Генетический полиморфизм антигенов гистосовместимости здорового детского населения Московского региона и при острых лейкозах у детей

Лебедева, Лидия Львовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Генетический полиморфизм антигенов гистосовместимости здорового детского населения Московского региона и при острых лейкозах у детей
ВАК РФ 03.02.07, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Генетический полиморфизм антигенов гистосовместимости здорового детского населения Московского региона и при острых лейкозах у детей"

На правах рукописи

ЛЕБЕДЕВА ЛИДИЯ ЛЬВОВНА

ГЕНЕТИЧЕСКИЙ ПОЛИМОРФИЗМ АНТИГЕНОВ ГИСТОСОВМЕСТИМОСТИ ЗДОРОВОГО ДЕТСКОГО НАСЕЛЕНИЯ МОСКОВСКОГО РЕГИОНА И ПРИ ОСТРЫХ ЛЕЙКОЗАХ У ДЕТЕЙ

03.02.07 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 ЗНОЯ 2010

Москва-2010

004613015

Работа выполнена в Государственном учреждении здравоохранения города Москвы «Банк стволовых клеток Департамента здравоохранения города Москвы», Федеральном Государственном Учреждении «Федеральный научно-клинический центр детской гематологии, онкологии и иммунологии» Росздрава.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук Астрелина Татьяна Алексеевна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Поспелов Лев Евгеньевич

кандидат биологических наук, доцент Азова Мадина Мухамедовна

Ведущая организация: Учреждение Российской академии наук Институт биологии гена РАН

Защита диссертации состоится ж // 2010 г. в часов на

заседании диссертационного совета Д 212.203.05 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов» по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 8.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов» по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 6.

/О

Автореферат разослан « » _ / ^ 2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук, доцент / О.Б. Гигани

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность

Достижения последнего десятилетия XX века и начала XXI в области изучения молекулярной генетики главного комплекса гистосовместимости, или МНС (Major Histocompatibility Complex), существенно расширили представление о строении системы HLA (Human Leukocyte Antigens) и изменили возможность типирования антигенов гистосовместимости.

В основне этиологии мультифакториальных заболеваний, к которым относятся лейкозы, лежит генетическая компонента (Tayler G.M., 2002, 2008, 2009; Масчан М.А., 2007; Маякова С.А., 2009). Возникающие под воздействием различных эндогенных и экзогенных факторов (онкогенные вирусы, неблагоприятные факторы внешней среды, ионизирующая радиация и т. д.) мутации зародышевых клеток системы кроветворения приводят к различным изменениям кариотипа (Флейшман Е.В., 2007, 2009).

Ключевым моментом в иммунном распознавании аллоантигенов является презентация пептида Т-клеткам в комплексе с HLA-молекулами (Doherty Р.С., 1975; Zinkernagel R.M., 1974, 1997). С одной и той же молекулой МНС могут взаимодействовать разные патогенные пептиды, которые, однако, отличаются по сродству к этой молекуле, и, как следствие, возникает различной интенсивности иммунный ответ, способствующий развитию заболевания или устойчивости к нему (Хамаганова Е.Г., 2006; Зарецкая Ю.М., 2008).

Заболеваемость острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ) практически в пять раз больше, чем острым миелобластным лейкозом (ОМЛ), частота встречаемости которого составляет 4-5 случая на 100000 детского населения в год (Tayler G.M., 2002, 2008, 2009; Масчан М.А., 2007; Маякова С.А., 2009). Популяционные исследования полиморфизма главного комплекса гистосовместимости свидетельствуют об ассоциативной связи генов главного комплекса гистосовместимости с острым лейкозом, как у взрослых, так и у детей (Dorak М.Т., 1992, 1996, 1999; Tayler G.M., 2002, 2008, 2009; Тананов А.Т., 1982; Хамаганова Е.Г., 1989; Зарецкая Ю.М., 2000; Рий А.А., 2007).

Имеются данные, полученные отечественными авторами, которые показали повышение частоты встречаемости антигенов В17 и В40, а также снижение частоты встречаемости антигена DR7 у больных детей с ОЛЛ (Тимонова Л.А., Румянцев А.Г., 1989).

Однако практически отсутствуют данные изучения взаимосвязи HLA-системы и вариантом острого лейкоза у детей. Не охарактеризованы особенности распределения HLA-маркеров предрасположенности и устойчивости к различным вариантам ОЛЛ и ОМЛ у детей, в зависимости от их пола. Не исследован генетический полиморфизм антигенов гистосовместимости здорового детского населения московского региона. Исходя из этого, настоящее исследование представляется актуальным.

Цель исследования: изучить профиль генетического полиморфизма антигенов гистосовместимости у здорового детского населения московской популяции и у детей больных ОЛЛ и ОМЛ.

Цель и задачи исследования

Задачи исследования

1. Осуществить выбор метода HLA-генотипирования адекватного для обработки большого количества образцов пуповинной крови, соответствующего стандартам NETCORD и требованиям EFI.

2. Провести оценку методов SSO (Sequence Specific Oligonucleotides) и SSP (Sequence Specific Primers) в детекции специфичностей (групп аллелей) и аплельных вариантов генов HLA системы.

3. Изучить генетический полиморфизм антигенов гистосовместимости у здорового детского населения московского региона.

4. Исследовать характер распределения специфических генов HLA-системы класса I и II при различных вариантах OJIJI у детей и в зависимости от пола ребенка.

5. Исследовать характер распределения специфических генов HLA-системы класса I и II при различных вариантах OMJI у детей.

6. Выявить HLA-маркеры предрасположенности и устойчивости к OJIJI и ОМЛ у детей.

Научная новизна

Впервые в России проведено широкомасштабное исследование генов HLA-системы на большом количестве образцов пуповинной крови с использованием высокотехнологических подходов (типирование методом SSO на автоматическом процессоре и методом SSP).

Впервые изучен характер распределения групп аллелей HLA-генов (специфичностей) класса I и II у здорового детского населения московского региоиа, выполненный на большом количестве материала. Установлено, что профиль генов HLA-системы у детского населения московского региона соответствует европеоидам.

Впервые получены данные об особенностях распределения специфических групп аллелей HLA-системы при ОЛЛ и ОМЛ у детей.

Охарактеризованы общие маркеры предрасположенности к развитию В-ОЛЛ у детей (HLA-специфичности Cw*04, DRB1*14 и DRB1*09), Т-ОЛЛ (HLA-специфичности DRB1*01, DRB1*13 и DQB1 *05), ОМЛ (HLA- специфичности Cvv*05 и С*07).

Выявлены маркеры с сильной ассоциацией и высоким риском развития заболевания на популяционном уровне для вариантов ОМЛ М2 и М7 (HLA-Cw*07) и варианта ОМЛ М5 (HLA-DQB 1*06).

Показаны характерные маркеры предрасположенности в зависимости от пола к развитию В-ОЛЛ: у мальчиков (HLA-специфичности В*50, Cw*16 и DRB1*14), у девочек (HLA-специфичности А*32, В* 15, -В*47 и DRB1*03); а также к развитию Т-ОЛЛ у мальчиков (HLA-специфичности А*26 и DRB1*13).

Выявлены характерные маркеры предрасположенности к развитию ОМЛ М2 (HLA-специфичности А*24, Cw*07 и В*51), ОМЛ М4 ( HLA-специфичности А*25, В*07, DRB 1*12, Cvv*05 и DQB1*06), ОМЛ М5 (HLA-специфичности А*68, DRB1*07 и DQB1*06) и ОМЛ М7 (HLA-специфичности В*39, В*49, Cw*07 и DRB1 * 11).

Показаны общий маркер устойчивости к заболеванию ОМЛ у детей (HLA-специфичность DRB1*07) и характерный маркер устойчивости к развитию В-ОЛЛ у мальчиков (HLA-специфичность DRB1*03), к развитию варианта ОМЛ М4 (HLA-DQB1*02).

Научно-практическая значимость

Научное значение имеет объективная оценка характера распределения специфических групп аллелей генов HLA-системы у здорового детского населения московской популяции с помощью молекулярно-генетического метода исследования. В результате выполненной работы предложен эффективный метод HLA-типирования большого количества образцов пуповинной крови (с применением технологий SSO и SSP), который может быть использован в медицинских учреждениях аналогичного профиля в России. Применение этого метода позволяет изучить особенности распределения генов гистосовместимости у детей больных острым лейкозом, обнаружить HLA-маркеры, определяющие риск или устойчивость к возникновению данного заболевания. Практическое значение работы вытекает из того, что установлены характерные специфические маркеры системы HLA в семьях, имеющих больного лейкозом ребенка, которые обуславливают максимальный риск к развитию заболевания. Впервые представлен в работе охарактеризованный профиль распределения генов главного комплекса гистосовместимости у здорового детского населения московского региона, который может быть использован в качестве контрольной группы в области изучения «HLA и болезни» и в популяционных исследованиях. Впервые создана база данных образцов ДНК больных детей с ОЛЛ и ОМЛ, которая может быть использована для дальнейших исследований.

Положения, выносимые на защиту

1. Типирование образцов пуповинной крови по локусам HLA-системы с применением современных технологий молекулярной биологии является необходимым чувствительным методом, требующим для исследования минимального количества исследуемого материала.

2. Предложенный метод типирования образцов пуповинной крови, представленный двумя технологиями ДНК типирования, такими как SSO и SSP, позволяет провести быструю обработку большого количества биоматериала и получать достоверные и однозначные результаты.

3. Исследование полиморфизма генов МНС позволяет изучить характер распределения аллельных специфичностей HLA-системы среди детского здорового населения московской популяции.

4. Изучение иммуногенетических особенностей при острых лейкозах у детей позволяет обнаружить маркеры, определяющие риск или устойчивость к возникновению заболевания.

Внедрение результатов в практику

Результаты исследования внедрены в практику работы Государственного учреждения здравоохранения «Банк стволовых клеток Департамента здравоохранения города Москвы», ФГУ «Федеральный научно-клинический центр детской гематологии, онкологии и иммунологии» Росздрава.

По материалам диссертации опубликовано 20 печатных работ в России и за рубежом.

Материалы диссертации доложены на: XIV конгрессе педиатров России с международным участием «Актуальные проблемы педиатрии» (Москва, 2010), 5-ой иммуногенетической международной конференции «East-West Immimogenetics Conference» (Пилсен, 2010), 36-ом Международном симпозиуме Европейской

группы ЕВМТ (Вена, 2010г.), HI научно-практической конференции «Современные технологии и методы диагностики различных групп заболеваний, лабораторный анализ» (Москва, 2010), 24-ой Европейской конференции по иммуногенетике и гистосовместимости (European Immunogenetics and Histocompatibility Conference, EF1 and 17-th the Italian Society for Immunogenetics and Transplantation, AIBT) (Флоренция, 2010).

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, описание материалов и методов исследования, главы собственных исследований, заключение, выводы и практические рекомендации, список литературы. Работа изложена на 138 страницах машинописного текста. Диссертация иллюстрирована 17 таблицами, 16 рисунками. Библиографический указатель содержит 35 источников отечественной и 174 источника иностранной литературы.

Апробация диссертации

Апробация диссертации проведена 21 июня 2010 г. на совместной научной конференции сотрудников отделов молекулярной гематологии, клинической гематологии, клинической иммунологии, химиотерапии ФГУ «Федеральный научно-клинический центр детской гематологии, онкологии и иммунологии» Росздрава, Государственного учреждения здравоохранения «Банк стволовых клеток Департамента здравоохранения города Москвы» и отделений трансплантации костного мозга, общей гематологии и онкогематологии Российской детской клинической больницы (РДКБ).

Работа выполнена на базе Государственного учреждения здравоохранения «Банк стволовых клеток Департамента здравоохранения города Москвы», (директор - к.м.н. М.В.Яковлева), на базе ФГУ «Федеральный научно-клинический центр детской гематологии, онкологии и иммунологии» Росздрава (директор -член-корр. РАМН, д.м.н., профессор А.Г.Румянцев), на базах отделения общей гематологии (заведующая отделением - к.м.н. З.М.Дышлевая), отделения трансплантации костного мозга (заведующая отделением - д.м.н. Е.В.Скоробогатова), на базе детской городской клинической больницы №9 им. Г.Н.Сперанского (главный врач - П.П.Продеус), гематологического отделения Морозовской детской городской клинической больницы ДЗМ (главный врач -В.Л.Фомина, заведующий отделением - к.м.н. К.Л.Кондратчик), г.Москва.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Характеристика материала и методов исследования

В исследование было включено:

• 2650 образцов пуповинной крови новорожденных условно здоровых детей (контрольная группа), родившихся на 37-41 неделе гестации, прошедших тестирование на вирусную и микробную контаминацию и внесенных в реестр неродственных доноров в г. Москве за период с 2004 по 2009 год;

• образцы периферической крови 187 детей с диагнозом OJIJI (112 мальчиков и 75 девочек, в возрасте от 6 мес. до 17 лет, средний возраст составил 8,3 лет ± 4,6);

• образцы периферической крови 146 детей, больных ОМЛ (88 мальчиков и 58 девочек, в возрасте от 6 мес. до 17 лет, средний возраст составил 8,9 лет ± 5,2).

Все пациенты находились на лечении в Российской детской клинической больницы, ФГУ ФНКЦ ДГОИ, Детской городской клинической больнице №9 им. Г.Н.Сперанского и Морозовской детской городской клинической больнице ДЗМ (г. Москва) за период с 2003 по 2009 год, имели неблагоприятный прогноз и нуждались в дальнейшей трансплантации гемопоэтических стволовых клеток.

В зависимости от иммунологического варианта дети, больные ОЛЛ, были разделены на три группы: 1 группа В-ОЛЛ (98 пациентов); 2 группа Т-ОЛЛ (37 пациентов); 3-ю группу составляли дети, с не установленным иммунологическим вариантом (52 пациента).

Дети, больные ОМЛ, были разделены в зависимости от цитоморфологической характеристики заболевания в соответствии с РАВ классификацией на группы: М2 - 28 больных, М4 - 26 больных, М5 - 28 больных и М7 - 18 больных. Группы больных вариантами ОМЛ МО (5 детей), ОМЛ М1 (5 детей) и Мб (4 ребенка), были малочисленными и потому не были включены в исследование. Помимо этого, была выделена группа с не установленным морфологическим вариантом (32 ребенка).

Методы исследовании

Выделение ДНК из биоматериала.

Геномную ДНК выделяли из свежих или замороженных образцов крови методом сепарации на магнитных частицах. Метод основан на способности магнитных частиц адсорбировать на своей поверхности высвобожденную из клеток ДНК с помощью специфических лиганд и состоит из двух этапов. На первом подготовительном этапе в пробирку вносили протеазу и лизировали клетки буфером при температуре 75°С, добавляли изопропанол для осаждения ДНК. На втором этапе образовавшийся лизат переносили в специальные стриповаиные пробирки, в которые были заранее внесены промывочные буферы и элюирующий раствор. Пробирки вставляли на платформу-держатель, загружали в прибор и запускали программу.

Измерения показателей ДНК на спектрофотометре.

Характеристики выделенной ДНК, её концентрацию и степень чистоты измеряли с помощью спектрофотометра. Концентрацию ДНК измеряли против чистого элюирующего раствора по оптической плотности ОГ^бо- Чистоту ДНК определяли соотношением показателей 00260/00280. Образцы для исследования соответствовали предъявляемым требованиям: концентрация ДНК была < 50 нг/мкл, и А260/280 составляло 1,7 - 1,9.

Молекулярные методы титрования. Генотипирование методом гибридизации с помощью олигонуклеотидных зондов.

Процедура анализа выполняли по методике, предложенной производителем «1пуН«^еп», которая состояла из 4-х стадий: 1. Амплификация исследуемого фрагмента ДНК. 2. Гибридизация с нанесенными на стрипы олигонуклеотидами. 3. Отмывание не связавшихся продуктов. 4. Детекция. На первом этапе приготавливали рабочую ПЦР смесь для амплификации

определенного локуса HLA (А, В, С, DRB или DQB1). Пробирки с исследуемыми и контрольными образцами закладывали в термоциклер и запускали программу. Весь процесс прохождения программы составлял 1,6 часа. По окончании процесса проводили денатурацию ампликонов щелочью для формирования одноцепочной ДНК. На следующем этапе проводили гибридизацию на стрипах. Вся последующая процедура гибридизации, отмывки и детекции проводилась в автоматическом режиме в течение 2,5 часов. Считывание и интерпретацию результатов проводили с помощью сканирующего устройства и компьютерной программы РМР. Образцы, у которых были получены двойные интерпретации результатов, дополнительно типировались методом ПЦР с помощью аллель-специфических праймеров.

Генотипирование методом ПЦР с помощью аллель-специфических праймеров.

Постановку реакции осуществляли с праймерами фирмы «Invitrogen» и выполняли по методике, предложенной производителем. Метод включал 3 этапа: 1. Амплификация. 2. Электрофорез в агарозном геле. 3. Интерпретация результатов. На первом этапе в пробирку, содержащую Mastermix, добавляли ДНК (концентрация 50 нг/мкл) и термостабильную ДНК-полимеразу. Полученную смесь затем закладывали в термоциклер и запускали программу. Весь процесс прохождения программы составлял 1,9 часа. На следующем этапе проводили детекцию продуктов гепамплификации с помощью электрофореза в 2% агарозном геле. Регистрацию сигналов полученной электрофореграммы, фотографирование изображения и документирование их в электронном виде осуществляли с помощью гельдокументирующей системы «ДиДжиДок» (США) и с использованием компьютерной программы DOC-It®LS. Интерпретацию результатов проводили с помощью таблиц.

Всего было проведено 19 472 лабораторных исследований.

Статистическая обработка результатов.

Для оценки полученных результатов и степени достоверности ассоциативных связей между генами системы HLA и изучаемыми заболеваниями в работе были использованы показатели: частота встречаемости гена (f), критерий Z с поправкой Йейтса на непрерывность, точный двусторонний критерий Фишера, если один из параметров был меньше 5, уровень достоверности (р). В случае, когда пулевая гипотеза отвергалась с вероятностью ошибки меньше, чем 5%, рассчитывался относительный риск RR и отношение шансов OR с доверительными интервалами 95% CI, если один из показателей был равен 0, относительный риск вычислялся по модифицированной формуле Haldane для малых чисел. В случаях, когда RR>2 (OR>2), вычислялась этиологическая/превентивная фракция. Статистический анализ исследования ассоциаций проводился с использованием двупольной таблицы при помощи программы «Open Epi» (Open Source Epidemiologic Statistics for Public Health), версия 2.3 (2009/20/05).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Исследование генетического полиморфизма системы HLA московской популяции.

Типипирование пуповинной крови по HLA-системе имеет свои специфические особенности: быстрота обработки большого количества

биоматериала при ограниченном количестве крови каждого образца и невозможности его повторного сбора. Поэтому использование чувствительных методов HLA-типирования, требующих для исследования минимального количества ДНК, является критическим фактором.

Проведение HLA-типирования с использованием двух методов молекулярной биологии.

В ГУЗ «БСК ДЗМ» впервые в России была апробирована и успешно внедрена технология обратной дот-блот гибридизации с олигонуклеотидными зондами (SSO) в автоматическом режиме на процессоре Dynal autoRELI™ 48 mk, позволяющая проводить скрининговое HLA-типирование большого количества образцов. Одним из несомненных достоинств этой технологии является ее большая пропускная способность и возможность использования минимального количества исследуемого материала - около 40 мкл ДНК (концентрация 13-15 пг/мкл). Весь рабочий процесс осуществляется за 2,5 часа. Однако, недостатком данного метода является возникновение двойных интерпретаций результатов типирования. Особенно это касается локусов HLA-B и HLA-DRB (около 13% случаев по каждому из них). По локусу HLA-A было получено около 6% случаев с неоднозначной интерпретацией результатов, по локусу HLA-C - 8,5% случаев, по HLA-DQB1- 1,5%. Для разрешения неоднозначной интерпретации результатов типирования этих образцов проводилось повторное типирование с применением метода ПЦР с аллель-специфическими праймерами (SSP), что позволило достичь 100% однозначности результатов.

На рис. 1 представлен результат генотипирования локуса HLA-B, полученный методом SSO и интерпретации с помощью программы REL1 SSO РМР. Как видно на рис. 1, на стрипе в определенной последовательности локализованы полоски, соответствующие продуктам гибридизации комплементарных участков ампликона с биотинилированными зондами. Однозначный результат типирования (В* 07; 08) обозначен цифрой 1. Ниже перечислены все возможные аллельные варианты соответствующих специфичностей, выявленных в исследуемом образце.

На рис. 2 представлены результаты неоднозначной интерпретации генотипирования локуса HLA-A данного образца, полученные методом SSO, обозначенные цифрой 1 (результат А* 03; 11) и цифрой 2 (результат А* 01; 11). Для разрешения двойной интерпретации был использован метод типирования с помощью аллель-специфических праймеров (SSP).

На рис.3 представлена электрофореграмма результатов амплификации исследуемого участка ДНК, где верхний ряд сигналов соответствует внутреннему контролю, а сигналы, относящиеся к HLA-ампликонам располагаются в нижних рядах в зависимости от их длины. Самый нижний ряд слабо светящихся полос -остатки праймеров.

Интерпретация полученных данных осуществлялась с помощью таблиц (рис. 4), где определенная комбинация сигнальных полосок соответствует определенной группе аллелей гена.

Dynai Pattern Matching Program Kef>,>r1 (колли?

Sample ID:

I h/amo Batch Numte« Expity OâM» »»'«Xïiifct NumtMr Ai:<artm»«<t Dal« Dynsl Kit YaBä«

ÜÜft6 __«y ¿01S «¿0 -XA 5 $ 0 î 20ÖS ¡Z Z4 2Ö0S.01 U-jOO

Sample Information

Created; 9-y ADMiNiSTRATOP

AiHhoiizocf: Input Type: Swâiintir

Pattern: î000101ÙÛOÙ010110005QQOOOG00010300001 3OOOOÛGCO11010101031111 p0* g- r&.t9 £4,28.2* î2:2i.JC.4S &0.«?,««.«ft&

Comment: 1? Exact ma-c^es fourni m Partial matches found Summary: B'O?^ 08 ? N -MOP Cotki: B*07XX & Ù8XX

B*07$ 08

B'CtfiS A Ô&3-.GS$3>

Tf 3 & oec< oi s&3 tes о&з res нем »4 а^-з-1 $4 osa ю&о&овм.о« IS« .&&< se* i ew

G -C7.ÎÂ & 002-4

Ä wrï

»4»7«d & овко* дмиздмтдео^мммлмпжд^^

B*C?85&? & ОЙС?

ôxvoeci .afcso.ovos. « ceo? «•его*«?» s. йбсё.овго

i) '.4VC-6" 0/*e 0Г50 i>76s .075? 0?S?«,0?ea в. 0833 Q&34

£070281 07Ca02.0?02CJ <!?4Й #>M V*7 G74<W S"*'.-

o?i«.ow.e*#.ora*.3?«ï о?вао«57.ч.»?вв « оетов»

8'0'0201 0?23 Î"y>.073S.a7S9-.074j С7Л5 $74? 0'J^K-i

S6.07 - • « • ' -, -, ','Ы X ..........

0ÜC «{И .OèO >«*.08ÔÎÔS.Ô80*M ,0901 fl&.eas Н*шшм.мтм»< 1 1 СвГЯг

Рисунок 1. Отчет с однозначными результатами типирования локуса HLA-B (методом SSO) образца XXX

Sample ID: «»

I Kit Batch Ntwnl»*r Expiry Dale Product K«mb«f Alignment Oat» Oynait Kit Tabi»

1 KLA-A RfrMHSG itySOlO d3KJ>** {2.23.G* A-OOCfiAli)

Sample Information

Croat«*»: By ADMimSTRA TOR

Authorized: By

Input Typ«: Scanner

Pattom: 001100100000110110001001000110000010010001110011 {»OS. Pict>*» SS 3.«, tt 1%M.M.t?.2i.S**.2»,W.a9,WI<.42,-tO,4*.4?.4tt Comment: 11 Exact matches found. 62 ¡Partial matches fenmd Probe*») 4 manyaSly assigned Summary' A*03 & 11|A*01 & 11 NMOP Code. A'XXXX & 11XX. Strip: |

¡лш ««t г«* sso strip mwj

2. A*03 S 11

А'&Ив & 1"H t

1. A*01 S 11

A*051S<N& 11J»

a*o 1 tsN ■& 1 то» ?o.noe.m ! tax A*£mSN Ä 1 1С! 106.1107 A'011514 «

t »tot iott»».i «<жц.*1а«о&1 тою?,* ««Ш.1 to»,i w».tt<»,t*i2.i*a«.mw..i s»

A'OTta & 1 !Э7

А "О»;« I Ol 0110101 erî-N OîOî0S„Oi<?î»3'.O5OlÔr5;OiÔ4«.ô10ô Ot1lN.OlieN,enÂN.Ol22N.ÔÏ.23,Oî»4.01Z5.0126.0lîr?« &

1 501 ID. 1 JÖA. $ J VS. 11 11S j

IfM.ft116N ,Ö12©X>I26..Ô127RQ129.0130 S

f 50106, П07

i «atoi.» 1 te*e® .i *o»««.i «we.ww.i 1010». » i« itom; i t42ei..'t vbq&». i w,i w. им. 1112.! m,i i?î«,i 122 tt2».msM*3

Рисунок 2. Отчет с неоднозначными результатами типирования (методом

SSO)

<Ь ¡ПУЛгодеп

л-1 & 4 ® | | а * § а ж и ■л а | - я „ л

~ ™ « - ~ — — ~ — _

ТШ° «г .. А А § Щ 4 1 - «

щ ~ гк а ~ „ „ „ а

Рисунок 3. Электрофореграмма образца XXX

«I» ¡т/игодеп

"Сой в»*» М1_А -А «.оси» У^ОККБНЕЕТ Соив г»е».: ИЗЮО

Щ—

Я п И" ! |! и н Я и П И

щшш

Рисунок 4. Таблица интерпретации результатов

Генетический полиморфизм НЬА-системы в московской популяции здоровых

детей.

В настоящее время в ГУЗ «БСК ДЗМ» храниться около 2650 образцов пуповиной крови, типированные по пяти локусам системы НЬА-А, -В, -С, -1ЖВ, -0(}В1. Были выявлены 17 специфических групп аллелей локуса НЬА-А, 32 специфичности локуса НЬА-В, 14 специфичностей локуса НЬА-С, 14 специфичностей гена НЬА-011В1 и 5 специфичностей гена 0(2В1.

Частота тех или иных генов гистосовместимости среди доноров стволовых клеток во многом зависит от этнических признаков входящих в неё лиц.Анализ распределения НЬА-специфичностей (специфических групп аллельных вариантов) у детей московской популяции определил, что наиболее часто встречаемыми по локусам класса I являются (в долях): НЬА-А*02 (0,288), А*03 (0,134), А*01 (0,114), А*24 (0,096); НЬА-В - В*07 (0,120), В*35 (0,0793), В*44 (0,101), В*18 (0,084), В*08 (0,067), В*13 (0,066); Сте*07 (0,257), Cw*12 (0,134), См""06 (0,130), С™*04 (0,0128). По классу II с наибольшей частотой встречаются следующие группы аллелей гена ОЯВ1 - *07 (0,143), *13 (0,139), *15 (0,133), *11 (0,130), *01 (0,110), *04 (0,110) и группы аллелей гена БС)В1 - *03 (0,330), *06 (0,222). Наиболее редко встречающимися группами аллелей были выявлены следующие: А* 69 (0,0033), А*34 (0,00035), А*80 (0,00035), В*47 (0,0036), В* 45 (0,002), В*46 (0,002), В*53 (0,0017), В* 73 (0,0015), В*54 (0,0003) и В*78 (0,0003).

Проведенные исследования и анализ литературных данных (Хамоганова Е.Г 2002.; Зарецкая Ю.М., 2008) свидетельствуют, что характер распределения генных частот НЬА класса I и II в популяции московского региона в целом соответствуют таковому для европеоидов.

Таким образом, применение для НЬА-типировании образцов пуповинной крови двух методов - ЭЗО и ББР- позволяет получать достоверные и однозначные результаты. Проведенных исследования выявили характерный профиль распределения специфических аллелей системы НЬА у детского населения московского региона. Полученные данные могут быть использованы при изучении различных заболеваний, ассоциированных с НЬА-генами, и в популяционных исследованиях.

Характер распределения частоты встречаемости генов НЬА-системы у детей с ОЛЛ

Были обследованы 187 детей с ОЛЛ различных регионов России, по этническим признакам относящиеся к популяции европеоидов. Для изучения характера распределения генов НЬА-системы пациенты, больные ОЛЛ, были разделены в зависимости от их иммунологического варианта на 2 группы: на В-ОЛЛ и Т-ОЛЛ.

Особенности распределения частоты встречаемости НЬА-генов у детей больных В-ОЛЛ.

Была исследована группа 98 детей с В-ОЛЛ (57 мальчиков и 41 девочка), в возрасте от 6 мес. до 17 лет (средний возраст составил 8,2 лет ± 4,8). Особенности характера распределения генов гистосовместимости в этой группе больных по сравнению с контрольной группой здоровых детей представлены на рис. 5 и в таблице 1. Частота встречаемости генов НЬА-системы была высокой в группе

больных В-ОЛЛ по сравнению со здоровыми детьми по локусу НЬА-А - А*32; по локусу НЬА-В - В* 15, В*50; В*47 по локусу НЬА-С - Cw*04; Cw*16 по локусу НЬА-ОЯВ - ОЯВ1 *09 и ОЯВ1 * 14.

Для изучения факторов риска развития заболевания использовали метод случай-контроль. Если этот показатель превышал СЖ > 2, то он считался значимым относительный риск развития (Зарецкая Ю.М., 1983).

Таблица 1.

Иммуногенетические факторы предрасположенности и устойчивости к

IILA- специи-фичности Дети (мальчики и девочки), п=98 Мальчики n=57 Девочки n=41

P OR CI EF/ PF,% P OR CI EF/ PF,% P OR CI EF/ PF,%

А*32 0,04 2,1 1,19 4,71 5,7 - - - - 0,03 2,9 1,21 7,03 10,2

В* 15 0,002 2,3 1,38 3,78 11,80 - - - - 0,02 2,6 1,20 5,05 13,8

В*50 0,03 2,6 1,16 6,02 4,3 0,03 3,3 1,26 8,66 6,2 - - - -

В*47 - - - - - - - - 0,009 10,9 2,96 40,37 6,8

C\v*04 0,007 1,9 1,21 3.05 17,4 0,05 1,95 1,06 3,58 18,3 0,02 2,56 1,18 5,51 27,1

Cvv*16 - - - - 0,016 3,7 1.40 9,65 8.1 - - - -

D К В 1*03 - - - - 0,037 0,3 ln:3,4 0,10 0,97 11,0 0,04 2,2 1,11 4,30 15,5

DRB1*09 0,0011 3,5 1,68 7,54 6,3 0,001 3.3 1,27 8,74 6,4 0.05 4,0 I.35 II,65 7,5

DRB1*14 0,002 3,1 1,54 6,33 6,6 0,0015 5,1 2,35 10,73 13,0 - - - -

n - количество больных детей; р - уровень достоверности; OR (odds ratio) - отношение шансов; In - инвертированный показатель (1/OR), CI (confidence interval) -доверительный интервал; EF/PF - этиологическая /превентивная фракция

0,2 0,18 0,16 0,14 0,12 доли 0,1 0,08 о,ое

0,04 0,02 о

р<0,05

0.0536 . В-47

0,03

жй

0,0.4?

о.оиЯЯ

Шконтр ОЛЛ-В

0,08, # 0,069

0,049

0,0.13'

Cw'16 DRB1-09 DRB1-03 DRB1*14

Рисунок 5. Частота встречаемости HLA-специфичностеи у детей, больных В-ОЛЛ

Так, при наличии у индивида специфичности А* 32 риск заболевания увеличивался в 2 раза. У представителей, имеющих специфичности НЬА-В*15 и В*50, он увеличивается до 2,3 и 2,6 раз соответственно. Наличие группы аллелей ОЯВ 1*14 у ребенка говорит о высоком риске заболевания В-ОЛЛ более, чем в 3 раза и в 3,5 раза при наличии группы аллелей ОКВ1*09. Силу ассоциации НЬА-маркера с заболеванием оценивали с помощью показателя этиологической/превентивной фракции (ЕР ЛТ).

Таким образом, наиболее высокий риск развития В-ОЛЛ был выявлен у детей носителей ОЕ1В1*09 и ОЯВ1*14 (ОЯ = 3,1 и 3,5 соответственно), но наиболее высокие показатели ЕР ассоциировались со специфичностью С\у*04 (013=1,9). Следовательно, при наличии аллельных специфичностей ОЯВ1*09, 0ЯВ1*14 у индивида риск развития В-ОЛЛ возникал с большей вероятностью, чем со специфичностью НЬА-Су^СН, однако, на популяционном уровне заболевание ассоциировалось в большей степени с НЬА-С\у*04 (17,4 % детского населения рискует заболеть В-ОЛЛ) и со специфичностью НЬА-В*15 (ЕР составляет около 12%), чем с 013В1*09 и БаВ1*14 (ЕР=6,3 % и 6,6 % соответственно).

Следует также отметить, что, несмотря на обнаруженный высокий показатель риска развития В-ОЛЛ у детей, несущих в своем НЬА-генотипе В*50 (013=2,6), процент больных, у которых развитие заболевания связано с этой группой аллелей составляет всего лишь 4,3%, т. е, ассоциации с ним на популяционном уровне (ЕР) слабая.

При разделении пациентов по полу были выявлены особенности распределения в частоте встречаемости НЬА-специфичностей с этим заболеванием (рис. 6). В контрольной группе различий по полу выявлено не было.

А*32 В*15 В*60 В*47 Cw*04 Cw*16 DRB1-09 DRB1*03 DRB1*14

Рнсунок 6. Частота встречаемости HLA-спецнфичностей у мальчиков и девочек В-ОЛЛ

У мальчиков, больных В-ОЛЛ наблюдалось накопление HLA-B*50 с увеличением показателя 0R до 3,3, у девочек, больных В-ОЛЛ, эта тенденция была в отношении группы аллелей В* 15 с увеличением показателя 0R до 2,6. Показатели, характеризующие риск развития и ассоциацию с заболеванием на популяционном уровне (EF), у мальчиков, больных В-ОЛЛ, значительно выросли с аллельными вариантами DRB1*14 (почти 13 %), у девочек с этими вариантами гена DRB1 такой

взаимосвязи не было выявлено. При этом, у девочек, имеющих в своем генотипе ОГШ1*09, выросли показатели риска развития у них В-ОЛЛ (СЖ=4,0) и этиологической фракции (ЕР=7,5%), в то время как у мальчиков эти значения практически не изменились и оставались низким для этиологической фракции (ЕР=6,4 %). Из чего можно заключить, что, несмотря на высокий риск развития В-ОЛЛ, как для мальчиков, так и для девочек, сила ассоциации этого заболевания со специфичностью ОГШ1*09 невысока. Повышение частоты встречаемости специфичности А*32 (ОЯ = 2,9) и В1Ш1*03 (ХЖ = 2,2) выявлено у девочек. В этой же группе больных девочек с высокой достоверностью было обнаружено увеличение частоты встречаемости специфичности В*47, увеличивающей риск развития заболевания почти в 11 раз, но ассоциация с В*47 на популяционном уровне оказалась невысокой (ЕР=6,8%).

В группе мальчиков, больных В-ОЛЛ, найдено достоверное увеличение частоты встречаемости специфичности Cw*16 по сравнению с контрольной группой. Хотя риск развития заболевания у его носителей увеличивался по показателю ОЯ в 3,7, на популяционном уровне ассоциация с В-ОЛЛ не была значительной (8,1%).

Достоверное отклонение от нормального распределения в сторону увеличения было выявлено для специфичности С\у*04, как в группе мальчиков, больных В-ОЛЛ, так и в группе девочек, при этом, показатели ОЯ и ЕР у девочек оказались значительно выше (2,56 и 27,1%).

В отношении специфичности ОГ1В1*03 были выявлены противоположные тенденции в частоте ее встречаемости среди мальчиков и девочек, больных В-ОЛЛ. В группе девочек наблюдалось достоверное накопление 011В1*03 с риском развития заболевания 011=2,2, в группе мальчиков - достоверное снижение в 3,4 раза. Показатель Фактора риска ОЯ для ОКБ 1*03 составлял лишь 0,3, а показатель превентивной пракции достигает 11%, что дает основание предполагать о превентивных свойствах : той группы аллелей гена ОЯВ1 для данного заболевания у мальчиков.

Особенности распределения частоты встречаемости НЬА-генов у детей, больных Т-МЛ.

Были исследованы 37 детей больных Т-ОЛЛ (25 мальчиков и 12 девочек) в озрасте от 1 года до 17 лет (средний возраст составил 10,1 лет ± 4,9). Отличительные :собенности характера распределения НЕА-генов в этой группе по сравнению со доровыми детьми представлены на рис.7 и табл. 2.

И контроль р<0,05

0,5 0,45 0,4 0,35 0,3

ДОЛИ 0,25 0,2 0,15 0,1 0,06 О

все дето мальчики

0,09«? 0,04ЭЙ<

!Р!

?5а

0,027 <

0,2,-Ы

0,1391

ЙЁ 1

0,456,

о,з()Й

11| 1II

ООВТОб

Рисунок 7.Частота встречаемости специфичностсй НЬА у детей больных Т-ОЛЛ

Было выявлено достоверное увеличение частоты встречаемости спвцифичностей НЬА-В*14, БКВ1*01, БКВ1*13 и БрВ1*05 у больных детей с Т-ОЛЛ по сравнению со здоровыми. При этом относительные показатели, характеризующие риск развития острого лейкоза Т-ОЛЛ у детей, имеющих эти группы аллелей, составляли от 011=2,2 для НЬА-1ЖВ1*13 до ОИ=3,0 для НЬА-В*14. Показатель же этиологической фракции, указывающей на силу ассоциации маркера с заболеванием, оказался невысоким (ЕР=9,5%) для НЬА-В*14. Для специфических аллельных вариантов 1ЖВ1 *01, 0ЯВ1*13 и ООВI *05 показатели этиологической фракции имели среднюю величину силы их ассоциации с данным заболеванием (ЕР=19,8%, ЕР=25,5% и ЕР=34,4% соответственно), и с высоким уровнем достоверности различия между контрольной группой и группой больных с Т-ОЛЛ детей (р=0,0035, р=0,002 и р=0,002 соответственно).

Таблица 2.

Иммуногенетнческие факторы предрасположенности к развитию Т-ОЛЛ у

детей

HLA-спецнфичн ости Дети (мальчики и девочки), п=37 Мальчики, n=25

Р OR CI EF,% Р OR CI EF, %

А*26 - - - - 0,006 3,7 1,53 9,04 20,0

В*14 0,05 3,0 1,15 7,92 9,5 - - - -

DRB1*01 0,0035 2,2 1,10 4,22 19,8 - - - -

DRB1*13 0,002 2,35 1,21 4,51 25,5 0,03 2,55 1,14 5,54 29,0

DQB1*05 0,002 2,45 1,19 5,04 34,5 - - - -

р - уровень достоверности; OR (odds ratio) - отношение шансов, CI (confidence interval) -доверительный интервал, EF- этиологическая фракция

Следовательно, их можно рассматривать маркерами развития Т-ОЛЛ у детей. Кроме того, при разделении пациентов по полу были выявлены достоверно высокие показатели OR (3,7) и EF (20,5 %) у мальчиков для группы аллелей HLA-гена А*26, которая для них тоже может рассматриваться, как фактор риска развития данного заболевания. В отношении группы девочек, больных Т-ОЛЛ, не представлялось возможным делать какие-либо выводы ввиду ее малочисленности.

Общая группа (все ОЛЛ) была представлена 187 детьми (112 мальчиков и 75 девочек) в возрасте от 6 месяцев до 17 лет (средний возраст составляла 8,0 лет ±). При анализе полученных данных были выявлены отклонения в распределении частоты встречаемости HLA-специфичностей В*50, Cw*04, DRBI*09, DRBI*14 по сравнению с контрольной группой здоровых детей (табл. 3).

Достоверное увеличение частоты встречаемости указанных HLA-специфичностей соответствовало профилю их распределения у детей с В-ОЛЛ. Были также выявлены специфичности HLA-B*37 и В*58 с достоверно повышенной частотой их встречаемости по сравнению с контрольной группой, но имеющие слабовыраженную ассоциацию с ОЛЛ на популяционном уровне (EF=2,7% и EF=2,6%). Кроме того, были обнаружены

специфичности В* 13 и 0<ЗВ1*02 с пониженной частотой встречаемости у больных детей в общей группе с ОЛЛ. Однако, их показатели, характеризующие превентивные свойства (1п=1,89 и 1п=1,6 соответственно; ЕР=5,6% и ЕР=13,8% соответственно) не имели большой значимости (1п<2).

Таблица 3.

Иммуиогеиетнческие факторы предрасположенности и устойчивости к _^_развитию ОЛЛ у детей, (общая группа, п=187)_

НЬА-спецн-фнчности Маркеры предрасположенности Маркеры устойчивости

Р С1 01* С1 ЕР, % Р С1 01* С1 РР, %

В*37 0,017 1,27 4,15 2,7 1,26 5,77 2,7 - - - - -

В*50 0,012 1,26 3,57 2,4 1,25 4,65 3,4 - - - - -

В*58 0,003 1,17 3,86 2,4 1,15 5,18 2,6 - - - - -

С\у*04 0,05 1,05 1,97 1,5 1,05 2,13 - - - - - -

01Ш*09 0,01 1,25 3,37 2,4 1,25 4,45 3,3 - - - - -

ШШ*14 0,002 1,39 3,35 2,5 1,42 4,41 4,5 - - - - -

В*13 - - - - - 0,03 0,31 0,93 0,50 1:2,0 0,29 0,91 5,6

ООВ1*02 - - - - - 0,007 0,47 0,88 0,6 I п: 1,6 0,44 0,87 13,8

р - уровень достоверности; СЖ- отношение шансов, С1- доверительный интервал; ЕР/РР - этиологическая /превентивная фракция

Таким образом, можно заключить, что иммунные варианты В-ОЛЛ и Т-ОЛЛ имеют азные иммуногенетические маркеры предрасположенности и устойчивости к данным 1болеваниям. Более того, выявленные маркеры имеют разную силу ассоциации с 1болеванием в зависимости от пола ребенка. Обнаружено, что у мальчиков и у девочек меются свои специфические маркеры к разным иммунофенотипическим вариантам >ЛЛ.

Характер распределения частот встречаемости генов НЬА- системы у детей с

омл.

Были исследованы 146 детей, больных ОМЛ, в возрасте от 6 мес. до 17 лет :редний возраст составил 8,9 лет ± 5,2), по этническим признакам относящиеся к опуляции европеоидов и разделенные на группы: ОМЛ М2 (28 детей), ОМЛ М4 (26 ;тей), ОМЛ М5 (28 детей) и ОМЛ М7 (18 детей). Дети с МО, М1и Мб вариантами в сследование не были включены из-за их малочисленности (всего 14 детей), сследования по выявлению НЬА-ассоциированных генов с вариантом ромиелоцитарного лейкоза (МЗ) не проводились, так как типирование антигенов ютосовместимости у них не осуществлялось. У 32 детей больных ОМЛ орфологические варианты не были выявлены. Из-за малочисленности группы больных МЛ статистическая обработка результатов НЬА-типирования в зависимости от пола г проводилась.

В результате проведенных исследований (рис. 8-11) у больных детей с ОМ Л были обнаружены достоверные отклонения от нормального распределения НЬА-генов.

о,;

0,4 0,3

доли 0,2

0,1 О

контроль V ОМЛМ-2

р<0,05

0,25-1:

0,1«

0.09

А*24

В*51

о <!?

Cw*06

0,143 :0»0

Сш*07

ОРШ1*07

Рисунок 8 Частота встречаемости НЬА-спецнфичностсй у детей, больных ОМЛ М2

р<0,05

: контроль а ОМЛ М-4

0,211

0,2223

0,116 0,11

0,134

0,023

"0,018 0,021

: \

0*05 0'12 ОНВ1*07 СКВГ12 [Х1ВГ02 ООВГОб

Рисунок 9. Частота встречаемости НЬА-специфичностей у детей, больных ОМЛ М4

0,4 0.3

р<0,05

контроль с ОМЛ М-5

Рисунок 10. Частота встречаемости НЬА-специфичностей у детей, больных ОМЛ М5

контроль ® ОМЛ М-7

В*39

р<0,05

0.01: В*49

"М

ОКВ1 "07 РКВ1*11 0(2В1*05

Рисунок 11. Частота встречаемости НЬА-специфичностей у детей, больных ОМЛ М7

В группе с вариантом ОМЛ М2 была выявлена статистически достоверная аномально высокая частота встречаемости групп аллелей Н1^А-А*24, В*51 и С\у*07. Риск развития ОМЛ М2 варианта у детей, имеющих указанные гены по отношению к

детям, не имеющих их в своем генотипе, возрастал в 2,8 раза (А*24), в 3,1 (В*51) и в 3,7 (С\у*07). Причем, достоверно высокая ассоциация заболевания вариантом ОМЛ М2 на популяционном уровне была обнаружена со специфичностью ПЬА-С\у*07 (ЕР=53,8 %). В группе больных детей вариантом ОМЛ М7 эти показатели для С\\!*07 были еще выше (ОК=4,2 и ЕР=60,2 %), что свидетельствует о высокой силе ассоциации С\у*07 с данным заболеванием. В подгруппах с вариантами ОМЛ М4 и ОМЛ М5 была выявлена высокая частота встречаемости 0<ЗВ1*06. По показателям 011 риск развития ОМЛ этих вариантов у детей носителей БС)В1*06 возрастает более чем в 2 раза (ОМЛ М4), и даже в 4 раза (ОМЛ М5). Также была установлена достоверно высокая ассоциация этих вариантов заболевания с группой аллелей гена Б(ЗВ1*06 и на популяционном уровне (ЕР=35,02% для ОМЛ М4 и ЕР=57,3% для ОМЛ М5). Кроме того, в группе детей с ОМЛ М4 было обнаружено достоверное повышение частоты встречаемости НЬА-специфичностей А*25, В*07, С\¥*05 и 1ЖВ1 * 12. Показатель соотношения шансов (011), характеризующий риск возникновения заболевания, для каждого из указанных генов имел достаточно высокое значение у детей больных этим вариантом лейкоза (011=2,8; 011=2,4; 011=3,97 и 011=4,26 соответственно), но сильной ассоциации на популяционном уровне не было выявлено (ЕР=14,7%, ЕР=22,2%, ЕР=17,6%, ЕР=14,0%).

В группе детей, больных ОМЛ М5, также статистически достоверно было становлено увеличение частоты встречаемости специфичности НЬА-С\у*05, оказатель риска развития заболевания с которой составлял 011 = 3,7, но и здесь не ыло выявлено сильной ассоциации на популяционном уровне (ЕР=16,5%). У детей той группы (ОМЛ М5) обнаружено и достоверное повышение частоты встречаемости пецифичности А*68 (011=3,08). Но показатель этиологической фракции (ЕР=12,3%) не ыл высоким, то есть ассоциация НЬА-А*68 с заболеванием на популяционном уровне е имела большой силы. Интересно, что в этой группе больных с ОМЛ М5 наблюдалось остоверное повышение частоты встречаемости О ГШ 1*07 (011=2,6), в то время, как во сех остальных группах с вариантами заболевания ОМЛ М2, ОМЛ М4, ОМЛ М7 аблюдалось снижение частоты этой группы аллелей гена 0ЯВ1 (в группе с ОМЛ М7 но не было достоверным). При этом, показатели риска развития заболевания с этими эуппами аллелей гена 0ЯВ1 имели очень низкое значение 011=0,18 (в группе с ОМЛ 12) и 011=0,097 (в группе с ОМЛ М4). Снижение частоты встречаемости БИВ 1*07 у ольных лиц указывает на протекторные свойства этой группы аллелей. Это значит, что детей риск заболеть вариантом ОМЛ М2 при наличии гена 011В 1*07 уменьшается в ,6 раз (1п=5,6) по сравнению с теми, кто не имеет её в своем генотипе, а риск заболеть ариантом ОМЛ М4 уменьшается у них даже в 10 раз (1п=10,1). Показатели ревентивной фракции достигали ЕР=22,3% и ЕР=25,14% соответственно.

В подгруппе детей с ОМЛ М2 обнаружено достоверное снижение частоты пречаемости НЬА-специфичности С\у*06, для которой был выявлен достаточно изкий показатель 011, составляющий 0,15 (1п=6,7). Но значения его доверительного нтервала включали 1, что указывает на недостоверность полученного результата (т.е. эбытие может произойти, а может и не произойти). Такие же данные получены и в гношении специфичности С\у*12. Частота встречаемости, которых в подгруппе детей, зльных ОМЛ М4 вариантом, была достоверно ниже по сравнению с контрольной >уппой, вычисленный показатель риска развития заболевания оказался низким Ж=0,15 и 1п=6,7), но доверительный интервал для него включал 1, что указывает на ¡достоверность полученных результатов. Кроме того, в этой же подгруппе (ОМЛ М4) >що выявлено статистически достоверное снижение частоты встречаемости

специфичности DQß 1 *02 и достоверное снижение риска заболевания в 2,9 раз (C)R=0,35). Показатель превентивной фракции достигал 25,7%.

У больных детей вариантом ОМЛ М7, помимо уже упомянутой выше специфичности HLA-Cw*07, были выявлены специфичности В*39, В*49 и DRB1*11 с высокой частотой встречаемости по сравнению со здоровой группой. Причем, если для специфичности DRB141 показатель риска развития заболевания был ниже (OR=3,9), чем для В*39 (OR=7,02) и В*49 (OR=8,4), то показатель этиологической фракции для DRB 1*11 был достаточно высоким (EF=42,6%).

Следует заметить, что выявленная в этой группе больных аномально высокая частота встречаемости HLA-специфичностей В*39 и В*49 (f=0,107 для каждого) у здорового детского населения, как было показано выше, является очень редкой (f=0,0193 и f=0,0166 соответственно). Вероятно, этим явлением объясняется, что на популяционном уровне сильной ассоциации их с вариантом OMJI М7 не было выявлено (EF=18,25% и EF=18,9% соответственно).

Таким образом, можно заключить, что различные морфологические варианты OMJ1, имеющие разнообразные хромосомные аномалии, в результате которых экслрессируются разнообразные опухолевые белки на лейкозных клетках (Флейшман Е.В., 2007), имеют и разнообразные иммуногенетические маркеры предрасположенности и устойчивости к этому заболеванию.

С целью выявления «общего маркера» для миелобаетного лейкоза была исследована общая группа всех больных детей (146 пациентов) с OMJI, независимо от варианта, а также пола и возраста ребенка. Из них было 88 мальчиков и 58 девочек. Данные статистического анализа проведенных исследований представлены в табл. 4.

Таблица 4.

Иммуногспетическне факторы предрасположенности и устойчивости к развитию OMJI у детей (п=146)

IILA-специ-фмчностп Маркеры риска Маркеры устойчивости

P OR CI EF,% P OR CI PF,%

А*24 0,02 1,82 0 1,08-2,41 - - - -

А*68 0,04 1,8 1,06-3,06 - - - - -

C\v*05 0,05 2,2 1,2574,089 7,8 - - - -

Cw*07 0,0001 2,1 1,45-3,22 35,5 - - - -

DRB1*11 0,05 1,5 1,02-2,08 - - - - -

DRB1*07 - - - - 0,001 0,6-In:l,7 0,360,88 11,0

DRQB1*02 - - - - 0,03 0,6 In: 1,7 0,410,93 15,0

р - уровень достоверности; OR (odds ratio) - отношение шансов; CI (confidence interval) -

доверительный интервал, ЕРЛТ - этиологическая /превентивная фракция

Как видно из таблицы, был обнаружен целый ряд аллелей НЬА-гснов с достоверно аномальным их распределением у детей, больных ОМЛ, по сравнению с контрольной группой у здоровых детей. Это специфичности относящиеся, как к классу I - А*24,

А*68, С*05, Cw*07, так и к классу II - DRB1*11, DRB1*07, DQB1*02. Однако только для группы аллелей HLA-генов Cw*05 и Cw*07 значения показателей риска развития заболевания превышали 2. Показатель этиологической фракции оказался достоверно высоким только для группы аллелей Cw*07 (EF=35,5%), что свидетельствует о её значительной силе ассоциации с этим заболеванием. Достоверное снижение стречаемости специфичности DRB1*07 при изучении частотного характера аспределении генов HLA-системы в общей группе ОМЛ характерно, как было ыявлено ранее, и для его отдельных вариантов: М2, М4 и М7 (для М7 не достоверно), меньшение же частоты встречаемости специфичности DQB1*02 среди больных детей, озможно, вызвано её неравновесным сцеплением с DRB1*07 и наследованием шлотипа HLA-DRB1 »07-DQB 1*02.

Следовательно, специфичности Cw*05 и HLA-Cw*07 являются маркерами риска азвития ОМЛ у детей, а HLA-DRB1*07 - маркером устойчивости к этому заболеванию детей. Причем специфичность Cw*07 имеет высокой силы ассоциацию и редрасположенность к заболеванию ОМЛ у детей.

Таким образом, в проведенном исследовании получены данные об ассоциации iLA-системы с ОЛЛ и ОМЛ у детей. Был изучен генетический полиморфизм главного эмплекса гистосовместимости здорового детского населения московского региона, характеризованы особенности распределения специфических генов HLA-системы пасса I и II у детей при различных вариантах ОЛЛ и ОМЛ и в зависимости от пола для ЛЛ, а также выявлены HLA-маркеры предрасположенности и устойчивости к этим 1болеваниям.

ВЫВОДЫ

HLA-генотипирование образцов пуповинной крови с использованием двух методов олекулярными биологии, таких как SSO и SSP, позволяет получать достоверные и позначные результаты.

Наиболее часто встречаемыми специфичностями по локусам HLA класса I у детского аселения московского региона являются (в долях): HLA-A*02 (0,288), А*03 (0,134), *01 (0,114), А*24 (0,096); В*07 (0,120), В*35 (0,0793), В*44 (0,101), В* 18 (0,084), В*08 1,067), В*13 (0,066); Cw*07 (0,257), Cw*12 (0,134), Cw*06 (0,130), Cw*04 (0,0128). По laccy II - специфичности HLA-DRB 1*07 (0,143), DRB1*13 (0,139), DRB1*15 (0,133), RB1*11 (0,130), DRB1*01 (0,110), DRB1*04 (0,110) и DQB1*03 (0,330), DQB1*06 i,222).

Наиболее редко встречающимися специфическими аллельными группами у детского деления московского региона были выявлены следующие (в долях): А* 69 (0,0033), *34 (0,00035), А*80 (0,00035), В*47 (0,0036), В*45 (0,002), В*46 (0,002), В*53 (0,0017), * 73 (0,0015), В*54 (0,0003), В*78 (0,0003).

Общими HLA-маркерами предрасположенности к развитию В-ОЛЛ у детей являются LA-специфичности Cw*04 (OR=l,9; р=0,007), DRB1*14 (OR=3,l; р=0,002) и DRB1*09 )R=3,5; р=0,001); к развитию Т-ОЛЛ являются HLA-специфичности DRB1*01 )R=2,2; р=0,0035), DRB1*13 (OR=2,35; р=0,002) и DQB1*05 (OR=2,45; р=0,002). бщими маркерами предрасположенности к развитию заболевания ОМЛ у детей 1ляются HLA-специфичности Cw*05 (OR=2,22; р=0,05) и С*07 (OR=2,12; р=0,0001). Маркером сильной ассоциации с ОМЛ М2 и М7 вариантами и высоким риском □вития заболеваний на популяционном уровне является HLA-Cw*07 (EF=53,8% и F=60,2% соответственно); маркером сильной ассоциацией с ОМЛ М5 и высоким

риском развития заболевания на популяционном уровне является HLA-DQB1*06 (EF=57,3%).

6. Характерными маркерами предрасположенности к развитию B-OJTJI у мальчиков являются HLA-специфичности В*50 (OR=3,3; р=0,03), С* 16 (OR=3,7; р=0,016), DRB1*14 (OR=5,l; р=0,0015); у девочек являются HLA-специфичности А*32 (OR=2,9; р=0,03), В* 15 (OR=2,6; р=0,02), В*47 (OR=10,9; р=0,009) DRB1*03 (OR=2,2; р=0,04). Характерным маркером предрасположенности к развитию Т-ОЛЛ у мальчиков являются HLA-специфичности А*26 (OR=3,7; р=0,006) и DRB1*13 (OR=2,55; р=0,03).

7. Характерными маркерами предрасположенности к развитию ОМЛ М2 являются HLA-специфичности А*24 (OR=2,5; р=0,046), В*5 1(OR=3,07; р=0,03) и Cw*07 (OR=3,6; р=0,015); к развитию ОМЛ-М4 являются HLA-специфичности А*25 (OR=2,8; р=0,05), В*07 (OR=2,36; р=0,049), Cw*05 (OR=3,97; р=0,004), DRB1*12 (OR=4,26; р=0,0077) и DQB1*06 (0R=2,36; р=0,049); к развитию ОМЛ М5 являются HLA-специфичности А*68 (OR=3,08; р=0,05), Cw*05 (OR=3,73; р=0,02) DRB1*07 (OR=2,67; р=0,048) и DQB1*06 (OR=4,33; р=0,0045); к развитию ОМЛ М7 являются HLA-специфичности В*39 (OR=7,02; р=0,03), В*49 (OR=8,4; р=0,019), Cw*07 (OR=4,25; р=0,03) и DRB 1*11 (OR=3,9; р=0,016).

8. Общим маркером устойчивости к заболеванию ОМЛ у детей является специфичность HLA-DRB1*07 (OR=0,59; р=0,001).

9. Характерным маркером устойчивости к развитию В-ОЛЛ у мальчиков является HLA-специфичность HLA-DRB1*03(OR=0,3; р=0,037); к развитию ОМЛ М4 у детей является HLA-DQB1*02 (OR=0,35; р=0,05).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Применение технологии SSO с использованием автоматического процессора Bee Blot в качестве основного метода и дополнительного HLA-типирования с помощью метода SSP для разрешения двойных интерпретаций рекомендуется использовать для проведения подобных исследований в медицинских учреждениях аналогичного профиля.

2. Полученные данные специфических маркеров системы HLA у детей, больных ОЛЛ и ОМЛ, рекомендуется учитывать в качестве дополнительного критерия в дифференцированной диагностике заболевания.

3 Выявление у детей специфических маркеров системы HLA в семье с ребенком, больным лейкозом, особенно проживающих в неблагоприятном экологическом районе, рекомендуется относить к группе риска развития заболевания.

4. Полученные данные частоты распределения аллельных специфичностей системы HLA у здорового детского населения московского региона рекомендуется использовать в качестве контрольной группы в области изучения «HLA и болезни» и в популяционных исследованиях.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ НАУЧНЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Майорова O.A. Организационные принципы создания и функционирования банков пуповинной крови (по стандартам NetCord и FAHCT) / Майорова O.A., Яковлева М.В., Румянцев С.А., Подколзина Э.А., Сухин Г.М., Спиридонова Е.И., Лебедева Л.Л. // Вопросы гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии. - 2005. -т.4. - №2. -стр.92-97.

2. Lebedeva L. HLA - genetic profile in Moscow Stern Cell Bank / Lebedeva L., Majorova 0. // Tissue Antigens. - v.71. - №4. - apr., 2008,- p.367-368.

3. Lebedeva L. Analysis of family studies in search for hematopoietic stem cell donor. / L.

Lebedeva // Tissue Antigens. - v.72. - №3. - sept., 2008 .- p.294-295.

4. Абрамов B.IO. Итоги межлабораторной программы контроля качества тканевого ипирования / Абрамов В.Ю., Гулидова О.В., Лебедева Л.Л., Попова Л.К., Мацуленко .Н., Калужина H.H. // Вестник трансплантологии и искусственных органов.- 2010. - т. :il. -№3. с. 89-93.

. Лебедева JI.JI. Иммуногенетические факторы предрасположенности и резистентности острому лимфобластному лейкозу у детей. / Лебедева Л.Л., Потапова Т.Н., Пухликова .В., Ставцев Д.С., Астрелина Т.А., Яковлева М.В. //Сборник материалов XIV онгресса педиатров России с международным участием «Актуальные проблемы едиатрии». - Москва. - 15-18 февраля 2010. -№ 478. - с. 480.

, Лебедева J7.JI. Ассоциации антигенов HLA-системы с хроническим миелолейкозом у гтей. / Лебедева Л.Л., Потапова Т.Н., Пухликова Т.В., Ставцев Д.С., Астрелина Т.А., ковлева М.В.: Тезисы докладов. XIV Конгресс педиатров России с международным частием «Актуальные проблемы педиатрии»,- Москва.- 15-18 февраля 2010.- № 479.481.

Лебедева Л.Л. Взаимосвязь антигенов HLA-системы с различными орфологическими вариантами острого миелоидного лейкоза у детей. / Лебедева Л.Л., отапова Т.Н., Пухликова Т.В., Ставцев Д.С., Астрелина Т.А., Яковлева М.В.: Тезисы зкладов. XIV Конгресс педиатров России с международным участием «Актуальные роблемы педиатрии». - Москва.15-18 февраля 2010. - № 480. - с. 482. Лебедева ЛЛ. Стратегия HLA-типирования в Московском банке стволовых клеток. Лебедева Л.Л., Потапова Т.Н., Пухликова Т.В., Астрелина Т.А., Яковлева М.В.: Тезисы зкладов. III научно- практическая конференция «Современные технологии и методы ^агностики различных групп заболеваний, лабораторный анализ». -13-14 мая 2010. -[осква,- Научное издание - с. 19-20.

Пухликова Т.В. Значение генетических факторов в развитии целиакии. / Т.В. ухликова, Л.Л. Лебедева, Т.Н. Потапова, Е.А. Рославцева, Е.А. Сабельникова, A.A. стрелина, М.В. Яковлева. // Вопросы современной педиатрии,- 2010,- 9(№4).- с. 10-14. ). Пухликова Т.В. Значение генетических факторов в развитии целиакии у детей. / Т.В. ухликова, Л.Л. Лебедева, Т.Н. Потапова, Е.А. Рославцева, A.A. Астрелина, М.В. ковлева: Тезисы докладов. XIV Конгресс педиатров России с международным тстием «Актуальные проблемы педиатрии». - Москва,- 15-18 февраля 2010г.- № 656,658.

I. Пухликова Т.В. Значение генетических факторов в развитии целиакии у детей в г. 'оскве. / Т.В. Пухликова, Л.Л. Лебедева, Т.Н. Потапова, Е.А. Рославцева, Е.А. абельникова, A.A. Астрелина, М.В. Яковлева: Тезисы докладов. III научно-эактическая конференция «Современные технологии и методы диагностики различных iynn заболеваний, лабораторный анализ». - 13-14 мая 2010.- Москва. - Научное |дание.- с. 20-21.

Ï. Шаманская Т.В. Опыт трансплантации пуповинной крови банка стволовых клеток осквы. / Шаманская Т.В., Астрелина Т.А., Качанов Д.Ю., Паина О.В., Скоробогатова В., Дышлевая З.М., Подколзина Э.А., Карпова Е.Э., Лебедева О.В., Яковлева М.В.: гзисы докладов. XIV Конгресс педиатров России с международным участием Актуальные проблемы педиатрии». - Москва. 15-18 февраля 2010 .- №898. - с. 901. I. Шаманская Т.В. Использование пуповинной крови при проведении аллогенной >ансплантации гемопоэтических стволовых клеток у детей (опыт работы Московского шка стволовых клеток). / Шаманская Т.В., Астрелина Т.А., Подколзина Э.А., Карпова

Е.Э., Лебедева Л.Л., Скоробогатова Е.В., Паина О.В., Яковлева М.В. // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. - 2010. -т.5. - №2. - с.1-7.

14. Lebedeva L. Estabilishment of typing strategy in Moscow Stem Cell Bank. / Lebedeva L., Potapova T., Puchlikova T., Astrelina T., Yakovleva M. // Book of Abstracts & Scietific Program. 5th East-West Immunogenetics Conference. - 4-5 March, 2010. - Pilsen, Czech Republic. - p. 29.

15. Lebedeva L.L. Nature of HLA-associated factors of predisposition and resistency in acute lymphoblastic leukemia. / Lebedeva L.L., Potapova T. N., Puhlikova T.V., Stavtsev D.S., Skorobogatova E.V., Astrelina T.A., Yakovleva M.V. // Bone Marrow Transplantation, 36-st Annual Meeting of the European Group for Blood and Marrow Transplantation 26-st Meeting of the Nurses Group 9-th Meeting of the EBMT Data Management Group, 2nd EBMT Quality Management Meeting. - Vienna, Austria. - March 21-24, 2010. - P-409.-S85.

16. Lebedeva L. Study on the correlation between of HLA genes and chronic myeloid leukemia in children. / Lebedeva L., Potapova T., Puchlikova T., Astrelina T // 24-th European Immunogenetics and Histocompatibility Conference (EFI) and 17-th Annual Meeting of the Italian Society for Immunogenetics and Transplantation (AIBT), Tissue Antigens, 2010, 75(№5), p.636, P360.

17. Lebedeva L. Immunogenetic factors of predisposition in acute lymphoblastic leukemia. / Lebedeva L., Potapova T., Puchlikova T., Astrelina T. // 24-th European Immunogenetics and Histocompatibility Conference (EFI) and 17-th Annual Meeting of the Italian Society for Immunogenetics and Transplantation (AIBT), Tissue Antigens, 2010, 75(№5), p.636, P361.

18. Lebedeva L. Communication of HLA association genes in chronic children with acute myeloid leukemia. / Lebedeva L., Potapova T., Puchlikova T., Astrelina T. // 24-th European Immunogenetics and Histocompatibility Conference (EFI) and 17-th Annual Meeting of the Italian Society for Immunogenetics and Transplantation (AIBT), Tissue Antigens, 2010, 75(№5), p.636, P359.

19. Puchlikova T. Genetic factors in development of children coeliac diseases. / Puchlikova T., LebedevaL., Potapova T., Roslavtseva E., Astrelina T., Yakovleva M.V // 26th International Pediatric Association Congress of Pediatrics (IPA).- 2010,- South Africa.- 4-9 August 2010.-abstract &P.673.

20. Shamanskaya T. Moscow Stem Cell Bank; experience of transplantation cord blood. / Shamanskaya T., Astrelina T., Kachanov D, Paina O., Skorobogatova E., Dishleva Z., Podkolzina., Karpova E., Lebedeva L., Yakovleva M // Bone Marrow Transplantation, 36-st Annual Meeting of the European Group for Blood and Marrow Transplantation 26-st Meeting of the Nurses Group 9-th Meeting of the EBMT Data Management Group, 2nd EBMT Quality Management Meeting .- Vienna, Austria. - March 21-24, 2010. - P-583. - S154.

Слисок сокращений

Р1 - Европейская Федерация Иммуногенетиков

ЪЛ - антигены лейкоцитов человека

1НС - главный комплекс гистосовместимости

ЕТС01Ш - Европейская сеть донорских банков стволовых

:мопоэтических клеток

БО - сиквенс-специфические нуклеотиды

БР - аллель-специфические праймеры

СК - гемопоэтические стволовые клетки

УЗ «БСК ДЗМ» - Государственное учреждение здравоохранения Банк стволовых клеток Департамента здравоохранения города Москвы» НК- дезоксирибонуклеиновая ДНК ЛЛ - острый лимфобластный лейкоз

• В-ОЛЛ - острый лимфобластный лейкоз В-клеточной линии

• Т-ОЛЛ - острый лимфобластный лейкоз Т-клеточной линии МЛ - острый миелобластный лейкоз

• М1 - миелобластный лейкоз без созревания клеток

• М2 - миелобластный лейкоз с неполным созревания клеток

• МЗ - промиелобластный лейкоз

• М4 - миеломонобластный лейкоз

• М5 - монобластный лейкоз Мб - эритролейкоз

• М7 - мегакариобластный лейкоз ЦР - полимеразная цепная реакция

ГУ «ФНКЦ ДГОИ» - Федеральное государственное учреждение

Федеральный научно-клинический центр детской гематологии, онкологии и кшунологии» Росздрава

ЛЕБЕДЕВА ЛИДИЯ ЛЬВОВНА (Россия)

Генетическиii полиморфизм антигенов гистосовмсстнмостн здорового детского населения московского региона и при острых лейкозах у детей

Проведен молекудярно-генетический анализ полиморфизма генов главного комплекса гистосовместимости (системы HLA) у здорового детского населения московской популяции и у детей больных острыми лейкозами. Выполнено HLA-генотипирование на популяционной выборке 2650 образцов пуповинной крови новорожденных условно здоровых детей, а также 187 детей с диагнозом ОЛЛ и 146 детей, больных ОМЛ. Впервые в России проведено широкомасштабное исследование групп аллелей HLA-генов (специфичностей) класса I и II у здорового детского населения московского региона с использованием высокотехнологических подходов. Проведена оценка методов SSO и SSP детекции специфичностей (групп аллелей) и аллельных вариантов генов HLA системы. Выявлен характер распределения специфических генов HLA-системы класса I и II при различных вариантах ОЛЛ у детей и в зависимости от пола ребенка и при различных вариантах ОМЛ у детей. Установлены HLA-маркеры предрасположенности и устойчивости к ОЛЛ и ОМЛ у детей. Результаты исследования рекомендуются к использованию в научных исследованиях, а также в практической медицине.

LEBEDEVA LIDIA L'VOVNA (Russia) Genetic polymorphism of tissue antigens of health child population of Moscow region and children with acute leukemia

A molecular genetic analysis of polymorphisms of Mayor Histocompatibility Complex (HLA system) was carried out in health child population of Moscow region and children with acute leukemia. Cord bloods samples from 2650 conditional-healthy newborn and 187 children with ALL and 146 children with AML were HLA-genotyped. For the first time in Russia, the large-scale research of alleles gropes of HLA-genes class I and class II was performed in health children population of Moscow region using High Technology. Evaluation of detection the allele groups and alleles of HLA-genes a by SSO and SSP methods was done. The distribution of specific allele groups of HLA-genes class I and class II was revealed in different immunophenotypic of ALL and different cytogenesis of AML as well as depending on sex of the children with ALL. HLA-markers of susceptibility and resistant to ALL and AML were found. The results of the research may be used in scientific researches as well as in medical practice

Подписано в печать:

08.10.2010

Заказ № 4257 Тираж -100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Лебедева, Лидия Львовна

Список сокращений.

Введение.

ГЛАВА 1. Обзор литературы.

1.1. Современные представления о главном комплексе гистосовместимости.

1.2. Структура МНС.

1.3. Полигенность и полиморфность системы НЬА.

1.4. НЬА гаплотипы.

1.5.Частота встречаемости аллелей и гаплотипов.

1.6. Строение молекул.

1.7. Роль МНС в регуляции иммунного ответа.

1.8. «НЬА и болезни».

1.9. Взаимосвязь МНС с лейкозами.

1.9.1. Острые лейкозы у детей.

1.9.1.1. Генетика острых лимфобластных лейкозов.

1.9.1.2. Генетика острых миелобластных лнйкозов.

ГЛАВА 2. Материалы и методы.

2.1. Материал исследования.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Выделение ДНК из биоматериала.

2.2.2. Измерение показателей характеристики

ДНК на спектрофотометре.

2.2.3. Молекулярные методы типирования.

2.2.3.1. Генотипирование методом гибридизации с помощью олигонуклеотидных зондов.

2.2.3.2. Генотипирование методом ПЦР с помощью аллель-специфических праймеров.

2.3. Статистическая обработка результатов.

ГЛАВА 3. Особенности генетического полиморфизма антигенов гистосовместимости здорового детского населения и больных детей острым лейкозом.

3.1.Исследование генетического полиморфизма системы НЬА московской популяции.

3.1.1. Проведение НЬА-типирования с использованием двух методов молекулярной биологии.

3.1.2. Генетический полиморфизм НЬА-системы в московской популяции здоровых детей.

3.2. Характеристика распределения частоты встречаемости генов НЬА-системы у детей с острыми лимфобластными лейкозами.

3.2.1. Особенности распределения частоты встречаемости НЬА-генов у детей, больных В-линейным лейкозом.

3.2.2. Особенности распределения частоты встречаемости НЬА-генов у детей больных Т-линейным лейкозом.

3.3. Характер распределения частоты встречаемости генов HLA-системы у детей с острым миелобластным лейкозом.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Генетический полиморфизм антигенов гистосовместимости здорового детского населения Московского региона и при острых лейкозах у детей"

В основе этиологии мультифакториальных заболеваний, к которым относятся лейкозы, лежит генетическая-компонента [19, 20, 176, 177, 178]. Возникающие под воздействием различных эндогенных и экзогенных факторов (онкогенные вирусы, неблагоприятные факторы внешней среды, ионизирующая радиация и т. д.) мутации зародышевых клеток системы кроветворения, приводят к различным изменениям кариотипа [27, 28]. Ключевым моментом в иммунном распознавании аллоантигенов является презентация пептида Т-клеткам в комплексе с HLA-молекулами [72, 207, 208]. С одной и той же молекулой МНС могут взаимодействовать разные патогенные пептиды, которые, однако, отличаются по сродству к этой молекуле, и, как следствие, возникает различной интенсивности иммунный ответ, способствующий развитию заболевания или устойчивости к нему [11, 30].

Заболеваемость острым лимфобластным лейкозом (OJIJI) практически в пять раз больше, чем острым миелобластным лейкозом (OMJI), частота встречаемости которого составляет 4-5 случая на 100000 детского населения в год [19, 20, 76, 176, 179]. Популяционные исследования полиморфизма генов главного комплекса гистосовместимости, проведенные у больных гемобластозами, свидетельствуют об ассоциативной связи системы HLA с острым лейкозом, как у взрослых, так и у детей [23, 29, 62, 65, 74, 141, 152, 176, 187].

Однако практически отсутствуют данные изучения взаимосвязи HLA системы и вариантом острого лейкоза у детей. Не охарактеризованы особенности распределения HLA-маркеров предрасположенности и устойчивости к различным вариантам OJIJI и OMJI у детей в зависимости от их пола. Не исследован генетический полиморфизм антигенов гистосовместимости здорового детского населения московского региона. Исходя из этого, настоящее исследование представляется актуальным.

Цель исследования

Изучить профиль генетического полиморфизма антигенов гистосовместимости у здорового детского населения московской популяции и у детей, больных OJIJI и OMJI.

Задачи исследования

2. Провести оценку методов SSO (Sequence Specific Oligonucleotides) и SSP (Sequence Specific Primers) в детекции специфичностей (групп аллелей) и аллельных вариантов-генов HLA системы.

4. Исследовать характер распределения специфических генов НЬА-системы класса I и II при различных вариантах ОЛЛ у детей и в зависимости от пола ребенка.

5. Исследовать характер распределения специфических генов НЬА-системы класса I и II при различных вариантах ОМЛ у детей.

6. Выявить НЬА-маркеры предрасположенности и устойчивости к ОЛЛ и ОМЛ у детей.

Научная новизна

Впервые в России проведено широкомасштабное исследование генов" НЬА-системы на большом количестве образцов пуповинной крови с использованием высокотехнологических подходов (типирование методом ЯЯО на автоматическом процессоре и методом Б8Р).

Впервые изучен характер распределения; групп аллелей НЬА-генов (специфично стей): класса I и II у здорового детского'населения московского; региона; выполненный на; большом количестве материала: Установлено,, что профиль генов НЬА-системы у детского, населения московского региона соответствует европеоидам;

Впервые получены данные об особенностях распределения:; специфических групп аллелей НЬА-системы при ОЛЛ и ОМЛ у детей.

Охарактеризованы общие маркеры предрасположенности* к развитию^ В-ОЛЛ у детей (НЬА-специфичности С\у*04, БЕВ1* 14 и ББШ1*09), Т-ОЛЛ' (НЬА- специфичности Б11В1*0Г, БКВ1*13 и БС)В1*05), ОМЛ (НЬА-специфичности С\у*05 и С*07).

Выявлены маркеры с сильной ассоциацией и высоким риском развития заболевания на популяционном уровне для; вариантов ОМЛ М2 и М7 (НЬА-Сш*07) и варианта-ОМЛ М5 (НЬА-Б(2В1*06). •

Показаны характерные маркеры предрасположенности в зависимости от пола к развитию B-OJIJI: у мальчиков (HLA-специфичности В*50, С* 16 и DRB1*14), у девочек (HLA-специфичности А*32, В* 15, -В*47 и DRB1*03); а также к развитию T-OJIJI у мальчиков (HLA-специфичности А*26 и DRB1*13).

Выявлены характерные маркеры предрасположенности к развитию ОМЛ М2 (HLA-специфичности А*24, Cw*07 и В*51), ОМЛ М4 ( HLA-специфичности А*25, В*07, DRB1*12, Cw*05 и DQB1*06), ОМЛ М5 (HLA-специфичности А* 68, DRB1*07 и DQB1*06) и ОМЛ М7 (HLA-специфичности В*39, В*49, Cw*07 и DRB1*11).

Научно-практическое значение

Научное значение имеет объективная оценка характера распределения специфических групп аллелей генов HLA-системы у здорового детского населения московской популяции с помощью молекулярно-генетического метода исследования. В результате выполненной работы предложен эффективный метод HLA-типирования большого количества образцов пуповинной крови (с применением технологий SSO и SSP), который может быть использован в медицинских учреждениях аналогичного профиля в России. Применение этого метода позволяет изучить особенности распределения генов гистосовместимости у детей больных острым лейкозом, обнаружить HLA-маркеры, определяющие риск или устойчивость к возникновению данного заболевания. Практическое значение работы вытекает из того, что установлены характерные специфические маркеры системы HLA в семьях, имеющих больного лейкозом ребенка, которые обуславливают максимальный риск к развитию заболевания. Впервые представлен в работе охарактеризованный профиль распределения генов главного комплекса гистосовместимости у здорового детского населения московского региона, который может быть использован в качестве контрольной группы в области изучения «HLA и болезни» и в популяционных исследованиях. Впервые создана база данных образцов ДНК больных детей OJIJI и OMJI, которая может быть использована для дальнейших исследований.

Положения, выносимые на защиту

1. Типирование образцов пуповинной крови по локусам HLA-системы с применением современных технологий молекулярной биологии является необходимым чувствительным методом, требующим: для исследования минимального количества исследуемого материала.

2. Предложенный метод типирования образцов пуповинной крови, представленная двумя технологиями ДНК типирования, такими как SSO и SSP, позволяет провести быструю обработку большого количества биоматериала и получать достоверные и однозначные результаты.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Лебедева, Лидия Львовна

выводы

1. HLA-генотипирование образцов пуповинной крови с использованием двух методов молекулярными биологии, таких как SSO и SSP, позволяет получать достоверные и однозначные результаты.

2. Наиболее часто встречаемыми специфичностями по локусам HLA класса I у детского населения московского региона являются: HLA-A*02 (0,288), А*03 (0,134), А*01 (0,114), А*24 (0,096); В*07 (0,120), В*35 (0,0793), В*44 (0,101), В* 18 (0,084), В*08 (0,067), В* 13 (0,066); Cw*07 (0,257), Cw*12 (0,134), Cw*06 (0,130), Cw*04 (0,0128). По классу II - специфичности HLA-DRB1*07 (0,143), DRB1*13 (0,139), DRB1*15 (0,133), DRB1*11 (0,130), DRB1*01 (0,110), DRB1*04 (0,110) и DQB 1*03 (0,330), DQB1*06 (0,222).

3. Наиболее редко встречающимися специфическими аллельными группами у детского населения московского региона были выявлены следующие: А* 69 (0,0033), А*34 (0,00035), А*80 (0,00035), В*47 (0,0036), В*45 (0,002), В*46 (0,002), В*53 (0,0017), В* 73 (0,0015), В*54 (0,0003), В*78 (0,0003).

4. Общими HLA-маркерами предрасположенности к развитию B-OJIJI у детей являются HLA-специфичности Cw*04 (OR=l,9 р=0,007), DRB1*14 (OR=3,l р=0,002) и DRB1*09 (OR=3,5 р=0,001); к развитию Т-ОЛЛ являются HLA-специфичности DRB1*01 (OR=2,2 р=0,0035), DRB1*13 (OR=2,35 р=0,002) и DQB 1*05 (OR=2,45 р=0,002). Общими маркерами предрасположенности к развитию заболевания ОМЛ у детей являются HLA-специфичности Cw*05 (OR=2,22 р=0,05) и С*07 (OR=2,12 р=0,0001).

5. Маркером сильной ассоциации с ОМЛ М2 и М7 вариантами и высоким риском развития заболеваний на популяционном уровне является HLA-Cw*07 (EF=53,8% и EF=60,2% соответственно); маркером, сильной ассоциацией с ОМЛ М5 и высоким риском развития заболевания на популяционном уровне является HLA-DQB1*06 (EF=57,3%).

6. Характерными маркерами предрасположенности к развитию В-ОЛЛ у мальчиков являются НЬА-специфичности В*50 (СЖ=3,3 р=0,03), С\у*16 (ОЫ=3,7 р=0,016), ОКВ1*14 (011=5,1 р=0,0015); у девочек являются НЬА-специфичности А*32 (011=2,9 р=0,03), В*15 (ОЯ=2,6 р=0,02), В*47 (0я=10,9 р=0,009) Б1Ш1*03 (ОЯ=2,2 р=0,04). Характерным маркером предрасположенности к развитию Т-ОЛЛ у мальчиков являются НЬА-специфичности А*26 (011=3,7 р=0,006) и БКВ1*13 (011=2,55 р=0,03).

7. Характерными маркерами предрасположенности к развитию ОМЛ М2 являются НЬА-специфичности А*24 ((Ж=2,5 р=0,046), В*51 (0я=3,07 р=0,03) и С\у*07 (ОК=3,6 р=0,015); к развитию ОМЛ-М4 являются НЬА-специфичности А*25 (СЖ=2,8 р=0,05), В*07 (ОЯ=2,36 р=0,049), С\у*05 (011=3,97 р=0,004) БИВ 1*12 (ОЫ=4,26 р=0,0077), и 0(^1*06 (ОЯ=2,36 р=0,049); к развитию ОМЛ М5 являются НЬА-специфичности А*68 (011=3,08 р=0,05), Cw.*05 (011=3,73 р=0,02), БКВ1*07 (ОЯ=2,67 р=0,048) и Б(2В1*06 (ОЫ=4,33 р=0,0045); к развитию ОМЛ М7 являются НЬА-специфичности В*39 (011=7,02 р=0,03), В*49 (ОЯ=8,4 р=0,019), Сш*07 (ОЯ=4,25 р=0,03) и ОБШ1*11 (ОЯ=3,9 р=0,016).

8. Общим маркером устойчивости к заболеванию ОМЛ у- детей является специфичность НЬА-ББШ1*07 (ОЯ=(),59 р=0,001).

9. Характерным маркером устойчивости к развитию В-ОЛЛ,у мальчиков является НЬА-специфичность НЬА-011В1*03 (011=0,3 р=0,037); к развитию ОМЛ М4 у детей является НЬА-БС>В1*02 (011=0,35 р=0,05).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Применение технологии SSO с использованием автоматического процессора Bee Blot в качестве основного метода и дополнительного HLA типирования с помощью метода SSP для разрешения двойных интерпретаций рекомендуется использовать для проведения подобных исследований в медицинских учреждениях аналогичного профиля.

2. Полученные данные специфических маркеров системы HLA у детей больных с ОЛЛ и ОМЛ рекомендуется учитывать в качестве дополнительного критерия в дифференциальной диагностике заболевания.

3. Выявление у детей специфических маркеров системы HLA в семье с ребенком больным лейкозом, особенно, проживающих в неблагоприятном экологическом районе, рекомендуется относить к группе риска развития заболевания.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Лебедева, Лидия Львовна, Москва

1. Абдулкадырое K.M. Заготовка плацентарной крови. Особенности ее клеточного состава и гемопоэтического потенциала. / Абдулкадыров K.M., Романенко Н. А., Старков Н. Н., Сельцер A.B., Балашова В.А // Гематология и трансфузиология.- 2002. № 2. - с. 44-46.

2. Алексеев Л.П. Распределение аллелей HLA 1,11 и III классов в узбекской популяции. / Алексеев Л.П., Хаитов P.M., Израилов К., Болдыреав М.Н. // Иммунология. 1996.-№3. - с.23-25

3. Галактионов В.Г. Иммунология./ В.Г. Галактионов. II Учебник для студентов вузов. М.: Академия, 2004. — 528 с.

4. Стептон Гланц. Медико-биологическая статистика. / Стептон Гланц // М.: Практика, 1998. с. 459.

5. Горбунова В.Н. Введение в молекулярную диагностику и генотерапию наследственных заболеваний: Сб. научн. трудов. / В.Н. Горбунова, B.C. Баранов. / /Специальная Литература. СПб., 1997. - с. 262.

6. Зарецкая Ю.М. Клиническая иммунология. / Зарецкая Ю.М. II М.: Медицина, 1983. 207 с.

7. Зарецкая Ю.М. HLA 50 лет: 1958-2008. / Зарецкая Ю.М., Леднев Ю.А. // Тверь.: Триада, 2008. 152 с.

8. Зарецкая Ю. М. Новые антигены тканевой совместимости.человека. /Зарецкая Ю. М., Абрамов В.- М. //М.: Медицина, 1986. 176с.

9. Зарецкая Ю.М. Иммуногенетические маркеры гемабластозов. /Зарецкая Ю.М., Хамаганова Е.Г., Алещенко С.М., Пивник A.B. // Тер. Арх.- 2000.-№12-с. 54-57.

10. Зотиков Е.А'. Лейкоцитарные антигены человека и болезни крови.

11. Зотиков Е.А., Тананов А.Т., Мусатова B.C. // Советская медицина. -1976.-№8. с.25-28

12. Зотиков Е.А. HLA и болезни крови: Тезисы докладов. / Зотиков Е.А., Тананов А.Т., Мусатова B.C. // 2-я национальная конференция- по медицинской биологии и генетике. Варна. Болгария, 1976. с.8

13. Зотиков Е.А. Неменделеевский тип наследования комплекса HLA. / Е.А. Зотиков, H.A. Красникова, P.M. Кутьина, А.И. Удовтченко, Л.С. Любимова. // Иммунология. 1989. - №6 - с.20-23.

14. Максимов О.Д., Клиническое значение HLA-фенотипа и иммунных нарушений у больных хроническим лимфолейкозом: дис. . канд. мед. наук: 14.00.29./ Олег Дмитриевич Максимов, Росс. НИИ гемат. и пер. кр. Москва, 2004.-117с.

15. Масчана М.А. Острый лимфобластный лейкоз у детей.

16. Масчана М.А., Мякова Н.В. // Онкогкматология. 2006.- т.1-№1- с.50-63.

17. Маякова С.А. Острые лимфобластные лейкозы. / Маякова С.А. // Сб. научн. трудов. Лейкозы у детей. Под ред. Г.Л. Менткевича, С.А. Маяковой. -М.: Практическая медицина, 2009. с. 214-251.

18. Попа A.B. Острые миелоидные лейкозы. / A.B. Попа /Сб.- научн. трудов.

19. Лейкозы у детей / Под ред. Г.Л. Менткевича, С.А. Маяковой. М.: Практическая медицина, 2009. - с.253-288.

20. Рий A.A. Клинико-диагностичесое значение антигенов HLA у больных острыми и хроническими лейкозами при проспективном наблюдении: дис. .канд. мед. наук: 14.00.05. / Анна Анатольевна Рий, Астр. гос. мед. акад. -Астрахань, 2007.- 168с.

21. Тананов А.Т. HLA и болезни крови. Ассоциация с возрастом начала заболевания, продолжительностью жизни. / Тананов А.Т. // Тезисы докладов. VII Международное совещание по тканевому типированию. Ленинград, 1981.-с. 175.

22. Тананов А.Т. HLA антигены у больных с патологией системы крови. / Тананов А.Т., Кутьина P.M., Турбина Н.С. // Проблемы гематологии. 1981. -№1. - с.8-12.

23. Тананов А.Т. Значение системы HLA в оценке степени риска возникновения и прогноза заболеваний: автореферат дис. . докт. мед. наук:1400.36; 14.00.29. / Александр Тихонович Тананов, НИИ гем. и пер. кр. МЗСССР М., 1982. - 30 с.

24. Тимонова Л А. НЬА-антигены I и II классов при остром лимфобластном лейкозе у детей. / Л.А. Тимонова, А.Г. Румянцев. // Гематология и трансфузиология. 1989. - Т.34. - №5. - с. 19-22.

25. Флейшман Е.В. Клиническое значение хромосомного анализа в онкогематологии.: Сб. научн. Трудов. / Флейшман "Е.В / Клиническая онкогематология / Под ред. Волковой М.А. -М.: Практическая медицина, 2007. 507с.

26. Флейшман Е.В. Хромосомный анализ в диагностике и прогнозировании лейкозов у детей. Сб. научн. трудов. / Флейшман Е.В. // Лейкозы у детей/ Под ред. Г.Л. Менткевича, С.А. Маяковой. М.: Практическая медицина, 2009. - с.93-194.

27. Хамаганоеа Е.Г. Главный' комплекс гистосовместимости у больных гемабластозами: полиморфизм генов НЪА класса II: дис. докт. биол. наук: 14.00.29; 14.00.36. / Екатерина Георгиевна Хамаганова, НИИ гем. и трасф. -Москва, 2002.-180с.

28. Хамаганова Е.Г. Молекулярные механизмы ассоциаций НЬА-маркеров с резистентностью и развитию лейкоза. / Хамаганова Е.Г., Зарецкая Ю.М // Гематология и трансфузиология. 2006. - т. 51. - №1. - с. 12-17.

29. Шабалин В.Н. Особенности течения заболеваний системы крови в зависимости от НЬА-фенотипа. / Шабалин В.Н., Серова Л.Д // Иммунология. 1982.- №3.- с.59-62.

30. Юрасов C.B. Выделение гемопоэтических стволовых клеток из пуповинной крови человека для трансплантации. / Юрасов С.В., Владимирская Е.В., Румянцев А.Г. // Гематология и трансфузиология. 1997 .- т.42(2). - с. 10-15.

31. Ярилин A.A. Основы иммунологии. / A.A. Ярилин / Учебник. М.: Изд. Медицина, 1999. - 608с.

32. Alexsander F.E. Risk factors for Hodgkin's diseases by Epstein-Bar vurus (EBV) status: prior infection by EBV and other agents. / Alexsander F.E., Jarret R.F., Lawrence D., Armstrong A.A., et al // Br. J.Cancer. 2000. - Vol. 82(5). - P. 1117-1121.

33. Albert ED. HLA antigens and haplotypes in acute leukemia1. / Albert ED, Nisperos B, Thomas ED // Leukemia Research 1977. Vol.1. - P. 261-269.

34. Amiel JL. Study of the leukocyte phenotypes in Hodgkin's disease. / Amiel JL. II In: Curtoni ES, Mattiuz PL, Tosi RM, eds. Histocompatibility Testing 1967, Copenhagen: Munksgaard. 1967. - P.79-81.

35. Aird I. A relationship between.cancer of stomach and the ABO blood groups. / Aird I, В entall HH, Roberts JAF // British Medical Journal. 1953. - v.l. - p. 799801.

36. ArnettKL. The Bw4/Bw6 difference between HLA-B*0802 and HLA-B*0801 changes the peptides endogenously bound and the stimulation of alloreactive T cells. / Arnett KL, Huang W, Valiante NM, Barber LD, Parham P // Immunogenetics. 1998. Vol. 48. - P. 56-61.

37. Begovich AB. Polymorphism, recombination, and linkage disequilibrium within the HLA class II region. / Begovich AB, McClure GR, Suraj VC, et al // Journal of Immunology. 1992. - Vol. 148. - P. 249-258.

38. Benacerraf B. Histocompatibility-linked immune response genes. / Benacerraf B, McDevitt HO. // Science. 1972. - Vol. 175. - P. 273-279.

39. Benacerraf B. Role of MHC gene products in immune regulation. / Benacerraf B .// Science. 1981 .- Vol. 212. -P. 1229-1238.

40. Complete sequence and gene map of a human major histocompatibility complex. The MHC sequencing consortium. // Nature. 1999. - Vol .401. - P. 921-923.

41. Bodmer WF. Evolutionary significance of the HLA system Review. / Bodmer WF. //Nature. 1972. - Vol. 237. - P. 139-145.

42. Bodmer JG. Nomenclature for the factors of the HLA system, 1998. / Bodmer JG, Marsh SG, Albert ED, et al. / /European Journal of Immunogenetics. — 1999. -Vol. 26. -P. 81-116.

43. Bonnet D. Human acute myeloid leukemia is organized as a hierarchy that originates from a primitive hematopoietic cell. / Bonnet D, Dick JE // Nat. Med. -1997. Vol. 3 (7). - P. 730-737.

44. Bortin MM. HLA associations with leukemia. /Bortin MM, D'Amaro J, Bach FH, Rimm AA, van Rood JJ. // Blood. 1987. - Vol. 70. -P. 227-232.

45. Browning M. HLA and MHC\ genes, molecules and function. / Browning M., McMichael A // Oxford: BIOS Scientific Publisher Ltd., 1996. P. 353-373.

46. Brown J.H. Three-dimensional structure of the human class II histocompatibility antigen HLA-DR1. / Brown J.H., Jardetzky T.S., Gorga J.C., Stern L.J., Urban R.G., Strominger J.L., Wiley D.C. // Nature.- 1993.- Vol. 364. -P. 33-39.

47. Budowle B. Properdin factor B and acute lymphocytic leukemia (ALL). / Budowle B, Acton RT, Barger BO, et al. // Cancer. 1982. - Vol. 50. - P. 23692371.

48. Bugawan, T. L. High-resolution HLA class I typing in the CEPH families: analysis of linkage disequilibrium among HLA loci. / Bugawan, T. L., W. Klitz, A. Blair, and H. A. Erlich. // Tissue Antigens. 2000. - Vol. 56. - P. 392-404.

49. Carpentier NA. Increased HLA-DR compatibility between patients with acute myeloid leukemia and their parents: implication for bone marrow transplantation. / Carpentier NA, Jeannet M. // Transplantation Proceedings. 1987. - Vol. 19. - P. 2644-2645.

50. Carpentier NA. Gametic association of HSP70-1 promoter region alleles and their inclusion in extended HLA haplotypes. / Carpentier NA, Jeannet M. // Tissue Antigens. 1993. - Vol. 42. -P. 62-66.

51. Cascino I. Strong genetic association between HLA-DR3 and a polymorphic variation in the regulatory region of the HSP70-1 gene.

52. Cascino I, Sorrentino R, Tosi R. // Immunogenetics. 1993. - Vol. 37. -P. 177182.

53. Casper JT. Transient appearance of HLA-DRw-positive leukocytes in peripheral blood after cessation of antileukemia therapy.

54. Casper JT, Duquesnoy RJ, Borella L // Transplantation Proceedings. 1980. -Vol. 12.-P. 130-133.

55. Chan KW. Distribution of HLA genotypes in families of patients with acute leukaemia. Implications for transplantation. / Chan KW, Pollack MS, Braun D, Jr., O'Reilly RJ , Dupont B. // Transplantation. 1982. - Vol. 33. - P. 613-615.

56. Chan KW. Distribution of HLA genotypes in families of patients with acute leukemia. Implications for transplantation. / Chan KW, Pollack MS, Braun D, Jr., O'Reilly RJ, Dupont B. // Transplantation. 1982. -Vol. 33. -P. 613-615.

57. Childhood cancer in Britain: the National Registry of Childhood Tumours and incidence rates 1978-1987. // Eur. J. Cancer. 1987. - Vol. 31(A). - P. 2028-2034.

58. Collins WM. Metastasis of Rous sarcoma tumors in chickens is influenced by the major histocompatibility (B) complex and sex. / Collins WM, Dunlop WR, Zsigray RM, Briles RW, Fite RW // Poultry Science. 1986.- Vol. 65. - P. 16421648.

59. Constantinidou, N. Hla Class I and Class II Associations in Childhood Acute Lymphoblastic Leukemia 91. / Constantinidou, N., Polychronopoulou, S., Georgi, P., Panagiotou, J. P., Haidas, S. // Pediatric Research. 1997. -Vol. 41(5). -May -P. 761-797.

60. Dausset J. Iso-leuco-anticorps. /Dausset J // Acta Haematologica. — 1959. -Vol. 20.-P. 156-166.

61. Dausset J. The major histocompatibility complex in man. / Dausset J. // Science. 1981 - Vol. 213. - P. 1469-1474.

62. D'Amaro J. HLA C associations with acute leukemia. / D'Amaro J, Bach FH, van Rood JJ, Rimm AA, Bortin MM. // Lancet. 1984. -Vol. 2. - P. 1176-1178.

63. Degli-Esposti MA. Ancestral haplotypes: conserved population MHC haplotypes. / Degli-Esposti MA, Leaver AL, Christiansen FT, Witt CS, Abraham LJ, Dawkins RL. // Human Immunology. 1992. - Vol. 34. -P. 242-252.

64. De Moor P. Distribution of HLA genotypes in sibs of patients with acute leukemia. / De Moor P, Louwagie A // Scandinavian Journal of Haematology. -1985.-Vol. 34. P. 68-70.

65. De Moor P. Distribution of HLA genotypes in sibs of patients with acute lymphoblastic leukemia. / De Moor P. // European Journal of Haematology. -1989.- Vol. 42.-P. 317-318.

66. Doherty PC. A biological role for the major histocompatibility antigens.

67. Doherty PC, Zinkernagel RM. // Lancet. 1975. - Vol. 1. (N. 7922). - P. 4061409.

68. Dorak MT. Human major histocompatibility complex contains several leukaemia susceptibility genes. /Dorak MT, Chalmers EA, Gaffhey D, et al. // Leukaemia & Lymphoma. 1994. - Vol. 12. - P. 211-222.

69. Dorak MT. Major histocompatibility complex, t-complex, and leukemia Review. / Dorak MT, Burnett AK. // Cancer Causes & Control. 1992. - Vol. 3. - P. 273-282.

70. Dorak MT. Nature of HLA-associated predisposition to childhood acute lymphoblastic leukemia. /Dorak MT, Owen G, Galbraith I, et al. // Leukemia. -1995.-Vol .9. -P. 875-878.

71. Dorak MT. Unravelling an HLA-DR association in childhood acute lymphoblastic leukemia:

72. Dorak MT, Lawson T, Machulla HKG, Darke C, Mills KI, Burnett AK // Blood.- 1999. Vol. 94. -P. 694-700.

73. Dyer PA. HLA-A,B and DR antigens in chronic lymphocytic leukemia. / Dyer PA, Ridway JC, Flanagan NG. // Disease Markers. 1986. -Vol. 4. - P. 231-237.

74. Edidin M. Function by association? MHC antigens and membrane receptor complexes. / Edidin M // Immunology Today. 1988. -Vol. 9. - P. 218-219.

75. Faraldo MJ. Histocompatibility genes (the H-2 complex) and susceptibility to spontaneous lung tumors in mice. / Faraldo MJ, Dux A, Muhlbock O, Hart G. // Immunogenetics. 1979. - Vol. 9. - P. 383-404.

76. Fialkow PJ. Clonal remissions in acute nonlymphocytic leukemia: evidence for a multistep pathogenesis of the malignanc. / Fialkow PJ, Janssen JW, Bartram // Blood.-1991.-Apr.-Vol. 1.-77(7).-P. 1415-1417.

77. Fuller TC. The humoral* immune response against an HLA class I , allodeterminant correlates with the HLA-DR phenotype of the responder. / Fuller TC, Fuller A // Transplantation. 1999. - Vol. 68. - P. 173-182.

78. Gaudieri S. The major histocompatability complex (MHC) contains conserved polymorphic genomic sequences that are shuffled by recombination to form ethnic-specific haplotypes.

79. Gaudieri S, Leelayuwat C, Tay GK, Townend DC, Dawkins RL.// Journal of Molecular Evolution. 1997. - Vol .45. - P. 17-23.

80. Gluckman E. Current status of umbilical cord blood hematopoietic stem cell transplantation. / Gluckman E. // Exp. Hematol. 2000. - Vol. 28. - P. 1197-205.

81. Gluckman E. Hematopoietic Stem-Cell transplants using umbilical-cord blood. / Gluckman E., Broxmeyer H.E. // N. Engl. J. Med. 2001. - Vol. 344 (24). - P. 1860-61.

82. Greer JP. / Greer JP //Wintrobe's Clinical Hematology. -11th. Philadelphia: Lippincott, Williams, and Wilkins, 2004. - P. 2045-2062.

83. Gluckman. Cord blood transplantation: state of the art. / Gluckman T., Rocha V. // Haematologica. 2009. - Vol. 94 (4). - P. 451-454.

84. Gorski J. Structural comparison of the genes of two HLA-DR supertypic groups: the loci encoding DRw52 and DRw53 are not truly allelic. / Gorski J, Rollini P, Mach B.// Immunogenetics. 1987. - Vol. 25. - P. 397-402.

85. Greaves M. Infections in early life and risk of childhood ALL. / M Greaves and P A Buffler // British Journal of Cancer. -2009.-Vol. 100.- P. 863-863.

86. Greaves, M.F. Molecular genetics, natural history and the demise of childhood leukaemia. / Greaves, M.F II Eur. J. Cancer. 1999. - Vol. 35. - P. 173-185.

87. Greaves F. Origins of chromosome translocations in childhood leukaemia. / F. Greaves and J. Wiemels. I I Nat. Rev., Cancer. 2003. - Vol. 3. -P. 639-649.

88. Gross L. Susceptibility to suckling-infant, and resistance of adult, mice of the C3H and of the C57 lines to inoculation with AK leukemia. / Gross L // Cancer. -1950.-P. 1073-1087.

89. Gross L. Viral (egg-borne) etiology of mouse leukemia. /Gross L. // Cancer. — 1956.-Vol. 9.- P. 778-791.

90. Gruen JR. Evolving views of the major histocompatibility complex. / Gruen JR, Weissman SM // Blood. 1997. - Vol. 90. -P. 4252-4265.

91. Hamilton MS. Selection for histoincompatible progeny in mice. /Hamilton MS, Hellstrom I.// Biology of Reproduction. 1978. - Vol. 19. -P. 267-270.

92. Han R. Linkage of regression and malignant conversion of rabbit viralpapillomas to MHC class II genes. /Hamilton MS, Hellstrom I. // Nature. 1992. i1. Vol. 356. P. 66-68.

93. Harris, D. T. Experience in autologous and allogeneic cord, blood banking. /Harris, D. T. II J. Hematother. 1996. - Vol. 5(2). - P. 123-128.

94. Harrison Ch. The detection and significance of chromosomal abnormalities in childhood acute lymphoblastic leukemia. / Harrison Ch. // Blood Reviews. 2001. -v.15.-p.49-59.

95. Haring V. Self-incompatibility: a self-recognition system in plants Review. / Haring V, Gray JE, McClure BA, Anderson MA, Clarke AE //Science. 1990. -Vol. 250. -P. 937-941.

96. Heinzelmann EW. Cross-reactivity between RSV-induced tumor antigen and B5 MHC alloantigen in the chicken. / Heinzelmann EW, Zsigray RM, Collins WM II Immunogenetics. 1981. - Vol. 13. - P. 29-37.

97. Jin K. Reproductive failure and the major histocompatibility complex. / Jin K, Ho HN, Speed TP, Gill TJI // American Journal of Human Genetics. 1995. -Vol. 56.-P. 1456-1467.

98. Jones JS. Tissue rejection: the price for sexual acceptance. /Jones JS, Partridge L //Nature. 1983. - Vol. 304. -P. 484-485.

99. Jonker M. The major histocompatibility complex: a key to a better understanding of evolution. / Jonker M, Balner H. // Transplantation Proceedings. 1980.-Vol. 12.-P. 575-581.

100. Klein J. Evolution and function of the major histocompatibility complex: facts and speculations. In: Gotze D, ed. The Major Histocompatibility System in Man and Animals. / Klein J. // New York: Springer-Verlag. 1976. - p.339-378.

101. Klein J. The molecular descent of the major histocompatibility complex Review. / Klein J, Satta Y, O'hUigin C, Takahata N. // Annual Review of Immunology. 1993. - v. 11. - p. 269-295.

102. Klein J C. Class II B Mhc motifs in an evolutionary perspective Review./ Klein J, O'hUigin C. // Immunological Reviews. 1995. - Vol. 143. - P. 89-111.

103. Kothe E. Tetrapolar fungal mating types: sexes by the thousands. / Kothe E // FEMS Microbiological Reviews. 1996. - Vol. 18. - P. 65-87.

104. Kupfermann H J. Shared polymorphism between gorilla and human major histocompatibility complex DRB loci. / Kupfermann H, Mayer WE, O'hUigin C, Klein D, Klein J. // Human Immunology. 1992. - Vol. 34. -P. 267-278.

105. Kybo K. HLA antigens in Mycobacterium avium-intracellulare pulmanory infection. / Kybo K., Yamazaki Y., Hanaoka M., Nomura H., et al //Am. J. Respir. Crit. Care -Med. 2000. -Vol. 161. - P. 1368-1371.

106. Lilly F. Genetic basis of susceptibility to viral leukemogenesis. / Lilly F., Boyse EA, Old LJ. // Lancet. 1964. - ii - P. 1207-1209.

107. Lilly F. Genetic control of murine viral leukemogenesis. / Lilly F., Pincus T // Advances in Cancer Research. 1973. - Vol. 17. - P. 231-277.

108. Lardy NM. HLA-DRB4 gene encoded HLA-DR53 specificity segregating with the HLA-DR7, -DQ9 haplotype: unusual association. / Lardy NM, van der Horst AR, van de Weerd M J, de Waal LP, Bontrop RE. // Human Immunology. -1998.-Vol. 59.-P. 115-118.

109. Leen MP. DRB4 promoter polymorphism in DR7 individuals: correlation with DRB4 pre-mRNA and mRNA levels. / Leen MP, Gorski J.// Immunogenetics. -1997.-Vol. 45.-P. 371-378.

110. Lechler R. HLA and Diseases. / Lechler R. // Academic Press, 1994. PP. 223,83-171.

111. Lerner SP. The major histocompatibility complex and reproductive functions, Review./ Lerner SP, Finch CE // Endocrine Reviews. 1991. - Vol. 12. -P. 7890.

112. Little A.-M. Polymorphism and evolution of HLA class I" and II genes and molecules. / Little A.-M and P. Parham // Rev. Immunogenetics. 1999. - Vol. 1. -P. 105-123.

113. Loetscher P. CCR5 is characteristic of Thl lymphocytes. / Loetscher P., Mariagrazia Uguccioni Lorenza Bordoli, Marco Baggiolini, Bernhard Moser, Carlo Chizzolini& Jean-Michel Dayer // Nature. 1998. - Vpl. 391. - P. 344-345.

114. Lundberg AS. Evolution of major histocompatibility complex class II allelic diversity: direct descent in mice and humans. / Lundberg AS, McDevitt HO. // Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 1992. - Vol. 89. -P. 6545-6549.

115. Martinez-Climent J A. Molecular cytogenetics of childhood hematological malignancies. / Martinez-Climent JA // Leukemia. 1997. - Vol. 11(12). - P. 19992021.

116. McSween JM. Restricted genetic heterogeneity in acute lymphocytic leukemia. / McSween JM, Fernandez LA, Eastwood SL, Pyasmary AF // Tissue Antigens. 1980. - Vol. 16. - P. 70-72.

117. Melnick A. Deconstructing a disease: RARa, its fusion partners, and their roles in the pathogenesis of acute promyelocytic leukemia. / Melnick A, Licht JD. // Blood. 1999. - Vol. 93(10). - P. 3167-215.

118. Metzenberg RL. The role of similarity and difference in fungal mating. / Metzenberg RL // Genetics. 1990. - v. 125. - p.457-462.

119. Meruelo D. The biological function of the major histocompatibility complex: hypotheses Review. / Meruelo D, Edidin M. // Contemporary Topics in Immunobiology. 1980. -Vol. 9. - P. 231-253.

120. Moerloose P. HL-A D antigens from B-lymphocytes and susceptibility to certain diseases. / Moerloose P, Chardonnens X, Vassalli P, Jeannet M. // Schweizerische Medizinische Wochenschrift Journal Suisse De Medecine. -1977. - Vol. 107. - P. 1461-1461.

121. Mori, M. HLA gene and haplotype frequencies in the North American population -The National Marrow Donor Program Donor Registry. / Mori, M., P. G. Beatty, M. Graves, K. M. Boucher, and E. L. Milford // Transplantation. -1997. Vol. 64. - P. 1017-1027.

122. Mori H. Chromosome translocations and covert leukemic clones are generated during normal fetal development. / H. Mori, S.M. Colman, Z. Xiao and A.M. Ford et al.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2002. Vol. 99. - P. 8242-8247.

123. Mullis K.BJ Mullis K.B.//US Patent 4683 202, 1985.

124. Muller CA. Significant association of acute lymphoblastic leukemia with HLA- Cw7. / Muller CA, Hasmann R, Grosse Wilde H, et al // Genetic Epidemiology. 1988.- Vol. 5. -P. 453-461.

125. Müller LP. Increased frequence of homozygosity for HLA class II loci in female patients with cronic lymphocytic leukemia. / Müller LP, Machulla HK. // Leuk. Lymphoma. 2002. - May. - Vol. 43(5). - P. 1013-1029.

126. Navarrete C. HLA class I and class II antigen associations in acute leukemias. /Navarrete C, Alonso A, Awad J, et al // Journal of Immunogenetics. 1986. Vol. 13.-P. 77-84.

127. Nowinski RC. Genetic and viral factors influencing the development of spontaneous leukemia in AKR mice. / Nowinski RC, Brown M, Doyle T, Prentice RL. // Virology. 1979. - Vol. 96. - P. 186-204.

128. Ober C. HL A and mate choice in humans. / Ober C, Weitkamp LR, Cox N, Dytch H, Kostyu DD, Elias S // American Journal of Human Genetics. — 1997. -Vol. 61.-P. 497-504.

129. Ober C. Decreased fecundability in Hutterite couples sharing HLA-DR. / Ober C, Elias S, Kostyu DD, Hauck WW // American Journal of Human Genetics. 1992.-Vol. 50.-P. 6-14.

130. Ogasawara M. Mimicry of human histocompatibility HLA-B27 antigens by Klebsiella pneumoniae. / M Ogasawara, D H Kono and D T Yu // Infect Immun. — 1986. Vol. 51(3). - P. 901-908.

131. Oguz FS. HLA system affects the age-at-onset in chronic myeloid leukemia. / Oguz FS, Kalayoglu S, Diler AS, Tozkir H, Sargin D, Carin M, Dorak MT// Am. J. Hematol. 2003. -Vol .73(4). - P. 256-262.

132. Orgad S. HLA-A11 is associated with poor prognosis in childhood acute lymphoblastic leukemia (ALL). / Orgad S, Cohen IJ, Neumann Y, et al. // Leukemia. 1988. - Vol.2. -P. 79S-87S.

133. Palm J. Maternal-Fetal histoincompatibility in rats: an escape from adversity. /Palm J. // Cancer Research. 1974.- Vol. 34. - P. 2061-2065.

134. Partanen J. HLA-linked heat-shock protein 70 (HSP70-2) gene polymorphism and celiac disease. / Partanen J, Milner C, Campbell RD, Maki M, Lipsanen V, Koskimies S. // Tissue Antigens. 1993. - Vol. 41. - P. 15-19.

135. Penn DJ. The evolution of mating preferences and major histocompatibility complex genes. / Penn DJ, Potts WK. // American Naturalist. 1999. - Vol. 153. -P. 145-164.

136. Phillips ML. Class I histocompatibility antigens and insulin receptors: evidence for interactions. / Phillips ML, Moule ML, Delovitch TL, Yip CC.

137. Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 1986. -Vol. 83. - P. 3474-3478.

138. Potts WK. Mating patterns in seminatural populations of mice influenced by MHC genotype. / Potts WK, Manning CJ, Wakeland EK. // Nature. 1991. -Vol. 352.-P. 619-621.

139. Powis SH. What is the MHC? / Powis SH, Geraghty DE.// Immunology Today. 1995. - Vol. 16. - P. 466-468.

140. Rivett A.J. Proteasome function in antigen presentation: immunoproteasome complexes, peptide production, and interactions with viral proteins. / Rivett A.J., Hearn A.R. // Curr. Protein Pept. Sci. 2004. - Vol. 5(3). - P. 153-161.

141. Rocha V. Comparison of outcomes of unrelated bone marrow and umbilical cord blood transplants in children with acute leukemia. / Rocha V., Cornish J., Sievers E. L. et al.// Blood. 2001. - Vol. 97. - P. 2962-2971.

142. Robinson J. Marsh SGE: The IMGT/HKA database. / Robinson J., Waller MJ., McWillam H, Lopez R., Parham P // Nucleic Acids Research. 2009. - Vol. 37. -P. D1013-1017.

143. Van Rood JJ. Leukocyte grouping. A method and its application. / Van Rood JJ, van Leeuwen A. // Journal of Clinical Investigation. 1963. - Vol. 42. - P. 1382-1390.

144. Satta Y J. HLA-DRB intron 1 sequences: implications for the evolution of HLA-DRB genes and haplotypes. / Satta Y, Mayer WE, Klein J. // Human Immunology.-1996.-Vol. 51.-P. 1-12.

145. Snell GD. Studies in histocompatibility. / Snell GD II Science. 1981 - Vol. 213. -P. 172-178.

146. Schreiber AB. Interaction between major histocompatibility complex antigens and epidermal growth factor receptors on human cells. / Schreiber AB, Schlessinger J, Edidin M. // Journal of Cell Biology. 1984: - Vol. 98. - P. 725731.

147. Srivastava PK. Tumour-specific immunogenicity of of stress-induced proteins: convergence of two evolutionary pathways of antigen1 presentation? / Srivastava PK, Heike M // Seminars in Immunology. 1991. - Vol. 3. -P. 57-59."

148. Singal D L. Proliferation of alloantigen sensitized human peripheral blood-lymphocytes by autologous cells associated with the HLA-B8/DR3. / Singal D. P., Fagnilli LII Clin. Exp. Immunol. 1982. - Vol. 49 (3). - P. 652-656.

149. Stiller CA. Childhood cancer in Britain: The national registry of childhood tumours and incidence rates 1978-87. / Stiller CA, Allen MB and Eatock EM. II Eur. J. Cancer. 1995. - Vol. 31 A. - P. 2028-2034.

150. Svejgaard A. Interaction of HLA molecules with non-immunological ligands as an explanation of HLA and disease association. / Svejgaard A, Ryder LP // Lancet. 1976. - ii - P. 547-549.

151. Taylor G. M. Investigators Human Molecular Genetics. / G. M. Taylor' Simon Dearden, Paul Ravetto, Michelle Ayres, Pamela Watson, Adiba Hussain, Mel Greaves, Freda Alexander, Osborn B. //Eden and UKCCS 2002. - Vol. 11(14). -P. 1585-1597.

152. Thomson G. HLA Disease Association: Models for the Study of complex Human Genetic Discords. / Thomson G. // Crit. Rev. Lab. Sciences. 1995. - Vol .32(2).-P. 183-219.

153. Tiwari. HLA and Disease Associations. / Tiwari JL, Terasaki PI // New York: Springer-Verlag. 1985.- Vol. 32. -P. 111.

154. Trowsdale J. Both man & bird & beast: comparative organization of MHC genes Review. / Trowsdale J. // Immunogenetics. 1995. - Vol. 41. - P. 1-17.

155. Vallesi A. Autocrine mitogenic activity of pheromones produced by the protozoan ciliate Euplotes raikovi. / Vallesi A, Giuli G, Bradshaw RA, Luporini P. //Nature. 1995. - Vol .376. - P. 522-524.

156. Vardiman JW. The World Health Organization (WHO) classification of the myeloid neoplasms. / Vardiman JW, Harris NL, Brunning RD. // Blood. 2002. -Vol. 100 (7). - P. 2292-2302;

157. Verreck FA. DR4Dw4/DR53 molecules contain a peptide from the autoantigen calreticulin. / Verreck FA, Elferink D, Vermeulen CJ, et al // Tissue Antigens. 1995. - Vol. 45. - P. 270-275.

158. Villalobos C. Association of HLA class I and leukemia I n mestizo patients of the state of Zulia, Venezuela. / Villalobos C, Rivera S, Weir-Medina J, Hassanhi M, Montiel M, González R //Invest. Clin. 2003. - Dec. Vol. 44(4). - P. 283289.

159. Vjyvjdic S. Distribution of HLA antigens in families of patients with leukemia. / Vjyvjdic S // Medicinski pregled. 2008. -Jan-Feb. - Vol. 61(1-2). - P. 22-26.

160. Vlug A. Genes of the H-2 complex regulate the antibody response to murine leukemia virus. / Vlug A, Schoenmakers HJ, Melief CJ. // Journal of Immunology. 1981. - Vol. 126. - P. 2355-2360.

161. Von Fliedner VE. HLA-DRw antigens associated with acute leukemia. / Von Fliedner VE, Sultan-Khan Z, Jeannet M. // Tissue Antigens. 1980. -Vol. 16. -P. 399-404.

162. Vojvodic S. Association between HLA antigens and leukemia in the population of Vojvodina. / Vojvodic S, Belie B, Popovic S// Med. Pregl. 2001. -Vol. 54(3-4).-P. 128-134.

163. Fliedner VE. Evidence for HLA-linked susceptibility factors in childhood leukemia. / Von Fliedner VE, Merica H, et al.// Human Immunology. — 1983. -Vol. 8. P. 183-193.

164. Walford RL. Acute childhood leukemia in relation to the HL-A human transplantation genes. / Walford RL, Finkelstein S, Neerhout R, Konrad P, Shanbrom E. // Nature. 1970. - Vol. 5231. - P. 461-462.

165. Weissman IL. Allorecognition histocompatibility in a protochordate species: is the relationship to MHC somatic or structural?

166. Weissman IL, Saito Y, Rinkevich B.// Immunological Reviews. — 1990. Vol. 113.-P. 227-241.

167. Wedekind C. MHC-dependent mate preferences in humans. / Wedekind C, Seebeck T, Bettens F, Paepke AJ. // Proceedings of the Royal Society of London -Series B: Biological Sciences. 1995. - Vol. 260. -P. 245-249.

168. Wedekind C T. Non-random fertilization in mice correlates with the MHC and something else. / Wedekind C, Chapuisat M, Macas E, Rulicke T // Heredity. -1996. -Vol. 77.-P. 400-409.

169. Wiemels, J.L., Cazzaniga, G., Daniotti, M., Eden, O.B., Addison, G.M., Masera, G., Saha, V., Biondi, A. and Greaves, M.F // Lancet. 1999. - Vol. 354. -P. 14991503.

170. William D. Hamilton. Innate social aptitudes of man: an approach from evolutionary genetics. / Hamilton William D. // In R. Fox (ed.), Biosocial Anthropology, Malaby Press, London. 1975. P. 133-153.

171. Xu A. Polymorphism in BoLA-DRB3 exon 2 correlates with resistance to persistent lymphocytosis caused by bovine leukemia virus. / Xu A, van Eijk MJ, Park C, Lewin HA // Journal of Immunology. 1993.- Vol. 151.-P. 6977-6985.

172. Zavazava N. MHC and; behavior. /•' Zavazava N, Eggert F. // Immunology Today. 1997.-Vol. 18.-P. 8-10.

173. Zijlstra M. Virology, genetics and immunology of murine lymphomagenesis. Review. / Zijlstra M, Melief CJ. // Biochimica et Biophysica Acta. 1986. - Vol. 865.-P. 97-231.

174. Zinkernagel RM, Doherty PC. Restriction of in vitro T cell-mediated cytotoxicity in lymphocytic choriomeningitis within a syngeneic or semiallogeneic system./ ZinkernagelRM, Doherty PC.//Nature. 1974. - Vol. 248. -P. 701-702.

175. Zinkernagel RM: Cellular immune recognition and the biological role of major transplantation antigens. / Zinkernagel RM // Scandinavian Journal of Immunology. 1997. - Vol. 46. - P. 421 -436.

176. Zinkernagel R. Restriction of in vitro T cell-mediated cytotoxicity Alymphocytic chorio-meningitis within a syngeneic or semiallogeneic system. / Zinkernagel R. M., Doherty P. C // Nature. 1974. - Vol. 248. - P. 701-702.

Информация о работе

Лебедева, Лидия Львовна
кандидата биологических наук
Москва, 2010
ВАК 03.02.07

Диссертация

Генетический полиморфизм антигенов гистосовместимости здорового детского населения Московского региона и при острых лейкозах у детей - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы