Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Герпесвирусная инфекция в условиях облучения и пути ее иммунологической коррекции

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Герпесвирусная инфекция в условиях облучения и пути ее иммунологической коррекции"

о* *

' ^ РОСХЖЯСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК

НАУЧНО-ИСОЕДОВАТЕЛШШЙ ИНСТИТУТ ВИРУСОЛОГИИ ИМЕНИ Д.И. ИВАНОВСКОГО

На правах рукописи

х /

АЛИМБАРОВД Людмила Михайловна

ГЕРПЕСВИРУСНАЯ ИКФЕКЩШ В УСЛОВИЯХ ОБЛУЧЕНИЯ И ПУТИ ЕЕ ШОТШОГИЧЕСЯОЙ КОРРЕКЦИИ

Специальность 03.00.06 - Вирусология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

МОСКВА - 1994.

?аоста Еыпслнека в НИИ вирусологи» имени Л.«. ИвансЕскогс РАМН Лирекгор Института - Академик РАМН. профессор Д. К. Львов

НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ: - доктор медицинских каук, профессор И.Ф. Баринский

- лектор медицинских наук Н.Д. Львов

ОФИПИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТУ: - доктор медицинских каук С.Г.Чешик

- доктор медицинских наук, профессор А. Ф. Бочаров

ВЕДУЩЕЕ УЧРЕЖДЕНИЕ Российская Кздвднская Акадеяия последиплокного образования

Зашита диссертации состоится е " 'V" часов на

МЖ^Ргш г.,

-7-

заседании специализированного совета 25 001.20. СЕ ври ЕИИ вирусологии им. Л- И. Ивановского РАМН по адресу: 123098, Москва, ул. Гамалеи, 16.

С диссертацией можно ознакомиться, в библиотеке НИИ вирусологиу имени Д. И. Ивановского РАМЕ

Автореферат разослан "//'

1994 г.

Ученый секретарь Специализированного совета, кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник

А. И. Жуковский

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Заболеванияобусловленные вирусом простого герпеса, занимают одно из ведущих мест в тоьекпшаюй патологии человека ГБаринский И.Ф. и соавт. .1986, Bulletin of the WO. 199V..

Учитывая тот факт, что вирус простого герпеса (ВИГ) иожет реактивироваться при латентной или хронической формах инфекпии под влиянием ряда факторов, снижающих интенсивность реакции клеточного звена иммунитета, в том числе ионизирующего излучения (Worthingt.cn list al.1980. Со-pez С. et al, 1986. Вотяков Е и соавт. ,1993), представляет интерес изучение течения герпесвирусной инфекции как у лиц, подвергшихся воздействию облучения по медицинским показаниям, так и у лиц. проживающих на территории, загрязненной радионуклидами вследствие аварии на Чернобыльской АЗС. И хотя имеется обширная научная литература, отражающая вопросы патогенеза, клиники, терапии лучевой болезни в герпесвирусной инфекции (Шубик В. М., 1987. Холл Л, 1989, ЕаринскийИ. Ф. и соавт., 1985), "многие зспекты остаются далеко не "изученными; в частности, вопросы иммунитета у лиц, инфицированных В11Г и подвергсзхся воздействию облучения, возможности использования специфических протавогерпетических препаратов (вакцины, иммуномодуляторов) для коррекши .иммунных нарушений у дачной категории больных.

Суммируя все вышеизложенное, можно сформулировать-цель и задачи настоящего исследования.

Дели и задачи исследования. Основной целью настояией работы явилось изучение Т-и В^систем иммунитета, специфических реамий противовирусного ^иммунитета: в эксперименте на модели лабораторных хпвотных, инфицированных ВПГ и подвергнутых облучению, при кливико-вирусологическом обследовании людей из зон последствий аварии на ЧАЭС; выявление в эксперименте эффективных, в отношении герпесвирусной инфекют, коррекции иммунного статуса, протавогерпетических и иммуносттдгаирувдих препаратов с последующим использованием данных для разработки агекватных методов терапии этой категории больных.

Необходимым условием достижения поставленной пели явилось решение, следующих задач;

1.. Изучение реакций противовирусного иммунитета у лабораторных жи-

вотных, инфицщгванных ЕПГ и подвергнутых облучению.

2. Изучение реа'ший противовирусного иммунитета у больных ВПГ из зон с неблагоприятна! радиационным фоном.

3. ПроЕеден® .оценки эффективности применения герпетической поливакцины, индукторсЕ интерферона, иммуномодуляторов, а так же их комбинаций е терапии герпетического иммунодефицита, индуцируемого облучением, используя в качеове критерия динамику иммунологического статуса.

4 Изучение свойств вновь синтезированных препаратов (ВАШ и вегетан) и определение шрепективы их использования для повышения иммуногенности герпетической шшвакцины.

Научная новига работы: Впервые проведена экспериментальная оценка эффективности применения индуктора интерферона -ларифина, иммуностимулятора миелопида, герпетической поливакцины, а также их комбинаций при лечении герпесвгрусного иммунодефицита у подвергнутых облучению животных. Установлена, сто коммерческая герпетическая поливакцина является не только протиЕшруснш препаратом, ко и радаопротективным средством.

Исследовано вгияние радиации на течение герпетической инфекции, иммунологические зиказатели у детей 4-15 лет, проживающих на территории, загрязненной радионуклидами в результате аварии на ЧАЭС. Персистенгная герпесвирусная кфекция выявлена у 9СЖ обследуемых детей и в 5 случаях подтверждена ввдглением вируса из крови. Противовирусные антитела к ВПГ -1 и 2 типов был обнаружены у детей из зон радиационного контроля (ЗРК) в титрах достоверно более высоких по сравнению с таковыми у их сверстников, . приживающих на территории "чистой" зоны. Выявлены нарушения в клеточном» гуморальном звеньях иммунитета, в системе интерферон»- 1 образования, кешецифической защиты у детей из ЗРК.

Проведено изущние вновь синтезированных препаратов (БАШ и вегетан) на предмет их прптивогерпетической активности и возможности использования для повышена, иммунногенности коммерческой герпетической поливакцины. Установлен, что вегетан и ВАШ обладают выраженным активирующим свойством в отнзешш лимфоидных клеток. Сочетание вегетана и герпетической шливавдны обладает синергидньш эффектом и способствует увеличению Еыживаешсти и средней продолжительности лизни жиеотных экспериментально инфицированных вирусом простого герпеса, стимулирует антител ообрааование, повышает функциональную активность йммунокомпе-тентных клеток.

Основные пожавши, выносимые на защиту:

1. Противогерпетическая вакцин, индуктор интерферона-ларфан, имму->стимулятор миелопид, а таk.v их комбинации, являются аффективными ютивовируснымн препарата!,v в терапии герпесвирусной иифегаии, проге-иоцей на фоне облучения. ■ .

2. Выявлены нарушения функционирования клеточного, гуморального зеньев иммунитета, системы интерферона, неспедафической зашиты у лиц, фицированных вирусом простого герпеса, и проживающих на территории, агрязненной радионуклидами вследствие аварии на Чернобыльской АЭС.

3. Вновь синтезированные препараты -вегетан и ВАШ о&кдаят выражен- . ыми активирующими свойствами в отношении лимфоидвых клеток; кроме того репарат вегетан имеет высокую противогерготическую активность in vivo.

4. Сочетание герпетической поливакцины и вегетана обладает синергид-. ым противогерпетичёским эффектом, способствует стабшшзазт показате-ей гуморального и клеточного звеньев иммунитета

i Практическая значимость работы. В результате проведешию экспери-йнтального исследования получены данные, . обосновывайте целесообраз-юсть применения герпетической поливакцины, индуктора интерферона лари-зана, иммуностимулятора, миелогода, а также их комбинаций у лиц, инфици-юванных вирусом простого герпеса и проживающих на терриясни, вагряз-енной радионуклидами в результате аварии на ЧернобылъсксЗ АЗС. Измене-шя в клеточном и гуморальном звеньях. иммунитета, в системе штерферонообразования и неспецифической зашиты, выявление у детей из ЗРК, могут быть испольюваны в качестве критериев оцени активности герпесвирусного процесса и контроля за эффективностью мм^нокоррегирую-' дей терапии. Для достижения высокого лечебного эффекта в терапии герпесвирусной инфекции, а такав для последующего клинишяого изучения рекомендовано сочетание применение герпетической поливзггяны и ймму-ноегимузягора вегетан.

Апробация работа

Результаты исследований были представлены и оссуядгза на конкурсе молодых ученых НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского' ИМЯ (Москва, 1993), на юбилейной научно-практической конференции "Актуальные проблемы инфекционной патологии" в НИИ эпидемиологии и микробзеогии им. Пас-тера (Санкт-петербург, 1993), на конференции молодых учепз России РАМН "Здоровье и болезни человека на рубезке XXI века" (Москва, 1994).

Диссертация апробирована 28. июня 1994 г. на заседания Экспертного совета по предварительной экспертизе диссертационных работ при НИИ вирусологии им. Д. Л Ивановского РАМЕ

Публикации. По материалам диссертации опубликовано б работ.

Структура и сйьем диссертации.

' Диссертация гзюжена ка_страницах машинописного текста и состоит

иг ВБедейия, обзора литературы,' описания материалов и методов, S глав собственных исслаюваний, обсуждения результатов, выеодов' и указателя

литературы. Ви&ихография включает _отечественных и_зарубежных.

источников литературы. Работа иллюстрирована_таблицами. 1 фотографией и_рисунками.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

МАТЕРИАЛЫ И 1ЯГОДЫ.

Вирусы. В работе использовали вирус простого герпеса, 1-го антигенного типа, иггама "L2", полученный из музея вирусов Института вирусологии им. Д. И. йезжшского РАМН; вирус болезни Ньккастла (ВЕН), штамм 'Т^акзас" .и вирус везикулярного стоматита (ВВС) штамм "Индиана" любезно предоставленные sau ст. научн. сотрудником лаборатории онтогенеза вирусов НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского РАМН JL А. Лаврухиной.

Животные. Зксшриыетальная часть работы выполнена на инбредных мышах, самцах, дшзй Balb/c, СВАхС57 Black/Fl массой 7-8 гр., 16-18 гр.; 18-22 гр., а таннэ та аутбредных белых мышах обоего пола массой 7-8 гр., полученных ш питомника "Столбовая" РАШ.

Додели инФекдЕЗ. Аутбредных белых мышей заражали интрацеребрально в объеме 0,03 мл кззкулома, содержащего ВПГ-1, шт. "L2"; инбредных мышей , (Balb/c; СВАхС37 Black/Fl) заражали внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл или J внутрикожно (в шдушечку задней лапки) в объеме ОД мл ивокулома, содержащего ВПГ-1 гг. "L2". Лоза вируса (в зависимости от цели исследования) составила 2;10-ДЮ {¿50.

Облучение. №еей (самцы линии СВАхС57 Black/Fl массой 18-22 гр.) ' подвергали однократному, равномерному, общему облучению на установке ИГУР гамма-квантами .Cs 137-при мощности дозы излучения 1,54 Гр/мин. в диапазоне доз от 100 до 850 Р.

Облучение животных проведено в Институте биофизики МЗ России.

Препараты.

Герпетическая вакцина , (культуральная. тканевая, инактивированная формалином, поливалентная, жидкая) выпускается Одесским предприятием по производству бактериальных, препаратов, в ампулах по 0,3 мл.......

Индуктор интерферона (ИШП- ларифан, представляющий собой двуспи-ральную рибонуклеиновую кислоту (дс РНК фага f2), синтезирован в Инсти-

гуте микробиологии им. Л.Кнрхенштейнь АН ЛатБии. Екпускзется экспериментальным заводом ИОС Латвии в ампулах по Ю иг в лиофилигироБанном виде.

Иммуномодулятор - 'миедопил. предложенный для клинического изучения в ленйлаконах по С.Р. мг е лиофилизисованном виде, любезно предоставлен Степакенко Р.Н. (Институт иммунологии РАМН).

Иммуностимуляторы: иегетан - гликопротеид растительного происхождения, синтезирован в Институте иммунологии РАМН, любезно предоставлен Чекановской Л А.; "БАШ" - псевдодипептид, содержащий в своем составе гетероциклическое имидазольное кольцо, синтезирован в Институте вирусологии им. Л. И. Ивановского, любезно предоставлен Семилегошм Ю. А.

Для характеристики влияния облучения на механизмы противовирусной резистентности у мышей использовали как общепринятые культуральные, вирусологические методы, подробная характеристика которых представлена в соответствующих разделах работы, так и методы молекулярт-биологические (индикация нуклеотидкых последовательностей ВПГ-1 по Мяиаиэ Т. е1 а1. ,1984), иммунологические (изучение пролиферативной аетивности спле-ноцитов' с фитогемагглкггинином и антигеном БПГ-1 по методзсе Каулен Д. Р. и соавт. ,1982; изучение гуморального звена иммунитета в реакции биологической нейтрализации и в пероксидаэном варианте ишуноферментгого анализа (ЕЫЗа); исследование наличия вирусспецифического антигена в органах инфицированных животных с помоиью ИФ-теста и ИФ& (Е1ЛЗа); исследование способности клеток селезенки и костного мозга продуцировать альфа- и гамма-интерфероны.

Кроме того, материалы диссертации базируются на анатазе данных обследования 131 ребенка, находившегося под наблюдением в Московском Ег/ч-ко-Исследовательском Институте педиатрии и неотложной мрургии МЗ России. Опытную группу составили 101 ребенок, проживающий на территории, загрязненной радионуклидами, вследствие аварии на-ЧАЭС, среди которых 40 детей в течение первых 4-5 лет проживали на территории 1-й зоны ра- . дотационного контроля, а затем переехали на территорию с благоприятным радиационным фоном, и 61 ребенок постоянно проживающий ва территории 2 ЗРХ (Брянская область, Россия). Среди этих детей 52% бша с неврологической патологией, ■ 42% 7 с патологией лор-органов, 392 - с патологией сердечнососудистой системы, 39% - с патологией щитовидной железы, 31% -с патологией мочеполовой системы, 237. - с патологией хелудочно-кишечного тракта Контрольную группу составили 30 практически заоровых детей,

проживающих на территории "чистой" зоны.

Для определены антител к ВПГ-1, 2 типов в сыворотке крови использовали метод тверюфазного иммуноферментяого анализа (ELISa); для выявления ' вирусспецнйнческого антигена БЕГ в мазках крови исследуемых детей применяли прямей метод флюоресцирующих антител; выделение вируса из крови проводила по общепринятой методике, подробное описание которой представлено в соответствующем разделе работы.

Наряду с вирусологическим обследованием детей проводили иммунологическое обследование .в соответствии с методическими рекомендациями по оценке иммунного статуса человека, разработанными Петровым Р. В. и со-авт., 1984.

Постановка реющий клеточного иммунитета осуществлялась с лимфоцитами, выделенными вз гепаринизированной Еенозной крови на градиенте плотности фиколл-гигак (Boljura , 1968).

У детей изучались: содержание лейкоцитов; абсолютное и относительное ■ содержание Т-лии^оцитов в периферической крови в реакции розеткообразо-вания (E-РОК) ш методу Jondal et al, 1972, в модификации Петрова Р. В. и соавт.', 1984; суЗпопулящи Т-лимфоцитов, в том числе чувствительные к действию теофилина (Тсуп.) и резистентные (Тхелп.); функциональную активность лимфоцшов в реакции бласттрансформации с специфическим антигеном и фитогемзяглзот'иншюм оценивали по индексу стимуляции, (Каулен Д. Р. и соавт., 132). Функциональную активность В-клеточного звена иммунитета оценивала по содержанию основных классов иммуноглобулинов А, М, G (метод простой радиальной иммунодшйузии в геле по Mancini et al,1965). Такж определяли уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотка, крови .по Новикову Д. К. и соавт., 1982.

Оценку интер^еронового статуса проводили по трем основным показателям: 1) уровню царкулирующнго интерферона (ИОН) в сыворотке крови; 2)' по уровню продукции альфа-ИФН лейкоцитами при индукции ВБН; 3) по уровню продукции гаиейФН лимфоцитами при индукции фитогемагглютинином (Соловьев В. Д., Беагеыиров Г.А., 1981; .Ершов Ф.И. и соавт., 1986).

Статисгическуп обработку данных проводили на PC-IBM-AT с использованием, пакетов прикладных программ статистических расчетов (Windows, version ) и учетом рекомендаций, приведенных в монографиях Урбаха В.Ю. (1575), Райскина М.Е. (1989). Результаты считали достоверными при доверительном пределе р<0,05; р<0,01.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

Изучение влияния однократного вненнего облучения на развитие инфекционного процесса, обусловленного вирусом простого герпеса, у

№пзей.

1ервоначально нами была определена чувствительность облученных жи-ных к инфицированию вирусом простого герпеса Для этого шшей-самцов ли СВА х С57 Black/Fl массой 18-22 гр однократно обгучали гам-квантами. Csl37 на установке "ИГУР" в диапазоне доз от 100 до 850 Р, атем, через 3 дня после облучения, заражали (ютраперитояеально) ви-:ом простого герпеса 1-го антигенного типа, „штамм L2 в дозе 100 Ю/0,2 мл. О чувствительности облученных животных к инфицированию ВПГ судили по разнице в показателях гибели и средней продоиигельности зни у жиеотных, подвергнутых только облучению (в ¿оотаетствующей дои у животных, испытывающих двойное воздействие облученяя и инфици-

Бри облучений мышей в дозах ниже 400 Р общее состояние животных радало мало и почти не отличалось от состояния животных, не подверг-гых облучению в течение всего периода наблюдения. liait видно из данных блицы 1, дозы от 100 до 250 Р вызываот гибель не более St животных, двергнутых только облучению; в то время как в группе обзученных, в неуказанных дозах, и инфицированных - процент гибели -колеблется в «делах от 5 до 15% соответственно. Что же касается показателя средней юдолжительности жизни, то в груше облученных и инфицированных живот-к он был со значительной степенью достоверности ниже аналогичного по-1зателя в груше только облученных ливотных (р< 0,05). Облучение в дозе 400 Р приводило к гибели 5Z только сбгученных жи-этных, одновременно увеличивая до SOI гибель в группе каютных, подогнутых двойному воздействии облучения и инфицирования.

Осблучеше шшей е дозе 550 Р приводило не только к статистически зстоверному увеличению гибели животных, - подвергнутых облучению и инфи-ированию, до 100% (в то время как в группе только облученных гибель оставила 10%), но и снижению их средней продолжительности жизни.

Дозы облучения, превышавшие 600 Р были абсолютно смертельными как ля мышей, подвергнутых только облучению, так и для мышей, подвергнутых блучению и инфицированию. Показатели же СПЖ в группах только облучен-

5ания (таблица 1).

ных животных в среднем на 1-3 суток превышали аналогичные в грушах облученных и инфвдрованных мышей.

Таким образси» из выгапредставленных данных следует, что облучение и последующее инфицирование- мышей 'ВИГ способствует- увеличению их гибели и снижению средвЕй продолжительности жизни по сравнению с аналогичными показателями в группах только инфицированных или только облученных животных. Все это свидетельствует о том, что облучение (особенно в дозах

Таблица 1. &Енение резистентности инбредных мшей к инфицированию ввдсом простого герпеса в результате облучения.

Исследуемая щппа ( погибло ЕЗ )

Доза Средняя продолжительность облДР) жизни, сутки, Ш-м

облученные обз. + инфиц: облученные обл. + инфиц.

абс. ' Z 35=. г

0/20 0 1/2Q 5 100 - 10, №-0

0/20 0 3/20 15 200 - 19,0+-5,2

0/20 0 S1D 15 250 • 13.5+-6Д

1/20 5 зт 15 325 ' 7.СН-0 8,34-6,1

1/20 5 18/20 90 №0 14,0-0 14,04-1,8

2/20 .10 2Qffi0 100 550 12,№-1,6 . 10, OHU 5

15/20 75 20/20 100 600 14,64-2,6 10,24-1,9

20/20 100 2QÍ20 100 703 11,7+-l,Q 8.СН-0

20/20 100 20/20 100 800 11.1+-1.8 9,6+-0,92

20/20 100 2CV20 100 850 11,8-1-2,0 10,74-1,5

Контроль облучена (интактные) 0/20 О

Контроль инфицирования

2/15 13

свыше 400 Р) приодет к значительному снижению естественной устойчивости организма к ярусной инфекции, в том числе и герпесвирусной, а инфицирование усугуйюет течение патологических изменений, обусловленных

- и -

радиационным воздействием.

Данный тезис основывается также на данных патоморфологяческого изучения органов облученных и инфицированных животных, данных лабораторных методов исследования по.выявлению вирусспецифического анигена в органах-мишенях, противовирусных антител в сыворотке крови, функциональной активности иммувокомпетентных клеток. Так, при выявлений вирусспецифического антигена в органах (печень, головной мозг) как толшо инфицированных, так и облученных и инфицированных животных, нами были отмечены сходные локализация и динамика интенсивности свечения анигена на протяжении всего (30 дней) периода наблюдения. Кроме того, несмотря на то, что однократное равномерное облучение мышей в диапазоне да от 100 до 325Р и последующее их инфицирование ВПГ, не -вызывало значительной гибели и видимых изменений органов и тканей, нам удалось ььветть вирусспе-цифический (герпетический) антиген в органах животных., повергнутых вышеуказанным воздействиям. . Интенсивность же свечения антигена (его концентрация) в органах животных, облученных в дозах свызг 550Р и впоследствии инфицированных ЕПГ, была более высокой по сращению с таковой в группах животных, облученных в меньшем диапазоне доа Дггпгое явление, очевидно, связано с тем, что облучение в указанных дозах, приводящее к более раннему радиационному поражению органов и тканей у таких животных, не влияет на способность вируса простого герпеса к ргародукции. .

Кроме того, на 9-е сутки после облучения, нами выявлена тенденция к снижению титров вирусспецифических антител к ЕПГ (до 30-50) в сыворотке крови животных, подвергнутых облучению и последующему шфяцированию, по сравнению с аналогичными показателями у только инфицированных животных (титр антител равен 270), что, по7видимому, обусловлено как более высокой радиочувствительностью реакции В-клеточного звена игаунитета, так и нарушением связи в кооперации Т- и В-лимфоцитов. К 18-м суткам (после облучения) наблюдается плавное увеличение титров 1еСг-аЕшгед до уровня, практически не отличающегося от аналогичного показателя в группе мышей, подвергнутых только инфицированию. Увеличение титров анпггел, очевидно, связано с интенсивными решративными процессами, проиаздящими в организме животных. Полученные наш результаты об антителоо^ззовании у животных. подвергнутых облучению согласуйся с данными, гредставленными Ярилиным А. А. и соавт. ,(1980), Шубик В.М.,( 1987).

При изучении ' в эксперименте функциональной активности иммунокомпетентных клеток у животных, подвергнутых, как облучению, так и инфицированию ВПГ в реакции бласттрансформации с митогеиаш - ^специфическим -фитогемагглютинином (ФГА) и специфическим антигеном ВПМ были выявлены

следующие пзме.^ия. Спонтанный ответ у мышей, подвергнутых облучению и иншцироБакию Ска статистически" достоверно Еьазе уровня, наблюдаемого у интактных 1р<0.га, з то же время, в 1,4-1,6 раза ниже, чем е группе только инчмцировакньк или только облученных животных и составил 2,923+-0.177.x 10 имплвт. Митогениндуцированкая способность спленоиитов (е" ответ на ФГА) бша со значительной степенью достоверности снижена по отношению к показателям у интактных, только облученных или только инфицированных мышей (индекс стимуляции на ФГА не превышает, в данном случае, 1.79+-0ДЗ, (рс0,001). фи изучении антигензависимой пролифератив-ной способности саденоцитов в груше облученных и инфицированных мышей отмечено снижение ответа на антиген ВПГ (ИС равен 0,5+-0,01). В более поздние сроки после облучения (17-е сутки) наблюдается повышение анти-. гензависимой прсннферагивной способности спленоцитов до уровня, равного 2,СН-0,79 (р<0,06}-

ЗДхЬекгивность применения иммунокоррегируюшей терапии (герпетической поливакшш, индуктора интерферона - ларифана, иммуностимулятора- миелопида. а также их комбинаций) при экспериментальной гер-петичеашй инфекции у мышей, подвергнутых облучению.

Как известно, ионизирующее излучение (ИИ) приводит к снижению иммунологической реактивности организма, что способствует реактивации латентных инфекций (герпесвирусной природы в том числеНЩубик ЕМ., 1987, 1989, МэгШ1пйЬэп Ы. et а1, 1937).

В связи с этим необходам поиск препаратов (вакцин, иммунокорректор-ов), обладающих как антивирусной активностью, так у некоторыми радиоп-ротективными свойствами, которые могли бы быть средством выбора е терапии инфекционных осложнений у людей, подвергшихся радиационному воздействию.

В литературе встречаются данные о том, что некоторые вакцины при определенных усланих введения обладают способностью активизировать ответ иммунной система на воздействие инфекционного агента и создавать устойчивость к воздействию ИИ; например, некоторые живые вакцины - ЕЩЕ, сибиреязвенная вакаика; убитые вакцины из грам-отрицательных бактерий (сальмонелл, Е.СЬШ. В то же время, введение таких вакцин, как бруцеллезная, туляремкная; иг грам-положительных бактерий (стрепто- и стафилококков) отягсвает состояние облученных животных.

Все это и "Объясняет наау заинтересованность е использовании герпетической инактивироЕанной поливакцины (ГВ).

Известно, что. герпес является одной из самых распространенных вирусных инфекций человека и проблема вакцинации для лечения этого заболевания весьма актуальна (Баринский И.Ф. и соавт. ,1985, Botstob В. И. и со-авт., 1992). ГВ обладает иммуномодулируклетм эффектом: нормализует анти-телообразовакие, активирует специфические реакции клепиного иммунитета, снижает содержание lg Е, подавляет кожную гиперчувспательность немедленного типа к БПГ, повышает пролиферативные способвости лимфоцитов, ИРЛ, обеспечивая, таким образом, смягчение клинических проявлений болезни, удлинение периодов ремиссии, а в ряде случаев, позволяя добиться полного прекращения рецидивов (Баринский И.Ф. и соавт.", 1926, Вотяков В. И. и соаЕТ. ,1992, Klein R. et al, 1981). Остается не изученной ради-опротективная роль антигенов ВПГ.

Нами проведено исследование возможности применения ГВ в качестве протектора и лечебного средства при облучении (Таблица 2). Однократное подкожное введение (через 3 часа после инфицирования-/ чаи 72 ч. после облучения) ГВ облученным в дозе 400 Р и иифишраватм ВПГ-1 мышам (самцы) лиши СВАхС57 Black/Fl способствовало снижению гибели последних до 25Z, достоверно защищая, таким образом, 307. особей; в-то время, как гибель в груше животных, не обработанных вакциной составила 552. (При введении инфицированным ВПГ или облученным животным - противогерпети-ческая вакцины таюке снижала гибель последних до. 51 (защитный эффект составил 25%) и до 0Z соответственно))" Снижение смертшсги, и увеличение защитного эффекта среди животных опытных групп, по-яиимому, связано со способностью вакцины активировать реакции иммунитета. Таким образом, в данных условиях эксперимента ГВ обладала противолучевой эффективностьа

Учитывая данные литературы (Баринский 51Ф. и соавт. Д986) ). о необходимости сокращения кратности введения ГВ у лиц, страдающих рецидивирующим герпесом, мы изучали тага© эффективность кшЭянации вакцины с перспективными, с практической точки зрения, препаратами: ларифаном и . миелогмдом. ■ . .

Табл. 2 Защитный эффект герпетической вакцины, ларифана, миедопида и их кокйинаций при экспериментальной герпетической инфекции у мышей, облученных в дозе 400 Р.

Исследуемая группа Доза обл. (Р) Погибло / из абс. % Защитный эффект

Обл.+ С вакцина+дарифан) 403 . ' 0/20 - 5~

Обл-+ ( вакцина+ше лопид) 400 0/20 - 5~

Обл. + вакцина 400 0/20 5~

Контроль обл. 400.' 1/20 5

Обл. +инфиц. +(вак. +лар.) 400 2/20 10 45"

Обл. +инфиц. +(вак. +те-л) 400 1/20 5 50"

Обл.+ инфиц. + вакцина 400 5/20 25 зет

Обл. + инфиц.. 400 11/20 55 •

контроль инфиц. 6/20 30

инфиц. + вакцина - 1/20 5 25~

инфиц. +ларифан. - 4/20 20 10~

инфиц. + (вак.+ларО - 1/20 5' 25"

инфиц. + миелопид - 0/20 ЗСГ~

инфиц.-+(вак ) - 0/20 зсг~

- степень достоверности Р< 0,05

- 15 -

~ - ^степень достоверности Р> 0,05

Использование вакцины в комбинации с ларифаном (через Зч. после инфицирования) снижало гибель облученных и инфицированных -животных до 10%, обеспечивая-достоверную защиту 45% особей, по сравнению с облученными и инфицированными, -но не леченными животными. Разниц между показателями, полученными при использовании вакцины в моноварианте или в комбинации с ларифаном была статистически не достоверной (р>0,05). (Введение ГВ + ларифан инфицированным или облученным животным приводило к уменьшению гибели последних до 5%, обеспечивая статистически значимую защиту 25% особей (р<0,05), и до 0% соответственно).

По данным Варинского IIФ. и соавт. ,1985, Львова Н.Д. и соавт., 1989, Кудратуллаева К ,1991, и других - ларифан хорошо зарекомендовал себя в терапии, как экспериментальной ГИ у животных, так и в гашнике, приводя к стойкому положительному эффекту. По нашим же данным, нельзя однозначно судить, об эффективности препарата в случае применения у животных, как облученных, так и подвергнутых двойному воздействию облучения и инфицирования. При использовании ларифана по профилактической и лечебной схемам (через 3 ч. после облучения) мы не только не набшдали положительного эффекта, но и отмечали резкое увеличение гибели животных до 60 -100%, снижение СПЯ (в среднем на 5,6 суток). Бри введении ларифана в более поздние сроки после облучения ( или при облучении в меньшей дозе) неблагоприятный эффект отсутствовал. Таким образом, следует с осторожностью подходить к времени использования данного индуктс^й в условиях облучения.

Нельзя не упомянуть данные Самойлович с соавт., 1989, об' отсутствии достоверной эффективности препарата ларифан у мышей, инфицированных ВПГ и обработанных последним по лечебной схеме.

■ Ври введении ГВ в сочетании с ишуномодулятором шелшидом облученным и инфицированным животным по указанной выше cxei® способствовало статистически достоверному снижению смертности последних до 5%, обеспе-_ чивая защиту от гибели 50% особей по сравнению с 55%-епй смертностью животных в опытной- группе, не получавших терапии. (Введение комбинации-'вакцины и миелогида облученным или инфицированным животным снижало гибель последних до 0Z (р>0,05), в то время как, в группе инфицированных мышей, не получавших терапии, смертность составила 30%.

На основании данных, представленных выше, мы пришли"к выводу, что, по степени убывания эффективности изучаемые препараты мпхно расположить

в следующем порядка: ГВ + миелопвд > ГВ + ларифан > вакцина

Следует отметить, что у животных, облученных в дозе 400Р, инфицированных через 3-е суток после облучения и обработанных вакциной в моноварианте или в кгаганации с ларифаном'или миедошдом, несмотря на - отдельные изменения, касающиеся уровня АГ в том или ином органе*- сроков регистрации, обшзя тенденция ангигенообразования остается сходной. По данным МФ-метода, НФА, "молекулярной гибридизации, использование препаратов приводило к более значительному и быстрому по времени снижению концентрации вирусспецифического антигена, однако не обеспечивало полной элиминации последнего.

Представляет определенный интерес данные о выработке вируснейтрали-зущих антител в группах как облученных, так и облученных и инфицированных мышей, обработанных препаратами (Таблица 3). Так, обработка облученных мышей ГВ ши комбинацией ГВ ■+ ларифан способствовала образованию у них антител в более высоком титре (хотя и не защищающем от гибели инфицированных не янбредных мышей), чем в грушах не получавших терапии (индекс нейтрализации (ИН) равен 1,17 и 1,5 соответственно). Обработка облученных и инфицированных мышей вакциной увеличивало ИН до 1,33, а использование вакщны в сочетании с ларифаном или миелопидом обеспечи- ' вало повышение ИН ае 1,67 (в первом случае) до 2,0 (во втором). Возможно, учитывая данаие литературы о том, что и ГВ, и миелолид являются стимуляторами антвтелопродуцентов, можно объяснить тот факт, что сочетание этих препаратов приводит к выработке антител в количестве достаточном для защиты от гибели экспериментально инфицированных и облученных животных. ■ '

Цри изучении реакций клеточного иммунитета, нами отмечено, что применение р=кцины в сочетании с ШФН-ларифаном или миелопидом способствовало снижению обчей реактогенности организма у облученных и инфицированных животных, что отражалось на показателях спонтанной бласттранс-формации уже на 9-е сутки после облучения, в то время как в группе не получавших терапии или получавших вакцину в ыоноварианте он (показатель) бьш почти в 9 раз выше и колебался в пределах-от 2,923-Ю, 177x105 имп/мин до 3,727+-0,019х10'3 имп/мин; повышению митогениндуцированной пролиферации сплевоцитов, (которая со значительной степенью достоверности была снижева у животных, не получавших терапии) в случае применения вакцины в 2,1 раза; ГВ+миелопид - в 4,4 раза; -ГВ+ИИФН-ларифан - в 6,2 раза - уже на 9-е сутки после облучения; в более отдаленные сроки активность стеатитов статистически достоверно увеличивалась во всех группах, за искжнением той, где применяли ГВ+ларифан; повышению анти-

гениндуцированной пролифератившй способности, при чем. Солее значи-

Таблица а Определение вируснейтрализующих антител в сшоротке крови облученных в дозе 400 Р и инфицированных ВПГ «шей, обработанных вакциной или вакциной в сочетании с ларифаном; миелопидом в реакции бионейтрализации на мышах.

Исследуемая Доза Титр вируса на мышах Индгкс нейтра-

группа обл. при 1 /с-инфицировании лизаоии (лога-

(Р) (1е Ш50/0.03 ш1) рифмичвские ед.)

Обл.+ (вак.+ лариф.) 400 4.0 1.5

Обл. + вакцина 400 433 1.17

Контроль обл. 400 5.5 0

Обл. +инфиц. + +(вак. +лар.) 400 азз 1.6?

Обл. + инфиц. +(вак.+миел.) 400 аб 2.0

Обл. +инфиц.+вакц. 400 417 1.33

Обл. + инфиц. (контроль) 400 433 1.17

контроль инфиц. - 40 1.5

инфиц. + вак. - 2.79 гп

инфиц. +лар. . ^ - 424 1.25

инфиц. +(вак. +лар.) - г 85 г®

инфиц. + миел. - 424 1.26

интактные (контроль) - 5.5

Таблица 4. Состояние псолийеративкой активности спленошггов по данным ?ЕТЛ у облученных в дозе 400 Р и инфицированных БПГ-1 мышей, подвергнутых обработке противогерпетической вакш-_ ной, ларифаном. миелопидом или комбинацией вышеуказанных препаратов.

Исследуемая Сроки Спонтанная Ответ спленошггов после воздействия

группа • OÓC3E- РБТЛ,

ДОВ- х 10 имп/мин ФГА АГ ВПГ-1

(cyi.)

облуч. + 9-е 3,7274-0,019 3.84-0,85"" 1.64-0,17

инфиц + 17-е 1,7174-0,099 18,14-0,1 1,24-0,012

вакцина

облуч. + 9-е 0,7344-0.09 11,24-1.32 1,84-0,2

(вак.+ лар.)

+ инфиц. 17-е 0,752+-0,12 11,594-1,49 1,24-0,01

облуч.. 4- 9-е 0,3924-0,05 7,94-0,05 2,24-0,25

(вак. +миел.) 17-е 1,0424-0,138 15,34-2,12 3,74-0,02

+ инфиц. -

облуч. ' + 9-е 2,9234-0,177 1,794-0,13 0,54-0,09

инфиц 17-е 2,034-0,216 4,44-0,7 2,0+-0,79

интактные *** 1,4444-0,115 ^ 22,74-2,24 0,64-0,015

™ - индекс стафляшш

*** - средние дзшые, полученные в период с 6-х по 14-е сутки наблюдения •

(

тельном/ в случае использования сочетания ГВ +миелопид, чем в группах, обработанных вакциной в моноварианте или в сочетании с ларифаном (Таблица 4).

При изучении инте рфе ронообразования, • мы выявили интересную закономерность: вакцина повышала способность клеток костного мозга облученных и инфицированных животных синтезировать гамма-ИФН (в то время, как у животных не получавших терапии данная способность отсутствовала); комбинация ГВ + ИМН-ларифан приводила к увеличению способности клеток селезенки продуцировать альфа-ИФН в 8 раз по сравнению с животными, необработанными препаратами, хотя и снижала способность клеток селезенки продуцировать гамма-ИФН.

Таким образом, использование ГВ, как в моноварианте, так и в сочетании с индуктором интерферона ларифаном или иммуностимулятором миелопи-дом, способствует повышению интенсивности реакций как клеточного, так и гуморального звеньев иммунитета, интерферонообразования у животных, подвергнутых облучению и инфицированию.

В связи с тем, что экспериментально полученные данные (с использова- ..-. нием животных) о влиянии облучения на развитие гераесвирусного процесса могут быть лишь приблизительно -перенесены на реально существующие условия, мы предприняли попытку изучить характер течения герпетической инфекции у людей, пострадавших в результате аварии на ЧАЭС и проживающих на территории с повышенным радиационным фоном.

Оценка юмунного и инхерфершгавого статусов у детей, инфицированных вирусом простого герпеса, щхиивавцих на территории с погашенным радиационным фоном.

Нами проведено иммунологическое и вирусологическое обследование 101 ' ребенка в возрасте 4-15 лет проживающего на территории, загрязненной радионуклидами вследствие аварии на ЧАЭС (Брянская область, Россия, плотность загрязнения почвы Cs 137 от 15 до 40 и выше Ки/кы*).

В результате обследования с помощью метода прямой иммунофлуоресцен-ции персистенция ЕПГ. в крови выявлена у 9СК детей. В 5 случаях персис-тенция подтверждена выделением вируса in vitra

Специфические антитела к ВИГ в сыворотке крови, являющиеся показателем хронического течения процесса, выявлены с помощью пероксидазного варианта иммуноферментного анализа у 100Z обследованных детей. Антитела

к ЕПГ-1 обнаружены в следующих титрах: от 200 до 2700 - у 40.22; от 2700 до 8100 - у 45.6%; от 8100 до 24300 и выше - у 13.92. В контрольной группе эти показатели составили соответственно: 66.62, 29.92, 3.32. Средние (арифметические) показатели тигров антител в опытной группе составляют: 7057.9+-3068.62 ; в контрольной группе - 1336.8+-1177.5. Специфические антитела к БПГ-2 в сыворотке крови обследуемых детей обнаружены в следующих титрах: от 300 до 2700 - у 17.42; от 2700 до 8100 т у 502; от 8100 до 24300 и выше - у 31.52. В контрольной груше эти показатели составляет соответственно: 36.62, 62.22 и 02. Средние показатели титров антител к ВПГ-2 составляют: в опытной группе 13305.3-+ -4737.9 (р<005); в контрольной - 2730^-1844.9.

Таким образом, титры антител как к ЕПГ-1, так и к ЕПГ-2 (по данным иммуноферментного анализа) были достоверно выше у детей из пострадавших районов, по сравнению с аналогичным показателем у их сверстников, проживающих на территории чистой зоны (43). Представленные результаты, возможно, связаны либо с тем, что облучение ранее инфицированых детей не оказывает существенного влияния на процесс антителообразования, либо с изменениями процессов иммунорегуляции, происшедшими в результате облучения, а именно с уменьшением числа Т-лимфоцитов-супрессоров, которое вызывает повышение функциональной активности Т-лимфоцитов-хелперов, а это в свою очередь приводит к стимуляции В - лимфоцитов и соответственно к усилению продукции специфических противовирусных антител, и подтверждают широкую циркуляцию вируса простого герпеса и наличие большого числа вирусоносителей среди детской части населения.

Известно, что факторы клеточного иммунитета играют немаловажную роль, как в выздоровлении и защите от рецидивов ГИ (Баринский И.Ф. и соавт., 1986, Rouse В. Г. et al, 1978, Klein R. et al, 1985, Levin S. (et al, 1985), так и определяют течение и исход лучевых поражений (Щубик а 11, 1987,

В результате проведенного наш анализа иммунологических показателей были выявлены определенные нарушения в содержании отдельных субпопуляций Т-лимфоцитов, обладающих хелперной и супрессорной активностью. Суд-рессорная функция, принципиально снижаясь, изменялась -очень неоднородно. Достоверное снижение количества Т-супрессоров отмечено у 502 обследуемых детей из 1-2 ЗРК; при чем у 102 из этих детей - Т-супрессоры отсутствовали вовсе. И лишь у 11,52 детей средний уровень Т-супрессоров превышал 242. Уровень процентного содержания Т-клеток-супрессоров у детей 1 ЗРК составляет 9,1£И-1,52, что в 1,5 раза ниже аналогичного показателя среди детей 2 ЗРК (14,09+- 2,012) и достоверно ниже, чем у детей

. Л4 .

/

из чистой зоны (13.5^-1,2%).

Регистрируемое уменьшение сдала Т-супрессоров объясняется, возможно, воздействием облучения, так как из данных литературы известно, что облучение способствует снижению числа и функции Т-супрессоров. мало влияя на численность и активность Т-хелпероз (Щубик КМ., 1987).

При изучении теофиллин-резистентной субпопуляции лимфоцитов (Тх) бы-, ли выявлены следующие данные: общий уровень Тх у детей из 1 ЗРК составил в среднем 51,б+-1,5%, у детей из 2 ЗРК - 46,6+-1,52, что ниже аналогичного показателя в контроле. Уровень теофиллин-резистентных клеток у детей из 43 составляет 56,5+-1,б 7. (разброс от 50 до 63%). Следует отметить, что у 27. детей Т-хелперы отсутствовали ювсе, а у 23% детей их уровень не превышал 35%.

Об изменениях в содержании Тс и Тх у людей, пострадавших вследствие аварии на ЧАЗС - Галишая ЕЕ с соавт., 1990, Павлова И.Е. с соавт., 1994. . В то же время, изменения в клеточном звене иммунитета характерны для лиц, страдающих различными формами герпесвирусной инфекции (Баринс-кий И.Ф. и соавт., 1986, Вотяков В.И. и соавт., 1992).

Из данных о содержании Тх и Тс в крови обследуемых детей следует еще один важный диагностический критерий, который подчеркивает существо происходящих Т-клеточных изменений и соответственно снижение резистентности к персистирующему ЕПГ: показатель соотношения Тх/Тс.

Нами установлено статистически достоверное повышение соотношения Тх/ Тс у детей 1- 2 ЗРК до 7,8+-2,05 по сравнению с аналогичным показателем у детей 43 (3,1+-1,0). Следует также отметить, что у 9,6% детей 1 -2 ЗРК соотношения Тх/Тс равно 0, вследствие отсутствия либо Тх, либо Тс; а у 48 детей -.выше 4,5 (разброс колебаний от 4,5 до 70), что объясняется снижением доли лимфоцитов-супрессоров.

Выявленное повышение соотношения Тх/Тс возможно объясняет высокие титры антител к вирусу простого герпеса в сыворотках крови детей, подвергшихся радиационному воздействию.

Согласно данным литературы, для детей, проживающих на территории, загрязненной радионуклидами, характерна нестабильность показателей ге-мопоэза (Галицкая ЕЕ и соавт., 1990).

При изучении процентного содержания Тобш. -лимфоцитов нами не выявлено существенной разницы в их содержании как у детей из 1 ЗРК, так и из 2 ЗРК по сравнению с аналогичными показателями у детей 43. Уровень Т-лимфоцитов у детей 1-2 ЗРК составляет 60.3-1-3,9%, у детей из 43 - 63, 2+- 4,3%.

Несмотря на то, что средний уровень абсолютного содержания лимфоцитов в крови детей из опытных групп мало отличается от нормы (2,65+-0,31 х10 /л и 2,1+-0,Зх10 /л соответственно), а относительное содержание превышает' верхнюю границу нормы, у 40,74% детей из 1 ЗРК и 24,6 % детей из 2 ЗРК' выявлено статистически значимое повышение абсолютного коли- ' чества лимфоцитов (абсолютный лимфоцитоз); относительный лимфоцитоз обнаружен уу4% детей из 1 ЗРК и у 72% из 2 ЗРК (уровень относительного содержания лимфоцитов в крови детей 1-2 ЗРК достоверно выше аналогичного показателя у детей 43). 40,74% детей из 1 ЗРК и 24,6 % детей из 2 ЗРК имеют абсолютный и относительный лимфоцитоз.

Наличие относительного и абсолютного лимфоцитоза при нормальном содержании лейкоцитов является следствием активной вирусной инфекции.

Бри изучении уровня лейкоцитов в крови мы не выявили существенной разницы между показателями у четей 1-2 ЗРК и у детей 43 (6,161+-0,578 х 10 /л и 6,94-0,4x10 /л соответственно). Тем не менее, 6,9% всех обсле- . дуемых детей имеют повышенный уровень лейкоцитов. Среди детей 2 ЗРК лейкоцитоз в 2,5 раза встречается чаще, чем у детей 1 ЗРК, - что свидетельствует о наличии устойчивой иди рецидивирующей инфекции.

При. изучении состояния клеточного иммунитета у. детей в реакции ' .бласттрансформации, мы обнаружили статистически значимое повышение, уровней спонтанной бласттрансформации до 2428,44-671,2 имп/мин у 40,3% обследуемых детей из 1-2 ЗРК по сравнению с аналогичным показателем у детей из контрольной группы (856,64-149 ими./мин) (таблица 5). Выявленное повышение спонтанной бласттрансформации, повидимому, свидетельствует о нарушении реактивности общей популяции лимфоцитов в организме детей в ответ на воздействие как хронического процесса вирусной природы (в том числе обусловленной и ВПГ), так.и Ж

При неспецифической стимуляции ФГА было выявлено снижение показателей БТЛ в 1,5-2 раза у 61,6% обследуемых детей из 1-2 ЗРК го сравнению с таковыми у детей, проживающих на территории 43 (27,5+-6,2). Среднег-рупповые показатели КС ФГА у детей 1-2 ЗРК составляют 13,94-3,3 (функциональная активность лимфоцитов, стимулированных ФГА, у детей 1; 2 ЗРК достоверно не различалась).

Полученные результаты укааывают на достоверное снижение реактивности организма, уровня пролиферативной активности лимфоидных клеток, обусловленные иммунодефицитом, приводящим к вышеуказанным изменениям.

При изучении антигензависимой бласттрансформации было выявлено еле- . дующее: способность лимфоцитов крови обследуемых детей реагировать на

Табд. 5 Состояние функциональной активности лимфоцитов по данным РБТЛ у детей, проживавших на территории с повышенным радиационным фоном.

Группа Число наб- Спонтанная Индексы стимуляции лимфоцитов обследуемых лишений з РБТЛ, после воздействия

х10 имп/мин ----------

ФГА (Ш-м) АГ БПГ (М+-м)

дети 1 ЗРК* 19 2,9054-0,852 .12,024-3,9 5.1+-2.3

дети 2 ЗРК** 33 1,9514-0,479 15,9 +-2,7 4,34-1,0

Итого:

1-2 ЗРК***' 52 2,4284-0,571. 13,9 4-3,3 4,74-1,7

дети 43**** . 15 0,8564-0,149 27,5 4-6,2 3,04-1,05

Р' >0,05 Р >0,05 Р >0,05-

1-2 1-2 1-2

Р <0,05 Р <0,05 Р ..->0,05

1-4 1-4 1-4

Р <0,05 Р <0,05 Р >0,05

2-4 2-4 ' 2-4

Р <0,05 Р <0,05 ; Р >0,05

3-4 3-4 3-4

Р* - степень достоверности полученных результатов

* -/дети из 1 ЗРК

** -\дети из 2 ЗРК

*** - все дети 1-2 ЗРК

**** - дети из 43

специфический антиген ВПГ связана с развитием активной сенсибилизации к вирусу Т-клеток (т.е. специфическая активация лимфоцитов антигеном позволяет оценить только функциональную активность Т-клеточного звена иммунитета) и' отражает состояние активации хронической ГИ.

Повышение уровне сенсибилизации до 4.7-Г-1.7 у 45« обследуемых детей иг. 1-2 ЗРК (среди детей иг 43 данный показатель равен З.СН-1.05) свидетельствует не только сО''определенной сенсибилизированное™ организма к ЕПГ.. но и подтверждает,широкое распространение.ГИ среди детей. В.то же время, снижение отгета на стимуляцию антигеном ВПГ менее 1 (или его отсутствие) у 2СП. обследуемых детей из 1-2 ЗРК свидетельствует о подавлении Т-клеточного звена иммунитета, возможно, обусловленного радиацией, что сочетается с данными литературы (Кормейн Р.Х., 1983). Нельзя не упомянуть также, что у 17,3% обследуемых детей из 1-2 ЗРК наблюдалось сочетание повышенных уровней антигенной стимуляции и спонтанного блас-Тогенеза, а у 9,6%. - ответ на. антиген ВПГ превышал'индекс стимуляции при введении ФГА. Нами не было выявлено достоверной разницы в изменениях, регистрируемых у детей 1 ЗРК или 2 ЗРК.

На. основании полученных данных, мы пришли к заключению о функциональной недостатоености .Т-клеточного звена иммунитета у большинства обследуемых детей из "1-2 ЗРК, независимо от зоны проживания.

Из данных литературы известно, что система интерферонообразования не

• только воздействует на весь комплекс защитных реакций организма, но и • является одним из факторов неспецифической резистентности в ответ как на инфекционный процесс вирусной природы, так и ИИ (Садыков А. С. и со-эет. , 1978, Еаринский И.Ф. и соавт., 1986, Неробко И. В и соавт. ,1990)

При исследовании системы ИФНа у детей 1-2 ЗРК нами были выявлены существенные изменения (таблица 6).

У 73,1% обследуемых детей (1-2 ЗРК) уровень циркулирующего-ИФНа находился в пределах фоновых значений и не превышал А ед/мл. В то же время, у 26,8% детей уровень сывороточного ИФНа превышал 32 ед/мл (разброс - от 32 до 255 ед/мл). У детей из 1 ЗРК было выявлено статистически достоверное повышение уровня циркулирующего ЙЕН в 1,5 раза (6,7&+-1,20 ед/ мл); у детей 2 ЗРК - в 2,1 раза по сравнению с аналогичным показателем

• у детей из 43 и составило 9,55ч-1,58 ед/мл.

Обнаруженное вами повышение Уровня сывороточного ИФНа расценивается, как неблагоприятное явление, свидетельствующее о стрессовом состоянии иммунной системы в ответ как на радиационное воздействие, поскольку ИФН является единственным радиопротектором, синтезируемым в организме, и на активацию проявлений хронической вирусной инфекции и согласуется с дан-

Табл. б Изучение ингерферонообразования у детей, пострадавших в результате аварии на ЧЛЭС.

Груша обследуемых Число наблюдений Показатель ИФН (ед/мл),

в сыворотке (ср. «/- ИФН х- ИФН геом. зн. в анги-log)

дети 1 ЗРК 40 6,764-1,20 148,844-1,73 79,434-1,73-

дети 2 ЗРК 42 9,554-1,58 ' 2707394—1,29 44,464-1,31

Итого: все дети 1-2 ЗРК 82 7,434-1,19 229,14-1,26 50,114-1,24

дети 43 (контроль) 30 4,4 4-1,1 120,14-1,6 94,04-8,6

ными литература

Наши данные, коррелируют с теми, которые были получены Коробко И.В. с соавт. ,1890, Галицкой H.R с соавт. ,1390, при исследовании системы интерферона у детей школьного возраста, проживающих на территории жесткого радиационного контроля р. Беларусь. Согласно вышеупомянутым авторам, 46% детей имели повышенный уровень циркулирующего ИФНа в сыворотке крови, равный 10+-0.8 ЕД.

Показатели интерфероновой реакции лейкоцитов (ИРЛ), которые отражают-общую реактивность организма и объединяют данные о "гуморальном" и "клеточном" факторах иммунитета в единую систему иммунологической реактивности также претерпели значительные изменения. Так, средние показатели ИРЛ у детей 1 ЗРК составили 148,844-1673 ед/мл, что в 1,2 раза было выше показателей у детей из 43. Более значительное повышение уровня ИРЛ до 270,394-1,29 ед/мл отмечается у детей 2 ЗРК, что-в 2,25 раза статистически достоверно выше аналогичного показателя у детей из 43. Несмотря на достаточно высокие среднегрупповые показатели ИРЛ, у 14,6% обследуемых детей выявляется резкое снижение уровня ИРЛ менее 10 ед/мл,

что могло свидетельствовать о значительном с к; икни;; реактивности организма ¿следствие воздействия ИИ.

У 70.6.Т обследуемых детей выявлена также сниженная способность лимфоцитов продуцировать^-ИФН," что в свою очередь, может указывать' на сни1 жение иммунного статуса в результате как-радиационного воздействия, так и активации хронического процесса герпетической природы. Показатели гГ-ИФН у детей 1 ЗРК составляют 79,43+-1,73 ед/мл, что в 1,2 раза ниже нормы; у детей 2'ЗРК - 44,46+-1,31 ед/мл, что в 2,1. раза ниже нормы. (У детей 43 данный показатель равен 94,СН-8,б ед/мл).

Таким образом, более значительные изменения в системе интерферонооб-разования выявлены у детей, постоянно проживающих на территории 2 ЗРК, по сравнению, как с детьми такого же Еозраста, проживавших в течение первых 4-5 лет на территории 1 ЗРК, а затем переехавших в районы с благоприятным рад. фоном, так и детьми из 41

Мы определили, что наряду с интерфэроновым статусом, характерным для здоровых детей - с фоновыми значениями сывороточного ИФН, выраженной продукцией^- и У-ИФН (и встречающимся реже) у детей из ЗРК встречаются еще 3 измененных, а именно: 1-й тип характеризуется наличием ЙФН в сыворотке; достаточной '(.повышенной)' способностью лейкоцитов продуцировать с/-ИФВ и сниженной продукцией ^-ИФН и встречается у 41,46% детей из 1-2 ЗРК. Данный тип характерен для инфекционного процесса вирусной природы и аутоиммунных заболеваний. 2-й тип характеризуется фоновыми (или незначительно повышенными) значениями сывороточного ИФН, значительным снижением продукции как с/-, так^-ИФН и встречается у 32,'9°1 детей из 1-2 ЗРК (при чем у детей из 1 ЗРК данный тип ИФН встречается в 2 раза чаще, чем у детей 2 ЗРК. Этот тип ИФНа свидетельствует о глубоких поражения системы интерферонообразования. И, наконец 3-й тип ИФН-статуса ( встречающийся реже по сравнению с двумя указанными выше) характеризуется фоновыми значениями сывороточного ИФН, достаточной продукцией</-ЙФН и сниженной продукцией^ ИФН Данный тип ЖЗ-статуса встречается почти в 2. раза чаще .у детей 2 ЗРК.

О существенных нарушениях системы ИФНа у детей из Чернобыльской юны районов России указывают данные, полученные Орловой Т.Г. с соавт., 1993 Из данных литературы известно,- что при ГИ отмечается несостоятельность различных звеньев иммунитета, в том числе и-неспецифической ре-зистенгности. (Еаринский И. Ф. и соавт., 1986). Изменения в содержании 1?Г отмечают и.при воздействии радиации (Щубик ЕМ., 1987). -

N

3\

- 27 -

Мы определяли содержание основных классов сыгсроточкыл иммуноглобулинов и циркулирующих иммунных комплексов.

Несмотря на то, что содержание осксвных классов Ig подвержено значи-•■ тельным колебаниям, нам удалось.выявить (статистически не достоверное) повышение уровня Ig G до 13,0б+-0.92 г/л (разброс от 12,6 до 20.5 г/л) у 50,97. детей из 1-2 ЗРК. что могло свидетельствовать о напряженности реакции гуморального иммунитета

Другим значимым изменением гуморального звена иммунитета явилось снижение уровня Ig А ниже нижней границы нормы (0,37 г/л) до уровня 0,51-t-0,06 г/л у 26,4% детей 1-2 ЗРК, что могло свидетельствовать об активации ГИ. Средний уровень Ig А в крови детей 1-2 ЗРК составляет 1, 06+-0.09 г/л. У детей 43 уровень Ig А - l,16i-0,07 г/л (разброс от 0,87 до 2,1 г /л).

Вами не выявлено статистически достоверной разницы в показателях Ig-M у детей 1-2 ЗРК.

Таким образом, наряду с типом гуморального иммунитета, характерным для здоровых детей (при котором уровни le A.M,G находятся в .границах возрастной нормы), у детей из зон с повышенным радиационным фоном встречаются согласно Европейской классификации дисиммуноглобулинешй определенные изменения, а именно: у 39,6% детей 1-2 ЗРК встречается тип, характеризующийся повышенным содержанием IgG, в то время как уровень IgA, IgM соответствует возрастной норме. У 19,7% обследуемых отме-~ чается тип дисиммуноглббулинемии (при чем у детей 2 ЗРК'в 2 раза чаще, чем у детей 1 ЗРК), характеризующийся пониженным содержанием Ig А, достаточным содержанием IgM и нормальным /или повышенным содержанием Ig6.

Обращает внимание достоверное повышение содержания ЦЙК у 73,1% обследуемых детей из 1-2 ЗРК до 0,145+-0,025 усл. ед. ( по сравнению с контролем 0,08+-0,05 усл. ед. ).

Увеличение содержания ПИК может свидетельствовать, как о снижении активности клеток системы мононуклеарных фагоцитов (СМФ) (т.к. вирус герпеса, являясь тройным к клеткам СМФ, оказывает на них повреждающее действие), так и снижении активности специфических реакции иммунитета Регистрируемая стимуляция антятелопродукции, по-видимому, способствует повышению образования ПИК В то же время, исходя из данных литературы, нельзя исключить возможность повышенного образования ЦИК у людей, подвергающихся хроническому воздействию ИИ в малых дозах. (Щубик В.11, 1987).

Таким образом, при исследовании детей, инфицированных ВПГ, • из зон

жесткого радиационного контроля, наш выявлены: угнетение клеточного (Т) звена иммунитета, некоторая активация В-клеточного звена иммунитета и определенные нарушения в системе неспецифической защиты, обусловленные как воздействием ИМ, так и активацией эндогенного процесса герпетической природы. -

Использование кммуиостамуляторов для повьшения юздуногеикости герпетической вакцины

Список известных к настоящему времени препаратов, использующихся в терапии ГИ, включает в себя вещества самой различной природы; однако не все из них обладают выраженным антивирусным эффектом и отвечают современным требованиям. Поэтому научный и практический интерес представляет поиск и разработка оригинальных препаратов, обладающих иммуностимулирующими и антивирусными свойствами, среди которых особое место занимают или искуственно созданные полипептиды, или высокомолекулярные пеп^идог-ликаны, экстрагированные из растений. Проведенные нами исследования по • изучению свойств синтезированных, как в НИИ иммунологии, так и в Инсти- • туте вирусологии препаратов: "ВАШ" и вегетан, в реакции бласттрансфорг-мации на спленоцитах мышей линии Ва1Ь/с (массой 16 гр.) показали, что последние, при использовании в концентрациях 5-10 мкг/мл, обладают выраженными активирующими свойствами в отношении лимфоидных клеток и не уступают по своей активности обычно используемому коммерческому препа-рату-ыитогену Кон А. - (Индекс стимуляции вегетана равен 60, 0; ИС "ВАШ" - 42,7; ИС Кон А - 61,5; разница показателей стимуляции между ВАШ и Кон А, с одной стороны, и вегетаном и Кон А, с другой, статистически не достоверна, р>0,05) (таблица 7).

Кроме того, была выявлена антивирусная активность у вышеназванных препаратов в отношении вируса простого герпеса. Противовирусную активность изучали на модели герпетического менингознцефалита мышей, .линии Ва1Ь/с, массой 7-8 гр., которых инфицировали ВПГ-1, шт. "12", внутрибрю-шинно, в дозе 10 Л£50/0,2 мл. Препараты вводили однократно, ивтрапери-тонеально в различных дозах в объеме 0,2 мл в среде 199, через 4 часа после инфицирования. Наиболее выраженный защитный эффект отмечен у ве-' гетанапри использовании в концентрациях 20 и 40 мкг/мышь, которые защищали соответственно 40 и 46,6% (р<0,01) инфицированных ЕПГ животных и удлиняли среднюю продолжительность жизни последних на 1,4 и 1,6 дня.

При использовании препарата ВАШ, защитный эффект, -равный 10%

р>0,С5) был отмечен только при концентрации 50мкг/мышь; средняя же ]родолжительность жизни увеличивалась на 1,3 суток.

Из данных литературы известно, что использование противогерпетичес-тай вакцины в лечении больных рецидивирующими, и системными формами. ГИ ¡опровождается определенными трудностями, связанными с ее многократным

Таблица 7. Влияние иммуностимуляторов ВАШ и вегетана на способность спленоцитов мышей ВАЬВ/с к пролиферации.

1сследу- Концентрация препарата,, мкг/мл

¡мые -----------:-----

грепара- 2,5 5,0 10,0 25,0

'ы

. 6,619"+-0,720 26,607+-6,689 49,002-Ы3,003 5,055+-1,167*-

[он А -----------------------------------

8,3** 33,4 61,5 6,35

б,222+-2,608 34,042+-17,765 33,588+-10,33б 4,5284-3,293

!АШ-----------

7,8 42,7 42,1 5,6

5.785+-0.397 24,636+-3,574 47.816+-7.291 3.987+-1.520

йгетан —;------------------------

7,26 30,95 60,0 5,0

Фонтанная РБТЛ, №-м, х 10 имп./мин. - 0,79б+-0,276

Р > 0,05***

ВАШ 2,5/5,0/10,0/25,0 - Кон А 2,5/5,0/10,0/25,0 Р л > 0,05

Вегетан 2,5/5,0/10,0/25,0 - Кон А 2,5/5,0/10,0/25,0

- численное значение,'ими/мин.

* - индекс стимуляции

:** - достоверность полученных результатов по отношению к Кон А

применением (Бармнский Ii Ф. и соавт., 1986). Поэтому, полученные нами сведения о наличии у исследуемых препаратов активности в отношении БПГ и иммуностимулирующих сюйств, легли в основу экспериментов по отбору препаратов, способных повысить иммуногенность ГВ.и соответственно сок- .. ратитъ сроки ее применения. Изучение способности препаратов ВАШ и.веге-тан повышать иммуногенность ГВ проводили на модели менингознцефалита после однократного внутрибрюиинного введения вышеуказанных препаратов в отобранной ранее оптимальной дозе (для вегетана-20 мкгДшшь, для ВАШ -50мкг/ыышь) в сочетании с ГВ (вводившейся подкожно в объеме 0,5 мл) через 4 часа после инфицирования (таблица 8).

Данные экспериментов показали, что вакцина в сочетании с вегетаном не только обеспечивала выживаемость 60%--животных, по сравнению с 40 и 46,7% выживаемостью мышей, обработанных вышеуказанными препаратами в отдельности, но и удлиняла СПЖ на 9,2 суток, в то время, как только вакцина увеличивала СПй на 4,7 суток, а вегетан - на 1,4 суток.

Таким образом, в случае сочетанного применения вакцины и вегетана наблюдали синергидный эффект по сравнению с эффективностью каждого из препаратов в отдельности.

Использование вакцины в сочетании с препаратом ВАШ, .приводило к увеличению как выживаемости, так и СПИ по сравнению с невакцинированными животными или получавшими только препарат ВАШ. Однако, величина этих показателей статистически не отличалась от таковой, регистрируемой в. группе инфицированных БПГ мышей, леченных только вакциной.

Таким образом, сочетание ВАШ + ГВ было менее эффективным, чем комбинация вегетан + ГВ.

При изучении сочетанного использования ГВ и иммуностимуляторов определенный интерес представляло определение функционального состояния Ь-клеточного гвена иммунитета с помощью ELISa-метода. Введение инфицированным ■ животным ГВ в комбинации с вегетаном приводило к усилению антителообразования в поздние сроки, достигая максимума на 21-е сутки после вакцинации (титр антител равен 7290).. (Дня сравнения, менее выраженная, но стойкая в первые 14 дней после вакцинации.динамика стимуляции антителообразования отменена при введении ГВ с препаратом ВАШ; а применение только вакцины приводило к стабильным показателям вирусспе-цифических антител на уровне 810 в течение всего периода наблюдения).

аблица 8. Противовирусная активность комбинации иммуностимуляторов с специфической герпетической вакциной на модели герпетического менингоэнцефалита.

гпарат Выживаемость Средняя продолжительность Защитный эффект животных жизни, сутки

абс. * % М+-м Р** р** ~

щина+ 'етан 18 60 15,2-1-1,4 <0,001 53,3 <0,01

{цина+ Б 12 40 9,84-1,3 <0,05 33,3 <0,01

адша 5 дней инфиц. 13 43,3 12,0-1-1,5 <0,05 36,5 <0,01

гащна эез 4 ■ п/инф. 12 40 10,7-1-1,2 <0,С6 33,3 <0,01

гетан 3,0 э,0 14 16 46,7 53,3 7,4+-1,5 7,6+-1,8 <0,05 <0,05 40 46,6 <0,01 <0,01

АШ 3,0 3 10 7,3+-2,0 >0,05 3,3 >0,05

НГРОЛЬ: рус з пре-ов 2 6,7 6,0+-1,9 •. ■"' -

вышение уровня антител к ЕПГ-1 в сышротке инфицированных мышей оче-дно объясняется способностью вегетана активировать В-лимфоциты, инду-руя их полноценное деление и созревание в I г-секрегирушие клетки. При изучении функциональной активности спленоцитов животных, инфици-

рованных ВПГ и обработанных препаратами го схеме указанной выше, в реакции бласттрансформации было отмечено: что использование вегетана в сочетании с ГВ приводило к статистически достоверному снижению показателя спонтанной бласттрансформации по сравнению с аналогичным ■ б группе-инфицированных мышей, не получавших терапии, повышало (в З раза) мито-гениндуцированную способность спленоцитов к пролиферации (в то время, как использование одной вакцины увеличивало данный показатель в 2 раза) и в 2,7 раза - ответ на антиген уже на 7-е сутки после введения препаратов, в то время как у только инфицированных животных отмечались повышенная спонтанная БТЛ, сниженная антиген-и ыитогениндуцированная способность спленоцитов. Нами установлено, что и в более отдаленные срони, вегетан в сочетании с вакциной оказывали стойкий положительный эффект на лимфоидные клетки. Что же касается, сочетания вакцины и ВАШ, то оно было менее эффективным (в данных условиях эксперимента).

Таким образом, полученные наш данные о свойствах вегетана позволяют надеяться но возможность дальнейшего применения этого препарата в терапии ГИ, как самостоятельно (повышая противовирусную резистентность жи-' вотных, воздействуя на Т-и В-авенья иммунитета), так и в комбинации с' ГВ (повышая ее иммуногенность) и рекомендовать его для дальнейшего кли-.' нического изучения.

ВЫВОДЫ

1. Облучение в условиях эксперимента является фактором^ отягощающим течение инфекционного процесса герпесвирусной природы. Отмечается прямая зависимость между дозой облучения и уровнем выживаемости инфицированных животных, а также средней продолжительностью их жизни.

2. Коммерческая герпетическая убитая поливакцина против вирусов цросто-го герпеса 1 и 2 типов (при экспериментальной герпетической инфекции у облученных животных) является не только противовирусным препаратом (процент защиты - 30), но и радиопротекгивным средством. В группе облученных и инфицированных мышей,'не получавших вакцины гибель составляет 55%.

3. Комбинация коммерческой герпетической поливакцины с индуктором интерферона ларифаном и иммуностимулятором миелопидом повышает процент защиты облученных в дозе 400Р и Инфицированных животных соответственно до 45-50%, способствует статистически достоверному снижению . смертности до 10-5% по сравнению с 55% смертностью в опытной груше животных, не получавших указанной терапии.

Комбинированное использование коммерческой герпетической вакцины с ларифаном и миелопидом способствует более высокому нарастанию вирус-нейтрализующх антител с индексом нейтрализации до 1,67-2,0 (при • введении одной вакцины индекс-нейтрализации равен 1,33), что, в сбою очередь, приводит к значительному и быстрому по времени снижению концентрации вируса в органах облученных и инфицированных животных, однако не обеспечивает его полной элиминации из организма "

5. Комбинированное использование коммерческой герпетической вакцины и иммуностимулятора ларифана приводит к восьмикратному увеличению способности спленоцигов инфицированных и облученных животных индуцировать продукции альфа-интерферона, одновременно снижая способность продуцировать гамма-интерферон; активирует реакции клеточного иммунитета (антиген- и митоген-индуцированную пролиферацию спленоцигов).

6. Персистентная герпетическая ■ инфекция обнаружена в 90% случаев при вирусологическом и иммунологическом обследовании материалов от 101 ребенка в возрасте 4-15 лет, проживающего на территории с повышенным радиационным фоном (плотность загрязнения почвы Сэ 137 составляет от 15 до 40 и выше Ки/км2). В 5 случаях персистенция была потверждена ■ прямым выделением вируса из крови больных.

7. Титры противовирусных антител в ИФА-тесте к вирусам простого герпеса 1 и 2 типов оказались достоверно выше у детей из пострадавших районов по сравнению с аналогичным показателем у их сверстников, проживающих на территории чистой зоны.

8. йлявлена функциональная, недостаточность Т-клеточного звена иммунитета у большинства обследуемых детей из ■ зон радиационного контроля, сопровождающаяся снижением неспецифической реакции бласттрансформа-ции на ФГА в 1,5^2,0 раза у 61,6% детей, повышением спонтанной бласттрансформации; повышением уровня бласттрансформации на специфи-

■ ческий антиген ВИГ (у 45% обследуемых детей).

9. При исследовании системы интерферона отмечено повышение уровня сыво- • роточного интерферона у 26,8% детей, повышение средних показателей интерфероновой реакции лейкоцитов (альфа-ИФН) в 1,2 раза у детей из 1-й зоны радиационного контроля и 2,25 раза - из 2-й ЗРК по сравнению с аналогичным показателем у их сверстников из "чистой" зоны. У 70,6% облученных детей выявлена сниженная способность лимфоцитов продуцировать гамма-интерферон.

10. При изучении субпопуляции Т-лимфоцитов у облученных детей установлено статистически достоверное повышение' соотношения Тх/Тс по сравнению с аналогичным показателем у детей из "чистой" зоны.

11.0 наличия г.ерсистенткой герпетической инфекции у детей из зон радиационного контроля свидетельствуют характерные показатели дисимыуног-лобулинемии (снижение ^А, повышение 1^6) и повышенное содержание циркулирующих иммунных комплексов (у .73,11 обследуемых).

12. Изучение и отбор новых иммуностимуляторов (ВАШ и вегетан), „пригодных для коррекции иммунологического статуса при герпетической инфекции, позволили получить в эксперименте сравнительные данные об их активности. Установлено, что препараты вегетан и ВАШ при использовании в концентрациях 5-10 мкг/мл обладают выраженным активирующим свойством в отношении лимфоидных клеток и не уступают по своей активности коммерческому препарату-митогену Кон А. Выраженный антивирусный (в отношении ВПГ-1) эффект отмечен у вегетана в концентрациях 20 и 40 мкг /мышь, обеспечивающий защиту соответственно 402 и 46,7Х мышей (р<0,01) и удлиняющий среднюю продолжительность жизни на 1,4 и 1,6 дня, . в то время как ВАШ (в концентрации 50 мкг/мышь) защищал не более 10Х животных. Выявлено, что введение герпетической поливакцины в сочетании с вегетаном приводит к усилению антителообразования, к повышению функциональной активности иммунокоипетентных клеток и обладает синергидным эффектом.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Баринский И. Ф., Алимбарова Л. М., Мельников В. Р. - " Роль специфических иммунобиологических препаратов при лечении хронических герпесви-русных инфекций и восстановлении вирусной латенции." Тезисы докладов 111 съезда гигиенистов, микробиологов, эпидемиологов и паразитологов Республики Молдова. "Актуальные проблемы современной эпидемиологии, микробиологии и паразитологии" Кишинэу, 1992, с. 248-249.

2. Алимбарова Л М., Баринский ЛФ., Лаврухина Л А., Восик ЕН. - "Реактивация латентной герпетической инфекции у детей из зон радиационного контроля." Тезисы докладов юбилейной научно-практической конференции "Актуальные проблемы инфекционной патологии". Санкт-Петербург, ВИЙ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера, ч.З- Иммунология и биотехнология, 1993, с. 10.

а Алимбарова Л.М., Баринский И.Ф., Семилетов К1 А., Шибнев Е А. - " Использование новьй производных имидазола в качестве иммуностимуляторов и при изучении иммунологического статуса заболеваний, вызываемых вирусом простого герпеса " Тезисы докладов юбилейной научно-практм-ческой конференции" Актуальные проблемы инфекционной патологии".

Санкт-Петербург, НИИ эпидемиологии и микробиологии вм. Вастера, ч. 3-Иммунология и биотехнология. 1993. с. 11.

Баринский И.Ф., Семенова Т. Б., Лосевая Т. А., Алимбарава JLM., Колие-ва i.L X, Шабалина ILB. - " Использование иммуностимуляторов для повышения иммуногенности герпетической вакцины." - "Вопроси вирусологии", 1993, N6, с. 274-276.

Lvov N. D., Alimbarova L. М., Melnikov V.FL, Barirsky l.F. -"Antiviral activity of the new immunostimulator "Vegetan" on the models of herpetic meningoencephalitis of mice and genital herpes of . guinea pigs" - "Antiviral research", Vennice, Italy, April 1993, p. 142.

Алимбарова Jilt, Coxa ХГ. -"Активация герпетической инфекции у де- ■ тей, - пострадавших в результате аварии . на „Чернобыльской атомной электростанции" Тезисы докладов конференции молодых ученых России "Здоровье и болезни человека на рубеже XXI века", Москва, 1994, с. 78.