Анализ генетических ассоциаций и структура наследственной предрасположенности клещевым инфекциям

Напалкова, Оксана Васильевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Анализ генетических ассоциаций и структура наследственной предрасположенности клещевым инфекциям
ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Анализ генетических ассоциаций и структура наследственной предрасположенности клещевым инфекциям"

□03485639

На правах рукописи

НАПАЛКОВА Оксана Васильевна

АНАЛИЗ ГЕНЕТИЧЕСКИХ АССОЦИАЦИЙ И СТРУКТУРА НАСЛЕДСТВЕННОЙ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТИ КЛЕЩЕВЫМ

ИНФЕКЦИЯМ

03.00.15 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

- з ДЕК 2009

ТОМСК - 2009

003485639

Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Научно-исследовательском институте медицинской генетики Сибирского отделения РАМН и в Государственном образовательном учреждении Высшего профессионального обучения «Сибирский государственный медицинский университет Росздрава»

академик РАМН,

доктор медицинских наук, профессор Пузырев Валерий Павлович

доктор медицинских наук, профессор Букреева Екатерина Борисовна

кандидат медицинских наук Макеева Оксана Алексеевна

Красноярский государственный медицинский университет им. профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого

Защита состоится года в_час. на заседании

диссертационного совета Д?Й 001.045.01 при Учреждении Российской академии медицинских наук НИИ медицинской генетики Сибирского отделения РАМН по адресу: 634050 г. Томск, Набережная реки У шайки, д. 10

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Учреждения Российской академии медицинских наук НИИ медицинской генетики Сибирского отделения РАМН, г. Томск

Автореферат разослан «_» «ноября» 2009 г.

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук

Кучер А.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Проблема природно-очаговых клещевых трансмиссивных инфекций, таких как клещевой энцефалит (КЭ), иксодовые клещевые боррелиозы (ИКБ) и их сочетаипые формы (микст-инфекция (МИ)) чрезвычайно актуальна для большинства территорий Российской Федерации [Злобин и др., 1996; Коренберг, 1996; 2006; Матущенко и др., 1998; Покровский, 2000; Онищенко, 2003; Лобзин и др., 2003]. Объясняется это ежегодным ростом заболеваемости, наличием тяжелых и хронических форм клещевых инфекций, нередко приводящих к инвалидизацни трудоспособного населения. Томская область входит в число эндемичных территорий Западно-Сибирского региона по этим инфекциям [Жукова, 2003], ежегодно регистрируется 17-20 тысяч случаев присасывания клещей и до 1000 случаев заболеваний клещевыми инфекциями (КЭ и ИКБ) [Шихин и др., 2008].

Для данного ареала, как и для большинства других эндемичных регионов, характерна сочетанность природных очагов клещевых инфекций: диких естественных и сформировавшихся в связи с деятельностью людей. Паразитарные системы очагов клещевых инфекций (ИКБ и КЭ) включают одни и те же виды переносчиков - клещей рода Ixodus (Ixodiis persulcatus (/. persulcatus)\ Ixodus ricinus (/. riciniis)). Эти системы в экологическом отношении имеют много общих черт, что в свою очередь, определяет большое сходство в эпидемиологии указанных этиологически различных инфекций. Кроме того, общность переносчиков создает предпосылки для возникновения МИ [Коренберг, 1993; Лобзин, 2000].

С точки зрения генетического анализа, большая часть заболеваний человека и признаков не следуют простому менделевскому принципу моногенного наследования, а являются результатом действия многих генетических факторов в сочетании с воздействиями среды и случайными причинами, то есть имеют мультифакториальную природу. К категории мультифакториальных признаков, помимо прочих, относится и наследственная составляющая чувствительности к инфекциям [Пузырев и др., 2005]. Генетические факторы в значительной мере определяют восприимчивость организма к различным заболеваниям, в том числе инфекционным. Наличие в геноме человека совокупности генов, определяющих такую предрасположенность, обусловливает особенности защитного реагирования макроорганизма на инвазию патогенов [Пименов и др., 2003]. Известно, что тяжесть протекания инфекционных заболеваний обусловлена сложным комплексом взаимодействия паразита и хозяина, при этом иммунный статус последнего играет столь же важную роль, что и тип возбудителя, вызвавшего заболевание. В настоящее время все большее внимание исследователей направлено на изучение генетических основ подверженности к инфекциям различной природы. Неуклонно растет число исследований генетических ассоциаций с инфекционными заболеваниями человека, включая полногеномные ассоциативные исследования. Тем не менее, малоизученными остаются индивидуальные особенности иммуногенетического ответа макроорганизма-хозяина на возбудителей клещевых инфекций, а именно вируса клещевого энцефалита (ВКЭ) и спирохету - Borrclia burgdorferi sensu lato {В. burgdorferi s. /.).

Таким образом, представляется актуальным изучение роли генов-кандидатов и их сочетаний в подверженности клещевому энцефалиту, иксодовому клещевому боррелиозу и микст-инфекции.

Цель исследования: Оценить роль аллельных вариантов генов подверженности клещевым инфекциям (иксодовому клещевому боррелиозу, клещевому энцефалиту и их сочетанию) у жителей г. Томска. Задачи исследования:

1. Изучить распространенность аллельных вариантов генов NRAMP1 (SLC11A1), IL12B, IL1B, JLlRNy больных клещевыми инфекциями.

2. Провести сравнительный анализ роли полиморфных вариантов изученных генов в подверженности клещевому энцефалиту, иксодовому клещевому боррелиозу и микст-инфекции.

3. Сравнить структуру гаметического неравновесия по аллельным вариантам исследуемых генов у больных клещевыми инфекциями и в контрольной группе.

4. Изучить распределение гаплотипов гена NRAMPI в контрольной выборке и у больных клещевыми инфекциями.

5. Провести анализ связи полиморфных вариантов исследуемых генов с клиническим фенотипом и количественными признаками изучаемых заболеваний.

Научная новнзна: Впервые изучена вовлеченность полиморфных вариантов генов-кандидатов (NRAMPI, IL12B, 1L1B, IL1RN) в формирование предрасположенности иксодовому клещевому боррелиозу, клещевому энцефалиту, мйкст-инфекции у жителей г. Томска.

Впервые изучены гаплотипы гена NRAMPI, образованные тремя полиморфизмами у больных клещевыми инфекциями. Впервые проведено исследование взаимосвязи полиморфных вариантов генов NRAMPI, IL12B, IL1B, IL1RN с качественными и количественными признаками, патогенетически значимыми в развитии клещевых инфекций.

Положения, выносимые на защиту:

1. Полиморфные варианты гена NRAMPI и генов интерлейкинов (IL12B, IL1B, IL1RN) ассоциированы с клещевыми инфекциями.

2. Гаплотип GAD гена NRAMPI, образованный тремя полиморфизмами (469+14G/C; 1465-85G/A; D543N), является предрасполагающим к развитию клещевых инфекций (клещевому энцефалиту, иксодовому клещевому боррелиозу, микст-инфекции), гаплотип GGD обладает протективным значением в отношении клещевых инфекций.

3. Изменчивость генов NRAMPI, IL12B, IL1RN является одним из факторов формирования клинического полиморфизма клещевого энцефалита, ик-содового клещевого боррелиоза и микст-инфекции, оказывая влияние на варьирование количественных и качественных, патогенетически значимых для заболеваний признаков.

Научно-практическая значимость:

Полученные данные об особенностях распределения частот аллелей и генотипов у больных клещевыми инфекциями дополняют фундаментальные знания о генетической компоненте этих инфекций. Материалы работы могут быть использованы в учебно-методическом процессе на медицинских факультетах ВУЗов.

С практической точки зрения сведения о роли полиморфных вариантов генов-кандидатов в подверженность клещевым инфекциям, а также в формировании клинического полиморфизма заболеваний, могут быть учтены при организации профилактических мероприятий.

Апробация работы:

Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на межлабораторных научных семинарах НИИ медицинской генетики СО РАМН (Томск, 2001, 2002), Второй Всероссийской школе по экологической генетике «Симбиогенетика и эволюция» (Санкт-Петербург, 2001), международной конференции «Развитие международного сотрудничества в области изучения инфекционных заболеваний» (Новосибирск, 2004), И международной конференции «Молекулярная медицина и биобезогтасность» (Москва, 2005), Российской научной конференции с международным участием «Медико-биологические аспекты мультифакториальной патологии» (Курск, 2006).

Публикации: по теме диссертации опубликовано 10 работ, из них 3 в центральной печати.

Структура и объем диссертации: Диссертационная работа изложена на 156 страницах машинописного текста и состоит из введения, трех глав («Обзор литературы», «Материалы и методы» и «Результаты и их обсуждение»), заключения, выводов, приложения и списка литературы. Данные проиллюстрированы 2 рисунками и 32 таблицами. Библиографический указатель включает 213 источника, из них 114 зарубежных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Выборка больных ИКБ, КЭ, МИ была сформирована на базе лечебно-профилактических учреждений г. Томска. Набор материала проводился в терапевтическом отделении медико-санитарной части «Строитель» (главный врач — H.H. Бартфельд, заведующий отделением - О.В. Буров), в инфекционном отделении госпитальных клиник ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава (главный врач — Заслуженный врач РФ, канд. мед. наук В.М. Шевелев, заведующая отделением -канд. мед. наук, доцент Н.С. Бужак), инфекционном отделении городской больницы ЖЗ г. Томска (главный врач — канд. мед. наук М.А. Лукашев, заведующая отделением - Г.В. Западаева), инфекционном отделении Тимирязевской районной больницы (заведующая отделением - Горошникова B.C.) в период с 2001 по 2003 гг. Диагностика и клиническое обследование больных изучаемой инфекционной патологии проводились квалифицированными сотрудниками перечисленных учреждений.

Диагноз клещевых инфекций верифицировался на основании эпидемиологического анамнеза (учет пребывания больного в эндемичных районах; ука-

зание в анамнезе на посещение леса; факт присасывания клеща; соответствие сезона (активность клещей в весенне-летнем периоде) и начала болезни; удаление присосавшегося клеща с людей или животных, употребление в пищу сырого козьего молока и клинико-лабораторных исследований. Установление диагноза проводилось по критериям МКБ-10, а также с использованием классификации, разработанной сотрудниками кафедры нервных болезней совместно с кафедрой инфекционных болезней СибГМУ.

Группа больных КЭ состояла из 101 человека (средний возраст ±S.D.=42,08±15,96). Группа больных ИКБ включала 117 человек (средний возраст ±S.D.=46,33±12,90). Группа больных МИ состояла из 89 человек (средний возраст ±S.D.=47,24±15,01). Общее количество пациентов клещевыми инфекциями (КШ - объединенная группа, включающая больных с ИКБ, КЭ, МИ - составило 307 человек.

В качестве контрольной группы использовалась популяционная выборка, сформированная для настоящего исследования на основе ДНК-банка НИИ медицинской генетики СО РАМН. Все лица, вошедшие в эту группу, по национальности были русскими. Выборку составили индивиды не родственные между собой и не имеющие в анамнезе клещевых инфекций. В группу вошли 118 человек (средний возраст ±S.D.=64,3±18,0).

Для проведения молекулярно-генетических исследований у больных КЭ, ИКБ, МИ проводился забор венозной крови в количестве 5-10 мл. Выделение ДНК проводили по стандартной неэнзиматической методике [Маниатис и др., 1984; Lahiri et al., 1992].

Изучено 6 полиморфных локусов 4 генов-кандидатов подверженности клещевым инфекциям. Перечень маркеров приведен в табл. 1. Выделенную ДНК замораживали и хранили при температуре -20°С до проведения эксперимента. Генотипирование осуществляли с помощью ПДРФ-анализа продуктов полимеразной цепной реакции (ПЦР), используя описанную в литературе структуру праймеров и соответствующие ферменты рестрикции.

Распределение генотипов по исследованным полиморфным локусам проверяли на соответствие ожидаемому при равновесии Харди-Вайнберга (РХВ) с помощью точного теста Фишера [Вейр, 1995] и G-модифицированного критерия, используемого для низко полиморфных локусов [Животовский, 1991]. Для сравнения частот аллелей между различными группами использовали критерий % с поправкой Йетса на непрерывность. Ожидаемую гетерозиготность рассчитывали по Ней [Nei, 1987]. Об ассоциации разных генотипов, их комбинаций, а также гаплотипов с заболеваниями судили по величине отношения шансов (odds ratio (OR)) [Pearce, 1993]. Расчеты гаметического неравновесия между парами аллельных вариантов исследованных генов производили по Хилл [Hill, 1974]. Для оценки частот гаплотипов и проведения исследования «случай-контроль» по галлотипам использовалась программа «PHASE v. 2.02» [Stephens et al. 2001]. Для анализа ассоциации маркеров исследуемых генов с качественными признаками (патогенетически значимыми для КИ) использовали точный тест Фишера.

Для анализа ассоциации маркеров исследуемых генов с количественными, патогенетически значимыми для изучаемых инфекций признаками, проводили сравнение средних значений уровней метрических показателей у носителей различных генотипов с помощью непараметрическнх тестов Краске-ла-Уоллиса и Манна-Уитни [Лакин, 1990; Гланц, 1998].

Таблица 1

Характеристика исследованных полиморфизмов

Ген Полиморфизм Локализация в гене Фермент рестрикции Литература

NRAMPI 469+14G/C Интрон 4 Apal Liu et al„ 1995

1465-85G/A Интрон 13 Bsell

D543N Экзон 15 В те 181

IL12 AU88C З'-UTR TaqI Hall et al., 2000

IL1B +3953А1/А2 Экзон 5 Taql Wilkinson et al., 1999

IL1RN VNTR Интрон 2 - Tarlow et al., 1993

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Распространенность аллельных вариантов генов NRAMP1, IL12B, IL1B, IL1RN в группах больных клещевыми инфекциями

В контрольной выборке распределение генотипов по всем исследованным полиморфным вариантам изученных генов соответствовало ожидаемым при равновесии Харди-Вайнберга (РХВ). В объединенной группе больных КИ (клещевой энцефалит, иксодовый клещевой боррелиоз и микст-патология) для большинства изученных полиморфных вариантов распределение генотипов соответствовало ожидаемым при РХВ. Для варианта 1188А/С гена IL12B было показано отклонение наблюдаемого распределения генотипов от ожидаемого при РХВ (з^=4,65; р<0,05), при этом наблюдаемое количество гетерозигот 1188АС превышало ожидаемое в 1,12 раза, относительное отклонение наблюдаемой гетерозиготности (Hobs) от ожидаемой гетерозиготности (Нехр) составило +0,1235.

У больных КЭ, а также у больных МИ по всем изученным полиморфным вариантам гена NRAMP1 (469+14G/C, D543N, 1465-85G/A), генов интерлейки-нов (полиморфизм 1188А/С гена IL12B; полиморфизм +3953А1/А2 гена ILIB; VNTR полиморфизм гена IL1RN) распределение генотипов соответствовало ожидаемому при РХВ.

В группе больных иксодовым клещевым боррелиозом для всех изученных локусов наблюдаемое распределение генотипов соответствовало ожидаемому, за исключением варианта 469+14G/C гена NRAMP1 (х2=4,74; G=4,47; р<0,05). При этом ожидаемое количество гомозигот 469+14СС превышало наблюдаемое в 3,8 раза. Уровень наблюдаемой гетерозиготности этого полиморфного варианта был больше ожидаемого (D=+0,2221). Помимо этого, в группе больных ИКБ отмечалось отклонение наблюдаемого распределения генотипов от ожидаемого при РХВ для полиморфизма +3953А1/А2 гена IL1B (х2=9,10; р<0,05) за счет недостатка наблюдаемого количества гетерозигот А1А2, относительное отклонение Hobs от Нехр составило -0,2800. Наблюдаемое количество гомозигот А2А2 равно 13,8% и превышает ожидаемое в 1,7 раза.

Анализ связи полиморфных вариантов гена NRAMP1 с подверженностью клещевым инфекциям

Сравнительный анализ частот генотипов и аллелей гена NRAMP1 контрольной группы с различными нозологическими формами клещевых инфекций позволил выявить ряд ассоциаций. Для варианта 469+14G/C установлено статистически значимое различие в распределении частот аллелей между больными КЭ и контрольной группой: частота аллеля 469+14С была выше у больных по сравнению со здоровыми (23,3% и 14,8%, соответственно; р=0,023). Но-сительство аллеля 469+14G ассоциируется с пониженным риском развития КЭ (OR=0,57; 95% CI: 0,34-0,96; р=0,033). В тоже время, не получено различий в распределении частот генотипов между больными КЭ и здоровыми (р=0,069), хотя частота генотипа 469+14GG NRAMP1 у больных КЭ составила 57,43%, что ниже по сравнению с контрольной группой (72,17%). Различий в частотах генотипов и аллелей по аллельному варианту 469+14G/C NRAMP1 между группами контроля и больными ИКБ не установлено. У пациентов с МИ значительно преобладала доля гомозигот 469+14СС по сравнению с индивидами контрольной группы (9,0% и 1,7% соответственно; р=0,035), так же как частота аллеля 469+14С сравнительно выше в группе больных, чем в контрольной группе (24,2% и 14,8% соответственно; р=0,021). Относительный риск развития МИ для индивидов с генотипом 469+14СС увеличивается в 5,58 раз по сравнению с носителями альтернативных генотипов (OR=5,58; 95% CI: 1,06-39,14; р=0,023). Предрасположенность к МИ ассоциировалась с носительством аллеля 469+14С (OR=l,84; 95% CI: 1,08-3,12; р=0,023). Обнаружены существенные различия в распределении генотипов по полиморфизму 469+14G/C гена NRAMP1 при сравнении групп больных, различающихся по этиологическому признаку заболеваний: в 9,0% случаев у больных МИ наблюдали генотип 469+14СС, в то время как у больных ИКБ данный генотип вообще не встречался (р=0,003). Отмечено преобладание доли аллеля 469+14С у больных КИ по сравнению с контрольной выборкой (21,1% и 14,8%, соответственно; р=0,050).

По полиморфизму 1465-85G/A гена NRAMP1 выявлено статистически значимое различие в распределении частот аллелей между больными КЭ и здоровыми: у больных КЭ отмечена более высокая доля аллеля 1465-85А по сравнению с контролем (38,0% и 28,3%, соответственно; р=0,043).Установлено, что

аллель 1465-85G ассоциирован с пониженным риском развития КЭ (OR=0,64; 95% CI: 0,42-0,99; р=0,043). Кроме того, наблюдается преобладание гомозигот 1465-85АА у больных КИ по сравнению с контрольной группой (14,15% и 10,6%, соответственно; р=0,029), при этом показатель относительного риска составил 2,25 (95% CI: 1,08-4,74; р=0,028). Частота аллеля 1465-85А также, сравнительно выше в группе больных, чем в контрольной выборке (37,3% и 28,3%, соответственно; р=0,019). Относительный риск подверженности КИ у носителей 1465-85А аллеля составляет 1,51( 95% CI: 1,07-2,13; р=0,019).

Для полиморфизма D543N гена NRAMP1 распределение генотипов и частот аллелей не различалось между группами больных КИ (объединенная группа), ИКБ, КЭ, МИ как при сравнении со здоровыми (р=0,341-1,000), так и при сравнении между собой (р=1,000).

Известно, что основная роль белка NRAMP1 заключается в защитной функции организма человека от возбудителей различных инфекций за счет участия в транспорте 2-х валентных ионов металлов [Gruenheid et al., 2000]. Согласно одной из теорий, Nrampl действует как мембранный насос, выкачивающий из мембраны фагосомы, содержащей в себе микроорганизм, необходимые для его жизнедеятельности ионы металлов типа Мп2+ и Fe2+ [Fortier et al., 2005]. Таким образом, дефект продукции Nrampl или дисрегуляция его функции могут приводить к нарушению транспортной роли Nrampl и, как следствие - повышенной чувствительности к внутриклеточным патогенам, таким как вирус КЭ. Возможно, данный механизм и объясняет, полученную в настоящем исследовании ассоциацию полиморфных вариантов 469+14G/C и 1465-85G/A гена NRAMPI с КЭ. Сведения о функциональной значимости однонуклеотидных замен 469+14G/C и 1465-85G/A гена NRAMP1 отсутствуют. Не исключено, что они сцеплены с другими вариантами, влияющими на функцию белка.

В тоже время, отсутствие ассоциации аллельных вариантов гена jNRAMPI с ИКБ, в данном исследовании, может быть связано с тем, что В. burgdorferi обладает уникальной способностью к росту без обязательного присутствия ионов железа [Posey et al., 2000; Ruef, 2001]. Механизм связи полиморфного варианта 469+14G/C гена NRAMPI с МИ сложно предположить, поскольку до настоящего времени сведения о взаимодействии В. burgdorferi и ВКЭ противоречивы. Так, показано, что микроорганизмы ведут себя по отношению друг к другу как синергисты [Коренберг, 2001], по данным других исследователей, очевиден выраженный антагонизм между этими двумя типами возбудителей [Алексеев и др., 2001]. Тем не менее, результаты настоящего исследования свидетельствуют о значимой роли гена NRAMPI в развитии КЭ и МИ.

Аналнз неравновесия по сцеплению полиморфных вариантов гена

NRAMPI

Известно, что между неаллельными генами, расположенными близко на хромосоме, может возникнуть неравновесие по сцеплению в силу того, что в процессе мейоза кроссинговер между ними происходит реже, чем между далеко расположенными локусами [Животовский, 1984].

Проведенный анализ неравновесия по сцеплению выявил разнонаправленный характер сцепления в исследуемых группах (табл. 2). В группах больных КИ, КЭ и МИ показано, что в неравновесии по сцеплению, также как и в контрольной группе, находится пара полиморфизмов гена А'КАМР! (1465-850/А и 054314, находящихся на расстоянии 462 п.о. друг от друга). В тоже время не обнаружено неравновесия по сцеплению между другой парой полиморфизмов этого же гена (469+140/С и 1465-85С/А) в группах больных КИ, КЭ, МИ. Группа больных ИКБ характеризовалась иной структурой: пара полиморфизмов 469+140/С и 1465-850/А (расстояние между ними составляет 9267 п.о.) находится в неравновесии по сцеплению в фазе отталкивания (-0,129).

Таблица 2

Сцепление между изученными полиморфными вариантами гена NRAMP1

Варианты Контроль КИ КЭ ИКБ МИ

469+14G/C -1465-85G/A D +0,078 +0,162 -0,011 -0,129 +0,013

X2 29,21 2,05 0,27 31,25 0,390

469+14G/C -D543N D +0,006 +0,003 +0,002 -0,005 +0,013

t 0,85 0,54 0,05 0,74 2,22

1465-85G/A -D543N D +0,017 +0,140 +0,019 +0,004 +0,021

X2 3,48 7,57 5,04 0,271 3,998

Примечание. Б - мера неравновесия по сцеплению по Хилл, % - для теста на неравновесие по сцеплению. Выделены величины, для которых достигнутый уровень значимости составил 5% и менее.

Анализ частот гаплотипов гена NRAMP1

Исследование структуры гаплотипов, образованных тремя полиморфными маркерами 469+14G/C, 1468-85G/A, D543N гена NRAMP1 методом «случай-контроль» выявило 8 вариантов гаплотипов, четыре из которых (GGD, GAD, CGD, CAD) явились наиболее распространенными как в группе контроля, так и в группах больных КИ, КЭ, ИКБ, МИ и в сумме от общего числа возможных вариантов их частота составила 95%; 95%; 97%; 98%; 96%, соответственно (табл. 3).

Анализ частот гаплотипов показал достоверное отличие (р=0,01) между больными КИ и контрольной группой. Гаплотип GGD встречался у больных КИ в 50% случаев против 65% в группе контроля. Гаплотип GAD чаще регистрировался в группах больных КИ, КЭ, ИКБ и МИ с частотой от 23% до 26% по сравнению с контролем (16%). Гаплотип CGD также чаще регистрировался в группах больных КИ (11%), КЭ (12%), МИ (12%) в сравнении с контролем (5%) и группой больных ИКБ (6%). Гаплотип CAD не отличался по своему процентному соотношению в группе КИ и контроля. Установлена ассоциация гагшоти-

пов гена NRAMP1 с КИ (р=0,01), КЭ (р=0,01) и МИ (р=0,01) (табл. 3). Кроме того, при сравнении частот гаплотипов было зарегистрировано, что гаплотип GAD имеет рисковую значимость для подверженности КИ (OR=l,67; 95% CI: 1,12-2,50; р=0,011); КЭ (OR=l,78; 95% CI: 1,08-2,94; р=0,022); ИКБ (OR=l,72; 95% CI: 1,06-2,80; р=0,028); МИ (OR=l,41; 95% CI: 1,01-1,98; р=0,045).

Таблица 3

Анализ частот гаплотипов гена NRAMP1 (469+14G/C, 1465-8SG/A, D543N)

Гаплотип Контроль, % Больные КИ, % Больные КЭ, % Больные ИКБ, % Больные МИ, %

GGD 65 50 49 56 51

GAD 16 25 26 25 23

CGD 5 11 12 6 12

CAD 9 9 10 11 10

Р 0,01 0,01 0,07 0,01

Примечание, р - уровень значимости, достигнутый при сравнении каждой группы больных с контрольной выборкой.

В свою очередь гаплотип GGD демонстрирует протективную роль в отношении всех групп изученных заболеваний: КИ (OR=0,56; 95% CI: 0,41-0,78; рО,01)04); КЭ (OR=0,52; 95% С1: 0,35-0,79; р=0,0014); ИКБ (OR=0,67; 95% CI: 0,45-0,99; р=0,046); МИ (OR=0,67; 95% CI: 0,45-0,99; р=0,046).

Ассоциация генов цнтокинов (IL12B, IL1B и IL1RN) с клещевыми

инфекциями

IL-12 секретируется макрофагами, моноцитами, В-лимфоцитами в ответ на индукцию микробными компонентами и продуктами, активирует дифферен-цировку Т-лимфоцитов, повышает их цитотоксическую активность, усиливает пролиферацию естественных киллеров, Т-лимфоцитов и продукцию других ци-токинов. Главный эффект IL-12 - индукция синтеза INF-y [Тотолян, Фрейдлин, 2000]. Наряду с другими провоспалительными (IL-1, IL-6, IL-8, TNF-a и др.) цитокинами, IL-12 принимает участие в патогенезе ИКБ, усиливая клеточно-опосредованный иммунный ответ и способствуя успешной противоинфекцион-пой защите [Тотолян, Фрейдлин, 2000; Миноранская, 2007].

В настоящем исследовании установлена ассоциация гена IL12B (полиморфизм 1188А/С) с ИКБ. При этом, у больных по сравнению с контрольной группой преобладали генотипы 1188АС (44,3% и 29,0%, соответственно; р=0,012) и 1188СС (3,5% и 0,9%, соответственно; р=0,012). Гетерозиготное но-сительство генотипа 1188АС ассоциировано с повышенным риском подверженности ИКБ (OR=l,95; 95% CI: 1,08-3,54; р=0,025). Наиболее распространенным в группе ИКБ является аллель 1188С, частота которого составила 25,7%, в то время как в контрольной группе аллель 1188С встречался в 15,4% случаев (р=0,011).

При сравнении группы больных КИ и здоровыми индивидами зарегистрировано статистически значимое различие в распределении генотипов и частот аллелей: гомозиготный генотип 1188СС гена IL12B зафиксирован у 3,3% больных и 0,9% у здоровых (р=0,012), аллель 1188С встречался у 23,4% больных КИ и у 15,4% индивидов в контрольной группе (р=0,018).

Имеются сведения, что генотип 1188АА гена IL12B ассоциирован с повышением экспрессии IL12B in vitro [Morahan et al., 2001], а аллель 1188C IL12B связан с пониженной экспрессией IL-12B [Stanilova, Miteva, 2005]. Следовательно, полученная в нашем исследовании ассоциация аллеля 1188С гена IL12B с ИКБ может быть обусловлена недостаточностью иммунного ответа у этих индивидов на внедрение В. burgdorferi.

Согласно данным последних лег, полиморфизм генов цитокинов, включая семейство IL-1, оказывает заметное влияние на предрасположенность к ряду заболеваний, в том числе инфекционной природы [Громова, Симбирцев, 2005].

Известно, что IL-ip, являясь провоспалительным цитокином, участвует в защитной функции организма [Ройт, 2000; Тотолян, 2005]. В патогенезе ИКБ провоспалительный медиатор - IL-1 играет важную роль, участвуя в активации Т-клеток и способствуя формированию острого, а затем хронического воспаления [Федоров и др., 1999]. На поздней стадии боррелиоза IL-1 стимулирует синтез коллагеназы и простагландиноподобных веществ, которые вызывают деградацию коллагена и соединительных тканей сустава [Ющук и др., 1999]. Показано, что В. burgdorferi обладает способностью стимулировать продукцию IL-1 [Федоров и др., 1999]. Повышенная продукция IL-1 важна для успешной клеточной защиты против внутриклеточно паразитирующих микроорганизмов [Тотолян и др., 2000]. Но, в отношении ИКБ ситуация выглядит несколько иначе. Частым проявлением заболевания на различных стадиях патогенеза является поражение опорно-двигательного аппарата. Получены данные о том, что у пациентов с Лайм-артритом с высокой концентрацией рецепторного антагониста IL-1 и низкой концентрацией 1L-1B отмечается быстрое разрешение атак артрита, обратное же соотношение характеризует торпидный и длительный артрит [Федоров и др., 1999]. Известно, что аллель А2 полиморфизма +3953 А1/А2 гена IL1B ассоциирован с повышенной экспрессией продукта этого гена [Коненков и др., 2003, Имангулова и др., 2005].

Выявлено статистически значимое различие в распределении генотипов и частот аллелей по полиморфному варианту +3953А1/А2 гена IL1B между больными ИКБ и здоровыми. Преобладающим у больных был генотип А2А2 по сравнению с контрольной группой (13,8% и 4,3%, соответственно, р=0,039). Носительство генотипа А2А2 ассоциировано с повышенным риском подверженности ИКБ (OR=3,58; 95% CI: 1,18-11,65; р=0,021). Кроме того, в группе больных ИКБ в сравнении с контрольной группой также чаще встречался аллель +3953А2 (28,4 % и 20,1 %, соответственно; р=0,046). Помимо этого, получены различия по частотам аллелей между больными МИ и контролем (р=0,026). У больных в сравнении с контрольной группой преобладающим был аллель А2IL1B (30,1 % и 20,1 %, соответственно).

Продукт гена 1L1RN является рецепторным антагонистом IL1B, он выполняет функцию специфического блокатора биологического действия IL1B. Показано, что аллель А2 VNTR полиморфизма во втором нитроне приводит к увеличению продукции белка IL1RN даже в гетерозиготном состоянии [Wilkinson е: al., 1999]. Установлено различие в распределении частот генотипов VNTR гена IL1RN между группой больных КЭ и контрольной выборкой: гетерозиготный генотип Al А2 чаще регистрировался у больных, чем в контроле (35,6% и 16,9%; р=0,017). Аллель А2IL1RNассоциирован с КЭ, его частота у больных составила 29,6%, а у индивидов контрольной группы - 17,9% (р=0,013). Кроме того, у больных ИКБ частота аллеля А2 1L1RN (17,0%) была почти в два раза ниже, чем у больных КЭ (р=0,002) и МИ (р=0,022). Помимо этого, показаны различия между исследуемыми группами, связанные с относительным преобладанием аллеля А1 (р<0,05) у больных ИКБ по сравнению с группами больных КЭ и МИ.

Анализ гаметического неравновесия

Известно, что под воздействием факторов популяционной динамики (естественного отбора) «сцепленными» могут оказаться гены, локализованные на разных хромосомах [Животовский, 1984]. Исследуемые гены расположены следующим образом: NRAMP1, ILIB, IL1RN - на второй хромосоме, a IL12B - на пятой хромосоме. Анализ гаметического неравновесия между всеми исследованными полиморфными вариантами генов показал некоторые особенности сочетания аллелей по несцепленным локусам у больных по сравнению с контрольной группой и различия между группами больных. Различия в структуре гаметического неравновесия показаны для пары локусов 469+14G/C гена NRAMP1 и 1188А/С гена IL12B: в контрольной группе полиморфные варианты находятся в фазе притяжения (+0,078), а в объединенной группе больных клещевыми инфекциями - в фазе отталкивания (-0,023). В ряде случаев гаметиче-ское неравновесие отмечалось либо только в контрольной группе, либо у больных (табл. 4). Так, в контрольной группе аллельный вариант D543N гена NRAMP1 оказался в фазе притяжения с полиморфизмом VNTR гена IL1RN (+0,017). Кроме того, в фазе отталкивания находились аллели 1465-85G гена NRAMP1 н 1188А гена 1L12B, 469+14G гена NRAMP1 и +3953А1 гена IL1B, мера сцепления для них была -0,089 и -0,028, соответственно.

В объединенной группе больных клещевыми инфекциями в фазе притяжения оказались часто встречающиеся аллели полиморфизмов 1465-85G/A гена NRAMP1 и VNTR гена IL1RN (+ 0,027). В группе больных КЭ гаметическое неравновесие показано для пары полиморфных вариантов 1188АУС гена IL12B и +3953А1/А2 гена IL1B, которые находятся в фазе притяжения (+0,049). В группах больных ИКБ и МИ статистически значимых различий не выявлено (табл. 4).

Анализ комбинаций генотипов

Кроме анализа ассоциаций с отдельными полиморфными вариантами генов NRAMP1, IL12B, ILIB, IL1RN изучены ассоциации различных попарных комбинаций генотипов с заболеваниями.

Таблица 4

Гаметическое неравновесие между парами исследованных полиморфных вариантов

Варианты Контроль КИ КЭ ИКБ МИ

NRAMP1 (469+14G/C) - IL12B (1188 А/С) +0,078* -0,023* -0,028 -0,000 -0,028

NRAMP1 (469+14G/C) -IL1B (+3953А1/А2) -0,028* +0,002 +0,019 +0,003 -0,019

NRAMP1 (469+14G/C) - 1L1RN (VNTR) -0,007 +0,013 +0,009 +0,008 +0,014

NRAMP1 (1465-85G/A) - IL12B (1188А/С) -0,089* -0,019 -0,010 -0,021 -0,024

NRAMP1 (1465-85G/A) - IL1B (+3953А1/А2) -0,013 +0,002 -0,005 +0,015 -0,019

NRAMP1 (1465-85G/A) - IL1RN (VNTR) -0,007 +0,027* +0,035 +0,018 +0,032

NRAMP1 (D543N) - IL12B (1188А/С) -0,004 -0,002 +0,002 -0,008 +0,005

NRAMP1 (D543N) - IL1B (+3953А1/А2) -0,000 -0,004 -0,006 +0,003 -0,014

NRAMP1 (D543N) - IL1RN (VNTR) +0,017* -0,002 -0,009 -0,005 +0,003

IL12B (1188А/С) - IL1B (+3953А1/А2) +0,026 +0,001 +0,049* -0,018 +0,020

IL12B (1188А/С) - 1L1RN (VNTR) -0,006 -0,006 +0,008 -0,004 -0,017

LIB (+3953А1/А2) - /¿/Ж (VNTR) -0,017 -0,004 -0,013 -0,025 +0,017

Примечание. Указаны значения меры гаметического неравновесия по Хилл и соответствующего уровня х2 для геста на неравновесие по сцеплению. Выделены величины, для которых достигнутый уровень значимости составил 5% и менее.

Согласно полученным данным, выявлена «общая» геногипическая комбинация, обладающая протективным действием.

Комбинация генотипов 469+14GG и 1465-85GG полиморфизмов гена NRAMP1 играет протективную роль для трех заболеваний: КЭ (C)R=0,28; 95% CI: 0,15-0,54; р=0,00004); ИКБ (OR=0,47; 95% CI: 0,26-0,83; р=0,008); МИ (C)R=0,35; 95% CI: 0,18-0,67; р=0,001). Выявлены разные рисковые комбинации генотипов для КЭ и ИКБ (табл. 5).

Так, в группе больных КЭ комбинации генотипов GC и GG полиморфизмов 469+14G/C и 1465-85G/A гена NRAMP1 демонстрируют предрасполагающий к заболеванию эффект (OR=3,48; 95% CI: 1,11-11,58, р=0,029). Сочетание комбинаций генотипов 1465-85GA NRAMP1 и +3953Л1А2 1ЫВ (OR=3,05; 95% CI: 1,37-6,88, р=0,04) 469+14GC NRAMP1 и А1А2 IL1RN (OR.=4,37; 95% CI: 4414,18, р=0,006) также показали ассоциацию с повышенным риском предрасположенности КЭ.

Таблица 5

Рисковые комбинации генотипов в отношении развития _клещевых инфекций__

Комбинация генотипов КЭ ИКБ

OR (95%С1) Р OR (95%С1) Р

469+14GC и 1465-85GG NRAMP1 3,48 (1,11-11,58) 0,029 -

469+14GC NRAMP1 и А1А2IL1RN 4,37 (1,44-14,18) 0,006 - -

1465-85GA NRAMP1 и +3953А1А21L1B 3,05 (1,37-6,88) 0,004 - - '

469+14GC NRAMP1 и 1188AC/ZJ25 - - 3,64 (1,21-11,70) 0,018

543DD и 1465-85GA NRAMP1 - - 1,79 (1,00-3,20) 0,05

543DD NRAMP1 и 1188АСЯ.725 - - 2,04 (1,11-3,76) 0,019

543DD NRAMPI и +3953А2А2IL1B - - 3,85 (1,13-14,35) 0,027

+3953А1А1IL1B и 1188AC/L/2S - - 2,65 (1,29-5,52) 0,006

11SSАС IL12B и A\A2IL1RN - - 2,89 (1,02-8,60) 0,045

Примечание. (Ж - значение отношения шансов; 95% С1 - 95% доверительный интервал; р - уровень значимости, достигнутый точным критерием Фишера.

Для группы больных МИ не выявлено ни одной комбинации, имеющей рисковую значимость.

Таким образом, анализ ассоциаций комбинаций генотипов исследуемых локусов показал разные сочетания рисковых комбинаций подверженности КЭ и ИКБ. Вероятнее всего, это обусловлено различными патогенетическими механизмами изучаемых заболеваний.

Анализ ассоциации полиморфизмов генов 1УЯАМР1,1Ы2В, 11,1 В, 1ЬШМ с различными формами, степенью тяжести клещевого энцефалита, иксодовмх клещевых боррелиозов, микст-инфекции

Проведена оценка роли полиморфизмов исследуемых генов в формировании клинической картины заболеваний. Установлена связь с клиническими формами КЭ и микст-инфекции.

При сравнении распределений частот генотипов между группами больных стертой и лихорадочной форами КЭ получены различия лишь по полиморфизму Б543М гена КГИАМР1 (р=0,039). Генотип 54ЭОЫ встречался в группе со стертой формой в 16% случаев, в то же время, в группе с лихорадочной формой КЭ - в 2,9% случаев (рис. 1). По остальным полиморфизмам статистически значимых различий не показано (р>0,05). Анализ частот аллелей и генотипов по исследуемым генам в группах пациентов с различной степенью тяжести КЭ также не показал отличий.

Р543М ЫИАМР1

% 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

Рис. 1. Частоты генотипов в группе больных КЭ с различными формами.

Анализ ассоциаций с изученными полиморфными вариантами исследуемых генов в группе больных ИКБ с наличием или отсутствием клинического маркера - мигрирующей эритемы и различной степенью тяжести, значимых отличий не показал. В тоже время показаны статистически значимые различия по полиморфизму 1465-850/А гена ЫИАМР1 в группе больных МИ по частотам генотипов, ассоциированные с эрятемными и безэритемными формами ИКБ (0,0% и 45,6%, соответственно; р=0,011), а также показаны различия в распределении частот аллелей: в группе больных с эритемной формой преобладал аллель 1465-85А (р=0,012) (рис. 2).

97,1

I I 2,9 О О

ОР ОЫ NN

[¡'1 Стертая ш Лихорадочная \

'\465-S5GIANRAMP1

90 ВО

ЭС вЛ АА б А

яЭригемная п Безэритемная

Рис. 2. Частоты генотипов и аллелей у больных с МИ (при сравнении групп с эритемными и безпритемными формами ИКБ).

Выявлено статистически значимое различие в распределении генотипов по аллельному варианту 1188А/С гена 1Ы2В при сравнении степеней тяжести ИКБ в группе больных МИ (р=0,036) (рис. 3).

100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

1188А/С И12В

70.6

50,9 49,1

26,5

0 2>9

АА

АС

I ПЛеская ■ Средняя!

СС

Рис. 3. Частоты генотипов у больных с МИ (при сравнении групп с легкой и средней степенью тяжести ИКБ).

Анализ ассоциаций исследованных генов с количественными признаками клещевого энцефалита, иксодового клещевого боррелиоза и микст-инфекции

Обнаружены ассоциации исследованных генов с рядом количественных фенотипов. У больных ИКБ обнаружены ассоциации двух полиморфизмов гена NRAMP1 с количеством моноцитов и уровнем а-амилазы.

Полиморфизм 469+14G/C ассоциирован с моноцитопенией (р=0,030). Среднее количество моноцитов у обладателей генотипа 469+14GG составило 5,94%, в то время как для носителей генотипа 469+14GC этот показатель равнялся 4,49%. В исследовании, проведенном Пироговой Н.П. с соавт. (2003), показаны изменения лейкоцитарной формулы у больных ИКБ, характеризующиеся преходящей моноцитопенией. Причем уровень моноцитов в начале и в разгаре заболевания составлял 6,24%±0,32 и 4,30% ±0,22, соответственно, а в периоде клинического выздоровления и у здоровых доноров - 7,57%±0,26 и 7,20%±0,27, соответственно. Механизм моноцитопении, возможно, обусловлен усиленной миграцией моноцитов из периферической крови в очаг воспаления, что свойственно разгару заболевания, который в ряде случаев проявляется воспалительной реакцией кожи [Пирогова и др., 2003].

Полиморфизм D543N гена NRAMP1 проявил ассоциацию с повышением уровня фермента - а-амилазы (р=0,002). Причем, у гомозиготных обладателей генотипа 543DD среднее количество а-амилазы составляет 18,15 ммоль/л, а у пациентов с гетерозиготным генотипом 543DN почти в 1,5 раза больше - 27,15 ммоль/л. Повышенный уровень амилазы свидетельствует о вовлеченности в патологический процесс поджелудочной железы. Данный факт объясним, поскольку для ИКБ характерна полиорганность поражения.

Помимо этого, выявлена ассоциация полиморфизма VNTR гена ILIRN с повышенным уровнем палочкоядерных нейтрофилов в группе больных ИКБ (р=0,034). У здоровых жителей г. Томска показатели находятся в пределах от 1,7% до 5,5% [Гольдберг, 1989]. Хотя в доступной литературе нет сведений о палочкоядерном сдвиге лейкоцитарной формулы влево при ИКБ, но подобные изменения характерны для многих бактериальных инфекций. Кроме того, об увеличении количества незрелых гранулоцитов при ИКБ свидетельствуют данные других исследователей [Пирогова и др., 2003]. У пациентов с гетерозиготным генотипом А1А2 и гомозиготным генотипом А2А2 отмечается повышение количества палочкоядерных нейтрофилов (6,08% и 12,80%, соответственно). Известно, что аллель А2 VNTR полиморфизма приводит к увеличению продукции белка IL1RN даже в гетерозиготном состоянии [Wilkinson et al., 1999]. Что, в свою очередь, обусловливает иммунную реакцию в ответ на внедрение В. burgdorferi повышением палочкоядерных нейтрофилов.

Также, была выявлена связь трансверсии 1188А/С гена IL12B с уровнем лейкоцитов: в группе с генотипом 1188АА количество лейкоцитов составило 5,54x109/л, а в группе с генотипом 1188(АС+СС) - 5,02x10% (р=0,039). Общее количество лейкоцитов у здорового человека колеблется от 4,5 до 8x10% [Гольдберг, 1989]. Полученную ассоциацию можно расценить как прогностически нейтральную для ИКБ поскольку средний уровень лейкоцитов при любом

варианте гена оставался в пределах нормы. Более того, лейкоцитоз при ИКБ обнаруживается достаточно редко [Иванов и др., 1998; Лобзин и др., 2000].

Для полиморфизмов генов NRAMP1,1L12B, IL1B не показано связи с изученными количественными признаками КЭ.

По аллельному варианту 469+14G/C гена NRAMP1 выявлена ассоциация с уровнем лейкоцитов у больных МИ (р=0,039). В норме уровень лейкоцитов равен 4,5-8х109/л [Гольдберг, 1989]. Средний уровень лейкоцитов у индивидов с генотипом 469+14GG составил 5,51х109/л, а у индивидов с генотипом 469+14GC - 6,17х109/л.

Полиморфизм 469+14G/C гена NRAMP1 проявил ассоциацию с уровнем сегментоядерных нейтрофилов (р—0,033) в группе больных МИ. Среднее количество сегментоядерных нейтрофилов для обладателей генотипа 469+14GG составило 54,41%, в то время как для носителей генотипа 469+14GC этот показатель равнялся 58,1%. В норме у здоровых уровень сегментоядерных нейтрофилов составляет 42,9% - 59,3% [Гольдберг, 1989]. Таким образом, выявленные ассоциация по полиморфизму 469+14G/C гена NRAMP1 прогностически нейтральны для МИ, поскольку средние уровни лейкоцитов, сегментоядерных нейтрофилов при том и другом варианте гена оставались в пределах нормы.

Генотип 1188АА гена IL12B ассоциирован со снижением уровня тимоловой пробы (р=0,027), хотя показатели находятся в пределах нормальных величин. Генотипы 1188АС и 1188СС гена IL12B, напротив, оказались связанными с более высокими цифрами, которые также являются вариантом нормы.

Заключение

В рамках настоящего исследования впервые осуществлен молекулярно-генетический анализ вовлеченности генов-кандидатов в предрасположенность широко распространенным и социально значимым инфекционным заболеваниям, таким как клещевой энцефалит, иксодовый клещевой боррелиоз и микст-патология у жителей Западной Сибири (Томская область). Сравнительный анализ частот аллелей и генотипов исследуемых генов между здоровыми и больными клещевыми инфекциями позволил выявить ассоциацию полиморфных маркеров генов NRAMP1, IL12B, IL1B, IL1RN с подверженностью к трем изученным заболеваниям. Ранее, в работах других исследователей, указывалось на возможную роль этих генов в предрасположенность к различным инфекционным заболеваниям. Ассоциации перечисленных генов с клещевыми инфекциями установлены впервые. Кроме того, важно отметить различную направленность полученных ассоциаций генных маркеров с изученными заболеваниями.

Так, было выявлено, что с риском подверженности клещевому энцефалиту ассоциированы два полиморфизма (469+ 14G/C; 1465-85G/A) гена NRAMP1 и полиморфный вариант VNTR гена JL1RN; с иксодовым клещевым боррелиозом - полиморфизмы 1188А/С гена IL12B; +3953А1/А2 гена IL1B; VNTR гена IL1RN; с микст-инфекцией - 469+14G/C гена NRAMP1; +3953А1/А2 гена IL1B.

Оценка связи гаплотипов гена NRAMP1 с риском подверженности клещевым инфекциям проводилась впервые. Гаплопш GAD значительно чаще встречался в группах больных по сравнению с контролем, а гаплотип GGD чаще ре-

гистрировался в контрольной группе. Проведенный анализ распределения частот гаплотипов в контрольной группе жителей г. Томска показал, что указанные варианты являются довольно частыми (16% и 65%, соответственно).

Проведенный анализ неравновесия по сцеплению выявил разнонаправленный характер сцепления в исследуемых группах. В группах больных КИ, КЭ и МИ показано, что в неравновесии по сцеплению, также как и в контрольной группе, находится пара полиморфизмов гена А1ЯАМР1 (1465-850/А и Э543М). В отличие от контроля не обнаружено неравновесия по сцеплению между другой парой полиморфизмов этого же гена (469+140/С и 1465-85С/А) в указанных группах больных. Для больных иксодовым клещевым боррелиозом отмечено неравновесие по сцеплению между указанным! полиморфными вариантами.

При анализе сочетаний генотипов были получены следующие данные: комбинация генотипов 469+140й и 1465-8500 гена ЫКЛМР! демонстрирует протективный эффект в отношении как клещевого энцефалита, так и иксодово-го клещевого боррелиоза и микст-инфекции. В тоже время, выявлены разные комбинации генотипов, ассоциированные с повышенным риском подверженности данным заболеваниям.

Проведена также оценка роли полиморфизмов ШАМР1, 1Ы2В, 1ЫВ, 1ЫЯЫ в формировании клинической картины заболеваний: проанализирована связь изученных генетических вариантов с клиническими формами и тяжестью течения КЭ, ИКБ и микст-инфекции. При сравнении распределений частот генотипов между группами больных стертой и лихорадочной форами КЭ получены результаты лишь по варианту Э543К гена МКАМР! (р=0,039), по другим полиморфизмам статистически значимых различий не показано. Анализ частот аллелей и генотипов по исследуемым генам в группах пациентов с различной степенью тяжести КЭ также не показал отличий. Исследование ассоциаций в группе больных ИКБ с наличием или отсутствием клинического маркера мигрирующей эритемы, а также групп, различающихся по степени тяжести заболевания, значимых отличий не показал. В то же время установлены значимые различия в отношении частот генотипов и аллелей по полиморфизму 1465-850/А гена ЫКАМР1 у больных микст-инфекцией с эритемными и безэритем-ными формами ИКБ (р=0,011 и р=0,012, соответственно) и по полиморфизму 1188А/С гена 1Ы2В в группе больных МИ при сравнении степеней тяжести ИКБ (р=0,036).

Показано, что исследованные полиморфные варианты генов ассоциированы с количественными признаками, значимыми в патогенезе клещевых инфекций. Необходимо отметить некоторые особенности полученных результатов. Так, например, при ИКБ полиморфизм гена Ы11АМР1 469+140/С оказался ассоциированным с моноцитопенией, а аллельный вариант Б5431^ этого же гена связан с повышенным уровнем амилазы, хотя отсутствовала связь указанного гена с «конечным» фенотипом - заболеванием. Полиморфный вариант \TSITR гена 1Ы1Ш связан с увеличенным количеством палочкоядерных нейтрофилов при ИКБ. Не выявлено связи полиморфизмов генов НКЛМР!, 1Ы2В, 1ЫВ с изученными количественными признаками КЭ.

В целом, полученные данные свидетельствуют о важном вкладе полиморфизма генов NRAMP1, IL12B, ILIB, ILIRN в подверженность КЭ, ИКБ и микст-инфекции, а также в формирование клинического фенотипа этих заболеваний.

ВЫВОДЫ

1. Установлена значимость аллельных вариантов гена NRAMP1 в патогенезе клещевого энцефалита (полиморфные маркеры 469+14G/C; 1465-85G/A) и микст-инфекции (полиморфный вариант 469+14G/C). Не обнаружено связи полиморфизмов гена NRAMP1 с развитием иксодового клещевого борре-лиоза. Показана вовлеченность генов цитокинов в патогенез иксодового клещевого боррелноза (полиморфизмы 1188А/С гена IL12B\ +3953А1/А2 гена IL1B), клещевого энцефалита (VNTR гена IL1RN)', микст-инфекции (+3953А1/А2 гена 1L1B).

2. В группах больных КИ, КЭ, МИ и контрольной в неравновесии по сцеплению находятся полиморфизмы (D543N и 1465-85G/A) гена MRAMPI, а в группе больных иксодовым клещевым боррелиозом и контрольной - полиморфные варианты (469+14G/C и 1465-85G/A). В гаметическом неравновесии в контрольной выборке находятся полиморфизмы D543N гена NRAMP1 и VNTR гена ILIRN, у больных клещевым энцефалитом - полиморфизмы 1188А/С гена IL12B и +3953А1/А2 гена IL1B, в группе больных КИ - полиморфизмы 469+14G/C гена NRAMP1 и 118 8А/С гена IL12B.

3. Выявлена ассоциация гаплотипов, образованных тремя полиморфизмами (469+14G/C; 1465-85G/A; D543N) гена NRAMP1 с клещевыми инфекциями (объединенная группа) (р=0,01), клещевым энцефалитом (р=0,01) и микст-инфекцией (р=0,01). Гаплотип GAD, является предрасполагающим к развитию клещевых инфекций, а наиболее часто встречающийся гаплотип GGD во всех случаях демонстрирует протективный в отношении заболеваний эффект.

4. Комбинация генотипов 469+14GG и 1465-85GG гена NRAMP1 связана с низким риском подверженности ко всем изученным заболеваниям (клещевому энцефалиту, иксодовому клещевому боррелиозу и микст-инфекции). Для клещевого энцефалита и иксодового клещевого боррелиоза выявлены разные комбинации генотипов, ассоциированные с повышенным риском развития данных заболеваний.

5. Аллельный вариант D543N гена NRAMP1 ассоциирован с лихорадочной и стертой формами клещевого энцефалита (р=0,039); полиморфизм 1465-85G/A гена NRAMP1 ассоциирован с эритемными и безэритемными формами ИКБ в группе больных микст-инфекцией (р=0,011), а полиморфный вариант 1188А/С гена IL12B - с легкой и средней степепыо тяжести ИКБ в группе больных МИ (р=0,036).

D543N гена NRAMP1 с повышенным уровнем амилазы (р=0,002); для МИ полиморфизм 469+14G/C гена NRAMP1 ассоциирован с количеством лейкоцитов

(р=0,039) и сегментоядерных нейтрофилов (р=0,033), 1188А/С гена IL 12В - с

уровнем тимоловой пробы (р=0,027).

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Никитин Д.Ю., Напалкова О.В. Связь полиморфизма гена NRAMP1 с восприимчивостью (резистентностью) к инфекционным заболеваниям // Сборник материалов международного симпозиума "Молекулярные механизмы генетических процессов и биотехнологии" - Минск. - 2001. - С. 324-325.

2. Пузырев В.П., Никитин Д.Ю., Напалкова О.В. Ген NRAMPJ: Структура, функция и инфекционные болезни человека // Молекулярная генетика микробиология и вирусология. - 2002. - № 3. - С. 34 - 40.

3. Напалкова О.В., Бабенко С.А. Исследование взаимосвязи полиморфизма гена NRAMPJ с клещевым энцефалитом, иксодовым клещевым боррелиозом и микст-инфекцией у жителей г. Томска // Сборник статей по материалам пятого конгресса молодых ученых и специалистов «Науки о человеке», Томск, 20-21 мая 2004 г. - С. 211.

4. Напалкова О.В., Бабенко С.А., Пузырев В.П. Исследование ассоциации полиморфизмов гена NRAMP1 с клещевым энцефалитом, иксодовым клещевым боррелиозом и микст-инфекцией у жителей г. Томска // Сборник тезисов Международной конференции «Развитие международного сотрудничества в области изучения инфекционных заболеваний», Новосибирская область, 8-10 сентября 2004 г. - С. 115.

5. Напалкова О.В., Пузырев В.П., Жукова Н.Г. Исследование полиморфизмов генов-кандидатов подверженности к клещевым инфекциям у жителей г. Томска // Сборник материалов международной научно-практической конференции «Генетические аспекты патологии человека. Проблемы сохранения генофонда коренных народов Севера», Якутск, 10-11 мая 2005 г. - Якутский медицинский журнал. - 2005. - Т. 1. - № 9. - Приложение № 1. - С. 5-6.

6. Напалкова О.В., Бабенко С.А. Полиморфные варианты генов NRAMPJ, ILJ2B и клещевые инфекции у жителей г. Томска // Материалы V съезда Российского общества медицинских генетиков, Уфа, 24-27 мая 2005 г. - Медицинская генетика. - 2005. - Т.4. - № 5. С. 235-236.

7. Напалкова О.В., Пузырев В.П., Жукова Н.Г., Фрейдин М.Б. Аллельные варианты генов-кандидатов подверженности клещевым инфекциям: Лайм-боррелиозу, клещевому энцефалиту и микст-инфекции // Сборник материалов Российской научной конференции с международным участием «Медико-биологические аспекты мультифакториальной патологии». - Курск, 25-27 января, 2006. - Т. 2. - С. 61-64.

8. Гончарова И.А., Фрейдин М.Б., Рудко A.A., Напалкова О.В., Колоколова О.В., Ондар Э.А., Дунаева Л.Е., Белобородова Е.В., Пузырев В.П. Геномные основы подверженности к инфекционным заболеваниям И Вестник ВОГиС. - 2006. - Т. 10. - №3. - С. 540-552.

9. Напалкова О.В., Пузырев В.П., Фрейдин М.Б., Жукова Н.Г. Аллельные варианты генов подверженности клещевым инфекциям // Сборник материалов III Российской научной конференции с международным участием «Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера». - Новосибирск, 27-29 сентября, 2006. - С. 200-201.

10.Фрейдш' М.Б., Гончарова H.A., Рудко A.A., Напалкова О.В., Ондар Э.А., Пузырев В.П. Геномные основы подверженности инфекционным заболеваниям // Молекулярная медицина. - 2006. - № 3. - С. 39-46.

Подписано к печати 17.11.2009 г. Формат 60х841/16. Печать ризография. Бумага офсетная № 1. Гарнитура «Тайме». Тираж 100 экз. Заказ № 894 .

Тираж отпечатан в типографии «Иван Фёдоров»

634009, г. Томск, Октябрьский взвоз, 1 Тел. (382-2)-51-32-95, тел./факс (382-2)-51-24-20 E-mail: mail@if.tomsk.ru

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Напалкова, Оксана Васильевна

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Клинико-эпидемиологические сведения о клещевых инфекциях у человека.

1.1.1. Клещевой энцефалит.

1.1.1.1. Этиология и эпидемиология клещевого энцефалита.

1.1.1.2. Клинические формы клещевого энцефалита.

1.1.1.3. Молекулярно-генетическая характеристика вируса клещевого энцефалита.

1.1.1.4. Современные представления о патогенезе клещевого энцефалита.

1.1.2. Иксодовые клещевые боррелиозы.

1.1.2.1. Этиология и эпидемиология иксодового клещевого боррелиоза.

1.1.2.2. Клинические формы иксодового клещевого боррелиоза.

1.1.2.3. Молекулярно-генетическая характеристика Borrelia burgdorferi sensu lato.

1.1.2.4. Патогенез иксодового клещевого борреллиоза.

1.1.3. Характеристика микст-патологии (сочетанные формы клещевого энцефалита и иксодового клещевого боррелиоза).

1.2. Роль генетических факторов в подверженности клещевым инфекциям.

1.2.1. Генетическая и иммунная компонента чувствительности к инфекционным агентам на модельных объектах.

1.2.2. Роль генов иммунного ответа в подверженности клещевым инфекциям у человека.

1.3. Характеристика полиморфных вариантов отдельных геновкандидатов подверженности клещевым инфекциям у человека.

1.3.1. Ген макрофагального белка, ассоциированного с естественной резистентностью NRAMP1 (SLC11АТ).

1.3.2. Гены цитокинов.

Глава 2. Материал и методы

2.1. Характеристика обследованных групп.

2.1.1. Характеристика контрольной группы.

2.1.2. Характеристика групп больных клещевыми инфекциями.

2.2. Клинико-диагностические методы исследования.

2.3. Молекулярно-генетические методы анализа полиморфизма генов 73 2.3.1. Генетико-статистические методы.

Глава 3. Результаты и их обсуждение.

3.1. Распространенность аллельных вариантов генов NRAMP1, IL12B, IL1B, IL1RN в группах больных клещевыми инфекциями и в контрольной группе.

3.1.1. Распространенность аллельных вариантов изучаемых генов в контрольной группе.

3.1.2. Распространенность аллельных вариантов изучаемых генов у больных клещевыми инфекциями.

3.2. Анализ связи полиморфных вариантов генов NRAMP1, IL12B, IL1B,

IL1RN с клиническим фенотипом изучаемых заболеваний.

3.2.1. Анализ ассоциаций аллельных вариантов гена NRAMP1 с иксодовым клещевым боррелиозом, клещевым энцефалитом, микст-инфекцией.

3.2.1.1. Анализ неравновесия по сцеплению.

3.2.1.2. Анализ частот гаплотипов гена NRAMP1.

3.2.2. Ассоциация генов-цитокинов (IL12B; IL1B\ IL1RN) с клещевыми инфекциями.

3.3. Анализ гаметического неравновесия.

3.3.1. Анализ комбинаций генотипов.

3.4. Анализ ассоциации полиморфизмов генов NRAMP, IL12B, IL1B, IL1RN с различными формами, степенью тяжести клещевого энцефалита, иксодовых клещевых боррелиозов, микст-инфекции.

3.5. Анализ ассоциаций исследованных генов с количественными признаками клещевого энцефалита, иксодового клещевого боррелиоза и микст-инфекции.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Анализ генетических ассоциаций и структура наследственной предрасположенности клещевым инфекциям"

В последней четверти XX и начале XXI веков в России возросло эпидемическое неблагополучие по природно-очаговым болезням [Злобин и др., 1996; Коренберг, 1996, 2006; Матущенко и др., 1998; Покровский, 2000; Лобзин и др., 2003]. В группе зоонозов наибольшую актуальность представляют клещевой энцефалит (КЭ), иксодовые клещевые боррелиозы (ИКБ) и их сочетанные формы, имеющие эпидемический характер распространения на территории более 40 субъектов Российской Федерации [Матущенко и др., 1998; Злобин, 2006]. Клещевые инфекции относятся к числу наиболее тяжелых заболеваний, требующих длительного лечения и многолетней реабилитации.

Томская область входит в число наиболее эндемичных территорий Западно-Сибирского региона по этим инфекциям [Жукова, 2003]. Для данного ареала, как и для большинства других эндемичных регионов, характерна сочетанность природных очагов клещевых инфекций: диких естественных и антропургиче-ских (сформировавшихся в связи с деятельностью людей). Паразитарные системы очагов клещевых инфекций (иксодового клещевого боррелиоза и клещевого энцефалита) включают одни и те же виды переносчиков - клещей рода Ixodes {Ixodus persulcatus (/. persulcatus); Ixodus ricinus (I. ricinus)). Эти системы в экологическом отношении имеют много общих черт, что в свою очередь, определяет большое сходство в эпидемиологии указанных этиологически принципиально различных инфекций. Кроме того, общность переносчиков создает предпосылки для возникновения микст-инфекций (МИ) [Коренберг, 1993; Лобзин, 2000].

Известно, что тяжесть протекания инфекционных заболеваний обусловлена сложным комплексом взаимодействия паразита и хозяина, при этом иммунный статус последнего играет столь же важную роль, что и тип микроба, вызвавшего заболевание. Современные молекулярно-генетические исследования показывают, что генетические факторы в значительной мере определяют восприимчивость организма к различным заболеваниям, в том числе инфекционным. Наличие в геноме человека совокупности генов, определяющих такую предрасположенность, обусловливает особенности защитного реагирования макроорганизма на инвазию патогенов [Пгшенов и др., 2003].

Одним из методов анализа роли генетических факторов в возникновении и развитии распространенных заболеваний является исследование ассоциаций полиморфизмов генов-кандидатов с заболеваниями. Этот метод основан на поиске популяционных корреляций в частотах аллелей. В классическом варианте -это сравнение частот генотипов больных индивидов со здоровыми, происходящих из одной популяции. Полиморфный вариант считается ассоциированным с болезнью, если его частота среди больных значимо выше, чем в контрольной выборке. В основе такой ассоциации маркера с болезнью могут лежать три причины. Во-первых, наличие ассоциации может свидетельствовать о том, что ассоциированный локус и есть ген или один из генов болезни. Во-вторых, причиной ассоциации может быть неравновесие по сцеплению между маркерным ло-кусом и локусом болезни. И, наконец, ассоциация может быть артефактом, возникшим вследствие подразделенности популяции [Пузырев, Степанов, 1997].

В настоящее время все большее внимание исследователей направлено на изучение генетических основ подверженности к инфекциям различной природы. До сих пор малоизученными остаются индивидуальные особенности иммуногенетического ответа макроорганизма-хозяина на возбудителей клещевых инфекций, а именно вируса клещевого энцефалита и спирохету - Borrelia burgdorferi sensu lato (В. burgdorferi s. /.). Таким образом, представляется актуальным изучение роли генов-кандидатов и их сочетаний в подверженности клещевому энцефалиту, иксодовому клещевому боррелиозу и микст-инфекции.

Цель исследования: Оценить роль аллельных вариантов генов в подверженности клещевым инфекциям (иксодовому клещевому боррелиозу, клещевому энцефалиту и их сочетанию) у жителей г. Томска.

Задачи исследования:

1. Изучить распространенность аллельных вариантов генов NRAMP1 (SLC11A1), IL12B, IL1B, IL1RN у больных клещевыми инфекциями.

4. Изучить распределение гаплотипов гена NRAMP1 в контрольной выборке и у больных клещевыми инфекциями.

Научная новизна: Впервые изучена вовлеченность полиморфных вариантов генов-кандидатов {NRAMP1, IL12B, IL1B, IL1RN) в формирование предрасположенности иксодовому клещевому боррелиозу, клещевому энцефалиту, микст-инфекции у жителей г. Томска, ген NRAMP1 участвует в патогенезе клещевого энцефалита и микст-инфекции, а гены цитокины IL12B, IL1B ассоциированы с иксодовым клещевым боррелиозом, IL1RN - с клещевым энцефалитом, IL1RN— с микст-инфекцией.

Впервые изучены гаплотипы гена NRAMP1, образованные тремя полиморфизмами у больных клещевыми инфекциями. Показано, что гаплотип GAD является предрасполагающим в развитии клещевого энцефалита, а также - в подверженности иксодовому клещевому боррелиозу и микст-инфекции. Впервые проведено исследование взаимосвязи полиморфных вариантов генов NRAMP1, IL12B, IL1B, IL1RN с качественными и количественными признаками, патогенетически значимыми в развитии клещевых инфекций. Установлена ассоциация аллельного варианта D543N гена NRAMP1 с лихорадочной и стертой формами клещевого энцефалита, 1465-85G/A NRAMP1 - с эритемными и без-эритемными формами иксодового клещевого боррелиоза в группе больных микст-инфекцией, полиморфизм 1188А/С IL12B со степенью тяжести иксодового клещевого боррелиоза в группе пациентов с микст-патологией. Полиморфный вариант 469+14G/C NRAMP1 ассоциирован с моноцитопенией при иксодо-вом клещевом боррелиозе.

Положения, выносимые на защиту:

1. Полиморфные варианты гена NRAMP1 и генов интерлейкинов (IL12B, IL1B, IL1RN) ассоциированы с клещевыми инфекциями.

2. Гаплотип GAD гена NRAMP1, образованный тремя полиморфизмами (469+14G/C;1465-85G/A; D543N) является предрасполагающим к развитию клещевых инфекций (клещевому энцефалиту, иксодовому клещевому боррелиозу, микст-инфекции), гаплотип GGD обладает протективным значением в отношении клещевых инфекций.

3. Изменчивость генов NRAMP1, IL12B, IL1RN является одним из факторов формирования клинического полиморфизма эндофенотипов клещевого энцефалита, иксодового клещевого боррелиоза и микст-инфекции, оказывая влияние на варьирование количественных и качественных, патогенетически значимых для заболеваний признаков.

Научно-практическая значимость:

Полученные данные об особенностях распределения частот аллелей и генотипов у больных клещевыми инфекциями дополняют фундаментальные сведения о генетической компоненте этих инфекций. Материалы работы могут быть использованы в учебно-методическом процессе на медицинских факультетах ВУЗов.

С практической точки зрения сведения о вкладе полиморфных вариантов генов-кандидатов подверженности клещевому энцефалиту, иксодовому клещевому боррелиозу и микст-инфекции в изменчивость патогенетически значимых при этих заболеваниях признаков, а также в формирование клинического полиморфизма заболеваний могут быть учтены при организации профилактических мероприятий.

Апробация работы:

Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на межлабораторных научных семинарах НИИ медицинской генетики СО РАМН (Томск, 2001, 2002), Второй Всероссийской школе по экологической генетике «Симбиогенетика и эволюция» (Санкт-Петербург, 2001), международной конференции «Развитие международного сотрудничества в области изучения инфекционных заболеваний» (Новосибирск, 2004), II международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва, 2005), Российской научной конференции с международным участием «Медико-биологические аспекты мультифакториальной патологии» (Курск, 2006).

Публикации: по теме диссертации опубликовано 10 работ, из них 3 в центральной печати.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Напалкова, Оксана Васильевна

выводы

1. Установлена значимость аллельных вариантов гена NRAMP1 в патогенезе клещевого энцефалита (полиморфные маркеры 469+14G/C; 1465-85G/A) и микст-инфекции (полиморфный вариант 469+14G/C). Не обнаружено связи полиморфизмов гена NRAMP1 с развитием иксодового клещевого боррелиоза. Показана вовлеченность генов цитокинов в патогенез иксодового клещевого боррелиоза (полиморфизмы 1188А/С гена IL12B; +3953А1/А2 гена IL1B), клещевого энцефалита (VNTR гена IL1RN); микст-инфекции (+3953А1/А2 гена IL1B).

2. В группах больных КИ, КЭ, МИ и контрольной в неравновесии по сцеплению находятся полиморфизмы (D543N и 1465-85G/A) гена NRAMP, а в группе больных ИКБ и контрольной - полиморфные варианты (469+14G/C и 1465-85G/A). В гаметическом неравновесии в контрольной выборке находятся полиморфизмы D543N гена NRAMP1 и VNTR гена IL1RN, у больных клещевым энцефалитом - полиморфизмы 1188А/С гена IL12B и +3953А1/А2 гена IL1B, в группе больных КИ -полиморфизмы 469+14G/C гена NRAMP1 и 1188А/С гена IL12B.

3. Выявлена ассоциация гаплотипов образованных тремя полиморфизмами (469+14G/C; 1465-85G/A; D543N) гена NRAMP1 с клещевыми инфекциями (р=0,01), клещевым энцефалитом (р=0,01) и микст-инфекцией (р=0,01). Гаплотип GAD, является предрасполагающим в развитии клещевых инфекций, а наиболее часто встречающийся гаплотип GGD во всех случаях демонстрирует протективный в отношении заболеваний эффект.

5. Аллельный вариант D543N гена NRAMP1 ассоциирован с лихорадочной и стертой формами клещевого энцефалита (р=0,039); полиморфизм 1465-85G/A гена NRAMP1 ассоциирован с эритемными и безэритем-ными формами ИКБ в группе больных микст-инфекцией (р=0,011), а полиморфный вариант 1188А/С гена IL12B — с легкой и средней степенью тяжести ИКБ в группе больных МИ (р=0,036).

6. Выявлены ассоциации генов-кандидатов с количественными патогенетически значимыми для заболеваний признаками: для ИКБ полиморфизм 469+14G/C гена NRAMP1 ассоциирован с моноцитопенией (р=0,030); VNTR гена IL1RN - с увеличенным количеством палочкоя-дерных нейтрофилов (р=0,034); 1188А/С гена IL12B - с уровнем лейкоцитов (р=0,050); D543N гена NRAMP1 с повышенным уровнем амилазы (р=0,002); для МИ полиморфизм 469+14G/C гена NRAMP1 ассоциирован с вариантным количеством лейкоцитов (р=0,039) и сегментоядер-ных нейтрофилов (р=0,033); 1188АА гена IL12B - с уровнем тимоловой пробы (р=0,027).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В рамках настоящего исследования впервые осуществлен молекулярно-генетический анализ вовлеченности генов-кандидатов предрасположенности широко распространенным и социально значимым инфекционным заболеваниям, таким как клещевой энцефалит, иксодовый клещевой боррелиоз и микст-патология. Сравнительный анализ частот аллелей и генотипов исследуемых генов между здоровыми и больными клещевыми инфекциями позволил выявить ассоциацию полиморфных маркеров генов NRAMP1, IL12B, IL1B, IL1RN с подверженностью к трем изученным заболеваниям. Ранее, в работах других исследователей, установлена значимость этих генов в предрасположенность к ряду заболеваний, в том числе Анфщшщщша^приркщшных генов с клещевыми инфекциями установлены впервые. Кроме того, важно отметить различную направленность полученных ассоциаций генных маркеров с изученными заболеваниями. Так, было выявлено, что с риском подверженности клещевому энцефалиту ассоциированы полиморфные маркеры 469+14 G/C; 1465-85 G/A гена NRAMP1 и VNTR гена IL1RN; с иксодовым клещевым боррелиозом -полиморфизмы 1188А/С гена IL12B; +3953 А1/А2 гена IL1B; VNTR гена IL1RN; с микст-инфекцией - 469+14G/C гена NRAMP1; +3953 А1/А2 гена IL1B. Оценка роли гаплотипов гена NRAMP1 на риск подверженности клещевым инфекциям проводилась впервые. Гаплотип GAD значительно чаще встречался в группе больных по сравнению с контролем, а гаплотип GGD в этой же группе наблюдался реже. Проведенный анализ распределения частот гаплотипов в контрольной группе жителей г. Томска показал, что указанные варианты являются довольно частыми (16% и 65%, соответственно).

Анализ неравновесия по сцеплению выявил разнонаправленный характер сцепления в исследуемых группах. В группах больных КИ, КЭ и МИ показано, что в неравновесии по сцеплению, также как и в контрольной группе, находится пара полиморфизмов гена NRAMP1 (1465-85 G/A и D543N). В отличие от контроля не обнаружено неравновесия по сцеплению между другой парой полиморфизмов этого же гена (469+14G/C и 1465-85G/A) в указанных группах больных. А для больных иксодовым клещевым боррелиозом отмечено неравновесие по сцеплению между указанными полиморфными вариантами.

При анализе сочетаний генотипов были получены следующие данные: комбинация генотипов 469+14GG и 1465-85GG гена NRAMP1 демонстрирует протективный эффект в отношении как клещевого энцефалита, так и иксодо-вого клещевого боррелиоза и микст-инфекции. В тоже время выявлены разные комбинации генотипов, ассоциированные с повышенным риском подверженности данным заболеваниям.

Проведена также оценка роли этих полиморфизмов в формировании клинической картины заболеваний: проанализирована связь изученных генетических вариантов с клиническими формами и тяжестью течения КЭ, ИКБ и микст-инфекции. При сравнении распределений частот генотипов между группами больных стертой и лихорадочной форами КЭ получены результаты лишь по варианту D543N гена NRAMP1 (р=0,039), по другим полиморфизмам статистически значимых различий не показано. Анализ частот аллелей и генотипов по исследуемым генам в группах пациентов с различной степенью тяжести КЭ также не показал отличий. Анализ ассоциаций в группе больных ИКБ с наличием или отсутствием клинического маркера мигрирующей эритемы, а также групп, различающихся по степени тяжести заболевания, значимых отличий не показал. В то же время установлены значимые различия в отношении частот генотипов и аллелей по полиморфизму 1465-85G/A гена NRAMP1 у больных микст-инфекцией с эритемными и безэритемными формами ИКБ (р=0,011 и р=0,012, соответственно) и по полиморфизму 1188А/С гена IL12B в группе больных МИ при сравнении степеней тяжести ИКБ (р=0,036).

Исследованные полиморфные маркеры оказывают влияние на количественные признаки, значимые в патогенезе клещевых инфекций. Необходимо отметить некоторые особенности полученных результатов. Так, например, полиморфизм гена NRAMP1 469+14G/C оказался ассоциированным с моно-цитопенией, а аллельный вариант D543N этого же гена связан с повышенным уровнем амилазы при ИКБ, хотя отсутствовала связь указанного гена с «конечным» фенотипом - заболеванием. Полиморфный вариант VNTR гена IL1RN связан с увеличенным количеством палочкоядерных нейтрофилов при ИКБ.

В целом, полученные данные свидетельствуют о существенном вкладе полиморфизма генов NRAMP1, IL12B, IL1B, IL1RN в развитие КЭ, ИКБ и микст-инфекции, а также в формирование клинического фенотипа этих заболеваний.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Напалкова, Оксана Васильевна, Томск

1. Абелев Г.И. Взаимодействие врожденного и приобретенного иммунитета в защите организма от инфекции // Соросовский образовательный журнал. 1998. - № 2. - С. 53-58

2. Аксенович Т.И. Статистические методы генетического анализа признаков человека: Учеб. пособие // Новосиб. гос. ун-т. Новосибирск. — 2001. 128 с.

3. Алексеев А.Н. Бактерии в борьбе с клещевы энцефалитом // Соровский образовательный журнал. — 1999. № 5. - С. 22-26.

4. Алексеев А.Н. Система клещ-возбудитель и ее эмерджентные свойства // СПб.: Зоол. Ин-т РАН, 1993. 30 с.

5. Алексеев А.Н., Дубинина Е.В. Организм переносчиков болезней — среда обитания множества патогенных микроорганизмов как пример функционирования сложной системы в меняющихся условиях среды // Российский биомедицинский журнал. — Т. 5.- № 12. С. 53-56.

6. Алифирова В.М., Орлова Ю.Ю., Бабенко С.А. и др. Полиморфизм 1188 А/С гена IL12B у больных рассеянным склерозом в Томской области и возможности оценки эффективности иммуномодулирующей терапии // Рассеянный склероз. 2006. - Т. 3. - С. 130-135.

7. Аммосов А.Д. Клещевой энцефалит /Аммосов А.Д. Кольцово, 2000. -Электронный ресурс, режим доступа: http://www.vectorbest.ru/brosh/tick born.htm.

8. Ананьева Л.П. Лайм-боррелиоз, или иксодовые клещевые боррелиозы. Этиология, клиника, диагностика // Руководство по внутренним болезням. Ревматические болезни. — М.: Медицина, 1997. С. 344-352.

9. Ананьева Л.П. Лайм боррелиоз, или иксодовые клещевые боррелиозы. I часть: этиология, клиника, диагностика // Инфекции и антимикробная терапия. - 2002. - Т. 4. - № 2. - С. 42-45.

10. Ананьева Л.П. Иксодовые клещевые боррелиозы (Лаймская болезнь). Экология, клиническая картина и этиология // Терапевтический архив. 2000. - № 5. - С 72-78.

11. Бабенко С.А. Роль аллельных вариантов генов иммунного ответа в развитии рассеянного склероза // Автореф. дис. канд. мед. наук. Томск, 2008.-23 с.

12. Бабич Г.Н., Белопасов В.В. Маркеры проницаемости гематоэнцефали-ческого барьера при нейроинфекциях // Нейроиммунология. — 2003. -№1.- С 51-56.

13. Барскова В.Г., Ананьева Л.П., Федоров Е.С. и др. Возраст и течение Лаймской болезни // Терапевтический архив. 2000. - № 11. — С 30-33.

14. Бархаш А.В., Сивкова Е.П., Кобзев В.Ф. и др. Связь полиморфизмов генов OAS3 и PRK с восприимчивостью человека к флавовирусным заболеваниям // Медицинская генетика. 2005. - Т. 4, № 4. - С. 155-156.

15. Беляков В.Д., Яфаев Р.Х. Эпидемиология. М.: Медицина, 1989. - С. -313.

16. Беляков В.Д., Семененко Т.А., Шрага М.Х. Введение в эпидемиологию инфекционных и неинфекционных заболеваний человека. М.: Медицина, 2001.-264 с.

17. Бессонова Е.Н., Лесняк О. М., Подымова С. Д. и др. Клиническая характеристика и факторы поражения печени при Лайм-боррелиозе // Клиническая медицина. — 2000. № 4. — С 36-40.

18. Букринская А.Г., Жданов В.М. Молекулярные основы патогенности вирусов. Москва. - 1991. - 256 с.

19. Быстрицкий Л.Д., Ильченко Т.Э. Анализ заболеваемости клещевым энцефалитом в Томской области. Экономическая оценка профилактики и диагностики клещевого энцефалита // Сибирский мед. журнал. Т. 19. -№2.-С. 31-34.

20. Вейер Б. Анализ генетических данных. М.: Мир, 1995. - 400 с.

21. Верета Л. Я. Иммунология клещевого энцефалита по материалам экспериментальных и клинико-эпидемиологических исследований в очагах Приамурья: Автореф. дис. д-ра мед. наук. М., 1969. - 31 с.

22. Гланц С. Медико-биологическая статистика//Пер. с англ. М.: Практика, 1998.-459 с.

23. Гольдберг Е. Д. Справочник по гематологии с атласом микрофотограмм. Томск: Изд-во Том. Ун-та, 1989. - 468 с.

24. Громова А. Ю., Симбирцев А.С. Полиморфизм генов семейства IL1 человека // Цитокины и воспаление. 2005. - Т. 4. - № 5. - С. 3 -12.

25. Давиденков С.Н. Клинические особенности атипической формы клещевого энцефалита // Клинич. медицина. 1952. - № 2. - С. 19-24.

26. Деконенко Е. П. Клинико-эпидемиологические особенности Лайм-боррелиоза // Врач. 2004. - № 2. - С. 24-28.

27. Жукова Н. Г. Клинико-эпидемиологическая характеристика клещевого энцефалита в Томской области за 50 лет: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Новосибирск. - 1996. 43 с.

28. Жукова Н.Г. Клещевой энцефалит (этиология, эпидемиология, клиника, диагностика, лечение, профилактика) // Методическое пособие. -Томск.-1999.-52 с.

29. Жукова Н.Г. Клещевые нейроинфекции в Томской области // Дисс. док. мед. наук. Томск. - 2003. - 417 с.

30. Жукова Н.Г., Гребенюк О.В. Диагностическая значимость иммунологических показателей в процессе лечения некоторых нейроинфекцион-ных заболеваний // Методическое пособие. 2000. - 22 с.

31. Жукова Н.Г., Команденко Н.И., Подоплекина JI.E. Клещевой энцефалит в Томской области (этиология, эпидемиология, клиника, диагностика, профилактика, лечение). Томск: STT, 2002. - 256 с.

32. Зима А.П. Система цитокинов и их рецепторов при хронических вирусных инфекциях: молекулярные механизмы дизрегуляции Автореф. дисс. . док. мед. наук. -Томск, 2008. 43 с.

33. Злобин В.И., Горин О.З. Клещевой энцефалит: Этиология. Эпидемиология и профилактика в Сибири. Новосибирск: Наука. Сибирская издательская фирма РАН. - 1996. - 177 с.

34. Злобин В.И. Эпидемиологическая обстановка и проблемы борьбы с клещевым энцефалитом в Российской Федерации // Бюллетень сибирской медицины. 2006. - Т 5. - Приложение 1. - С. 16-23

35. Иванов К. С. , Антонов B.C., Саламатов В. И. и др. Об особенностях клинической диагностики и лечения клещевого боррелиоза (Болезни Лайма) // Военно-медицинский журнал. 1998. - № 8. - С. 40-43.

36. Иерусалимский А.П. Клещевой энцефалит // Руководство для врачей. -Новосибирск, Государственная медицинская академия МЗ РФ. 2001. -360 с.

37. Имангулова М.М., Бикмаева А. Р., Хуснутдинова Э.К. Полиморфизм кластера гена интерлейкина 1 у больных туберкулезом легких // Цито-кины и воспаление, 2005. Т 4. - №1. - С. 36-41.

38. Имангулова М.М., Бикмаева А. Р., Хуснутдинова Э. К. Исследование полиморфных локусов D543N и 3' -UTR гена NRAMP1 у больных ин-фильтративным туберкулезом легких в Баркошстане // Мед. генетика. — 2004. Т.4. - № 8. - С. 376-379.

39. Исачкова JI.M., Плехова Н.Г. К развитию представлений об инфекционной резистентности // Эпидемиология и инфекционные болезни. — 2002.-№ 1.-С11-15.

40. Кветкова Э.А. Вирусологические и иммунологические аспекты патогенеза клещевого энцефалита// Дисс. докт. JL, 1984. 417 с.

41. Кетлинский С.А. Роль Т- хелперов типов 1 и 2 в регуляции клеточного и гуморального иммунитета // Иммунология. 2002. - № 2. — С. 77-79.

42. Конев В.П., Кветкова Э.А. Морфогенез и патоморфоз клещевого энцефалита / Вирусные, риккетсиозные и бактериальные инфекции, переносимые клещами // Тезисы докладов межд. научной конф. Иркутск, 1996.-С. 103-104.

43. Коненков В.И. Медицинская и экологическая иммуногенетика. СО РАМН, Новосибирск. - 1999. - 250 с.

44. Коненков В.И., Смольникова М.В. Структурные основы и функциональная значимость аллельного полиморфизма генов цитокинов человека и их рецепторов // Медицинская иммунология. 2003. - Т.5. - № 1-2. С. 11-28.

45. Коренберг Э.И. Изучение и профилактика микст-инфекций, передающихся иксодовыми клещами // Вестн. РАМН. 2001. - № 11. - С. 41-45.

46. Коренберг Э.И., Горелова Н.Б., Постик Д. и др., Резервуарные хозяева и переносчики боррелий возбудителей иксодовых клещевых борре-лиозов в России// Журн. микробиол. - 1997. - № 6. - С. 36-38.

47. Куфко И.Т., Мельников В.Г., Андреева З.И. и др. Сравнительное изучение результатов серологической диагностики Лайм-боррелиоза в непрямой иммунофлюоресценции и иммуноферментном анализе // Клиническая диагностика. 1999. - №3. - С 34-37.

48. Лайковская Е.Э., Лесняк О.М., Волкова Л.И. и др. Микст-инфекция Лайм-боррелиоза и клещевого энцефалита // Проблемы клещевых боррелиозов / Под ред. Э.И. Коренберг. М.: Центр по боррелиозам ГК сан.-зап. Надзора РФ, 1993. - С. 93-98.

49. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Наука, 1990. - 300 с.

50. Леонова Г.Н., Борисовец Е.Н. Эпидемиологические проявления природной очаговости клещевого энцефалита на территории Приморского края // Мед. паразитология и паразитарные болезни. 1991. - №3. — С. 7-10.

51. Левкович Е.Н., Погодина В.В., Засухина Г.Д. и др. Вирусы комплекса клещевого энцефалита. Л.: Медицина, 1967. - 245 с.

52. Лобзин Ю.В., Усков А.Н., Козлов С.С. Лайм боррелиоз (иксодовые клещевые боррелиозы). - СП-б: «Издательство Фолиант». - 2000. - 160 с.

53. Ляпустин В.Н., Свиткин Ю.В., Ляшкевич В.А. Синтез вирусспецифи-ческих белков в клетках почки эмбриона свиньи, зараженных вирусом клещевого энцефалита // Acta virol. 1980. - Т. 24. - № 5. - С. 305 -310.

54. Малиновская В.В., Волегова Г.М., Устинова О.Ю. и др. Система интерферона при остром клещевом энцефалите и влияние на динамику клинико-лабораторных показателей различных методов интерфероно-терапии // Вопросы вирусологии. 1995. - № 5. - С. 234-238.

55. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. М.: Мир, 1984. - 480 с.

56. Наследникова И.О., Рязанцева Н.В., Новицкий В.В. и др. Дисбаланс иммунорегуляторных Thl- и ТЪ2-цитокинов при персистентных вирусных инфекциях. 2007. - Мед. Иммунология. - Т. 9. - №1. - С. 53-60.

57. Насонов E.JI. Интерлейкин 1 и его роль в патологии человека // Тер. архив. 1987. - №12. - С. 112-115.

58. Наумов P.J1. Клещевой энцефалит и болезнь Лайма: Эпизоотические параллели и мониторинг // Мед. паразитология и паразитарные болезни. 1992. -№ 2. - С. 20-25.

59. Панов А. Г. Клещевой энцефалит. Л., 1956. - 283 с.

60. Петров Р.В. Иммунология. М.: Медицина. - 1987. - С. 223.

61. Плехова Н.Г., Сомова Л.М., Крылова Н.В. и др. Инфицирование макрофагов вирусом клещевого энцефалита // Вопр. Вирусологии. 2008. -Т. 53.-№2.-С. 32-37.

62. Погодина В.В. Экспериментальное изучение клещевого энцефалита при алиментарном заражении. Сообщение I. Динамика распределения вируса в организме белых мышей, зараженных энтерально // Вопр. Вирусологии. 1960. - № 3. - С.272-279.

63. Погодина В.В., Фролова М.П., Ерман Б.Л. Хронический клещевой энцефалит. Этиология, иммунология, патогенез. — Новосибирск: Наука. Сиб. отд-ние, 1986. 232 с.

64. Пименов Е.В., Тотолян А.А., Бывалов А.А. и др. Современные представления о патогенезе инфекционных заболеваний // Вестник РАМН. -2003. -№ 6. -С. 3-9.

65. Пирогова Н.П., Карпова М.Р., Новицкий В.В. и др. Избранные вопросы состояния клеточных факторов резистентности при клещевых природ-но-очаговых микст-инфекциях // Бюллетень сибирской медицины. — 2006. Приложение 1. - Т. 5. - С. 144-150.

66. Пирогова Н.П., Новицкий В.В., Бабаева Л.В. и др. Характеристика ней-трофильного моноцитарного паттернов периферической крови при ик-содовом клещевом боррелиозе // Бюллетень СО РАМН. 2003. - №1. -Т. 107.-С 61-64.

67. Покровский В.И. Инфекционные болезни в России: оценка ситуации // РМЖ. 2000. - Т. 8. - № 17. - С. 27-32.

68. Поташов Д. А., Шустов А. В., Леонтьева С. А., Леганова Н. М. Клиническое наблюдение поражения сердца при Лайм-боррелиозе // Сибирский медицинский журнал. — 2001. № 2. - С. 63-64.

69. Проблемы клещевых боррелиозов/ под ред. проф. Э.И. Коренберга. -М., Б.И., 1993.- 184 с.

70. Пузырев В. П. // Генетика человека и патология. — Томск, 2000. Вып. 5.-С. 7-15.

71. Ратникова Л.И., Тер-Багдасарян Л.В., Миронов И.Л. Современные представления о патогенезе клещевого энцефалита // Эпидемиология и инфекционные болезни. — 2002. № 5. — С. 41-46.

72. Рудко А.А. Аллельные варианты генов подверженности к туберкулезу у тувинцев. Дисс. канд. мед. наук. Томск, 2004. - 123 с.

73. Рычков А.А. Структурные элементы инвазии вируса клещевого энцефалита в лимфоидных органах: Автореф. дис. канд. мед. наук. — Челябинск, 1992.-18 с.

74. Сеитова Г.Н. Анализ взаимосвязи генов-кандидатов хронической об-структивной болезни легких с клиническими проявлениями болезни у татар и русских Западной Сибири: Дис. канд. мед. наук. Томск, 2004.- 164 с.

75. Сенников С.В., Силков А.Н., Козлов В.А. // Медицинская иммунология. 2001. - Т. 3. - № 3. - С. 389-396.

76. Сенников С.В., Силков А.Н., Козлов В.А. Роль альтернативного сплайсинга генов цитокинов в формировании полиморфной структуры цито-киновой сети // Медицинская иммунология. 2001. - Т. 3. - № 3. - С. 389-400.

77. Симбирцев А.С. Цитокины — новая система регуляции защитных сил организма // Цитокины и воспаление. — 2002. — Т. 1. № 1. — С. 9-16.

78. Симакова А.И., Мандракова Е.В. И др. Цитокиновый профиль у больных с иксодовым клещевым боррелиозом // Цитокины и воспаление — 2004. Т.З. - № 4. - С. 21-24.

79. Скрипникова И.А., Ананьева Л.П., Барскова В.Г. Результаты клинико-серологического обследования 60 пациентов с Лаймской болезнью // Терап. архив. 1992. - Т. 64. - № 5. - С. 93-98.

80. Смольникова М.В., Коненков В.И. Клиническая иммуногенетика заболеваний человека // Медицинская иммунология. — 2001. — Т. 3. № 3. — С. 379-389.

81. Смородинцев А.А., Дубов А.В. Клещевой энцефалит и его вакцино-профилактика. — Л.: Медицина, 1986.-232с.

82. Стронин О.В., Епачинцев А.А., Гольцова Н.А. и др. Изучение возбудителей иксодовых клещевых боррелиозов на территории Томской области // Сибирский медицинский журнал. — 2004. Т 19. - № 3. - С. 72-74.

83. Ткачёв С. Е., Митрофанова Е.Э., Максимова Т.Г. и др. Сравнительный анализ защитного эффекта ДНК-вакцин с различными генами вируса клещевого энцефалита // Иммунология. — 2000. № 3. — С. 26-29.

84. Тотолян А.А., Фрейдлин И.С. Клетки иммунной системы. В 2-х томах -Спб.: Наука, 2000.

85. Фёдоров Е.С., Барскова В.Г., Ананьева Л. П. и др. Механизмы регуляции воспаления и иммунитета в патогенезе болезни Лайма // Клиническая медицина. 1999. - № 6. - С 14-19.

86. Фогель Ф., Мотульски А. Генетика человека: в 3-х томах. Т. 1.: Пер. с англ. М.: Мир, 1989. - 312 с.

87. Фрейдин М.Б., Рудко А.А., Колоколова О.В., Ондар Э.А., Стрелис А.К., Пузырев В.П. Сравнительный анализ структуры наследственной компоненты подверженности к туберкулезу у тувинцев и русских // Молекулярная биология. 2006. - Т. 40. - №2. - С. 252-262.

88. Фрейдлин И.С. Цитокины и межклеточные контакты в противоинфек-ционной защите организма // Соровский образовательный журнал. — 1996.-№7.-С. 19-25.

89. Черницина JI.O. Прогнозирование предрасположенности и резистентности к заболеванию КЭ, формы и варианты его течения: Методические рекомендации. — Новосибирск, 1993. 41 с.

90. Шаповал А.Н. Клещевой энцефаломиелит. — JL: Медицина, 1980. — 256 с.

91. Ющук Н.Д. Венгеров Ю.Я. // Лекции по инфекционным болезням. — Москва. 1999. - С. 205-219.

92. Abel L., Sanchez F.O., Oberti J. et al. Susceptibility to leprosy is linked to the human NRAMP1 gene // J. Infect. Dis. 1998. - V. 177. - P. 133-145.

93. Abel L., Sanchez F.O., Oberti J. et al. Susceptibility to leprosy is linked to the human NRAMP1 gene // J. Infect. Dis. 1998. - V. 177. P. 133-145.

94. Albrecht P. Pathogenesis of Experimental Infection with Tick-borne Encephalitis Virus // Biology of Viruses of the Tick-borne Encephalitis Complex., praha. 1962. - P. 247-254.

95. Alcais A., Sanchez F.O., Thuc N.V. et al. Granulomatous reaction to intradermal injection of lepromin (Mitsuda reaction) is linked to the human NRAMP1 gene in Vietnamese leprosy sibships // J. Infect. Dis. 2000. -V. 181.-P. 302-308.

96. Alvarado-Navarro A., Montoya-Buelna M., Munoz-Valle J.F. et al. The 3'UTR 1188 A/C polymorphism in the interleukin-12p40 gene (.IL-12B) is associated with lepromatous leprosy in the west of Mexico // Immunology Letters. -2008. V. 118.-P. 148-151.

97. Anguita J., Barthold S.W., Samanta S. et al. Selective anti-inflammatory action of interleukin-11 in murine lyme disease: arthritis decreases while carditis persists // J. Infect. Dis. 1999. - V. 179. - № 3. - P. 734-737.

98. Asbrink E., Hovmark В., Hederstedt B. The spirochetal etiology of acrodermatitis chronica atrophicans Herxheimer // Acta Dermatol. Venerol. -1984. -№64.-P. 506-512.

99. Baranton G., Ras N.M., Postic D. Molecular epidemiology of the aetio-logical agents of Lyme borreliosis // Wien. Klin. Wocheschr. 1998. - V. 110.-№24.-P. 850-855.

100. Barbour A.G., Hayes S.F. Biology of Borrelia species // Microbiol. Rev. -1986.-V. 50.-P. 381-400.

101. Barthold S.W., Sidman C.L. Smith A.L. Lyme borreliosis in genetically resistant and susceptible mice with severe combined immunodeficiency // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1992. -V. 47. - № 5. - P. 605-613.

102. Barton C.H., Biggs Т.Е., Bowen H. et al. Nrampl: a link between intracellular iron transport and innate resistance to intracellular patogenes // J. Leukoc. Biologi. 2003. - V. 66. - № 5. - P. 757-762.

103. Beek G., Benach J.L., Habicht G.S. Isolation of interleukin-1 from joint fluids of patients with Lyme disease // J. Rheum. 1989. - V. 16. - P. 800.

104. Bellamy R, Hill A.V.S. Genetic susceptibility to micobacteria and other infections patogenes in human // Current Opinion in Immunol. 1998. - № 10.-P. 483-487.

105. Bellamy R., Ruwende C., Corrah T. et al. Variations in the NRAMP1 gene and susceptibility to tuberculosis in West Africans // N. Engl. J. Med. -1998. Vol. 338. - № 10. - P. 640-644.

106. Belperron A.A. The IX international conference on Lyme borreliosis and other tick-borne diseases, New York; 2002.

107. Blackwell J.M., Searle S., Goswani Т., Miller E.N. Understanding the multiple functions of Nrampl. Microbes Infect. 2000. - V. 2. - P. 317-321.

108. Bogdan C., Vodovotz Y., Nathan C. Macrophage deactivation by inter-leukin 10// J. Exp. Med.- 1991.- V. 174.-P. 1549-1555.

109. Bredley D.J. Genetic control of natural resistance to Leishmania donovani // Nature. 1974. - V. 250. - P. 353-354.

110. Bredley D.J. Regulation of leishmania populationwithin the host II. Genetic control of acute susceptibility of mice to Leishmania donovani infection // Clin. Exp. Immunol. 1977. - Vol. 30. - P. 130-140.

111. Brown C.R., Reiner S.L. Experimental Lyme arthritis in the absence of in-terleukin-4 or gamma interferon // Infection and Immunity. 1999. - V. 67.-№7.-P. 3329-3333.

112. Brown C.R., Reiner S.L. Development of lyme arthritis in mice deficient in inducible nitric oxide synthase // J. Infect. Dis. 1999. - V. 179. - № 6. -P. 1573-1576.

113. Brown C.R., Reiner S. Genetic control of experimental Lyme arthritis in the absence of specific immunity // Infection and Immunity. 1999. — V. 67.-№4.-P. 1967-1973.

114. Brown J.P., Zachary J.F., Teuscher C. at al. Dual role of Interleukin-10 in murine Lyme diseases: regulation of arthritis severity and host defense // Infection and Immunity. 1999. - V. 67. № 10. - P. 5142-5150.

115. Cellier M., Govoni G., Vidal S. et al. Human natural resistance-associated macrophage protein: cDNA cloning, chromosomal mapping, genomic organization, and tissue-specific expression // J Exp Med. 1994. - V. 180. -№5.-P. 1741-1752.

116. Cellier M.F.M. , Bergevin I., Boyer E. et al. Polyphyletic origins of bacterial Nramp transporters // Trends in Genetics. 2001. - V. 17. - № 7. - P. 365-370.

117. Cervino A.C.L., Lakiss S., Sow O. et al. Allelic assotiation between the NRAMP1 gene and susceptibility to tuberculosis in Guinea-Conakry // Ann. Hum. Genet. 2000. -V. 64. - P. 507-512.

118. Chensue S.W. Molecular machinations: chemokine signals in host-pathogen interactions // Clinical microbiology reviews. 2001. - V.14. -№4.-P. 821-835.

119. Cornstock L.E., Thomas D.D. Penetration of endothelial cell monolayers by Borrelia burgdorferi // Infect. Immun. 1989. - V. 57. - P. 1626-1628.

120. Dubaniewicz A., Jamieson S.E., Dubaniewicz-Wybieralska M. et al. Association between SLC11A1 (formerly NRAMP 1) and the risk of sarcoidosis in Poland // Europ. J. Hum. Genet. 2005. - V. 13. - P. 829-834.

121. Fikrig E., Telford III Sam R., Wallich R. at al. Vaccination against Lyme diseases caused by diverse Borrelia burgdorferi //J. Exp. Med. 1995. -V. 181.-P. 215-221.

122. Forbes J.R. Gros P. Iron, manganese, and cobalt transport by Nramp 1 (Slcllal) and Nramp2 (Slclla2) expressed at the plasma membrane // Blood.-2003.-V. 102. -№ 5.-P. 1884-1892.

123. Fortier A., Min-Oo G., Forbes J., Lam-Yuk-Tseung S., Gros P. Single gene effects in mouse models of host: pathogen interactions //J. Leukoc. Biol. -2005.-V. 77.-P. 868-877.

124. Fraser С. M, Casjens S., Huang W. M. et al. Genomic sequence of a Lyme disease spirochaete, Borrelia burgdorferi. Nature. - 1997. - 390. - № 11. -P. 580-586.

125. Garcio-Monco J.C., Villar B.F., Alen J.D.C. et al. Borrelia burgdorferi in the central nervous system: experimental and clinical evidence for early invasion // J. Infect. Dis. 1990. - V. 161. - P. 1187-1193.

126. Glass W.G, Lim J.K, Cholera R. et al. Chemokine receptor CCR5 promotes leukocyte trafficking to the brain and survival in West Nile virus infection // J. Exp. Med. 2005. - V. 202. - P. 1087-1098.

127. Glass W.G., McDermott D.H., Lim J.K. et al. CCR5 deficiency increases risk of symptomatic West Nile virus infection // J. Exp. Med. — 2006. V. 203.-P. 35-40.

128. Goswami Т., Bhattacharjee A., Babal P. et al. Natural-resistance-associated macrophage protein 1 is an H+/bivalent cation antiporter // Bio-chem. J. -2001.-V. 354.-P. 511-519.

129. Govoni G., Cross P. Macrophage NRAMP1 and its role in resistance to microbal infections // Inflamm. Res. 1998. - V. 47. - № 7. - P. 277-284.

130. Gros P. Scamene E., Forget A. Genetic control of natural resistance to Mycobacterium bovis (BCG) in mice // J. Immunol. 1981. - V. 127. - P. 2417-2421.

131. Gross D.M., Huber B.T. Cellular and molecular aspects of Lyme arthritis // CMLS, Cell. Mol. Life Sci. 2000. - V. 57. - P. 1562-1569.

132. Gruenheid S., Gros P. Genetic susceptibility to intracellular infections: NRAMP1, macrophage function and divalent cations transport // Current Opinion in Immunology. 2000. - № 3. - P. 43-48.

133. Gubler U., Chua A.O., Schoenhaut D.S. et al. Coexpression of two distinct genes is required to generate secreted bioactive cytotoxic lymphocyte maturation factor // Proc. Nat. Acad. Sci. 1991. - V. 88. - P. 4143-4147.

134. Hall M.A., McGlinn E., Coakley G. et al. Genetic polymorphism of IL12 p40 gene in immune-mediated disease // Genes and Immunity. 2000. -V.l. - P. 219-224.

135. Heinz F., Kunz C. Characterization of tick-borne encephalitis virus and immunogenicity of its surface components in mice // Acta Virol. — 1976. -V. 21.-P. 308-316.

136. Hill V.S. The immunogenetics of human infectious diseases // Ann. Rev. Immunol. 1998. - V. 16. - P. 593-617.

137. Hofmeister A., Neibergs H.L., Pokorny R.M. et al. The natural resistance-associated macrophage protein gene is associated with Crohn's disease // Surgery. 1997. - V. 122. - P. 173-178.

138. Jouanguy E., Altare F., Lamhamedi S. et al. Interferon-gamma—receptor deficiency in an infant with fatal bacille Calmette-Gue'rin infection // N. Engl. J. Med. 1996. - V. 335. - P. 1956-1959.

139. Jiang W. Bonnert T.P., Venugopal K. A single chain antibody fragment expressed in bacteria neutralizes tick-borne flaviviruses // Virology. -1994. -№ l.-P. 21-28.

140. Kamradt T. Lyme disease and current aspects of immunization // Arthritis Res.-2002-V. 4.-P. 20-29.

141. Lam-Yuk-Tseung S., Gros P. Genetic control of susceptibility to bacterial infections in mouse models // Cellular Microbiology. 2003. - V. 5. — № 5. - P. 229-239.

142. Liu J., Fujiwara m., Buu N.T. et al. Identification of polymorphisms and sequence vatiants in the human homologue of the mouse Natural resistance-associated macrophage protein Gene // Am. J. Hum. Genet. 1995. -V. 56.-P. 845-853.

143. Marquet S., Sanchez F.O., Arias M. et al. Variants of the human NRAMP 1 gene and altered human immunodeficiency virus infection susceptibility // Journal of Infectious Diseases. 1999. - V. 180. - P. 1521-1525.

144. Matyniak J.E., Reiner S.L. T-helper phenotype an genetic susceptibility in experimental lyme disease // J. Exp. Med. 1995. - V. 181. - № 3. - P. 1251-1254.

145. McDermid J.M., Prentice A.M. Iron and infection: effects of host iron status and the iron-regulatory genes haptoglobin and NRAMP 1 (SLC11A1) on host-pathogen interactions in tuberculosis and HIV // Clinical Science. 2006. - V. 110. - P. 503-524.

146. McKusick V.A. On-line Mendelian Inheritance in Man (OMIM). Baltimor and London: J. Hopkins Univer. Электронный адрес: http://www3 .ncbi.nlm.nih.gov/omim.

147. McNicholl J.M., Cuenco K.T. Host genes and infections diseases. HIV, other pathogens and a public health perspective // Am. J. Prev. Med. -1999. V. 16. - № 2. - P. 141-154.

148. McNicholl J. Host genes and infections diseases // Journal of Infectious Diseases 1998. -V. 4 - № 3. -P. 677-678.

149. Moore K.W., Malefyt R.de W., Coffinan R.L. at al. Interleukin-10 and the Interleukin-10 receptor // Annu. Rev. Immunnol. 2001. - V. 19. - P. 683765.

150. Morahan G., Huang D., Ymer S.I. et al. Linkage disequilibrium of a type 1 diabetes susceptibility locus with a regulatory IL12B allele // Nat Genet. -2001.-V. 27.-P. 218-221.

151. Mueller Т., Mas-Marques A., Sarrazin C. et al. Influence of interleukin 12B (IL12B) polymorphisms on spontaneous and treatment-induced recovery from hepatitis С virus infection // J. Hepatol. 2004. - V. 41. - P. 652658.

152. Nadelman R.B. , Wormser G.P. Lyme borreliosis // Lancet. — 1998. V. 352.-P. 557-565.

153. Nei M. Molecular evolutionary genetics. New York: Columbia Univer sity Press, 1987.-580 p.

154. Nelson N. Metal ion transporters and homeostasis // EMBO J. 1999. -V. 18.-P. 4361-4371.

155. Newport M.J., Huxley C.M., Huston S. et al. A mutation in the interferon-gamma receptor gene and susceptibility to mycobacterial infections in man //N. Engl. J. Med. 1996. -V. 335. - P. 1941-1949.

156. Oschmann E.P., Kraiczy P. Lyme Borreliosis and Tick-Borne Encephalitis // Bremen, Germany. 1999. - 144 p.

157. Ottenhoff T.H.M., Verreck F.A.W., Lichtenauer-Kaligis E.G.R. et al. Genetics, cytokines and human infectious disease: lesson from weakly pathogenie mycobacteria and salmonellae // Nature genetics. — 2002. V. 32. -P. 97-105.

158. Pearce N. What does the odds ratio estimate in a case-control study? // Int. J. Epidemiol. 1993. -V. 26. - № 6. - P. 1189-1192.

159. Picard C., Fieschi C., Altare F. et al. Inherited interleukin-12 deficiency: IL12B genotype and clinical phenotype of 13 patients from six kindreds // Am. J. Hum. Genet. 2002. - V. 70. - P. 336-348.

160. Pfister H.W., Wilske В., Weber K. Lyme borreliosis: basic science and clinical aspects //Lancet. 1994. -V. 343. - P. 1013-1016.

161. Piacentino J.D., Schwartz B.S. Occupational risk of Lyme disease: an epidemiological review // Occup. Environ. Med. 2002. - V. 59. - P. 75-84.

162. Plant J., Glynn A.A. Genetics of resistance to infection with Salmonella typhimutium in mice // J. Infect. Dis. V. 133. - P. 72-78.

163. Posey J.E., Gherardini F.C. Lack of a role for iron in the Lyme disease pathogen// Science. -2000. V. 288. - P. 1651-1653.

164. Potter M.R., Rittling S.R., Denhardt D.T. et al. Role of Osteopontin in murine Lyme arthritis and host defense against Borrelia burgdorferi. -2002-V. 70. № 3. - P. 1372-1381.

165. Rodriguez M.R., Gonzalez-Escribano M.F., Aguilar F. et al. Assotiation of Nrampl promoter gene polymorphism with the susceptibility and radiological severity of rheumatoid arthritis // Tissue Antigens. 2002. - V. 59. -№ 4.-P. 311-315.

166. Randolph A.G. Lange C., Silverman E.K. et al. The IL12 В gene is associated with asthma // Am. J. Genet. 2004. - V. 75. - P. 709-715.

167. Ryu S., Park Y.K., Bai G.H. et al. 34JTR polymorphisms in the NRAMP1 gene are assotiated with susceptibility to tuberculosis in Koreans // Int. J. Tuberc. Lung. Dis. 2000. - № 4. - V. 6. - P. 577-580.

168. Ruef C. Lyme disease and host defense // Infection. 2001. - № 2. - P. 57-58.

169. Skamene E., Gros P., Forget A. et al. Regulation of resistance to leprosy by chromosome 1 locus in the mouse // Immunogenetics. — 1984. — V. 19. — P. 117-120.

170. Searle S., Blackwell J.M. Evidence for a functional repeat polymorphism in the promoter of the human NRAMP 1 gene that correlates with autoimmune versus infectious disease susceptibility I I J. Med. Gen. 1999. — V. 36.-P. 295-299.

171. Searle S., Bright N.A., Roach I.A. et el. Localisation of Nrampl in macrophages: modulation with activation and infection // Journal of Cell Science. 1998. - V. 111. - P. 2855-2866.

172. Seegers D., Zwiers A., Strober W. et al. A TaqI polymorphism in the 3' UTR of the IL-12p40 gene correlates with increased IL-12 secretion // Genes and immunity. 2002. - № 3 . - P. 419-423.

173. Shaw M.A., Clayton D., Atkinson S.E. et al. Linkage of rheumatoid arthritis to the candidate gene NRAMP 1 on 2q35 // J. Med. Genet. 1996. - V. 33.-P. 672-677.

174. Silvia O.J., Shellam G.R., Urosevic N. Innate resistence to flavivirus infection in mice controlled by Flv is nitric oxide-independent // Journal of General Virologi. 2001. - V. 82. - P 603-607.

175. Singal D.P., Li J., Zhu Y., Zhang Y. NRAMP1 gene polymorphisms in patients with rheumatoid arthritis // Tissue Antigen. 2000. - № 1. - V. 55. -P. 44-47.

176. Stanilova S., Miteva L. Taq-I polymorphism in 3'UTR of IL-12B and as-sotiation with IL-12p40 production from human PBMC // Genes Immun. 2005.-V. 6. — P.364-366.

177. Steere A.C. Lyme disease: a growing threat to urban populations // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. - № 91. - P. 2378-2383.

178. Steere A.C., Dwyer E., Winchester R. Assotiation of chronic Lyme arthritis with HLA-DR4 and HLA-DR2 alleles // N. Engl. J. Med.- 1990. №. 4.-V.-323.- P. 219-223.

179. Steere A.C., Coburn J., Glickstein L. The emergence of Lyme disease // The Journal of Clinical Inestigation. 2004. - V. 113. - № 8. - P. 10931101.

180. Steere A.C. Lyme disease // N. Engl. J. Med. 2001. - V. 345. - № 2. - P. 115-125.

181. Stienstra Y., Werf T.S., Oosterom E. et al. Susceptibility to Buruli ulcer is associated with the SLC11A1 (NRAMP1) D543N polymorphism. Genes Immun. 2006. - V. 7. - P. 185-189.

182. Stephens M., Smith N.J., Donnelly P. A new statistical method for haplo-type reconstruction from population data // Am. J. Hum. Genet. 2001. -V. 68.-P. 978-989.

183. Tarlow J.K., Blakemore I.F., Lennard A. et al. Polymorphism in human IL-1 receptor antagonist gene intron 2 is caused by variable number of an 86-bp tandem repeat // Human Genetics. 1993. - V. 91. - P. 403-404.

184. Taype C.A., Castro J.C., Accinelli R.A. et al. Association between SLC11A1 polymorphisms and susceptibility to different clinical forms oftuberculosis in the Peruvian population // Infect Genet Evol. -2006. № 5. -V.6.-P. 361-367.

185. Trollmo C., Meyer A.L., Steere A.C. at al. Molecular mimicry in Lyme arthritis demonstrated at the single cell level: LFA-laL is a partial agonist for outer surface protein A-reactive T cells // The Journal of Immunology. 2001. - V. 166.-P.-5286-5291.

186. Vejbaesya S., Chierakul N., Luangtrakool P., Sermduangprateep C. NRAMP 1 and TNF-alpha polymorphisms and susceptibility to tuberculosis in Thais // Respirology. 2007. - V. 12. - № 2. - P. 202-206.

187. Vidal S.M., Malo D., Vogan K. Natural resistance to infection with intracellular parasites: isolation of a candidate for Beg // Cell. 1993. - V. 73. -P. 469-485.

188. Wang G., van Dam A.P., Schwartz I., Dankert J. Molecular typing of Borrelia burgdorferi sensu lato: taxonomic, epidemiological, and clinical implications // Clin. Microbiol. Rev. 1999. - V. 12. - P. 633- 653.

189. Weis J.J., McCrackenYing Ma B.A., Roper D.F. et al. Identification of quantitative trait loci governing arthritis severity and humoral responses in the murine model of lyme disease // J. Immunol. 1999. - V. 162. - № 2. -P. 948-956.

190. Werber K., Pfister H. History of Lyme borreliosis in Europe / K. Werber К and W. Burgdorrfer (ed.). Aspets of Lyme borreliosis. Spriger-Verlag KG, Berlin, Germany. 1993. - P. 1-20.

191. Wilkinson R.J., Patel P., Llewelyn M. et al. Influence of polymorphism in the genes for the interleukin (IL)-l receptor antagonist and II-1 fi on tuberculosis // J. Exp. Med. 1999. -V. 189. - № 12. - P. 1863-1873.

192. Wong M.M, Fish E.N. Chemokines: attractive mediators of the immune Response // Semin. Immunol. 2003. - V. 15. - P. 5-14.

193. Zajkowska J., Hermanowska-Szpakowicz Т., Swierzbinska R. Concentration of soluble CD4, CD8 and CD25 receptors in early disseminated Lyme borreliosis // Infection. 2001. - V. - 29. - P. 71-74.

194. Zang W.-H., Shao L., Weng X. et al. Variants of the natiral resistance-associated macrophage protein 1 gene (.NRAMP1) are associated with severe forms of pulmonary tiberculosis // Clinical Infections Diseases. -2005. -V. 40. P. 1232-1235.

Информация о работе

Напалкова, Оксана Васильевна
кандидата медицинских наук
Томск, 2009
ВАК 03.00.15

Диссертация

Анализ генетических ассоциаций и структура наследственной предрасположенности клещевым инфекциям - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы