Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Генетическая регуляция формирования пигмент - белковых комплексов тилакоидных мембран хлоропластов пшеницы

ВАК РФ 03.00.12, Физиология и биохимия растений

Автореферат диссертации по теме "Генетическая регуляция формирования пигмент - белковых комплексов тилакоидных мембран хлоропластов пшеницы"

рга ил

I Г; '!■.:;]

АКАДЕМИЯ НАУК АЗЕРБАЙДЖАНА ИНСТИТУТ БОТАНИКИ

На прапах рукописи

ГУСЕЙНОВА ИРАДА МАМЕД кызы

УДК 581. 132, 581. 171

ГЕНЕТИЧЕСКАЯ РЕГУЛЯЦИЯ ФОРМИРОВАНИЯ ПИГМЕНТ—БЕЛКОВЫХ КОМПЛЕКСОВ ТИЛАКОИДНЫХ МЕМБРАН ХЛОРОПЛАСТОВ ПШЕНИЦЫ

03. 00. 12 — Физиология растений 03. 00. 03 — Молекулярная биология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

БАКУ - 1994

Работа выполнена в лаборатории молекулярной организации фотосинтетического аппарата Института ботаники АН Азербайджанской Республики.

Научный руководитель: доктор биологических наук, академик Д. А. АЛИЕВ

Официальные оппоненты: доктор биологических наук Н. М. ГУЛИЕВ кандидат биологических наук Д. М. ИСАЕВА

Ведущая организация — Бакинский государственный университет.

Защита диссертации состоится «с ¿¿У» ¿¿/{>/6$ 1994 г.

в /5 часов на заседании Специализированного совета Д 004. 12. 01 в Институте ботаники АН Азербайджанской Республики.

Адрес: 370073, Баку, Патамдартское шоссе, 40.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института ботаники АН Азербайджанской Республики.

Автореферат разослан « Хо » маЛ- 1994 г.

Ученый секретарь Специализированного coвв',^',

кандидат биологических

ОЩАа ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность гюоблемы. Согласно современным представлениям, биогенез структурнсм^ункциональпых компонентов фотосинтетического аппарата осуществляется Тесним взаимодействием ядерно-цито-ллазматических л лластидних генетических систем, и в синтезе мембранных белкотз участвуют и цитодлазматические (80S ) и хлоро-4 пластные (70S } рибосомы (Насиров, 1975; Ellis , 1977,Ibdl;Gray 1987).Для выяснения участия отдельных белоксинтезирующих систш . цитоплазмы и хлоропластов и изучения роли их геномной система в этом процессе наиболее удобным подходом является метод ингиби-горного анализа, т.е. использование специфических ингибиторов, бяокииущах трансляцию или транскрипцию в отдельных кшпартмен-тах клетки. Не вызывает сомнений, что такой подход дает возможность вjявить влияние Нарушения синтеза определенных белков на б.отосинтетическую функцию п нативное состояние пигментных систем хлоропластов, Познание принципов регуляции позволит в будущем управлять процессами биогенеза, лмея в виду конечную цель - повышение фотосинтетической продуктивности растений»

Имеется немало работ, посвященных изучению формировгяая и накопления пигментных систем хлородйастов.0днг>ко не был исследован полипептйдний состав, а а послеу.ем случае стоит вопрос о корректности пршленения стандартных методик выделения.Не исследовано тазсгш влияние ингибиторов синтеза ¿HK а белка ¿за иинш область .Почти не имеется иЩк . мадии о процессе транскрипции в ядро и хлоропластах на синтез и сборку компонентов фотосинтетического аппарата, за исключение« работы (üogen et al.' , 1990)«Таким образом, вопросы, касающиеся регуляции биогенеза пигмент-белковых4^ комплексов ыотосинтетичэского аппарата недостаточно изучены у высших растения (особенно у т&кой валшол культуры, как пшеница).

И ель и ааДаЗи исдде^вщия» Целью работы являлось исследование регуляции формирования пигмент-белковых комплексов дотосинте-тическях мембран хлоропйастов пшеницы на Уровне трансляций а транскрипции .Исходя из этого бйг.л Поставлены следующие задача:

1. Изучить действие специфических ингибиторов трансляция на иоляпептадшй состав, фотоХшШескуи активность а сяектральн-.е характеристики хлоропластов ¿зеницы.

2. Изучить действие специфических ■ ингибиторов t^aácmymum на полипептидкьл состав, ío .охииическуп а^.тиБлость л спек?_.аль-

ные характеристики хлоропластом пшеницы.

Научная ноызна. Впервыо. комплексно ь срашитездш 'плайё исследованы спектральные характеристики, фотохрдачесщййЗДФйЪ*-нооть и полипептидный состав хлоропластов,, вцделрнн;д£ "йз об'р'йой-танпых разгачныма ингибиторами; трансляции' т®айр_щ|®дац дргфйсг-ков пшеницы. Выявлено, что линкомиция блаь ф^е^ ФШИГез апобойка Р700 с ыолек^лят-аой массой 72 кДа и синтез, аджштдов 43., й'З^Й п 32 кДа, принадлежащих комплексу ФС 2. Пр^ Фсчезаки 1л а при 683 № РЦ ®С 2-й. прц. 690, 696; % щаТшк «С I. Установлено, что лннрошцин не. влияет-на. ЩЪъешшщ ССК в уйё-лнчдвзет содершше дв$х< ооновдп&. фэр, ^ ^а ."$43 ем (хл б) и 676 да (2л а).. Выявлено,, чг,с. при- блшш^^й ОШшйГза йодигвп-тидов РЦ фотосистем^ 41 ФйК-2.. В ош&чяе дкдащгяна,*- циклогеяощлгок прг?рч.дтщ- к-, рв.цущ^>ШШЪ ШШй-ц, облаете 28-25,5;, к5а», укен$гвд1т содерБагаге выщзудйг-зашю^^р^фо^Хк. бтого комплекса». Прц< э?рм: уменьшается- такие соотяощ^ще^^.Зб/РбВБ,, что, свя?а!1р с; бдощрованьеы синтеза ССК-1 и Пр^дзаиб, что вдрщфдар,?*! трапрлщвд,, сильно -одавяяя функционирование РЦ ФС 2, по'щь не . ш?»?яи.Тг ВД> фргртишчзскую акта внрсть ТО I.

Ингибиторы транскрипциикп стаму-шровали-накопление субъедг-шщ ССК, что, по-видимому,, свидетельствует о том, что регуляция оборот апобежков ССК ооущеоргйя^гря: на пост-транскрипционном уровне. Выявлено, что регуля1ЩтФр$®рсвания ШК хлоро пластов пшеницы, г основном, осуществедетрь н?-. уровня трансляции.

Нгургто-птактическа; цзннрот*»,. Полученные результаты существенно расшряю? и углубляют вдяр-! представления о механизмах регу-лйц^Щ; фср:дроваш1Я шгмантг^цоз.шх комплексов фстосинтетачеекой

0;щ могут быть, ¡вд^дьзоваиы для дальнейшего изучения пращ?!ной 1 Фр1р!Ррваш;я.фотврадетртического аппарата. Эти реэулъта-т^орзт^ч^к^.значение для выяснения механизмов поглощения '^•ерва^фщщщ^&ц^рсяа солнечного света при фотосинтезе. Детальное понимавд^, щжндапов регуляция позволит в будущем "правлять процессами биогенеза, имея в виду конечную цель - пов£г*' аенио фото синтетической продуктивности растений.

Апрофдпия работц. Материалы диссертации бьиш доложены, на л Всесоюзной конференции "Преобразование световой.энергии в.фото-скнтезпрущих системах и их моделях" (Пуи^но, 1989}; .IX Медд^йа^'

родном; к&йгрессо по фотосинтезу (Нагоя, Япония, 1992); Ш съезде

(фййкФ-Потербург, 1993).; I (Баку, 1990) и П (Баку, 1993) РеояуйЩ'йайсвих биохимических конференциях; I съезде Республитсан-ШЩё&Ъа физиологов растений (Баку, 1993); ХУ1 Международная кощзейсе по биохимии и молекулярной биологии (Дата, Индия, Республиканской научной конференции аспирантов АН Азэрб. Рйеиуб^эйи (Баку, -1990). Диссертационная работа обсуядалась на ое.мчна;а% :ц заседании Ученого совета Института ботатки АЛ Азерб. Pecnyfefei.

Йо материалам диссертация опубликовано 12 работ.

йШйЖТура и объем работц. Диссертация состоит из азеденля, Сбаора ЩШратуры» ойисания материалов и методов исследования, розуяьтатщ й йх ойсупдеяяя, заключения-, шводов и списка цитаро-1Д5Н(оЗ ли^рйФурй-. Диссертация йзйозена на страницах машинное тотсста,, Содержи* '6 таблиц я -26 рисунков. Список литература щгзте? ййймейбьаняй.

ОЙЫЖТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектом, исс^Щошкня служил интенсивный сорт твердой ознкой яденицн ( Tritjca-a DesfJ Гарагллчиг-2. Растения выращивает й водной культуре на fefe'Tpoвольной бумаге в факторостаганх усло-ЙЯЯЙ под дшачвоцонтиш® й'ашгаш, освещэнность - 10000 лаке. 5-6 дчевяне эглолпрокшицз ^£йсткн 'без зеряойка и корня перосатава-«Я В "Шй«^ «а ШВЙй'тора нет йоду без внгйбптора (кон- .

Обработку йророегков айтибиотикаки проводили по методу, предложенному в работе Тнлл- ja с соавт. (1ЭС6). Применяли специфические. ингибиторы синтеза белка, подавггаийв трансляции на 70 а рибосомах хлорогиастов (лишаддащин» хлорамфеш'1кол) й 80 а рибосомах цитоплазмы (цлклогексимйд) или подавАтаяЙге транскрипции в хлоропластах (рйфайййци.!) й в кйчтйё (аЖномиг^Й Д) (Адаарлп а Ключарев, 1975). В опытах ке'гтолъЗойаЛи сЛедуюийэ .ссВДенграцпи ингибиторов: ЛШ ^ 0»t г/ль' ХАФ - 0V5 r/jtv Щ - 0v0i Ш-, РЭ - 0,1 г/л, Ахт.Д - 0, Ох 'г/л, Пэрвсаяейй'йз проростка ввдэрайвалп 24 ч л темноте, затем 48 ч эк:локнрОвалй на ёвету.

Листья измвльчаЛй в гомогенизаторе KBi-302 (Польша) а течо-¡ше 5 сек при 4°С. ВвдеЛенйв £лоропяастов и ос!яденле талаяозд-Я1£Х l/ембрая проводили осмотическим шоком по методу ШугалороЗ (I97R). ПагтинмЯ осадок мейбрап суспендировала в 5 ill трзс-KCl

буфере, pH 8,0. Материал иопсипзова^пт срачу или яе замораживали в жидком азоте (77 К) для хранения.

Изучение пслипептидного состава гилакоидных мембран хлоро-пластов проводили путем электрофореза в градиентном полиакрил-амадиом гелэ (10-25%) с rs-lía на пластинах размером 1x160x180 ш по методу Лемшш (1370). Парад электрофорезо,м образцы солюбк-лизироваяи 30 ш t в растворе, содержащем в 5 Ш трио- hcl, pH 8,0, сахарозу, 2%-пШ Da-Ha, 1%-тй 2-мвркаптоэтанол. Моиекуляр-пш шссн полапешздов определяли ро методу Вебера и Осборнг (1969). После электрофореза гели огсрашвали в течшто 1-1,5 ч 0,25%-нш раствором кумасси 11-250, приготовлешшм из швея 10$-дой уксусаой кислоты и бО^-ногэ этанола. Избыток красителя удаляли в самодельном аппарата с активированным углем в даеси 7^-ная уксусная кислота - 28^-ный атанол. Шастяпки сканировали на лазерное денситометре ültsoecsa-2202 (ЛКБ, Швеция).

Измерение спектров поглощения (А) и их 2-х и 4-х производных (Ав, А1У) при 77 К производили на спектрофотометре 2итачи-557 (Ягоная) в двухяучевоад режима со стандартнцг.я 1фпнадлехкостя?,га, яак описано в работах (Асадов и др., 1984, 1986). Изшренле прп 77 К спектров $луоресцещтаи (3?) проводшш иа спектрофотометра йлаад-вбО (Япония).

Копвдцтрадив хлорофилла н отнокедко 1л а/Хл ö определяли по иетсд? ( ИсЫааеу, 1941{Л1зюп , 1949). Фотохимическую активность хяорошгастоь определяли поляро1таф?чвскк.л методом в замкнутой ышэгиметраческой ячейка о пл<_гиновшл электродом та па Кларка по поглощении ила шделеншо кислорода (фшша, 1971). /на ость £<3 X по фотоокислегаш F700 определяли по волггтнз фотоивдуциро-ваиного езтвнвшл поглощения при 697 ни на спектрофотометре Хита-чи-557 с боковым оснащением и со скрещенными фильтрами СЗС 22/КС 18 к КС/СЗС ( ilarßbo and Kok, 1974).

РЕЗУЛЬТАТЫ В ИХ ОБОТДШИЕ

I, Действие специфических ингибиторов трансляции на полипапгащный состав, фотохимическую активность п спектральные характериотшз! хяороплас-тов пшеница

Градиентный электрофорез в I0-25^~im:¿ МАГ в присутствии 0,1^-вого погизываот, что тилакоидяче мембранк ппвнида

содержат около 28 'полипептидов о шлеку.адрной массой от 72 до 15 кДа (рис. I). Обработка проростков пшеницы ингибиторами трансляции в хлоропластах (ЛКЛ) пли в цитоплазме (ЦШ) шшваст суце^т-веишэ изменения.в составе белю в хлоропластной мембраны. При этом блокируется Ошнкомицшшм) или частично блокируется (цикяо-гексимадом) синтез апоболкя P7Q0 о молекулярной м&ссой 72 к5а и синтез 2л а -белка ФС I (CP I) с Ы 125 «Да, т.е. основного структурного эдсианта фС I (рис. I б,в). Интересно отмотать, что при этом обнаруживали сохранение значительной фотохимической активности 5С I при исчезновении 1л а-белка CP I на депсатогралиэ, что является темой отдельных исследования. Аналогичную картину наблюдали и в некоторая других работа:?, т.е. сохраиязтся значительная часть фотохимической активности Í0 I при 0TC7Tc?Biut CP I (Hilles at al. , 1977; Sarvari and Hyitrax , 1985; Bujcea ot al. , 1985). Прэдставляет интерес узнать, какого типэ изменения ивдуцаруится в структура ФС | обработкой эташ ингибитора;®!. ЧуЕстгатасыюсть синтеза Хл а-боЛка CP I к ингибиторам белкового спнтоза па 70 а рибосомах, а также существование ахасгоиаих мутантоз, лиейшщх CP I, по-видшлоцу, однозначно укгзюзают на участие хлоропяастпой ДНК в синтезе полипептидов Х- а-болка CP I. Создаст нокотороо недоразумение уменьшение содержания Ял а-белка CP I при действии ЩИ, Однако, имеются дашша, что в формировании пагмапт-баддапэ-го комплекса SC I участвует как пяаствднчэ, так'п датоплазйзта-чесюте б.алокспнтезируюв*ле систе:ли ( Bilis , ISGI). Судя по дзлеп-тограммо, под действием ЛШ подавляется такяе.синтез бежов 48, 43,5 и 32 нДа, прииадяеаацах ПБК СС 2. Огсэда следует, что кодирование и трансляция OTJtx поллпептцдоа цепосрадетззяяо связали с пластомнш геномом и собственной бэлокскнтезпрупзо;! системой. Однако V при обработка ЦГЛ няблвдается на деиситогг-тг-зз углзаьзаш:о содержания этих полипе птадов. Вероятно, при их аптвзз в яакоД-то степени принимает участие ядерная геномная спстегл п цптоплазмз-тячес: лв рибосомы. Есть тавхе мнение, что содиьептид« рэакцпошшх центров фотосистем синтезируется в хлоропластах ( Gray, IS87), но для их летраптшя в формирующуюся мембрану е сборки в функциональную единицу необхда'« минорные компонента, ститозируещэ на цатоплазматдческих рибосомах. Интересно отмотать, что ЛИ« на только не влияет ка полипептидк светособнраздего 1л а/б-болкоао-го комплекса, а в некоторых о.шти: даже увеличивает их содержа-кие (28, 27 и 25,5 к1л). Эти данные хоросо ".озладаэ? с результа-

--.С*--

Рас. I. Дшситограйма аявктрофорода белков т.пакоидаых мои-бран хлоропластов швницы в 10-25^-ном ПААГ с ш-Еа ко обработки (а), госде обработки ЛШ (б), ЦГИ (в)^ г - белки-маркеры: фосфорилаза Б (94 цЦа), бычий сывороточный альбумин (67), он ¡льбумин (43), карбо-анхздраза (30), ингибитор трипсина (20,1), лакталь-бушн (14,4).

- ? -

тсл'г," полученными ранее (Uyitrai and Htxvorl, 1985) а в опытах с другим типом ингибитора синтеза белка в хлоропластах - хлорам-феникояом, который стимулировав! накопление ССК и ого апсбелкоз

at al. , 1985). Эти результаты наводят на fas ль, vs о при условиях, где синтез белчов реакционных центров фотосистем I и 2 ■ ннгибггруется, светособирашие апобелки могут стабилизироваться. Таким образом, подтверждается гипотеза, выдвинутая Акояноглн и • др. ( Ssinsa and Ar^uroudi-Akoyuaoslou , 1988), о существовании конкуренции мевду годипелтидами реакционных центров фотосистем и овотособиращиш ¿.побелками по ново синтезированному хлороЯил- " лу при формировании фотошнтетической мембраны.

Подавление трансляции цинлогексимвдои приводит к редуциро-евнеэ полипептидов в области 28-25,5 (рис. I в). Полученные :ia-М! результаты годтверядазт данные о том, что подипептидо ССК кодируется мнояеством небольших гаюв, локализованных в ядре, а сантезируются на рибосомах цитоплазмы. .Действием ЦШ ослабляется интепгавность нпзкомолекулярных полос, а для ЛШ, наоборот, увз-дп-1гаотся относительное содеряание низкомолекуляршвс компонен-"оз глекбра:ш. По-видимому, это сыдетельствует о значительной лабильности структуры мембранной система хлорошшстов у проростков, обработанных антибиотиками, а тагсге о серьезных нарушениях в их б елкою .1 организации,

Представляет танае определенный интерес изучение влияния подавления синтеза определенных белков на фотосгштотичеокув фугш-цйй, §отохш.щческуа активность и состояние пигментных систем хлорошгастоз,

В низкотемпературных спектрах поглощения у обработанных образцов по сравнению с контролем сбнаруккваатся неболъпяо различия. Главная полоса, кот чая располагается при 677-678 пм э красной области спектра, сдвигается на 1-2 шл в коротковолновую сторону. Одновременно уменыззется сз интенсивность относителъно контроля. Приведены такхв четвертые производные спектров поглощения исследованных препаратов (рис. 2 и 3). Как е!дао из рис. 3, дейстгае ЛКМ приводит к исчезновению трех наиболее длинноволновых форм хлорофиллов: Хл 690, 696 и 705 мм, которые в литератур« относятся к реакционному центру ФС I (Ладыгин и др.. 198Й). tla-блвдаешй в спектре А(77 К) при обработке- ЛШ хлоропластов пик при 689 нм скорее всего являегся вторичны;.! мяксамумом четвертой производной полосы при 676 шл (Асадов и др., 1984). Исчезает ц

Рис. 2. Спектр поглощения (I) и его четвертая производная (2) при 77 К хяооопластов, выделенных из норызлышх проростков пшеницы. Интервал да|фаренщровашш й X = 7.

§орла Xjx а при 6ВЗ, относящаяся к реакционному центру £С 2. Интересно отметить, что пра етом обнаруживается увеличение (по отношения к контролю) относительного содераашя двух основных форм хлорофилла светособиразощего Хл а/б-белкового комплекса: 1л 6 €48 -14,8$ в контроле) и Хя а 676 -:40,7$ (34,3$ в контроле).

Одновременно отношения агшлитуд ликов А (676): А(648) у контрольных и обработанных ЛШ хлоропластов составляли 3,3 и 2,1 соответственно. Аналогичные изменения наблюдали Сарвари с соавт. (Sorvari end Hyitrai, 1985; Nyitrai and Sarvari , IS85) на фасоли. Однако под действием ЦИ значительно уменьиалось содержание пиков При 648 и 676 относительно контроля: 7л б 648 - 3,8% (12,4^ в ¿сонтрсяе) и Хп а 676 - 10,2% (34,3% в контроле). Вероятно, среди субъединиц светособирающего комплекса, которые, сильно редуци- •

-i

Rio. 3. Спектр поглощения Ш п его чатзертая пропз-• водная (2) при 77 К хяороптастов, гтделе.'ш^ из обработанных ЛК.-! проростков пзс'пзш. Интервал диЗферелцпроЕапзя Д X « ?.

руются под действаш ЦП! (-»т. девсятогрс^, шс. X s), ексэтся полипептидн, связывагаще о»л ftop!.3i хлорсфгиов. Эге согласуется с результатам! спектралэушх исследошгаЗ CGS (Acates а др., 1SS7), ввдвлешшх из тияакоядноЯ ^кибргши ^лсрокгастоз.

Сравштельнкй анализ 4-пх ^сззЕодяих епезггроа таглезепзя при 1° К ялоропластов нормзяшк и cdpnôoTfiimux ЛКУ проростков л синей области (рис. 2, 3) показал'ачздугг^з. Для обработан:!« $2$ хлсропластов проявляется /ген о о умешпзшю Спо отаесакта г. контроле») отношения шятлитуд таков 1л а (ир-л 440 a б (игл 472 ктл), что соответствует данннм по красной сбластп {сл. пгзз), 3 -;з г-э время обработка ДВ< хлорояластоп гало сказизается на полоейя поглощения каротииоидоэ' (тага щ>й 452 , 4S0, 484, 434 a 503'пи).

На рио. 4 !гредстттс!Ш ; ! : ! з ко т e.-.tn о ра г у р1 ; ;; и оавкгра

41, ~ДеЗо®Еае ингибиторов трансляции на спектры '"фп^оресценщй! >Жброшгастов -пшеницы при 7? К: I -- х:онтрадь, '2 обработанный-ЛШ, ■ - !-оОра;б отаышй ДШ.

иа контрольных"!! оо*работам1ых ингибитора?® гЕр$рЖг?<йэ. ^Гяь^ная полоса флуоресценции» Которая ."в/контроле рас-ДШШ-аетсй при 740-742' нм» сдвигается в кэроклвйЗййауо (сторону ДЬ'1-6 н«. По-зицкмо.му^-ингабирование синтеза гшк№й}ршс Шатапеп--тидов ФС I талакоидаой 'дайбраай; врввоя№ 'К Еодаалжаш образования -НЙГ^ЙЙ ¿йй'нновсишоеых 'Шквкйх^орм хлорофилла. <Зто скора© о.бурловлеко-; Уу^ШЁйешге«- сбдзр'паная хлорофилла в анлжке (РЯ5г1)/и тюдобзййдспектральный ^сдвиг <3ыл-1фйшсаи удалою® • хлоро&ЗШв анте1шы'('НиХХе^ 1980). Под

^ейстп!'емЖ41 ^^флуоресценции ксчезабТ'ИЛечо при 695 нм. я-гм^вдо, у^Шййаё'гбяШ-Ия'генсйвность паюсы при ^685 нм относотель-

¿сонтроля(, ,с подавлением образования полипептядоз

РЦ 4С 2. В то же времяг.прщ^кдат -стимулядая роста отноше,мйякК'

■¡l'dítóífflHOCTeíi físjryopeolíeiíiíí-iH P 7Йб/-Ф'б85 относительно контроля, 'Sito 'ítoítiio связать со йгийуляцией сйнТёза CCK-I при- янгибироваяип 5йй JtJe'sttaííid!ifíEJ3c центров. 'Отногеиие Ф '736/ V 685 у контроля и об-¡¿¡абс^ёйшх -31ЙД хлйро'й&гстов соШ'ЬШю 1,6 и 2,4 соотввтссвепно I).

Таблица I

Дейотете 'ингибиторов 'трансляции на отноаешо алуорзсцеш^ш 740/686 ни хлоропластов при 77 К

Ф£5работка .........74 0/886 им Длина волна, ни

Хошую«, -IV6 — .......-.....i - 74Ü

JlUíníJí^'X'Wífl 2V4 73-3

IL'SSSWeitcraa« Ь,2 733

Эти даяние хорошо согласуются с результатами Сарварп с соавт. (Barvari aid Nyitrai , 1985; Jyitrai aaü Sarvari , 1985), полученными на фасоль. В низкотеглперг турках спектрах (флуоресценции хяоропластов под действием ДШ уменьсается соотношение Р 70S/ Р 685 и составляет 1,2, что, видим», связано с блокированием синтеза CCK-I и ССК-2 под действием ЦМ. Таким образом, отноаепио (F 735/ Р 685)Жг > (Р 736/ Р 685)^. Аналогичные результату бшш получен» на горохе (Ггшгео и др., 1979).

Почти аналогичную icap пну наблюдали и в опектрачышх характеристиках при измерении непосредственно листьев проростков, обработайте: ингибиторами. Под дейстааец ЛВД полносткэ исчезает форма Хд а при 683 им, относящаяся к реакционному центру í€ 2, 3:л.*.ет-ио уленъвается содержание дпкштвоягових полос, входяда:: в состав СС I. Интересно отметать, что глк в случае хлоропластов, так и в отсм случае, при блокировании синтеза балков реакцяошпхх цеитроэ йотос^тем линкомиедном, увеличивается штенсль.осгь основных форм хлорофилла светособиршсщего комплекса: 1л а при 660 , 669 и 676 нм. Появляется да?.о форма Хл а прт,1 679 нм, относящаяся к сво-VocotíKpaw-ty Хл а-болку, которая обычно при регистрации производных спектров по разропается.

Известно, что потеря любых пелипептидов в результате яягиби-poKamá синтеза белков сопрог гд jtch опродаззнкима изменениям в co^of'tíimc? пигментов. Как свидетельствуют пг,лученные результаты.

- и -

подавле:ще трансляции с ЛШ, и ЦГИ приводит к уменьшению содержания гигментоз у обработанных проростков, В случае Л1Ш общая убыль хлорофиллом, происходит за счет преигдущест венного уменьшения содержания хлораТигла а. В результате чего в листьях заметно уменьшается отношение хяороф&ялов а/б от 3,16 до 2,62. Это преада всего связано с большой чувствительностью хлорофилла а к действии' ЛКМ, чем хлорофилла б, что хорошо согласуется со спе! гральнши данными, пслучошгшп шш по нативншл. формам хлорофилла. Аналогичным образом' действует.и другой тип ингибиторов синтеза белка на 703 рибосомах - хлора?лфошп;ол. Здесь следует особенно подчеркнуть влияние даглогокошлэда, т.е. ингибитора, блогшрувдв-'о скнтез белка на цитоплазма. Он подавляет накопление хлорофиллсв а и б примерно одщга'ково,' в результате чего отношение Хя а/ Хл б в препаратах под действием ЩИ близко !•: контрольному.

Скоросгь дл-щ'злешш кислорода у обработанных хлорашхастов значительно подавляется :£табл. 2), Здесь следуот особенно под- • черкнуть, что в таких окопоржлонтах па из:.:еряе;.ы£, показатель заметно влияет концентрация ингибитора. Ноэтагу необходимо более критично относиться к получений.! результатам. Пру тех концентрациях, которно кц вобрали гм нагих о!штов, бехяеэ активно, как и предполагалось, дейстйузэт ингибитора синтеза белка в пластидах: Ж! и Ш5, ЦП! исысолько уступаот -им. С одно;! стороны, здарошо известно, ч^о процесс юзделендя зшачородп в шзтко непосредственно связок с хко^юшшеггаи, с круто!*, что баыа 33, 23 к 17 кДа, участвующие в окдедашш води, код^руится в яд.'с ь. синтезируются на цятопяагкатачаспзх рибосогах. Сдсдуот от^от^гь, что как тест, ха-рахтеризукг^кй акхнвчост* £С 2, кзполгзозлп: опсгстлу 1^0 -«-¡СдРе (С10б , с как тост, хахакгор^зуздиЛ сякассосзь К I, шшояьзовшз: евзтеглу ДКЕЮ'!^. —КВ. Как сдсдуст из тсЗл. 2, -лггабиторц траио-дядаи (особенно ЖД) значзтадапо пздогд&зт активность Щ СС. 21 Однако, при этом не происходи? особш: кклоншаШ в активности 40 I. Таким образом, в лроткткшато^цость г. преимущественно:^ кнгабарс»-ванг; ФС 2, эти ингибитору почти не влпяэт на фотохимическую активность ФС I. Среди них а огяпчпе от ингибиторов, блоетруадих •и'.лхоз белка, в юшеззщах, цаклотекссшд более яалэтио действует на активность СС I.

Как видно кз табл. 2, ингибиторы трансляции увеличивают отношение ФС I/ £0 2 по пероносу электронов относительно контроля, что свидетельствует об уменьшении активного функционирования РЦ фс

. ■ Таблица 2 .

®отохи;.ические свойства хясропластов, обработанных иигибитораш-i трансляции (мкмоль 02/ г.с *хд-ч)

Варианты Активность 50 2 Н20-^К3Ре (СИ)б Активность К! I ДХФИЗ ч2—- -мв Отношение ФС I/ SO 2

Контроль 258±Il 35li.32 ; , 1,4

Лпнког,шщш 49±7 288±24 5,8

Хлоранфсникол 52±К 314*28 6,0

цшслогоксшлщ 64±3 , 1эз±т: , 3,t

2 'особенно в случае ХАЗ - 6,0). Сходные результаты нолучы.ы нагл и яри измерении фоте химической активности щотоснстяд с погэдьэ других тестов,. потор_э попосродс лзе:шо характеризует футздкшро-взгае реакцшшзх центров. Цргадаа янаеттаг».1И $0 2 при всех эт.« воздействия:: мо~ет быть обусловлена.эдавдсштем цорсноса элсг.тро-нов от фоофитгла на перетягай хипоаовкИ акцептор

Представляет особы!!-питсрес шяилийе* ролл' осаовиого лолп-пспгода ядра ОС I с llv 70 iclla л Тл s-бслгл CP I з футшззожрохг.-ши Р"00. Так, по работам Бенгпса и Лзлься С Bengia and ЛзХьса, 1975; 1977), указанный еолгшзксяд является косятеяса йогохаяатас-к: активной Qcvr.-j хяорс£ттаа а цт-л 7DQ n;.i :i ctjgtcjeci?c:i фото« гощдаровсшцй сигнал при 700 игл. Патучспнсэ nam по гра-

диенту Г&ПЪ-ЭЛОКТрофорСЗу что 1703ЛЛ 1ШХЛ-

бктора?:.: «отоза бачка уходит'па^птситлг, 72 :;Да {т.о. слзпрстс::!! ?700) и :-л а-бслок С? I (с:% rrio.'I, Г'л), С-како п?-

сутстгло данного нох:псптиг.а а со'с.7ат."> С? X гг-ггд го на йогосетчссксй ахтатос^п ГЦ'О I, г»стс~-э i'r::',;.;;;r:rr: т~.углт сдо-ссбсг-га: 1) nxinpoipaJmcK:^ гдсг.еч го

логсза от ДХКЛ (табл. 2) а.2) тто ёотс^лу^огг-'.ггГсгу ногшэ погадкия пра 7Ю ш-т (¿А 7С05. . " '

Носкотря па то, что С? I п erq-acc6?.r»2 сэткго' ргдздащстся , ингабитораш синтеза бежа,-по Сптраг~5гип гязаяпоаг: CS 1., г^роят-* но, сутесгвуот поток электронол'о? И.1 £С I сгстсгду i.ier.r.0- ■ за?лепяемшс пэрояосчаксз, катаят явгсзха? nasi > п ягастедаюа. В лзтпратуро. ккеятся данные, продЕСГаггт^з.гггжзо такого альтер- , натигаого пути в ЭТЦ фотосинтеза (Акулапа п Гс~сз, 1977; Ghana, 1979;. Возможно,такие, чго 'а данном,сдучзэ в фотташиачосазе роак-

щш вступашт шггекулы других» отлн'шых от Р700, пшянтоэ ЕЦ, ¡работающих,. однако, j. меньшей активностью... С другой; сюгяраш., ш пользу этого аргумента, недавно йолнштов работа на; высотах COL» roinharátii , в которой установлено, что при отсутсяыЕка шетла-■ида» 19,5 1Да 1т.е. Ро-з бедка Риске) гдукшеи' на способа к «дате,-оу ядра ФС X и. оддщ^ешвэ заачгоешю постегали: концеитрацаа гголппогэдлгз 65 и 'Б2,Е СЛзЙсКёв ia Е&В).

Еазк, в совокупности наша яшш» a jrnsa fí^ras авторов сяазяз под сошзпнб ств9то1свеанос«ь вожшгакхда с EL, 7Q «Да в £^Еазпониров£1шя Щ -С I. Но иска: «геие «акха j-^assa в этом про, щасов ножа в«з'чегх:$ицарован1шх Еизксмолокуаогр'Ш. талашнивдов (дли полглаитада), входящие в ядр' ФС I. Шэ-ввдгкй>£ч дда реше-шк стой проблем -необходимо вздел ять чкетые преяара'&г ШК §C I в нагишом сосо^лшаз, изучить его субъэданичный состав 3S фотохи-

' íiiiiO > ' ■ •

2. Действие специфических инга'битбров транскрыщии Há полипептидный состав, фотох^тческую активность и спектральные характеристики хлоропластов пшонгщ

Градиентный электрофорез в, 10-25#~ном ШАГ в присутствии 0,1^-ното LS-Ka показывает, что обработка проростков пшеницу ингибиторами транскрипции в хлоропласт; с (рифаьяпцшО гли з клсеко (актиношцдн Д) вызывает некоторые изменения в состава белков 'ÍH--лакоидной мембраны хлородластов. Как видно из денситограммы (рис. 5), вод деИсгвцем обоих ингибиторов -локируется синтез покакайте-» до с Мг 51 кДа (полоса 4), который относят к внутренней акгеиг.о ÍG 2. Блокируется такко синтез полипеплща 32,5 иДа (полсаа XI), который б литературе относят к едру £0 2. Под действием «1.®шоми-ipnia % оз почтя годностью исчезает (рис. 5 в), а в случаа руфам-шц'лла - остаются только следи полоса 32,5 кДа (рис. 5 d). Удала-1210 &rovo полгподгэда под действием рнфаыпицша - шгкбШ'ора, по-довхЕщего транскрипцию в пластида):, наводит на мысль, что его •яраижршцыя осуществляется непосредственно гиюгд.д xaopQiWacte. %;> ííctom не кабяадеяц особых изменений в состава а содержании по-■к-пс.Егдзов в области 28,5-26 кЦа (полосы 13, 14, 15) главной ан-scaaa сзстособпраальго Хл а/б-беквового комплекса 2,

Несмотря па то, что пкгдблторы трансляции в пластидах - хлор-ац^сямкоз а дшгдасаин .вызывали .накопление апобелда..«? светособп-

Рис. б» Донсптограмгяа ялек^^дрсяа (ишгохв ттапсаэднсх избран :кзщиас:я5г?ьв> пезниды в 10-25$. ШЛГ.'с-лз-Яа(Тйрййггии &Г„ лосло- обрабо^и:Р5. (б), ;л1гг:д 'Св);; 1Г-- (йш^та^йгарис. фЬсфорялаза-Б-'(94 -гДа);; ЖкжШошещэягчш?.*аивбугт.* (67-'гДа),. 'отальо'улш гавб&янгпярз5*г ©ШкДа)',.

"•ингибитор трипсина к,ма5)„ жсаявяв6$ит-£1<М вДз).

ржг;сго хлорофилла а/б-баясовогохтсегзгсяа. (Йрздчдуцая глава), гакоЛ: сзЗйекг.ка„урсана г.5гПКнт лабЗкчазтся. Аналогичные дашша тас^тпи 1в;рй&<гао ((Иозеа>.е1? «1-., 1930) на мутанте шешща.

'Паадзэнсоотметить, что под деЯсттаем этик ингибиторов по дававд выоокоразрепакв",й системы электрофореза заметно урйлпчива-етгя содержите пг.лпяептидов 33, 23 и 17,5 т<Да (полоса 10, т8 и 23), входящих в состав кислородвэделяющего кошлокса. Под дейсг -вием обоих ингибиторов увеличивается относительная интенсивность низкомсиекулярных компонентов мембраны. Наблюдаемый эффект мояно эбъяснить тем, что в условиях неполного ингибировакия синтеза вы-

сокомодекулярных йплкои ыогут кедсаоаолмоватьоя участвующие в синтезе этих белкив компоненты белошштезирувдей систеш, что создает воздогшоегь болео интенсивного использования их для синтеза низкошяекулярных белков. Следует отметить, что ш жбиторы, блокирующие транскрипцию и в хлорошгастах (РФ) ч в клетке (акт.А) не вызываш особах изменений в содержании Хд а-белка ©3 1 (СР I) и его апобелка по ощшетт к контролю.

Вызывает такза определенна интерес исследование влияния блокирования синтеза некоторых поеттеитидов на фотохимическую активность в состояние пигментных сдстец хлоропластом.

В иизкот чгазратуряых спектрах "оглощевия у обработанных образцов хи срашсшш с контролем езобых изменений 1.з обнаруживали. Цравэдеш тгакг четвертые произв.;,чипе спектров поглощения изучен-1ШХ препаратов лри 77 К (рис. 6 7). Как видно из ¡мс. 7, у хло-ропластов, обр Зотачных РФ, 'практически остаются следы дтишовои-новше подсс (1л 630, 690 и 705 ни). Уменьшается ч интенсивность форш Хя а при 683 ни, относядаяся к ?Д ОС 2. По-видимому, эти формы хлорофилла каким-то обозом связаны в мембране с полипелти-даш 51 и 32,5 нЦа, которые исчезают при блокировании транскрипции в хяородкастах и,воэтзно, эти полипептиды играют существенную роль в чатавной организации данник форм хлорофилла. Содержа-: вие форы Хя а (660, 669 и б7о) и 2л б (648 ни) еветособиравдего комплекса, почти такоо так у контро7М. В сине'' области спектра особых изменений не ка'шэда.та. Аналогичную картину яаблвдали и в препаратах, обработанных,актюмащисм Д. В спектре низкотемпора-туриой флуоросаоицаи у. препаратов, «обработанных рифампицаном, происходи? одеи? оспоейого 'ьакевмуш от 740 до 736 нм.

Результаты оштоз с'ршиЗпторзиа транскрипцаи в хлоропласта^ показывают, что риф&звети одакикор'ьм образом влияет на ссдераа-кно хлорофиллоэ а к <5, в результате чего соотношение 7л а/ Хл 6 оетаотпя почта ца;^ро»ио.коэтрояа 2,6В (Хл а/ 7л. б = 2,94 у хоптрстя). Однако, слнте5 хща$&яяь а в хлоропласта« более чув-езштелан к дейсгаш кжщойлщна Д п гаотоиу соотнопедио Ха а/ / 2л 6 ко значки» кзвдго кзитразя {Хя'а/Хч 0 = 2,60). ^роягня, что - дзааси сгучаз 'проиехсяит' нарушение нормального Функцпошцкъ езшш центров биссшигеоа'.«йброфшета и' клетке, йзмэнешю содераа-3£.п 1гаротзпкщоз,'козеб вазыятщпо-кдау.эму, не является ярся» следстглаа щцуйарогаипя, Ц обусловлены дибо. плеКотронным ;;ейязяся зкзор (^ува«з а- др., г-водостру.-глвнсл измене-

Гис. 6. Спектр поглощения (I) п рто четвертая прставод-

ная (2) при 77 к хлоропластов, тад&лгшпп из : иэр?лальньк,прор-_ жкоз потницы. Интервал диффз- '••. рс'широва'стя д X = 7. Концентрация хяпрофиляа ,; . равна 60 мкг/ш. • :/;'.•■..; '

ни ем мембранной система хлоропластов в i ззультато потери часть ' пигмент-белковых комплексов ( Senoucva and ЬайузЗл,- 1984; Селено- -ва и Ладыгин, IS35). vV!.-' ■ "' " ' ■ ■/'••'

Ингабирование транскрипции в пластидах.й в клетке, вызывает ■-•/. определенные изменения в фотохг пческой активности sJicpoiLacTOB. ; ... При этом скорость выделения кислорода (тест на фотохитачзскуп ait- . тивность ФС 2) у обработанных цреиаратов, в отличяо от шшибпто-. ров трансляции, почти на уровне контроля (в некоторых спнтссх датм. чуть вызе; (табл. 3). Сходные данные получены и в работа-(Горбунов и др., 1989) при использовании другого тпйа гягзбитора трог- „ ■ скригсдаи хлороплартноЙ'ДНК - ¿-дезокои-Д^глэкозы, в которой но па-'-' блкщали изменений выхода фтуЬросценции, евздетельотвувдах. об ипги-" ■ б^оващпь'яероясеаг^^ первичный жиион.

Рис. 7. Спектр поглощения (I) и его четвертая производная (2) при 77 К хлороыастов, выделенных из обработанных РФ цроростк;з пшеницы. Интервал дЕффэреццдрования дД- 7. Концентрация хлорофилла рант 60 мкгДдя.

Как Е1ДНО из таблицы 3, в переносе электронов отношение £0 I/ «1С 2 лине контроля н шд действием обоих ингибиторов синтеза РНК составляет 1,1. Это превдо всего монно объяснить тем, что ингибиторы транскрипции благоприятствуют фушсци.ннровашаэ РЦ ФС Г; Актишое функционирование СС 2 у обработанных препаратов до нь-ко-тороЦ степени ..коррелирует и с даншли элезстрофореза, в котором шукается увеличение содержания полипептидов 33, 23 и 17,5 кДа окюсигодыю контроля, участвующие в окислешь. во„и.

противоположность к сохранении активности К 2 в препара-'«'0}; хпорошшетов, -обработанных РО к Акт.Д, оба ингибитора трал-ецрашпщ вызывает уменьшение (хотя и незначительное) фотохимической актитпсста ОС I {табл.- -3). Аналогичные данные получены и по С^сшщэтировашауу изменении поглощения при 700 н.. ( дА7Э0).

Таблица 3

Фотохимические свойства хлоропластов, обработанных ингибиторами транскрипции (икмоль 02/ мг-Хп-ч",

Вару снты Активность ФС 2 Активность ФС I Отношение

н2° -К3?э (0íl)6 ДШФ Hg-Hffi ФС I/ «гс 2

Контролх 253 ± 14 351 ± 32 1,4

ифашпцин 290 ± 16 318 ± 25 1,1 '

ктпиоюцин Д 296 ± 19 326 ± 26 1,1

Зтк дашше наводят на шзль, что фунгашотзровапяе ШС 2 koíü--оструется не ка транскрипционного а на трансляционном уроЕИэ,

81020 ВОЗМОГЛО, что г>уяеС?ВЭ1ШЭ раЗ.тшчзя МСЙЗДУ ДейОТдДОМ Ш:дГ1б/.-

орсз трансляции н транскрипции ка активность Щ <Ю 2 связаны eflcmjts рп^амаицина п актяноетдоа Л не только на црсцоссц ранскряпции хяоротласйюй а гдерной ДГ% но такке и на кэ-габо-нзм глоток.

ВЫВОДЫ

1. Выявлено, что дгапаягак (шшгбпгор тргнедаацп; па 70s t:í-ссомах хлороскгстов) блокирует синтез апобелка Р700 с I.' 72

Да л синтез Хл а-бзлка cp I. Пода&тагется tsszo сгд'гзг: пояяаззй:-сз 48, 43,5 л 32 кДа, прпкадлсгащпх комшиссу 50 2. Црп этом на -oí! производной спектра поглощения исчегавг §c*s,s Li а 683 п; Ц ОС 2 к при 690, 695 и 705 ш.: -зцмент-белкового комплекса СО I.

2. Установлено, что лкнкоьицин на вдагаг на егштез субэсда-иц с Мг 28, 27 и 25,5 кДа свэтособпраящого Хч а/о-чЗелкс-ого кодекса. При этом увеличиваются относителт.ныэ содсрггнгя двзт ос-овнше фора хлерофздла свегособиратаето 1л а/б-балковэго ксиххоп-а: Xi б &Í8 - utb% (12,4% г контроле) и Хз а 673- 40,75? (34,

контроле). Увеличивается тш®е отношение полоо пазпотоглпэратур-ой флуоресценции £ 736/ Р 686 и составляет 2,4 (1,6 в контроле).

3. Выявлено, что пра блокировании синтеза тяишггвдов Щ ; „ отосистем I и 2, стимулируется формирование овэтособяраздих патент-белковых комплексов CCK-J. и'ССК-2 и пх оубъедшшц. Подтвврж-ено мнение о существований конкуренции мезду субьединицами Щ

©С I и 2 и сватос обиравшего Хл а/б-белкового комплекса за ново-синтезированные тгшкулы хлорофилла.

4. Действие одкяогокстшда (ингибитор трансляции на 80 а рп босомах цитоплазмы) приводит к редуцированию полипептидов светсуг ообиравдего Хд а/б-белкового комплекс? в области 28, 27 и 25,5 кДа. При этом гбяаруяено уменьшение относительного содераания двух форы хлорофилла СОК: Хл б 648 - 3,8g и Хл а 676 - 10,2$ (12,4$ и 34,3$ в вонтроло соответственно). Уменьшается также соотношение Р 733/ F 685 и составляет 1,2 (1,6 в контроле), что дико связано с блокированием синтеза CCK-I и ССК-2 и нарушением шграцш влергпи ыозду ОС 2 и ФС I.

5. Установлено, что ингиби? >ры трансляции, сильно подавляя функцагтирова :де F4 К 2, почти '(0 втия??т на фотохимическую ак-тпшость СО I. Б то m вреда ри'зыпицнн и актинсшцин Д ингибиторы, блокарухыро ^рансрршщизо в, хдорошшстногл и ддорном геноме^ практически не влияют на фотохимическую активность К 2.

• 6, Под действием рпфампидана и актиношцина Д исчезают пали пептиды с Цр 51 и 32,5 кДа £С 2. При этой увеличивается относи-' тельное содержание полипэптцдов 33, 23 ц Т.7,5 гДа, участвующие скислсшзи "ОДЫ. •

7. Ингибиторы транскрипции не стимулировали накопление субь единиц ССК. Кэ-Ездиыому, регулявдя сборки апобелков свегособьра!> цого 'кождокса осуцэс.вяяотся на"пост-транскрипцаоннои уровне. -

3. Еиявлеко, что в формировании и функционировании пигмент-. ■ белкоыд ысетиаксов тилакоиднои мслбраны хлороготстов пыешщн нд бдндаехся кооперация бедокаштезпруюда: п генетических систем ф*,-ра и хлородлаохов и рефляция форглзрования этих комплексов, в EOflHCPJ, осудаетатчся на уроню трансляции.

Список работ, опубликованные по теме диссертации:

1. СулзйьшоБ C.D., Русейшш ИГМ. Исследование белкового состава фстосантетическпх иембран хлоропдастэв г'гешщц /Д!атернд-Л4 научной конф. "Интенсификация агропромышленного производства 4 ва «щреашшсу гтайе". - Баку, 1988. - I часть. - С.137.

2, Судеййанов С.Ю., Русейнова П.М., Алиев Д.А. Полигаптадц тгаахоадшк иаибран хлорат:, сгов пшеницы /Материалы научной кои фарзыцда "Преооразова не световой энергии р фотос нтезирувдих 1

в'?ВДедяЬс%- - Цущкно, .1989, - С.ПО.

3, Гусейнова И.М., Сулеймаяов С.Ю. Действие ингибиторов трансляции в хлороплаетах н цитоплазме на белковый состав а стзк-тралыше характеристики хлоропластов пшеницы /Д Республиканская биохимическая конференция. - Баку, I9S0. - 0.58.

. Гусейлова И.М. Влияние ингибиторов белкового синтеза на полиг.оитвдный состав и спектральные характеристики тилахондпых мембран пшеницы// Материаль научной конференции аспирантов АН Азербайджана. - Баку, 1991. - С.60-81.

5. Алиев Д.А., Сулеймачов С.Ю., Г/сэйнова И.М., Асадов А.А.-, Ксмайлов М.А. Действие специфических ингибиторов трансляции па шмшпептвдшй состав и спектральные свойства хлоропластов пшеницы //Биохимия, 1992. - Т.57, В 5. -'С.679-686. ;

6. Suleimauov 3.1'u., Guseinova 1.Ц., Aliev J.Л. Tho effect. Of? lincpaycin on the polypeptide composition. a~d npoctral cbiracte-ristica of thylakoid aenbraaes //Ini Abstracts of tbe 22 ^ IatoiS national Congiaso on Ehotosyatheses, Itogoya, Japan, 1992.-p.19S8.

7. Гусейнова И.М., Сулейманов С.Ю., Исмайлов К.А,, Алиев Д.А, 0 кооперации белоксинтззируыцих систем тдатошшзш и пластид в формировании пигментного аппарата хлоропластов //Материалы И съезда ВОФР. - Санкт-Петербург, 1993. - 1.92.

8. Aliev J.A., Suloiconcv G.Yu., Guseinova I.LI., Ireaailov И.А., Азайоу А.А. Effect of spedfio translation Inhibitors on polypeptide coapooition and spactral characfceriotioa of ^hsab thylakoid asmbraneo. // "Ehotoeyntbetlca". - 1995. - V. 29, Ho 3« - P. 3o1-367.

9. Гусейнова И.М., Сулеймшов С.Ю. Действие шпглбитороз транскрипции на полипептидный состав и 4отохшгаческуп активность хлоропластов пшеницы ЛИ Республиканская биотзческая конйзренг ция. - Баку, 1993. - С.78.

10. Гусейнова И.М., Сулейманов C.D., Исмаштоз'".А., Алиев

Д.А. Кооперация белоксинтозирувдах систем хщтоптазмг я zaropoinae-тов при биогенезе пигментного аппарата пиенищ //Материаш I сьезда физиологов растений Азербайджана. - Баку, is94.

11. Гуоейнова Ч.М., Сулеймаяов С.Ю., йсмайяов U.A. Кооизра- ; ция двух генетических систем в формировании тплшкщдшгх малбрая 'хлоропластов высших растений //Материалы научно-практической ксв-~. фереяции "Интенсификация производства с/х продуктов"..- Баку, 1994 (в печати)

12. Suleiaaaov ЗЛи.» Guseinova. 1.М.» Aliav J.A. SranaoxsiE—

tdUso taMMtprs effect oa роЗдавр-Ыйе composition and pbotooha-alical .aefcLvity of «haat chloroplaats //"16th Zateraatioaal con-GKica <eg bioohacAstiy aid ¡aolecular biology"., - Ksw Delhi, India,

193^ фгеве>.

®S - фазигсиствма, ПБК - пигмент-белковый комплекс, Хл -алорофшж» ES, - реакционный центр, F700 - РЦ ФС I, Р680 - Рц iO 2, CP I - е-белок ФС I„ ССК - светособирающий Хя

а/б-С&шэгыа - молекулярная масса, ПАЛГ - полиак-

рпламадный гель, ДХЗЗЙ - 2%?-дг/лорфен£>лндсфонся, DS-Иа - доде-цплсульфи: да.рия, 2?^¡луорем снция, кДа - килодальтсн^ЛКМ -линкпщпин, • & - хлоршфенйкол, ЩЙ Шкло-гексимвд, РФ -рифам-шщнн, Акт.Д -- актиномидвд Ж.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ьус8^ноез Крадэ (¿азй£эд hjsü

Бугдз гдсрсплясглгршаЕг твлакоад кзкЗраашвя nurasES1-зуяал кйалатугэрэкяи фириаягзиасиззя RSEZTTZI ssasast

•'у иш инкибатор анализа методу иле Суд да гдоропластяаршш таш. ,яд кембрзншвд штиант-зулал комплекс явршка <П5К) трано-лjacиJa ze Tpaaacpmicnja сввпЛесгшде' фзрдалааггашнш. кжшзво Ьэср с^отдур.йезтэрижадднр ки.лгпсокксанин тв'сяра are P70Ö-ун 72 кДа аггозулзлгшгн оЕПтазз вэ SC l-пн Хл а-зулазинш ©эркс-летлчсы тормозланнр. Ьвм-шнян @С 2-кап тергшбинэ даххч олсд ÍS, 43,5 вэ 32 кЯа голйцэпт«адлэрпя скнтези да да^еннр.Бу зйМзе ®0 2-psaRcs'ja кэкэзинот 683 од вэ $с 1-т твркябзнэ дагил елся »SSi» 69S вэ 705 ни фзрнилар Joz олур. «anyopéccsBcaja сгохтрпздб пасбэти артыр ки,б}ву да фотосистемлэрин paaiccnja кзр-кэзле'рй тзруозлаядагда шггтошш4ан комплексы «ИТК-1 вв 1ШС-2) •стЕяуллао«й80 яда эл£.гэ«,сндпркэк олар.ТсаклоЬексэлиднн та»скрип-' Д35н .КТК-вш кДа областинда ояаа субваЪаиэр: ш кагдарз

33a-.fíR>J|3y 'зьчш! Т'ЗуА^зесевси^а спектрндзд F736/F685 кксбзта сзг.-лыр ка-„ Gfsî/ ÍJ8 1ШС-Х ВД? 1ЩС-2-ШШ СЕатезшодн торкстгЕласц- vjtx влагэгарднр.З^н^асц^аЧйЕаОкторлари £432- шш ре ахи Ja ивр»езя-шш феали,] jemns -сучлу азаЯ2Щк<г*ЯЦ. «CI-га •"reora-jJsBs. 'м.гглг.':-jEae та*сир )ткар.Ргафаяасгя -во 'ск гдшта&зд Д-8Ш2»ч(Жрз хпэ cyjyn оксидяевмэся- просесжшв натирок -едав -^23 :в* Т%б яДв зу-лзлларьшын нисбн мигдй{рз артыр^МуэЛЛвн едалкгадзр im, транс-.рхяг-ciïja инзшбгторлары ¡П31чинн СТбзаЬадлэрпнпн сантезкзп стая'^яз-дармир.КерувдуЛу .-коетхекейн а^зулалларшагх -сиевзи-. гг

топланмаен пост-транскрпаз^а^з cöaa^jajaasa без

Бугдв хяоропластлзр$шш ТЕК-ннн фирмаяггдаааяа» Р*>- фупаез-¿асында нувэ вэ ллстюпдзсжш хьдом вэ зу>.йп си«тезз;вгш састам-лэришга кооперасяйасц. îf.Tîîah2j9 с зуыур ОД хомплег.слзрлл1. З^ркз-лашдасшшн товзимн.осисеп- et? Enj Ja синде Lajaia пз-

чкр.

Gusainova Irada Mamed gtzi

GENETIC REGULATION OF FORMATION OF PIGMENT-PROTEIN COMPLEXES OF THYLAKOID MEMBRANES OF WHEAT CHLOROPLASTS

SUMMARY

The fresent work is devoted to the study of regulation of formation of. pigment-protein complexes of thylakoid membranes of wheat chloroplasts by Inhibitor analysis method at translation and transcription level. It was shown that pnder lincomycin effect synthesis of apo-prctein P700 with molecular mass of 72 (iDa and Chi a-protein of FS 1 were I locked. .Synthesis ot polypeptides wiih jnolecular .nass of 48, 43,5 and 32 kDu o'f PS 2 comnlex was also suppressed. At {he same time (hi a forms of RC PS i disappear at 683 nm and forms of RC PS 1 disappear at r,90, 696 and 705 nm. Relative Chi b content and fluorescence b^nds ratio F736/F686 increase significantly. This can be recited to stimulation of JJJIC-l and LHC-2 at the Inhibition of reaction centers of photosystems. jSycloheximide effect results in reduction of subunits of light-harvesting complex ip the range of 28-35,5 kDa. Decrease of relative content of two Chi forms of the giyen complex was revealed: Chi b at .648 nm and Chi a at 676 nm. Fluorescence bands ratio F736/F686 decreases. This is evidently related to LHC-1 and LHC-2 synthesis blocking. It was found that suppressing strongly RC PS 2 function, jptnslation inhibitors scarcely effect PS 1 photochemical ; ctivity. Relative content pf polypeptides of 33, 23 and 17,5 kDa participating in water oxidation increases bidder rifomycin and antinomycin effect. Translation inhibitors did not stimulate accumulation of light-harvesting complex subunits. This testifies, obviously, ibu| regulation of the given complex apo-proteins assembly takes placs ;)] |>o'st-transcriptional level. . . *

It was concluded (hat cooperation of protein synthesizing and genetic; systems both of nucleus and chloroplasts was observed in formation and functiojc pf wheat pigment-protein complexes and regulation of formation of the gives Complexes takes place, mainly, at translation level.