Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Генетический полиморфизм GpIIIa (Leu33-Pro), GpIa (C807-T) и функции тромбоцитов у лиц с разными группами крови АВ0 в норме и при гриппе А(H1N1)2009

ВАК РФ 03.03.01, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Генетический полиморфизм GpIIIa (Leu33-Pro), GpIa (C807-T) и функции тромбоцитов у лиц с разными группами крови АВ0 в норме и при гриппе А(H1N1)2009"

h

Гергесова Екатерина Евгеньевна

ГЕНЕТИЧЕСКИЙ ПОЛИМОРФИЗМ GMDa (Leu33-Pro), GPIa (С807-Т) И ФУНКЦИИ ТРОМБОЦИТОВ У ЛИЦ С РАЗНЫМИ ГРУППАМИ КРОВИ ABO В НОРМЕ И ПРИ ГРИППЕ А(Н^,)2009

03.03.01 - физиология 14.03.03 - патологическая физиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 О АПР 2011

Чита-2011

4844898

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Читинская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения и социального развития РФ

Научные руководители:

Доктор медицинских наук, профессор

Доктор медицинских наук, профессор

Витковский Юрий Антонович Кузник Борис Ильич

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук,

профессор Цыбиков Намжил Нанзатович

Кандидат медицинских наук Герасимов Александр Александрович Ведущая органнзация:

ФГУ "Российский НИИ Гематологии и трансфузиологии Минздравсоцразвития РФ", г. Санкт-Петербург

Защита состоится "__2011 года в 9.00 на заседании

диссертационного совета Д 208.118.01 при ГОУ ВПО ЧГМА Минздравсоцразвития РФ, 672000, г.Чита, ул. Горького, 39 а.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО ЧГМА Минздравсоцразвития РФ.

Автореферат разослан "_" апреля 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, д.м.н., профессор

И.Н. Гаймоленко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В настоящее время не вызывает сомнений существование единой клеточно-гуморальной системы защиты организма, объединяющей иммунитет и гемостаз (Кузник Б.И., Цыбиков H.H., 19892005; Витковский Ю.А., 2000-2010), одним из способов реализации свойств которой является функция лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии (Солпов A.B., 2005). Изучена молекулярная база этого взаимодействия (Витковский Ю.А., Кузник Б.И., 2002; Solpov A.et al., 2002; Солпов A.B., 2005; Li N., 2008), накоплены данные о роли J1TA в патогенезе различных заболеваний (Витковский Ю.А. и совт., 2007; Батаева Е.П., Витковский Ю.А., 2007; Емельянова А.Н., Витковский Ю.А., 2009 и др.). Однако к настоящему моменту нет данных о возможных генных механизмах регуляции этой физиологической функции, существование которых, тем не менее, бесспорно. Показатель J1TA, особенно лимфоцитарно-тромбоцитарный индекс (ЛТИ), отражающий адгезивность тромбоцитов на лимфоцитах, позволяет характеризовать функциональное состояние кровяных пластинок, чему в доступной литературе уделено сравнительно недостаточно внимания. Функции же тромбоцитов зависят как от генетических (Newman P.J.et al., 1989; Lane D.A., Grant P.J., 2000; Michelson A.D. et al., 2000; Weiss E.J. et al., 1996 и др.), так и от некоторых конституциональных факторов, например групп крови ABO (Wiggins K.L. et al., 2006; Garcia A.A. et al., 2006; Sousa N.C. et al., 2007; Jenkins P.V., 0,Donnell J.S., 2006; Boven D.J., 2003). В свою очередь, функция лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии в норме у лиц с различной групповой принадлежностью крови АВ0 не изучалась. Кроме того, несомненным является участие тромбоцитов в реакциях как неспецифического, так и специфического (вирусного, бактериального) воспаления (Hansson G.K., 2005; Shiraki R. Et al., 2004; Weyrich A.S., Zimmerman G.A., 2004; Cognasse F. Et al., 2005; Fitzgerald J. R. Et al., 2006 и др.), однако, эти реакции не изучены с позиций конституциональной тромбогенности "ненулевых" групп крови АВ0.

Таким образом, представляется интересным изучить особенности функции лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии и агрегации тромбоцитов в связи с генетическими особенностями тромбоцитарных рецепторов у лиц с различной групповой принадлежностью крови по системе АВ0 как в норме, так и в условиях воспаления.

Целью работы явилось изучение роли полиморфизмов генов тромбоцитарного рецептора фибриногена GpIIIa (интегрина ¡i3) (Leu33-Рго), тромбоцитарного рецептора коллагена Gpla (интегрина а2) (С807-Т) и системы ABO в регуляции лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии и агрегации тромбоцитов у здоровых лиц и больных гриппом A(H1N,)2009.

В соответствии с поставленной целью решались следующие задачи:

1. Оценить состояние функции лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии и агрегации тромбоцитов у здоровых лиц с различной групповой принадлежностью крови по системе ABO. Выявить частоту встречаемости полиморфных вариантов генов тромбоцитарного рецептора фибриногена GPIIIa (интегрина рз) (Leu33-Pro) и тромбоцитарного рецептора коллагена GPIa (интегрина а2) (С807-Т) у здоровых лиц с различной групповой принадлежностью крови по системе ABO. Проследить влияние носительства полиморфных вариантов изучаемых генов на функции тромбоцитов.

2. Исследовать состояние функции лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии и агрегации тромбоцитов у больных гриппом A(H,N,)2009 с различной групповой принадлежностью крови по системе ABO. Сравнить функцию лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии и агрегацию тромбоцитов у здоровых лиц и больных гриппом A(H,N,)2009.

3. Выявить частоту встречаемости полиморфных вариантов генов тромбоцитарного рецептора фибриногена GPIIIa (интегрина Р3) (Leu33-Pro) и тромбоцитарного рецептора коллагена GPIa (интегрина а2) (С807-Т) у больных гриппом A(H,N,)2009 с различной групповой принадлежностью крови по системе ABO.

4. Оценить функцию лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии и агрегации тромбоцитов у больных-носителей полиморфных вариантов генов тромбоцитарного рецептора фибриногена GPIIIa (интегрина Р3) (Leu33-Pro) и тромбоцитарного рецептора коллагена GPIa (интегрина а2) (С807-Т).

Научная новизна. Впервые установлено, что у здоровых лиц с "ненулевыми" группами крови снижена способность тромбоцитов образовывать коагрегаты с лимфоцитами. У больных гриппом A(H1N,)2009 повышается лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия, что не зависит от группы крови ABO. У больных с гриппом A(H,N,)2009 спонтанная агрегация тромбоцитов повышается, а индуцированная снижается, особенно у лиц с I (0) группой крови.

Впервые выявлено, что среди здоровых лиц аномальные варианты гена тромбоцитарного рецептора коллагена GPIa (интегрина а2) (С807-Т) чаще встречаются у обладателей "ненулевых" групп крови. Гетерозиготный вариант гена тромбоцитарного рецептора фибриногена GPIIIa (интегрина Р3) ЗЗЬеиРго чаще обнаруживается у женщин с "ненулевыми" группами крови, чем у мужчин. Сочетание мутантных генотипов тромбоцитарных рецепторов чаще встречается у обладателей II (А) группы крови, причем у мужчин реже, чем у женщин. Функция лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии усилена у здоровых GpIIIa ЗЗЬеиРго гетерозигот со II (А) группой крови.

Впервые показано, что распределение частот встречаемости полиморфных вариантов генов тромбощггарного рецептора фибриногена GPIIIa (интегрина (З3) (Leu33-Pro) и тромбоцитарного рецептора коллагена GPIa (интегрина а2) (С807-Т) практически не различается среди здоровых лиц и больных гриппом A(H1N])2009. У больных-носителей гомозиготного 807ТТ генотипа тромбоцитарного рецептора коллагена GPIa (интегрина а2) способность тромбоцитов взаимодействовать с лимфоцитами усиливается, а спонтанная и коллаген-индуцированная агрегация снижается.

Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные сведения о генетическом полиморфизме адгезивных молекул углубляют представление о механизмах лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии, агрегации тромбоцитов у здоровых лиц и в патогенезе гриппа A(HIN,)2009.

Данные о связи полиморфизма адгезивных молекул и системы ABO могут быть включены в генетический паспорт индивидуума и совместно с другими полиморфизмами использоваться для прогнозирования тромботического риска у лиц с различной групповой принадлежностью крови по системе ABO.

Внедрение в практику. Сведения об особенностях тромбоцитарных функций, зависящих от генетических и конституциональных факторов, внедрены в учебный процесс кафедр нормальной и патологической физиологии, гистологии, цитологии и эмбриологии ГОУ ВПО "Читинская государственная медицинская академия", в работу НИИ медицинской экологии ЧГМА.

Апробация диссертации. Основные положения работы доложены на: VI Сибирском физиологическом съезде (Барнаул, 2008), Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 55-летию Читинской

государственной медицинской академии (Чита, 2008), I Международной научно-практической интернет-конференции "Состояние здоровья: медицинские и психологические аспекты" (Чита-Славянск, 2009), XXXIII Мировом конгрессе Международного общества гематологии (Иерусалим, Израиль, 2010), XI Европейском симпозиуме по иммунобиологии тромбоцитов и гранулоцитов (Бон, Франция, 2010), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Итоги эпидемии гриппа AÍHjN,)" (Чита, 2010), заседании Читинского отделения физиологического общества имени И.П. Павлова (Чита, 2010).

По материалам диссертации опубликовано 14 печатных работ, из них 3 в ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях, определенных ВАК Министерства образования и науки РФ.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Частоты встречаемости полиморфных вариантов гена тромбоцитарного рецептора фибриногена GpIIIa (Leu33-Pro) не имеют особенностей у здоровых обладателей разных групп крови ABO. Гомозиготный мутантный вариант 807ТТ коллагенового рецептора Gpla тромбоцитов чаще встречается у здоровых лиц со П (А) группой крови, а нормальный 807СС вариант гена Gpla обнаруживается реже. Частота встречаемости сочетания мутантных гентипов GpIIIa и Gpla выше у женщин и у лиц со II (А) группой крови.

2. Агрегационная функция тромбоцитов и лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия зависят от групп крови ABO, тромбогенные свойства которых определяются в том числе и полиморфизмом генов тромбоцитарного рецептора фибриногена GpIIIa (интегрина Р3) (Leu33-Pro) и тромбоцитарного рецептора коллагена Gpla (интегрина а2) (С807-Т).

3. Частоты встречаемости полиморфных вариантов генов GpIIIa (Leu33-Pro) и Gpla (С807-Т) у больных гриппом A(H,N])/2009 не отличаются от здоровых лиц. При гриппе A(H,N|)2009 усиливается функция лимфо-цитарно-тромбоцитарной адгезии и скорость спонтанной агрегации тромбоцитов. Скорость индуцированной агрегации кровяных пластинок снижается. Тромбогенность "ненулевых" групп крови при гриппе A(H,N,) 2009 проявляется увеличением адгезивности тромбоцитов на лимфоцитах.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 138 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, глав результатов собственных

исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и указателя литературы, включающего 216 работ, из них - 59 отечественных и 157 зарубежных авторов, иллюстрирована 38 таблицами и 3 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

В работе с обследуемыми лицами соблюдались этические принципы, предъявляемые Хельсинкской Декларацией Всемирной Медицинской Ассоциации, World Médical Association Déclaration of Helsinki ( 1964).

Объектами наблюдения явились: стабилизированная 3,8% раствором цитрата натрия кровь здоровых людей в возрасте 18-35 лет (322 образца) и больных гриппом в период эпидемии A(H,N1)/09 (200 образцов).

Методы исследования

Методы изучения функций тромбоцитов: Подсчет тромбоцитов и лейкоцитов проводился в камере Горяева с использованием общепринятых методик. Число лимфоцитов определяли в фиксированных мазках, окрашенных азур-Ц-эозином по Романовскому-Гимзе. Определение показателя лимфоцитарно-тромбоцигарной адгезии проводили по методике IO.A. Витковского ( 1999), лимфоцитарно-тромбоцитарный индекс (ЛТИ) оценивали как среднее арифметическое количество тромбоцитов, присоединившихся к одному лимфоциту. Оценку агрегационной способности тромбоцитов осуществляли турбидиметрическим методом по G. Вош ( 1962) с помощью лазерного анализатора агрегации Biola (НПФ "Биола", Москва): исследовали спонтанную, АДФ-, адреналин- и коллаген-индуцированную агрегацию с использованием соответствующих реактивов, выпускаемых ООО "Технология-стандарт" (Барнаул).

Определение групп крови АВО: группы крови АВО определялись общепринятым методом с использованием реакции изогемагглютинации на планшете при помощи цоликлонов анти-А и анти-В (ООО "Гематолог", Россия, Москва).

Молекулярно-генетическое исследование: выделение ДНК из цельной крови и постановка ПЦР с целью выявления мутаций генов GpIIIa (Leu33-Pro) и Gpla (С807-Т) проводились с использованием соответствующих наборов, выпускаемых НПФ "Литех" (Москва). Детекция продуктов амплификации осуществлялась путем горизонтального электрофореза в 3% агарозном геле.

Статистическая обработка результатов выполнена параметрическими и непараметрическими методами с использованием пакета программ Microsoft Office Excel 2007, STATISTICA6,0 (StatSoft Inc., США), с определением статистической значимости различий при р<0,05. Изучаемые показатели представлены в виде средних величин со стандартным отклонением (M±SD). При нормальном распределении признака применялся критерий Стьюдента (t-тест), при распределении, отличном от нормального - критерий Манна-Уитни (U-тест). Для сравнения групп по качественному бинарному признаку применялся критерий X2 (Пирсона). Для оценки статистической значимости различий между группами признаков использовался коэффициент ранговой корреляции Спирмена, значимым признавался результат г >0,3 при р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ

обсуждение

1. Распространенность полиморфных вариантов генов GpIIIa (Leu33-Pro) в Gpla (С807-Т) у здоровых лиц с разными группами крови ABO н функции тромбоцитов.

В группе здоровых лиц обнаружено 135 нормальных 33LeuLeu-гомозигот (R=0,68) тромбоцитарного рецептора фибриногена GPlIIa (интегрина ß3), 42 носителя ЗЗЬеиРго гетерозиготного генотипа (R=0,21), 23 мутантные ЗЗРгоРго-гомозиготы (R=0,11). Полиморфные варианты тромбоцитарного рецептора коллагена GPla (интегрина а2) распределились следующим образом: 105 нормальных 807СС-гомозигот (R=0,53), 46 носителей 807СТ гетерозиготного варианта (R=0,23) и 49 мутантных 807ТТ-гомозигот (R=0,24). Среди испытуемых обладатели I (0) группы крови составили 36%, II (А) - 30%, III (В) - 26% и IV (AB) - 8%. Полученные о группах крови данные соответствуют сведениям, имеющимся в литературе для Европейской части России (Томилин В.В., Гуртовая C.B., 1999; Жибурт Е.Б., 2002; Кузник Б.И., Максимова О.Г., 2007).

По причине малого количества испытуемых обладатели IV(AB) группы из наблюдений были исключены. Обнаружено, что частоты встречаемости полиморфных вариантов гена тромбоцитарного рецептора фибриногена GpIIIa (интегрина ß3) у обладателей разных групп крови не различались, в то время как частота встречаемости гомозиготного

мутантного варианта 807ТТ коллагенового рецептора тромбоцитов интегрина а, оказалась выше у обладателей второй группы крови по сравнению с первой. Вместе с тем носительство нормального гомозиготного генотипа обнаружилось у них реже (рис. 1).

Рис.1. Частота встречаемости (%) полиморфных вариантов гена Gpla (С807-Т) у здоровых лиц с разными группами крови ABO, % (X2 - тест, * - р<0,05), п=200.

Среди носителей сочетания мутаций тромбоцитарных рецепторов преобладали лица со II (А) группой крови (табл.1). Сочетанные мутации у женщин встречались чаще, чем у мужчин (табл.2).

Таблица 1

Частота встречаемости (R) разных групп крови ABO у здоровых лиц носителей сочетания мутантных аллелей тромбоцитарных рецепторов Gpla (С807-Т) и GpIIIa (Leu33-Pro)

1(0) п=7 II (А) п=9 III (В) п=8

0,13 0,23 р<0,05 0,09

Примечание: %2-тест, р - статистическая значимость различий по сравнению с первой группой крови.

Таблица 2

Частота встречаемости (R) сочетания мутантных аллелей тромбоцитарных рецепторов Gpla (С807-Т) н GpIIIa (Leu33-Pro) у здоровых мужчин и женщин с различной групповой принадлежностью крови по системе ABO

1(0) И (А) III (В)

Муж п=24 Жен п=38 Муж п=32 Жен п=48 Муж п=16 Жен п=22

0,08 0,16 Р,<0,05 0,13 0,25 р<0,05 Р,<0,05 0,13 0

Примечание: х2-тест, р - статистическая значимость различий по сравнению с первой группой крови в пределах одного пола, р, -статистическая значимость тендерных различий.

В следующей серии исследований установлено, что у людей со II (А) и III (В) группами крови содержание тромбоцитов выше, чем с I (0), хотя не выходит за пределы референтных значений. Вместе с тем абсолютное содержание присоединившихся к лимфоцитам тромбоцитов в 1 мкл оказалось меньше у лиц с III (В) группой крови (табл. 3).

Таблица 3

Число тромбоцитов JITA п ЛТИ у обладателей разных групп крови по системе ABO (М SD)

Группы крови Число тромбоцитов (тысяч в 1 мкл крови) ЛТА (%) ЛТА (в 1 мкл крови) ЛТИ Абсолютное число Число тромбоцитов, присоединившихся к имфоцитам в 1 мкл крови

1(0) (п=41) 205±5 13±2,5 298±19 3,1±0,2 1068±79

II (А) (п=38) 243±8 р<0,01 15±2,7 337±21 2,9±0,2 962±66

III (В) (п=33) 231 ±9 р<0,01 15±2,8 317±22 3,3±0,2 824±65 р<0,05

Примечание: 1-тест, р - статистическая значимость различий по сравнению с I (0) группой крови.

Скорость спонтанного образования тромбоцитарных агрегатов оказалась увеличена у здоровых лиц со II (А) группой крови (средний радиус агрегатов в I (0) группе 1,1±0,1отн.ед.,во11(А)- 1,4±0,1 отн.ед.; скорость их образования в I (0) группе 0,4±0,1 отн.ед./мин., во II (А) - 0,7±0,1; t-тест, р<0,05). Кроме того, у обладателей II (А) и III (В) групп, по сравнению с I (0), агрегация оказалась повышенной, если в качестве лиганда использовался коллаген (средний радиус агрегатов в I, II и III группах соответственно 6,7±2,5, 7,3±1,9 и 8,5±1,6 отн.ед.; скорость их образования 19,1±4,7, 15,9±3,2 и 24,6±5,2 отн.ед./мин.; по показателю светопропускания - 53,5±11,8,73,4±12,0 и 66,1±14,1%; 65,9±15,5, 85,7±15,0 и 92,0±15,6%/мин.; t-тест, р<0,05).

Обнаружено, что у здоровых лиц носителей мутантного гомозиготного 807ТТ генотипа Gpla ослаблена способность тромбоцитов взаимодействовать с лимфоцитами (ЛТИ), в то время как процент лимфоцитарно-тромбоцитарных коагрегатов в циркуляции не зависит от генетического полиморфизма коллагенового рецептора тромбоцитов. Кроме того, гетерозиготный генотип не оказывает влияния на функцию л1мфоцитарно-тромбощтгарной адгезии (табл.4). При этом скорость спонтанной агрегации кровяных пластинок оказалась выше у здоровых лиц носителей 807ТТ варианта (скорость спонтанного образования агрегатов из тромбоцитов у 807СС-гомозигот, 807СТ-гетерозигот и 807ТТ-гомозигот составила соответственно 0,3±0,1, 0,3±0,1 и 0;7±0,2 отн.ед./мин; U-тест, р<0,05). Тромбоциты реагировали сильнее на коллаген у носителей гетерозиготного генотипа (средний радиус образующихся при индукции коллагеном агрегатов из тромбоцитов у 807СС-гомозигот, 807СТ-гетерозишт и 807ТТ-гомозигот соответственно 6,6±3,7, 8,1±3,9, 6,5±2,2 отн.ед., скорость их образования - 18,4±11,9, 26,3±7,9, 19,2±6,0 отн.ед./мин.; U-тест, р<0,05). Вместе с тем, у здоровых носителей ЗЗРгоРго генотипа GpIIIa увеличивается средний размер и скорость спонтанно образующихся агрегатов из тромбоцитов (средний радиус агрегатов у 33LeuLeu-гомозигот, ЗЗЬеиРго-гетерозигот и ЗЗЬеиЬеи-гомозигот соответственно составил 1,0±0,4; 1,1±0,2 и 1,6±0,5 отн.ед., скорость их образования -0,1±0,1, 0,2±0,1 и 0,5±0,2 отн.ед./мин.; U-тест, р<0,05).

Таблица 4

Функция лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии у здоровых лиц носителей полиморфных вариантов гена Ср1а (С807-Т) (М±8Б)

<3р1а (807СС) <3р1а (807СТ) <3р1а (807ТТ)

ЛТА, % 14,3±4,4 14,6±2,1 14,3±3,9

ЛТИ, отн.ед. 4,Ш,0 3,6±0,7 2,6±1,1 р<0,05

Примечание: и-тест, р - статистическая значимость различий по сравнению с группой носителей нормального гомозиготного 807СС варианта.

Сочетание мутантных генотипов Ср1а 807СТ, 807ТТ и врШа ЗЗЬеиРго, ЗЗРгоРго приводило к увеличению размера спонтанно образующихся агрегатов из тромбоцитов (рис. 2).

Рис.2. Максимальное значение среднего размера спонтанно образующихся агрегатов из тромбоцитов, отн.ед. (и-тест, * - р<0,05).

2. Функции тромбоцитов и полиморфизм генов Ср1а (С807-Т) и СрГПа (ЪеиЗЗ-Рго) у больных гриппом А(Н^,)/2009 и различной групповой принадлежностью крови по системе АВО.

Оценка состояния функции лимфоцитарно- громбоцитарной адгезии и афегации тромбоцитов у больных гриппом в период эпидемии А(Н1Ы1)/ 2009 выявила, что индекс адгезивности тромбоцитов на лимфоцитах (ЛТИ) в группе больных выше, чем у здоровых (рис. 3), в то время как скорость спонтанного образования агрегатов из тромбоцитов у больных оказывается выше, а скорость ответа на индукторы - ниже (табл. 5).

Рис.3. Лимфоцитарно-тромбоцитарный индекс у здоровых и больных гриппом A(H,N,)2009 (U-тест, * - р<0,05).

Показатели спонтанной агрегации кровяных пластинок оказались выше у больных с I (0) группой крови по сравнению со II (А) (максимальный радиус агрегатов 1,6±0,1отн.ед., во II и III группах соответственно 1,2±0,1 и 1,4±0,2; t-тест, р<0,05). Вместе с тем скорость наступления индуцированной АДФ агрегации тромбоцитов была снижена у пациентов с III (В) группой крови (максимальный наклон кривых агрегации в I, II и III группах соответственно 19,9±5,9,22,7±4,9, 14,6±3,4 отн.ед./мин.; t-тест, р<0,05).

Таблица 5

Максимальный радиус агрегатов (отн.ед.) и максимальный наклон (отн.ед.в мин.) кривых агрегации тромбоцитов у здоровых лиц и больных гриппом А(Н^,)2009 (Ш£0)

Здоровые (п=122) Больные (п=100)

спонтанная Макс, значение 1,2±0,2 1,4±0,6

Макс, наклон 0,4±0,3 0,7±0,4 р<0,05

АДФ Макс, значение 8,7±2,6 7,9±2,5

Макс, наклон 25,7±2,1 18,9±2,4 р<0,05

адреналин Макс, значение 7,3±3,6 6,4±2,5

Макс, наклон 12,9±3,9 8,4±3,7 р<0,05

коллаген Макс, значение 7,9±2,7 6,8±2,8

Макс, наклон 19,2±4,4 16,5^4,6 р<0,05

Примечание: t-тecт, Р - статистическая значимость различий между больными и здоровыми.

В следующей серии исследований в группе больных гриппом А^И,)/ 2009 обнаружено 140 нормальных ЗЗЬеиЬеи-гомозигот (11=0,7) гена тромбоцитарного рецептора фибриногена СРШа (интегрина Р3), 47 носителей ЗЗЬеиРго гетерозиготного варианта (11=0,24), 13 мутантныхЗЗРгоРго-гомозигот (11=0,06). Полиморфные варианты гена тромбоцитарного рецептора коллагена вР1а (интегрина <х2) распределились следующим образом: 95 нормальных 807СС-гомозигот (11=0,48), 71 носитель 807СТ гетерозиготного генотипа (11=0,36) и 34 мугангные 80711-гомозиготы (11=0,16), что не отличается от распределения частот в группе здоровых лиц (х2-тест, р>0,05). При этом показатели спонтанной и коллаген-индуцированной агрегации кровяных пластинок были меньше у

больных носителей мугантного 807ТТ генотипа Ср1а, а у 807СТ-гегерозигот скорость коллаген-индуцированной агрегации оказалась выше (табл.6). Адгезивность тромбоцитов на лимфоцитах усиливалась у больных носителей мугантного 807ТТ-генотипа (Зр1а (табл. 7). Сочетание мутантных аллелей тромбошггарных рецепторов у больных приводило к уменьшению процента лимфоцитарно-тромбощггарных коагрегатов в циркуляции (ЛТА в группе пациентов-носителей сочетанных мутаций 12,1 ±9,8%, в группе без сочетанных мутаций -17,6±9,2%; и-тест, р<0,05) и размера, а также скорости спонтанного образования агрегатов из тромбоцитов (максимальное значение радиуса агрегатов в группе больных носителей сочетанных мутаций 1,0±0,3 отн.ед., в группе без сочетанных мутаций -1,7±0,4 отн.ед.; максимальный наклон кривых агрегации соответственно 0,3±0,2 отн.ед./мин. и 0,9±0,2 отн.ед./мин.; и-тест, р<0,05).

Таблица 6

Максимальный радиус агрегатов (отн. ЕД) и максимальный

наклон (отн.ед.в мин.) кривых спонтанной н коллаген-индуцированной агрегации тромбоцитов у больных носителей полиморфных вариантов тромбоцитарного рецептора коллагена вРГа (интегрина аг) (С807-Т) (М+ЭБ)

807СС п=95 807СТ п=71 807ТТ п=34

спонтанная Маке.знач. 1,4±0,8 1,4±0,7 1,2±0,7 р<0,05

Макс.накл. 0,6±0,3 0,7±0,4 0,6±0,3

коллаген Маке.знач. 6,7±2Д 7,0±4,4 6,3±2,4

Макс.накл. 16,1±8,0 19,4±8,1 р<0,05 12,8±10,1 р<0,05

Примечание: и-тест, Р - статистическая значимость различий с группой носителей гомозиготного 807СС генотипа.

Таблица 7

ЛТА (%) и ЛТИ (отн.ед) у больных носителей полиморфных вариантов тромбоцнтарного рецептора коллагена СР1а (интегрина а2) (С807-Т) (М+вБ)

807СС п=95 807СТ п=71 807ТТ п=34

ЛТА 16,5±9,6 16,2±8,6 17,1±10,5

ЛТИ 3,1±0,9 3,9±1,6 6,2±2,7 Р<0,05

Примечание: и-тест, Р -статистическая значимость различий с группой носителей гомозиготного 807СС генотипа.

Частота встречаемости разных групп крови ABO в группе больных гриппом А(Н1 N1 )/2009 не отличалась от группы здоровых лиц (х2-тест, р>0,05). Обнаружено, что аномальный ЗЗРгоРго-вариант reHaGPIIIa чаще встречается у больных со II (А) группой крови, также как и гомозиготный мутантный 807ТТ генотип тромбоцнтарного рецептора коллагена GPIa (табл. 8). При этом среди носителей сочетанных мутаций тромбоцитарных рецепторов преобладают больные со II (А) группой крови (частота встречаемости I, II и III групп соответственно 0,15,0,34 и 0,1; х2-тест, р<0,05).

Таблица 8

Частота встречаемости (R) полиморфных вариантов генов тромбоцптарного рецептора фибриногена GPHIa (ннтегрпна р^)

(Leu33-Pro) и тромбоцптарного рецептора коллагена GPIa (ннтсгрнна а2) (С807-Т) в группе больных гриппом A(H,N,)2009 с различной групповой принадлежностью крови по системе ABO

GpIIIa Gpla

33LeuLeu 33LeuPro ЗЗРгоРго 807СС 807СТ 807ТТ

1(0) п=66 0,6 0,3 0,1 0,55 0,35 0,1

II (А) п=46 0,4 р<0,05 0,3 0,3 р<0,05 0,3 р<0,05 0,3 0,4 р<0,05

III (В) п=3б 0,73 0,27 0 0,5 0,4 0,1

Примечание: "¿г-тест, р - достоверность различий по сравнению с I (0) группой крови.

Таким образом, все полученные данные позволяют говорить о том, что функции кровяных пластинок как в норме, так и при патологии зависят от полиморфизма генов Gpla (С807-Т), GpIIIa (Leu33-Pro) и групповой принадлежности крови по системе ABO. При этом, учитывая общность адгезивных молекул, способствующих реализации функции лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии и агрегации тромбоцитов (Солпов A.B., 2005), правомерно говорить о конкуренции за сайты связывания. Исход такого конкурентного взаимодействия зависит от конкретной физиологической или патофизиологической ситуации. Так, если у здоровых лиц тромбогенность "ненулевых" групп крови проявляется усилением агрегации тромбоцитов и снижением их адгезивности к лимфоцитам, то при воспалении происходит сдвиг в сторону образования лимфоцитарно-тромбоцитарных коагрегатов. Генетические маркеры изменения функций тромбоцитов вместе с групповой принадлежностью крови по системе ABO позволяют прогнозировать исход реакций воспаления при патологии, а также вероятность тромботического риска у здоровых лиц.

выводы

1. Здоровые лица обладатели "ненулевых" групп крови характеризуются усилением агрегационного потенциала кровяных пластинок на фоне снижения их способности к формированию гетеротипических межклеточных контактов. Протромботические мутантные варианты генов Gpla (С807-Т) и GpIIIa (Leu33-Pro), а также их сочетание чаще выявляются у здоровых людей со II (А) группой крови, способствуя усилению агрегационной функции тромбоцитов.

2. У больных гриппом A(H,N1)/2009 усилена функция лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии и спонтанная агрегация тромбоцитов по сравнению со здоровыми лицами, при этом активность кровяных пластинок у них выше при I (0) группе крови.

3. Частоты встречаемости полиморфных вариантов генов Gpla (С807-Т) и GpIIIa (Leu33 -Pro) у больных гриппом A (H,N1)/2009 не отличаются от группы здоровых лиц. Аномальные генотипы тромбоцитарных рецепторов и их сочетание чаще выявляются у больных со II (А) группой крови.

4. Аномальные варианты генов Gpla (С807-Т) и GpIIIa (Leu33-Pro) и их сочетание у больных гриппом A (H,N1)/2009 обусловливают усиление адгезивности тромбоцитов на лимфоцитах, что приводит к уменьшению процента лимфоцитарно-тромбоцитарных коагрегатов в циркуляции и способствует ослаблению агрегации пластинок in vitro.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Гергесова Е.Е. Функция лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии, агрегация тромбоцитов и группы крови / Е.Е. Гергесова, Ю.А. Витковский, В.М. Черепанов // Актуальные проблемы клинической и экспериментальной медицины : тезисы докладов Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 55-летию ЧГМА. -Чита, 2008.-С. 174-175.

2. Степень лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии зависит от количества тромбоцитов и имеет особенности у лиц с различной групповой принадлежностью крови по системе ABO / Е.Е. Гергесова, Ю.А. Витковский, А.М. Гринь, И.В. Осипов // VI Сибирский физиологический съезд : тезисы докладов. - Барнаул, 2008. - С. 91-92.

3. Новый подход к определению J1TA / Е.Е. Гергесова, Ю.А. Витковский, A.M. Гринь, И.В. Осипов // VI Сибирский физиологический съезд: тезисы докладов. - Барнаул, 2008. - С. 92.

4. Гергесова Е.Е. Лимфоциты, тромбоциты и группы крови / Е.Е. Гергесова // Медицинские аспекты состояния здоровья: материалы I международной интернет-конференции "Состояние здоровья: медицинские и психологические аспекты". - Чита-Славянск, 2009. - С. 138-139.

5. Гергесова Е.Е. Группы крови, агрегация тромбоцитов и лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия / Е.Е. Гергесова// Тромбоз, гемостаз и реология. - 2009. - №3. - С. 37-42.

6. Гергесова Е.Е. Лимфоцнтарно-тромбоцитарная адгезиа, тромбоцитарно-лейкощггараые,тромбоцигарно-лш1фоц11тарные отношения н агрегация тромбоцитов у мужчин и женщин в зависимости от групповой принадлежности крови / Е.Е. Гергесова I / Кубанский научный медицинский вестник. - 2009. - №7. - С. 38-41.

7. Гергесова Е.Е. Полиморфизм генов тромбоцитарного рецептора фибриногена GpIIIa (ЬеиЗЗРго), тромбоцитарного рецептора коллагена Gpla (С807Т) и молекулы дифференциации тромбоцитов CD14 (С159Т) у пациентов с осложненным течением пандемического гриппа A (H,N )/2009 / Е.Е. Гергесова, A.A. Петров // Итоги эпидемии гриппа A (HjNJ : материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием. -Чита, 2010.-С. 121-123.

8. Гергесова Е.Е. Полиморфизм генов тромбоцитарного рецептора фибриногена GpIIIa (Leu3 3Pro) и тромбоцитарного рецептора коллагена Gpla (С807Т) у пациентов с осложненным течением пандемического гриппа A (H,N,)/2009 и различной групповой принадлежностью крови по системе ABO / Е.Е. Гергесова// Итоги эпидемии гриппа A (HjNj) : материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием. - Чита, 2010. - С. 123-125.

9. Гергесова Е.Е. Функции тромбоцитов, полиморфизм генов Leu33-Pro GpIIIa, С807-Т Gpla и система ABO в норме и патологии / Е.Е. Гергесова // Клиническая гемостазиология и гемореология в сердечнососудистой хирургии: материалы пятой Всероссийской конференции (с международным участием). - Москва, 2011. - С. 129-130.

10. Гергесова Б.Б. Агрегация тромбоцитов, лимфоцитарно-тромбоцитариая адгезия и группы крови АВО у больных гриппом A(H1N1) / Е.Е. гергесова, Ю.А. Витковский, А.В. Солпов // Забайкальский медицинский вестник (электронный вариант). - 2011. - № 1. - С. 5-10.

11. Гергесова Е.Е. Функции тромбоцитов и генетический полиморфизм Gpla (С807-Т) и GpIIIa (Leu33-Pro) у здоровых лиц обладателей разных групп крови АВО / Е.Е. Гергесова, Н.Н. Страмбовская, Ю.А. Витковский // Забайкальский медицинский вестник (электронный вариант). - 2011. - № 1. - С. 34-38.

12. Kuznik B.I. Clinical use of the test of lymphocyte-platelet adhesion / B.I. Kuznik, A.V. Solpov, E.E. Gergesova et al. // The Journal of Thrombosis and Haemostasis. - 2007. - №5. - suppl. 2. - P. W-303.

13. Gergesova E. The carriage of a2(C807T) integrin and P3 (Leu33Pro) integrin polymorphisms in healthy persons with different ABO blood groups / E. Gergesova, Y. Vitkovsky // Vox Sanguinis. - 2010. - №99.

- suppl. 2. - P. 24.

14. Solpov A. Lymphocyte-platelet adhesion in AHtNj infected patients / A. Solpov, E. Gergesova, N. Strambovskaya et al. // Abstracts from the XXXIII World Congress of the International Society of Hematology.

- Jerusalem. - 2010. - P. 79.

Лицензия ИД №03077 от 23.10.00. Подписано в печать 06.04.2011. Бумага офсетная. Гарнитура Times NewRoman Формат 60x84 '/]6. Усл. печ. л. 1,0 Тираж 100. Заказ№ 57/2011.

Отпечатано в информационно-издательском центре ЧГМА 672090, Чита, ул. Горького, 39а.

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Гергесова, Екатерина Евгеньевна

Список сокращений.

Введение.

1. ФУНКЦИИ ТРОМБОЦИТОВ И ЛИМФОЦИТАРНО-ТРОМБОЦИТАРНАЯ АДГЕЗИЯ: ЗНАЧЕНИЕ ПОЛИМОРФИЗМОВ РЕЦЕПТОРОВ И АДГЕЗИВНЫХ МОЛЕКУЛ, А ТАКЖЕ ГРУППОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИ ПО СИСТЕМЕ ABO (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1.Общие представления о тромбоцитах.

1.2.Гемостатическая функция тромбоцитов:

1.2.1. Современные представления о первичном гемостазе.

1.2.2. Кровяные пластинки и коагуляционный гемостаз.

1.3 .Тромбоциты — связующее звено единой клеточно-гуморальной системы защиты организма:.

1.3.1. Гетеротипические межклеточные контакты, формируемые с участием тромбоцитов.

1.3.2. Лимфоцитарно-тромбоцитарное взаимодействие.

1.3.3. Другие способы реализации защитной функции тромбоцитов.

1.4.Мембранные рецепторы тромбоцитов - функции и полиморфизм.

1.5.Групповая система ABO:

1.5.1. Общие представления.

1.5.2. Группы крови ABO и заболеваемость.

1.5.3. Группы крови и система гемостаза.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1.Подсчет форменных элементов крови.

2.2.Исследование лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии.

2.3 .Изучение агрегационной функции кровяных пластинок.

2.4.Молекулярно-генетическое исследование:.

2.4.1. Выделение ДНК.

2.4.2. Постановка ПЦР.

2.4.3. Детекция продуктов амплификации.

2.5.Определение групповой принадлежности крови по системе ABO.

2.6. Статистическая обработка результатов.

3. ФУНКЦИИ ТРОМБОЦИТОВ И ГЕНЕТИЧЕСКИЙ ПОЛИМОРФИЗМ Gpla (С807-Т) И GpIIIa (ЬеиЗЗРго) У ЗДОРОВЫХ ЛИЦ ОБЛАДАТЕЛЕЙ РАЗНЫХ ГРУПП КРОВИ ABO (РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ):

3.1.Тромбоциты, лимфоциты, ЛТА и агрегация тромбоцитов у здоровых лиц с различной групповой принадлежностью крови по системе ABO:

3.1.1. Число тромбоцитов, ЛТА и ЛТИ у здоровых лиц с различной группой крови.

3.1.2. Агрегационная функция тромбоцитов у здоровых лиц с различной групповой принадлежностью крови по системе ABO.

3.1.3. Взаимоотношения между ЛТА, ЛТИ и агрегацией тромбоцитов у здоровых лиц с различной групповой принадлежностью крови ABO.

3.2.Частота встречаемости полиморфных вариантов Leu33-Pro тромбоцитарного рецептора фибриногена GPIIIa (интегрина (Зз) И С807-Т тромбоцитарного рецептора коллагена GPIa (интегрина аг) у здоровых лиц с различной групповой принадлежностью крови по системе

З.З.Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия и агрегационная функция тромбоцитов у здоровых лиц носителей полиморфных вариантов генов Gpla (С807-Т) и GpIIIa (Leu33-Pro) с различной группой крови

4. ГРИПП A (HiNO/2009 (РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ)

4.1.Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия и агрегационная функция тромбоцитов у пациентов с осложненным течением пандемического гриппа A(HiNi) 2009 и различной группой крови

4.2.Частота встречаемости полиморфных вариантов ЬеиЗЗРго тромбоцитарного рецептора фибриногена GpIIIa (интегрина (Зз)И С807Т тромбоцитарного рецептора коллагена Gpla (интегрина а2)у больных пандемическим гриппом и различной групповой принадлежностью крови по системе

Введение Диссертация по биологии, на тему "Генетический полиморфизм GpIIIa (Leu33-Pro), GpIa (C807-T) и функции тромбоцитов у лиц с разными группами крови АВ0 в норме и при гриппе А(H1N1)2009"

Актуальность проблемы

В настоящее время не вызывает сомнений существование единой клеточно-гуморальной системы защиты организма, объединяющей иммунитет и гемостаз [Кузник Б.И., Цыбиков H.H., 1989-2005; Витковский Ю.А., 2000-2010], одним из способов реализации свойств которой является функция лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии [Солпов A.B., 2005]. Изучена молекулярная база [Витковский Ю.А., Кузник Б.И., 2002; Solpov A.et al., 2002; Солпов A.B., 2005; Li N., 2008], накоплены данные о роли J1TA в патогенезе различных заболеваний [Витковский Ю.А. и совт., 2007; Батаева Е.П., Витковский Ю.А., 2007; Емельянова А.Н., Витковский Ю.А., 2009 и др.]. Однако к настоящему моменту нет данных о возможных генных механизмах регуляции этой физиологической функции, существование которых, тем не менее, бесспорно. Кроме того, показатель JITA, а, в особенности, лимфоцитарно-тромбоцитарный индекс (ЛТИ), отражающий адгезивность тромбоцитов на лимфоцитах, позволяет характеризовать и функциональное состояние кровяных пластинок, чему в доступной литературе уделено сравнительно недостаточно внимания. Функции же тромбоцитов зависят как от генетических [Newman P.J.et al., 1989; Lane D.A., Grant P.J., 2000; Michelson A.D. et al., 2000; Weiss E.J. et al., 1996 и др.], так и от некоторых конституциональных факторов, например групп крови ABO [Wiggins K.L. et al., 2006; Garcia A.A. et al., 2006; Sousa N.C. et al., 2007; Jenkins P.V., О,Donneil J.S., 2006; Boven D.J., 2003]. В свою очередь, функция лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии в норме у лиц с различной групповой принадлежностью крови АВ0 не изучалась. Кроме того, несомненным является участие тромбоцитов в реакциях как неспецифического, так и специфического (вирусного, бактериального) воспаления [Hansson G.K., 2005; Shiraki R. Et al., 2004; Weyrich A.S.,

Zimmerman G.A., 2004; Cognasse F. Et al., 2005; Fitzgerald J. R. Et al., 2006 и др.], однако, эти реакции не изучены с позиций конституциональной тромбогенности «ненулевых» групп крови АВ0.

Таким образом, представляется интересным изучить особенности функции лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии и агрегации тромбоцитов в связи с генетическими особенностями тромбоцитарных рецепторов у лиц с различной групповой принадлежностью крови по системе АВ0 как в норме, так и в условиях воспаления.

Цель и задачи исследования

Основной целью работы явилось изучение роли полиморфизмов генов тромбоцитарного рецептора фибриногена GpIIIa (интегрина (З3) (Leu33-Pro), тромбоцитарного рецептора коллагена Gpla (интегрина а2) (С807-Т) и системы АВ0 в регуляции лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии и агрегации тромбоцитов у здоровых лиц и больных гриппом A(HiNi)2009.

В соответствии с поставленной целью решались следующие задачи:

1. Оценить состояние функции лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии и агрегации тромбоцитов у здоровых лиц с различной групповой принадлежностью крови по системе АВ0. Выявить частоту встречаемости полиморфных вариантов генов тромбоцитарного рецептора фибриногена GPIIIa (интегрина |33) (Leu33-Pro) и тромбоцитарного рецептора коллагена GPIa (интегрина а2) (С807-Т) у здоровых лиц с различной групповой принадлежностью крови по системе АВ0. Проследить влияние носительства полиморфных вариантов изучаемых генов на функции тромбоцитов.

2. Оценить состояние функции лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии и агрегации тромбоцитов у больных гриппом A(H]Ni)2009 с различной групповой принадлежностью крови по системе АВ0. Сравнить состояние функции лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии и агрегации тромбоцитов у здоровых лиц и больных гриппом A(HiN])2009.

3. Выявить частоту встречаемости полиморфных вариантов генов тромбоцитарного рецептора фибриногена GPIIIa (интегрина р3) (Leu33-Pro) и тромбоцитарного рецептора коллагена GPIa (интегрина а2) (С807-Т) у больных гриппом A(HjNi)2009 с различной групповой принадлежностью крови по системе ABO.

4. Оценить функцию лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии и> агрегации тромбоцитов у больных-носителей полиморфных вариантов генов тромбоцитарного рецептора фибриногена GPIIIa (интегрина Рз) (Leu33-Pro) и тромбоцитарного рецептора коллагена GPIa (интегрина а2) (С807-Т).

Научная новизна

Впервые установлено, что у здоровых лиц с «ненулевыми» группами крови снижена способность тромбоцитов образовывать коагрегаты с лимфоцитами. У больных гриппом A(HiN¡)2009 повышается лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия, что не зависит от группы крови ABO. У больных с гриппом A(H)Ni)2009 спонтанная агрегация тромбоцитов повышается, а индуцированная снижается, особенно у лиц с I (0) группой крови.

Впервые выявлено, что среди здоровых лиц аномальные варианты гена тромбоцитарного рецептора коллагена GPIa (интегрина а2) (С807-Т) чаще встречаются у обладателей «ненулевых» групп крови. Гетерозиготный вариант гена тромбоцитарного рецептора фибриногена GPIIIa (интегрина рз) ЗЗЬеиРго чаще обнаруживается у женщин с «ненулевыми» группами крови, чем у мужчин. Сочетание мутантных генотипов тромбоцитарных рецепторов чаще встречается у обладателей II (А) группы крови, причем, у мужчин реже, чем у женщин. Функция лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии усилена у здоровых GpIIIa 33LeuPro гетерозигот со II (А) группой крови.

Впервые показано, что распределение частот встречаемости полиморфных вариантов генов тромбоцитарного рецептора фибриногена GPlIIa. (интегрина (З3) (Leu33-Pro) и тромбоцитарного рецептора коллагена GPIa (интегрина а2) (С807-Т) практически не различается среди здоровых лиц и больных гриппом A(H!Ni)2009. У больных-носителей гомозиготного 807ТТ генотипа тромбоцитарного рецептора коллагена GPIa (интегрина а2) способность тромбоцитов взаимодействовать с лимфоцитами усиливается, а спонтанная и коллаген-индуцированная агрегация снижается.

Теоретическая и практическая значимость работы

Полученные сведения о генетическом полиморфизме адгезивных молекул углубляют представление о механизмах лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии а агрегации тромбоцитов у здоровых лиц и в патогенезе пандемического гриппа A(H]Ni)2009.

Данные о связи полиморфизма адгезивных молекул и системы ABO могут быть включены в генетический паспорт индивидуума и совместно с другими полиморфизмами использоваться для прогнозирования тромботического риска у лиц с различной групповой принадлежностью крови по системе ABO.

Внедрение в практику

Теоретические сведения об особенностях тромбоцитарных функций, зависящих от генетических и конституциональных факторов, внедрены в учебный процесс кафедр нормальной и патологической физиологии, гистологии, цитологии и эмбриологии ГОУ ВПО Читинская государственная медицинская академия, в работу НИИ медицинской экологии ЧГМА.

Апробация диссертации

Основные положения работы доложены на: VI Сибирском физиологическом съезде (Барнаул, 2008), Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 55-летию Читинской государственной медицинской академии (Чита, 2008), I Международной научно-практической интернет-конференции «Состояние здоровья: медицинские и психологические аспекты» (Чита-Славянск, 2009), XXXIII Мировом конгрессе Международного общества гематологии (Иерусалим, Израиль, 2010), XI Европейском симпозиуме по иммунобиологии тромбоцитов и гранулоцитов (Бон, Франция, 2010), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Итоги эпидемии гриппа A(H]Ni)» (Чита, 2010), заседании Читинского отделения физиологического общества имени И.П. Павлова (Чита, 2010).

Положения, выносимые на защиту

1. Частоты встречаемости полиморфных вариантов гена тромбоцитарного рецептора фибриногена GpIIIa (Leu33-Pro) не имеют особенностей у здоровых обладателей разных групп крови ABO. Гомозиготный мутантный вариант 807ТТ коллагенового рецептора Gpla тромбоцитов чаще встречается у здоровых лиц со II (А) группой крови, а нормальный 807СС вариант гена Gpla обнаруживается реже. Частота встречаемости сочетания мутантных гентипов GpIIIa и Gpla выше у женщин и у лиц со II (А) группой крови.

2. Агрегационная функция тромбоцитов и лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия зависят от групп крови ABO, тромбогенные свойства которых определяются в том числе и полиморфизмом генов тромбоцитарного рецептора фибриногена GpIIIa (интегрина Рз) (Leu33-Pro) и тромбоцитарного рецептора коллагена Gpla (интегрина а2) (С807-Т).

3. Частоты встречаемости полиморфных вариантов генов GpIIIa (Leu33-Pro) и Gpla (С807-Т) у больных гриппом A(HiN,)/2009 не отличаются от здоровых лиц. При гриппе A(H¡Ni)2009 усиливается функция лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии и скорость спонтанной агрегации тромбоцитов. Скорость индуцированной агрегации кровяных пластинок снижается. Тромбогенность «ненулевых» групп крови при гриппе A(H1N1)2009 проявляется увеличением адгезивности тромбоцитов на лимфоцитах.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Гергесова, Екатерина Евгеньевна

выводы

1. Здоровые лица обладатели «ненулевых» групп крови характеризуются усилением агрегационного потенциала кровяных пластинок на фоне снижения их способности к формированию гетеротипических межклеточных контактов. Протромботические мутантные варианты генов Gpla (С807-Т) и GpIIIa (Leu33-Pro), а также их сочетание чаще выявляются у здоровых людей со II (А) группой крови, способствуя усилению агрегационной функции тромбоцитов.

2. У больных гриппом A(HiNi)/2009 усилена функция лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии и спонтанная агрегация тромбоцитов по сравнению со здоровыми лицами, при этом активность кровяных пластинок у них выше в I (0) группе крови.

3. Частоты встречаемости полиморфных вариантов генов Gpla (С807-Т) и GpIIIa (Leu33-Pro) у больных гриппом A (HiNi)/2009 не отличаются от группы здоровых лиц. Аномальные генотипы тромбоцитарных рецепторов и их сочетание чаще выявляются у больных со II (А) группой крови.

4. Аномальные варианты генов Gpla (С807-Т) и GpIIIa (Leu33-Pro) и их сочетание у больных гриппом A (HiNi)/2009 обусловливают усиление адгезивности тромбоцитов на лимфоцитах, что приводит к уменьшению процента лимфоцитарно-тромбоцитарных коагрегатов в циркуляции и способствует ослаблению агрегации пластинок in vitro.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Гергесова, Екатерина Евгеньевна, Чита

1. Байгозина, Е.А. Роль полиморфизмов генов CD 14 и цитокинов в особенностях течения и исходе нозокомиальной пневмонии / Е.А. Байгозина, В.И. Совалкин // Медицинская иммунология. 2008. - Т. 10.-№4.-С. 467-472.

2. Батаева, Е.П. Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия у детей с воспалительными заболеваниями почек // Е.П. Батаева, Ю.А. Витковский // Забайкальский медицинский вестник. 2007. - № 3. -С. 29-31.

3. Блокировка интерлейкинов 4 и 10 изменяет гемостатические свойства лимфоцитов / Ю.А. Витковский, Б.И. Кузник, A.B. Солпов, Д.А. Еделев // Иммунология. 1999. - № 5. - С. 20 - 23.

4. Бурячковская, Л.И. Гетерогенность тромбоцитов человека и животных. Связь морфологических особенностей с функциональным состоянием: автореф. дисс. . докт. биол. наук / Л.И. Бурячковская. М., 2007. - 46 с.

5. Витковский, Ю.А. Феномен лимфоцитарно-тромбоцитарного розеткообразования / Ю.А. Витковский, Б.И. Кузник, A.B. Солпов // Иммунология. 1999. - № 4. - С.35 - 37.

6. Витковский, Ю.А. Цитокины в регуляции системы гемостаза: автореф. дисс. . докт. мед. наук /Ю.А. Витковский. Чита. - 1997. -32 с.

7. Влияние вил она на состояние иммунитета и лимфоцитарно-тромбоцитарную адгезию у больных сахарным диабетом 1 типа / Б.И. Кузник и др. // Иммунология. 2007. - № 5. - С. 290- 296.

8. Влияние интерлекинов 4 и 10 на систему гемостаза in vitro / Ю.А. Витковский, Б.И. Кузник, Д.А. Еделев, A.B. Солпов // Иммунология. 2001. - № 1.-С. 43-45.

9. Головина, О.Г. Роль фактора Виллебранда в реакциях гемостаза и тромбоза / О.Г. Головина // Ученые записки. 2004. - №11(3). -С. 3744.

10. Гребенщиков, Л.В. Значение групповой принадлежности крови в диагностике наиболее распространенных ЛОР заболеваний: дис. . канд. мед. наук / Л.В. Гребенщиков. Спб. - 2001.

11. Дранник, Г.Н. Генетические системы крови человека и болезни / Г.Н. Дранник, Г.М. Дизик. Киев: Здоровье. - 1990, 196 с.

12. Емельянова, А.Н. Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия и содержание провоспалительных цитокинов у больных с булёзно-геморрагической формой рожи / А.Н. Емельянова, Ю.А. Витковский // Дальневосточный мед. журнал. 2009. - № 2. - С.23-25.

13. Жибурт, Е.Б. Трансфузиология / Е.Б. Жибурт. Москва- Санкт-Петербург: Питер. - 2002.

14. Зависимость коагулограммы от групповой принадлежности крови // Физиология и патология системы гемостаза / Г.Я. Моржуева и др.. Чита. - 1980. - С. 105—106.

15. Интенсивная терапия тяжелых осложненных форм гриппа А(НМ) и сезонного гриппа у беременных / Т.Е. Белокриницкая и др. // Здравоохранение. -2010. №1. - С. 39-47.

16. Кашутин, С. Л. Адгезия и фагоцитоз агрегатов тромбоцитов нейтрофилами и моноцитами у больных псориазом / С.Л. Кашутин, Ю.С. Дегтяр // Цитокины и воспаление. 2008. - № 4. - С.54-57.

17. Кетлинский, С.А. Цитокины / Кетлинский, С.А., Симбирцев A.C. -Санкт-Петербург: Фолиант. 2008. - 550 с.

18. Клинико-генетические аспекты воспалительных заболеваний кишечника / Е.Ю. Валуйских и др. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. — 2008. Т. 18. -№6. - С. 68-74.

19. Козинец, Г.И. Исследование системы крови в клинической практике / Г.И. Козинец, Ю.С. Арустамян, Г.Д. Ашуров. М: Триада-Х. -1997. -480 с.

20. Кузник, Б.И. Общая гематология и гематология детского возраста / Б.И. Кузник, О.Г Максимова. М: Феникс. - 2007. - 573с.

21. Кузник, Б.И. Единая клеточно-гуморальная система защиты организма / Б.И. Кузник, H.H. Цыбиков, Ю.А. Витковский // Тромбоз, гемостаз и реология. 2005. - № 2. - С. 3-16.

22. Кузник, Б.И. Иммунитет, гемостаз и неспецифическая резистентность организма / Б.И. Кузник, Н.В. Васильев, H.H. Цыбиков. М.: Медицина. - 1989. - 320 с.

23. Кузник, Б.И. Клеточные и молекулярные механизмы регуляции системы гемостаза в норме и патологии / Б.И. Кузник. Чита: «Экспресс-издательство». - 2010. — 826 с.

24. Кузник, Б.И. Форменные элементы крови, сосудистая стенка, гемостаз и тромбоз / Б.И. Кузник, В.П. Скипетров. М: Медицина. -1974. - 332 с.

25. Лейкоцитозы и исходы острого нарушения мозгового кровообращения / Б.И. Кузник и др. // Вестник гематологии. -2010.-Т. 6. -№> 1.-С. 86-92.

26. Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия у больных стенокардией / C.B. Жеребцова и др. // Мед. иммун. 2007. - № 2- 3. - С. 330 -331.

27. Лобань, Г. А. Гемокоагулирующие свойства плазмы, тромбоцитов и эритроцитов людей с различными группами крови системы ABO / Г.А. Лобань // Проблемы гематологии. — 1981. № 3. — С. 15-17.

28. Нагервадзе, М. Особенности распространения эритроцитарных групповых антигенов среди инфицированных гепатитом В и С и здоровых доноров / М. Нагервадзе, Л. Ахвледиани // Таврический медико-биологический вестник. Т. 13. - № 1 (49). - 2010. - С. 148153.

29. Перевалова, Е.Б. Некоторые патогенетические механизмы нарушения микроциркуляции у больных сахарным диабетом 1 типа при кетоацидозе: автореф. дисс. . канд. мед. наук / Е.Б. « Перевалова. Чита. - 2009.- 19 с.

30. Показатели гемостаза у первичных доноров различного возраста уральского региона / Т.В. Кузьмина и др. // Клиническая лабораторная диагностика. 2008. - №9. - С. 78-83.

31. Свойства штаммов пандемического вируса гриппа, выделенных на территории России / Г.Г. Онищенко и др. // Проблемы особо опасных инфекций. 2009. -вып. 101. С. 5-9.

32. Северин, Е.С. Биохимия: Учеб. для вузов / Е.С. Северин. М: ГЭОТАР-Медиа, 2003. - 615 с.

33. Симбирцев, A.C. Роль цитокинов в регуляции физиологических функций иммунной системы / A.C. Симбирцев // Физиология и патология иммунной системы. 2004. - № 10. - С. 3-9.

34. Солпов, A.B. Влияние цитокинов на: лимфоцитарно-тромбоцитарную адгезию / A.B. Солпов // Тромбоз, гемостаз, реология. 2002. -№ 1, - С. 34-36.

35. Солпов, A.B. Механизмы лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии:автореферат диссканд. мед. наук / A.B. Солпов. Чита. - 2005. 24;с.

36. Состояние иммунитета и лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии при раке гортани /ТО.А. Витковский, Л.В. Ильиных, Б.И. Кузник, A.B. Солпов // Медицинская иммунология. 2007. - № 6. - С. 653 -659.

37. Состояние иммунитета, гемостаза, процессов ПОЛ и лимфоцитарно-: тромбоцитарной адгезии при диффузном токсическом зобе / Б.И. Кузник и др. // Тромбоз, гемостаз, реология. 2008. - № 2. - С. 2735.

38. Струкова, С.М. Роль тромбоцитов и сериновых преотеиназ в сопряжении свертывания крови и воспаления / С.М. Струкова // Биохимия. -2004. № 10.-С. 1314-1331.

39. Тарбаева, Д.А. Анализ течения беременности и ее исходов на фоне гриппа А (HiNi)2009 / Д.А. Тарбаева, С.А. Иозефсон, Э.Д.

40. Загородняя // Дальневосточный медицинский журнал. № 2. - 2010. - С. 43-45.

41. Тихомирова,4 Э.Б. Иммуногенетические маркеры в популяциях Коми / Э.Б. Тихомирова // Генетика. 1990. - № 9. - С. 1660-1666.

42. Томилин, В.В. Частота встречаемости антигенов системы ABO у населения Российской Федерации / В.В. Томилин, C.B. Гуртовая // Судебно-медицинская экспертиза. 1999. - № 3. - С. 16-18.

43. Фрейдин, М.Б. Геномные основы подверженности инфекционным заболеваниям / М.Б. Фрейдин, И.А. Гончарова, A.A. Рудко // Молекулярная медицина. 2006. - № 3. - С.39-45.

44. Шаманская, М.Г. Влияние нейротропных препаратов на лимфоцитарно-тромбоцитарную адгезию у больных с алкогольной зависимостью / М.Г. Шаманская, Ю.А. Витковский // Дальневосточный медицинский журнал. 2009. - №2. - С.89-93.

45. Шитикова, А.С. Тромбоцитарный гемостаз / А.С. Шитикова. СПб: Изд-во СПбГМУ. - 2000. - 227с.

46. A common single nucleotide polymorphism in the CD 14 promoter decreases the affinity of Sp protein binding and enhances transcriptional activity / T.D. LeVan et al. // J. Immunol. 2001.- N 167. - P. 58385844.

47. ABO blood groups as a risk factor of helicobacter pylori infection / P.A. Gonzales Flores, J.O. Dias Ferrer, E. Monge Salgado, T. Watanabe Varas // Rev. Gastroenterol. Peru. 2000. - N 20 (4). - P. 370-375.

48. ABO genotype and risk of thrombotic events and hemorrhagic stroke / K.L. Wiggins et al. // JTH. 2009. - N7. - P. -263-269.

49. AB0 system of blood groups in people and their resistance to certain infectious diseases (prognosis) / I.G Skripal // Microbiolohichnyi zhurnal. 1996.- N58 (2).-P. 102-108.

50. ABO blood group but not haemostasis genetic polymorphisms significantly influence thrombotic risk: a study of 180 homozygotes for the Factor V Leiden mutation / V. Le Cam-Duchez et al. // Br. J. Haematol. 2006. - №135. - P. 697-702.

51. ABO blood groups and risk of venous thromboembolism during pregnancy and the puerperium. A population-based, nested case-control study / T.B. Larsen et al. // J. Thromb. Haemost. 2005. - №3. - P. 300304.

52. Adhesion of Staphylococcus aureus to surface-bound platelets: role of fibrinogen/fibrin and platelet integrins / M.J. Herrmann et al. //• Infect. Dis. 1993. - N 167. - P. 312-322.

53. Allan, T. M. ABO blood groups and ischemic heart disease in men / T. M. Allan, A. A. Dawson // Br. Heart J. 1968. - № 30. P. 377—382.

54. Association of the -159 CD14 gene polymorphism and lack of association of the -308 TNFA and Q551R IL-4RA polymorphisms, with severe chronic periodontitis in Swedish Caucasians / M. Donati et al. // J. Clin. Periodontol. -2005. N 32(5). P. 474-479.

55. Association of the gene polymorphisms of platelet glycoprotein la and Ilb/IIIa with myocardial infarction and extent of coronary artery disease in Korean population / S. Park et al. // Yonsei Medical J. 2004. - Vol. 45. - № 3. - P. 428-434.

56. Association of the platelet glycoprotein la C807T gene polymorphism with nonfatal myocardial infarction in younger patients / S. Santoso et al. // Blood. 1999. - Vol. 93. - P. 2449-2453.

57. Association of the platelet glycoprotein lib HPA-3 polymorphism with survival after ischemic stroke / A.M. Carter, A.J. Gatto, J.M. Bamford, P.J. Grant// Stroke. 1999.- Vol. 30; - P: 2606-2611.'

58. Association of two silent polymorphisms of platelet glycoprotein Ia/IIa receptor with risk of myocardial, infarction: a case-control study / K. Moshfegh et al.'// Lancet. 1999. - Vol. 353. - P. 351-354.

59. Avent, N.D. Human erythrocyte antigen expression: its molecular bases / N.D. Avent // Br. J, Biomed. Sci.- 1997. Vol. 54. - N 1. -P. 16-37.

60. Bazil ,V. Shedding as a, mechanism of down-modulation of CD 14 on stimulated human monocytes / V. Bazil, J. L. Strominger // J. Immunol. -1991.-Vol. 147. P. 1567-1571.

61. Bennett, J.S. Effect of the P1A2 alloantigen on the function of (33-integrins in platelets /J.S: Bennett, F. Catella-Lawson, „A.R. Rut // Bd. -2001. Vol. 97. - P. 3093-3099.

62. Berckmans, R.J. et al., Cell-derived microparticles circulate in healthy human and support low grade thrombin generation / R.Ji Berckmans.11 Thromb. Haemost.-2001.-N3(5). P. 834-839.

63. Blood platelets activate, the classical pathway of human complement / E.I.B. Peerschke, W. Yin, S.E. Grigg, B: Ghebrehiwet // JTH. 2006. -N4. - P. 2035-2042.

64. Bottiger, C. HPA-1 and HPA-3 polymorphism of the platelet fibrinogen receptor and coronary artery disease and myocardial infarction / G. Bottiger, A. Kastrati, W. Koch // Thromb. Haemost. 2000. - Vol. 83. -P. 559-562.

65. Boven, D.J. An influence of ABO blood groop on the rate of proteolysis of von Willebrandt factor by ADAMTS13 7 D.J. Boven // J. Thromb. Haemost.-2003.-№1. -P. 33-40.

66. Bronte-Stewart, B: ABO blood groups in relation to ischemic heart disease / B. Bronte-Stewart, M. C. Botha, L. H. Krut // Br. Med. J. -1962. N 1.- P. 1646— 1650.

67. C (260) T polymorphism in the promoter of the GDI4 monocyte receptor gene as a risk factor for myocardial infarction / J. A. Hubacek et al. // Circulation. 1999. - N 99. - P. 3218-3220.

68. Carter, A.M. Platelet glycoprotein Ilia P1A polymorphism in young men with myocardial infarction / A.M. Carter, N. Ossei-Gerning, P.J. Grant // Lancet. 1996. - V. 348. - P. 485-486.

69. CD14 -159 and -260 gene polymorphisms are associated with HBV-related chronic injuiy in Chinese han patients / Ch-G. Yan et al. // Chinese journal of physiology. 2008; - Vol. 51(2). - P. 94-99.

70. CD14 C-159T and early infection with Pseudomonas aeruginosa in children with cystic fibrosis / A.C. Martin et al. //Resp. Res. 2005. -N6. - P. 63-66.

71. CD14 expression and production by human hepatocytes / GL. Su et al. // J. Hepatol. 1999. - N 31. - P. 435-439.

72. CD 14 gene —260 C/T polymorphism is associated with chronic heart failure / S. Krugera et alp// Abs. Europ. J. Intern. Med. -2005. Vol.16. -N 5. -P. 345-347.

73. CD 14 is a member of the family of leucine-rich proteins and is encoded by a gene syntenic with multiple receptor genes / E. Ferrero, C.L. Hsieh, U. Francke, S.M. Goyert // J. Immunol. 1990. - N 145. P. 331-336.

74. CD14 is a pattern recognition receptor / J. Pugin et al. // Immunity. -1994.-Vol. 1.-P. 509-515.

75. CD14 is an acute-phase protein / B. Sylvette et al. // The Journal of Immunology. 2004. - N172. - P. 4470-4479.

76. CD 14 is expressed and released as soluble CD 14 by human intestinal epithelial cells in vitro: lipopolysaccharide activation of epithelial cells revisited / E. Frey et al. // A Infect. Immun. 2001. - N 69. P. 37723780.

77. CD14 promoter polymorphism C(159)T is associated to chronic Chlamidia Pneumoniae infection in peripheral blood monocytes / J. Rupp et al. // Genes and immunity. 2004. - N 5. - P. 435-438.

78. CD 14, a receptor for complexes of lipopolysaccharide (LPS) and LPS binding protein / S. D. Wright et al. // Science. 1990. - Vol. 249. -P. 1431-1436.

79. Cell-free pool of CD 14 mediates activation of transcription factor NF-kB by lipopolysaccharide in human endothelial cells / M. A. Read et al. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1993. - Vol. 90. - P. 9887-9892.

80. Circulating monocyte-platelet aggregates are an early marker of acute myocardial infarction / M. Furman et al. // JACC. 2001 — Vol. 38. -№.4.-P. 1002-1006.

81. Clinical features of the initial cases of 2009 pandemic influenza A (HiNi) vims infection in China / B. Cao et al. // The new Engl. J. Med. -Vol.361. N 26. - P. 2507-2517.

82. Crook, M. Sialic Acid: Its Importance to Platelet Function in Health and Disease / M. Crook // Platelets. 1991. - Vol. 2. - No. 1. - P. 1-10.

83. Cross-reactive antibody responses to the 2009 pandemic HiNj influenza virus / K. Hancock // The new Engl. J. Med. 2009. - Vol. 361. -N20.- P. 1945-1952.

84. Cutting edge: heat shock protein (HSP) 60 activates the innate immune response: CD 14 is an essential receptor for HSP60 activation of mononuclear cells / A. Kol et al. // J. Immunol. 2000. - N 164. - P. 13-21.

85. Cutting edge: human B cell function is regulated by interaction with soluble CD 14: opposite effects on IgGl and IgE production / M.A. Arias et al. // J. Immunol. 2000. - N 164. P. 3480-3487.

86. Demin, H. Association of the CD 14 gene polymorphism C-159T with allergic rhinitis. H. Demin, Sh. Wenyu, Zh Luo // Am. J. of Rhinology & Allergy. 2010 - Vol. 24. -N 1. - P. el-e3.

87. Diminished platelet binding in vitro by Staphylococcus aureus is associated with reduced virulence in a rabbit model of infective endocarditis / P. M. Sullam, A. S. Bayer, W. M. Foss, A. L Cheung // Infect. Immun. 1996. - N 64. - P. 4915-4921.

88. Emilia, G. Helicobacter pylori eradication can induce platelet recovery in idiopathic thrombocytopenic purpura / G. Emilia // Bd. -2001. N97. - P. 812-814.

89. Endotoxin activates human vascular smooth muscle cells despite lack of expression of CD 14 mRNA or endogenous membrane CD 14 / H. Loppnow et al. // Infect. Immun. 1995. - N 63. - P. 1020-1028.

90. Endotoxin-neutralizing capacity of soluble CD14 / C. Schutt et al. // Res. Immunol. 1992. - Vol. 143. - P. 71-79.

91. Engelmann, B. Intravascular tissue factor pathway a model for initiation of coagulation within the blood vessel / B. Engelmann, T. Luther, I. Muller // Thromb. Haemost. - 2003. - N 89(1). P. 3-8.

92. Evidence for an expression of blood group A antigen on platelet glycoproteins IV and V / D. Stockelberg et al. // Transfus Med. 1996. -Vol. 6. -N3. - P. 243-248.

93. Evidence of a trimolecular complex involving LPS, LPS binding protein and soluble CD 14 as an effector of LPS response / C. J. Thomas et al. // FEBS Lett. 2002. - Vol. 531. - P. 184-189.

94. Evidence of Toll-like receptor molecules on human platelets. F. Cognasse et al. // Immunol. Cell Biol. 2005. N 83. - P. 196-198.

95. Examination of the platelet membrane glycoprotein Ilb-IIIa complex and its interaction with fibrinogen and other ligands by electron microscopy / J.W. Weisel, C. Nagaswami, G. Vilaire, J.S. Bennett // J. Biol. Chem. 1992. - Vol. 267. - P. 16637-16643.

96. Expression of CD 14 by hepatocytes: up-regulation by cytokines during endotoxemia / S. Liu et al. // Infect. Immun. 1998. - Vol. 66. -P. 5089-5094.

97. Expression of Toll-like receptors on human platelets I R. Shiraki et al. // Thromb. Res. 2004. - N 113. - P. 379 385.

98. Fitzgerald, J. R. The interactions of bacterial pathogens with platelets / J. R. Fitzgerald, T.J. Foster, D. Cox // Microbiology. 2006. -N4. - P. 445-457.

99. Foster, T. J; Surface protein adhesins of Staphylococcus aureus / T.J. Foster, M. Hook // Trends.Microbiol. 1998. - N 6. - P. 484-488.

100. Franchini, M. Helicobacter pylori infection and- immune thrombocytopenic purpura: an update / M. Franchini, D. Veneri // Helicobacter. 2004. -N 9. - P. 342-346.

101. Glycoprotein la gene C807T polymorphism and risk for major adverse cardiac. events within the first 30 days after coronary artery stenting / N. von Beckerath // Blood. 2000. - Vol. 95. - P. 3297-3301.

102. Glycoprotein Ilia polymorphism and risk of myocardial infarction / N.J. Samani, D. Lodwick // Cardiovasc. Res. 1997. - Vol. 33. - P. 693697.

103. Goldschmidt-Clermont, P.J. Clues to the death of an Olympic champion / P.J. Goldschmidt-Clermont, W.S. Shear, S J. hwartzberg // Lancet. 1996. - Vol. 348. - P. 485^-86.

104. Goronzy, J.J. Rheumatoid arthritis / J.J. Goronzy, C.M. Weyand // Immunol. Res. 2005. - Vol. 204. - P.55-73.

105. Gruchala, M. Association between the PI platelet glycoprotein GPIIIa polymorphism and extent of coronary artery disease / M. Gruchala, D. Ciecwierz, K. Ochman // Intern. J. Cardiol. 2003. - Vol. 88. - P. 229-237.

106. Guessous, F. Shiga toxin 2 and lipopolysaccharide cause monocytic THP-1 cells to release factors which activate platelet function / F. Guessous // Thromb. Haemost. 2005. - N 94. - P. 1019-1027.

107. Hansson, G.K. Inflammation, atherosclerosis and coronary artery disease / G.K. Hansson // Engl. J. Med. 2005. - Vol. 352. - P. 16851695.

108. Hawiger, J. Staphylococci-induced human platelet injury-mediated by protein A and immunoglobulin G Fc fragment receptor / J. Hawiger // J. Clin. Invest. 1979. - N 64. - P. 931-937.

109. Hepatocytes contribute to soluble CD14 production, and CD14 expression is differentially regulated in hepatocytes and monocytes / Z. Pan, L. Zhou, C. J. Hetherington, D. E. Zhang // J. Biol. Chem. 2000. -N275.-P. 36430-36439.

110. Heterogeneous expression and release of CD 14 by human gingival fibroblasts: characterization and CD14-mediated interleukin-8 secretionin response to lipopolysaccharide / S. Sugawara et al. // Infect. Immun. -1998.-N66.-P. 3043-3048.

111. Hospitalized patients with 2009 H.Ni influenza in the United States, april-june 2009 / S. Jain et al] // The new Engl. J. Med. Vol.361. - N 20.-P. 1935-1944.

112. Human keratinocytes express functional CD 14 and Toll-like receptor 4 / P. I. Song et al. // J. Invest. Dermatol. 2002. - Vol. 119. - P. 424430.

113. Impact of gender on the clinical presentation and diagnosis of deep venous thrombosis / R.M. Bauersachs et al. // Thromb. Haemost. — 2010. N. 104(2). - P. 710-717.

114. In vivo effects of lipopolysaccharide and TLR4 on platelet production and activity: implications for thrombotic risk / M. Jayachandran et al. // J. Appl. Physiol. 2007. N 102. - P. 429-433.

115. Jenkins, P.V. ABO blood group determines plasma von Willebrand factor levels: a biologic function after all / P.V. Jenkins, J.S. 0,Donnell // Transfusion. 2006. - Vol. 46. - P. 1836-1844.

116. Karl, W. Innate sensing of viruses by toll-loke receptors / W. Karl, B. Compton, T. J. Compton // Virol. 2004. - N78(15). - P.7867-7873.

117. Kerrigan, S. W. A role for glycoprotein lb in Streptococcus sanguis-induced platelet aggregation / S. W. Kerrigan // Bd. 2002. - N 100. - P. 509-516.

118. Lane, D.A. Role of hemostatic gene polymorphisms in venous and arterial thrombotic disease / D.A. Lane, P.J. Grant // Blood. 2000. - Vol. 95.-P. 1517-1532.

119. Li, N. Platelet-limphocyte conjugation differs between lymphocyte subpopulations / N. Li, Q. Ji, P. Hjmdahl // J. of Thromb. Haemost. -2006.-N4.-P. 864-871.

120. Li, N. Platelet-limphocyte cross-talk / N. Li I I J. of Leukocyte Biol. -2008.-Vol. 83.-P. 342-350.

121. Lipopolysaccharide activation of human endothelial and epithelial cells is mediated by lipopolysaccharide-binding protein and soluble CD14 / J. Pugin et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. - Vol. 90. -P. 2744-2750:

122. Lipopolysaccharide from enterohemorrhagic Escherichia coli binds to platelets through TLR4 and CD62 and is detected on circulating platelets in patients with hemolytic uremic syndrome / A.L. Stahl et al. // Blood. -2006. -N 108. -P. 167-176.

123. Lipopolysaccharide induces sCD40L release through human platelets TLR4, butnotTLR2 and TLR9 / F. Cognasse et al. // Intensive Care Med. -2007. -N33. P. 382-384.

124. Lymphocyte-platelet adhesion in IL-2 therapy of patient with laryngeal carcinoma / Yu. Vitkovsky, L. Ilynych, A. Solpov, B. Kuznik // Journal of Leukocyte Biology. 2001. - Suppl. 2001. - P. 66-67.

125. Marian, A.J. Platelet glycoprotein Ilia P1A polymorphism and myocardial infarction / A.J. Marian, R. Brugada, N.S. Kleiman // N. Engl. J. Med. 1996. - Vol: 335. - P. 1071-1074.

126. Massey, R. C. Fibronectin-binding protein A of Staphylococcus aureus has multiple, substituting, binding regions that mediate adherence to fibronectin and invasion of endothelial cells I R.C. Massey // Cell. Microbiol. 2001. - N 3. - P. 839-851.

127. MD-2, a molecule that confers lipopolysaccharide responsiveness on Toll-like receptor 4 / R. Shimazu et al. // J. Exp. Med. 1999. - N 189. -P. 1777-1782.

128. Michelson, A.D. Platelet GP Ilia P1A polymorphisms display different sensitivities to agonists / A.D. Michelson, M.I. Furman, P.

129. Goldschmidt-Clermont // Circulation. 2000. - Vol. 101. - P. 1013— 1018.

130. Molecular genetics of the ABO histo-blood group system / F. Yamamoto // Vox Sanguinis. 1995. - Vol.69. - P. 1-7.

131. Moreillon, P. Role of Staphylococcus aureus coagulase and clumping factor in pathogenesis of experimental endocarditis / P. Moreillon // Infect. Immun. 1995. - N 63. - P. 4738-4743.

132. Murine CD 14 gene expression in vivo: extramyeloid synthesis and regulation by lipopolysaccharide // C. Fearns, V. V. Kravchenko, R. J. Ulevitch, D. J. Loskutoff// J. Exp. Med. 1995. - N 181. - P. 857-862.

133. Newman, P.J. Platelet alloantigens: cardiovascular as well as immunological risk factors / P.J. Newman // Lancet. 1997. - Vol. 349. P. 370-384.

134. Newman, P.J., Valentin N. Human platelet alloantigens: recent findings, new perspectives / P.J. Newman, N. Valentin // Thromb. Haemost. 1995. - Vol. 74. - P. 234-239.

135. Nucleotide polymorphisms in the alpha 2 gene define multiple alleles which are associated with differences in platelet alpha 2 beta 1 / M. Kritzik et al. // Bd. 1998. - Vol. 92. - P. 2382-2388.

136. Patients hospitalized with 2009 pandemic influenza A (H.Ni) New York City, may 2009 / M.E. Slopen et al] // Morbidity and mortality weekly report. - 2009. - Vol.58. - N51&52. - P. 1436-1440.

137. Pierschbacher, M.D. Cell attachment activity of fibronectin can be duplicated by small synthetic fragments of the molecule / M.D. Pierschbacher, E. Ruoslahti // Nature. 1984. - Vol. 309. - P. 30-33.

138. P1A1/A2 polymorphism of platelet glycoprotein Ilia and risks of myocardial infarction, stroke and venous thrombosis / P.M. Ridker, C.H. Hennekens, C. Schmitz // Lancet. 1997. - Vol. 349. - P. 385-388.

139. Platelet damaging factor, a fifth activity of staphylococcal a-toxin. M. Manohar, S. K. Maheswaran, S. P. Frommes, R. K. Lindorfer // J. Bacterid. 1967. - N 94. - P. 224-231.

140. Platelet Defect of Infectious Mononucleosis / R. Clancy, E. Jenkins, B. Firkin // Br. Med. J. 1971. - № 4(5788). - P. 646-648.

141. Platelet TLR4 activates neutrophil extracellular traps to ensnare bacteria in septic blood / S.R. Clark et al. // Nat. Med. 2007. - N 13. P. 463-469.

142. Platelet Toll-like receptor expression modulates lipopolysaccharide-induced thrombocytopenia and tumor necrosis factor-alpha production in vivo / R. Aslam et al. // Bd. 2006. N 107. P. 637-641.

143. Platelets enhance CD4+ lymphocyte adhesion to extracellular matrix under flow conditions: role of platelet aggregation, integrins and non-integrin receptors / A. Solpov // Thrombosis and Haemostasis. 2006. -Vol.95. -№5.-P. 815-821.

144. Platelets express functional Toll-like receptor-4 / G Andonegui et al. // Bd. 2005. N 106. P. 2417-2423.

145. Platelets secrete stromal cell-derived factor-1 alpha and recruit bone marrow-derived progenitor cells to arterial thrombi in vivo / S. J. Massberg et al. // Exp. Med. 2006. - N 5. - P. 1221 - 1233.

146. Polymorphism in CD14 gene associated with pulmonary function in farmers / T.D. LeVan et al. // Am. J. Resp. Crit. Care Med. 2005. -Vol. 171.-P. 773-779.

147. Polymorphism in the 59 flanking region of the CD 14 gene is associated with circulating soluble CD 14 levels and with total serum immunoglobulin E / M.A. Baldini et al. // Am. J. Respir. Cell. Mol. Biol. -1999.-N20. P. 976-983.

148. Polymorphism of human platelet membrane glycoprotein lib is associated with the Baka/Bakb alloantigen system / S. Lyman, R.H. Aster, G.P. Visentin, P.J. Newman // Blood. 1990. - N 75. - P. 23432348.

149. Polymorphisms of the CD 14 gene and atopic phenotypes in Czech patients with IgE-mediated allergy / D. Bucková, L. Izakovicová Hollá, V. Znoji, A. Vasku // J. Hum. Gen. Vol. 51. - N 11. - 2006. - P. 977983.

150. Postmenopausal hormone replacement therapy increases coagulation activity and fibrinolisis / H.J. Teede et al. // Artetioscler. Tromb. Vase. Biol. 2000. - N 20. - P. 1404-1409.

151. Prevention and treatment of venous thromboembolism / A.N. Nicolaides et al. // Int. Angiol. 2006. N 25. P. 101—161.

152. Promoter polymorphism of the CD 14 endotoxin receptor gene is associated with biliary atresia and idiopathic embrional cholestasis / H-H.Shih et al. // Pediatrics. 2005. - Vol 116. - P. 437-441.

153. Proulx, F. Pathogenesis of Shiga toxin-associated hemolytic uremic syndrome / F. Proulx, E. G. Seidman, D. Karpman // Pediatr. Res. — 2001. -N50.-P. 163-171.

154. Recombinant soluble CD 14 inhibits LPS-induced tumor necrosis factor-a production by cells in whole blood / A. Haziot et al. // J. Immunol. 1994. - N 152. - P. 5868-5873.

155. Recombinant soluble CD 14 mediates the activation of endothelial cells by lipopolysaccharide / A. Haziot, G. W. Rong, J. Silver, S. M. Goyert//J. Immunol. 1993.-N 151.-P. 1500-1508.

156. Recombinant soluble CD14 prevents mortality in mice treated with endotoxin (lipopolysaccharide) / A. Haziot et al. // J. Immunol. 1995. -N154.-P. 6529-6536.

157. Reduced thromboxane biosynthesis in carriers of toll-like receptor 4 polymorphisms in vivo / P. Patrignani et al. // Blood. 2006. — N 107. -P. 3572-3574.

158. Role ot fibrinogen alpha and gamma chain sites in platelet aggregation D.H. Farrell, T P. hiagarajan, D.W. Chung, E.W. Davie // Proc. Natl. Acad. Sei. 1992. - Vol. 89. - P. 10729-10732.

159. Scarabin, P-Y. Differential assotiation of oral and transdermal oestrogen-replacement therapy with venous tromboembolism risk / P-Y. Scarabin, E. Oger, G. Plu-Bureau // Lancet. 2003. - N 362. - P. 428432.

160. Schmitz, G. CD 14 signalling in lipid rafts: new ligands and co-receptors / G. Schmitz, E. Orso // Curr. Opin. Lipidol. 2002. - Vol. 13. -P. 513-519.

161. Schumann, R. R. The role of CD 14 and lipopolysaccharide-binding protein (LBP) in the activation of different cell types by endotoxin / R. R. Schumann, E. T. Rietschel, H. Loppnow // Med. Microbiol. Immunol. -1994. -N 183.-P. 279-284.

162. Schutt, C. sCD14 prevents endotoxin inducible oxidative burst response of human monocytes / C. Schutt, T. Schilling, C. Kruger // Allerg. Immunol. 1991. -N 37. - P. 159-164.

163. Schwarz-Linek, U. Pathogenic bacteria attach to human fibronectin through a tandem ß-zipper / U. Schwarz-Linek // Nature. 2003. - N 423. -P. 177-181.1. MM

164. Severe respiratory disease concurrent with the circulation of H1N1 influenza /G. Chowell et al. // The new Engl. J. Med. Vol. 361. - N 7. -P. 674-679.

165. Shenkel-Brunner, H. Human blood groups. Chemical and biochemical basis of antigen specificity / H. Shenkel-Brunner // Springer Wein, New-York. 2000. - P. 30-293.

166. Slowik, A. A2 alelle of GpIIIa gene is a risk factor for stroke caused by large-vessel disease in males / A. Slowik, T. Dziedzic, W. Turaj // Stroke. 2004. - Vol. 35. - P. 1589-1593.

167. Soluble lipopolysaccharide receptor (CD 14) is released via two different mechanisms from human monocytes and CD 14 transfectants / P: Bufler et al. // Eur. J. Immunol. 1995. - N 25. - P. 604-610.

168. Stimulation of Toll-Like Receptor 2 in Human Platelets Induces a Thromboinflammatory Response Through Activation of Phosphoinositide 3-Kinase / P. Blair et al. // Circ. Res. 2009. - N 104(3). P. 346-354.

169. The Glasgow Outcome, APCR and Lipid (GOAL) Pregnancy Study: fit,' significance of pregnancy associated activated protein C resistance /P.

170. Clark, N. Sattar, I.D. Walker, I.A. Greer // Thromb. Haemost. 2001. - N 85. P. 30-35.

171. The Gpla C807T dimorphism associated with platelet collagen receptor density is not a risk factor for myocardial infarction / S.A. Croft et al. // British J. Haematol. 1999. - Vol. 106. - P. 771-776.

172. The junctional adhesion molecule 3 (JAM-3) on human platelets is a counterreceptor for the leukocyte integrin Mac-1 / S. Santoso et al. // J. Exp. Med. 2002. - N 196. - P. 679-691.

173. The myeloid differentiation antigen CD 14 is N- and O-glycosylated: contribution of N-linked glycosylation to different soluble CD 141. J?«'"1") I 1 !isoforms / F. Stelter et al. // Eur. J. Biochem. 1996. -Vol. 236. - P. 457-461.

174. The relationship between ABO blood group and the risk of bleeding during vitamin K antagonist treatment / A.A. Garcia et al. // J. Thromb. Haemost. -2006. N4. - P. 1418-1420.

175. The relationship between ABO groups and subgroups, factor VIII and von Willebrand factor / N.C. Sousa // Haematologica/the hematology journal. 2007. - № 2(02). - P. 236-239.

176. The risk of recurrent venous thromboembolism in men and women / A. Paul et al. // The new Eng. J.Med. 2004. - N. 350. - P. 2558-2563.

177. The two soluble forms of the lipopolysaccharide receptor, CD14: characterization and release by normal human monocytes / J. J. Durieux et al. // Eur. J. Immunol. 1994. - N 24. - P. 2006-2011.

178. Tobias, P. S. Lipopolysaccharide binding protein and CD14 in LPS dependent macrophage activation / P. S. Tobias, R. J. Ulevitch // Immunobiology. 1993. - N 187. - P. 227-235.

179. Trifonov, V. Geographic dependence, surveillance and origins of the 2009 influenza A (HiNj) virus / V. Trifonov, H. Khiabanian, R. Rabadan // The new Eng. J. Med. 2010. - Vol. 361. - N 2. - P. 115-119.

180. Up-regulation of mouse CD 14 expression in Kupffer cells by lipopolysaccharide / K. Matsuura et al. // J. Exp. Med. 1994. - N 179. -P. 1671-1679.

181. Variability of integrin alpha 2 beta 1 activity on human platelets / T.J. Kunicki, R. Orchekowski, D. Annis, Y. Honda // Bd. 1993. - Vol. 82.-P. 2693-2703.

182. Veneri, D. High prevalence of sustained remission of idiopathic thrombocytopenic purpura after Helicobacter pylori eradication: a long-term follow-up study / D. Veneri, M. Krampera, M. Franchini // Platelets. -2005.-N16.-P. 117-119.jA

183. Venous thromboembolic disease and ABO blood type / H. Jick et al. // Lancet. 1969. - N 1. P. 539—542.

184. Vitkovsky, Yu. Interleukin 2 influence on platelet-lymphocyte adhesion / Yu. Vitkovsky, A. Solpov, B. Kuznik // Thrombosis and Haemostasis. Suppl. - Abstr. XVII Congress of the ISTH. Washington D.C.; 1999.-P. 141-142.

185. Weiss, E.J. A polymorphism of a platelet glycoprotein receptor as an inherited risk factor for coronary thrombosis / E.J. Weiss, P.F. Bray, M. Tayback // N. Engl. J. Med. 1996. - Vol. 334. - P. 1090-1094.

186. Weyrich, A.S. Platelets: signaling cells in the immune continuum /

187. A.S. Weyrich, G.A. Zimmerman // Trends. Immunol. 2004. -N 25. - P. 489-495.

188. Yamamoto, F. Cloning and characterization of DNA complementary to human UDP-GalNAc: Fuc-l-2Gal-l-3GalNac transferase (histo-blood group A transferase) mRNA / F. Yamamoto, J. Marken, T. Tsuju // J. Biol. Chem. 1990. - Vol.265. - P. 1146-1151.

189. Yang, Y. The biology of P-selectin glycoprotein ligand-1 / Y. Yang,

190. B.C. Furie, B. Furie // Thrombos. Haemost. 1999. - Vol. 81. - P. 1-7.