Генетическая гетерогенность аномальных гемоглобинов человека

Спивак, Владимир Абрамович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Генетическая гетерогенность аномальных гемоглобинов человека
ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Генетическая гетерогенность аномальных гемоглобинов человека"

АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК СССР ИНСТИТУТ МЕДИЦИНСКОЙ ГЕНЕТИКИ

ОУ/Х А/^

На призах рукописи

УДК 575.174.016.3; Б75.852.112; 577.112.5; 616.163.963.42

СПШАК Вллдипир Абрамович

ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ГЕТЕРОГЕННОСТЬ

АНОМАЛЬНЫХ ГЕМ0ГЛ0БИН08 ЧЕЛОВЕКА: * \ ПРШАДНЬЕ И ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ

03.00.15 - Генетика 03.00.04 - Биохимия

Автореферат диссертации на соискание учйной степени доктора биологических наук

Мэсква - 1989 г.

Работа выполнена о лаборатории патологии сритрона НИИ гематологии и интенсивной терапии Всесоюзного ге»датологичаского научного цонтра КЗ СССР

0«ИЦИАЛЬ!€^£ оплзнсиш:

доктор химических наук, про^оссор Б. Г. СслздсжиЯ доктор биологических н^ук Г. Я. Влд^гмлЛл доктор биологических наук, профессор Е. К. Гштер

Бодус^я организация: Институт колску/доюЛ сиология Ш ССС

За^гта состоится " "_1С0Э г.

в _ часоа _ шнут на оасоданни Специализированного ученого

соаета Д.001.16.01 Института цэдицинскоЛ генетики А.'Л! СССР по адресу: 11Ь4?0 1,!зскза, ул, ¡.^скпорачье, д.1.

. )

С диссертацией 0зца;а'™1тьсл о библиотека Илстнтута

Аэторефар&т разослан " "_1С2Э г.

Учйн^Л секретарь Специализированного совета доктор биологических наук

Л. О. Курило

-31. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

/jcy.yaubHccrj, npo5j,ej"t. Генетическая гетерогенность анональння геиоглобинов обусловлена, как известно, существованием в популяциях вариантов глобиновых генов, дающих при их экспрессии глобины с отличахсуйся первичной структурой, чаще всего - содержащие единичную аминокислотную заимку. Генетическая гетерогенность аномальных геыоглобиноь человека является причиной группы наследственных огЛолевпний системы крови - структурных гемоглобинопатий. Установление характера и локализации аминокислотной замены в молекуле ну-тглтного гемоглобина. т.е его молекулярная диагностика, в кладом конкретной случае геиоглобинопатии позволяет ставить точный диагноз з<>£5олевания. Поэтому структурно анализ аномальных гоиоглобинон -основная прикладное задача в изучении генетической гетерогенности этого болт • Da?»и и всегда актуален для практического здравоохранения .

Исследование генетической гетерогенности аномальных геуоглобинов а популйщм позволяет получить вакние для медицинской генетики д.глние, необходим» для организации медицинской помочь больным ге иоглобинопатиякн о районах, ондтшннх по этим заболеваниям. Таки-, исследование проводятся а соответствии с комплексной программой Президиуыа А!'Ч СССР "Изучение распространенности и гетерогенности гемоглобинопатий". Некоторое иуталтныэ гемоглобини могут бить использовали □ качестве удобных маркеров, помогающих исод&доиать гщ-ршкдание и сиевенио популяций, поэтсиу данные о генетической гетерогенности аномальных геиоглобинов. обнаруженных на территории СССР и ряда других стран; представляют интерес для популяционной генетики

Сопоставление структуры и свойств аномальных геиоглобинов с кли ничеекой картиной заболевания имеет фундаментальное значение дли современной цедицины и гематологии d частности, поскольку позволяет выявлять взаимосвязь иеаду характером молекулярного де<1*жта, огныс твеннсго за возникновение наследственной патологии (на примере ге иоглобинопатий). и особенностям клинического проявлении заболевания. вносят вклад в изучение патогенеза молекулярных болезней Эгл часть исследования генетической гетерогенности аномальных Гемогло бинов человека проводилась в соответствии с Госпрогрпмиой ('ЮТ С. 69,QV по иммунологии и издицинсксй генетике

■ i J.\ 9íH

Генетическая гетерогенность семейств иутонтних белкоа вообад и гемоглобина в частности лехит в основе явления белкового полиморфизма, который, кап всякий наследственны;! полиыорфизи, 1~о;,.1'Т служить мерей генетической изменчивости популяций. В сеоа очередь, изменчивость легат в основе таких фундаузнтальта биологических процессов как адаптация и вволюция. В процесса оволющш белки дол;,зги с необходимостью проходить стадию полиморфизма, поэтому очевидна попасть явления полиморфизм белков (и, следовательно, изучения их генетической гетерогенности) для разделов теоретической и нолгкуляр-ной биологии, зонииаюсяхея проблемами молекулярной оаолвдш.

Поль исследования. Целью окгпариижГ4Узьнюг (;гсг.едэог№«Я

структурная идеити^и1сац»!я шкхлалыи^: гс1:згло5;:иоа человека, ььиэ-яйнных на территории СССР и ряда других стргл, а -шео розра5о7Г~ новых подходов к тык»! исслодозгл;:ли. Ц~,снтк.'::;:£ц;!:1 слонапътг: го-»¡оглобинои била попоена и основу иапекул-ирлаЛ дилп:сгт»»;и структурных ге»:сглсбкног;ат;:Г; у гематологически: больн:гс.

Целью теоретического «солодс-сл;::; язу.ся кс-т^екен:.-.! анедагз генетической гетерогенности сеиайсго;. алгиалыш: гС1:згло5;:ио2 ч^г.з^.,-«?а, основанной на соостьенни;-: и;зпир;и.:я>тсяык£; ржуяътсльи п современных литературных дакни::.

Задачи исслсцо^али^:

- "'¡следовать гемоглобинопатии к-лской откологии, па территории СССР и ряда други:: стран. Прг^сст» и »жучить некоторое свойства аюухлыпи гемоглоеппса, у больных структурньча! гемглэОииопслгшш, и теи постсллп'ь точный • молекулярный ди&гноа о^болеоаша.

- Получить даннм;- о наличии и гетерогенности ьу-ган?!;:.::: гемоглсаи-ноа в ряде популяции СССР и накотори:: других стран.

- Разработать новый подход к стругаурной идант^.'нк-ц::;! сизцолъни:: гемоглобинов человек, сснооалний на использовали;! отечественного оборудования и рассчитанный на его испольсозаяиа с диагностичес^:; лабораториях слухби крови страну.

- Разработать новые и усовершенствовать и сптт^лзиросать ряд из-ь ест них методов, используешгх и молекулярной диагностика 'аномальна;; геыоглобинов. Доказать применимость комплекса ручное: ультра^глкро-чуБстсительных методов струетурной пептидной хшйш и с их по^з^ю провести идентификацию ряда вариантов гемоглобина на ¿икроуровно.

-Б-

- На основе полученных экспериментальных а литературных данных просвети ксмпле^ныЛ енализ гипотезы нейтральности вариантов гемоглобина челепекд Оценить применимость концепций селекционизма н нейтрализма» для об'аснения сугестпу£™ей картины полиморфизма гемоглобина человека.

/.'аушзз i'c::u3!ta. Про о опека структурная идентификация около ста сЗрелцоз аномальных гвисглсбкксз' челозека, обнерупгнных у гмтелеЯ СССР. a тачка Болггрни, Венгрии, Гвинеи. Рл.:она, Кипра, Нубн, Лаоса, L'лг.и. !'~игол;':1 и Сирии Открыты нст/с глсиалыи-'э гемоглсбикы Hb Дагестан абОЛнэ->Гду, НЬ ttimteK р92Гнс->/рг и Hb 1Ьнсосия |Я7Л1П->Рли.

1'леитн J-.идерсоди рйцкке ¡¿утснтимз гсорго-бини:. lib Abraham Lirkoln, Hb Азепсзг, Hb Buenos Aires, Hb Detroit, Hb M Saskatoon, IIb Set if, lib Sirtraj, lib Тасо.тл. Доклзсио нлгмчкэ респрострлненнае !п се:- ■ гдгр-э г^ск'алыш гемоглсЗиноа S, Е, С и 0 Punjab d ncnyr.a-muis, н&селяк^ю СССР. Изучены некоторые сг-ойстоа ноенх и »«утмггммх гееэглобшюя.

P'.ip:'отглг-з и !1сп0.*:ь:;с:з.".к11 о $'ССЛ0Я01.Э'«'.Л"' г угод1! n«q»:r.por тиьнсго гясЗкисэ поело плектре ^рэт^'^-огого р?л£ег -««я

гемо.'.'.яатс*» ил:! глеЗккоЗ'.::: irnel ¡n .> •:• • ¡^глегэль, б!™?ро и просто получать иэ стент^лнсЛ nr.c-Hici 10-'.0 ншль

чистсЛ. обессиленной глсбигспеЗ ц:м";.

Рглрг^отглм'-'-з í'oto.cíi •«'¡•рсг.г;с-п-л:с!":!,сго- г"г »г:-»'.'.! глсбинепих цепе Л полег-ени о сгнсзу того ргЗотз vn-.~ro г^.т'оца к нолеку ляркоЯ пняичюстике'г.чоиэлм'!.'::- гс»<зг.г?>3»«!си, и.-рлктлрнэуйгегсся от-иссмтельксЛ прсгтотсП. п чугс?г::.ггымстьп. Hod; Л

подход использовал для. »яентс! нкэдкм рлял' лисм-льпых геноглобиноп.

1ЪуЧ21!И ü03t!3»ÍCCT¡1 поптия'.:~"*. rrpr п. СГОО ЦОЛЛКЛО'ЛЫ D lía-

чгстсо шчфспрепараткзнсго- listona, емдел-зн'ия пег.тилоп при структурной идентификации аномальных геиоглсЗикоз..Изпгстние ручные методы определение порэдчноЯ структуры пептидоз о улътро".асромаситвбо адслтирспаны для цеяэЛ ь-олекуяяркоЛ Д'лагнсстики слоизльиьвс гешгло биноа.

D теоретической части работы предложи исрсрхнческпЛ подход к рассмотрению явленил нейтральности белкешя парчонтоо. Основанный на ote-i подходе коыллексниЛ анализ нейтральности йутантных гемогло-бшгоэ, гллюлт-нтгЛ с прнплечениен ссбстЕонжгх результатов и литературных данных, спидетег.ьстиует об отсутствии молекулярной и/или клинической неЛтральности иногих вериантоэ го'леглобнна. Выдвинута

гипотеаа о возиогной роли повышенной локальной конформационной подвижности белка о создании молекулярно-нейтральных вариантов.

Сформулирована концепция генетической гетерогенности аномальных гемоглобиноо человека, о основу которой положено введенное & работе понятие о псевдо-нейтральных белгеовых вариантах, численно преобладающих в семействе мутантных геиоглобиноа. В компенсированной гетерозиготной состоянии псевдо-не"тральный варианты являются потенциальным источником появления у белка новых функций и адаптивно ценных форы. г

Высказана и обоснована гипотеза, согласно которой эволюция бел-,ков протекает от стадии, удовлетворяемой концепции нейтральности белкового полииэр&юиз, к стадии, удоэлетвораксай концепции се-?):-ционизиа.

Пршаличесноо значяниз. Основное значение просадзнного исследования для отечественного одраиоохроненил состоит в воспроизведении и разработке на базе ВГНЦ 1.3 СССР совокупности ыэтодоа структурной белковой химии, позволяв^« проводить работы по молекулярной диагностике аномальных гемоглобинов в насей стране, а таххя в создания методических основ для постановки аналогичных работ в других иссле довательских центрах страны.

Установление характера и локализации дефекта первичной структур белка в каздоа конкретной случае гемоглобинопатии является необходимой! отопок постакос!си преданного диагноза, лечения и прогноза ваболевания.

Данные по гетерогенности иуталтних фори гемоглобина о различны: регионах страны необходим для организации практичесгай медициною поуоел населенна на местах (создание модико-генетические (инсульт« ций и диагностических лабораторий, подготовь медицине»^ кадров).

Новый экспериментальный подход, основанный на микропропсратиаис выделении глобинов после их электрофореза на целлогелэ, делает ма кулярную диагностику скомалъных гемоглобиноэ более еконоыичной, доступной, требукязй меньсих временных оатрат; отот подход мокет найти применение при идентификации различных аномальных гемоглоби;

Система уяьтрамикрометгцоь белковой химии, развитая и адаптиро ванная применительно к задачам определения первичной структуры ан цальных гекоглобинов. иокет оказаться полезной при изучении полек лярньы основ других наследственных болезней, вызванных наличием ' аномальных белков, при .типировании различных ыутантных белков, ан

по Салистого полиморфизма, в других исследованиях, вкспзримен-ггыюе осусествление который находится □ коылетенции структурной элкоьой химии.

Ты/л и содержание диссертационной ргботы отвечают оаданиям коил-ексной программы А!.Я СССР "Изучение распространенности и гетеро-енности гемоглобинопатия", Госпрограмм ГКНТ.О.69.07 по иммунологии

медицинской генетике и 0.69.05 "Лейкозы".

Схидрепиз а прамг.ику. Работы по струтгурнсП идентификации ено-ллышх геыоглобинов человека внедрены о практику и проводятся а ГНЦ 1.0 СССР.

Развитые в представленной исследовании ь-атоди иолекулярной диег-остики аномальных геиоглобинов. основании^ на использовании оте-¡$стаенного оборудования, внедрены о пргиггику работы геиатологичео-и» центров Азербайджанской ССР (АзНИИ гематологии'и пгреливаниа •рсьи, Республиканская станция переливания крози, р.Елку) и Узбекской ССР (Уэ1Г/М гематологии и перелизания крон и, г.Тс^ент).

В соответствии с Плснрли кеглународного сотрудничаете» и в по-:ядпэ оказания научно-технической пс'„ю:;1 геютсяо^ичес^'.м слу~5ам голгерин, Венгрии, Гвинеи, Кеизна., Кипра- и Гдигсяяи прспедены рабс-ги по колеку.тарной диагностике смсиалыка ре!«сряс5йкоэ.'-. сЗнаругзн-

а этия странах.

['.а гаг-ипу сииоссхса: .

- Результаты- Ъкеперииентйлыея нгслодс^лмиД раЬтичзскоЛ гетерогенности еномальньи реиерлебкисп ^.челссма," •егг.эягкньа иг территории ЗОСР и ряда других 'стран, ..пезаояяЕгйэ: открыть . 1»зиа- а?рййгги гемоглобина,-' идентифицирозеть р^прсстрг:?с!!1:,.:э н . р2Г,:"1э всригнты.

- !.'.гтодически& раэрйЗот}щ. - создан:;:)ксЪого зкелери-[¿енталького подхода к; (.галекулзрноп ди^гнссти:» елс^ллы!^ геиогло-Виноз.' коздо цотодез иссяедоаснка/ иоде&гкгцдег я.еяггягецйя • известных 1;этодоз с цег.ьп пез^ння о^стизностн стругггурпсЛ идентификации гло(.'ллы(1К геисглобиноэ. • С

- -.Концепция теистической гстсрсгси^ости го^глоЗинов чэлс^ека, основанная на понятии- псездо*нгПтрг.'а»1!СС?н • бгюсспых. вери-ентоа' й- иерархической подход'® -'к- ргссиотр».*»»"есйскк»- нейтральности болкозых вариентез и из С,2»отигткч2С!С1а. Прсл2л2!::*„1,

/ярсбсциа рабсян. Сснозкиэ результаты к^ссертации дологаны на 1

и 2 Всесоюоных с'содах геиатологоа и трансфуаиологоа (Баку,1979; Львов, 1385), Международной Конгр&ссе общества геиатологоа (Будапешт, 19В2), 1 Всесоюзной конференции "Хроматография d биологии и иадицино" О.Ьскпа, 1Q83), 6 и ? Всесоюзных си№озиуиах по xh^ih белков и пептидов (Рига, 1983; Таллии, 1GS7), 1 Всесоюзной с'садэ медицинских генетикоа (Кнео, 1Q24). Всесошной £коле "Биолацлнос-цэнция и хеиилшинесцэнтньЯ ан'пиэ" (Красноярск, 1GB5), 0 Всесоюзном симпозиуме "Ьйлекуларныз t:exaHí.Oí¿j генетических процессоз" (Москва, 1S37), Б с'*с!дэ Всесоюзного обс^стса гензтиюэ и селекционеров им. Н.Н.Вааилооа ((/.оскаа, 1SS7), 2 Цзздународной конференции па ыетодаи разделения в биохтсш (Кестг.сл, 1GS3), на 52, 53. 55, £3 и 69 научных сессиях Uíví-íTEi.

Развитая о диссертед.»! кс::цопц;«1 гсноткчгсиА»» готорсгсииссти ано^лльных геыоглобкиоь человека дэло^на и сйгугдсп^ на !.".оско2еши городском ссшиара го иолсч^л^рно;! бисфпзи;^, tbcîto^cr^ городами семинаре по евслеционной биокн^и, научна cesíuiapa^ Идститута молекулярной генетики АН СССР и 1.;стптута 1Ьд::ц:шс!;оЛ rcucTiusä /¿il СССР.

Публикации- ГЬ материалам диссертации слуолиг-алаио GO п..ч„тн^ работ в отечественных и еарубг^ш изданная.

Об'ел и сдругсдура дхссгрхрцди. Дисссртсцая »»г.о»на tía 214

страницах машинописного таюта (без списка литература и

ний), состоит из ЕБедгнил, 7 rr<Lj i! сиодоз, илл^стр::россла 13 таЗ-

лицаии и S3 ¿исунка^н. Сппсс;; литератури содс-р^тг 375 иа^ло^ак;:.":.

Возедшиа в диссертации псслздосайс Cituui eu-

полнены совместно с Е.А. Асеезой, Н.В.£рцлг.о:псл, Е.В.Кудряицзгой, И.Н. Луценко, Т.гиълчанозоа, Ю. В. Постников, Э.Н.Ре^зозоЯ, А.Coy и Е.С.Талевой, paSoTaaoiisi под рукозодстпои азт'сра. toгор благодарен сотрудникам лаборатория патология ср: ¡трона ЕГНЦ (pyiw^o^rrer.b лаборатории - профессор Ю. H.Tcscapea) où по-эгь при сгдолкснии работы. Теоретические разделы диссертации сьлолнзни азторои самостоятельно.

2. ЛЛАДИЗ CEHOTTCtJMZCOK ПРОДЛЕНИЯ КОС'ПЕЛЬСТЗЛ МЮМАЛЬКЫХ ГЕКСГЛСО^ОО Ч1ЛОЗЕКЛ

Пгрсччянз. fanor.mw'iCQKV.n npor.njouun сг.олеиытх cqj'.csjcSwioo :5усгозяз»ш • их своГ.стэ'с.ш. Характер» I« 51 фэнотипическж« -прояоло-!!ПГ.1 L7TCMTI1KX ГеиОГЛСбИНСЭ с понн.-опнсЯ .стсбилыюстьа является -.с^г^нил-л скорость.процесссэ онутрмклеточнса денатурлцим гееогло-Js'i'.n и окислительного 'поьрогдения !'.ог5р",м,' эамта'о кг-рутния нср-!ялоги!1 еритроцитсп, к:: прсн'лцаогастц и 'дефсринруемэсти. Рид причин

генноЛ экспрессии, кестйипы'ость, »гз».'э1»о»!:'.э параметров cSop:?it тетра^ра - i:ort?T приводить к упэиыйН!:» ссдсрг'.ния лиомаль-i:cro геьзглобина и кропи. Больгая группз !*утслт|'^::: гомогг.сЗ/.ноа \:".г;07- измененное сролстьо к кислороду.. Нг:»:г2Ц, пекотсруо гшспль-

ц»«язт • сп'лг^ческ:»» C'-«HOT;:n:'.4ecK':a проязл&кг.:1: H!j S сг.оссС«!! пслииермзсзаться внутри вритроилтсэ,. что' иэменпет фор'гу, Г'-'ор'-иру* »• :тгь и прс!«1Цге;-ость плотен, игругсст-и:: п^сларод-трале-пгртнуэ гемсглсбг.ни груши !!, с:»смгль!1!.:<г суЯ'епин^им исто-

I'": стабиг^пирсг.'-аш: п .о^сл&кноП ¿ер::-', .i-p:"^

!'•: СГСЙ273 !J 7. л.

С^"".":—■••■;. ск'" С"'.-?"'.'.?''-?. !'эргр:!т гем-остп-

тичзгк:«! тха.чнзмсэ разного у реп и - с? молекулярного г.-э ерггннз-t'vinioro, its гнсгс!»нтурнгсть » ксг-': озп'лсг-чнос-п» сбоспочияает rr.ipo-ryo "licpjiy рэакщш" спстамч краа;:. П '.:2!'ПС!!г£!ш:э оЦам.та, приииоси-!'ого r:tci'.ciib!ib-j re!crr.c2:::!3:i, :мг/7 £'г:и созлзчс:г: ¡гп:с?ор'.:э или дзгэ больсшстсо йтих »'эхгл'.ГгмЬз,' чго псзесллс? г.э случали

1,".!ПСЛйрСаать не5длгспр:;л-.':-м:> плрппчт."? пре^гленгл, сЗуелозл::ннм2 CZQ?.07ur;<л нутглт» :ого бал:'.п.

Ознсвньа» isitropcu' чолзкулярр.сго уронил о гльпансацу.и проявлений лгйого нутентного гемоглобина полается напичнэ п. готерозигот

сериально рсАотейггго го» элегичного. глсЗкнсзого-гена,' продукция которого способна ка/лонсирозать сниманио »/логшг к'.стльных гемогло-биноз и обеспечить »»ормальнмй сую/.2рньЛ урезень гемоглобина в про- -пи 0 ¡гсмпо!!се.ц!'.',1 наруганиЯ, прмамсс!"':::! кестеЗпяъиЬ^ гемоглобина-ми, участвует-ряд сритроцлте^ншг Сзрмаптоз, изхелкя!at- »{лоточного и

С!1СТСГПСГО УРС"НСЙ, ТОН НЭ МЗН20 ТЯГОСТЬ ' 1СПК11МЧ2СК0»У карт»«»« - гемолитической с.чемни - у гетерсЗиготн;»'нсснтелеЯ,' а сбсэи,- »ссррели-руот со степень» нестабильности мута.чтнего гемоглобина. Основнуи роль d коипенссции тканепоЛ гипоксии,' к котсрсЛ могло бы■-привести .

напичиа иутснтиого гсиогло5чи2 с пол^лнт;^ сродстеои 1С (саслорсду, играет увеличение? количества ернтроцатоз о крозл (орпгроцатсо); другим сагзшу (-ошанейторнь-и иэхии-.о^эи ¡.■¿."..:стсг. отигчениоз для из- • которых носителей тенях гсоглоОиноз уса^ач;;.;::? сердечного ыЗроса и перер^спредзленао крогогс;:^ слрссс::, чтоЗи сбаспачать кис-

лородом в первую очореда» 2.;:знсано ил: {из сргс;у - голосаоЯ ьззг и сердца.

Взшшэотносс<>ш порзмчни: Сон-от;;г»;чс:г!»:л про/,г,г,^утс.чт»:сго бояка и изхенязыоэ поддарг-^ш гс::асстглз£. «:зте1£» кроен из^ю »ы-мсстиенно продстьзить сс27ол:»:г а&зобрезигго подо;:;;;ого ьосия, исбольсаз, Сазас.-.огкчас!:;;:.* и^с^зиюск; то:;

;;;;;; ¡¡них С^иотг.тк-ои;:: прсг,г;:21;::Л кз^лазка::

со сторона и со::ра:г.гл* ссгтслаал рс.::а2ллоал

на болсо ила ылнло пзстслнаеи п;.л Сааза::;:.:а;у4ра- а

ьнегноерздогых С;л;тсрс:. П.::: ^ • отно2;5,-ст.л:ого пос-

тоянства ьнз»с>Л и саутрлаалЛ срл;:/.: су;..:г:£лаи,-:л- г,:::. сргсааз:^ Слкз-типачасгл'.а пролслспал ксгстег^сг:.:. аутлагалго бог.:;^ пер^ггеризуэт и:.:лааа ото, тс: рс^аоллгигл солгала:;:?, с. к; плрзичгплЛ лл-

Слкт. Уроллал, ал изтсро:: деггкгелгел рлгаоллсал, ккл;? р^злич^ьгл. у р^эп-л:: ипдаладууггзз а с слсасаалстлаа енл:л:лП п

внутренне*;! ерлда его гаал';а-:лс;:уа гАчэтитуцда.

Л/.длл\¿:;;;.•л• Кл сгсгла кзкла-иаз С л: ¡того:

ср-аг1' и, с 1,.р_уа салрл;;-.., (."лгЛ'ср;:: аа;::;:лЛ ерзг/л !.:л:,:лт Сап. сала-плнзаролл: 10 сргсглсалзл:. Г-лсл-спел, клпраа.р, схучп езтр-п: ггазлати-чссгых кралоз у г.агг^сг.-;'; »;лет£Л;-лл;лл: плл.гл празт кг

/£>;&?ста-с;г:г&;?с;:и.?. ил;: сг.ролсцарллсмаал поли-лкал:: тс:я::г-71Т-!#

парусаал С тсии: случал С^ггсрц

среди ьизсала стрлссслу» рлл:;цал сргс:ал!:л, рлл5:э и^рупглгг.:: ссзтсл-нио кошанеахорного рлзиоззг;;.! г,о г. сю^лллькзау гемогло-

бину с хараетергилла яг». отого нечего, игр^рпо-слпого ссгтелаал Сл-котяпичеаиоа пролпдлаал!»::.

Такии обрелоу, едгдуь? рлл.пачлть Слаотютачлсгл-.а г.роллг.лаал, шх-рйкгериэукз'ю парлачниЛ салаг^ллршл! дл£-л!ст, с игллиао: ссрЛстса 17-тантного болт и их Бираг-энаа на иоле^ллрао^ и иг.2-тсч:1ои уро^алх; пройглон1и, херглггеризуез'.е состолнио рсааослсгл плрсачяого деф^ггг и компенсаторных Еозиохнгстеп оргелизьа и.кагзнац, норгзнозгекое

сстссшиз, 1хгда «'Л!тенсс7срн'.х> позшгзюсти сргг.чизиз исчерпаны. Эти -заь'з фвнотипические прел олени:! одного и того гэ дефектного гена трапагуг наиболее сусестпешше особенности ссоЛств кутелтного белка гл е:.,ра-:'нность отих свойств и .—.¡пуп:?» организме, влияние на с-•".•сетатичееку» систему "мутелтнмй белок - ергипяи" генетических и ¡рсдсии:: фастсрса »»гаг« в сестити компенсации, тлк и при стрессовых :0Г5ДйГ.С7йИ:1й

2 п0л1г!с?с*:см го'сглсь^п [} он-.'.!'л лнлл.'о

г.зле!г.;п 1'1птг>дл'..!!сст;1 плгплнтез

Их'м::^гэ.-сг.'ебе:"! ».¿¿„"гг.а.. Глгон'-л поп'.'.'-ор^'зг.т, г^могло-1у.ул яерпгтьрио длл ряда чег.есочссг:х пслул-лииЛ. Три но мости нои-Г-Сг.сэ рагпрострглскн:;:-: ¡г;, зс"".:о:! м-ро пгркгчтеп - !!Ь 3, Г.Ъ Е и !!Ь С,

ссисиисЯ п его пол: /ор'нзм -

:.?, дегтано шкдйииаясгичйсгсггч и скгп2ри"1!гглпьт.'м:1 плмнм'лм

-птг.1'нс-. • • л ¡-.-ига » ргЛлнп:;, С:нде:::!чнкг.с гэ »••гггрнн и, слогот-- лъло. у;::.:... л:: •;; лл\? мс:ммпц'Л! сегл:;1'';он::?!"м ""р—"; рлегг'^гг-л-: •;:•:•• !!Ь 0 РмП'Л.Ъ м !'Ь 0 .'глЪ, прелтло, I" - с сог-у-r:\-n-

.••• -у.", ст • :, и п:: .-.о грег^'^мтс-1 ;:э •'■:гхи "и"мг,'ит<"са" ¡¡л роли :■> г<:"-;гло5п::\,

г.снцсш;::: г.'::*.7рг'лгсс1 *"ллл;го г:с,:н,-г.?,,г. -1, Слачитадык-» Сольг'нстго : г-л-тг¡V-чглтпплде?

сс"с:1 род!«:а Сорми бзлка, пс^лпллм:;, г ¿рол.тго, 07кесг,?ог:»ио недачно □ результат'-» спсптммг.сга : ут.ч: *г':- :го грЗ'Л-сса, г,лптературп'к: Г.тна позволил ы:;;йлить г: с:г."Г-ы?'ч группу умер-лпо рпепрсстрс-чин-ггз врриомти геиггяеЗкмс. ^ сси'пзча.'Угел нч столь чссто. как,

плг.р:;м:р, !!Ь 5 или НЬ Е, тел г.э ми:: о :<" члстсти сг::-:ча:27 критери:.) пс~.имор-*костн о ссанц лсиллыпк: пепуллц'ллх. В оту группу отсЗрано 16 вариантой. Распространенно накотср'-г,: из ни:: моге? бить интерпре-тпрозано с позиций сйлекцисиизма, распространение других вариантов требует своего сЗ'лсненил. Анализ степени нейтральности вариантов нссЗйодиу для сЗсснсраннсго заточения о соотзотстснн реально су-сгетоукгдго полнмер^нзиг» семейстьз аюиаглньа гемсглсЗкнов человек селекцисннзма или иелтр.гплзмл.

¡."лрарх!::: ^ к>:с:1 кеЛ-рЕиъпоспи баикосих сариаг.~оа. Хотя в принципе популяциеннея генетика ьь'ргЛотала гллн.ч^твенние критерии

нейтральности, применимые при рассиотрении белковых вариантов, практические попытки оценки степени нейтральности аномальных геио- . глобинов в популяциях человека сталкивается со значительными трудностям.

В соответствии-с иерархией уровней организации биологических об'ектов предлагается различать уросни - молекулярный, клеточный и клинический, на которых ц-злесошраэно рассоривать явленна иойт-ральности белковых вариантов, если со популацпоино-генетичесиое рассмотрение затруднено пли иезозыо^о. Тогда по аналогии с сб^ц понятием нейтральности под истинной иолс1:уллрисй нейтральностью белкового варианта, налриызр, следует понизь иерзэдовюгть отличать ыутантную Сор«У Сел:» ст норы^яьноЛ по ее* с;с^-!ггизныы структурным и функциональным 1;етодаыи анализа отих характеристик. Аналогичный сОр^зоа определить более высокие уровни нейтральности - криологическую и гл.;ннчссг.уй. На все:: уровнях иерархии работает характерные длл к^-дого ыеханизыы гсис-о-стаза, которые псзеолльт в иэьостник продела:: »»¡лансировать проявление дефекта. Текли обрезом,' к&здьЗ урспеиь иерархии располагает специфические вэз^яостйю} увеличения сф£с«к • слой нейтральности белкового варианта.

Следует подчеркнуть, что нейтральность пегого уродил иерархии для того или, иного бокового варианта дсл:.31а всегда рассматриваться дли конкретных пепуллций, су^сгвсаакне юторы:: определяется конкретными гсизтичоскиш и средэзы^ фаи-тсрсми. Один и тот «г бел!»ьиЛ вариант, в принято и пр^ггичеогл, ;с5еспэч;сать своим носите-

лей раз ну» степень. нейтральности л:с5ого уро-кл в разных популяция:: при разных-условия« существовала.

ОбцыЗ сиаииэ пай;.£сиькосгг.и сарийнг^эз сслоглобыш. Предстазла-нп о нейтральности значительной части белкового полиморфизма ле:.;!Т в основе попул,1ционио-гснетичес»к>й концепции нейтрализм М. Кииури. Может показаться, что современная гематология располагает -данными, подтверядаодиыи ото представление: иногие гетерозиготные носители аномальных гешоглобиноа - гггы:тич0С)Си здоровые лзди, и сбнару;.:еипе цутантного белка у них чааго происходит случайно о процессе скрининга больших кои'ингентоз населения, а не по причине гематологического заболевания у носителя, что позволяет предполагать, по крайней игра, клиническую нейтральность этих вариантов Г К выводу о

С'ПТРПЛИЮСТИ (ПО CyZ'rCJU'J - о >.:0лекуллрн011 НОЙТР1ЛЬНОСТИ) бОЛЬЕНН-î!:,'i бС'ЛКСННХ ti'ipK'iHTOrt ПрИХОДИТ ТЫСЙ М. Гк'РУТЦ на ochouo СНЙЛ'ИЗа ростр"~чсти»*нной структуры нолчкули гемоглобина. Ten нэ менее, удить о С7еп"ни нсчггрллыкчгги олриантсэ гекэглобина, сспст.'згшсь олысо na liptUif'Rt'iiii!« подкоп,ix, затруднительно. Диализ »«••'Птр"-лыюстн lib S, Hb Е и lib С (ni.'cc.u'ïtx сснсгнсй »:or:i-

¡(>'J:íV1 !J ПОЛИ» Ч'Р ; '.У.1'1 Сеч ' ",ОТРП fîîOï-T.b»:.'» ГО^СГЯСЗПНСП) ,

гполнг'Н!!!-.'! с !;píiL'/iv'".-!,;',.-4 гч гс!'~>?с::оп<:1, "ччг.сло-

с.«:коьпй i; ••зп'.-кул.'рнсй 'иолсг!";, .cr:«r.-.T';r.^c7nyf?r с "5 ст-

утст'".".1 i*xiюл.-кул ipi^.'í и HCÛ:;

Г'.-1: -гсп п псг.у::.:!г::;оч:—.чч'х чч? рлЛсг:-ччучччч по

"Ч'р/и. т."рч'.сь:';';, гчк ¡*ч."з у:'"';"';? г:'" ч>, гс? ?;"■! г-'уччтч C'i'cr:-—с:-с::ч ^ечггегч: о--; •: ••••.: п^счл-у.-:сгг';. ) !" 1ч:!;гчь;з-

н ■" . " " * р:;о-—v.tti ч г: ; ""ît; ч л спчст:« тч;ч-? Сг ■".- групп.- ^vr.c'iw-'o-j с г.--'-1'vhkv-'î г: ;; пчсл-срст.'' .' •n?::1-

Уннгч!. " • ■ f '."чт1., чгг ;

чс,-........!"•■ Г'.'ч.г"-.';!":': п r^'v.:;" гч^-.-, ■• ■ го -ч :'"2\г'чч ч'Чрч-<

л, ч-1 ■■■■иг,'); re. ч:; г: ."*;-" :■--" • ч ч, п~ч V;r\ г г.. ч: ■-

'y::'i¡-:íiC4 ч !"• Ч-ОЧ':ч y'V'V 1, ; ...... ; - ""Ч7-.0ГЧсг-

СТбОр.

Гг.ч,,:,!1сЛ стсутст-'Ч'ч Г".;"'......; ч: ч-'.угчч" у г-ггс-псч-го?

..-.-■•> г-с-го -лп.^-лг-тс-л¿ :*ч;ччго '""ч П";'""ч - о г/г.2, нг

';rí \"¡f.rГ:ЧЧ''Ч;:ЧП-:-; ------ -----:. Гч^тС '7 ■"'•".•Ч'-г.о.Ч'Ггпг.ть нли-

■ич'-ску:') t я.-* лт р " "j ^ f';:"!ï:-4'''"f С'-cor- tîtc: ••:••:: • it -¡.•.тг.-г-.'Л-готйрсм-'ст i пегих rücrnh :'•••{ гч" чг лсТч: -1 ч ' • • ч пепуг *!:::•": ímv-i ^ч'-ггслч^сть :?!•.:; !и-р»''.итсз Г:*: -с:о." Гглгг'И'Ч - пея-гг:—н'ч'ч.-т.'Ч'.оху :?:'-nrj'?Mttî» яйг.яатся.'<?.'?!:? '-осы-ч crp^::i'.t-ti"cro :*з.г":ззтпа (пноэ

от сСг.то числа"n?cóo7!ür;)- г• 'зпы • г с лс ! к коз,. сЗнгругэи-чп о го!юз 1*,готно!{ состольг.'МM ь:л "г.""np:í отсч, супп по одинич-

«•м случаи), ия!*,нкчс*скс:1. cîii'ntc'.'.lûtî'îcîi.•

Болыглнстпо нутпнттд гсчсглсб^чоз прог.ст"чл:к-т cc5c:"í, скорее, ícfbko-mofttpnflbttw вприпити, п тел или• иноЛ ctcrci:m• нейтрализован-;. ок> 0ргачиэ1'0я Tpj'ji» псеьдо-нейтрплънкэ рлригчти чогут-оести себя ;о пс-рч до »f.»íi".'HM itíu? кликическл-нойтрапып.'а, одигасо под всэдейст-3i«t'U измгяшпа-ихсй С-'жтсроп среди и/или - генетических ^лчтсрсь они •огут утратить счоо нейтральность-и стать чччоньп длл отбора против ix носителей. Более подробнее рассмотреть, псепдо-нейтральности бу-;зт проведено d глгао 6.

• -к-

4-. МАТЕРИАЛЫ i! líITOfcS КОСЛЕДОЗЛШЛ

Крови длл иссягдок^кя поступала в хода с*яюлнгн::л »:01я;;з;:с»;зЛ программу "Изучение рс2п?огтрд.чг«»:я и гетерогенности гаагюЗшюг. тиЛ" Президиум f¿.:\ СССР," Гсспрагрс^и-ГШ 0.6D.05 по и^нэлог«;; шдищшакД гашти;:о и О.С0.07 по x&u&scx, о ссогсстствял с шх: m иаучно-исслсдоЕйтс^сгсж rv3:>Y Ш-.СП;: i¡ ЕПЩ 13 СССР, о соот-ботствии о плачгли из;.дуи.1род!:сго сотрудоясстса с гс-цатолотчас!

цзитрсизг Болгср;:.! í¡ C-j^p:;!, о с:;аз:ич::я ийучло-техпич;

ксЛ псиои:^ сяугЗгд! ГвказАскоЛ распубюки, Пои-*!.':

. Кипра, !.Ьагол;:п, tu; учрзгдекнй r.í-Ъггли, t:a г;

i:c.Tonor¡;4uoiu¡:: Теплите и Тб::л;:си.

CaCU'i ¡угаг.зз г.зя^'лгрк-зЛ ¿v^hoctmí» г; ctc;".5Yt. £:¡o-

гаяиш:; rc-»:or«.cC;n:¿2 . с вслтсяцзД рсЗа'

изтодоо 1:ссг.здэ:::л;;а прлзс'Д-ла, íuí p;;a.l.

Б чизяо ociiCLíiin: стр*г;:?ур:;ого 1.зслздз:;сд;:.- Сиг,:1, orcCp

ьлалитичесг.;;;*! слс^трзСор^з и ц-;пзЛ na.

тат-цоплвлозиоЛ пг.зш:э CL-llc^l, глясаочпал иопззЗ

k.:¡i:íí.;í s-:po:¿i»orpa.*;« п глоЗниа^и:: u-íü';, дзуизриоз р.

дглзииз пс.-п-п:дэз соч^та;;:^ u грси-легра.*::;'» (ntnv;¡

низ »1с.р~ц» C;:nr»-pr.pi:ii7) и тсн;;зи сяр»- ц^тл-яз-и, е-.'алдартииЛ czt иатичас^'Д г.:.:зизг.:.нгГ; чуг.атс;ггелы!Ости, с

рздзяоти с^но^зяз'лл к_пг;:д- u (ори,; со Е-З-прзг.зпс

ного t; e г^рЗсг^яоптидкакого р:

кл-пязыл, üiiiSc;;.^ ручдего

пйптидои.

Сб'с-кгои cncy;;ir^!:cro пгсяздз^зл'.гя кэучзгс»

u¿;í вооиоляасгсй кзгода пептядн^: «api с сяоз игял^лоои.

личаствэ пептида, ютороэ их:ta Е1£зя;:ть с па^эоа overo taroas. является опредэядк^ш для иЗора изтодэз пззяедуь^зго «зуч-знкд i вичнаа структуры пептида. Рогулт-ти кзучяш. Сз:ягороз, сюякз» извлечение пептида из тон:кзго сяоз цзллкяези, cyi££¡PQ33¡¡''¿ с тсЗ Прзв^дениое иссяадозан'.'.з г.ззсол;у.з Зйгличтъ, что изгоя пептндн шрт в tohjcou слоэ цзллвяази иокзт бь*гь испальзозан d ¡гячзстсо ропрепаративного в работе; па иэлзкулярнзЯ рсгиостикз а.чоиалы; ге^оглобшой.. i"ou но tanao. посглльку водалять с ого поиоу>в па no.'i пептидной карти удг^тса в средней порядка 1-1.5 н^оль пеп »тот ыикропрепарйтивный иотод иохзт быть, приизнен лиеь .в сочетс с ct^uvsi чувствительный) ^гтодаха! аминокислотного анализа и cej-

I ЦЕЛЬНАЯ iíPCSb I-Сункц^скадьн'-гэ г.селэдспаиия "j

»агатсэляшЕ

ГИ.ШСАТ

'"Л/,'.•.'.'.•О

H!!1;Z/1E:Î!!E

Опрзделзшге гачсстгзешюго и количественного состава:

orcirrpoíjepea ге;.:аглс5н!:с1з, арсуатогряфпа гетгясСиноо, уровень НЬ A3 и Hb F ■Стабильность гегЗякзата: иаспропгу голы игл тест, т^рыостабияьиссть

АЬШЛПЫй-Я ГЕ'ИГЛС!

упл

jrnîT]-

.»-'(.»•Л''

ïurK.ian:.

Электрофорез ц-.-пеЛ , Д,'.:-;(о:-',,.сг.о'г:;гЛ лизят

I аксп^ная ira {-—

Л',*;«'.ci'i'crcTKV'.í. м

ТРгГГГ1"*Г£СК!'31 ГЮРОВШТ.

'.тлл^/г/'егс." Г-1 • »* **

г^тг:.'".! -,

. Аналитически ¿гнгс-рпркм? со •' спецг^^чесии'.'нтрсяпдйния!::« •

а 02 р;

лш.'ляыдо пзптил

'Сг "Л —'* п

t'- и ' С-кокцепсй: сяяянэц пептида

*••'-. И'этся '|j£Hc:infЭг^Яча, . гетея •Д,*13П,Ц-ггч,.''на,

Схена: иояекуяяриой сссйств.

сномальисго 'rcusrJioOmás. р"5о то

фезеикя. пйптияоз. ■ ••

Для целей определения. ягшсжслотисго'сестсзз.иструктур-,, jeí .характеристик кэдсиэодш* и •cyöitM'.cijo'nbjsft. ¡:ог.й»?стз' пептидов ил рсзргботен »жтод' количестяеннсго.Ъ их

лусресичрук^« с зисоии»квглтоаш. С1лспси'ЛЙ-прс:''.г,поди^г.. Г.'этод сстоит п количественной переведении. египскисяо? п из: ДЯгпроиавод-разделении ДНС-сая'.нокпслот дзумйрнсй nuccitoa.voîîthshcil-тонкоо-с'.ной xpcûaTcrpa-jHârt■ на силкглголе й-далее jo».!speinin китеграяь-их интенсивностея флуоресценции хроиатогря^яческих пятен ДКС-ами-

Тьблица 1

возможность кспользозенил пслтидмд: vts.pt с тонкой слое целлюлозы о качество препаративного истода

Определяют»; факторы Результаты

1. Уровень йшнокизло-тньлг примесей сорли.глацлн - 0,3-0,8 (¡моль, глутаанновал и аспарагиновая казло-?и, алаллн - 0,1-0,4 тиль о }:ро»:аторра£.ичссг.ои нлтнл' (1 сы")

С. Диапазон колачзст'и про-теолиоата, налез:::.::;;; ка пептиднуа каргу 1-4 ш.оли

3. Выход ссободной И-кслидз-бой слсшокислоти пллт;«- ¡^л — Са^

4. Технаиа ол^цал "ьлаучалааа:; - ©¡Сор илдез^: аалтрллл.' л: л

0. Эллснла' слазала.;: П':р..д;;н, с, „ с;...-ел отллаор^олал-прлл.: клл-ьода (4:1:5 по сб'с:. !л:з/,лтк::л: С3% ¡,7ралы:нл.'л ¡л:ллолс, 102, тр»ал;ору>;оусалл ¡л.з; К ' тр;;*,тсруксуснл:: каг; 0,21.! уалусклл каолэта

6. Природа оптируемого гюптида и а!-» :•);'.';■,г.пллть сльцлл ¡.хллепт от р:.:,г.:е-ра >: струпгури пептида

7. Полнота г.ротсолаз£, конкрзтмгг: свллел л:л;лл 1.ЛЛП,;; пллтгдзл шлх-длтеа ь п;лг„>л:.:: СЗ-Т52 от гсорзтичссксго ! ; .;,-..:.алл:::: к сг.е-ца;лча2 27П Са-ралат а т< л л..л подеор;и.чно2Т!» соотсэтстьу друга;: плпгилсл пр:;5д:л'.лллтся а 1 СО

8. Выход пептида ко плЛтад-ной карты (следстькг? пунатез 4-7) иолл-Зллг&з и предела;; \0-76Z с оаа ¡...лета о: тсаиалл! оллллл, алл/лнта, прарода плпгпда к полноты протсола соогллхс'гпоптадаал слллсЛ

нокислот при колбугдлааа к:; УС-ссзтси клпззрлдстслааэ на кроиато-графической ^пластиагл.'. Ьлла рллраЗотсаа телдзуаллзрдлпаткаЛ с! нируе:лий иикрофлуорицлтр и услогнл даагиг.арззанал слл;аоал:одогклл: сизсей. отвечайте требо^с-с«и количестсекнсго илтода. На рас. 2 приведена картина разделения С-Г-произсодны.* ссех природ:¡-г.; еллак: кислот на двух пластинках с силикагелеи разизрои 6x5 си. Налнно такие пластинки использовались для двухкоординатного сканировали-.

-1G-

хроиа.тсгрс&1чес»;их пятой E-S3-£äü«j0isiar»07 точэчным ceotosuu соЦязу, кап oro по:азс.чо на cxeue рлл. 3, с цхв имллма, а

тыаэ для иденти^а;^*.;*. далепллнии иьтсдои и

при солзспиросаи;:;« пзтчягэ ¡.лягс-ги далопл-Едл-лла. 4yc5reîsTc:aisc3Ti» метода а:.::;;;з:и:елзтпого алл^ила - G.0Î асспралллодлилагй -

С-5%.

Длл пзучлллл плрллчлол cvpy..r.,.'pu каломелл;:«:: y^zvxiznz паптлл-з Сил ccGpcji ручного е.ллеллреллнлл плпт;у;оа,

предлталлллплл па рщг.;. плллллллг cunan: ¡лть сс^сплрлла-

нлл срадллх по {10-;5-<1ллл:л;;:> п:г.т;:дол лл-Зим трех кгл-

úo;;:e разлила; р.л;;;;:л:л дллллл-Едлллл, и прл-

>.'ofо ¡.лп'с;;л Сд!.лла с ,л:.л.л„Л глимл:

л;!.хро1и:.,; сЗ'с.аи.: р:-Лл; лллллл Our... сплцлл-ллпл.::

!.:.::.;:. л.;ч..ла ("о" ¡a рлс.О с 1.,;л,.ллл.^::л.; тртлил с^'сллл. Сллллпл-ролалле £:а::ллллл:л пллхлллл л С керилдл-

нал; полазаа:? пла:л..ть лллл.лЛла'Ал::

нол t¡au_:;u. Ллл с»::;: ц:л:,"; i.:/. *ачлЛ:а типа "гаум"

("?" ia р;:2.0. 'ил.;::.; сСр—си, лл„л:а;е ; ..лрлллте-лл сл;;ллплрслл:л:. Сил длл г.-.;.... ro-

Сл, г---уь'—.Си,. лллллллллл;; тал е дгл ерлл-н;;толы:2го i.'jyia.r.:;; s::, ;тл.:а;л ерлд:;;:;: по рлларл

и:;,.;:".:,;:: и к.::л;:л;;о, плллолг.ст прлаалль его и с-а.а:.::; с г:_л.л;;-.л л :лта.;л; и ¡ал.отел 1л;.:рллр. паратпллего илледл. га;;..-.:::;; л

СлЗралнл.1 ci'.Oícui tarer,г-. егруаг.уризЛ ндагп^лаал; слхаллна:. геиогяе&шоз, рлал:лула-л :а р;;о.1 1а;л:;л'ас!;уо стра-

тегии, . спралдага слил d работа:: по 1ал:;:уллрлсЛ д:аг;;оо7;:.:е с;о-иальни:; геиегдобцаз чзг.-сл.а. С tcjís suл: i::;uai с:а Сил

испояьсовада со ecci: crpyicryp::^: -глсрие буду? .опл-

есни далее.

■.\ í;., '■■-• к <

: ("v.', ■•'

..'y.'^-'r-': ,

Püc.'ó. fl:-íi;;'.ri.'¡:.-'

в TCh¡:o;i сvc-nn^.oou

}• -г.".аб;:нс:.-: jx

l;,wt »......

: : v. cr¡,:2;v;:¡; -и vivy 7:.) —:..'... f... G) ty.:.::. - ,r.*.-rj.'; j'.uio^o."; ц:п.;,

r) - ' .....Ц;..,:,

:■) - f,-r; ; ..-.Г, ...

•) г:

il.; !. ,,

f O

í-C'.'j

i, o

O i ; i

O c-

• Ô

. - . ■. ел

? ~ o o t;-o

, u

Füs.G. С.чС.,1. и слог ц^ллзг.саи тр;:пт;;чсг;-п:

цгпаЯ: а) - lib Lepare

Bzî&cn i! б) - üb A. amis Ь -гяоЗЛюгоЛ цопя cisipstso-au:.

м-сглсбгнц леггл сгшляптсй степом ол^ктро^ороза. при pH 3,9 по их !М*.'НаН1!См'ПОЛаИПСОТП, ЧТО СВИДОТеЛЬСТПуСТ Об ГЛМ'ЗГЖСЛЭТЖЯС Oûv»-ix, сспрсг,о:'лс.::~ч::ся изг^имщсм, заряда на огяу йЯ'"»<цу в lib S и ПЬ Punjab и m едиц:'.ци - в .'!!>.Е, С н i'b О ЛгяЫ Структурисо :сг. эти;*. гся:згяоГлп:сз п Ссг.ьг:-".:стсо случпся нугячало прэ-

•..'..uif.'uco iivr.i'.'M'H'.vj ,: чоччлькчх Д-г;:1>.-:плЛ псясночнсЛ ü•::•.'>-

, "pav'Tcrp^ суг/ярпто гясЗин.ч, гилроя-.'л 7p;'Hci'.Hr.:i

37'» irî'îcr.ao cTr'r.vpTnr..! ч'сть стр^ггурпсо изол^-ушгчил в д«;:ь-

r!t дял i-pr;r:'.coï.4 úy;r-r сбсчгач"."-'-:! с "стгч::/-"71>чо получпгз зомюю«эг»7\У), п:ri7i:.vV.i г::тс;;с,ч г.;-П7;>гн'"{ it-pr i. -.y :¡¡;c»í

г.г"--\:зп'.:о ;i глг.чсч.чолотнг''* ч"::::з rulov-r.! :::::: п.-птидоч. На :c.S 'ягогр-.»,«:« г:&г.Т5%7Я« ггрт ч«?гр-ч счоччльччх

>-гл''- Я р"зггс.огр'">'г!'"!'-! гтг'.ггабина ri ср.-.г?»'-»-

ü! о •::. ч-> от:- ';:!:;;;;:; гусч'ллмпл-с п-'Ч!-

'•—п п'г""- г;о -зет о"уч"-!:1 о~""-ччч:;п с.г-.'"-".тчтч го-

:::■."!■:•■;■:■ : . г;сгг;тч::х :",•--■:! ?'......! Î:,!;V -'у. -тм• í'"!

, г; —i, "b ~ ;ГГГ; :«->Г-, !'VO лТ ■• " 1 ГчгкЬ

i'-Г.Гяу-'Г'ч ч Slb 0 Avrb ^1Г;1Г.".ч->Г;'.Г|.

M V- - - у . ■■ •• •. | ¡" M ¡ ;¡ lii'Aj'« ] V i • Г .'! ' ' -

;;Л у^'.vччс", ¡'."'л ü - •.'/■y:í¡. г>;пост.'.злг-

1"-;<т, f:p;!.:-:r.;;¡m рчз.f>,.er 'г.г-Т' сгпуо'^, что различил з зрч'-л.нг.Л ч :лс"-лы:гЛ ".-:гг.с';-ч:-.' ä:-.'> гл'р-ч'рччч^ч'геп ка-

-ч-либо сдиич п:*я7идг:1. r::'-;v;у;''-;:'.;ч::г' ni c:íí"3

"птидез пезпзяил- стг.сегл на. н п-:-п7:—дм З-цг-гл:, ч;о п с'/ютамчи с ап'.1Ч!««м норч';;:ь!!СГо пептида 7! Г 5■ г:—долило кдтати^'гг'.рспать «ло-пльн1л1 г«1«огяс5ин i*.:-.;t.lib Loporo Dorrten Зп-г>7) p?( 113-1 .

Ии$ч*".и?.ик£цил fcçi<ux. сяхслышк солеялоЗшюз грсзодилась по бк,-:il схема нол/:куллрчс1\-Д»агнойт1:г.:1. ■ Па риг:7 су;ч:.::рсЕгли далииз .. О 1'.я1'аяизйц/.И на ПСПТИД!'-ЗЙ IWpTO OHCUar.Miir.î Г.СПТ'ИД-З идонти^'.'.ци-

oauiHHX'O pi50Tû рсдг,.'1:( а;о!.'аяьшя{ reverlo!инса с зг.^ппчи н р-цепи.

из // 3A7X¿re?:/ pózn:z->7:uv вид-згпли,. сзнсиь-залсь иа;ств;пс!и'.гзл-оД стгХильнзст!^ D 'услок'ях. ляопропаюпьнсгэ "ГОСТИ. иУдйязо- прсв'эди-и стандяртноз пр:1Готозяс«!'.з. протеолизата' еючачьнел р-гясйипс^ол ■ ;гпи.' ;>î.s<HO!'j;ci!OTiim - след:» • паптидоо 7а йТЗ •. (си,-, рис/?)- 'показал;

что пораыЛ из них язллотся 4рггь:,л;тсу р-цапи 62-С5 с ой^аиой töriic-Тир, т.е. соответствует пептиду 77 £.чо;^2Льлсй цепи, а ЕтороЛ -Срзгыунтоа ß-цопа С-2-СЗ с тс.1 из sterna, т.е. соответствует паптия

Т7-8 йнсмалыюЛ-цопи.

Fas.7. ; п;птнд:::л:

ic-гл' в слоа це-ллслосц слоилль

a¿:r.¿07:u:;:?cac:u:i2: (fâ)fi-rr.о5л-нелл;: ц;пс.'; росс::; иугелтни.: геиоглс С.и:сз, нлел^л^лцл^оеллллл и pwOTû. Каптргсткэ сцкэлг:ш плтнь S£pc:;»cp;a

"A"-i:b î.:uïx-i. Abrcîcn Lirv

holn, Eu-jnos Aires, "D"-

Hb Detroit, "î Г'-i'.L» !.: Ssstetoon. "V-

ilj II::. Пслее сг..:«э г.?»

'/¡/...u лл..е,л,. с г;:гvr.;

из гласилpzû..:r-r->c:::j - его

нлл д:;лгпост;:::л. г;ллл::.,лл :;-л:'У..;:ло с.чэ-

¡„лаенел р-гяоЗллоес.'. ц:.;.л ;;:.л;.е - ие.-и^лле s л.;, л.;. Л..:лл:л..с..е."л' славно j:opt:;rcp::orc гл:глл п.л;,:,;- "¿'" (сл. р.,с. 7) пеелеллл чпть, что сп гсллетса слслле.-лсл: Ï3 с ос :-¡;o.'; сОАрР-ХЗор.

ií-j Aj-r-zz: сс-рл;с:л r;.:oTi~o~ dot ыоу-кьксЛ АЗ-/>-глс5ллел.:Л ц,лл ;лл;;;,;::.лли его л:тс;;:а! íi.:.n T*y;:ii£< ксрг сСчлруллл ¡:_n:¡4;:e ("A" »u

p;;n.7) i: стсугстсле 'ПС. Л ллгллелотнлЛ г::л:л! поело;;.'

что сд.:л л;::: г.~:..л.:сл !>л~лл:ллл Ср-плл^ол, сса-Г-'.л EVsa ocTùïi-i СЗ-СЭ 'о г.-¡u;:;,- TIC с £ЗРг-у->Л:з

(10а Hi. рло.7).

/••a t¿ja.os RpifupiTüiuso ьг;:еле;;::о стого ru

глобина преходил:: -и lot-C-P--' :;ро;--тсгр~':

ей. После еллглл гсиа и сглл^лрглсго крлготс„леллл г.ротсолл^-гй аноыальноЛ /ß-jj- глоЗиислол цег»:; ьеп;'л;;л_л сбллру.^лл. поселе-

ние нового плтна ("ЗА" на рис.7). Длллícíьзилг.лз пзпт^нсп ки^ркила. содержоцргоса û отса плтко, позволил сслллчлтъ, что он содержит cuicb анемольнзго пептлдо, TIO и ¿рог^оитй Т10-11 *(огтс.тк БУ-10-i1 с прздп-\. >аительнсЛ а сосной С;и->Сср. Сод:рхсл;«';ся с "РА" пептпдньт t^Tepi-.ал подгзоргали сег^он;:розо.чл.э в пороллгл^ с Hop^iaTibHiüi пелтидои Т10 в лчс-л)^- т;1ла "псук". Ре-зультсти оеллелл.р ьачия. приБс-рекние на рис - Б. позволили эаверглть иде»ти4«ка»я>.

olpyktypx«!

a Ce**t*u?o«z»i

t')Q

к"г-н. а ТГ-*: г."1« trc г.1«-ЛИЗлн* ПЬ /Ьгест'ч аТ7-Р: г.-.и гис гл* ГЛУ .rvj п '-О Ля» Г/у

ti.vf4 f' т ю. i.in-rpt • £ г11 e.ivtf » !îb Duvitci-AJfti J TÎC; <ли-т;ч СГР-ша-тгс

{US

Г4

<•£ Til; s*.i ЛГИ (I.4J-e-î-1 ¿cu Hb S?t{f 3 T H : ТП1» "»-мл ^и и ,мч

леи— bp

¿î (*♦.'<«» "/«i•• í г? ••>'•'».Лл* Л ''"/»^г/ч .vív^í.-v /•/•"' íw'á Hb ¿V/'.'" /

!—t.vj

i-t.'íl--1—t.4'j_i-t.1i---1

f-тг:- ''î-i * " ■ н > *<■•■,- .r ci; л 'f

I---Т.П-.-----1

I--T.1!0-¡1.13—1

i-----t.li--1

ГТМ: r: Vi« m/* ?c»-r; j-f.n -г * i-i f*r •

!---ТЛ7-!-1-T.'l?--—I

£1 • ' if -¡i-u rit-r^i-i'-yj »j-w^h й'.в s.v• ff/!b f.ij

ïl, -.• « « « r e: i-i I m.iv'4 tj<•;•<¥ ) к*»fi'* eu ¡. 1.1 ,c-ni i >(".u '«r vi,..1!'! о. пт* », « . Т í t t '.Vi л, î jH .*.t>*44lî M' ill I' , t.«" 'i'» Ч ; i К!"1'' '¡••■Г,' 'IJ

<5 V *• • V -А -М'Т I И. V ь . ».¡I........ !!•.»,{ ТЛ J Ч' , : i'-.i - •

Г у* »J'íHIt^vJ »4. IÄ »"К,

Г*. Cr:v-".-;,vr;:- "г а.;-:;-;; ' л-::-vc; ' : : ar --v."/:

'Лгг,гу:;';':п*-? г:лТ'*:лг':' *..*~ ........ \; "Л "та а

"';• а-. • ': """л "л "тсутг--;;:-, глр-

i'cro t;-r~:í"'i TUа::' ~"О. :r\-:\ о

а V-1' """■,< г...........с;.....с

Г11). Pfsyr'jTr-.TM с--:*гг.:;тг-'.':— --------v-ro г:г."г-тглтг?*:^^ ni

у.з.О; сна гслталс-ла.

слхг^хт г?."'/1'":::-"'.t СТГЧТГ-"' сТрглсе прстзол«-

31Т П!С""-ПЫ!СЛ ''a-^-rrciv'icr-c^ ц-?г.м. С*Г""!'Л !Ч г^птнгнпЛ

к."ртс- огсутсгкгг i.'cpvsruKsro гоптидл,-710' и н^гг-гз кс-.сго пятна "D" (р;:с.7), кллог.-.г'ггггсс-л ni ñCüy п-лтеи 'лермплы:1::;'п Т11 и Т13.

Ai-;:i:iK!;cr.OTH«.-i 'ncü'i "D" 'пог,7сс;рлйл' п.иой.псп.тидоэ

Tîl и ИЗ и,- нрс'л-5 того, г.нс".?л".ь!'сгр• плитира Т10,

ССД'-'-рГЛ^Л-ГОСЯ Э ПО ОТНСТЗНаЬ '!:' 711 Г0Г'."-:-?СТЛ'3. Попытки

рязг^-ленг.л эт:а п^птидсп 1'зтог.см пзптнг,!«.^ игрт з тонксц-слоэ цел-л'ллези и cimî'.itrrer.n пра ¡'.залил:-:«:! узгслаП.рллл-лааая результатоз не дали. ЗлкироаанниЯ аз трах пептидиун "¡еярт натерапл, содеряал?1йся d

ooiia "D" в' кЬлнчсствэ с:зяо '6 «аэл:»;- бия. подззргиут раз^плзнпэ териолизинои,, с.проду.гги разделили изтодзи исптиагаз

карт _в тонкой слое. В-паралг.элй Е.;алсгич-л/.л процедура била-прорсдз-на для с;,:эсн пзптндзз.ПО, Т11 и Т13,' олклрозсик::^' пзптидноЯ карт и нормаль';,-er о прохсолизата. скагпз слоя сЗкгру-

гзшш пептк&зэ. терыад;;;'«чзс;рго гидрег.пзата пссиолг.л сделать у,х отнесение к структуре тр:а?г«чзс»вк: прздзтездзююа на р;;а.£

£акнцо {и^г.лза-пзг.гида ТП1 из образца ¡з

сочетании с isixmcusuJt его «р;. сгсаглпзь

достаточна! д::л

Ezsiaxijzxz&xt cc^cj-'^J:.'::-л трззуст. прег.-;

лз, пр;;;.:^:: ¿".зкалагедзохи к харситера

иутецшши:: и Ссс.:р.

irj ЦЛГСС1-/Л . о услсгг.лк слзктрс'з-

рьза на цзлясгсло бил с пззпзлыак образцах крсЕЛ, получз!: TS--. ¡Ьсяедо-а;!;:.-. по Дагсгт£;:г!Ий АЗСР.

Пратсолпса.' ц:пи 6i пригстослзн ст

Iii:..! сЗразси. П_г.7;:.:;,:::э (p;;j.Ca) ■ ctls :ару: >?лл гятна "Л

и t.3433i;323i;:;2 r..::;.\:;;a.7V\ с^г.:з:::'.слотного с::али

за а.'!о:г_";ьно.";о что c;i пр-лзтеадле? сс2оГ;

Т7-В (остатки'57-С1) с с;;:.ого ;.з г,г/х остах;на

тида , с п Г.-'.-'-П'Ц

изтедз:.: V, c::cr,Hi-'-.' р;...у;../;:..;' cciuj-

цни. нозего 'irj7au-.-.zT0 1Ъ Г^гсстс:: с£Э1;.:з->Рлу.

ю £гс^аглсЗи:! с ог.з;;тро-

СсретическоГ; tun сС::ару*с;-1 D itpo-u

г&мэлитичесюЯ. • Цзпаиулдрнаа• диагностика склкчапа прзпара-

тиьное ьыд-злиил;? ыутантнзго го-аглаЗика ьатодэа кзлопочнзй пзизоЗ-ианной хроштогра&м» стг^дарткоз получзпно протезлизата елоьЕ-ънсй АЭ-£-глобиновй. цгпи и .его раздзлзниз цатодсу пептида карт, р: аулътати которогопредзтазлз.чи на рис.S3. Аинноглслзтний ссстаз тидл 3 05 cooTD£?TCTpyC'T С-кснуоБоуу. ipar^frry нереального г.ептпда Т1 (си риз.Sb). Н-Конц&ооЯ {регцает. бил о5нарукан только послэ тотапь-нсго ¿ши.чЬкислотого aiianna.ü ссех .пептидов карты в пятне-пептида Т9.

p C-S

cb 1'< i о «i

О » г, - -J 9

V Л О C3>

<< .j

2 С »•s a, 1?4 Сй> f

1У ff to (1 П 's..,. J 3

7 О "JI i ts>

пор:?- рТЮ: г.-:; - »•• - лоЗ - fis

рТЮ: ГЛ"! « • • • - лаЗ - ЛЕГ

л:.' 71Сл

С5

есл -

а) 6)

з 3

ТЮЗ

¿ s

9 i? 10 SO

".......""" "".....—г)-*""

I"" - Г*"* )■*-•- »! »•»«■-" ■ ••» » * | р л I 1Л -, / ^ т* t >* Г-# J- rt"î J « г

л) it j) •• сл'н nbrr:':1:':: г ;.г з ?сл:~:.! слсл иолг'ллли .'лл'nr^ucít ••-гг.г'рг'глгл tr.;V5( Hb Л:г«?с?гг:г» prrc*!':!2-":t irno!)

'.•.4ï.:.p;;:.,:î с:к;гд| 'Я плг;тлг;-л. Сол за сл^о* oCee-nsKU плтга пспти-

лг, î т*л .....л с!.- п г:) "" стл'л*"

лура гллмллылл! ('«сггаггсз TîOnb-ïlCj, г: л :г-ллг:л:"о-

;x;.i глррслл^э ЛЗ-^-глс^ллллсЛ ц: л:: üb п срлллсллл о

С) - Результаты сслллгллсллглл (г:сдч:р:л:утлл пллллпсллтллг л-лсть) г;- лл:-.!.его'Сp.T!.'t::7.i Ï2-0 трллтмллоллго гнгро.т.гтм р-глт-ллллл:'! • г.лпи üb í: ллллл.л.

рлт,~;:пг.лпсггу ргсгрп-л1,"лп :i о р-

-ri ¡ícrrpntyT.i гглксго *рсг:'.с:!7Л ТЮ.т. (CÎI

С f^J» J i— -•"■■> » f* i»" f«^«

«»fJ-» '* Л!-'1'*"' *

>р'*"'î'b !p^ZPГС*)/4.*!'?» j

вшнуй так по нздвани» районного цэнтра ЦхковскоД оЗг-астн, сЗлг.з» которого »1Л его носитель.

ни ш;;,сс.7г: /<7лиз->гл:и Сыгтродгпгь::""^:» при иадьнид гемоглобин Сил в сйрасцз, г.слу чайке:.: клд струк-

турного исследсианил из г. Ццдсия СКлпр). С^саа, пэдтк&'&Л г-арты полученного стонпиртими ойрмоу протг.-о;.;:;;атй алзи-^.ы;:::". р-гг.аС:;.:аааГ, ц;-ни представлен« на риг. . иганалпи некого пег. гида

"Н" показ ад. что он »¡ьялетса керасг.еиивг.'.кзй <!;;а"ыалтса: 72-2 (сз-татки 9-Й0) с пр^дослаггкельнэГ. ^=«->ГлХ.

ной выделений аноа^льксго пептидного с^аггзмтл 72-3 пролег,'--!!') соп!,-._'стно с Е:О.Крыж.-цкии с&р&тнс^азной сгсскоа/; лплилол га:;;:а;зт-нзй храиатегр^и'-и. Да;.с.ч* <;>«ч:еиг Л'а^'л'Ц-1 V

кмкро^.'йке. Ггзультсли се^енироиглиа (рпз.Сг) казаоала:; ид-'ьтк^лиаци^ нзасго с -.^'.алансго гсаг-лзСлал, ¡;з }Л?!у. .->Ркл.

о.гдспгс^г'/.:*;¡-: ¡:з:стс:-:.:: са:.'.:т::ч I"

Гаспрогкрякти* с..с ;.•■;.:.. аа\а:-лла",-..а,:л С ^/сГ; г;а.аа

а.ал-куалрлзл д.какае;...; .-и.а. с;, .а:., с,.', а £.;..-

глаа^, су:., ...;л.;,л„,л с *;оч:::: ера;..а; а., кал н~.аг.оЛ нр:::ьзиигс.'-Л. К—лла. а а.а.: е.. ал._-атсл псс^тис а а,/га:

и таЬаицу " и 3 с;..-;, .к.; д-.члле ей 1,да.»с, 1Ц.г.гла...; г.ссладзаан'.м слеа-.а.ан.а; е,ы..а;,.с?.:СССР

с.ч'Зл.2) и г-лгл ДГ'УП-.;: С7р„_! Чт^л.З). {1...:.., и с-.'пззпгслана.-. р;.а-

простраиакио.;ть 12> С р£Г/.у->Л;:; к 0 Рил]^ рШГлу->Гл:1 с р-з-

пуйликал Срда-Р. 'Да;;;: лазал,' 1:згу" Саать сО'&скепи

близость» ити^ рагиопзыч; гсызглоЗипспсди;.": Е и 0 -

Кгс-Состсчлал Дана и ^еллеззтаетстаекко,

Солаызе-кэлк'кстьэ случае:, ¡Ь О АгсЬ и Болга-

рии <6олие О) и сочетании с даш::;;.:! круги« наследодателей пэзьолл-ьт рассиад-рлаада ьту .страну вааиз;.;аа1 цачлр гс:;зг;:а5н-

нопатил'О АгаЪ. Илтчиз в -СслгсрииЛИ» Ьс-рого Соа1оп. <нааа! пд-антп^л-^¡роваио более 10 случаев носителасгаа оюго вариант) на сз^т' считаться случаЛни.), т.к. от от уизрепна распространенный вадшант ебнаруу-йн во илогих при^ы)«^!;« бгаааь-иму Средизсинсго

«оря.

ТмЗлица 2

Лпсуплыи:э ге:,:ог.'|сб'.!!!п, славленные на территории СССР

и идонтг/м'.Л'рсп глшкэ з рпДото

Лчсп'йльт/:! го^сглебин М.?сто сСнеру.^йнин (республика, национальность)

1. Р.'гс г:*~0Л.:а->Глу Д/г-гестглсагп АССР (тпбасаргнци, лезгины)

г) 5 Г~л ерб СЛ ДГЛ.Ч С! 15Я ГруО!!!!ок.'лп ССР ГСХР Угбйкоюя ССР ССР (русские) (узбс*!К1, греки

3. с ->;•::•} АзолСп^пглмлксл СС?

ЛлсрЗлЛп-лазглл Груз:::гскл1 ССР Т?л*~"С'Ллл СС? УлСоас::п ССР ССР

л. Тлзсл'Л рС1,'гг->С:э ГС "С? (рус СГЛ'Э)

,'.сг:;гп !Лг.ло1п Про рс:с? (русс:л:о)

( . - ......... —" ............—...... ■ Груг^гскм С"? Гл-с.-с:-.-п С:? (руссллл) (гегт::-;!)

3. Г'.'^псз Л1ГСЗ ТСС? Сг;уос::::э)

•л '.'У-.:. 4 г:г?

10. * „ .. ^^ _ ч. ... 1 СС?

11. . 0 ГепК-Ъ ;Д21Г.-;->Гл:: ССР ГлгЬстл::л::-\л /ССР (::стг?Лии) ГС ГС? (русс:'л:а) Тглг-л-л—л ССР Усбл!:с::гл СС? .

12. . 0 Аг.~-Ь 'И.'?1Г,Л7 гссс? . (болгзри)

ТсЗдлца О

Aîtou.'iT.i.H-_:o ГйыопяоЭини, вилош:*к&; tu тсррито?'.;» ряд:- c?p;.;¡ Ü мд&ыт^цкрэ&одшэ с ргЛпгс»

клоСапь'Лал reuarraáKri

IL:ото (CTp-iaî

1. Set if «.04Лгп->Т«р

с. s |iñn¡y->to¡

3. С

ES'1

Слллл

Гг;;гл iL' .:•„

<.. iUaciu

С;. L

IL:;, p

ß. /¿ana;:! ;;£2¡7.y->

La:,г;

D Punjab р:пГл;/->Глл

:*лпр

0. O hn.h &Ц'1Г;.у->Л-:о fi. U'Pcre-traten

Cx.ïv.piu

1Ьлуч 'ими:« ií r-''cítt!.Cprj-i„:i¡tr,p;u':'. o »<а;,:;ч:;,;» -t»s-

ni;pocftîi»ux иариапкч» г<:Ю>\г.:£ииа ь p.,да пзпул.'.ЦлЛ СОТ' (ТсЗд.С) гв-Jmn?ca n:pE¡.v.i .литш^илли даннлл;! та::о."о рода, пояучлшглуп

IJ Hftií-A C'fp.ji,-. CV;¡ ксис?ьт*:руюг liy,il4i!J.O JUî-ТОЛЬКО

j> спрогтрежмшч íopu ¡y,xHTi:::.: ixWvTî.oSkhôu'. üo и редких ьарпгл- • roa,' ысгл. и t-cna V» ¡ury¿r¡><&$3 'км&г ob'«спать- njjctjyyspct-

boiiííoíí i''sciipo::!pöMöHitb tili S, 'üb E и ИУО Punjab г»ког.ог»1Ч£«скиа:|,-'te*-торич&с»мми. 1,опуыц.;«ир-тцт;;чйсъш:1 и причинам и иэка-

HtuuuMt, тс i>..'P¡cí£í Çopuu, оничсиал» дли г^илтояогическоа

npaiiTüiui, ыогут ьстротшьса -иодсо^стно.

■i

сгс?.сг.-а смо-»лл>»"»х ■.:а.',озл>5инсп. Попрсбноо изучение

с: ::"с-тг! !*гл-нп". ?г.матггыпз« гссгле^лссл не? пхег.кло п оа-¡,..л> при сг,;*с.'!;•:; нсг:!"{ и р'.тлик пг р г'-.чтеп,

, Г ; р ~ ~ £ - 1 , ; • > ; м , |р , , , $ »'(.ЧЛТСр!.!*

.....-;-;ллллл '~:.-.::сг; подумгч. СссЬя'Н'.-.!

:: 7 п~'Г- "ллл'; г л г. г'-) с:лл 'лчнлл с

."":"•': г Г.'.'-'? сслллг:г-л- !'•••? г:с"гГ'".-7, с одлсл

. л ' л' •■■ : "л л, л гругг': - <:леу;:.;л; еллг.-л-л лл-

' ' - " ' Л "'"Л, "Л '■' -■' ; У:) ''>,*' ' Л .

', Г '< Г- Л- ■ 'У' ' " ~ ■ " ■ ; '•-:■'.'. л.

!"? П Г .л-з л:": лл л 'Л л ::') О ,'г л- ■ • О . Слллллл'} л--

:-.ргл": ¡--гг.-:, (.Зуллсллл'л:1 лл •• —

■л с:, с." с ; л;т/ '. - ; лл-: г:-л::;гг?л-

' р-гуллллл слслл-л ••;"• •., л*":"-л":лл:Л

г,:';лг:;тсч. г г г:Г"^П'гл!-

гл р:ллул лл.лл ль л' л;• 7.....лл::;л, .лг-лгет1"1 лэ л-л: - ........л.....

спсссЗпссть тр-лепертл глелерллл (см -го.10); г.с:лг-лл гг-:г\-гГ:::тз 3 и. Л групп г-:*.-:!.'грел? того, л'тглллуо ггллл----::-;") сл-пТГ'-'гл:^:

эти го пп-лггея п:: легллуллрло- ни :глллл"~с:"!-г:Лт-

рзглшгги, хота й слу - з ч, "эНГ и НЬ Тгосгл пролпг;::::л

носительстса trnix белкой хорошо о со une и с л p a о ал ¡ u, v. е. ui: относительная клиническая нейтральность более вира^зна. псу каг.акуяяря^з.

Изучение cooäcTü открытого нового варианта - Iii» !.!а.-л;Дск pG£(F0> Рис->Apr позволило иитерпретирозать последствия. г. ко.орлл l:c:.ït привести cîiinioiaiûjioTH&i ъсхени. В fi-су.V едлнлци:: стсго • отсутствует ipjcuffficíí клй форшрозсш прострамстваш:сй структуры белка остаток. проксимального гистийина F8, гсжхлеитно ccs:c:,i:r,^;-;íi стой ьйлспа reu:» с глобиновой часть» суб*единицы. Сило установлено, что Гпг->Арг в положении F0 приводит к потере re;.u а.,ал;.г..-

huíáh суб' едишешши %по крайней ь^рг - tu vzTt-о) и к cüsoí-.'Ной с WHu дестабилизации всей структуры в целой.

Изучение- (¡.ушарталькгГл свойств (рис 105 сбисру;;:г.э уаалллан..,.? сродства иутглтиого rt-ызглобина к кислороду (Р «IG,С ¡л.: рг.ст. г.о ерллкелиа с С7* 1 гл рт.ст. ййд нериолькой крали), иоде.,;:; иаал.рлл-тпвность окаигеклрааилл; (отсутствие елга.з:рлало гар:л"ар,, лрлааД, saac ото иыеет еасто д:л; корлы), каруалкие rai-re^aaoro галл. :г.лаа-{.;-,.-. (калапада.; n«î,Û пр.; n-2,C-L\7 ь р.-л ). Î.;,атлаллла;; , а -

ti.'-iiaa". IIb Рх.лДал, i л.-ст *..-:.„. ли:л крацлллалрглл; i вкутг... а; .галл-• таи. Сто влечёт а.. сс5сД,, с сдлоД стерзпы, уел:;,л;ллл., елараатл руслш.л крлаллл ¡ал-тск (гаааллл) к ; л: -'..л • калла.,.лла ссд.'Г кал рстккутыпогтоы а кра.л:. с. с длррсД evepaaa - yi„.;,iarav сад:.рл„-

¡лл клалапало га. ;лла.:..... l лрлграц ;;aa;. Upa... ,.л- v. a.л. г.гр:;:г-;:» :

Í'-L'.ü ра-л,'1,аЛиаа ¡a;a¿а;.ар... «а-ы крсаа а;.., : _л.а «л. ;. о саидетельствус-т илалл-л;;; - :рал^ло-с-лелкаА рл'ллл- а ¡лллл.аллл лра-

ал Сольного клояародал (па.аалалэ к., рас. 10 иркл/арал) г.з ср.....:.л л. •

с корлаД. - Dea'aro прлаадлл к елтуадлл, ;;ар::,.^рлаД дал ал.ллл.

Ycîhu сбрлаа-л, с ал; .¡л. л.-алаллал^наго гиг-;; л...;а ГС с ib i'.:; к салаалнае с ьтпу ¡лл,алал..а С лалле-:ла.'лчаскл:л s; (у^аалокар-каа: саалст^ прлаелн к клинической :л р;л..а -.р.; л;;а." гсыслкгпчагкэД алеют.), набллда^еДгд у Go/л.ьоро. К;; 1:л:иДек. рсг.уу.атс;:, не rw..:uïcs иолокуллрно- или клллкчао2л;-каДтра^ака^ ьар;;~тгси

Результаты каучалл.л налотерал: сааДсть S'.pp.^ïa^a.u.i.e—л.л;л анэ-иаяьныи roaor^owîu.a.j согласуется с новостной, точкой сроила, соглас но которой чаи üar.ú'j cy«ictbuhi-:a роль ааа'люга'.елстного сстатка в пэдцарл.ллил (лллалай ¡^¡¡.ap^iai галаглойлла, той к Солаилл.Салоти пичесшш изиенс-ииги и. гаы: следетсла/ к бол.а yüí^üiSj: 1^:лнлчес:и:ы ПР03ВЛ.2НИЙЫ кеаа.-т вести S£u¿c¡ia отего остатка..

Г'.'з.Ю. сро.';.!:о-('у.'ссеи"с:!;:гз крип::? цзглнсЛ ;:pc~:t, "п."- то г'.з :;j>-r"í п t»cpr.:4íüTüs ypvjüfir.tf У:'.''..",?,. \ - нсситеп!» üb !'з:.г-;зк, - 3 - í:g:¡;t:w ;ib Л1гс~. Пункт::рем из oc:î

оп'озит<?;:м:з:? с:со!:гом::рсггл:!:о'Л гечоглоби-

n : ncsivrwu Kb :'o;r:tc« и r,o::cp"i np:t Pc. с^т-.р:::! C^ICO >ri Р'.'.ст.) :i i <--'0 гм рт.ст.). .'ртегчэ-::'.::;:;:"-; рпз:ппп гг ccrS'P"--:::::í с^с.-КЬ fer :•-< строл:с.г-1) :гол:"::атпу Г'слеро-

гм, стг.""г.сг-сго kcc-.'io а ткп«л».

/."?.'мз Г.> D F:~>Jr'j и Гл О .'sr'x пс.-ребпсз

rracorpcnne' r.c-'.';Tpnr,ii!C3Ti! п~р:;с.'ггсгз гссглсП:':'^ пригара

1:ь D PcnjrJb п I!b 0 ,".гсЬ, tœirnî;':tr'pcrr:nr-t п и

з тгЗ.тлц-з 2 и 3. Гетсрсг.тсти г.э c3c:vt гг.::згг,сгкпси ..мзгл ncpyanbtra гсчатсг.огг.чзс::::? пс:"зато~:1, отсутстпг.э г:г::и:?!?с-г.сЛ ааитсузкяя. Езз сбсяглс^г-'П!*.^ d рсЗото готсроскготи-

кс^пзунди с сочетаг^л:-:» lib D nn:t Г.Ь О/Д-тглассзгтя» плпрот-з, кмели DLpa".3Knya кштчеспуо снютсг-ат'/лгу, кг^гскежэ гаптеяегачзских по-!?ззптолй;1 и, d особенности, пер^олегки cp'/.Tpciyrrcn. п отлич'.ю ст прсстих гетерозиготныд нозятелзЛ лпбого из от»х гегез. Гс.'сзпготнь-з' носители Kb 0 Arab, согласно литературпь-м

yujpem.-a.", пьэдипгмч&скаЯ aioiau:. с то врсш кья er,::cl,,,au', rovozu-roruu-'l носитель lit» 0 Punjci» бия couopcasKta • сдераз.

Oriroor.T'T.'uMfei iur,;»:i4ücr¿_; «еитрадьиэйть Hb D Pury¿!> и - п слЛ ст«'П'.-и;: - На 0 АггЛ u сн'.чмтелакз?. г~'рз сЗусдзая^с vol:, '-..o Ш cavara;; г.'.ут-.уяазазП кулаги £-г.*:эЗ::»;с:.з:'. ц-аг.я , aa■ t Cw^HÄ pa.auci'/a:r;¡ 1.».■ p-cyCO;;...: ar; L

сг.;:раяи;зА солост» г. на примитат учазги* с ctivw.í.t ;аг;аг

^а^одаЛстьнл::. cn?c«r.er-u::;u: eîp;v.;yp4 и ¡¡Л

юглЦ'Л:.*. i',:L:.'GTi¡o, что рал a;! coTt-viia. Gl*, i^.-.^v.u 1Я.ЗГ;,:, c-Jbü-rvst oii.viitTi-í;.tia naaira'-Hiiari i я: ijop^an;:«»:! ¡ ;.'» roà'-nçia:.?;/» cs;.aa.íc£ tvanv; na cf..sM!«n;ia с ccrcr.a!<:¿.;s участка."..! 5.a. ;;э <;р..д.':си.з*

rra., чго ; a tu;vy:,::.:.г, ir .í. Ги: ara:.......

г, ото;..; к, сею ;л ьпаоччиа c'j'i.c;;:.:.":;; 1__.гл. a.;.;... r.rr:.'; : a; .,.y:a ; .•...,. ¡л.прая.л.а :ти il- D Punjab ¡; ¡I.j G .'.; ::~r.......i., •

r._¡a.'L'.-i4!c,:"¡ cipj'i".:;'*.:: га;-::;;я;-, ;,:.;';,.:.- сг;,; я:.::;-;.--. :' -- ■■.." a. :..•■.,; а;аглг' t, а-ггл-. уччап'.а, ср.:: чааа:.:л::> .a-rúa '. : Г.::. са.„и.,_.лг.:у !;j тч. с:ч_-а iaayacayc.::. 1;,.:;;.:; с. ; : ас:.. ;.а:а,а;.л:,.,,

"';..;.,;:,-!.a.'.ví • .".„j:;;.; а.;.....г, -...

Г'.:.• .. ;;л ;;тсгч; c4a¿ar;::aaa II- D rcrijú'j i. 'la.О ."¿.ab,

irr;.чо гчто i rr г;/:;.:г;ч- rr;..................t ar,-..y-

лгрча-чаугр^-ла. ' ; j: ч;а "с;..::; n'a cciJ' с;,:; cO _а;:_ч, :a_„.' а, ;.:... ¡,a-ситс.-.г.ч с.¡.. а'.;; ..г: •,:;.. ;:.a:arra: i.y гу.уче: :: чагачэ» i,a,sj\r.,:iv;a:í-ну.а ií;í;ipü.v,iiasíu (Kl" 0«Д-ч.'> i:;;'.vp~a..¡ ¡,..;:'..ra.с.„. - суд.', t.a

его Гаагаигчааг:::.: каалг;,:,,:::; 1 1 :.г; ..г;; . .. г, . а ;;aay;r цл.а: а.а-

уч.лге.. n; arа..а;у . ; .у :.: : а :,, г а с:.; .случ...',>,агч; ;,;..... .. п.-¡:ra r¡4;.::t4-¡:r::;r; .cayy¡:vy. . углу;...i,..., i;a.,;;r-p. a s:...; ¡ала:, yVw;^::. !; r; i; гч-, :,гяаС;г..яя.л;-..; £ c/r '.--71, p.k.ll.....

£.;:a:rrr,;::;::-Гч,:;:?;::У;-;::-г i, t.rc.. r.::.;v.r.i;:r.¡. ;1сгг.:

' Сггясуга 'i.',::.с;'.;,y m !.гс;г;с:я:;'; l!a D FctijíJü и lía 0 и-- да-

"г.. ¡.г." ;; ...» tuya:;..-.u¡.

пу.V u î чго сг..;,у;-г l. ;,o.'i.üi.a ' i:

Cejaiop:rsh.:7J:¿ O K jíC,,;.;; na,

стр.14. dhv^tu.ukoo бал^^-геи-а н си^.-Латьи ,'ш-

HUÄ rc*Korf.aúwios чс;па.чс-т псоида-иэАтрщлии.'- б^чиетсиа ьаркаии, и

отличи'.' от истинно нейтральных, могут подпадать под действие отбора а гетерозиготном состоянии при изменении средспых факторов и/или генетического Фона, когда внутренний коуленсаторние ьозиогзюсти ор-гсниэгл будут исчерпали, а такт» о гомозиготном состоянии. Поэтому у поеадо-нчйтральких ь/;риантсв нет псрзлектиии достигнуть гшсоких чяатот ь больпих пспуа.пш'' с поиогья случайного дрейфа, т.о. внести ш1лод й нейтрчпьиуэ молекул.! рнуо ьеолщи».

Лласрньтнирузт оти дз? группы нейтралы«« овриантоа »««« факторы средн. т.гп м ф.-лгорм внутренний среди организ»/'!, включая л го гснлгнчесауа аокзтатуцкя. Внутренняя среда организма опосредует чяглниа анеп^й среди через соси дох&икзю! гонеостаэа и определяет, з к,':;*.:!:', предел.--,:-: •.'.знзнет'.я усяепнй бетмшй пприемт будет оставаться 1:зЛтр1льи1.а, нэ подзс'р;'*,нн1:и эягл-инпца:« отберо;«. !Ъяю предполагать, что йглэ уроггнь рмсятия срггн'.тЪ, чем соверкеннее его гсч: лсстптпческае тем болько такой ергшгам !!Ог.ет дспус-

глгь г.се^до-!гейтралыг-л белкегмк скрийнтея и тем, следовательно, ¿ольлз голетааесгл:? рллнслбрллае гида, и которому прнн.едле.глт орга-аилм.

псалоатьсл, что псе-одо-иэАтргльш-о Соласлаэ плр-.дашг пред-стг.ъмгя собой толыго геиетичзскнЛ груз, потенциально средний „<гп пспулпции. Сто но та;:. В аспласгрсллпнс:.!, нгйтрллиэспсинсм с~сгс-Л!:;<;: !:агу? сул:естлелать !утгн7»Г!:з аотераа, сеттаясь по-

тзиг;!.глы:о гр^дгегш ял 1 ерггллзг-л о сб? -л;:?;:! услсла тх его пани, нз-сг!Г_оатьсл поллзьлгл! ллл газам п друг»:: услсага:. Если текко но-'л-'л уоллллл суг/-'стг;сг."ял.л Зуду? грлалти сг.г-алг-лм - алг-ра-'лр, гл-.-гл-алЛтрлльнаЛ глг'лл.1!? длзт г-слгогнзсть ерггааг-у з.гпть ас-зуп :::лл:..';л::л:;уз аллу - то Сг:.г.'й "з-пло-ал^грлль:"^ глрчлчт г,пелал аз'лг» сгйть цзи!'!л?, сГ!Г.лЛ-г::м с-эллаталн:"! иргг-угрстпсм порея пр::::гм д-.г.лач типом. СтЗср б'гстрэ по"лплз? п-р:*-\'гг:| •'зстл'-ч.

Пссггдэ-п-л'традькаэ (и астаааа |:зПтр~лы:'лз) лсл-ллал гг-а'а:?н <-о-гут елллдлть' сг.э одно Л цлнасЛ готсацалльнсЛ спсгсЗассть». 3 тл:'л:: гг?аг:пт пол прл'.тратал-! гсмлсстлз 1 нггут гллааалгь рглпссбрглн-ло сочетала.-] длслаал, трсГллл: а групп л"алс:-ла:лзтаг: л-'ла,'лпл-лгсгде-сп результатом псглгдо.татзлыг:л тсалааг:: ^тЛчлЛ з сочз-

тсчаа с рлг^'бкнлдалп!. При птсп с.ту«:лЛ:гэ }-лгут слс.^сьсл еллалати аегкекего цоктрз ггслсЛ (уалг.и 0гл:"л1 ?нслррлгуллторнсго), да-г.::?й срган!13!.<у ;гл'л;>-«:',5удь лсаал пр;;лгуллстпз. С отего г.'сгллнта о. пользу т?л'.ого всраанта нач!)ет лелзтлелать отбор, и следст:=иэи зтих соб'лай будет пояЕленае у белка нооей фушади, закрепленной а ово-

лкции. Таной иехшши возникновения у бел::а позой фукэд;»! - слалог на молекулярной уровне процс^сса преришстих рллноиесий - позволяет обойти оеноину» трудность'альтернативного механизма - через отбор ь пользу 1с&кдой стали", (т.о. гл^дой суинокислотной замени), ведуигй »; Сориироианию нового оглшного центра. Предстоять себе постадийний отбор и пользу промежуточна* вариантов, конечно, очень трудно.

Ззолх^м&мий Рассмотрен-/,смэгодьних гемоглоЗипоз чзло-

с.01:а приводит к вшоду, что ни концепция селекционизма, ни 1сонцуп-цла нейтрализма "и чистой [гиде" полностью но сЗ'аснякт полиморфизм, характерный Для семейства аномальных гемоглобиноэ. Создается впечатление, что мтагониэи диух концепций па со^ом деле и ь г, лет си г^

и сн;;ц;1..-тс>', если рассматривать. проблему белового полллор-4г.зма в иьол^цисиноа асп^гге.

(Ьжо предполагать, что на соре свос-Я воолэдюиной г,стер;;;; "но-в0испич<.*ннмй" белок бил устроен Нй»50Ле0 просто 1! состоял ЛЯС» I» апмнного центра. виполнаккгего функций/ рзд» -которой Селоп Сил "создан" (ь 'случае геиоглоЗина ■ группа ге^а с руюслми ее аг£>-■нокпелотоун), к белкового' »;&р;:аса. ксспоцл^зирсвснного носителя активного центра белка,' обяздакагго необходимой длз работы етого активного центра »¡•сткосгьо Тс:ой-взгляд на -ьалодуе" форму белка-иг» противоречит гипотезе I Гилберта о мозаичной сборки.- генов нових белков из вкаоиов размах -предсушггвукегш • пяЬз. Прад^йственнпкои "молодой" .глойшы/ откоторого ьтот Село;; йог унаследовать ■ гем-.солэиаакцлй доион,: йог .солатьсй, налрниор, цятохрои типа Ь. С другой стрроми, отот' взгляд согласуется с 'визовом Птиаина, что ти-пичние пространственные' струт-'ура. глобулярных белгмз херсктерни у*а для случайных последовательностей.-саннокислотнш остаткоа. • (.¡злодей глобин, вероятно, и прадстааллл собой случьйнуо последовательность аминокислотных ост&ткоэ с"располог-динуа:и-центральной его части 'Геи-св.яэизах)!5ш домаиоа.: Этому пгрподу оаолодюнной:истории белка сопутствовала его илгинмольнаа-эволюционная'.пластичность; больсинст • во. «айикхдаслотпах аамвн, лок&пизова: тих -.вне ангинного центра, вело г. нейтральный балкоьш варианте^..Такая ситуация полностью соответствует нййтролистсюя чгонцопции белкового. полиморфизма.

■Услохлониэ организмов в процассо ооолкции сопровождается появлением у. болка .нозих, вспомогательных Сун;иу!й .-'функция регуляции активности белка. Эти в а« ад функции управления позволяют организму использовать белокболзе эффективно в изменяк'-лихся на протяжении

ллолшнснной истории /слоаиях сносней и внутренней среди, шш»-

беле к й сОиук» систему гсмеостаза ?/олекулярного уровня. Лктип-нл'е центры, соотаетс/вукллно 'iynittinaM упреиления, появляются d пластичной, изменчивой чг.сти шлеиулн и привносят с ссбо;Ч ограничения на рсэ»го:иость дъльнелзю мейтргоыт вариаций соответствую^« ш'и-нгч'.исяотн!!х сстатноа tfj'j'm сбрглсм, процесс вйолкцин белка после ого аспникнопения затрагивает гобразом его н&споциализиро-ездьу» часть, хотя коррегсция ссно&нся фунгецни ь соответствии с из-»•оняг.г.и-'чгя усяа:;::я:.;:1 и уровнем рлавитка организма, разумеется, то-

происходит. По пере сЗретенил ноны:; ^уни-ций управления, сспер-ггнетаояанил и сп&цналпэедин беяколей структуры воэшяюсти для изЛтр^льисго пол'И!-ор;:?з1.!й белком постепенно утрачивается. В пределе л л 1 ^..•ссг.оспдцийЛ'/.зироэе.чного белка псе ого а'л'.нс^-лслотке остатки |;:эг*"лш!;ч, иегипченно ».'олйт бить сделано лиз для зл'-епекнй, игеЬ-":гл лл-нсэ ад:хпл'.!;нсэ значение. Зга стадия алоллц'лоиней истерии Оллла псянсатьп сеотсотстпуе? кентпцин солотюнгт'л. 7с:<сй путь с&олшвютгя пргоЗртасса.чиЛ Солгсд находится о ссстзотстпин с шлюпом Ролькекг-теРна о созрлстсмии степени неогл'лилг.остп с-"н1!01'.нсяотних ептатпегз, '1ор'."«руг::"их боло:'., и, едгдеттояькэ, о псзрлстскии н.сн-лсстн иелислсл стру.тгур!) я :годо г:~ол"цин.

i'jv::, ем?йгсниз!'л д-?ух концепций Сояколсго псли-.ср'-.згл, на пап ? -Л1Д, ¡.'л суллстпуе?, нейтралистская и сллс:-''л:л:'лстс::гл горели яо-л ллгел протиголологгнгп поллса-'и, кегду j:oTep!r-i грот.::с-о7 оголх-ция лет.

К-д :гкей .-л? стсдни олеллцли ««дедится гл^сглс'ллн чл.леллка? ¡tot ['лгссть'о, гегоглебкн - один из дрзл.'пм Селпсз, стллглй ал сссэ длительную г-лоллкленнуа пстсри:-) специалнзирсггглп*« с гл'сслсл <уп;:цно-гольней загругеннсстьп CTpyirrypu. Отдать о? талого Сэл:« нюглстпа кгЯтрэшгих плриантез а нлетелг.еэ пр^гп нэ прилсдигсл. Урсллпь по-л;л.'.ор'из!,:а гивгаебкиа чмопека ссотпотстдуот стадли гэл^гул-рнсЯ лсоллцни, из которой находится ото? боле::, и трлЗелалллм адаптации пепуляций к fc!tyr;?!j услсллл!.« с:фугл-~л:1 ср:>гл. В гс.луллцлл:: чллсле-ил полинор&тзм гемоглобина предстсзяяот сеЗсЯ а нэ

рорэходнук Сазу гелекуллрлей слоллцля, что с5\л"сул?ся с точней прения Алтухспэ на беяшпД петяпжр^яи.

7. нэвьп подход i: структурно:! иде>т:е::;:лш:л Аиогглльнах го-аглок:юз

Ь'ал^кулярная диапюсти:«; ач-зцалпш:* геиагязЗписа с со саи&пич-лэх одическои и аппаратурной о^оргз'лнни »ujjwtc« длительна vi дорогое? Oil ¡зим струю урн.ц:,! l к; С ;>- Д ' > i I 11! U1 х:. bO^L'O^iû'^Ti! ce ПрСЗйДС-ППЛ и

раЛоно>:-центра;; геыогж&инопптий ь СССР сера: г.:ч\-на' дззтупнасп.ь; со-OTbifTCTOyiC^ví'O оборудован»;;! В то ta н^сЛкосиг^зть «..зл.-куллр-

ной ßHrj'üacTiaui, сбосизы^иа,: результата.".: г.рзгр;.

'ЧЬучс-tuv? piiCtipCiCTpfiiwimocTi'. i. ••«.♦тсрагч'нтлч« г<... су;;-стьуит у;;.- u ¡:, v дз - Г.::,: p.;-;;; J;,::.'

cpt-ß* i о i1 Aatw, ti Уа: cí¿ ¡ : taa l .

При f.r.-jpr,K,OT¡:'« ис-тодэз иолл^т./ри^Г: t

t:.tn:,!iO к услзй:;,1:.: Г^ а г ; : п.-. :•.. :. :

t::.:,ctp^íj, г; гсходшг из иг jrt„-¡.!4i*¡::tí;;: í

ц.-птрсз г. плане rip;:cii;-fjT«v»i;!i; íitnapaTypi:, c;cy¿ci¡.;:.¡ с»ки;•.;;;> шитой kutorv»"» 3»*.¡>.'i fcí-T.5 н д;,;. tipo-

ян,! cr.u<;!u;; CTf¡yj:r¿'¿г.i.; гзсл^Д'оз-,.:-.! С^ичп.н.л п,;;:с;;л:,."л:а/|ы:ал *трудн'«ет»» состояла и отсугстьнп r.C'U--L.;::.; ti г.р:-зги.« г-гсдзи npontpc тишыч> 1едел<.*ни<: rt'tórf.íxiü;{c.:; нЛ;лп цлн-л, г-зтсп:.» ¡.зга;)

6:j был» tiffiacpvßsttii'üito ьзналы-оза-ш и прагти;..- oít-4¿ctcfit;tu:; t3".;¡-iwíío-ди^гностичуеи,-,:: .лсХ-зратсрпЛ.

D octioúy ¡;: . : подхода t..:;... |-".азс:;ч--с:з;з

sj.ïï одл t...ш'ллц.'.ззьол j.tu cljj

йнаг.иаа ге^алнаатг; f. ц-гпзЛ, сдллчз кгпольиоьапи сл.; С::ли

о »«шастав. i-aapoitpvitapwi- ста ыс^ь*!:::.: кнтерзе

глсбииэвихалы. При г.зучз>«:;1 пр^наратиикг: ьозиайюатсй стандартной плзшш Cellc^el разора:: 14 к 6,7'си биг.о устсюилино, чго если содзрхаипз c;io«j;uv,aro гз^згяс-Зина a г«ьад;«>£.7й состазллот. иапрп-t3p, 4ÛX,' то на сдаоЛ разделить да 15 кьйяь еюиал1.нсй

цепи при 'HtiiacotiHH сус-йриогч» глоЗнна п. соотаетстиенко, до 3^-40 1г.оль при 'нанесении глобина аномального оЗрсаца. «ели он Сил нре-д-иарнтелоно иидьш«.

Цс-нтралиниЛ изизнт, ноаого прспарагньисго tjToßa - извлечений Силюаого материала. из пленил {Ьйбсг гозорл, техничис1-з'.& трудности, bünmv.UsxÄto при-'каьпечанин CeftKoaoi-o иагс*ри.'Ала из носителя, обк.-ссолиьании материала и с-го 1из;;цгнтрироиании. «зляотсй ochouhuí

срм.озем в использозснии олектрсх^оретических иетодоз в клчест&о репаратионых. Нами были разработали условия, позволяют^ свести ¡перации извлечения белкового материала из цкллогелл, его обессоли-1сяия и кониентрирсэамид к одной простои столпи, протекающей с ко-л'.честееннш« пи у. од ом глобина. После электрофореза о денатурирующих •слош'.я;: с машинальным возмсгяы:,» налесенкеи глсбиня (или гемолиэа-п) на стертоау» линий по ьсей длине пленки ее бокооые края отреэа-;и. прслашли ямидо^г/арцем. совмеглли с основной частью плешт, 5'П*ечэл!1 на нескрел.'еннсй части половине представляв^« интерес 5сн глсбинолш цепей и вырезали их. Зоны переносили о пробирки и толностьй ргстьоряли ацетат-целлюлозу и компоненты электрофорети-;:-с!ХТО буфера п нескольких порцллх смеси абсолютного ацетона и этанола (•"<■ 1 по сб'е«у). Нэ растворяешься о этих условиях глобин' 1реципитирует и мо:",ет быть почти количественно дьщелен после цент-р'^угирсвания и удаления недсссдка. Выделенный глобин использовали непосредственно длл протеолкза трипсином а ст&ндсртних услсзиях.

Полученного количестса протеолизата (10-15 ш'.эль) пполне достаточно длп разделении пептидез методсм пептидных карт п тонкой слое целлюлозы. Качество ¿иигорпрннта является хорошей хсрглггеристикой метода о целей. На рис.5 прппедоки пептидн'лз ¡сарты аномальных гло-б'"чспмх цепей распространенных веризлтоэ гемоглобина, обнаружит« на территсрии СССР; поколение глсбинслых цепей прозедчли р^рабо-тгп'.нл! игми «,'5тодо)1. Рис.5 ссидетельстпует. что качество всех пеп-тидих карт вполне удовлетворительно, следовательно, удовлетворительно и качество протеолкэатоп, и ссотпетстоуглаз глебиьелыэ цепи не у с туп г. от по чистота цепям, сыделешым классическим мгтсдсм. Используй разработанную технжеу в сочетании с аманехюлотнмм анализом предстсалякз« интерес пептидоэ, ми кден7з:'*::ц:!рслзли псе аномальные ге^гдобини, пептидиэ 1сарти котср:я предстсздспу на рис.5. Супест-сснно, что используя раз работа«« Л метол, длл проведения молекулярной диагностики распространенных сноизяьких ГСМЛГЛСбИНОЗ, £нгу-рироллзпгих на рис.5, по ссек случаях потрсбсзллссь нэ Солге 0,1 мл крепи, котерме легко получить у прс5л.чда из пальца.

с:'.сперн),Читальный подход, аналогичный кспэльзсланнс!Г/ длл мкк-ропрепаратиенсго элетроферзза глсЗинсзих цепей на пленках Сэ11озе1, был применен тегл-л для ыикрепрепаратипного разделения геыолизатоз. В этом случае техника извлечения представллсдего интерес белкового материала была та гз, что списана пыле, а длл удаления тема, растворения пленки и ьхшонентоз оле!про!среткчее!лего

-ЕЗ-

буСора пзрвув сОр;^отку вирозлкной осни вслпн î, bZ p:.:T;.o,ic:.; К 31 в аЦОТОНе I! Далее - НеСКОЛЫШМП ПйрЦЛЛМЛ ClUrCii ОССЛ-ЯИЛЛ СЦОТОНа ti втснола (4:1 по об'сиу). Твкьй подкол пс-ролнет вудзллтв »;з одной плги;ш до <0 нмоль лродстазлакллго мнтерсс гло5;:кл, годного для пйслодук/цзго раЭДС'луни.1 его ц«пей.

Замена дзух относительно трудоеиод; и дорогостслспг припараткз-hlö оталов структурной идентификации cmcu:jíí.«'-« гс^-гдсЗнаой - ий-дзлзннэ иутоитного бел!» «с иид»? его глобина) г. uíомальнзл глобино-сой цепи, ьиполнлюак сбично р^лличниин tipaa-iTtui: 1х»::о::эч;:оЯ кро-иагограф-нн, значительно удивляет i: упро^-т исследование в ерекд, кг008оди;;эу дял вэдель«нкл глобкновэй цепи, сскра^тс;: с трах до одного рлЗочого ;;нл

С ц.'льк» дальней^-то упрой-нил и уи^с^оленлл структурного i.jm.'«»-дзвани.1 науц били ¡л л ; : ; ; С ; : ц.-. ; ^ г«11 и уелс-ил ил.'ктрз£зр: прэтеглл'лата в тошеои слое целлллоои - п«рво> раздал-"— «р:;

клн пь'птидныз карт. Е^-.э пэкгзало, что к;;зкозо,*..»Т1.иЛ. п.- тр.:.>»..„.:; специальной cucn-iu охлаг.^ш лл;-ктг«оф-зр.л1 r,;e:.¿r..:¡.7 дсесльло с;-¡ллттилко рллд;,л;1ть тр:;птг,чсл>-и? И'ЛиПДл гло*».чс;.и^ ц-.su.». i; лл:лл;.* •достаточен длл прздедениз меяй1;уллрг.зл гллл'нлгтллл, г,о aj-

ро, dock нллОоли- рлспрострлилилл гс ллглоллл.., Слгу;.л;;е-

ил рлс.Б. Cyï,-:oTt'-û:.o. что п-греде;: с ; лсолсл ол„л1.ело ¡л. ¡л.„-кэро'&тниД олектрэферо:. по:юлил с. cociXJTCTfcyu^rc

спьцпалнзнрозаннзг'о с'срудоиеллл н п;олодл;л. i

!илл.';ро того из дзетуплзго отсчгетваиого пр.;-зре (ЕСПЛ-СйЭ-О.ОЭ пл. аналогичны:.' другпз), ¡ллсрлЛ прпмонлетел г,гл: рледзд-пл.: гслоллеатл и гло5иног.1.г,: цоп.-й на г-тат-цоллалазньг: пл:к.л,л.

РслработсшиЛ 1л!;ф:лг.".г!лг.лти^!глд ызтод £лл..;л;ллл глей«;:к. с сочетании с цодл:»;;цлролаш!лл uotosoj слоктрсфор^за б мл; i псполезсеали, например, при ivr-iiTt:;:»^'.:; lb С /£Глу>Л:з- у студ.лга f.; Илх.л, п?^ ходиасого обучеипо о г.Бку. Ьсо оталц структурного исслздэвалаз вплоть до получен« образцов пептидов длз слли'.о:сл:лотного снсдизс были пройьдл'нц h:¡ РвспубЛ5'.г,гн2»аГ. стащы поролирйд^ г^оап 13 /¿О (г.Бл::у) с иопэ.",ьлслл:лл-,л толкло сйьчнзго о3^ла2оратср;:ого с.ору-доаьнил отсчостсснного пролз^здзтеа и прлЗсра дг.л ыл^гп-роСср^за 5:ПА-2£0-0,С5. слал;:; бил прооодса с Г.Сллу.

Структурнал 11д£.'нт1'4''»'лц;'.з Сило, сааорсена в теченпз плтн раЗоч;к дней и потребовала-0,1 ил lyo^n длл ксслздкган»». Длл от

мэтии, что слалогичног нсслодозанлз с 1:спользо^ал;-.ом с5цч:;оД спстс методов молог^лпрной ípiiruocTr.i^t г.родолгаотег. пз монсо д^у;: рл5очл

и для него требуется 1-2 нл кропи. Разработка нопого по'дхояа

{ »голисуляркой ДИАГНОСТИКА ПиГШОЛНЛа ЬНеДрНТЬ ото трудо&ИСОО И !ЛЮ"

•сзтг-лнсе исследсапиие з практику работн гематологических центроз '.о«рбгЛлг.-лс1КЗ-Л и Узбекской ССР (республи1сансииэ 1УА гематологии и крсЕи). Б исследоьательску» практику этик центроз били

•¡НЗЛргнш:

- {.»иироизтоя получения суш&риого глобина иа гомолизата;

- >та:рспр*?пг.п2тизннл электрофорез • глобинов»« цепей на ецатат-ц?лл"лсзпоя пленке;

- ггтол ¡соличсстзснного выделения глсбинозоЛ цепи из едотат-цолл::г.сз»;сй пленки;

- !.::;toa прэтсояиза нлкрсксллчсстп глсбиноаиз цепей трипсином;

- УГ.7СЛ ПЗПТ5!Д:ПП5 í*..1p? ТСИПТИЧССЯЮ ПТРОЯНЗГ.ТОЗ ГЯСЗКИСЗ!ПС цепей п тенкс:; слое цсллалсзи;

- v:?ca 'леплзчаплл пйптиесэ tn те;«'.ero след с послэдул-.ей их подготовкой к с.-:'.!:2Х*.слотис?у гглдкзу.

3 результате лкедреилл лптог.сз сезгл:« псзглсл:-

гое;ь пререррлллл стру!ттур::!л по г'сг.екулпрпгй г,"дгисстк:г> рсс-

пр:етр';;:!:!-ч;; Серн спс-^лыгхл гегегдебкке:? п гсг.сглгл:: учрегдекля:: c:.j: -":» креен ДлерЗрДдг'ллспсй ССР и. 'ЛСслктсЛ CC?;

Пр:-":;!;ег'.'.е ргзргЛстскксго педрерд, praycrrci, иг сгрпкич::згл?ся лдлл;л'лллцлей рлепреетрллешлл: си "0—.7

сигь ::спо;;ьго:ач со see:i случлл::, у.сгрл с пг;'гт»!> rr.tcssrpcГсрстичге-

летсдсз удагтей отделить «ге."?л»я:Л гр!'Сгл:3;':i :\p:s .гге^лдънуэ г.тсЗкисзуз цепь от кер'-ллы:'":. Tczt. ррзр:Лет:г;!.,Л пед::од С::л пз-пелъаергр! при юлекуллркей диатегтигл ксстгЛклллсго НЬ "ЬгдЬлп Lincoln. Осаде«. pvnssrnA за 5 кюг/спегл гегеллелта, п усгеглл:: гаспрспдлольного теста, бил зи.гчпголы:о c£crcr.::i спс^д'лггЛ ,i-rr.c5:i-

ксрсп цзпыо. !*«ф0прзп;рпиз»!1д 0i]c¡rrpsícrc3 ртсго ссгд'-л 3 д-нгггу-

pnpyscts услозизи с пссдедуггг.и керлзчеллсм i.'.cn:i сг.кс-ипсй тегипкей пезеолил зндэлить с:аэдо SO кйолъ слж'лдьнсй ]5-гг.с5н1:спей цепм. !*«-репропгративнйя пептидная г-ерта, призэдзним на гглз.И,'ссидстельст-аует, го-nspDia, о чистота деделекпей цепи и, na-STcpic:; пелгог.лет сЗкгругмть енсизлышЛ пзптид.74 Сс?:.:ечс>з на r.-ртэ стрелой). (ггссотшЯ сякянэ и сссзккрегггв» зтего пептида псеполили згпгр~«ть структурнуа идентифашдоэ рэяхго сгриг.нта И> Abrete» Lincoln jüH2JM->rtpo. ' • ; л

ï:-' Ч. Л Г'';;-1'..S'a:

• >/ ; ¿¿О'

'•' v '/ - ". '/i.-'í.'.vv'-

Рис.11. fiormiaitu-Jr »«¡pru с тонкой еяод цзяладозы трятичаскм:: гкдролизатои норидпьноп- р-tic-mi (1) i¡ спаисльноЛ р-цзги: Hb Abrcíwa Utncoln (2), ыдолшиск: с иепояьсааьипау pcspcàoïUtt.isro паддока.

¡-'л полагай, что Rpcuuys^ST&ä раараЗотг-чнзго подхода, i

иисчшо, простота, окспрласксать. "ьиаисшчийать, пэтрсЗигсть- tunaro количесгил бслкоьсго иатс-риаль м его 'ьзнкиаями'э патера с процоссс* исследоатш» поасоддт п;.;;„:лн;пь »тот подход Сояго сдоя плл дилг ностики нислацетьшшх патологий. иизиалтл: рсзлич;;и.:л иутакттл/н беляши, иаучшн-.а'б&лкоэаго полиморфизма, решили других сопрасоа, находящихся в яо«1атбНц:-гд crcnosmstircj&tus: слодзз структурна?, белковой хиыин,

вывода

1. Ргзрайотол и внедрен о практику новый подход к молекулярной диагностике аномальных гемоглобинсе человека, основанный на исполь-совании известных методов анализа геиолиэата, глобиноьых цепей и триптических гидролиэатоа в качестве кикропрепаративных методов. Новый подход яераэтеризут' относительные экономичность, простота, о;:спрессность, скиглние необходимого для структурного исследования к-олпчестза нрогм до 0,1 ил; его реализация рассчитана на использо-вгяиэ дег:еосго и доступного отечественного оборудования.

2. Разработаны и использованы о исследованиях методы микропрепа-Г-тп-ггнего выделения глсбкноо после злектрофоретического разделения генолиэатоэ или глоЗимозых цепей на цэллогелэ, позволявшие быстро, просто и количественно выделять из одной стандартной плешей 10-

•10 кмоль чистой обессоленной цепи.

3. Оптн'лизирсзены услсаия извлечения пептидов из тонкого слоя целлалоэи; показано, что используя пептидные карты в тсшшы слое в качлстсэ мчкропреперативного метода, «огно сыдэлить для последующего CTpyirrypnoro исследования о средней 1-1,Б нмоль пептида из одной клрти. 1'.смпле1к: !31кромзтодсз сразннтельнсго изучения первичной структуру нлкомольных количеств пептидоэ едглтирсзгл для целей мз-ллггуляркой диагностик екомзльньк гсмоглсбинсз.

Л. ¿Зэлэкулярнся дмегисстика енсмллькнх гегзглсбинсз позволила постелить точный диагноз струтурксЛ гемоглобинопатии у гематологи-чеасю больH-nt, пылоленнкх г.л.ч п СССР, тел и о ряде других стран. Яо::ззено напичнэ в популяция:: СССР, и ряда других стрлл как распространенных на земно;.! глрэ аномальных гемсглсбппсз - Kb S ?ХТлу-> • Вал, lib Е Д23Глу->Д5Э, НЬ 0 рСГлу-Жз, lib D Punjeb ,М21Глу->Глн, НЬ О АгсЬ ;»121Глу->Ягз, lib Lepora Boston, те: и ред-л« вариантов.

■ б. Опфыты нелмэ парианти гемоглобина: Kb Плгсстеи аС0Лиз->Глу, lib Ызя-Яси р92Гис->Арг и НЬ Ни:хсн:! р17Лиз->Глн. Идентифицированы редгаэ форму аномальных геыоглобинса, п той числе Hb Setif «94Асп-> Тир, Kb Тссога ]ЗсОАрг->Сзр, Kb Abraham Lincoln £32Лзй->Про", Hb Н

Saskatoon £бЗГий->Тир, Hb Buenos Aires £85£ен->Сер. Hb Agenoel р90Глу->Л1Э и Hb Detroit р95Лиэ->Асн. Проведено сопоставление изученных свойств новых и редких вариантов с клиническими проявлениям геиоглобинопатий у носителей.

0. Предло»жо различать Ii-нот и пи чес кие прояьлений носительства сноиалышх гемоглобиноп человека, хара1Етериэу*«иэ первичный молекулярный дефект (а ииенно, свойстьа иутантн'.го Сеяла и их выражение на молекулярной и клеточной уровнях); проявления, характеризуйте состояние равновесия первичного дефекта.и коипенсаторних возиокнос-тей организма и, наконец, неравновесное* состояние, когда коылснса-торныг пооиокности органиииа исчерпаны.

7. Предложен иерархический подход к рассштрени» явления нейтральности белковых вариантов - в соответствии с уровнями организации биологических сй'ектов. Основанный на иерархической подхода коигшэкснмй аллиз нейтральности иутантнцх геыоглэбииоа, выполнен* ньа> с -привлечением собственник результатов и литературных даяных, ' свидетельствует о5 отсутствии ьале^ларной и/или клинической нейтральности бояьсинства аномальных геыоглобикса, для которых накоплен достаточный вксперииентальний материал. :Иа исследованных толькэ Hb D Punjab и - о сзньсей степени - Hb 0 Arab исгут рассматриваться как относительно нейтральные на иалекулариоп и клинической уроанях. Сдвинута гипотеза о псзцо»к>й роли повышенной локальной кон^орка-ционной подаик<остн бел;»''о формировании салскулярно-нейтральных вариантов.

0. ССоруулправана коицзпцпз полиыорСиэца гемоглобина чалоаекс, с основу которой подобно еяедэниоо, о.работе понятна о псевдо-нейтральных боя!Ивш вариантах, на приаодас« «• клинический »lapycamtau у готершиготних носителей и обычных условия» их сусаствовсииа, но способных подпадать под действие отбора при возыои»ых изменениях средоаца'.итсизткчасгя'.х фа:ггороа. Пзевдо- нейтральнее варианты численно снач;асльио преобяядаат в сешйстса аномальных геыоглобнноз челозата. В одлэисироа&ннои гетерозиготной состоянии псевдо-нейтральные паркаггц свлястся потенциальный источником появления у белка иоаьа фушздй и сдапткгна цашаа фора.

9. Высказана и обоснована гипотеза, согласно которой вволюция белкоа протекает от стадии, удовлетворяющей концепции нейтральности белюэвого полиморфизма, к стадии, удовлетворяющей концепции селек-циснизиа. Полиморфизм гемоглобина в популяциях человека предстаоля-ет собой стационарнуп, а не перэходну» фазу шлекулярной оволюции и соответствует требованиям адаптации популяций к тскугаи условиям скруг^к^Я среди.

Оскопив результата диссертации опубликовены d следующих работах:

1. Спивал В.Л., Иэлчснова Т.П., Ернакоэ Н.В., Toitapea Ю.Н., Гарысаацеаа Р.О.. Асаноа А.». Установление перэичноЛ структуры ию-мального D-подобного гемоглобина. выявленного а крови донора//

1 Респ. науч. конф. "Гешлитическио анемии".-1976.-Дупакбе.-Тезисы.-С. 111-112.

2. Спивак В. А., Мэлчаиова Т.П., Ермакоэ Н.В., Токарев О.Н., Гарька&цееа P.O., Асанов А. Ю. Установление перпичноЯ структуры аномального D-подобного гемоглобина, выявленного d кропи донора// Еиояи^я . -1978. -Т. 43. -С. 1175-1183.

3. Спивал В. А., Молчанова Т. П., Eptsaitoa Н.В., Токарев Ю.Н., Герькавцева P.O. Установление первичной структуры аномального Е-подобного геног лобина//Биохиь51Я.-1979.-Т. 44.-С.816-021.

4. Спинак В А., Молчанова Т.П., Ермаков Н.В., Токарев Ю.Н. Установление первичной структуры аномальных гемоглобинсз//

1 ВсесоезныЯ с'еэд гематологов и трснсфузиологсэ.-1979.-Бй!?у.-Тезисы.-С.205.

0. Ерыакоз Н. В., Спивак В. А. Анализ электрофореграми суб'единиц глобина и молекулярная диагностика некоторых наследственная гемоглобинопатия//1 Всесоюзный с'еэд гемлтологоэ и траксфузиологсз.-1979. - Besiy. - Тез кси. -С. 217- 218.

0. Молчанова Т.П., Спивак В.А., Абатуроа Л.В., Сргакоэ Н.В. Регссглобкн (.1 Saskatoon, молекулярная диагностик, ебразезанкэ ге-мнхрема и протеолитичес!*аа деградация//1 Всесо^зниЯ с' езд гематологов и трансфузиологов.-1979.-Баку,-Тезисы.-С.21В.

7. Спивак В. А. Молекулярная диагностика аксг'ллькьа геиоглобиноз// Валчейсие гемоглобинопатии -Носкза.-Авангард.-1979.

8. СпиоакВ.А., Ролчалсва Т.П., Ериакоз hcB., Tcitapc3 Ю.Н.» Еах-рамов С.М., Сеттарова Л. А. Структурная идентификация аномальных гемоглобином S и D Punjab, обнаруг^нныя на территории УзССР//Конф. "Новое в трансфузиологии и гематологий".-19Б0.-Теа«нт.-Шдицина.-. Тезисы.-С.35.

9. Спиьак В.А , Молчанова Т П , Ериакоо Н В., Токарев Ю Н . Цштинес Г , Селеньи Ю , Хораиьи U., Селди Я . Холла,! С . Казиеш X 3 , Uiaaou И А Новый анОм&льний геиоглобин Цлгестел c;.60JV.y-> Г;;; 6L' науч. сессий ЦНИЯПК.-1Q80.-fctocKoa.-Тезисы.-С.61-62.

10. Спиаак В.А , Цэлчанова Т.П.. Токарев ЮН Экспрессии:! и ы сокочунстьительний метод идентификации ьгюмальнш геиоглобиноз S н D Рип)аЬ//Пробл гештол перелив кроои.-19BQ.-Н5.-С ЬЬ-БВ.

11. Молчанова Т.П., Аботуроз Л.В., Спис&» В.Д., Ер«акоо Н В , Toicapi.'Q ЮН. Гемоглобин W Saskatoon /-бЗГис •> Тир. Структуриал пде: (Jnicanit.i, обрмовамие гекихроиа и протеолитичесиая деградацил// ЬЬлекулирна* биология.-1 &BQ -Т 14. -С. 1 ¡¿53-1266.

U1. Спины: В А.. кЬлчалова Т.П., Постников О В . Асесьа Р. А , Луц*?нко И.Н , Токарев О И , Epuaitos И В Ь'гии'кул-лрньд диагностик шюшльних геиэглс£ш«о&//&3 науч. сссскл ЦИЯСкч -10В1 - !.'."СгСЛ:.. -Тезисы. - С. Г.Б-116

13. Cniibut В А , 1'олчцлоаа ? П , Epua:«:; II В , fbcTMaiOw D 0 Токярсь Ю Н . P*tiato& Р Г . Тоидодо 3 3 Геиоглобкн ibnopu Состс Е5олгирии//Пробл гмиатол перелив крсьи.-1£В2 -¡¡о -С "7-30

14 Гыфилои 0. К , Токйрйз Ю Н.. Спит: В А Схтиионнл о сбл ти шлс-куля'жой гематологии я гсиэтолагичэсиай Г€кеткки//Сзс?ни;; AJ.il СССР.-1U22. -КО. -С.67-61

16 Cruiawt В. Л . Налчааойа Т.П.. Ериагл:. Н В , Гостнккэа О. О Т «сирей О Н , Рассол Р Г., То.-гло&а 3 3. (.Ълекуллрнад сшлюстш: трех случать,иосиг£'Л1-ст!;а гемоглобине. О Араб в Бэлгь?}01//Гсштол трансфузиол.-1S33 -N5.-C 37-<0.

10. Хлса.'о Л.'П , П'.'йэ П Л., Кулагин U.H . Кзлодей С.В., Спил В А . Цэлчгиоьь Т.П . Cpiwcou (I B. Г«иоглг-3»;н Д iU-ндклЛ с fcrcsv Гсдагол.трше^-уаиол -1003.-W.-C. 47-<3.

17. Токар^з.Ю. И., Спиде: В./, Цзяйкуллрна.'; диагностики itsy^. иие wiow^n'oHUX г<шагг.сб:.иоз о СССР/УСолл-то-лл; -1ССЗ.-!Л

С. 61 -64.

10. Сппза:: В. Л., Caninui D. Лн^ьаглкцз го^огяобкии и'их мол;: л.юнал ди^гности::а//"Илол2Яст1;енис ос-ипп я гоьлзглсЗпнопал'лГ -1GB3. чьеюа. -15йдицина.-С.69-91.

10. Токлрео'Ю.Н.. Спасен В. Д.. Пэстникоа О. В. Ваиюйаи» наел; ьеннлл гс-1ЛГшбинопьтки//'.'»1лсдедйтьс-нниа снеод* и rcuariioftwionai 1S83. -»Аэсква. -l/лдещина: -С. 137-143. '

20. Снивак В.А.. иэлчьиоза Т.П., Постников О В., Асееса Е.А , Луиенко И П., То»у»реь Ю П., Еодоюшоса А.И. Цэлекуяярнад диагнос I«» НЬ Buenos Aires f.65Cen->Cep и изучение его сг.ойсть//Е5 науч.с ciw ЩйОТЕ*.-10ВЗ.Л'оскай -Тезисы.-С 70-70.

21. Асеева Е А., Спивай В.А. Цлоди тонкослойной крои&тогра^: структурной исследовании пептидов при молекулярной диагностика i иалышх гемоглобиноо//1 Всесоюзная iton^. "Хроиатогри£ил и биолог-иедицинй".-19ВЗ.- 1Ьскаа.-Теоиси.-С.63.

22 Луце.чко И H . Спивал В А Иепольэооанио ¡.¡»тсдоо олектрофоре-sa при молекулярной диагностика аномальных гемсглобинов//1 Всесоюзная конф "Хроматография э биологии и медицине". - 1983.-Москва.-Тзэи-Ü4 -С 124-1Ü5

ГЗ Молчанова Т П , Спивак В. А. Применение ионообменной хрома-гографии при исследовании аномальных гемсглобинов человека// 1 Вее-:о»онал конф "Хро«атсгр«и{ия в биологии и медицине". -1983. - Москва. -Гепиоы -С.129

24 Спив а:: 3 А , Молчанспа Т.П., Асеева Е А., Постников Ю. В., Пуцрнко И H , Тскпрвв Ö H Мстодн хроматографии и здектрофороэа при •х.л^кулярней сиагнсстике аномэлышх г<.*>юглсбиноа//1 Всесоюзная хонф. •"'cc-morpaf.'i s биологии и ггдицине". - 19ВЗ.-Мэскза. -Теаисы. -С. 13325 Асеева Е А . Спиппк В. Д., Алахоп Ю В. Ультрамикроанализ пер-структуры пстгп1;;<>» при иденти^кглшш зно'гальиых ге!~сглсбииоп// J Г;с1-со:гл«.",1 синг.сзиум п.о ¿и>:ки б-элков и пептиден.-1G83.-Рига.-Тези-:ч -С.аЗ-ul.

У.З. Спиг'к 8. А., ¡'алчлчозз Т П.. Лсеоза 3. А., Постников Ю. В., Гуч.нчз И ¡1., 7с::пр-;э Э. Н. 'Ьучекч-а злклния зг.шажслотных ас.чаи на

тгоуктурно-фун!й!ис!<аяыя••* х.?г? чггг'рчстччч ансчальмчл гч>'оглсйччоп и

:::: йлинич-асис-а' пголйлсн'.'.е при гегоглс5'инспатил>://б ЗсееоюзнчЛ сим-асчуч по :•':-• а: аалгса ¡1 п^ятидсп -1С23. -Гига. -Т^исн.-С. 137-133.

Г.7. !'элчгчог:1 Т.П., Cn;;r?r:t В.Д., Tcsaapoo Q.H. Иссладсгзенча про; •а.аа гччаачг.'! пагс'аучаа: гаа^агачагегагасЗииеп чалсс:^.а//5 Пссо-

• акчЛ c:"'4rc4VH го хк-ди б?якоз ч пс!ПТ'.'ясп.-1?03. - Рига.-Тезисы. -J. 121-КО.

СП. С,ara.'", •]. л "олачуларчал па-гнаатчка и чзу^чнч:- спсйсаз г.но-

• ".w;:: гс-уагясбииоп чояосди/Л 1?:ссо-~зн"Л с' сап медицине wet гонэ-г-ч'с:ч.-1П84.-:'чап. -Тезчеч.-С.313.

2D. Спчг-чс S.A., i'sw-.C2Z 7. П., Асесса С.Д., Дуиончо П. П., Гааачччоа Ю.З . С'члчнкопа O.A. Тсч-рса D.И. "элачуларнач диагностика гча-'альчч-: г-атогяс'анноз п "чгаачауч.еаасчч ЦП'.СТПл,-10tM.-;'ac;:aa. -Тааисы.-С. 1CG-107.

ГО. Спкяак В.Л. Стру!г:ур:!!-гД уяугра"чкра-ч{ллиз яаптидся а ^ор>*о ня лч'".'1;осцчруа.::1/; я-ансилыпк прочзподнчх//[?есссазч.ал г:;-ол?. "Биолю-'•чнасценцчя и хечнлч^чнссйантнчЛ гчг.пчз".-!005.-Краансгпрск.

31. Спчзак З.Л., Маячснсаа Т.П., Лсеспа 2.Д., Луцскко И.Н., Гастникоэ ¡O.B. !Ъяо!суяярнря л»ягнсс"!'.йа ti чзучоииэ сасГааш аномальна гечсглсбиноз//2 Бсесогаш-п! с'спд гсчатолсгоз и трансфуэиологоп. -12С5.-Льпоз.-Тезисы.-С.337-353.

32. Та-аапа Е С., Лгпчео С. Г., Tovsneoa 3.3., Рагзхз FT., Спинск В. А., Колченога Т.П., Пастншиз О. В., Асес-оаЗ.А., Луцанко И. Н., Тонарео О.Н. Молекулярная платности)«! .ряда анс?!альньк ге»логлс5иноа п Еолгарин//2 Национальна stourpccc по надицинсксй биолегии и ген-э-тикэ.-1SE5.-Сс^ил.-Тезисы.-С.74.

33 Луценко И Н , Смипак В А , Токарев Ю Н. Использование проте олиаа глобинових цепей на ацетат-целлюлозной пленке в молекулярной диагностике аномальных гемоглобинон//Гсматол трансфузиол. - 100Ь -¡¡2 С. 47- 50

Дуб {юн а Ю К , Идраион К М , Алтухов 10 П . Спивак Гз А , Молчанова Т.П , Тада.'ьа Е С , Луценко И И , Асеева К А , Токарев Ю И , Агаджш-юва А А Генетическо* и клиническое изучение семьи с аномальным гемоглобином НЬ 0 Рш^аЬ &121Глу-чГлн//Генетики -19В5 -Т.21.-С.1018-1920.

:<з Спивик В А , Ткгева Р. С , Асеева Е А . Токарев О Н Редкие варианты НЬ П Рип]ай, НЬ и Ат аЬ и полиморфизм гемоглобина человека Генетики -1000 Т -С 611-Ыв

'Д). Сливах В А Гемоглобин человека- полиморфизм, нейтральностк вариантов, яьольционний аспект//Мзлеку ли риал биологи,? -1 -Т 20 С Ж)-797

37. Рустамои Р Ш . Годкиеи Э Г , Спивак В А , Луценко И М , Асеева Е А , Токарев Ю Н. Лье родственные семьи - носители НЬ С /ЗбГлу-'Лиу и азербайджанской популяции/'/Гмиатол. Трансфузиол -1987 N1 .-С.Ь&-57

гад Ипельсон Л И . Мэлчшюьа Т П , Асеева Е А , Спивак В А , Т< кпрев ЮИ Второй случай нооительетва НЬ Таеока с 1'оскве//Гематол трансфузиол.-1987.-НЭ -С 4Ъ-4б

Спивак 6 . А , Асеева Е А . Крынецкий ЕВ, Г^ценко И Н , Ку ривцева Е В , Токарев О И Новый шшильный гемоглобин Никосия 17Лиз->Гли//Ь9 науч.сессий ЩШГИК.-1987 -Москва -Тезисы.-С 10406

40. Спиъак В А , Асеева Е А , Крынецкий Е Ю . Луценко И Н , 1\у рньцеба Е В , Токарев Ю Н Нопый аномальный гемоглобин Никосия бШТиз-^Глн'/'' Ьсесоюный симпозиум по химии белков и пептидов -19Ь7.-Таллин - Тезисы -0.114-116.

41 • Спивак В. А. Сенотипические проявления носительстви ономоль них гемоглобиноь челоьека//5 с'езд Всесоюзного обсества генетиков селекционеров -1987.-Москва.-Тезисы -Т.б--С 103

42 Спивак В. А. Полиморфизм гемоглобина челооека//б Всесоюзный симпозиум "Молекулярный мех^иамы генетических процессов".-1937 Москва -Теаисы.-С.39..

43. Спивак В. А , Асеева Е А., Луценко И Н Ь^кропрепаратиьни» тонкослойные* пептидные карты в молекулярной диагностике аномал ыи Геыоглобинов чолоьека//Мзлекулйрния генетика. -10В8. -Н4. -С. 29-36

44 Местиалтили И Г., Нацвлицазили В.М , иандкгаладае Ц и , Ш) беридэе М. А., Бакурадзе НА., Зедгенидзе И.Ш.. ГЬстников Ю. В.. КЬ чанова Т.П., Реук В.Д., Сгшвак В.А., Асеева Е А , Токарев ЮН., С леньи Ю., Фелди Я., Уораньи М , Холлан С Случай сочетанного ноа тельства НЬ Е и Д-тапасоемии в Грузинской ССР//Гематол трансфуэи( 198Н.-N9.-0.50-52.

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Спивак, Владимир Абрамович

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ГЕМОГЛОБИН ЧЕЛОВЕКА: НОРМА И АНОМАЛЬНЫЕ ФОРМЫ по литературным данным)

Гемоглобин человека (основные сведения) 13 Глобиновые гены и биосинтез гемоглобина человека основные сведения)

Появление аномальных гемоглобинов

Мутации ДНК и типы аномальных гемоглобинов 27 Влияние аминокислотных замен на некоторые свойства аномальных гемоглобинов

Молекулярная диагностика аномальных гемоглобинов

ГЛАВА 2. АНАЛИЗ ФЕНОТШШЧЕСКИХ ПРОЯВЛЕНИЙ НОСИТЕЛЬСТВА

АНОМАЛЬНЫХ ГЕМОГЛОБИНОВ ЧЕЛОВЕКА Первичные фенотипические проявления молекулярного дефекта Состояние компенсации дефекта в организме Проявление стрессовых воздействий Заключение

ГЛАВА 3. ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ГЕТЕРОГЕННОСТЬ АНОМАЛЬНЫХ ГЕМОГЛОБИНОВ ЧЕЛОВЕКА: ПОЛИМОРФИЗМ ГЕМОГЛОБИНА. И ОБЩИЙ АНАЛИЗ

ЯВЛЕНИЯ НЕЙТРАЛЬНОСТИ ВАРИАНТОВ

Полиморфизм гемоглобина человека 60 Иерархия уровней нейтральности белковых вариантов феноменологическое рассмотрение)

Общий анализ нейтральности вариантов гемоглобина

Введение Диссертация по биологии, на тему "Генетическая гетерогенность аномальных гемоглобинов человека"

Актуальность проблемы

Генетическая гетерогенность аномальных гемоглобинов обусловлена, как известно, существованием в популяциях вариантов глобиновых генов, дающих при их экспрессии глобины с отличающейся первичной структурой, чаще всего - содержащие единичную аминокислотную замену. Генетическая гетерогенность аномальных гемоглобинов человека является причиной группы наследственных заболеваний системы крови -структурных гемоглобинопатий. Установление характера и локализации аминокислотной замены в молекуле мутантного гемоглобина, т.е. его молекулярная диагностика, в каждом конкретном случае гемоглобинопатии позволяет ставить больному точный диагноз заболевания. Поэтому структурный анализ аномальных гемоглобинов - основная прикладная задача в изучении генетической гетерогенности этого белка - важен и всегда актуален для практического здравоохранения.

Исследование генетической гетерогенности аномальных гемоглобинов в популяциях позволяет получить важные для медицинской генетики данные, необходимые для организации медицинской помощи больным гемоглобинопатиями в районах, эндемичных по этим заболеваниям. Такие исследования проводятся в соответствии с комплексной программой "Изучение распространенности и гетерогенности гемоглобинопатий", утвержденной Президиумом АМН СССР в 1975 году. Некоторые мутантные гемоглобины могут быть использованы в качестве удобных маркеров, помогающих исследовать перемещение и смешение популяций. Поэтому данные о генетической гетерогенности аномальных гемоглобинов, обнаруженных на территории СССР и ряда других стран, представляют интерес для популяционной генетики.

Изучение свойств мутантных гемоглобинов проливает свет на один из основных вопросов современной биохимии и химии белка - о соотношении структуры белка и его функции и об изменении последней в результате небольших локальных нарушений уникальной структуры белка. Сопоставление структуры и свойств аномальных гемоглобинов с клинической картиной заболевания имеет фундаментальное значение для современной медицины и гематологии в частности, поскольку позволяет выявлять взаимосвязь мевду характером молекулярного дефекта, ответственного за вознивновение наследственной патологии (на примере гемоглобинопатий$ и особенностями клинического проявления заболевания, вносит вклад в изучение патогенеза молекулярных болезней. Эта часть исследования генетической гетерогенности анпмальных гемогло-бинов человека проводилась в соответствии с Госпрограммой 0,69.07 по иммунологии и медицинской генетике.

Генетическая гетерогенность семейств мутантных белков вообще и гемоглобина в частности лежит в основе явления белкового полиморфизма, который, как всякий наследственный полиморфизм, может служить мерой генетической изменчивости популяции. В свою очередь изменчивость лежит в основе таких фундаментальных биологических процессов как адаптация и эволюция. В процессе эволюции белки должны с необходимостью проходить стадию полиморфизма, поэтому очевидна важность явления полиморфизма белков (и, следовательно, изучения их генетической гетерогенности) для разделов теоретической и молекулярной биологии, занимающихся проблемами молекулярной эволюции «

Цель исследования

Целью экспериментальных исследований явилась структурная идентификация аномальных гемоглобинов человека, выявленных на территории СССР и ряда других стран, а также разработка новых подходов к таким исследованиям. Идентификация аномальных гемоглобинов была положена в основу молекулярной диагностики структурных гемоглобинопатий, выявленных у гематологических больных.

Целью теоретического исследования явился комплексный анализ генетической гетерогенности семейства аномальных гемоглобинов человека, основанный на современных данных генетики, гематологии, физиологии, белковой химии и молекулярной биологии, а также собственных экспериментальных результатах»

Задачи исследования:

- Исследовать гемоглобинопатии неясной этиологии, выявленные на территории СССР и ряда других стран. Провести идентификацию и изучить некоторые свойства аномальных гемоглобинов, обнаруженных у больных структурными гемоглобинопатиями и тем самым поставить точный молекулярный диагноз заболевания,

- Получить данные о наличии и гетерогенности мутантных гемоглобинов в ряде популяций СССР и некоторых других стран.

- Разработать новый подход в структурной идентификации аномальных гемоглобинов человека, основанный на использовании отечественного оборудования и имеющий преимущества перед классической схемой определения первичной структуры мутантных гемоглобинов в основных характеристиках - экономичности, экспрессности и чувствительности.

- Разработать новые и усовершенствовать и оптимизировать ряд известных методов, используемых в молекулярной диагностике аномальных гемоглобинов. Доказать применимость комплекса ручных ультра-микрочурствительных методов структурной пептидной химии в молекулярной диагностике аномальных гемоглобинов и с их помощью провести идентификацию ряда вариантов гемоглобина на микроуровне.

- На основе полученных экспериментальных и литературных данных провести комплексный анализ гипотезы нейтральности вариантов гемоглобина человека. Оценить применимость концепций селекционизма и нейтрализма для объяснения существующей картины полиморфизма гемоглобина человека.

Научная новизна

Проведена структурная идентификация около ста образцов аномальных гемоглобинов человека, обнаруженных у жителей СССР, а также Болгарии, Венгрии, Гвинеи,. Йемена, Кипра, Кубы, Лаоса, Мали, Монголии и Сирии. Открыты аномальные гемоглобины НЬ Дагестан о(60 Лиз-^Глу, НЬ Можайск р92Гис-*Арг и НЬ Никосия ^&7Лиз-*Глн. Идентифицированы редкие мутантные гемоглобины: НЬ йЬгаЬот UncНЬ Age-no^ НЬ Buenos, Aires, HbDetroi.^ HИ Saskatoon, НЬ Setij и НЬТцсотл.

Доказано наличие распространенных на земном шаре аномальных гемоглобинов 5, Е, С и Ъ Punjab в популяциях, населяющих СССР. Изучены некоторые свойства новых и редких мутантных гемоглобинов.

Разработаны и использованы в исследованиях методы микропрепаративного выделения глобинов после электрофоретического разделения гемолизатов или глобиновых цепей на пленке целлогель, позволяющие быстро и просто получать из одной стандартной пленки 10 - 40 нмоль чистой, обессоленной глобиновой цепи, а также метод количественного анализа аминокислот в форме их флуоресцирующих дансильных производных чувствительностью 0,01 нмоль.

Разработанные методы микропрепаративного выделения глобиновых цепей положены в основу развитого в работе нового подхода в молекулярной диагностике аномальных гемоглобинов, характеризующегося относительными простотой, экспрессностью и чувствительностью. Новый подход использован для идентификации ряда аномальных гемоглобинов .

Изучены возможности пептидных карт в тонком слое целлюлозы в качестве микропрепаративного метода выделения пептидов при структурной идентификации аномальных гемоглобинов. Известные ручные ме~ тоды изучения первичной структуры пептидов в улътрамикромасштабе адаптированы для целей молекулярной диагностики аномальных гемоглобинов.

Комплексный анализ генетической гетерогенности аномальных гемоглобинов человека с использованием собственных экспериментальных результатов, а также данных генетики, гематологии, физиологии, белковой химии и молекулярной биологии свидетельствует об отсутствии нейтральности многих вариантов гемоглобина. Выдвинута гипотеза о возможной роли повышенной локальной конформационной подвижности белка в создании нейтральных белковых вариантов.

Сформулирована концепция генетической гетерогенности аномальных гемоглобинов человека, в основу которой положено введенное в работе понятие о псевдо-нейтральных белковых вариантах, численно преобладающих в семействе мутантных гемоглобинов. Такие варианты, в отличие от истинно нейтральных, могут подпадать под действие отбора при возможных изменениях средовых и генетических факторов. В компенсированном гетерозиготном состоянии псевдо-нейтральные варианты являются потенциальным источником появления у белка новых функций и адаптивно ценных форм.

Высказана и обоснована гипотеза, согласно которой эволюция белков протекает от стадии, удовлетворяющей концепции нейтральности белкового полиморфизма, к стадии, удовлетворяющей концепции се-лекционизма. Уровень полиморфизма гемоглобина человека соответствует стадии молекулярной эволюции, на которой находится этот белок, и требованиям адаптации популяций к текущим условиям окружающей среды.

Практическое значение

Основное значение проведенного исследования для отечественного здравоохранения состоит в воспроизведении и разработке на базе

Всесоюзного гематологического научного центра совокупности методов структурной белковой химии, позволяющей проводить работы по молекулярной диагностике аномальных гемоглобинов в нашей стране, а также в создании методических основ для постановки аналогичных работ в других исследовательских центрах страны.

Установление характера и локализации дефекта первичной структуры белка в каждом конкретном случае гемоглобинопатии является необходимым этапом постановки правильного диагноза, лечения и прогноза заболевания.

Данные по гетерогенности мутантных форм гемоглобина в различных регионах страны необходимы для организации практической медицинской помощи населению на местах (создание медико-генетических консультаций и диагностических лабораторий, подготовка медицинских кадров).

Новый экспериментальный подход, основанный на микропрепаративном выделении глобинов после их электрофореза на целлогеле, делает молекулярную диагностику аномальных гемоглобинов более экономичной, доступной, требующей меньших временных затрат; этот подход может найти применение при идентификации различных аномальных гемоглобинов.

Система ультрамикрометодов белковой химии, развитая и адаптированная применительно к задачам определения первичной структуры аномальных гемоглобинов, может оказаться полезной при изучении молекулярных основ других наследственных болезней, вызванных наличием аномальных белков, при типировании различных мутантных белков, анализе белкового полиморфизма, решении других задач структурной белковой химии.

Тема и содержание диссертационной работы отвечают заданиям комплексной программы АМН СССР "Изучение распространенности и гетерогенности гемоглобинопатий", Госпрограмме по физико-химической биологии ж биотехнологии, Госпрограмме 0.69.07 по иммунологии и медицинской генетике и Госпрограмме 0.69.05 "Лейкозы".

Внедрение в практику

Работы по структурной идентификации аномальных гемоглобинов человека внедрены в практику и проводятся во Всесоюзном гематологическом научном центре МЗ СССР.

Развитые в представленном исследовании методы молекулярной диагностики аномальных гемоглобинов, основанные на использовании отечественного оборудования, внедрены в практику работы гематологических центров Азербайджанской ССР (АзНЙИ гематологии и переливания крови, Республиканская станция переливания крови, г. Баку) и Узбекской ССР (УзНИИ гематологии и переливания крови, г. Ташкент),

В соответствии с Планами меадународного сотрудничества и в порядке оказания научно-технической помощи гематологическим службам Болгарии, Венгрии, Гвинеи, Йемена, Кипра и Монголии проведены работы по молекулярной диагностике аномальных гемоглобинов, обнаруженных в этих странах.

Фрагменты работы дважды - в 1982 и в 1984 годах были экспонированы на ВДНХ СССР, а в 1982 году удостоены Дипломов 2й и степени ВДНХ СССР.

По материалам диссертации опубликовано более 50 печатных работ в отечественных и международных изданиях. Материалы диссертации доложены на 1 и 2 Всесоюзных съездах гематологов и трансфузиологов (Баку, 1979; Львов, 1985), Международном Конгрессе общества гематологов (Будапешт, 1982), 1 Всесоюзной конференции "Хроматография в биологии и медицине" (Москва, 1983), 6 и 7 Всесоюзных симпозиумах по химии белков и пептидов (Рига, 1983; Таллин, 1987), 1 Всесоюзном съезде медицинских генетиков (Киев, 1984), Всесоюзной школе "Биолюминесценция и хемилюминесцентный анализ" (Красноярск, 1985),

6 Всесоюзном симпозиуме "Молекулярные механизмы генетических процессов" (Москва, 1987), 5 съезде Всесоюзного общества генетиков и селекционеров им, Н.И.Вавилова (Москва, 1987), 2 Международной конференции по методам разделения в биохимии (Кестхеи, 1988); 52, 53, 55, 56 и 59 научных сессиях ЦНИИПЗК.

Развитая в диссертации концепция генетической гетерогенности аномальных гемоглобинов человека доложена и обсуждена на Московском городском семинаре по молекулярной биофизике, Московском городском семинаре по эволюционной биохимии, научных семинарах Института молекулярной генетики АН СССР и Института медицинской генетики АМН СССР.

На защиту выносятся:

- Результаты экспериментальных исследований генетической гетерогенности аномальных гемоглобинов человека, выявленных на территории СССР и ряда других стран, позволившие открыть новые варианты гемоглобина, идентифицировать распространенные и редкие варианты.

- Методические разработки, включающие создание нового экспериментального подхода к молекулярной диагностике аномальных гемоглобинов, новых методов исследования, модификации и адаптации известных методов с целью повышения эффективности структурной идентификации аномальных гемоглобинов.

- Концепция генетической гетерогенности аномальных гемоглобинов человека, основанная на понятии псевдо-нейтральности белковых вариантов и иерархическом подходе к рассмотрению явления нейтральности белковых вариантов и их фенотипических проявлений.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Спивак, Владимир Абрамович

ВЫВОДЫ

1. Разработан и внедрен в практику новый подход к молекулярной диагностике аномальных гемоглобинов человека, основанный на использовании известных методов анализа гемолизата, глобиновых цепей и триптических гидролизатов в качестве микропрепаративных методов. Новый подход характеризуют относительные экономичность, простота, экспрессность, снижение необходимого для структурного исследования количества крови до 0,1 мл; его реализация рассчитана на использование дешевого и доступного отечественного оборудования.

2. Разработаны и использованы в исследованиях методы микропрепаративного выделения глобинов после электрофоретического разделения гемолизатов или глобиновых цепей на целлогеле, позволяющие быстро, просто и количественно выделять из одной стандартной пленки 10-40 нмоль чистой, обессоленной цепи.

3. Оптимизированы условия извлечения пептидов из тонкого слоя целлюлозы; показано, что используя пептидные карты в тонком слое в качестве микропрепаративного метода, можно выделить для последующего структурного исследования в среднем 1-1,5 нмоль пептида из одной карты. Комплекс микрометодов сравнительного изучения первичной структуры наномольных количеств пептидов адаптирован для целей молекулярной диагностики аномальных гемоглобинов.

4. Молекулярная диагностика аномальных гемоглобинов позволила поставить точный диагноз структурной гемоглобинопатии у гематологических больных, выявленных как в СССР, так и в ряде других стран. Доказано наличие в популяциях СССР и ряда других стран как распространенных на земном шаре аномальных гемоглобинов Hb S £6Глу-*Вал,

Hb E р26Глу-н-Лиз, Hb С рбГлу—Лиз, Hb D Punjab р121Тлу-*.Глн, Hb 0 Arab р121Глу-*-Лиз, Hb Lepore Boston, так и редких вариантов.

5. Открыты новые варианты гемоглобина: НЬ Дагестан ос60Лиз-*Глу, НЬ Можайск £92Гис-*Арг и НЬ Никосия р17Лиз-*-Глн. Идентифицированы редкие формы аномальных гемоглобинов, в том числе Hb Set if ot94Acn-* Тир, Hb Tacoma >30Арг-*Сер, Hb Abraham Lincoln р32Лей-*Про, Hb М SasKatoon рбЗГис-^Тир, Hb Buenos Aires р85Фен-*-Сер, Hb Acjeno^i р90Глу-*Лиз и Hb Detroit р95Лиз-*-Асн. Проведено сопоставление изученных свойств новых и редких вариантов с клиническими проявлениями гемоглобинопатий у носителей.

6. Предложено различать фенотипические проявления носительства аномальных гемоглобинов человека, характеризующие первичный молекулярный дефект (а именно, свойства мутантного белка и их выражение на молекулярном и клеточном уровнях); проявления, характеризующие состояние равновесия первичного дефекта и компенсаторных возможностей организма и, наконец, неравновесное состояние, когда компенсаторные возможности организма исчерпаны.

7. Предложен иерархический подход к рассмотрению явления нейтральности белковых вариантов - в соответствии с уровнями организации биологических объектов. Основанный на иерархическом подходе комплексный анализ нейтральности мутантных гемоглобинов, выполненный с привлечением собственных результатов и литературных данных, свидетельствует об отсутствии молекулярной и/или клинической нейтральности большинства аномальных гемоглобинов, для которых накоплен достаточный экспериментальный материал. Из исследованных только Hb D Punjab и - в меньшей степени - НЬ 0 Arab могут рассматриваться как относительно нейтральные на молекулярном и клиническом уровнях. Выдвинута гипотеза о возможной роли повышенной локальной конформационной подвижности белка в формировании молекулярно-нейтральных вариантов.

8. Сформулирована концепция полиморфизма гемоглобина человека, в основу которой положено введенное в работе понятие о псевдо-ней-тральных белковых вариантах, не приводящих к клиническим нарушениям у гетерозиготных носителей в обычных условиях их существования, но способных подпадать под действие отбора при возможных изменениях средовых и генетических факторов. Псевдо-нейтральные варианты численно значительно преобладают в семействе аномальных гемоглобинов человека. В компенсированном гетерозиготном состоянии псевдонейтральные варианты являются потенциальным источником появления у белка новых функций и адаптивно ценных форм.

9. Высказана и обоснована гипотеза, согласно которой эволюция белков протекает от стадии, удовлетворяющей концепции нейтральности белкового полиморфизма, к стадии, удовлетворяющей концепции се-лекционизма. Полиморфизм гемоглобина в популяциях человека представляет собой стационарную, а не переходную фазу молекулярной эволюции и соответствует требованиям адаптации популяций к текущим условиям окружающей среды.

Выражаю признательность всем коллегам, принимавшим участие в экспериментальной работе по структурной идентификации аномальных гемоглобинов на разных ее этапах, а также коллективу ВГНЦ МЗ СССР за помощь при выполнении исследований.

Автор благодарит проф., д.б.н. Ю.П.Алтухова, к.б.н. Е.А.Асееву, д.б.н. Р.Ф.Гарькавцеву, к.х.н. М.Г.Дмитриеву, к.б.н. Ю.Е. Луброву, д.б.н. Л.А.Животовского, проф., д.м.н. Л.И.Идельсона, к.х.н. Е.А.Лесник, проф., д.б.н. С.А.Лимборскую, И.Н.Луценко, д.б.н. А.А.Ревазова, проф., д.б.н. Д.М.Спитковского, д.б.н. В.А. Спицына, проф., д.м.н. Ю.Н.Токарева, д.б.н. В.М.Шяимака за обсуждение диссертационной работы и ценные замечания.

Заключение

В результате описанных в этой главе исследований разработаны новые методы микропрепаративного выделения глобинов после электро-форетического разделения гемолизатов или глобиновых цепей на пленке целлогель. Методы позволяют быстро (в течение одного рабочего дня), просто и количественно выделить из одной стандартной пленки порядка 10 - 40 нмоль чистой, обессоленной глобиновой цепи, готовой для последующего ее расщепления трипсином. Эти препаративные методы хорошо согласуются с требованиями последующих этапов структурного исследования - разделения пептидов методом пептидных карт в тонком слое целлюлозы и изучения первичной структуры пептидов после их извлечения из целлюлозы. Оба метода расчитаны на широкое использование для диагностики наследственных патологий, вызванных различными мутантными белками, изучения белкового полиморфизма, решения других задач структурной белковой химии.

Разработанные методы положены в основу нового подхода к молекулярной диагностике аномальных гемоглобинов человека. Новый подход характеризуют следующие достоинства: 1) возможность проведения всего структурного исследования за исключением завершающего аминокислотного анализа на доступном, дешевом оборудовании отечественного производства; 2) перевод структурного исследования на микроуровень, что позволяет снизить необходимое для проведения молекулярной диагностики количество крови до ОД мл - в случае распространенных и многих других аномальных гемоглобинов; 3) время молекулярной диагностики распространенных вариантов гемоглобина сокращается с двух до одной рабочей недели; 4) унификация аналитических и препаративных стадий разделения на всех этапах, включая разделение пептидов, что значительно упрощает исследование в целом.

С помощью нового подхода была проведена молекулярная диагностика не только наиболее распространенных вариантов гемоглобина -Hb S р6Глу->Вал, Hb Е р>26Глу-*-Лиз, НЬ С р6Глу-*1из, Hb D Punjab £121Глу-*Глн, но также редкого варианта Hb Abraham Lincoln f>32 ~ Лей-*Про, идентификация которого включала секвенирование аномального пептида.

Разработанный подход внедрен в практику работы гематологических центров Азербайджанской и Узбекской ССР, в результате чего создана возможность проведения структурных работ по молекулярной диагностике распространенных форм аномальных гемоглобинвв в головных учреждениях службы крови обеих республик.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Спивак, Владимир Абрамович, Москва

1. Braunitzer G., Gehring-Mailer R., Hilschmanri N., Hilse K., Hobom G., Rudloff V., Wittmann-Liebold B. Die Konstitution des normallen adulten Human-Hamoglobins//Hoppe Seyler's Z.Physiol. Chem.-1961.-V.325. -P.283-286.

2. Perutz M.F. X-Ray analysis of hemoglobin//Science.-1963.~ V.140.-P.863-869.

3. Arnone A. X-Ray diffraction study of binding of 2,3-di-phosphoglycerate to human deoxyhaemoglobin//Nature.-1972.-V.237.-P. 146-149.

4. Perutz M.F. Structure and mechanism of haemoglobin//Br.Med. Bull.-1976.-V.32.-P.195-208.

5. Kilmartin J.V. Interaction of haemoglobin with protons, С0г and 2,3-diphosphoglycerate//Br.Med.Bull.-1976.-V.32.-P.209-212.

6. Fermi G., Perutz M. F. Atlas of molecular structures in biology. 2. Haemoglobin and myoglobin.-Oxford: Clarendon Press, 1981.-P.1-104.

7. Shaanan Boaz Structure of human oxyhaemoglobin at 2.1A resolution//J.Mol.Biol.-1983.-V.171-P.31-59.

8. Fermi G., Perutz M. F., Shaanan В., Fourbe R. The crystal structure of human deoxyhaemoglobin at 1.74A resolution//J.Mol. Biol.-1984.-V.175.-P.159-174.

9. BunnH.F., Forget B.G. Hemoglobin function//Hemoglobin: molecular, genetic and clinical aspects.-Philadelphia-London-Toronto: Saunders Co.-1986.-P.37-60.

10. Deisseroth A., Nienhuis A., Lawrence'J., Giles R., Turner P., Ruddle F.H. Chromosomal localization of human ^-globin gene on human chromosome 11 in somatic cell hybrids//Proc.Natl.Acad.Sci. USA.-1978.-V.75.-P.1456-1460.

11. Grzeschik K.H., Kazazian H.H. Report of the committee on the genetic constitution of chromosomes 10, 11 and 12//Cytigenet.Cell Genet.-1985.-V.40.-P.179-205.

12. Cox D.R., Gedde-Dahl Т. Report of the committee on the genetic constitution of chromosorres 13, 14/15 and 16//Cytogenet.Cell Genet.-1985.-V.40.-P.206-241.

13. Honig G.R., Adams J.G. Human hemoglobin genetics-VierrNew York: Springer Verlag.-1986.-P.1-452.

14. Liebhaber S.A., Goossens M., Kan Y.V. Cloning and complete nucleotide sequence of human 5'-oC-globin gene//Pros.Natl.Acad.Sci USA.-1980.-V.77.-P.7054-705B.

15. Michelson M.S., Orkin S.H. The 3'-untranslated regions of the duplicated human oc-globin genes are unexpectedly divergent// Cel1.-1980.-V.22.-P.371-377.

16. Michelson A.M., Orkin S.H. Boundaries of gene conversion within the duplicated human o(.-globin genes//J.Biol.Chem.-1983.-V.258.-P.15245-15254.

17. Proudfoot N.J., Gil A., Maniatis T. The structure of the human zeta-globin gene and a closely linked, nearly identical pseudogene//Cel1.-1982. -V.31.-P.553-563.

18. Lawn R. M., Efstratiadis A., 0'Cornell C., Maniatis T. The nucleotide sequence of the human jb-globin gene//Cell.-1980.1. V.21.-P.647-651.

19. Spritz R. A., DeRiel J.K., Forget B.G., WeissmanS.M. Corrr plete nucleotide sequence of the human 3-globin gene//Cell.-1980. V.21.-P.639-646.

20. Slightom J.L., Blechl A.E., Smithies 0. Human fetal and1. A u-globin genes: complete nucleotide sequences suggest that DNA can be exchanged between these duplicated genes//Cell.-1980.-V.21. P.627-638.

21. Baralle F.E., Shoulders C.C., Proudfoot N.J. The primary structure of the human £-globin gene//Cell.-1980.-V.21.-P.621-626

22. Hardison R.C., Sawada I., Cheng J.F., Shen C.K.J., Schmid С A previously undetected pseudogene in the human alpha globin gene с1uster//Nuc1.Ac ids Res.-1986.-V.14.-P.1903-1911.

23. Lewin R. New alpha-globin gene discovered//Science.-1986.-V.233.-P.158-159.

24. Burn H.F., Forget B.G. Molecular genetics and biosynthesis of hemoglobin//Hemoglobin: molecular, genetic and clinical aspects.-Philadelphia-London-Toronto: Saunders Co.-1986.-P.169-222.

25. Wiborg 0., Jorgen J., Nielsen H., Jensen E., Paludan K., Marcker K. The nucleotide sequences of two leghemoglobin genes from soybean//Nuc1.Ac ids Res.-1982.-V.10.-P.3487-3494.

26. Antoine M., Niessing J. Intron-less genes in the insect Chironomus thummi thummi//Nature.-1984.-V.310.-P.795-798.

27. Спивак В.А., Селеньи Ю. Аномальные гемоглобины и их молекулярная диагностикам/Наследственные анемии и гемоглобинопатии.-Москва: Медицина. -1983. С. 69-91.

28. Дубинин Н.П. Потенциальные изменения в ДНК и мутации.-Москва: Наука. -1978. -С. 1-38.

29. Лыоин Б. CLewinB.) Гены Спер, с англ.).-Москва: Мир.-1987.-С. 37-42.

30. Vogel F., Motulsky A. Human genetics.-Berlin-Неidelberg-New York: Springer Verlag.-1982.-P.311-315, P.400-404.

31. Маккьюсик В. CMcKusick V.) Генетика человека Спер, с англ.).-Москва: Мир. -1967. -С.

32. Blouquit Y., Braconnier F., Galacteros F., Arous N., Soria J., Zittoun R., Rosa J. Hemoglobin Hotel-Dieup99Asp—>Gly CGI). A new abnormal hemoglobin with high oxygen affinity//Hemoglobin.1981.-V.5.-P.19-31.

33. Popp R.A., Bailiff E.G., Hirsch G.P., Conrad R.A. Errors in human hemoglobin as a function of age//Interdiscipl.Topics Geront.-1976.-V.9.-P.209-218.

34. International Hemoglobin Information Centre//Hemoglobin.-1987.-V.11.-P.241-308.

35. Boissel J.P., Kasper T.J., ShahS.C., Malone J.I., Burn H.F. Amino-terminal processing of proteins: hemoglobin South Florida, a variant with retention of initiator methionine and N*-acetylation// Proc.Natl.Acad.Sci. USA.-1985.-V.82.-P.8448-8452.

36. Kamel K., El-Najjar A., Webber B.B.; Chen S.S., Wilson J.В., Kutlar A., Huisman T.H.J. Hb Doha of EX-N-Met-1 CNA1)Val—>Gln. a new j?>-chain abnormal hemoglobin observed in a Qatari female// Biochem.Biophys.Acta.-1985.-V.831.-P.257-260.

37. Prchal J.Т., Cashman D.P., Kan Y.W. Hemoglobin Long Island is caused by a single mutation (adenine to cytosine) resulting in a failure to cleave amino-terminal methionine//Pros.Nat.Acad. Sci. USA. -1986.-V. 83.-P. 24-27.

38. BunnH.F., Forget B.G. Hemoglobin structure//Hemoglobin: molecular, genetic and clinical aspects.-Philadelphia-London-Toronto: Saunders Co.-1986.-P.13-36.

39. Sack J.S., Andrews L.C., Magnus K.A., Hanson J.C., Rubin J., Love W. E. Location of amino acid residues in human deoxy hemoglobin// Hemoglobin.-1978. -V.2.-P.153-169.

40. Bunn H.F., Forget B.G. Unstable hemoglobin variants//Hemoglo-bin: molecular, genetic and clinical aspects.-Philadelphia-London-Toronto: Saunders Co. -1986.-P.565-594.

41. Bunn H.F., Forget B.G. Hemoglobinopathy due to abnormal 0 binding//Hemoglobin: molecular, genetic and clinical aspects.-Philadelphia-London-Toronto: Saunders Co.-1986.-P.595-622.

42. Graham J.L., Grundbaum B.W. A rapid method for microelectrophoresis and quantitation of hemoglobins on cellulose acetate//Am.J. Clin. Pathol. -1963. -V. 39. -P. 567-578.

43. Bartlett R.C. Rapid cellulose acetate electrophoresis. 2. Qualitative and quantitative hemoglobin fractionation//Clin. Chem.-1963.-V. 9.-P. 325-329.

44. Schneider R.G. Differentiation of electrophoretically similar hemoglobins such as S, D, G and P; or Az, E and 0 - by electrophoresis of the globin chains//Clin.Chem.-1974.-V. 20.-P. 1111-1115.

45. Drysdale J.W., Righetti P., Bunn H.F. The separation of human and animal hemoglobins by isoelectric focusing in polyacryl-amide gel//Biochem. Biophys.Acta.-1971.-V.229.-P.42-50.

46. Monte M., Beuzard Y., Rosa J. Mapping of several abnormal hemoglobins by horizontal polyacrylamide gel isoelectric focusing// Amer. J. Clin. Path. -1976. -V. 66. -P. 753-759. •

47. Basset P., Beuzard Y., Garel M.O., Rosa J. Isoelectric focusing of human hemoglobin: its application to screening to the characterization of 70 variants, and to the study of modified fractions of normal hemoglobins//Blood.-1978.-V.51.-P.971-982.

48. Basset P., Braconnier F., Rosa J. An update on electro-phoretic and chromatographic methods in the diagnosis of hemoglobinopathies//J.Chromat.-1982.-V.227.-P.267-304.

49. Vogel F., Rathenberg R. Spontaneous mutation in man// Advances in human genetics.-New York-London: Plenum Press.-1975. -V.5.-P.223-318.

50. Дуброва Ю.E. Статистический анализ аномальных ex.- и j2>-глобинов человека//Генетика.-1986.-Т.22.-С.1040-1046.

51. Schneides R.G., Hightower В., Hosty T.S., Ryder Н., Tomlin G., Atkins R., Brimhall В., Jones R.T. Abnormal hemoglpbins in a quarter million people//Blood.-1976.-V.48.-P.629-637.

52. Schneider R.G., Barwick R.C. Measuring relative electro-phoretic mobilities of mutant hemoglobins and globin chains// Hemog1obin.-1978.-V.2.-P.417-435.

53. Barwick R.C., Schneider R.G. The computer-assisted differentiation of hemoglobin variants//Tex.Repts Biol. Med.-1981.-P.l43-156.

54. Alter B.P., Goff S.C., Efremov G.D., Gravely M.E., Huisman T.H.J. Globin chain electrophoresis: a new approach to the determination of the^y^ration in fetal haemoglobin and to studies of globin synthesis//Brit.J.Haematol.-1980.-V.44.-P.527-534.

55. Grimes A.J., Meisler A., Dacie J.V. Congenital Heinz-body anaemia: Further evidence on the cause of Heinz-body production in red cells//Br.J.Haematol.-1964.-V10.-P.281-290.

56. Dacie J.V., Grimes A.J., Meisler A., Steingold L., Hemstead E.H., Beaven G.H., White J.C. Hereditary Heinz body anaemia//Brit. J.Haemat.-1964.-V.10.-P.388-402.

57. Ockelford P.A., Liang A.Y., Wells R.M., Vissers M., Brennan S.0., Williamson D., Carrell R.W. Hemoglobin Volga j527Ala-->Asp: functional and clinical correlations of an unstable hemoglobin// Hemoglobin.-1980.-V.4.-P.295-306.

58. Carrell R.W., Kay R. A simple method for the detection of unstable haemoglobins//Br it. J. Haemat.-1972.-V.23.-P.615-619.

59. Rieder R.F., Oski F.A., Clegg J.B. Hemoglobin Philly (p>35Tyrosine-->Phenylalanine): Studies in the molecular pathology of hemoglobin//J.CI in.Invest.-1969.-V.48.-P.1628-1636.

60. Huisman Т.Н.J., Brown А.К., Efremov G.D., Wilson J.В., Reynolds C. A., Vy R., Smith L.L. Hemoglobin Savannah p>24Glycine —>Valine: an unstable variant causing anemia with inclusion bodies//J.Clin. Invest.-1971.-V.50.-P.650-659.

61. Carrell R.V., Lehmann H. Zinc acetate as a precipitant of unstable haemoglobins//J.Clin.Pathol.-1981.-V.34.-P.796-799.

62. Asakura Т., Adachi K., Shapiro M., Friedman S., Schwartz E. Mechanical precipitation of hemoglobin Koln//Biochem.Biophys.Acta.-1975.-V.412.-P.197-201.

63. Vella F. Mechanical stability of human haemoglobins//Acta Haematol.-1975.- V.54.-P.257-260.

64. North M.L., Thillet J., Rosa J. Effect of some physical features and of amino acid substitution on the mechanical precipitation of hemoglobin//Hemoglobin.-1981.-V.5.-P.379-390.

65. Schroeder W. A., Huisman T.H.J. The chromatography of hemoglobin.-New York-Basel: Marcel Dekker Inc.-1980.-P.1-255.

66. Huisman T.H.J., Wilson J.B. The use of HPLC procedures in the study of human hemoglobin variants//Protides Biol.Fluids Proc. 32 Colloq. 1984.-Oxford.-1985.-P.1029-1036.

67. Felice A.E. The W.A.Schroeder symposium on the application of HPLC in hemoglobin analysis//Hemoglobin.-1986.-V.10.-P.561-571.

68. BunnH.F., Forget B.G. M-Hemoglobins//Hemoglobin: Molecular, genetic and clinical aspects.-Philadelphia-London-Toronto: Saunders Co.-1986.-P.623-633.

69. Nagai M., Takama S., Yoneyama Y. Hemoglobin M: Effect of the proximal or distal histidine replacement on circular dichroism in the visible region//BBRC.-1985.-V.128.-P.689-694.

70. Ingram V.M. A specific chemical difference between the globins of normal human and sickle-cell anaemia haemoglobin//Nature.-1956.-V.178.-P.792-794.

71. Ingram V.M. Gene mutations in human haemoglobin: The chemical difference between normal and sickle cell haemoglobin//Natu-re.-1957.-V.180.-P.326-328.

72. Ingram V.M. Abnormal human haemoglobins. 1. The comparison of normal and sickle-cell haemoglobins by "fingerprinting"// Biochem.Biophys.Acta.-1958.-V. 28.-P.539-545.

73. Ingram V.M. Abnormal human haemoglobins. 3. The chemical difference between normal and sickle cell haemoglobins//Biochem. Biophys.Acta.-1959.-V.36.-P.4o2-411.t Jt JO

74. Petrakis N.L., Doherty M.A., Grunbaum В. V., Atchley V.A. Cellulose acetate membranes for electrophoretic demonstration of Hb A^/Acta Haematol.-1962.-V.27.-P.96-103.

75. Briere R.O., Golias Т., Batsakis J.G. Rapid qualitative and quantitative hemoglobin fractionation: Cellulose acetate electrophoresis// Amer .J.CIin.Pathol.-1965.-V.14.-P.695-701.

76. Hamilton S.R., Miller M.E., Jessop M., Charache S. Comparison of microchromatography and electrophoresis with elution for hemoglobin hz CHb Аг) quantitation//Amer.J.CI in.Pathol.-1979.-V.71.-P.388-396.

77. Rich S., Ziegler F.D., Grimley P.M. An analysis of electrophoretic and microcolumn methods for the separation of hemoglobins A and Ая//С1in.Chim.Acta.-1979.-V.96.-P.113-123.

78. Williard R.F., Lovell W.J., Dreiling B.J., Steinberg M.H. Electrophoresis of hemoglobin on polyacrylamide gels. Precise method for measurement of hemoglobin Az//Clin.Chem.-1973.-V.19.-P.1082-1084.

79. Matuonto V., Cappellini M.D., Fiorelli G. Comparison between electrophoresis and DEAE-microchromatography in quantitation of hemoglobin A^//J.Chromatog.-1974.-V.92.-P.174-176.

80. Pietschmann H., Singer F., Vormittag V. Hamoglobinuntersu-chungen mittels Disk-Elektrophorese//Wien.Z.inn.Med.-1971.-V.52.-P. 83-89.

81. Righetti P.G., Gianazza E., Gianni A.M., Comi P., Giglioni S., Ottolenghi S., Secchi C., Rossi-Bernardi L. Human globin chain separation by isoelectric focusing//J.Biochem.Biophys.Meth.-1979.-V.1.-P.45-57.

82. Valkonen K., Gianazza E., Righetti P.G. Human globin chain separation by isoelectric focusing in ultrathin polyacrylamide gels//Clin.Chim.Acta.-1980.-V.107.-P.223-229.

83. Petrides P.E., Jones R.T., Bohlen P. Reverse-phase high-performance liquid chromatography of proteins: The separation of hemoglobin chain variants//Anal.Biochem.-1980.-V.105.-P.383-388.

84. Leone L., Monteleone M., Gabutti V., Amione C. Reversedphase high-performance liquid chromatography//J.Chromatogr.-1985.-V.321.-P.407-419.

85. Kutlar F. Separation of normal and abnormal hemoglobin chains by reversed-phase high-performance liquid chromatography// J.Chromatogr.-1986.-V.357.-P.147-153.

86. Clegg J. В., Naught on. M. A., Weatherall D.J. Abnormal human hemoglobins. Separation and characterization of the ol and p>-chains by chromatography and determination of two new variants Hb Chesapeake and Hb J Bangkok//J.Mol.Biol.-1966.-V.19.-P.91-108.

87. Clegg J.B., Naughton M.A., Weatherall D.J. Separation of the ос and £>-chains of human haemoglobin//Nature.-1968,-V.219.-P.69-70.

88. Shibata S. Separation of hemoglobin chains//Hemoglobin.-1980.-V.4.-P. 561-566.

89. Turci S.M., McDonald M. Isolation of normal and variant human hemoglobin subunits//J.Chromatogr.-1985.-V.343.-P.168-174.

90. Lehmann H., Huntsman R.G. Man's haemoglobins.-Amsterdam-Oxford: North Holland Publ.Co.-1974.-P.55, 222, 444.

91. Beuzard Y., Courvalin J.C., Cohen-Solal M. Structural studies of hemoglobin Saint Etiennef.92CF8)His—>Gln: A new abnormal hemoglobin with loss ofpproximal histidine and absence of the-chains//FEBS Let. -1972.-V.27.-P.76-80.

92. Cohen-Solal M. Haemoglobin Lyon С jbl7-18(A14-15)Lys-Val-->0.: Determination by sequenator analysis//Biochim.Biophys.Acta.-1974.-V. 351.-P. 306-316.

93. Harano K., Harano Т., Ueda S., Shibata S. Mapping and amino acid analysis of tryptic peptides of globin by use of cellulose thin 1ayer//Kawasaki Med.J.-1978.-V.4.-P.323-326.

94. Спивак В.А., Молчанова Т.П., Токарев Ю.Н. Экспрессный и высокочувствительный метод идентификации аномальных гемоглобинов

95. S, Е и D PunjаЬ//Пр$5л.гемат.перелив.крови.-1980,- 5.-С.55-59.

96. Wilson В., LamH., Pravatmuang P., Huisman T.H.J. Separation of tryptic peptides of normal and abnormal ot, ji, ^ and $ hemoglobin chains by high-performance liquid chromatography// J.Cromatogr.-1979.-V.179.-P.271-290.

97. Schroeder W.A., Shelton J.B., Shelton J.R. Separation of hemoglobin peptides by high performance liquid chromatography// Hemoglobin. -1980.-V.4.-P.551-559.

98. Bishop C.A., Hancock W.S., Brennan S.O., Carrell R.W.,

99. Hearn M.T.W. Peptide mapping by hydrophylic ion-paired, reversed-phase high performance liquid chromatography for the characterization of the tryptic digest of haemoglobin variants//J.Liquid Chrom.-1981.-V.4.-P.599-612.

100. Minasian E., Sharma R.S., Leach S.J., Grego B., Hearn M. T.W. A comparative study of thechain of normal and abnormal hemoglobins by reversed phase high performance liquid chromatography// J. Liquid Chrom.-1983.-V.6.-P.199-213.

101. Imamura T., Sugihara J., Yokota E., Kagimoto M., Naito Y., Yanase T. Analytical peptide mapping by ion-exchange high-performance liquid chromatography: application to haemoglobin variants// J.Chromat.-1984.-V.305.-P.456-460.

102. Jones R.T. Structural studies of aminoethylated hemoglobins by automatic peptide chromatography//Cold Spring Harb.Symp. Quant.Biol. -1965.-V.19.-P.297-308.

103. Chin C.C.Q., Wold F. A convenient method for preparative pept ide separat ion//l972.-V.46.-P.585-593.

104. Benson J.R. Fluorescent peptide mapping with microgram quantities of protein//Analyt.Biochem.-1976.-V.71.-P.459-470. .

105. Fishbein J.C., Place A.R., Ropson I.J., Powers D.A., Sofer W. Thin-layer peptide mapping: quantitative analysis and sequen-sing at the nanomole level//Analyt. Biochem.'-1980.-V. 108.-P. 193201.

106. Moore S., Stein W.H. Procedures for the chromatographic determination of amino acids on four percent cross-linked sulfonated polystyrene resins//J.Biol.Chem.-1954.-V.211.-P.893-902.

107. Gray W. R., Hartley B.S. A fluorescent end-group reagent for protein and peptides//Bichem.J.-1963.-V.89.-P.59p.

108. Gray V.R. End-group analysis using dansyl chloride//Meth. Enzymol.-1972.-V.25.-P.121-138. r

109. Seyler N., Wiechmann J. Zum Nachweis von Aminosauten in-4010 -mol Mastab. Trennung von l-dimethylamino-naphtalin-5-sulfonyl-aminosauren auf Dunnschichtchrorriatograinrnen//Experientia.-1964.-V.20.-P.559-560.

110. Беленький Б.Г., ГанкинаЭ.С., Нестеров В.В. Экспрессный ультрамикрочувствительный метод идентификации N-концевых аминокислот в белках и пептидах с помощью тонкослойной хроматографии// Докл.АН СССР.-1967.-Т.172.-С.91-95.

111. Spivak V.A., Fedoseev V.A., Orlov V.M., Varshavsky Ja.M. Quantitative ultramicroanalysis of amino acids in the form of their DNS-derivatives. 3. Analysis of natural amino acids. Characteristics of the method//Analyt.Biochem.-l971.-V.44.-P.12-31.

112. Woods K.R., Wang K.T. Separation of dansyl-amino acids by polyamide layer chromatography//Biochim.Biophys.Acta.-1967.1. V.133.-P.369-372.

113. Ambler R.P. Enzymatic hydrolysis with carboxypeptidases// Meth.Enzymol.-1972.-V.25B.-P.143-154.

114. Edman P. Method for determination of the amino acid sequence in peptides//Acta Chem.Scand.-1950.-V.4.-P.283-293.

115. Edman P., Henschen A. Sequence determination//Protein sequence determination.-Berlin-Heidelberg-New York.-1975.-P.232-279.

116. Schroeder W.A. Degradation of peptides by the Edman method with direct identification of the phenylthiohydantoin-amino acids//Kfeth.Enzymol.-1972.-V.25B.-P.298-313.

117. Gray W.R. Sequence analysis with dansyl chloride//Meth. Enzymo1.-1972.-V.25B.-P.333-344.

118. Chang J.Y., Brauer D., Wittmann-Liebold B. Micro-sequence analysis of peptides and proteins using 4-N,N'-dimethylaminoazo-benzene-4'-isothiocyanate/phenylisothiocyanate double coupling method//FEBS Lett.-1978.-V.93.-P.205-214.

119. Huisman T.H.J., Jonxis J.H.P. The hemoglobinopathies: Techniques of identification.-New York: Marcel Dekker Inc.-1977,-P.65-266.

120. Спивак В.А. Фенотипические проявления носительства аномальных гемоглобинов человека//5 с'езд Всесоюзного общества генетиков и селекционеров им. Н.И. Вавилова.-Москва.-1987.-тезисы.-Т.6.-С.193.

121. Спивак В.А. Анализ фенотипических проявлений носительства аномальных гемоглобинов человека//Мол.генетика.-1989.- З.-С.З

122. OrkinS.H., Kazazian Н. Н., Antonarakis S.E., OstrerH., Goff S.С., Sexten J.P. Abnormal RNA processing due to the exon mutation of J2>e globin gene//Nature.-1982.-V.300.-P.768-769.

123. OrkinS.H., Antonarakis S. E., Loukopoulos D. Abnormal processing of -Knossos RNA//Blood.-1984.-V.64.-P.311-313.

124. Traeger J., Wood W.G., Clegg J.В., Weatherall D.J. Defective synthesis of Hb E is due to reduced levels of E mRNA// Nature.-1980.-V.288.-P.497-499.

125. Hunt D.M., Higgs D.R., Vinichagoon P., Clegg J.В., Weatherall D.J. Haemoglobin Constant Spring has an unstable ос-chain messenger RNA//Brit.J.Haematol.-1982.-V.51.-P.405-413.

126. Goldberg A.L., St.John A.C. Intracellular protein degradation in mammalian and bacterial cells//Ann.Rev.Biochem.-1976.-V.45.-P.747-803.

127. Carrell R.W., Winterbourn C.C. The unstable hemoglobins// Tex.Repts Biol.Med.-1981.-V.40.-P.431-445.

128. Ogunmola G.B., EsanG.J.F., Falusi A.G. Hemoglobin chain recombination and the pattern of composition of hemoglobin S and D in heterozygotes//Acta Haematol.-1980.-V.63.-P.94-100.

129. Shaeffer J.R., Kingston R.E., McDonald M.J., Bunn H.F. Competition of normal f*> chains and sickle haemoglobin p> chains for ol chains as a post-translational control mechanism//Nature.-1978.-V.276.-P.631-632.

130. Bunn H.F., McDonald M.J. Electrostatic interactions in the assembly of haemoglobin//Nature.-1983.-V.306.-P.498-500.

131. Bunn H.F. Subunit assembly of hemoglobin: an important determinant of hematologic phenotype//Blood.-1987.-V.69.-P.l-6.

132. Pace C.N., Fisher L.M., Cupo J.F. Globular protein stability: aspects of interest in protein turnover//Acta biol.et med.germ.-1981.-V.40.-P.1385-1392.

133. Шульц Г., Ширмер P. Принципы структурной организации белков Спер, с англ.).-Москва: Мир.-1982.-С. 354.

134. Grutter М. G., Hawkes R.B. Mutations and the conformational stability of globular proteins//Naturwissenschaften.-1983.-V.70.-P.434-438.

135. Clark M.R., Shohet S.B. The effect of abnormal hemoglobins on the membrane regulation of cell hydration//Tex.Repts Biol. Med.-1981.-V.40.-P.417-429.

136. Delaunay J., Alloisio H., Morle L., Dorleac E. Unstable hemoglobins and thalassemias generate proteolysis and protein cross-links within the red cell//Cienc.Biol.Mol.and Cell Biol.1985.-V.10.-P.85-93.

137. Reinhart W.H., Sung L.A., Chien S. Quantitative relationship between Heinz body formation and red blood cell deformabili-ty//Blood.-1986.-V. 68.-P.1376-1383.

138. Fagan J.M., Waxman L., Goldberg A.L. Red blood cells contain a parthway for the degradation of oxidant-damaged hemoglobin that does not require ATP or ubiquitin//J.Biol.Chem.1986.-V.261.-P.5705-5713.

139. Flynn T.P., Allen D.V., Johnson G.J., White J.G. Oxidant damage of the lipids and proteins of the erythrocyte membranes in unstable hemoglobin disease//J.Clin.Invest.-1983.-V.71.-P.1215-1223.

140. Niazi G.A., Shibata S. Instability of hemoglobin molecule: clinical and laboratory manifestation//Kawasaki Med.J.-1984.1. V.10.-P.17-20.

141. Гомеостаз.-Москва: Медицина.-1981.-С.1-573.

142. Шмальгаузен И.И. Пути и закономерности эволюционного процесса.-Москва: Наука.-1983.-С.55.

143. Wasi Р., Winichagoon Р., Baramee Т., Fucharoean S. Globin chain synthesis in heterozygous and homozygous hemoglobin E// Hemog1obin.-1982.-V.6.-P.75-78.

144. Sciarratta G.V., Sansone G., Ivaldi G., Felice A.E., Huisman T.H.J. Alternate organization of«Б-Philadelphia globin genes among U.S. black and italian Caucasian heterozygotes// Hemoglobin.-1984.-V.8.-P.537-547.

145. Liebhaber S.A., Cash F.E., Main D.M. Compensatory increase in ocl-globin gene expression in individuals heterozygous for the oc-thalassemia-2 deletion//J. CI in.Invest.-1985.-V.76.-P.1057-1064.

146. Winterbourn C.C., McGrath В. M., Carrell R.W. Reactions involving superoxide and normal and unstable haemoglobins// Biochem.J.-1976.-V.155.-P.503-510.

147. Tillmann W. Verminderte Verformbarkeit der Erythrozyten als gemeinsamer Nenner hamolytischer Anamien//Wien.med.Wochensch.-1986.-V.136.-P.14-16.

148. Butler W.M., Spratling L., Kark J.A., Schoomaker E.B. hemoglobin Osier: report of a new family with exercise studies before and after. phlebotomy//Amer.J.Hematol.-1982.-V.13.-P.293-301.

149. Wranne B. Berlin G., Jorfeldt L., Lund N. Tissue oxygenation and muscular substrate turnover in two subjects with high hemoglobin oxygen affinity//J.Clin.Invest.-1983.-V.72.-P.1376-1384.

150. Burn H.F., Forget B.G. О and CO transport in health and disease//Hemoglobin: Molecular, genetic and clinical aspects.-Philadelphia-London-Toronto: Saunders Co.-1986.-P.91-125.

151. Char ache S. Measurement of homeostatic responses to altered Psoin patients with abnormal hemoglobins//Biochemical and clinical aspects of hemoglobin abnormalities.-New York-San Francisco-London: Academic Press.-1978.-P.577-581.

152. Charache S. Structure-function relationships in hemoglobins: clinical aspects//Tex.Repts Biol.Med.-1981.-V.40.-P.199-206.

153. Берпггейн С. А. Гуревич M. И., Соловьёв А. И. Дефицит кислорода и сосудистый тонус.-Киев; Hayкова Думка.-1984.-С.221-227.

154. Спивак В. А. Гемоглобин человека: полиморфизм, нейтральность вариантов, эволюционный аспект//Молек.биол.-1986.-Т.20.-С.789-797.

155. Honig C.R., Green D., Shamsuddin М., VidaL.N., Mason R.G., Gnarra D.J., Maurer H.S. Hemoglobin Abraham Lincoln p32CB14)Leu—> Pro. An unstable variant producing severe hemolytic disease//J.

156. CI in. Invest.-1973.-V.52.-P.1746-1755.

157. Jackson J.M., Yates A., Huehns E.R. Haemoglobin Perth: 32CB14)Leu— >Pro, an unstable haemoglobin causing haemolysis//

158. Brit.J.Haematol.-1973.-V. 25.-P.607-610.

159. Grove S.S., Jenkins Т., Kamuzora H.J., Lehmann H. Congenital Heinz body haemolytic anaemia due to haemoglobin Perth in a Nama child seemingly aggravated by the high nitrate content of the water supply//Acta Haematol.-1977.-V.57.-P.143-151.

160. Rousseaux J., Nuyts J.P., Demouveau G., Dantrevaux J.

161. A severe hemolytic anemia related to a new case of hemoglobin Perth

162. CAbraham Lincoln) in a French patient//Hemoglobin.-1980.-V.4.-P.89-93.

163. Frick P.G., Hitzig W.H., Betke K. Hemoglobin Zurich.

164. A new hemoglobin anomaly associated with acute hemolytic episodes with inclusion bodies after sulfonamide therapy//Blood.-1962.-V.20.-P.261-271.

165. Dickerman J.D., Holtzman N. A., Zinkham W.H. Hemoglobin Zurich. A third family presenting with hemolytic reactions to sulfonamides//Amer. J.Med.-1973.-V.55.-P.638.

166. Adams J.G., Heller P., Abramson R.K., Vaithiatham T. Sulfonamide-induced hemolytic anemia and hemoglobin Hasharon// Arch.Intern.Med.-1977.-V.137.-P.1449-1451.

167. Winterbourn C.C., Williamson D., Vissers M.C.M., Carrell R.W. Unstable haemoglobin haemolytic crises: contributions of pyrexia and neutrophil oxidants//Brit.J.Haematol.-1981.-V.49.-P.111-116.

168. Айала Ф. Введение в популяционную и эволюционную генетику Спер, с англ.). -Москва: Мир. -1984. -С. 1-230.

169. Алтухов Ю.П. Генетические процессы в популяциях.-Москва: Наука. -1983. -С. 44-45, 174.

170. Северцов А.С. Основы теории эволюции.-Москва: МГУ.-1987.-С.121.

171. Левонтин Р. Генетические основы эволюции (пер. с англ.).-Москва: Мир.-1978.-С. 1-338.

172. Goodman М., Moore G.W., Matsuda G. Darwinian evolution in the geneology of haemoglobin//Nature.-1975.-V.253.-P.603-608.

173. Goodman M. Decoding the pattern of protein evolution// Progr.Biophys.Mol.Biol.-1981.-V.37.-P.105-164.

174. Kimura M. The neutral theory of molecular evolution// Sci.Amer.-1979.-V.241.-P.94-104.

175. Jukes Т.Н. Neutral changes during divergent evolution of hemoglobins//J.Mol.Evol.-1978.-V.11.-P.267-269.

176. Кимура M. Молекулярная эволюция: теория нейтральности (пер. с англ.).-Москва: Мир.-1985.-С.1-398.

177. Perutz М.F. Species adaptation in a protein molecule// Mol.Biol.Evol.-1983.-V.l.-P.1-28.

178. Ptitsyn O.B., Volkenstein M.V. Protein structures and neutral theory of evolution//J.Biomol.Struct.Dynam.-1986.-V.4.-P.137-156.

179. Fairbanks V.F. Hemoglobinopathies and thalassemias.-New York: Brian C.Dekker Publ.-1980.-P.10-14, 38-46.

180. HuntsmanR.G. Sickle-cell anemia and thalassemia.-Ontario, Canada: The Canadian Sickle Cell Society.-1987.-P.

181. Allison A.C. Polymorphism and natural selection in human population//Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol.-1964.-V. 29.-P. 137149.

182. Nagel R.L., Raventos-Suatez C., Fabry M. E., Tanowitz H., Sicard D., Labie D. Impairment of the growth of Plasmodium falciparum in Hb EE erythrocytes//J.Clin.Invest.-1981,-Y.68.-P.303-305.

183. Livingstone F.B. The malaria hypothesis//Distribution and evolution of hemoglobin and globin loci.-New York-Amsterdam-Oxford: Elsevier Sci.Publ.Co.-1983.-P.15-37.

184. Olson J.A. Nagel R.L. Synchronized cultures of P.falciparum in abnormal red cells: The mechanism of the inhibition of growth in Hb CC cells//Blod.-1986.-V.67.-P.997-1001.

185. Bunyaratvej A., Putthep P., Yuthavong Y., Fucharoen S., Khusmith S., Yoksan S., Wasi P. Increased phagocytosis of Plasmodium falciparum infected erythrocytes with haemoglobin E by peripheral blood monocytes//Acta Haematol.-1986.-Y.76.-P.155-158.

186. Politis-Tsegos C., Lang A., Stathopoulous R., Lehmann H. Is haemoglobin G Philadelphia linked to -thalassemia? Further ev idence//Hum.Genet.-1976.-V.31.-P.67-74.

187. Sciarratta G.V., Sansone G., Ivaldi G., Felice A.E., Huismann T.H.J. Alternate organization of o<.G-Philadelphia globin genes among U.S. black and Italian caucasian heterozygotes//Hemo-globin.-1984.-V.8.-P.537-547.

188. Liebhaber S.A., Rappaport E.F., Cach F.E., Ballas S.K., Schwartz E., Surrey S. Hemoglobin I mutation encoded at both o(.-globin loci on the same chromosome: concerted evolution in the human genome.-1984.-V.226.-P.1449-1451.

189. Marinucci M., Schiliro G., Russo G., Tentori L. Hemoglobinopathies in Italy//Hemoglobin.-1982.-V.6.-P.247-255.

190. Harano K. Harano Т. Shibata S. Mori H. Ueda S. Imai

191. К., Ohba Y., Irimajiri К. Hb J Oxford Cocl5Gly—>Asp) in Japan// Hemoglobin. -1984.-V.8.-P.197-198.

192. LehmannH., Vella F. Hemoglobin Hasharon//Hum.Genet.-1974.-V.25.-P.237-240.

193. Eliakim R., Rachmilewitz E.A. Hemoglobinopathies in Israel//Hemoglobin.-1983.-V.7.-P.479-485.

194. Bender J.W., Reilly M.P., Asakura T. Molecular stability and function of hemoglobin Hasharon c<47Asp—>His//Hemoglobin. -1984.-V.8.-P.61-73.

195. Maccioni L., Galanello R., Mel is M.A., Cao A. Hemoglobin constitution of double heterozygotes for a or thalassemia and Hb J Sardegna//Hemoglobin.-1984.-V.8.-P.497-507.

196. Trabuchet G., Benabadji M., Labie D. Genetic and biosyn-thetic studies of families carrying haemoglobin J Mexico: association ofot-thalassemia with Hb J//Hum.Genet.-1978.-V.42.1. P.189-199.

197. Weatherall D.J., Clegg J.B. The thalassaemia syndromes. -Blackwell Sci.Publ.Co.-1981.-P.366-623.

198. Gadjusek D.C., Guiart J., Kirk R.L., Carrell R.W., Irvine D., Kynoch P.A.M., Lehmann H. Haemoglobin J Tongariki//J.Med. Genet.-1967.-V.4.-P.1-6.

199. Abramson R.K., Rucknagel D.L., Schreffler D.C., Saave J.J. Homozygous Hb J Tongariki: evidence for only one alpha chain structural locus in Melanesians//Science.-1970.-V.69.-P.194-196.

200. Beaven G.H., Hornabrook R.W., Fox R.H. Occurence of heterozygotes for alpha chain haemoglobin variant Hb J (Tongariki) in New Guinea//Nature.-1972.-V.235.-P.46-47.

201. Beaven G.H., Fox R.H., Hornabrock R.W. The occurence of haemoglobin-J (Tongariki) and of thalassaemia on Karkar Island and the Papua New Guinea mainland//Philos.Trans.R.Soc.Lond.-1974.1. V.268.-P.269-278.

202. Old J.M., Clegg J.B., Weatherall D.J., Booth P.B. Hemoglobin J Tongariki is associated with alpha-thalassemia//Nature.1978.-V.273.-P.319-320.

203. Bowden O.K. ot-Globin gene deletions associated with Hb J Tongariki//Brit.J.Haematol.-1982.-V.51.-P.243-249.

204. Lie-Injo L.E., Sadono K. Haemoglobin 0 (Buginese X) in Su 1 awas i / / Br i t. hfed. J. -1958. V. 1. - P. 1461 -1462.

205. Vasi P. Hemoglobinopathies in Southeast Asia//Distribution and evolution of hemoglobin and globin loci.-New York-Amsterdam-Oxford: Elsevier Sci.Publ.Co.-1983.-P.179-208.

206. Weatherall D.J., Clegg J.B. The <x»-chain termination mutants and their relationship to the &-thalassaemias//Philos. Trans.R. Soc. Lond. -1976.-V.271.-P.411-455.

207. Derry S., Wood W.G., Pippard M., Clegg J.B., Weatherall D.J. Hematologic and biosynthetic studies in homozygous hemoglobin Constant Spring//J.Clin.Invest.-1984.-V.73.-P.1673-1682.

208. Pootrakul P., Winichagoon P., Fucharoen S., Pravatmuang P., Piankijagum A., Wasi P. Homozygous haemoglobin Constant Spring: a need for revision of concept//Hum.Genet.-1981.-V.59.-P.250-255.

209. Schiliro G., Li Volti S., Musumeci S., Molleca F., Mari-nucci M., Mavilio L., Tentori L. Sicily: a cluster of Hb G San Jose//Hemoglobin. -1981. -V. 5.-P.725-730.

210. Schiliro G., Li Volti S. Did the Hb G San Jose gene arise in Sicily?//J.Msd.Genet.-1986.-V.23.-P.281.

211. Tondo C.V. Hemoglobin Porto Alegre: an assymetric tetramer with only one abnormal beta chain in the aged hemolysate of erythrocytes from the heterozygous carrier <x2p29Ser—>Cys//An. Acad.Brasil.Cienc.-1972.-V.44.-P.337-348.

212. Martinez G., Lima F., Wade M., Estrada M., Colombo В., Heredero L., Granda H. Hemoglobin Porto Alegre in a Cuban family// J.Med.Genet.-1977.-V.14.-P.422-425.

213. Salzano F.M., Tondo C.V. Hemoglobin types in Brazilian populat ions//Hemoglobin.-1982.-V.6.-P.85-97.

214. Baglioni C., Weatherall D.J. Abnormal human hemoglobins. 9. Chemistry of hemoglobin J Baltimore//Biochim.Biophys.Acta.-1963.-V.78.-P.637-643.

215. Schneider R.G. Review of hemoglobin variants studied in Southwestern USA//Hemoglobin. -1980.-V.4.-P.363-372.

216. Romero C., Munoz A., Fernandez Fuertes I., Hernandez-Jodra M., Navarro J.L. First association in Spain of Hb J Baltimore <x2pz Gly—>Asp and beta thalassemia//Hemoglobin.-1982.-V.6.1. P.607-612.

217. Blackwell R.Q., Ro J.H., Liu C.S., Yang H.J., Vang C.C., Huang J.Т.Н. Hemoglobin variant found in Koreans, Chinese and North American Indians: 22Glu— >Ala//Amer. J.Phys. Anthropol.-1967.-V.30.-P.389-391.

218. Chen S.S. Studies on abnormal hemoglobin variants in China. Two cases with Hb G Coushatta and the primary structure of the hemoglobin variant//Clin.Med.J.-1981.-V.94.-P.13-20.

219. Boissel J.P., Wajcman H., Labie D., Dahmane M., Benabadji M. Hemoglobine G Coushatta Cf>22Glu—>Ala) en Algerie description d'un cas homozygote//Nouv.Rev.Franc.Hemat.-1979.-V.21.-P.225-230.

220. Zeng Y.-T. Hemoglobinopathies in China mainland//Hemo-globin.-1981.-V.5.-P.517-524.

221. Bunn H.F., Forget B.G. Human hemoglobin variants//Hemo-globin: molecular, genetic and clinical aspects.-Philadelphia-London-Toronto: Saunders Co.-1986.-P.381-452.

222. AhernE., Ahern V., Serjeant G.R., Serjeant B.E., Seakins M., Darbre P., Middleton A., Lehmann H. jb-Chain variants in Jamaican newborns//Hemoglobin.-1978.-V.2.-P.495-502.

223. Fabritius H. Hemoglobin N Baltimore: 28 cases in one Guadeloupe family//Nouv.Rev. Fr.Hemat.-1980.-V.22.-P.405-410.

224. Jones Vaughan R., Grimes A.J., Carrell R.W., Lehmann H. Koln Haemoglobinopathy. Further data and a comparison with other hereditary Heinz body anaemias//Brit.J.Haematol.-1976.-V.13.1. P. 394-408.

225. Ricco G. Koln hemoglobinopathy in Italy//Panminerva Med.-1981.-V.23.-P.227-233.

226. Blackwell R.Q., Liu C.S., Wang C.L: Hemoglobin New York in Chinese subjects in Taiwan//Amer.J.Phys.Anthrop.-1971.-V.34.-P.329-334.

227. Saenz G.F., Elizondo J., Arroyo G., Jimenez J., Montero G., Lima F., Martinez G. Two cases of hemoglobin New York in Costa Rica//Hemoglobin.-1980.-V.4.-P.101-105.

228. Zeng Y.-T. Hemoglobinopathies in China Mainland//Hemoglobin.-198.1.-V. 5.-P. 517-524.

229. Zeng Y.-T., Huang S.-Z. Hemoglobin New York «.2^a113Val—> Glu in China//Hemoglobin.-1982.-V.6.-P.61-67.

230. Efremov G.D. Hemoglobin Lepore and anti-Lepore//Hemoglo-bin.-1978.-V.2.-P.197-233.

231. Marinucci M. Hb Lepore trait in Italy: hematological and structural studies on the Italian population//Brit.J.Haematol.1979.-V.42.-P.557-565.

232. Quattrin N., Luzzatto L., Quattrin S. New clinical and biochemical findings from 235 patiens with hemoglobin Lepore// Ann.NY.Acad.Sci.-1980.-V.344.-P.364-374.

233. Li W.-H. Maintenance of genetic variability under the joint effect of mutation, selection and random drift//Genetics.-1978.-V.90.-P.349-382.

234. Deka R. Fertility and haemoglobin genotypes: a population study in Upper Assam С India)//Hum.Genet.-1981.-V.59.-P.172-174.

235. Das N.K. , Sarkar J.M., Bhattacharya K.K., Ghosh A.K.

236. A note on fitness of haemoglobin genotypes in the Bengali-speaking populat ion//Hum. Hered. -1983.-V.33.-P.307-310.

237. Lesk A.M., Chothia G. How different amino acid sequences determine similar protein structure: the structure and evolutionary dinamics of the globins//J.Mol.Biol.-1980.-V.136.-P.225-270.

238. Sears D.A. The morbidity of sickle cell trait//Amer.J. Med.-1978.-V.64.-P.1021-1036.

239. Vichinsky E.P., Lubin B.H. Sickle cell anemia and related hemoglobinopathies//Pediatr.Clin.North.Amer. -1980. -V. 27.-P.429.

240. Koepke J.F. Laboratory aspects of sickle cell anemia// Labmedica.-1986.-V.3.-P.39-43.

241. Heath D., Williams D.R. Man at high altitude.-Churchhi11 Livingstone Publ.-1981.-P. 1-440.

242. Nagel R. Distribution and evolution of hemoglobin and globin loci.- New York-Amsterdam-Oxford: Elsevier Sci.Publ.Co.-1983.-P.158.

243. Cameron B.F., Smith D.B., Cody B. Hemoglobin С in heterozygote carriers//Amer.J.Hematol.-1984.-V.17.-P.437-438.

244. Fabry M.E., Kaul D.K., Raventos C., Baez S., Rieder R., Nagel R.L. Some aspects of the pathophysiology of homozygous Hb CC erythrocytes//J.Clin.Invest.-1981.-V.67.-P.1284-1291.

245. Fairbanks V.F., Gilchrist G.S., Brimhall В., Jereb J.A., Goldston E.C. Hemoglobin E .trait reexamined: a cause of microcy-tosis and erythrocytosis//Blood.-1979.-V.53.-P.109-115.

246. Ockelford P.A., Liang A.Y., Veils R.M., Vissers M., Brennan S.O., Williamson D., Carrell R.W. Hemoglobin Volga £>27 CB9)Ala-->Asp: functional and clinical correlations of an unstable hemoglobin//Hemoglobin.-1980.-V.4.-P.295-306.

247. Dorleac E., Morle L., Gentilhomme 0., Jaccound P., Bandonnet C., Delaunay J. Thalassemia-like abnormalities of the red cell membrane in hemoglobin E trait and desease//Amer.J. Hematol. -1984. -V. 16. -P. 207-217.

248. Спивак В.А., Молчанова Т.П., Ермаков Н. В., Токарев Ю.Н., Гарькавцева Р.Ф., Асанов А.Ю. Установление первичной структуры аномального D-подобного гемоглобина, выявленного в крови донора// Биохимия.-1978. -Т.43.-С.1175-1183.

249. Dyce B.J., Bessman S.P. A rapid nonenzymatic assay for 2,3-DPG in multiple specimens of blood//Arch.Environ.Health. -1973.-V.27.-P.112-115.

250. Spivak V.A., Molchanova T.P., Postnikov Yu.V., Aseeva E. A., Lutsenko I.N., Tokarev Yu.N. A new abnormal hemoglobin:

251. Hb Mozhaisk p>92(F8) His— >Arg//Hemoglobin.-1982.-V. 6.-P. 169-181.

252. Луценко И.Н., Спивак В.А., Токарев Ю.H. Использование протеолиза глобиновых цепей на ацетат-целлюлозной плёнке в молекулярной диагностике аномальных гемоглобинов//Гематол.Трансфузи-ол.-1985.- 2.-С.47-50.

253. Anson M.L., Mirsky А.Е. Protein coagulation and its reversal. The preparation of insoluble globin and heme//J.Gen. Physiol.-1930.-V. 13.-P. 469-476.

254. Спивак В.А. Молчанова Т.П., Ермаков Н.В., Токарев Ю.Н., Гарькавцева Р.Ф. Установление первичной структуры аномального

255. Е-подобного гемоглобинаУ/Биохимия.-1979.-Т.44.-С.816-821.

256. Cole R.D. S-Aminoethylation//Meth.Enzymol.-1967.-V.11.-P.315-316.

257. Smith D.G. Techniques in enzymic hydrolysis//Meth.Enzymol.-1967.-V.11.-P.214-230.

258. Спивак В.А., Асеева E.A., Луценко И.H. Микропрепаративные тонкослойные пептидные карты в молекулярной диагностике аномальных гемоглобинов человека//Мол.генетика.-1988.- 4.-С.29-36.

259. Спивак В.А. Количественный ультрамикроанализ аминокислот в форме их ДНС-производных и пути его применения в белковой химии// диссертация на соиск.уч.ст.канд.хим.наук.-Москва.-ИМБ АН СССР.-1971.

260. Беленький Б.Г., Ганкина Э.С., Прянишникова С.А., Эрастов Д.П. Микротонкослойная хроматография динитрофенильных и фенилтио-гидантоиновых производных аминокислот//Молек.биол.-1967.-Т.11. С.184-189.

261. Spivak V.A., Orlov V.M., Shcherbukhin V.V., Varshavsky Ja.M. Quantitative ultramicroanalysis of amino acids in the form of their DNS-derivatives. 1. An apparatus for ultramicroanalysis of DNS-amino acids//Analyt.Biochem.-1970.-V.35.-P.227-234.

262. Афанасенко Г.А., Нисанов В.Я., Шляпников С.В., Каминир Л. Б., Северин Е.С. Количественный дансильный микрометод анализа аминокислот. Исследование пептидных карт триптического гидролизата рибонуклеаз ы//Биохимия.-1977.-Т.42.-С.2178-2185.

263. Gross C., Labouesse B. Dansylation of amino acids, peptides and proteins//Eur.J.Biochem.-1969.-V.7.-P.463-470.

264. Gray W. R., Hartley B.S. The structure of chymotriptic peptide from Pseudomonas cytochrome C-551//Biochem.J.-1963.-V.89.-P.379-380.

265. Асеева E.A. Структурный микроанализ пептидов в молекулярной диагностике аномальных гемоглобинов.-диссертация на соиск.уч.ст. канд.биол.наук.-Москва.-ВГНЦ МЗ СССР.-1988.

266. Sumrrers M.R., Smythes V.W., Oroszlan S. Thin-layer chromatography of sub-nanomole amounts of PTH-amino acids on polyamide sheets//Analyt.Biochem.-1973.-V.53.-P.624-628.

267. Kasper C.B. Fragmentation of proteins for sequence studies and separation of peptide mixture//Protein sequence determination: Springer-Verlag.-1975.-P.114-161.

268. Heinrikson R.L. Applications of thermolysin in protein structural analysis//Meth.Enzymol.-1977.-V.47.-P.175-189.

269. Луценко И.H., Спивак В.А. Использование методов электрофореза при молекулярной диагностике аномальных гемоглобинов//

270. Всесоюзная конф. "Хроматография в биологии и медицине".-Москва.-1983.-тезисы.-С.124-125.

271. Смирнов Ю. И. Электрофорез в блоках ацетатцеллюлозы// Злектрофоретические методы анализа белков.-Новосибирск: Наука.-1981.-С.63-68.

272. Молчанова Т.П., Спивак В.А. Применение ионообменной хроматографии при исследовании аномальных гемоглобинов человека//

273. Всесоюзная конф. "Хроматография в биологии и медицине".-Москва.-1983.-тезисы.-С.129.

274. Ермаков Н.В., Спивак В.А. Анализ злектрофореграмм субъединиц глобина и молекулярная диагностика некоторых наследственных гемоглобинопатий//1 Всесоюзный съезд гематологов и трансфуэмоло-гов.-Баку.-1979.-тезисы.-С.217-218.

275. Спивак В.А., Молчанова Т.П., Асеева Е.А., Луценко И.Н., Постников Ю.В., Санникова О.А., Токарев Ю.Р. Молекулярная диагностика аномальных гемоглобинов в микромасштабе//56 научн.сессия ЦНИИГПК.-Москва.-1984.-тезисы.-С.106-107.

276. Спивак В.А., Асеева Е.А., Крынецкий Е.Ю., Луценко И.Н., Кудрявцева Е.В. Токарев Ю.Н. Новый аномальный гемоглобин Никосия £17Лиз—>Глн//7 Всесоюзный симп. по химии белков и пептидов.-Таллин.-1987.-тезисы. С.114-115.

277. Спивак В.А., Асеева Е.А., Крынецкий Е.Ю., Луценко И.Н., Кудрявцева Е.В., Токарев Ю.Н. Новый аномальный гемоглобин Никосия р.17Лиз—> Глн//59 научн. сессия ЦНИИГПК. -Москва.-1987. -тезисы.1. С.104-105.

278. Maekava М., MaekavaT., Fuj iwara N., Tabara К., Matsuda G. Hemoglobin Nagasaki £17Glu: a new abnormal human hemoglobin found in one family in Nagasaki//Int.J.Prot.Res.-1970.-V.11.-P.147-156.

279. Chen R. The sequence determination of a protein in a micro scale: the sequence analysis of ribosomal protein L34 of E.coli// Hoppe-Seyler's Z.Physiol.Chem.-1976.-V.357.-P.873-886.

280. Bodenmuller H. Micro-sequencing of peptides with dansyla-ted amino acids//Z.Anal.Chem.-1984.-V.317.-P.618-620.

281. Асеева E.А., Спивак В.А., Апахов Ю.Б. Ультрамикроанализ первичной структуры пептидов при идентификации аномальных гемоглобинов//6 Всесоюзный симп. по химии белков и пептидов.-Рига.-1983.-тезисы.-С.59-61.

282. Асеева Е.А., Спивак В.А. Методы тонкослойной хроматографии в структурном исследовании пептидов при молекулярной диагностике аномальных гемоглобинов//1 Всесоюзная конф. "Хроматография в биологии и медицине".-Москва.-1983.-тезисы.-С.88.

283. Itano Н.А. Solubilities of naturally occurring mixtures of human hemoglobins//Arch.Biochem.Biophys.-1953.-V.47.-P. 148-159.

284. Спивак В.А., Молчанова Т.П., Постников Ю.В., Асеева Е.А., Луценко И.Н., Токарев Ю. Н., Ермаков Н.В. Молекулярная диагностика аномальных гемоглобинов//53 научн. сессия ЦНИИГПК.-Москва.-1981.-тезисы.-С7115-116.

285. Рустамов Р.Ш., Гаджиев Э.Г., Луценко И.Н., Асеева Е.А., Спивак В.А., Токарев Ю.Н. Две родственные семьи носители НЬ С6Глу-->Лиз в азербайджанской популяции//Гематол.трансфузиол.-1987,- 1.-С.55-57.

286. Хасаев А.Ш., Шамов И.А., Кулагин М.Н., Колодей С.В., Спивак В.А., Мэлчанова Т.П., Ермаков Н.В. Гемоглобин D Punjab в Дагестане//Гематол.трансфузиол.-1983.- 6.-С.47-49.

287. Спивак В.А., Ташева Е.С., Асеева Е.А., Токарев Ю.Н. Редкие варианты Hb D Punjab и Hb 0 Arab и полиморфизм гемоглобина человека//Генетика.-1986.-Т.22.-С.511-518.

288. Спивак В.А., Молчанова Т.П., Ермаков Н.В., Постников Ю.В., Токарев Ю.Н., Рашков Р.Г., Томалева 3.3. Молекулярная диагностика трех случаев носительства гемоглобина О Араб в Болгарии//Гематол. трансфузиол.-1983.- 5.-С.37-40.

289. Спивак В.А., Молчанова Т.П., Ермаков Н.В., Постников Ю.В., Токарев Ю.В., Рашков Р.Г., Томалева 3.3. Гемоглобин Лепоре Бостон в Болгарии//Пробл.гематол.перелив.крови.-1982.- 5.-С.27-30.

290. Cheblonne Y., Verdier G. The delta-beta-crossing-over site in the fusion gene of the Lepore-Boston disease might be localized in a preferential recombination region//Acta Haematol.-1983.1. V.69.-P.294-302.

291. Молчанова Т.П., Абатуров Л.В., Спивак В.А., Ермаков Н.В., Токарев Ю.Н. Гемоглобин М Saskatoon^63CE7)His-->Tyr. Структурная идентификация, образование гемихрома и протеолитическая деграда-ция//Мол.биол.-1980.-Т.14.-С.1253-1266.

292. Молчанова Т.П., Спивак В.А., Абатуров Л.В., Ермаков Н.В.

293. Гемоглобин М Саскатун: молекулярная диагностика, образование гемихрома и протеолитическая деградация//1 Всесоюзный съезд гематологов и трансфуаиологов.-Баку.-1979.-тезисы.-С.218.

294. Спивак В.А., Молчанова Т.П., Постников Ю.В., Асеева Е.А., Луценко И.Н., Токарев Ю. Н., Евдокимова А.И. Молекулярная диагностика НЬ Буэнос-Айрес ^85(П)Фен—>Сер и изучение его свойств//55 научн. сессия ЦНИИГПК.-Москва.-1983.-тезисы.-С.76-78.

295. Идельсон Л.И., Молчанова Т.П., Асеева Е.А., Спивак В.А., Токарев Ю.Н. Второй случай носительства НЬ Такома в Москве// гематол.трансфузиол.-1987.- 9.-С.45-46.

296. Foldi J., Horanyi М., Szelenyi J., Hollan S.R., Kiss A., SpivakV.A., AseevaE.A., TashevaE.S., Tokarev Yu.N. Hemoglobin Agenogi in Hungary//Hemoglobin.-1988.-V.12.-P.395-398.

297. Moo-Penn W.F., Schneider R.G., Andrian S., Das D.K. Hemoglobin Detroit: £95(FG2)Lysine-->Asparagine//Biochim.Biophys. Acta.-1978.-V.536.-P.283-288.

298. Spivak V.A., Molchanova Т. P., Ermakov N.V., Tokarev Yu.N., Martinez G., Szelenyi Ju., Horanyi M., Foldi Ja., Hollan S.R., Kazieva H., Shairiov I.A. A new hemoglobin variant: Hb Dagestan oc60(E9)Lys—>Glu//Hemoglobin.-1981.-V.5.-P.133-138.

299. Spivak Y.A. Letter to editor//Hemoglobin.-1989.-V.13.-P.186.

300. Tokarev Yu.N., Spivak V.A. Heterogeneity and distribution of hemoglobinopathies in some parts of the USSR//Intern.Congr. ISH-ISBT.-Budapest.-1982.-theses.-P.46.

301. Tokarev Yu.N., Spivak V.A. Heterogeneity and distribution of hemoglobinopathies in some parts of the USSR//Hemoglobin.-1982.-V.6.-P.653-660.

302. Гаврилов O.K., Токарев Ю.H., Спивак*В.А. Достижения в области молекулярной гематологии и гематологической генетики// Вестн.АМН СССР.-1982,- 6.-С.57-61.

303. Токарев Ю.Н., Спивак В.А. Молекулярная диагностика и изучение аномальных гемоглобинов в СССР//Сов.мед.-1983.- 11.-С761-64.

304. Токарев Ю.Н., Спивак В.А., Постников Ю.В. Важнейшиенаследственные гемоглобинопатии//Наследственные анемии и гемоглобинопатии. -Москва: Медицина.-1983.-С.137-148.

305. Гинтер Е.К., Гарькавцева Р.Ф. Распространение и гетерогенность гемоглобинопатий//Прогресс в медицинской генетике.-Москва: Медицина.-1978.-С.10-36.

306. Местиашвили И.Г., Нацвлишвили В.М. Гемоглобинопатии в Грузинской ССР//1 Всесоюзный съезд гематологов и трансфузиологов.-Баку.-1979.-тезисы.-С.211-213.

307. Kantchev K.N., Tcholakov B.N., Casey R., Lehmann H.,

308. Hazmi M. E. Twelve families with Hb 0 Arab in the Burgas district of Bulgaria//Humangenetic.-1975.-V.26.-P.93-97.

309. Penev M.N., Panova D.Y., Ivanov B.N. Three cases of hemoglobin 0 Arab//Folia Haematol.-1977.-V.104.-P.271-276.

310. Цонева M., Тончева Д., Маврудиева M., Рашков Р.Г., Томалева 3., Донов М. Популяционно-генетические данные о распространенности гемоглобинопатий в некоторых округах Болгарии//Современная медицина (БНР).-1978.-Т.7.-С.13.

311. Чолаков В., Нейчев П. Распространение гемоглобинопатии О среди школьников Бургаского округа//ПедиатрияСБолгария).-1982.-Т.2.-С.167.

312. Адамовская И.И., Идельсон Л.И., Матрагун С., Леманн Г. Гемоглобин О Араб р-талассемия у болгарина, жителя Одессы// Пробл.гематол.перелив.крови.-1978.- 11.-С.51-53.

313. Spivak V.A., Lutsenko I.N., Aseeva Е.А. A new approach to structural identification of abnormal human hemoglobins//Proc.of the 2 ICBS. -Keszthely (Hungary).-1988.-P.79-88.

314. WajcmanH., BelkhodjaO., Labie D. Hb Setif: Gl(94)Asp—> ? Tyr. A newol-chain hemoglobin variant with substitution of theresidue involved in a hydrogen bond between unlike subunits// FEBS Lett.-1972.-V.27.-P.298-300.

315. Nozari G., Rahbar S., Darbre P., Lehmann H. Hemoglobin Setif (oc94Asp—>Tyr) in Iran. A report of 9 cases//Hemoglobin. -1977.-V.l.-P.292-298.

316. Wilkinson T. Hemoglobinopathies in Australia and New Zealand//Hemoglobin.-1981.-V.5.-P. 525-530.

317. IdelsonL.I., Didkovsky N. A., Casey R., LorkinP.A., Lehmann H. Structure and function of Hb Tacomap30Arg—>Ser, found in a second family//Acta Haematol.-1974.-V.52.-P.2-6.

318. Brimhall В., Jones R.T., Baur E.W., Motulsky A.C. Structural characterization of hemoglobin Tacoma//Biochemistry.-1969.-V.8.-P.2125-2129.

319. Deacon-Smith R.A., Lee-Potter J.P. An unstable haemoglobin. Hb TacomajJ30CB12)Arg-->Ser, detected at birth by the demonstration of red cell inclusions//J.Clin.Path.-1978.-V.31.-P.883-886.

320. Спивак В. А. Молекулярная диагностика и изучение свойств аномальных гемоглобинов человека//1 Всесоюзный съезд мед.генетиков. -Киев.-1984.-тезисы. -С. 318.

321. Спивак В.А., Молчанова Т.П., Асеева Е.А., Луценко И.Н., Постников Ю. В. Молекулярная диагностика и изучение свойств аномальных гемоглобинов//2 Всесоюзный съезд гематологов и транс-фузиологов.-Львов.-1985. тезисы.-С.357-358.

322. Brimhall В., Jones R.T., Baur E.W., Motulsky A.C. Structural characterization of hemoglobin Tacoma//Biochemistry.-1969.-V.8.-P.2125-2129.

323. Pulsinelli P.D., Perutz M.F., Nagel R.L. Structure of hemoglobin M Boston, a variant with a five coordinated ferric heme//Ргoc.Nat1.Acad.Sc i.USA.-1973.-V.70.-P.3870-3874.

324. MullerC.J., Kingma S. Haemoglobin -Zurich 63Arg//Biochim. Biophys.Acta.-1961.-V.50.-P.595.

325. Bird G.W.G., Lehmann H. Hb D in India//Brit. Med. J. -^бб.-УЛ.-Р.б^.

326. Deliyannis G.A., Ballas A., Christakis J. Haemoglobin D in Greek family//Acta Haematol.-1969.-V. 41.-P.121-125.

327. Ungar В., Symons H.S., Anderson G.R., Stubbs A.E.,

328. Wiltshire B.G., Lehmann H. Hemoglobin D Punjab in an European family in Australia//Med.J.Austral.-1973.-V.l.-P.354-356.

329. Vella F., Lehmann H. Haemoglobin D Punjab CD Los Angeles)// J.Med.Genet.-1974.-Y.il.-P.341-348.

330. Baiget M., del Rio E., Gimferrer E. Hemoglobin D Punjab in a Spanish family//Hemoglobin.-1982.-V.6.-P.193-198.

331. Efremov G.D., Sadikario A., Stoyancov A., Dojcinov D., Huisman T.H.J. Homozygous hemoglobin 0 Arab in a Gypsy family in Yugoslavia//Hemoglobin.-1977.-V.1.-P.389-394.

332. Altay C.A., Gurgey A., Huisman T.H.J. Homozygosity for hemoglobin 0 Arab//Turk.J.Pediatr.-1986.-V.28.-P.67-72.

333. Politis-Tsegos C., Kynoch P., Lang A., Lehmann H., Lorkin P.A., Stamathoupoulous R., Wakefield G. Homozygous haemoglobin

334. D Punjab//J.Med.Genet.-1975.-V. 12.- P.269-374.

335. Bellingham A.J., Huehns E.R. Compensation in haemolytic anemia caused by abnormal hemoglobins//Nature.-1968.-V.218.1. P.924-926.

336. Ringelhann В., Lewis R.A., Lorkin P.A., Kynoch P.A., Lehmann H. Sickle cell haemoglobin D Punjab disease: S from Ghana and D from England//Acta haematol.-1967.-V.38.-P.324-331.

337. Milner P. F., Miller C., Grey R., Seakins M., Dejong W.W., Went L.N. Hemoglobin 0 Arab in four Negro families and its interaction with hemoglobin S and hemoglobin C//N.Engl. J.Med.-1970. -V.283.-P.1417-1425.

338. Gilman P.A., Abel A.S. Acute splenic sequestration in hemoglobin sickle-0 Arab disease//Johns Hopkins Med.J.-1980.-V.146.-P.285-288.

339. Haji F., Chadle A., Fattoum S., Souilem J., Hassine L. Double heterozygotie Hb 0 Arab/j2>-thalassemie chez un enfant tunis ien//Arch.Inst.Pasteur.Tunis.-1986.-V.62.-P.341-353.

340. Идельсон Л.И. Гипохромные анемии.-Москва: Медицина.-1981.-С.177.

341. Westhof Е., Altschuh D., Moras D., Bloomer А.С., Mondragon A., Klug A., Van Regenmortel//Correlation between segmental mobility and the location of antigenic determinants in proteins// Nature.-1984.-V.311.-P.123-126.

342. Спивак В.А. Полиморфизм гемоглобина человека//6 Всесоюзный симп."Молекулярные механизмы генетических процессов".-Москва.-1987.-тезисы.-С.99.

343. Petschow D., Wurdinger I., Baumann R., Duhm J., Braunitzer Q G., Bauer C. Causes of high blood 0Zaffinity of animals living athigh altitude//J:Appl.Physiol.-1977.-V.42.-P.139-143. t 353. Braunitzer G., Schrank В., Stangl A., Bauer C., Phosphat/

344. Protein-Wechselwirkung und die Altmung des Lamas, des menschlichen Fotus und die des Pferdes//Hoppe-Seyler*s Z.Physiol.Chem.-1978.-B.359.-S.547-558.

345. Bauer C., Rollema H.S., Till H.W., Braunitzer G. Phosphate binding by llama and camel hemoglobin//J.Сотр.Physiol.-1980.-V.136.-P.67-70.

346. Samaja M., Veicsteinas A., Cerretelli P. Oxygen affinity ofblood in altitude Sherpas//J.Appl. Physiol.-1979.-V.47.-P.337-341.

347. Hebbel R.P., Eaton J.W., Kronenberg R.S., Zanjani E.D., Moore L.G., Berger E.M. Human llamas: adaptation to altitude in subjects with high hemoglobin oxygen affinity//J.Clin.Invest.-1978.-V.62.-P.593-600.

348. Gilbert W. Why genes in pieces?//Nature.-1978.-V.271.-P.501.

349. Gilbert W. Genes-in-pieces revisited//Science.-1985,-V.228.-P.823-824.

350. Sudhof Т.О., Goldstein J.L., Brown M.S., Russel D.W. The LDL receptor gene: a mosaic of exons shared with different proteins//Science.-1985.-V.228.-P.815-822.

351. Runnegar B. Derivation of the globin from type b cytochromes// J .Mol.Evol.-1984.-V.21.-P.33-41.

352. Птицын О.Б. Белок как отредактированный статистический сополимер//Мол,биол.-1984.-Т.18.-С.574-590.

353. Volkenstein М.V. Mutations and value of information// J.Theor.Biol.-1979.-V.80.-P.155-169.

354. Conrad M., Volkenstein M.V. Replaceability of amino acids and the self-facilitation of evolution//J.Theor.Biol.-1981.-V.92.-P.293-299.

355. Spivak V.A., Lutsenko I.N. Micropreparative electrophoresis of globin chains on cellulose acetate films in structural identification of abnormal human hemoglobins//Aanalyt.Biochem.-19BB.-V.171.-P.108-112.

356. Спивак В.А., Луценко И.Н., Асеева E.A. Новая стратегияструктурной идентификации аномальных гемоглобинов человека//Мол. генетика.-1988.- 8.-С.46-48.

357. Беленький Б.Г., ГанкинаЭ.С., КеверЕ.Е., КостюкИ.О., Саминский А.Е., Илларионова Н.Г. Высокоэффективная эксклюзионная микроколоночная хроматография белков и пептидов//Биоорг.химия.-1987.-Т.13.-С.894-897.

358. Guevara J., ChioccaE.A., Clayton F. С., von Eschenbach A.C., Edwards J.J. A simple method of eluting proteins from two-dimensional gels//Clin.Chem.-1982.-V.28.-P.756-758.

359. Stralfors P., Belfrage P. Electrophoretic elution of proteins from polyacrylamide gel si ices//Analyt.Biochem.-1983.-V.128.-P.7-10.

360. Christopherson R.I. Desalting protein solutions in a centrifuge column//Meth.Enzymol.-1983.-V.91.-P.278-281.

361. Helmerhorst E., Stokes G.B. Microcentrifuge desalting: a rapid, quantitative method for desalting small amounts of protein//Analyt.Biochem.-1980.-V.104.-P.130-135.

362. Stokke B.T., Mikkelsen A., Elgsaeter A. An electrophoretic device concentrating charged macromolecules to a predetermined final solution volume//Analyt.Biochem.-1985.-V.148.-P.527-532.

363. Rhodes D., Yphantis D.A. A small-volurre electrophoretic concentrator//Analyt.Biochem.-1981.-V.116.-P.379-382.

364. Mahuran D., Clerrents P., Carrella M., Strasberg P.M.

365. A high recovery method for concentrating microgram quantities of protein from large volumes of solution//Analyt.Biochem.-1983.-V.129.-P.513-516.

366. Hashizume S., Rashid M., Shoji M., Kuroda K. Electrophoretic extract ion-concentration of proteins from polyacrylamide gels under alkaline, neutral and acidic conditions//Electrophoresis.-1984.-V.5.-P.30-34.

367. Saul A., Don M. A rapid method of concentrating proteins in small volumes with high recovery using Sephadex G-25//Analyt. Biochem.-1984.-V.138.-P.451-453.о о*о

Информация о работе

Спивак, Владимир Абрамович
доктора биологических наук
Москва, 1989
ВАК 03.00.15

Диссертация

Генетическая гетерогенность аномальных гемоглобинов человека - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы