Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Генетическая трансформация льна-долгунца (Linum usitatissimum L.) с использованием семядольных эксплантов

ВАК РФ 03.00.12, Физиология и биохимия растений

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Белоногова, Марина Анатольевна

СОКРАЩЕНИЯ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Систематика и происхождение, ботаническое описание и особенности биологии льна-долгунца.

1.2. Основные направления и проблемы селекции льна-долгунца.

1.3. Биотехнологические способы создания генетического разнообразия льна.

1.4. Морфогенетический ответ растений рода Linum.

1.4.1.Физиологический контроль морфогенеза in vitro.

1.4.1.1.Зависимость морфогенеза от источника экспланта.

1.4.1.2. Зависимость морфогенеза от генотипа растения-донора.

1.4.1.3. Зависимость морфогенеза от состава среды.

1.4.2. Получение новых форм растений в роде Ыпит методами культуры тканей.

1.4.3. Растительные протопласты в качестве источника новых форм растений рода Ыпит.

1.4.4. Эмбриокультура и культура пыльников в качестве источника новых форм растений рода Linum.

1.5. Получение новых форм растений методами генетической инженерии.

1.5.1. Использование селективных генов при трансформации клеток растений.

1.5.2. Репортерные системы и возможности их применения в генетической трансформации.

1.5.3. ß-глюкуронидаза (GUS) E.coli - одна из наиболее распространенных репортерных систем.

1.5.4. Получение трансгенных растений рода Linum.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Генетическая трансформация льна-долгунца (Linum usitatissimum L.) с использованием семядольных эксплантов"

Актуальность проблемы. Одной из важнейших сельскохозяйственных культур комплексного использования является лен-долгунец (Linum usitatissimum L). Он широко применяется в текстильной, лакокрасочной, электротехнической, резиновой, кожевенной, мыловаренной, фармацевтической, а также пищевой и других отраслях промышленности. Льняные ткани отличаются гигиеничностью, продолжительным сроком носки, хороши при стирке и устойчивы против гниения. Льняное масло используется для изготовления масляных красок, олифы, лаков и как продукт питания. Льняной жмых - высокопитательный концентрированный корм для животных (содержит до 36% легкоусвояемых белков). Кроме того, лен-долгунец способен хорошо расти в зонах умеренного климата, что делает эту культуру особенно важной для условий средней полосы и севера России.

Современное сельское хозяйство и перерабатывающая промышленность предъявляют достаточно высокие требования к сортам, но их генетическое однообразие и селекция на трудно совместимые признаки, такие как высокая урожайность семян и волокна, высокая урожайность волокна и его высокое качество, дружное созревание, неполегаемость и т.п., очень часто затрудняют работу селекционеров. Широкие возможности для решения этих проблем открывают биотехнология и генетическая инженерия, методы которых позволяют включать в геном растений чужеродные гены, изменяя свойства растений.

Хотя лен в культуре in vitro известен около 30 лет [Ruybczynsky, 1975; Gamborg, Shyluk, 1976; Mathews, Narrayanaswamy, 1976; Murray et al., 1977; Lane, 1979; McHughen et al., 1984; 1989; 1986; 1994; 1997; 1998; Pretova, Williams, 1986; Ling, Binding, 1887; McHughen, 1987; 1989; Jordan, McHughen, 1988; Dong, McHughen, 1991; 1993; Nichterlein, Fredt, 1993; Поляков и др., 1998; Tejklova, 1998; Dedicova et al., 2000; Каляева и др.,

2000; Поляков, 2000(a); Mundhara, Rashid, 2001; 2002; Hjordis et al., 2003; Rutkowska-Krause et al., 2003; Yildiz, Ozgen, 2004]. В настоящее время активно исследуют, в основном, лен масличный, у которого достаточно легко образуются растения-регенеранты. Однако применение для льна-долгунца методов регенерации и генетической трансформации, основанных на уже разработанных системах для льна масличного, дают низкую частоту образования побегов-регенерантов и побегов-трансформантов. В нашей стране исследования, связанные с культурой ткани и генетической инженерией льна-долгунца, были начаты в нескольких научных центрах [Чикризова, 1997; Поляков и др., 1998, 2000; Егорова, 1999; Поляков, 2000; Каляева и др., 2000; Каляева, 2001; Пролетова, 2000; 2003; Чикризова, Поляков, 2000; 2004; Пролетова и соавт., 2004], однако, к настоящему времени их ведется очень мало.

В работах, посвященных разработке систем регенерации и трансформации льна-долгунца, в качестве эксплантов, как правило, использовали сегменты гипокотиля, также применяемые при трансформации льна масличного. Однако известно, что при снятии апикального доминирования образование адвентивных почек на гипокотиле льна происходит в основном из эпидермальных клеток [Crooks, 1933; Link, Egers, 1946; Murray et al., 1977 Shepard, 2000], тогда как трансформация и пролиферация трансформированных клеток идет вокруг раневой поверхности. Поэтому после генетической трансформации огромная часть побегов на сегментах гипокотиля образуется из ^трансформированных клеток, а часть образующихся побегов состоит из трансформированных и ^трансформированных клеток (химерные побеги). Увеличение раневой поверхности путем удаления части эпидермиса, надрезания и прокалывания эксплантов при подготовке гипокотилей к трансформации позволяет несколько увеличить процент истинно трансгенных растений-трансформантов, но, с другой стороны, делает процесс более трудоемким, и к тому же снижает жизнеспособность эксплантов [Поляков и др., 1998]. Dong и McHughen [1993] в своих работах показали, что доля химерных по трансгену растений-трансформантов, образующихся на сегментах гипокотиля, даже при удалении части эпидермиса перед проведением генетической трансформации, может достигать 45%. Все это делает актуальным разработки надежных, воспроизводимых и высокотехнологичных методов регенерации и трансформации растений льна-долгунца, доступных для широкого круга исследователей и для специалистов с/х производства.

Мы предположили, что использование иного типа экспланта позволило бы избежать проблемы образования химерных по трансгену побегов после генетической трансформации, которая связана с феноменальной природой образования адвентивных почек на гипокотиле льна. Из литературы известно, что развивающиеся семядоли обладают высоким морфогенетическим потенциалом, так как в них находится большое количество различных гормональных соединений [Sharma et al., 1990; Kusnetsov et al., 1994; Wilhemova et al., 2004]. Хотя в работах других исследователей семядоли проростков льна были охарактеризованы как низкоморфогенные экспланты, мы предполагали, что при использовании методов регенерации, разработанных в нашей лаборатории для семядольных эксплантов других культур, и семядоли проростков льна-долгунца будут способны к высокой степени регенерации.

Цели и задачи исследования. Целью настоящей работы являлось получение трансгенных растений льна-долгунца при использовании семядольных эксплантов.

В ходе исследования решались следующие задачи:

1. Изучить и оптимизировать факторы, влияющие на морфогенетическую способность семядольных эксплантов льна-долгунца.

2. Исследовать способность к регенерации семядольных эксплантов различных сортов льна-долгунца.

3. Разработать способ агробактериальной трансформации семядольных эксплантов льна-долгунца и получить растения-трансформанты, содержащие репортерные и селективные гены.

4. Доказать трансгенность полученных трансформантов, показав наличие и экспрессию введенных репортерных генов в трансгенных растениях.

5. Показать наследование введенных генов.

Научная новизна работы. В результате проведенных исследований разработан новый метод регенерации растений льна-долгунца, позволяющий с высокой эффективностью получать побеги на семядольных эксплантах растений разных генотипов. Впервые при использовании семядольных эксплантов льна-долгунца при применении различных конструкций получены трансгенные растения с репортерным геном GUS (ß-глюкуронидазы). Впервые для льна-долгунца было показано, что наличие в используемой для трансформации конструкции последовательности внутренней инициации трансляции - IresMPcr75, выделенной из генома тобамовируса крестоцветных, вызывало увеличение эффективности трансляции по сравнению с экспрессией гена в линиях трансгенных растений, полученных после трансформации с конструкциями, не имеющими такой последовательности. Разработанная система трансформации может быть использована для получения новых форм льна-долгунца.

Заключение Диссертация по теме "Физиология и биохимия растений", Белоногова, Марина Анатольевна

ВЫВОДЫ:

1. Разработан высокоэффективный метод регенерации, позволяющий получать побеги на семядольных эксплантах льна-долгунца различных генотипов [Патент на изобретение. Заявка № 2005112940].

2. Наибольшей способностью к морфогенезу обладали семядольные экспланты пятидневных проростков. Была выявлена закономерность между физиологическим возрастом эксплантов и соотношением регуляторов роста в среде. На семядольных эксплантах, полученных с 5-дневных проростков, наибольшее число побегов образовывалось при концентрациях: 1 мг/л БАП и в отсутствие ауксина в питательной среде. Для семядолей, полученных с 8-дневных проростков, были необходимы 2 мг/л БАП и присутствие ауксина (0.05 мг/л НУК).

3. Показано, что среди использованных сортов наибольшей способностью к образованию побегов обладали семядольные экспланты сорта А-29, а наименьшей - сорта Алексим.

4. Получены трансгенные растения льна-долгунца сорта А-29, содержащие и экспрессирующие встроенные гены ферментов ß-глюкуронидазы (GUS) и неомицинфосфотрансферазы II (NPTII).

5. Частота трансформации существенно зависела от генетической конструкции. Наибольшую частоту трансформации наблюдали при использовании конструкции, не содержащей усиливающих трансляцию последовательностей.

6. Проведена оценка эффективности трансляции репортерного гена ß-глюкуронидазы в различных линиях трансгенных растений. Показано, что последовательность внутренней инициации трансляции - IRES, выделенная из генома тобамовируса крестоцветных, увеличивала эффективность трансляции репортерного белка по сравнению с экспрессией гена в линиях трансгенных растений, полученных после трансформации с конструкциями, не имеющими такой последовательности.

7. Анализ растений Т1 показал наследование встроенных генов. При этом ген прй\ наследовался в соотношении 3:1, что свидетельствует о наличии одной вставки трансгена.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проблема создания новых форм может быть решена по-разному для различных видов растений. Для одних, более лабильных, для этих целей может быть использована сомаклональная изменчивость, для других - это может быть слияние протопластов или мутагенез. К настоящему времени наиболее совершенным методом, позволяющим получать растения, обладающие новыми заранее заданными свойствами, несвойственными исходным формам, является генетическая инженерия. Трансгенные растения льна были получены в ряде лабораторий мира, но большинство работ было проведено для льна масличного, а также при использовании в качестве эксплантов сегментов гипокотиля. Несмотря на легкость получения растений-регенерантов льна на эксплантах этого типа, существенном недостатком является образование химерных по трансгену побегов, связанное с природой образования адвентивных почек на гипокотилях льна.

В настоящей работе были изучены факторы, влияющие на морфогенетическую способность семядольных эксплантов льна-долгунца. На основе полученных результатов был разработан метод регенерации, с помощью которого можно получать растения-регенеранты различных генотипов льна-долгунца. Проведенные эксперименты показали, что органогенез в значительной степени зависел от генотипа, возраста растения, от которого взят эксплант, а также от состава питательной среды и концентрации регуляторов роста, находившихся в среде культивирования. При этом во всех случаях регенерацию побегов наблюдали по срезанному краю экспланта, на котором образовывался небольшой каллус. Эта особенность образования побегов на семядольных эксплантах может играть положительную роль при проведении генетической трансформации, так как трансформация и пролиферация трансформированных клеток происходит вокруг раневой поверхности.

Использование семядольных побегов может являться преимуществом по сравнению с применением сегментов гипокотиля льна, образование адвентивных почек на которых происходит, в основном, из эпидермальных клеток [Link, Egers, 1946; Murray et al., 1977].

Разработанный метод регенерации был с успехом применен в экспериментах по трансформации растений при помощи агробактерий. Были получены трансгенные растения льна-долгунца сорта А-29, содержавшие встроенные гены ß-глюкуронидазы (GUS) и неомицинфосфотрансферазыП (nptll). Наличие и экспрессия репортерного гена были доказаны различными методами. При анализе GUS-активности с помощью гистохимического окрашивания характерной мозаичной окраски, которая свойственна для химерных побегов после трансформации с данным репортерным геном, не наблюдали.

Анализ растений Т1 показал наследование встроенного гена неомицинфосфотрансферазыП, при этом ген nptll наследовался в соотношении 3:1, что свидетельствует о наличии одной вставки трансгена.

Таким образом, разработанный нами метод регенерации можно использовать при генетической трансформации и получении трансгенных растений льна-долгунца различных генотипов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Белоногова, Марина Анатольевна, Москва

1. Александрова Т.А., Павлова Л.Н., Марченков А.Н. Выведение сортов льна-долгунца А-93, Ленок и их хозяйственная ценность // Мат. межд. научно-практ. конф., посвящ. 70-летию ВНИИ льна. Торжок: 2000. С.22-23.

2. Бутенко Р.Г. Биология клеток высших растений in vitro и биотехнология на их основе. М.: ФБК-ПРЕСС, 1999, 157с.

3. Бутенко Р.Г. Культура изолированных растительных тканей // Физиология растений. 1956. Т. 3. С.217-286.

4. Бутенко Р.Г. Культура изолированных растительных тканей и физиология морфогенеза растений. М.: Наука, 1964,

5. Гешеле Э.Э. Основы фитопатологической оценки в селекции растений. М.: Наука, 1978, 208 с.

6. Глик Б., Пастекнак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. М.: Мир, 2002. 589 с.

7. Гловер Д. Клонирование ДНК. М.: Мир, 1988, 366 с.

8. Дрейпер Д., Скотт Р., Армитедж Ф., Дьюри Г., Джекоб Л., Уолден Р., Кумар А., Джефферсон Р., Хэмил Д. Генная инженерия растений. М.: Мир, 1991.408 с.

9. Егорова Е.Г. Создание форм льна-долгунца на основе эмбриокультуры: Автореф. дисс. на соиск. ученой степени канд. биолог, наук. М: ТСХА, 1999. 16 с.

10. Зверева С.Д., Романов Г.А. Репортерные гены для генетическойинженерии растений: характеристика и методы тестирования // Физиология растений. 2000. Т. 47. С.479-488.

11. Каляева Н.М., Захарченко Н.С., Бурьянов Я.И. Особенности регенерации льна-долгунца (Linum usitatissimum L.J //Биотехнология. 2000. Т.6. С.34-40.

12. Каляева М.А. Разработка эффективной методики трансформации льна-долгунца (Linum usitatissimum) и дикорастущих видов рода Linum: Автореферат дисс. на соискание ученой степени канд. биол. наук. Пущино: ИФПБ, 2001,21с.

13. Колмен А. Транскрипция и трансляция. Под ред., Хеймса Б.М.: Мир. 1987. 65-88 с.

14. Коновалов Ю.Б. Частная селекция полевых культур. М.: Агропромиздат. 1990. 373-379 с.

15. Крепков А.П. Проблемы и направления селекции льна-долгунца // Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 70-летию ВНИИ льна. Торжок: 2000. С. 10-11.

16. Кутузова С.Н. Технические культуры: селекция, технология переработка. М.: Агропромиздат, 1991. С. 186-191.

17. Малышенко С.И., Тюлькина Л.Г., Зверева С.Д., Ралдугина Г.Н. Получение трансгенных растений Brassica campestris, экспрессирующих ген gfp II Физиология растений. 2003. Т.50. С.309-315.

18. Маниатис Ф., Фрич Е., Самбрук Д. Молекулярное клонирование: Лабораторное руководство. М.: Мир, 1985. 545с.

19. Методические рекомендации по получению трансгенныхрастений льна-долгунца. Отв. за подготовку Козловская. В.Ф., М: Россельхозакадемия, 2001. 39 с.

20. Муромцев Г.С., Бутенко Р.Г., Тихоненко Т.И., Прокофьев М.И. Основы сельскохозяйственной биотехнологии. М: Наука, 1990, 384 с.

21. Муромцев Г.С., Чкаников Д.И., Кулаева О.Н., Гамбург К.З. Основы химической регуляции роста и продуктивности растений. М.: Агропромиздат, 1987. 171с.

22. Никуленко Т.Ф., Чканников Д.И. Токсины фитопатогенных грибов и их роль в развитии болезней растений. М.: ВИНИТИ, 1987. 52 с.

23. Пирузян Э.С. Основы генетической инженерии растений. М.: Наука, 1988. 393 с.

24. Поляков A.B., Чикризова О.Ф., Каляева Н.М., Захарченко Н.С., Балохина Н.В., Бурьянов Я.И. Трансформация растений льна-долгунца // Физиология растений. 1998. Т.45. С.882-887.

25. Поляков A.B., Чикризова О.Ф., Пролетова Н.В. Укоренение побегов льна (Linum usitatissimum L.J, полученных биотехнологическими методами // Мат. межд. научно-практ. конф., посвящ. 70-летию ВНИИ льна. Торжок: 2000. С.42-44.

26. Поляков A.B. Биотехнология в селекции льна. Тверь, 2000(a). 179с.

27. Поляков A.B. Эмбриокультура самоопыленных генотипов и межсортовых гибридов льна. // Мат. межд. научно-практ. конф., посвящ. 70-летию ВНИИ льна, Торжок: 2000(6). С. 40-42.

28. Посыпанов Г.С. Растениеводство. М.: Колос, 1997. С.397-404.

29. Пролетова Н.В. Культура пыльников в селекции льна-долгунца на устойчивость к фузариозному увяданию: Автореферат дисс. на соискание ученой степени канд. биол. наук. М: МСХА, 2003. 22 с.

30. Ралдугина Г.Н., Соболькова Г.И. Генотипические различия при действии абсцизовой кислоты на каллусные культуры Brassica napus II Физиология растений. 1994. Т.41. С.702-706.

31. Ралдугина Г.Н., Соболькова Г.И. Факторы, влияющие на органогенез у семядольных эксплантов рапса // Физиология растений. 1995. Т.42. С.916-922.

32. Ралдугина Г.Н. Получение и исследование трансгенных растений рапса (Brassica napus L.): Дисс. на соиск. ученой степени канд. биолог, наук. М: ИФР, 1997. 155 с.

33. Рогаш А.Р. Льноводство. 1967, М.: Колос, С.583.

34. Соловьев А.Я. Льноводство. М.: Агропромиздат, 1989. С.320.

35. Чикризова О.Ф., Поляков А.В. Эффективность использования питательных сред для массового получения трансгенных растений льна // Мат. межд. научно-практ. конф., посвящ. 70-летию ВНИИ льна. Торжок: 2000. С. 44-46.

36. Чикризова О.Ф. Создание форм льна-долгунца на основе генетической трансформации Agrobacterium tumefaciens: Автореферат дисс. на соискание ученой степени канд. с.-х. наук. М: ТСХА, 1997. 16 с.

37. Чикризова О.Ф., Поляков А.В. Методика оценки трансгенных форм льна-долгунца на устойчивость к хлорсульфурону // Сб. науч. трудов междунар. науч.-практич. конфер. М.: ГНУ ВНИИО РАСХН, 2004. С.182-191.

38. Adams J. Adventitious shoots on hypocotyl of flax and tomato // Bot. Gaz. 1924. V.78, P.461-462.

39. Anderson P.A., Lawrence G.J., Morrish B.C., Auliffe M.A., Finnegan E.J., Ellis J.G. Inactivation of the flax rust resistance gene M associated with loss of repeated unit within the leucine region // Plant Cell. 1997. V.9. P.641-654.

40. Akiyoshi D.E., Klee H., Amasino R.K. et al. Agrobacterium tumefaciens encodes an enzyme of cytokinin biosynthesis 11 Proc.Natl.Acad.Sci. USA. 1984. V.81. P.407-411.

41. Akiyoshi D.E., Morris R., Hinz R., Mischke В., Kosuge Т., Garfinkle D., Gordon M., Nester E. Cytokinin-auxin balance to crown gall tumors isregulated by specific loci in T-DNA // Proc.Natl.Acad.Sci. USA. 1983. V.80. P.407-411.

42. Barakat M.N., Cocking E.C., An assessment of the cultural capabilities of protoplasts of some wild species of Linum II Plant Cell Rep. 1985. V.4. P. 164-167.

43. Barfield D.G., Pua E.C. Gene transfer of plants of Brassica juncea using Agrobacterium tumefaciens mediated transformation // Plant Cell Rep. 1991. V.10. P.306-314.

44. Baroncelli S.M., Buiatti M., Bennici A. Genetics of growth and differentiation in vitro of Brassica oleracea var. botrytis. I. Differences between 6 inbred Lines // Z. Pflanzenzucht. 1973. V.70. P.99-107.

45. Basiran N., Armitage P., Scott R.J., Drapper J.Genetic transformation of flax {Linum usitatissimum) by Agrobacterium tumefacience: regeneration of transformed shoots via callus phase // Plant Cell Rep. 1987. V.6. P.396-399.

46. Beard B.H., Comstock V.E. Hybridisation of crop plants // Amer. Society of Agronomy. 1980. P.367-356

47. Binding H., Krumbiegel-Shroeren G., Nehls R. Protoplast fusion and development of fusants // Differentiation of protoplasts and of transformed plant cells.(Eds. Reinert J., Binding H.) 1986. P.37-66.

48. Bonell M.L., Lassaga S.L. Genetic analysis of the response of linseed1.num usitatissimum L.) somatic tissue to in vitro cultivation // Euphytica. 2002. V.125. P.367-372.

49. Bornman C.H. Morphological and ultrastructural responses to abscisic acid. //Abscisic acid. N.Y.: Praeger, 1983. P.523-647.

50. Bretagne B., Chupeau MCh., Chupeau Y., Fouilloux G. Improved flax regeneration from hypocotyls using tidiazuron as cytocinin source // Plant Cell Rep. 1994. V.14. P. 120-124.

51. Bretagne B., Chupeau Y. Selection of transegic flax plants is facilitated by spectinomycin // Transgenic research. 1996. V.5. P. 131-137.

52. Brown D.C.W., Thorpe T.A. Plant regeneration by organogenesis // Cell culture and somatic cell genetics of plants. N.Y.: Academic Press, 1986. V.3 P.49-65.

53. Budar F., Thia-Toong L., Van Montagu M., Hernalsteens J.P. Agrobacterium-mediated gene transfer results mainly in transgenic plants transmitting T-DNA as a single Mendelian factor // Genetics. 1986. V.114. P.303-313.

54. Burns G.P., Hedden M.E., Conditions influencing regeneration, of the hypocotyls // Beihefte zum Bot. Centralbl. 1906. V.19. P.383-392.

55. Capelle S.C., Mok D.W.S, Kirchner S.C., Mok M.C. Effect of thidiazuron on cytokinin autonomy and the metabolism of M)-2-isopoentenyl-8-adenosine in callus tissue of Phaseolus lunatus I I Plant Physiol. 1983 V.73. P.796-802.

56. Chen Y., Kenaschuk E. O., Procunier J.D. Plant regeneration from anther culture in Canadian cultivars of flax (Linum usitatissimum L.) // Euphytica. 1998. V.102. P.183-189.

57. Chen Y., Dribnenki P. Effect of genotype and medium composition on flax Linum usitatissimum L. anther culture // Plant Cell Rep. 2002. V.21 P.204-207.

58. Chi G.-L., Pua E.C. Ethylene inhibitors enhanced de novo shoot regeneration from cotyledons of Brassica campestris ssp. chinensis (chines cabbage) in vitro II Plant Sci. 1989. V.64. P.243-250.

59. Chikrizova O.F., Poliakov A.V., Transformation of flax by

60. Agrobacterium tumefaciens on the basis of gene nptll introduction // Natural fibres, Special edition. Poznan, Poland. 1998. V.2. P.237.

61. Crooks D.M. Histological and regenerative studies of the flax seedlings // Botanic Gazette. 1933. V.95. P.209-239.

62. Cunha A., Ferreira M.F. Differences in free sterols content and composition associated with somatic embroyogenesis, shoot organogenesis and calli growth of flax // Plant Sci. 1997. V.124. P.97-105.

63. Cunha A.C., Fernandes-Ferreira M. Ontogenic variations in free and esterified fatty acids during somatic embryogenesis of flax {Linum usitatissimum L.) // Plant Science. 2003. V.164. P.863-872.

64. Cunha A.C., Fernandes-Ferreira M. Ontogenic variations in /z-alkanes during somatic embryogenesis of flax {Linum usitatissimum L.) // Plant Science. 2001. V.160. P.l 137-1143.

65. Cunha A.C., Fernandes-Ferreira M. Somatic embryogenesis, organogenesis and callus growth kinetics of flax // Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 1996. V.47. P. 1-8.

66. Dabauza M., Bordas M., A. Salvador L., Roig A., Moreno V. Plant regeneration and Agrobacterium-mediated transformation of cotyledon expiants of Citrullus colocynthis (L.) Schrad // Plant Cell Reports. 1997. V.16. P.888-892

67. David C., Chilton M.D., Tempe J. Conservation of T-DNA in plants regenerated from hairy root cultures // Biotechnology. 1984. V.2. P.73-76.

68. Dedicova B., Hricova A., Samaj J., Obert B., Bobak M., Pretova A.

69. Shoots and embryo-like structures regenerated from cultured flax {Linum usitatissimum L.) hypocotyl segments // J. Plant Physiology. 2000. V.157. P.327-334.

70. Denis M., Delourme R., Gourret J.-P., Mariani C., Renard M. Expression of engineered nuclear male sterility in Brassica napus II Plant Physiol. 1993. V.101. P.1295-1304.

71. Depicker A., Stachel S., Dhaese P., Zambrysky P., Goodman H. Nopaline synthase: Transcrypt mapping and DNA sequence // J.Mol.Appl.Genet. 1982. V.l. P.561-573.

72. Dong J., McHughen A. An improved procedure for production oftransgenic flax plants using Agrobacterium tumefaciens II Plant Science 19936. V.88. P.61-71.

73. Dong J., McHughen A. Transgenic flax from Agrobacterium mediated transformation: incidence of chimeric régénérants and inheritance of transgenic plants//Plant Science. 1993a. V.91. P.139-148.116

74. Dong J., McHughen A. Patterns of transformation intensity on flax hypocotyls inoculated with Agrobacterium tumefaciens II Plant Cell Rep. 1991.• V.10. P. 555-560.

75. Drexler H.S., Scheffler J.A., Heinz E. Evaluation of putative seed specific promoters for Linum usitatissimum II Mol. Breeding. 2003. V.l 1. P. 149158.

76. Ellis J.G., Finnegan E.J., Lawerence G.J., Developing a transposon tagging system to isolate rust-resistance genes for flax // Theor. Appl. Genet.1992. V.l2. P.46-54.

77. Gaither D.H., Lutz D.H., Forrence L.E. Abscisic acid stimulates elongation of excised pea root tips // Plant Physiology. 1975. V.55. P.548-553.

78. Gambourg O.L., Evelegh D. Culture methods and detection ofglucanases in suspension cultures of weat and parleys 11 Can. J. Biochem. 1968. V.46. P.417-421.

79. Gambourg O.L., Shyluk J.P. Tissue culture, protoplasts, and morphogenesis in flax II Bot. Gaz. 1976. V.l37. P.301-306.79 .George E.F., Sherrington P.D. Plant propogation by tissue culture. ^ Exegetics, Eversley, England. 1984. 465p.

80. Guerche P., Charbonnier M., Jouanin L., Tourneur C., Paszkowski J., Pelletier G. Direct gene transfer by electroporation in Brassica napus II Plant Sci. 1987. V.52. P.lll-116.

81. Guivarch A., Caissard J.C., Azmi A., Elmayan T., Chriqui D., Tepfer M. In situ Detection of expression of the gus reporter gene in transgenic plants: Ten years of blue genes // Transgenic Research. 1996. V.5. P.281-288.

82. Gulati A., Jaiwai P.K. Culture conditions effecting plant regeneration from cotyledons of Vigna radiata (L.) Wilczek // Plant Cell, Tissue and Organ culture. 1990. V.23.P.1-8.

83. Halperin W. Attainment and retention of morphogenetic capacity in vitro II Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plants. N.Y.: Academic Press, 1986. P.3-47.

84. Hepburn A.G., Clarke L.E., Blundy K.S., White J. Nopaline Ti-plasmid, pTiT37, t-DNA insertion into flax genome // J. Mol. Appl. Genet. 1983. V.2.P.211-224.

85. Hjordis H.S., Drexler, Jodi A., Scheffler, Heinz E. Evaluation ofputative seed-specific promoters for Linum usitatissimum II Molec. Breeding. 2003. V.l 1. P.149-158.

86. Huetteman C.A., Preece J.E. Thidiazuron: a potent cytokinin for woody plant tissue culture // Plant Cell Tissue Organ Culture. 1993. V.33. P.105-119.

87. Iantcheva A., Vlahova M., Bakalova E., Kondorosi E., Elliott M.C., Atanassov A. Regeneration of diploid annual medics via direct somatic embryogenesis promoted by thidiazuron and benzylaminopourine // Plant Cell Rep. 1999. V.l8. P.904-910.

88. Jain P., Rashid A. Stimulation of shoot regeneration on Linum hypocotyls segments by tidiazuron and its response to light and calcium // Biol. Plantarum. 2001. V.44. P.611-613.

89. Jain R.K., Thompson R.G., Taylor D.C., MacKenzie S.L., McHughen A., Rowland G.G., Tenaschuk D., Coffey M. Isolation and characterization of two promoters from linseed for genetic engineering // Crop Sci. 1999. V.39. P. 1696-1701.

90. Jefferson R.A. Assaying chimeric genes in plants: the GUS gene fusion system// Plant Molecular Biology Reporter. 1987(a). V.5. P.387-405.

91. Jefferson R.A., Burgess S.M., Hirsh D. p-glucoronidase from Escherichia coli as a gene-fusion marker // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986. V.83. P.8557-8451.

92. Jefferson R.A., Kavanagh T.A. and Bevan M.W. GUS fusions: beta-glucuronidase as a sensitive and versatile gene fusion marker in higher plants //• EMBOJ. 1987(6). V.6. P.3901-3907.

93. Jin-Zhuo Dong, Shi-Rong Jia. High effeciency plant regeneration from cotyledons of watermelon (Citrillus vulgaris Shrad) // Plant Cell Rep. 1991. V.9. P.559-562.

94. Jordan M., McHughen A. Glyphosate tolerant flax plants fromagrobacterium mediated gene transfer//Plant Cell Rep. 1988(a). V.7. P.281-284

95. Jordan M., McHughen A. Transformed callus does not necessarily regenerate transformed shoots // Plant Cell Rep. 1988(6). V.7. P.285-287

96. Kaul V., Williams E.G. Multiple shoot induction in vitro from the ^ hypocotyls of germinating embryos of flax (Linum usitatissimum) II J. Plant

97. Physiol. 1987. V.131.P.441-448.

98. Klee H., Horsch R., Rogers S. Agrobacterium-mediated plant transformation and its further application to plant biology // Ann.Rev.Plant Physiol. 1987. V.38. P.467-486.

99. Koronfel M,, McHughen A. An efficient regeneration procedure forflax {Linum usitatissimum L.) //Natural fibres, Special edition. Poznan, Poland. 1998(a). V.2. P.195-196

100. Koronfel M., McHughen A. Sensitivity of flax (Linum usitatissimum L.J hypocotyls and shoots to kanamicin, cefotaxime and carbenicillin // Natural fibres, Special edition. Poznan, Poland. 1998(6). V.2. P.195-196

101. Kranz K., Petersen M. b-Peltatin 6-O-methyltransferase from ® suspension cultures, of Linum nodiflorum II Phytochemistry. 2003. V.64. P.453458.

102. Kristen L., Choffe, Susan J., Murch & Praveen K. Saxena. Regeneration of Echinacea purpurea: Induction of root organogenesis from hypocotyl and cotyledon explants // Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 2000. V.62. P.227-234.

103. Kroes G.M.L.W., Sommers E., Lange W. Two in vitro assays to evaluate resistance in Linum usitatissimum to Fusarium wilt disease // Europ. J. Plant Pathol. 1998. V.104. P.561-568.

104. Laine E., Lamblin F., Lacoux J., Dupre P., Roger D., Sihachaki D., David A. Gelling agent influences the detrimental effect of kanamycin on adventitious budding in flax // Plant Cell Tissue and Organ Culture. 2000. V.63. P.77-80.

105. Laloue M., Fox J.E., Cytokinin oxidase from wheat // Plant Physiol. 1989. V. 90. P.899-906.

106. Lane D.W. Influence of growth regulators on root and shoot initiation from flax meristem tips and hypocotyls in vitro II Physiol. Plant. 1879. V.45. P.260-264.

107. Ling H.Q. Binding H., Plant regeneration from protoplasts in Linum //Plant Breeding. 1987. V.98. P.312-317.

108. Lin H., Kwok K. H., Doran P. M. Development of Linum flavum hairy root cultures for production of coniferin // Biotechnology Letters. 2003.• V.25. P.521-525.

109. Link G.K.K., Eggers V. Mode, site, and time of initiation hypocotyledonary bud primordia of Linum usitatissimum IIL. Botanical Gazette. 1946. V.107. P.441-454.

110. Malik K.A., Saxena P.K. Regeneration in Phaseolus vulgaris L., High frequency induction of direct shoot formation in intact seedlings by N6-benzylaminopurine and thidiazuron // Planta. 1992. V.186. P.384-389.

111. Mascaronhas J.P., Hamilton D.A. Artifacts in the localization of GUS activity in anthers of petunia transformed with a CaMV 35S-GUS• construct // Plant J. 1992. V.2. P.405-408.

112. Mathews H.V., Narayanaswamy S. Phytohormone control of regeneration in cultured tissues of flax // Z. Phlanzenphysiol. 1976. V.80. P.436-442

113. Marshall G., Courduries P. A seedling bioassay for screening putitative Fusarium oxysporum f. sp. lini resisitant somaclonal lines of linseed // Natural fibres. Special edition. Poznan, Poland. 1994. V.38. P.27-28.

114. Marshall G. Field analysis of variation in somaclones of fibre flax {Linum usitatissimum L.) // Natural fibres. Special edition. Poznan, Poland. 1994. V.38 P.27-28.

115. McHughen A., Holm F.A. Development and preliminary field testing £ of glufosinate-ammonium tolerant transgenic flax // Can. J. Plant Sci. 1994.1. V.75.P.117-120.

116. McHughen A., Jordan M. Recovery of transgenic plants from "escape" shoots // Plant Cell Rep. 1989. V.7. P.661-614.

117. McHughen A., Jordan M., Fiest G. A preculture period prior to Agrobacterium inoculation increases production of transgenic plants // J. Plant Physiol. 1989. V.134. P.245-248.

118. McHughen A., Rowland G.G., Holm F.A., Bhatti R.S., Kenaschuk E.O. CDC Triffid transgenic flax. // Can. J. Plant Sci. 1997. V.77. P.641-643.

119. McHughen A., Wijayanto T., Koronfel M. Advancement in new methods of genetic engineering in linseed breeding. // Natural fibres, Special edition. Poznan, Poland. 1998. V.2. P. 181-185.

120. McHughen A. Agrobacterium mediated transfer of chlorsulfuron resistance to commercial flax cultivars // Plant Cell Rep. 1989. V.8. P.445-449.

121. McHughen A. Salt tolerance through increased vigor in flax line (STS-II) selected for salt tolerance in vitro II Theor. Appl. Genet. 1987. V.74. P.727-732

122. McHughen A., Swartz M. A tissue culture derived salt-tolerant line of flax {Linum usitatissimum L.) // J. Plant Physiol. 1984. V.177. P. 109-107.

123. Misra S, Gedamu L. Heavy metal tolerant transgenic Brassica napus L. and Nicotiana tabacum L. plants // Theor.Appl.Genet. 1989. V.78. P. 161-168.

124. Mok M.C.,. Mok D.W.S, Armstrong D.J., Shudo K., Isogai Y., Okamoto T. Cytokinin activity of A^-Phenyl-A^-l,2,3-Thiadiazol-5-ylurea (Thidiazuron) // Phytochemistry. 1982. V. 21. P. 1509-1511.

125. Monnier M. Culture of zygotic embryos // Proc. 4th Cogress for Plant tissue and cell culture. 1978. Canada. P.277-286.

126. Mouras A., Saul M.W., Essad S., Potrycus I. Localization by in situ hybridization of a low copy chimeric resistance gene introduced into plants by direct gene transfer// Mol.Gen. Genet. 1989. V.207. P. 204-209.

127. Mundhara R., Rashid A. Regeneration of shoot-buds on hypocotyl of1.num seedlings: a stress-related response // Plant Science. 2001. P. 161 19-25.

128. Mundhara R., Rashid A. Stimulation of shoot-bud regeneration on hypocotyl of Linum seedlings, on a transient withdrawal of calcium: effect of calcium, cytokinin and thidiazuron // Plant Science. 2002. V.162. P.211-214.

129. Mundhara R., Rashid A. Stimulation of shoot regeneration on Linum hypocotyls segments by tidiazuron and its response to light and calcium // Biol. Plantarum. 2001. V.44. P.611-613.

130. Murashige T. Clonal propogation through tissue cultures // Annu.Rev.Plant Physiol. 1974. V.25. P. 133-160.

131. Murashige T., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassys with tobacco tissue cultures // Physiol. Plant. 1962. V.15. P. 473.

132. Murray B.E., Handyside R.J., Keller W. A. In vitro regeneration of shoots on stem explants of haploid and diploid flax (Linum usitatissimum) II Can. J. Geneti. Cytol. 1977. V.19. P.177-186.

133. Mylnarova L., Bauer M., Nap J.P., Pretova A. High efficiency

134. Agrobacterium-mediated gene transfer to flax // Plant Cell Rep. 1994. V.13. P.282-285.

135. Niedz R.P., Smith S.S., Dunbar K.B., Stephens C.T., Murakishi H.H. Factors influencing shoot regeneration from cotyledonary explants of Cucumis melo L. // Plant Cell, Tissue and Organ culture. 1989. V.18. P.313-319.

136. Nichterlein K., Friedt W. Plant regeneration from isolatedmicrospores linseed {Linum usitatissimum) II Plant Cell Rep. 1993. V.12. P.26-430.

137. Nitsch J. La culture de pollen isolesur millien synthetique // Acad. Sci. 1974. D.278. P.1031-1034.

138. Oostdam A. Establishment of hairy root cultures of Linum flavum producing the lignan 5-metyloxypodophyllotoxin // Plant Cell Rep. 1993. V.12. P.474-477.

139. Ow D., Jacobs J., Howell S. Functional regions of the cauliflower mosaic virus 35 S RNA promoter determined by use of the firefly luciferase gene as a reporter of promoter activity // Proc.Natl.Acad.Sci. USA, 1987. V.84. P.4870-4871.

140. Pavlova L.V., Aleksandrova T.A., Marchenkov A.N., Krylova T.V., Loshakova N.I. Bases of flax breeding for productivity and resistance to deseases//Natural fibres, Special edition. Poznan, Poland, 1998. V.2. P. 172.

141. Petersen G., Smith R. Effect of abscisic acid and callus size on regeneration of american and international rice varietis // Plant Cell Rep. 1991. V.10. P.35-38.

142. Potrycus J., Shillito R., Saul M., Paszkowski J. Direct gene transfer, state of the art and future potentiol // Plant Mol.Biol. Reporter. 1985. V.3. P.l 17-128.

143. Pretova A., Hajduch M., Obert B. Some characteristic of flax embryo Development in situ and in vitro // Acta Biol. Cracov. 2000. V.42. P.45-53.

144. Pretova A., Williams E.G. Direct somatic embryogenesis from immature zygotic embryos of flax (Linum usitatissimum) II J. Plant Physiol. 1986. V.126. P.155-161.

145. Rakousky S., Tejklova E., Weisner J., Weisnerova D, Kocabek T., Ondrej M. Hygromycin B an alternative in flax transformation selection // Biol. Plantarum. 1999. V.42. P.361-369.

146. Rakousky S., Tejklova E., Weisner I., Weisnerova D, Kocabek T., Ondrej M. T-DNA induced mutations and somaclonal variants of flax // Natural fibres, Special edition. Poznan, Poland. 1998. V.2. P.244-246.

147. Rutkowska-Krause I., Mankowska G., Poliakov A.V. Somaclonal and gametoclonal variation of flax (Linum usitatissimum L.J II Natural fibres, Special edition. Poznan, Poland. 1998. V.2. P.214-220.

148. Rutkowska-Krause I., Mankowska G.,- Lukaszewicz M., Szopa-J. Regeneration of flax (Linum usitatissimum L.) plants from anther culture and somatic tissue with increased resistance to Fusarium oxysporum II Plant Cell Rep. 2003. V.22. P.110-116.

149. Ruybczynski J.J. Callus formation and organogenesis of mature cotyledons of Linum usitatissimum L. var Szokijskij in vitro culture // Genetica Polonica. 1975. V.16. P.l 15-120

150. Sanford J.C. Biolistic plant transformation // Physiol. Plant. 1990, V.79. P.206-209.

151. Saxena P.K., Malik K.A., Gill R. Induction by thidiazuron of somatic embryogenesis in intact seedlings of peanut // Planta. 1992. V.17. P.421-424.

152. Seetharam A. Interspecific hybridization in Linum II Euphytica. 1972. V.21. P.482-495

153. Sen S., Newton R.J., Fong F., Neuman P. Stimulation abscicic acid: a role in shoot enhancement from loblolly pine (Pinus taeda) cotyledon explants // Plant Cell Rep. 1989. v.8. p.191-194.

154. Sharma K.K., Bhojwani S.S., Thorpe T.A. Factors affecting high frequency differentiation of shoots and roots from cotyledon explants of Brassica juncea (L.) Czern. // Plant Sci. 1990. v.66. p.247-253.

155. Sharma K.K., Bhojwani S.S., Thorpe T.A. The role of cotyledonary tissue in the differentiation of shoots and roots from cotyledon explants of Brassica juncea (L.) Czern. // Plant Cell Tis. Organ Cult. 1991. V.24. P.55-59.

156. Sharma K.K., Thorpe T.A. In vitro regeneration of shoot buds and plantlets from seedling of Brassica napus L. // Plant Cell Tis. Organ Cult. 1989. V.18. P. 129-141.

157. Shepard A.K. Leaf initiation on adventious shoot meristems of flax (Linum usitatissimum) dissertation abstracts international, 2000. P.24

158. Schroder M., Dixellius C., Rahlen L., Glimelius K. Transformation of Brassica napus by using the Aada gene as selectable marcer inheritance studies of the marcer gene // Physiol. Plantarum. 1994. V.92. P.37-46.

159. Simpson R.B., Spielmann A., Margossin L., McNight T.D. A disarmed binary vector from Agrobacterium tumefaciens functions in Agrobacteriun rhizogenes //Plant. Mol.Biol. 1986. V.6. P.403-415.

160. Skoog F. Growth and organ formation in tobacco tissue cultures // Am.J.Bot. 1944. V.31. P. 19-24.

161. Skoog F., Miller C. Chemical regulation of growth and organ formation in plant tissues cultured in vitro II In: The biological action of growth substances (ed.porter h.k.), Academic Press, N.Y. 1957. V.l 1. P.l 18-131.

162. Spielmeyer W., Lagudah E.S., Mendhaml N., Green A.G.1.heritance of resistance to flax wilt (Fusarium oxysporum f.sp. lini Schlecht) in a doubled haploid population of Linum usitatissimum L. // Euphytica. 1998. V.l01. P.287-291.

163. Tabei Y., Kanno T., Nishio T. Regulation of organogenesis and somatic embriogenesis by auxin in melon, Cucumis melo L. // Plant Cell Rep. 1991. V.l0. P.225-229.

164. Taylor C.B. Promoter fusion analysis: an insufficient measures ofgene expression // Plant Cell. 1997. V.9. P.273-275.

165. Tejavathi D. H., Sita L. G., Sunita A.T. Somatic embryogenesis in flax // Plant Cell Tissue and Organ Culture. 2000. V.63. P. 155-159.

166. Tejklova E. Study of anther culture in flax {Linum usitatissimum L.J II Natural fibres, Special edition. Poznan, Poland. 1998. V.2. P.202-209.

167. Thomas J.C., Katterman F.R. Cytokinin activity induced by thidiazuron // Plant Physiol. 1986. V.81. P.681-683.

168. Thompson G., Jain R., Rowland G.G., Taylor D., McKenzie .L., McHughen A. Fatty acid modifications in flax // Proc. Agric. Biotech. Conf. 1996. Saskatoon. Canada.

169. Thorpe T.A., Patel K.R. Clonal propogation: Adventitious buds. In: Cell culture and Somatic Genetics of Plants (Ed.Vasil I.K.), Academic Press, N.Y., 1984, V.l. P.49-60

170. Vasil V., Vasil I.K. Somatic embryogenesis and plant regeneration from suspension cultures of pear millet (Pennisetum americanum) // Ann.Bot., 1981. V.47. P.669-678.

171. Verdus M.C., Thellier M., Ripoll C. Storage of environmentalsignals in flax: their morphogenetic effect as enabled by a transient depletion of calcium // Plant J. 1997. V. 12. p. 1399-1410.

172. Visser C., Qureshi J.A., Gill R., Saxena P.K. Morphoregulatory role of thidiazuron: substitution of auxin and cytokinin requirement for the induction of somatic embryogenesis in geranium hypocotyl cultures // Plant Physiol. 1992. V.99. P. 1704-1707.

173. Vnuchkova V.A., Maryachina I.I., Eisner G.I. Effect of acetone in the culture medium on the regeneration efficiency and on the resistance to root rot of regenerants of varius plant species // Plant Cell Rep. 1993. V.12. P.577-580.

174. White Ph. Potentially unlimited growth of excised plant callus in an artificial nutrient // Amer. J. Bot. 1939. V.26. P.59-64.

175. Wicks Z.V., Hammond J.J. Screening of flax species for sources of genes resistant to Melanosora lini (Echrenb.) Lev. // Crop Sci. 1978. V.18. P.7-10.

176. Wijayanto T. Gene transwfer to flax (Linum usitatissimum L.) using particle bombardment // M. Sc. Thesis. 1998. University of Saskatchewan

177. Wilhemova N., Prochazkova D., Machakova I., Vagner M., Srbova M. The role of cytokinins and ethylene in bean cotyledon senescence. The effect of free radicals // Biolog. Plant. 2004. V.4. P.523-529

178. Williams J., Pink D.A.C., Biddington N.L. Effect of silver nitrate on long-term culture and regeneration of callus from Brassica oleracea var,gemmifera II Plant Cell Tissue Org. Cult. 1990. V.21. P.61-66.

179. Wrobel M., Zebrowski J, Szopa J. Polyhydroxybutyrate synthesis in transgenic flax // J. of Biotechnol. 2004. V.107. P.41-54.

180. Yildiz M., Ozgen M. The effect of a submersion pretreatment on in vitro explant growth andshoot regeneration from hypocotyls of flax Linum usitatissimum II Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 2004. V.77. P.l 11-115,.

181. Yildiz M.,-Er C. The effect of sodium hypochlorite solutions on in vitro seedling growth and shoot regeneration of flax {Linum usitatissimum) // Naturwissenschaften. 2002. V.89. P.259-261.

182. Yang J., Hu Z., Guo G.Q., Zheng G.C. In vitro plant regeneration from cotyledon explants of Swainsona salsula Taubert // Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 2001. V.66. P. 35-39,

183. Yuan Chao-Xing, Bai Yong-Yan. An improved Agrobacterium-mediated transformation method for flax {Linum usitatissimum cv. Ningya Noll) cotyledon segments // Acta Phytophysiologica Sinica. 1993. V.19. P.387-390.

184. Yuan Zhi Hui, Wei Zhi Ming, Xu Shu Ping, Sun Hong Tao, Wu Chang Bing, Ji Yan Ru, Song Shu Min, Yu Li. Plant regeneration from protoplast culture in flax {Linum usitatissimum) II Acta Biologiae Experimentalis Sinica. 2000. V.33. P.165-169.

185. Yurong Chen, Kenaschuk E. O., Procunier J.D. Plant regeneration from anther culture in Canadian cultivars of flax {Linum usitatissimum L.) // Euphytica. 1998. V.102. P.183-189.

186. Yurong Chen, Kenaschuk E. O., Dribneki P. Response of flax genotypes to doubled haploid production // Plant Cell Tissue and Organ Culture. 1999. V.57. P. 195-198.

187. Zhan X., Jones D.A. Kerr A. In vitro plantlet formation in Linum marginale from cotyledons, hypocotyls, leaves, roots and protoplasts // Austral. J. Plant Physiol. 1989. V.16. P.315-320.

188. Zhan X., Jones D.A. Kerr A. Regeneration of flax plants transformed by Agrobacterium rhizogenes II Plant Molecular Biology. 1988. V.l 1. P. 551559.

189. Zhan X., Jones D.A. Kerr A. The pTiC58 tzs gene promotes high-efficiency root induction by agropine strain 1855 of Agrobacterium rhizogenes II Plant Molecular Biol. 1990. V.14. P.785-792.