Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Генетическая информативность 3'UTR (TC→CA)- и del425- полиморфизмов гена c-fms человека

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Генетическая информативность 3'UTR (TC→CA)- и del425- полиморфизмов гена c-fms человека"

На правах рукописи УДК 575.113:577.21:004.6

КУЗНЕЦОВА ТАТЬЯНА НИКОЛАЕВНА

ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ИНФОРМАТИВНОСТЬ З'ИТЯ (ТС-»СА>- И ёе1425- ПОЛИМОРФИЗМОВ ГЕНА сфпя ЧЕЛОВЕКА.

Генетика-03.00.15

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

НОВОСИБИРСК 2004

Работа выполнена в Институте цитологии и генетики СО РАН в лаборатории молекулярных основ генетики животных, г. Новосибирск

Научные руководители: кандидат биологических наук,

Ромащенко А. Г.

Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск;

доктор медицинских наук Воевода М. И."

Институт терапии СО РАМН, г. Новосибирск:

Официальные оппоненты: доктор биологических наук -

Меркулова Т. И. Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск:

член-корреспондент РАМН, профессор Коненков В.И.

,.'.'.'". Институт иммунологии СО РАМН,

Г.Новосибирск.

Ведущее учреждением Институт молекулярной генетики РАН,;

■ г. Москва

Защита диссертации состоится! " 24 " марта » 2004 г. на заседании диссертационного совета Д - 003.011.01 в Институте цитологии и генетики^ СО>• РАН в коференц-зале Института по адресу: 630090, Новосибирск-90, проспект: акад. Лаврентьева, 10. тел/факс: (3832)331278. e-mail: dissov@bionet.nsc.ru С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института цитологии и генетики СО РАН.

Автореферат разослан " г.

Ученый секретарь * диссертационного совета, доктор биологических наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Многие гены характеризуются этноспецифическими особенностями распределения вариантов аллелей и генотипов по некоторым из полиморфных сайтов в их структуре [Chang et al., 1996; Yudin et al., 1998; Merryweather-Clarke et al., 2000]. Этноспецифическая вариабельность генов может являться следствием совокупного вклада ряда факторов: эффекта основателя, селекции, ассимиляции, случайного дрейфа генов и т.д. Считается, что изменение внешних условий среды оказывает влияние на изменчивость геномов половых клеток отдельных людей и, следовательно, на генофонд популяции человека в целом. Различают следующие векторные составляющие, которые могут определять характер и степень изменчивости в генофонде: 1. появление новых мутаций в геномах половых клеток индивидов, приводящее, потенциально, к увеличению гетерогенности генетического материала в генофонде; 2. индивидуальная восприимчивость к воздействию внешнего фактора на организм человека из-за существующей вариабельности структуры ДНК и, как следствие, возможности возникновения патологий в репродуктивном периоде жизни, сокращение потомства, ведущее к уменьшению степени гетерогенности в структуре генофондов. Оценка вклада отдельных генов в формирование индивидуальной чувствительности организма к неблагоприятному фактору среды - задача достаточно сложная, решение ее в существенной мере определяется соответствием внешнему фактору выбранного для анализа гена-кандидата. Не менее сложным может оказаться поиск информативных локусов в выбранном гене. В исследованиях по анализу ассоциаций между полиморфными сайтами и заболеваниями пока преимущественно используют нуклеотидные полиморфизмы, приводящие к несинонимичным заменам аминокислот в белке [Cardill et al., 1999; Gard et al., 1999], но такие полиморфизмы редки. В последнее время к ассоциативному анализу привлекают дополнительно полиморфизмы в составе цис-элементов в регуляторных областях генов [Artida et al., 1998; Horikawa et al., 2000]. Однако, сведения о таких полиморфизмах фрагментарны. Для решения задач практического значения учитывают и то, что частоты редких (мутантных) вариантов аллелей могут быть столь малы, что не позволят рассматривать их в качестве информативных и пригодных на уровне популяций маркеров. Молекулярно-эпидемиологические исследования относительно генетических последствий от облучения в популяции человека, немногочисленны [Шевченко и др., 1994; Коненков и др., 1995; Dubrova et al, 1998; Hayashi et al., 1997].

В настоящей работе для эколого-генетических исследований в качестве гена-кандидата был взят ген рецептора макрофаг-колониестимулирующего фактора (c-jhts). Ген c-fins характеризуется разносторонним плейотропным влиянием на важнейшие физиологические и патологические функции в организме человека [Sapi et al., 1999]. Пара белков MCSF/FMS является ключевым звеном, определяющим дифференцировку, пролиферацию и выживаемость клеток моноцит/макрофагального ряда и, таким образом, вовлекается в формирование системы неспецифического иммунитета [Sherr, 1990]. Через участие в дифференцировке остеокластов MCSF/FMS белки влияют

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА

на остеогенез [Grey et al., 2000]. Функционирование второго, трофобласт-специфического промотора в гене c-fins определяет участие FMS во внутриутробном развитии эмбрионов [Pollard et al., 1997; Suzuki et al., 1999]. Важно и то, что миелоидный росток костного мозга - источника стволовых гематопоэтических клеток, и репродуктивные органы женщин, где экспрессируется ген, являются одними из наиболее уязвимых тканей при облучен™.

В работе впервые была предпринята попытка оценить изменение в характере распределения вариантов аллелей и генотипов по двум полиморфным сайтам на примере выбранного нами гена-кандидата (c-fins) в популяциях человека, проживающих в условиях экологического загрязнения по сравнению с популяционным контролем. В связи с тем, что выбранные полиморфные сайты расположены в некодирующих областях гена, был осуществлен контекстный анализ последовательностей нукпеотидов в районах их локализации для выяснения возможного вклада полиморфизмов в функционирование гена c-fins. Дополнительно, был проведен анализ ассоциаций исследуемых полиморфизмов гена с рядом патологий и некоторыми фенотипическими признаками, в формировании которых теоретически мог бы участвовать c-fins, для оценки их генетической информативности.

Цель и задачи исследования.

Цепью настоящей работы являлось выяснение перспективности гена рецептора макрофаг-колониестимулирующего фактора (c-jms) в качестве генетического маркера воздействия неблагоприятных факторов среды на популяцию человека. Достижение цели настоящего исследования осуществляли решением задач:

1. Выбора локуса гена для изучения его структурной вариабельности, исходя из данных строения c-fins и особенностей функционирования рецептора FMS в различных клеточных ситуациях, с целью выявления наиболее перспективных для популяционных исследований генетических маркеров и их экспериментальная идентификация.

2. Изучения характера распределения вариантов аллелей и генотипов по динуклеотидному полиморфному сайту в З'-нетранслируемой области (3'UTR ТС—>СА) и делеционному полиморфизму в 11-м интроне (del425) гена c-fins среди некоторых европейских (русские, немцы) и монголоидных этнических групп, а именно: арктических монголоидов (чукчи — прибрежные и тундровые, канадские эскимосы) и центрально-азиатских популяций (казахи,, алтайцы, тувинцы).

3. Исследования особенностей распределения гаплотипов по полиморфным сайтам 3'UTR и del425 гена ^ c-fins в этнических группах арктических монголоидов (канадские эскимосы, прибрежные и тундровые чукчи), центрально-азиатских популяций (тувинцы, алтайцы, казахи) и европейцев (русские, немцы).

4. Выяснения контекстным анализом особенностей структуры ДНК в местах расположения полиморфных сайтов, 3'UTR ТС—>СА и del425, в отношении

наличия потенциальных регуляторных элементов для прогнозирования возможной функциональной значимости этих районов в регуляции экспрессии гена сфк.

5. Определения возможных ассоциаций между полиморфизмами З'ШИ ТС-+СА, <3е1425 и некоторыми заболеваниями тех органов человека, в клетках которых в норме или патологии экспрессируется ген с-^ш, для косвенной оценки информативности данных полиморфизмов.

6. Установления возможных изменений в характере распределения вариантов аллелей и генотипов по полиморфизмам З'ШП ТС—>СА и <3е1425 в структуре генофондов популяций человека из экологически неблагоприятных регионов страны: Рубцовского района Алтайского края (немцы) и Урала (облученное русское население, проживающее вдоль р. Теча), по сравнению с таковыми контрольных популяций человека (из Немецкого района Алтайского края и г. Новосибирска соответственно).

Научная новизна.. Открыты два новых полиморфных сайта гена рецептора макрофаг-колониестимулирующего фактора (один - в 21 интроне 034047А, другой в виде измененного динуклеотида - в 3*-нетранслируемой области гена на расстоянии 34 н.п. от стоп-кодона трансляции, в позициях 34293 и 34294: ТС—+СА). Установлены особенности распределения вариантов аллелей, генотипов и гаплотипов по полиморфизмам ЭТЛИ и <1е1425 гена с-ргк в некоторых европейских и монголоидных этнических группах России и канадских эскимосов: показаны расовые и этноспецифические различия в характере распределения редких вариантов аллелей и гаплотипов по двум изучаемым полиморфизмам гена с-рпь у части исследованных в работе популяций человека Контекстным анализом структуры протяженных участков ДНК в районах нахождения полиморфизмов показана их потенциальная генетическая информативность: З'ЦТЯ ТС—»СА динуклеотид примыкает к 5'-концу известного цис-эдемента - САААСТТС -, вовлеченного в посттранскрипционные события созревания мРНК; присутствующие в делегированном фрагменте ДНК сигнальные мотивы (САгв, еЬ, Е- и М-боксы и т.д.) потенциально способны модулировать лиганд (М-СБР)-зависимую транскрипцию гена с-^пк, кодирующего его рецептор (ТМ5). Обнаружены ассоциации З'ЦТЯ ТС—>СА и ёе1425 полиморфизмов с некоторыми-заболеваниями органов, в клетках которых показана экспрессия гена с-рпь в норме или патологии, что является косвенным указанием на информативность исследуемых полиморфизмов в качестве генетических маркеров. Впервые, на примере гена специально выбранного для изучения генетических

последствий от воздействия неблагоприятных факторов среды (радиация), выявлены достоверно значимые изменения в распределении вариантов аллелей и генотипов по З'ШИ и (1е1425 полиморфизмам этого гена в выборках людей из экологически неблагоприятных районов страны по сравнению с популяционным контролем (эксперименты проведены по типу "случай-контроль").

Практическая ценность. Установление информативности полиморфизмов З'иТЯ и с1е1425 гена выбранного для изучения генетических последствий

от воздействия радиации, может быть использовано в будущем для изучения изменений структуры генофондов популяций человека, проживающих в экологически неблагоприятных регионах страны. Модификация метода массового генотипирования полиморфизмов с протяженными делениями [Кузнецова и др., 2004] может быть широко использована при молекулярно-эпидемиологических исследованиях генетического разнообразия по другим генам со сходными по структуре полиморфизмами.

Положения, выносимые на защиту.

1. Выбор полиморфизмов- 3'UTR и del425 гена c-fms, участвующего в формировании многих фенотипических признаков в организме человека, в качестве генетических маркеров оценки в генофондах популяций изменений от воздействия неблагоприятных внешних факторов среды (радиации).

2. Обнаружение новых полиморфизмов в гене c-fms: одного в 21 интроне в позиции 34047 G-+A и другого, в виде динуклеотида - в 3*-нетранслируемой области гена на расстоянии 34 н.п. от стоп-кодона трансляции, в позициях 34293 и 34294: ТС-+СА.

3. Установление расовых или этноспецифических различий в распределении вариантов аллелей и генотипов по двум (3'UTR, deI425) полиморфизмам гена с-fms в некоторых из исследованных этнических групп России.

4. Определение потенциальной функциональной значимости изучаемых в работе 3'UTR и del425 полиморфизмов гена c-fms на основании данных контекстного анализа структуры протяженных.участков ДНК. в местах их локализации: возможное участие 3'UTR ТС—>СА полиморфизма в составе сигнального мотива -(ТС/СА)САААСТТС- в посттранскрипционных событиях созревания mPHK. FMS и вовлечение делегируемого фрагмента ДНК в 11-м интроне, размером 425 н.п. (deI425) в M-CSF-зависимую транскрипцию гена c-fms.

5. Выявление ассоциаций 3'UTR и del425 полиморфизмов гена c-fms с некоторыми заболеваниями тех органов, в клетках которых экспрессируется с-fins в норме или патологии, как косвенное указание на генетическую информативность изучаемых сайтов.

6. Обнаружение изменений в распределении вариантов аллелей и генотипов по 3'UTR и del425 полиморфизмам гена c-fms в выборках человека из экологически неблагоприятных регионов (Рубцовский район Алтайского края, облученное русское население Урала, проживающее вдоль реки Теча) по сравнению с контрольными популяциями (Немецкого района Алтайского края и г. Новосибирска соответственно) в экспериментах, проведенных в дизайне "случай-контроль".

Апробация работы/ Материалы исследования были доложены, представлены стендовыми докладами или тезисами докладов на: международном симпозиуме по молекулярной и клеточной биологии - Кенстоун, США, 1998; на ЗападноСибирском терапевтическом форуме - Тюмень, 2000; на 2-м съезде Вавиловского общества генетиков и селекционеров "Отдаленные последствия,

мутагенез, канцерогенез: закономерности, механизмы." - Санкт-Петербург, 2000; международной конференции "Биоразнообразие и динамика экосистем в Северной Евразии" - Новосибирск, 2001; на IV съезде по радиационным исследованиям - Москва, 2001; международной конференции "Рецепция и внутриклеточная сигнализация", г. Пущино, 2003 г.

Публикации: По теме диссертации опубликовано 9 работ (из них две в рецензируемой печати).

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 138 страницах машинописного текста и состоит из разделов: Введение, Обзор литературы, Материалы и Методы, Результаты и их обсуждение, Заключение и Выводы. Данные проиллюстрированы 22 таблицами и 14 рисунками. Библиографический указатель включает 338 источников.

Материалы и методы исследования.

Попуняционный материал. Образцы ДНК были выделены из крови индивидов, принадлежащих к различным этническим группам России (Таблицы 1 и 2).

Таблица 1. Выборки, собранные в ходе эпидемиологического обследования населения.

Этническая группа Локализация

русские г. Новосибирск (программа ВОЗ МОНИКА)

чукчи и эскимосы п. Лорино Чукотского района, Янракинот, Сирени ки, Новое - Чаплино Провиденского района Чукотского автономного округа (прибрежная популяция, а также п. Какчалан (тундровая популяция чукчей).

тувинцы г. Кызыл и п. Эрзин Убсунурской котловины

эскимосы Канады п. Иглулик Северо-Западной территории

казахи и алтайцы поселки Кош-Агачского района республики Алтай

немцы поселки Немецкого района Алтайского края

Таблица 2. Популяции человека из экологически неблагоприятных регионов страны.

Локализация Доза облучения

немцы поселки Рубцовского района Алтайского края. г. Веселоярск - 65 сЗв (87 чел.), с. Саратовка - 26 сЗ (73 чел.), с. Зеленая Дубрава - 18 сЗв (31 чел.). •Радионуклиды: образующиеся при делении урана и плутония. Тип излучения - смешанный (а-, 3-, у-).*

русские поселки вдоль р.Теча (Челябинск, обл.) лица обоего пола старше 45 лег: 114 чел. получили дозовую нагрузку до 40 сЗв и 53 чел. - свыше 40 сЗв; до 45 лет: 160 чел. получили дозовую нагрузку до 5 сЗв и 39 чех - свыше 10 сЗв (указаны дозы на гонады родителей). •Радионуклиды: 90$г, 137^, тип излучения: (5-**

Примечание: * Данные о дозах взяты из Распоряжения Правительства РФ от 10.02.94 №162-р. ** Данные об индивидуальных дозах предоставлены Челябинским центром радиационной медицины.

Получение препаратов ДНК из крови осуществляли по методике Смита с соавторами [Смит и др., 1990].

Патологический материал. Ассоциации генотипов и аллелей З'-UTR ТС->СА и del 425- полиморфизмов гена c-jms с инфарктом миокарда (113 чел.), фибрознокистозной мастопатией (43 чел.), фиброаденомой (39 чел.), пневмонией, а также раком легких (139 чел.) изучали на выборках больных из популяции русских. Частоты генотипов и аллелей в выборках больных сопоставляли с данными, полученными на соответствующих по возрасту, полу и этническому составу популяционных выборках.

Амплификацию соответствующих фрагментов ДНК и анализ генотипов по полиморфизмам: З'-UTR ТС-»СА и del425 в 11 интроне гена c-jms проводили согласно методам аллель-специфической ПЦР, описанной ранее [Ромащенко и др., 2002; Кузнецова и др., 2004].

SSCP анализ проводили в соответствии с методом Orita et al. (1993). Анализ структуры ДНК проводили путем прямого автоматического секвенирования продуктов ассиметричной ПЦР соответствующих фрагментов гена c-jms.

Идентификацию полиморфных вариантов генов ccr2 (ccr2-64I (G-A)) и ссг5 (ccr5delta32) осуществляли согласно методам [Воевода и др., 2002] и [Yudin et al, 1998] соответственно.

Соответствие частот генотипов равновесию Харди-Вайнберга оценивали с использованием критерия х* [Zaykin et al, 1993]. Статистическую обработку проводили с помощью пакета прикладных статистических программ SPSS. Частоты гаплотипов вычисляли, с использованием метода максимального правдоподобия (ММП-оценка) [Аксенович; Т.И, 2000]. Для идентификации потенциальных щс-элементов в соответствующих последовательностях нуклеотидов использовали программы BinomSite и TESS [Schug et al, 1997; Поздняков и др., 2001].

Результаты и обсуждение.

Обнаружение полиморфных сайтов в 21 интроне и 3 '-нетранслируемой области гена c-fms.,

Из-за отсутствия к моменту начала исследований сведений о полиморфизмах гена c-fms человека (был описан только делеционный полиморфизм в 11-ом интроне) проводили поиск их, исходя из теоретических предпосылок. Для изучения структурной вариабельности c-fms был выбран локус гена, включающий экзоны 21, 22, интрон между ними и часть 3'-нетранслируемой области гена. Из всех экзонов гена c-fms низкая межвидовая, гомология характерна только для экзонов 21 и 22. К тому же, в генах v-fins ряда штаммов вируса лейкоза кошек наблюдали отсутствие гомологичного экзону 22 участка. ДНК, кодирующего фрагмент рецептора с сайтом аутофосфорилирования Туг9б9, вовлечённого в негативную регуляцию трансформирующей активности FMS [Coussens. et al, 1986; Browning et al, 1986; Rothwell et al, 1987; Moore et al, 1994]. Структурную вариабельность выбранного фрагмента ДНК (635 н.п.) гена c-fms, оценивали с помощью SSCP метода на выборке немцев Алтайского края из Немецкого района. Обследование 86 человек позволило обнаружить два полиморфных сайта в Xho П

рестрикционных фрагментах амплифицированного продукта (рис.1). На носительство точковой мутации в—»А в 21 интроне (полиморфный сайт 1) было проанализировано 55 человек. Частота редкого варианта составила 2.73%. По всей видимости, нами идентифицирована уникальная мутация, все три выявленные гетерозиготы обнаружены в одной семье у разнополых потомков первого и второго поколения. Из-за низкой частоты представленности редких вариантов гена по этому полиморфизму в немецкой популяции мы прекратили дальнейший его скрининг в других этнических группах

Рисунок 1. Конформационный полиморфизм ХЬо II- фрагментов ПЦР-продукта (635 п.н.) гена сфк. А) Фрагмент 108 пл.: стрелки показывают на гетерозиготы по мутации в 21 интроне (дорожки 1,3). Б) Фрагмент 280 п.н.: стрелки показывают на гетерозиготы по мутации в З'-нетранслируемой области гена с-]Чю (Б, дорожки 2,5,6)

Популяционные различия в распространении разных вариантов аллелей, генотипов и гаплотипов по З'-VTR TC—KZA и делеционному полиморфизму в 11 интроне (del425) гена c-fms человека.

Высокая частота встречаемости редкого аллеля по полиморфизму в З'-нетранслируемой области следовала уже из данных SSCP-анализа. Результаты были повторены путём генотипирования той же выборки с помощью аллель-специфической ПЦР, условия которой были подобраны на секвенированных ДНК индивидов, гомозиготных по разным аллельным вариантам согласно данным SSCP [Ромащенко и др., 2002]. Частоты вариантов аллелей и генотипов по З'-UTR ТС-»СА полиморфизму гена c-fms исследовали в европеоидных и монголоидных этнических группах Севера. Евразии. Из данных Таблицы 1 видно, что частоты редкого аллеля в европейских популяциях близки (22.6% и 26.47%). Значительный разброс наблюдали у арктических монголоидов: 19% - у канадских эскимосов, 25.2% - у прибрежных чукчей и 37,3% - у тундровых чукчей. Данные субпопуляции чукчей достоверно отличаются друг от друга (F2. sided, 4jo=0.007). Центрально-азиатские популяции характеризуются частотой редкого аллеля от 30.8% до 39.9%. Наблюдаемые отклонения соотношения генотипов уравнению Харди-Вайнберга обусловлены пониженной частотой гетерозигот во всех этнических группах. Сравнительный анализ межпопуляционных различий по распределению генотипов 3'UTR полиморфизма гена c-fms (критерий yf) показал несомненную близость двух европейских этнических групп - русских и немцев (Таблица 1А). Но эти популяции также проявляют сходство по этому признаку с канадскими эскимосами и прибрежными чукчами, а немцы к тому же проявляют сходство и

А) 1 2 3

Б) 1 2 3 4- 5 6 7

с алтайцами. Алтайцы близки из центрально-азиатских популяций только с казахами, но проявляют сходство по распределению генотипов с канадскими эскимосами и прибрежными чукчами. Генотипическое разнообразие казахов, помимо алтайцев, сходно с тувинцами. Тундровые чукчи отличаются от всех других обследованных популяций, включая и арктических монголоидов, но они по этому показателю близки к тувинцам.

Таблипа 1. Оценка частот аллелей и гевотипов по З'-Ш'К ТС->СА полиморфизму -гена с-/тз в различных этнических группах._

Популяция N Грр ррч Гад х1

русские (¿Новосибирск) 1201 22.65 (0.9) 0.619 0.308 0.073 17.5

немцы (Алтайский кр.) 204 26.47(2.2) 0.578 0.314 0.108 7.7

канад. эским (Канада) г 76 19.08 (3.2) 0.711 0.197 0.092 9.8

чукчи (прибрежные) > 123 25.20 (2.8) 0.596 0.358 0.073 Х-В

чукчи (тундровые) 102 3706(3.4) 0.363 0.529 0.108 Х-В

тувинцы (Респ. Тыва) - 144 39.93 (3.6) 0.368 0.465 0.167 Х-В

алтайцы (Респ. Алтай) < 212 30.87 (2.2) 0.514 0.354 0.132 6.2

казахи (Респ. Алтай) 156 36.54 (2.7) 0.455 0.359 0.186 7.9

^Примечание: Р - частота генотипа

Таблваа 1А. Значения межоонуляционных различий в распределении частот генотипов по 3'ЦТИ-долиморфидму гена офгм (критерий (Р))._

немцы алтайцы казахи тувинцы канад. эским.- чукчи. прибр. чукчи : тундр.

русские Р=0.19 Р=0.002 Р<0.001 Р<0.001 Р=0.121 Р=0.51 Р<0.001

немцы Р=0.408 Р<0.05 Р=0.001 Р-О.ИЗ Р=0.49 Р=0.001

алтайцы Р=0.312 Р<0.05 Р=0.12) Р=0.24 Р<0.05

казахи Р=0.160 Р=0.001 Р<0.05 Р<0.05

тувинцы Р<0.001 Р=0.002 Р=0.376

канад. зек. Р=0.055 Р<0.001

чукчи пр. Р0.009

Широкое распространение мутантного аллеля в популяциях человека (19.7%-42.6%) может указывать на адаптивную роль динуклеотидной замены в обеспечении соответствующего уровня рецептора при определенных клеточных процессах. Полученные данные мы расцениваем как факт того, что на распределение генотипов по полиморфизму З'ШИ. гена с-рт в популяции, вероятно превалирующую роль оказывали факторы внешней среды.

Оценку структурного разнообразия с-рт в разных популяциях Евразии проводили дополнительно по другому полиморфизму, находящемуся также в некодирующей области гена, но в интроне (с!е1425). Некоторое функциональное проявление этого полиморфизма наблюдали ранее французские, исследователи. На семейных выборках (48 чел.) они отметили тенденцию повышенной рождаемости гетерозигот [Хи е1 а1., 1985]. Генотипирование разных популяций показало, что характер распределения редкого варианта аллеля и различных генотипов по делеционному полиморфизму в 11-м интроне значительно

отличается от таковых полиморфизма З'ЦЖ гена с-/ш (Таблицы 1,2 и 1 А, 2А). Высокие значения частоты редкого аллепя по делеционному полиморфизму обнаружены у арктических монголоидов и они колеблются в пределах 30,88% у тундровых чукчей и 41,06% у прибрежных чукчей, тогда как по З'ЦТЯ полиморфизму максимальные величины, как было отмечено выше, наблюдали у центральноазиатских популяций (Таблица 2).

Таблица 2. Частоты вариантов аллелей в генотипов по <1е1425 полиморфизму гена е-/па в различных этнических группа!.__

Популяция N Ти Гц, „1 X х-»

немцы (Алтайский кр.) 127 9.45(1.8) 0.811 0.189 0 Х-В

русские (г.Новосибирск) ■ 775 12.13 (0.8) 0.776 0.206 0.018 х-в

канад. эским (Канада) • 79 38.61 (3.9) 0.418 0.392 0.190 Х-В

чукчи (прибрежные)* 123 41.06(3.1) 0.390 0.399 0.211 Х-В

чукчи (тундровые) * 102 30.88 (3.2) 0.500 0.382 0.118 Х-В

казахи (Респ. Алтай), 144 1453(2.1) 0.708 0.285 0.007 Х-В

алтайцы (Респ. Алтай) 200 20.75 (2.0) 0.625 0.335 0.040 Х-В

тувинцы (Респ. Тыва) 133 27.07 (2.7) 0.511 0.436 0.053 Х-В

Кроме того, генотипическое распределение по <1е1425 в популяциях человека в большей мере, чем по З'ШИ полиморфизму, характеризуется групповым своеобразием (Таблица 2А).

Табляпя 2А. Значения межпопуляпионаых различий по распределению частот генотипов гена офю (йе1425), сравнение по критерию х2 (Р)).

немцы у алтайцы казахи тувинцы -, канад. эским. чукчи прибр. чукчи тундр.

русские ■ Р=0.27 Р<0.001 Р=0.09 Р<0.001 Р<0.001 Р<0.001 Р0.001

немцы - Р=0.001 Р=0Л1 Р<0.001 Р<0.001 Р<0.001 Р<0.001

алтайцы Р=0.08 Р=0.12 Р<0.001 Р0.001 Р< 0.05

казахи Р=0.001 Р<0.001 Р<0.001 Р<0.001

тувинцы Р=0.006 Р0.001 Р-0.179

канад. эск. Р=0.903 Р=0.330

чукчи пр. Р=0.Ю7

Обособленно отстоит группа арктических монголоидов, которые по этому параметру относительно близки только друг к другу, за исключением тундровых чукчей, проявляющих сходство также с тувинцами. Отдельную группу представляют европейцы. Однако, по распределению генотипов обе европейские популяции близки также с казахами. Центрально-азиатские популяции достаточно гетерогенны, по распределению генотипов они различаются как между собой, так г в по отношению к другим популяциям.- Характер: распределения генотипов определяется, вероятно, несколькими факторами: принадлежностью к конкретной расе, климато-географическими условиями проживания, образом жизни и т.д.

В работе оценивали неравновесие по сцеплению между исследуемыми полиморфизмами гена Вероятностные частоты гаплотипов гена

были расчитаны методом ММП-оценки из таблиц сопряженности генотипов в популяциях. Теоретические частоты гаплотипов, посчитанные через произведения соответствующих частот аллелей статистически не отличаются от вероятностных во всех проанализированных популяциях, кроме популяции тувинцев, в которой отсутствует независимая сегрегация аллелей двух локусов (Х2-критерий, Р=0.006). Из данных Таблицы 3 видно преобладание гаплотипа 1Р во всех этнических группах, кроме тувинцев, у которых в отличие от других популяций наблюдается некоторое превышение Ь) над остальными гаплотипами. Наблюдается также различие в распределении вторых по численности гаплотипов: Ь} - у европейцев (немцы, русские), в центральноазиатских популяциях (казахи, алтайцы), а также у тундровых чукчей, ёР - у канадских эскимосов и прибрежных чукчей, 1Р - у тувинцев, что может указывать на селективные преимущества определенных гаплотипов для носителей в зависимости от условий проживания.

Таблица 3. Частоты гаплотнпов гена о/л» расчитанные методом ММП-оценки в некоторых популяциях России и канадских эскимосов. ___

Выбоока N Частоты редких вариантов: d-del425; q-3'UTR p(IP) P(lq) p(dP) p(dq)

Русские 616 d=0.13 q=0.22 0.666 0.208 0.112 0.013

Немцы 122 d=0.09 q=0.29 0.623 0.283 0.082 0.012

Алтайцы 200 d=0.21 q=0.31 0.521 0.272 0.169 0.038

Казахи 144 d=0.15 q=0.37 0.491 0.360 0.134 0.015

Тувинцы 127 d=0.28 q=0.41 0.333 0.391 0.254 0.022

Канад. эскимосы 76 d=0.37 q=0.19 0.475 0.150 0.334 0.041

Чукчи (прибреж.) 123 d=0.41 q=0.25 0.383 0.210 0.365 0.042-

Чукчи (тундровые) 102 d=0.31 q=0.37 0.370 0.321 0.257 0.

Контекстный анализ пуклеотидных последовательностей ДНК в местах нахождения 3 '-UTR ТС-*СА и del 425 в гене c-fms..

Близость расположения обнаруженного нами полиморфного сайта ТС—»СА к стоп-кодону трансляции дало основание предполагать возможность влияния этого участка на процессинг или устойчивость мРНК [Ross et al, 1995]. Вероятность этого предположения увеличивается из-за нахождения полиморфного динуклеотида (ТС—»СА) в непосредственной близости к сигнальному мотиву -САААСТТС-, на 100% гомологичного цис-элементу в 3'-нетранслируемой области гена рибонуклеотидредуктазы [Chen et al, 1993]. Заслуживает внимание и факт присутствия в З'-нетранслируемой области гена с-fms второго сигнального мотива вблизи сайта полиаденилирования, который 5'-участком своей структуры идентичен первому мотиву в редком варианте аллеля (-(СА)САААСТСС-). Косвенно, это обстоятельство может указывать на принадлежность динуклеотида (ТС-+СА) к сигнальному мотиву и возможность влияния его на сродство соответствующего регуляторного белка к этому участку РНК [Ромащенко и др, 2002]. На рисунке 2 приведена последовательность ДНК

той части 11-го интрона, где локализуется делегированный в одном из вариантов гена фрагмент ДНК размером 425 п.н. Видно, что точка разрыва на границе с 5*-концевон частью делегированного фрагмента ДНК проходит через потенциальный CArG цис-элемент, перекрывающийся с ets-мотивом и, вероятно, вместе с ним образующий композиционный CArG/ets элемент [Latinkic et al., 1996]. Вблизи расположены Е- и N-боксы, с которыми потенциально могут связываться белки Мус семейства. Такая композиция расположения: трех мотивов предполагает возможность триггирования сборки нескольких альтернативных ансамблей транскрипционных факторов. Из существующих представлений о механизмах передачи сигнала лиганд/рецепторной парой белков: M-CSF/FMS■ к генам мишеням следует, что при взаимодействии соответствующих эффекторных белков с сайтом аутофосфорилирования в позиции 699 гидрофильной вставки FMS активируется гаСМЕК сигнальный каскад, приводящий к активации транскрипционных факторов Ets-2 и Мус двумя ■ независимыми путями [Buscher et al.,1995].

«м-

САгО I-------

_i I

-GTATGf^^^j^CTACrrATTATTCAG|CCXXAAA»gfeHgg!

OT4U

gaattctgicctgtgctgcagcatgaatgaaccljtgaagaca^tatgctgggtgaaataaggcaatctca ы»

alaga|cacat^ctgtgtgagtccactgaggtgcagtgcctagagcagtgcaattcacagagacagcag

aalcatggttgccaggggctggaggagggaaaggggagttgctffltaacaggaacagaamcagttt liba

tgcaagataaaaagagctctggaaactggttgjcacaagfatagaatgtaatttacttaatactactgaacc atacacttaaaaatggttgaaatggtaaafficatgtatgtMatcacaaítaaaatatatatóataffiggat

GXXCCACCCXCCCXCCXGGCICAGGAAXXACCAGATTAXC AGAGATATCAG-

Рвсунок 2. Структура ДНК делегированного фрагмента и фланкирующих его областей в 11 интроне raía c-fms человека Прнмечаине:: мелким шрифтом дана нуклеотидная последовательность делегированного фрагмента 11-го интрона Прямоугольниками обведены мотивы транскрипционных факторов. Точками подчеркнута микросателлитная ДНК; в также может

составе палиндрома являться

мишенью для

сигналов, пе-редаваемых парой M-CSF/FMS через rafiMEK сигнальный каскад. Таким образом, можно полагать, что аллель, у которого отсутствует фрагмент ДНК 11-го интрона, может быть ограничен в способности модулировать экспрессию гена c-Jms в ответ на некоторые внешние сигналы и, в частности, на воздействие M-CSF [Panterne et al., 1993].

Имеются- данные, что конститутивная экспрессия Ets-2 важна. для ингибирования апоптоза, а при синхронной сверхэкспрессии Мус и для стимуляции пролиферации клеток [Sevilla et al., 1999]. Так как переход клеток с Gl стадии клеточного цикла в S-фазу определяется и уровнем экспрессии гена c-fins, то можно предположить, что ген с-

Изучение ассоциаций аллелъных вариантов гена c-fms с различными патологиями.

Известно, что экспрессия c-fms протоонкогена наблюдается в различных карциномах тканей, где в норме она отсутствует или осуществляется на низком уровне [Sapi et at., 1996; Anderson et al., 1999]. Это позволяло надеяться на. возможность нахождения ассоциаций между отдельными вариантами гена и патологиями различной этиологии. Нами были изучены возможные ассоциации генотипов и аллелей гена c-fms по исследуемым полиморфизмам с некоторыми заболеваниями, в патогенезе которых важную роль играют макрофаги (инфаркт миокарда (ИМ), пневмония, рак легкого, доброкачественные опухоли молочной железы (фибрознокистозная мастопатия (ФКМ) и фиброаденома (ФА)). Частоты генотипов и аллелей в выборках больных сопоставляли с аналогичными данными, полученными на соответствующих по возрасту и этническому составу популяционных выборках, а) Для полиморфного сайта З'-UTR ТС—>СА статистически значимые отличия по критерию %2 в частотах генотипов наблюдали в выборке мужчин, больных раком легкого (Р =0.004) за счет увеличения доли гетерозигот. У женщин значимые отличия в частотах аллелей обнаружены в выборке больных с доброкачественными опухолями молочной железы (фибрознокистозной мастопатией и фиброаденомой) (F^idetnO.043). В этой группе наблюдается повышение частоты редкого аллеля с 21.47% до 31.09% главным образом за счет возрастания частоты генотипов, гомозиготных по редкому аллелю (более чем в 2 раза), б) По del425 полиморфному сайту не обнаружено достоверных отличий по сравнению с контролем в частотах генотипов и аллелей в анализируемых выборках больных.

Из полученных данных следует, что З'-UTR полиморфизм гена c-fms может давать вклад в уровень общей смертности в популяции через специфические пол-зависимые патологии, но для выявления полного спектра таких патологий требуются дальнейшие исследования.

Т.о. данный ген может быть перспективным в качестве гена-кандидата для оценки генетических последствий от воздействия радиации в популяциях человека.

Оценка возможных изменений в распределении вариантов аллелей и • генотипов экспрессирующихся в макрофагах генов c-fms, CCR2, CCR5 в популяциях человека, подвергшихся воздействию радиации.

а) В работе сравнивали частотное распределение вариантов аллелей и генотипов по двум полиморфизмам (3'UTR ТС-»СА и del 425) гена c-fms в популяциях немцев контрольного Немецкого района по отношению к Рубцовскому району, подвергшегося воздействию радиации со стороны Семипалатинского полигона (1949-56 гг.). Обследованное население в двух районах проживает в одних и тех же климато-географических и социально-экономических условиях. В качестве контролей были взяты гены хемокиновых рецепторов ссг2 и ccrS, экспрессирующиеся в макрофагах. Нами было показано, что частота редкого аллеля по 3'UTR полиморфизму гена достоверно снижена в популяции немцев Рубцовского района, попавшей под радиационный след, и

составила 15.7% против 26.1% в контрольной популяции (х2-критерий, Р=0.003, ^.^а], 78о<0.001) (Таблица 4). Анализ характера распределения вариантов аллелей генов ссг2 и ссг5 не выявил значимой разницы в исследуемых районах. Из данных Таблицы 5 видно, что основной вклад в уменьшение частоты редкого аллеля гена с-рт по полиморфному сайту в З'ЦТЯ в Рубцовском районе дает возрастная группа до 43 лет. Частота редкого аллеля в ней составляет 10.1%, что значительно ниже по сравнению с Немецким районом (23.83%), разница в значениях частот аллелей и генотипов статистически достоверна. Показано, что частота редкого аллеля по этому локусу гена с-/ш в этой группе одинаково низка и у мужчин (10.18%) и у женщин (10%). По делеционному полиморфизму гена с-рю снижение частоты редкого аллеля в разных возрастных группах наблюдается как в Рубцовском так и в Немецком районах.

Таблица 4. Частоты вариантов аллелей и генотипов генов с-/па, ссг2 и ссг5 в двух >

Район < Локус гена N q%(SJ Frp F„ F„ x1 X.-B

Немецкий; c-fms_3'UTR* 199 26.13 (2.2) 0.578 0.322 0.10 5.54

(контроль) ■ c-fms_de¡425- 127 9.45 (1.8) 0.811 0.189 0 X-B

ccr2 56 10.71 (2.7) 0.804 0.179 0.017 X-B

ccrSdeUa32 85 10.59 (2.3) 0.800 0.188' 0.012 X-B

Рубцовский ! c-fins_3'UTR* 191 15.71 (1.8) 0.738 0.209 0.053 8.35

(радиац.) c-fms_deU25 102 6Л7 (1.7) 0.873 0.127 0 X-B

ccr2 66 9.09 (2.5) 0.818 0.182 0 X-B

ccr5deUa32 110 9.09 (1.9) 0.827 0.164- 0.009 X-B

(*х -критерий, Р=0.003, р2<ьы, 78о0.001 (достоверное отличие по частотам вариантов аллелей и генотипов данного локуса гена с-рп$ между районами))

Таблица 5. Частоты вариантов аллелей и генотипов генов c-fms, сст2 и ccrS в различных возрастных когорта» двух популяций немцев Алтайского края._

Район

ген c-fms

Возр. гр.

N q%(SJ

X

х.-в

Немецкий (контроль) •

3'UTR до43 от 43

128 75

23.83 (2.6) 0.609 29.33 (3.7) 0.533

0.305 0.086 0.347 0.120

Х-В Х-В

del425 до43 75 6.0 (1.9) 0.880 0.120 0 Х-В _от 43 52 14.42 (3.4) 0.712 0.288 0 Х-В

Рубцовский (радиац.)

3'UTR до43 104 от43 87

del425 до43 от 43

62 40

10.10 (2.0) 22.41 (3.2)

0.817 0.644

0.163 0.264

0.019 0.092

4.03 (1.8) 10.0 (3.3)

0.919 0.800

0.081 0.200

Х-В 5.0

Х-В Х-В

Примечание: Возрастная группа (до 43 лет) сформирована из лиц, родившихся после 1949 г., т.е. с начала выбросов радиации со стороны Семипалатинского полигона, -Старшую возрастную группу составили из лиц родившихся до 1949 г. и проживающих > на этой территории и поме 1949 г.

Обнаруженный нами результат вряд ли можно объяснить постнатальной смертностью людей, родившихся от облученных. Более вероятно, что селекция

генотипов осуществляется на очень ранних стадиях эмбриогенеза в период закладки тканей организма, развитие которых коррелирует с уровнем экспрессии FMS в соответствующих резидентных макрофагах и его лиганда М-CSF в окружающих их типах клеток [Hume et al., 1997]. Полагают, что на данном этапе онтогенеза отчетливо проявляются морфоорганизующие свойства резидентных макрофагов [Cecchini et al, 1997].

б) Эпидемиологические исследования, связанные с оценкой генетических последствий от воздействия радиации на структуру генофонда популяции человека, бьши повторены с населением Челябинской области, русских жителей прибрежных сел р.Теча и Восточно-Уральского радиоактивного следа, получивших облучение со стороны ПО МАЯК (1949-1956 гг.). Работа проводилась совместно с Челябинским центром радиационной медицины в рамках Интеграционного проекта СО РАН. Одним из основных доэообразующих радионуклидов в этом регионе является стронций-90, который накапливается и длительное время удерживается в костной ткани. Превышение допустимых уровней помимо ^Sr наблюдали и для 137Cs [Akleyev et al, 1994]. В качестве контроля бьши использованы данные по распределению частот аллелей и частот генотипов генов c-fms, ссг2 и ссг5 в популяции русских г. Новосибирска (собранных в рамках программы МОНИКА). Нами не были обнаружены различия в распределении генотипов по 3'UTR и del425 полиморфизмам гена c-fms между облученной группой, их потомками по сравнению с контрольной выборкой. Возможно, отсутствие различий объясняется отличием спектра радионуклидов, давших вклад в облучение населения, проживающего вдоль р. Теча, по сравнению с загрязненными территориями Алтайского края. Однако, анализ распределения вариантов аллелей и генотипов по двум полиморфным локусам гена c-fms в зависимости от пола показал, что в старшей возрастной группе у женщин наблюдается статистически достоверное снижение частоты более редкого аллеяя по del425 полиморфизму гена c-fms по отношению к группе мужчин : в группе женщин частота составляет 4.64% против 11.49% в группе мужчин (Fj.,¡ded, 342=0.023). Частота редкого аллеяя в группе облученных женщин старше 45 лет достоверно отличается и от - контроля: соответствующей возрастной группы русских женщин г. Новосибирска (F2^¡jed. 373=0.01). По 3'UTR локусу гена c-fms не наблюдается различий в распределении генотипов в зависимости от пола. Возможно, участок гена с делеционным полиморфизмом более чувствителен к радиационному воздействию по сравнению с фрагментом ДНК в 3'UTR области гена c-fms, где расположен динуклеотидный полиморфный сайт. Для гена саг2 также наблюдали снижение частоты редкого аллеля: в группе облученных женщин старше 45 лет - 6.94% против 15.68% в группе облученных мужчин того же возраста (F2-sided, 246=0.035). Для гена ссг5 в данной возрастной группе частоты редкого аллеля близки у мужчин и женщин. Данные свидетельствуют о том, что в популяции русских Уральского региона имеет место факт выбывания индивидуумов с чувствительными к радиации генотипами. Эффект обусловлен, по-видимому, различными патологиями, спровоцированными воздействием ионизирующего излучения на организм

взрослого человека. Данные также косвенно указывают на зависимые от пола особенности регуляции экспрессии гена с-рт при образовании моноцитарной системы клеток крови.

Таким образом, из данных настоящего исследования - следует, что выбранные для анализа полиморфные сайты гена, с-рт являются перспективными в отношении оценки генетических последствий от воздействия радиации. Результаты позволяет предполагать, что, по-видимому, окружающие факторы среды дифференцированно воздействуют на пенетрантность гена через различные генетические процессы, регулируемые разными участками некодирующей ДНК.

Выводы:

1. В гене с-рт человека, экспрессирующегося в кроветворных клетках, репродуктивных органах женщин, остеокластах и эмбриональных тканях, обнаружены два новых полиморфных сайта: один - в 21 интроне 034047А, другой - в З'-нетранслируемой области гена на расстоянии 34 н.п. от стоп-кодона трансляции, в позициях 34293 и 34294: ТС—>СА. Мутация в интроне обнаружена только у индивидуумов одной семьи немцев. Мутация в З'-нетранслируемой зоне (ЗТПШ.) широко распространена в этнических группах европейской и монголоидных рас.

2. Изучен характер распределения аллельных вариантов и генотипов З'ШК полиморфизма гена с-рт и ранее описанного функционально значимого делеционного полиморфизма 11-го интрона (<1е1425) в европейских и монголоидных этнических группах России и канадских эскимосов.: Обнаружены достоверные различия в генсшшическом разнообразии по 3'1ГГО. полиморфизму гена с-рт между этническими группами, наиболее различающимися между собой оказались арктические монголоиды - чукчи (прибрежная и тундровая субпопуляции) и канадские эскимосы. Генотипическое распределение по с!е1425 полиморфизму в большей мере, чем по З'ШП сайту, характеризуется расовым и групповым своеобразием тех популяций человека, которые проживают в сходных климато-географических условиях.

3. Оценено сравнительное распределение гаплотипов по полиморфным сайтам З'ит и ¿е1425 в этнических группах арктических монголоидов (канадские эскимосы, чукчи (прибрежные и тундровые)), центрально-азиатских популяций (тувинцы, алтайцы, казахи) и европейцев - русских и немцев. Показано доминирование ПЧ-аплотипов во всех этнических группах, кроме тувинцев, у которых доминирует Ь)-гаплотип. Обнаружено различие в распределении вторых по численности гаплотипов: Ь} - у европейцев (немцы, русские), в ценгральноазиатских популяциях (казахи, алтайцы), а также у тундровых чукчей, <1Р - у канадских эскимосов и прибрежных чукчей, 1Р - у тувинцев, что указывает на селективные преимущества определенных гаплотипов для носителей в зависимости от условий проживания.

4. Контекстным анализом последовательности нуклеотидов 3'-нетранслируемой зоны и делегируемого фрагмента ДНК 11-го нитрона гена с-fins человека установлено, что полиморфный сайт ТС/СА примыкает к 5'-концу известного цис-элемента -САААСТТС-, вовлеченного в поспранскрипционные события созревания мРНК; в делегированном фрагменте ДНК 11-го интрона находятся несколько специфически сочетающихся регуляторных сигнальных мотивов (CArG, ets, Е- и N-боксы, MAR/SAR сайты), потенциально способных модулировать лиганд (M-CSF)-зависимую транскрипцию гена, кодирующего его рецептор (FMS).

5. Показано наличие ассоциаций З'ШИ-полиморфизма гена c-fins с острым бронхитом, доброкачественными опухолями молочной железы (ФА, ФКМ) у женщин и раком легких у мужчин в популяции русских г. Новосибирска. В отличие от 3'UTR сайта для делеционного полиморфизма показано отсутствие ассоциаций с доброкачественными опухолями молочной железы у женщин (ФА, ФКМ), раком легких у мужчин, но сохраняется ассоциация х острым бронхитом в популяции русских г. Новосибирска

6. В результате молекулярно-эпидемиологических исследований установлена информативность 3'UTR и делеционного полиморфизмов гена с-fms для оценки влияния неблагоприятных факторов среды на генетическое разнообразие в генофондах популяций человека

7. Выявлены существенные отличия в распределении вариантов аллелей и генотипов по 3'UTR полиморфизму гена c-fins в двух популяциях, немцев, проживающих в разных в экологическом отношении районах Алтайского края: Немецком - относительно благополучном и Рубцовском, загрязненном радиоактивными веществами. Обнаружено более чем двухкратное пол-независимое обеднение 3'UTR CA аллеля в возрастной группе до 43 лет у жителей Рубцовского района по сравнению с Немецким той же возрастной когорты.

8. Существенные различия (>2 раз) в распределении вариантов аллелей и генотипов по делеционному полиморфизму в разных возрастных группах наблюдали не только в Рубцовском, но даже в Немецком районе, считающимся относительно экологически чистым. Высказано предположение о большей информативности del425 полиморфизма.

9. В экологически неблагополучном Уральском регионе России (население, проживающее вдоль р. Теча) характер распределения вариантов аллелей и генотипов по 3'UTR полиморфизму в зависимости от возраста и пола в популяции русских не отличаются от такового в контрольной выборке русских г. Новосибирска, вероятно из-за более низких доз облучения или же различий в природе радионуклидов. Обнаружено зависимое от пола уменьшение редкого аллеля по del425 полиморфизму гена c-fins в старшей возрастной группе облученных женщин Уральского региона по сравнению с контрольной группой русских женщин того же возраста г. Новосибирска.

СПИСОК ОСНОВНЫХ ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Т.Н. Кузнецова. М.И. Воевода, О. А Подколодная, И.В. Куликов, В.Ф. Кобзев, С.Н. Устинов, С.К. Малютина, Н.И. Логвиненко, Э.Я. Журавская, Н.В. Чердынцева, Ю.В. Туманов, O.A. Морозова, В.А. Баум, А.Г. Ромащенко. Делеционный полиморфизм! 11 -го интрона гена c-fins человека: частоты аллелей в некоторых популяциях России и возможная функциональная значимость. // Генетика. 2004. Т.40 (№1). С.102-112.

2. Т.Н. Кузнецова. АГ. Ромащенко, RC. Юдин, И.В. Куликов, С.Н. Устинов, Л.А. Гырголькау, В.Н. Максимов, Т.М. Найкова, Т. А Потапова, В.Ф. Кобзев, МИ. Воевода. Полиморфизмы экспрессирующихся в макрофагах генов c-fins и ссг5\ частотные распределения аллелей и генотипов в некоторых этнических группах северной Азии. // "Генофонд населения, Сибири." Сборник. научных, статей, Новосибирск - (Изд-во. Института археологии СО РАН). 2003. С.44-49.

3. Кузнецова Т.Н.. Воевода М.И., Подколодная O.A., Ромащенко. АГ. "Возможный механизм регуляции M-CSF-зависимой транскрипции гена его рецептора (FMS) через полиморфный участок ДНК (А425) 11 -интрона." // Материалы, международной конференции, г. Пущино, 16-18 июня 2003 г. С.84.

4. Ромащенко АГ, Кузнецова Т.Н.. Рузанкина Я.С, Косгенко М.В, Ковзев В.Ф.; Куликов ИВ, Кончук Ч, Воевода М.И. Обнаружение двух полиморфных сайтов в гене c-fins человека: частоты аллелей и генотипов в некоторых популяциях России // Генетика, 2002, Т.38, №1, С.33-40.

5. Romaschenko AG- Kouznetsova T.N.. Ruzankina Y.S, Kobzev V.F, Kostenko. M.V, Konchuk Ch., Voevoda ML The allelic states of two polymorphic sites of the c-fins gene in human population of Eurasia // В кн. 'Biodiversity ¿id dynamics of ecosystems in -North Eurasia." Part 4. 2001, V.l. P.171-173.

6. Кузнецова Т.Н.. Ромащенко АГ, Рузанкина Л С, Кобзев В.Ф, Бабенко В.П, Киселев В.И.,. Шойхет Я.Н, Иванова М.В, Воевода; М.И. Изменение частот полиморфных; вариантов гена: c-fins среди; населения,, проживающего; в зоне: радиационного воздействия в: Алтайском i крае. // IV съезд по радиационным -исследованиям. Т.1. С. 128. Москва, 20-24 ноября 2001 г.

7. Ромащенко А.Г, Кузнецова Т.Н.. Рузанкина Я.С, Кобзев В.Ф, Бабенко В.П, Киселев В.И, Шойхет Я.Н., Иванова М.В, Воевода МИ. Генотишфование полиморфного сайта гена c-fins в популяциях человека: обнаружение связи гена с реакцией человека на факторы окружающей среды. // В кн. "II съезд Вавиловского общества . генетиков . и селекционеров." : Отдаленные последствия, ., мутагенез, канцерогенез: закономерности, механизмы. Т.2. С.206. Санкт-Петербург 1-5 февраля' 2000.

8. Kouznetsova T.N.. Ruzankina J.S, Kulikov I.V., Voevoda MI, Romaschenko AG. Detection of two polymorphic sites in last intron and З'-flanking region of MCSF receptor^ gene // Keystone Symposia on Molecular and Cellular.Biology. C5: Specificity in Signal; Transduction Nevada, March 1-7,1998. Abstract #221, p.56.

9. Кузнецова Т.Н.. Рузанкина ЯС, Куликов ИВ, Воевода М.И, Ромащенко АГ. Обнаружение двух полиморфных сайтов в последнем интроне и проксимальной кг терминальному кодону 3' фланкирующей области гена рецептора M-CSF // Материалы • научно-практической конференции. "Медицинская генетика: проблемы диагностики, профилактики и диспансеризации больных с наследственной патологией." С.31-33. Томск 9-10 июня, 1998.

-Т9 8 8'

Подписшо к печати 16.02.2004 г.

Формат бумаги 60x90 1/16. печ. л. 1. Уч. изд. л. 0.7

Тираж 100 экз. Заказ 25

Ротапринт Института цитологии и генетики СО РАН 630090, Новосибирск, пр. ак. Лаврентьева, 10.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Кузнецова, Татьяна Николаевна

Введение

Список сокращений 10 Обзор литературы:

Глава 1. Некоторые молекулярно-генетические подходы к анализу сложных признаков.

Глава 2. Молекулярная биология M-CSF и его рецептора.

2.1. Макрофаг колоние-стимулирующий фактор (M-CSF).

2.2. Экспрессия и структура M-CSF.

2.3. Рецептор M-CSF: структура и молекулярные механизмы его функционирования.

2.3.1. III класс семейства RTK-клеточно-поверхностпых белков.

2.3.2. Структура FMS и его круговорот в клетке.

2.4. Трансформирующий потенциал c-fms протоонкогена

2.5. Передача сигнала MCSF-R в ответ на действие M-CSF. а) M-CSF-индуцированный пролиферативный ответ клеток и выживание. б) M-CSF-индуцированная дифференциация моноцитарных фагоцитов.

2.6. Структура гена c-fms, регуляция его экспресии. 43 Заключение к главе 2.

Глава 3. Влияние ионизирующего облучения на генофонд популяций.

3.1. Генетические последствия облучения самцов млекопитающих.

3.2. Генетические последствия облучения самок млекопитающих.

3.3. Генетические последствия облучения самок и самцов млекопитающих.

3.4. Генетические последствия облучения человека

3.5.1. Характеристика радиоактивного загрязнения Алтайского края со стороны Семипалатинского полигона Состояние здоровья населения в некоторых районах Алтайского края.

3.5.2. Характеристика радиоактивного загрязнения территории Уральского региона со стороны ПО "Маяк". Состояние здоровья населения, подвергшегося радиационному воздействию. 60 Материалы и методы 62 Результаты:

1.1. Поиск и обнаружение полиморфных сайтов в 21 интроне и З'-нетранслируемой области гена c-fms.

1.2. Популяционные различия в распространении разных аллелей, генотипов и гаплотипов исследуемых полиморфизмов гена c-fms. а) Определение частот аллелей и генотипов по полиморфным сайтам 1 и 2 гена c-fms в * некоторых этнических группах России и популяции канадских эскимосов. б) Анализ распространенности аллелей и генотипов делеционного полиморфизма в 11-ом интроне гена c-fms (полиморфный сайт 3, del425) человека с использованием модифицированного метода аллель-специфической ПЦР. в) Оценка частот гаплотипов по 3'UTR и deI425 полиморфизмам гена c-fms в некоторых этнических группах Евразии и популяции канадских эскимосов. с) Распределение ахлелей и генотипов по полиморфизмам (deI425 и 3'UTR (ТС-»СА)) гена c-fms в различных возрастных группах (it некоторых популяций России.

1.3. Контекстный анализ нуклеотидных последовательностей ДНК в местах нахождения полиморфных сайтов в гене c-fms.

1.4. Изучение ассоциаций ахлельных вариантов гена c-fms с различными фенотипическими признаками женщин и патологиями различной этиологии.

1.5. а) Оценка возможных изменений в распределении вариантов атлелей и генотипов, экспрессирующихся в макрофагах генов c-fms, CCR2, СС/15 в генофонде немцев Алтайского края в ответ на воздействие радиации. б) Частоты ахлелей и генотипов по полиморфизмам deI425 и 3'UTR (ТС-»СА) гена c-fms в ^ популяции русских, проживающих по течению р.Теча (Челябинская обл.), подвергшихся радиационному воздействию со стороны ПО "Маяк".

Обсуждение

1.1. Оценка степени информативности выбранных для молекулярно-эпидемиологического анализа полиморфных сайтов в гене c-fms человека

1.2. Полиморфизмы 3'UTR и deI425 гена c-fms являются информативными генетическими маркерами для оценки последствий воздействия радиации на популяции человека.

Выводы

Введение Диссертация по биологии, на тему "Генетическая информативность 3'UTR (TC→CA)- и del425- полиморфизмов гена c-fms человека"

Актуальность проблемы. Развитие методов массового генотипирования на основе анализа структуры ДНК создало объективные предпосылки для оценки существ)тощей гетерогенности генетического материала в популяциях человека. Расшифровка последовательностей нуклеотидов генома человека позволила выявить значительное число (>Ю7) полиморфных сайтов, часть из которых, вероятно, имеет отношение к наблюдаемой изменчивости в проявление некоторых фенотипических признаков у человека [Risch et al., 2000].

Известно, что многие гены характеризуются этноспецифическими особенностями распределения вариантов аллелей и генотипов по некоторым из полиморфных сайтов в их структуре [Chang et al., 1996; Martinson et al., 1997; Yudin et al., 1998; Merryweather-Clarke et al., 2000]. Этноспецифическая вариабельность генов может являться следствием совокупного вклада ряда факторов: эффекта основателя, селекции, ассимиляции, случайного дрейфа генов и т.д. Эволюционно отобранные аллельные варианты генов, распространенные в популяции, в определенной мере отражают адаптивный потенциал вида в отношении неблагоприятных средовых воздействий. Считается, что изменение внешних условий среды оказывает влияние на изменчивость геномов половых клеток отдельных людей и, следовательно, на генофонд популяции человека в целом. Различают следующие векторные составляющие, которые могут определять характер и степень изменчивости в генофонде: 1. появление новых мутаций в геномах половых клеток индивидов, приводящее, потенциально, к увеличению гетерогенности генетического материала в генофонде; 2. индивидуальная восприимчивость к воздействию внешнего фактора на организм человека из-за существующей вариабельности структуры ДНК и, как следствие, возможности возникновения патологий в репродуктивном периоде жизни, сокращение потомства, ведущее к уменьшению степени гетерогенности в структуре генофондов. Вклад разных составляющих в изменчивость генофондов различен. Закрепление новых мутаций и значимое увеличение частоты каждой из них в популяции -сложный и длительный процесс. Тогда как сокращение гетерогенности генетического материала в генофонде за счет индивидуальной восприимчивости к неблагоприятному фактору может быть существенным, если допустить, что существующие варианты генов и их сбалансированность в геномах являются продуктами длительного приспособления человека к иным условиям среды. Оценка вклада отдельных генов в формирование индивидуальной чувствительности организма к неблагоприятному фактору среды - задача в настоящее время достаточно сложная. Поэтому решение ее в существенной мере определяется соответствием внешнему фактору выбранного для анализа гена-кандидата

Не менее сложным может оказаться поиск информативных локусов в выбранном гене. В исследованиях по анализу ассоциаций между полиморфными сайтами и заболеваниями пока преимущественно используют нуклеотидные полиморфизмы, приводящие к несинонимичным заменам аминокислот в белке [Cardill et al., 1999; Halushka et al., 1999; Gard et al., 1999; Picoult-Newberg et al., 1999], но такие полиморфизмы редки. В последнее время к ассоциативному анализу привлекают дополнительно полиморфизмы в составе цис-элементов в регуляторных областях генов [Artida et al., 1998; Hall et al., 1997; Gragnoli et al., 1997; Scholtz et al., 1999; Bidwell et al., 1999; Horikawa et al., 2000]. Однако, сведения о таких полиморфизмах достаточно фрагментарны. Для решения задач практического значения необходимо также учитывать, что частоты редких (мугантных) вариантов аллелей могут быть столь малы, что не позволят рассматривать их в качестве информативных и пригодных для практического использования на уровне популяций маркеров.

Работы по изучению последствий влияния ионизирующего облучения на популяцию человека посвящены, как правило, поиску индуцированных радиацией мутаций в геномах соматических клеток и анализу их вклада в развитие патологического процесса (опухолеобразование, нарушение работы различных органов, патологии внутриутробного развития) [Шевченко и др., 1994; Neel et al., 1980; Hayashi et al., 1997; Kodama et al., 1996; Neel et al., 1988; Saton et al., 1993; Kodaira et al., 1995]. Эпидемиологические работы по изучению генетических последствий облучения в популяции человека немногочисленны [Шевченко и др., 1994; Коненков и др., 1995; Dubrova et al., 1996; Dubrova et al., 1998; Hayashi et al., 1997].

В настоящей работе для эколого-генетических исследований в качестве гена-кандидата был взят ген рецептора макрофаг колоние-стимулирующего фактора (c-fms), одного из четырех колониестимулирующих ростовых факторов крови. Ген c-fms характеризуется разносторонним плейотропным алиянием на важнейшие физиологические и патологические функции в организме человека [Moore, 1994; Sapi et al., 1999]. Пара белков M-CSF/FMS яаляется ключевым звеном, определяющим дифференцировку, пролиферацию и выживаемость клеток моноцит/макрофагального ряда и, таким образом, воалекается в формирование системы неспецифического иммунитета [Wiktor-Jedrzejczak et al., 1992; Witmer-Pack et al., 1993; Moore, 1994]. Через участие в дифференцировке остеокластов М-CSF/ FMS белки влияют на остеогенез [Kodama ct al.,

1991; Grey et al., 2000]. Функционирование второго, трофобласт-специфического промотора в гене c-fms определяет участие FMS во внутриутробном развитии эмбрионов в организме матери [Roberts et al., 1992; Pollard et al., 1997; Omigbodum et al., 1998; Suzuki et al., 1999]. Аномальная экспрессия c-fms в опухолях женских репродуктивных органов (молочная железа, яичники, матка) [Sapi et al., 1996; Sapi E., Flick M. et al., 1999; Anderson et al., 1999] косвенно указывают на то, что регуляция гена может находиться под контролем факторов, свойственных только женскому организму. Немаловажным обстоятельством, способствовавшему выбору гена c-fms в качестве кандидата для оценки генетических последствий от радиации, было и то, что миелоидный росток костного мозга - источника стволовых гематопоэтических клеток, и репродуктивные органы женщин, где экспрессируется ген, являются одними из наиболее уязвимых тканей при облучении.

В настоящей работе впервые была предпринята попытка оценить изменение в характере распределения вариантов аллелей и генотипов по двум полиморфным сайтам на примере выбранного нами гена-кандидата (c-fms) в популяциях человека, проживающих в условиях экологического загрязнения по сравнению с популяционным контролем. В связи с тем, что выбранные полиморфные сайты расположены в некодирующих областях гена, был осуществлен контекстный анализ последовательностей нуклеотидов в районах их локализации для выяснения возможного вклада полиморфизмов в функционирование гена c-fms. Дополнительно, был проведен анализ ассоциаций исследуемых полиморфизмов гена с рядом патологий и некоторыми фенотипическими признаками в формировании которых теоретически мог бы участвовать c-fms, для оценки их генетической информативности.

Цель и задачи исследования.

Целью настоящей работы являлось выяснение перспективности гена рецептора макрофаг-колоние-стимулирующего фактора (c-fms) в качестве генетического маркера воздействия неблагоприятных факторов среды на популяцию человека. Достижение цели настоящего исследования осуществляли решением следующих задач:

Выбора локуса гена для изучения его структурной вариабельности, исходя из данных строения c-fms и особенностей функционирования рецептора FMS в различных клеточных ситуациях, с целью выявления наиболее перспективных для популяционных исследований генетических маркеров и их экспериментальная идентификация.

2) Изучения характера распределения вариантов аллелей и генотипов по динуклеотидному полиморфному сайту в З'-нетранслируемой области (3'UTR ТС—»СА) и делеционному полиморфизму в 11-м интроне (del425) гена c-fms среди некоторых европейских (русские, немцы) и монголоидных этнических групп, а именно: арктических монголоидов (чукчи - прибрежные и тундровые, канадские эскимосы) и центрально- J v/ азиатских популяций (казахи, алтайцы, тувинцы). J

3) Исследования особенностей распределения галлотипов по полиморфным сайтам 3'UTR и del425 гена c-fms в этнических группах арктических монголоидов (канадские эскимосы, прибрежные и тундровые чукчи), центрально-азиатских популяций (тувинцы, алтайцы, казахи) и европейцев (русские, немцы).

4) Выяснения контекстным анализом особенностей структуры ДНК в местах расположения полиморфных сайтов, 3'UTR ТС—*СА и del425, в отношении наличия потенциальных регуляторных элементов для прогнозирования возможной функционатьной значимости этих районов в регуляции экспрессии гена c-fms.

5) Определения возможных ассоциаций между полиморфизмами 3'UTR ТС—+СА, deI425 и некоторыми заболеваниями тех органов человека, в клетках которых в \/ норме или патологии экспрессируется ген c-fms, для косвенной оценки информативности данных полиморфизмов.

6) Установления возможных изменений в характере распределения вариантов аллелей и генотипов по полиморфизмам 3'UTR ТС—+СА и del425 в структуре генофондов популяций человека из экологически неблагоприятных регионов страны: Рубцовского района Алтайского края (немцы) и Урата (облу ченное русское население, проживающее v вдоль реки Теча), по сравнению с таковыми контрольных популяций человека (из Немецкого района Алтайского края и г. Новосибирска соответственно).

Научная новизна. Открыты два новых полиморфных сайта гена рецептора макрофаг колоние-стимулирующего фактора (один - в 21 интроне G34047A, другой в виде измененного динуклеотида - в З'-нетранслируемой области гена на расстоянии 34 н.п. от стоп-кодона трансляции, в позициях 34293 и 34294: ТС—»СА). Установлены особенности распределения вариантов ахтелей, генотипов и галлотипов по полиморфизмам 3'UTR и del425 гена c-fms в некоторых европейских и монголоидных этнических группах России и канадских эскимосов: показаны расовые и этноспецифические различия в характере распределения редких вариантов ахтелей и галлотипов по двум изучаемым полиморфизмам гена c-fms у части исследованных в работе популяций человека Контекстным анализом структ)ры протяженных участков ДНК в районах нахождения анализируемых полиморфизмов показана их потенциальная генетическая Ф информативность: 3'UTR ТС—*СА динуклеотид примыкает к 5'-концу известного цисэлемента - САААСТТС вовлеченного в посттранскрипционные события созревания мРНК; присутствующие в делегированном фрагменте ДНК сигнальные мотивы (CarG, els, Е- и N-боксы и т.д.) потенциально способны модулировать лиганд (M-CSF)-зависимую транскрипцию гена, кодирующего его рецептор (FMS). Обнаружены ассоциации 3'UTR ТС—»СА и del425 полиморфизмов с некоторыми заболеваниями органов, в клетках которых показана экспрессия гена c-fms в норме или патологии, что является косвенным указанием на информативность исследуемых полиморфизмов в качестве генетических маркеров. Впервые, на примере гена c-fms, специально выбранного для изучения генетических последствий от воздействия неблагоприятных факторов среды (радиация), выявлены достоверно значимые изменения в распределении вариантов аллелей и генотипов по 3'UTR и del425 полиморфизмам этого гена в выборках людей из экологически неблагоприятных районов страны по сравнению с популяционным контролем (эксперименты проведены по типу "случай-контроль").

Практическая ценность. Установление информативности полиморфизмов 3'UTR и del425 гена c-fms, выбранного для изучения генетических последствий от воздействия радиации, может быть использовано в будущем для изучения изменений стр>лст)ры генофондов популяций человека, проживающих в экологически неблагоприятных ф регионах страны. Модификация метода массового гепотипирования полиморфизмов с протяженными делециями [Кузнецова и др., 2004] может быть широко использована при молекулярно-эпидемиологических исследованиях генетического разнообразия по другим генам со сходным по структуре полиморфизмами.

Положения, выносимые на защиту.

1. Выбор полиморфизмов 3'UTR и del425 гена c-fms, участвующего в формировании многих фенотипических признаков в организме человека, в качестве генетических маркеров оценки в генофондах популяций изменений от воздействия неблагоприятных внешних факторов среды (радиации).

2. Обнаружение новых полиморфизмов в гене c-fms: одного в 21 интроне в позиции * 34047 G—|>А и другого, в виде динуклеотида - в З'-нетранслируемой области гена на расстоянии 34 н.п. от стоп-кодона трансляции, в позициях 34293 и 34294: ТС—»СА.

3. Установление расовых или этноспецифических различий в распределении вариантов аллелей и генотипов по двум (3'UTR, del425) полиморфизмам гена c-fms в некоторых из исследованных этнических групп России.

4. Определение потенциальной функциональной значимости изучаемых в работе 3'UTR и del425 полиморфизмов гена c-fms на основании данных контекстного анализа структуры протяженных участков ДНК в местах их локализации: возможное участие 3'UTR ТС—»СА полиморфизма в составе сигнального мотива -(ТС/СА)САААСТТС - в посттранскрипционных событиях созревания мРНК FMS и вовлечение делегируемого фрагмента ДНК в 11-м интроне, размером 425 н.п. (del425) в M-CSF-зависимую транскрипцию гена c-fms.

5. Выявление ассоциаций 3'UTR и del425 полиморфизмов гена c-fms с некоторыми заболеваниями тех органов, в клетках которых экспрессируется c-fms в норме или патологии, как косвенное указание на генетическую информативность изучаемых сайтов.

6. Обнаружение изменения в распределении вариантов ахлелей и генотипов по 3'UTR и del425 полиморфизмам гена c-fms в выборках человека из экологически неблагоприятных регионов (Рубцовский район Алтайского края, облученное русское население Урала, проживающее вдоль реки Теча) по сравнению с контрольными популяциями (Немецкого района Алтайского края и г. Новосибирска соответственно) в экспериментах, проведенных в дизайне "случай-контроль".

Апробация работы. Материалы исследования были доложены, представлены стендовыми докладами или тезисами докладов на: международном симпозиуме по молекулярной и клеточной биологии - Кенстоун, США, 1998; научно-практической конференции "Медицинская генетика: проблемы диагностики, профилактики и диспансеризации больных с наследственной патологией." - Томск, 1998; на 1-м съезде геронтологов и гериатров Сибири и Дальнего Востока - Новосибирск , 2000; на ЗападноСибирском терапевтическом форуме - Тюмень, 2000; на 2-м съезде Вавиловского общества генетиков и селекционеров "Отдаленные последствия, мутагенез, канцерогенез: закономерности, механизмы." - Санкт-Петербург, 2000; международной конференции

Биоразпообразие и динамика экосистем в Северной Евразии" - Новосибирск, 2001; на IV съезде по радиационным исследованиям - Москва, 2001; на 73-м конгрессе европейского общества по изучению атеросклероза - Зальсбург, 2002; на Российском национальном конгрессе кардиологов - Санкт-Петербург, 2002; международной конференции "Рецепция и внутриклеточная сигнализация", г. Пущино, 2003 г.

Публикации; По теме диссертации опубликовано 9 работ, из них две в рецензируемой печати.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 138 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов и их обсуждения, выводов, списка литературы. Данные проиллюстрированы 22 таблицами и 14 рисунками. Библиографический указатель 'ф включает 338 источников, из них 42 работы отечественных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Кузнецова, Татьяна Николаевна

Выводы:

В гене c-fms человека, экспрессирующегося в кроветворных клетках, репродуктивных органах женщин, остеокластах и эмбриональных тканях, обнаружены два новых полиморфных сайта: один - в 21 нитроне G34047A, другой - в З'-нетранслируемой области гена на расстоянии 34 н.п. от стоп-кодона трансляции, в позициях 34293 и 34294: ТС—»СА. Мутация в интроне обнаружена только у индивидуумов одной семьи немцев. Мутация в З'-нетранслируемой зоне (3'UTR) широко распространена в этнических группах европейской и монголоидных рас.

Изучен характер распределения аллельных вариантов и генотипов 3'UTR полиморфизма гена c-fms и ранее описанного функционально значимого делеционного полиморфизма 11-го интрона (del425) в европейских и монголоидных этнических группах России и канадских эскимосов. Обнаружены достоверные различия в генотипическом разнообразии по 3'UTR полиморфизму гена c-fms между этническими группами, наиболее различающимися между собой оказались арктические монголоиды - чукчи (прибрежная и тундровая субпопуляции) и канадские эскимосы. Генотипическое распределение по del425 полиморфизму в большей мере, чем по 3'UTR сайту, характеризуется расовым и групповым своеобразием тех популяций человека, которые проживают в сходных климато-географических условиях.

Оценено сравнительное распределение гаплотипов по полиморфным сайтам 3'UTR и del425 в этнических группах арктических монголоидов (канадские эскимосы, чукчи (прибрежные и тундровые)), центрально-азиатских популяций (тувинцы, алтайцы, казахи) и европейцев - русских и немцев. Показано доминирование 1Р-гаплотипов во всех этнических группах, кроме тувинцев, у которых доминирует Iq-гаплотип. Обнаружено различие в распределении вторых по численности гаплотипов: Iq - у европейцев (немцы, русские), в центральноазиатских популяциях (казахи, алтайцы), а также у тундровых чукчей, dP - у канадских эскимосов и прибрежных чукчей, IP - у тувинцев, что указывает на селективные преимущества определенных гаплотипов для носителей в зависимости от условий проживания.

Контекстным анализом последовательности нуклеотидов З'-нетранслируемой зоны и делегируемого фрагмента ДНК 11-го интрона гена c-fms человека установлено, что полиморфный сайт ТС/СЛ примыкает к 5'-концу известного цис-элемента -САААСТТС-, вовлеченного в посттранскрипционные события созревания мРНК; в делегированном фрагменте ДНК 11-го интрона находятся несколько специфически f сочетающихся регуляторных сигнальных мотивов (CArG, ets, Е- и N-боксы,

MAR/SAR сайты), потенциально способных модулировать лиганд (M-CSF)-зависимую транскрипцию гена, кодирующего его рецептор (FMS).

5. Показано наличие ассоциаций З'ШИ-полиморфизма гена c-fms с острым бронхитом, доброкачественными опухолями молочной железы (ФА, ФКМ) у женщин и раком легких у мужчин в популяции русских г. Новосибирска. В отличие от 3'UTR сайта для делеционного полиморфизма показано отсутствие ассоциаций с доброкачественными опухолями молочной железы у женщин (ФА, ФКМ), раком легких у мужчин, но сохраняется ассоциация с острым бронхитом в популяции русских г. Новосибирска.

6. В результате молекулярно-эпидемиологических исследований установлена информативность 3'UTR и делеционного полиморфизмов гена c-fms для оценки влияния неблагоприятных факторов среды на генетическое разнообразие в генофондах популяций человека.

7. Выявлены существенные отличия в распределении вариантов аллелей и генотипов по 3'UTR полиморфизму гена c-fms в двух популяциях немцев, проживающих в ф разных в экологическом отношении районах Алтайского края: Немецком относительно благополучном и Рубцовском, загрязненном радиоактивными веществами. Обнаружено более чем двухкратное пол-независимое обеднение 3'UTR СА аллеля в возрастной группе до 43 лет у жителей Рубцовского района по сравнению с Немецким той же возрастной когорты.

8. Существенные различия (>2 раз) в распределении вариантов аллелей и генотипов по делеционному полиморфизму в разных возрастных группах наблюдали не только в Рубцовском, но даже в Немецком районе, считающимся относительно экологически чистым. Высказано предположение о большей информативности del425 полиморфизма.

9. В экологически неблагополучном Уральском регионе России (население, проживающее вдоль р. Теча) характер распределения вариантов аллелей и генотипов по 3'UTR полиморфизму в зависимости от возраста и пола в популяции русских не отличаются от такового в контрольной выборке русских г. Новосибирска, вероятно из-за более низких доз облучения или же различий в природе радионуклидов. Обнаружено зависимое от пола уменьшение редкого аллеля по del425 полиморфизму гена c-fms в старшей возрастной группе облученных женщин Уральского региона по сравнению с контрольной группой русских женщин того же возраста г. Новосибирска.

Заключение.

Таким образом, из совокупности полученных данных следует, что функционирование рецептора FMS и его лиганда M-CSF регулируется у женщин пол-зависимым способом, по крайней мере при части физиологических процессов, и, вероятно, находится в специфическом соответствии с морфофенотипическими особенностями их организма. Связующая роль пары белков, M-CSF/FMS, в реализации сложных фенотипических признаков вероятно и обуславливает перспективность использования кодирующих их генов в качестве кандидатов для эпидемиологической оценки генетических последствий от воздействия на популяцию человека неблагоприятных внешних факторов среды.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Кузнецова, Татьяна Николаевна, Новосибирск

1. Аксенович Т.И. Статистические методы генетического анализа признаков человека. // Новосибирск. 2001. Учебное пособие, ФЕН НГУ.

2. Безлепкин В.Г., Газиев А.И. Индуцированная нестабильность генома половых клеток животных по мини- и микросателлитным последовательностям. // Радиац. биология. Радиоэкология. 2001. Т. 41. № 5. С. 475-488.

3. Богачев С.С. Молекулярно-биологические аспекты взаимодействия ДНК и ядерного ламина D. melanogaster//Дис. доктор. Новосибирск. 1998.

4. Бунак В.В. Род Homo, его возникновение и последующая эволюция. // М.: Наука. 1980. 329 стр.

5. Воробцова И.Е. Влияние облучения родителей на физиологическую полноценность и риск канцерогенеза у потомства первого поколения организмов разных видов. : Автореферат диссертации д-ра биол. наук. Л.: ЦНИРРИ МЗ РФ, 1988.

6. Дубасов Ю.В., Матущенко A.M., Филатов Н.П. Семипалатенский испытательный полигон: оценивая радиоэкологические последствия. // Информ. бюл. 1993. М: Центр общественной информации по атомной энергии, Спецвыпуск 20 января 1993 г.

7. Журавская А.Н., Кершенгольц Б.М., Курилюк Т.Т., Щербакова Т.М. Эпидемиологические механизмы адаптации растений к условиям повышенного естественного радиационного фона. // Радиац. биология. Радиоэкология. 1995. Т. 35.Вып. 3. С. 349-355.

8. Кавсан В.М. Сплайсинг мРНК в ядре. // Молекуляр. биология. 1986. Т. 20. С. 14511471.

9. Колесников А.П., Гордеев Д.В., Хабаров А.С. Иммунологические изменения у детей, проживающих в регионах Алтайского края, подвергшихся радиационному воздействию. // Вестник научной программы "Семипалатинский полигон". 1994. Вып. 3. С. 76-79.

10. Колчанов Н.А., Ананько Е.А., Колпаков Ф.А., Подколодная О.А., Игнатьева Е.В., Горячковская Т.Н., Степаненко И.Л. Генные сети. // Мол. Биология. 2000. Т. 34(4). С. 533-544.

11. Коненков В.И, Прокофьев В.Ф. Отдаленные последствия радиационных воздействий на иммуногенетическую структуру популяций европеоидного населения Алтая. // Вестник научной программы "Семипалатинский полигон". 1995. Вып. 2. С. 65-71.

12. Косенко М., Дегтева М. Оценка радиационного риска популяции, облучившейся вследствие сбросов радиоактивных отходов в р. Теча // Атомная энергия. 1992. Вып. 4. С. 390-395.

13. Котеров А.Н., Никольский А.В. Адаптация к облучению in vivo. II Радиац. биология. Радиоэкология. 1999. Т. 39. № 6. С. 648-662.

14. Крапивко Т.П., Ильенко А.И. Первые признаки радиоадаптации в популяции рыжих полевок (Clethrionomys glareolus) в радиационном биогеоценозе. // Докл. АН СССР. 1988. Т. 302(5). С. 1272-1274.

15. Лепехин Н.П., Палыга Г.Ф. Последствия для внутриутробного развития потомства облучения половых клеток самцов на разных стадиях сперматогенеза. // Радиац. биология. Радиоэкология. 1994. Т. 34. Вып. 4. С. 645-650.

16. Лысенко Е.А., Кальченко В.А., Шевченко В.А. Изменчивость полиморфных систем Centaurea scabiosa L. под действием хронического облучения. // Радиац. биология. Радиоэкология. 1999. Т. 39(6). С. 623-629.

17. Мазурик В., Мороз Б. Проблемы радиобиологии и белок р53. // Радиац. биология. Радиоэкология. 2001. Т. 41. № 5. С. 548-572.

18. Макаренко Н.Г., Каримова Л.М., Беляшов Д.Н., Комаров И.И., Аристова И.Л., Кардашев А.В. Юшков А.В. Топологический метод анализа площадных загрязнений территорий бывших ядерных полигонов. // Радиац. биология. Радиоэкология. 1999. Т. 39(5). С. 521-527.

19. Материалы научных исследований "Ядерные испытания, окружающая среда и здоровье населения Алтайского края", г. Барнаул. 1993. Т. 1. Книга 1. С. 34-72.

20. Маянский Д.Н. Клетка Купфера и система мононуклеарных фагоцитов.

21. Новосибирск. "Наука". 1981. С. 7-35.

22. Найдич В. Основные результаты научных исследований в области радиобиологии и радиоэкологии за 2000 г. // Радиац. биология. Радиоэкология. 2001. Т. 41(4). С. 435-461.

23. Нефедов И.Ю., Нефедова И.10., Палыга Г.Ф. Актуальные аспекты проблемы генетических последствий облучения млекопитающих. // Радиац. биология. Радиоэкология. 2000. Т. 40(4). С. 358-372.

24. Палыга Г.Ф., Домбровский А.В., Лепехин Н.П. Состояние потомства первого поколения, зачатого в различные сроки после облучения самок в малых дозах. // Радиац. биология. Радиоэкология. 1999. Т. 39(4). С. 384-387.

25. Померанцева М.Д., Рамайя Л.К., Шевченко В.А. Повышение частоты ДЛМ в премейотических клетках у мышей. // Всесоюз. конф. "Актуальные проблемы радиационной биологии и радиационной генетики": Тез. докл. Обнинск, 1990. С. 104-106.

26. Смит К., Клко С., Кантор Ч. Пульс-электрофорез и методы работы с большими молекулами ДНК // В сб. Анализ генома. Под ред. К. Дейвиса. М.:Мир,1990. С. 5894.

27. Шахдинарова Л.В. Радиочувствительность ооцитов млекопитающих в онтогенезе и ее модификация мексамином и гипоксической гипоксией.: Автореферат канд. биол. наук. Обнинск: НИИМР АМН, 1989. С. 20.

28. Шевченко В.А., Померанцева М.Д. Генетические последствия действия ионизирующих излучений. //М: Наука. 1985. С. 279.

29. Шевченко В.А., Сусков И.И., Снигерева Г.П., Елисова Т.В., Семов А.Б. Генетический статус населения, подвергшегося воздействию ядерных испытаний. // Вестник научной программы "Семипалатинский полигон". 1994. Вып. 3. С. 5-33.

30. Шевченко В.А. Современные проблемы оценки генетического риска облучения человека. // Радиац. биология. Радиоэкология. 2000. Т. 40(5). С. 630-639.

31. Шойхет Я.Н., Киселев В.И., Алгазин А.И. Ядерные испытания на Семипалатинском полигоне и здоровье населения Алтайского края. // Пульмонология. 1993. № 4. С. 77-80.

32. Akleyev A.V, Lyubchansky E.R. Environmental and medical effects of nuclear weapon production in the southern Urals. // Sci. Total Environ. 1994. V. 142(1-2). P. 1-8.

33. Alford P., Xue Y., Shackelford R. Tumor necrosis factor-alpha induces c-fms RNA expression in murine tissue macrophages. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1997. V. 240. P. 442-445.

34. Alonso G., Koegl M., Manurenko N., Courtneidge S. Sequence requirements for binding of Src family tyrosine kinase to activated growth factor receptor. // J. Biol. Chem. 1995. V 270. P. 9840-48.

35. Amati B. and Land H. Myc-Max-Mad: a transcription factor network controlling cell cycle progression, differentiation and death. // Oncogenes and cell proliferation. 1994. V. 4. P. 102-109.

36. Anderson P., Smith H., Goldberg G., Field A., Runowicz C., and Pollard J. Colony-stimulating factor-1 and its receptor do not have a role in the pathogenesis of uterine sarcomas. // Gynecol. Oncol. 1999. V. 74(2). P. 202-207.

37. Arnhcim N., Strange C., Erlich H. Use of pooled DNA samples to detect linkage disequlibrium of polymorphic rectriction fragments and human disease: studies of the HLA class II loci. // PNAS. 1985. V. 82. P. 6970-6974.

38. Artiga M., et al Risk for Alzheimer's disease correlates with transcriptional activity of the APOE gene. //Hum. Mol. Genet. 1998. V. 7. P. 1887-92.

39. Aziz N., Cherwinski H., McMahon M. Complementation of defective colony-stimulating factor 1 receptor signaling and mitogenesis by Raf and v-Src. // Mol. Cell. Biol. 1999. V. 19. P. 1101-1115.

40. Badano J.L. and Katsanis N. Beyond Mendel: an evolving view of human genetic disease transmission. // Nature Rev. 2002. V. 3. P. 779-789.

41. Bader J.S. The relative power of SNPs and haplotype as genetic markers for association tests. //Pharmacogenomics. 2001. V. 2(1). P. 11-24.

42. Bauchinger M, Salassidis K, Braselmann H, Vozilova A, Pressl S, Stephan G, Snigiryova G, Kozheurov VP, Akleyev A. FISH-based analysis of stable translocations in a Techa River population. // Int. J. Radiat. Biol. 1998. V. 73(6). P. 605-12.

43. Bello-Fernandez C., Packham G., and Cleveland J. The ornithine decarboxylase gene is a transcriptional target of c-Myc. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. V. 90. P. 7804-7808.

44. Berra E., Diaz-Meco M., Lozano J., Frutos S., Municio M., Sandchez P., Sanz L., and Moscat J. Evidence for a role of MEK and MARK during signal transduction by protein kinase С. //EMBO. 1995 V. 14. P. 6157-63.

45. Bidwell J., Keen L., Gallagher G., Kimberly R., Huizinda Т., McDermott M., Oksenberg J., McNicholl J., Pociot F., Hardt C. and Alfonso S. Cytokine gene polymorphism in human disease: on-line databases. // Genes and Immunity. 1999. V. 1. P. 3-19.

46. Biskobing D., Fan D., and Rubin J. c-fms mRNA is regulated posttranscriptionally by l,25(OH)2D3 in HL-60 cell. // Calcif. Tissue. Int. 1997. V. 61(3). P. 205-209.

47. Bourette R., Myles G., Choi J.-L. and Rohrschneider L. Sequential activation of phoshatidylinositol 3-kinase and phospholipase C-y2 by the M-CSF receptor is necessary for differentiation signaling. // EMBO J. 1997. V. 16(19). P. 5880-93.

48. Branch R.B., Turner R., Guilbert L.J. Synergistic stimulation of macrophage proliferation by the monokines tumor necrosis factor-alpha and the colony-stimulating factor-1.//Blood. 1989. V. 74. P. 307-311.

49. Bull, of the World Health Organization. "Prevention of avoidable mutational disease." Memorandum from a WHO Meeting. 1986. V. 64. N.2. P. 205-216.

50. Buscher D., Hipskind R., Krautwald S., Reimann Т., and Baccarini M. Ras-dependent and independent pathways targrt the mitogen-activated protein kinase network in macrophages. //Mol. Cell. Biol. 1995. V. 15 (N1). P. 466-475.

51. Cardone M., Roy N., Stennicke H., Salvesen G., Franke Т., Stanbredge E., Frisch S., and Reed J. Regulation of cell death protease caspase-9 by phosphorylation. // Science. 1998. V. 282. P. 1318-1321.

52. Cargill M. et al. Characterization of SNPs in coding regions of humane genes. // Nature Genet. 1999. V. 22. P. 231-238.

53. Carlberg K., and Rohrschneider L. Characterization of a novel tyrosine phosphrylated 100-kDa protein that binds to SHP-2 and phosphatidylinositol З'-kinase in myeloid cells. //J. Biol. Chem. 1997. V. 272. P. 15943-50.

54. Carlberg K., Tarley P., Haustead C., Rohrchneider L. The role of kinase activity and the kinase insert region in ligand- induced internalization and degradation of the c-fms protein. // EMBO J. 1991. V. 10. P. 877-883.

55. Cecchini М., Hofstetter W., Halasy J., Wettenvald A., Felix R. Role of M-CSF in bone and bone marrow development, //Mol. Reprod. Dev. 1997. V. 46. P. 75-84.

56. Chambers S., Wang Y., Gertz R., and Kacinski B. Macrophage colony-stimulating factor mediates invasion of ovarian cancer cell through urokinase. // Cancer Res. 1995. V. 55. P. 1578-1585.

57. Chang F.-M., Kidd J., Livak K., Pakstis A., Kidd K. The world-wide distribution of allele frequencies at the human dopamine D4 receptor locus. // Hum. Genet. 1996. V. 98. P. 91-101.

58. Chee M., Yang R., Hybbell E„ Berno A., Huang X., Stern D., Winker J., Lockhart D., Morris M., Fodor S. Accessing genetic information with high-density DNA arrays. // Science. 1996. V. 274. P. 610-614.

59. Chen F., Amara F., and Wright J. Defining a novel ribonucleotide reductase rl mRNA cis element that binds to an unique cytoplasmic trans-acting protein. // Nucl. Acids Res. 1993. V. 22. P. 4796-4797.

60. Chen H., Chang Sh., Trub Т., and Neel B. Regulation of colony-stimulating factor 1 receptor signaling by the SH2 domain containing tyrosine phosphatase SHPTP1. // Moll. Cell. Biol. 1996. V. 16(7). P. 3685-3697.

61. Cheng M., Wang. F., and Roussel M. Expression of c-myc in response to colony-stimulating factor-1 requires mitogen-activated protein kinase kinasc-1. // J. Biol. Chem. 1999. V. 274(10). P. 6553-6558.

62. Cohen P., Zhu L., Nishimura K., Pollard J. Colony-stimulating factor 1 regulation of neuroendocrine path ways that control gonadal function in mice. // Endocrinology. 2002. V. 143(4). P. 1413-22.

63. Collarts M., Tourkine N., Belin D., Vassali P., Jeanteur P. and Blanchard J. c-fos gene transcription in murine macrophages is modulated by a calcium-dependent block to elongation in intron l.//Mol. Cell. Biol. 1991. V. 11. P. 2826-31.

64. Collins A., Lonjou C., Morton N. Genetic epidemiology of single-nucleotide polymorphisms. // PNAS. 1999. V. 96. P. 15173-177.

65. Cooper J., King C. Dephosphorylation or antibody binding to the carboxy terminal stimulation p60c-src. // Mol. Cell. Biol. 1986. V. 6(12). P. 4467-4477.

66. Courtneidge S.A., Dhand R., Pilat D., Twamley G.M., Waterfleld M.D., Roussel M.F. Activation of Src family kinases by colony-stimulating factor-1, and their association with its receptor. // EMBO J. 1993. V. 12. P. 943-950.

67. Coussens L., Van Beteren C., Smith D., Chen E., Mitchell R., Verma I., Ullrich A. Structurial alteration of viral homologue of receptor protooncogene fms at carboxyl terminus. // Nature. 1986. V. 320. P. 277-280.

68. Csar X., Wilson N. McMahon K., Marks D., Beecroft Т., Ward A., Whitty G., Kanangasundarum V. and Hamilton J. Proteomic analysis of macrophage differentiation. //J. Biol. Chem. 2001. V. 276. P. 26211-17.

69. Curtis D., North В., Sham P. Use of an artificial network to detect association between a disease and multiple marker genotypes. // Ann. Hum. Genet. 2001. V. 65. P. 95-107.

70. Daiter E., Pampfer S., Yeung Y., Barad D., Stanley E., Pollard J. Expression of colony-stimulating factor-1 in the human uterus and placenta. // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1992. V. 74. P. 850-858.

71. Daiter E., Pollard J. Colony-stimulating factor-1 (M-CSF) in pregnancy. // Reprod. Med. ReV. 1992. V. 1. P. 83-87.

72. Dang С. V. c-Myc target genes involved in cell growth, apoptosis and metabolism. // Mol. Cell. Biol. 1999. V. 19. P. 1-19.

73. Dano K., Andreasen P., Grondahl-Hansen J., Kristensen P., amd Nielsen L. Plasminogen activators, tissue degradation and cancer. // Adv. Cancer Res. 1985. V. 44. P. 139-266.

74. Datta S., Dudek H., Tao X., Masters S., Fu H., Gotoh Y., and Greenberg M. Akt phosphorylation of BAD couples survival signals to the cell-intrinsic death machinery. // Cell. 1997. V. 91. P. 231-241.

75. Dey A., She H., Kim L., Boruch A., Guris D„ Calberg K., Sebti S., Woodley D., Imamoto A., and Le W. Colony-stimulating factor-1 receptor utilizes multiple signaling pathways to induce cycline D2 expression. // MCB. 2000. V. 11. P. 3835-48.

76. Downing J.R., Rettermier C.W., Sherr C.J. Ligand-induced tyrosine kinase activity of the colony-stimulating factor-1 receptor in a murine macrophage cell line. // Mol. Cell. Biol. 1988. V. 8. P. 1795-1799.

77. Dubrova Y., Nesterov V., Krouchinsky N., Ostapenko V., Neumann R., Neil D. and Jeffreys A. Human minisatellite mutation rate after the Chernobyl accident. // Nature. 1996. V. 380. P. 683-686.

78. Dubrova Y., Plumb M, Brown J, Jeffreys AJ. Radiation-induced germline instability at minisatellite loci. // Int. J. Radiat. Biol. 1998. V. 74(6). P. 689-96.

79. Duckworth В., and Cantley L. Conditional inhibition of the mitogen-activated protein kinase cascade by wortmannin. // JBC. 1997. V. 272. P. 27665-70.

80. DufTi M., Reily D„ O'Sullivan C., O'Higgins N., Fennelly J., and Andreasen P. Urokinase-plasminogen activator, a new and independent prognostic marker in breast cancer. // Cancer Res. 1990. V. 50. P. 6827-6829.

81. Dunn G.R., Kohn H.I. Some comparisons between induced and spontaneous mutation rates in mouse sperm and spermatogonia.//Mutat Res. 1981. V. 80(2). P. 159-164.

82. Durbin J., Hackenmiller R., Simon M., Levy D. Targeted disruption of the mouse Statl gene results in compromised innate immunity to viral disease. // Cell. 1996. V. 84. P. 443-450.

83. Ehling U.H. Induction of gene mutation in mice: the multiple and point eproach. // Gen. Toxicol, of Environ. Chem. P. B: Genetic effects and applied mutagenesis. 1986. P. 501510.

84. Eilers M., Schirm S., and Bishop J. The MYC protein activates transcription of the alpha-prothymosin gene. // EMBO J. 1991. V. 10. P. 133-141.

85. Fambrough D., McMlure K., Kazlauskas A., Lander E. Diverse signaling pathways activated by growth factor receptors induce broadly overlapping, rather than independent, sets of genes. //Cell. 1999. V. 97(6). P. 727-41.

86. Favot P., Yue X., Hume D. Regulation of the c-fms promoter in murine tumour cell lines.//Oncogene 1995, V. 11(7). P. 1371-81.

87. Fernandez-Valle C., Gorman D., Gomez A., Bunge M. Actin plays a role in both changes in cell shape and gene-expression associated with Schwann cell myelination. //J. Neurosci. 1997. V. 17(1). P. 241-50.

88. Fixe P., Praloran V. Macrophage colony-stimulating factor (M-CSF or M-CSF) and its receptor: structure-function relationships. // European Cytokine Network. 1997. V. 8(2). P. 127-136.

89. Flick M., Sapi E., Perrotta P., Maher M., Halaban R., Carter D. and Kacinski B. Recognition of activated M-CSF receptor in breast carcinomas by tyrosine 723 phosphospecific antibody. // Oncogene. 1997. V. 14. P. 2553-61.

90. Flick M., Sapi E., Kacinski B. Hormonal regulation of the c-fms proto-oncogene in breast cancer cells is mediated by a composite glucocorticoid response element. // J. Cell. Biochem. 2002. V. 85(1). P. 10-23.

91. Galaktionov K., Chen X., and Beach D. Cdc25 cell-cycle phosphatase as a target of c-myc. // Nature. 1996. V. 3 82. P. 511 -517.

92. Gard K., Green P., Nickerson D. Identifocation of candidate coding region SNPs in 165 human genes using assembled expressed sequence tags. // Genome Res. 1999 V. 9. P. 1087-92.

93. Gil-Gomez G., Berns A., and Brady H. A link between cell cycle and cell death: Bax and Bcl-2 modulate Cdk2 activation during thymocyte apoptosis. // EMB0.1998. V. 17. P. 7209-18.

94. Gille H., Sharrocks A., and Shaw P. Phosphorylation of transcription factor p62tcf by MAP kinase stimulates ternary complex formation at c-fos promoter. // Nature. 1992. V. 358. P. 414-417.

95. Gliniak B.C., Rohrschneider L.R. Expression of the M-CSF receptor is controlled posttranscriptionally by the dominant actions of GM-CSF or Multi-CSF. // Cell. 1990. V. 63. P. 1073-1083.

96. Grandori C., Mac J., Siebelt F., Ayer D., and Eisenman R. Myc-Max heterodimers activate a DEAD box gene and interact with multiple E box-related sites in vivo. И EMBO J. 1996. V. 15. P. 4344-4357.

97. Gradnoli C., et al Maturity-onset diabetes of the young due to a mutation in the hepatocyte nuclear factor-1 a gene. // Diabetes. 1997. V. 46. P. 1648-51.

98. Grandori C., and Eisenman R. Мус target genes. // Trends. Biochem. Sci. 1997. V. 22. P. 177-182.

99. Gu Z., Hilier L., Kwok P. Single nucleotide polymorphism hunting in cyberspace. // Hum. Mutat. 1998. V. 12(4). P. 221-225.

100. Guldberg P., Henrikscn K., Guttler F. Molecular analysis of phenylketonuria in Dermark: 99% of the mutations detected by denaturing gradient gel electrophoresis. // Genomics. 1993. V. 17. P. 141-146.

101. Gusella G., Auroldi E., Espinoza-Delgado I., and Varesio L. Lipopolysaccharide, but not INF-y, down-regulares c-fms mRNA protooncogene expression in murine macrophages. //J. Immunol. 1990. V. 144. P. 3574-80.

102. Gutman A., and Wasylyk B. The collagenase gene promoter contains a TP A and oncogene-responsive unit encompassing the PEA3 and AP-1 bindig sites. // EMBO J. 1990, V. 9. P. 2241-2246.

103. Hacia J.G. Resequencing and mutational analysis using oligonucleotide microarrays. // Nature genetics supplement. 1999. V. 2. P. 42-47.

104. Hall S. A common mutation in the lipoprotein lipase gene promoter, -93T/G, is assosiated with lower plasma triglyceride levels and increased promoter activity in vitro. //Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 1997. V. 17. P. 1969-76.

105. Halushka M. et al Patterns of SNPs in candidate genes for blood-pressure homeostasis. //Nature Genet. 1999. V. 22. P. 239-247.

106. Hamilton G., Lysiak J., Watson A., Lala P. Effects of colony stimulating factor-1 on human extravillous trophoblast growth and invasion. // J. Endocrinol. 1998. V. 159(1). P. 69-77.

107. Hampe A., Shamoon B.M., Gobet M., Sherr C., Galibert F. Nucleotide sequence and structural organization of the human FMS proto-oncogene. // Oncogene Res. 1989. V. 4. P. 9-17.

108. Haskill S., Warren M.K., Becker S., Ladner M.B., Johnson C., Eierman D., Ralph P., Mark D.F. Adherence induces M-CSF gene expression in monocytes. // J. Leukoc. Biol. 1987. V. 42. P. 359-365.

109. Hawes В., Luttrell L., van Biesen Т., and Lefkowitz R. Phosphatidylinositol 3-kinase is an early intermediate in the GPr-mediated mitogen-activated protein kinase signaling pathway. //JBC. 1996. V. 271. P. 12133-136.

110. Hill C., Marais S., John S., Wynne J., Dalton S., and Treisman R. Functional analysis of growth factor-responsive transcription factor complex. // Cell. 1993. V. 73. P. 395-406.

111. Hill C., and Treisman R. Transcriptional regulation by extracellular signals: mechanisms and specificity. //Cell. 1995. V. 80. P. 199-211.

112. Himes S., Tagoh H., Goonetilleke N., Sasmono Т., Oceandy D., Clark R., Bonifer C., and Hume D. A highly conserved c-fms gene intronic element controls macrophage- specific and regulated expression. //J. Leuk. Biol. 2001. V. 70. P. 812-820.

113. Horikawa Y., et al Genetic variation in the gene encoding calpain-10 is associated with type 2 diabetes mellitus. //Nature Genet. 2000. V. 26. P. 163-175.149. http://bioinfo.weizmann.ac.il/cards-bin/carddisp?M-CSFR&search=c-fms&suff=txt

114. Hume D., Monkley S., and Wainwright B. Detection of c-fms protooncogene in early mouse embryos by whole mount in situ hybridization indicates roles for macrophages in tissue remodelling. //British Journal ofHaematology. 1995. V. 90. P. 939-942.

115. Hume D., Yue X., Ross I., Favot P., Lichanska A., and Ostrowski M. Regulation of M-CSF receptor expression. // Mol. Reprod. Dev. 1997. V. 46(1). P. 52-53.

116. Inaba Т., Yamada N., Gotoda Т., Shimano H., Shimada M., Komomura K., Kadowaki

117. Т., Motoyoshi K., Morisaki N. Expression of M-CSF receptor encoded by c-fms on smoth muscle cells derived from arteriosclerotic lesion. // J. Biol. Chem. 1992. V. 267. P. 56935699.

118. Insogna K., Tanaka S., Neff L., Home W., Levy J., and Baron R. Role of c-src in cellular events associated with colony-stimulating factor-1-induced spreading in osteoclasts. // Mol. Reprod. Dev. 1997. V. 46. P. 104-108.

119. Irizarry K, Kustanovich V, Li C, Brown N, Nelson S, Wong W, Lee CJ. Genome-wideanalysis of single-nucleotide polymorphisms in human expressed sequences. // Nature Genet. 2000. V. 26(2). P. 233-6.

120. Jackowski S., Xu X., and Rock C. Phosphatidylcholine signaling in response to M-CSF. // Mol. Reprod. Dev. 1997. V. 46(1). P. 24-30.

121. Janknecht R., Ernst W., Pingoud V., and Nordheim A. Activation of ternary complex factor Elk-1 by MAP kinases.//EMBО J. 1993. V. 12. P. 5097-5104.

122. Jansen-Durr P., Meichle A., Steiner P., Pagano M., Finke K., Botz J., Wessbecher J., Draetta G., and Eilers M. Differential modulation of cyclin gene expression by MYC. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. V. 90. P. 3685-3689.

123. Jokhi P., Chumbley G., King A., Gardner L., Loke Y. Expression of the colonystimulating factor -1 receptor (c-fms product) by cells at the human uteroplacental interface. //Lab. Invest. 1993. V. 68(3). P. 308-20.

124. Jorde L.B. Linkage disequilibrium and the search for complex disease genes. // Genome Res. 2000. V. 10. P. 1435-44.

125. Judson R., Stephens J., Windemuth A. The predictive power of haplotypes in clinical response. // Pharmacogenomics. 2000. V. 1(1). P. 15-26.

126. Kanzaki H., Yui J., Iwai M., Imai KM Kariya M., Hatayama H., Mori Т., Guilbert L.J., Wegmann T.G. The expression and localization of mRNA for colony-stimulating factor (M-CSF) in human term placenta. // Hum. Reprod. 1992. V. 7. P. 563-567.

127. Kawasaki E., Ladner M., Wang A., Van Arsdell J., Warren M., Coyne M., Schweickart V. Molecular cloning of a complementary DNA encoding human macrophage colony-stimulating factor (M-CSF). // Science. 1985. V. 230. P. 291-295.

128. Kel O.V., Romaschenko A.G., Kel A.E., Wingender E., Kolchanov N.A. A compilation of composite regulatory elements affecting gene transcription in vertebrates. // Nucl. Acids Res. 1995. V. 23. P. 4097-4103.

129. Kelley Т., Graham M., Doseflf A., Pomerantz R., Law S., Ostrowski M., Franke Т., and Marsh C. Macrophage colony-stimulating factor promotes cell survival through Akt/protein kinase B. // J. Biol. Chem. 1999. V. 274(37). P. 26393-8.

130. Khight J., Udalova I., Hill A., Greenwood В., Peshu N. Marsh K., and Kwiatkowski D. A polymorphism that affects OCT-1 binding to the TNF promoter region is associated with severe malaria. // Nature Genetics. 1999. V. 22. P. 145-150.

131. Kodama H., Nose M., Niida S., Ohagame Y., Abe M., Kumagawa M., Suda T. Essential role of macrophage colony-stimulating factor in the osteoclast differentiation supported by stromal cells. //J. ExP. Med. 1991 V. 173. P. 1291-1294.

132. Kodaira M., Satoh C., Hiyama K., Toyama K. Lack of effect of atomic bomb radiation on genetic instability of tandem-repetitive elements in human germ cells. // Am. J. Hum. Genet. 1995. V. 57(6). P. 1263-6.

133. Kodama K., Mabuchi K., Shigematsu I. A long-term cohort study of the cohort study of the atomic-bomb survivors. // J. Epidemiol. 1996. V. 6(3). P. 95-105.

134. Kolch W., Kotwaliwale A., Vass K. and Janosch P. The role of Raf kinases in malignant transformation. // Expert Reviews in Molecular Medicine. 2002: http://www.expertreviews.org/

135. Kolpakov FA, Ananko EA, Kolesov GB, Kolchanov NA. GeneNet: a gene networkdatabase and its automated visualization.// Bioinformatics. 1998. V. 14(6). P. 529-37.

136. Kossenko M. Cancer mortality in the exposed population of the Techa River area. // World Health Stat. 1996. V. 49(1). P. 17-21.fr 178. Krawczak M. Informativity assessment for biallelic single nucleotide polymorphisms. //

137. Electrophoresis. 1999. V. 20(8). P. 1676-81.

138. Kruglyak L. Prospects for whole-genome linkage disequilibrium mapping of common disease genes. //Nature Genet 1999. V. 22. P. 139-144.

139. Latinkic B.V., Zeremski M., Lau L.F. Elk-1 can recruit SRF to form a ternary complex upon the serum response element. // Nucl. Acids Res. 1996. V. 27. P. 1345-1351.

140. Le Moine, O., P. Stordeur, L. Schandenii, A. Marchant, D. de Groote, M. Goldman, J. Devinre. 1996. Adenosine enhances IL-10 secretion by human monocytes. HI. Immunol. 1996. V. 156. P. 4408-4412.

141. Lee A., Nienhus A. Mechanism of kinase activation in the receptor for colony-stimulating factor-1. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. V. 87. P. 7270-7274.

142. Lee A. Synergistic activation of mitogen-activated protein kinase by cAMP and growth factors opposes cAMP's growth-inhibitory effects. // Blood. 1999. V. 93(2). P. 537-553.

143. Lee A., Nambirajan S. and Moffat J. M-CSF-activates MAPK-dependent and p53-independent pathways to induce growth arrest of hormone-dependent human breast cancer cells. // Oncogene. 1999. V. 18. P. 7475-92.

144. Lee A. and States D. Both Src-dependent and independent mechanisms mediatephosphatidylinositol 3-kinase regulation of colony-stimulating factor 1 activated mitogen-activated protein kinase in myeloid progenitors. // MCB. 2000. V. 20. P. 677998.

145. Lee P., Wang Y., Dominguez M., Yeung Y., Murphy M., Bowtell D. And Stanley E. The Cbl protooncoprotein stimulates M-CSF receptor multiubiquitination and endocytosis, and attenuates macrophage proliferation. // EMBO J. 1999. V. 18(13). P. 3616-3628.

146. Li Y., and Chen B. Induction of macrophage colony-stimulating factor receptor up-regulation in Thp-1 human leukemia cells is dependent on the activation of c-fyn protein tyrosine kinase. // Leuk. Res. 1997. V. 21(6). P. 539-547.

147. Lin H., and Gordon S. Secretion of plasminogen activator by bone marrow-derived mononuclear phagocytes and its enchancement by colony-stimulating factor. // J. ExP. Med. 1979. V. 150. P. 231-245.

148. Lioubin M.N., Myles G.M., Carlberg K., Bowtell D., Rohrschneider L.R. She, Grb2, Sosl, and a 150-kilodaIton tyrosine-phosphorylated protein form complexes with Fms in hematopoetic cells. //Mol. Cell. Biol. 1994. V. 14. P. 5682-5691.

149. Liu Q., Shalby F., Jones J., Bouchard D., Dumon T. The SH2-cotaining inisitol polyphosphate 5-phosphatase, Ship, is expressed during hematopoeiesis and spermatogenesis.//Blood. 1998. V. 91. P. 2753-59.

150. Long A., Langley Ch. The power of association studies to detect the contribution of candidate genetic loci to variation in complex traits. // Genome Research. 1999. V. 9(8). P. 720-731.

151. Lu L., Osmond D. Regulation of cell survival during В lymphopoiesis in mouse bone marrow: enhanced pre-B-cell apoptosis in M-CSF-deficient op/op mutant mice. // Exp. Hematol. 2001. V. 29(5). P. 596-601.

152. Luderus M.E., de Graaf A., Mattia E., den Blauwen J.L., Grande M.A., de Jong L., van Driel R. Binding of matrix attachment regions to lamin B. // Cell. 1992. V. 70. P. 949959.

153. Mai S., and Jalava A. c-Myc binds to 5' flanking sequence motifs of the dihydrofolate reductase gene in cellular extracts: role in proliferation. // Nucleic Acids Res, 1994, V. 22. P. 2264-2273.

154. Marco S., Hel Z., Lachance C., Furneaux H., and Radzioch D. Polymorphism in the 3'-untranslated region of TNFa mRNA impairs binding of the posttranscriptional regulatory protein HuR to TNFa mRNA. // NAR. 2001. V. 29(4). P. 863-871.

155. Martinson J., Chapman N., Rees D., Lui Y., Clegg J. Global distribution of the CCR5 gene32-basepair deletion. //Nat. Genet. 1997. V. 16. P. 100-103.

156. McCarthy J., Hilfiker R. The use of single-nucleotide polymorphism maps in pharmacogenomics. // Nat. Biotechnol. 2000.V. 18(5). P. 505-508.

157. McGlynn H., Baker A., and Padua R. Biological consequences of a point mutation at codon 969 of the FMS gene. // Leuk. Res. 1998. V. 22(4). P. 365-72.

158. Merryweather-Clarke A., Pointon J., Shearman J., Robson K. Global prevalence of putative haemochromatosis mutation.//J. Med. Genet. 1997. V. 34. P. 275-278.

159. Mischak H, Seitz T, Janosch P, Eulitz M, Steen H, Schellerer M, Philipp A, Kolch W. Negative regulation of Raf-1 by phosphorylation of serine 621. // Mol. Cell. Biol. 1996. V. 16. P. 5409-12.

160. Mokrov Y, Glagolenko Y, Napier B. Reconstruction of radionuclide contamination of the Techa River caused by liquid waste discharge from radiochemical production at the Mayak Production Association. //Health Phys. 2000. V. 79(1). P. 15-23.

161. Moodie S., Willumsen В., Weber M., and Wolfman A. Complexes of Ras-GTP with Raf-1 and mitogen-activated protein kinase. // Science. 1993. V. 260. P. 1658-1661.

162. Moore M.A.S. Macrophage colony-stimulating factor. // In "Colony-Stimulating Factors: Mol. and Cell Biol." Second Ed., Ed. by J.M. Garland, P. J. Quesenberry, D.J. Hitton, 1994, ch.13. P. 255-289.

163. Myles G.M., Brandt C.S., Carlberg K., Rohrschneider L.R. Tyrosine 569 in the c-Fms juxtamembrane domain is essential for kinase activity and macrophage colony-stimulating factor-dependent internalization. //Mol. Cell. Biol.1994. V. 14. P. 4843-4854.

164. Nakamura I., Lipfert L., Rodan G., and Duong L. Convergence of avp3 intergin and macrophage colony stimulating factor -mediated signals on phospholipase Cy in precision osteoclasts. //Cell Biology. 2001. V. 152. P. 361-374.

165. Nakamura Т., Datta R., Kharbanda S., Kufe D. Regulation of jun and fos gene expression in human monocytes by the macrophage colony- stimulating factor. // Cell Growth differ. 1991.V. 2. P. 267-272.

166. Neel J., Satoh C., Hamilton H., Otake M.f Goriki K., Kadeoka Т., Fujita M., Neriishi S., Asakawa J. Search for mutations affecting protein structure in children of atomic bomb survivors: pleliminary report. // PNAS. 1980. V. 77(7). P. 4221-5.

167. Neel J., Saton C., Goriki K., Asakawa J., Fujita M., Takahashi N., Kadeoka Т., Hazama R. Search for mutations altering protein charge and/or function in clildren of atomic bomb survivors: final report. // Am. J. Hum. Genet .1988. V. 42(5). P. 663-676.

168. Neet K. and Hunter T. Vertebrate non-receptor protein-tyrosine kinase families. // Genes to Cells. 1996. V. 1. P. 147-169.

169. Novak U., Nice E., Hamilton J., and Paradiso L. Requirement for Y706 of the murine (or Y 708 of the human) M-CSF receptor for STAT1 activation in response to M-CSF. // Oncogene. 1996. V13. P. 2607-13.

170. Novak U., Nicholson S., Bourette R, Rohrschneider L., Alexander W., Paradiso L. M-CSF and interferon-gamma act synergistically to promote differentiation of FDC-P1 cells into macrophages.//Growth Factors. 1998. V. 15(3). P. 159-71.

171. Olavesen M., Hampe J., Mirza M., Saiz R., Lewis C., Bridjer S., Teare D et al. Analysis of single-nucleotide polymorphisms in the interleukin-4 receptor gene for association with inflammatory bowel disease. // Immunogenetics 2000. V. 51. P. 1-7.

172. Opstelten R.J.G., Clement J.M.E., Wankoi F. Direct repeats at nuclear matrix-associated DNA regions and their putative control function in the replicating eukaryotic genome // Chromosoma. 1989. V. 98. P. 422-427.

173. Orita M., Iwahana H., Kanazawa H., Hayashi K., Sekiya T. Detection of polymorphisms of human DNA by gel electrophoresis as single-strand conformational polymorphism. // PNAS. 1989. V. 86. P. 2766-2770.

174. Ota J., Sato K., Kimura F., Wakimoto N., Nakamura Y., Nagata N., Yamada M., Shimamura S., and Motoyoshi K. Association of Cbl with Fins and p85 in response to macrophage colony stimulatinf factor. // FEBS Lett. 2000. V. 466(1). P. 96-100.

175. Pampfer S., Daiter E., Barad D. Pollard J. Expression of colony-stimulating factor receptor (the c-fms proto-oncogene product) in the human uterus and placenta. // Biol. Reprod. 1992. V. 46. P. 48-57.

176. Pankov R., Baird S., Ralph P., and Nakoinz I. Functional macrophage cell lines transformed by Abelson leukemia virus. //Cell. 1978. V. 15. P. 261-267.

177. Pawson T. Protein modules and signaling networks.//Nature. 1995. V. 373. P. 573-579.

178. Perez-Roger I., Kim S., Griffiths В., Land S., Land H. Cyclins D1 and D2 mediate Myc-induced proliferation via sequestration of p27Kip 1 и p21cip 1 . // EMBO J. 1999. V. 18. P. 5310-20.

179. Picoult-Newberg L., et al Mining SNPs from EST databases. // Genome Res. 1999. V. 9. P. 167-174.

180. Pollard J. Role of colony-stimulating factor-1 in reproduction and development. // Mol. Reprod. Dev. 1997. V. 46. P. 54-61.

181. Reedijk M., Liu X., Pawson T. Interactions of Phosphatidylinositol kinase, GTPase-activating protein (GAP), and GAP-associated proteins with the colony-stimulating factor 1 receptor. //Mol. Cell. Biol. 1990. V. 10. P. 5601-5608.

182. Rettenmier С W, Roussel M F, Sherr С J. 1988. The colony-stimulating factor-1 (M-CSF) receptor (c-fms proto-oncogene product) and its ligand //J. Cell. Sci. Suppl. 1988. V. 9. P. 27-30.

183. Ridge S., Worwood M., Oscier D., Padua R. FMS mutations in myelodysplastic, leukemic, and normal subjects. //PNAS. 1990.V. 87. P. 1377-1380.

184. Riley J., Allan C., Lai E., Roses A. The use of single nucleotide polymorphism in the isolation of common disease genes. // Pharmacogenomics. 2000. V. 1(1). P. 39-47.

185. Risch N.J. Searching for genetic determinants in the new millennium. // Nature. 2000. V405. P. 847-56.

186. Roberts W., Shapiro L., Ashmun R., Look A. Transcription of the human colony-stimulating factor-1 receptor gene is regulated by separate tissue-specific promoters // Blood. 1992. V. 79. P. 586-593.

187. Robinson M, Cobb MH. Mitogen-activated protein kinase pathways. // Curr. Opin. Cell. Biol. 1997. V. 9. P. 180-183.

188. Rock C., Cleveland J., and Jackowski S. Macrophage growth arrest by cyclic AMP defines a distinct checkpoint in the Mid-Gl stage of the cell cycle and overrides constitutive c-myc expression. //Moll. Cell. Biol. 1992. V. 12(5). P. 2351-2358.

189. Rohrschneider L.R., Rothwell V. M., Nicola N.A. Transformation of murine fibroblasts by a retrovirus encoding the murine fibroblasts the murine c-fms proto-oncogene. // Oncogene. 1989. V. 4. P. 1015-1022.

190. Rohrschneider L.R., Bourette R.P., Lioubin M.N., Algate P. A., Myles G.M., Carlberg K. Growth and differentiation signals regulated by the M-CSF receptor. // Mol. Reprod. Dev. 1997. V. 46. P. 96-103.

191. Rohrschneider L., Fuller J., Wolf I., Liu Y., and Lucas D. Structure, function, and biology of SHIP proteins. // Genes and Development. 2000. V. 14. P. 505-520.

192. Romaschenko A.G., Voevoda M.I. Population aspects of genome medicine. // IV ISTC Scieeentific advisory committee seminar on "Basic science in ISTC activities". Akademgorodok, Novosibirsk. 23-27 April, 2001. P. 241-247.

193. Ross I., Yue X., Ostrowski M., Hume D. Interaction between PU.1 and another Ets family transcription factor promotes macrophage-specific basal transcription initiation. // JBC. 1998. V. 273(12). P. 6662-69.

194. Ross J. mRNA stability in mammalian cells. // Microbiol. Reviewies 1995. V. 59(3). P. 423-450.

195. Roussel M., Dull Т., Rettenmier C., Ralph P., Ullrich A., Sherr C. Transformingpotential of the c-fms protooncogene. // Nature. 1987. V. 325. P. 549-552.

196. Roussel M., Downing J.R., Rettenmier C.W., Sherr C.J. A point mutation in the extracellular domain of the human M-CSF receptor (c-fms proto-oncogene product) activates its transforming potential. // Cell. 1988. V. 55. P. 979-988.

197. Roussel M., Clevang J., Shurleff S., and Sherr С. Мус rescue of a mutant M-CSFreceptor impaired in mitogenic signaling. //Nature. 1991. V. 353. P. 361-363.

198. Roussel M. Signal transduction by the macrophage-colony-stimulating factor receptor. // J. Cell. Sci. Suppl. 1994. V. 18. P. 105-108.

199. Roussel M., Theodoras A., Pagano M., and Serr C. Rescue of defective mitogenic signaling by D-type cyclins. // PNAS. 1995. V. 92(15). P. 6837-41.

200. Roussel M. Regulation of cell cycle entry and G1 progression by M-CSF. // Mol. Reprod. Dev. 1997. V. 46(1). P. 11-18.

201. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1998. V. 253. P. 300-304.

202. Rowley P., Farley В., Giuliano R., LaBella S., and James F. Induction of the FMS proto-oncogene product in HL-60 cells by vitamin D: a flow cytometric analysis. // Leukemia Research. 1992. V. 16(4). P. 403-410.

203. Russel L.B. Dominant lethal induced at a highly sensitive stage in mouse oogenesis. // Anat. Rec. 1956. V. 125. N.3. P. 647-653.

204. Sankaranarayanan K. Estimation of genetic risks of exposure to ionizing radiation: status• in the year 2000. // Радиац. биология. Радиоэкология. 2000. Т. 40. № 5. С. 621-626.

205. Sapi Е., Flick М.В., Kacinski В.М. The first intron of human c-fms proto-oncogene contains a processed pseudogene (RPL7P) for ribosomal protein L7. // Genomics. 1994. V. 22. P. 641-645.

206. Sapi E., Flick M., Gilmore-Hebert M., Rodov S., and Kacinski B. Transcriptional regulation of the c-fms (M-CSFR) proto-oncogene in human breast carcinoma cells by glucocorticoids. //Oncogene. 1995. V. 10. P. 529-542.

207. Sapi E., Kacinski B.M. The role of M-CSF in normal and neoplastic breast physiology. // Proc. of the Soc. for ExP. Biol. Med. 1999. V. 220. P. 1-8.• 265. Sariban E., Immamura K., Sherman M., Rothwell V., Pantazis P and Kufe D.

208. Downregulation of c-fms gene expression in human monocytes treated with phorbol esters and colony-stimulating factor 1. //Blood. 1989. V. 74. P. 123-129.

209. Saton C., Takahashi N., Asakawa J., Hiyama K., Kodaira M. Variations among Japanese of the factor IX gene (F9) detected by PCR-denaturing gradient gel elecrtophoresis. // Am. J. Hum. Genet. 1993. V. 52(1). P. 167-175.

210. Scheid M., and Duronio V. Phosphatidylinositol 3-OH kinase activity is not required for activation of mitogen-activated protein kinase by cytokines. // JBC. 1996. V. 271. P. 18134-39.

211. Scholtz C., et al Mutation -59C/T in repeat 2 of the LDL receptor promoter: reductionin transcriptional activity and possible allelic interaction in a South African family withfamilial hypercholesterolemia. //Hum. Mol. Genet. 1999. V. 8. P. 2025-30.

212. Technical Report CBIL-TR-1997-lOOI-vO.O, of the Computational Biology and Informatics Laboratory, School of Medicine, University of Pennsylvania, 1997. TESS, URL: http://www.cbil.upenn.edu/tess.

213. Schwartihg A., Moore K., Wada Т., Tesch G., Yoon H., Relley V. R. INF-gamma limits macrophage expansion in MLR-Fas/lpr autoimmune interstitial nephritis: a negative regulatory pathway. //J. Immunol. 1998. V. 160. P. 4074-4081.

214. Scott E., Simon M., Anastasi J. and Singh H. Requirement of transcription PU.l in thedevelopment of multiple hematopoietic lineages. // Science. 1994. V. 265. P. 1573-76.

215. Sharba P., Nencioni L., Labardi D., Rovida E., Caciagli В., Cipolleschi M. IL-2 downmodulates the macrophage colony-stimulating factor receptor in murine macrophages. // Cytokine. 1996. V. 8(6). P. 488-94.

216. Sherr C.J. Colony- stimulating factor-1 receptor. // Blood. 1990. V. 75. P. 1-12.

217. Sherr C.J. The colony-stimulating factor 1 receptor: pleiotropy of signal-response coupling. // Lymph. Res. 1990. V. 4. P. 543-548.

218. Speck N.A. Core binding factor and its role in normal hematopoietic development. //

219. Curr. Opin. Hematol. 2001. V. 8. P. 192-196. 280. Spencer C., and Groudine M. Transcription elongation and eukaryotic gene regulation. // Oncogene. 1990. V. 10. P. 777-785.

220. Stacey К., Fowles L., Colman M., Ostrowski M., and Hume D. Regulation of urokinase-type plasminogen activator gene trascription by macrophage colony-stimulating factor. // Mol. Cell. Biol. 1995. V. 15. P. 3430-3441.

221. Stanley E.R., Berg K.L., Einstein D.B., Lee P. S., Pixley F.J., Wang Y., Yeung Y.G. Biology and action of colony-stimulating factor 1. // Mol. Reprod. Dev. 1997, V. 46. P. 410.

222. Stein J., Borzillo G.V., Rettenmier C.W. Direct stimulation of cells expressing receptors for macrophage colony-stimulating factor (M-CSF) by a plasma membrane-bound precursor of human M-CSF. //Blood. 1990. V. 76. P. 1308-1314.

223. Stice L., Vaziri C., and Faller D. Regulation of platelet-derived growth factor signaling by activated p21Ras. // Front. Biosci. 1999. V. 4. P. 72-86.

224. Sudo Т., Nishikawa S., Ogawa M., Kataoka H., Ohno N., Izawa A., Hayashi S., and Nishikawa S. Functional hieraechy of c-kit and c-fms in intramarrow production of CFU-M. //Oncogene. 1995. V. 11. P. 2469-76.

225. Sutor S., Vroman E., Armstrong E., Abraham R., and Karnitz L. A phosphatidylinositol 3-kinase-dependent pathway that differentially regulates c-raf and A-raf. // JBC. 1999. V. 274. P. 7002-10.

226. Suzuki N., Yamada Т., Matsuoka K., Hiraoka N., Iwamaru Y., and Hata J. Functional expressions of fms and M-CSF during trophoectodermal differentiation of human embrional carcinoma cells. // Placenta. 1999. V. 20 (2-3). P. 203-211.

227. Takeda S., Soutter W., Dibb N. and White J. Biological activity of the receptor for macrophage colony-stimulating factor in the human endometrial cancer cell line, Ishikawa. // British Journal of Cancer. 1996. V. 73. P. 615-619.

228. Tan F., Wang N., Kuwana M., Chakraborty R., Bona C., Milewicz D., Arnett F. Association of fibrillin 1 SNP-haplotypes with systemic sclerosis in Choctaw and Japanese populations. //Arthriric. Rheum. 2001. V. 44(4). P. 893-901.

229. Terwilliger J., Weiss K. Linkage disequilibrium mapping of complex disease: fantasy or reality? // Curr. Opin. Biotech. 1998. V. 9. P. 578-594.

230. The International SNP Map Working Group. A map of human genome sequence variation containing 1.42 million single nucleotide polymorphisms. // Nature. 2001. V. 15. P. 928-933.

231. Thomas D., Patterson S., Bradshaw R. Src homologous and collagen (She) protein binds to F-actin and translocates to the cytoskeleton upon nerve growth factor stimulation in PC12 cells. //J. Biol. Chem. 1995. V. 270(48). P. 28924-31.

232. Vairo G., and Hamilton J. Activation and proliferation of signals in murine macrophages: stimulation of Na+, K+-ATPase activity by hemopoetic growth factors and other agents. III. Cell. Physiol. 1988. V. 134. P. 13-24.

233. Vairo G., Arguriou S., Bordum A-M., Gonda Т., Gragoe E., and Hamilton J. Na7H+ exchange involvement in colony-stimulating factor-1 stimulated macrophage proliferation. // J. Biol. Chem .1990. V. 265. P. 2692-2701.

234. Vairo G., Arguriou S., Bordun A., Whitty G., and Hamilton J. Inhibition of the signaling pathways for macrophage proliferation by cAMP. // J. Biol. Chem. 1990. V. 265. P. 26922701.

235. Vairo G., Hamilton J. Signaling through CSF receptors. // Immunol. Today. 1991. V. 12. P. 362-369.

236. Van der Geer P., Hunter T. Mutation of Tyr697, a GRB2-binding site, and Tyr721, a PI 3-kinase binding site, abrogates signal transduction by the murine M-CSF receptor expressed in Rat-2 fibroblasts. //EMBO. 1993, V. 12. P. 5161-5172.

237. Verbeek J., Roebroek A., Van den Ouweland A., Bloemers H., and Van de Ven W.

238. Human c-fms proto-oncogene: comparative analysis with an abnormal allele. // Mol. Cell.

239. Biol. 1985. V. 5. P. 422-426.293.294.295.296.

240. Visvader J., Verma I.M. Differential transcription of exon 1 of the Human c-fms gene in placental trophoblastsand monocytes. //Mol. Cell. Biol.1989. V. 9. P. 1336-1341.

241. Wang J., Griffin J., Rambaldi A., Chen Z., Mantovani A. Induction of monocyte migration by recombinant macrophage colony stimulating factor. // J. Immunol. 1988. V. 141. P. 575-579.

242. Wang Y., Berezovska O., Fedoroff S. Expression of colony stimulating factor-1 receptor (M-CSFR) by CNS neurons in mice. //J. Neurosci. Res. 1999. V. 57(5). P. 616-32.

243. Wang Y., Yeung Y., and Stanley E. M-CSF stimulated multiubiquitination of the M-CSF receptor and Cbl follows their tyrosine phosphorylation and association with other signaling proteins.//J. Cell. Biochem. 1999. V. 72(1). P. 119-134.

244. Wang Z., Myles G.M., Brandt C.S., Lioubin M.N., Rohrschneider L. Identification of the ligand-binding regions in the macrophage colony-stimulating factor receptor extracellular domain. //Mol. Cell. Biol. 1993. V. 13. P. 5348-5359.

245. Warren M., Ralph P. Macrophage growth factor M-CSF stimulates human monocyte production of interferon, tumor necrosis factor, and colony-stimulating activity. // J. Immunol. 1986. V. 137. P. 2282-85.

246. Wasylyk C., Flores P., Gutman A., and Wasylyk В. PEA3 is a nuclear target for transcription activation by non-nuclear oncogenes. // EMBO J. 1989. V. 8. P. 3371-3378.

247. Weber В., Horiguchi J., Luebbers R., Sherman M., and Kufe D. Posttranscriptional stabilization of c-fms mRNA by a labile protein during human monocytic differentiation. // Mol. Cell. Biol. 1989. V. 9. P. 768-775.

248. Weinberg R.A. The retinoblastoma protein and cell cycle control. // Cell. 1995. V. 81. P. 323-330.

249. Weiss K., Terwilliger J. How many diseases does it take to map a gene with SNPs? // Nature America Inc. http://genetics.nature.com

250. Weiss K.M. In search of human variation. // Genome Res. 1998. V. 8(7). P. 691-697.

251. Wennstrom S., and Downward J. Role of phosphatidylinositol 3-kinase in activation of Ras and mitogen-activated protein kinase by epidermal growth factor. // Mol. Cell. Biol. 1999. V. 19. P. 4279-88.

252. Wetters Т., Hawkins A., Roussel M., Sherr J. Random mutagenesis of M-CSF receptor (FMS) reveals multiple sites for activating mutations within the extracellular domain. // EMBO J. 1992. V. 11. P. 551-557.

253. Wiktor-Jedrzejczak W., Bartocci A., Ferrantc A.W., Ahmed-Ansari J.A., Sell K.W., Pollard J.W., Stanley E.R. Total absence of colony-stimulating factor 1 in the macrophage-deficient osteopetrotic (op-op) mouse. // PNAS. 1990. V. 87. P. 4828-4832.

254. Wiktor-Jedrzejczak W., Ratajczak M., Plasznik A., Sell K., Ahmed-Ansari A. and Ostertag W. M-CSF deficiency in the op/op mouse has differential effects on macrophage populations and differentiation stages. // Exp. Hematol. 1992. V. 20. P. 1004-10.

255. Wilks A.F. Protein tyrosine kinase growth factor receptors and their ligands in development, differentiation and cancer. // Adv. Cancer Res. 1993. V. 60. P. 43-63.

256. Williams S.C., Du Y., Schwartz R.S., Weiler S.R., Ortiz M., Keller J.R., Johnson P. F. C/EBPepsilon is a myeloid activator of cytokine, chemokine and macrophage colony-stimulating factor receptor genes. HI. Biol. Chem. 1998. V. 273. P. 13493-13501.

257. Witmer-Pack M., Hughes D., Schuler G., Lawson L., McWilliam A., Inaba K., Steinman R., and Gordon S. Identification of macrophages and dendritic cells in the osteopetrotic (op/op) mouse. //J. Cell. Sci. 1993. V. 104. P. 1021-29.

258. Wood G„ Hausmann E., and Choudhuri R. Relative role of M-CSF, MCP-l/JE, and RANTES in macrophage recruitment during successful pregnancy. // Mol. Cell. Dev. 1997. V. 46. P. 62-70.

259. Woolford J., McAuliffe A., Rohrschneider L.R. Activation of the feline c-fms proto-oncogene: multiple alterations are required to generate a fully transformed phenotype. I I Cell. 1988. V. 55. P. 965-977.

260. Wu H., Houlton K., Horvai A., Parik S., Glass Ch.K. Combinatorial interactions between AP-1 and ets domain proteins contribute to the developmental regulation of the macfrophage scavenger receptor gene.//Mol. Cell. Biol. 1994. V. 14. P. 2129-2139.

261. Xu D., Guilhot S., and Galibert F. Restriction fragment length polymorphism of the human c-fms gene// PNAS. 1985. V. 82. P. 2862-2865.

262. Yarden Y., Ullrich A. Growth factor receptor tyrosine kinases. // Ann. ReV. Biochem. 1988. V. 57. P. 443-478.

263. Yeung Y., Wang Y., Einstein D., Stanley E. Colony-stimulating factor-1 stimulates the formation of multimeric cytosolic complexes of signaling proteins and cytoskeletal components in macrophages. //J. Biol. Chem. 1998.V. 273(27). P. 17128-37.

264. Yoshida H., Hayashi S.-I., Kunisada T. The mirine mutation "osteopetrosis" (op) is a mutation in the coding region of the macrophage colony stimulating factor gene. // Nature. 1990. V. 345. P. 442-444.

265. Zaykin D.V., Pudovkin A.I. 2 programs to estimate significance of CHI-2 values using pseudoprobability tests // J.Heredity. 1993. V. 84. P152-156.

266. Zhang D., Hetheringston C.J., Chen H., Tenen D.G. The macrophage transcription factor PU.l directs tissue-specific expression of the macrophage colony-stimulating factor receptor. //Mol. Cell. Biol. 1994b. V. 14. P. 373-381.

267. Zhang X., Settleman J., Kyriakis J., Takeuchi-Suzuki E., Elledge S., Marshall M., Bruder J., Rapp U., and Avruch J. Normal and oncogenic p21ras proteins bind to the ammo-terminal regulatory domain of c-Raf-1. // Nature. 1993. V. 364. P. 308-313.

268. Zimmermann S., Rommel C., Ziogas A., Lovric J., Moelling K., and Radziwill G. MEK1 mediates a positive feedback on Raf-1 activity indepently of Ras and Src. // Oncogene. 1997.V. 15. P. 1503-1511.

269. Zimmermann S., and Moelling K. Phosphorylation and regulation of Raf by Akt (protein kinaseB). //Science. 1999. V. 286. P. 1741-44.