Генотипическая характеристика вируса гепатита С среди населения Новгородской области

Кириллова, Екатерина Николаевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Генотипическая характеристика вируса гепатита С среди населения Новгородской области
ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Генотипическая характеристика вируса гепатита С среди населения Новгородской области"

На правах рукописи

КИРИЛЛОВА Екатерина Николаевна

ГЕНОТИПИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВИРУСА ГЕПАТИТА С СРЕДИ НАСЕЛЕНИЯ НОВГОРОДСКОЙ ОБЛАСТИ

03.00.06 - вирусология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Санкт-Петербург - 2009

00347В <4Ь

003476745

Работа выполнена в Институте медицинского образования Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Новгородский государственный университет имени Ярослава М[удрого».

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Архипов Георгий Сергеевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Кузнецов Олег Константинович, доктор биологических наук Киселева Ирина Васильевна

Ведущее учреждение: Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М. П. Чумакова РАМН, г, Москва.

Защита диссертации состоится «б» октября 2009 г. в 1300 часов на заседании дис9ертационного совета Д.001.46.01. при Учреждении Российской Академии медицинских наук Научно-исследовательский институт гриппа СевероЗападного отделения РАМН по адресу: Санкт-Петербург, ул. Профессора Попова, д. 15/17.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Учреждения Российской Академии медицинских наук Научно-исследовательский институт гриппа Северо-Западного отделения РАМН.

Автореферат разослан «6» сентября 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат медицинских наук

Суховецкая В. Ф.

Общая характеристика работы

Актуальность темы. По своим медицинским и социально-экономическим характеристикам гепатит С (ГС) входит в десятку наиболее распространенных инфекционных болезней населения современной России. Последнее десятилетие отмечено существенным увеличением распространенности хронических форм ГС (ХГС), что связано как с высокой интенсивностью эпидемического процесса в форме острого и бессимптомного гепатита С в предыдущие годы, так и с широким спектром социальных условий жизни населения, способствующих реализации путей передачи инфекции (Шахгильдян И. В., Михайлов М. И., Оншценко Г. Г., 2003; Ершова О. Н., 2006; Знойко О. О., 2008).

По данным ВОЗ от последствий гепатита С ежегодно умирает приблизительно 10 млн. человек, а всего инфицировано не менее 900 млн. жителей планеты, среди которых признаки хронического гепатита и цирроза печени наблюдаются у 300-350 млн. больных (Sheriock Sh. 1995; Жданов К. Н., 2000; Шахманов Д. М., 2007; Флоряну А. И., 2007). Острый гепатит С заканчивается хронизацией процесса примерно в 70-85% случаев, что более чем в 15 раз превышает аналогичный показатель при гепатите В. У 20% перенесших ГС формируется цирроз и у каждого пятого - первичный гепатоцеллюлярный рак (И1ирокова Е. Н., Ивашкин В. Т., 2002; Радченко В. Г., Стельмах В. В., Козлов В. К., 2004; Белозеров Е. С., 2005).

Рекомендации Парламентских слушаний от 13.02.2001 г., решение Коллегии Минздрава от 27.03.2001 г. и рекомендации Межведомственной Комиссии Совета Безопасности Российской Федерации от 28.03.2003 г. обязывают в борьбе с вирусными гепатитами С и В объединить усилия 8 ведомств с тем, чтобы реализовать основную задачу - резко сократить заболеваемость наиболее поражаемого населения 15-19 и 20-29 лет (Вирусные гепатиты в Российской Федерации, аналитический обзор, 5 выпуск, 2005).

До настоящего времени остаются нерешенными некоторые важные вопросы эпидемиологии этой инфекции. К ним, прежде всего, может быть

отнесена слабая изученность генотипического разнообразия вируса гепатита С (ВГС) и его значение в формировании хронических форм этой инфекции.

Известно, что в основе генетической вариабельности ВГС лежит отсутствие редактирующей активности у вирусной РНК-полимеразы, вследствие чего происходит накопление мутаций в процессе вирусной репликации. По данным сравнительного анализа вирусных геномов различия между изолятами могут достигать 35%, пропорционально распределяясь между консервативными и вариабельными областями генома. В этом случае данные изоляты принято рассматривать как различные генотипы, В настоящее время выделяют 6 основных генотипов ВГС, которые в свою очередь представлены несколькими субтипами. Преимущественное распространение в мире имеют 1, 2 и 3 генотипы ВГС (Мукомолов С. Л., 1996; Ильина Е. Н., 2000; Михайлов М. И., 2001; Шустов А. В., 2003; Ястребова О. Н., 2005; БсЬаеГег Б., 2007).

Различные варианты вируса гепатита С возможно дифференцировать как на основании непосредственного изучения изменений в нуклеотидной последовательности генома возбудителя (методы генотипирования), так и с использованием серологических методов, в частности ИФА. Исследования, выполненные специалистами в разных странах мира, показали, что на одной и той же территории могут циркулировать несколько вариантов возбудителя с преобладанием определенных генотипов (Бгатопск Р., 1995; ВикЬ 1., 1995, Zem N.. 1996; Львов Д., 1995,1996; Мукомолов С., 1997; Киселев О., 1997; Соринсон С., 1998). Определение циркулирующих вариантов вируса гепатита С имеет большое значение для практической медицины, как для клиницистов, так и для эпидемиологов:

1. Определение генотипов вирусов гепатита С важно при проведении эпидемиологических исследований, так как позволяет хорошо документировать источники и пути передачи возбудителя (Воронкова В. Н., 2002; Мукомолов С. Л., 2005;.Ершова О. Н., 2006).

2. Отмечено, что пациенты с хроническим гепатитом С (ХГС), ассоциированным с различными генотипами вируса, по-разному отвечают на

интерферонотерапию. Установлено, что эффективность лечения препаратами интерферона пациентов, инфицированных генотипом Ib ВГС, - минимальна. Кроме этого, больные, пораженные генотипом Ib ВГС, чаще имеют выраженные клинические проявления заболевания и неблагоприятные исходы (Воронкова В. Н., 2002; Бохонов М. С.,2007; Яковенко М. А., 2007; Знойко О.

0.. 2008).

3. Сведения о циркуляции различных вариантов возбудителя на определенных территориях могут оказаться полезными при конструировании вакцин против гепатита С (Ершова О. Н., 2006).

Все вышесказанное определяет повышенное внимание к этому социально-значимому заболеванию, активность и важность его дальнейшего изучения. Изложенное выше явилось основанием для выяснения в настоящей работе современных особенностей генотипического распределения ГС среди населения Новгородской области и влияние ВГС-инфекции на течение ВИЧ-инфекции (инфекции, вызванной вирусом иммунодефицита человека).

Целью работы явилось определение генотипического разнообразия и структуры ВГС циркулирующего среди населения Новгородской области. Задачи исследования:

1. Определить этиологическую структуру вирусных гепатитов В, С и D среди пациентов с парентеральными вирусными гепатитами (острыми, хроническими и скрытыми формами) в Новгородской области.

2. Определить с помощью методов ИФА (иммуноферментный анализ), ПЦР (полимеразная цепная реакция) и ОТ-ПЦР (обратная транскрипция и полимеразная цепная реакция) структуру различных генотипов у больных ВГС в Новгородской области.

3. Оценить особенности распространения генотипов ВГС в различных половозрастных группах населения с учетом путей передачи возбудителя.

4. Охарактеризовать особенности распределения генотипов ВГС с учетом артифициальных и неартифициальных путей его передачи и оценить роль этих путей передачи для больных с сопутствующей ВИЧ-инфекцией.

5. Оценить уровень распространения вирусного гепатита С и его генотипов среди больных ВИЧ-инфекцией.

Научная новизна исследования. Впервые изучена структура генотипов вируса гепатита С, циркулирующих среди отдельных групп населения Новгородской области (пациентов инфекционных и других отделений стационаров, больных ВИЧ, медицинских работников).

Определена генетическая неоднородность ВГС в различных группах населения Новгородской области и показано преобладание субтипов 1Ь и За. Среди ВИЧ-инфицированных доминируют генотипы ВГС: За, За+1Ь, 1Ь.

Установлено, что 1Ь и За генотипы ВГС превалирует в возрастных группах 20-24 года, 25-29 лет, 30-34 года и 35-39 лет (Р<0,001), генотип 2а у больных ВГС более часто по сравнению с другими генотипами встречается в возрасте 25-29 лет. Микст-генотипы ВГС чаще регистрируются также у лиц не старше 30 лет (Р<0,05). В Новгородской области мужчины и женщины в возрастных группах-от 15 до 49 лет инфицируются ВГС чаще, чем ВГВ (Р<0,001).

Показано, что основными путями заражения ВГС и ВИЧ+ВГС в Новгородской области являются внутривенное введение наркотиков (77,0+2,54) илоловой путь (23,0+4,03) с преобладанием генотипов 1Ь и За.

Теоретическая и практическая значимость работы. Особенности структуры генотипов и наличие определенного генотипа ВГС среди пациентов позволяют прогнозировать выделение групп эпидемиологического риска и совершенствовать эпидемиологический надзор за инфекцией, а также является основанием для клиницистов при выборе тактики дифференцированной антивирусной терапии. Распределение генотипов ВГС среди населения Новгородской области ' определяется географическими особенностями расположения региона и высокими показателями миграции населения, что способствует более глубокой оценке эпидемической ситуации по вирусному гепатиту С.

Установлена связь между генотипами ВГС и ведущими путями передачи этой инфекции в различных возрастных и социальных группах населения Новгородской области, вовлеченных в эпидемический процесс, что позволяет применять дифференцированный подход к проведению профилактических и терапевтических мероприятий.

Результаты диссертационного исследования внедрены в практическую деятельность учреждений здравоохранения Новгородской области, использованы при подготовке методических рекомендаций, практических и лекционных занятий со студентами Института медицинского образования ГОУ ВПО «Новгородский государственный университет имени Ярослава Мудрого».

Положения, выносимые на защиту:

1. На территории Новгородской области циркулируют три основных генотипа вируса гепатита С (1, 2 и 3) и соответствующие субтипы (1а, 1Ь, 2а, 2Ь, За), отмечены случаи инфицирования двумя субтипами ВГС - 1а+1Ь, За+1Ь и За+2Ь.

2. В этиологической структуре гепатита С в возрастных группах 20-29 лет и 35-49 лет преобладают генотипы 1Ь и За, .у больных в возрасте 25-29 лет выделен преимущественно генотип 2а.

3. Для вируса гепатита С (ВГС) в определенных возрастных группах характерна коинфекция с вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), главным образом потому, что эти возбудители имеют общие пути передачи. В возрастных группах 20-29 лет, 30-39 лет и 40-49 лет при внутривенном пути заражения в группах ВИЧ+ВГС-инфицированных превалирует генотип За, и в убывающем порядке представлены генотипы: 1Ь, 1Ь+За, 1а+1Ь, 1а, 2а, 2Ь.

Личный вклад автора в проведенное исследование. Автором выполнены ПЦР-диагностика, генотипирование ВГС, постановка иммуноферментного анализа (ИФА) для определения серологических маркеров вирусов гепатита В, С и О. Доля автора в проведении исследований 95%, в обобщении и анализе составляет 100%.

Проведен сравнительный анализ полученных результатов с эпидемиологическими, серологическими и генетическими показателями, а также статистическая обработка результатов. Полученные данные легли в основу учебного пособия «Вирусные гепатиты» по частной вирусологии для практической и самостоятельной работы студентов медицинских высших учебных заведений и слушателей системы постдипломной подготовки специалистов (д.м.н., проф. - Туркин В. В., Архипов Г. С., Архипова Е. И., Кириллова Е. Н., ассистент).

Внедрение в практику. Результаты исследования внедрены в работу ПЦР-лаборатории «Клинический госпиталь ветеранов войн», референс-лаборатории центра по профилактике и борьбе со СПИДом и инфекционными заболеваниями «Хелпер» и используются врачами-инфекционистами Великого Новгорода. Научные положения, выводы и практические рекомендации, вытекающие из результатов диссертационной работы, используются при чтении лекций и практических семинарских занятий на кафедре микробиологии, иммунологии и инфекционных болезней Института медицинского образования ГОУ ВПО «Новгородский государственный университет им. Ярослава Мудрого». Находится в печати учебное пособие «Вирусные гепатиты» по частной вирусологии для практической и самостоятельной работы студентов медицинских высших учебных заведений и слушателей системы постдипломной подготовки специалистов (д.м.н., проф. -Туркин В. В., Архипов Г. С., Архипова Е. И., Кириллова Е. Н., ассистент).

рождения С. П. Боткина, 29-31 мая 2007г., Санкт-Петербург; на 5-й Российско-итальянской конференции «Актуальные вопросы социально-значимых вирусных инфекций», Петрозаводск, 29-31 мая 2008 г.; на региональной научно-практической конференции «Проблемы охраны здоровья здорового человека на региональном уровне», Великий Новгород, 28 ноября 2008 года, на 7-й Российско-итальянской конференции «Актуальные вопросы социально-значимых вирусных инфекций», Великий Новгород, 14-16 мая 2009 г.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 16 научных работ, 2 - в журналах, рецензируемых ВАК.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных результатов работы, их обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа изложена на 121 странице печатного текста. Содержит 20 таблиц и 13 рисунков. Библиографический указатель содержит 263 наименований библиографических источников, в том числе 58 на русском и 205 на английском языке.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы. Для изучения генотипического разнообразия и структуры ВГС среди населения Новгородской области в период с марта 2005 г. по сентябрь 2008 г. исследовано 2210 проб плазмы крови от пациентов с подозрением на вирусные гепатиты В, С и D для определения внутрипопуляционной изменчивости ВГС, циркулирующих среди жителей Новгородской области. Среди 1385 человек с маркерами вирусных гепатитов В, С и D - 968 больных с острым, хроническим и скрытыми формами гепатита С. Особую группу обследованных составили ВИЧ-инфицированные - 716 пациентов, состоящих на диспансерном учете в центре по профилактике и борьбе со СПИДом и инфекционными заболеваниями «Хелпер» (В. Новгород).

Для оценки уровня распространения вирусного гепатита С и его генотипов среди больных ВИЧ-инфекцией в работе использованы отчеты референс-лаборатории Центра по профилактике и борьбе со СПИДом и инфекционными заболеваниями «Хелпер» (В. Новгород) с 1990 по 2008 годы.

Для выявления динамики заболеваемости острым и хроническим формами вирусного гепатита С проведен анализ официальных статистических данных годовых отчетов Территориального управления Роспотребнадзора по Новгородской области с 1995 по 2008 годы.

Определение серологических маркеров. Для выявления антител классов IgG и IgM к вирусу гепатита С использовали скрининговую тест-систему «РекомбиБест антй-ВГС» и «РекомбиБест анти-ВГС-спектр»; для выявления HBsAg с помощью рекомбинантного антигена и моноклональных антител использовали тест-системы производства ЗАО «Вектор-Бест» III поколения - «Вектогеп B-HBs-антиген» и «Вектогеп B-HBs-антиген, подтверждающий тест-стрип», для выявления антител IgG к вирусу гепатита В «анти-HBcAg Ig G»; для выявления антител к ВИЧ-1, 2 и антигена р24 ВИЧ-1 использовали тест-систему «КомбиБест-ВИЧ-1, 2 АГ/АТ - стрип» (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск).

Результаты ИФА регистрировали с помощью спектрофотометра, измеряя оптическую плотность (ОП) на длине волны 450 нм. Измерения проводили не позднее 10-15 мин. после остановки реакции. Результаты анализа считали положительными, если значение ОП в соответствующей лунке было равно или превышало критическое значение (ОП крит).

Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Для выявления ВГС и его генотипирования в образцах плазмы крови методом обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) использовали набор реагентов «ГЕНОтаП-С» (ЗАО «НПФ ДНК-Технология», Москва). Определенное количество образца из обработанной клинической пробы переносится в специальную микроцентрифужную пробирку типа «Eppendorf» объемом 0,2 мл. В эту же пробирку добавляется амплификационная смесь (вода, ПЦР-буфер,

раствор дНТФ, раствор праймеров и раствор Taq-полимеразы). Затем в каждую пробирку добавляется одна капля минерального масла, и пробирки переносятся в программируемый термостат (амплификатор), и проводится амплификация в автоматическом режиме по заданной программе, соответствующей виду определяемой инфекции. Для определения РНК-ВГС используется фермент обратная транскриптаза, который по РНК-матрице синтезирует ДНК-копию, которая затем участвует в ПЦР.

Метод горизонтального электрофореза. Для визуализации результатов амплификации использовали метод электрофореза, основанный на разделении молекул ДНК по размеру. Для этого готовят пластину агарозного геля, представляющего собой застывшую после расплавления в электрофорезном буфере агарозу в концентрации 1,5-2,5% с добавлением специального красителя ДНК (бромистый этидий). Гель с нанесенным образцом переносят в камеру для электрофореза, заполненную буфером, камеру подключают к источнику питания и проводят электрофоретическое разделение продуктов амплификации при U = 10-15 В/см. Для документирования гель фотографировали на пленку типа «Микрат 300».

Генотипирование ВГС. Для выявления генотипов HCV использовали тест-системы «ДНК-Технология HCV-генотип» (ЗАО «НПФ ДНК-Технология», Москва). Для каждого препарата кДНК возможно проведение исследования на наличие 4 генотипов (la, lb, 2, За/ЗЬ) ВГС. Для исследования на каждый генотип применяли соответствующий комплект для ПЦР-амплификации. Детекция, учет и интерпретация результатов осуществляется на приборах iCycler iQ (Bio-Rad) автоматически с помощью программного обеспечения.

Для статистического анализа данных использовали стандартные статистические показатели и приёмы обработки. Полученные результаты обработаны с использованием стандартного пакета программ Microsoft Excel (2006 г.). Статистическую достоверность оценивали с учетом t-критерия Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

В период с марта 2005 г. по сентябрь 2008 г. обследовано 2210 человек. Среди пациентов с подозрением на вирусные гепатиты В, С и D: 701 стационарных и амбулаторных пациентов ГУЗ «Клинический госпиталь ветеранов войн» Великого Новгорода, 359 пациентов Новгородской городской инфекционной больницы, 207 пациентов Медико-санитарной части Управления внутренних дел Новгородской области, 159 пациентов Новгородской областной больницы, 68 сотрудников лечебных учреждений ГУЗ «Клинический госпиталь ветеранов войн» Великого Новгорода и 716 пациентов Центра по профилактике и борьбе со СПИДом и инфекционными заболеваниями «Хелпер».

В процессе исследования выявлено 1385 (62,7%) положительных результатов на ВГС, ВГВ и микст-гепатитов ВГВ+ВГС и ВГВ+ВГД. На основе информации, содержащейся в картотеке вирусологической лаборатории, индивидуальной карте на каждого больного и сведений в лабораторном журнале по форме №256-У 03-МВ-01 (утверждена Минздравом СССР от 04.10.1980 г. № 1030), от обследуемых лиц получали демографическую информацию (пол, возраст) и информацию о путях заражения этими инфекциями. Среди обследованных на наличие вирусных гепатитов В, С и D -1106 женщин и 1104 мужчин в возрасте от 1 года до 87 лет, из них инфицированы парентеральными гепатитами 569 (25,8%) и 816 (36,9%) человек соответственно.

В Новгородской области среди 1385 пациентов с парентеральными вирусными гепатитами наибольшую долю составили больные вирусным гепатитом С - 69,9% (968 чел.), на долю вирусного гепатита В пришлось 25,3% (351 чел.) (рис. 1).

БГВ+ВГО; 3,70% ВГВ+ВГС; 1,10%

0ВГС ■ ВГВ авгв+вго авгв+вгс

Рис. 1. Этиологическая структура парентеральных вирусных гепатитов (острых, хронических, скрытых форм) в Новгородской области в 2005-2008 гг. (N = 1385)

Количество микст-форм гепатитов, вызванных одновременно двум вирусами В+С и В+Б, составило 66 человек (4,8%). Основную часть в структуре микст-форм составило сочетание вирусных гепатитов В+Д - 3,7%, на долю ВГВ+ВГС - 1,1% случаев (табл. 1).

Таблица 1, - Этиологическая структура диагностированных парентеральных вирусных гепатитов (острых, хронических и скрытых) в 2005-2008 гг. в Новгородской области

Парентеральные вирусные гепатиты Общее число обследованных с подозрением на вирусные гепатиты Положительные результаты

абсолютное число от общего числа больных М + т, %

С 2210 968 69,9+1,47*

В 351 25,30+2,32*

в+о 51 3,70+2,64

В+С 15 1,10+2,69

Всего: 1385 100,00±0,00

Примечание: * Р<0,001

Проведенные исследования показали, что среди инфицированных острым, хроническим и скрытыми формами гепатита С больные в возрасте 1519 лет составили 8,5% (82 чел.), 20-24 года - 13,95% (135 чел.), 25-29 лет -19,63% (190 чел.), 30-34 года - 15,2% (147 чел.), 35-39 лет - 13,73% (133 чел.),

40-44 года - 11,1% (107 чел.) и 45-49 лет - 8,4% (81 чел.). Вирусный гепатит С у больных острым, хроническим и скрытыми формами в возрасте 50-54 года и 55-59 лет регистрировали по 3,0% (30 чел.). Незначительный процент регистрации больных ВГС в возрастных когортах - от рождения до 4 лет (1,13%), 10-14 лет (0,3%), 60-64 года (0,8%).

Установлено, что среди больных вирусным гепатитом С в возрастных группах от 15 до 49 лет доля мужчин (55,16% - 534 чел.) значительно превышала таковую у женщин (35,2% - 341 чел.), что отличается от структуры инфицированных вирусом гепатита В (Р<0,001). В структуре парентеральных вирусных гепатитов В и С как среди мужчин, так и среди женщин преобладало инфицирование ВГС, составившее 69,9%, вирусом гепатита В (ВГВ) - 25,3%.

Анализ возрастного состава больных вирусными гепатитами В и С показал, преимущественное поражение лиц молодого возраста 25-29 лет, 30-34 года, 40-44 года (Р<0,001) с явным снижением в группах 50-54 лет (Р<0,05), 55-59 лет (Р<0,01).

Таким образом, количество больных гемоконтакгными вирусными гепатитами В и С находится в прямой зависимости от интенсивности циркуляции вирусов среди населения репродуктивного возраста, каким в основном являются лица от 20 до 29 лет и от 30 до 39 лет, что следует рассматривать как крайне неблагоприятный факт.

Инфицирование гепатитом С происходит преимущественно при внутривенном введении наркотиков (47,1%) по сравнению с оперативными вмешательствами (1,5%) и заражении при проведении других медицинских манипуляций (1,7%). Реже больные указывают на заражение ВГС при переливании крови и/или ее препаратов (0,9%) (Р<0,001). Значительную долю составил половой (36,1%) и семейный (2,2%) пути передачи ВГС (Р<0,001) с формированием групп риска, за которыми необходим динамический контроль с обследованием на маркеры парентеральных вирусных гепатитов В и С (табл. 2).

В результате проведенных исследований установлено, что из 968 инфицированных ВГС у 929 пациентов (96,0%) выявлены генотипы НСУ 1, 2 и

3. Использование для генотипирования метода ПЦР и ОТ-ПЦР позволило идентифицировать пять субтипов: 1а, 1Ь, 2а, 2Ь, За (табл. 3). Несмотря на положительный качественный анализ в 39-ти образцах, НСУ типировать не удалось, что свидетельствует о наличии редкого генотипа, не регистрируемого ранее в Новгородской области.

Таблица 2, - Характеристика путей передачи вируса гепатита С

в Новгородской области с 2005 по 2008 гг.

Пути передачи НСУ Кол-во человек Уд. вес, %

I. Артафициальные пути передачи

Переливание крови и/или ее препаратов 9 0,9

Оперативные вмешательства 15 1,5

Заражение в стационарах, заражение в амбулаториях 16 1,7

Профессиональное заражение 68 7,0

Внутривенное введение наркотиков 456 47,1

II. Неартифициальные пути передачи

Внутрисемейная передача 21 2,2

Половой путь 349 36,1

Путь инфицирования неизвестен 34 3,5

ВСЕГО: 968 100,00

Распределение генотипов ВГС оказалось следующим: 1а выявлен у 48 больных (5,0%), 1Ь - у 439 (45,3%), 2а - у 37 (3,8%), За - у 243 (25,1%), 2Ь - у 18 (1,9%). У 144 пациентов (18,9%) определялись микст-субтипы (1а+1Ь - у 19 больных (2,0%), За+2Ь - у 16 (1,7%), За+1Ь - у 99 (10,2%), За+;1а - у 4 (0,4%), 1Ь+2а - у 3 (0,3%) и 1а+2Ь - у 3 (0,3%)). Анализ генотипического разнообразия ВГС среди больных показал, что инфицирование несколькими генотипами регистрировалось в 14,6% случаев, при этом доля микст-генотипов За+1Ь составила 10,2%. Результаты генотипирования представлены на рис. 2.

встречаются За, За+1Ь, 1а, 2а, 1а+1Ь, 2Ь, За+2Ь, За+1а, 1а+2Ь и 2а+1Ь (табл. 3). Наименьший процент регистрации приходился на сочетание генотипов За+1а, 1а+2Ь, 2а+1Ь.

В структуре генотипов ВГС у мужчин превалируют генотипы 1Ь (39,1%) и За (30,3%), доля остальных генотипов ВГС составила: 1а (3,5%), 2а (3,1%), 2Ь (1,9%). Среди мужчин в возрастных группах от 20 до 44 лет генотип За ВГС встречается значительно чаще, чем другие генотипы (Р<0,001). На долю микст-генотипов ВГС среди мужчин приходится 18,6%, из них: За+1Ь (12,4%), За+2Ь (2,6%), 1а+1Ь (2,4%), За+1а (0,7%) и 1а+2Ь (0,5%). Определить генотип и субтипы ВГС у мужчин не удалось в 3,5% случаев.

Структура генотипов ВГС у женщин представлена превалирующими генотипами 1Ь (54,45%) и За (17,6%), доля остальных генотипов ВГС составила: 1а (7,0%), 2а (4,8%), 2Ь (1,8%). Инфицирование двумя генотипами ВГС у женщин отмечено в 10,3% случаев, из них: За+1Ь (7,1%), 1а+1Ь (1,3%), За+2Ь (0,3%) и 2а+1Ь (1,7%). Определить генотип и субтипы ВГС у женщин не удалось в 4,8% случаев.

Исследования показали, что в Новгородской области генотип 1Ь и За ВГС превалирует как среди мужчин, так и среди женщин. Соотношение генотипов между мужчинами и женщинами показало, что среди женщин превалирует генотип 1а, среди мужчин микст-генотипы - 1а+1Ь, За+1Ь, За+2Ь, За+1а и 1а+2Ь встречаются значительно чаще, чем среди женщин.

и-ьюк Н/типир. образцы-ГЧ 4,00%_

Рис, 2. Генотипическая структура ВГС среди населения Новгородской области (N = 968)

Генотипическое разнообразие ВГС оказалось неодинаковым в разных возрастных группах. Так, 1 и 3 генотипы зарегистрированы у больных в возрастных группах от 15 до 60 лет, 2 генотип определялся в возрастных группах 20-24 года, 25-29 лет и от 50 до 60 лет (Р<0,001). Генотип 1Ь чаще регистрируются у мужчин в возрасте от 15 до 60 лет, особенно в возрастных группах от 20 до 40 лет, генотип 1а превалирует среди женщин в возрастной группе 25-29 лет.

Таблица 3, - Генотипическое разнообразие и распределение

генотипов ВГС по полу среди населения Новгородской области

Генотип и субтипы ВГС Кол-во образцов (Ы = 968) Уд. вес, (%) Мужчины Женщины

кол-во чел. (N = 575) М+т, % кол-во чел. (N = 393) М+т, %

1а 48 5,0 20 41,67+7,19 28 58,33+7,19

1Ъ 439 45,3 225 51,25+2,39 214 48,75+2,39

2а 37 3,8 18 48,65+8,33 19 51,35+8,33

2Ь 18 1,9 11 61,11+11,82 7 , 38,89+11,82

За 243 25,1 174 71,60+2,90 69 28,40+2,90

1а+1Ъ 19 2,0 14 73,68+10,38 5 26,32+10,38

За+2Ь 16 1,7 15 93,75+6,25 1 6,25+6,25

За+1Ь 99 10,2 71 71,72+4,55 28 28,28+4,55

За+1а 4 0,4 4 100,00+0,00 0 0,00+0,00

1а+2Ь 3 0,3 3 100,00+0,00 0 0,00+0,00

2а+1Ъ 3 0,3 0 0,00+0,00 3 100,00+0,00

Н/типир. образцы 39 4,0 20 51,28+8,11 19 48,72+8,11

Полученные результаты демонстрируют рост доли генотипа За ВГС в возрастных группах 20-24 лет, 25-29 и 30-34 года (Р<0,001) и равномерное снижение в возрастных группах от 45 лет и старше. Микст-субтипы чаще регистрируются также у лиц не старше 30 лет (Р<0,05).

Среди 68 медицинских работников с диагнозом «гепатит С» зарегистрирована неравномерность распределения генотипов ВГС: 1Ь выявлен

у 34 больных (50,0%), За - у 15 (22,0%), 2Ь - у 5 (7,4%), 2а - только у 1 больного ВГС (1,5%), у 13 медицинских работников с ВГС (19,1%) определяли сочетание генотипов - За+1Ь, других микст-вариантов не определяли. Таким образом, генотипирование ВГС среди медицинских работников показало, что генотип 1Ь (74,0%) преобладает во всех возрастных группах, при этом на долю женщин приходится 46,5% случаев, а на долю мужчин - 27,5% случаев (Р<0,001).

Существенные различия в структуре генотипов ВГС отмечены у медицинских работников, Среди медицинских работников доля генотипа 1Ь ВГС составила 50,0% по сравнению с субтипами За (22,0%), 1Ь+За (19,1%), 2Ь (7,4%), 2а (1,5%) (Р<0,001). Анализ структуры генотипов ВГС показал, что как среди медицинских работников, так и среди населения Новгородской области доминируют генотипы 1Ь, За и сочетание нескольких генотипов За+1Ь.

В Новгородской области и г. В. Новгороде за период с 1990 г. по 2008 г. зарегистрировано 1031 ВИЧ-инфицированных, из которых 716 человек систематически наблюдаются в Центре по профилактике и борьбе со СПИДом и инфекционными болезнями. Среди больных ВИЧ-инфекцией маркеры парентеральных гепатитов В и С выявлены у 49,4% пациентов (509 чел.), из них: вируса гепатита С обнаружены у 37,2% (383 чел.), вируса гепатита В - у 12,2% (126 чел.). Таким образом, коинфекция вирусом гепатита С (ВГС) и вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) достаточно распространена, главным образом потому, что вирусы имеют общие пути передачи.

ВИЧ-инфекция оказывает существенное влияние на течение ВГС-инфекции: ускоряет темп развития прогрессирующего заболевания печени с последующим,летальным исходом, увеличивает риск перинатальной передачи обоих вирусов, а также затрудняет лабораторную диагностику ВГС-инфекции.

Из 383 больных с коинфекцией вирусом гепатита С и ВИЧ были выделены: 71,5% (274 чел.) мужчин и 28,5% (109 чел.) женщин в возрасте от 20 до 49 лет. Исследования показали, что доля мужчин с ВГС+ВИЧ существенно

превышает таковую для женщин в возрастных группах 20-29 лет (39,69+3,97), 30-39 лет (52,22+3,53) и 40-49 лет (8,09±4,90) (Р<0,001).

Согласно проведенным исследованиям, у коинфицированных пациентов главным фактором риска заражения ВИЧ+ВГС является внутривенное введение наркотиков 77,0+2,54, на втором месте - половой путь передачи в 23,0+4,03 случаев (Р<0,01). Половой путь передачи чаще отмечается у женщин, чем у мужчин во всех возрастных группах (Р<0,001). Внутривенное введение наркотиков распространено чаще среди мужчин, чем среди женщин (Р<0,01). Половой путь передачи чаще отмечается у женщин, чем у мужчин во всех возрастных группах (Р<0,001) (табл. 4),

Таблица 4, - Распределение ВГС у ВИЧ-инфицированных

по основным факторам риска заражения

Главный фактор риска заражения Пол Возрастная группа, годы Итого

20-29 30-39 40-49

N = 153 М+т, % N = 216 М+т, % N=14 М+т, %

Половой путь Муж (N = 38) 12,12+9,42 15,85+7,16 0,00+0,00 13,87+5,61

Жен (N = 50) 40,74+10,48 48,08+9,99 100,00+0,00 45,87+7,05

В/венное введение наркотиков Муж ("N=236"! 87,88+8,35 84,15±3,11 ■■ 100,00+0,00 86,13+2,25

Жен (N = 59) 59,26+8,69 51,92+9,62 0,00+0,00 54,13+6,49

Качественный анализ ПЦР показал, что для 383 обследованных с коинфекцией ВИЧ+ВГС характерны генотипы: За (42,6%), За+1Ь (24,3%), 1Ь (22,7%), 1а+1Ь (1,8%), 1а (1,3%), 2а (1,3%) и 2Ь (1,0%). У 102 пациентов (26,63%) определялись микст-субтипы (1а+1Ь - у 9 больных (2,34%), 1Ь+За - у 93 (24,3%)). Среди больных ВИЧ+ВГС доминируют генотипы За, За +1Ь и 1Ь, чем другие генотипы (Р<0,001) (табл. 5).

В структуре генотипов ВГС у мужчин с ВИЧ+ВГС превалируют генотипы За (32,4%) За+1Ь (18,5%) и 1Ь (15,1%), доля остальных генотипов ВГС у ВИЧ-инфицированных составила: 1а (1,0%), 2а (0,8%), 2Ь (0,6%). На долю микст-генотипов ВГС среди ВИЧ-инфицированных мужчин приходится

20,1%, из них: За+ГЬ (18,5%) и 1а+1Ь (1,6%). Определить генотип и субтипы ВГС у ВИЧ-инфицированных мужчин не Удалось в 2,6% случаев.

Структура генотипов ВГС у ВИЧ-инфицированных женщин представлена превалирующими генотипами За (10,2%), За+1Ь (5,8%) и 1Ь (5,5%), доля остальных генотипов ВГС составила: 2а (1,0%), 2Ь (1,0%) и 1а (0,8%). Инфицирование двумя генотипами ВГС у женщин с ВИЧ-инфекцией отмечено в 6,5% случаев, из них: За+1Ь (5,8%), 1а+1Ь (0,7%). Определить генотип и субтипы ВГС у женщин не удалось в 2,4% случаев.

Таблица 5, - Распределение генотипов ВГС у ВИЧ-инфицированных

Генотип НСУ ВСЕГО Мужчины Женщины

абсолют, кол-во чел. (N = 383) М+т, % абсолют, кол-во чел. (N = 278) М+т, % абсолют, кол-во чел. (N=105) М+т, %

1а 7 1,8±14,73 4 51,14+24,74 3 42,86+28,57

1Ь 79 20,6+5,35* 58 73,42+5,80* 21 26,58+9,64*

2а 7 1,8+18,04 3 42,86+28,57 4 57,14+24,74*

2Ь б 1,6+23,75 2 33,33+33,33 4 66,67+23,57*

За 163 42,6+1,97* 124 76,07+3,83* 39 23,93+6,83

1а+1Ъ 9 2,3+12,8 6 66,67+19,25 3 33,33+27,22

За+1Ь 93 24,3+3,03* 71 76,34±5,04* 22 23,66+9,06*

Н/типир. образцы 19 5,0+12,41 10 52,63+15,79 9 47,37+16,64

Примечание: * Р <0,001

Исследования показали, что в Новгородской области у больных ВИЧ+ВГС генотипы За (42,6±1,97), За+1Ь (24,3±3,03) и 1Ь (20,6±15,35) ВГС превалирует как среди мужчин, так и среди женщин. Различия в распределениях генотипов между мужчинами и женщинами достоверно показали, что среди женщин превалирует генотип 2а и 2Ь, среди мужчин доминируют микст-генотипы - За+1Ь и 1а+1Ь.

Среди мужчин и женщин с коинфекцией ВИЧ+ВГС распределение генотипов ВГС существенных статистических различий не имеет. Относительная встречаемость различных генотипов ВГС зависит от среднего возраста обследованных и от превалирующих путей передачи вируса. Таким

образом, при внутривенном введении наркотиков среди пациентов чаще регистрируется генотип За ВГС, а генотип 1Ь - чаще при операционных вмешательствах.

ВГС-инфекция представляет собой неблагоприятный фактор для ВИЧ-инфицированных пациентов, ускоряя снижение уровня СД4+ клеток. При наличии 1 генотипа ВГС происходит наибольший риск прогрессии ВИЧ-инфекции, развития СПИДа с летальным исходом по сравнению с генотипами 2 и 3 (Шахгильдян И. В., Михайлов М. И., Онищенко Г. Г., 2003).

ВЫВОДЫ

1. В структуре парентеральных вирусных гепатитов В, С, Б и микст-гепатитов В+С, В+Б среди населения в Новгородской области доля ГС и ГВ составляет 69,9% и 25,3% соответственно; количество микст-форм гепатитов достигает 4,8% (ВГВ+ВГД - 3,7%, ВГВ+ВГС - 1,1%).

2. Установлено, что в возрастных труппах от 15 до 49 лет среди больных вирусным гепатитом С доля мужчин (55,16% - 534 чел.) превышала таковую у женщин (35,2% - 341 чел.), что отличается от структуры инфицированных вирусом гепатита В (Р<0,001). Показано, что 1 и 3 генотипы ВГС превалирует в возрастных группах 20-29 лет и 30-45 лет (Р<0,001), а генотипы 2а и 2Ь у больных в возрасте 25-29 лет. Микст-генотипы ВГС чаще регистрируются у лиц не старше 30 лет (Р<0,05).

3. Среди населения Новгородской области в 2005-2008 гг. циркулировали следующие генотипы ВГС: 1Ь (45,3%), За - 25,1%, 1а - 5,0%, 2а - 3,8%, 2Ь -1,9%. Существенное значение имеют сочетание нескольких генотипов ВГС: За+1Ь (10,2%), 1а+1Ь (2,0%) и За+2Ь (1,7%).

передачи ВГС являются: передача, ассоциированная с внутривенным введением наркотиков (47,1%) и половой путь (36,1%).

5. При сочетанном течение ВИЧ+ВГС преобладает парентеральное введение наркотиков (77,1+2,54), на втором месте - половой путь передачи (22,9+4,03) (Р<0,01).

6. Генотипическая структура у коинфицированных ВИЧ+ВГС представлена субтипами: За (42,6%), За+1Ь (24,3%), 1Ь (22,7%), 1а+1Ь (1,8%), 1а (1,3%), 2а (1,3%) и 2Ь (1,0%). Генотипы 1Ь, За и 1Ь+За определяются чаще, чем другие генотипы (Р<0,001).

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Определение генотипа ВГС имеет существенное клиническое значение, так как эти данные при исследовании в динамике могут использоваться практическими врачами для выбора терапии и дать дополнительную оценку эффективности проводимой терапии, что имеет прогностическую значимость.

2. Алгоритм диагностики гепатита С должен быть основан на комплексном обследовании больных и включать наряду с эпидемиологическими, клиническими данными и биохимическими исследованиями сыворотки крови определение антител к ВГС методом ИФА, определение РНК ВГС с последующим изучением ее свойств методом ПЦР. Это позволит поставить диагноз на ранней стадии заболевания острого вирусного гепатита С и, как следствие, позволит начать своевременное проведение специфической противовирусной терапии.

3. В случае создания кандидатной вакцины, возможность её применения и оценка эпидемиологической эффективности среди населения, проживающего на конкретной территории, будет определяться степенью изученности популяционной структуры НСУ в данной среде и знанием превалирующих генотипов вируса.

4. Материалы диссертационной работы могут быть использованы в учебном процессе при чтении лекций проведении лабораторных занятий по микробиологии, иммунологии, инфекционным болезням, эпидемиологии, а также при составлении учебных пособий.

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Кириллова, Е. Н. Генотипическая вариабельность вируса гепатита С среди населения Новгородской области / Е. Н. Кириллова, Г. С. Архипов, Е. А. Орлова // Здоровье населения и среда обитания. - № 11 (176). - 2007. - С. 2729.

2. Кириллова, Е. Н. Эпидемиологические особенности распространения гепатита С в Новгородской области / Е. Н. Кириллова, Е. А. Орлова, Г. С. Архипов // Вестник Российской Военно-Медицинской Академии. Всерос. науч. конф., СПб., 17-18 апреля 2008 г., ч. II (приложение). - № 2 (22). - 2008. - С. 417-418.

3. Орлова, Е. А, Идентификация вирусов гепатита С молекулярно-биологическим методом (ПЦР) в Великом Новгороде / Е. А. Орлова, Е. Н. Кириллова // Ученые записки Института сельского хозяйства и природных ресурсов НовГУ. - Т. 13, вып. 2 / Сост. Э. А. Юрова. - Великий Новгород: Изд-воНРЦРО, 2005.-С. 33-36.

4. Архипов, Г. С. Генотипические варианты вирусов гепатита С среди населения Новгородской области / Г. С. Архипов, Е, Н. Кириллова, Е. А. Орлова // Клиническая медицина: межвуз. сб. стран СНГ. Т. 13. - В. Новгород; Алматы, 2006. - С. 99-102.

5. Орлова, Е. А. Генотипическое разнообразие вируса HCV и некоторые эпидемиологические особенности гепатита С у населения Новгородской области / Е. А. Орлова, С. М. Гетманцева, Е. Н. Кириллова // Ученые записки Института сельского хозяйства и природных ресурсов НовГУ. - Т. 14, вып. 2 / Сост. Э. А. Юрова. - Великий Новгород: Изд-во НРЦРО, 2006. - С. 65-68.

6. Орлова, Е. А. Генотипическое разнообразие вируса HCV и частота встречаемости маркеров вирусов гепатита С среди населения Новгородской области / Е. А. Орлова, С. М. Гетманцева, Е. Н. Кириллова // Ученые записки Института сельского хозяйства и природных ресурсов НовГУ. - Т. 14, вып. 3 / Сост. Э. А. Юрова. - Великий Новгород: Изд-во НРЦРО, 2006. - С. 65-70.

7. Кириллова, Е. Н. Молекулярная вариабельность изолятов вируса HCV у населения Новгородской области / Кириллова Е. Н., Е. А. Орлова // Здоровье и образование в XXI веке: науч. тр. VII междунар. науч.-практ. конф., 23-26 ноября 2006 г. - Москва, 2006. - С. 235-236.

8. Кириллова, Е. Н. Распространенность генотипов вируса гепатита С в Новгородской области: сб. науч. тр. Новгородского научного центра СевероЗападного отделения РАМН / Е. Н. Кириллова, Е. А. Орлова, Г. С. Архипов // Охрана здоровья населения - национальный приоритет государственной политики. М.: Медицина. - 2006 г. - том № 5. - С. 99-101.

9. Бузунова, С. А. Распространенность гепатита С у ВИЧ-инфицированного контингента населения: сб. мат-лов Всерос. науч.-практ. конф. и тр. Новгородского научного центра Северо-Западного отделения РАМН / С. А. Бузунова, Г. С. Архипов, Е. Н. Кириллова [и др.] // Роль медицинской науки и здравоохранения в реализации демографической политики государства. М.: Медицина, 2007. - Т. 6. С. 232.

10. Кириллова, Е. Н. Распространенность вируса гепатита С у ВИЧ-инфицированных среди населения г. В. Новгород и Новгородской области / Е. Н. Кириллова, Н. В. Бахтина, Т. Н. Ткаченко // тез. докл. II Международ, мед. конгресса «Санкт-Петербургские научные чтения - 2007» к 110-летию СПбГМУ им, акад. И. П. Павлова, 5-7 декабря 2007 г. - СПб., 2007. - С. 113.

11. Сухно, Е. О. Эпидемиология вирусного гепатита С в Великом Новгороде / Е. О. Сухно, Т. О. Федорова, Е. Н. Кириллова [и др.] // Мат-лы IX съезда Всерос. науч.-практ. общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов: в' 3 т. Т. 1; Минздравсоцразвитие России; Роспотребнадзор; РАМН; ВНПОЭМП, Москва, 2007; С. 374.

12. Федорова, Т. О. Сероэпидемиологическое обследование населения Великого Новгорода на антитела к вирусу гепатита С / Федорова Т. О., Е. О. Сухно Е. Н. Кириллова [и др.] // Юбилейная научная конференция, посвященная 175-летию со дня рождения С. П. Боткина, 29-31 мая 2007 г. -Санкт-Петербург, 2007. - С. 303-304.

13. Архипов, Г. С. Распространенность генотипов вируса гепатита С у ВИЧ-инфицированных Новгородской области / Г. С. Архипов, Е. Н. Кириллова, Е.

A. Орлова // 5-я Российско-итальянская конференция «Актуальные вопросы социально-значимых вирусных инфекций», Петрозаводск, 29-31 мая 2008 г. -Петрозаводск, 2008.

14. Архипов, Г. С. Проявления эпидемиологического процесса вирусного гепатита в Новгородской области: сб. мат-лов региональной науч.-практ. конф. и трудов Новгородского научного центра Северо-Западного отделения РАМН / Г. С. Архипов, Е. Н. Кириллова, Е. А. Орлова // Здоровье населения - основа процветания России, М.: Медицина, 2008. - Т. 7. - С. 28.

15. Кириллова, Е. Н. Диагностика вируса гепатита С среди ВИЧ-инфицированных в Новгородской области / Е. Н. Кириллова, Н. В. Бахтина, Г.С. Архипов [и др.] // Клиническая медицина: межвуз. сб. стран СНГ. Т. 16. -

B. Новгород - Алматы, 2008. - С.40-45.

16. Кириллова, Е. Н. Закономерности распространения генотипов ВГС и его генотипов в Новгородской области / Е. Н. Кириллова, Г. С. Архипов, Е. И. Архипова // 7-я Российско-итальянская конференция «Актуальные вопросы социально-значимых вирусных инфекций», Великий Новгород, 14-16 мая 2009 г. - ВДовгород, 2009. - С.73-75.

Благодарности. Считаю свою»! долгом выразить глубокую благодарность моему научному руководителю доктору медицинских наук, профессору Г. С. Архипову за постоянное внимание и помощь в работе. Выражаю признательность руководителю ПЦР-лаборатории ГУЗ «Клинический госпиталь ветеранов войн» В. Новгорода - А. И. Хорошевской, главному врачу

референс-лаборатори ММУ центра по профилактике и борьбе со СПИДом и инфекционными заболеваниями «Хелпер», кандидату медицинских наук - С. А. Бузуновой за помощь в выполнении исследований.

Отпечатано: ООО «Типография «Виконт», Великий Новгород, ул, Береговая, д. 48, к. 2, тел. 8 (8162) 677894. Бумага офсетная. Формат 60x84 1/16. Объем 1,5 п. л. Заказ № 1300 от 3 сентября 2009 г. Тираж 100 экз.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Кириллова, Екатерина Николаевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. МОЛЕКУЛЯРНАЯ БИОЛОГИЯ ВИРУСА ГЕПАТИТА С (АНАЛИТИЧЕСКИЙ ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1. Структурно-функциональная организация генома.

1.1.1. Структура и организация генома.

1.1.2. Вирусные белки.

1.1.3. Жизненный цикл вируса гепатита С.

1.1.4. Репликация ВГС.

1.2. ГЕОГРАФИЧЕСКОЕ РАСПРОСТРАНЕНИЕ ВИРУСА ГЕПАТИТА С И ЕГО ГЕНОТИПОВ.

1.2.1. Генетическая неоднородность ВГС. Современные подходы в генотипировании вируса гепатита С.

1.2.2. Факторы риска инфекции ВГС в различных популяционных группах.

1.2.3. Закономерности распространения ВГС и его генотипов в России и странах СНГ.

1.3. МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ ВИРУСА ГЕПАТИТА С В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ПУТЕЙ ПЕРЕДАЧИ ВГС.

1.3.1. Эпидемиологическая характеристика структуры путей передачи вируса гепатита С.

1.3.2. Методологическая база диагностики ВГС.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Генотипическая характеристика вируса гепатита С среди населения Новгородской области"

Актуальность темы

По своим медицинским и социально-экономическим характеристикам гепатит С (ГС) входит в десятку наиболее распространенных инфекционных болезней населения современной России. Последнее десятилетие отмечено существенным увеличением распространенности хронических форм ГС (ХГС), что связано как с высокой интенсивностью эпидемического процесса в форме острого и бессимптомного гепатита С в предыдущие годы, так и с широким спектром социальных условий жизни населения, способствующих реализации путей передачи инфекции [25, 52, 55].

По данным ВОЗ от последствий гепатита С ежегодно умирает приблизительно 10 млн. человек, а всего инфицировано не менее 900 млн. жителей планеты, среди которых признаки хронического гепатита и цирроза печени наблюдаются у 300-350 млн. больных [52, 186]. Острый гепатит С заканчивается хронизацией процесса примерно в 70-85% случаев, что более чем в 15 раз превышает аналогичный показатель при гепатите В. У 20% перенесших ГС формируется цирроз и у каждого пятого - первичный гепатоцеллюлярный рак печени [19, 34, 55].

Рекомендации Парламентских слушаний от 13.02.2001 г., решение Коллегии Минздрава от 27.03.2001 г. и рекомендации Межведомственной Комиссии Совета Безопасности Российской Федерации от 28.03.2003 г. обязывают в борьбе с вирусными гепатитами В и С объединить усилия 8 ведомств с тем, чтобы реализовать основную задачу — резко сократить заболеваемость наиболее поражаемого населения 15—19 и 20-29 лет [3, 56].

До настоящего времени остаются нерешенными некоторые важные вопросы эпидемиологии этой инфекции. К ним, прежде всего, может быть отнесена слабая изученность генотипического разнообразия вируса гепатита С (ВГС) и его значение в формировании хронических форм этой инфекции.

Известно, что в основе генетической вариабельности ВГС лежит отсутствие редактирующей активности у вирусной РНК-полимеразы, вследствие чего происходит накопление мутаций в процессе вирусной репликации. По данным сравнительного анализа вирусных геномов различия между изолятами могут достигать 35%, пропорционально распределяясь между консервативными и вариабельными областями генома. В этом случае данные изоляты принято рассматривать как различные генотипы. В настоящее время выделяют 6 основных генотипов ВГС, которые, в свою очередь, представлены несколькими субтипами. Преимущественное распространение в мире имеют 1, 2 и 3 генотипы ВГС [1,9, 55, 234, 256].

Различные варианты вируса гепатита С возможно дифференцировать как на основании непосредственного изучения изменений в нуклеотидной последовательности генома возбудителя (методы генотипирования), так и с использованием серологических методов, в частности ИФА. Исследования, выполненные специалистами в разных странах мира, показали, что на одной и той же территории могут циркулировать несколько вариантов возбудителя с преобладанием определенных генотипов [52, 55, 144, 187]. Определение циркулирующих вариантов вируса гепатита С имеет большое значение для практической медицины, как для клиницистов, так и для эпидемиологов:

2. Отмечено, что пациенты с хроническим гепатитом С (ХГС), ассоциированным с различными генотипами вируса, по-разному отвечают на интерферонотерапию. Установлено, что эффективность лечения препаратами интерферона пациентов, инфицированных генотипом 1Ь ВГС, минимальна. Кроме этого, больные, пораженные генотипом 1Ь ВГС, чаще имеют выраженные клинические проявления заболевания и неблагоприятные исходы [13, 21,25].

3. Сведения о циркуляции различных вариантов возбудителя на определенных территориях могут оказаться полезными при конструировании вакцин против гепатита С [19].

Учет результатов генотипирования ВГС среди различных групп населения наиболее информативен в комплексе с другими клиническими и лабораторными показателями, прежде всего с уровнем вирусемии. Наряду с генотипическими различиями ВГС допускают разную чувствительность к интерферону. Определенное значение в этом отношении придают обнаружению генотипа ВГС [34, 56].

Исходя из актуальности нерешенных клинических проблем, касающихся вирусного гепатита С, были сформированы цель и задачи данного исследования.

Дель работы: определить генотипическое разнообразие и структуру ВГС циркулирующего среди населения Новгородской области.

Для достижения поставленной цели исследования в диссертации решались следующие задачи:

1. Определить этиологическую структуру вирусных гепатитов В, С и Б среди пациентов с парентеральными вирусными гепатитами (острыми, хроническими и скрытыми формами) в Новгородской области.

5. Оценить уровень распространения вирусного гепатита С и его генотипов среди больных ВИЧ-инфекцией.

Научная новизна исследования

Установлено, что 1Ь и За генотипы ВГС превалирует в возрастных группах 20-24 года, 25-29 лет, 30-34 года и 35-39 лет (Р<0,001), генотип 2а у больных ВГС более часто по сравнению с другими генотипами встречается в возрасте 25-29 лет. Микст-генотипы ВГС чаще регистрируются также у лиц не старше 30 лет (Р<0,05). В Новгородской области мужчины и женщины в возрастных группах от 15 до 49 лет инфицируются ВГС чаще, чем ВГВ (Р<0,001).

Показано, что основными путями заражения ВГС и ВИЧ+ВГС'в Новгородской области являются внутривенное введение наркотиков

77,0+2,54) и половой путь (23,0+4,03) с преобладанием генотипов 1Ь и За. Теоретическая и практическая значимость работы

Особенности структуры генотипов и наличие определенного генотипа ВГС среди пациентов позволяют прогнозировать выделение групп эпидемиологического риска и совершенствовать эпидемиологический надзор за инфекцией, а также является основанием для клиницистов при выборе тактики дифференцированной антивирусной терапии. Распределение генотипов ВГС среди населения Новгородской области определяется географическими особенностями расположения региона и высокими показателями миграции населения, что способствует более глубокой оценке эпидемической ситуации по вирусному гепатиту С.

Положения, выносимые на защиту:

2. В этиологической структуре гепатита С в возрастных группах 20-29 лет и 35-49 лет преобладают генотипы 1Ь и За, у больных в возрасте 25-29 лет выделен преимущественно генотип 2а.

Актуальность проблемы обостряется тем, что заболевание чаще • развивается в молодом трудоспособном возрасте, что приносит огромный экономический ущерб государству.

Апробация работы

Апробация диссертации осуществлялись на протяжении всего периода исследования. Полученные материалы обсуждались на XIII научной конференции преподавателей, аспирантов и студентов Новгородского государственного университета имени Ярослава Мудрого (секция «Генетическая изменчивость: методы исследования, оценка разнообразия, структура популяций») (2006 г.); на VII Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» 23—26 ноября 2006 г., Москва; на Юбилейной научной конференции, посвященной 175-летию со дня рождения С. П. Боткина, 29—31 мая 2007г., Санкт-Петербург; на 5-й Российско-итальянской конференции «Актуальные вопросы социально-значимых вирусных инфекций», Петрозаводск, 29-31 мая 2008 г.; на региональной научно-практической конференции «Проблемы охраны здоровья здорового человека на региональном уровне», Великий Новгород, 28 ноября 2008 года, на 7-й Российско-итальянской конференции «Актуальные вопросы социально-значимых вирусных инфекций», Великий Новгород, 14—16 мая 2009 г.

Внедрение в практику

Результаты исследования внедрены в работу ПЦР-лаборатории «Клинический госпиталь ветеранов войн», референс-лаборатории центра по профилактике и борьбе со СПИДом и инфекционными заболеваниями «Хелпер» и используются врачами-инфекционистами Великого Новгорода. Научные положения, выводы и практические рекомендации, вытекающие из результатов диссертационной работы, используются при чтении лекций и практических семинарских занятий на кафедре микробиологии, иммунологии и инфекционных болезней Института медицинского образования ГОУ ВПО «Новгородский государственный университет им. Ярослава Мудрого». Находится в печати учебное пособие «Вирусные гепатиты» по частной вирусологии для практической и самостоятельной работы студентов медицинских высших учебных заведений и слушателей системы постдипломной подготовки специалистов (д.м.н., проф. — Туркин В. В., Архипов Г.С., Архипова Е. И., Кириллова Е. Н., ассистент).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 16 научных работ, 2 — в журналах, рецензируемых ВАК.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных результатов работы, их обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа изложена на 121 страницах печатного текста. Содержит 20 таблиц и 13 рисунков. Библиографический указатель содержит 263 наименования библиографических источников, в том числе 58 на русском и 205 — на английском языке.

Заключение Диссертация по теме "Вирусология", Кириллова, Екатерина Николаевна

ВЫВОДЫ

1. В структуре парентеральных вирусных гепатитов В, С, Э и микст-гепатитов В+С, В+О среди населения в Новгородской области доля ГС и ГВ составляет 69,9% и 25,3% соответственно; количество микст-форм гепатитов достигает 4,8% (ВГВ+ВГД - 3,7%, ВГВ+ВГС - 1,1%).

2. Установлено, что в возрастных группах от 15 до 49 лет среди больных вирусным гепатитом С доля мужчин (55,16% — 534 чел.) превышала таковую у женщин (35,2% - 341 чел.), что отличается от структуры инфицированных вирусом гепатита В (Р<0,001). Показано, что 1 и 3 генотипы ВГС превалирует в возрастных группах 20-29 лет и 30—45 лет (Р<0,001), а генотипы 2а и 2Ь у больных в возрасте 25-29 лет. Микст-генотипы ВГС чаще регистрируются у лиц не старше 30 лет (Р<0,05).

3. Среди населения Новгородской области в 2005-2008 гг. циркулируют следующие генотипы ВГС:' 1Ь —45,3%, За - 25,1%, 1а ~ 5,0%, 2а - 3,8%, 2Ь — 1,9%. Существенное значение имеет сочетание нескольких генотипов ВГС: За+1Ь (10,2%), 1а+1Ь (2,0%) и За+2Ь (1,7%).

4. Основными группами риска инфицирования вирусом гепатита С в Новгородской области являются как молодые мужчины, так и женщины трудоспособного возраста (20-39 лет - 62,5%) (Р<0,001). Главными путями передачи ВГС являются: передача, ассоциированная с внутривенным введением наркотиков (47,1%) и половой путь (36,1%).

5. При сочетанием течение ВИЧ+ВГС преобладает парентеральное введение наркотиков (77,1+2,54), на втором месте - половой путь передачи (22,9+4,03) (Р<0,01).

6.« У коинфицированных ВИЧ+ВГС генотипическая структура представлена субтипами: За (42,6%), За+1Ь (24,3%), 1Ь (22,7%), 1а+1Ь (1,8%), 1а (1,3%), 2а (1,3%) и 2Ь (1,0%). Генотипы 1Ь, За и 1Ь+За определяются чаще, чем другие генотипы (Р<0,001).

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

2. Алгоритм диагностики гепатита С должен быть основан на комплексном обследовании больных и включать наряду с эпидемиологическими, клиническими данными и биохимическими исследованиями сыворотки крови определение антител к ВГС методом ИФА, определение РНК ВГС с последующим изучением ее свойств методом ПЦР. Это позволит поставить диагноз на ранней стадии заболевания острого , вирусного гепатита С и, как следствие, позволит начать своевременное проведение специфической противовирусной терапии.

Благодарности. Считаю своим долгом выразить глубокую благодарность моему научному руководителю доктору медицинских наук, профессору Г. С. Архипову за постоянное внимание, всестороннюю помощь и знания, полученные при совместной работе. Выражаю признательность руководителю ГЩР-лаборатории ГУЗ «Клинический госпиталь ветеранов войн» Великого Новгорода — А. И. Хорошевской, биологу лаборатории — Е. А. Орловой, главному врачу референс-лаборатории ММУ центра по профилактике и борьбе со СПИДом и инфекционными заболеваниями «Хелпер», кандидату медицинских наук - С. А. Бузуновой и зав. лаборатории — Н. Н. Ковалевской за помощь в выполнении исследований.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Парентеральные вирусные гепатиты (ВГВ и ВГС) остаются в РФ серьезной медицинской и социальной проблемой. В последние годы в стремительно меняющихся социально-экономических условиях произошли существенные изменения во многих проявлениях эпидпроцессов ВГВ и ВГС, что нашло отражение в основных эпидемиологических характеристиках этих инфекций [55, 150, 157]. На фоне отчетливого снижения показателей заболеваемости острыми формами ГВ и ГС, роста уровня заболеваемости хроническими формами этих инфекций (особенно ГС) заметно изменился возрастной состав заболевших такими типами вирусных гепатитов (все более широким вовлечением в эпидпроцесс лиц 25-29 лет, 30-34 лет и 40—44 года). Существенные перемены произошли и в структуре путей передачи возбудителей этих инфекций. Резко возрос в последние годы удельный вес больных ГВ и ГС, у которых установлен парентеральный путь введения психоактивных препаратов, и одновременно заметно уменьшилась доля лиц, инфицированных половым путем. При этом продолжается сокращаться частота внутрибольничного заражения ВГВ и ВГС. Все вышеперечисленное диктует необходимость проведения углубленного анализа сложившихся новых эпидемиологических особенностей этих инфекций, в целях совершенствования системы эпиднадзора за ВГВ и ВГС. Значение изучения этих особенностей в Новгородской области особенно важно, так как позволяет разработать и осуществлять мероприятия по улучшению проведения комплекса мероприятий по борьбе с парентеральными вирусными гепатитами [19, 153, 177, 185].

Выявление РНК-содержащего вируса, установление его этиологической роли при ГС, внедрение в медицинскую практику диагностикумов, основанных на рекомбинантных вирусных белках, дали возможность приступить к изучению клинических, эпидемиологических и молекулярно-биологических аспектов данной проблемы [22, 154, 158].

Для диагностики ВГС-инфекции нами был отработан следующий диагностический алгоритм, включающий: выявление антител к структурным и неструктурным вирусным белкам, проведение качественного ПЦР-анализа (определение РНК вируса) и определение генотипа вируса гепатита С.

Ведущим маркером определения ВГС-инфекции в острой, хронической, скрытой форме является наличие анти-ВГС, выявляемых чаще в ИФА при использовании рекомбинантных вирусных белков. Сравнение данных ИФА и ПЦР показало, что у всех больных, имеющих в плазме крови anti-core-IgG HCV, было выявлено наличие РНК HCV. При этом у 15,0% пациентов обнаружение РНК HCV не сопровождалось выявлением a-core-IgG HCV. Этот факт можно объяснить существованием и распространением в последние годы в популяции ВГС мутантных штаммов вируса HCV, не распознаваемых стандартным набором исследований методом иммуноферментной диагностики. Знания о генетическом разнообразии циркулирующих вариантов важны для выработки стратегии надзора за вновь возникающими вариантами вируса гепатита С, для прогнозирования развития эпидемического процесса, выработки стратегии лечения, а также разработки профилактических и противоэпидемических мероприятий[159, 161, 163, 164, 189, 192,203].

Однако в настоящее время данные о генотипической структуре ВГС в Новгородской области и Великом Новгороде были единичными.

За период с марта 2005 года по сентябрь 2008 года было исследовано 2210 проб плазм крови пациентов с HCV-инфекцией. Определение анти-ВГС проводили с помощью тест-систем «РекомбиБест анти-ВГС Ig G, подтверждающий тест» и «РекомбиБест анти-ВГС-спектр» (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск). Генотипирование проводили методом ПЦР («FLASH», с использованием системы «ДНК-Технологии», Москва). г

В структуре генотипов ВГС доля отдельных субтипов варьирует от 0,3% (1а+2Ь и 2а+1Ь) до 45,3% (1Ь). Среди выявленных вариантов генотипов ВГС чаще встречаются субтипы 1Ь (45,3%) и За (25,1%). Как свидетельствуют полученные данные, в выборке превалирует генотип 1Ь, в убывающем порядке встречаются За, За+lb, la, 2а, la+lb, 2b, За+2Ь, За+1а, 1а+2Ь и 2а+1Ь. Наименьший процент регистрации приходился на сочетание генотипов За+1а, la+2b, 2а+1Ь.

В ходе исследования среди больных ВГС соотношение мужчин и женщин составляло: 1:1,2 в возрастных группах 25-29 и 35-39 лет, 1:1,7 в возрастных группах 15—19, 30-34 и 45—49 лет и 1:2,2 в возрастной группе 2024 года. При этом наибольшее число респондентов с ВГС приходится на возрастные группы 20—45 лет. Статистически достоверно установлено, что мужчины инфицируются чаще ВГС, чем женщины (Р< 0,001).

В проведенном исследовании было выявлено, что соотношение генотипов зависит от превалирующих путей и механизмов передачи вируса гепатита С в популяции. Основными путями передачи ВГС-инфекции в ; Новгородской области признаны: внутривенное введение наркотиков (47,1%) и половой путь (36,1%). На долю профессионального, внутрибольничного пути заражения приходится 7,0%. h

1 Наряду с предупреждением внутрибольничного инфицирования вирусом ГС, в условиях отсутствия вакцины, ведущим направлением профилактики этого заболевания является квалифицированное информирование населения (прежде всего молодежи), с целью достижения безопасного поведения, исключающего риск инфицирования вирусами парентеральных гепатитов и иммунодефицита человека, а также дальнейшее расширение масштабов борьбы с наркоманией [25, 170, 172, 176].

Многочисленными исследованиями установлена эпидемиологическая и клиническая значимость определения генотипа HCV, от которого зависит предсказание течения вирусного гепатита С и исход противовирусной терапии. Наиболее неблагоприятный прогноз и низкий процент ответа на противовирусную терапию имеет 1 тип вируса (как 1а, так и 1Ь), тогда как для 2,3,4 и т. д. типов прогноз благоприятный, хороший ответ на противовирусную терапию, низкий процент развития осложнений [28, 171, 181,227, 234].

В ряде исследований, проведенных с целью выявления связи между конкретным генотипом и фактором риска заражения ВГС, имеются данные о том, что генотип 1Ь достоверно чаще встречается среди лиц, которым проводилось переливание крови. Таким образом, можно говорить о том, что гемотрансфузии являются превалирующим путем передачи для генотипа 1Ь. В последние годы основным путем заражения ВГС становится использование внутривенных наркотиков. Среди лиц, употребляющих наркотические препараты внутривенно, достоверно чаще встречается генотип За. Следует ожидать, что доля генотипа За будет неуклонно расти, что уже нашло свое подтверждение в работе российских исследователей из Санкт-Петербурга [16,42].

Можно заключить, что эпидемиология ВГС меняется и, вероятно, со временем картина распределения генотипов будет несколько иной, что приведет к необходимости внесения изменений в выборе стратегии лечения ВГС.

Особое внимание необходимо обратить на изоляты вируса гепатита С, которые пока не удалось генотипировать имеющимися в нашем арсенале тест-системами.

Изучение генотипического разнообразия вируса гепатита С, циркулирующих на территории Новгородской области, и определение той роли, которую они играют в эпидемическом процессе, необходимы для выявления закономерностей распространения ВГС-инфекции, совершенствования диагностики гепатитов, разработки терапевтических и профилактических вакцин [187, 194, 216, 228, 242].

Главный санитарный врач России Г. Г. Онищенко в 2004 году обратил внимание на то, что «за последние годы во многих странах ГС занимает довольно большой удельный вес среди гепатитов с парентеральным механизмом передачи. Особую значимость в России в последние годы приобрел вирус гепатита С, имеющий в ряде регионов высокую распространенность, а генетическая неоднородность ВГС и высокая изменчивость вируса требует постоянного изучения» [42].

Таким образом рост заболеваемости парентеральными вирусными гепатитами в последние годы в связи с широким распространением среди подростков и молодежи психоактивных препаратов, расширением среди них неупорядоченных половых связей позволяет с достаточным основанием считать, что ВГВ, ВГС, ВГТ) приобрели в настоящее время характер социально обусловленных инфекций [42].

Полученные результаты исследования позволили сделать нам следующие выводы и дать практические рекомендации.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Кириллова, Екатерина Николаевна, Великий Новгород

1. Антонова, Т. В. Вирусные гепатиты в группах риска гемоконтактного инфицирования // Современные технологии диагностики и терапии инфекционных болезней: мат-лы науч. конф, 27—28 октября 1999 г. / ВМедА -СПб., 1999.-С. 15-16.

2. Апросина, 3. Г. Внепеченочные проявления ХГВ и ХГС / 3. Г. Апросина, В. В. Серов // Новые направления в гепатологии: тез. докл. междунар. Фальк Симпозиума № 92. СПб., 1996. - С. 28.

3. Афанасьев, А. Ю. ИФА-диагностика в разграничении гепатита С острого и хронического течения / А. Ю. Афанасьев, С. В. Зубов, Ю. Е. Жданов и др. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1995. - № 3. - С. 12.

4. Балаян, М. С. Энциклопедический словарь вирусные гепатиты / М. С. Балаян, М. И. Михайлов; 2-е изд., перераб. и доп. - М., 1999. — 301 с.

5. Блюм, Е. А. Гепатит С: Современное состояние проблемы // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. — 2005. № 1. — С. 20-25.

6. Бобкова, М. Р. Генетические варианты вируса гепатита С среди ВИЧ-инфицированных потребителей наркотических препаратов в России / М. Р. Бобкова, Е. И. Самохвалов, А. В. Кравченко и др. // Вопросы вирусологии. -2002. — № 3. С. 15-20.

7. Бобкова, М. Р. Молекулярно-эпидемиологическая характеристика основных очагов эпидемии ВИЧ-инфекции среди наркоманов в России / М. Р. Бобкова, А. Ф. Бобков, Е. В. Буравцова и др. // Вопросы вирусологии. -1999. № 44. - С. 220-224.

8. Борисов, Л. Б. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. — М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2001. -С. 556-563.

9. Борзанова, М. В. Вирусные гепатиты В и С у больных хронической почечной недостаточностью, находящихся на лечении в центрах программного гемодиализа: дис. . канд. мед. наук / М. В. Борзанова. — СПб., 2003. 125 с.

10. Воронкова, Н. В. Хронический гепатит С с нормальным уровнем трансаминаз: клиника, диагностика, тактика ведения больных: автореф. дис. . канд. мед. наук / Н. В. Воронкова. — М., 2002. — 25 с.

11. Горбунова, В. Н. Введение в молекулярную диагностику и генотерапию наследственных заболеваний / В. Н. Горбунова, В. С. Баранов. — СПб.: Специальная литература, 1997. С. 278-289.

12. Дунаева, Н. В. Клинико-морфологическая характеристика гломерулонефритов у больных хроническим гепатитом С: дис. . канд. мед. наук / Н. В. Дунаева. СПб., 2008. - 144 с.

13. Ершова, О. Н. Современные проявления эпидемиологического процесса ГС, активность естественных путей передачи и совершенствование профилактики этой инфекции: дис. . д-ра. мед. наук / О. Н. Ершова. — М; 2006. 300 с.

14. Жданов, К. В. Латентные формы вирусных гепатитов В и С у лиц молодого возраста: дис. д-ра. мед. наук / К. В. Жданов. — СПб., 2000. — 330 с.

15. Жербанова, Л. В. Эпидемиологические особенности вируса гепатита С у госпитализированных больных / Л. В. Жербанова, И. В. Малов, Е. Д.

16. Савилов // Всероссийская научная конференция «Клинические перспективы в инфектологии», 17-18 октября 2001 г. СПб., 2001. - С. 16-19.

17. Знойко, О. О. Выявление РНК вируса гепатита С методом ОТ-ПЦР в острую и хроническую фазы инфекции // Гепатология. 2003. - № 2. - С. 16-21.

18. Знойко, О. О. Клинико-патогенетические особенности естественного течения ВГС и оптимизация лабораторно-диагностических критериев исходов заболевания: автореф. дис. . .д-ра мед. наук / О. О. Знойко. М, 2008.-23 с.

19. Ильина, Е. Н. Особенности генодиагностики трансфузионных вирусных гепатитов // Гепатология. № 1. - 2003. - С. 28-36.

20. Ильина, Е. Я. Новый подход в генотипировании вируса гепатита С / Е. Я. Ильина, А. Г. Гущин, В. М. Говорун, и др. // Эпидемиология и инфекционные болезни. 1999. ~№ 5. - с.23-26.

21. Иванов, А. В. Молекулярная биология вируса гепатита С / А. В. Иванов, А. О. Кузякин, С. Н. Кочетков // Успехи биологической химии. -2005. -Т. 45, № 1 -С.37-86.

22. Исаева, О. В. Генотипирование вируса гепатита С среди больных острым и хроническим гепатитом С. Гепатит С // Тез. науч.-практич. конф. «Гепатит С (Российский консенсус)», 26-27 сентября 2000 г. М., 2000. - С. 53-55.

23. Исаева, О. В. Разработка системы внешней оценки качества лабораторных исследований при диагностике вирусных гепатитов В и С: автореф. дисс. канд. биол. наук / О. В. Исаева. — М., 2003. С. 5-9.

24. Козлова, А. В. Клинические особенности и исходы острого гепатита С при разных генотипах вируса: дис. . канд. мед. наук / А. В. Козлова. М., 1998.-128 с.

25. Лобзин, Ю. В. Особенности течения гепатита С у наркоманов / Ю. В. Лобзин, С. Л. Мукомолов, В. С. Чирский и др. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. —2000. — Т. 10, № 1 — С.8.

26. Лобзин, Ю. В. Клинико-морфологическая характеристика острого микст-гепатита В+С / Ю. В. Лобзин, Д. А. Гусев И Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 2000. - Т.10, № 1. -С.11.

27. Львов, Д. К. Распространение генотипов вируса гепатита С, циркулирующих на территориях Северо-Западной и Центральной частей России / Д. К. Львов, С. Миширо, Н. А. Селиванов и др. // Вопросы вирусологии. — 1995. № 6. - с. 251-253.

28. Львов, Д. К. Географическое распространение вируса гепатита С и его генотипов / Д. К. Львов, П. Г. Дерябин // Вопросы вирусологии. — 1997. № 5.-С. 196-199.

29. Мансуров, X. X. Хронические гепатиты В и С (основы диагностики и противовирусной терапии) / X. X. Мансуров, Г. С. Мироджов, Ф. X. Мансурова // Проблемы гастроэнтерологии. 2004. - № 1. — с. 15-22.

30. Маянский, А. Н. Диагностика гепатита С / А. Н. Маянский, А. П.

31. Обрядина, Т. И. Уланова и др. / НПО «Диагностические системы».1 >

32. Информационные материалы. — Н. Новгород, 2004. — С.16.

33. Медицинская микробиология // Гл. ред. В. И. Покровский, О. К. Поздеев. М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1999. - С. 465-472.

34. Михайлов, М. И. Лабораторная диагностика гепатита С (Серологические маркеры- и методы их выявления) // Вирусные гепатиты: достижения и перспективы. Информационный бюллетень — 2001. — № 12 (2). С. 8-18.

35. Мукомолов, С. Л. Разработка и использование метода серотипирования для определения циркулирующих генотипов вируса гепатита С / С. Л. Мукомолов, С. А. Колобов, И А.Созина и др. // Новости фармакотерапии. -1997.-Т. 3-4.-С. 29.

36. Потехин, О. Е. Факторы, влияющие на течение инфекции вирусом гепатита С. Современное состояние проблемы // Новости фармакотерапии. — 2001.-С.156.

37. Рейзис, А. Р. Госпитальные инфекции в современной медицине. — М.: Руди-Барс, 1993. С. 260-269.

38. Садикова, Н. В. Определение корреляционной связи между заболеваемостью хроническим вирусным гепатитом В и распространенностью наркомании на отдельных территориях Российской

39. Федерации / Н: В. Садикова Л. Е. Кузина, И. А. Варламова и др. // Вирусный гепатит В — диагностика, лечение и профилактика (к 40-летию открытия HBsAg): тез. докл. рос. науч.-практ. конф. с междунар. участием, 19-20 мая 2004 г. М., 2004.- С. 162.

40. Саринсон, С. Н. Особенности патогенеза и течения гепатита С. Оптимальные сроки лечения интерфероном // Вирусные гепатиты. — 1998. — №1(2).-С. 3-8.

41. Сатарова, М. И. Хронический вирусный гепатит С (некоторые аспекты пато морфогенеза, диагностики и клинического течения): дис .канд. мед. наук / М. И. Сатарова. - Душанбе, 2006. — 136 с.

42. Серов, В. В. Современная классификация хронических гепатитов // Русский медицинский журнал. 1996. - Т. 4. - № 2. - С. 179-183.

43. Флоряну, А. И. Клинико-иммунологические аспекты и эффективность противовирусной терапии у больных хроническим вирусом гепатита С: дис. . канд. мед. наук/ А. И. Флоряну. -М, 2007. 136 с.

44. Шахильдян, И. В. Парентеральные вирусные гепатиты (эпидемиология, диагностика, профилактика) / И. В. Шахильдян, М. И. Михайлов, Г. Г. Онищенко М., 2003. - 384 с.

45. Шевченко, В. А. Генетика человека: 2-е изд. / В. А. Шевченко, Н. А. Топорнина, Н. С. Стволинская М., 2004. — С. 71.

46. Шулакова, Н. И. Характеристика современных проявлений эпидемиологических процессов острых и хронических форм гепатитов В и С, оценка реализации широкомасштабной программы вакцинопрофилактики НВУ-инфекции в мегаполисе: дис. . канд. мед. наук

47. Н. И. Шулакова. М., 2005. - 135 с.

48. Ястребова, О. Н. Гепатит С: Информ.-метод. пособие / О. Н. Ястребова. — 2-е изд., перераб. — Кольцово, 2005. — 36 с.

49. Alberti, A. Diagnosis of hepatitis С facts and perspectives / A. Alberti // J. Hepatol. 91. - Vol. 12, N 1. - P. 279-282.

50. Abe, F. Effectiveness of interferon, glycyrrhizin combination there in patients with chronic hepatitis С / F. Abe // Nippon Rinsho. 1994. - Vol. 52, N 7. - P. 1817-1822.

51. Alter, H. J. Chronic consequences of поп- А. поп- В hepatitis / H. J. Alter // Current Perspectives in Hepatology. Seeff L. В., Lewis J. H, Plenum Publishing. -New York, 1989.-P. 83-97.

52. Asabe, S. I. The N-terminal region of hepatitis С virus-encoded NS5A is important for NS4A-de-pendent phosphorylation / S. I. Asabe, Y. Tanji, S. Saioh et al. // J. Virol. 1997. - Vol. 71, N 1. - P. 790-796.

53. Arrieta, J. J. In situ detection of hepatitis С virus RNA in salivary glands / J. J. Arrieta, E. Rodriguez-Inigo, N. Ortiz-Movilla et al. // Am. J. Pathol. 2001. -Jan; N 158 (1) - P. 259-264.

54. Barrera, J. M. Improved detection of anti-HCV in post-transfusion hepatitis by a third-generation ELISA / J. M. Barrera, B. Francis, G. Ercilla et al. // Vox Sang.-1995.-Vol. 69.-P. 15-18.

55. Basu, A. Functional properties of a 16 kDa protein translated from analternative open reading frame of the core-encoding genomic region of hepatitis C virus / A. Basil, R. Steele, R. Ray // J. Gen. Virol. 2004. ~ Vol. 85, N 8. - P. 2299-2306.

56. Bataller. R. Hepatitis C virus core and nonstructural proteins induce fibrogenic effects in hepatic stellate cells / R. Bataller, Y. Paik, J. N. Lindquist et al. // Gastroenterology. 2004. - Vol. 126, N 2. - P. 529-540.

57. Bell. H. Prevalence of hepatitis C genotypes among patients chronic hepatitis C in Norway / H. Bell, K. Helium, S. Harhtung et al. // Scand. J. Infec. Dis. -1996. -V. 28, N 4. P. 357-359.

58. Berth, H. Cellular binding of hepatitis C -virus envelope glycoprotein E2 requires cell surface heparan sulfate / H. Berth, C. Scháfer, M Adah et al. // J. Biol. Chem. 2003. - Vol. 278, N 42. - P. 41003-41012.

59. Boyer. N. Pathogenesis, diagnosis and management of hepatitis C / N. Boyer, P. Marceline // Ibid. 2000. - Vol. 32, N 1. - P. 98-112.

60. Bukh, J. Genetic heterogenety of hepatitis C: quasispecies and genotypes / J. Bukh, R. H. Miller, R. H. Purcell // Semin. Liv. Dis. 1995. - V.15. - N 1. - P. 41-63.

61. Bukh, J. At least 12 genotypes of hepatitis C virus predicted by sequence analysis of the putative El of isolates collected worldwide / J. Bukh, R. H. Miller, R. H. Purcell // Biohemistry. 1993. - Vol. 90, N 9. - P. 8234-8238.

62. Bunnsch, B. Cell entry of hepatitis C virus requires a set of co-receptors that include the CD81 tetrespanin and the SR-B1 scavenger receptor / B. Bunnsch, A. Vitelli, C. Granier et al. // J. Biol. Chem. 2003. - Vol. 278, N 43. - P. 4162441630.

63. Brede, H. D. Vielfolt der hepatitis c virusstamme / H. D. Brede // Rioborum. -1993.-Vol. 16.-N6.-P. 225.

64. Cai. Z. Effect of mutations of the initiation nucleotides on hepatitis C virus RNA replication in the cell / Z. Cai, T. J. Liang, G. Luo // J. Virol. 2004. - Vol. 78, N7.-P. 3633-3643.

65. Castillo, A. Correlation between lymphocyte and monocyte function in patients with chronic non-A, non-B hepatitis (letter) / A. Castillo, M. L. Suhira, M. P. Civeira et al. // Am. J. Gastroenterol. 1989. - Vol. 84. - P. 978-982.

66. Chayama, K. Serial amino acid sequence change in the hypervariable region of hepatitis C virus / K. Chayama // Nippon-Rinscho. 1994. - Vol. 52. - P. 1716-1720.

67. Chayama, K. Genotyping Hepatitis C Vims by type-specific primers for PCR based on NS5 region / K. Chayama 11 Hepatitis C Protocols, Edited by Johnson Yiu-Nam Lau, MD, Humana Press, 1998. P. 165-173.

68. Chen, P. J. Immunoglobulin M antibodies against hepatitis C virus antigens: significance and applications / P. J. Chen, L. H. Hwang, L. Y. Chang et al. // Gastroenterol. Jpn. 1993. - May; 28. - P. 67-70.

69. Cheng, J. C. Specific interaction between the hepatitis C virus NS5B RNA polymerase and the 3' end of the viral RNA / J. C. Cheng, M. F. Chang, S. C Chang // J. Virol. 1999. -^Vol. 73, N 8. —P. 7044-7049.

70. Chemello, L. Randomized trial comparing three different regimens of alfa-2a-interferon in chronic hepatitis C. The TriVeneto Viral Hepatitis Group / L. Chemello, P. Bonetti, L. Cavalleto // Hepatology. 1995. - Vol. 22, N3. - P. 700-706.

71. Cho, S. W. In situ detection of hepatitis C virus RNA in liver tissue using a digoxigenin-labcled probe created during a polimerase chain reaction / S. W. Cho, S. C. Hwang, D. S. Han et al. // J. Med. Virol. 1996. - Vol. 48, N 3. - P. 327333.

72. Choo, Q. Isolation of a CDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis genome / Q. Choo, G. Kuo, A. Weiner et al. // Science. 1989. -Vol. 244.-P. 359-362.

73. Clarke B. Molecular virology of hepatitis C virus: review / B. Clarke // J. Gen. Virol. 1997. - Vol. 78, N 10. - P. 2397-2410.

74. Cilia, G. Genotyping of hepatitis C virus isolates from Basque Country, Spain

75. G, Cilla, M. Garcia-Bengoechea, E. Perez-Trallero et al. // Epidemiol. Infec. — 96. Vol. 117. - № 3. - p. 533-536.

76. Cooremon, M. P. HCV biological and clinical consequences of hepatiti C heterogenety / M. P. Cooremon, E. M. E. Schoohdermork von deven // Scand. J. Gastroenterol. Dis. - 1996. - V.31. - Suppl.-N 218. -P. 106-115.

77. Crotta, S. Inhibition of natural killer cells through engagement of CDS 1 by the major hepatitis C virus envelope protein / S. Crotta, A. Stilla, A. Wack et al. // J. Exp. Med. 2002. - Vol. 195, N 1. - P. 35-41.

78. Cuthbert, J. A. Hepatitis C: progress and problems / J. A. Cuthbert // Clin. Microbiol. Rev. 1994. - Vol. 7, N 4. - P. 505-532.

79. Davidson, F. Survey of major genotypes and subtypes of hepatitis C virus using RFLP of sequences amplified from the 5' non-coding region / F. Davidson, P. Simmonds, J. C. Ferguson et al. // J. Gen. Virol. 1995. - 76. - P. 11971204.

80. De Francesco, R. New therapies on the horizon for hepatitis C: are we close? / R. De Francesco, C. Rice // Clin. Liver Dis. 2003. - Vol. 7. - P. 211-242.

81. De Francesco, R. Approaching a new era for hepatitis C virus therapy: inhibitors of the NS3-4A serine protease and the NS5B RNA-dependent RNA polymerase / R. De Francesco, L. T omey, S. Altamura et al. // Antiviral Res. — 2003.-Vol. 58,N1.-P. 1-16.

82. Demettre E. Ribonuclease L proteolysis in peripheral blood mononuclear cells of chronic fatigue syndrome patients / E. Demettre // J. Biol. Chem. 2002. — Vol. 277.-P. 35746-35751.

83. De Mirti, M. S. HCV-associated liver cancer without cirrhosis / M. S. De Mirti, R. Poussin, P. Baccarini et al. // Lancet. 1995. - V. 345 (8947). - P.413.415.

84. Doule, J. J. Isolation of DNA from tissue / J. J. Doule, J. L. Doule // Focus. -1990.-N. 12.-P. 13-15.

85. Enomoto, N. Mutations in the non-structural protein 5a gene and response to interferon in patients with chronic hepatitis C virus lb infection / N. Enomoto, I. Sakuma, Y. Asahina et al. // N. Enel. J. Med. 1996. - Vol. 334, N 2. - P. 7782.

86. Esteban, J. L. Hepatitis C: Molecular biology, pathogenesis, epidemiology, clinical features and prevention / J. L. Esteban, J. Genesca, H. J. Alter // Progress in Liver Diseases. Chapter. 1996. - N 12. - P.253-282.

87. Fabrizi, F. Hepatitis C virus genotypes in chronic dialysis patients / F. Fabrizi, G. Lunghi, I. Guarnori et al. // Nefrol. Dial. Transplant. 1996. - V.l 1. - N 4. -P. 679-683.

88. Feray, C. Reinfection of liver graft by hepatitis C virus after liver transplantation / C. Feray, D. Samuel, V. Thiers et al. II J. Clin. Invest. 1995. -Vol. 89.-P. 1361-1366.

89. Feuch, H. H. Distribution of genotypes and response to alfa-interferon in patients with hepatitis C virus infection in Germany / H. H. Feuch, B. Zollner, M. Schroter et al. // Eur. J.Clin. Microbiol. Infect. Dis. 1996. - Vol. 15. - N 2. - P. 128-132.

90. Feuch, H. H. The influence of age on the prevalence of hepatitis C virus subtypes la and lb / H. H. Feuch, B. Zollner, M. Schroter et al. // J. Infect Dis. -1997. Vol. 175, N 3. - P. 685-686.

91. Gil, B. Hepatic and extrahepatic HCV RNA strands in chronic hepatitis C: different patterns of response to interferon treatment / B. Gil, C. Quian, J. I. Riem-Boj et al. // Hepatology. 1993. - Vol. 13. - P. 1050-1054.

92. Gonzalez-Peralta, R. P. Optimization for the detection of hepatitis C virus antigens in the liver / R. P. Gonzalez-Peralta, J. W. Fang, G. L. Davis et al. // J. Hepatol. 1994. - Jan; 20(1). - P. 143.

93. Goeser, T. Bedeutung der genotypen bei chronischer hepatitis C virus infection und hepatitis C virus bedingster Leberzirrhose in deutschland / T. Goeser, U. Tox, M. M. Muller et al. // Dtsh. Med. Wochenschr. 1995. - Vol. 120, N 31-32. - P. 1070-1073.

94. Grakoui, A. Characterization of the hepatitis C virus-encoded serine proteinase: determination of proteinase-dependent polyprotein cleavage sites / A. Grakoui, D. McCourt, C. Wychowski et al. // J. Virol. 1993. - Vol. 67, N 5. -P. 2832-2843.

95. Gremion, C. Cytotox T lymphocytes derived from patients with chronic hepatitis C virus infection kill bystander cells via Fas-FasL interaction / C. Gremion, B. Grabscheid, B. Walk et al. // J. Virol. 2004. - Vol. 78, N 4. - P. 2152-2157.

96. Greene, W. K. Prevalence of hepatitis c virus sequence in souht — east Asia / W. K. Greene, M. K. Cheong et al. // J.Gen. Virol. 95. - Vol.76. - N 6. - P. 211-215.

97. Guadagnino, V. Identification of HCV genotypes in the Calabria's region / V. Guadagnino, B. Carolio, A. Zingone et al. // Pathol. Biol. Paris. Dis. 1996. -Vol. 48. - N 5. - P. 464-467.

98. Hadiock, K. C. Cross-reactivity and clinical impact of the antibody response to hepatitis C virus second envelope glycoprotein (E2) / K. C. Hadiock, R. Gish,

99. J. Rowe et al. // J. Med. Virol. 2001. - Vol. 65, N I. - P. 23.

100. Hagivara, H. Quantitative-analysis of hepatitis C virus — RNA in serum during interferon Alfa therapy / H. Hagivara, N. Hayashi, E. Mita et al. // J. Gastroenterology -1993. Vol. 104. - P. 877.

101. Harrison, T. J. The Molecular Medicine of Viral Hepatitis / T. J. Harrison, A. J. Zuckerman. Chichester, 1997. - P. 254-257.

102. He, Y. Subversion of cell signaling pathways by hepatitis C virus nonstructural 5A protein via interaction with Grb2 and P85 phosphatidylinositol 3-kinase / Y. He, H. Nakao, S. L. Tan et al. // J. Virol. 2002. - Vol. 76, N 18. -P. 9207-9217.

103. He, Y. The regulation of hepatitis C virus (HCV) internal ribosome-entry site-mediated translation by HCV replicons and nonstructural proteins / Y. He, W. Yan, C. Coito et al. // J. Gen. Virol. 2003. - Vol. 84, N 3. - P. 535-543.

104. Hijikata, M. Hypervariable regions in the putative glycoprotein of hepatitis C virus / M. Hijikata, N. Kato, Y. Ootsuyama et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun.-1991.-Vol. 175.-P. 220-228.

105. Hjalmarsson, S. Sequence evolution and cross-reactive antibody responses to hypervariable region 1 in acute hepatitis C virus infection / S. Hjalmarsson, J. Blomberg, L. Grillner et al. // J. Med. Virol. 2001. - Vol. 64, N 2. - P. 117124.

106. Houghton, M. Molecular biology of the hepatitis C viruses: implications for diagnosis and control / M. Houghton, A. Weiner et al. // Hepatology. 1991. -Vol. 14.-P. 381-388.

107. Hwang, S. J. Randomised controlled trial of recombinant interferon-alfa 2b in the treatment of Chines patients with chronic hepatitis C / S. J. Hwang, C. Y. Chan, R. H. Lu et al. // J. Inerferon Cytokine Res. 1995. - Vol. 15. - P. 611616.

108. Ishii, K. Expression of hepatitis C virus NS5B protein: characterization of its RNA polymerase activity and RNA binding / K. Ishii, Y. Tanaka, C. C. Yap et al. // Hepatology. 1999. - Vol. 29, N 4. - P. 1227-1235.

109. Ishido, S. Complex formation of NS5B with NS3 and NS4A proteins of hepatitis C virus / S. Ishido, T. Fujita, H. Hotta // Biochem. Bio-phys. Res. Commun. 1998. - Vol. 244, N 1. - P. 35-40.

110. Kao, J. H. Serotyping hepatitis C virus chronic type C hepatitis in raiwan correlation with genotypes / J. H. Kao, H. H. Lio, P. J. Chen et al. // J.Gastroenterol. 1996. - V.31. - N 2. - P. 224-227.

111. Kitamura, A. Induction of the human gene for p44, a hepatitis C associated microtubular aggregate protein, by interferon-alfa/beta / A. Kitamura, K. Takahashi, A. Okajima et al. // Eur. J. Biochem. 1994. - Vol. 224. - P. 877883.

112. Kobayashi, M. Natural history of hepatitis C / Mi Kobayashi, E. Tanaka, T. Sodeyama et al. // Intervirologe. 1994. - Vol.37. -N 2. - P. 101-107.

113. Koff, R. S. Exstrahepatitic raanifectashion of hepatitis C and the association with alcoholic liver disease / R. S. Koff, J. L. Dienstag // Semin. Liv. Dis. 1995. -Vol. 81.-Nl.-P. 101-109.

114. Kronenberger, B. Interferon alfa down-regulates CD81 in patiens with chronic hepatitis C / B. Kronenberger, B. Ruster, R. Elez et al. // Hepatology. -2001.-Vol. 33, N6.-P. 1518-1526.

115. Krawczynski, K. Hepatitis C virus antigen in hepatocytes: immunomorphologic detection and identification / K. Krawczynski, M. J. Beach, D. W. Bradley et al. // Gastroenterology. 1992 Aug; 103 (2) - P. 622-629.

116. Lam N. P. Hepatitis C: natural history, diagnosis, and management / N. P. Lam // Am. J. lilth Syst. Pharm. 1999. - Vol. 56, N 10. - P. 961-973.

117. Lareu, R. R. Rapid and sensitive genotyping of hepatitis C virus by singlestrand conformation polymorphism / R. R. Lareu, R. N. Swanson, S. Fox // J. Virol. Meth. 1997. - Vol. 64. - P. 11-18.

118. Leckie, G. Sensitive quantition of hepatitis C virus RNA using an Abbott LCx assay / G. Leckie, K. Abravaya, et al. // Antiviral Therapy, 2000; 5 (Suppl. 1), 10th International, Symposium on Viral Hepatitis and Liver Disease. — C. 6.

119. Lee, K. J. The C-terminal transmembrane domain of hepatitis C virus (HCV) RNA polymerase is essential for HCV replication in vivo / K. J. Lee, J. Choi, M. Lai // J. Virol. 2004. - Vol. 78, N 7. - P. 3739-3802.

120. Lemon S. M. Targeting the Acilles' heel of hepatitis C virus / S. M. Lemon // Hepatology. 1997. - Vol. 25. -P. 1035-1037.

121. Lenzi, M. Type 2 autoimmune hepatitis and hepatitis C virus infection / M. Lenzi, G. Ballardini, M. Fusconi et al. // Lancet 1990. - Vol. 335. -P. 258259.

122. Lerat, H. Specific detection of hepatitis C minus strand RNA in hematopoetic cells / H. Lerat, F. Berby, M. A. Trabaud et al. // J. Clin. Invest. — 1996. Vol. 97, N 3. -P. 845-851.

123. Lin, C. Processing in the hepatitis C virus E2-NS2 region: identification of p7 and two distinct E2-specific products with different C termini / C. Lin, B. D. Lindenbach, B. A. Pragai et al. // J. Virol. 1994. - Vol. 68, N 8. - P. 50635073.

124. Lin, C. The hepatitis C virus NS4A protein: interactions with the NS4B and NS5A proteins / C. Lin, J. W. Wu, K. Hsiao, M. S. Su // J. Virol. 1997. - Vol. 71,N9.-P. 6465-6471.

125. Lozach, P. Y. DC-SIGN and L-SIGN are high affinity binding receptors forhepatitis C virus glycoprotein E2 / P. Y. Lozach, H. Lorrat-Jacob, A. De Lacroix de Lavalette et al. // J. Biol. Chem. 2003. - Vol. 278, N 22. - P. 20358-20366.

126. Loria, A. Chronic virul hepatitis C. Anatomiclinical and biological correlations / A. Loria, P. Giral, L. Serfaty et al. // Gastroenteralogie clinique at Biologique. 95. - V. 19, N 5. - P. 508-513.

127. Lvov, D. K. Scientific Reports from Members of the Europe an Network «Man Against Virus» / D. K. Lvov. Venezia, 1994. - Vol. 17. - P. 139-205.

128. Louie, R. E. Inactivation of hepatitis C virus in low pH intravenous immunoglobulin / R. E. Louie, C. J. Galloway, M. L. Dumas et al. // S. Biologicals. 1994. - Vol. 22, N 1. - P. 13-19.

129. Ludwig, I. Hepatitis C virus targets DC-SIGN and L-SIGN to escape lysosomal degradation /1. Ludwig, A. Lekkerkerker, E. Depla et al. // J. Virol. -2004. Vol. 78, N 15. - P. 8322-8332.

130. Lunel, F. Virus de hépatite C: Diagnostic virologque / F. Lunel, J. M. Paulotsery // Pathoel. Biol. 95. - V.43, N 8. - P. 681-690.

131. Magrin, S. Is autoimmune chronic active hepatitis an HCV-related disease? / S. Magrin, G. Craxi, C. Fiorentino et al. // J. of Hepatology. 1991. - Vol. 13. -P. 56-60.

132. Malaguarnera, M. An increased cardiac risk during IFN treatment / M. Malaguarnera // Hepatology. 1995. -P. 50.

133. Manzm, A. Quantification of hepatitis C virus genome molecules in plasma samples / A. Manzm, P. Bagnarelli, S. Menzo et al. // J. Clin. Microbiol. 1994. - Vol. 32, N 8. - P. 1939-1944.

134. Manss, M. P. Viral induction of autoimmunity: mechanisms and examples in Hepatology / M. P. Manss, P. Obermayer-Straub et al. // J. Viral.Hep. 1997.1. Vol. 4.-P. 42-47.

135. Marraferro, V. Prevention of hepatocellular carcinoma recurrence with ainterferon after liver resection in HCV cirrhosis / V. Marraferro, R. Romito, M. Schiaro et al. // Hepatology. 2006. - Dec., N 44 (6). - P. 1543-1554.

136. Matsumoto, M. Homotypic interaction and multimerization of hepatitis C virus core protein / M. Matsumoto, S. B. Hwang, K. S. Jeng et al. // Virology. — 1996. Vol. 218, N 1. -P. 43-51.

137. Mazalla G., Accogli E., Sottili S. Alfa-interferon treatment may prevent hepatocellular carcinoma in HCV-related liver cirrhosis / G. Mazalla, E. Accogli, S. Sottili // J. Hepatol. 1996. - Vol. 24. - P. 141-147.

138. Mclntyre N. Clinical presentation of acute viral hepatitis / N. Mclntyre // Brit. Med.Bulletin. 1990. - Vol. 46. - P. 533-547.

139. McMahon, F. Geographical distribution of hepatitis C virus genotypes in blood donors: an international collaborative survey / F. McMahon, P. L. Yap, B. C. Dow et al. // International Congress of Virology. 9-th: Abstracts. Glasgow, 1993.-P. 316.

140. McMahon, B. J. Hepatitis B-related sequelae: Prespective study in 1400 hepatitis B surface antigen-positive Alaska native carriers / B. J. McMahon, S. R. Alberts, R. B. Wainwright et al. // Arch. Inter. Med. -1990. Vol. 150. - P. 1051-1054.

141. Mellor, J. Low level or absent in vivo replication of hepatitis C virus and hepatitis G virus. GB virus C in peripheral blood mononuclear cells / J. Mellor, G. Haydon, C. Blair et al. // J. Gen. Virol. 1998. - Vol. 79, N 4. - P. 705-714.

142. Mizushima, H. Two hepatitis C virus glyecprotein E2 products with different C termini / H. Mizushima, M. Hijikata, S. Asabe et al. // J. Virol. 1994. - Vol. 6S, N 10. - P. 6215-6222.

143. Miller, R. H. Hepatitis C virus shares amino acids with pestiviruses and flaviviruses as well as members of two plant virus supergroups / R. H. Miller, R. H. Purcell // Proc. Nat. Acad. Sci. 1990. - Vol. 87. - P. 2057-2061.

144. Minohara, Y. Relation between serum hepatitis C virus RNA levels and efficacy of interferon-beta therapy / Y. Minohara, T. Kato, K. Kanki et al. // Acta. Paediatr. Jpn. 1995. -Vol.37, N 4. - P. 530-533.

145. Moldvay, J. Detection of hepatitis C virus RNA in peripheral blood mononuclear cells of infected patients by in situ hybridization / J. Moldvay, P. Deny, S. Pol et al. // Blood, 1994. - Vol. 83, N 1. - 269-273.

146. Muratori, B. L. Quantification of hepatitis C virus infected peripheral blood mononuclear cells by in situ reverse transcriptase chain reaction / B. L. Muratori, D. Gibellini, M. Lenzi et al. // Blood. 1996. - Vol. 88, N 7. - P. 2768-2774.

147. Morozov, V. Homologous recombination between different genotypes of hepatitis B virus / V. Morozov, M. Pisareva, M. Grudinin // J. Gen. Virol. — 2000. -Vol. 260. P. 55-65.

148. Muratori, L. Interferon therapy in liver /kidnei microsomal antibody type 1 positive patients with chronic hepatitis C / L. Muratori, M. Lenzi, M. Cataleta et al. // J. Hepatol. -1994. Vol. 21, N 2. -P. 199-203.

149. Nadir, A. Type 2 cryoglobulinemia and Hepatitis C virus: its recognition and treatment / A. Nadir, J. W. Smith, B. Matter // J. Okla State Med Assoc. 1994. -Vol. 87, N 10. - P. 449-453.

150. Neddermann, P. The nonstructural proteins of the hepatitis C virus: structure and functions / P. Neddermann, L. Tomei, C. Steinkuhler et al. // J. Biol. Chem. 1997. - Vol. 378, N 6. - P. 469-476.

151. Nishiguchi, S. The nonstructural proteins of the hepatitis C virus: structure and functions / S. Nishiguchi, T. Kuroki, H. Claeys et al. // J. Infect. Dis. 1995. -Vol. 171.-P. 1380-1381.

152. Nolandt, O. Randomised trial of effects of interferon-alfa on incidence ofhepatocellular carcinoma in chronic active hepatitis C with cirrhosis / O. Nolandt, V. Kern, S. Nacatani et al. // Lancet. 1995. - Vol. 346. - P. 1051-1055.

153. Nouri Aria, K. Detection of genomic and intermediate replicative strands of hepatitis C virus in liver tissue by in situ hybridization / K. Nouri Aria, R. Sallie, D. Sangar et al. // J. Clin. Invest. 1993. - Vol.91, N 5. - P. 2226-2234.

154. Nousbanni, J. B. Hepatitis C Virus Type lb (II) Infection in France and Italy / J. B. Nousbanni, S. Pol, B. Nalpas et al. // Ann. Intern. Med. 1995. - Vol. 122.-P. 161-168.

155. Oh, J. W. A recombinant hepatitis C virus RNA-dependent RNA polymerase capable of copying the full-length viral RNA / J. W. Oh, T. Ho, M. M. Lai // J. Virol. 1999. - Vol. 73, N 9. - P. 7694-7702.

156. Okabe, M. Chronic variant of myocarditis associated with hepatitis C virus infection / M. Okabe, K. Fukuda, K. Arakawa // Circulation. 1997. - Vol. 96, Nl.-P. 22-24.

157. Okamoto, H. Characterization of the genomic sequences of type V (or 3 a) hepatitis C virus isolates and PCR primers for specific detection / H. Okamoto, H. Tokita, M. Sakamoto et al. // Ibid. 1993. - Vol. 74. - P. 2385-2390.

158. Orland, J. R: Acute hepatitis C / J. R. Orland, T. L. Wright, S. Cooper // Hepatology.-2001.-Vol. 33,N2.-P. 321-327.

159. Pawlotsky, J. M. Is the detection of anti-hepatitis C virus core IgM influenced by the presence of serum rheumatoid factor / J. M. Pawlotsky, J. Remire, F. Darthuy // J. Med. Virol, 1995. - Jan; 45 (1). - 68-70.

160. Pawlotsky, J. M. Relationship between hepatitis C virus genotypes and sources of infection in patients with chronic hepatitis C / J. M. Pawlotsky, L. Tskiris, F. Roudot-Thoraval et al. // J. Infect Dis. 95. - Vol.171, N 6. - P. 1607-1610.

161. Petracca, R. Structure-function analysis of hepatitis C virus envelope CDS 1 binding / R. Petracca, F, Falugi, G. Galli et al. // J. Virol. 2000. - Vol. 74, N 10.-P. 4824-4830.

162. Peterson, J. Detection of hepatitis C core antigen in the antibody negative «window» phase of hepatitis C infection / J. Peterson, G. Green, K. Lida et al. // Vox Sang. 2000 - 78 (2) - 80-85.

163. Pereira, L. M. Hepatitis C virus infection in Schistosomiasis mansoni in Brasil / L. M. Pereira, M. C. Melo, M. J. Saleh // J. Med. Virol. 1995. - Vol. 45, N4.-P. 423^128.

164. Pohlmann, S. Hepatitis C virus glycoproteins interact with DC-SIGN and DC-SIGNR / S. Pohlmann, J. Zhang, F. Baribaud et al. // J. Virol. 2003. - Vol. 77, N7.-P. 4070-4080.

165. Pol, S. The chanding relative prevalence of hepatitis C virus genotypes: Evidence in hemodialyzed patients and kidney recipients / S. Pol, V. Thiers, J. B. Nousbaum et al. // Gastroenterology. 1995. - Vol.108, N 2. - P. 581-584.

166. Pol, S. Efficacy and tolerance of alfa-2b interferon therapy on HCV infectionof hemodialized patients / S. Pol, V. Thiers, F. Carnot // Kidney Int. 1995. -Vol.47, N5.-P. 1412-1418.

167. Prati, D. Influence of different hepatitis C virus genotypes on the course of asimthtomatic hepatitis C virus infection / p. Prati, C. Capelli, A. Zanella et al. // Gastroenterology. 1996. - Vol.110, N 1. - P. 178-183.

168. Prescoff, L. E. Defection and clinical features of hepatitis C type 6 infections in blood donors from Hong Kong / L. E. Prescoff, P. Simmond, C. L. Lai et al. // J. Med. Virol. 96. - Vol.50, N 2. - P. 168-175.

169. Preston, F. E. Heterogeneity of hepatitis C virus genotypes in hemophilia: relationship with chronic liver disease / F. E. Preston, L. M. Jarvis, M. Makris et al. // Blood. 1995. - Vol.85, N 5. - P. 1259-1262.

170. Reyes, G. The nonstructural NS5A protein of hepatitis C virus: an expanding, multifunctional role in enhancing hepatitis C virus pathogenesis / G. Reyes // J. Biomed. Sci. 2002. - Vol. 9, N 3. - P. 187-197.

171. Radkowski, M. Detection of active hepatitis C virus and hepatitis G virus / GB virus C replication in bone marrow in human subjects / M. Radkowski, J. Kubicka, E. Kisiel et al. // Blood. 2000. - Vol. 95, N 12. - P. 3986-3989.

172. Robertson, B. H. Detection of active hepatitis C virus and hepatitis G virus / B. H. Robertson, B. Khanna, M. O. Favorov et al. // Viral Hepatitis and Liver Disease Ed. K. Nishioka. Tokyo, 1994. - P. 306-309.

173. Saito, K. Detection of hepatitis C virus RNA sequences: hepatocellular carcinoma and its precursors by microdissectior polymerase chain reaction / K. Saito, D. Sullivan, Y. Hcrunc et al. // Arch. Pathol. Lab. Med. 1999. - Vol. 121, N4.-P. 400-403.

174. Sansonno, D. Insimultaneous detection of hepatitis C virus RNA and hepatitis C virus-related antigenes in hepatocellular carcinoma / D. Sansonno, V. Cornacchiulo, V. Racanelli et al. // Cancer. 1997. - Vol. 80, N 1. - P. 22-33.

175. Santolini, E. Biosynthesis and biochemical properties of the hepatitis C virus core protein / E. Santolini, G. Migliaccio, N. La Monica // J. Virol. 1994. - Vol.68,N6.-P. 3631-3641.

176. Santolini, E. The NS2 protein of hepatitis C virus is a transmembrane polypeptide / E. Santolini, L. Pacini, C. Fipaldini et al. // J. Virol. 1995. - Vol.69,N 12.-P. 7461-7471.

177. Saunter, B. Role of the asialoglycoprotein receptor in binding and entry of hepatitis C virus structural proteins in cultured human hepatocytes / B. Saunter, M. Triyaini, L. Hanich et al. // J. Virol. 2003. - Vol. 77, N 1. - P. 546-559.

178. Scarselli, E. The human scavenger receptor class B type I is a novel candidate receptor for the hepatitis C virus / E. Scarselli, H. Ansuini, R. Cerino et al. // EMBO J. 2002. - Vol. 21, N 19. - P. 5017-5025.

179. Schmidt, W. N. Distribution of hepatitis C virus (HCV) RNA in whole blood and blood cells fractions: plasma HCV RNA analysis underestimates circulating virus load / W. N. Schmidt, P. Wu, J.-Q. Han et al. // J. Infect. Dis. 1997. -Vol. 176.-P. 20-26.

180. Schmid, P. A. HCV- genotypen bei chronischer HC unterschiedlicher Aetiologie / P. A. Schmid, I. Diamontis, H. Kupferschidt et al. // Schweir. Med.

181. Wochenschr. 1996. - Vol.126, N 35. - P. 7.

182. Sheng, L. Hepatitis C virus genotypes in Belgian hemophiliaes / L. Sheng, M. Willems, K. Peerlinck et et al. // J. Med. Virol. 1995. - Vol.45,N 2. - P. 211-214.

183. Shimakami, T. Effect of interaction between hepatitis C virus NS5A and NS5B on hepatitis C virus RNA replication with the hepatitis C virus replicon / T. Shimakami, A. Hijikata, H. Luo et al. // J. Virol. 2004. - Vol. 78, N 6. - P. 2738-2748.

184. Schroter, M. Definition of false-positive reactions in screening for hepatitis C virus antibodies / M. Schroter, H. H. Feucht, P. Schafer et al. // J Clin Microbiol. 1999 Jan; 37 (1). - 233-234.

185. Schroter, M. Serological Determination of Hepatitis C Virus Subtypes la, lb, 2a, 2b, 3a, and 4a by a Recombinant Immunoblot Assay / M. Schroter, H. Feucht, P. Schafer et al. // J. Clin. Microbiol. 1999. - Vol. 37, N 8 - P. 2576-2580.

186. Silini, E. Virological features of HCV infection in hemodialysis patients / E. Silini, F. Bono, A. Cerino // J. Clin. Microbiol. 1993. - Vol. 31, N 11. - P. 2913-2917.

187. Simmonds, P. Identification of genotypes of hepatitis C virus by sequence comparisons in the core, El and NS5 regions / P. Simmonds, D. B Smiht et al. // J. Gen. Virol. 94. - Vol.75. - P. 1053-1061.

188. Simmonds, P. A proposed system for the nomenclature of hepatitis C viralgenotypes / P. Simmonds, A. Alberti, H. J. Alter et al. // Hepatology. 1994. — Vol. 19, N5.-P. 1321-1324.

189. Simmonds, P. Classification of hepatitis C virus into six major genotypes and a series of subtypes by phylogenetic analysis of the NS-5 region / P. Simmonds, E. C. Holmes, T. A. Cha et al. // J. Gen. Virol. 1993. - Nov; 74 (Ptll)-2391-2399.

190. Simmonds, P. Sequence variability in the 5' non-coding region of hepatitis C virus: identification of a new virus type and restrictions on sequence diversity / P. Simmonds, F. McOmish, P. L. Yap et al. // J. Gen. Virol. 1993. - Vol.74. - P. 661-668.

191. Soguero, C. Hepatitis C virus core protein leads to immune suppression and liver damage in a transgenic murine model / C. Soguero, M. Joo, K. A. Chianese et al. // J. Virol. 2002. - Vol. 76, N 18. - P. 9345-9354.

192. Songsivilai, S. HCV genotypes in patients with hepatocellular carcinoma and cholangiocarcinoma in Tailand / S. Songsivilai, T. Dharakul, D. Kanstanon // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hug. 1996. - Vol.90, N 5. - P. 505-507.

193. Sonmez, E. Falsepositive reaction between syphilis and hepatitis C infection / E. Sonmez, I. H. Ozerol, M. Senol et al. // Isr J Med Sci. 1997. - Nov; 33 (11) -P. 724-727.

194. Sugiyama, Y. Typing hepatitis C virus by polymerase chain-reaction with type-specific primers-application to clinical surveys and traging infectious sources / Y. Sugiyama, H. Okamoto, S. Okada et al. // J. Gen. Virol. 1992. -Vol.73.-P.673-675.

195. Streuli, M. At least three human type interferons: structure of alfa 2 / M. Streuli, S. Nagata, C. Weissmann // Science. 1980. - Vol.209. - P. 1343-1347.

196. Sugano, M. Quantification of hepatitis C viral RNA in liver and serum samples usisng competitive polymerase chain reaction / M. Sugano, J. Hayashi, S. Joon et al. // J. Clin. Pathol. 1995. - Vol. 48, N 8. - P. 820-825.

197. Takanizava, A. Structure and organization of the hepatitis C virus genomeisolated from human carriers / A. Takanizava, C. Mori, I. Fuke et al. // J.Virol. -1991.-Vol. 65.-P. 1105-1113.

198. Tanji, Y. Phosphorylation of hepatitis C virus-encoded nonstructural protein NS5A / Y. Tanji, S. Satoh, K. Shimotohno et al. // J. Virol. 1995. - Vol. 69, N 7. - P. 3980-3986.

199. Thomas, H. C. Future approaches to treatment of chronic hepatitis B and hepatitis C virus infection / H. C. Thomas, J. A. Waters // J. Viral. Hep. — 1997. -Vol. 4, N2.-P. 92-97.

200. Tokita, H. Hepatitis C virus variants from Nepal with novel genotypes and their classification into the third major group / H. Tokita, S. M. Shrestha, H. Okamoto et al. // J. Gen. Virol. 1994. - Vol. 75. - P. 931-936.

201. Tomei, L. Characterization of the inhibition of hepatitis C virus RNA replication by non-nucleosides / L. Tomei, S. Altamura, L. Bartholomew et al. // J. Virol. 2004. - Vol. 78, N 2. - P. 938-946.

202. Tsubota, A. Factors useful in predicting the response to interferon therapy in chronic hepatitis C / A. Tsubota, K. Chayama, Y. Arase et al. // J. Gastroentorol. Hepatol. 1993. -Vol. 8. - P. 535-539.

203. Tsutsumi, M. Efficacy of combination therapy with interferon and AZT in chronic type C hepatitis: a pilot study / M. Tsutsumi, A. Takada, M. Sawada // J. Gastroentorol. 1995. -Vol. 30, N 4. - P. 485^192.

204. Triyatni, M. Interaction of hepatitis C virus-like particles and cells: a model system for ,studying viral binding and entry / M. Triyatni, B. Saunter, P. Maruvada et al. // J. Virol. 2002. - Vol. 76, N 18. - P. 9335-9344.

205. Tseng, C. T. Binding of the hepatitis C virus envelope protein E2 to CD81 inhibits natural killer cell functions / C. T. Tseng, G. R. Klimpel // J. Exp. Med. — 2002.-Vol. 195, N 1. —P. 43^19.

206. Tsutsumi, A. Detection of antigens related to hepatitis C virus RNA encoding the NS5 region in the livers of patients with chronic type C hepatitis / A. Tsutsumi, S. Urashima, A. Takada et al. // Hepatology. -1994. Vol. 19, N 2. -P. 773-778.

207. Van Rossum, T. G. Review article: glycyrrhizin as a potential treatment for chronic hepatitis C / T. G. Van Rossum, A. G. Vulto, R. A. de Man et al. // Nippon Rinsho. 1998. - N 12 (3). - P. 199-205.

208. Vashldna, N. The hepatitis C virus RNA-dependent RNA polymerase membrane insertion sequins is a transmembrane segment / N. Vashkina, B. Wolk, V. Lohmann et al. // J. Virol. 2002. - Vol. 76, N 24. - P. 13088-13093.

209. Viazow, S. Typing of hepatitis C virus isolates by DNA Enzyme immunoassay / S. Viazow, A. Zibert, K. Ramakrishnan et al. // J. Virol. Meth. -1994.-Vol.48.-P. 81-92.

210. Wang, J. Phenotypic and functional status of intrahepatic T-celles in chronic hepatitis C / J. Wang, T. N. Holmes, L. L. Guevara et al. // J. Infect. Dis. 2006. -Vol. 194 (8). - P. 1068-1077.

211. Wang, W. Conserved C-terminal threonine of hepatitis C virus NS3 regulates auto proteolysis and prevents product inhibition / W. Wang, F. C. Lahser, Y. MinKyung et al. // J. Virol. 2004. - Vol. 78, N 2. - P. 700-709.

212. Wunschmann, S. Characterization of hepatitis C virus (HCV) and HCV E2 interactions with CD81 and the low-density lipoprotein receptor / S. Wunschmann, J. D. Medh, D. Klinzmann et al. // J. Virol. 2000. - Vol. 74, N 21.-P. 10055-10062.

213. Wu, H. The diagnostic significance of anti-HCV IgM in chronic hepatitis C virial infection / H. Wu, J. Wang, X. Lin // Chung-Hua Nei Ko Tsa Chin. Chinege. J. Interh. Med. 95. - Vol.34, N 1. - P. 41-45.

214. Watson, J. P. HCV: epidemiology and genotypes in the north-east of England / J. P. Watson, A. M. Brind, C. E. Chapman et al. // Gut. 1996. -Vol.38. - N 2. - P. 269-276.

215. Xu, Z. Synthesis of a novel hepatitis C virus protein by ribosomal frame shift / Z. Xu, J. Choi, T. Yen. et al. // EMBO J. 2001. - Vol. 20, N 14. - P. 38403848.

216. Yang, S. H. Internal cleavage of hepatitis C virus NS3 protein is dependent on the activity of NS3-4A protease / S. H. Yang, C. G. Lee, M. K. Song et al. // Virology. 2000. - Vol. 268, N 1. - P. 132-140.

217. You, S. Cascading replication element in the sequence encoding the NS5B RNA-dependent RNA polymerase is required for hepatitis C virus RNAreplication / S. You, D. Stump, A. Branch, C. A. Rice et al. I I J. Virol. 2004. -Vol. 78, N3.-P. 1352-1366.

218. Young, K. C. Detection of hepatitis C virus RNA in peripheral blood mononuclear cells and in saliva / K. C. Young, T. T. Chang, T. C. Liou et al. // J: Med. Virol. 1993. - Vol. 41, N 1. - P. 55-60.

219. Yu, M. L. The genotypes of hepatitis C virus in patients with chronic hepatitis C virus infection in Southern Taiwan / M. L. Yu, W. L. Chuang, S. N. Lu et al. // Kao. Hsing.I., Hsuch. Ko. Hsuch. Tsachin. 1996. - Vol.12, N 11. -P. 605-612.

220. Zaman, S. Primary hepatocellular carcinoma and virus hepatitis B and infection in Bangladeshi subjects / S. Zaman, M. Khan, R. Alam et al. // J. Tropical. Med. Hygiene 1995. - Vol.98, N 1. - P. 64-68.

221. Zein, N. N. Hepatitis C genotypes: current trends and future implication / N. N. Zein, D. H. Persing // Mayo Clin. Proc. 1996. - Vol.71, N 5. - P. 458-463.

222. Zeurem, S. Philogenetic analisis of hepatitis C isolates abed their correlation to viremi, liver function tests and histology / S. Zeurem, A. Franke, Lee J. et al. // Hepatology. 1996. - Vol. 24, N 6. - P. 1003-1009.

223. Zignego, A. L. Hepatitis C virus infection of mononuclear cells from peripheral blood and liver infiltrates in chronically infected patients / A. L. Zignego, M. De Carli, M. Monti et al. // Ibid. 1995. - Vol. 47. - P. 58-64.

Информация о работе

Кириллова, Екатерина Николаевна
кандидата биологических наук
Великий Новгород, 2009
ВАК 03.00.06

Диссертация

Генотипическая характеристика вируса гепатита С среди населения Новгородской области - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы