Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Генетический и молекулярно-биологический анализ способности плазмиды RP4 наследоваться в широком круге бактериальных хозяев

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Крыстева, Росица Трыпкова

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Н-плазмиды как типичные представители внехромо-сомных наследственных элементов и распространение множественной лекарственной устойчивости

2.Х.I. Роль антибактериальных препаратов в распространении множественной лекарственной устойчивости

2.1.2.К-плазмиды, их свойства и роль в обмене генетической информации

2.1.3. Классификация и структура в-плазмид

2.2. Роль плазмид в половом процессе

2.2.1. Механизм процесса конъюгации

2.2.2. Генетический контроль этапов конъюгационного переноса плазмид

2.3. Репликация и ее связь с несовместимостью плазмид

2.3.1. Плазмидные праймазы и их роль в инициации репликации плазмид и хромосомы

2.3.1.1. Типы праймаз и их свойства

2.3.2. Некоторые аспекты несовместимости плазмид группы Шср.

2.4. Структура и функции плазмид группы 1пср наследующихся в широком круге хозяев

2.4.1. Генетический контроль репликативных функций и стабильности наследования плазмид групп 1пср

2.5. Мигрирующие генетические элементы

2.5.1. Свойства мигрирующих генетических элементов

2.5.1.1. Специфичность внедрения транспозонов

2.5.1.2. Генетический контроль транспозиции . . . •

2.5.1.3. Генетические перестройки, стимулируемые мигрирующими элементами

2.5.2. Транспозоны как инструмент в молекулярно-генетических экспериментах.

3. МАТЕРИМЫ И МЕТОДЫ

3.1. Питательные среды и реактивы.

3.2. Мутагенез с помощью Тп

3.3. Коньюгационные скрещивания . «.

3.4. Стабильность наследования транспозонного маркера

3.5. Исследование несовместимости плазмид

3.6. Изучение супрессии <inaG мутации плазмидным геном рг±*.

3.7. Выделение плазмидной ДНК

3.8« Рестрикционный анализ плазмидной ДНК

3.9. Электрофорез нуклеиновых кислот •

3.10.Электронная микроскопия ДНК

4. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

4.1. Получение мутантов плазмиды RP4 с измененными частотами наследования в s^typbimuriam

4.1.1. Введение Тп5 в геном плазмиды RP4 из хромосомы штамма е.«coli ei

4.1.2. Определение сравнительных частот наследования инсерционных производных плазмиды RP в S.typhimurium и e.coli Kl

4.1.2.I. Перенос мутантных плазмид из донорного штамма AB 5I-II/RP4 а ¿:ап(тп5). • •

- 4

4.1.2.2. Перенос ыутантных плазмид из донорного штамма ЗЬ368£/НР4 А ЬГап(Тп5).

4.1.2.3. Изучение гомогенности популяций штаммов, несущих путанные плазшды.

4.2. Электронно-микроскопический анализ плазыид рНЪЗ, рИЬ4, рИЫ1 и рИЫЗ

4.3. Рестрикционный анализ плазмид риь.

4.4. Генетические доказательства сохранения функции гена зле в плазыидах рыт и рныз

4.5. Генетические доказательства внедрения Тп в ген рг1 плазмиды рИЬ

4.6. Изучение наследования мутантных плазмид в клетках различных бактериальных видов

5. ОБСУЖДЕНИЕ.

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Генетический и молекулярно-биологический анализ способности плазмиды RP4 наследоваться в широком круге бактериальных хозяев"

В настоящее время накоплен большой экспериментальный материал, свидетельствующий о том, что плазмиды как внехроыосомные элементы наследственности играют существенную роль в эволюции бактериальных геномов. В составе плазмидных репликонов передаются и наследуются в различных видах микроорганизмов гены, кодирующие множественную лекарственную устойчивость и устойчивость к солям тяжелых металлов, способность к утилизации углеводов и гены, определяющие факторы патогенности. Этот факт объясняет все более частые случаи возникновения штаммов возбудителей бактериальных инфекционных заболеваний, лечение и профилактика которых сильно затруднены.

Детальное изучение плазмид представляет как теоретический, так и практический интерес в области эпидемиологии и здравоохранения.

В связи с этим все более актуальным становится вопрос об изучении механизмов распространения плазмид в бактериальных популяциях и генетического контроля этих процессов; Существует большой класс плазмид, принадлежащих к группе несовместимости Incp способных передаваться и стабильно наследоваться практически во всех видах семейства Enterobacteriaceae и в представителях некоторых других семейств. В силу космополитизма и конъюгативности плазмид группы Incp они способны обеспечивать генетический обмен, включая распространение лекарственной устойчивости и других признаков, среди неродственных видов бактерий.

Однако, генетические основы космополитического характера наследования плазмид группы Incp все еще не достаточно изуче-- ны. Согласно недавним исследованиям Lanka и Barth (1981) способность плазмид групп - incl и incP наследоваться в представителях различных родов зависит от активности особого.вида РНК-полимеразы-праймазы.Нарушение структуры прашазного гена,привводит к сшшению частоты наследования мутантных плазынд в Salmonella typhimurium Proteus mirabilis,Klebsiela aerogenes Providencia sp.Очевидно, прайглаза необходима как для передачи плазмидной ДНК при конъюгации, так и для поел едущих этапов репликации в реципиенте.

Исследования по изучению плазмид в широком спектре хозяев проводила группа авторов под руководством J.shapiro (1969).Они показали, что в геноме мультикопийной плазмиды R1162 наследующейся в широком круге хозяев,существуют гзны,необходимые для стабильного наследования плазмиды в Е.colin Pseudomonas putida.Таким образом эти немногочис ленные данные свидетельствуют о том,что плазмиды содержат в своем составе гены,продукты которых контролируют процесс их наследования в различных видах микроорганизмов.

Целью настоящей работы было выяснение генетического контроля космополитического характера наследования пллазмиды rp4 группы IncP.

Для достижения этой цели в работе были поставлены следующие задачи:1) выделение мутантов плазмиды RP4 с измененными частотами насле*дования при конъюгации в S.typhimurium по сравнению с е.coliÎ2) физическое картирование полученных мутаций в геноме плазмиды;3) изучение свойств полученных мутантов;4) изучение наелледования мутантных плазмид в различных видах микроорганизмов.. Научная новизна работы: Используя в качестве мутагенного*. В дальнейшем процесс наследования плазмид при конъюгации мы будем называть наследованием.агента Тп5 выделены инсерционные мутанты плазмиды ИР4 которые с пониженной частотой передавались и наследовались при конъюгации в БуЬурЫлиЛЗ.ит По сравнению с Е-соИ К12«В одной из мутантных плазмид ( р**Ь4 )тп5включен в район гена рм.; в остальных случаях транспозон встроен в 5 различных областей генома плазмиды КР4. в этих районах локализуются детерминанты, ответственные за несовместимость, процессы репликации и конъюгации.

Наши данные позволяют утверждать, что внедрение Тп5 в ген рг1 нарушает функцию праймазного гена.

Установлено также, что полученные внедрения Тп5 в район гена ¿пс в плазмидах ркьп и рНЫЗ не нарушает функции этого гена, но снижают частоту наследования плазмид в Б^урЬхтигаитОбсуждается возможная роль других генов в процессах конъюга-ционной передачи и стабильного наследования плазмид в представителях различных бактериальных видов.

Практическое значение работы: Новые плазмиды, производные плазыиды ИР4 могут быть использованы для проведения фундаментальных исследований на разных бактериальных объектах.

Впервые идентифицированы новые районы генома плазмиды ИР4 которые контролируют способность плазмиды наследоваться в представителях различных видов микроорганизмов. От сохранения этих районов в ходе генно-инженерных манипуляций с плазмидами группы 1пср зависит и сохранение их космополитизма. В связи с этим полученные данные необходимы для прикладных биотехнологических исследований с плазмидами группы. Кроме того, локализация районов, контролирующих космополитический характер наследования КР4, необходима для конструирования челночных векторов на основе этой плазмиды.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Крыстева, Росица Трыпкова

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что способность плазмиды RP4 ( incp) наследоваться в представителях родов Salmonella, Shigella, Citrobac-ter, Klebsiella, Providencia при их скрещивании с донорами E.coii детерминирована генами, находящимися в различных районах генома плазмиды.

2. Гены, контролирующие способность плазмиды ДР4 наследоваться в широком круге бактериальных хозяев, инактивируются внедрениями с координатами у pKL9 - 0,8 т.п.н.; у рЕЪЗ - 3,3 т.п.н.; урКЫ 2,13 - 9,2 т.п.н.; у pRL7 - 9,7 т.п.н.; ypRLio, 11 - 11,2 т.п.н.; у PKL4 - 38,0 т.п.н. (Координаты определены с помощью гетеродуплексного и рестрикционного анализа).

3. Нарушение функции ллазыидного гена pri , кодирующего ДНК-праймазу, приводит к наиболее выраженному снижению частоты наследования ДР4 в микроорганизмах различных видов. ДНК-прайма-за, кодируемая плазыидой RP4 , необходима для наследования при конъюгации в тех случаях, где в качестве реципиентов используются представители родов бактерий, перечисленных в выводе № I, и, в значительно меньшей мере, - в случае реципиента E.coii К12.

Снижение частоты наследования pri" плазмиды pRL4 обусловлено нарушением одного из этапов конъюгации после вхождения до-норной ДНК в клетку реципиента.

5. Внедрения 1п5 в район гена inc снижают частоту наследования плазмид рНЫО,11 и pRLi2,i3 , но не нарушают функций гена inc •

6. Снижение частоты наследования плазмид рвъз , pRL7 , pRL9» pEL10, 11 , pHL12, 13» в скрещиваниях E.coii X S.typhimurium обусловлено нарушением одного из этапов коньюгационного взаимодействия, характерного для межродовых скрещиваний этого типа.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Крыстева, Росица Трыпкова, Москва

1. Бабыкин М.М., Дубейковски А.Н., Зинченко В.В. Экспресс методы выделения плазмидной ДНК. Тезисы докладов У Всесоюзного совещания по программе "Плазмида". 1980, 21 с.

2. Ильина Т.С., Нечаева Е.В., Беликов Н.Г., Смирнов Г.Б.Специфичность внедрения в хромосому Escherichia coli El 2 транспозо-на, определяющего устойчивость к хлорамфениколу ( т»9 ). Генетика, 1978, т.14, № 12, с. 2071-2081.

3. Ильина Т.е., Романова Ю.М., Нечаева Е.В., Смирнов Г.Б. Генетическое изучение мутаций Escherichia coli El2 , влияющих на процесс транспозиций. Генетика, 198I, т.17, № I, с. 33-45.

4. Ильина Т.С., Смирнов Г.Б. Мигрирующие генетические элементы и их роль в эволюции бактерий. "Итоги науки и техники. ВИНИТИ АН СССР. Сер. Микробиология". 1979, т.100, с. 99-153.

5. Миллер Ок. Эксперименты в молекулярной генетике. Изд. "Мир", 1976, 436 с.

6. Нечаева Е.В., Захаренко В.И., Буйвид В.А., Смирнов Г.Б. Изучение механизма мобилизации плазмид ColEi и рМВ-9 плазмидой . F'lac* у Escherichia coli Е12 . Генетика, 1979, т. ХУ, № 12, с. 2108-2118.

7. Саканян В.А., Алиханян С.И., Якубов JI.3., Степанов А.И. Выделение нетрансмиссибельных делеционных вариантов и генетическая карта плазмиды pass (RP4-CoiEi) Генетика, 1977, т.13, № 10, с. 1778-1789.

8. Саканян В.А., Крупенко М.А., Рябченко Л.Е., Пермогоров В.И., Алиханян С.И. Контроль плазмидной несовместимости: характеристика двурепликонного гибрида pAS8 и его делеционных мутантов. Генетика, 1979, т. 15, № б, с. 972-988.

9. Саканян В.А., Якубов JI.3., Алиханян С.И., Степанов А.И. Генетический и гетеродуплексный анализ делеционных мутантов плаз-миды PAS8 . Генетика, 1978, т. 14, te 5, с. 853-865.

10. Сафарян B.C., Носиков В.В., Поляновский O.JI., Мякинин В.Б., Степанов А.И. Участки узнавания и рестриктаз Bam Hl, sali, Smat на ДНК плазмиды RP4 . Доклады АН СССР, 1978, т. 238, с.740-743.

11. Смирнов Г.Б. Генетическая и молекулярная организация оперонов токсигенность Escherichia coli и vibrio cholerae и механизмы антитоксического иммунитета. Молекулярная генетика микробиология и вирусология. 1984а, Ш 12, с. 3-16.

12. Смирнов Г.Б. Роль плазмид и мигрирующих генетических элементов в эволюции бактерий. Успехи микробиологии", Изд."Наука", 19846, т.19, с.35-74.

13. Смирнова Н.И., Ерошенко Г.А., Ильина Т.С., Смирнов Г.Б. Генетическое картирование хромосомы холерного вибриона с помощью конъюгации. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология, 1983а, № 5, с. 17-22.

14. Смирнова Н.И., Ерошенко Г.А., Ильина Т.О., Смирнов Г.Б. Создание донорных штаммов холерного вибриона с помощью плазмид pNSlO (RTS1::Шп10) и Rpl . Молекулярная генетика, микробиология и вирусология, 19836, № 4, с. 23-26.

15. Смирнова Н.И., Ильина Т.О., Смирнов Г.Б. Первичное картирование локуса Оад, детерминирующего синтез соматического О-ан-тигена, на хромосоме vibrio eitor. Генетика, 1982, te 10,с. I595-I60I.

16. Степанов А.И. Организация геномов плазмид RP4 и ибк и эксперименты по генной инженерии Bacillus subtilis . Автореферат дисс. на соискание ученой степени докт.биол.наук. Москва, 1979.

17. Степанов А.И., Зимина М.С., Хлебалина О.И., Рабинович О.И., Бебуров М.Ю., Дебабов В.Т. Трансмиссибельная гибридная плаз-мида RP4-Col1L. Генетика, 1976, т. 12, te II, с. 162-164.

18. Урлапова С.В. Генетический контроль автономного наследования плазмиды RP4 в клетках Escherichia coli К12, Автореферат дисс. на соискание ученой степени канд. биол. наук. Москва, 1980.

19. Хесин Р.Б. Непостоянство генома. Изд. "Наука", 1984, 472 с.

20. Akiba Т., KoyamaK., Ishiki I., Kimura S., Fukushima Т. On the mechanism of the development of multiple drug-resistant clones of Shigella. 1960,Japan,J.Microbiol., 1960,v.4, p.219-224.

21. Arthur A., Sherratt D. Dissection of the transposition process; A transposon-encoded site-specific recombination system. Mol. Gen.Genet. 1979, v.175, p.267-274.

22. Barth P.T. RP4 and R300B as wide host-range plasmid cloning vehicles. In "Plasmid of Medical, Environmental and Commercial Importance" (K.N.Timmis, and A.piihler, eds). Elsevier/North-Holland; Amster dan/New York. 1979, p.399-410.

23. Barth P.Т., Grinter N.J. Map of plasmid RP4 by insertion of transposonC. J.Mol.Biol. 1977, v.113, № 3, p.455-474.

24. Barth P.Т., Grinter N.J. Bradley D.E. Conjugal transfer system of plasmid RP4: analysis by transposon 7 insertion. J.Bacterid. 1978, v.133, №1, p.43-52.

25. Bedbrook J.R., Lehrach H., Ausubel P.M. Directive segregation in the basis of ColEl plasmid incompatibility. Nature (London) 1979, v.281, p.447-452.

26. Bennett P.M., Grinsted J., Chou C.L., Richmond M.A. Characterization of Tn501, a transposon determining resistance to mercuric ions. Mol.Gen.Genet. 1978, v.159, № 1, p.101-119.

27. Benz E.W., Reinberg Y.D., Vacuna R., Hurwitz Y. Initiation of DNA replication by the dna G protein. J.Biol.Chem. 1980, v.255, is 3, p.1096-1106.

28. Berg D., Davies J., Allett B., Rochaix J .D., Transposition of Rfactor genes to bacteriophage lambda. Proc.Nat.Acad.Sci. USA, 1975, v.72, p.3628-3632.

29. Beringer J.G. R factor transfer in Rhizobium leguminosarum. J.Gen.Microbiol. 1974, v.84, p.188-198.

30. Beyersman D., Messer W., Schlicht M. Mutants of Escherichia coli B/r defective in deoxyribonucleic acid initiation: dnal, a new gene for replication.J.Bacteriol 1974,v.118,p.780-783.

31. Bouche J.P., Rowen I, Kornberg A. The RNA primer synthesized by primase to initiate phag G4 DNA replication. J.Bid.Chem. 1978, v.253, p.765-769.

32. Bouche J.P., Lechel K., Kornberg A. GnaG gene product a ri^am-piein resistant RNA polymerase, initiated the conversion of ajingle-stranded coliphage DNA to its duplex replicative form. J.Biol. Chem., 1975, v.250, p.5995-6001.

33. Boulnois G.J., Wilkins B.M. A novel priming system for conjugal synthesis of en Intld plasmid in recipients. Mol.Gen.Ce-net. 1979. v.175, p.275-279.

34. Boulnois G.J., Wilkins B.M., Zanka E. Overlapping genes at the ША primase locus of the large plasmid Coll. Nucleic Acids Res. 1982, v.10, p.855-869.

35. Bradley D.E. Morphological and serological relationships of conjugative pili. Plasmid, 1980, v.4, p .155-169.

36. Braaley D.E., Cohen D.R. Adsorption of lipid-containing bacteriophages RP4 and PRD1 to pili determined by a P-1 incompatibility group plasmid. J.Jen.Microbiol.1977, v.98, p.619-623.

37. Brutlag D., Schekman R., Kornberg A. A possible role for RUA polymerase in the initiation of M13 ША synthesis. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1971, v.68, p.2826-2829.

38. Bryan L.E., Semaka H., van den Elzen H. Characteristics of R931 and other Pseudomonas aeruginosa R factors. Antimicrob. Agents Chemother. 1973, v.3, p.625-637.

39. Burkhardt H., Riess G., Puhler A. Relationship of group P1 plasmids revealed by heteroduplex experiments RPl, RP4, R68, and RK2 are identical. J.Gen.Microbiol. 1979, v.114, p.341-348.

40. Calos M.P., Johnsrud L., Miller J.H. DNA sequence at the integration sites of the insertion elements IS1. Cell. 1978, v.13, p. 411-418.

41. Calos M.P., Miller J.H. Eransposable elements. Cell. 1980, v.20, № 3, p.579-595.

42. Carl Р.Ь. Escherichia coli mutants with temperature sensitive synthesis of DNA. Mol.Gen .Genet., 1970, v.109, p .107-122.

43. Chadwell H., Fritz H.J., Habermann P., Klear R., Starlinger P. Studies with IS1 and IS4. Cold Spring Harbor Symp. Quant.Biol., Cold Spring Harbor, N.Y., 1979, v.43, № 2, p.1187-1192.

44. Chan R.K., Botstein D., Watanabe Т., Ogata Y. Specialized transduction tetracycline resistance by P22 in Salmonella typ-himurium. II. Properties of a high frequency transducing lysate. Virology, 1972, v. 50, p.883-898.

45. Chatfield L.K., Orr E., Boulnois G.J. Wilkins B.M. DNA primase of plasmid Collb is involved in conjugal ША synthesis in donor and recipient bacteria. J.Bacterid. 1982, v.152, v.152, В 3, p.1188-1195.

46. Cohen S.N. Transposable genetic elements and plasmid evolution. Nature (London) 1976, v.263, $ 5580, p.731-738.

47. Cornelis G., Ghosal D., Saedler H. Tn951: a new transposon carrying a lactose operon. Mol.Gen.Genet. 1978, v.160, JS 2, p. 215-224.

48. Cowan P., Krishnapillai V. Tn7 insertion mutations affecting the host range of promiscuous Incp-1 plasmid RIS. Plasmid 1982, v.8, p.164-174.

49. Csonka L.N., Clark A.J. Deletions generated by the transposon Tn10 in the recA srl region of the Escherichia coli E12 chromosome. Genetics.1979, v.93, p.321-332.

50. Dbrymple B.p., Boulnois G.J., Wilkins B.M., Jrr E., Williams P.H. Evidence for two genetically distenet DNA primase activities specified by plasmids of the В and I incompatibility-groups. J.Bacterid. 1982, v.151, ls1, p.1-7.

51. Dalrymple B.p., Williams P.H. Detection of primase specified by IncB plasmid R864a. J.Bacterid.1982, v 352, .^2, p. 901-903.

52. Datta N. Classification of genes among the groups. In Microbial drug resistance (Mitsuhashi S., Hashimiti N., eds). University of Tokyo press., 1975, p. 83-91.

53. Datta N. Transmissible drug resistance in an epidemic strain of Salmonella typhimurium. I.Hyg. 1962, v. 60, p.301-311.

54. Datta N., Hedges R.W. Compatibility groups among fi~ R factors. Nature (London) 1971, v.234, p. 222-223.

55. Datta N., Hedges R.W. Host range of R factors. I.Gen. Microbiol. 1972, v. 70, p. 453-460.

56. Datta N., Hedges R.W., ShawE.C., Sykes R.B., Richmond M.H. Properties of on R factor from Pseudomonas aeruginosa. J.Bac-teriol. 1971, v.108, Jl 3, p.1244-1249.

57. Datta N., Hugnes V.M., Nugent M.E., Richards H. Plasmids and transposons and their stability and mutability in bacteria isolated on outbreak of hospital ingection. Plasmid. 1979, v.2, J& 2, p.182-189.

58. Davey R.B., pittard J. Plasmids mediating resistance to gen-tamicin and other antibiotics in Enterobacteriaceae from four hospitals in Melbourne. Aust.J.Exp.Biol.Med.Sci. 1977, v.55, p.299-306.

59. Davies R.W., Botstein D., Roth J.R. Advanced Bacterial Genetics. New York. 1980.

60. Davies R.W., Simon M., Davidson N. Electron microscope hetero-duplex methods for mapping regions of base sequence homology in nucleic acids, bii Methods in enzymology (Grossman L.,

61. Molctave K., eds) N.Y.: Academic press, 1971, v.21, D.p.413.

62. Deonier R.C., Habley R.G., Hu M. Eaumeration and identification of IS3 elements in Escherichia coli stains. J.Bacteriol., 1979, v.137, B 3, p.1421-1424.

63. Depicher A., Van Montagu M., Schell J. Physical map of RP4. In "DNA insertion elements, plasmids, and episomes" (Bukhari A.I., Shapiro J.A., Adhya S.L., eds) Cold Spring Harbor Labor., Cold Spring Harbor., N.Y. 1977, p.678-679.

64. Falkow S. Infections multiple drug resistance. Pion Limited, London 1975, 300 p.

65. Figurski D.H., Helinski D.r., Replication of an origincontai-ning derivative of plasmid RK2 dependent on a plasmid function provided in trans. Proc.Nat.Acad.Sei USA 1979, v.76, $4,p.1648-1652.

66. Figurski D.H.,Meyer R.J., Helinski D.R. Suppression of ColEI replication properties by the IncP-1 plasmid RK2 in hybrid plasmid constructed in vitro. J.Mol.Biol. 1979,v.133,p.295-318.

67. Figurski D.H., Meyer R.J., Miller D.S., Helinski D.R. Generation in vitro of deletions of the broad host range plasmid RK2 using phage Mu insertions and a restriction endonuclease. Gene. 1976, v.1, p.107-119.

68. Figurski D.H., Pohlman R.F., Bechhofer D.H., Princ A.S., Eel-ton C.A. The broad host range plasmid RK2 encodes multiple kil genes potentially lethal to Escherichia coli host cells. Proc. Nat.Acad.Sei. USA, 1982, v.79, p.1935-1939.

69. Grinsted J., Saunders J.R., Ingram C.L., Sykes R.B., Richmond M.H. Properties of an Rfactor which originated in Pseudomonas aeruginosa 1822. J.Bacteriol.1972, v.110, № 2,p.529-537.

70. Grinter N.J. Replication control of IncP plasmids. Plasmid 1984, v.11, I 11, p.74-81.

71. Haberman P., Klear R., Kuhn S., Starlinger P. IS4 is found between eleven or twelve base pair duplication. Mol. Gen. Genet. 1979, v.175, p.369-373•

72. Hahn E.F. Chematography of bacterial plasmids. Naturwissenschaften. 1979, v.66, p.555-562.

73. Hirota Y., Morden, Scheffler I., Jacob P. Genetic approach to DNA replication and its control in Escherichia coli. Ped.Proc. 1972, v.31, p.1422-1427.

74. Hirsch H., Starlinger P., Brochet P. Two kinds of insertions in bacterial genes. Mol. Gen. Genet. 1972, v.119, p.191-206.

75. Holloway B.W. Plasmids that mobiliz bacterial chromosome. Plasmid 1979, v.2, J& 1, p.1-19.

76. Holloway B.W. Richmond M.H. R factor used for genetic studies in strains of Pseudomonas aeruginosa and their origin. Genet. Res. 1973, v.21, p.103-105.84P Howe M.M., Bade E.G. Molecular biology of bacteriophage Mu.- 103

77. Science, 1975, v.190, p.624-632.

78. Hu S., Deonier R.C. Mapping of IS1 elements flanking the argF gene region on the Escherichia coli K12 chromosome. Mol.Gen.Genet 1981, v.181, B 2, p.222-229.

79. Hu S., Ohtsubo E., Davidson N., Saedler H. Electron mierosco-pic heteroduplex studies of sequence relations among bacterial Plasmids; identification and mapping of IS1 and IS2 in F and R Plasmids. J.Bacteriol. 1975, v.122, № 2, p.764-775.

80. Iida S.A cointegrate of the bacteriophage Pi genome and the conjugative R plasmid R100. Plasmid 1980, v.3, p.278-281.

81. Ingram L., Richmond M.H., Sykes R.B. Molecular characterization of the R-factors implicated in the carbenicillin resistance of a sequence of Pseudomonas aeruginosa strains isolated from burns. Antimier. Agents and Chemother. 1973, v.3, 2,p.279-288.

82. Isberg R.R., Syvanen M. Replicon fusion promoted by the inverted repeats of Tn5. The right repeat is an insertion sequence. J.Mol.Biol. 1981, v.150, JM, p.15-32.

83. Jordan E., Saldler H., Starlinger P. 0°-and strong-polar mutations in the gal operon are insertions. Mol.Gen.Genet. 1968, v. 102, p. 353-363.

84. Jorgenson R.H., Rothstein S.J., Reznikoff W.S. A restriction enzyme cleavage map of 2h5 and location of a region encoding neomycin resistance. Mol. Gen. Genet. 1979, v. 177, 1,p. 65-72.

85. Kado C.I., Liu S.-T. Rapid procedure for detection and isolation of large and small plasmids. J.Bacteriol. 1981, v. 145, J'B, p. 1365-1372.

86. Kitamoto 0., Kasai N., Fukaya K.,Kav/ashima A. Drug sensitivityof the Shigella strains isolated in 1955. J.Japan

87. Assoc. Infect. Diseases, 1956, v. 30, p. 403-415.

88. Klaer R., pfeifer D., Starlinger P. IS4 is still found at its chromosomal site after transposotion to gal T. Mol. Gen. Cenet. 1980, v. 178, № 2, p. 281-284.

89. Klaer R., Starlinger P. IS4 at its chromosomal site in E.coli K12. Mol. Gen. Genet. 1980, v. 178, p.285-291.

90. Kleckner N. Eransposable elements in prokaryotes. Ann. Rev. Genet. 1981, v. 15, p. 341-404.

91. Kornacki J.A., West A.H., Firshein W. proteins encoded by the trans-acting replication and maintenance regions of broad host range plasmid HE2. Plasmid 1984, v. 11, tè 1, p. 48-57.

92. Kuempel P. Temperature-sensitive initiation of chromosomal replication in a mutant of Escherichia coli. J.-Bacterid. 1969,v. 100, p. 1302-1310.

93. Lacatena R.N., Cesarni G. Base pairing of MA I with its complementary sequence in the primer precursor inhibits Col EI replication. Nature (London), 1981, v. 294, p. 623-626.

94. Laird A.J., Young I.G. 0ii5 mutagenesis of the enterochelin gene cluster of Escherichia coli. Gene, 1980, v. 11, p. 359-366.

95. Lanka E., Barth P.T. Plasmid RP4 specifies a deoxyribonucleic acid primase involved in its conjugal transfer and maintenance. J.Bacterid. 1981, v. 148, & 3, p. 769-781.

96. Lanka E., Lurz B., Kroger M., Furste J.P. plasmid RP4 encodes two forms of a BJA primase. Mol.Gen.Genet. 1984, v. 194,1. Jê 1/2, p. 65-72.

97. Lanka E., Scherzinger E., Gunter E., Schuster H. A IN A primase specified by I-like plasmids. proe. Natl. Acad. Sei. USA 1979, v. 76, & 8, p. 363^-3636.

98. Lark E.G. Evidence for the direct involvement of RffA in the initiation of ENA replication in Escherichia coli 153T.

99. J.Mol. Biol. 1972a. vl 64, p. 47-60.

100. Lark K.G. Genetic control over the initiation of the synthesis of the short deoxynucleotide chains in Escherichia coli. Nature, London. 1972b, v. 240, № 103, p. 237-240.

101. Leemans J., Villarroel, Silva В., Van Montagy M., Schell J. Direct repetition of a 1,2 Md DNA sequence is involved in site-specific recombination by the P1 plasmid R68. Gene,1980, v.10, & 4, p.319-328.

102. Lichtenstein C., Brenner S. Site-specific properties of Tn7 transposition into the Escherichia coli chromosome. Mol.Gen Genet. 1981, v.183, p.380-387.

103. Malamy M., Fiandt M., Szybalski W. Electron microscopy of polar insertions in the lac operon of E.coli. Mol.Gen.Genet. 1972, v.119, p.207-222.

104. Maniatis Т., Fritsch E.F., Sambrook I. Molecular cloning. New York. 1982.

105. Maturin Ii.J., Curtiss III R. Role of ribonucleic acid synthesis in conjugational transfer of chromosomal and plasmid deoxyribonucleic acid. J.Bacteriol. 1981, v.146, p.552-563.

106. Meyer R.J. Expression of incompatibility by derivatives of the broad host range incp-1 plasmid RK2. Mol. Gen.Genet. 1979, v.177, p.155-161.

107. Meyer R.J., Figurski D., Helinski D.R. physical and genetic studies with restriction endonucleases on the broad host-range plasmid RK2. Mol.Gen.Genet. 1977, v.152, p.129-135.

108. Meyer R., Helinski D.R. Unidirectional replication for the P-group plasmid RK2. Biochim.Biophys. Acta, 1977, v.478, p.109-113.

109. Meyer R., Hinds M. Multiple mechanisns for expression of incompatibility by broad-host-range plasmid RK2 J.Bacteriol., 1982, v.152, p.1078-1090.

110. Meyer R., Zaux R., Boch G., Hinds M., Bayly R., Shapiro J.A. BroacUhost-range IncP4 plasmid R1162; Effects of deletions and insertions on plasmid maintenance and host rang. J.Bacteriol.- 107 -1982, v.152, p.140-150.

111. Mitsuhashi S. Drug resistance plasmids. Mol.Cellular biochemistry 1979, v.26, $ 3, p.135-139.

112. Nisen p., purucker M., Shapiro J. Deokyribonucleic acid sequence homologies among bacterial, insertion sequence elements and genomes of various organisms. J.Bacteriol. 1979, v.140,1. B 2, p.588-596.

113. Novick R.P. The molecular basis of the plasmid state. In. Extrachromosomal inheritance in bacteria (Hertman I. et al., eds). Contr.Microbial.Immunol., v.6, Karger, Basel, 1979,p.1-15.

114. Olsen R.H., Shipley P. Host range and properties of the Pseudomonas aeruginosa R factor R1822. J.Bacteriol. 1973» v.113»p. 772-780.

115. Ohtsubo H., Ohtsubo E. Isolation of inverted repeat sequences including IS1, IS2 and IS3» in Escherichia coli plasmids Proc. Natl.Acad. Sei. USA, 1976, v.73, p.2316-2322.

116. Ohtsubo H., Ohtsubo E. Nucleotide sequence of an insertion elements, IS1. Proc.Nat. Acad.Sei. USA, 1978, v.75, JM ,p.615-619.

117. Pohlman R.F., Eigurski D.H., Conditional lethal mutants of the kil B determinant of broad host range plasmid RK2. Plasmid, 1983a, v.10, p.82-95.

118. Pohlman R.E., Figurski D.H. Essential genes of plasmid RK2 in Escherichia coli; trfB region controls a kil gene near trfA. J. of Bacterid, 1983V» v.156, J£ 2, p.584-591 .133« Pritchard R.H. Control of DNA replication in bacteria. In:

119. Malineux I, Kohiyama M (eds) DNA synthesis present and future. Plenum press, New York, London, 1978, p.1-26.

120. Ravetch J., Ohsumi M., Model P., Vovis 6., Eischoff D., Zin-der N. Organization of a hibrid between phage f^ and plasmid pSOI01. Proc. Nat.Acad.Sci, USA, 1979, v.76, p.2195-2198.

121. Reed R., Young R., Steitz J.A., Grindey N., Guyer M. Transposition of the Escherichia coli insertion elements fy- b generates a five base pair repeat. Proc .Nat .Acad. Sci. USA, 1979, v.10, p.4882-4886.

122. Reif H.I., Saedler H. IS1 is involved in deletion formation in the gal region of E.coli K12. Mol.Gen.Benet. 1975, v.137, N 1, p.17-28.

123. Rhothstein S.J. Jorgensen R.A., Postle K., Reznikoff W.S. The inverted repeats of Tn5 are functionally different. Cell, 1980, v.19, p.795-805.

124. Ross D.G., Swan J., Kleckner N. Physical structures of Tn10 promoted deletions and inversions: role of 1400 bp inverted repetitions. Cell 1979, v.16, p.721-731.

125. Rothstein S.J., Resnikoff W.S. The functional differences in the inverted repeats of Tn5 are caused by a single base pair- 109 nonhomology. Cell 1981, v.23, p.191-199.

126. Rowen L., Kornberg A. Primase, the etna G protein of Escherichia coli. J.Biol.Chem., 1978, v.253, p.758-764.

127. Sasakawa C., yoshikawa M. Requirement for suppression of a dna G mutation by an I-type plasmid. J.Bacteriol. 1978, № 2, JM33, p.485-491.

128. Schmidhauser T.J., Filutowicz M., Helinski D.R. Replicationof derivatives of the broad host range plasmid RK2 in two dis-tanetly related bacteria. Plasmid. 1983, v.9, B 3, p.325-330.

129. Shapiro J. Mutation caused by the insertion of genetic mate-riali into the galactose operon of E.coli. J.Mol.Biol. 1969, v.40, J? 1, p.93-105.

130. Shapiro J. Molecular model for the transposition and replication of bacteriophage Mil and other transposable elements. Proc .Nat.Acad.Sei USA, 1979, v.76, p.1933-1937.

131. Shapiro J.A., Sporn P. Tn402; a new transposable element determining trimethaprim resistance that inserts in bacteriophage lambda. J.Bacteriol. 1977, v.129, JS 3, p.1632-1641.

132. Shaw K.J., Berg C.M. Escherichia coli K12 autotrophs induced by insertion of the transposable element Tn5. Geneties, 1979, v.92, p.741-747.

133. So M., Heffron P., McCarthy B. The E,coli gene encoding heat stable ioxin is a bacterial transposon flanked by inverted repeats of IS1. Nature, London, 1979, v.277, p.453-456.

134. Stalker D.M., Thomas C.M., Helinski D.R. Nucleotide sequenceof the region of the origin of .of replication ofthe broad host range plasmid RK2. Mol.Gen.Genet, 1981, v.181, № 1, p.8-12«

135. Stanisich V.A., Bennett P.M., Richmond M.H. Characterisation of a translocation unit encoding resistance to mercurie ions that occurs on a nonconjugative plasmid in Pseudomonas aeruginosa. J.Bacteriol. 1977, v.129, p.1227-1288»

136. Stanisich V.A., Holloway B.W. Chromosome transfer in p. aeruginosa mediated by R-factors. Genet.Res., 1971, v*17, J6 2,p.169-172»153« Starlinger P. IS elements and transposons. Plasmid, 1980, v.3, № 3, p.241-259.

137. Starlinger P., Saedler H. IS elenents in microorganisms. Curr. Top.Microbiol. Immunol., 1976, v.75, p.111-115.

138. Stokes H.W», Moore R.J», Ifcishnapillai V. Complementation analysis in Pseudomonas aeruginosa of the transfer genes of the wide host range R plasmid R18. plasmid 1981, v.5, p.202-212.

139. Thomas C.M. Complementation analysis of replication and maintenance funetions of broad host range plasmids RK2 and RP1. Plasmid 1981a, v.5, № 3, p.277-291 .

140. Thomas C.M. Instability of a high-copy-number mutant of a mini-plasmid derived from broad host range IncP plasmid RK2. Plasmid, 1983, v.10, J® 2, p.184-195.

141. Thomas C.M. Molecular genetics of broad host range plasmid RK2. Plasmid, 1981b, v.5, p.10-19.

142. Tomizawa J.I., It oh T. Plasmid ColEI incompatibility determined by interaction of RNA I with primer transcript. Proc. Nat.Acad.Sei. USA, 1981, v.78, p.6096-6100.

143. Tomizawa J.I., Itoh T., Selzer G., Som T. Inhibition of Col

144. Tu Ch.-P.D., Cohen S.N. Translocation specificity of the Tn3 element: characterization of sites of multiple insertions;. Cell 1980, v.19, p.151-160.

145. Vapnek D., Lipman M.B., Rupp W.D. phisical properties and mechanism of transfer of R factors in Escherichia coli. J.Bacteriol. 1971, v.108, p.508-514.

146. Watanabe T. Infective heredity of multiple drug resistance in bacteria. Bacteriol. Rev. 1963, v.27, p.87-91.

147. Watanabe T.M.B. The origin of R factors. Am. of the N.Y. Acad. Sei. 1971, v.182, p .126-140.

148. Weinstock G.M., Botstein D. Regional specifity of illigiti-mate recombination associated with the translocatable ampi-cillin-resistance clement Tn1. Cold Spring Harbor Symp. Qunt. Biol, 1979, v.43, p.1209-1215•

149. Wickner S., Wright M., Hurwitz J. Studies on in vitro DNA synthesis. Purification of the dnaG gene product from Escherichia coli.Proc .N at. Acod. Sei .USA, 1973,v.70,№ 5, p .1613-1618.

150. Wilkins B.M. Partial suppression of the phenotype of Escherichia coli K12 dnaG mutants by some I-line conjugative plasmids. J.Bacterid. 1975, v.122, p.899-904,.

151. Wilkins B.M., Boulnois G.J., Lanka E. A plasmid DHA primase active in discontinuous bacterial DNA replication. Nature, London, 1981, v.290, p.217-221.

152. Wilkins B.M., Hollom S.E. Conjugational synthesis of Flac+ and Col I DNA in the presence of rifampicin and in Escherichia coli ЕП2 mutants defective in DNA synthesis. Mol.Gen.Genet. 1974, v.134, p.143-156.

153. Willetts N.S., Shurray R. The conjugation system of P.like plasmids. Ann.Rev.Genet. 1980, v.14, p.41-76.

154. Wolf R.E. Integration of specialized transducing bacteriophage fi с 1857St68h80 dg nd his by unusual pathway promotes formation of deletions and generates a new translocatable element. J.Bacterid., 1980, v.142, № 2, p.588-592.

155. Womble D.D., Rownd R.H. Replication of plasmids in mutants of Escherichia coli temperature-sensitive for initiation of deoxyribonucleic acid.synthesis. Plasmid, 1979, v.2, p.95-108.

156. Young C., Bechhofer D.H., Figurski D.H. Gene regulation in plasmid RK2; positive control by korA. in the expression of kor C. J.Bacteriol. 1984, p.247-252.

157. Young R., Grillo S.D., Isberg R., Way J., Syvanen M. Transposition of the kanamycin resistana transposon Tn903. Mol.Gen. Genet. 1980, 3, v.178, p.681-689.