Функциональные особенности желчных кислот у рыб

Морозов, Дмитрий Николаевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Функциональные особенности желчных кислот у рыб
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Функциональные особенности желчных кислот у рыб"

На правахрукописи

МОРОЗОВ Дмитрий Николаевич

ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ЖЕЛЧНЫХ КИСЛОТ У РЫБ

Специальность 03.00.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Петрозаводск 2004

Работа выполнена в лаборатории экологической биохимии Института биологии Карельского научного центра Российской Академии Наук

Научный руководитель: доктор биологических наук

Высоцкая Римма Ульяновна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Шатуновский Михаил Ильич кандидат биологических наук, доцент Судакова Надежда Михайловна

Ведущая организация: Институт биологии внутренних вод

им. И.Д. Папанина РАН

Зашита состоится "13г января 2004 года в 14 часов на заседании диссертационного совета КМ 212.087.01 при Карельском государственном педагогическом университете по адресу: 185035, Республика Карелия, г. Петрозаводск, ул. Пушкинская, 17, ауд. 113 главного корпуса.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Карельского государственного педагогического университета.

Автореферат разослан декабря 2004 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета

Малкиель А.И.

Актуальность темы. Важнейшими компонентами живой материи являются липиды. В зависимости от выполняемых в организме функций их подразделяют на четыре группы: структурные (или мембранные), запасные, физиологически активные, метаболиты (Сидоров, 1983; Сидоров и др., 1994). К группе физиологически активных веществ липидной природы относятся производные холестерина. Это уникальное по биологической активности соединение поддерживает стабильность клеточных мембран и является предшественником в биосинтезе других стероидов (витаминов, кортикостероидов, половых гормонов, желчных кислот). Со стероидами связана регуляция таких жизненно важных биологических систем, как пищеварительная и репродуктивная.

Желчные кислоты, синтезируемые в печени позвоночных животных, определяют вклад в процесс пищевариения, осуществляя эмульгирование жиров, активацию липаз и других пищеварительных ферментов, способствуют всасыванию жирных кислот (Мосолов и др., 1971; Labourdenne et al., 1997; Pasqualini et al., 2000). Кроме указанной функции, обусловленной особенностями строения указанной молекулы - наличия гидрофобных и гидрофильных участков, они выполняют защитную функцию, проявляющуюся в трех формах - подавлении активности и роста микроорганизмов, детоксикации различных чужеродных веществ и стимуляции иммуногенеза (Ганиткевич, 1980; Ayala-Fierro et al., 1999; Itoh et al., 1999). Сообщается об участии этих соединений в глюконеогенезе, в процессе деления клетки (Sinai et al., 2001; De Fabiani et al., 2003), апоптозе (Benz et al'., 2000), синтезе аполипопротеинов (Kardassis et al., 2003). Имеется ряд работ, посвященных действию желчных кислот на лизосомы и лизосомальные ферменты (Попова и др., 1980, 1981; Высоцкая, Рипатти, 1988).

Изучены эволюционные и некоторые другие экологические аспекты вариабельности состава желчных кислот у животных (Haslewood, 1967; Рипатти, Сидоров, 1973; Рипатти, 1975, 1978; Попова и др., 1979, 1980, 1983; Сидоров и др., 1978, 1994; Сидоров, 1983; Зекина и др., 1987; Богдан и др., 2000). Известно широкое разнообразие и филогенетическая определенность желчных кислот (Рипатти, Сидоров, 1983). Основные исследования по вариабельности желчных кислот проведены на млекопитающих и человеке, что связано с медицинской стороной проблемы (Романенко, 1978; Ганиткевич, 1980). В то же время вопрос об особенностях функционирования этих биологически важных веществ у рыб - группы низших позвоночных животных, выделяющейся по видовому разнообразию и условиям обитания, отличающейся своеобразием физио-лого-биохимических адаптации на уровне липидов освящен в литературе

vüg. национальная I

¿чада*]

недостаточно (Сидоров и др., 1972,1977; Сидоров, 1983). Практически отсутствуют сведения об изменении желчнокислотного статуса у рыб в ходе онтогенеза, в зависимости от физиологического состояния.

Учитывая, что биосинтез желчных кислот и других стероидов, а также детоксикация различного рода ксенобиотиков протекает с участием ци-тохрома Р-450 (Арчаков, 1975,1983; Мишин, Ляхович, 1985; Shefer et al., 1968; Ahokas et al., 1976; Myant et al., 1977; Gonzalez, 1990; Rocha-e-Silva et al., 2001; Smirlis et al., 2001), несомненный интерес представляет изучение гидроксилазной активности этой монооксигеназной системы у рыб и ее сопоставление с соотношением желчных кислот в желчи в условиях техногенного загрязнения водоема. Это особенно важно в тех случаях, когда рыба используется в качестве тест-объекта при биоиндикации состояния водной среды (Кашулин и др., 1999).

Знания, полученные при детальном исследовании влияния различных факторов среды на показатели обмена липидов стероидного ряда важны для выяснения биохимических механизмов адаптации организмов к условиям существования, они помогут подойти к пониманию вопроса о степени разграничения функций сходным образом устроенных молекул по мере эволюционного совершенствования позвоночных животных, найдут применение при решении практических задач рыбоводства и биотестирования.

Цель и задачи работы. Основной целью настоящей работы являлась качественная и количественная оценка состава желчных кислот и некоторых ферментов их метаболизма у рыб при действии различных факторов окружающей среды.

Были поставлены следующие задачи:

определить качественный и количественный состав желчных кислот различных видов рыб;

изучить вариабельность желчных кислот под влиянием изменяющихся факторов среды (абиотических факторов: солености, закисленности и гумифицированности водоемов; биотических факторов: за-ражененность гельминтами; антропогенных факторов: действия разнообразных токсикантов; изменения состава пищи; возрастных особенностей);

изучить связь вариабельности желчных кислот с типом питания, физиологическим состоянием организма;

изучить активность некоторых ферментов, участвующих в метаболизме и функционировании желчных кислот.

Научная новизна работы. Оценка влияния ацидности, солености, зараженности гельминтами, комплексного загрязнения, возрастных особенностей,

половых различий на функциональные особенности желчнокислотного состава проводилось впервые. Показана зависимость гидроксилазной активности цитохрома Р-450, отдельные формы которого участвуют в метаболизме желчных кислот и ксенобиотиков, от изменения соотношения желчных кислот в желчи рыб при техногенном загрязнении. Продемонстрировано действие такого биотического фактора, как зараженность гельмитнами, на изменение соотношения желчных кислот в желчи хозяина. Таким образом, научная новизна работы состоит в установлении связи между действием факторов среды и функциональными особенностями желчных кислот, а также ферментов их метаболизма у представителей группы низших позвоночных животных (рыб). Высказано предположение о механизмах регуляции транспорта и биосинтеза желчных кислот при действии исследуемых факторов.

Практическая значимость работы. Работа является частью исследований, проводимых в лаборатории экологической биохимии Института биологии КарНЦ РАН в рамках основных направлений исследований Отделения биологических наук РАН (5.15, 5.21) и гранта Президента РФ «Ведущие научные школы» (НШ-894. 2003.4), ФЦП «Интеграция науки и высшего образования России на 2002-2006 годы». Найденные закономерности позволяют прояснить некоторые особенности метаболизма желчных кислот и использовать полученные результаты при разработке систем эколого-биохимического мониторинга водоемов и для оценки физиолого-биохимического состояния водных организмов. Материал используется при чтении курсов «Экологическая биохимия животных» и «Биохимия» для студентов ПетрГУ и КГПУ.

ресурсов», (Москва, 2004); международной научной конференции «Основные достижения и перспективы развития паразитологии» (Москва, 2004); международной конференции «Экологические проблемы северных регионов и пути их решения» (Апатиты, 2004); международной научной конференции: Инновации в науке и образовании - 2004, (Калининград, 2004); международной научной конференции «Современные проблемы физиологии и биохимии водных организмов» (Петрозаводск, 2004).

Благодарности. Автор выражает искреннюю благодарность сотрудникам лаборатории экологической биохимии Института биологии КарНЦ РАН (особенно вед. биол. Зекиной Л.М., вед.н.с, к.б.н. Рипатти П.О.), сотрудникам института эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова за предоставленную возможность прохождения стажировки (д.б.н, Хованских А.Е., к.б.н. Кормилицыну Б.Н.), сотрудникам института промышленной экологии Севера за сотрудничество (д.б.н. Ка-шулину Н.А, к.б.н. Королевой И.М.). Признателен всем сотрудникам лаборатории экологической биохимии института биологии КарНЦ РАН за постоянную поддержку. Автор от всей души признателен научному руководителю д.б.н. Р.У. Высоцкой за всестороннюю помощь, ценные советы и рекомендации. Благодарю всех сотрудников лаборатории экологической биохимии за постоянную поддержку.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 16 печатных работ, в том числе 3 статьи и 13 тезисов докладов.

Структура и объем работы. Диссертационная работа изложена на 173 страницах машинописного текста, содержит 13 таблиц и 40 рисунков и состоит из введения, обзора литературы, методической части, пяти глав результатов исследования, заключения, выводов. Список цитируемой литературы включает 332 наименования, из них 232 на иностранном языке.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

В обзоре литературы рассмотрены общие представления о строении, функциях желчных кислот позвоночных животных, в том числе рыб. Отражены современные представления о путях биосинтеза желчных кислот и ферментов их метаболизма. Делается акцент на значимости в превращении желчных солей и ксенобиотиков различных форм цитохрома Р-450, важной неспецифической монооксигеназы. Обобщены уже имеющиеся в литературе данные об особенностях действия различных факторов окружающей среды на биосинтез желчных кислот и обмен липидов рыб.

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

В качестве объектов исследования были использованы 6 видов рыб: навага Eleginus navaga, окунь Perca fluviatilis L., колюшка трехиглая Gasterosteus aculeatus, сиг Coregonus lavaretus L., ряпушка Coregonus albula L., радужная форель Parasalmomykiss Walb.

Желчь, собранную от свежей рыбы, фиксировали 7-кратным объемом 96° этанола. Для выделения и анализа желчных кислот использовали метод количественного определения состава желчных кислот, разработанный в лаборатории экологической биохимии института биологии КарНЦ РАН П.О. Рипатти и сотр. (Рипатти и др, 1969) для смеси холевой, дезок-сихолевой, хенодезоксихолевой и литохолевой кислот, которые являются основными желчными кислотами, встречающимися в желчи человека и животных, в том числе у рыб.

Качественное определение состава желчных кислот проводили методом одномерной тонкослойной хроматографии на стандартных пластинах «Silufol» («Kavalier», ЧССР) в системе растворителей: изооктан - этилаце-тат - уксусная кислота - бутанол (60:30: 9:9) (Рипатти, 1975). Проявление пятен желчных кислот осуществляли с помощью регентов, содержащих хлорное железо FeClj • 6Н2О (Lowry, 1968).

Для метода газожидкостной хроматографии использовали осадок, полученный после выделения свободных желчных кислот. Пробы анализировали в виде метиловых эфиров диазометана на хроматографе Chrom-5 на насадочных стеклянных колонках диаметром 3 мм и длиной 2,4 м с заполненной 5 % фазой OV-17 на хромосорбе WAW 70-80 меш. Скорость потока газо-носителя (гелия) составляла 40-80 мл/мин. Температура колонок равнялась 270 °С. Идентификацию желчных кислот проводили с помощью метчиков и литературных данных по Rf относительно холевой кислоты (Зекина и др., 1987).

Холестерин определяли по методу Илька по реакции с окрашивающим реагентом (Сидоров и др., 1972).

Для оценки гидроксилазной активности микросомального цитохрома Р-450 использовали метод, основанный на способности фермента гидроксилировать субстрат в присутствии кофактора NADPH (Mazel, 1972). В качестве субстрата использовали анилин, который в ходе реакции превращается в парааминофенол и образует устойчивый комплекс с максимумом поглощения при длине волны 630 - 640 нм.

Статистическая обработка всех результатов работы проводилась общепринятым способом (Кокунин, 1975). Достоверность различий между сравниваемыми группами оценивали по непараметрическому критерию

U Уилкоксона-Манна-Уитни (Гублер, Генкин, 1969). Различия считали достоверными при р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Глава 3. СРАВНЕНИЕ ЖЕЛЧНОКИСЛОТНОГО СОСТАВА У

РАЗНЫХ ВИДОВ РЫБ При сопоставлении значений холатных показателей (отношения концентрации холевой кислоты к общей концентрации желчных кислот в желчи, выраженной в процентах) шести исследуемых рыб (окунь Река fluviatilis, колюшка трехиглая Gasterosteus aculeatus, ряпушка европейская Coregonus albula, навага Eleginus navaga, сиг малотычинковый Coregonus lavaretus L, радужная форель Parasalmo mykiss Walb.) наблюдается видоспецифичность состава желчных кислот (рис. 1).

Рис. 1. Холатные показатели желчи разных видов рыб.

1- окунь Река АитОШ, п=11;

2-колюшка Gasterosteus аси1еа-Ы5, п=5; 3- ряпушка Coregonus а1Ьи1а, п=6; 4- навага Ек^нш navaga, п=10, 5- сиг Со^онш ¡таМш Ь, п=10; 6- форель Parasalmo туШяя Жа№., п=4.

Из литературных данных известно, что чем более разнообразны кормовые объекты, тем ниже холатный показатель и больше его коэффициент вариабельности (Рипатти и др., 1977). Это может быть объяснено возрастающими возможностями выбора предпочитаемых кормовых объектов, то есть потреблению меньшего числа видов (Ивлев, 1955). Данная точка зрения подтверждается полученными нами результатами по высокому разбросу холат-ного показателя желчи наваги, являющейся эврифагом. Аналогичным образом с разнообразием кормовых объектов в пище сига следует связать понижение доли холевой кислоты по сравнению с другими видами.

Заметное понижение величины холатного показателя по сравнению с полученными ранее данными (87,4+1,9%, Рипатти, 1974) выявлено у ряпушки из оз. Сямозеро, что может быть обусловлено изменениями в структуре популяции рыбы произошедшими к настоящему времени. Конкурентные взаимоотношения с другими видами с неизбежностью сказываются на интенсивности биосинтеза желчных кислот. Более подробно механизм этого взаимодействия будет рассмотрен ниже.

Высокий холатный показатель отмечен в желчи колюшки трехиглой, являющейся хищником, для которой характерно высокое процентрное содержание холевой кислоты (Рипатти, 1975,1978).

При сравнении холатного показателя радужной форели и колюшки трехиглой выявляются близкие процентные соотношения холевой кислоты. Это свидетельствует о том, что в корме радужной форели, выращенной в искусственных условиях, преобладают белковые и липидные компоненты.

Таким образом, согласно проведенному сопоставлению величин холатных показателей, подтверждается влияние характера питания и состава пищи на желчнокислотный состав желчи рыб.

Глава 4. ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ЖЕЛЧНЫХ КИСЛОТ РЫБ ПРИ ДЕЙСТВИИ РАЗЛИЧНЫХ ФАКТОРОВ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ 4.1 Функциональные особенности желчных кислот при действии

абиотических факторов А) Влияние солености воды на желчнокислотный состав желчирыб Объектом исследования была навага Eleginus navaga, отловленная из различных акваторий Белого моря, характеризующихся неодинаковым уровнем солености.

У наваги из открытого моря, желчнокислотный состав характеризовался низкой концентрацией как холевой, так и хенодезоксихолевой кислот как у самок, так и самцов. В дельте реки Кемь наблюдались более низкие значения этих величин. При сравнении по половому признаку получены достоверные различия между самцами из разных зон (рис. 2).

Выявленные различия в соотношении желчных кислот (холевой к хе-нодезоксихолевой) можно объяснить влиянием солености непосредственно на состав желчных кислот или опосредовано через кормовую базу.

При исследовании методом газожидкостной хроматографии желчи наваги были обнаружены в следовых количествах литохолевая и дезоксихолевая кислоты (рис.3), что говорит о достаточно высоком разнообразии желчнокислотного состава желчи наваги и преобладании холевой и хенодезоксихолевой кислот в желчи.

Рис. 2. Соотношение желчных кислот желчи наваги из разных зон вылова.

Условные обозначения: 1- самцы, открытое море, п=5; 2- самки, открытое море, п=5; 3- самцы, устье реки Кемь, п=5; 4- самки, устье реки Кемь, п=6. Схк (мг/мл) - концентрация холе-вой кислоты в мг/мл; Схдхк (мг/мл) -концентрация хенодезоксихолевой кислоты в мг/мл; Собщ (мг/мл) - общая концентрация желчных кислот в желчи в мг/мл.

Рис. 3. Данные газожидкостной хроматографии желчи наваги.

Условные обозначения: 1- устье реки Кемь (п=7); 2- Открытое море (п=10). XC- холестерин; ЛХК - литохолевая кислота; ДХК - дезоксихолевая кислота; ХДХК - хенодезоксихолевая кислота; ХК - холевая кислота

Резкие изменения уровня солености в дельте реки Кемь существенным образом сказываются на видовом составе пищевых объектов исследуемого вида рыбы, что может привести к существенному сдвигу многих биохимических показателей, в том числе и желчных кислот.

В гипоосмотических условиях у морских организмов снижение концентрации аминокислот приводит к изменению пищевого поведения - активному поиску пищи для компенсации недостатка азотсодержащих соединений (Хле-бович, 1981). При интенсивном питании концентрация аминокислот в крови растет, что способствует ингибированию котранспорта желчных кислот в мембране клеток печени поступающими с кровью аминокислотами. Это

приводит к уменьшению накопления их в желчи. Так, хенодезоксихолевая кислота в желчи самцов из устья реки Кемь присутствует в следовых количествах; мало ее и в желчи самок из этой же акватории. Наблюдается уменьшение содержания в желчи холевой кислоты по сравнению с содержанием ее в желчи наваги из открытого моря.

Таким образом, показано, что с уменьшением солености содержание холевой кислоты в желчи наваги падает. Резко уменьшается содержание хенодезоксихолевой кислоты у самцов, что говорит о большей чувствительности этого пола к воздействию пониженной солености. Это свидетельствует о значительном действии в основном на регуляторную и пищеварительную функции желчи, так как уменьшение концентрации желчных кислот, несомненно, скажется на свойствах желчи. Изменения желчнокислотного состава можно рассматривать как биохимическую адаптацию наваги к изменению солености.

Б) Влияниезакисленности водоемов на желчнокислотны й состав желчирыб

Для изучения действия рН (кислотности) водоема на желчнокислотный состав желчи рыб исследовалось изменение состава желчи окуня PercafluviatШs Ь, связанного с ацидификацией озер. Выбор тест-объекта был не случаен. Известно, что при закислении водоемов этот вид исчезает последним, продолжая существовать в озерах, рН которых падает в весенний период до уровня 4.0 (Комов, 1994). Рыбу отлавливали из водоемов отличающихся по трофности, гумификации и значении рН. Оз. Вуонтеленъярви является олиготрофоным, полигумозным, с величиной рН воды, равной 5,2; оз. Уросозеро - олиготроф-ное, ультраолигогумозное, рН 6,4; Кудомская губа оз. Сямозера - мезотрофное, олигогумозное, рН 7,0 - 7,2. Онежское озеро, Петрозаводская губа характеризуется как мезотрофное, олигогумозное, рН 7,0 - 7,2.

Данные исследований выявили, что наиболее высокая конецнтрация холевой кислоты обнаружена в пузырной желчи окуней из оз. Вуонтеленъярви - 83,17% (процент от общей концентрации желчных кислот), из оз. Уросозеро оно составляло 66,34%, из Кудомской губы оз. Сямозера -57,15%, а из Петрозаводской губы Онежского озера - 57,99% (рис. 4).

Указанные значения рН и трофности водоемов Онежского озера, оз. Сямозеро, оз. Уросозеро, отличные от озера Вуонтенъярви, свидетельствуют о том, что окунь в этих озерах не испытывает значительного действия исследуемого фактора (закисленности). Относительно низкие значения холатных показателей могут быть обусловлены более интенсивным питанием по сравнению с озером Вуонтеленъярви. Следует отметить, что соотношение концентраций желчных кислот значительно изменяется именно в желчи окуней из оз. Вуонтеленъярви, интенсивнее

накапливается холевая кислота, хотя хенодезоксихолевая остается на том же уровне, что и во всех других озерах (рис. 4).

12 3 4 Группы

Рис. 4. Соотношение желчных кислот в желчи окуня из разных водоемов.

Условные обозначения: 1- оз. Онежское (Петрозаводская губа), п=4; 2- оз. Сямозеро (Кудомская губа), п=3; 3- оз. Вуонтеленъярви, п=5; 4- оз. Уросозеро, п=4. Схк (мг/мл) - концентрация холевой кислоты; Схдхк (мг/мл) - концентрация хенодезоксихолевой кислоты; Собщ (мг/мл) - общая концентрация желчных кислот в желчи.

По полученным данным можно предположить, что в озере с сильным за-кислением воды рыба голодала. Содержание холестерина было наибольшим в желчи окуней из оз. Вуонтеленъярви (табл.1).

Таблица 1

Влияние закисленности водоемов на содержание холестерина в желчи окуня

_Perca fluviatilis L._

Группы Схс(мг/мл) М±т

оз, Онежское (Петрозаводская губа), п=5 0,979+0,12214

оз. Сямозеро (Кудомская губа), п=3 0,191+0,00033

оз. Вуонтеленъярви, п=6 2,826+0,48851

оз. Уросозеро, п=5 0,380+0,06008

Условные обозначения к таблице: Схс(мг/мл) - концентрация холестерина в мг/мл. Достоверны различия между всеми группами при р<0,05, кроме между рыбами из оз. Сямозеро и из оз. Уросозеро.

Согласно данным литературы, ацидификация водоема оказывает негативное влияние на рыб (Виноградов и др., 1994; Матей и др., 1994). Кроме того, многочисленными исследователями обнаружено (Wood, McDonald, 1987; Dietrich, Schlatter, 1989; Stripp et al., 1990; Suns, Hitchin, 1990), что понижение рН повышает токсичность тяжелых металлов, в том числе за счет процессов метилирования ртути (Кузубова и др., 1989; Ко-маровский, 1981; Патин, Морозов, 1981; Мур, Рамамурти, 1987).

Таким образом, при учете характеристик оз. Вуонтеленъярви в данном эксперименте наблюдается воздействие на окуня одновременно трех факторов: низкого рН, загрязнения ртутью и высокого содержания гуминовых кислот. Немаловажной особенностью озер, подвергающихся ацидификации является то, что они слабо минерализованы. Данные факторы значительно влияют на пищеварительную функции желчи. Вполне возможно, что это приводит за счет накопления холевой кислоты к повышению детергирующих способностей желчи и, следовательно, лучшему усвоению пищи в данных неблагоприятных условиях (бедность кормовой базы, повышенная закисленность). Накопление в желчи холевой кислоты и холестерина может быть обусловлено тем, что проницаемость мембран клеток печени к протонам водорода и тяжелым металлам увеличивается, что приводит к изменению липидного состава мембран (Богдан и др., 2002). Это способствует увеличению скорости котранспорта желчных кислот особенно транспортируется холевая кислота, что и приводит к большему накоплению ее в желчи.

4.2 Функциональные особенности желчных кислот при действии биотических факторов (на примере взаимоотношений паразит-хозяин)

Нами изучены изменения содержания желчных кислот и холестерина в желчи у самцов и самок рыб при заражении цестодой Schistocephalus solidus. Объектом изучения воздействия этого биотического фактора была избрана колюшка трехиглая Gasterosteus aculeatus, являющаяся промежуточным хозяином S. solidus (окончательный хозяин паразита - птицы). Рыбу отлавливали в р. Лососинка методом электролова и до анализа содержали две недели в аквариумах без питания.

При сравнении групп рыб по половому признаку отмечено, что у незараженных самок содержание холевой кислоты выше на 40, 3%, чем у зараженных, а между зараженными и незараженными самцами явного отличия по этому показателю нет. Содержание холестерина в группе незараженных рыб почти втрое выше у самцов, у зараженных - обратная ситуация, у самок в три раза холестерин выше, чем у самцов, (рис. 5)

Рис. 5. Содержание холестерина в желчи колюшки трех-иглой зараженной и незара-женной.

Условные обозначения: 1 - самки зараженные; 2- самки незаряженные; 3- самцы зараженные; 4- самцы незараженные; * - есть достоверные отличия от незара-женных самок, р<0,05; **- есть достоверные отличия от незара-женных самцов, р<0,05; *** -есть достоверные отличия от зараженных самцов, р<0,05.

Холестерин и стероидные гормоны, обнаруженные ранее в тканях паразитических червей (Высоцкая, Сидоров, 1973; Шишова-Касаточкина, Леутская, 1979)используются гельминтами для превращения их в нужные ему стероидные соединения.

Таким образом, в результате проведенных исследований показано, что заражение колюшки трехиглой цестодой Sch solidus вызывает значительные количественные изменения желчнокислотного состава и холестерина в желчи рыбы. Эти изменения по холатному показателю сильнее выражены у самок, чем у самцов (у зараженных самок концентрация хе-нодезоксихолата увеличивается 28 раз по сравнению с незараженными, а у зараженных самцов в 10 раз) (рис. 6).

Рис 6. Соотношение желчных кислот в желчи зараженной и неза-раженной колюшки трехиглой.

Условные обозначения: 1 - самки зараженные; 2- самки незараженные; 3- самцы зараженные; 4- самцы незараженные. Схк (мг/мл) - концентрация холевой кислоты; Схдхк (мг/мл) - концентрация хенодезоксихолевой кислоты; Собщ (мг/мл) - общая концентрация желчных кислот в желчи.

Наблюдаемое нами у самок повышение концентрации хенодезоксихолата можно связать с улучшением защитных свойств желчных солей. Это способствует лучшему приспособлению этого пола к неблагоприятным условиям и мобилизации резервов организма. По содержанию холестерина значительные различия величин исследуемых биохимических показателей наблюдаются как у самок, так и у самцов. При этом наблюдается инверсия по содержанию данного стероида. Вероятно, причиной обнаруженных изменений являются своеобразная утилизация липидов стероидного ряда паразитом. 4.3 Функциональные особенности желчных кислот рыб при действии антропогенных факторов.

А) Функциональные особенности желчных кислот рыб при техногенном загрязнении водоемов на примере сига Coregonus lavaretus L

В качестве объекта исследования был взят сиг Coregonus lavaretus Ь. из двух различных водоемов: озера Ковдор, загрязняемого стоками горно-обогатительного комбината и озера Нижняя Пиренга, не испытывающего значительной антропогенной нагрузки (условно чистый район). Следует отметить, что в загрязненном водоеме в состав стоков могут входить не только тяжелые металлы, но и органические соединения. Сравнивали реакцию на комплексное загрязнение у самок и самцов. Рыбу брали в осенне-зимний период, что соответствовало началу нереста данного вида и изменению температурного режима водоемов (похолодание).

Обнаружено, что желчнокислотные профили сигов из разных озер не совпадали: у самцов из озера Ковдор наблюдалось преобладание триок-сихолановых кислот, а у самок - диоксихолановых. В составе желчных кислот желчи рыб из условно чистого водоема не было отмечено значительных различий между самками и самцами (Рис. 7).

Рис 7. Соотношение желчных кислот в желчи сигов из разных водоемов.

Условные обозначения: 1-самки, Ковдор, п=3; 2- самцы, оз. Ковдор, п=6; 3- самки, оз. Нижняя Пиренга, п=5; 4- самцы, оз. Нижняя Пиренга, п=5. Схк (мг/мл) - концентрация холевой кислоты; Схдхк (мг/мл) - концентрация хенодсзоксихолевой кислоты; Собщ (мг/мл) -общая концентрация желчных кислот в желчи.

Проведенная нами тонкослойная хроматография желчи сига выявила наличие холевой кислоты и, судя по распределению, хенодезоксихолевой (Рис.8).

Рис. 8. Тонкослойная хроматография желчи сига.

Условные обозначения 1- оз Ковдор, самцы, 2- Оз Ковдор, самки, 3- Оз Нижняя Пиренга, самцы, 4- оз Нижняя Пиренга, самки, 5- смесь метчиков (хо-левая кислота, дезоксихолевая кислота, литохолевая кислота, холестерин)

Возникающие различия по желчнокислотному составу между самками и самцами в оз. Ковдор (загрязненной акватории) свидетельствуют о неодинаковой чувствительности представителей разных полов к комплексному загрязнению: самцы сохраняют почти неизменным желчнокислотный состав, в то время как самки значительно уменьшают содержание триоксихолановых желчных кислот, доля хенодезоксихолевой кислоты растет.

В данных условиях адаптация организма к действию комплексного загрязнения привела к изменению соотношения желчных кислот в желчи, что, вполне возможно, связано еще и с детоксикационной ролью желчи - способностью связывать тяжелые металлы и выводить их в виде солей. Для увеличения способности к связыванию с органическими молекулами загрязнителей (молекулярные силы взаимодействия) должно увеличиваться содержание более гидрофобных желчных кислот - в данном случае - хенодезокси-холевой, что и наблюдается у самок из оз. Ковдор. У самцов этот механизм детоксикации не реализован должным образом, что может быть связано с изменением активности ферментов биосинтеза желчных кислот. Возможно, здесь имеет место конкуренция субстратов (ксенобиотиков - органических соединений и эндобиотиков - предшественников желчных кислот) с рецепторами связывания этих видов стероидов. Очевидно, наблюдается отличная

от самок степень сродства ксенобиотиков, что и подтверждается данными литературы (Danzo et al.,1997; Guo et al., 2003). В итоге падает концентрация желчных кислот в желчи самцов. Вместе с тем, до конца сама картина остается неясной, так как не понятно, как при этом процессе ведет себя фермент, участвующий как в метаболизме желчных кислот, так и в метаболизме ксенобиотиков ( монооксигеназа цитохром Р-450). Поэтому возникает необходимость определить гидроксилазную активность этого фермента.

Таким образом, становится очевидным, что комплексное загрязнение (тяжелые металлы, органические соединения) приводит к проявлению неодинаковой чувствительности самок и самцов к данному виду воздействия. Самцы более чувствительны, в их желчи происходит менее активное накопление солей и комплексов (результатов молекулярного взаимодействия) и имеет место конкуренция ксенобиотиков за места связывания со стероидным ядерным рецептором, то есть, в основном изменяется защитная функция желчи.

Б) Функциональные особенности желчных кислот рыб при техногенном загрязнении водоемов на примере европейской ряпушки Coregonus albula (L)

Для сравнения действия комплексного фактора (загрязнения тяжелыми металлами и органическими соединениями на представителей разных видов рыб) была проанализирована европейская ряпушка Coregonus albula (L.)., выловленная одновременно с сигом из того же водоема.. За условно чистый район была принята ряпушка из оз. Сямозеро (республика Карелия).

Получены различия между исследуемыми группами самок и самцов из оз. Сямозеро. Это можно объяснить их разной интенсивностью питания. Вместе с тем, комплексное загрязнение приводит к значительному повышению концентрации холевой кислоты у самок и у самцов (рис. 9),

что может быть связано с действием данных загрязнителей не только на кормовую базу, но и непосредственно на биосинтез желчных кислот.

Рис. 9. Соотношение желчных кислот в желчи ряпушки Coregonus albula (к) из разных по загрязненности техногенными водами водоемами.

Условные обозначения- 1-оз Сямозеро, самцы, п=4,2- оз Сямозеро, самки, п=3; 3- оз. Ковдор, самцы, п=4,4- оз Ковдор, самки, п=4.

В данном исследовании реакция на комплексное загрязнение у самок и самцов схожая. Отсутствие выраженности реакции на этот вид загрязнения может быть связано с реализацией ряда защитных механизмов, приводящих к стабилизации значений желчных кислот, оставляя синтез хенодезоксихолевой кислоты и холевой кислоты на высоком уровне.

Однако при подобного рода сравнении необходимо учитывать тот факт, что в сравниваемой группе (контроль) наблюдается низкое процентное содержание холевой кислоты, по сравнению с предшествующими годами (Рипатти, 1974). Аномально низкие концентрации желчных кислот в желчи ряпушки из оз. Сямозеро могут быть следствием воздействия ряда факторов. Это разнообразные кормовые объекты, а также наличие и присутствие чужеродных метаболитов рыб, вступающих в конкурентные взаимоотношения. Последние приводят в ингибированию синтеза желчных кислот, выступая здесь в роли ксенобиотиков.

Сопоставление концентраций желчных кислот в желчи ряпушки из разных мест обитания показало, насколько сильно могут влиять различные факторы на исследуемые биохимические параметры. Исследованное соотношение желчных кислот в желчи рыб из оз. Ковдор является оптимальным для проявления защитных свойств желчи. Однако отсутствие достоверных различий по процентной доле холевой кислоты в желчи между самками и самцами из этой зоны позволяют утверждать, что чувствительность к данному загрязнению обоих полов одинаковая.

В) Сопоставление холатных показателей желчи европейской ряпушки Coregonus albula L и сига Coregonus lavaretus L из одного водоема.

Дня оценки действия комплексного загрязнения на соотношение желчных кислот в желчи различных видов рыб были сопоставлены желчнокислотные профили желчи сига Coregonus lavaretus Ь. и европейской ряпушки Coregonus albula Ь из одного исследуемого водоема (оз. Ковдор). Обнаружены

значительные различия в соотношении желчных кислот между самками и самцами (Рис. 10).

Рис 10. Соотношение желчных кислот желчи сига и ряпушки из оз. Ковдор.

Условные обозначения: 1- самцы, ряпушка, п= 4; 2-самки, ряпушка, п= 4; 3-самцы, сиг, п= 6; 4-самки, сиг, п= 3.

Различия по содержанию холевой и хенодезоксихолевой кислот связаны с разной степенью сродства к ядерным рецепторам ксенобиотиков у сига и ряпушки при конкуренции их за места связывания с предшественниками желчных кислот. Вероятно, что здесь также различаются и детоксикационные свойства желчи, то есть данный фактор неодинаково воздействует на защитные свойства желчи разных видов. Обнаруженное соотношение желчных кислот в желчи исследуемого вида в данных условиях является оптимальным и позволяет говорить о лучшей приспособленности ряпушки, чем сига.

Глава 5. ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ЖЕЛЧНЫХ КИСЛОТ РЫБ РАЗНЫХ ВОЗРАСТНЫХ ГРУПП

Для изучения возрастных изменений желчнокислотного состава и их функций исследовалась ряпушка Coregonus albula (Ь.) из оз. Сямозеро. Использовались сеголетки и двухлетки. Обнаружены значительные изменения в соотношении желчных кислот как между самками и самцами, так и между группами разного возраста (рис. 11).

Рис. 11. Соотношение желчных кислот в желчи ряпушки Coregonus al-bula разного возраста из оз. Сямозеро Условные обозначения:

1- самки, сеголетки, п=7;

2- самцы, сеголетки, п~4;

3- самки-двухгодовики, п=3; 4-самцы-двухгодовики, п=3.

Наблюдаемые изменения желчнокислотного состава в желчи между сеголетками и двухлетками может быть связано с разной интенсивностью питания и с тем, что данная популяция приспосабливается к новым условиям среды обитания, то есть, неодинаковыми адаптационными возможностями организмов разного возраста и пола.

Следует отметить, что у самок двухгодовиков наблюдается более значительное понижение процентного содержания холевой кислоты

(холатного показателя), чем у самцов того же возраста, что может быть обусловлено более интенсивным питанием первых в связи с подготовкой к репродуктивному периоду. Этот сдвиг в соотношении желчных кислот может привести к изменению детергирующих способностей желчи, что также может сказаться на интенсивности их питания.

Таким образом, при исследовании желчнокислотного состава желчи ряпушки разных возрастов обнаружено, что значительная перестройка обмена веществ на втором году жизни приводят к большему снижению холатного показателя, чем у самок и самцов первого года жизни. Происходит мобилизация ресурсов организма у самок второго года жизни и этот процесс проходит иначе, чем на первом году. Такие изменения желчнокислотного состава могут значительно влиять на пищеварительные и регуляторные свойства желчи.

Глава 6. ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ЖЕЛЧНЫХ

КИСЛОТ РЫБ ПРИ ИЗМЕНЕНИИ КОМПОНЕНТОВ ПИЩИ

Для изучения вариабельности желчных кислот и их функций в желчи при изменении состава пищи использовалась радужная форель Parasalmo mykiss Walb., выращенная в искусственных условиях. Сравнивалась форель одинакового возраста (один год) и пола (самки), выращенная в одном из форелевых хозяйств Карелии. В качестве контроля взята рыба, питающаяся искусственными кормовыми смесями, применяемыми в настоящее время в форелеводстве этого региона (корм финской фирмы КеЬшашо). Опытная партия отличалась добавлением жирорастворимых биологически активных веществ, способных улучшить обмен веществ и иммунитет рыб.

У рыб, выращиваемых с добавлением биологически активных добавок, наблюдались существенные изменения в составе желчных кислот желчи: уменьшалась доля холевой и хенодезоксихолевой кислот. Холатный показатель желчи рыб из контрольной группы составлял 74, 36%, достоверно отличаясь от ХП желчи рыб из опытной - 62,88% (табл. 2).

Таблица 2

Вариабельность желчнокислотного состава радужной форели Parasalmo

Группы Схк М±т Схдхк М+т Собщ М+т ХП%+т М+т

Контроль, п=4 6,76+0,19 2,47+0,15 9,23+0,05 73,22*1,73

Опыт, п=3 1,28+0,63 0,56+0,23 1,84+0,86 67,25+2,45

концентрация хенодезоксихолевой кислоты, мг/мл, Собщ - общая концентрация желчных кислот, мг/мл

Таким образом, причиной подобного различия между исследуемыми группами в составе желчных кислот являются, главным образом, пища и входящие в ее состав компоненты. Важно отметить, что снижается синтез холевой и хенодезоксихолевой кислот, что может свидетельствовать о конкуренции в ядерном рецепторе за места связывания этого вещества с предшественниками желчных кислот. В этом случае это вещество воспринимается и метаболизиру-ется организмом как ксенобиотик. Важно отметить, что здесь не наблюдается существенного увеличения концентрации хенодезоксихолевой кислоты, как это отмечено у самок сига при исследовании комплексного загрязнения. Это может быть связано с тем, что в данном случае это вещество не так токсично, быстрее и легче утилизируется печенью, не вызывает сильных нарушений обмена веществ. При этом происходят, в основном, изменения пищеварительной функции желчи, а не защитной, как в случае обычных загрязнителей, так как значительного дисбаланса в соотношении холевой и хенодезоксихолевой кислот не наблюдается, что может быть обусловлено малой токсичностью этих компонентов пищи.

Глава 7 ИЗУЧЕНИЕ ГИДРОКСИЛАЗНОИ АКТИВНОСТИ ЦИТОХРОМА Р-450 МИКРОСОМ ПЕЧЕНИ РЫБ ПРИ КОМПЛЕКСНОМ ЗАГРЯЗНЕНИИ

Для выяснения механизма изменения соотношения желчных кислот при действии комплексного загрязнения исследовалась гидроксилазная активность фермента цитохрома Р-450 из микросом печени сига Со^онш ¡таШш Ь. из водоемов: озера Ковдор, загрязняемого стоками горнообогатительного комбината и озера Нижняя Пиренга, не испытывающего значительной антропогенной нагрузки (условно чистый район).

Результаты исследований показали, что гидроксилазная активность у сигов из чистой и загрязненной зон была различной. У самок из оз. Ковдор активность составляла 0.00318 мкг парааминофенола /1г сырого веса ткани /мин., у самцов - практически не была выявлена. Напротив, в условно чистом водоеме (Нижняя Пиренга) у самок активность была очень низкой, а у самцов составляла 0.00075 мкг парааминофенола /1г сырого веса ткани /мин., что в 4 раза ниже, чем у самок из загрязненной акватории оз. Ковдор (табл. 3).

Таблица 3

Изучение гидроксилазной активности цитохрома Р-450 микросом печени

Группы Активность(мкг п-аминофенола/грамм/мин) М±т *

Самки, оз. Ковдор, п=5 0,00318+0,00084

Самцы, оз. Ковдор, п=3 0,0

Самки, оз. Нижняя Пиренга, п=3 0,0

Самцы, оз. Нижняя Пиренга, п=4 0,00075+0,00018

*- достоверны отличия между самками, оз. Ковдор и самцами, оз. Нижняя Пиренга, р<0,05.

Гидроксилазная активность цитохрома Р-450 у самок в загрязненной зоне была значительно выше, чем у самцов, то есть самцы и самки проявляли разную чувствительность к комплексному загрязнению. Отсутствие гидроксилазной активности у самцов из загрязненной зоны может быть обусловлено тем, что самцы более чувствительны к этому виду загрязнения во время нереста. Эта повышенная чувствительность приводит к подавлению гидроксилазной активности. Проявление активности цитохрома Р-450 у самцов из чистой зоны обусловлено особенностями созревания представителей сем. Лососевых: самцы в начале нереста созревают первыми, что, в свою очередь является следствием изменения стероидного обмена. В микросомах печени самок из оз. Нижняя Пиренга не выявляется активность цитохрома Р-450, что может свидетельствовать о благоприятной экологической обстановке по сравнению с озером Ковдор.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о неодинаковой чувствительности представителей разных полов к комплексному загрязнению.

ВЫВОДЫ

1. Сравнительное изучение состава желчных кислот желчи у рыб, относящихся к разным экологическим группам, показало, что процентное содержание холевой кислоты определяется типом питания и составом пищи.

2. У морских видов рыб в условиях пониженной солености снижался транспорт и биосинтез холевой и хенодезоксихолевой кислот, что влекло за собой изменение пищеварительной и регуляторной функций желчи.

3. Повышенная кислотность, гумифицированность, аккумуляция ртути в тканях, пониженная минерализация в пресноводных водоемах приводят к накоплению холевой кислоты и холестерина в желчи и изменению пищеварительной функции желчи.

4. Зараженность колюшки трехиглой О.. aculeatus гельминтом solidus вызывает разнонаправленные изменения у самок и самцов в соотношении стероидных компонентов желчи.

5. Изменение гидроксилазной активности цитохрома Р-450 и концентраций желчных кислот в желчи рыб под воздействием антропогенных факторов указывает на неодинаковую чувствительность к поллютантам у представителей различных видов рыб. Большая устойчивость самок к повреждающему воздействию этого фактора на клеточном уровне может быть связана с разной степенью сродства

ядерных рецепторов к ксенобиотикам и эндогенным предшественникам желчных кислот.

6. Имеются возрастные особенности состава желчных кислот, свидетельствующие о существенных перестройках метаболизма пищеварительных и регуляторных свойств желчи в ходе онтогенеза.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Высоцкая Р.У., Зекина Л.М., Морозов Д.Н., Сидоров B.C. Желчные кислоты желчи как индикатор на химическое загрязнение среды // V Международная конф. «Освоение Севера и проблемы природовосстановления». Сыктывкар, 2001: Научный центр УрО РАН. С. 38-40.

2. Высоцкая Р.У., Рипатти П. О., Зекина Л.М., Сидоров B.C., Морозов Д.Н. Разнообразие желчных кислот в мире животных // Международная конференция «Биоразнообразие Европейского Севера». Петрозаводск, 2001, КарНЦРАН. С. 40.

3. Сидоров B.C., Высоцкая Р.У., Зекина Л.М., Морозов Д.Н. Особенности состава желчных кислот у рыб // III съезд биохимического, общества, С-пб, 2002. С. 357- 358.

4. Высоцкая Р.У., Крупнова М.Ю., Кяйвяряйнен Е.И., Немова Н.Н., Морозов Д.Н., Такшеев С А Влияние экологических условий на ферментный статус наваги и трески Белого моря // Тезисы международных докладов: «Современные проблемы физиологии и экологии морских животных (рыбы, птицы, млекопитающие)», Ростов-на-Дону, 2002. С. 42.

5. Высоцкая Р.У., Морозов Д.Н. Влияние экологических условий на желчнокислотный состав окуней (Perca fluviatilis L.) // Всероссийская конференция: Современные проблемы водной токсикологии. Борок, 2002. С. 30-31.

6. Морозов Д.Н., Зекина Л.М., Высоцкая Р.У. Влияние характера питания на желчнокислотный состав пузырной желчи окуня // Международная конференция: Трофические связи в водных сообществах и экосистемах. Борок, 2003. С. 91-92.

7. Высоцкая Р.У., Крупнова М.Ю., Кяйвяряйнен Е.И., Немова Н.Н., Морозов Д.Н. Такшеев С.А. Влияние экологических условий на активность гидролитических ферментов наваги и трески Белого моря // Современные проблемы физиологии и экологии морских животных. Апатиты, 2003. С. 299 - 305.

8. Морозов Д.Н. Цитохром Р-450 в биохимических механизмах устойчивости сига С. LAVARETUS (L.) к комплексным загрязнениям // XV Коми Республиканская молодежная научная конференция. Сыктывкар, 2004. С. 119-120.

9. Морозов Д.Н., Зекина Л.М., Высоцкая Р.У. Оценка экологической ситуации в водоемах с использованием некоторых показателей стероидного обмена рыб // Вторая международная научная конференция и выставка: Биотехнология - охране окружающей среды, Третья школа-конференция молодых ученых и студентов: Сохранение биоразнообразия и рациональное использование биологических ресурсов, Москва, 2004. С. 127.

10. Морозов Д. Н., Зекина Л. М., Высоцкая Р. У., Евсеева Н. В. Влияние зараженности цестодой S. SOLIDUS на желчнокислотный состав колюшки трехиглой G. ACULEATUS II Международная научная конференция: Основные достижения и перспективы развития паразитологии. Москва, 2004. С. 183-185.

11. Морозов Д.Н., Высоцкая Р.У., Амелина B.C. Влияние загрязняющих веществ различной природы на активность нуклеаз окуня PERCA FLUVIATILIS L II Международная конференция: Экологические проблемы северных регионов и пути их решения, Апатиты, 2004. С. 69-71.

12. Морозов Д.Н. Исследование механизмов адаптации сига Соге-gonus lavaretus (L.) к комплексным загрязнениям // Международная научная конференция: Инновации в науке и образовании - 2004, Калиниград, 2004. С. 13-14.

13. Морозов Д.Н., Высоцкая Р.У., Коломейчук С.Н., Зекина Л.М. Участие цитохрома Р-450 в метаболизме желчных кислот у рыб // Международная научная конференция: Современные проблемы физиологии и биохимии водных организмов, Петрозаводск, 2004г. С. 94.

14. Амелина B.C., Ломаева Т.А., Морозов Д.Н. Активность кислых нуклеаз в тканях сига COREGONUS LAVARETUS (L.) в условиях загрязнения воды отходами железнорудного производства // Международная научная конференция: Современные проблемы физиологии и биохимии водных организмов, Петрозаводск, 2004г. С. 12

15. Морозов Д.Н. Изменение активности цитохрома Р-450 из микросом печени и желчнокислотного состава желчи при адаптации сига Coregonus lavaretus (L.) к комплексным загрязнениям водоема // Вестник Молодых Ученых, серия: Науки о жизни, 2004, № 1. С. 88-92.

16. Феклов Ю.А., Морозов Д.Н. Оценка экологической обстановки озёр Ковдор и Нижняя Пиренга на основании гистологических исследований производителей сигов (вид - биоиндикатор) // Сборник Межведомственной Ихтиологической комиссии. 2004. С. 61-68.

Изд. лиц. № 00041 от 30.08.99. Подписано в печать 09.12.04. Формат 60x84'/16. Бумага офсетная. Гарнитура «Times». Печать офсетная. Уч.-изд. л. 1,2. Усл. печ. л. 1,4. Тираж 100 экз. Изд. № 69. Заказ № 464

Карельский научный центр РАН 185003, Петрозаводск, пр. А. Невского, 50 Редакционно-издательский отдел

»2731 0

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Морозов, Дмитрий Николаевич

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Роль печени в метаболизме желчных кислот.

1.2 Строение и разнообразие желчных кислот.

1.3 Пути метаболизма желчных спиртов и кислот.

1.4 Цитохром Р-450 и его роль в обмене веществ.

1.5 Другие ферменты метаболизма желчных кислот.

1.6 Функции желчных кислот и спиртов, их эволюционное 38 значение

1.7 Факторы, оказывающие влияние на функции желчных 44 кислот.

Глава 2. Материал и методы исследования.

2.1. Объекты исследования.

2.2. Методы выделения желчных кислот.

2.3. Методы качественного и количественного определения 60 желчных кислот.

2.4. Метод определения содержания холестерина.

2.5. Метод определения гидроксилазной активности цитохрома Р- 73 450.

2.6. Статистическая обработка данных.

Результаты и их обсуяадение.

Глава 3. Сравнение желчнокислотного состава у разных видов рыб.

Глава 4. Функциональные особенности желчных кислот рыб при действии различных факторов окружающей среды.

Глава 5. Функциональные особенности желчных кислот рыб разных возрастных групп.

Глава 6. Функциональные особенности желчных кислот рыб при изменении компонентов пищи.

Глава 7. Изучение гидроксилазной активности цитохрома Рмикросом печени рыб при комплексном загрязнении.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Функциональные особенности желчных кислот у рыб"

Актуальность темы. Важнейшими компонентами живой материи являются липиды. В зависимости от выполняемых в организме функций их подразделяют на четыре группы: структурные (или мембранные), запасные, физиологически активные, метаболиты (Сидоров, 1983; Сидоров и др., 1994). К группе физиологически активных веществ липидной природы относятся производные холестерина (ХС). Это уникальное по биологической активности соединение поддерживает стабильность клеточных мембран и является предшественником в биосинтезе других стероидов (витаминов, кортикостероидов, половых гормонов, желчных кислот). Со стероидами связана регуляция таких жизненно важных функций биологических систем, как пищеварительная и репродуктивная.

Желчные кислоты (ЖК), синтезируемые в печени позвоночных животных, определяют вклад в процесс пищеварения, осуществляя эмульгирование жиров, активацию липаз и других пищеварительных ферментов, способствуют всасыванию жирных кислот (Мосолов и др., 1967; Labourdenne et al., 1997; Pasqualini et al., 2000). Кроме указанной функции, обусловленной особенностями строения молекулы - наличия гидрофобных и гидрофильных участков, они выполняют защитную функцию, проявляющуюся в трех формах - подавлении активности и роста микроорганизмов, детоксикации различных чужеродных веществ и стимуляции иммуногенеза (Ганиткевич, 1983; Ayala-Fierro et al., 1999; Itoh et al., 1999). Сообщается об участии этих соединений в глюконеогенезе, в процессе деления клетки (Sinai et al., 2001; De Fabiani et al., 2003), апоптозе (Benz et al., 2000), синтезе аполипопротеинов (Kardassis et al., 2003). Имеется ряд работ, посвященных действию ЖК на лизосомы и лизосомальные ферменты (Попова и др., 1980; Попова, Бехтерева, 1981; Высоцкая, Рипатти, 1988).

Изучены эволюционные и некоторые экологические аспекты вариабельности состава ЖК у животных (Haslewood, 1967; Рипатти, Сидоров, 1973; Рипатти, 1975, 1978; Попова и др., 1979, 1980, 1983; Сидоров и др., 1978, 1994; Сидоров, 1983; Зекина, Рипатти, 1987; Богдан и др., 2000). Известно широкое разнообразие и филогенетическая определенность ЖК (Рипатти, Сидоров, 1983). Основные исследования по вариабельности ЖК проведены на млекопитающих и человеке, что связано с медицинской стороной проблемы (Романенко, 1978; Ганиткевич, 1980). В то же время вопрос об особенностях функционирования этих биологически важных веществ у рыб - группы низших позвоночных животных, выделяющейся по видовому разнообразию и условиям обитания, отличающейся своеобразием физиолого-биохимических адаптаций на уровне липидов, освящен в литературе недостаточно (Сидоров и др., 1972, 1977; Сидоров, 1983). Практически отсутствуют сведения об изменении желчнокислотного статуса у рыб в ходе онтогенеза, в зависимости от физиологического состояния.

Учитывая, что биосинтез желчных кислот и других стероидов, а также детоксикация различного рода ксенобиотиков протекает с участием цитохрома Р-450 (Арчаков, 1975, 1983; Мишин, Ляхович, 1985; Shefer et al., 1968; Ahokas et al., 1976; Myant et al., 1977; Gonzalez, 1990; Rocha-e-Silva et al., 2001; Smirlis et al., 2001), несомненный интерес представляет изучение гидроксилазной активности этой монооксигеназной системы у рыб и ее сопоставление с соотношением ЖК в желчи в условиях техногенного загрязнения водоема. Это особенно важно в тех случаях, когда рыба используется в качестве тест-объекта при биоиндикации состояния водной среды (Кашулин и др., 1999).

Знания, полученные при детальном исследовании влияния различных факторов среды на показатели обмена липидов стероидного ряда важны для выяснения биохимических механизмов адаптаций организмов к условиям существования, они помогут подойти к пониманию вопроса о степени разграничения функций сходным образом устроенных молекул по мере эволюционного совершенствования позвоночных животных, найдут применение при решении практических задач рыбоводства и биотестирования.

Были поставлены следующие задачи:

- определить качественный и количественный состав ЖК различных видов рыб;

- изучить вариабельность ЖК под влиянием изменяющихся факторов среды (абиотических факторов: солености, закисленности и гумифицированности водоемов; биотических факторов: заражененность гельминтами; антропогенных факторов: действия разнообразных токсикантов; изменения состава пищи; возрастных особенностей);

- изучить связь вариабельности ЖК с типом питания, физиологическим состоянием организма;

- изучить активность некоторых ферментов, участвующих в метаболизме и функционировании ЖК.

Научная новизна работы. Оценка влияния ацидности, солености, зараженности гельминтами, комплексного загрязнения, возрастных особенностей, половых различий на функциональные особенности желчнокислотного состава проводилась впервые. Показана зависимость

Положения, выносимые на защиту

1) Состав желчных кислот, выполняющих у рыб, как и других позвоночных пищеварительную, регулярную и защитную функции подвержен количественным изменениям под воздействием естественных и антропогенных факторов;

2) Функциональные особенности желчнокислотного состава рыб находятся в зависимости от возраста, пола, физиологического состояния организма, характера питания;

3) Различия в гидроксилаэной активности цитохрома Р-450, фермента, участвующего в биосинтезе желчных кислот, могут быть объяснены разной степенью сродства ксенобиотиков и предшественников желчных кислот к ядерному рецептору и к ферменту, гидроксилазной активности цитохрома Р-450, отдельные формы которого участвуют в метаболизме желчных кислот и ксенобиотиков, от изменения соотношения желчных кислот в желчи рыб при техногенном загрязнении. Продемонстрировано действие такого биотического фактора, как зараженность гельмитнами, на изменение соотношения ЖК в желчи хозяина. Таким образом, научная новизна работы состоит в установлении связи между действием факторов среды и функциональными особенностями желчных кислот, а также ферментов их метаболизма у ряда представителей группы низших позвоночных животных (рыбы). Высказано предположение о механизмах регуляции транспорта и биосинтеза ЖК при действии исследуемых факторов.

Практическая значимость работы. Работа является частью исследований, проводимых в лаборатории экологической биохимии Института биологии КарНЦ РАН в рамках основных направлений Исследований Отделения биологических наук РАН (5.15, 5.21) и гранта Президента РФ «Ведущие научные школы» (НШ-894. 2003.4), ФЦП «Интеграция науки и высшего образования России на 2002-2006 годы». Найденные закономерности позволяют прояснить некоторые особенности метаболизма желчных ЖК и использовать полученные результаты при разработке систем эколого-биохимического мониторинга водоемов и для оценки физиолого-биохимического состояния водных организмов. Материал используется при чтении курсов лекций «Экологическая биохимия животных» и «Биохимия» для студентов ПетрГУ и КГПУ.

Апробация работы. Материалы диссертации представлены на V международной конференции «Освоение Севера и проблемы природовосстановления» (Сыктывкар, 2001); международной конференции «Биоразнообразие Европейского Севера» (Петрозаводск, 2001); Ш-ем съезде биохимического общества (Санкт-Петербург, 2002); международной конференции «Современные проблемы физиологии и экологии морских животных (рыбы, птицы, млекопитающие)» (Ростов-на-Дону, 2002); всероссийской конференции: Современные проблемы водной токсикологии (Борок, 2002); международной конференции: Трофические связи в водных сообществах и экосистемах (Борок, 2003); XV -ой Коми Республиканской молодежной научной конференции (Сыктывкар, 2004); второй международной научной конференции и выставке «Биотехнология - охране окружающей среды» и третьей школе-конференции молодых ученых и студентов «Сохранение биоразнообразия и рациональное использование биологических ресурсов», (Москва, 2004); международной научной конференции «Основные достижения и перспективы развития паразитологии» (Москва, 2004); международной конференции «Экологические проблемы северных регионов и пути их решения» (Апатиты, 2004); международной научной конференции: Инновации в науке и образовании - 2004, (Калининград, 2004); международной научной конференции «Современные проблемы физиологии и биохимии водных организмов» (Петрозаводск, 2004).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 16 печатных работ, в том числе 3 статьи и 13 тезисов докладов.

Структура и объем работы. Диссертационная работа изложена на 173 страницах машинописного текста, содержит 12 таблиц и 41 рисунок и состоит из введения, обзора литературы, методической части, пяти глав результатов исследования, заключения, выводов. Список цитируемой литературы включает 332 наименования, из них 232 на иностранном языке.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Морозов, Дмитрий Николаевич

Выводы

4. Зараженность колюшки трехиглой Gasterosteus aculeatus гельминтом Schistocephalus solidus вызывает разнонаправленные изменения у самок и самцов в соотношении стероидных компонентов желчи.

Заключение

Основной целью диссертационной работы являлось изучение особенностей функционирования желчных кислот у рыб при воздействии прямо или опосредовано на обмен этих веществ естественных и вызванных деятельностью человека факторов окружающей среды. Была предпринята попытка подойти к пониманию биохимических механизмов адаптации гидробионтов к экзогенным и эндогенным факторам. Показана связь между гидроксилазной активностью фермента цитохрома Р-450, участвующего как в метаболизме ксенобиотиков, так и в биосинтезе желчных кислот, со сдвигом соотношения желчных кислот желчи рыб.

Реакции гидробионтов на изменение солености среды обитания, оцениваемые по изменению состава желчных кислот, зависят от осморегуляторных биохимических механизмов. Исследование гипоосмотического стресса на примере рыб, показало значительное уменьшение синтеза, транспорта и накопления желчных кислот в желчи. Обнаружено, что самцы являются более чувствительными к данным условиям. Однако, так как изменение солености не приводит к морфологическим изменениям в органах и тканях, то это может быть расценено как биохимическая адаптация рыбы к изменению солености.

Ртутное загрязнение, как и закисленность водоемов, является распространенным антропогенным фактором, воздействующим на водную биоту Севера России, учитывая существующую проблему закисления поверхностных вод и высокой степени органического загрязнения. Повышение биодоступности токсиканта (метилирование ртути) сказывается на проницаемости мембран клеток и приводит к накоплению тяжелых металлов. Обнаружено, что действие этих факторов приводит к изменению процессов транспорта и накоплению в желчи таких биологически активных соединений, как желчные кислоты и холестерин.

Инвазия гельминтами рыб сопровождается значительными изменениями в содержании липидов в их тканях, в том числе и в желчи. Показано, что изменения в соотношении таких липидов, как желчные кислоты и холестерин, могут быть детерминированы полом. Наблюдается разная утилизация паразитом этих стероидов у самок и самцов и их неодинаковая чувствительность к инвазии.

Комплексное загрязнение поверхностных вод, вызванное деятельностью человека, в значительной мере определяет благополучие водных организмов, обитающих в районах с высокой антропогенной активностью. Исследование представителей пресноводных рыб (сига и ряпушки), выловленных в зоне выброса сточных вод горнообогатительного производства, показало значительные изменения в соотношении желчных кислот и активности цитохрома Р-450, зависящие от степени загрязнения и чувствительности разных видов и полов. В качестве тест-объекта антропогенного загрязнения водоемов может быть использован сиг.

Для подавляющего большинства рыб исследователи отмечают прямую зависимость между возрастом и содержанием липидов в тканях и органах. Обнаружено существенное отличие по содержанию желчных кислот в желчи рыб, отличающихся возрастом и полом. Причем более чувствительными к этим изменениям являются самки второго года жизни, что связано с различной мобилизацией ресурсов организма для репродуктивных целей.

Известно, что состав липидов значительно изменяется при различном составе пищи. Кроме того, некоторые вещества могут вести себя как ксенобиотики, что и показано при исследовании действия жирорастворимых биологически активных веществ на желчнокислотный состав желчи форели.

Таким образом, наметились некоторые шаги по расшифровке механизмов изменения метаболизма, функций желчных кислот у рыб при действии различных факторов окружающей среды. Степень лабильности состава желчных кислот в указанных условиях зависит от силы и длительности воздействия факторов, изучаемого вида, пола, возраста, физиологического состояния, стадии зрелости гонад. Если воздействующий фактор превышает пороговые значения, то адаптивные возможности организма рыб (на уровне регуляции синтеза биологически важных веществ, в том числе и желчных кислот), резко снижаются и возможно развитие патологических состояний, изменения защитных и других свойств желчи. Следует отметить, что изменения в ходе приспособления организма к условиям среды не могут быть реализованы только при помощи одного регуляторного механизма. Только скоординированная работа различных систем организма сможет обеспечить должным образом адаптацию.

Так как отмечена значительная вариабельность исследованных показателей, соотношение желчных кислот и гидроксилазная активность цитохрома Р-450 может быть использована в качестве тестов для оценки экологического состояния водоема и гидробионтов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Морозов, Дмитрий Николаевич, Петрозаводск

1. Аминева В.А., Яржобек А.А. Физиология рыб. М.: Легкая и пищевая промышленность. 1984. 200 с.

2. Арчаков А.И. Микросомальное окисление. М.: Наука, 1975. 326 с.

3. Арчаков А.И. Оксигеназы биологических мембран. М.: Наука, 1983. 55 с.

4. Богдан В.В., Немова Н.Н., Руоколайнен Т.Р. Влияние ртути на состав липидов печени и мышц окуня Perca fluviatilis L. // Вопросы ихтиологии. 2002. Т. 42, №2. С. 259-263.

5. Богдан В.В., Зекина JI.M., Такшеев С.А., Еремеев В.И., Сидоров B.C. Желчнокислотный состав желчи щуки Esox lucius L. при техногенном воздействии // Вопросы ихтиологии. 2000. Т. 40, вып. 4. С. 573-576.

6. Богдан В.В., Зекина JI.M., Такшеев С.А., Еремеев В.И., Сидоров B.C. Холатный показатель как критерий реакции организма на токсическое воздействие // Тез.докл. межд. семинара, поев, памяти академика Е.М. Крепса. Мурманск. 19996. С.112-113.

7. Васильева Э.Н. Григорьева Т. М. Влияние количества жира в пище на секрецию и состав желчи крыс // Вопросы питания. 1976. №1. С. 44-46.

8. П.Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.: Наука, 1972. 272 с.

9. Высоцкая Р.У., Сидоров B.C. О содержании липидов у некоторых гельминтов пресноводных рыб //Паразитология. 1973. Т. 7. С. 51-57.

10. З.Высоцкая Р.У., Рипатти П.О. Воздействие детергентов на структуру и функционирование лизосом у пресноводных рыб // Физиология и токсикология гидробионтов. Ярославль: Ярославский гос. ун-т. 1988. С. 100-106.

11. Ганиткевич Я.В. Роль желчи и желчных кислот в физиологии и патологии организма. Киев: Наукова думка, 1983. 180 с.

12. Губин Г.Л. Суточная ритмика обмена веществ клеток эпителия печени позвоночных в онтогенезе и филогенезе в экспериментальных условиях // Автореф. докт. дис. Тюмень, 1971. 37с.

13. Гублер Е.В., Генкин А.А. Применение критериев непараметрической статистики для оценки различий двух групп наблюдений в медико-биологических исследованиях. М.: Медицина. 1969. 29 с.

14. Гуляева Л.Ф., Гришанова А.Ю., Громова О.А., Слынько Н.Н., Вавилин В.А., Ляхович В.В. Микросомная монооксигеназная система живых организмов в биомониторинге окружающей среды. Новосибирск: Из-во ГПНТБ, 1994. 100с.

15. Гуревич B.C., Шаталина Л.В., Ковалева И.Г., Бершадский Б.Г. Роль холестерина в активации перекисного окисления липидов в тромбоцитах // Биохимия. 1992. Т. 57. Вып. 2. С. 267-274.

16. Ивлев B.C. Экспериментальная экология питания рыб. М., 1955. 252 с.

17. Исидоров В.А. Введение в курс химической экотоксикологии: Учебное пособие. СПб.: Из-во Санкт-Петербургского университета, 1997. 88 с.

18. Кашулин Н.А., Лукин А.А., Амундсен П.А. Рыбы пресных вод субарктики как биоиндикаторы техногенного загрязнения. Апатиты: КНЦ РАН, 1999. 142 с.

19. Кокунин В.А. Статистическая обработка данных при малом числе опытов

20. Украинский биохимический журнал. 1975. Т. 47, №6. С. 776-190.

21. Костылев Ю.В. Рыбы. Петрозаводск: Карелия, 1990. 150с.

22. Крепс Е.М. Липиды клеточных мембран. Л.: Наука, 1981. 330 С.

23. Кузубова Л.И., Лаврик О.Л., Лебедева А.Н. Физико-химические методы определения ртути и других тяжелых металлов природных объектов // Поведение ртути и других тяжелых металлов в экосистемах. Новосибирск: Изд-во АН СССР. 1989. 4.1. 140с.

24. Кулинский В.И. Обезвреживание ксенобиотиков // Соросовкий образовательный журнал. 1999, № 1. С. 8-12.

25. Кулинский В.И., Колесниченко Л.С. Биологическая роль глутатиона // Успехи совр. биол. 1990а. Т.110, Вып.1, № 4. С.20-33.

26. Кулинский В.И., Колесниченко Л.С. Обмен глутатиона // Успехи биол. химии. 19906, Т.31. С.157-179.

27. Лапин В.И., Шатуновский М.И. Особенности состава, физиологическое и экологическое значение липидов рыб // Усп. совр. биол. 1981. Т. 92. В. 3, №6. С. 380-394.

28. Лизенко Е.И. Содержание липидов в органах крупной ряпушки Coregonus albula L. в зависимости от некоторых экологических и физиологических факторов // Автореф. дис.канд. биол. наук. Петрозаводск.: КарНЦ АН СССР. 1973. 27 с.

29. Лизенко Е.И., Сидоров B.C., Потапова О.И. Липиды рыб. II. Сезонная динамика фосфатидов и триглицеридов крупной ряпушки Coregonus albula L. // Лососевые (Salmonidae) Карелии. 1971. Вып.1. С. 164-169.

30. Лизенко Е.И., Сидоров B.C., Потапова О.И. О содержании липидов в гонадах ряпушки Coregonus albula L. оз. Уросозера // Вопр. ихтиологии. 1974. Т. 13. Вып. 2. С. 1124-1129.

31. Лизенко Е.И., Сидоров B.C., Потапова О.И., Нефедова З.А. Липиды рыб. III. Содержание глицеридов и фосфатидов в различных органах ряпушки в зависимости от условий ее обитания // Лососевые (Salmonidae) Карелии. 1972, вып. 1.С. 170-177.

32. Лоуренс Д.Р., Бенитт П. Н. Клиническая фармология. М.: Медицина, 1993, Т. 1.С. 185-253.

33. Лукин А.А., Даувальтер В.А., Кашулин Н.А., Раткин Н.Е. Влияние аэротехногенного загрязнения на водосборный бассейн озер Субарктики и рыб // Экология. 1998, №2. С. 109-115.

34. Лукин А.А., Кашулин Н.А. Влияние водозабора большой мощности на рыбное сообщество субарктического водоема // Водные ресурсы. 1996. Т. 23, №5. С. 589-598.

35. Лукьяненко В.И. Экологические аспекты ихтиотоксикологии. М.: Агропромиздат, 1987. 240 с.

36. Мак-Мюррей У. Обмен веществ у человека.// Пер. с англ., М.: Мир, 1980. 280 с.

37. Мартемьянов В.И. Стресс у рыб: защитные и повреждающие процессы // Биология внутренних вод. 2002, №4. С. 3-13.

38. Матей В.Е., Джаго Ч.Х., Хайнс Т.А., Морфология жаберного аппарата рыб из ацидных озер // Структура и функционирование экосистем ацидных озер. С-Пб.: Наука. 1994. С. 213-229.

39. Мещерская К.А., Бородина Г.П. Участие желчных кислот в гипохолестериномическом действии бетаситостерина // Фармакология и токсикология. 1962. №1. С. 44-46.

40. Мишин В.М., Ляхович В.В. Множественные формы цитохрома Р-450. Новосибирск: Наука, 1985. 182 с.

41. Моисеенко Т.Н., Кудрявцева Л.П. Никель в поверхностных водах Кольского Севера, его аккумуляция и токсичные эффекты // Проблемы химического и биологического мониторинга экологического состояния водных объектов Кольского Севера. Апатиты. 1995. С. 36-45.

42. Мосолов В.В., Лушникова Е.В., Афанасьев П.В. Влияние солей желчных кислот на трипсин // Докл. Акад. Наук СССР. 1967. Том. 174, №1. С. 230233.

43. Мур Дж. В., Рамамурти С. Тяжелые металлы в природных водах. М.: Мир. 1987. С. 285с.

44. Парк Д.Б. Биохимия чужеродых соединений. М.: Медицина, 1973. 288 с.

45. Патин С.А., Морозов Р.П. Микроэлементы в морских организмах и экосистемах. М.: Лег. и пищ. пром-сть, 1981. 153с.

46. Петровский Ю.А. Воскобойник С.Л. Измнение содержания желчных кислот в желчи при экспериментальном поражении печени // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1947. Т. 23. С. 1-18.

47. Попова Р.А., Бехтерева З.А. Влияние таурохолата натрия на активность ферментов лизосом печени форели // Сравнительные аспекты биохимии рыб. Петрозаводск: Карельский филиал АН СССР, 1981, С. 39-43

48. Попова Р.А., Бехтерева З.А. Исследование влияния желчных кислот на мембраны лизосом печени крыс и форели // Биохимия пресноводных рыб Карелии, Петрозаводск: Карельский филиал АН СССР, 1980. С. 86-89.

49. Попова Р.А., Бехтерева З.А., Рипаттти П.О., Сидоров B.C., Влияние кормовой базы на состав желчи у рыб // Сравнительная биохимия водных животных. Петрозаводск: Карельский филиал АН СССР. 1983. С. 145-150.

50. Попова Р.А., Болгова О.М., Рипатти П.О., Бехтерева З.А., Сидоров B.C. Изучение липидного и желчнокислотного состава у речной и заводской молоди лосося // Биохимия пресноводных рыб Карелии, Петрозаводск: Карельский филиал АН СССР. 1980. С. 29-36.

51. Попова Р.А., Рипаттти П.О., Сидоров B.C., Желчнокислотный состав некоторых рыб Карелии // Современные вопросы экологической физиологии рыб. М., 1979. С. 206-210.

52. Решетников Ю.С. Экология и систематика сиговых рыб. М.: Наука, 1980. 300 С.

53. Решетников Ю.С., Попова О.А., Стерлигова О.П., Бушман Л.Г., Иешко Е.П., Макарова Н.П., Малахова Р.П., Помазовская И.В., Смирнов Ю.А. Изменение структуры рыбного населения эвтрофируемого водоема. М.: Наука, 1982. 248 с.

54. Рипатти П.О. Биологическая специфичность желчных кислот: Автореф. канд. биол. наук. Петрозаводск, 1975. 21 с.

55. Рипатти П.О. О связи состава желчных кислот с характером питания // Экологическая биохимия животных. 1978. Петрозаводск: Карельский филиал АН СССР. С. 46-53.

56. Рипатти П.О., Сидоров B.C. Количественный состав желчных кислот некоторых позвоночных животных в связи с характером питания // ДАН СССР, 1973, т. 212, №3. С.770-773.

57. Рипатти П.О., Попова Р. А., Бехтерева З.А. Изменчивость желчных кислот у рыб // Сравнительная биохимия рыб и их гельминтов. Петрозаводск: Карельский филиал АН СССР, 1977. С. 56-61.

58. Рипатти П.О., Попова Р.А., Бехтерева З.А., Сидоров B.C. Смирнов Ю.А. Изучение состава желчных кислот Лососевых рыб. // Лососевые (Salmonidae) Карелии. Петрозаводск: Карельский филиал АН СССР, 1972, Вып. 1.С. 122-126.

59. Рипатти П.О., Попова Р.А., Каган Т.Б, Бехтерева З.А. Спектрофотометрическое определение желчных кислот. Вопр. мед. химии, 1969, т. 15. С. 630-633.

60. Романенко В.Д. Роль печени в обмене кальция и его значение в процессах желчеобразования: Автореф. дис. д-ра биол. наук. Киев, 1969. 32 с.

61. Романенко В.Д. Печень и регуляция межуточного обмена. Киев: Наукова думка, 1978. 184 с.

62. Саприн А.Н. Ферменты метаболизма и детоксикации ксенобиотиков // Успехи биол. химии. 1991. Т. 32. С. 146-175.

63. Саратиков А.С., Скакун Н.П. Желчеобразование и желчегонные средства. Изд. 2-е, Томск: Изд. Томского ун-та, 1991. 260 с.

64. Сейфулла Р.Д., Сергеев П.В., Ульянкина Т.И. Стереохимия, электронная структура и биологическая активность стероидных гормонов // Успехи биол. химии. 1975. Т. 16. М.: Наука. С. 165 195.

65. Сергеев П.В. Стероидные гормоны. М.: Наука, 1984. 240 с.

66. Сидоров B.C. Экологическая биохимия рыб. Липиды. Л.: Наука, 1983. 240 с.

67. Сидоров B.C., Попова Р.А. Липидный состав рыб в зависимости от изменений условий обитания, вызванных антропогенными факторами // Экологическая биохимия животных. Петрозаводск: Карельский филиал АН СССР, 1978. С. 6-14.

68. Сидоров B.C. Лизенко Е.И., Рипатти П.О. Эволюционные аспекты экологической биохимии липидов рыб // Теоретические аспекты экологической биохимии. Петрозаводск: КарНЦРАН, 1994. С. 5-36.

69. Сидоров B.C., Лизенко Е.И., Болгова О.М., Нефедова З.А. Липиды рыб. I. Методы анализа. Тканевая специфичность липидов ряпушки Coregonus albula L. //Лососевые (Salmonidaej Карелии. 1972, вып. 1. С. 152-163.

70. Сидоров B.C., Лизенко Е.И., Рипатти П.О., Болгова О.М. Липиды рыб // Сравнительная биохимия рыб и их гельминтов / под ред. Сидорова B.C. Петрозаводск.: КФ АН СССР. 1977. С. 55-56.

71. Сидоров B.C., Высоцкая Р.У., Смирнов Л.П., Гурьянова С.Д. Сравнительная биохимия гельминтов рыб. Аминокислоты, белки, липиды. Л.: Наука, 1989. 152 с.

72. Сорвачев К.Ф. Основы биохимии питания рыб. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1982. 247 с.

73. Стерлигова О.П., Павлов В.Н., Ильмаст Н.В., Павловский С.А., Комулайнен С.Ф., Кучко Я.А. Экосистема Сямозера (биологический ражим, использование). Петрозаводск: Карельский научный центр РАН, 2002,119 с.

74. Титов В.Н. Роль эфиров холестерина в транспорте триглицеридов // Биохимия. 1995. Т. 60, вып. 9. С. 1371-1381.

75. Уайт А., Хендлер Ф., Смит Э., Химл Р., Леман И. Основы биохимии: в Зх томах. Т.1 Пер с англ. /под ред. Овчинникова Ю.А. М.: Мир, 1981. 534 с.

76. Физер Л., Физер М., Химия природных соединений фенантренового ряда. М.- Л.: Госхимиздат, 1953, 93 с.

77. Физер Л., Физер М., Стероиды, пер. с англ. М.: Мир, 1964, с.982.

78. Халилов Ф.Х. Материалы по морфологии и гистохимии пищеварительной системы костистых рыб. Алма-Ата: Мектеп, 1969. 131с.

79. Халилов Ф.Х., Бармина И.А. К сравнительной морфологии кишечника и гепатопанкреаса некоторых карповых рыб // Рыбные ресурсы водоемов Казахстана и их использование. Алма-Ата: Мектеп. Т. 5. 1966. С. 339-345.

80. Хечинашвили Г.Г., Никульчева Н.Г. Липопротеидлипаза, печеночная триглицеридная липаза и некоторые другие липолитические ферменты животного организма // Успехи биологической химии. 1980, М.: Наука, т. 21. С. 163-184.

81. Хлебович В.В. Критическая соленость биологических процессов / Хлебович В.В. АН СССР. Зоол. Ин-т. Л.: Наука, 1974. 236 с.

82. Хлебович В.В. Акклимация животных организмов. Л.: Наука, 1981. 135 с.

83. Шатуновский М.И. Изменения биохимического состава печени и крови беломорской речной камбалы во время созревания ее половых продуктов в летне-осенний период // Вестник Московского университета. Биология, почвоведение, 1967, №2. С. 22-30.

84. Шатуновский М.И. Сравнительное изучение липидов сыворотки крови трески, наваги, речной и полярной камбалы Белого моря // ДАН СССР, 1969, т. 184, №5. С. 1207-1209.

85. Шишова-Касаточкина О.А., Леутская З.К. Биохимические аспекты взаимоотношений гельминта и хозяина (обмен белков, витаминов и стероидов в процессах паразитирования). М.: Наука, 1979. 280 с.

86. Afonso A. Efeitos da salinidade da na circulacao branquial ao "tern" e suas imlicacoes em aquacultura // Cienc. Biol. Mol.and cell., 1990. V. 15. No 1 -4, p. 3.

87. Agellon L.B., Cheema S. K. The 3'-untranslated region of the mouse cholesterol 7a-hydroxylase mRNA contains elements responsive to post-transcriptional regulation by bile acids // Biochem. J. 1997. V. 328. P. 393-399

88. Ahokas J.T, Pelkonen O, Karki N.T. Metabolism of polycyclic hydrocarbons by a highly active aryl hydrocarbon hydroxylase system in the liver of a trout species // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1975.V. 63. No 3. P. 635-41.

89. Ahokas J.T., Pelkonen O., Karki N.T. Cytochrome P-450 and drug-induced spectral interactions in the hepatic microsomes of trout, Salmo trutta lacustris. // Acta Pharmacol. Toxicol. (Copenh.). 1976.V. 38. No 5. P. 440-449.

90. Akita H., Suzuki H.I, Sugiyama Y. Sinusoidal efflux of taurocholate correlates with the hepatic expression level of Mrp3 // Biochemical and Biophysical Research Communications. 2002.V. 299. P. 681 -687.

91. Akobeng A.K., Clayton P.T., Miller V., Super M., Thomas A.G. An inborn error of bile acid synthesis (3 (3-hydroxy-A5-C27 -steroid dehydrogenase deficiency) presenting as malabsorption leading to rickets // Arch. Dis. Child. 1999.V. 80. P. 463-465.

92. Albalak A., Zeidel M.L., Zucker S.D., Jackson A.A., Donovan Joanne M. Effects of Submicellar Bile Salt Concentrations on Biological Membrane Permeability to Low Molecular Weight Non-Ionic Solutes // Biochemistry 1996.V. 35. P. 7936-7945.

93. Ali S.S, Elliott W.H. Bile acids. LI. Formation of 12alpha-hydroxyl derivatives and companions from 5 alpha-sterols by rabbit liver microsomes // J. Lipid Res. 1976.V. 17. No 4. P. 386-392.

94. Ali S.S., Stephenson E., Elliott W.H. Bile acids. LXVII. The major bile acids of Varanus monitor // J. Lipid Res. 1982.V. 23. No 7. P. 947-954.

95. Amuro Y., Tanaka M., Higashino K., Hayashi E., Endo Т., Kishimoto S., Nakabayashi H., Sato J. Bile acid synthesis by long-term cultured cell line established from human hepatoblastoma // J. Clin. Invest. 1982. V. 70. No 5. P. 1128-1130.

96. Angelico M., Attili A.F., Capocaccia L. Fasting and postprandial serum bile acids as a screening test for hepatocellular disease // Am. J. Dig. Dis. 1977. V. 22. No 11. P. 941-946.

97. Angelin В., Bjokhem I., Einarsson K. Individual serum bile acid concentrations in normo- and hyperlipoproteinemia as determined by mass fragmentography: relation to bile acid pool size // J. Lipid Res. 1978. V. 19. No 5. P. 527-537.

98. Araya Z., Tang W., Wikvall K. Hormonal regulation of the human sterol 27-hydroxylase gene CYP27A1 // Biochem J. 2003. V. 372. Pt. 2. P. 529-34.

99. Axelson M., Morkg В., Everson G. T. Bile Acid Synthesis in Cultured Human Hepatoblastoma Cells // J. Biol. Chem. 1991. V. 266. No. 27, pp. 1777017777.

100. Axelson M., Shodas J., Sjovallg J., Anders Т., Wikva K. Cholesterol Is Converted to 7cu-Hydroxy-3-oxo-4-cholestenoic Acid in Liver Mitochondria // J. Biol. Chem. 1992. V. 267. No. 3. P. 1701-1704.

101. Ayala-Fierro F., Firriolo J.M., Carter D.E. Disposition, toxicity, and intestinal absorption of cobaltous chloride in male Fischer 344 rats // J. Toxicol. Environ. Health. A. 1999. V. 56. No 8. P. 571-91.

102. Azer S.A., Klaassen C.D., Stacey N.H. Biochemical assay of serum bile acids: methods and applications // Br. J. Biomed Sci. 1997. V. 54. No 2. P. 118132.

103. Bai C., Canfield P.J., Stacey N.H. Individual serum bile acids as early indicators of carbon tetrachloride- and chloroform-induced liver injury // Toxicology. 1992. V. 75. No 3, P. 221-34.

104. Batta A.K., Salen G., Rapole K.R., Batta M., Batta P., Alberts D., Earnest

105. D. Highly simplified method for gas-liquid chromatographic quantitation of bile acids and sterols in human stool // J. Lipid Res. 1999. V. 40. P. 1148-1154.

106. Batta A.K., Salen G., Batta P., Tint G.S., Alberts D.S., Earnest D.L. Simultaneous quantitation of fatty acids, sterols and bile acids in human stool by capillary gas-liquid chromatography // Journal of Chromatography В 2002. V. 775. P. 153-161.

107. Batta A.K., Salen G., Shefer S. Substrate Specificity of Cholylglycine Hydrolase for the Hydrolysis of Bile Acid Conjugates // J. Biol. Chem. 1984. V. 259. No. 24. P. 15036-15039.

108. Batta, A.K., Agganval S. K., Mirchandani R., Shefer S., Salen G. Capillary gas-liquid chromatographic separation of bile alcohols // J Lipid Res. 1992. V. 33. P. 1403-1407.

109. Baumgartner U., Baier M.D., Mappes P.R.G., Hanns-Jo M.D., Farthmann

110. E.H. Pericentral Hepatocytes Translocate Hydrophilic Bile Acids More Rapidly than Hydrophobic Ones // Digestive Diseases and Sciences 2001. V. 46. No. 10. P. 2098-2103.

111. Benz C., Angermuuller S., Otto G., Sauer P., Stremmel W., Stiehl A. Effect of tauroursodeoxycholic acid on bile acid-induced apoptosis in primary humanhepatocytes I I European Journal of Clinical Investigation 2000, v. 30. P. 203209.

112. Bergstrom S., Bergstrom B. Metabolism of lipids // Ann. Rev. Biochem., 1956. V. 25. P. 177-200.

113. Bergstrom S., Danielsson H., Samuelsson B. Formation and matebolism of bile acids // Lipid metabolismi / K. Bloch, New York and London, 1960. P. 291-336.

114. Bieri J.G., Tolliver T.J. Reversal by bile acid on the inhibition of alpha-tocopherol absorption by retinoic acid // J. Nutr. 1982. V. 112. No 2. P. 401-403.

115. Bjorkhem I. Mechanism of degradation of the steroid side chain in the formation of bile acids // J. Lipid Res. 1992. V. 33. No 4. P. 455-471

116. Bjorkhem I., Leitersdorf E. Sterol 27-hydroxylase Deficiency: A Rare Cause of Xanthomas in Normocholesterolemic Humans // Trends Endocrinol. Metab. 2000. V. 11. P. 180-183.

117. Bloch K., Berg H.B., Rittenberg D. The biological conversion of cholesterol to cholic acid // J. Biol. Chem. 1943. P. 143-511.

118. Borgstrom В., Erlanson C. Pancreatic juice co-lipase: physiological importance // Biochim. Biophys. Acta. 1971. V. 242. No 2. P. 509-513.

119. Bortolini O, Medici A, Poli S. Biotransformations on steroid nucleus of bile acids // Steroids. 1997. V. 62. No 8-9. P. 564-77.

120. Boyer J.L., Hagenbuch В., Ananthanarayanan M., Suchy F., Stieger В., Meier P.J. Phylogenic and Ontogenic Expression of Hepatocellular Bile Acid Transport // PNAS. 1993. V. 90. P. 435-438.

121. Buchmann К., Lindenstrom Т. Interactions between monogenean parasites and their fish hosts // Int. J. Parasitol. 2002. V. 32. No 3. P. 309-319.

122. Bucuvalas J.C., Goodrich A.L., Blitzer B.L., Suchy F.J. Amino acids are potent inhibitors of bile acid uptake by liver plasma membrane vesicles isolated from sucking rats // Pediatr. Res. 1985. V. 19. No 12. P. 1298-1304.

123. Cali J.J., Russell D.W. Characterization of Human Sterol 27-Hydroxylase (A Mitochondrial Cytochrome P-450 That Catalyzes Multiple Oxidation Reactions In Bile Acid Biosynthesis) // J. Biol. Chem. 1991. V. 266, No. 12. P. 7774-7778.

124. Chahande R.D., Jadhav S.P. Influence of temperature and pH on oxygen consumption of fresh water fish Naemacheilus botia // Uttar. Pradesh. J. Zool.1997. V. 17. No 3. P. 224 226.

125. Chan D.K.O., Woo N.Y.S. 1978. Cortisol in eel metabolism // Gen. сотр. Endocr. V. 35. P. 205-215.

126. Chester J.I., Chan D.K.O., Henderson I.W., Ball J.N. The adrenocortical steroids, adrenocorticotropin and the corpuscle Stannius // Fish Physiol. 1969. V. 2. P. 322-376.

127. Chester J.I., Mosley W., Henderson I.W., Garland H.O. The interregnal gland in pisces // General, Comparative and Clinical Endocrinology of the Adrenal Cortex. L.: Acad. Press, 1980. V. 3. P. 396-523.

128. Chiang J.Y.L. Regulation of Bile Acid Synthesis // Frontiers in Bioscience1998. V. 3. P. d 176-193.

129. Conti M.E., Cecchetti G. A biomonitoring study: trace metals in algae and molluscs from Tyrrhenian coastal areas // Environ. Res. 2003. V. 93. No 1. P. 99-112.

130. Cuebas D.A., Phillips C., Schmitz W., Conzelmann E., Novikov D.K. The role of alpha-methylacyl-CoA racemase in bile acid synthesis // Biochem J. 2002. V. 363. Pt3. P. 801-807.

131. Danzo B.J. Environmental xenobiotics may disrupt normal endocrine function by interfering with the binding of physiological ligands to steroid receptors and binding proteins // Environ.Health Perspect.1997. V. 105. No 3. P. 294-301.

132. De Silva S.S.,. Perera P.A.B. Studies on the young grey mullet, Mugil cephalus L. I. Effects of salinity on food intake, growth and food conversation // Aquaculture, 1976. V. 7. P. 327-338.

133. Degtyarenko K.N., Archakov A.I. Molecular evolution of P450 superfamily and P450-containing monooxygenase systems // FEBS Lett. 1993. V. 332. No 12. P. 1-8.

134. Denton J.E., Yousef M.K., Yousef J.M., Kuksis A. A bile acid composition of rainbow trout, Salmo gairdneri. Lipids, 1974. V. 9. No 12. P.945 - 951.

135. Dietrich D., Schlatter C. Alluminium toxicity to rainbouw trout at low pH // Aquatic. Toxicol. 1989. V. 15. No 15. P. 197-212.

136. Donovan J.M., Jackson A.A. Transbilayer Movement of Fully Ionized Taurine-Conjugated Bile Salts Depends upon Bile Salt Concentration, Hydrophobicity, and Membrane Cholesterol Content // Biochemistry 1997. V. 36.P. 11444-11451.

137. El Babili M., Brichon G., Zwingelstein G. Sphingomyelin metabolism is linked to salt transprt in the gills of euryhaline fish // Lipids, 1996. V. 31. No 4. P. 385-392.

138. Eriksson H., Taylor W., Sjovall J. Occurrence of sulfated 5a-cholanoates in rat bile // J. Lipid Res. 1978. V. 19. P. 177 186.

139. Evrard E., Janssen G. Gas-liquid chromatographic determination of human fecal bile acids // J. Lipid Res. 1968. V. 9. P. 226-236.

140. Felton S.P., Luzzana U. Vitamin С lost during adaptation to salt water. Ascorbic acid and ascorbyl-2-sulphate measured in chinook salmon,

141. Oncorhinchus tohawytscha (Walbaum) // Aquacult. Res. 1998. V. 29. No 8. P. 609-610.

142. Flicker G., Wossner R., Drewe J., Flicker R., Boyer J.L. Enterohepatic circulation of scymnol sulfate in an elasmobranch, the little skate (Raja erinacea) // Am. J. Physiol. 1997. V. 273. Pt 1. P. G1023-1030.

143. Fujino Т., Une M., Imanaka Т., Inoue K., Nishimaki-Mogami T. Structure-activity relationship of bile acids and bile acid analogs in regard to FXR activation // J. Lipid Res. 2004. V. 45. No 1. P. 132-138.

144. Gilmour C.C., Henry E.A. Mercury methylation in aquatic systems affected by acid deposition // Environ. Pollut. 1991. V. 71. No 2-4. P. 131-169.

145. Gonzalez F.J. Molecular genetics of the P450 superfamily // Pharmacol. Ther. 1990. V.45.P. 1-38.

146. Grant J.K. Lipids: Steroid Metabolism // Comparative Biochemistry / ed. by M. Florkin and H.S. Mason, v. IIIA, New York and London. 1962. P. 163-204.

147. Grosell, M., O'Donnell M. J., Wood С. M. Hepatic versus gallbladder bile composition: in vivo transport physiology of the gallbladder in rainbow trout // Am. J. Physiol. Regulatory Integrative Сотр. Physiol. 2000. V. 278. P. R1674-R1684.

148. Grundin R., Moldeus P., Orrenius S., Borg K.O., Skanberg I., Von Bahr C. The possible role of cytochrome P-450 in the liver "first pass elimination" of a beta-receptor blocking drug // Acta Pharmacol. Toxicol. (Copenh.). 1974 V. 35. No 3. P. 242-260.

149. Hagey L.R., Crombie D.L., Espinosa E., Carey M.C., Igimi H., Hofmann A.F. Ursodeoxycholic acid in the Ursidae: biliary bile acids of bears, pandas, and related carnivores // J. Lipid Res. 1993. V. 34. No 11. P. 1911-1917.

150. Hagey L.R., Schteingart C.D., Rossi S.S., Ton-Nu H.T., Hofmann A.F. An N-acyl glycyltaurine conjugate of deoxycholic acid in the biliary bile acids of the rabbit// JLipidRes. 1998. V.39.No 11. P. 2119-2124.

151. Hagey L.R., Schteingart C.D., Ton-Nu H-T., Hofmann A.F. A novel primary bile acid in the Shoebill stork and herons and its phylogenetic significance // J. Lipid Res.2002. V. 43. P. 685-690.

152. Haney D.C. Osmoregulation in the sheepshead minnow, Cyprinodon variegates: Influence of a fluctuating salinity regime // Estuaries. V. 22. No 4, 1999. P. 1071-1077.

153. Haslewood G.A.D. Bile salt evolution // J. Lipid Res. 1967. V. 8. P. 535550.

154. Haslewood G.A.D., Wootton I.D.P. Comparative Studies of Bile Salts. I. Preliminary survey // Biochem. J. 1950. V. 47. P. 384-395.

155. Hiraoka, Т., Kohda Т., Kosaka D., Yamauchi Т., Kihira K., Kuramoto K., Hoshita Т., Kajiyama G. Identification of bile alcohols in rat bile // J. Lipid Res. 1989. V. 30. P. 1889-1893.

156. Hofmann A.F, Roda A. Physicochemical properties of bile acids and their relationship to biological properties: an overview of the problem // J. Lipid Res. 1984. V. 25. No 13. P. 1477-1489.

157. Hollander D. Retinol lymphatic and portal transport: influence of pH, bile, and fatty acids // Am. J. Physiol. 1980. V. 239. No 3. P. G210-214.

158. Home L., Curtis L.N. The effect of pH on development of eggs of the Japanese Medaka (Oryzia latipes) // J. E. Mitchell Sci. Soc. 1999. V. 115. No 3. P. 176.

159. Hughes G.M. Effects of low environmental pH in the presence of aluminium on filtration properties of the blood at Atlantic salmon (Salmo slsr L.) // Acta boil. Hung, 1993. V. 44. No 2-3. P. 223 230.

160. Huijghebaert S.M, Hofmann A.F. Influence of the amino acid moiety on deconjugation of bile acid amidates by cholylglycine hydrolase or human fecal cultures. J. Lipid Res. 1986. V. 27. No 7. P. 742-52

161. Ishibashi S., Schwarz M., Frykman P.K., Herz J., Russell D.W. Disruption of Cholesterol 7a-Hydroxylase Gene in Mice // J. Biol. Chem. 1996. V. 271. No 30. P. 18017-18023.

162. Ishikawa H., Nakashima Т., Inaba K., Mitsuyoshi H., Nakajima Y., Sakamoto Y., Okanoue Т., Kashima K, Seo Y. Proton magnetic resonance assay of total and taurine-conjugated bile acids in bile // J. Lipid Res. 1999. V. 40. P. 1920-1924.

163. Karlaganis G., Bradley S.E., Boyer J.L., Batta A.K., Salen G., Egestad В., Sjovall J. A bile alcohol sulfate as a major component in the bile of the small skate (Raja erinacea) //J. Lipid Res. 1989. V. 30. P. 317-322.

164. Khan R.A. Experimental transmission, development, and effects of a parasitic copepod, Lernaeocera branchialis, on Atlantic cod, Gadus morhua // J Parasitol. 1988. V. 74. No 4. P. 586-599.

165. Kibe, A., Nakai S., Kuramoto Т., Hoshita T.Occurrence of bile alcohols in the bile of a patient with cholestasis // J. Lipid Res. 1980. V. 21. P. 594-599.

166. Kihira K., Akashi Y., Kuroki S., Yanagisawa J., Nakayama F., Hoshita T. Bile salts of the coelacanth, Latimeria chalumnae II J. Lipid Res. 1984. V. 25. P. 1330-1336.

167. Kirilenko V.N., Gregoriadis G. Fat soluble vitamins in liposomes: studies on incorporation efficiency and bile salt induced vesicle disintegration // J. Drug. Target. 1993. V. 1. No 4. P. 361-368.

168. Kliewer S.A., Goodwin В., Willson T.M. The Nuclear Pregnane X Receptor: A Key Regulator of Xenobiotic Metabolism // Endocrine Reviews. 2002. V. 23. P. 687-702.

169. Kliewer, S.A., Willson T.M. Regulation of xenobiotic and bile acid metabolism by the nuclear pregnane X receptor // J. Lipid Res. 2002. V. 43. P. 359-364

170. Krisans S. K., Thompson S.L. Pena L. А., Кок E., Javitt N.B. Bile acid synthesis in rat liver peroxisomes:metabolism of 26-hydroxycholesterol to 3P-hydroxy-5-cholenoicacid // J. Lipid Res. 1985. V. 26. P. 1324-1332.

171. Kubaska W.M, Gurley E.C., Hylemon P.B., Guzelianj P.S., Vlahcevic Z.R. Absence of Negative Feedback Control of Bile Acid Biosynthesis in Cultured Rat Hepatocytes // J. Biol. Chem. 1985. V. 260. No. 25. P. 13459-13463.

172. Labourdenne S., Brass O., Ivanova M., Cagna A., Verger R. Effects of Colipase and Bile Salts on the Catalytic Activity of Human Pancreatic Lipase. A Study Using the Oil Drop Tensiometer // Biochemistry 1997, v. 36. P. 34233429.

173. Lack L. Properties and biological significance of the ileal bile salt transport system // Environ Health Perspect. 1979. V. 33. P. 79-90.

174. Lange R. Isoosmotic intracellular regulation // Nytt. mag. zool., 1968. V. 16. No l.P. 1-13.

175. Laqueux R. Presence de larves plerocestoides de Diphyllobothrium (Cestode), sur la truite de Quebec // Natur. Canad. 1966, v. 23, No 4. P. 440441.

176. Laurent P., Parry S.F. Effects of Cortisol on gill chloride cell morphology and ionic uptake in the freshwater trout, Salmo gairdneri II Cell Tissiue Res. 1989. V. 250. P. 429-442.

177. Li W.,. Scott A.P., Siefkes M.J., Honggao Y., Liu Q., Yun S.-S., Gage D.A. Bile Acid Secreted by Male Sea Lamprey That Acts as a Sex Pheromone // Science. 2002. V. 296. P. 138-141.

178. Li-Hawkins J., GafVels M., Olin M., Lund E.G., Andersson U., Schuster G., Bjorkhem I., Russell D.W., Eggertsen G. Cholic acid mediates negative feedback regulation of bile acid synthesis in mice // J. Clin. Invest. 2002. V. 110. No 8. P. 1191-1200.

179. Liu S., Dixon K. Induction of mutagenic DNA damage by chromium (VI) and glutathione // Environ Mol Mutagen. 1996. V. 28. No 2. P. 71-79.

180. Lowry R.R. Ferric chloride spray detector for cholesterol and cholesteryl esters on thin-layer chromatograms // J. Lipid Res. 1968. V.9. P. 397.

181. Macrides T.A., Shihata A., Kalafatis N., Wright P.F. A comparison of the hydroxyl radical scavenging properties of the shark bile steroid 5 beta-scymnol and plant pycnogenols // Biochem. Mol. Biol. Int. 1997. V. 42. No 6. P. 12491260.

182. Maislos M., Shany S. Bile salt deficiency and the absorption of vitamin D metabolites. In vivo study in the rat // Isr. J. Med Sci. 1987. V. 23. No 11. P. 1114-1117.

183. Martin K.O., Budai K., Javitt N.B. Cholesterol and 27-hydroxycholesterol 7a-hydroxylation: evidence for two different enzymes // J. Lipid Res. 1993. V. 34. P. 581-588.

184. Masui T. The synthesis of sterobile acids. XXXV. Formation of bile acids from cholesterol in the organisms of Rana catesbiana // J. Biochem. 1961. V. 49. No 3. P. 211-216.

185. Mazel P. Experiments Illustrating Drug Metabolism In Vitro // Fundamental of Drug Metabolism and Drug Disposition, Baltimore: The Williams & Wilkins Company. 1972. Chapter 27. P. 546 582.

186. McCormick S.D. Hormonal control of gill Na+-K+-ATPase and chloride cell function // Cellular and Molecular Approaches to Fish Ionic Regulation. San Diego: Acad. Press. 1995. P. 285-315.

187. Meier P.J., Stieger B. Bile salt transporters // Annu. Rev. Physiol. 2002. V. 64. P. 635-661.

188. Momsen W.E., Brockman H.L. Inhibition of pancreatic lipase В activity by taurodeoxycholate and its reversal by colipase // J. Biol. Chem. 1976. V. 251. No 2. P. 384-388.

189. Moore David D. Does loss of bile acid homeostasis make mice melancholy? // J. Clin. Invest. 2002. No 10. P. 1067-1069.

190. Moore L.B., Parks D.J., Jones S.A., Bledsoe R.K., Consler T.G., Stimmel J.B., Goodwini В., Liddlei C., Blanchard S.G., Willson T.M., Collins J.L., Kliewer S.A. Orphan Nuclear Receptors Constitutive Androstane Receptor and

191. Pregnane X Receptor Share Xenobiotic and Steroid Ligands // J. Biol. Chem. 2000. V. 275. No. 20. P. 15122-15127.

192. Moutou K.A., Burke M.D., Houlihan D.F. Hepatic P-450 monooxygenase response in rainbow trout (Oncorhynchus my kiss (Walbaum)) administered aquaculture antibiotics // Fish Physiology and Biochemistry 1998. V. 18. P. 97106.

193. Mumtaz M.M., Tully D.B., El-Masri H.A., De Rosa C.T. Gene Induction Studies and Toxicity of Chemical Mixtures // Environ. Health Perspect. 2002. V. 110. Suppl 6. P. 947-956.

194. Myant N.B., Mitropoulos K.A. Cholesterol 7a- hydroxylase // J. Lipid Res. 1977. V. 18. P. 135-154.

195. Narayanan V. S., Storch J. Fatty Acid Transfer in Taurodeoxycholate Mixed Micelles // Biochemistry. 1996. V. 35. P. 7466-7473.

196. Navarro-Blasco I., Alvarez-Galindo J.I. Aluminium content of Spanish infant formula // Food Addit. Contam. 2003. V. 20. No 5. P. 470-481.

197. Nehru В., Sidhu P. Behavior and neurotoxic consequences of lead on rat brain followed by recovery If Biol. Trace Elem. Res. 2001. V. 84. No 1-3. P. 113-121

198. Ninomiya R, Matsuoka K, Moroi Y. Micelle formation of sodium chenodeoxycholate and solubilization into the micelles: comparison with other unconjugated bile salts.Biochim Biophys Acta. 2003. V. 1634. No 3. P. 116125.

199. Norlin M., A. Toll I. Bjorkhem, Wikvall K. 24-Hydroxycholesterol is a substrate for hepatic cholesterol 7a-hydroxylase (CYP7A) // J. Lipid Res. 2000. V.41.P. 1629-1639.

200. Noto H., Matsushita M., Koike M., Takahashi M., Matsue H., Kimura J., Todo S. Effect of High Concentrations of Bile Acids on Cultured Hepatocytes // Artificial Organs. 1998. V. 22. No 4. P. 300-307.

201. Ogawa H., Mink J., Hardison W.G., Miyai K. Alkaline phosphatase activity in hepatic tissue and serum correlates with amount and type of bile acid load // Lab. Invest. 1990. V. 62. No 1. P. 87-95.

202. Omland E., Aksnes J., Mathisen O. Effect of phlorizin on hepatic bile production before and during glucose infusion // Scand. J. Gastroenterol. 1991. V. 26. No 6. P. 638-644.

203. Pacifici G.V., Fracchia G.N. Advances in Drug Metabolism in Man / Ed. Pacifici G.V., Fracchia G.N. Brussels; Luxemborg: Europ. Comis. 1995. 834 p.

204. Pandak W.M., Vlahcevic Z.R., Chiang J.Y.L., Heuman D.M., Hylemon P.B. Bile acid synthesis. VI. Regulation of cholesterol 7a-hydroxylase by taurocholate and mevalonate // J. Lipid Res. 1992. V. 33. P. 659-668.

205. Pandak W.M., Ren S., Marques D., Hall E., Redford K., Mallonee D., Bohdan P., Heuman D., Gil G., and Hylemon P. Transport of Cholesterol into

206. Mitochondria Is Rate-limiting for Bile Acid Synthesis via the Alternative Pathway in Primary Rat Hepatocytes // J. Biol. Chem. 2002. V. 277. No 50. P. 48158-48164.

207. Pandak, W.M., Heuman D.M., Hylemon Р.В., Vlahcevic Z. R. Regulation of bile acid synthesis. IV. Interrelation-ship between cholesterol and bile acid biosynthesis pathways // J. Lipid Res. 1990. V. 31. P. 79-90.

208. Pasqualini E., Caillol N., Valette A., Lloubes R., Verine A., Lombardo D. Phosphorylation of the rat pancreatic bile-salt-dependent lipase by casein kinase II is essential for secretion // Biochem J. 2000. V. 345. Pt 1. P. 121-128.

209. Perry S.F., Fryer J.N. Proton pumps in the fish gill and kidney // Fish Physiology and Biochemistry. 1997. V. 17. P. 363-369.

210. Porter T.D., Coon M.J. Cytochrome P-450. Multiplicity of isoforms, substrates, and catalytic and regulatory mechanisms // J. Biol. Chem. 1991. V. 266. No 21. P. 13469-13472.

211. Potts W.T.W. The inorganic composition and amino acid composition of some lamellibranch muscles //J. Exp. Biol. 1958. V. 35. No 4. P. 749-764.

212. Powell A.A., Larue J.M., Batta A.K., Martinez J.D. Bile acid hydrophobicity is correlated with induction of apoptosis and/or growth arrest in HCT116 cells // Biochem. J. 2001. V. 356. P. 481-486.

213. Redinger R.N. The economy of the enterohepatic circulation of bile acids in the baboon. 2. Regulation of bile acid synthesis by enterohepatic circulation of bile acids // J. Lipid Res. 1984. V. 25. P. 437-447.

214. Reinke C.M., Breitkreutz J., Leuenberger H. Aluminium in over-the-counter drugs: risks outweigh benefits? // Drug Saf. 2003. V. 26. No 14. P. 1011-1025.

215. Rosenfeld R.S., Hellman L. The relation of plasma and biliary cholesterol to dile acud synthesis in man // J. Clin. Investig. 1959, v.38, No 8. P. 1334-1338.

216. Rudling M., Parini P., Angelin B. Growth Hormone and Bile Acid Synthesis (Key Role for the Activity of Hepatic Microsomal Cholesterol 7a-hydroxylase in the Rat.) // J. Clin. Invest. 1997. V. 99. P. 2239-2245.

217. Schludermann C., Konecny R., Laimgruber S., Lewis J.W., Schiemer F., Chovanec A., Sures B. Fish macroparasites as indicators of heavy metal pollution in river sites in Austria // Parasitology. 2003. V. 126. P. S61-69.

218. Schoffeniels E. Adaptations with respect to salinity // Biochem. Soc. Symp. 1976. P. 179-104.

219. Schreiber A.M., Specker J.L. Metamorphosis in the Summer Flounder, Paralichthys dentatus: Thyroidal Status Influences Salinity Tolerance // J. Exp. Zool. 1999. V. 284. P. 414-424.

220. Schwarz M., Wright A. C., Davis D. L., Nazer H., Bjorkhem I., Russell D. W. The bile acid synthetic gene 3b-hydroxy-D 5 -C27-steroid oxidoreductase is mutated in progressive intrahepatic cholestasis // J. Clin. Invest. 2000. V. 106. P. 1175-1184.

221. Scott S.S., Waxman D.J. Hepatic P-450 Cholesterol 7a-Hydroxylase. J. Biol. Chem. 1990. V. 265. No. 25. P. 15090-15095.

222. Sen A., Arinc E. Further immunochemical and biocatalytic characterization of CYP1A1 from feral leaping mullet liver (Liza saliens) microsomes // Сотр. Biochem. Physiol. С Toxicol. Pharmacol. 2000. V. 126. No 3. P. 235-44.

223. Seth R., Yang S., Choi S., Sabean M., Roberts E.A. In vitro assessment of copper-induced toxicity in the human hepatoma line, Hep G2 // Toxicol. In Vitro. 2004. V. 18. No 4. P. 501-509.

224. Shattuck K.E., Grinnell C.D., Rassin D.K. Amino acid infusion induce reversible, dose-related decreases in bile flow in the isolated rat liver // JPEN J. Parenter. Enteral. Nutr. 1993. V. 17. No 2. P. 171-176.

225. Shaw J. Osmoregulation in the muscle fibres of Carcinus maenas I I J. Exp. Biol. 1958. V. 35. No 4. P. 920-929.

226. Shefer S., Hauser S., Mosbach E.H. 7-alpha-hydroxylation of cholestanol by rat liver microsomes // J. Lipid Res. 1968. V. 9. No 3. P. 328-33.

227. Shi D., Wang W.X. Understanding the differences in Cd and Zn bioaccumulation and subcellular storage among different populations of marine clams // Environ Sci. Technol. 2004. V. 38. No 2. P. 449-456.

228. Shikano Т., Fujio Y. Changes in salinity tolerance and branchial chloride cells of newborn guppy during freshwater and seawater adaptation // J. Exp. Tool. 1999. V. 284. No 2. P. 137 146.

229. Shim W.J., Jeon J.K., Hong S.H., Kim N.S., Yim U.H., Oh J.R., Shin Y.B. Accumulation of tributyltin in olive flounder, Paralichthys olivaceus: its effect on hepatic cytochrome P450 // Arch. Environ. Contam. Toxicol. 2003. V. 44. No 3. P. 390-397.

230. Siefkes M.J., Li W. Electrophysiological evidence for detection and discrimination of pheromonal bile acids by the olfactory epithelium of female sea lampreys ( Petromyzon marinus) // J. Сотр. Physiol A. 2004. V. 190. P. 193 -199.

231. Siegfried C.M., Elliott W.H. Separation of bile acids of rat bile by thin-layer chromatography // J. Lipid Res. 1968. V. 9. P. 394-395.

232. Sinai C.J., Yoon M., Gonzalez FJ. Antagonism of the Actions of Peroxisome Proliferator-activated Receptor-a by Bile Acids // J. Biol. Chem. 2001. V. 276. No. 50. P. 47154-47162.

233. Siperstein M.D., Chaikoff J.L. Conversion of cholesterol to bile acids // Fed. Proc., 1955. V. 14. No 3. P. 767-774.

234. Sippel C.J, Dawson P.A, Shen T, Perlmutter D.H. Reconstitution of bile acid transport in a heterologous cell by cotransfection of transporters for bile acid uptake and efflux // J. Biol. Chem. 1997. V. 272. No 29. P. 18290-18297.

235. Small S.M. 1992 Aspen Bile Acid/Cholesterol/Lipoprotein Conference. Report of a conference // J. Lipid Res. 1993. V. 34. P. 680-687.

236. Smirlis D., Muangmoonchai R., Edwards M., Phillipsi I.R., Shephard E.A. Orphan Receptor Promiscuity in the Induction of Cytochromes P450 by Xenobiotics J. Biol. Chem. 2001. V. 276. No. 16. P. 12822-12826.

237. Sola S., Brito M.A., Brites D., Moura J. J. G., Rodrigues C.M. P. Membrane structural changes support the involvement of mitochondria in the bile salt-induced apoptosis of rat hepatocytes // Clinical Science. 2002. V. 103. P. 475-485.

238. Spry D.J., Wiener J.G. Metal bioavailability and toxicity to fish in low-alkalinity lakes: A critical review // Environ. Pollut. 1991. V. 71. No 2-4. P. 243-304.

239. Sreejayan N., Von Ritter C. Effect of bile acids on lipid peroxidation: the role of iron // Free Radic Biol Med. 1998. V. 25. No 1. P. 50-56.

240. Stegeman J.J., Chevion M. Sex differences in cytochrome P-450 and mixed-function oxygenase activity in gonadally mature trout // Biochem. Pharmacol. 1980. V. 29. No 4. P. 553-558.

241. Steinberg D. Aspen Bile Acid/Cholesterol Conference 1991.Report of a Conference // J. Lipid Res. 1992. V. 33. P. 937 942.

242. Steiner R.D., Linck L.M., Flavell D.P., Lin D.S., Connor W.E. Sterol balance in the Smith-Lemli-Opitz syndrome: reduction in whole body cholesterol synthesis and normal bile acid production // J. Lipid Res. 2000. V. 41. P. 1437-1447

243. Stravitz R.T., Vlahcevic Z.R., Gurley E.C., Hylemon P.B. Repression of cholesterol 7a-hydroxylase transcription by bile acids is mediated through protein kinase С in primary cultures of rat hepatocytes // J. Lipid Res. 1995. V. 36. P. 1359-1369

244. StrippR., Heit M., Bidanset J. Trace element accumulation in the tissues of fish from lakes with different pH values // Water air and soil polutant. 1990. V. 51. No 1-2. P. 75-87.

245. Strouhal M., Kizek R., Vacek J., Trnkova L., Nemec M. Electrochemical study of heavy metals and metallothionein in yeast Yarrowia lipolytica // Bioelectrochemistry. 2003. V. 60. No 1-2. P. 29-36.

246. Sundin L., Nilsson G.E. Branchial and Circulatory Responses to Serotonin and Rapid Ambient Water Acidification in Rainbow Trout. J. Exp. Zool. 2000. V. 287. P. 113-119.

247. Suns К., Hitchin G. Interrelationships between mercury levelsin yellow perch, fish condition and water quality // Water air and soil polutant. 1990. V. 50. No 3-4. P. 255-265.

248. Swallwood W.M., Derrickson M.B. The development of the carp Cyprinus carpio. J. Morphol. 1933. V. 55. P. 217-231.

249. Swanson C. Interactive Effects Of Salinity On Metabolic Rate, Activity, Growth And Osmoregulation In The Euryhaline Milkfish (Chanos Chanos) The Journal of Experimental Biology 1998. V. 201. P. 3355-3366

250. Tagliari K.C., Cecchini R., Rocha J.A., Vargas V.M. Mutagenicity of sediment and biomarkers of oxidative stress in fish from aquatic environments under the influence of tanneries // Toxicol. In Vitro. 2004. V. 18. No 4. P. 501509.

251. Takahito S., Yoshihisa F. Changes in salinity tolerance and branchial chloride cells of newborn guppy during freshwater and seawater adaptation // J. Exp. Tool. 1999. V. 284. No 2, P. 137 146

252. Takei Т., Tanakadate A. Role of drinking in seawater adaptation in eels: Abstr. 69th Annu. Meet. Zool. Soc. Jap. Hirosima. Sept. 26 28,1998 // Zool. -1998. Suppl. 15. P. 112.

253. Takeshita A., Taguchi M., Koibuchi N., Ozawa Y. Putative Role of the Orphan Nuclear Receptor SXR (Steroid and Xenobiotic Receptor) in the Mechanism of CYP3A4 Inhibition by Xenobiotics // J. Biol. Chem. 2002. V. 277. No. 36. P. 32453-32458.

254. Tammi J., Appelberg M., Beier U., Hesthagen Т., Lappalainen A., Rask M. Fish status survey of Nordic lakes: effects of acidification, eutrophication and stocking activity on present fish species composition // Ambio. 2003. V. 32. No 2. P. 98-105

255. Topashka-Ancheva M., Metcheva R., Teodorova S. Bioaccumulation and damaging action of polymetal industrial dust on laboratory mice Mus musculus alba .II. Genetic, cell, and metabolic disturbances. Environ. Res. 2003. V. 92. No 2. P. 152-160.

256. Tsou T.C., Lin R.J., Yang J.L. Mutational spectrum induced by chromium (III) in shuttle vectors replicated in human cells: relationship to Cr (III)-DNA interactions // Chem. Res. Toxicol. 1997. V. 10. No 9. P. 962-970.

257. Ullrich K.J., Rumrich G., Kloss. Transport of inorganic substances in the renal proximal tubule // Klin. Wochenschr. 1982. V. 60. No 19. P. 1165-1172.

258. Underhay J.R., Burka J.F. Effects of pH on contractility of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) intestinal muscle in vitro I I Fish Physiology and Biochemistry. 1997. V. 16. P. 233-246.

259. Van Hattum В., De Voogt P., Van den Bosch L., Van Straalen N.M., Joosse E.N., Go vers H. Bioaccumulation of cadmium by the freshwater isopod Asellus aquaticus (L.) from aqueous and dietary sources // Environ. Pollut. 1989. V. 62. No 2-3. P. 129-151.

260. Vlahcevic Z.R., Schwartz C.C., Gustafsson J., Halloran L.G., Danielsson H., Swell L. Biosynthesis of bile acids in man. Multiple pathways to cholic acid and chenodeoxycholic acid // J. Biol. Chem. 1980. V. 255. No 7. P. 2925-2933.

261. Voitkun V., Zhitkovich A., Costa M. Cr(III)-mediated crosslinks of glutathione or amino acids to the DNA phosphate backbone are mutagenic in human cells // Nucleic Acids Res. 1998. V. 26. No 8. P. 2024-2030.

262. Weinman S.A., Carruth M.W., Dawson P.A. Bile acid uptake via the human apical sodium-bile acid cotransporter is electrogenic // J. Biol. Chem. 1998. V. 273. No 52. P. 34691-34695.

263. Whitney J.O., Vessey D.A. Inability of cholylglycine hydrolase to cleave the amide bond of tauronorcholic acid // Steroids. 1984, v. 44, No 1. P.77-83.

264. Wood C., McDonald D. The physiology of acid aluminium stress in trout // Ann. Soc. Roy. Zool. Belg. 1987. V. 117. No 1. P. 399-410.

265. Wootton I.D., Wiggins H.S. Studies in the bile acids. 2. The non-ketonic acids of human bile // Biochem J. 1953. V. 55. No 2. P. 292-294.

266. Zia S., McDonald D.G. Role of the gills and gill chloride cells in metal uptake in the freshwater adapted rainbow trout, Oncorhynchus mykiss // Can. J. Fish and Aquat. Sci. 1994. V. 51. No 11. P. 2482 2492.

Информация о работе

Морозов, Дмитрий Николаевич
кандидата биологических наук
Петрозаводск, 2004
ВАК 03.00.04

Диссертация

Функциональные особенности желчных кислот у рыб - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы