиология

А В ТО РЕФЕРАТ Диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

РГБ ОД

■На правах рукописи

НАБОКА ЮЛИЯ ЛАЗАРЕВНА

РОСТОВ- НА-ДОНУ 1994

Работа выполнена в Ростовском государственном медицинском университете.

Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор

Эссель А.В.

Официальные оппоненты : доктор медицинских наук, профессор

Ведущая организация: Ростовский Научно-исследовательский противочумный институт Госкомэпиднадзора Российской Федерации.

заседании диссертационного совета Д 084.53.01. при Ростовском государственно»! * медицинском университете (344022, г. Ростов -на- Дону, пер. Нахичеванский, 29).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ростовского государственного медицинского университета.

Гамлешко Х.П.

кандидат медицинских наук, доцент

ЧернаВская Л.Н.

Защита состоится

-Ю- О^ПШ/Ь^ 1994 г. В {0-

часов на

Автореферат разослан

1994 г.

Ученый секретарь диссертационного

совета, доцент

Н.Я.Корганов

- 1 -

'общая характеристика работы

Актуальность проблемы. Нарастающий интерес клинической медицины к нормальной микрофлоре человеческого тела и, в частности, гселудочно-кишечного тракта, определяет необходимость совершенствования методических подходов и . интерпретации результатов обследования как для взрослых, так и для детских контингептов. Обобщенные данные о роли нормальной микрофлоры толстого гаснечпика, в частности, эшерихий, как компонента кикробиоценоза желудочно-кишечного тракта обобщены в ряде монографий (В.Г.Петровская, О.П.Марко, 1976; И.Б.Куваева, 1976; И.Н.Блохина, В.П.Дорофейчук, 1979; А.Е.Эссель с соавт. 1985 и др., Finegold Sydney И., 1986; L.Lejeune, 1986; Н. Milch, 1991). Нормальная микрофлора в макроорганизме выполняет антагонистическую, защитную, иммунотренирукхцую,

ферментативную, и др. функции (В.И.Покровский, 1985; В. Н. Красноголовец, 1989 и др. ). Шесте с тем, в обычной диагностической г® беге функциональная характеристика компонентов нормального микробного биоценоза практически не определяется и обследование ограничивается установлением видового состава и количественного представительства отдельных видов (Э. О. Козлова, 1978; P.C. Черкасская, 1986, 1992; А.Е.Эссель с соавт., 1985; Л.И.Васильева, 1991; Ж.К. Урдабаев, 1993). Кишечная палочка является одним из наиболее изученных представителей сблигатной микрофлоры &елудочно-кзнзэчного тракта.

- г -

Антагонистическим свойствам кишечной палочки посвящено большое количество работ ( Л.Г.Иеретц, 1355; Д.Г.Кудлай, 1966; И.М.Юдицкая, 1975; M.Kivans, 1090; B.Juven, 1991; Е.М. Горская, 1992 и др.). Но в' литературе остается не освещенным вопрос становления антагонистической функции эшерихий в онтогенезе у новорожденных, находившихся на естественном вскармливании. В каком возрасте появляется * антагонистическая функция и к каким видам микроорганизмов? Так как основным источником контаминации новорожденного является организм матери, ми предположили, что первоначально антагонистический эффект эшерихий раньше проявляется к условно-патогенным штаммам, с которыми организм новорожденного впервые встречается и которыми заселяется^ и лишь позке к облигатпо-патогенным.

Цель и задачи исследования.

Представляется существенной оценка гомогенности популяции зшерияий как итамма-антагониста, а также по отношению проявления антагонистических свойств з режимах разного уровня аэробности.

Изложенные соображения определили формирование цели и задач исследования.

Целью настоящей работы явилось изучение стабильности и гомогенности популяции В.coli по признакам антагонистической активности и толерантности к тензии кислорода для обеспечения большей полноты микробиологического диагноза.

Для достижения указанной цели представлялось

необходимым решение следующих основных задач:

)

1. Изучение становления антагонистической функции кишечных палочек у детей первого года жизни в процессе формирования

микробиоценоза желудочно-кишечного тракта.

2. Определение сроков стабилизации популяции пшерихий по этому признаку.

3. Подбор непатогенного тест-штамма для характеристики антагонистической активности эшерихий.

4. Исследование антагонистической активности зшерихий в аэробных и полуанаэробных условиях культивирования.

5. Изучение гетерогенности субпопуляций эшерихий по признаку антагонистической активности в различных режимах культивирования (аэробном, полуанаэробном и анаэробном).

Научная новизна. Выявление гетерогенности популяций эшерихий по отношению к тензии кислорода и общему давлению. Установление связи антагонистической активности с режимом аэробности культивирования . Установление гетерогенности популяций экерихий, ввделенных у детей на 4 сутки еизни и в возрасте ЗО дней, по признакам антагонистической активности и отношения к тензии кислорода и общему давлению.

Практическая значимость работы

Н

вытекает из возможностей уточнения качественых характеристик банальной коли-флоры для соответствующих детских контигзгентов, что существенно в оценке дисбиотических состояний и эффекта их коррекции. Практически существенными являются методические рекомендации по возможностям использования условно-патогенных штаммов для тестирования антагонистической активности эшерихий, а также предложенный вариант методики ее определения.

Положения, выносимые на защиту.

1. При разных режимах аэробности культивирования антагонистическая активность эшерихий более . выражена в полуаназробных условиях культивирования. Однако, определенная близость показателей, полученных в аэробном и полуаиаэробном режиме, позволяет, в практических целях, ограничиваться аэробными условиями культивирования.

2. Уровень и спектр антагонистической активности эшерихий у детей, находившихся на естественном вскармливании, неодинаков на протяжении первых трех месяцев ккзни и характеризуется тенденцией к увеличению, стабилизируясь в более поздние сроки.

3. Первоначально антагонистическое действие эшерихий проявляется к представителям условно-патогенной флоры Klebsiella edwardsii и Citrobacter freundii, что возмоано связано с ранней контаминацией этими видами.

4. Выявлена возможность использования лактозонегативных штаммов Citrobacter freundii, Klebsiella edwardsii, в качестве, тест-штаммов, для определения антагонистической активности эшерихий.

Апробация работы. Основные положения

диссертации доложены па 6 конференциях молодых ученых .1

Ростовского медицинского института <1939 - 1904) и юбилейной конференции института (1990), изданы методические рекомендации (1994). По материалам диссертации опубликованы 7 работ.

Объем и структура диссертации. Работа представлена на 155 стр. машинописного текста. Состоит из введения, обзора литература в доух главах,

материалов собственных исследований в четырех главах, сводного обсуждения результатов, заключения, выводов и указателя литературы, охватывающего 188 отечественных и 132 зарубежных источника. Работа иллюстрирована 50 таблицами и 11 рисунками. Имеется не- входящее в листаж работы приложение, содержащее 4 таблицы.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ. Материалы и методы исследования.

Бил использован комплекс бактериологических методов, включавших культивирование в режимах разной аэробности (аэробном, полуанаэробном - О,5 атм, анаэробном - 1 атм), с учетом положения эшерихий, как факультативных анаэробов. В дальнейшем мы отказались от условий полной анаэробности, т.к. а этом режиме рост культуры был скудным или полностью отсутствовал. С целью изучения гомогенности популяции по морфометрическим показателям измеряли диаметры колоний и длины бактериальных клеток по соответствующим методикам (Г.Аппельт, 1959; Г.Г.Автандилов, 1990). Для оценки стабильности свойств исследованных штаммов эшерихий и тест-штаммов, чувствительных к антагонисту, применяли супермутаген - налидиксовую кислоту.

В работе были использованы 28 исходных штаммов,. 26 свежевыделенных и 2 стандартных музейных. Все описанные в литературе методики по определению антагонистических свойств эшерихий предусматривают использование в качестве тест-штамма облигатного патогена Б.Г1ехпег1, что не удобно в повседневной лабораторной практике из режимных соображений и увеличения количества документации.

- - с -

Предварительно проведя большую серию опытов на высоко-стабилизированном в своих свойствах пггакые E.coli М-17 по определению его антагонистической активности к различным тест-ктаммам, ии предлагаем использовать сокращенный (Citrobacter freundii и/или Klebsiella edwardsii) или расаирепкйй (Citrobacter freundii, Klebsiella edwardsii, S.flexneri) набор тест-штаммов для определения антагонистической активности эшерихий.

Проведенные исследования показали: во-первых, на

о ...

• неоднородность популяций эшерихий по признаку антагонистической активности в различных решимах (аэробном и полу-аназробаом) культивирования; антагонистический эффект Е1зср;-1г:ий бпл более вадгажен в условиях культивирования при -о, 5 стм; во-вторых, па гетерогенность популяции эшерихий со корфокатричзским показателям колоний и клеток в условиях стаптахшой колеЕпсиоотя гомогенности популяции, равчо как ив присутств11и' супар:-г!утагааа налютпгсовой лшслоты.

• • . , Определенна антагонистической активности, как высоко^ . стаапЕЕкровапного гх'аму.а E.coli К-17, тш: и свеаевыделенных ' . ssepisasi первично проводили ' классическим •. методом отсроченного антагонизма Фредерика, агаровых пластинок в »етдафиаздии .Гауза' <Г.©.Гаузе,1358> с тест-штаммом ''s.flexneri. Одаако» .пользуясь» зтши петодикаш!, ыы . получили пеудовлатворителькно результаты. Стабильный в своих свойствах штамм E.coli М-17 не обладал:антагонистической активность» к класстмескому ,тёст-Ш5'а2Ф1у S;flexneri при определении по методике Оредерина. Кодификация Раузе (агароваа пластинки) оказалась, громоздкой и капризной для повседневной работы. На конечный результат учета антаго-

- -

Биотических свойств эшерихий, влияли многие факторы: толщина агара в чашке Петри, время хранения уже разлитого в чашки агара, концентрация исследуемых микроорганизмов, взятых в опыт и т.д. Поэтому для определения антагонистической активности лактозопозитивных (банальных) эшерихий мы, . испытав несколько методических модификаций, остановились на следующей: сделав смыв со скошенного .агара 18-часовой культуры тест-штамма, на среду Эндо наносили О,5 мл этой взвеси и засевали газоном. Затем 0,1 мл взвеси испытуемого штамма-антагониста (эшерихий) наносили на среду Эндо у края чашки. Капля стекала с одного края наклоненной чашки Петри к другому. Посевы помещали в термостат в аэробном режиме и в анаэростат при давлении -О,5 атн. Через 18-24 часа учитывали антагонистическое действие эшерихий следующим способом: измеряли зону отсутствия роста в начале дорожки посева, образованной каплей, в середине и п конце нее. Каздый показатель делили на ширину самой дорожки посева в соответствующей части. Из трех показателей вычисляли среднее арифметическое. Вопросы количественной оценки антагонистической функции для измеряемых параметров требуют дальнейшей разработки. Задачей измерения, явилось приближение к стандартизации оценки антагонистической активности. На уровне достигнутого мы.считаем корректной альтернативность суждения о наличии или отсутствии антагонизма (рис.1).

Показатель антагонистической активности рассчитывали по Формуле :

ПА=А/В , где ПА-показатель антагонизма; Л - ширина зоны отсутствия роста; В - ширина посева на этом ке участке. В качестве тест-штаммов использовали S.flexneri, Citrobacter freundii, Klebsiella edwardsii.

Были исследованы фекалии ю нозорожденных па 4 сутки жизни, находившихся на естественном вскармливании 'в родильном отделении, организованном по типу "Мать-дитя". В возрасте 1 месяца было проведено повторное обследование , но уке 7 новорожденных данной группа. Детей, штаммы эшерихий

которых в указанные сроки не проявляли антагонистической активности обследовали дополнительно в 2-х и 3-х месячном возрасте. Полное бактериологическое исследование фекалий проводили, с целью определения эу- или дисбиоза, в соответствии с рекомендациями -А.Е.Эсселя, Л.И.Васильевой, Г.Г.Скляренко (1985). Определение антагонистической активности выделенных эшерихмй проводили -по модифицированной нами методике "стекающей капли".

Полученные результаты морфометрических исследований и определения антагонистической активности были обработаны статистически по специально составленной программе на компьютере 1ВМ РС АТ.

Всего было проведено 1242 опыта, 21796 измерений. результаты и обсуждение. Выделив одну из важнейших функций зшерихий, их антагонистическую активность, мы попытались выяснить; в каком возрасте у новорожденных, находившихся на естественном вскармливании, появляются штаммы, обладающие этим свойством. Обследовав группу детей на 4 и зо сутки жизни, некоторых в 2 и 3 месяца, мы выявили не только характеристики микробного пейзаха их толстого кишечника, но и получили данные о появлении зшерихий, обладавших антагонистическими свойствами.

На 4 сутки жизни было обследовано Ю условно-здоровых новорожденных, находившихся на естественном вскармливании. Состояние эубиоза толстого кишечника не было выявлено ни у одного ребенка. Дисбг»ктериоз 1 степени был выявлен у 5 новорожденных, дисбактериоэ 2 степени также у 5 новорожден-

ных. Выделение детей с дисбактериозом 1 и 2 степени являлось условным и было сделано для удобства, ибо в этом возрасте, на наы взгляд, нельзя еще говорить о дксбиозе, а лишь о незавершенном процессе становления фекального микробиоценоза.

Антагонистическую активность выделенных эшерихий определяли методом "стекающей капли" со следующими тест-штаммами: S.flexneri, Klebsiella edwardsii, Citrobacter freundii, E.coli, причем все тест-штакмы были лактозо-,негативными. У четырех детей из пяти с формальным дисбактериозом 1 степени антагонистическая активность E.coli на выявлялась. У одного новорожденного выделенные зшерихии обладали антагонистически!'! эффектом только к тест-штамму Citrobacter freundii в аэробных и полуанаэробных условиях культивирования, причем эти юз микроорганизмы вцдэлялись среди прочих представителей факультативной флоры в количестве lO3 КОЕ в 1 г фекалий.

У новорожденных с формальным дисбиозом 2 степени кишечная палочка не обладала антагонистической активность» у троих детей из пяти, у двоих была выражена - к штамму Citrobacter в аэробных условиях культивирования (табл.1). Из фекалий новорожденных этот штамм не выделялся, поэтому мЪжно с осторэхностью предположить , что мать была контаминирована этим микроорганизмом.

Таблица 1

Антагонистическая активность кишечных палочек новорожденных на 4-ый день гизни при формальном дисбиозе 1-2 степени.

\ тест-\ штамм \----\ Н штамма \ антагониста S.flexneri Klebsiella edwardsii Citrobacter freundii E.coli

Q -0.5 H -0.5 a -0.5 H -0.5

1 - - - - + + - -

2 - - - - - - - -

3 - - - - - - - -

4 - - - - - - ■ - -

5 - - - - - - • - -

6 - - - - + - - -

7 - - - - - - - -

8 - - - - - - - -

9 - - - - - - - -

10 - - - - + - - -

где Н штаммов с 1 по 5 - новорожденные с дисбактериозом 1ст.

с 6 по 10- новорожденные с дисбактериозом 2 ст. Здесь и во всех последующих таблицах: (+) - наличие антагонистической активности; <-) - отсутствие антагонистической активности; Н - культивирование в аэробных условиях ;

-О.5 - культивирование в полуанаэробных условиях (-0.5 атм).

Таким образом, на 4 сутки киЗйи новорожденных кишечная палочка у 7 из Ю детей антагонистической активностью не обладала ко всем избранным тест-штаммам, у 3

• - 12 -

\

новорожденных антагонистический эффект зшерихий был выражен только к штамму Citrobacter, что подтвердило наше предположение о том, что первоначально антагонистическое действие эшерихий проявляется к условно-патогенным тест-штаммам, которыми ребенок ковтаминируется практически' с первых дней жизни.

Так как у большинства детей выделенные эшерихии ■ антагонистической активностью не обладали, мы провели повторное обследование в этой ке группе новорожденных, находившихся на естественном вскармливании, но в возрасте 30 дней. Группа состояла из 7 детей. Дисбактериоз 1 степени был выявлен у 1 ребенка, дисбактериоз 2 степени - у 6 детей. Показатели антагонистической активности кишечных палочек распределились следующим образом (табл.2)

Таблица 2

Антагонистическая активность кишечных палочек у детей , в возрасте 1 месяца.

л

\ тест-\ штамм \----\ Н штамма \ антагониста S.flexneri Klebsiella edwardsii Citrobacter freundii E.coli

Н -0.5 В -0.5 Н -0.5 Н -0.5

1

. 2 - - - - + - - - -

3 - - ' - " - + - -

4

5 - - - - + + - -

е - - + + - - - -

7 - - ■ - + - -

Т 13 -

Как видео из этой таблицы, у четверых детей из семи, выделенные эшерихии обладали антагонистической активностью к штамму Citrobacter freundii, причем у одного штамма эшерихий в аэробных условиях, у двух - в полуанаэробных, у одного при обоих режимах культивирования. Еще у одного ребенка выделенные эшерихии проявляли антагонистическую активность к штамму Klebsiella edwardsii в аэробном и полуанаэробном условиях культивирования.

Тем новорожденным, у которых выделенные эшерихии не обладали антагонистической активностью на 4 и ЗО день кизни, проводили повторное обследование в 2 и 3 месячном возрасте. Сводные данные по становлению антагонистической функции кишечных палочек к различным тест-штаммам при культивировании в аэробных и полуанаэробных условиях у обследовании^ детей представлены в табл.3.

Таблица 3

Сводные данные становления антагонистической функции эшерихий.

сроки тест-штаммы 4 дня 1 месяц 2 м Зм

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 Ь 6 7 1 4 1

Shigella flexneri H

-0.5 +

Klebsi ella H

-0.5 +

Citro baeter В + - - - - + - - - + - + - - + - - - + -

-0.5 + - + - - - + - - - - - + - + - + - - +

E.coli H

-0.5 +

- 14, -

Таким образом, у новорожденных, находившихся ыа естественном вскармливании, к 3О дшо жизни происходит становление антагонистической функции .эшерихий к

условно-патогенным тест-штаммам Citrobacter freundii и

Klebsiella edwardsii; к тем штаммам , с которыми организм

>

новорожденного впервые встречается , и которыми, быть может, конгаминируется от матери, медицинского персонала и т.д. Видимо, в пределах указанного срока , процесс становления полноценных ' антагонистических свойств зшерихий остается ' пезавернешшм или кишечник еще пе . колонизирован полооцазиш-м в антагонистическом отношении эшерихиями. И только потом, к 3 месяцам и позже , проявляется антагонистическая активность к облигатно-патогенным штаммам. Таким образом, при сравнении антагонистических свойств эшерихий, ввделенншс в период первых ЗО дней жизни человека, со итаз-мами, полученными в более поздние (старше 1 года) сроки гизпи, последние обладали (в пределах тестов) полным (в том числе и к S.flexneri) гштагопнстическим^ диапазоном.

- Несмотря па многообразие механизмов антагонистического действия , его становление необходимо (с целью получения диагностических опорностей зубиоза) изучать для

основных (не только зшерихий) представителей микробиоценоза. 1

Можно полагать, что антагонистическая функция достигает полноценного развития в условиях стабилизированного и сбалансированного микробиоценоза. Конечно, в формировании антагонистической функции следует учитывать и "столкновения организма ;гозяипа" с условнкки и облигатньгми патогенами. Естестоавно, что в обьгчных условиях " участншсаки"' первых

- ir. -

встреч являются условно-патогенные микробы. К ним ранее всего и формируется антагонистическая функция.

То, что первичная экзогенная контаминация является первоисточниковой в формировании кишечной микрофлоры каждого индивидуума - очевидно. Вместе с тем, остаются ли штанмовые свойства каждого отдельного вида неизменными на протяжении дальнейшей жизни хозяйка, изменяются ли свойства штаммов, или se происходит смена штаммов, представляющих тот или иной вид в системе формирующегося микробного биоценоза организма человека, остается малоизученным. Эти вопроси представляются ключевыми не только в теоретическом, но ив прикладном плане, в частности, в разработке подходов и методов получения, микробиологической ; . информации о микробном биоценозе и \ ее интерпретации. Для решения данных вопросов представлялось необходимым ; изучение внутриштаммовой изменчивости /высо:состабил11зированного , ! -антагониста В,coli; М-17. При этом, с учетом о&дей характеристики вида, как факультативно1« анаэ^ба,'оцешгаали ; ; морфометрически в трёх рсжимахкультивироваиии (аэробный, анаэробный -1 атм., полуанаэробпый -О,5 атм.) исходную популяции штамма и субпопуляции. Опыты показали, что , rio данным , . морфометрии Наибольшие размеры клеток.и колоний эшерихий ;; определяются в полуанаэробном резшме культивирования '(табл.5)..

Таблица 5

Диаметры колоний и длины бактериальных клеток (в мкм) для E.coli Н-17 в разных режимах культивирования.

Н опы -та Давле ние (атм) П о к а з а т е л и

X б бх .V %

d 1 d 1 d 1 d 1

Н 29.6 1.6 7.0 0.5 1.3 0.1 23.8 35.3

1 -0.5 45.1 2.5 9.5 0.9 1.8 0.2 21.1 34.8

-1 27.2 1.7 3.9 0.6 0.7 0.1 14.5 37.1

Н 812.4 1.6 270.9 0.5 50.3 0.09 33.3 31.9

2 -0.5 1337.3 1.9 217.8 0.6 40! 4 0.1 16.3 30.5

-1 862.5 .1-6 125.4 0.6 23.3 0.1 14.5 37.5

Н 368.6 1.3 143.6 0.4 26.4 0.08 38.9 33.9

3 -0.5 1094.7 1.5 217.1 0.5 40.3 0.09 19.8 30.6

-1 701.0 1.8 108.6 0.8 20.2 0.1 15.5 45.7

d - диаметр колоний ; 1 - длина бактериальных клеток ; Н - культивирование в аэробных условиях ;

-О.5 - культивирование в полуан&эробных условиях (-0.5 атм); -1 - культивирование в анаэробных условиях (-1 атм). Даже воздействие супермутагена - налидиксовой кислоты - не вызывало существенных морфометрических сдвигов, а если и приводило к таковым, то при возвращении к обычным условиям культивирования изменившиеся субкульту!« реверсировали к исходной форме.

Также была проведена серия опытов по определению антагонистической активности эшерихий по отноиению к классическому тест-штамму S.flexneri и к штаммам условно-патогенных видов Citrobacter freundii и Klebsiella

edwardsii. Характеристики показателей чувствительности классического тест-вггамма шигелл, существенно не отличаются от таковых для штаммов клебсиелл и цитробактера по антагонистическому действию эшерихий в различных режимах культивирования для популяции в целом.

Поэтому относительно умеренная колеблемость показателей антагонистической активности штаммов-антагонистов и чувствительности субпопуляций тест-штаммов свидетельствует о стабильности соответствующих свойств и обосновывает включение теста на определение антагонистической активности эшерихий в общую схему исследования эу- или дисбиоза, что . в настоящее время не проводится.

ВЫВОДЫ.

1. По показателям длины бактериальных, клеток и диаметра колоний популяция стандартного штамма E.coli М-17 неоднородна в различных режимах культивирования. Наибольшие показатели встречаются при давлении - О,5 атм.

2. Популяция штамма E.coli М-17 неоднородна по вышеуказанным признакам. В присутствии супермутагена - налидиксовой кислоты наибольшие размеры клеток встречаются в полуанаэробном режиме {-О,5 атм).

3. Популяции и субпопуляции исследованных штаммов эшерихий E.coli М-17, E.coli I, E.coli 73, E.coli 75 неоднородны по антагонистической активности к различным тест-штаммам.

4. Популяции и субпопуляции тест-штаммов шигелл, клебсиелл, цитробактера неднородны по чувствительности к штаммам антагонистам.

- . 1В -

5. Характеристики показателей чувствительности классического тест-штамма ккгелл существенно пе отличаются от таковых для штаммов клебсиелл и- цитробактера по антагонистическому действию эшерихий. Это является основанием для рекомендации замены классического патогенного штамма предлагаемыми нами условно-патогенными.

6. Метод "стекающей капли" для определения антагонистической активности лактозопозитивних эшерихий удобен, прост, экономичен и не менее информативен, чем методика отсроченного антагонизма.

7. Эшерихии, о5ладакжр-1э антагонистической активностью, появились у большинства обследованных детей, находившихся на естественном вскармливании к ЗО даю.

8. Антагонистически активность эшерихий, выделенных от детей ва 4, ЗО сутки жизни, чаще выражена к штамму Citrobacter freundii, реке к штамму Klebsiella edrardsii и не проявляется к классическому тест-звтамму S.flexneri.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Регулирующее влияние кислородного режима и общего давления на развитие культуры кишечной палочки. // 44 итоговая научная конференция студентов, молодых ученых и специалистов РОДОМИ : 'Гез. докл. - Ростов-на-Дону, 19SO.-- С.80.

2. Гетерогенность бактериальной популяции по чувствительности к кислороду, ее диагностическое значение и перспективы (А.Е.Эссель). - // Тез. докл. научно-практической конференции, посвященной БО-летию ГОДНКК. Ростов-на-Дону, 1990. С. 2БО.

3. Морфометрическое изучение клеток и популяций эшерихий в различном режиме аэробности и общего давления ( Н.Больтенко, Г.Галикян ). - // 45 итоговая научная конференция студентов, молодых ученых и специалистов РОДНМИ: Тез. докл. - Ростов-на-Дону, 1991. - С. 54.

4. Использование клебсиелл и .цитробактера в качестве тест-штамма для определения антагонистической активности эшерихий. // 46 научная итоговая конференция студентов, молодых ученых и специалистов РОДНМИ: Тез. докл.-Ростов-на-Дону, 1992. С.52.

5. Антагонистическая активность Е.col i у детей первого года жизни. // 47 научная итоговая конференция студентов, молодых ученых и специалистов РОДНМИ: 'Гоз.докл. Ростов-на-Дону, 1993. С. 55.

6. Становление антагонистической функции эшерихий п неонатальном периоде жизни ребенка. //48 итоговая научная конференция студентов, молодых ученых и специалистов РОДНМИ : Тез. докл. - Ростов-на-Дону, 1994. С. 17.

7.' Определение антагонистической активности эшерихий. //Методич. рекомендации. Ростов-на-Дону, 1994, 6 с.