Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Аллельные варианты генов-кандидатов подверженности туберкулезу у русского населения Западной Сибири

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Аллельные варианты генов-кандидатов подверженности туберкулезу у русского населения Западной Сибири"

На правах рукописи

КОЛОКОЛОВА

ОЛЬГА ВАЛЕНТИНОВНА

АЛЛЕЛЬНЫЕ ВАРИАНТЫ ГЕНОВ-КАНДИДАТОВ ПОДВЕРЖЕННОСТИ ТУБЕРКУЛЕЗУ У РУССКОГО НАСЕЛЕНИЯ ЗАПАДНОЙ СИБИРИ

03 00 15 - генетика 14 00 26 - фтизиатрия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Томск - 2005

Работа выполнена в ГОУ ВПО Сибирский государственный медицинский университет Росздрава и в ГУ НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН, г. Томск

Научные руководители:

академик РАМН, профессор Пузырев Валерий Павлович

член-корреспондент РАМН, профессор

Стрелис Айвар Карлович

Официальные оппоненты доктор медицинских наук,

профессор

Назаренко Людмила Павловна

кандидат медицинских наук Шарабурова Ольга Егоровна

Ведущая организация: Новосибирский НИИ туберкулеза Минздравсоцразвития РФ, г Новосибирск

Защита состоится ^ / Я 2005 г в _ час. _ мин на

заседании диссертационного сове& К 001 045 01 при ГУ НИИ медицинской генеаики Томского научного центра СО РАМН по адресу: 634050 г Томск, Набережная р У шайки, 10

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН, г Томск

Автореферат разослан «_»_2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук

Кучер А. Н.

2.eo6~f

ass/ ; Z-f7-?f3<P

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы:

По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) от туберкулеза (ТБ) ежегодно умирают более двух миллионов человек во всем мире В связи с этим в 1993 г. ТБ объявлен всемирной опасностью Несмотря на наметившиеся тенденции к стабилизации и позитивную динамику отдельных показателей, эпидемиологическая ситуация по туберкулезу в Российской Федерации остается сложной [Перельман и др , 2001, Ошпценко, 2003, Ерохин, 2003; Белиловский и др., 2003]. В 27 субъектах РФ уровень заболеваемости значительно выше, чем по стране, причем наибольшие показатели отмечены в Сибирском федеральном округе [Мурашкина и др , 1999, Краснов, 2004] Таким образом, ТБ является одной из самых серьезных медико-социальных проблем здравоохранения, как Томской области, так и в целом России [Перельман, 2003, Стрелис, 2004]

Одним из приоритетных направлений в активном выявлении и профилактике туберкулеза является определение групп риска Формирование этих групп требует методологически правильного подхода, основанного на четком знании факторов, определяющих повышенный риск заболевания [Горбач и др , 2004]

Несомненно, ключевым звеном патогенеза заболевания является проникновение микобакгерий туберкулеза (МБТ) в организм человека Однако нельзя недооценивать роль предрасполагающих факторов, к которым относят возраст больного, сопутствующие заболевания, неблагоприятное влияние факторов внешней среды, а также различные патологические состояния специфического и неспецифического иммунитета, многие из которых генетически детерминированы [Давыдовский, 1962; Апт и др , 1982, Хоменко, 1990] Близнецовые и генетико-эпидемиологические исследования установили важную роль наследственности в развитии туберкулеза [Чуканова и др , 2001, Kallman, Reisner, 1943, Comstock, 1978, Fme, 1981] Большинство инфекционных заболеваний, в том числе и ТБ, относят к мультифакториальной патологии, которая представляет собой результат сложного взаимодействия большого числа генов с разнообразными факторами окружающей среды [Мороз, Торонджадзе, 1977, Березовский и др , 1986]

Достижения в области молекулярной генетики открыли новые перспективы в изучении патогенеза болезней появилась возможность идентифицировать гены, продукты экспрессии которых принимают участие в развитии патологических состояний [Hill, 1999] Такие гены определяются как кандидатные К группе генов-кандидатов туберкулеза относят ген макрофагального белка, ассоциированного с естественной резистентностью (NRAMP1), ген рецептора к витамину D (VDR), ген интерлейкина-lß (IL1B) и его рецепторного антагониста (.IL1KN), ген интерлейкина-12Р и другие [Bellamy, Hill, 1998]

Одним из методов анализа роли генетических факторов в возникновении и развитии распространенных заболеваний является исследование ассоциаций генетических маркеров с заболеваниями [Пузырев, 2000; Collins, 1999, McKusick, 2000] Известно, что у человека гены многих ферментов, рецепторов и других белков характеризуются наличием одного или нескольких структурных полиморфизмов, которые не приводят к значимым изменениям первичной структуры белка, и соответственно, очевидным патологическим последствиям, но

оказывают влияние на функциональную активность кодируемых белков Эти

задолго

специфические для конкретной патологии мар

БИБЛ1

Шз\

БИБЛИОТЕКА !

Cnmpfeiw/, о ' оа т'

до ее клинической манифестации, что может позволить определять группы риска, проводить их мониторирование, обосновывать индивидуальную профилактику и превентивную терапию Таким образом, идентификация генов и их аллелей, участвующих в определении чувствительности или резистентности к туберкулезу, позволит не только глубже проникнуть в фундаментальные механизмы иммунитета и патологии этой инфекции, но и будет способствовать совершенствованию профилактических мероприятий Цель исследования:

Изучить роль полиморфных вариантов генов ЫКАМР1, ЮЯ, 1Ы2В, 1ЫВ и 1ЫШ в возникновении и развитии туберкулеза у русских жителей г. Томска. Задачи исследования:

1 Изучить распространенность и межлокусное взаимодействие полиморфных вариантов гена МЫМР1 (469+140/С, 1)543Ы, С274Т, 1465-850/А), аллельных вариантов генов УОЯ (В/Ь, М), 1Ы2В (АИ88С), 1ЫВ (+3953А1/А2), ИШ (УШ"Б{) у русских г Томска.

2 Оценить частоту встречаемости больных туберкулезом среди родственников больных и здоровых лиц.

3 Провести анализ ассоциаций полиморфизма исследуемых генов с туберкулезом

4 Исследовать влияние изучаемых аллельных вариантов на варьирование патогенетически значимых признаков болезни

5 Провести сравнительный анализ русских г Томска и жителей Тувы по распространенности исследованных генов, гаметическому неравновесию между парами полиморфизмов генов и выявленным ассоциациям

Научная новизна:

Впервые получены сведения о распространенности аллельных вариантов генов NRAMP1, УОЯ, 1Ы2В, 1ЫВ, 1ЬПШ у русских жителей г Томска Проведен межпопуляционный сравнительный анализ генов-кавдидатов туберкулеза у русских и тувинцев, установивший отличия в распределении генотипов и частот аллелей по всем исследованным генетическим маркерам Показано, что структура неравновесия по сцеплению между полиморфизмами гена ЫЯАМР1 идентична у русских и тувинцев Изучено влияние полиморфизма генов-кандидатов туберкулеза на возникновение и развитие различных клинических вариантов заболевания. Впервые выявлены ассоциации полиморфизма +3953А1/А2 гена 1ЫВ с ограниченным деструктивным ТБ легких, УЫТЯ полиморфизма гена 1ЫШ и полиморфизма 274С/Т гена ЫЕАМР1 с распространенной деструктивной формой заболевания, полиморфизма 1465-850/А гена М1АМР1 с первичным туберкулезом и полиморфизма 1188А/С гена 1Ы2В как с распространенным деструктивным туберкулезом легких, так и с первичной по генезу формой патологии. Показана связь полиморфизма генов 1Ы2В, ШАМР1 и УОЯ с патогенетически важными для ТБ качественными и количественными характеристиками патологического процесса объемом поражения ткани легкого, деструктивными изменениями, уровнем палочкоядерных нейтрофилов, а также СОЭ у женщин. Практическая значимость:

Полученные результаты исследования полиморфизма генов-кандидатов туберкулеза представляются важными для формирования представлений о взаимосвязи особенностей генофондных параметров популяции с закономерностями распространения этого инфекционного заболевания, позволяют глубже проникнуть в

фундаментальные механизмы иммунитета и патологии ТБ Сведения о вкладе полиморфизма исследованных генетических маркеров в формирование вариабельности подверженности к этому заболеванию, а также в определение различий клинических проявлений болезни, могут быть использованы при организации профилактических и лечебных мероприятий Полученные данные могут быть полезны в уточнении стратегии формирования групп риска по заболеванию туберкулезом Положения, выносимые на защиту:

1 В нопуляциях человека имеет место специфичность распространения генотипов и аллелей генов-кандидатов туберкулеза №ММР1, УПЯ, ПАВ, 1ЫШ, 1Ы2В, что может составлять основу различной подверженности к заболеванию у представителей разных этнических групп населения.

2 Полиморфизмы генов 1ШАМР1, 1Ы2В, 1ЫВ, 1ЫШ являются структурными элементами наследственной компоненты подверженности к туберкулезу у русских г Томска.

3 Вклад генов ШАМР1, УБР, 1Ь1В, 1Ь1Ш, II, 12В в развитие туберкулеза и изменчивость его клинических проявлений у представителей европеоидного и монголоидного населения Сибири различен

Апробация работы:

Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях кафедры фтизиатрии и пульмонологии ГОУ ВПО Сибирский государственный медицинский университет (2002, 2005), Юбилейной научно-практической конференции с международным участием «Новые технологии во фтизиатрии» (Томск, 2002), VI научной конференции «Генетика человека и патология» (Томск, 2002), Международной конференции «Развитие международного сотрудничества в области изучения инфекционных заболеваний» (Новосибирская обл, 2004), межлабораторном научном семинаре ГУ НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН (Томск, 2002, 2005), V съезде Российского общества медицинских генетиков (Уфа, 2005). Публикации:

По 1еме диссертации опубликовано 12 работ Структура и объем диссертации:

Диссертационная работа изложена на 127 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных результатов и их обсуждения, заключения и вьюодов Данные проиллюстрированы 7 рисунками и 23 таблицами Библиографический список включает 209 литературных источников, из них 97 отечественных и 112 зарубежных.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалом для исследования послужила ДНК русских жителей г Томска Анализ популяциошгой распространенности полиморфизма генов выполнили на материале выборки здоровых жителей города, сформированной для настоящего исследования на основе ДНК-банка НИИ медицинской генетики Основным критерием отбора образцов было отсутствие родства между индивидами В данную выборку вошли лица никогда не болевшие туберкулезом

Изучение патогенетической значимости исследуемых генов проводили на материале выборки больных туберкулезом жителей г Томска и Томской обл и

на материале семейной выборки пробандов, больных туберкулезом Всего было обследовано 304 пациента, из них 99 женщин и 205 мужчин, 42 семьи (109 человек), в том числе 25, зарегистрированных по пробандам - детям в возрасте от 1 года до 15 лет и 17 семей - по взрослым пробандам в возрасте от 17 до 48 лет

Диагноз туберкулеза легких устанавливался на основании данных микроскопии мокроты с обязательным рентгенологическим исследованием легких для определения формы заболевания и распространенности специфического процесса. Всего было изучено 9 полиморфных вариантов 5 генов-кандидатов подверженности туберкулезу 4 полиморфных варианта гена АШАМР1 (469+140/С, 274СЛГ, 1465-85С/А, В543]М), два полиморфизма гена ЪТЖ (В/Ь, ¥/Г), полиморфный вариант +3953А1/А2 гена 1ЫВ, полиморфизм УШИ гена 1ЬШN и полиморфизм 1188А/С гена 1Ы2В (табл. 1). Генотипирование осуществляли с помощью ПДРФ-анализа продуктов полимеразной цепной реакции (ПЦР), используя описанную в литературе структуру праймеров и соответствующие ферменты рестрикции.

Таблица 1.

Характеристика исследованных полиморс 1ИЗМ0В

1 Ген j Полиморфизм Локализация в гене Фермент рестрикции Литература

274С/Т Экзон 3 Мпй Liuetal., 1995

NRAMP1 469+14G/C Интрон4 A pal

1465-85G/A И нтрон 13 Bse Л

D543N Экзон15 Bme 181

IL12B А1188С 3-UTR Taql Hall et al., 2000

VDR B/b 3' Рей Wilkinson et al., 2000

F/f 5' Fold

IL1B +3953А1/А2 Экзон 5 Taql Wilkinson et al., 1999

ILUiN VNTR Интрон 2 - Tarlow et al., 1993

Распределение генотипов по исследованным полиморфным локусам проверяли на соответствие равновесию Харди-Вайнберга (РХВ) с помощью точного теста Фишера [Вейр, 1995] Расчеты гаметического неравновесия между парами молекулярно-генетических маркеров проводили по Hill (1974) Для сравнения частот аллелей между различными этническими группами, для анализа ассоциации маркеров исследуемых генов с туберкулезом, а также с качественными патогенетически важными признаками заболевания, использовали критерий X2 с поправкой Йетса на непрерывность. При численностях генотипов менее пяти использовали точный тест Фишера В дополнение к этому об ассоциации разных генотипов (или их комбинаций) с заболеванием судили по величине отношения шансов (odds ratio (OR)) [Pearce, 1993]. На материале семейной выборки больных изучение ассоциаций полиморфизма исследованных генов с туберкулезом проводили с использованием теста на неравновесие при переносе (Transmission/Disequilibrium Test, ТОТ) [Spielman et al., 1993] С целью выявления ассоциации маркеров исследуемых генов с количественными, патогенетически важными признаками туберкулеза, проводили сравнение средних значений уровней метрических показателей у носителей разных генотипов с помощью однофакторного дисперсионного анализа по Фишеру. При наличии зависимости

признака от пола показатели анализировались отдельно в группе мужчин и женщин Корректировка влияния возраста на количественный параметр проводилась по Л ильин (1984) В случае неравных дисперсий испочьзовали непараметрические тесты Манна-Уитни и Краскела-Уоллиса [Лакин, 1990]

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Распространенность полиморфизма генов NRAMP1, IL12B, VDR, ¡LIB, IIJRN среди здоровых лиц (контрольная группа)

В настоящее время во многих популяциях мира достаточно широко исследованы полиморфные варианты гена NRAMP1, и в меньшей степени изучена распространенность аллелей генов VDR, IL12B, IL1B, IL1RN [Р\дко, 2003. Имапп юва и др , 2004, Bellamy et al, 1998, Ryu et al, 2000, Cervino et al, 2000. Gao, 2000. Baghdadi et al., 2004, Liu et al, 2004] Изучение частот аллелей и генотипов генов-кандидатов ТВ у русских жителей г Томска дало возможность сравнить распространенность этих генетических маркеров Русские отличались по частотам аллелей, исследованных полиморфизмов от представителей других этнических групп (рис 1) Так, имели место отличия по полиморфизму 469+14G/C гена NRAMP1 от гамбийцев и китайцев, по полиморфизму D543N гена NRAMP1 от жителей Башкирии, по полиморфизму F/f VDR от индийцев и 1188А/С гена IL 12В от камерунцев. Установленные различия частот аллелей свидетельствуют об этнической специфичности распространения рассматриваемых генов-кандидатов предрасположенности к туберкулезу Возможно, это является причиной дифференциальной подверженности к заболеванию в разных этнических группах

Данное исследование является фрагментом изучения подверженноеги к туберкулезу в различных этнических группах, которое проводится в ГУ НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН под руководством академика РАМН В П Пузырева Полученные в настоящей работе результаты анализа роли генов-кандидатов в возникновении и развитии туберкулеза сравнивались с таковыми у тувинцев Исследование популяции Тувы выполнено научными сотрудниками к м н А А Рудко (ГУ НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН, г Томск) и к м н Э А Ондар (Многопрофильная научная лаборатория по медико-биологическим проблемам Минздрава Республики Тува, г Кызыл) Выбор сходных полиморфизмов генов для оценки резистентности к ТБ \ г\ винцев и русских позволил провести сравнительный анализ распространенности исследованных маркеров у больных и здоровых данных этнических гр\ пп населения При сравнении частот аллелей и генотипов у русских и i\ винцев показаны отличия практически по всем исследованным полиморфизмам, кроме изменчивости 274С/Т гена NR4MP1, однако статистические пока ?ате.чи д 1я этот полиморфизма были пограничными (табл 2)

У жителей г Томска установлено неравновесие по сцеплению межд\ четырьмя парами полиморфизмов гена NRAMP1 (469+14G/C и 274С/Т, 469+14G/C и 1465-85G/A, 274С/Т и 1465-85G/A, D543N и 1465-85G/A) (табл 3) В фазе притяжения оказались часто встречаемые аллели Полиморфизм 274С/Т расположен в третьем экзоне гена, a 469+14G/C - в четвертом интроне Такая локализация их в гене легко объясняет наблюдаемое между ними сцепление (+0,104).

Р

* - р<0,05 Ш русские

■ индийцы (Лондон) □ китайцы

А1Н.1В А1 И-НМ

100-

80

60 Г^ А

40-

20

0^

1188А 11.12В

0 русские ■ англичане □ камерунцы Шгреки В ирландцы

469+146 МРАМР1

543й ЫРАМР1

□ русские ■ китайцы Пгамбийцы В корейцы И японцы И татары И башкиры_

Рис 1 Частоты аллелей исследованных генов у русских г Томска (собственные данные) в сравнении с другими популяциями мира (по данным литературы)

Таблица 2

Частоты аллелей исследованных генов у русских г Томска и тувинцев*

Ген Аллель Частота у здоровых Р Частота у больных туберкулезом Р

русских тувинцев русских тувинцев

ЫЯАМР 1 469+140 0,847 0,920 0,002 0,810 0,918 0,000

543Э 0,957 0,861 0,000 0,971 0,892 0,000

1465-850 0,715 0,783 0,040 0,677 0,794 0,000

274С 0,836 0,880 0,127 0,749 0,900 0,000

1Ы2В 1188 А 0,826 0,622 0,000 0,760 0,605 0,000

ЮЯ Ь 0,532 0,825 0,000 0,546 0,812 0,000

Р 0,611 0,749 0,000 0,641 0,755 0,000

1Ь1В +3953А1 0,806 0,865 0,035 0,741 0,891 0,000

1ЫЯЫ А1 А2 АЗ 0,786 0,186 0,018 0,849 0,069 0,013 0,000 0,714 0,258 0,027 -

Примечание * - по данным Рудко, 2004, р - уровень значимости при сравнении частот аллелей.

Полиморфизм 1465-850/А и Б543Ы находятся в 13 интроне и 15 экзоне соот-ветствешго, что обусловливает неравновесие по сцеплению между ними (+0,017) Сила сцепления между полиморфизмом 1465-850/А и вариантами 469+140/С, 274С/Т была примерно на одном уровне и составила +0,078 и +0,085, соответственно Интересно, что структура неравновесия по сцеплению между парами полиморфных вариантов гена МЯАМР1 оказалась идентичной у русских и тувинцев Кроме того, у жителей г Томска найдено неравновесие между полиморфизмами В/Ь и 1-7Г гена РТ)Н (+0,053), а также выявлено тметическое неравновесие между маркерами, расположенными на разных хромосомах аллельный вариант ¥/{ гена УТ>Я оказался в фазе отталкивания с полиморфизмами 469+140/С, 274С/Т, 1465-850/А гена ЫЯАМР1 (-0,040, -0,039, -0,058, соответственно), а также 1465-850 гена ЫЯАМР1 с 1188А гена 1112В (-0,041), 469+140 гена ЫЯАМР! с +3953А1 гена ШВ(-0,030).

В исследованной выборке 304 пациентов с туберкулезом, живущих в г Томске, проанализированы частоты аллелей и генотипов рассматриваемых генов. Сравнение частот аллелей и генотипов у русских и тувинцев, больных туберкулезом показало статистически значимые отличия для всех исследованных полиморфных маркеров (табл 2) В целом при межпопуляционном сравнении особенностей распределения аллелей генов-кандидатов ТВ и складывающихся межло-кусных взаимодействиях у русских и тувинцев выявлены значительные отличия, что представляется важным с точки зрения генетической эпидемиологии

Анализ связи полиморфизма генов Л7ММР/, 1Ы2В, УОЯ, ПАВ, с

туберкулезом

Первостепенное внимание было уделено поиску ассоциаций полиморфизма генов с туберкулезом При сравнении частот аллелей и генотипов у больных и здоровых установлена связь полиморфизма 274С/Т гена ЫРЛМР1 и трех генов, принимающих участие в продукции шггерлейкинов с вторичным ТЕ (табл 4)

Таблица 3

Гаметическое неравновесие между парами исследованных полиморфных вариантов генов у русских I Томска

Ген ИКАМР1 1Ы2В 1'Ш 1ИВ 1ЫШ

Ген Полиморфизм 469+14 С/С 274С/Т 1465-85 в/А 0543Ы 1188 АУС В/Ь +3953 А1/А2 УОТЯ

МЫМР! 469+14 в/С - +0,104 +0,078 +0,078 -0,009 -0,040 -0,012 -0,030 +0,002

274С/Т 70,39 - +0,085 +0,002 -0,019 -0,039 -0,003 -0,026 +0,003

1465-85 О/А 29,94 29,79 - +0,017 -0,041 -0,058 -0,027 -0,014 +0,016

054314 1,54 0,085 4,69 - +0,001 -0,010 -0,005 -0,001 +0,013

1Ы2В И 88 А/С 0,505 1,88 7,08 0,029 +0,011 +0,016 +0,018 -0,000

тя ¥/{ 6,12 4,92 7,68 1,05 0,361 +0,053 -0,012 +0,008

В/Ь 0,465 0,03 1,47 0,221 0,730 4,65 - +0,006 -0,010

1Ь1В +3953 А1/А2 5,88 3,63 0,747 0,017 1,85 0,371 0,104 - -0,023

шт \TNTR 0,024 0,042 0,890 3,08 0,001 0,162 0,217 2,65 -

Примечание Над центральной диагональю указаны значения меры гаметического неравновесия (О), под диагональю - соответствующее значение х2 для теста на неравновесие по сцеплению.

Выделены величины, для которых достигнутый уровень значимости составил 5% и менее

Таблица 4.

Частоты аллелей и генотипов исследованных генов у больных вторичным __туберкулезом легких и здоровых _

Ген/ Полиморфизм Генотип/ Аллель Здоровые Больные ТБ Р OR (95% CI)

NRAMP1 274С/Т СС СТ ТТ 80 34 2 136 108 13 0,010 0,51« (0,31-0,82) 1,75* (1,06-2,88) 5,01* (1,07-33,72)

С 0,836 0,739 0,005

А1А1 90 146 0,70(0,45-1,10)

IL1B +3953 А1/А2 А1А2 А2А2 44 5 92 21 одоз 1,19(0,75-1,89) 2,36 (0,82-7,34)

А1 0,806 0,741 0,041

IL1RN А1А1 А1А2 А2А2 93 27 12 134 89 23 0,025 0,55* (0,35-0,86) 2,20* (1,31-3,72) 1,04(0,48-2,31)

VNTR другие 8 12 -

А1 А2 0,786 0,186 0,705 0,269 0,019

IL12B АА АС 85 43 135 89 0,041 0,69(0,43-1,10) 1,20 (0,75-1,94)

1188А/С СС 1 13 7,43* (1,00-153,87)

А 0,826 0,757 0,041

Примечание р - достигнутый уровень значимости; (Ж - относительный риск; (95%С1) - доверительный интервал для (Ж; *- р < 0,05

Аллели 274Т гена МШР1,1188С Ы2В, +3953А2 ЫВ, А2ШГС. Ш статистически значимо чаще регистрировались в группе больных, чем в контроле. Относительный риск для носителей генотипов 274С/Т и 274ТЯ гена ШАМР1, А1/А2 УОТИ гена 1ЫШ и 1188СС гена 1Ы2В был достоверно вьппе единицы, что позволило сделать вывод о предрасполагающем к заболеванию эффекте этих генотипов. Кроме этого, выявлена протективная роль в отношении вторичного туберкулеза генотипов 274С/С гена ЬШАМР! и А1/А1 полиморфизма УШИ гена 1Ь1Ш

Известно, что тяжесть туберкулезного процесса определяется распространенностью патологического образования в пораженном органе и наличием деструкции ткани. При сравнении частот аллелей и генотипов в группе больных с наличием деструкции и контрольной, выявлены отличия по полиморфизмам, проявившим связь с вторичным туберкулезом (табл 5). Пациенты с туберкулезом без деструкции не отличались от здоровых лиц. Анализ частот аллелей и генотипов в группах пациентов с разным объемом поражения легочной ткани и у здоровых индивидов показал отличия между больными и здоровыми Ассоциацию с распространенным туберкулезом легких проявили полиморфизм 274С/Т гена N.ИАМР1, УЫТИ гена 1ЫШ и 1188А/С гена 1Ы2В, а с ограниченной формой заболевания - +3953А1/А1 гена 1ЫВ (табл. б)

1Ь-1Р является провоспалигельным цитокином, а значит, варианты, кодирующего его гена могут приводить к ослаблению защитной реакции организма и, как следствие, способствовать заболеванию при наличии возбудителя в организме.

Таблица 5.

Частоты генотипов и аллелей исследованных полиморфизмов у больных __деструктивным туберкулезом легких____

Ген/ Генотипы Аллели Сравнение со здоровыми

Полиморфизм Генотипов Аллелей

NRAMP1 СС СТ ТТ С=0,735 р=0,013 р=0,005

274С/Т 96 74 11

IL1B А1А1 А1А2 А2А2 А1=0,715 р=0,022 р=0,008

+3953А1/А2 100 63 21

IL12B АА АС СС А=0,737 р=0,012 р=0,013

1188А/С 94 67 12

IL1RN А1А1 А1А2 А2А2 А 1=0,690 р=0,056 р=0,017

VNTR 93 60 20 А2=0,283

Примечание. Обозначения см. табл. 4

Таблица 6

Частоты генотипов и аллелей исследованных полиморфизмов у больных

Ген/ Полиморфизм Объем поражения Генотипы Аллели Сравнение со здоровыми

Генотипов Аллелей

NRAMP1 274С/Т Более доли СС СТ ТТ С=0,704 р=0,002 р=0,001

54 51 8

IL1B +3953А1/А2 Менее доли А1А1 А1А2 А2А2 А 1=0,699 р=0,038 р=0,015

35 25 8

IL12B 1188А/С Более доли АА АС СС А=0,750 р=0,022 р=0,058

61 37 8

IL1RN VNTR Более доли А1А1 А1А2 А2А2 А 1=0,687 А2=0,287 р=0,057 р=0,018

59 37 13

Примечание. Обозначения см. табл. 4

Рецепторный антагонист IL-1J3 выполняет функцию специфического блока-тора биологического действия IL-lp. К тому же известно, что аллель А2 этого маркера связан с увеличением продукции белка IL-1RN [Wilkinson et al., 1999]. Таким образом, связь полиморфизма +3953А1/А2 гена IL1B и VNTR гена IL1RN с ТБ может бьггь объяснена с позиции функции продуктов экспрессии этих генов.

При исследовании гаметического неравновесия между проявившими связь с вторичным туберкулезом полиморфизмами генов показано, что в фазе отчалкива-ния оказались часто встречаемые аллели генов IL1B и IL1RN, причем мера неравновесия для них составила -0,033 (р=0,009) Сочетание генотипов IIJRN*A\AU IL1B*А1А1 статистически значимо чаще регистрировали в контрольной выборке (OR=0,50, р=0,003). Таким образом, гаплотип IL1RN*A\A\I1LIB*A\A\ имеет протеюгивный эффект и защищает его обладателя от заболевания туберкулезом

Выявлена ассоциация полиморфизма 1465-85G/A гена NRAMP1 и 1188А/С гена IL12B с первичным туберкулезом (табл 7). У больных по сравнению со здоровыми индивидами статистически значимо чаще регистрировали аллель 1465-85А гена NRAMP1 и 1188С гена IL12B. К тому же показана протективная роль в отношении первичного туберкулеза для генотипа 1465-85G/G NRAMP1.

Таблица 7

Сравнительный анализ частот аллелей и генотипов исследованных полиморфизмов у больных первичным туберкулезом и здоровых_

Ген/ Полиморфизм Генотип/ Аллель Здоровые Больные ТБ Р OR (95%С1)

NRAMP1 1465-85G/A GG GA АА G 73 47 15 0,715 12 27 4 0,593 0,004 0,047 0,33« (0,15-0,73) 3,16* (1,47-6,86) 0,82 (0,22-2,86)

IL12B 1188А/С АА АС СС А 85 43 1 0,826 27 11 4 0,774 0,012 0,370 0,93 (0,42-2,06) 0,71 (0,30-1,64) 13,47* (1,35-326,4)

Примечание. Обозначения см табл 4

Известно, что продукт гена Nrampl у мышей участвует в процессе фагоцитоза, влияя на судьбу MET в макроорганизме Кроме того, на мышах показано, что именно ранняя фаза инфекции с микобактериями туберкулеза штамма BCG находится под контролем гена Nrampl По всей видимости, дефект продукции или функции человеческого гомолога Nrampl при первой встрече человека с микобактерией может способствовать возникновению заболевания Тогда, как в организме инфицированного ранее индивида срабатывают механизмы иммунологической защиты, и мутации в гене, а следовательно и дефекты NRAMP1 не оказывают подобного влияния

Полиморфизм 1188А/С гена JL12B оказался значимым, как для первичного туберкулеза, так для вторичных форм заболевания, причем у носителей генотипа 1188С/С риск заболеть первичным туберкулезом возрастал в 13 раз, а вторичными формами инфекции - в 8 раз Полученная связь этого генетического маркера с патологией методом случай-контроль подтверждена на семейной выборке больных Дети с туберкулезом лишь в 13% случаев наследовали от родителей аллель 1188А, тогда как аллель 1188С - в 87% (табл 8) Найденная связь изменчивости гена IL12B с туберкулезом закономерна, поскольку продукт экспрессии этого гена - IL-12 является ключевым цитокином для усиления кчеточно-опосредованного иммунного ответа и инициации эффективной противоинфекци-онной защиты Он секретируется макрофагами в ответ на индукцию микробными компонентами и продуктами, активирует дифференцировку Т-лимфоцитов, повышает их цитотоксическую активность, усиливает пролиферацию естественных киллеров, Т-лимфоцитов и продукцию других цитокинов. Главный эффект - индукция синтеза INF-y Характер течения и исход многих инфекций зависят от способности возбудителя индуцировать синтез IL-12 При анализировании анамнестических данных показано, что частота встречаемости родственников, больных туберкулезом, у заболевших этой инфекцией и у здоровых индивидов, отличается (%2=15,67, р<0,001) Найдено, что вероятность заболеть туберкулезом выше у индивидов, в семьях которых имеются лица, перенесшие это заболевание (OR=3,63, р<0,000) Необходимо отметить, что учитывались родственники I и II степени родства, перенесшие туберкулез, но не имеющие тесного семейного контакта в период болезни с обследуемыми индивидами

Повышение частоты туберкулеза у родственников больных по сравнению со

здоровыми свидетельствует в пользу имеющегося мнения о наследственной предрасположенности к инфекционным заболеваниям, в том числе к туберкулезу

При сравнении выявленных ассоциаций исследованных генов с ТБ у русских г Томска и коренных жителей Тувы показаны существенные отличия Результаты, полученные при изучении тувинского этноса, свидетельствуют о незначительном вкладе исследованных полиморфизмов в формирование подверженности к туберкулезу [Рудко, 2004] У русских, напротив, получены ассоциации для 5 из 9 исследованных полиморфизмов генов-кандидатов ТБ Такие отличия в проявлении роли изученных генов, вероятно, обусловлены разным генетическим фоном у русских и тувинцев Известно, что каждый ген действует не самостоятельно, а во г* взаимодействии со множеством других генов, следовательно, эффекты генов проявляют зависимость от того генетического фона, на котором действует ген

Таблица 8

Число аллелей исследуемых полиморфизмов, унаследованных больными __потомками от гетерозиготных родителей__

Ген Полиморфизм Аллели Количество перенесенных аллелей ТЭТ Р

469+140/С в 10 1,00 0,317

С 6

ЫЯАМР! 1465-850/А в 12 0,15 0,695

А 14

274С/Т С 9 0,06 0,808

Т 8

1Ы2В 1188 А/С А 2 8,07 0,005

С 13

В/Ь В б 2,00 0,157

ЮЯ Ь 12

Р/Г Р 11 0,00 1,000

í 11

1ЫВ +3953А1/А2 А1 9 0,05 0,818

А2 10

111 КМ УЫТИ А1 9 0,60 0,439

не А1* 6

Примечание р - достигнутый уровень значимости, <1 Г - число степеней свободы, * - аллели А2 и АЗ

Анализ связи полиморфизма генов N1^4^191,1Ы2В, КОЛ, 1ЫВ, ¡ЫШЯ с патогенетически важными параметрами болезни

Установлено, что полиморфизмы 469+14Сг/С гена КЧЫМР1 и В/Ь гена УЛЯ не предрасполагают к туберкулезу, однако они оказывают влияние на течение возникшего заболевания (табл 9) Получена ассоциация аллеля 469+14С гена АГЯАМР1 с деструкцией при туберкулезе и с большим объемом поражения легочной ткани Показано влияние полиморфизма В/Ь гена УПК на распространенность зоны туберкулезного поражения, поскольку аллель Ь статистически значимо чаще выявляли у больных с легочным поражением в пределах 1-2 сегментов.

Обнаружены ассоциации исследованных генов с рядом количественных показателей (табл. 10). Для полиморфизма 1188А/С гена 1Ы2В показана связь с уровнем СОЭ и выраженностью палочкоядерного сдвига влево лейкоцитарной формулы, при этом аллель 1188С ассоциирован с повышением палочкоядерных нейтрофилов независимо от пола больного (р=0,031), а генотип 1188АС - со значительной степенью повышения СОЭ у женщин (р=0,010). При сравнении ассоциаций исследованных полиморфизмов генов с патогенетически важными параметрами ТБ у русских и тувинцев выявлены различия. У коренных жителей Тувы максимально значимыми с точки зрения прогнозирования клинического течения туберкулезного процесса оказались полиморфизм В/Ь гена УЛН и полиморфизм УЫТЯ гена ШШ [Рудко, 2004].

Таблица 9.

Частоты аллелей и генотипов исследованных генов у больных с разным течением __туберкулеза____

Ген/ Полиморфизм Признак Генотип Р Аллель Р

ОД сс СС в

N1ЫМР1 469+14в/С Деструкция + 108 60 5 0,048 0,798 0,027

Деструкция - 39 8 1 0,896

Поражено доля и < 73 28 1 0,043 0,853 0,016

Поражено > доли 60 41 5 0,759

УТЖ В/Ь вв вь ЬЬ Ь

Поражено < доли 3 44 21 0,011 0,632 0,021

Поражено доля и > 29 85 33 0,514

Примечание, р - достигнутый уровень значимости

Таблица 10.

Средние значения количественных признаков у носителей разных генотипов

Ген/ Полиморфизм Генотипы N Признак Среднее значение признака в.О. Тест Краскела - Уоллиса Тест ЬвБ

АА 97 Палоч-коядер- 5,206 4,943 АА-АС* р=0,007

АС 60 ные нейтро- 7,567 5,782 р=0,031 АС-СС* р=0,907

1112В СС 11 филы (%) 7,364 5,372 СС-АА* р=0,201

1188 А/С АА 34 СОЭ у женщин (мм/ч) 24,765 19,285 АА-АС* р=0,006

АС 24 39,833 20,466 р=0,010 АС-СС* р=0,044

СС 4 17,750 21,608 СС-АА* р=0,507

Примечапие N - численность генотипов; Я 13,- стандартное отклонение; р -достигнутый уровень значимости; * - указаны генотипы, для которых сравнивали среднее значение признака

Для этих генетических маркеров выявлены ассоциации с деструкцией при ТБ, повышением СОЭ и со сдвигом лейкоцитарной формулы влево. У жителей г. Томска ассоциированными с перечисленными параметрами туберкулеза оказались другие полиморфизмы Таким образом, при межпопуляционном сравнении генов-кандидатов подверженности к ТБ у русских и тувинцев выявлены отличия, как по генетической структуре популяций, так и по вовлеченности в формирование генетической основы предрасположенности к туберкулезу и его особенностей клинического течения

Функциональные механизмы, определяющие полученные ассоциации, возможно, связаны с действием продуктов экспрессии этих генов на патогенез заболевания В случае подтверждения этой гипотезы, аллели 1465-85А гена NRAMP1, 1188С гена IL 12В могут считаться маркерами предрасположенности к первичному туберкулезу, а аллели 274Т гена NRAMP1, А2 VNTR полиморфизма гена ILIRN, +3953А2 гена IL1B, 1188С гена IL12B - маркерами подверженности к вторичному туберкулезу с деструкцией легочной ткани. Кроме того, зная генотип больного по полиморфизмам 469+14G/C гена NRAMP1 и В/b гена VDR, вероятно можно будет прогнозировать течение туберкулезного процесса. В целом, полученная информация позволит глубже проникнуть в патогенез туберкулеза, его отдельных клинических форм, может быть учтена при определении групп риска, также она представляется важной для формирования представления о связи закономерностей распределения аллелей генов-кандидатов ТБ в популяции с особенностями распространения данного инфекционного заболевания

ВЫВОДЫ

1 Выявлены особенности в распределении частот аллелей, изученных генов-кандидатов подверженности к туберкулезу, у русских жителей г Томска по сравнению с другими популяциями мира. При сравнении с тувинцами показаны отличия в распределении генотипов и частот аллелей по всем рассматриваемым генам, как у здоровых индивидов, так и у больных туберкулезом. 2. У русских жителей г. Томска наблюдается неравновесие по сцеплению между четырьмя парами полиморфизмов гена NRAMPJ: 469+14G/C и 274С/Т (D=+0,104), 469+14G/C и 1465-85G/A (D=+0,078), 274СЯ и 1465-85G/A (D=+0,085), D543N и 1465-85G/A (D=+0,017) и между полиморфизмами В/b и F/f гена VDR (D=+0,053) Структура неравновесия по сцеплению между полиморфизмами гега NRAMP1 не отличается от таковой у тувинцев.

3 Родственники индивидов больных туберкулезом заболевают этой инфекцией чаще, чем родственники здоровых лиц, даже при отсутствии семейного контакта с больным пробандом (OR=3,63, р<0,000).

4 Полиморфные варианты 1188А/С гена IL 12В и 1465-85G/A гена NRAMPI ассоциированы с туберкулезом первичного генеза у русских г Томска Распространенный вторичный туберкулез с деструкцией легочной ткани связан с изменчивостью по 274С/Т гена NRAMPI, 1188А/С гена IL 12В, VNTR гена IL1RN, а ограниченный вторичный туберкулез с деструкцией легочной ткани -с полиморфизмом +3953А1/А2 гена IL1B.

5 Генотип 1465-85G/G NRAMPI проявляет протекгивный эффект при первичном туберкулезе (OR=(),33, р=0,005), а генотипы 274С/С гена NRAMPI (OR=0,5l, р=0,005), Al/Al ILIRN (OR=0,55, p=0,007) и гаплотип

IL1RN*A\A\IIL1B*A\A\ (C>R=0,50, p=0,003) - при вторичном туберкулезе. Рисковыми генотипами для туберкулеза являются 1465-85G/A NRAMPI (OR=3,16, р=0,002) и 1188С/С IL 12В (OR=13,47, р=0,013) при первичном генезе заболевания, 1188С/С IL 12В (OR=7,43, р=0,023), 274СЯ NRAMPI (OR=l,75, р=0,026), 274Т/Т NRAMPI (OR=5,01, р=0,037) и А1/А2 IL1RN (OR=2,20, р=0,002) при вторичном туберкулезе.

6 Для полиморфизмов 1188А/С гена IL12B, 469+14G/C гена NRAMPI и В/b гена VDR выявлена ассоциация с качественными и количественными патогенетически важными признаками туберкулеза: уровнем палочкоядерных нейтрофи-лов, показателем скорости оседания эритроцитов у женщин, деструкцией ткани легкого и объемом поражения легочной ткани при туберкулезе.

7 Выявлены отличия в структуре генетической компоненты подверженности к туберкулезу у русских и тувинцев, заключающиеся в разном вкладе исследуемых генов в формирование предрасположенности к заболеванию и в клинические проявления туберкулеза.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Пузырев В.П, Фрейдин М Б., Рудко A.A., Стрелис А.К., Колоколова О.В. Исследование полиморфизмов генов NRAMPI и IL12p40 у больных туберкулезом города Томска / «Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера» Вторая научная конференция с международным участием / Новосибирск: ЦЭРИС, 2002. - С. 210-211.

2 Рудко А А., Юн Н Э., Колоколова О.В. Полиморфизм генов NRAMPI и IL 12В у жителей Томска I Материалы 4-ой молодежной научной конференции СО РАМН «Фундаментальные и прикладные проблемы современной медицины» / СО РАМН, Новосибирск, - 2002. - С. 103-105.

3 Пузырев В П., Фрейдин М Б, Рудко A.A., Стрелис А.К., Колоколова О.В. Полиморфизм генов кандидатов подверженности к туберкулезу у славянского населения Сибири, политное исследование // Молекулярная биология. - 2002 -Т.36. -№ 5.-С. 788-791.

4. Пузырев В.П., Фрейдин М.Б., Рудко A.A., Стрелис А К., Колоколова О.В Анализ взаимосвязи полиморфизмов генов NRAMPI и IL12p40 с клиническим туберкулезом / Сборник тезисов научно-практической конференции «Новые технологии во фтизиатрии» / Томск, 2002. - С. 86-88.

5 Колоколова OB., Стрелис А.К., Пузырев В.П., Фрейдин М.Б. Генетические аспекты восприимчивости и резистентности к туберкулезу / Сборник тезисов научно-практической конференции «Новые технологии во фтизиатрии» / Томск, 2002.-С. 49-52.

6. Пузырев В.П., Фрейдин М.Б., Рудко A.A., Стрелис А.К., Колоколова О.В. Анализ взаимосвязи полиморфных маркеров генов NRAMPI и IL12p40 и туберкулеза // Медицинская генетика. - 2002. - Т.1. - № 1. - С. 44-46

7 Рудко A.A., Никитин Д.Ю., Фрейдин М.Б., Колоколова О.В, Помогаева А.П Полиморфизм генов NRAMPI и IL12B при туберкулезе и сальмонеллезе у жителей г. Томска / Генетика человека и патология: Сборник научных трудов / Под ред. В.П. Пузырева - Вып. 6. - Томск. «Печатная мануфактура», 2002. -С. 165-170.

8 Рудко А.А, Фрейдин М.Б., Никитин Д.Ю., Колоколова О В, Стрелис А.К., Помогаева А П., Гоздан Т.М. Исследование полиморфизма генов NRAMPI и

IL12B при туберкулезе и сальмонеллезе у жителей г Томска // Медицинская генетика. -2003. -Т.2. -Ä1.-C 32-35. 9. Rudko A. A, Nikitin DU., Freidin MB, Kolokolova O.B. Polymorphism of NRAMP1 and ÍL12B genes in Russians with tuberculosis and salmonellosis // European Journal of Human Genetics - 2003. - Vol 11. - Suppl. 1. - P. 229 ЮРудко А. А, Фрейдин М.Б, Пузырев ВП, Колоколова О.В., Стрелис A.K, Ондар ЭА., Никитин ДЮ., Помогаева АГТ Генетические основы предрасположенности к развитию инфекционных заболеваний / Молекулярно-биологические технологии в медицинской практике / Под ред. А.Б. Масленникова -Вып. 4. - Новосибирск' Альфа Виста, - 2003. - С 166-173. 11 Рудко А.А, Фрейдин М.Б., Колоколова О.В, Ондар Э.А., Стрелис А К., Матракшин А Г, Пузырев В.П Полиморфизм генов-кандидатов туберкулеза NRAMP1 и IL12B в этнически дифференцированных популяциях Сибири / Тезисы Всероссийской научно-практической конференции «Современные достижения клинической генетики», Москва, 25-27 ноября 2003 г / Медицинская генетика. - 2003 - Т.2 - № 10 - С. 439. 12.Пузырев ВП, Стрелис А К., Колоколова О.В., Фрейдин М.Б, Рудко A.A., Брагина Е.Ю. Анализ взаимосвязи полиморфизма гена NRAMP1 и туберкулеза легких «Развитие международного сотрудничества в области изучения инфекционных заболеваний» Международная конференция / Новосибирск' ЦЕРИС, 2004 - С. 143-144

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ТБ - туберкулез

ВОЗ - всемирная организация здравоохранения МБТ - микобактерии туберкулеза СОЭ - скорость оседания эритроцитов РХФ - равновесие Харди-Вайнберга

NRAMP1 - макрофагальный белок, ассоциированный с естественной ресистентностью

NRAMP1 - ген макрофагального белка, ассоциированного с естественной резистентностью

VDR - ген рецептора к витамину D INF-7 - гамма ингерферрон IL-1 ß - интерлейжин-1 ß IL-12ß - интерлейкин-12ß IL1B - ген интерлейкина-1 ß IL 12В - ген интерлейкина-12ß

IL1RN - ген антагониста рецептора к интерлейкину-1 ß

í

f) 1

»1781*

РНБ Русский фонд

2006-4 15561

Отпечатано ООО «НИП» г. Томск, ул. Советская, 47, тел. 531470 Заказ № 1709-05 Тираж 100 экз.

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Колоколова, Ольга Валентиновна

Список сокращений.

Введение.

Глава I. Обзор литературы.

1.1. Роль наследственных факторов в возникновении и развитии туберкулеза.

1.2. Молекулярные механизмы патогенеза туберкулеза у человека.

1.3. Физиологические функции белковых продуктов генов-кандидатов подверженности туберкулезу, их роль в патогенезе заболевания.

Глава 2. Материал и методы исследования.

2.1. Обследованные группы населения.

2.1.1. Характеристика контрольной выборки.

2.1.2. Характеристика выборки больных туберкулезом.

2.1.3. Характеристика семейной выборки пробандов, больных туберкулезом.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Клинико - лабораторные методы исследования.

2.2.2. Молекулярно - генетические методы анализа полиморфизма генов.

2.2.3. Генетико - статистические методы анализа.

Глава 3. Результаты и обсуждение.

3.1. Распространенность полиморфизма генов NRAMP1, VDR, IL12B, ILIB, IL1RN среди здоровых лиц (контрольная группа).

3.2. Анализ связи полиморфизма генов NRAMP1, VDR, IL12B,

IL IB, IL1RN с туберкулезом.

3.3. Анализ накопления случаев туберкулеза в семьях больных.

3.4. Анализ связи полиморфизма генов NRAMP1, VDR, IL12B, IL1B, IL1RN с патогенетически важными параметрами болезни.

3.4.1. Анализ ассоциаций исследованных генов с качественными признаками туберкулеза.

3.4.2. Анализ ассоциаций исследованных генов с количественными признаками туберкулеза.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Аллельные варианты генов-кандидатов подверженности туберкулезу у русского населения Западной Сибири"

По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) от туберкулеза (ТБ) ежегодно умирают более двух миллионов человек во всем мире. В связи с этим в 1993 г. ТБ объявлен всемирной опасностью. Несмотря на наметившиеся тенденции к стабилизации и позитивную динамику отдельных показателей, эпидемиологическая ситуация по туберкулезу в Российской Федерации остается сложной [Перельмап М.И., 2001; Онищенко Г.Г., 2003; Ерохин В.В., 2003; Белиловский и др., 2003]. В 27 субъектах РФ уровень заболеваемости значительно выше, чем по стране, причем наибольшие показатели отмечены в Сибирском федеральном округе [Мурашкина Г.С. и др., 1999; Краснов В.А., 2004]. Таким образом, ТБ является одной из самых серьезных медико-социальных проблем здравоохранения, как Томской области, так и в целом России [Персльман М.И., 2003; Стрелис А.К., 2004].

Несомненно, ключевым звеном патогенеза заболевания является проникновение микобактерий туберкулеза (МБТ) в организм человека. Однако нельзя недооценивать роль предрасполагающих факторов, к которым относят возраст больного, сопутствующие заболевания, неблагоприятное влияние факторов внешней среды, различные патологические состояния специфического и нсспецифического иммунитета [Давыдовский И.В., 1962].

Известно, что туберкулезной инфекции свойственен выраженный клинический полиморфизм [Пузик В.И. и др., 1973]. Основой для такой вариабельности клинического течения болезни является не только внешние средовые причины, но и генетически детерминированные [Апт А.С и др., 1982; Хоменко А.Г., 1990]. Благодаря врожденной относительной резистентности человека к туберкулезу заболевает лишь малая часть инфицированных МБТ, в то время как, по данным ВОЗ, инфицируется практически каждый третий житель планеты.

Близнецовые и гепетико-эпидемиологические исследования установили важную роль наследственности в развитии туберкулеза [Чуканова В.П. и др., 2001; KallmanF, ReisnerD., 1943; Comstock G.W., 1978; Fine Р.Е.М., 1981].

С генетической точки зрения ТБ, как и большинство инфекционных заболеваний, относят к мультифакториальной патологии, которая представляет собой результат сложного взаимодействия большого числа генов с разнообразными факторами окружающей среды [Мороз A.M., Торонджадзе В. Г., 1977; Березовский Б.А. и др., 1986]. Современные достижения в области молекулярной генетики открыли новые перспективы в изучении патогенеза болезней: появилась возможность идентифицировать гены, продукты экспрессии которых принимают участие в развитии патологических состояний [Hill А. V. S., 1999].

Важнейший этап патогенеза туберкулеза - персистенция возбудителя в фагосомах макрофагов [Авербах М.М. и др., 1982; Литвинов В.И. и др., 1983]. Макрофаги поглощают патоген в очагах воспаления, но часто теряют способность элиминировать его в лизосомах, что в итоге приводит к их массированному размножению и последующему выходу из погибших клеток [Myrvik Q. et al., 1984]. В связи с этим в число генов-кандидатов туберкулеза входят гены, продукты которых участвуют в процессе фагоцитоза микобактерий. Современные характеристики туберкулезной инфекции диктуют необходимость контроля прохождения микобактерии по эндосомально -лизосомалыюму пути.

Одним из методов анализа роли генетических факторов в возникновении и развитии распространенных заболеваний является исследование ассоциаций генетических маркеров с заболеваниями [Пузырев В.П., 2000; Collins F.S., 1999; McKusick V., 2000]. В основе такой ассоциации маркера с болезнью могут лежать три причины. Во-первых, наличие ассоциации может свидетельствовать о том, что ассоциированный локус и есть ген или один из генов болезни. Вовторых, причиной ассоциации может быть неравновесие по сцеплению между маркерным локусом и локусом болезни. И, наконец, ассоциация может быть артефактом, возникшим вследствие подразделенности популяции [Пузырев В.П., Степанов В.А., 1997]. Феномен ассоциации генетического маркера с заболеванием или каким-либо признаком болезни определяется дифференциальной приспособленностью носителей разных генотипов [Алтухов Ю.П., 2003].

Одним из приоритетных направлений в активном выявлении туберкулеза является определение групп риска. Формирование этих групп требует методологически правильного подхода, основанного на четком знании факторов, определяющих повышенный риск заболевания [Горбач Н.А. и др., 2004]. Методами молекулярной медицины было установлено, что у человека гены многих ферментов, рецепторов и других белков характеризуются наличием одного или нескольких структурных полиморфизмов, которые не приводят к значимым изменениям первичной структуры белка, и соответственно, очевидным патологическим последствиям, но оказывают влияние на функциональную активность кодируемых белков. Эти специфические для конкретной патологии маркеры могут быть выявлены задолго до ее клинической манифестации, что позволит определить группы риска, организовать их мониторинг, а в случае необходимости, предложить индивидуально обоснованную профилактику и превентивную терапию. Таким образом, идентификация генов и их аллелей, участвующих в определении чувствительности или резистентности к туберкулезу, позволит не только глубже проникнуть в фундаментальные механизмы иммунитета и патологии этой инфекции, но и будет способствовать усовершенствованию лечебно-профилактических мероприятий.

Настоящее исследование является фрагментом изучения подверженности к туберкулезу в различных этнических группах, которое проводится в ГУ НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН под руководством академика РАМН В.П. Пузырева. Получены результаты исследования роли генов-кандидатов в возникновении и развитии туберкулеза у тувинцев [Рудко А.А., 2004]. Нами изучено влияние генов NRAMP1 (ген макрофагального белка, ассоциированного с естественной резистентностью), VDR (ген рецептора к витамину D), IL12B (ген иптерлейкина 12В), IL1B (ген интерлейкина IB), ILIRN (ген антагониста рецептора к иптерлейкину 1В) па предрасположенность к туберкулезу у русских г. Томска. Выбор сходных полиморфизмов генов для оценки резистентности к ТБ у тувинцев и русских позволил провести сравнительный анализ распространенности исследованных маркеров у больных и здоровых представителей данных этнических групп населения.

Цель исследования: изучить роль полиморфных вариантов генов NRAMP1, VDR, IL12B, IL1B и ILIRN в возникновении и развитии туберкулеза у русских жителей г. Томска.

Задачи исследования:

1. Изучить распространенность и межлокусное взаимодействие полиморфных вариантов гена NRAMP1 (469+14G/C, D543N, С274Т, 1465-85G/A), аллельных вариантов генов VDR (B/b, F/f), IL12B (АП88С), IL1B (+3953А1/А2), ILIRN (VNTК) у русских г. Томска.

2. Оценить частоту встречаемости больных туберкулезом среди родственников больных и здоровых лиц.

3. Провести анализ ассоциаций полиморфизма исследуемых генов с туберкулезом.

4. Исследовать влияние изучаемых аллельных вариантов на варьирование патогенетически значимых признаков болезни.

5. Провести сравнительный анализ русских г. Томска и жителей Тувы по распространенности исследованных генов, гаметическому неравновесию между парами полиморфизмов генов и выявленным ассоциациям.

Научная новизна:

Впервые получены сведения о распространенности аллельных вариантов генов NRAMP1, VDR, IL12B, ILIB, ILIRN у русских жителей г. Томска. Проведен межпопуляционный сравнительный анализ генов-кандидатов туберкулеза у русских и тувинцев, установивший отличия в распределении генотипов и частот аллелей по всем исследованным генетическим маркерам. Показано, что структура неравновесия по сцеплению между полиморфизмами гена NRAMP1 идентична у русских и тувинцев. Изучено влияние полиморфизма генов-кандидатов туберкулеза на возникновение и развитие различных клинических вариантов заболевания. Впервые выявлены ассоциации полиморфизма +3953А1/А2 гена IL1B с ограниченным деструктивным ТБ легких, VNTR полиморфизма гена ILIRN и полиморфизма 274С/Т гена NRAMPI с распространенной деструктивной формой заболевания, полиморфизма 1465-85G/A гена NRAMP1 с первичным туберкулезом и полиморфизма 1188А/С гена IL12B как с распространенным деструктивным туберкулезом легких, так и с первичной по гепезу формой патологии. Показана связь полиморфизма генов ILI2B, NRAMPI и VDR с патогенетически важными для ТБ качественными и количественными характеристиками патологического процесса: объемом поражения ткани легкого, деструктивными изменениями, уровнем палочкоядерных нейтрофилов, а также СОЭ у женщин.

Практическая значимость:

Полученные результаты исследования полиморфизма генов-кандидатов туберкулеза представляются важными для формирования представлений о взаимосвязи особенностей генофондных параметров популяции с закономерностями распространения этого инфекционного заболевания, позволяют глубже проникнуть в фундаментальные механизмы иммунитета и патологии ТБ. Сведения о вкладе полиморфизма исследованных генетических маркеров в формирование вариабельности подверженности к этому заболеванию, а также в определение различий клинических проявлений болезни, могут быть использованы при организации профилактических и лечебных мероприятий. Полученные данные могут быть полезны в уточнении стратегии формирования групп риска по заболеванию туберкулезом.

Положения, выносимые на защиту:

1. В популяциях человека имеет место специфичность распространения генотипов и аллелей генов-кандидатов туберкулеза NRAMP1, VDR, [LIB, IL1RN, IL12B, что может составлять основу различной подверженности к заболеванию у представителей разных этнических групп населения.

2. Полиморфизмы генов NRAMP1, IL12B, IL1B, IL1RN являются структурными элементами наследственной компоненты подверженности к туберкулезу у русских г. Томска.

3. Вклад генов NRAMP1, VDR, IL1B, IL1RN, ILI2B в развитие туберкулеза и изменчивость его клинических проявлений у представителей европеоидного и монголоидного населения Сибири различен. и

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Колоколова, Ольга Валентиновна

105 ВЫВОДЫ

1. Выявлены особенности в распределении частот аллелей, изученных генов-кандидатов подвержености к туберкулезу, у русских жителей г. Томска по сравнению с другими популяциями мира. При сравнении с тувинцами показаны отличия в распределении генотипов и частот аллелей по всем рассматриваемым генам, как у здоровых индивидов, так и у больных туберкулезом.

2. У русских жителей г. Томска наблюдается неравновесие по сцеплению между четырьмя парами полиморфизмов гена NRAMPI: 469+14G/C и 274С/Т (D=+0,104), 469+14G/C и 1465-85G/A (D=+0,078), 274С/Т и 1465-85G/A (D=+0,085), D543N и 1465-85G/A (D=+0,017) и между полиморфизмами В/b и F/f гена VDR (D=+0,053). Структура неравновесия по сцеплению между полиморфизмами гена NRAMP 1 не отличается от таковой у тувинцев.

3. Родственники индивидов больных туберкулезом заболевают этой инфекцией чаще, чем родственники здоровых лиц, далее при отсутствии семейного контакта с больным пробандом (OR=3,63, р<0,000).

4. Полиморфные варианты 1188А/С гена IL12B и 1465-85G/A гена NRAMPI ассоциированны с туберкулезом первичного гепеза у русских г. Томска. Распространенный вторичный туберкулез с деструкцией легочной ткани связан с изменчивостью по 274С/Т гена NRAMPI, 1188А/С гена IL12B, VNTR гена ILIRN, а ограниченный вторичный туберкулез с деструкцией легочной ткани - с полиморфизмом +3953А1/А2 гена ILIB.

5. Генотип 1465-85G/G NR/IMPI проявляет протективный эффект при первичном туберкулезе (OR=0,33, р=0,005), а генотипы 274С/С гена NRAMPI (OR=0,51, р=0,005), Al/Al ILIRN (OR=0,55, р=0,007) и гаплотип ILIRN'-'А1А1 //L /5 *А 1А1 (OR=0,50, р=0,003) - при вторичном туберкулезе. Рисковыми генотипами для туберкулеза являются 1465-85G/A NRAMPI

OR=3,16, p=0,002) и 1188C/C IL12B (OR=13,47, p=0,013) при первичном генезе заболевания, 1188С/С IL12B (OR=7,43, р=0,023), 274С/Т NRAMP 1 (OR=l,75, p=0,026), 274T/T NRAMP1 (OR=5,01, p=0,037) и A1/A2 ILIRN (OR=2,20, p=0,002) при вторичном туберкулезе.

6. Для полиморфизмов 1188А/С гена IL12B, 469+14G/С гена NRAMP1 и В/Ь гена VDR выявлена ассоциация с качественными и количественными патогенетически важными признаками туберкулеза: уровнем палочкоядерных нейтрофилов, показателем скорости оседания эритроцитов у женщин, деструкцией ткани легкого и объемом поражения легочной ткани при туберкулезе.

7. Выявлены отличия в структуре генетической компоненты подверженности к туберкулезу у русских и тувинцев, заключающиеся в разном вкладе исследуемых генов в формирование предрасположенности к заболеванию и в клинические проявления туберкулеза.

107

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

При изучении роли генов-кандидатов подверженности туберкулезу в этиологии и клинических проявлениях заболевания использован следующий алгоритм работы. На первом этапе проведен анализ популяционной распространенности исследуемых полиморфизмов. Второй этап заключался в определении ассоциаций генетических маркеров с туберкулезом. Третий этап включал поиск связи аллельных вариантов генов с качественными и количественными патогенетически значимыми параметрами заболевания. Кроме того, проведен сравнительный анализ полученных результатов с исследованием тувинской популяции, выполненным ранее по той же методологии [Рудко А.А., 2004].

Изучена популяционная распространенность полиморфных вариантов генов NRAMPI, VDR, IL1B, IL1RN, IL12B у русских г. Томска. Это дало возможность провести сравнение между характерными особенностями распространения аллелей генов-кандидатов туберкулеза в различных популяциях мира. При этом выявлена специфичность их распространения у жителей г. Томска. Результаты сравнительного анализа представляются важными с точки зрения обнаружения связи между особенностями распределения частот аллелей генов-каидидатов туберкулеза и заболеваемостью этой инфекционной патологией в различных популяциях.

При сравнении частот аллелей и генотипов у русских и тувинцев показаны отличия практически по всем исследованным полиморфизмам, кроме варианта 274С/Т гена NRAMPI, однако статистические показатели сравнения генотипов для этого полиморфизма были пограничными (р=0,064). Структура неравновесия по сцеплению между парами полиморфных вариантов гена NRAMPI оказалась идентичной у русских и тувинцев. Неравновесие между другими исследованными генетическими маркерами отличалось в изученных этнических группах. При сравнении частот аллелей и генотипов у больных туберкулезом русских и тувинцев выявлены отличия по всем полиморфизмам. В целом при межпопуляционном сравнении особенностей распределения аллелей генов-кандидатов ТБ и складывающихся межлокусных взаимодействиях у русских и тувинцев выявлены значительные отличия, что представляется важным с точки зрения генетической эпидемиологии.

Первостепенное внимание было уделено поиску ассоциаций полиморфизма генов NRAMPI, VDR, ILIB, ILIRN, IL12B с туберкулезом. Основой в проведенном исследовании вклада генов-кандидатов туберкулеза в формирование подверженности к заболеванию служил комплексный подход, заключающийся в характеристике полиморфизма этих генов, как на популяционном уровне, так и на семейном. При сравнении частот аллелей и генотипов у больных и здоровых установлена связь полиморфизма I188A/C IL12B с туберкулезом (р=0,044 и р=0,035 соответственно), причем у носителей генотипа 1188С/С риск заболеть первичным туберкулезом возрастал в 13 раз, а вторичными формами инфекции - в 8 раз. Полученная связь генетического маркера с патологией методом случай-контроль подтверждена на семейной выборке больных. Дети с туберкулезом лишь в 13% случаев наследовали от родителей аллель 1188А, тогда как аллель II88C - в 87% (TDT=8,07, р=0,005). С другими исследованными генами-кандидатами туберкулеза ассоциаций по данным теста TDT не получено. Также показано, что полиморфизм 1188А/С гена IL12B ассоциирован не с любым клиническим вариантом вторичного туберкулеза легких, а лишь с распространенным (объем поражения - более одной доли) (р=0,022), деструктивным ТБ (р=0,012).

Выявлено наличие ассоциации с заболеванием полиморфизма 1465-85G/A гена NRAMPI. У заболевших первичным туберкулезом чаще, чем в контрольной группе встречался гетерозиготный генотип 1465-85G/A (р=0,004), риск заболевания у этих индивидов был в 3 раза выше, чем у обладателей других генотипов этого полиморфизма. К тому же показана протективная роль в отношении первичного туберкулеза для генотипа 1465-85G/G NRAMP1.

Показана связь полиморфизма 274С/Т гена NRAMP1 с вторичным туберкулезом легких, причем с деструктивными (р=0,005) и распространенными (р=0,002) формами. Индивиды с генотипом 274С/Т преобладали в 1,66 раза в группе больных по сравнению с контролем. Лица, обладающие генотипом 274С/С, статистически значимо чаще встречались среди здоровых (OR=0,54).

В результате проведенного анализа установлена значимость VNTR полиморфизма гена IL1RN при туберкулезе. Частота аллеля А2 была выше в группе больных по сравнению с контролем (р=0,023). При сравнении частот генотипов выявлена предрасполагающая к ТБ роль гетерозигот А1/А2 (OR=2,10, р-0,030). Установлено, что выявленная ассоциация VNTR гена IL1RN с патологией обусловлена связью этого полиморфизма с вторичными формами туберкулеза легких, так как распределение генотипов различалось в группах лиц с вторичным генезом заболевания и здоровых (р=0,025), а в выборках с первичным туберкулезом и контрольной отличий не показано. Кроме того выявлена связь этого маркера с распространенным (р=0,018) и деструктивным (р=0,017) вторичным туберкулезом легких.

Ген IL1B, продукт экспрессии которого является провоспалительным цитокином, проявил статистически значимую связь с вторичным деструктивным туберкулезом легких. Аллель А2 полиморфизма +3953 этого гена чаще определяли у больных, чем у здоровых (р=0,008). Распределение генотипов в группе больных деструктивными формами заболевания и здоровых также различалось (р=0,022). Кроме того аллель А2 оказался ассоциирован с небольшим объемом туберкулезного поражения в легком (1-2 сегмента) (р—0,015) (рис. 6)

При определении неравновесия между полиморфизмами генов IL1B и IL1RN показано, что аллель +3953А1 и аллель А1 полиморфизма VNTR находятся в фазе отталкивания, мера неравновесия для них составила -0,033 (р=0,009). При сравнении частоты гаплотипа ILI RN*A\A\HLI В*А\А\ в группах больных туберкулезом и здоровых индивидов найдено, что статистически чаще это сочетание встречается в контрольной выборке (р=0,003). При этом риск заболеть туберкулезом у носителей этого гаплотипа был равен 0,50. Таким образом, гаплотип ILIRN*AIA\/IL/ В*А\ А1 имеет протективный эффект и защищает его обладателя от заболевания туберкулезом.

Рис. 6. Ассоциации исследованных генов с туберкулезом.

При анализировании анамнестических данных показано, что родственники индивидов больных туберкулезом, не имеющие контакта с пробандами, страдают от этого заболевания чаще, чем родственники здоровых людей (OR=3,63, р<0,000). Это свидетельствует о наследственной предрасположенности к туберкулезу.

При сравнении выявленных ассоциаций исследованных генов с ТБ у русских г, Томска и коренных жителей Тувы показаны значительные отличия. Результаты, полученные при изучении тувинского этноса, свидетельствуют о незначительном вкладе исследованных полиморфизмов в формирование подверженности к туберкулезу [Рудко А.А., 2004]. У жителей г. Томска, напротив, получены ассоциации для 5 из 9 исследованных полиморфизмов генов-кандидатов предрасположенности к ТБ. Такие отличия в проявлении эффекта изученных генов, вероятно, обусловлены разным генетическим фоном у русских и тувинцев. Известно, что каждый ген действует не самостоятельно, а во взаимодействии со множеством других генов, следовательно, эффекты генов проявляют зависимость оттого генетического фона, на котором действует ген.

Установлено, что полиморфизмы 469+14G/C гена NRAMP1 и В/b гена VDR не предрасполагают к туберкулезу, однако они оказывают влияние на течение возникшего заболевания. При сравнении распределений генотипов и частот аллелей 469+14G/C гена NRAMP1 в группах больных туберкулезом с деструкцией легочной ткани и больных туберкулезом без деструкции выявлены статистически значимые отличия. Так, частота аллеля 469+14С этого гена в выборке больных с экссудативно-некротическим и пролиферативно-некротическим типом воспалительной реакции была выше, чем в группе больных с пролиферативными и экссудативным типом воспалительной реакции (р=0,027). Кроме того, этот полиморфизм оказался значимым в определении обьема поражения при туберкулезе легких. Частота аллеля 469+14С в группе больных распространенным туберкулезом превышала таковую в группе больных с ограниченной формой заболевания (р=0,016).

Таким образом, можно говорить о вкладе 469+14С аллеля гена NRAMP 1 не только в формирование деструкции при туберкулезе, но и в увеличение зоны поражения. Показано влияние полиморфизма В/b гена VDR на распространенность зоны туберкулезного поражения, поскольку аллель b статистически значимо чаше выявляли у больных с легочным поражением в пределах 1-2 сегментов (р= 0,011).

Обнаружены ассоциации исследованных генов с рядом количественных показателей. Для полиморфизма 1188А/С гена IL12B показана связь с уровнем СОЭ и выраженностью пал очко ядерного сдвига влево лейкоцитарной формулы, при этом аллель 1188С ассоциирован с повышением палочкоядерных нейтрофилов независимо от пола больного (р=0,031), а генотип 1188АС — с значительной степенью повышения СОЭ у женщин (р=0,010) (рис. 7).

Уровень СОЭ у

Ж ILI2B \ женщин f 1188 А/С j

Уровень палочкоядерных / NRAMPI \ нейтрофилов ( 469-14G/C ) v\ /

Деструкция легочной f VDR \ ткани B/b Pv

J * Обьем поражении ткани легкого

Рис. 7. Ассоциации исследованных генов с качественными и количественными, патогенетически значимыми параметрами туберкулеза.

При сравнении показанных ассоциаций исследованных полиморфизмов генов с патогенетически важными параметрами ТБ у русских и тувинцев выявлены различия. У коренных жителей Тувы максимально значимыми с точки зрения прогнозирования клинического течения туберкулезного процесса оказались полиморфизм В/b гена VDR и полиморфизм VNTR гена IL1RN. Для этих генетических маркеров выявлены ассоциации с деструкцией при ТБ, повышением СОЭ и со сдвигом лейкоцитарной формулы влево [Рудко А.А.,2004]. У жителей г. Томска ассоциированными с перечисленными параметрами туберкулеза оказались другие полиморфизмы. Таким образом, при межпопуляционном сравнении генов-кандидатов подверженности к ТБ у русских и тувинцев выявлены отличия, как по генетической структуре популяций, так и по вовлеченности в формирование генетической основы предрасположенности к туберкулезу и его особенностей клинического течения.

Функциональные механизмы, определяющие полученные ассоциации, возможно, связаны с действием продуктов экспрессии этих генов на патогенез заболевания. В случае подтверждения этой гипотезы, аллели 1465-85А гена NRAMP1, 1188С гена IL12B могут стать маркерами предрасположенности к первичному туберкулезу, а аллели 274Т гена NRAMP1, А2 VNTR полиморфизма гена ILIRN, +3953А2 гена IL1B, 1188С гена IL12B - маркерами подверженности к вторичному туберкулезу с деструкцией легочной ткани (рис. 6). Кроме того, зная генотип больного по полиморфизмам 469+I4G/C rvmiNRAMPI и В/b гена VDR, вероятно можно будет прогнозировать течение туберкулезного процесса (рис. 7). В целом, полученные данные позволят глубже проникнуть в патогенез туберкулеза, его отдельных клинических форм, также они представляются важными для формирования представления о связи между частотой аллелей генов-кандидатов ТБ и особенностями распространения этого инфекционного заболевания.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Колоколова, Ольга Валентиновна, Томск

1. Авербах М. М. Иммунология и иммунопатология туберкулеза. М.:1. Медицина, 1976. 311 с.

2. Авербах М. М, Литвинов В. И, Гергерт Г. В. Иммунологические аспектылегочной патологии. М.: Медицина, 1980. - 113 с.

3. Авербах М. М, Гергерт В. Я, Мороз А. М. и др. Современные аспектыфтизиоиммунологии // Сб. трудов ЦНИИТ. 1982. - С. 3-9.

4. Авербах М. М, Мороз А. М, Апт А. С. и др. Межлинейные различиячувствительности мышей к туберкулезу // Иммунология. 1980. - №2. - С. 42-43.

5. Алтухов 10. П. Генетические процессы в популяциях. М.: ИКЦ

6. Академкнига», 2003. 431 с.

7. Алтухов Ю. П, Курбатова О. Л. Наследственность человека и окружающаясреда. М.: Наука, 1984. - С. 7-34.

8. Апт А. С, Никоненко Б. В, Мороз А. М, Авербах М. М. Генетическийанализ факторов, детерминирующих восприимчивость к туберкулезу // Бюл. Эксперимю биол. 1982. - № 12. - С. 83-85.

9. Апт А. С. Генетические аспекты выявления групп риска по туберкулезу //

10. Проблемы туберкулеза. № 10. - С. 65-68.

11. Белиловский Е. М, Борисов С. Е, Дергачев А. В. и др. Заболеваемостьтуберкулезом в России: ее структура и динамика // Проблемы туберкулеза. 2003. - № 7. - С. 4-11.

12. Березовский Б. А, Мостовой Ю. М, Пухлик Б. М, Михей Л. В. Проверкагипотезы мультифакториального типа наследованияпредрасположенности к туберкулезу легких // Проблемы туберкулеза. -1986. №2. - С.24-26.

13. Богадельникова И. В, Сергеев А. С, Агапова Р. К, Перельман М. И.

14. Исследование уровней гетерозиготности у больных туберкулезом легких с различной эффективностью лечения // Вестник РАМН. 2000. - № 3. - С. 15-21.

15. Вахидова Г. А., Еремеев В. В., Убайдуллаев А. М. Иммунологическиемеханизмы патогенеза туберкулеза // Проблемы туберкулеза. 1991. - № 5.-С. 69-71.

16. Вейр Б. Анализ генетических данных. М.: Мир, 1995. - 400 с.

17. Визель А. А., Гурелева М. Э. Туберкулез. М.: ГЭОТАР Медицина, 2000.208 с.

18. Галактионов В. Г. Иммунология. М.: МГУ, 1998. - 440 с.

19. Гамалея Н. Ф. Инфекция и иммунитет. М.: Медицина, 1939. - 280 с.

20. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М.: Практика, 1998. - 459 с.

21. Гольдберг Е. Д. Справочник по гематологии с атласом микрофотограмм.

22. Томск: Изд-во Том. Ун-та, 1989.-468 с.

23. Давыдовский И. В. Проблема причинности в медицине. М.: Медицина,1962.-728 с.

24. Еремеев В. В. Взаимодействие макрофаг-микобактерия в процессе реакциимикроорганизма на туберкулезную инфекцию // Проблемы туберкулеза. -2004.-№8.-С. 3-7.

25. Ерохин В. В. Основные итоги и перспективы работы сотрудничающегоцентра ВОЗ по борьбе с туберкулезом в Российской Федерации. // Проблемы туберкулеза. 2003. - № 3. - С. 11-21.

26. Ерохин В. В. Субклеточная морфология легких при экспериментальномтуберкулезе // Автореф. дис. д-ра мед. наук. М., 1974 - 42 с.

27. Ерохин В. В., Земскова 3. С. Современные представления о туберкулезномвоспалении // Проблемы туберкулеза. 2003. - № 3. - С. 11-21.

28. Животовский JI. А. Интеграция полигеннЫх систем в популяциях.

29. Проблемы анализа комплексных признаков. М.: Наука, 1984. - 183 с.

30. Животовский JT. А. Статистические методы анализа частот генов вприродных попкляциях 11 М.: ВИНИТИ, 1983. Т. 8. - С. 76-104.

31. Земскова 3. С., Дорожкова И. Р. Скрыто протекающая туберкулезнаяинфекция. М: Медицина, 1984. - 224 с.

32. Имангулова М. М., Бикмаева А. Р., Хуснутдинова Э. К. Исследованиеполиморфных локусов D543N и 3-UTR гена NRAMPI у больных инфильгративным туберкулезом легких в Башкортостане // Медицинская генетика. 2004. - № 8. - Т. 4. - С. 376-379.

33. Имангулова М. М., Бикмаева А .Р., Хуснутдинова Э. К. Полиморфизмкластера гена интерлейкина 1 у больных туберкулезом легких // Цитокины и воспаление. 2005. - № 1. - Т. 4. - С. 36-41.

34. Кан Е. Л. Изменения в системе крови и их диагностическое значение /

35. Руководство по туберкулезу органов дыхания. М., 1972. - С. 116-128.

36. Клеточная биология легких в норме и при патологии. / Под ред. В. В.

37. Ерохина, Л. М. Романовой // М.: Медицина, 2000. 469 с.

38. Кноринг Б. Е., Фрейдлин И. С., Симбирцев А. С. и др. Характерспецифического иммунного ответа и продукция цитокинов мононуклеарами крови больных разными формами туберкулеза легких // Медицинская иммунология. 2001. - Т. 3. - № 1. - С. 61 -69.

39. Кобринский Б. А. Формирование групп риска и прогноз развитиязаболеваний // Вестник АМН. 1987. - № 4. - С. 85-89.

40. Краснов В. А. Калачев И. В. Степанов Д. В. и др. Перспективы развитияпротивотуберкулезной помощи населению Сибири. // Проблемы туберкулеза. 2003. - № 5. - С. 3-6.

41. Лакин Г. Ф. Биометрия. М.: Наука, 1990. - 300 с.

42. Лильин Е. Т., Трубников В. И., Ванюков М. М. Введение в современнуюфармакогенетику // М.: Медицина, 1984. 160 с.

43. Литвинов В. И., Чуканова В. П., Маленко А. Ф. и др. Проблемыиммуногенетики болезней легких // Сборник трудов ЦНИИ туберкулеза МЗ СССР. 1983. -Т. 37. -С. 16-19.

44. Литвинов В. И., Гергерт В. Я., Мороз А. М. и др. Иммунологиятуберкулеза: современное состояние проблемы // Вестник РАМН. 1999. - №7. - С. 8-11.

45. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбук Дж. Методы генетической инженерии.

46. Молекулярное клонирование. М.: Мир, 1984. - 480 с.

47. Меньшиков В. В. Лабораторные методы исследования в клинике. М.:1. Медицина, 1987. 350 с.

48. Мороз А. М. Иммуногенетические механизмы резистентности ктуберкулезу (экспериментальное исследование) / Дис. д-ра мед. наук. — М., 1984.-42 с.

49. Мурашкина Г. С., Алексеева Т. В., Ревякина О. В., Новикова Н. М.

50. Туберкулез в западной Сибири // Современная фтизиатрия и проблемы туберкулеза XXI века. Тезисы докладов. - 1999. - С. 5.

51. Онищенко Г. Г. Эпидемическая ситуация в Российской Федерации и мерыпо ее стабилизации // Проблемы туберкулеза. 2003. - № 11. - С. 4-9.

52. Пальцев М. А. Молекулярная медицина // Вестник молодых ученых.2002. № 4. - С. 64-84.

53. Пальцев М. А. Значение биомедицинских фундаментальных исследованийдля фтизиатрии // Проблемы туберкулеза. 2004. - № 3. - С. 3-7.

54. Патофизиология: учебник для медицинских вузов / Под ред. В. В.

55. Новицкого, Е. Д. Гольдберга // Томск: Из-во Том. ун-та, 2001. 716 с.

56. Перельман М. И., Хомяков Ю. Н., Киселев В. И. и др. Молекулярнаямедицина и лечение туберкулеза // Проблемы туберкулеза. 2001. - № 5. -С. 5-7.

57. Перельман М. И. Основные итоги противотуберкулезной работы в России в2001 г. // Проблемы туберкулеза. 2003. - № 2. - С. 3-11.

58. Пименов E. В, Тотолян А. А, Бывалов А. А. и др. Современныепредставления о патогенезе инфекционных заболеваний // Вестник РАМН. 2003. - № 6. - С. 3-9.

59. Покровский В. И, Авербах М. М, Литвинов В. И, Рубцов И. В.

60. Приобретенный иммунитет и инфекционный процесс. М.: Медицина, 1979.- 280 с.

61. Пузик В. И, Уварова О. А, Авербах М. М. Патоморфология современныхформ легочного туберкулеза. М.: Медицина, 1973. - 244 с.

62. Пузырев В. П. Генетика мультифакториальных заболеваний: междупрошлым и будущим // Медицинская генетика. 2003. - Т.2. № 12. - С. 498-508.

63. Пузырев В. П, Никитин Д. Ю, Напалкова О. В. Ген NRAMP1: структура,функция и инфекционные болезни человека // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2002. - №3. - С.34-40.

64. Пузырев В. П, Степанов В. А. Патологическая анатомия генома.

65. Новосибирск: Наука, 1997. 224 с.

66. Рабухин А. Е. Туберкулез органов дыхания у взрослых. М.: Медицина,1976.-328 с.

67. Рабухин А. Е. Исторический очерк развития учения о туберкулезе.

68. Руководство по туберкулезу. М, 1959 - 134 с.

69. Рабухин А. Е. Эпидемиология и патогенез легочного туберкулеза.- М,1948 120 с.

70. Ридер Г. Л. Эпидемиологические основы борьбы с туберкулезом // Пер. сангл. М.: Весь Мир.-2001.- 192 с.

71. Ройт А. Основы иммунологии. М.: Мир, 1991. - 327 с.

72. Ройт А, Бростофф Дж, Мейл Д. Иммунология. М.: Мир, 2000. - 592 с.

73. Рудко А. А. Аллельные варианты генов подверженности к туберкулезу утувинцев / А.А. Рудко: Автореф. дисс. канд. мед. наук. Томск, 2004. - 20с.

74. Рудко А. А., Ондар Э. А., Фрейдин М. Б., Пузырев В. П. Полиморфизмгенов NRAMPI и IL12B у больных туберкулезом Республики Тыва / Сборник тезисов «Вопросы сохранения и развития здоровья населения Севера и Сибири» / Красноярск, 2003. С. 372-374.

75. Рудко А. А., Фрейдин М. Б. Генетика предрасположенности к туберкулезу /

76. Генетика человека и патология: Сборник научных трудов / Под. ред. В. П. Пузырева. Вып. 6. - Томск: «Печатная мануфактура». — 2002. - С. 170176.

77. Рудко А. А., Фрейдин М. Б. Генетические основы подверженности ктуберкулезу // Тихоокеакский медицинский журнал. 2002. - №1(8). - С. 61-61.

78. Рудко А. А., Фрейдин М. Б., Пузырев В. Г1. Полиморфизм генов NRAMPI и1.12B у больных туберкулезом Республики Тыва / Сборник тезисов 13-го национального конгресса по болезням органов дыхания / Санкт-Петербург, 2003. С. 289.

79. Сабадаш Е. В., Павлов В. А., Кравченко М. А. и др. К вопросу оформировании естественной резистентности к туберкулезу / Материалымеждун. конф. «Туберкулез старая проблема в новом тысячелетии», 1-5 июля 2002г. -М.: Медицина и жизнь. - С. 150-151.

80. Селедцова Г. В., Козлов В. А. Иммунорегуляторные свойствамоноцитов/макрофагов у больных туберкулезом легких // Проблемы туберкулеза. 1991. - № 5. - С. 54-56.

81. Сергеев А. С., Богадельникова И. В., Агапова Р. К., Перельман М. И.

82. Анализ уровней гетерозиготности по локусам PL, TF, PGM1, ACPI, HP, GC, GLOl, СЗ и ESD у больных туберкулезом легких с различной эффективностью лечения // Генетика. 2001. - Т.37. № 12. - С. 1673-1680.

83. Симбирцев А. С. Цитокины новая система регуляции защитных силорганизма // Цитокины и воспаление. 2002. - Т. 1 .№ 1. - С. 9-16.

84. Скворцова JI. А., Павлова М. В., Виноградова Т. И., Арчакова JI. И.

85. Комплексная терапия туберкулеза легких с применением рекомбинантных интерлейкинов // Проблемы туберкулеза. 2003. - № 10. - С. 9-12.

86. Скутко А. Я. Особенности клиники деструктивных и кавернозных формтуберкулеза легких у впервые выявленных больных // Врачебное дело. -1970. -№ 12.-С. 61-65.

87. Состояние противотуберкулезной помощи населению сибирского идальневосточного федеральных округов по итогам работы в 2003 году / Под ред. В. А. Краснова // Новосибирск. 2004. - 122 с.

88. Справочные материалы по эпидемиологии туберкулеза в Сибирском и

89. Дальневосточном федеральном округах / Выездное заседание президиума СО РАМН 19 мая 2004 г., г. Новосибирск.

90. Стрелис А. К. Актовая речь // Современная фтизиатрия и проблемытуберкулеза XXI века. Томск, 1999. - 69 с.

91. Стрелис А. К. Туберкулез сегодня инфекционный агрессор и бомбазамедленного действия / Сборник трудов международной научно-практической конференции «Проблемы туберкулеза и современные путиих решения», 7-8 октября 2004 г. Томск. - С. 19-23.

92. Струков А. И. Формы легочного туберкулеза в морфологическомосвещении. М., 1948. - 160 с.

93. Струков А. И. Кауфман О. Я. Гранулематозное воспаление игранулематозные болезни. М: Медицина, 1989. - 184 с.

94. Тотолян А. А., Фрейдлин И. С. Клетки иммунной системы. СПб.: Наука,2000.-231 с.

95. Туберкулез. Руководство для врачей / Под ред. А. Г. Хоменко. М.:1. Медицина, 1996.-496 с.

96. Уварова О. А., Ильина Т. Я., Зикеев В. В. Взаимосвязь морфологическихиммунных реакций и характера туберкулезного процесса в легких // Проблемы туберкулеза. 1981. - № 4. - С. 65-68.

97. Урсов И. П. Эпидемиология туберкулеза. Новосибирск, 1997. - 112 с.

98. Флейс Д. Статистические методы для изучения таблиц долей и пропорций.- М.: Финансы и статистика, 1989. 319 с,

99. Фогель Ф., Мотульски А. Генетика человека: Пер. с англ. М.: Мир, 1989.-Т.1-313 с.

100. Фрейдлин И. С. Система мононуклеарных фагоцитов. М., 1984. - 272 с.

101. Хаудамова Г. Т. Риск заболевания туберкулезом основных этническихгрупп Казахстана // Проблемы туберкулеза. 1991. - №4. - С. 22-25.

102. Холмовская М. Б. Исторический очерк развития медико-биологическогоучения о туберкулезе. М., 1997. - 247 с.

103. Хоменко А. Г. Проблемы наследственности при болезнях легких. М.:1. Медицина, 1990.-240 с.

104. Хонина Н. А., Никонов С. Д., Шпилевский С. В. и др. Особенностииммунитета у больных с различными формами туберкулеза легких // Проблемы туберкулеза. 2000. - №1. - С. 30-32.

105. Чуканова В. П., Сергеев А. С., Мороз А. М., Гафуров К. Г. Рольнаследственных факторов при туберкулезе // Проблемы туберкулеза. -1981.-Ml. -С. 46-50.

106. Чуканова В. П., Литвинов В. И., Поспелов Л. Е., Слогоцкая Л. В. Значениефакторов наследственной предрасположенности в развитии и течении легочного туберкулеза // Проблемы туберкулеза. 1995. -№2. - С. 6-9.

107. Чуканова В. П., Поспелов Л. Е., Маленко А. Ф. Значение факторовнаследственной предрасположенности при туберкулезе и других гранулематозных заболеваниях легких // Проблемы туберкулеза. 2001. -№2.-С. 33-36.

108. Шевченко Ю. Л. Борьба с туберкулезом в России на пороге XXI века //

109. Проблемы туберкулеза. 2000. - № 3. - С. 2-5.

110. Шмелев Н. А. Цитологический анализ крови и его значение притуберкулезе. М.: Медицина, 1959. - 112 с.

111. Штефко В. Г. Туберкулез и конституция. Л., 1930. - 240 с.

112. Ярилин А. А. Симбиотические взаимоотношения клеток иммуннойсистемы // Иммунология. 2001. - №4. - С. 16-20.

113. Ярилин А. А. Межклеточная кооперация при иммунном ответе // Вестник

114. РАМН. 1999. - №4. - С. 25-29.

115. Abe Т., Linuma Y., Ando М. et al. Nrampl polymorphisms susceptibility andclinical features of tuberculosis // J. Infect. Dis. 2003. - Vol. 46. - P. 215220.

116. Abel L., Casanova J. L. Genetic predisposition to clinical tuberculosis: bridgingthe gap between simple and complex inheritance // Am. J. Hum. Genet. 2000. -Vol. 67.-P. 274-277.

117. Abel L., Dessein A. J. The impact of host genetics on susceptibility to humaninfectious diseases // Curr. Opin. Immunol. 1997. - Vol. 9. - P. 509-516.

118. Altare F., Jouanguy E., Lamhamedi S. et al. Mendelian susceptibility to mycobacterial infection in man // Curr. Opin. Immunol. 1998. - Vol. 10. - P.413.417.

119. Baghdadi J. E, Remus N, Benslimane A. et al. Variants of the human NRAMP1gene and susceptibility to tuberculosis in Morocco // Int. J. Tuberc. Lung Dis. -2003. Vol. 7(6). - P. 599-602.

120. Barton С. II, Biggs Т. E, Baker S. T. et al. Nrampl: a link between intracellulariron transport and innate resistance to intracellular pathogens // J. Leuk. Biol. 1999.-Vol. 66.-P.757-762.

121. Bellamy R. Genetic susceptibility to tuberculosis in human populations //

122. Thorax. 1998. - Vol. 53. - P. 588-593.

123. Bellamy R. Identifying genetic susceptibility factors for tuberculosis in Africans:a combined approach using a candidate gene study and a genome-wide screen // Clin. Science. 2000. - Vol. 98. - P.245-250.

124. Bellamy R. The natural resistance-associated macrophage protein andsusceptibility to intracellular pathogens // Microbes and Infection. 1999. -Vol. l.-P. 23-27.

125. Bellamy R, Beyers N, McAdam K. P. W. J. et al. Genetic susceptibility totuberculosis in Africans: a genome-wide scan // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. Vol. 97. - P. 8005-8009.

126. Bellamy R, Hill A. V. S. Genetic susceptibility to mycobacteria and otherinfectious pathogens in humans // Cult. Opin. Immunol. 1998. - Vol. 10. - P. 483-487.

127. Bellamy R, Ruwende C, Corrah T. et al. Assessment of the interleukin 1 genecluster and other candidate gene polymorphisms in host susceptibility to tuberculosis // Tuber. Lung. Dis. 1998. - Vol. 79(2). - P. 83-89.

128. Bellamy R, Ruwende C, Corrah T. et al. Tuberculosis and chronic hepatitis Вvirus infection in Africans and variation in the vitamin D receptor gene // J. Infect. Dis. 1999. - Vol. 179. - P. 721-724.

129. Bellamy R, Ruwende C, Corrah T. et al. Variations in the NRAMP1 gene andsusceptibility to tuberculosis in west Africans // N. Engl. J. Med. 1998. - Vol. 338(10).-P. 640-644.

130. Blackwell J. M., Barton С. H., White J. K. et al. Genetic regulation ofleishmanial and mycobacterial infections: the Lsli/lty/Bcg gene story continues // Immunol. Lett. 1994. - Vol. 43. - P. 99-107.

131. Blackwell J. M., Barton С. H., White J. K. et al. Genomic organisation andsequence of the human NRAMP gene: identification and mapping of a promoter region polymorphism // Mol. Med. 1995. - Vol.1. - P. 194-205.

132. Blackwell M. J., Searle S. Genetic regulation of macrophage activation:understanding the function of Nramp 1 (= Ity/Lsh/Bcg ) // Immunol. Lett. -1999.-Vol. 65.-P. 73-80.

133. Bornman L., Campbell S. J., Fielding K. et al. Vitamin D receptorpolymorphisms and susceptibility to tuberculosis in west Africa: a case-control and family study // J. Infect. Dis. 2004. - Vol. 190(9). - P. 1631-1641.

134. Bradley D. J. Regulation of Leishmania populations within the host. II. Geneticcontrol of acute susceptibility of mice to Leishimania donovam infection // Clin. Exp. Immunol. 1977. - Vol. 30. - P. 130-140.

135. Brightbill H. D., Libraty D. H., Krutzik S. R. et al. Host defense mechanismstriggered by microbial lipoproteins through toll-like receptors // Science. -1999. Vol. 285. - P. 732-736.

136. Cadranel J., Hance A. J., Milleron B. et al. The production of l,25(OH)2D3 bycells recovered by bronchoalveolar lavage and the role of this metabolite in calcium homeostasis // Am. Rev. Respir. Dis. 1988. - Vol. 138. - P. 984-989.

137. Canonne-Hergaux F., Gruenheid S., Govoni G., Gros P. The Nramp I protein andits role in resistance to infection and macrophage function // Proc. Assoc. Am. Physicians. 1999.-Vol. 111(4).-P. 283-289.

138. Cellier M., Belouchi A., Gros P. Resistance to intracellular infections:comparative genome analysis of NRAMP II Trends Genet. 1996. - Vol. 92. 1. P. 201-204.

139. Cellier M., Govoni G., Vidal S. et al. Human natural resistance-associated macrophage protein: cDNA cloning, chromosomal mapping, genomic organization, and tissue-specific expression // J. Exp. Med. 1994. - Vol. 180. -P. 1741-1752.

140. Cellier M., Bergevin I., Boyer E. et al. Polyphyletic origins of bacterial Nramptransporters // Trends Genet. 2001. - Vol. 17. - № 7. - P. 365-370.

141. Cervino A. C. L., Lalciss S., Sow O. et al. Fine mapping of a putativetuberculosis susceptibility locus on chromosome -15qll-13 in African families // Hum. Mol. Genet. - 2002. - Vol. 11. - P. 1598-1603.

142. Cervino A. C. L., Lakiss S., Sow O., Hill A. V. S. Allelic association betweenthe NRAMP 1 gene and susceptibility to tuberculosis in Guinea Conakiy // Ann. Hum. Genet. - 2000. - Vol. 64. - P. 507-512.

143. Chan T. Y. Vitamin D deficiency and susceptibility to tuberculosis // Calcif.

144. Tissue. Int. 2000. - Vol. 66(6). - P. 476-478.

145. Chensue S. W., Davey V. P., Remick D. G., Kunkel S. L. Release of interleukin1 by peripheral blood mononuclear cells in patiens with tuberculosis and active inflammation // Infect. Immun. 1986. - Vol. 52, № 1. - P. 341-343.

146. Comstock G. W. Tuberculosis in twins: a reanalysis of the Prophit study // Am.

147. Rew. Respir. Dis. 1978. - Vol. 117. - P. 621-624.

148. Cooper A. M., Kipnis A., Turner J. et al. Mice lacking bioactive IL-12 cangenerate protective, antigen-specific cellular responses to mycobacterial infection only if the IL-12 p40 subunit is present // J. Immun. 2002. - Vol. 168.-P. 1322-1327.

149. Cooper A. M., Magram J., Ferrante J., Orme I. M. Interleukin 12 (IL-12) Iscrucial to the development of protective immunity in mice intravenously infected with Mycobacterium tuberculosis II J. Exp. Med. 1997. - Vol. 186(1). - P. 39-45.

150. Davies P. D., Brown R. C., Woodhead J. S. Serum concentrations of vitamin Dmetabolites in untreated tuberculosis // Throax. 1985. - Vol. 40. - P. 187-190.

151. Denis M. Killing of Mycobacterium tuberculosis within human monocytes:activation by cytokines and cacitriol // Clin. Exp. Immunol. 1991. - Vol. 84. -P. 200-206.

152. Dorman S. E., Holland S. M. Interferon-y and interleukin-12 pathway defectsand human disease // Cytokine Growth Factor Rev. 2000. - Vol. II. - P. 321 -333.

153. Edwards J. H. Familial predisposition in man // Brit. Med. Bull. 1969. - V. 25.-P. 58-64.

154. Falconer D. S. The inheritance of liability to certain diseases, estimated from theincidence among relatives // Ann. Hum. Genet. 1965. - V. 29. - P. 51-76.

155. Fine P. E. M. Immunogenetics of susceptibility to leprosy, tuberculosis andleishmaniasis: An epidemiological perspective // Int. J. Leprosy. 1981. - Vol. 49. - P. 437-454.

156. Flynn J. L., Goldstein M. M., Triebold K. J. et al. IL-12 increasis resistance of

157. BALB/c mice to mucobacterium tuberculosis infection // J. Immunol. 1995. -Vol. 155.-P. 2515-2524.

158. Flynn J. L., Chan J., Triebold K. J. et al. An essential role for interferon gammain resistance to mucobacterium tuberculosis infection // J. Exp. Med. 1993. -Vol. 178.-P. 2249-2254.

159. Forget A., Skamene В., Gros P. et al. Differences in response among inbredstrains of mtce to infection with small doses of mycobacterium bovis (BCG) // Infect. Immun. 1981. - Vol. 32. - P. 42-50.

160. Gao P. S., Fujishima S., Mao X.-Q. et al. Genetic variants of NRAMPI andactive tuberculosis in Japanese populations // Clin. Genet. 2000. - Vol. 58. -P. 74-76.

161. Giovine F. S., Takhsh E., Blakemore A. I. F., Duff G. W. Single basepolymorphism at-511 in the human interleykin-1 (3 gene // Hum. Mol. Genet. -1993.-Vol. 1.- P. 450.

162. Golli V., Ghitulescu I., Ionescu N. et al. Clinical and epidemiologicalsignificance of isolated culture Koch bacillus after conclusion of chemotherapy //Pneumoftiziol. 1981.-Vol. 30, №1.-P. 55-58.

163. Govoni G., Gros P. Macrophage NRAMP 1 and its role in resistanse to microbialinfections // Inflam. Res. 1998. - Vol. 47, №7. - P. 277-284.

164. Govoni G., Vidal S., Gauthier S. et al. The Bcg/Ity/Lsh Locus: genetic transfer ofresistance to infections in C57BL/6J mice transgenic for the NramplGiyi69 allele // Infect. Immun. 1996. - Vol. 64. - P. 2923-2929.

165. Greenwood С. M. Т., Fujiwara Т. M., Boothroyd L. J. et al. Linkage oftuberculosis to chromosome 2q35 loci, including NRAMP 1, large aboriginal Canadian family // Am. J. Hum. Genet. 2000. - Vol. 67. - P. 405-416.

166. Griffin M. D., Xing N., Kumar R. Vitamin D and its analogs as regulators ofimmune activation and antigen presentation // Annu. Rev. Nutr. 2003. - Vol. 23.-P. 117-145.

167. Gros P., Skamene E., Forget A. Genetic control of natural resistance to

168. Mycobacterium bovis (BCG) in mice // J. Immunol. 1981. - Vol. 127, №6. -P. 2417-2421.

169. Gruenheid S., Gros P. Genetics susceptibility to intracellular infections: Nrampl,macrofage function and divalent cations transport // Curr. Opin. Microbiol. -2000. Vol. 3. - P. 43-48.

170. Gruenheid S., Pinner E., Desjardins M., Gros P. Natural resistance to infectionwith intracellular pathogens: the Nramp 1 protein is recruited to the membrane of the phagosome // J. Exp. Med. 1997. - Vol. 185. - P. 717-730.

171. Hall M. A., McGlinn E., Coakley G. et al. Genetic polymorphism of IL-12 p40gene in immunemediated disease // Genes and Immunity. 2000. - Vol. 1. - P. 219-224.

172. Нага Н., Matsushima Т., Soejima R. et al. A tuberculosis epidemic. An outbreakof cases in a furniture company // Kekkaku. 1982. - Vol. 57, №9. - P. 491496.

173. Hill A. V. S. Genetics and genomics of infectious disease susceptibility // Brit.

174. Med. Bull. 1999.-Vol. 55, №2.-P. 401-413.

175. Hill A. V. S. The immunogenetics of human infectious disease // Annu. Rev.1.munol. 1998. - Vol. 16. - P. 593-617.

176. Hill W. G. Estimation of linkage disequilibrium in random mating populations //

177. Hereditary. 1974. - Vol. 33. - P. 229-479.

178. Jackett P. S., Aber V. R., Lowrie D. B. Virulence of Mycobacterium tuberculosisand susceptibility to peroxidative killing systems // J. Gen. Microbiol. 1978. -Vol. 107(2).-P. 273-278.

179. Kallman F. J., Reisner D. Twin studies on the significance of genetic factors intuberculosis // Am. Rev. Tuberc. 1942. - Vol. 47. - P. 549-574.

180. Kameda K., Kuchii N., Horii F. et al. A study on the family contacts examinationof tuberculosis patients // Kekkaku. 1983. - Vol. 58, №1. - P. 33-37.

181. Kindler V., Sppino A. P., Grau G. E. ct al. The inducing role of tumor necrosisfactor in the daveloptment of bactericidal granulomas during BCG infection // Cell. 1989. - Vol. 56. - P. 731-740.

182. Knight J. C., Kwiatkowski D. Inherited variability of tumor necrosis factorproduction and susceptibility to infectious disease // Proc. Assoc. Am. Physicians. 1999. - Vol. 111. - № 4. - P. 290-298.

183. Kramnik I., Dietrich W. F., Demant P., Bloom B. R. Genetic control ofresistance to experimental infection with virulent Mycobacterium tuberculosis

184. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. - Vol. 97(15). - P. 8560-8565.

185. Labuda M, Ross M. V, Fujiwara Т. M. et al. Two hereditary defects related tovitamin D metabolism map to the same region of human chromosome 12q.ll // Cytogenet. Cell Genet. 1991. - Vol. 58. - P. 1978.

186. Lahiri D. K, Bye S, Nunberg J. I. et al. Anon-organic and non-enzymaticeztraction method gives higher yields of genomic DNA from whole-blood samples than do nine other methods used // J. Biochem. Biophys. Methods. — 1992.-Vol. 25.-P. 193-205.

187. Liu J, Fujiwara Т. M, Buu N. T. et al. Identification of polymorphisms andsequence variants in the human homologue of the mouse natural resistance — associated macrophage protein gene // Am. J. Hum. Genet. 1995. - Vol. 56. -P. 845-853.

188. Liu W, Cao W. C, Zhang C. Y. et al. VDR and NRAMPl gene polymorphismsin susceptibility to pulmonary tuberculosis among the Chinese Han population: a case-control study // Int. J. Tuberc. Lung Dis. 2004. - Vol. 8(4). - P. 428434.

189. Lurie M. B, Zappasodi P, Dannenberg A. M, Weiss G. H. On the mechanismof genetic resistance to tuberculosis and its mode of inheritance // Am. J. Hum. Genet. 1952. - Vol. 4. - P. 302-314.

190. Lynch C. J, Pierce-Chase С. H, Dubos R. A genetic study of susceptibility toexperimental tuberculosis in mice infected with mammalian tubercle bacilli // J. Exp. Med.- 1965.-Vol. 121.-P. 1051-1070.

191. Malo D, Vogan K, Vidal S. et al. Haplotype mapping and sequence analysis ofthe mouse Nramp gene predict susceptibility to infection with intracellular parasites // Genomics. 1994. - Vol. 23. - P. 51-61.

192. Marquet S, Lepage P, Hudson T. J. et al. Complete nucleotide sequence andgenomic structure of the human NRAMPl gene region on chromosome region 2q35 // Mamm. Genome. 2000. - Vol. 11. - P. 755-762.

193. Mohan V. P., Scanga C. A., Yu K. Effects of Tumor Necrosis Factor alpha onhost immune respons in chronic persistent tuberculosis: possible role for limiting Pathology // Infect. Immun. 2001. - № 3. - P. 1847-1855.

194. Myrvik Q., Leake E. Wright M. Disruption of fhagosomal membranes of normalalveolar macrophages by the H37Rv strain of M. tuberculosis. A correlate of virulence // Am. Rev. Resp. Dis.— 1984. — Vol. 129. P. 322-328.

195. Nei M. Molecular population genetics and evolution. New York, Amsterdam:

196. North-Holland publishing companu, Oxford American Elsevier publishing company, 1975.-288 p.p.

197. Nelson N. Metal ion transporters and homeostasis // EMBO J. 1999. - Vol. 18.-P. 4361-4371.

198. Nicklin M. J. H., Weith A., Duff G. W. A physical map of the region encompassing the human interleykin-1 -alpha, interleykin-l-beta, and interleykin-1 receptor antagonist genes // Genomics. 1994. - Vol. 19. - P. 382-384.

199. Noben-Trauth N., Schweitzer P. A., Johnson K. R. et al. The interleukin-12 betasubunit (p40) maps to mouse chromosome 11 // Mamm. Genome. 1996. -Vol. 7.- P 392.

200. North R. J., Medina E. How important is Nrampl in tuberculosis? // Trends

201. Microbiol. 1998. - Vol. 6, №11. - P. 441-443.

202. Oppmann В., Lesley R., Blom B. et al. Novel p19 protein engages IL-12p40 toform a cytokine, IL-23, with biological activites similar as distinct from IL-12 // Immunity. 2000. - Vol. 13. - P. 715-725.

203. Orme I. M., Cooper A. M. Cytokine / chemokine cascades in immunity totuberculosis // Immunol. Today. 1999. - Vol. 20. - P. 307-311.

204. Ottenhoff Т. H. M., Verreck F. A. W., Lichtenauer-Kaligis E. G. R. et al.

205. Genetics, cytokines and human infectious disease: lessons from weakly pathogenic mycobacteria and salmonellae // Nature Genetics. 2002. - Vol. 32.-P. 97-104.

206. Patterson D., Jones C., Hart I. et al. The human interleukin-1 receptor antagonist1.1RN) gene is located in the chromosome 2ql4 region // Genomics. 1993. — Vol. 15.-P. 173-176.

207. Pearce N. What does the odds ratio estimate in a case-control study? // Int. J.

208. Epidemiol. 1993.-Vol. 26 №6.-P. 1189-1192.

209. Pociot F., Molving J., Wogensen L. et al. A TaqI polymorphism in the humaninterleykin-1 beta (IL-1 beta) gene correlates with IL-1 beta sacretion in vitro // Eur. J. Clin. Invest. 1992. - Vol. 22. - P. 396-402.

210. Rigby W. F. The immunobiology of vitamin D // Immunol. Today. 1988.1. Vol. 9.-P. 54-58.

211. Rook G. Role of activated macrophages in the immunopathology of tuberculosis

212. Brit. Med. Bull.— 1988.— Vol. 44, № 3,— P. 611—623.

213. Rook G., Steele J., Fraher L. et al. Vitamin D3, gamma interferon, and control ofmucobacterium tuberculosis by human monocytes // Immunology. 1986. — Vol. 57.-P. 159-163.

214. Roth D. E., Soto G., Arenas F. et al. Association between vitamin D receptorgene polymorphisms and response to treatment of pulmonary tuberculosis // J. Infect. Dis. 2004. - Vol. 190(5). - P.920-927.

215. Ryu S., Park Y. 1С., Bai G. H. et al. 3'UTR polymorphisms in the NRAMPI geneare associated with susceptibility to tuberculosis in Koreans // Int. J. Tuberc. Lung Dis. 2000. - Vol. 4, № 6. - P. 577-580.

216. Schlesinger L. S. Entry of Mycobacterium tuberculosis into mononuclearphagocytes // Curr. Top. Mycrobiol. Immunol. 1996. - Vol. 215. - P. 71-96.

217. Schlesinger L. S. Role of mononuclear phagocytes in M. tuberculosispathogenesis // J. Invest. Med. 1996. - Vol. 44. - P. 312-323.

218. Selvaraj P., Kurian S. M., Uraa H. et al. Influence of non-MHC genes onlymphocyte response to Mycobacterium tuberculosis antigens and tuberculinreactive status in pulmonary tuberculosis // Indian J. Med. Res. 2000. - Vol. 112.-P. 86-92.

219. Servaraj P., Narayanan P. R., Reetha A. M. Association of vitamin D receptorgenotypes with the susceptibility to pulmonary tuberculosis in femele patients and resistance contacts // Indian J. Med. Res. 2000. - Vol. 111. - P. 172-179.

220. Sevaraj P., Narayanan P. R., Reetha A. M. Association of functional mutanthomozygotes of the mannose binding protein gene with susceptibility to pulmonary tuberculosis in India // Tuberc. Lung. Dis. 1999. - Vol. 79. - P. 221-227.

221. Sieburth D., Fabs E. W., Warrington J. A. et al. Assignment of NKSF/IL-12, aunique cytokine composed of two unrelated subunits, to chromosomes 3 and 5 // Genomics. 1992. - Vol. 14. - P. 59-62.

222. Skamene E., Kongshavn P. A. L., Landy M. Genetic control of natural resistanceto infection and malignancy New York: Academic Press., 1980. - 280 p.p.

223. Skamene E. The Beg gene story // Immunobiology. 1994. - Vol. 191. - P. 451460.

224. Soborg C., Andersen А. В., Madsen H. O. et al. Natural resistance-associatedmacrophage protein 1 are associated with microscopy-positive tuberculosis // J. Infect. Dis. 2002. - Vol. 186 - № 4. - P. 517-521.

225. Spielman R. S., McGinnis R. E., Ewens W. J. Transmission test for linkagedisequilibrium: the insulin gene region and insulin-dependent diabetes mellitus (IDDM) // Am. J. Hum. Genet. 1993. - Vol. 52. - P. 506-516.

226. Spielman R. S., Ewens W. J. The TDT and other family-based tests for linkagedisequilibrium and association // Am. J. Hum. Genet. 1996. - V. 59. - P. 983989.

227. Stead W. W. Genetics and resistance to tuberculosis: could resistance beenhanced by genetics engineering? // Ann. Int. Med. 1992. - Vol. 116. - P. 937-941.

228. Stead W. W., Senner J. W., Reddick W. Т., Lofgren J. P. Racial differences insusceptibility to infection by Mycobacterium tuberculosis // N. Engl. J. Med. -1990. Vol. 322. - P.422-427.

229. Tarlow J. K., Blakemore I. F., Lennard A. et al. Polymorphism in human IL-1receptor antagonist gene intron 2 is caused by variable numer of an 860-bp tandem repeat// Hum. Genet. 1993. - Vol. 91. - P. 403-404.

230. Uitterlinden A. G., Fang Y., Meurs J. B. et al. Genetics and biology of vitamin Dreceptor polymorphisms // Gene. 2004. - Vol. 338(2). - P. 143-156.

231. Vidal S. M., Malo D., Vogan K. et al. Natural resistance to infection withintracellular parasites: isolation of a candidate for Beg // Cell. 1993. - Vol. 73, №3. - P. 469-485.

232. Walker L., Lowrie D. B. Killing of Mycobacterium microti by immunologicallyactivated macrophages // Nature. 1981. - Vol. 293. - P. 69-71.

233. Wilkinson R. J., Lieweiyn M., Toossi Z. et al. Influence of vitamin D deficiencyand vitamin D receptor polymorphisms on tuberculosis among Gujarati Asians in west London: a case-control study // Lancet. 2000. - Vol. 355. - P. 618621.

234. Wilkinson R. J., Patel P., Llewelyn M. et al. Influence of Polymorphism in the

235. Genes for the Interleukin (IL)-l Receptor Antagonist and IL-1(3 on Tuberculosis // J. Exp. Med. 1999. - Vol. 189 (12). - P. 1863-1873.

236. Yang Y. S., Kim S. J., Kim J. W., Koh E. M. NRAMPI gene polymorphisms inpatients with rheumatoid arthritis in Koreans // J. Korean Med. Sci. — 2000. № 15.-P. 83-87.

237. Zaahl M. G., Robson K. J. H., Warnich L. et al. Expression of SLC11A1

238. NRAMPI) 5'-(GT)n repeat: Opposite effect in the presence of 237C —> T // Blood Cells, Molecules, and Diseases. - 2004. - Vol. 33. - P. 45-50.