Функциональное состояние тромбоцитов, вышедших из криоанабиоза (-40[О]С)

Яленский, Андрей Юрьевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Функциональное состояние тромбоцитов, вышедших из криоанабиоза (-40[О]С)
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Функциональное состояние тромбоцитов, вышедших из криоанабиоза (-40[О]С)"

На правах рукописи

ЯЛЕНСКИЙ Андрей Юрьевич

ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ТРОМБОЦИТОВ, ВЫШЕДШИХ ИЗ КРИОАНАБИОЗА (-40°С)

03 00 13 - физиология

14 00 29 - гематология и переливание крови

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Киров 2007

ООЗОТ124В

003071246

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Сведенцов Евгений Павлович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук Киселев Сергей Васильевич

доктор медицинских наук Поздеев Николай Маркович

Ведущая организация Челябинская государственная медицинская академия

Защита состоится «28» M-¿X-JL 2007 года в 42 час на заседании диссертационного совета К 208 036 01 при ГОУВПО «Кировская государственная медицинская академия» по адресу. 610027, г Киров, ул Карла Маркса, 112

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Кировской государственной медицинской академии по адресу 610027, г Киров, ул Карла Маркса, 137

Автореферат разослан «¿5"» _ _2007 года

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат медицинских наук, доцент

С В Хлыбова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы

Глубокому исследованию проблемы влияния холодового анабиоза на биологические объекты посвящены десятилетия (Ре Л, 1962, Лозина-Лозинский Л К , 1972, Голдовский А М , 1986, Сведенцов Е П и соавт, 2006) Интерес к этой проблеме обусловлен тем, что в состоянии холодового анабиоза в живых системах обратимо подавляются или частично затормаживаются метаболические и физиологические процессы (Белоус А М, Грищенко В И , 1994), что способствует долгосрочному хранению клеточных суспензий в жизнеспособном состоянии и реализации их запасов на практике в связи с возникающими потребностями (Цуцаева А А , 1983, Сведенцов Е П , 1999)

Характерной особенностью современной клинической трансфузиологии является все возрастающая потребность в компоненте крови - тромбоцитном концентрате (ТК) (Компанией А М , 1992, Rebulla Р , 1993, Аграненко В А и соавт, 1995, Мельникова ВН и соавт, 2003) ТК используется для профилактики и лечения угрожающей жизни тромбоцитопенической кровоточивости, обусловленной современными протоколами высокодозной химиотерапии больных с гематологическими и онкологическими заболеваниями, радиационным облучением, воздействием миелотоксических средств, повышенным разрушением тромбоцитов при экстракорпоральном кровообращении или повышенным потреблением кровяных пластинок при синдроме диссеминированного внутрисосудистого свертывания (Ковалева Л Г 1990, Абдулкадыров К М , 1994, 2004, Owens М et al, 1994, Petz L 1996, Wautier J L , 2002, Мельникова В H и соавт, 2003, Brand A et al, 2006)

Возрастающая потребность в ТК, особенно в экстренных случаях, требует создание их полноценных запасов Поэтому большую актуальность в последние годы приобрел вопрос долговременного хранения тромбоцитов, который еще далек от окончательного разрешения

По данным литературы (Kaplan С , 1993), известно, что в кровяном русле тромбоциты обладают коротким периодом жизни (8-10,5 дней) Существующие способы консервирования кровяных пластинок при положительных температурах позволяют сохранять клетки в биологически полноценном состоянии крайне непродолжительный срок - 3-5 суток (Компанией А М 1992, Holme S et al, 1994, Vucetic D et al, 2000, Meer P et al, 2005)

Наиболее перспективным для осуществления длительного хранения тромбоцитов является применение криоанабиоза (Захаров В В, 1996, Сведенцов Е П , 2004, Кузнецов К В , 2005)

Использование жидкоазотных технологий с введением тромбоцитов в глубокий криоанабиоз (-136°С--196°С), при котором останавливается внутриклеточный метаболизм и все фракции воды полностью замерзают, но сохраняются орбитальные переходы электронов в атомах молекул биообъекта (Цуцаева АА, 1983), ввиду высокой дороговизны не нашло широкого применения и востребовано лишь в некоторых крупных медицинских центрах (Кузнецов К В , 2006)

Совершенствование методов длительного хранения выделенных тромбоцитов при отрицательных температурах в функционально сохранном состоянии в значительной степени зависит от успехов в создании криозащитных сред и экономичного электрорефрижераторного оборудования, доступного для широкого круга учреждений физиологического, биологического и медицинского профиля Все это обуславливает необходимость поиска эффективного, вместе с тем простого и надежного метода введения тромбоцитов в криоанабиоз, обеспечивающего щадящие режимы замораживания, морфологическую сохранность, физиологическую полноценность кровяных пластинок под защитой хладоограждающего раствора, исключающего его отмывание после оттаивания Этим требованиям отвечает охлаждение ТК при умеренно-низкой температуре (-40°С), при которой внеклеточная, свободная и частично связанная внутриклеточные фракции воды замерзают, а фиксированная фракция воды остается в незамерзшем состоянии, и метаболизм в клетках замедлен (Сведенцов Е П, 2004) Данный метод осуществляют в электрических морозильниках с применением нетоксичного криозащитного раствора, что может быть подтверждено физиологическими экспериментами на животных (определение веса тела, температуры тела, общего поведенческого состояния, явлений, отражающих общее физиологическое состояние животных) при переливании тромбоцитов, вышедших из криоанабиоза

Сведений об устойчивости тромбоцитов к повреждающим условиям криоанабиоза при -40°С в научной литературе не обнаружено

Цель исследования - определить устойчивость к холодовому стресс-воздействию и физиологические особенности тромбоцитов, перенесших криоанабиоз при умеренно-низкой температуре (-40°С), введение в который проводится по экспоненциальной программе под защитой нового хладоограждающего раствора, не требующего отмывания, исследовать влияние вышедших из криоанабиоза аутологичных тромбоцитов на организм экспериментальных животных

Задачи исследования:

1 Оценить в сравнительных исследованиях хладоограждающие свойства 4-х вариантов разработанного раствора, ингредиентами которого являются гексаметиленбистетраоксиэтилмочевина (ГМБТОЭМ), натрия фумарат и кислота лимонная, и предназначенных для создания функциональной и морфологической устойчивости тромбоцитов к холодовому стресс-воздействию, для определения оптимального его варианта, сохраняющего наибольшее количество функционально активных кровяных пластинок в условиях криоанабиоза (-40°С) в течение I суток Изучить сроки сохранности хладоограждающих свойств оптимального варианта данного раствора

2 Определить устойчивость к холодовому стресс-воздействию и физиологические свойства тромбоцитов, введенных в криоанабиоз по экспоненциальной программе замораживания с применением оптимального варианта хладоограждающего раствора и хранившихся при -40°С в течение 1210 суток, особенно исследовать реакцию на гипотонический шок тромбоцитов

после выхода из криоанабиоза, которая определяет приживляемость тромбоцитов после их введения в сосудистое русло

3 Исследовать в экспериментах на животных «острую», «хроническую» токсичность и пирогенность оптимального варианта хладоограждающего раствора и определить влияние размороженных аутологичных тромбоцитов, хранившихся в состоянии криоанабиоза (-40°С) с данным раствором в течение 24 часов, на организм экспериментальных животных (собак) Научная новизна

В экспериментальном исследовании впервые изучена физиологическая активность (адгезия, агрегация, реакция на гипотонический шок) тромбоцитов, перенесших криоанабиоз при -40°С, введение в который проводилось по экспоненциальной программе охлаждения и с использованием нового хладоограждающего раствора (патент №2230454 от 20 06 2004), включающего в конечной концентрации 5% ГМБТОЭМ, 0,95% натрия фумарата, 0,5% кислоты лимонной и бидистиллированную воду Впервые показано, что применение экспоненциальной программы и данного оригинального раствора позволяет предупредить криоповреждение их мембран и денатурацию внутриклеточных белков, приспособить кровяные пластинки к условиям криоанабиоза и сохранить на высоком уровне физиологические и морфологические свойства тромбоцитов, хранившихся 120 суток в условиях холодового стресс-воздействия при -40°С -Полученные результаты расширяют представление о механизмах криозащиты на клеточном уровне

Установлено, что переливание аутологичных тромбоцитов, вышедших из криоанабиоза (-40°С) с разработанным оптимальным вариантом хладоограждающего раствора, экспериментальные животные (собаки) переносят без возникновения каких-либо нарушений их исходного физиологического состояния не изменяется температура тела, поведение животных, отсутствуют явления, определяющие постгрансфузионные реакции и осложнения

Теоретическая и практическая значимость работы Получены доказательства и дано научное обоснование криозащитных свойств разработанного хладоограждающего раствора для тромбоцитов Данный раствор, ингредиентами в который включены вещества только отечественного производства ГМБТОЭМ - криопротектор с экзо- и эндоцеллюлярным действием, натрия фумарат - антигипоксант биоэнергетической направленности, кислота лимонная - антикоагулянт, является нетоксичным, апирогенным, при внутривенном введении с тромбоцитами его хорошо переносят экспериментальные животные, что свидетельствует о сохранности функциональных свойств тромбоцитов, вышедших из криоанабиоза при -40°С

следствие не возникает рекристаллизации во вне- и внутриклеточной воде, отрицательно влияющей на биообъект при введении его в криоанабиоз

Полученные данные о сохранении физиологических свойств тромбоцитов крови человека, благоприятно перенесших холодовое стресс-воздействие при замораживании до -40°С, свидетельствуют о том, что создан экономичный, доступный и эффективный метод (оптимальный вариант хладоограждающего раствора и экспоненциальная программа охлаждения) введения кровяных пластинок в криоанабиоз с целью их 120 суточного хранения в функционально полноценном состоянии

Это дало возможность прогнозировать теоретически и осуществлять практически хранение тромбоцитов в физиологически полноценном состоянии при охлаждении до -40°С в течении 4-х месяцев с разработанным хладоограждающим раствором (вариант №3)

На основании положительных данных, полученных в экспериментальных исследованиях по изучению «острой» и «хронической» токсичности, пирогенности разработанного хладоограждающего раствора (вариант №3), физиологической и морфологической полноценности кровяных пластинок, замороженных с ним, их благоприятной переносимости опытными животными дано заключение о возможности применения созданного метода криоконсервирования тромбоцитов в научных лабораториях криофизиологического, медицинского и биологического профиля

Основные положения, выносимые на защиту:

1 Разработан хладоограждающий раствор (вариант №3) для введения в криоанабиоз тромбоцитов, содержащий ГМБТОЭМ, натрия фумарат, кислоту лимонную и бидистиллированную воду, который нетоксичен, апирогенен и не требует отмывания перед внутривенным введением размороженного тромбоцитного концентрата

2 Тромбоциты, введенные в криоанабиоз при -40°С по экспоненциальной программе с предложенным хладоограждающим раствором (вариант №3), сохраняют на высоком уровне свои физиологические свойства после перенесенного холодового стресс-воздействия в течение 4 месяцев

3 Переливание ТК, замороженных с разработанным криозащитным раствором, благоприятно переносят в эксперименте крупные животные (собаки), что позволяет рекомендовать данный ограждающий раствор и экспоненциальную программу охлаждения кровяных пластинок для применения в научных лабораториях криофизиологического, медицинского и биологического профиля

Апробация работы и публикации

«Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (Киров, 2003) и объединенном заседании Кировского отделения Физиологического общества им И П Павлова и областного научного общества гематологов и трансфузиологов (Киров, 2007)

Публикации материалов исследования

По материалам диссертации опубликовано 8 печатных работ, из них 1 в рецензируемом журнале Получен патент на изобретение № 2230454 (РФ) от 20 06 2004 г

Личное участие автора в получении результатов

Автором разработан новый хладоограждающий раствор, определена морфологическая и функциональная сохранность клеток до замораживания и после оттаивания, исследована «острая» токсичность на лабораторных мышах, «хроническая» токсичность на лабораторных мышах и кроликах, на собаках изучена переносимость трансфузий размороженных аутологичных тромбоцитных концентратов, перенесших криоанабиоз при -40°С под защитой разработанного криозащитного раствора, проведен анализ и статистическая обработка полученных результатов

Диссертация выполнена в Федеральном государственном учреждении «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (директор д м н проф С Л Шарыгин), в лаборатории консервирования крови и тканей (рук д м н доцент А А Костяев)

Выражаю искреннюю благодарность научному руководителю, д м н профессору Е П Сведенцову за предоставление темы и помощь в подготовке диссертации, а также д м н доценту А А Костяеву, ученому секретарю института к м н доценту М Е Ковтуновой и заместителю директора по научной работе д м н профессору Г А Зайцевой, за содействие в выполнении диссертации

При выполнении работы в совместных исследованиях принимали участие сотрудники лаборатории патоморфологии крови (рук к м н ст н с Н С Федоровская, ст н с к м н |В М Новосадов[), лаборатории экспериментально-клинических исследований (рук к м н доцент Ю В Зиновьев, ветеринарные врачи - Л Е Рослякова, Р В Климова) ФГУ «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Росздрава» (директор д м н проф С Л Шарыгин), отделения контроля качества (заведующая Г А Гребенева), бактериологической лаборатории (заведующий А В Ветошкин) станции переливания крови ФГУ «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Росздрава» (главный врач В К Куноф), лаборатории криофизиологии (к б н , мне О О Зайцева), сотрудники отделения патогистологии Кировской областной клинической больницы (главный врач к м н В А Агалаков), сотрудник ГОУВПО КГМА заведующий кафедрой гистологии д м н, профессор В Б Зайцев, за что автор им признателен и глубоко благодарен

Объем и структура работы

Диссертация изложена на 128 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы с описанием материалов и методов исследования, главы с изложением результатов собственных исследований, главы, где обсуждаются результаты экспериментальных исследований, выводов, практических рекомендаций для научной работы и списка литературы, который включает 304 источника (128 отечественных и 176 зарубежных) В диссертации 24 таблицы, 7 рисунков

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа основана на материале лабораторно-экспериментальных исследований тромбоцитных концентратов (ТК), полученных из цельной крови доноров-добровольцев при 3--кратном тромбоцитаферезе Режимы центрифугирования на центрифуге «8огуе11» (1 цикл) I фаза - 1800об/мин (880g) в течение 8 мин - при температуре +22°С, II фаза 3500 об/мин(3300§) в течение 20 мин -при температуре +22°С, максимальное число циклов на одну процедуру - три, ТК заготовлены на консерванте цитроглюкофосфат (СЭР), находящемся в полимерном контейнере «Гемакон 300» или «Компопласт 300» в отделении гравитационной хирургии крови при клинике ФГУ «КНИИГиПК Росздрава» Полученные ТК в объеме 28,16±0,25мл смешивали 1 1 с одним из 4-х вариантов хладоограждающего раствора, содержащего криопротектор ГМБТОЭМ, антигипоксант фумарат натрия, антикоагулянт лимонную кислоту и бидистиллированную воду (таблица 1)

Таблица 1 Конечные концентрации ингредиентов 4-х вариантов хладоограждающего раствора после смешивания 1 1 с ТК

Номера вариантов раствора Ингредиенты вариантов раствора

ГМБТОЭМ, в% Натрия фумарат, в% Лимонная кислота, в%

I 5 0,55 0,40

2 5 0,75 0,45

3 5 0,95 0,50

4 5 1,15 0,55

Изучение стерильности серийных образцов хладоограждающего раствора проводили согласно Инструкции по контролю стерильности консервированной крови, ее компонентов, препаратов, консервированного костного мозга, кровезаменителей и консервирующих растворов (1995)

Испытания на сохранность хладоограждающего раствора осуществляли методом ускоренного старения («Временная инструкция по проведению работ с целью определения сроков годности лекарственных средств на основе метода ускоренного старения при повышенной температуре» - М , 1979)

Определение рН криоконсервантов и ТК проводили при 22°С стеклянными электродами на иономере ЭВ-74 (произведено 22 измерения)

Изучение криопротекторных свойств разработанного

хладоограждающего раствора при замораживании тромбоцитов до -40°С и оценку его влияния на морфофункциональные показатели кровяных пластинок in vitro в период эквилибрации проводили с растворами, содержащими конечные концентрации ингредиентов Образцы ТК замораживали в полимерных контейнерах «Компопласт» емкостью 300 мл Охлаждение проводили в 4000 мл ванне, заполненной 96% этиловым спиртом, охлажденным до -28°С, в аппарате «Криостат» (разработан Институтом проблем криобиологии и криомедицины HAH Республики Украина и ФГУ «КНИИГиПК Росздрава»), после достижения температуры -28°С контейнер с ТК переносили в камеру электроморозильника, охлажденную до -40°С Регистрацию программы вели по имитатору, используя прибор ГСП 04 по датчику ТСМ 3-02, установленному в одном из контейнеров с соответствующим вариантом хладоограждающего раствора с конечной концентрацией ингредиентов

Контейнеры с ТК, смешанными с вариантами хладоограждающего раствора №1, №2, №3, №4, хранили в электрическом морозильнике фирмы «Derby» (Дания) при температуре -40°С Оттаивание образцов проводили в 20-ти литровой водяной ванне при температуре воды +38°С в течение 25-40 секунд с покачиванием контейнера 3-4 раза в секунду до температуры +2°С

Исследование функциональной активности тромбоцитов проводили после выделения их из цельной крови, перед введением в криоанабиоз после 20-90 мин эквилибрации с испытуемыми вариантами хладоограждающего раствора (тест на цитотоксичность), а также после выхода из криоанабиоза

ТК оценивали по следующим показателям подсчет числа тромбоцитов до и после криоконсервирования осуществляли методом световой микроскопии в камере Горяева в двух параллельных пробах с вычислением концентрации (х109/л) и общего содержания (х10п) кровяных пластинок в ТК, ультраструктуру тромбоцитов изучали на электронных микроскопах «ЭВМ-100 АК», «ПЭМ-100» на ультратонких срезах при увеличениях 21700-50000 (ускоряющее напряжение 75 кв ), при этом применяли общепринятые методы проводки, кроме того, проводили морфометрический анализ ультраструктуры по Ллойду в описании Г Г Автандилова (1973), всего изучена 221 электронограмма

Физиологическую полноценность тромбоцитов оценивали путем определения адгезивности к стеклу по R Marx и S Derlath (1957), измерения АДФ-индуцированной, ристомицин-индуцированной агрегации

(фотометрический метод Born G, 1962), определения реакции на гипотонический шок по R Handin et al (1970)

Экспериментальные исследования выполнены на 171 животном в лаборатории, патофизиологии ФГУ «Кировский НИИ гематологии и переливания крови Росздрава» Для проведения экспериментов использованы 3 вида животных лабораторные белые мыши массой тела 19-20 г (100 исследований), кролики неальбиносы массой тела 2,3-2,9кг (68 исследований) и беспородные собаки массой 22-29 кг (3 исследования) - таблица 2

В экспериментах на 35 белых мышах по методике Госфармакопеи XI изучена «острая» токсичность разработанного оптимального хладоограждающего раствора для тромбоцитов

Исследования «хронической» токсичности по методике Госфармакопеи XI выполнены при внутривенном введении оптимального нового хладоограждающего раствора на белых мышах (25 мышей — опыт, 5 мышей -контроль), 13 кроликах (10 кроликов - опыт, 3 кролика - контроль)

Таблица 2 Виды и число животных, использованных в экспериментальных исследованиях

Виды животных Число животных

Мыши 100

Кролики 68

Беспородные собаки 3

Всего 171

При изучении функции печени определяли общий белок биуретовым методом на фотометре КФК-3 методом, альбумины - с помощью реакции с бромкрезиловым зеленым, аь а2, (3, у - глобулины методом электрофореза на бумаге Активность ферментов сыворотки крови - аспартатаминотрансферазы (АсАТ) и аланинаминотрансферазы (АлАТ) - определяли колориметрическим методом Райтмана-Френкеля (1976) Исследования проведены на 13 кроликах

Общий анализ крови проводили по общепринятой методике Выполнено 78 исследований Изучая функцию почек производили общий анализ мочи, определяли суточный диурез объемным методом Глюкозу крови экспериментальных животных определяли унифицированным глкжозо-оксидазным методом Исследования проведены на 13 кроликах

Электрокардиограммы записывали у 5 кроликов с помощью электрокардиографа ЭК-1Т-03 во втором стандартном отведении (произведено 10 исследований)

Изучение пирогенности хладоограждающего раствора проводили по методике Госфармакопеи XI на 45 кроликах

При исследовании нового хладоограждающего раствора на отсутствие гемолитического действия изучали уровень свободного гемоглобина в плазме крови гемоглобин-цианидным методом, осмотическую резистентность эритроцитов

Измерения среднего объема эритроцита, среднего содержания гемоглобина в эритроците и средней концентрации гемоглобина в эритроците произведены расчетным методом

Цифровые данные исследований подвергнуты статистической обработке с использованием критерия Стьюдента и компьютерной программы «Биостат» с вычислением среднего и стандартной ошибки среднего (различия считали достоверными при р<0,05) (Гланц С , 1998)

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Определение влияния вариантов ограждающих растворов на функциональное и морфологическое состояние тромбоцитов при их хранении в течение 24 часов

Для эффективного сохранения тромбоцитов при умеренно-низкой температуре (-40°С) были изучены 4 варианта хладоограждающего раствора с различным содержанием ингредиентов (см таблицу 1) с целью выбора оптимального

Изучение цитотоксичности вариантов хладоограждающего раствора осуществлялось через 20, 40, 60, 90 минут эквилибрации тромбоцитов с данными вариантами раствора при 20°С Изучение количества и жизнеспособности тромбоцитов в процессе эквилибрации с исследуемыми вариантами хладоограждающего раствора показало, что за 1,5 часа их контакта количество тромбоцитов в концентратах снижалось не достоверно от исходного уровня, агрегационная активность тромбоцитов подвергалась незначительному ингибированию Адгезивность и реакция на гипотонический шок (РГШ) значительно снижаются после 40-минутного контакта клеток с вариантами хладоограждающего раствора Экспозиция тромбоцитов с вариантами раствора в течение 20-ти минут не оказывала существенного влияния на тромбоциты и их функциональные показатели В качестве контроля во всех экспериментах использовали данные оценки функциональных и морфологических свойств тромбоцитов до контакта их с исследуемыми вариантами хладоограждающего раствора

Все варианты раствора обладают криозащитным действием, но различной степени выраженности Лучшие результаты по тестам in vitro (таблица 3) показали кровяные пластинки, перенесшие криоанабиоз (-40°С) с вариантом №3 криозащитного раствора, содержащего в конечной концентрации 5% ГМБТОЭМ, 0,95% натрия фумарата, 0,5% лимонной кислоты, остальное — вода для инъекций

При его применении сохраняется 88,60±1,12% клеток от исходного, а функциональные свойства составляют адгезивность 26,55+0,58%, агрегация АДФ-индуцированная 38,13±1,46%, агрегация ристомицин-индуцированная 40,40±1,37%, РГШ 28,70+1,53% Вместе с тем, у кровяных пластинок, замороженных с растворами, содержащими наименьшее и наибольшее количество натрия фумарата функциональная активность значительно снижена (адгезивность соответственно 23,0511,17% и 24,3710,67%, агрегация АДФ-индуцированная - 28,50+2,90% и 32,50+2,03%, агрегация ристомицин-индуцированная - 29,90+2,95% и 33,4211,86%, реакция на гипотонический шок (РГШ) - 21,90+1,17% и 23,87+0,95%) Исходя из вышеизложенного, более целесообразно применять вариант №3 раствора, который позволяет сохранить функциональную активность тромбоцитов, перенесших криоанабиоз, на высоком уровне

Все дальнейшие исследования проводились с вариантом N3 хладоограждающего раствора, который был признан оптимальным

Таблица 3 Функциональные свойства тромбоцитов после замораживания до -40°С в течение 24 часов с вариантами хладоограждающего раствора, имеющими различную концентрацию ингредиентов

Показатель Размороженные тромбоциты

№№ вариантов криозащитного раство ра

1 2 3 4

Концентрация тромбоцитов, хЮ'/л в % к контролю п 967,0±54,45* 79,60±1,49* 10 1011,7131,62* 82,60+1,55* 12 1151,3 ±41,34 88,60±1,12 15 1035,8±32,25* 84,04+3,09* 12

Адгезивность, % п 23,05±1,17* 10 23,69±1,!4* 12 26,55±0,58 15 24,37+0,67* 12

Агрегация с АДФ, % п 28,50±2,90* 10 29,83±2,63* 12 38,13+1,46 15 32,50±2,03* 12

Агрегация с ристомицином, % п 29,90±2,95* 10 31,58+2,09* 12 40,40+1,37 15 33,42±1,86* 12

РГШ, % п 21,90+1,17* 10 22,42±0,66* 12 28,70+1,53 15 23,87+0,95* 12

* - различие достоверно (р<0,05) по сравнению с вариантом раствора№3

Для изучения влияния варианта N3 хладоограждающего раствора и криоанабиоза на морфологию тромбоцитов использовали электрономикроскопические исследования

После 90-мин эквилибрации тромбоцитов с данным вариантом хладоограждающего раствора наблюдается усиление процессов экзоцитоза

Изучение образцов тромбоцитов, вышедших из криоанабиоза, под электронным микроскопом показало вполне удовлетворительную сохранность ультраструктуры у основной массы клеток, криоконсервированных с использованием варианта №3 хладоограждающего раствора

Проведенный морфометрический анализ содержания а-гранул и митохондрий на срез тромбоцита и величины площади среза клеток, перенесших криоанабиоз при -40°С, подтвердил хорошее криозащитное действие указанного раствора (таблица 4)

Как видно из данных электронной микроскопии, представленных в таблице 4, средняя площадь среза тромбоцитов, вышедших из криоанабиоза, достоверно не отличалась от средней площади нативных тромбоцитов, а количество а-гранул на срез в размороженных тромбоцитах достоверно уменьшилось (р<0,05), но составляло 2Л от исходной величины

Следовательно, на основании результатов морфометрических исследований кровяных пластинок, подвергнутых замораживанию до -40°С под защитой варианта №3 раствора, можно заключить, что разработанный новый

хладоограждающий раствор обеспечивает необходимую сохранность ультраструктуры тромбоцитов

Таблица 4 Показатели ультраструктуры тромбоцитов после криоконсервирования с разработанным хладоограждающим раствором

""Количество исследований Испытуемая среда Площадь среза (мкм2) Количество а-гранул на срез Количество митохондрий на срез

12/180 Тромбоциты нативные (контроль) 2,9±0,6 7,5±0,7 0,8+0,06

4/41 Тромбоциты после размораживания с криоконсервантом 3,0+0,2 5,2+0,6** 0,8±0,5

* - в числителе - число доноров, в знаменателе - количество электронограмм, **- р<0,05 в сравнении с контролем

Уровень функциональной активности тромбоцитов в зависимости от примененной программы охлаждения для введения в криоанабиоз

(при -40°С)

Высокая сохранность клеток наряду с эффективностью хладоограждающего раствора в большой степени зависит от правильно выбранного режима охлаждения

Было изучено 2 программы охлаждения - экспоненциальная и линейная, отличавшихся скоростями замораживания (таблица 5, рис 1)

Обе программы охлаждения позволили сохранить количество тромбоцитов и их функциональную активность на достаточно высоком уровне (таблица 6)

Таким образом, обе программы дали одинаковые результаты по морфологической и функциональной сохранности тромбоцитов, но при этом следует отметить, что при экспоненциальной программе охлаждения не требуется дорогостоящего криогенного оборудования, доставки жидкого азота, высококвалифицированного обслуживающего персонала, данная программа является экономичной и доступной

При экспоненциальной программе условия введения в криоанабиоз следующие охлаждение от +20,3°С до -3,9°С со скоростью 11,7°С/мин, от -3,9°С до -28°С со скоростью 1,1°С/мин, от -29°С до -40°С со скоростью 0,9°С/мин (таблица 5, рис 1), с последующим хранением в электрическом морозильнике при -40°С

При сравнении полученных нами данных о физиологических свойствах тромбоцитов, вышедших из криоанабиоза (-40°С) через 4 месяца с результатами, опубликованными О М Селезневой (1996), по замораживанию тромбоцитов с криоконсервантом «Кримолит» до -196°С, обнаружены следующие различия адгезивность тромбоцитов, которые замораживались до -

40°С, составила 26,30±2,12%, а при охлаждении до -196°С - 21,38±2,86% (различие достоверно значимо р<0,05), агрегация с АДФ у тромбоцитов после }амораживания до -40°С, была равна 37,60±1,6%, а после охлаждения до -196°С — 11,02±2,14% (различие достоверно значимо р<0,05), РГШ у тромбоцитов после замораживания до -40°С соответствовала 52,4±1,4%, а после охлаждения до -19б°С — 47,2±0,9% (различие достоверно значимо р<0,05)

Таблица 5 Программы охлаждения тромбоцитов

Линейная про1 рамчл охлаждения Тромбон 1ПОВ Экспоненциальная программа охлаждения тромбоцитов

С корость охлаждения до кристаллизации "С/мии Скорость охлаждения после кристаллизации °С/м ин Скорость охлаждения до кристаллизации "С/мин Скорость охлаждения после кристаллизации °С/мин

Скорость охлаждения от +20,3 °С до -3,9°С (°С/мин) Скоро оть охлаждения от -3,9°С до -28°С (°С/мин) Скорость охлаждения от -29°С до -40°С (°С/мин)

3 3 11,7 1,1 0,9

Рис I Термограммы замораживания тромбоцитных

концентратов по линейной и экспоненциальной программам до -40°С

I Экспоненцтальная программа

II Линейная программа

Таким образом данные сравнительного анализа свидетельствуют о том, что по своим физиологическим параметрам тромбоциты, вышедшие из криоанабиоза (-40°С) не уступают таковым, подвергшимся замораживанию до -196°С, и даже по агрегации, индуцированной АДФ, и РГШ (что особенно ценно, т к этот показатель является наиболее важным тестом для тромбоцитов,

прямо коррелирующим с их приживаемостью после трансфузии в сосудистое русло) несколько превосходят подобные показатели тромбоцитов, охлаждавшихся до-196°С

В 1996 году В В Захаров, проводивший в Военно медицинской академии замораживание тромбоцитов под защитой диметилацетамида при -80°С констатировал, что функциональные показатели у них выше, чем у тромбоцитов, охлаждавшихся до -196°С Этот факт подтвердил в своих исследованиях К В Кузнецов (2006), замораживавший тромбоциты до -80°С и с диметилацетамидом, и с препаратом «Кримолит»

Более положительные данные о физиологических свойствах тромбоцитов, вышедших из криоанабиоза при -40°С, по сравнению с таковыми у тромбоцитов, криоконсервированных при -196°С, судя по имеющейся отечественной и иностранной литературе, были установлены впервые в наших исследованиях при умеренно-низкой температуре

Таблица 6 Влияние программ охлаждения на функциональные свойства тромбоцитов хранившихся 24 часа при -40°С

Экспоненциаль- % сохран- Линейная % сохран-

Показатель ная программа охлаждения ности функции программа охлаждения ности функции

при от при от

температуре исходного температуре исходного

-40°С уровня -40°С уровня

Концентрация тромбоцитов х109/л 1151,3+41,34 88,6+1,12 1078,3+40,43 87,1+0,82 >0,05

п 15 12

Адгезивность в % 26,55+0,58 92,8+ 1,19 26,19±1,56 91,7+1,50 >0,05

п 15 12

Агрегация АДФ-

индуцированная в % 38,13+1,46 80,1+1,74 37,17±1,67 78,9+3,30 >0,05

п 15 12

Агрегация ристомицин-индуцированная в % п 40,40+1,37 15 81,9+1,91 39,25±2,17 12 80,5+1,04 >0,05

РГШ в % 28,70+1,53 53,6±1,81 26,92±1,26 51,8±2,12 >0,05

п 15 12

Функциональная активность тромбоцитов, перенесших разную длительность криоанабиоза (при -40°С)

Впервые было установлено, что криоконсервирование тромбоцитов по новому методу и их хранение в электрическом морозильнике при температуре -40°С позволяет сохранить в течение 4 месяцев клетки с функциями на достаточно высоком уровне (таблица 7) При этом сохраняется 87,4±0,84% клеток от исходного, а функциональные свойства составляют адгезивность - 26,30±2,12% (91,3±3,54% от исходного уровня), агрегация АДФ-индуцированная - 37,60+

Таблица 7 Сохранность физиологических свойств тромбоцитов через разные сроки их хранения в условиях

криоанабиоза (-40°С)

Показатель Тромбоциты до замораживания (контрочь) Время хранения Тромбоциты до замораживания (контроль) Время хранен» я % сохранности функции от исходного уровня Тромбоциты до замораживан ия (контроль) Время хранени я Тромбоциты до замораживания (контроль) Время хранени я Тромбоциты до замораживания (контроль) Время хранени я

3 мес 4 мес 5 мес 6 мес 7 мес

Концентрация тромбоцитов, ХЮ'/л п 1247 5 ±60,39 12 1096 7 ±54 29* 12 1298,7 ±42,38 15 11367 ±44,54* 15 87,4 ±0,84 1350 0 ±55 35 11 1072 0 +47 15* 11 12130 ±42 36 11 786 0 ±43 57* 11 12160 ±51,90 11 599 1 ±36 04* 11

Адгезивность % п 29 55 ±1,31 12 27,30 ±1,15* 12 28,71 ±1,74 15 26 30 ±2,12* 15 91 3 ±3,54 29,07 ±1,81 11 22,09 ±1,36* 11 28 64 ±1,73 11 17,05 ±1,12* 11 28,72 ±2,09 11 12 15± 0,89* 11

Агрегация с АДФ, % п 47,25 ±3,15 12 37,92 ±2,48* 12 47,93 ±2,24 15 37,60 ±1,61* 15 78,8 ±1,81 47,64 ±2,63 11 33,18 ±1,33* 11 47,91 ±1,50 11 26,45 ±1,16* 11 47,91 ±2,87 11 18,64 ±1,51* II

Агрегация с ристомицином % п 49,00 ±1 75 12 40,00 ±2,31* 12 49,07 ±2,16 15 39,93 ±2,46* 15 80,7 ±1,64 48,18 ±2,95 11 34,82 ±2 24* 11 48,36 ±1,76 11 28,18 ±1,89* 11 47,45 ±2 83 II 20 00 ±1,80* 11

Реакция на гипотонический шок, % п 53,02 ±3,13 12 27,44 ±1,93* 12 53,08 ±2,05 15 27,97 ±1,60* 15 52,4 ±1,42 52,81 ±2,35 11 23,90 ±1 47* 11 52,61 ±2,63 II 19,95 ±1,44* 11 52,19 ±2,76 11 15,86 ±1 55* 11

* - различие достоверно (р<0,05) по сравнению с контролем

±1,61% (78,8± 1,81% от исходного уровня), агрегация ристомицин-индуцированная - 39,93±2,46% (80,7+1,64% от исходного уровня), РГШ -27,97±1,60% (52,4±1,42% от исходного уровня) При дальнейшем хранении (5, 6, 7 месяцев) функциональная активность тромбоцитов падает, т к не происходит полной остановки обменных процессов в клетке при -40°С и расходуется энергетический запас кровяных пластинок, и функциональная активность снижается, следовательно, физиологическая сохранность клеток при умеренно-низкой температуре обеспечивается в течение 120 дней

Результаты исследования в экспериментах на животных «острой» и «хронической» токсичности, пнрогенности оптимального варианта (№3)

хладоограждающего раствора и переносимости аутологичных тромбоцитов, перенесших криоанабиоз (-40°С) с указанным раствором в

течение 24 часов

При токсико-фармакологическом исследовании оптимального варианта (№3) хладоограждающего раствора, проведенного на 3-х видах животных (мыши, кролики, собаки) и на клетках периферической крови человека, установлено отсутствие каких-либо отрицательных реакций

При оценке «острой» токсичности исследуемого оптимального крио-защитного раствора 10 белым лабораторным мышам (для 1-й серии хладоограждающего раствора) по методике ГФ XI (таблица 8) внутривенно вводили тест-дозу препарата, которая составляла 0,5 мл раствора, с содержанием ГМБТОЭМ 1,3 г/кг, натрия фумарата 0,25 г/кг, лимонной кислоты 0,13 г/кг (в течение 5 суток наблюдения все животные оставались живы) В контрольной группе 10 мышам вводили аналогичный объем 0,9% раствор хлорида натрия 3 кроликам (таблица 9) трехкратно с интервалом в 2 сут внутривенно вводили тест-дозу (16,5 мл/кг) препарата (высшую токсическую дозу) с содержанием ГМБТОЭМ 2,5 г/кг, натрия фумарата 0,47 г/кг и 0,25 г/кг массы тела лимонной кислоты (в течение 5 суток наблюдения все животные оставались живы) На основании полученных данных сделан вывод об

Таблица 8 Токсичность семи стандартных серий оптимального хладоограждающего раствора для тромбоцитов

NN Серия Результат исследования на токсичность

пп ограждающего NN прото- Число Через 5 сут Заключение

раствора колов мышей живы умерли

1 61202 65 5 5 - нетоксичен

2 10103 4 5 5 - нетоксичен

3 20303 10 5 5 - нетоксичен

4 30303 11 5 5 - нетоксичен

5 40303 12 5 5 - нетоксичен

6 50303 13 5 5 - нетоксичен

7 60303 14 5 5 - нетоксичен

отсутствии «острой» токсичности у разработанного нами хладоограждающего раствора

«Хроническая» токсичность была изучена на 20 белых мышах (таблица Ю), которым ежедневно в течение 10 дней вводили в хвостовую вену тест-дозу, составляющую 0,5 мл, оптимального хладоограждающего раствора, а 5 контрольным белым мышам аналогичный объем стерильного 0,9% раствора хлорида натрия

«Хроническая» токсичность исследовалась и на 10 кроликах, которым ежедневно в течение 10 сут в вену ушной раковины вводили стерильный оптимальный хладоограждающий раствор (ГМБТОЭМ в дозе 0,33 г/кг массы тела, 6,6 мл/кг 5% раствора криофилактика, натрия фумарата 0,06 г/кг массы тела)

Таблица 9 Изучение высшей токсической дозы разработанного хладоограждающего раствора

Показатель № кролика 1 2 3

1 Первая I инфузия препарата | вес, г 2400 2200 2400

введено раствора, мл 39,6 36,4 39,6

Результат наблюдения жив Жив жив

Вторая инфузия препарата вес, г 2400 2200 2400

введено раствора, мп 39,6 36,4 39,6

Результат наблюдения жив Жив жив

Третья инфузия препарата вес, г 2400 2200 2400

введено раствора, мл 39,6 36,4 39,6

Результат наблюдения жив Жив жив

Таблица 10 Определение «хронической» токсичности разработанного хладоограждающего раствора на белых лабораторных мышах

Группа Вес г Число Доза Скорость Время Реакция

животных живот- раствора, введения, введения, на

ных мл мл/сек сут введения

Опытная группа 19-20 20 0,5 0,1 10 Живы - 20

Контрольная

группа 19-20 5 05 0,1 10 Живы - 5

В контрольной группе 3 кроликам 10 дней аналогично вводили изотонический раствор хлорида натрия Все животные хорошо перенесли курс

инфузий, их поведение и внешний статус не отличались от обычных Не наблюдалось явлений анорексии, слабости, потери веса

При гистологическом исследовании головного и спинного мозга у животных опытной и контрольных групп, не обнаружено деструктивных изменений после десятисуточного курса инъекций соответственно предложенного хладоограждающего раствора и изотонического раствора хлорида натрия Это указывает на то, что предложенный хладоограждающий раствор не оказывает отрицательного воздействия на деятельность центральной нервной системы

При сравнении показателей ЭКГ до и после 10-суточного курса ежедневных внутривенных инфузий не выявлено статистически значимых отклонений Это указывает на то, что внутривенное введение разработанного хладоограждающего раствора не оказывало отрицательного воздействия на сердечно-сосудистую систему животных

Не обнаружено статистически значимых отклонений от исходного уровня показателей периферической крови у кроликов до и после 10-суточного курса инфузий разработанного хладоограждающего раствора, кроме умеренного снижения количества лимфоцитов

Результаты исследования уровня общего белка, альбуминов, фракций глобулинов, а также ферментов (АсАТ и АлАТ) до и после 10-сут курса ежедневных внутривенных инфузий кроликам испытуемого раствора статистически достоверно не отличались, и показали, что новый хладоограждающий раствор не оказывает отрицательного воздействия на белковообразовательную и ферментативную функции печени животных

Результаты общего анализа мочи кроликов, получивших курс 10 ежедневных инфузий испытуемого раствора достоверно не отличались относительно исходных, и свидетельствовали о том, что многократное внутривенное введение нового хладоограждающего раствора не приводит к нарушению выделительной функции почек у экспериментальных животных

Не было отмечено статистически значимых отличий содержания глюкозы в крови кроликов как опытной группы после 10-суточного введения хладоограждающего раствора, так и контрольной группы, которым внутривенно вливали 0,9% раствор хлорида натрия Кроме того, гистологическое исследование желез внутренней секреции у животных обеих групп не выявило деструктивных изменений

На 3 собаках было проведено изучение переносимости трансфузий аутологичных тромбоцитных концентратов, перенесших криоанабиоз при -40°С под защитой разработанного хладоограждающего раствора Во время внутривенной инфузии аутологичного ТК собаки вели себя спокойно, отклонений в их поведении и внешнем статусе не наблюдалось Масса тела, температура тела, частота сердечных сокращений животных после трансфузии не изменились Собаки по внешнему виду, поведению, отношению к корму, не отличались от исходного состояния Не обнаружено статистически значимых отклонений от исходного уровня в показателях периферической крови, мочи Аутотрансфузии размороженных тромбоцитов, введенных в криоанабиоз при

-40°С с разработанным хладоограждающим раствором, собаки перенесли без реакций и осложнений

Результаты испытания по методике ГФ XI на пирогенность семи серий оптимального разработанного хладоограждающего раствора свидетельствовали об отсутствии пирогенных свойств у данного раствора

Гемолитическое действие нового хладоограждающего раствора изучали при смешиваний его с донорской кровью Наибольшее время контакта составило 24 часа В течение этого срока не наблюдалось статистически значимого увеличения содержания свободного гемоглобина, изменения осмотической резистентности эритроцитов (ОРЭ), увеличения числа дегенеративных форм эритроцитов МСУ (СОЭ), МСН (ССГЭ) и МСНС (СКГЭ) также остались на уровне исходных показателей

Было проведено экспериментальное изучение предложенного хладоограждающего раствора в процессе длительного хранения С этой целью использован метод ускоренного старения, при котором образцы выдерживали в течение 45 сут при +60°С, что соответствует двум годам хранения при +20°С Данные исследований показали, что после 45 сут хранения при +60°С криозащитного раствора, содержащего ГМБТОЭМ, натрия фумарат, кислоту лимонную и бидистиллированную воду, не происходит изменения качества, содержания основного компонента, стерильности, токсичности, апирогенности среды Показатель рН раствора увеличился на 1,1 от исходного, но остался благоприятным для кровяных пластинок, требующих умеренно-подкисленную среду

В результате выполненных комплексных физико-химических и биологических исследований установлено, что хладоограждающий раствор (№3), содержащий криопротектор ГМБТОЭМ, антигипоксант натрия фумарат, антикоагулянт лимонную кислоту и бидистиллированную воду, безвреден для тромбоцитов, не оказывает отрицательного воздействия на организм подопытных животных, стабилен в процессе хранения и не требует отмывания после выхода тромбоцитов из криоанабиоза

Совокупность данных, полученных нами в экспериментальных исследованиях, расширяет представления о механизмах криоповреждения и криозащиты тромбоцитов крови человека, сохранении ими функциональных свойств после выхода из криоанабиоза при -40°С и свидетельствует о том, что предложенные хладоограждающий раствор и экспоненциальная программа введения данных клеток в холодовой анабиоз с последующим их быстрым отогревом могут быть использованы в научных целях в лабораториях криофизиологического, медицинского и биологического профиля

ВЫВОДЫ

1 Оптимальным хладоограждающим раствором для создания устойчивости тромбоцитов к холодовому стресс-воздействию и сохранению физиологических и морфологических свойств кровяных пластинок является

вариант раствора №3, содержащий в конечной концентрации 5% ГМБТОЭМ, 0,95% натрия фумарата и 0,5% кислоты лимонной, остальное бидистиллированную воду При его применении через 24 часа холодового стресс-воздействия сохраняется 88,6% тромбоцитов, их физиологические свойства составляют адгезивность 26,6±0,6% (92,8± 1,19% от исходного уровня), агрегация АДФ-индуцированная 38,1±1,5% (80,1±1,74% от исходного уровня), агрегация ристомицин-индуцированная 40,4±1,4% (81,9±1,91% от исходного уровня), реакция на гипотонический шок 28,7+1,5% (53,6±1,81% от исходного уровня) Хладоограждаюшие свойства данного раствора сохраняются при +60°С в течение 45 суток, что соответствует 2 годам хранения при +4°С

2 Оптимальный срок сохранения на высоком уровне физиологической активности тромбоцитов, подвергнутых криоанабиозу при -40°С под защитой оптимального варианта (№3) хладоограждающего раствора, составляет 4 месяца К этому времени сохраняется в функционально активном состоянии 87,4% кровяных пластинок, их адгезивность составляет 91,3% от исходного, АДФ-индуцированная агрегация - 78,8% от исходного, ристомицин-индуцированная агрегация - 80,7% от исходного, реакция на гипотонический шок — 52,4% от исходного уровня, проявляя этим выраженную устойчивость к холодовому стресс-воздействию

3 Эффективной и физиологически щадящей (обеспечивающей устойчивость к повреждающему действию отрицательных температур) программой введения тромбоцитов в холодовой анабиоз при умеренно-низкой температуре является экспоненциальная, при которой не происходит выброса кристаллизационного тепла при эвтектической температуре и рекристаллизации, что предотвращает образование крупных кристаллов во внутри- и внеклеточной водной среде, не происходит разрушения органелл и цитоплазматической мембраны, что позволяет сохранить ультраструктуру и функциональную активность у выраженного большинства кровяных пластинок после выхода из криоанабиоза (-40°С)

4 Переливания аутологичных тромбоцитов, вышедших из криоанабиоза (-40°С) с разработанным хладоограждающим раствором, экспериментальные животные (собаки) переносят без возникновения каких-либо нарушений их исходного физиологического состояния, что свидетельствует о возможности его применения в научных лабораториях криофизиологического, медицинского и биологического профиля

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Разработанный хладоограждающий раствор для тромбоцитов (патент № 2230454 (РФ) от 20 06 2004 г ) и экспоненциальная программа охлаждения до -40°С, позволяющие сохранить 87,4% кровяных пластинок в физиологически полноценном состоянии в течение 4 месяцев, рекомендуются для применения с научной целью в работе лабораторий криофизиологического, медицинского и биологического профиля

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Яленский А Ю, Сведенцов Е П , Утемов С В , Костяев А А Криоконсервирование тромбоцитов при - 40° С// В сб Материалы научной сессии Кировского филиала Академии Естествознания - Киров, 2001 - С 142

2 Яленский А Ю, Сведенцов Е П , Утемов Е П , Костяев А А Функциональная активность тромбоцитов, консервированных замораживанием при умеренно-низкой температуре// В сб Материалы научно-практической конференции «Современные проблемы гематологии и трансфузиологии» -Киров, 2002 - С 35

3 Яленский А Ю , Сведенцов Е П , Ежова Н Л Состояние тромбоцитов человека, перенесших холодовой анабиоз при -40°С// В сб Материалы научно-практической конференции, посвященной 40-летию Центральной научно-исследовательской лаборатории КГМУ «Современные методы исследования в медицине и фармации» - Казань, 2002 - С 48

4 Яленский А Ю, Сведенцов Е П Консервирование тромбоцитов замораживанием при -40°С// В сб Тезисы докладов 3-й городской конференции аспирантов и соискателей Науке нового века - знания молодых Вятская государственная сельскохозяйственная академия - Киров, 2003 - С 92

5 Яленский А Ю , Сведенцов Е П Новый метод криоконсервирования тромбоцитов при температуре -40°С// Пермский медицинский журнал (рецензируемый) -2003 -Том 20,№2 - С 197-199

6 Яленский А Ю , Сведенцов Е П , Гребенева Г А , Федоровская Н С Изучение токсичности нового криоконсерванта для тромбоцитов// В сб Материалы научно-практической конференции «Актуальные вопросы современной медицины» (Епифановские чтения) - Киров, 2003 г - С 104

7 Сведенцов Е П , Яленский А Ю Морфофункциональные особенности тромбоцитов через разные сроки хранения при -40°С// В сб Материалы Российской научно-практической конференции «Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии» - Санкт-Петербург, 2004 - С 161

8 Патент РФ № 2230454 Хладоограждающий раствор для замораживания тромбоцитов при умеренно-низкой температуре / Е П Сведенцов, А Ю Яленский, С В Утемов, А А Костяев Заявлено 24 05 2002, Опубл 20 06 2004, Бюл 17

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ:

АДФ - аденозиндифосфорная кислота, РГШ - реакция на гипотонический шок, АлАТ - аланинаминотрансфераза, ТК — тромбоцитный концентрат,

АсАТ - аспартатаминотрансфераза, ЭКГ - электрокардиограмма,

ГМБТОЭМ - гексаметиленбистетраокси МСНС (СКГЭ) - средняя концентрация этилмочевина, гемоглобина в эритроците,

ГФ - Государственная Фармакопея, МСН (ССГЭ) - среднее содержание

ОРЭ - осмотическая резистентность гемоглобина в эритроците, эритроцитов, МСУ (СОЭ) - средний объем эритроцита

Отпечатано в типографии Кировской ГМА г Киров, ул К Маркса, 112 Тираж 100 экз Заказ 391

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Яленский, Андрей Юрьевич

Список использованных сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. Современное состояние вопроса о введении тромбоцитов в криоанабиоз при -40°С. Обзор литературы.

ГЛАВА 2. Материалы и методы исследований.

ГЛАВА 3. Результаты экспериментальных исследований.

3.1. Разработка лекарственной формы нового хладоограждающего раствора для введения тромбоцитов в криоанабиоз при -40°С.

3.2. Влияние нового ограждающего раствора на сохранность и функциональное состояние тромбоцитов при комнатной температуре.

3.3. Изучение функциональной полноценности и сохранности тромбоцитов, криоконсервированных с различными вариантами нового хладоограждающего раствора.

3.4. Определение эффективного режима охлаждения кровяных пластинок с оптимальным хладоограждающим раствором.

3.5. Изучение сохранности функциональных свойств тромбоцитов, введённых в криоанабиоз по разработанному методу.

3.6. Исследование в опытах на животных «острой» и «хронической» токсичности разработанного хладоограждающего раствора.

3.6.1. Изучение «острой» токсичности разработанного хладоограждающего раствора.

3.6.2. Изучение «хронической» токсичности разработанного хладоограждающего раствора.

3.6.2.1. Определение «хронической» токсичности разработанного криозащитного раствора при многократном внутривенном введении белым мышам.

3.6.2.2. Влияние длительного введения разработанного криозащитного раствора на общее состояние и массу тела животных.

3.6.2.3. Влияние разработанного криозащитного раствора на центральную нервную систему при многократном внутривенном введении.

3.6.2.4. Влияние длительного введения разработанного криозащитного раствора на сердечно-сосудистую систему.

3.6.2.5. Влияние длительного введения разработанного криозащитного раствора на показатели периферической крови.

3.6.2.6. Влияние многократного внутривенного введения разработанного криозащитного раствора на функции печени.

3.6.2.7. Влияние введения криозащитного раствора на почки.

3.6.2.8. Определение влияния длительного введения разработанного криозащитного раствора на эндокринные железы животных.

3.6.3. Изучение переносимости трансфузий аутологичных тромбоцитных концентратов, замороженных с разработанным криозащитным раствором.

3.6.4. Изучение пирогенности разработанного криозащитного раствора.

3.6.5. Изучение гемолитических свойств разработанного криозащитного раствора.

3.7. Изучение стабильности разработанного хладоограждающего раствора для тромбоцитов при длительном хранении.

ГЛАВА 4. Обсуждение результатов экспериментальных исследований.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Функциональное состояние тромбоцитов, вышедших из криоанабиоза (-40[О]С)"

Актуальность темы

Глубокому исследованию проблемы влияния холодового анабиоза на биологические объекты посвящены десятилетия (Голдовский A.M., 1986; Лозина-Лозинский Л.К., 1972; Ре Л., 1962; Сведенцов Е.П., Кузнецов К.В., Утёмов С.В. и др. 2006). Интерес к этой проблеме обусловлен тем, что в состоянии холодового анабиоза в живых системах обратимо подавляются или частично затормаживаются метаболические и физиологические процессы (Белоус А.М, Грищенко В.И., 1994), что способствует долгосрочному хранению клеточных суспензий в жизнеспособном состоянии и реализации их запасов на практике в связи с возникающими потребностями (Сведенцов Е.П., 1999;ЦуцаеваА.А, 1983).

Успехи в современной клинической трансфузиологии обусловили возрастание потребности в применении компонента крови - тромбоцитного концентрата (ТК) (Аграненко В.А. и соавт, 1995; Компаниец A.M., 1992; Мельникова В.Н. и соавт, 2003; Rebulla Р., 1993). ТК используется для профилактики и лечения угрожающей жизни тромбоцитопенической кровоточивости, обусловленной современными протоколами высокодозной химиотерапии больных с гематологическими и онкологическими заболеваниями, радиационным облучением, воздействием миелотоксических средств, повышенным разрушением тромбоцитов при экстракорпоральном кровообращении или повышенным потреблением кровяных пластинок при синдроме диссеминированного внутрисосудистого свертывания (Абдулкадыров К.М., 1994, 2005; Ковалева Л.Г., 1990; Сведенцов Е.П., 1999; Brand A. et al., 2006; Owens М. et al., 1994; Petz L.,1996).

Возрастающая потребность в ТК, особенно в экстренных случаях, требует создание их полноценных запасов. Поэтому большую актуальность в последние годы приобрёл вопрос долговременного хранения тромбоцитов, который ещё далёк от окончательного разрешения.

По данным литературы (Kaplan С., 1993), известно, что в кровяном русле тромбоциты обладают коротким периодом жизни (8-10,5 дней). Существующие способы консервирования кровяных пластинок при положительных температурах позволяют сохранять клетки в биологически полноценном состоянии крайне непродолжительный срок - 3-5 суток (Балезина JI.B., 1991; Компаниец A.M., 1992; Holme S. et. al., 1994; Meer P. et. al., 2005; Vucetic D. et. al., 2000).

Наиболее перспективным для осуществления длительного хранения тромбоцитов является использование методов их консервирования с помощью применения криоанабиоза (Белоус А.М, Грищенко В.И., 1994).

Использование жидкоазотных технологий с введением тромбоцитов в глубокий криоанабиоз (-1360О-196°С), при котором останавливается внутриклеточный метаболизм и все фракции воды полностью замерзают, но; сохраняются орбитальные переходы электронов в атомах молекул биообъекта (Сведенцов Е.П., 2004; Цуцаева А.А., 1983;), ввиду высокой дороговизны не нашло широкого применения и востребовано лишь в некоторых крупных медицинских центрах. '

Совершенствование методов длительного хранения выделенных тромбоцитов при отрицательных температурах в физиологически сохранном состоянии в значительной степени зависит от успехов в создании криозащитных сред и экономичного электрорефрижераторного оборудования, доступного для широкого круга учреждений физиологического, биологического и медицинского профиля. Все это обуславливает необходимость поиска эффективного, вместе с тем простого и надежного метода введения тромбоцитов в криоанабиоз, обеспечивающего щадящие режимы замораживания, морфологическую сохранность, биологическую и физиологическую полноценность кровяных пластинок под защитой хладоограждающего раствора, исключающего его отмывание после оттаивания. Этим требованиям отвечает охлаждение ТК при умеренно-низкой температуре (-40°С), при которой внеклеточная, свободная и частично связанная внутриклеточные фракции воды замерзают, а фиксированная фракция воды остаётся в незамёрзшем состоянии, и метаболизм в клетках замедлен (Сведенцов Е.П., 2004). Данный метод осуществляют в электрических морозильниках с применением нетоксичного криозащитного раствора,; что может быть подтверждено физиологическими экспериментами на животных (определение веса тела, температуры тела, общего поведенческого состояния, явлений отражающих общее физиологическое состояние животных) при переливании тромбоцитов, вышедших из криоанабиоза. *

Сведений об устойчивости тромбоцитов; к повреждающим условиям криоанабиоза при -40°С в научной литературе не обнаружено.

Цель исследования - определить устойчивость к холодовому стресс-воздействию и физиологические особенности тромбоцитов; перенёсших криоанабиоз при умеренно-низкой температуре (-40°С), введение в: который-проводится по экспоненциальной программе под защитой нового хладоограждающего раствора; не требующего отмывания; исследовать влияние вышедших из криоанабиоза аутологичных тромбоцитов на организм экспериментальных животных.

Задачи исследования:,

1. Оценить в сравнительных исследованиях хладоограждающие свойства 4-х вариантов разработанного раствора, ингредиентами которого являются гексаметиленбистетраоксиэтилмочевина (ГМБТОЭМ), натрия фумарат, кислота лимонная и остальное бидистиллированная вода, и предназначенных для создания функциональной и морфологической устойчивости тромбоцитов к холодовому стресс-воздействию, для определения оптимального его варианта, сохраняющего наибольшее количество функционально активных кровяных пластинок в условиях криоанабиоза (-40°С) в течение 1 суток. Изучить сроки сохранности хладоограждающих свойств оптимального варианта данного раствора.

2. Определить устойчивость к холодовому стресс-воздействию и физиологические свойства тромбоцитов, введённых в криоанабиоз по экспоненциальной программе замораживания с применением оптимального варианта хладоограждающего раствора и хранившихся при -40°С в течение 1210 суток; особенно исследовать реакцию на гипотонический шок тромбоцитов после выхода из криоанабиоза, которая определяет приживляемость тромбоцитов после их введения в сосудистое русло.

3. Исследовать в экспериментах на животных «острую», «хроническую» токсичность и пирогенность оптимального варианта хладоограждающего раствора и определить влияние размороженных аутологичных тромбоцитов, хранившихся в состоянии криоанабиоза (-40°С) с данным раствором в течение 24 часов, на организм экспериментальных животных (собак).

Научная новизна

В экспериментальном исследовании впервые изучена физиологическая активность (адгезия, агрегация, реакция на гипотонический шок) тромбоцитов, перенёсших криоанабиоз при -40°С, введение в который проводилось по экспоненциальной программе охлаждения и с использованием нового хладоограждающего раствора (патент №2230454 от 20.06.2004), включающего в конечной концентрации 5% ГМБТОЭМ, 0,95% натрия фумарата, 0,5% кислоты лимонной и бидистиллированную воду. Впервые показано, что применение экспоненциальной программы . и данного оригинального раствора позволяет предупредить криоповреждение их мембран и денатурацию внутриклеточных белков, приспособить кровяные пластинки к условиям криоанабиоза и сохранить на высоком уровне физиологические и морфологические свойства тромбоцитов, хранившихся 120 суток в условиях холодового стресс-воздействия при -40°С. Полученные результаты расширяют представление о механизмах криозащиты на клеточном уровне.

Установлено, что переливание аутологичных тромбоцитов, вышедших из криоанабиоза (-40°С) с разработанным оптимальным вариантом хладоограждающего раствора, экспериментальные животные (собаки) переносят без возникновения каких-либо нарушений их исходного физиологического состояния: не изменяется температура тела, поведение животных, отсутствуют явления, определяющие посттрансфузионные реакции и осложнения;

Теоретическая и практическая значимость работы

Получены доказательства и дано научное обоснование криозащитных свойств; разработанного хладоограждающего раствора для тромбоцитов. Данный раствор, ингредиентами в который включены, вещества только отечественного производства: ГМБТОЭМ - криопротектор с экзо- и эндоцеллюлярным действием, , натрия фумарат - антигипоксант биоэнергетической направленности,, кислота лимонная - антикоагулянт, является нетоксичным, апирогенным, при внутривенном введении с тромбоцитами его хорошо переносят экспериментальные животные, что свидетельствует о сохранности функциональных свойств тромбоцитов, вышедших из криоанабиоза при -40°С.

Установлено, что по сравнению с линейной (принудительной) более предпочтительной и доступной является экспоненциальная (щадящая) программа замораживания тромбоцитов, при которой в отличие от линейной программы не наблюдается выброса кристаллизационного тепла и как следствие не возникает рекристаллизации во вне- и внутриклеточной? воде, отрицательно влияющей на биообъект при введении его в криоанабиоз.

Полученные данные о сохранении физиологических свойств тромбоцитов крови человека, благоприятно перенёсших холодовое стресс-воздействие при замораживании до -40°С, свидетельствуют о том, что создан экономичный, доступный и эффективный метод (оптимальный вариант хладоограждающего раствора и экспоненциальная программа охлаждения) введения кровяных пластинок в криоанабиоз с целью их 120 суточного хранения в функционально полноценном состоянии.

На основании положительных данных, полученных в экспериментальных исследованиях по5 изучению «острой» и «хронической» токсичности, пирогенности разработанного хладоограждающего раствора (вариант №3), физиологической и морфологической полноценности кровяных пластинок, замороженных с ним, их благоприятной переносимости опытными; животными, дано заключение о возможности применения созданного метода криоконсервирования тромбоцитов в научных лабораториях криофизиологического, медицинского и биологического профиля.

Основные положения, выносимые на защиту:

1 Разработан хладоограждающий раствор (вариант №3) для введения в криоанабиоз тромбоцитов, содержащий ГМБТОЭМ, натрия фумарат, кислоту лимонную и бидистиллированную воду, который нетоксичен, апирогенен и не требует отмывания перед внутривенным введением, размороженного тромбоцитного концентрата.

2 Тромбоциты, введённые в криоанабиоз при -40°G по экспоненциальной программе с предложенным хладоограждающим;раствором (вариант №3), сохраняют на высоком уровне свои физиологические свойства после перенесённого холодового стресс-воздействия в течение 4 месяцев.

3. Переливание ТК, замороженных с разработанным криозащитным раствором, благоприятно переносят в эксперименте крупные животные (собаки), что позволяет рекомендовать данный ограждающий раствор и экспоненциальную программу охлаждения кровяных пластинок для применения в научных лабораториях криофизиологического, медицинского и биологического профиля.

Апробация работы и публикации

Основные результаты и положения диссертационной работы доложены и обсуждены на научно-практической конференции, посвященной современным проблемам гематологии и трансфузиологии (Киров, 2002), областном научном обществе гематологов и трансфузиологов (Киров, 2002), научно-практической конференции «Актуальные вопросы современной медицины. Епифановские чтения» (Киров, 2003), Российской научно-практической конференции «Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии» (Санкт-Петербург, 2004). Диссертация апробирована на заседаниях Проблемной комиссии и Ученого Совета Федерального государственного учреждения «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (Киров, 2003) и объединённом заседании Кировского отделения Физиологического общества им. И.П.Павлова и областного научного общества гематологов и трансфузиологов (Киров, 2007).

Публикации материалов исследования

По материалам диссертации опубликовано 8 печатных работ, из них 1 в рецензируемом журнале. Получен патент на изобретение № 2230454 (РФ) от 20.06.2004 г.

Личное участие автора в получении результатов

Автором разработан новый хладоограждающий раствор, определена морфологическая и функциональная сохранность клеток до замораживания и после оттаивания, исследована «острая» токсичность на лабораторных мышах, «хроническая» токсичность на лабораторных мышах и кроликах, на собаках изучена переносимость трансфузий размороженных аутологичных тромбоцитных концентратов, перенёсших криоанабиоз при -40°С под защитой разработанного криозащитного раствора (вариант №3), проведён анализ и статистическая обработка полученных результатов.

Объём и структура работы

Диссертация изложена на 128 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы с описанием материалов и методов исследования, главы с изложением результатов собственных исследований, главы, где обсуждаются результаты экспериментальных исследований, выводов, практических рекомендаций для научной работы, списка использованной литературы, который включает 304 источника (128 отечественных и 176 зарубежных) и списка работ, опубликованных по теме диссертации. В диссертации 24 таблицы, 7 рисунков.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Яленский, Андрей Юрьевич

ВЫВОДЫ

1. Оптимальным хладоограждающим раствором для создания устойчивости тромбоцитов к холодовому стресс-воздействию и сохранению физиологических и морфологических свойств кровяных пластинок является вариант раствора №3, содержащий в конечной концентрации 5% ГМБТОЭМ, 0,95% натрия фумарата и 0,5% кислоты лимонной, остальное бидистиллированную воду. При его применении через 24 часа холодового стресс-воздействия сохраняется 88,6% тромбоцитов, их физиологические свойства составляют: адгезивность 26,6±0,6% (92,8±1,19% от исходного уровня), агрегация АДФ-индуцированная 38,1 ±1,5% (80,1±1,74% от исходного уровня), агрегация ристомицин-индуцированная 40,4+1,4% (81,9±1,91% от исходного уровня), реакция на гипотонический шок 28,7±1,5% (53,6±1,81% от исходного уровня). Хладоограждающие свойства данного раствора сохраняются при +60°С в течение 45 суток, что соответствует 2 годам хранения при +4°С. .

2. Оптимальный срок сохранения на высоком уровне физиологической активности тромбоцитов, подвергнутых криоанабиозу при -40°С под защитой оптимального варианта (№3) хладоограждающего раствора, составляет 4 месяца. К этому времени сохраняется в функционально активном состоянии 87,4% кровяных пластинок, их адгезивность составляет 91,3% от исходного, АДФ-индуцированная агрегация - 78,8% от исходного, ристомицин-индуцированная агрегация - 80,7% от исходного, реакция на гипотонический шок - 52,4% от исходного уровня, проявляя этим выраженную устойчивость к холодовому стресс-воздействию.

3. Эффективной и физиологически щадящей (обеспечивающей устойчивость к повреждающему действию отрицательных температур) программой введения тромбоцитов в холодовой анабиоз при умеренно-низкой температуре является экспоненциальная, при которой не происходит выброса кристаллизационного тепла при эвтектической температуре и рекристаллизации,, что предотвращает образование крупных кристаллов во внутри- и внеклеточной водной среде, не происходит разрушения органелл и цитоплазматической мембраны, что позволяет сохранить ультраструктуру и функциональную активность у выраженного большинства кровяных пластинок после выхода из криоанабиоза (-40°С).

4. Переливания аутологичных тромбоцитов, вышедших из криоанабиоза (-40°С) с разработанным хладоограждающим раствором, экспериментальные животные (собаки) переносят без возникновения каких-либо нарушений их исходного физиологического состояния, что свидетельствует о возможности его применения в научных лабораториях криофизиологического, медицинского и биологического профиля.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Разработанный хладоограждающий раствор для тромбоцитов (патент № 2230454 (РФ) от 20:06.2004 г.) и экспоненциальная программа охлаждения до, -40°С, позволяющие сохранить 87,4% кровяных пластинок в физиологически полноценном состоянии в течение 4 месяцев, рекомендуются для применения: с научной целью в работе лабораторий криофизиологического, медицинского и биологического профиля.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Яленский, Андрей Юрьевич,

1. Абдиев К.М. Оптимизация тактики трансфузий концентратов тромбоцитов у больных с амегакариоцитарными тромбоцитопениями: Автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 1991. - 22 с.

2. Абдулкадыров К.М. Гемокомпонентная терапия при заболеваниях системы крови // Клинич. медицина. 1994. - Т. 72, № 2. - С. 10-13.

3. Абдулкадыров К.М. Гематология: Новейший справочник. — С-Пб: Изд-во Совет; М.: Изд-воЭКСМО, 2005. - 928 с.

4. Автандилов Г.Г. Морфометрия в патологии. — М.: Медицина, 1973.248 с.

5. Аграненко В.А. Тромбоцитотерапия // Актуальные вопросы службы крови и трансфузиологии : Тез. докл. Рос. конф. СПб., 1995. - С.431.

6. Аграненко В.А., Бахрамов С.М., Жеребцов Л.А. Компонентная гемотерапия.- Ташкент, 1995. 279 с.

7. Аграненко В.А., Тибилова Н.Н. Консервирующие растворы для крови и её компонентов // Кровезаменители, консерванты крови и костного мозга. Справочник.-М.: Медицина, 1997.-С. 120-161.

8. Аграненко В.А., Файенштейн Ф.Э., Голубева В.Л. и др. Криоконсервированные тромбоциты и их клиническая эффективность // Гематология и трансфузиология. 1987. - № 5. - С. 8-12.

9. Азовская С.А. Криоконсервирование тромбоцитов // Гематология и трансфузиология. 1995. - Т. 40, № 1. - С. 22-24.

10. Азовская С.А., Волкова Р.И., Сокольцов В.Ф. Криоконсервирование тромбоцитов и их функциональная полноценность // Гематология и трансфузиология. 1995. - Т. 40, № 5. - С. 44-47.

11. Актуальные проблемы криобиологии / Под ред. Н.С. Пушкаря. -Киев: Наукова думка, 1981. 605 с.

12. Актуальные проблемы криобиохимии //Криобиология и криомедицина / A.M. Белоус, В.И. Луговой, А.К. Гулевский. Киев, 1975. -С.8-15.

13. Балезина Л.В. Выделение и консервирование концентратов тромбоцитов из отдельных доз донорской крови: Автореф. дис. . канд. мед. наук.-М., 1991.-28 с.

14. Барышев Б.А. Кровезаменители. Справочник для врачей. СПб.: Человек, 2001.-96 с.

15. Белоус A.M., Бондаренко В.А., Бондаренко Т.П. Влияние замораживания оттаивания на липидный состав митохондрий // Биохимия. -1978. - Т. 43, №12. - С. 2175-2182.

16. Белоус A.M., Гордиенко Е.М., Розанов Л.Ф. Замораживание и криопротекция.-М.: Высш. шк., 1987.-80 с.

17. Белоус A.M., Грищенко В.И. Криобиология. Киев: Наукова,думка, 1994.-431 с.

18. Биохимия (учебник для вузов) / Под ред. Е.С. Северина. М.: ГЭОТАР-МЕД, 2003. - 925 с.

19. Биохимия мембран: Кн. 3. Замораживание и криопротекция (Учеб. пособие для биол. и мед. спец. вузов) / Под ред. А.А. Болдырева. М.: Высш. шк., 1987. - 81 с.

20. Быков В.Л. Цитология и общая гистология (функциональная морфология клеток и тканей человека). СПб.: СОТИС, 1998. - 520 с.

21. Вашкинель В.К., Петров М.Н. Ультраструктура и функция тромбоцитов человека. Л.: Наука, 1982. - 88 с.

22. Владимиров Ю.В., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.: Наука, 1972. - 345 с.

23. Волков Н.Н., Горшкова Н.Н., Крючков М.И., Петренко Л.И. Реальные потребности в компонентах крови в клинической практике // Терапевт, архив. 1989. - Т. 61, № 7. - С. 121-123.

24. Волкова Р.И: Консервирование концентрата тромбоцитов, выделенных из обогащенной; тромбоцитами плазмы // Гематология и трансфузиология.- 1992,-№4.т G.32.

25. Волкова Р.И!, Балезина Л:В., Аграненко В.А. и др. Косервирование концентратов, тромбоцитов, выделенных из обогащенной: тромбоцитами плазмы донорской крови // Гематология и трансфузиология. 1992. - № 4. - С. 32-35.

26. Воробьев А.И. . Новый? этап в развитии службы крови страны // Пробл. гематологии и перел. крови. 1995; - Т. 1, №1.- G. 3-6.

27. Воробьев А.И., Городецкий В.М., Крючков М.И. Получение, тромбоцитной массы и ее применение в терапии; лейкозов // Плазмаферез и гравитационная хирургия крови. Ереван, 1981. - С. 94-98.

28. Воробьёва Г.С., Компаниец• A.M., Ивашков В.И-, Разработка метода1 криоконсервирования тромбоцитов с ДМАЦ для клинических целей' // Консервирование крови и её компонентов. М., 1981.- С.77-78.

29. Временная инструкция по проведению работ с целью определения сроков годности лекарственных средств на основе метода ускоренного старения при повышенной температуре. МЗ CGCP. М;, 1979. - 7 с.

30. Гаврилов O.K., Кавешникова Б.Ф., Калинин Н.Н. Аппаратура и методы гравитационной' хирургии крови // Гравитационная хирургия крови / Под ред. О.К.Гаврилова. М;: Медицина, 1984. - С. 52-84.

31. Гланц С. Медико-биологическая статистика. — М.: Практика, 1998459 с.

32. Голдовский A.M. Анабиоз и его практическое применение. Л.: Наука, 1986.-167 с.

33. Головкина Л.Л. Значение антигенов тромбоцитов:в трансфузиологиии педиатрии // Новое в трансфузиологии.- 2000:- Вып. 25.- С.93-101.

34. Головкина Л.Л., Зотиков Е.А., Красникова Н.А. и др. Значение антигенов тромбоцитов систем HLA и НРА в трансфузиологии // Пробл. гематологии и переливания крови.-2003.-№1.- 41с.

35. Гордиенко Е.А., Осяцкий А.И:, Розанов Л.Ф. Научное обоснование способов низкотемпературного консервирования; клеточных суспензий // Пробл. криобиологии. 1997. - №1. - С. 67-71.

36. Гордиенко Е.А., Пушкарь H.G. Физические основы низкотемпературного;консервирования клеточных суспензий;- Киев: Наукова думка, 1994.- 144 с.

37. Городецкий В.М. Получение тромбоцитов от одного донора методом прерывистого тромбоцитафереза и их применение при амегакариоцитарной тромбоцитопении : Автореф. дис. канд. мед. наук. .--Mi, 1981. 30;с:

38. Городецкий В.М., Воробьев А.И. Получение лечебной дозы тромбоцитов от одного донора // Гравитационная хирургия крови /, Под ред. О.К.Гаврилова. М.: Медицина, 1983. - С. 153-154.

39. Еосударственная фармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа, лекарственное растительное сырьё / 11-е изд. М.: Медицина, 1990. — С.182-185;

40. Государственная фармакопея СССР. / 10-е изд. М.: Медицина, 1968.- 1079 с.

41. Гравитационная хирургия, крови / Под ред. O.K. Гаврилова. Mi: Медицина, 1984.-304 с.

42. Данилова А.В., Андожская И.В., Стерлин В.М. Заготовка и применение концентрата тромбоцитов* в отделении переливания, крови // Пробл. гематологии и переливания крови. 2000. - №2. - С. 19.

43. Данильченко В.В1 Разработка и обоснование принципов организации донорства в вооруженных силах Российской; Федерации : Автореф. дис. . д-ра мед. наук. СПб., 1996. - 28 с.

44. Данильченко В.В., Сидоркевич С.В., Калеко С.П. и др. Организация банков низкотемпературного консервирования клеток крови и костного мозга //Актуальные вопросы службы крови и трансфузиологии : Тез. докл. СПб., 1995.-С. 56.

45. Данильченко В:В;, Тюрин Р.В., Богданов А;Н. и др. Гемокомпонентная терапия у больных после; аутомиелотрансплантации // Актуальные вопросы гематологии : Тез. докл. Всеарм. науч. конф. СПб., 1995.-С. 67.

46. Дегтярева И.Н. Разработка эффективного метода получения лечебных доз тромбоцитов от минимального количества доноров, обеспечивающих проведение курса гемокомпонентной терапии : Автореф. дис. канд. мед. наук. Л., 1986. - 20 с.

47. Джумабаева Б.Т., Васильев С.А., Городецкий В.М., Воробьёв А.И. Способ хранения тромбоцитов. А.с. №1526697 от 7.12.89т. •

48. Дуткевич И.Г. Варианты аутогемотрансфузий в хирургической практике : Автореф. дис. . д-ра мед. наук.- Л;, 1987.-34 с.

49. Жибурт Е.Б. Трансфузиология. СПб.: Питер, 2002 - 736 с.

50. Журавлёв В.В. Получение лечебной . дозы тромбоцитного концентрата от одного донора с применением полимерных контейнеров кп км «600/400/400»: Автореф. дис.канд. мед. наук. СПб., 2005. - 20 с.

51. Журавлёв В.В., Сведенцов Е.П., Югов Ю.И. Опыт клинического применения трёхкратного тромбоцитафереза // Четвертая конференция. Московского общества гемафереза: Тез. докл. М., 1996.- С. 128.

52. Заготовка в полимерных контейнерах концентрата тромбоцитов и концентрата лейкоцитов из лейкотромбоцитарного слоя консервированной крови: (Метод: рекомендации). Mi, 1984. - 10 с.

53. Заготовка концентрата тромбоцитов методом двойного плазмацитафереза; с последующим криоконсервированием: (Метод, рекомендации). Киров, 1991. - 8 с.

54. Зайцева Г.А., Бутила Б.В., Карпов Д.А. и др. Актуальные проблемы гематологии и; переливания крови// V съезд гематологов и трансфузиологов Республики Беларусь: Тез. докл.- Минск, 2003.- Т.З.- G. 65.

55. Захаров В В. Консервирование тромбоцитов замораживанием при -80°С под защитой диметилацетамида: Автореф. дис. . канд. мед. наук. -СПб., 1996.-22 с.

56. Ивашков В .И., Рыбак А.Б., Федорова Л.И. О нахождении оптимального температурного режима криоконсервирования биологических объектов //Гематология и трансфузиология.- 1983.- №1.- С. 21-26.

57. Инструкция по заготовке тррмбоцитов от одного донора методом прерывистого тромбоцитафереза; с; применением, полимерных контейнеров.,. МЗ РФ от 29.05.1995г. М., 1995.- 15 с.

58. Инструкция по клиническому изучению концентратов тромбоцитов, замороженных с раствором «тромбокриодмац». М.,1979. - 9 с.

59. Инструкция по контролю стерильности консервированной: крови, ее компонентов, препаратов; консервированного костного мозга, кровезаменителей и консервирующих растворов. МЗ и МП РФ от 29.05.1995г.-М., 1995.- 11 с.

60. Инструкция по криоконсервированию клеток крови. МЗ РФ от 29.05.1995г.-М., 1995.-44 с.

61. Калинин Н.Н. Современное состояние проблемы плазмацитафереза //Гематология и трансфузиология. 1995.- №2.- С. 46-48.

62. Клестова В.И., Шабанова Л.И., Рябов Н.В., Ипатов С.Г. Получение чистой фракции тромбоцитов, из периферической крови доноров //Гравитационная хирургия крови / Под ред. O.K. Гаврилова. М.: Медицина,1983.-С. 154-155.

63. Ковалева Л.Г. Острые лейкозы / 2-е изд., перераб. и доп.- М.: Медицина, 1990.-272 с.

64. Колб В.Г., Камышников B.C. Клиническая биохимия. Минск: Беларусь, 1976. - 311 с.

65. Компаниец A.M. Консервирование концентратов тромбоцитов и их клиническая эффективность : Автореф. дис. . д-ра мед. наук. М., 1992. - 52 с.

66. Компаниец A.M. Функциональная полноценность тромбоцитов, сохраняемых при различных температурных режимах : Автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 1980. - 19 с.

67. Компаниец A.M., Аграненко В.А., Файнштейн Ф.Э. Трансфузии консервированных концентратов тромбоцитов показания, дозировка,, лечебная эффективность // III-й Всесоюз. съезд гематологов и трансфузиологов : Тез. докл. Т. 1. - Киров, 1991. - С. 433-434.

68. Компаниец A.M., Аграненко В.А., Хан Чер, Полянская A.M. Лечебная эффективность консервированных концентратов тромбоцитов // Клинич. медицина. 1989. - N12. - С. 74-80.

69. Компаниец A.M., Николенко А.В., Луговой В.И. Криоконсервирование тромбоцитов с веществами ряда полиолов // П-я Международная конференция по криобиологии : Тез. докл. Харьков, 1992. -С. 86.

70. Костяев А.А., Сведенцов Е.П., Утёмов С.В. и др. Оценка опыта применения электроморозильника «Криостат» для быстрого двухступенчатого замораживания клеточных суспензий // Мат-лы научн. сессии Пермской гос. мед. академии.-Пермь, 2001.-С. 154.

71. Криоконсервирование клеточных суспензий / Под общ. ред. А.А.Цуцаевой. Киев: Наукова думка, 1983. - 240 с.

72. Кровезаменители, консерванты крови и костного мозга : Справочник

73. Под ред. проф. Г.Н.Хлябича. -М.: Медицина, 1997. 192 с.

74. Кузнецов К.В. Консервирование тромбоцитов замораживанием при -80°С по экспоненциальной программе: Автореф. дис. канд. мед. наук. — СПб., 2006. 23 с.

75. Лабораторные методы исследования в клинике : Справочник / Под ред. проф. В.В.Меньшикова. М.: Медицина, 1987. - 368 с.

76. Лисовская И.Л., Аграненко В.А. Новый метод приготовления функционально активных концентратов тромбоцитов из консервированной крови 1-5 дней хранения//Гематология и трансфузиология. 1983. - № 10. - С. 55-58.

77. Лозина-Лозинский Л.К. Очерки по криобиологии. Адаптация и устойчивость организмов и клеток к низким и сверхнизким температурам. -Л.: Наука, 1972.-288 с.

78. Лобовская Л.В. Морфология поверхности свежевыделенных и консервированных тромбоцитов // П-й Всесоюзный съезд гематологов и трансфузиологов : Тез. докл. М., 1985. - С. 51.

79. Лобовская Л.В. Поверхностная архитектоника и электрофоретическая подвижность интактных и консервированных тромбоцитов: Автореф. дис. канд. мед. наук. М., 1985. - 25 с.

80. Лыткин М.И., Шевченко Ю.Л., Матвеев С.А. Применение криоконсервированных аутотромбоцитов в кардиохирургии // Грудная и сердечно-сосудистая хирургия. -1990. № 10. - С. 37-39.

81. Масчан А.А., Самочатова Е.В., Крыжановский О.И. Тактика сопроводительной терапии при лечении острого лимфобластного лейкоза по программе БФМ // Педиатрия. 1992. - N2. - С. 68-78.

82. Матвеев С.А. Изменение функциональных свойств тромбоцитов при хирургической инфекции и пути их коррекции // Вестн. хирургии им. И.М. Грекова. 1987. - Т. 138, № 6. - С. 142-145.

83. Матвеев С.А. Состояние тромбоцитарного гемостаза и егокоррекция при кардиохирургических операциях в условиях искусственного кровообращения : Дисканд. мед. наук. Л., 1988. - 195 с.

84. Механизмы индукции и репарации нелетальных криоповреждений / А.А. Цуцаева, А.О. Котляров, О.В. Кудокоцева и др. // Цитология. 2004. -Т. 46, №9: - С. 879;

85. Мигунов В.Н., Селиванов Е.А., Сведенцов Е.П. и др. Разработка отраслевого классификатора крови, инфузионных и трансфузионных сред // «Актуальные проблемы гематологии: и: трансфузиологии: Сб. научн. тр. — СПб., 2002. С. 233-234.

86. Мовшев Б.Е., Витвицкий В.М., Лисовская И.Л. и др. Трансфузионные среды: прикладные и фундаментальные1 аспекты // Гематология и трансфузиология.- 2001.- №3. С. 74-82.

87. Молекулярные механизмы криоповреждения мембранных структур / A.M. Белоус, Т.П. Бондаренко, В.А. Бондаренко //Криобиология и криомедицина. 1979. - № 5. - С. 3-13.

88. Никитин И.К., Козинец Г .И. Кровь, компоненты крови: хранение, фракционирование, качество и стандарты // Гематология: и трансфузиология.-2002.- Т.47, №4. С. 36-40.

89. Николаев AJL Биологическая химия: Учебник, для мед. спец. вузов.-М.: Высш. шк, 1989. 495 с.

90. Николенко А.В. Криопротекторные свойства полиолов и их производных при замораживании тромбоцитов: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Харьков, 1991. - 18 с.

91. Николенко А.В. Низкотемпературное консервирование тромбоцитов под защитой соединений ряда амидов // Криобиология. — 1985. №3. - С. 51.

92. Об утверждении инструкции по применению компонентов крови. Приказ МЗ РФ №363 от 25.11.2002г.-М., 2002. 29 с.

93. Осташко В.Ф., Осташко Ф.И. Температурный шок клеток как гидравлический удар в резонансной системе // Цитология. 2004. - Т. 46, №9.-С. 831-832.

94. Патент на изобретение №2049391 (РФ). Средство для криоконсервирования костного мозга / Е.П. Сведенцов, В.П. Архиреев, Д.С. Симкин, Е.В. Кузнецов. Опубл. 10.12.1995.

95. Петров М.М., Федорова Л.Н., Кураева Ю.И. и др. Донорский тромбоцитаферез на новом фракционаторе крови «Amicus» фирмы «Baxter» // Пробл. гематологии и переливания крови.-2002.-№1. 68 с.

96. Поздеев Н.М., Федоровская Н.А., Югов Ю.И. и др. Трансфузиологическое и гормональное обеспечение спленэктомий у больных апластической анемией // Актуальные вопросы трансфузиологии и клинической медицины: Мат-лы научн. конф. Киров, 1993. - С. 15-16.

97. Пушкарь Н.С., Белоус A.M. Введение в криобиологию.- Киев: Наукова думка, 1975.- 344 с.

98. Ре Луи Консервация жизни холодом. М.: Мир, 1962. - 155 с.

99. Руководство по общей и клинической трансфузиологии. / Ю.Л. Шевченко, В.Н. Шабалин, М.Ф. Заривчацкий, Е.А Селиванов.- СПб.: Фолиант, 2003.-608 с.

100. Руководство по трансфузионной медицине / Под ред. Е.П. Сведенцова. Киров, 1999. - 716 с.

101. Румянцев А.Г., Аграненко В.А. Клиническая трансфузиология.- М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1997.-575 с.

102. Рутберг Р.А., Маллер А.Р., Терентьева Э.И., Козинец Г.И. Получение больших количеств физиологически полноценной тромбоцитарной массы // Функциональные свойства тромбоцитов в норме и при патологических состояниях. Обнинск, 1975. - С. 71.

103. Рыжко В.В. Переливание тромбоцитной массы // Новое в трансфузиологии.- 1994.-Вып. 6.-С. 13-17.

104. Сведенцов Е.П., Костин А.И., Селезнёва О.М.| Аутодонорство тромбоцитов у онкогематологических больных // Вест, службы крови России. 1998. - №2.-С. 17-19.

105. Сведенцов Е.П., Кузнецов К.В., Утёмов С.В. и др. Криоконсервирование тромбоцитов при -80°С //Вестник службы крови России. 2006. - №2. - С.3-5.

106. Сведенцов Е.П., Рахматуллаев А.Р., Сахибов Я.Д. Заготовка и консервирование тромбоцитов для клинического применения. Ташкент: Абу Али ибн Сина, 1996. - 73 с.

107. Сведенцов Е.П., Селезнёва О.М.|, Симкин Д.С., (Новосадов1 В.М.

108. Водный раствор для криоконсервирования тромбоцитов. 1993. - Патент № 1561227 (Роспатент) от 12.04.1993г.

109. Селезнёва О.М.| Криоконсервирование тромбоцитов с применением нового хладоограждающего; раствора: Автореф: дис: . канд. биол. наук. -СПб., 1996.-21 с.

110. Серова Л.Д. Аллосенсибилизация к антигенам клеток и белков плазмы крови у гематологических больных // Гемокомпонентная инфузионная терапия и парентеральное питание : Сб. науч. тр. Л;, 1983. - С. 37-441.

111. Синицын П.Д., Волкова В.II. Переливание крови и ее компонентов. Челябинск: Челяб. мед. ин-т, 1988. - 118 с.

112. Скопина С.Б., Виноград-Финкель Ф.Р., Полушина Т.В: и др: Изыскание эффективных ограждающих растворов для криоконсервирования; тромбоцитов // Пробл. гематологии и переливания крови.- 1975.-№9.- С. 17211

113. Суворов А.Н., Poop О.А. Эффективность трансфузий концентратов тромбоцитов при лечении острых лейкозов: // Проблемы гематологии и переливания крови. 2003. - №1. - С. 57.

114. Фефелова И.В., Мхеидзе Д.М., Селидовкин Т.Д. и др. Криоконсервирование тромбоцитов с диметилсульфоксидом // Гематология и трансфузиология. 1991. - № 6. - С. 30-32.

115. Хейхоу Ф.Г.Дж., Кваглино Д. Гематологическая цитохимия. М.: Медицина, 1983. - 320 с.

116. Шабалин- В.Н., Серова О.Д., Абдулкадыров К.М. и др. Иммунологическое обеспечение компонентной гемотрансфузионной терапии // Проблемы гематологии и переливания крови. 1978. - № 8. - С. 3-7.

117. Шарова Ю.А., Аграненко В.А., Самсонова Н:Н. Клиническоеприменение тромбоцитоконцентрата в сердечно-сосудистой хирургии // Гематология и трансфузиология. 1989. - Т. 32, № 5. - С. 12-14.

118. Шевченко Ю.Л., Чечеткин А.В., Журавлев Ю.Н. и др. Принципы трансфузионной терапии при операциях на сердце // Актуальные вопросы службы крови и трансфузиологии: Тез. докл. Рос. конф. СПб., 1995. - С. 331.

119. Шитикова А.С. Тромбоцитарный гемостаз. СПб: Издательство СПб ГМУ, 2000.-227 с.

120. Шраго М.И., Гучок М.М., Калугин Ю.В. и др. О некоторых путях создания криопротекторов // Пробл. гематологии и переливания крови,- 1981.-№6.-С. 3-6.

121. Шраго М.И., Козлова В.Ф. Токсико-фармакологические исследования в криобиологии // Криобиология. 1987. - N1. - С. 5-10.

122. Щеглова О.О. Функциональное состояние лейкоцитов после выхода из холодового анабиоза при умеренно-низкой температуре: Автореф. дис. канд. биол. наук. Киров, 2005. - 20 с.

123. Adams J.A., Gordon А.А., Jiang Y.Z. et al. Thrombocytopenia after bone marrow transplantation for leukemia: Changes in megakaryocyte growth and growth-promoting activity // Br. J. Haematol. 1990. - Vol. 75, № 2. - p. 195-201.

124. Aisner J., Schiffer C.A., Wolff J.H., Wiernik P.H. A Standardized Technique for Efficient Platelet and Leukocyte Collection Using the Model 30 Blood Processor // Transfusion. 1976. - Vol. 16, № 5. - P. 437-445.

125. Alder S.P. Transfusion-Transmitted CMV-Infections. Clinical Importance and Means of Prevention // Vox. Sang. 1984. - Vol. 46, № 6. - P. 387414.

126. Angelini A., Dragani A., Berardi A. et al. Evalution of Four Different Methods for Platelet Freezing I I Vox. Sang. 1992. - Vol. 62, № 1. - P. 146-151.

127. Archer G.T., Grimsley P.O., Lindra J. et al. Survival of Transfused Platelets-Collected into New Formulation Plastic packs // Vox. Sang. 1982. - Vol. 43, № 4. - P.223-230.

128. Arnaud F.G., Pegg D.E. Cryopreservation of human platelets with 1.4M glycerol at -196 degrees С // Thromb. Res.- 1989.- Vol.53, №6.- P. 585-594.

129. Ashwood-Smith M.G. Low temperature preservation. of mouse lymphocytes with DMSO // Blood; 1964. Vol.23, №3. -P. 494-499.

130. AuBuchon JP, Taylor II, Holme S, Nelson E. In vitro and in vivo evaluation of leukoreduced platelets stored for 7 days in CLX containers. //Transfusion. — 2005. Vol. 45, №8. - P. 1356-61.

131. Badlou B:A. IJseldijk MJ.W. Smidt W.M. Prolonged platelet, preservation by transient metabolic suppression // Transfusion. 2005. - Vol. 45. -P.214.

132. Bannai M., Mazda Т., Sasakawa S. The effect of pH and agitation on platelet preservation //Transfusion. 1985. - Vol: 25, №1. - P. 57-59;

133. Beanjean F;, beforestier C., MannonUP^ Functional and clinical studibs-of Platelets frozen with 5% DMSO : Congress of the international society of Blood Transfusion. Abstracts (II), 27-28. Paris, 1978. - T.i. 319.

134. Benjamin R.J, Rojas P., Christmas S. Plateletpheresis efficiency: a comparison of the Spectra LRS and AMICUS separators //Transfusion. 1999; -Vol. 39.-P. 895.

135. Berndsen G. Zur. Trombozytenflussiglagerung // Folia Haematol. 1989. -Bd. 116, №2. - S. 227-234.

136. Besa E.C., Catalano P.M., Kant J.A. et al. Hematology. Philadelphia e.a.: Harwal Publ. - 1992. - P. 83.

137. Blajchman M.A., Goldman M., Baeza F. Improving the bacteriological safety of platelet transfusions // Transfus. Med. Rev. -2004. Vol.18. - P. 11-24.

138. Bock M, Greither L, Heim MU. Morphologic andafunctional changes in thrombocytes after deep freezing with DMSO"// Infusionsther Transfiisionsmed. -1996. -Vol. 23, №2. P. 76-79.

139. Bock M., Rotrig S., Kunz D. et al. Platelet concentrates derived from buffy coat and apheresis: biochemical and functional differences // Transfusion Medicine. 2002.- Vol: 12, №5. -P. 317.

140. Воск M.M., Schleuning M.U., Heim- P. and Mempol W. Cryoprcscrvation of human platelets with dimethyl sulfoxide: changes in biochemistry and cell function//Transfusion. 1995. - Vol.35. - P. 921-924.

141. Born G.V.R. Aggregation of blood platelets by adenosine diphosphate: and its reversal //Nature. 1962. - Vol. 194, №4832. - P. 927-929.

142. Brand A, Novotny V, Tomson B. Platelet transfusion therapy: from 1973 to 2005 // HumiImmunol;- 2006.- Vol:67, №6. P:413-418.

143. Brands A., Vam Eeeuwen A., Eemisse J:G., Van Rood J.J. Platelet Transfusion Therapy. Optimal donor Selection with a Combination of Lymphocytoxicity and Platelet Fluorescence Test // Bloodi 1978. - Vol. 51, № 5. - -P. 781-788.

144. Brodthagen U.A., Armitage W.J., Parmar N. Platelet Cryopreservation with Glicerol, Dextran and Mannitol: Recovery of 5-Hydroxytryptamine Uptake and Hypotonic Stress Response // Cryobiology. 1985. - Vol. 22, № 1. - P. 1-9:

145. Car R., Mutton J.L., Jenkins J.A. et al. Transfusion of ABO-mismatched platelets leads to early platelet refractoriness // Br. J. Haematol. 1990. - Vol. 75, № 3. - P. 408-413.

146. Chao F.C., Tullis .JiE.,. Tinch R.J. et al. Plateletpheresis by Discontinuous Centrifugation: Effect of Collecting Method on the in vitro Function of platelets // Brit.J.Haematol. 1979. - Vol. 39, № 2. - P. 177-187.

147. Clarke J.A., Salsbury J. Surface ultrastructure of human blood cells // Nature.- 1967. № 215. - P. 402-404.

148. Coffe C., Couteret Y., Pouthier F., Peters A. Prevention of Platelet

149. Alloimmunization//Transfus. Sci. 1990. - Vol.11, №2. - P. 133-139.

150. Daly P.A., Schiffer C.A., Aisner J., Wiernik P.H. Successful Transfusion of Platelets Cryopreserved for More Then 3 Years // Blood. 1979. -Vol.54.-P. 1023-1027.

151. Day H.J., Holmzen H., Zucker M.B. Methods for separating platelets from blood and plasms // Thromb. et diath Haemorr. 1975. - Vol.33, № 3. - p. 648-676.

152. Dayian G., Harris H.L., Vlahides G.D., Pert J.H. Improved Procedure for Platelet Freezing // Vox.Sang. 1986. - Vol.51, № 2. - P. 292-298. .

153. Dayian G., Pert J.H. A Simplified Method for Freezing Human Blood Platelets in Glycerol-Glucose Using a Statically Controlled Cooling Rate Device // Transfusion. 1979. - Vol.19, № 3. - P. 255-260.

154. Dayian G.M., Rowe A.W. Cryopreservation of human platelets for transfusion // Ciyobiology.- 1976.- Vol.13- P. 1-8.

155. Djerassi I., Roy A., Kim J., Cavins J. Dimethylacetamide, a New Cryoprotective Agent for Platelets // Transfusion. 1971. - Vol.11, № 2. - P. 72-75.

156. Fabris F., Belloni M., Casonato A. et al. Girolami A. Improvement of Platelet Aggregation Abnormalities in Thrombocytosis after Thrombocytopheresis // Folia Haematologica. 1981. - Vol.108, № 6. - P. 853-862.

157. Fabris F., Randi M., Casonato A. et al. The Significance of Plasma and (or) Platelet Activated Products After Apheresis Procedures // Thromb. Haemostas.- Stuttgart. 1983. - Vol.50, № 2. - P. 620-623.

158. Fiala J. Trombocytafereza // Vnitrni lekarstvi. Praha. - 1981. - Vol.27, № 12.-P. 1217-1222.

159. Fijnheer R., Pietersz R.N.I., Korte D.De, Roos D. Monitoring of platelet morphology during storage of platelet concentrates // Transfusion. 1989. - Vol. 29, №1.- P. 36-40.

160. Filip D.J., Duquesnoy R.I., Aster R.H. Predictive Value of Crossmatching for Transfusion of Platelet Concentrates to Alloimmunizid Recipients // Amer. J. Hemat. 1976. - Vol.1, № 4. - P. 471-479.

161. Fuller BJ. Cryoprotectants: the essential antifreezes to protect life in the frozen state // Cryo Letters. 2004 - Vol.25, №6. - P. 375-88.

162. Fuller В., Lane N., Benson E. Life in the frozen state. London, New York, Washington: CRS Press. - 2004. - P. 672.

163. Gardner F.H. Use of Platelet Transfusion // Brit. J. Haemotology. -1974. Vol.27, № 4. - P. 537-543.

164. Gascon P., Zoumbos N.C., Young N.S. Immunologic Abnormalities in Patients Receving Multiple Blood Transfusions // Ann. Intern. Med. 1984. - Vol. 100,№ 2.-P. 173-177.

165. Gilcher R.O. Blood and Apheresis Productes: Usage in Modern Transfusion Therapy // Plasma Ther. 1982. - Vol. 3, № 1. - P. 27-44.

166. Gmur J. Die Stellung der Thrombozyten und Granulozytentransfusion in der heutigen Spitalmedizin // Ther. Umsch. - 1982. - Vol. 39, № 7. - P. 515-518.

167. Gordone B.C., Coliano F.R., Tuttle S.A., Ervin T.J. A quick and efficient way to pool platelets // Transfusion. 1983. - Vol. 23, № 1. - P. 70-71.

168. Gottschall J.L., Johnston V.L., Rzad L. etal. Importance of white blood cells in platelet storage // Vox. Sang. 1984. - Vol. 47, № 2. - P. 101-107.

169. Gunson H.H., Makar I.F., Fletcher S., Merry A.H. Five day storage of platelet concentrates // Brit. J. Haematol. 1982. - Vol. 52, № 1. - P. 141.

170. Haddad SA, Lichtiger B, Klein HG. In vivo efficacy of shipped HLAmatched platelets // Transfusion. 2006. - Aug;Vol.46, №8. - P. 1306-1310.

171. Handin R.I., Fortier NX., Valeri C.R. Platelet respons to hypotonic stress after storage // Transfusion. 1970. - Vol. 10, N6. - P. 305-309.

172. Hattory A. S. Scanning electron microscopy of human peripheral blood cells//Acta haematol. jap. 1972.-№ 32. - P. 457-482.

173. Hattory A.S., Ito S., Sugawara A., Matsuoka M. Studies on fixation and drying of blood cells for scanning electron microscopic observation // Acta haematol. jap. 1975.-№ 38.-P. 86-95.

174. Hay S.H., Brecher M.E. Validation of pH and glucose determination for bacteria detection screening in platelet concentrates stored in the Terumo Teruflex XT612 platelet container//Transfusion.-2004.-Vol.44.-P. 1395.

175. Heal I.M., Bailey G., Helphingstine C. et al. Non-centrifugal plasma collection using cross-flow membrane plasmapheresis // Vox. Sang. 1983.- Vol. 44, № 3. - P. 156-166.

176. Heal I.M., Horan P.K., Schmitt T.C. et al. Long-Term Follow-up of Donors Gytapheresed More Then 50 Times // Vox. Sang. 1983. - Vol. 45, № 1. -P. 14-24.

177. Heaton W.A., Holme S., Keegan T. Development of a combined storage medium for 7-day storage of platelet concen trates and 420-day storage of red concentrates //Br. J.Haematol. - 1990. - Vol. 75, №3. - P. 400-407.

178. Herve P. Le piastrine in terapia transfusionale // Clin. Ter. 1984. - Vol. 109, №5.- P. 405-416.

179. Herve P, Potron G, Droule C, Beduchaud MP, Masse M, Coffe C, Bosset JF, Peters A. Human platelets frozen with glycerol in liquid nitrogen: biological and clinical aspects // Transfusion. 1981. - Vol.21, №4. - P. 384-90.

180. Herzig R.H., Herzig G.P., Bull M.J. et al. Correction of poor platelets transfusion responses concentrates // Blood. 1975. - Vol. 46, № 5. - P. 743-750.

181. Hester D., White D. Effect of plasmacytopheresis on the ultrastructure of platelets // Гематология и трансфузиология. 1985; - № 1. - С. 39-41.

182. Hogge D.E. Dutcher J.P., Aisner J., Schiffer C.A. Lymphocytoxic antibody is a predictor of response to random donor platelet transfusion // Amer. J. Hematol. 1983. - Vol. 14, № 4. - P. 363-369.

183. Hogg D.E., Thompson B.W., Schiffer C.A. Platelet storage for 7 days in second-generation blood bags // Transfusion. 1986. - Vol. 26, N2. - P. 131-135.

184. Hogman C.F. New Trends in Blood Component Therapy // Haematologia. 1983. - Vol. 16, № 1. - P. 23-38.

185. Holme S., Storage and quality assessment of platelets // Vox Sang. — 1998. Vol. 74, №2. - P. 207-216.

186. Holme S., Heaton W.A., Courtright M. Platelet storage lesion in second-generation containers: Correlation with platelet ATP levels // Vox Sang. 1987. -Vol. 53, №4.-P. 214-220.

187. Holme S., Heaton W.A., Moroff G. Evaluation of platelet concentrates stored for 5 days with reduced plasma volume // Transfusion. 1994. - Vol. 34, №1. - P. 39-43.

188. Huestis D.W., Feltcher J.L., White R.F., Price MJ. Citrate Anticoagulants for Plateletpheresis // Transfusion. 1977. - Vol. 17, № 2. - P. 151.155.

189. Hunderford D.A. Leucocytes cultured from smale inocula of whole blood and the preparation of metaphase chromosomes by treatment with hypotonic KC1 // Stain. Techn. 1965. - Vol. 40. - P. 333-338.

190. Ishikawa Y., Honda K., Sasakawa S., Hatada K. Prevention of Leakage of Di-2-ethylhexyl-phthalate from Blood Bags by Glow Discharge Treatment and Its Effect on Aggregability of Stored Platelets // Vox. Sang. 1983. - Vol. 45, № 1. -P. 68-76.

191. Jacobson M.S., Kevy S.V., Parkman R., Wesolowski J.S. An in vitro evaluation of a new plasticezer for polyvinylchloride medical devices // Transfusion. -1981.- Vol. 20, № 4. P. 443-447.

192. Kao K.J. Stability of platelet and plasma HLA concentarions in healthyadults or random-donor platelet concentrates // Transfusion. 1989. - Vol. 29, № 4. - 328-331.

193. Kahn R.A., Staggs S.D., Phillips G.L. Recovery, Life Span, and Function of stored plateletpheresis Units // Vox. Sang. 1981. - Vol. 40, № 4. - P. 253-259.

194. Kakaiya R.M., Katz AJ. Platelet preservation in lange containers // Vox. Sang. 1984. - Vol. 46, № 2. - P.l 11-118.

195. Kelton J.G., Smith J.W., Horsawood P. et al. Gov3715 alloantigen system on human platelets//Blood.- 1990. Vol. 75, № 11. - P. 2172-2176.

196. Kaplan С. Platelet transfusion therapy and management of refractoriness //In: ESTM. Current problems of transfusion medicine in clinical practice. St.Petersburg (Russia). 1993.- P.125-127.

197. Kenney D.M., Peterson I.I., Smith I.W. Extended storage , of single-donor apheresis platelets in CLX blood bags: Effect of storage on platelet morphology, viability and in vitro function //Vox Sang. 1988. - Vol. 54,. №1. - P. 24-33.

198. Kickler I.S., Ness P.M., Braine H.G. et al. The expression of IgG allotypes on platelets and immunization to IgG allotypes in multitransfused thrombocytopenic patients // Blood. 1990. - Vol. 76, № 4. - P. 849-852.

199. Kilkson H., Holme S., Murphy S. Platelet metabolism during storage of platelet concentrates at 22°C // Blood. 1984. - Vol. 64, N2. - P. 406-414.

200. Kim B.K., Baldini M.G. The Platelet Response to Hypotonic Shock.Its Value as an Indicator of Platelet Viability After Storage // Transfusion. 1974. -Vol. 14, №2. - P. 130-138.

201. Klein Ch.A., Blajchman M.A. Alloantibodies and Platelet Destruction // Seminars Thromb. Hemost. 1982. - Vol. 8, № 2. - P. 105-115.

202. Koerner K. Platelet Function after Shipment of Room Temperature Platelet Concentrates //Vox. Sang. 1983. - Vol. 44, № I. p. 37-41.

203. Kotelba-Witkowska В., Schiffer C.A. Cryopreservation of plateletconcentrates using glycerol-glucose // Transfusion. 1982. - Vol. 22, № 2. - P. 121124.

204. Kurtz S.R., McMican A., Carciero R. et al. Plateletpheresis experience with the haemonetics blood» processor 30, the IBM blood processor 2997, and the Fenwal GS-3000 blood processor // Vox. Sang. 1981. - Vol. 41, № 4. - P. 212-218.

205. Kutlay S., Ilhan J., Arslan O. Influence of storage time on activation of platelets collected with CS 3000 Plus and Cobe Spectra using platelet storage containers//Terapeutic Apheresis.-2002.-Vol.6.- P. 82.

206. Kutti L, Laroulis C.G., Dinsmore R.E. et al. A prospective study of platelet-transfusion therapy administered to patients with acute leukemia // Transfusion. 1982. - Vol. 22,.№1. - P. 44-47. .

207. Larsson S, Sandgren P, Sjodin A, Vesterinen M, Gulliksson H. Automated preparation, of platelet concentrates from pooled buffy coats: in vitro studies and experiences with the OrbiSac system // Transfusion. 2005. - Vol. 45, №5.-P. 743-751.

208. Lazarus H.M., Kaniechi-green E.A., Warm L.E. Therapeutic effectiveness of frozen platelet concentrates for transfusion // Blood; 1981.- Vol; 57, j\o 2. - P. 243-249.

209. Lee E.J., Schiffer C.A., Tomiyasu Т., Testa J.R. Clinical and; cytogenetic correlations of abnormal megakaiyocytopoiesis in patients with acute leukemia and chronic myelogenous leukemia in blast:crisis;// Leukemia. 1990; -Vol. 4, №5.-P. 350-353. .

210. Marino.; I.R., Weber Т., Esquivel G.O. et al. Intraoperative blood transfusion requirements and deficient hemostasis in hightly alloimmunized patients undergoing liver transplantation // Transplant proc. 1988. - Vol. 20, №6. - P. 1087

211. Marx R., Derlath S. Never eine Method zur vergleichend quantitativen Bestimmung der thrombocytenadhasivitat an blutfremden overflachen // Blut. -1957.-№3.-S. 247-254.

212. Mazur P. Cryobiology. The freezing of biological systems // Science. -1970. Vol. 169, № 5135. - P. 939-949.

213. Mazur P., Fuller B.J, Lane N. et al. Principles of cryobiology // Life in the frozen state.- New York.-2004.- P. 3-65.

214. McLeod B.C., Sassetti R.J., Weens J.H., Vaithianthan T. Haematolytic Transfusion Reaction Due to ABO Incompatible Plasma in a Platelet Consentrare // Scand. J. Haematol. 1982. - Vol. 28, № 3. - P. 193-196.

215. McShine R.L., Weggemans M., Das P.C. et al. The Use of Fresh Plasma and a Plasma-free Medium to Enhance the Aggregation Response of Stored Platelets // Platelets. 1993. - № 4. - P. 338-340.

216. Meer P., Pietersz R, Reesink H. Leucoreduced platelet concentrates in additive solution: an evaluation of filters and storage containers // Vox Sang.- 2001-Vol.81.-P. 102-107.

217. Meer P., Vrielink H., Pietersz Ruby N.I. Preparation and storage of white blood cell-reduced split apheresis platelet concentrates for pediatric use //Transfusion. 2005. - Vol.45. - P. 223.

218. Melaragno A.J. Abdu W.A., Katchis R.J. et al. Cryopreservation of platelets isolated with the IBM 2997 Blood Cell Separator:A rapid and simplified approach // Vox Sang.- 1982.- Vol.43.- P. 321-326.

219. Melaragno A., Carciero R., Feingold H., et al. Cryopreservation of human platelets using 6% dimethylsulfoxide and storage at -80°C. Effects of 2 years of frozen storage at -80°C and transportation in dry ice // Vox Sang.- 1985.-Vol.49.- P. 245-258.

220. Menitov I.E., Aster R.H. Transfusion of Platelets and Plasma Products //Clin. Haemotol. 1983. - Vol. 12, № 1. - P. 239-266.

221. Menitov I.E., Frenzke M., Aster R.H. Use of prostacyclin to inhibit activation of platelets during preparation of platelet concentrates 7/ Transfusion. -1984. Vol. 2, №6. - P. 528-531.

222. Meryman H.T. Freezing injure and its prevention in living cells // Annu. Rev. Biophys. andBioeng. 1974. - № 3. - P. 341-363.

223. Mrowiec L., Skzeczkowska E., Kotelba-Witkowska B. et al. Przechowywanie koncentratow krwinek plytkowych w temperaturze -80°C. Ocena in vivo // Acta haematol. pol. 1986. - Vol. 17, №1-2. - S. 2-16.

224. Mueller-Eckhardt C., Mersch-Baumert K. The Problem of Platelet Autoantibodies. I. Evaluation // Vox. Sang. 1977. - Vol. 33, № 4. - P. 221-233.

225. Murphy M.E., Pullon H.W.H., Metcalfe P. et al. Menagement of fetal aHoimmune thrombocytopenia by weekly in utero platelet transfusions // Vox Sang. 1990. - Vol. 58, №1. - P. 45-49.

226. Murphy S., Litwin S., Herrinf L.M. et al. Indication for platelet transfusion in children with acute leukemia // Amer. J. Hematol. 1982. - Vol. 12, №4.-P. 347-356.

227. Nusbacher J., Scher M.L., MacPherson J.L. Plateletpheresis using the Haemonetics Model 30 cell Separator // Vox. Sang. 1977. - Vol. 33, № 1. - P. 915.

228. Odink J., de Wit J.J., Janssen C.L., Prins H.K. Platelet Preservation Preparation and Cryopreservation of Platelet Concentrates from Fresh and Overnight stored Human Blood // Transfusion. - 1978. - Vol. 18, № 1. - P. 21-28.

229. Owens M., Cimino C., Donelly I. Cryopreserved platelets have decreased adhesive capacity // Transfusion. 1991. - Vol. 31, №2. - P. 160-163.

230. Owens M., Werner E., Holme S., Afflerbach C. Membrane

231. Glycoproteins in Cryopreserved Platelets I I Vox. Sang. 1994. - Vol. 64, № 1. - P. 28-31.

232. Packham M.A., Mustard J.F. // Progress in hemostasis and thrombosis. V.7 / Ed T.H.Spaet. New York, 1984.-P. 211-288.

233. Patel I.P., Ambinder E., Holland J.F., Aledort L.M. In vitro and in vivo Comparison of Single Donor Platelets and Multipledonor Pooled Platelets Transfusions in Leukemic Patients // Transfusion. 1978. - Vol. 18, № 1. - P. 116119.

234. Perseghin P., Mascaretti L., Speranza Т., et al. Platelet activation during plasma-reduced multicomponent PLT collection: a comparison between СОВЕ Trima and Spectra LRS turbo cell separators //Transfusion. 2004. - Vol.44. - P. 125

235. Petz L. Platelet transfusions //L. Petz et al. (ed.), Clinical practice of transfusion medicine. 1996. - Ch. 16 - P. 359-412.

236. Pietercz R.N.I., Loos J.A., Reesink H.W. Platelet concentrates stored in plasma for 72 hours at 22°C prepared from buffycoats collected in a quadruplebag saline-adenin-glucose-mannitol system // Vox Sang. 1985. - Vol. 49, №2. - P. 8185.

237. Pietersz R.N.I., Reesink H.W., Huijgens P.S., Van Oers M.H.I. Preparation of leucocyte-poor platelet concentrates from buffy coats. IV. Clinical evaluation/// Vox Sang. 1988. - Vol. 55, №3. - P. 129-132.

238. Pushkar N.S., Itkin Yu.A., Bronshtein V.L. et al. On the problem of dehydration and intracellular crystallization during freezing of cell suspension // Cryobiology 1976. - Vol. 13, № 2. - P. 147-152.

239. Racz L., Hasko F. Room temperature storage of pooled platelet concentrates in gas-permeable plastic bags for five days // Haematologia. 1989. -Vol.22, №2. - P. 89-96.

240. Ramphilon D.H., Potter M., Cutts M. et al. Platelet concentrates irradiated with ultraviolet ligth retain satisfactory in vitro storage characteristics andin vivo survival // Br. J. Haematol. 1990. - Vol. 75, № 2. - P. 240-244.

241. Reali G., Avanzi G., Bacigalupo A. et al. HLA-matched Platelets from Unrelated Donore in the Supportive Therapy of Patients Undergoing Intensive Haemotologic Treatment // Haematologica. 1978. - Vol. 63, № 5. - P. 575-585.

242. Rebulla P. Platelet support of patients with hematological malignancy //In: ESTM. Current problems of transfusion medicine in clinical practice. StPetersburg (Russia). 1993. - P.95-104.

243. Redmond J.M., Bolin R.B., Cheney B.A. Glycerol-glucose cryopreservation of platelets. In vivo and in vitro observations // Transfusion.-1983.-Vol.23, №3.-P.213-214.

244. Ridgway R.L., Usry R.T. Cryopreservation of Platelets Simplified: A Modified Glycerol-Glucose Method // Transfusion. 1980. - Vol. 20, № 4. - P. 427432.

245. Rock G., Scerring V.A., Tittley P.A. Five-day storage of platelet concentrates // Transfusion. 1984. - Vol. 24, № 2. - P. 147-152.

246. Rock G., Titley P.A. A comparison of results obtained by two different chromium-51 methods of deteminind platelet survival and recovery // Transfusion. -1990. Vol. 30, № 5. - P. 407-410.

247. Rock G., Tittley P., McCombie N. 5-day storage of single-donor platelets obtained using a blood cell separator // Transfusion. 1989. - Vol. 29, №4. -P. 288-291. ,

248. Rozenstein R., Zacharski L.R., Allen R.D. Quantitation of human platelet transformation on siliconized glass: Comparison of «normal» and «abnormal» platelets // Thromb.Haemost. -1981.- Vol. 46, № 2. P. 521-524.

249. Sadani DT, Urbaniak SJ, Bruce M, Tighe JE. Repeat ABO-incompatible platelet transfusions leading to haemolytic transfusion reaction // Transfus Med. 2006,-Vol. 16, №5. -P. 375-379.

250. Saito. S., Ota. S., Seshimo. H., et al. Platelet transfusion refractoriness caused by a mismatch in HLA-C antigens. // Transfusion. 2002. - Vol.42, №3. —1. P. 302-308.

251. Santoso S., Lohmeyer J., Rennich H. et al. Platelet surface antigens: Analysis by monoclonal antibodies. I. Immunological and biochemical studies // Blut. 1984. - Vol. 48, № 3. - P. 161-170.

252. Schiffer C.A., Anderson K.C., Bennett C.L. Platelet transfusion for patients with cancer: Clinical practice guidelines of the American Society of Clinical Oncology//J. Clin. Oncol. -2001. -Vol.19. -P. 1519-1538.

253. Schiffer C.A., Jiseph Aisner, Wiernik P.H. Clinical Experience with Transfusion of Cryopreserved Platelets // Br. J. Haematol. 1976. - Vol. 34, № 3. -P. 377-385.

254. Schiffer C.A., Jiseph Aisner, Wiernik P.H. Frozen autologous platelet transfusion for patients with leukemia// N. Engl. J. Med. 1978. - Vol. 299, № 1. -. P. 7-12.

255. Schiffer C.A., Lee E.I., Ness P.M., Reilly G. Clinical evaluation of platelet concentrates stored for one to five days // Blood. 1986. - Vol.67, №6. - P. 1591-1594.

256. Schmidt K.G., Rasmussen J. W. Preparation of Platelet Suspensions from Whole Blood in Buffer. Description of a metod which gives a large platelet,yield // Scand. J. Haematol. 1979. - Vol. 23, № 2. -P. 88-96.

257. Schneider W., Frohling Ch., McCarty L.J. Blood Component Preparation in Single Plastic Bags // Blut. 1974. - Vol. 29, № 1. - P. 1-12.

258. Schoendorfer D.W., Hansen L.E., Kenney D.M. The surge technique: A metod to increase purity of platelet concentrates obtained by centrifugal apheresis // Transfusion. 1983. - Vol. 23, № 3. - P. 182-189.

259. Shah G.A., Lenferink I.C.M. Extension of platelet concentrate storage by addition of sodium bicarbonate // Transfusion. 1985. - Vol. 25, № 2. - P. 162164.

260. Shimada K., Asahia E. Vizualization of intracellular ice crystals formed in very rapidly frozen cells at -27°C // Cryobiology 1975. - Vol. 12, № 3. - P. 209

261. Shimizu Т., Kouketsu К., Morishima Y. et al. A new polyvinylchloride blood bag plasticized with less-lachable phthalate ester analogue, di-n-decyl phthalate, for storage of platelets // Transfusion. 1989. - Vol. 29, № 4. - P. 292297.

262. Simon T.L., Neison E.I., Carmen R., Murphy S. Extension of platelet concentrate storage // Transfusion. 1983. - Vol. 23, №3. - P. 207-212.

263. Singh H, Chaudhary R, Ray V. Evaluation of platelet storage lesions in platelet concentrates stored for seven days // Indian J. Med. Res. 2003. - Vol. 118. -P. 243-246.

264. Slichter SJ. Efficacy of Platelet Collected by Semi-continuous Flow Centrifugation (Haemonetics Model 30) // Brit.J.Haematol. 1978. - Vol. 38, № 1. -P. 131-140. ,:

265. Slichter S.I. Poststorage platelet viability in thrombocytopenic recipients is reliable measured by radiochromium-lebeled platelet recovery and survival measurements in normal volunteers // Transfusion. 1986. - Vol. 26, №1. - P. 8-13.

266. Slichter S.J., Harker L.A. Preservation and Storage of Platelet Concentrates // Transfusion. 1976. - Vol. 16, № 1. - P. 8-12.

267. Smit Sibinga C. Th. Platelets for transfusion: Collection, processing and preservation aspects // Blut. 1987. - Vol. 55, №6. - P. 475-482.

268. Snyder E.L., Bookbinder M., Kakaiya R. et al. 5-Day storage of platelet concentrates in CLX containers: effect of type of agitation // Vox Sang. 1983. -Vol.45, N6. - P.432-437.

269. Snyder E.L., Hezzey A., Katz A.J., Bock J. Occurrence of the Release Reaction during Preparation and Storage of Platelet Concentrates // Vox. Sang. -1981. Vol. 41, № 2. - P. 172-177.

270. Snyder E.L., Korner T.A.W., Kakaiya R. et al. Effect of mode of agitation on storage of platelet concentrates in PL-732 Containers for 5 days //Vox Sang. 1983. - Vol. 44, №5. - P. 300-304.

271. Spector J.I., Flor W.J;, Valeri G.R. Ultrastructural Alterations and Phagocytic Function of Cryopreserved Platelets // Transfusion. 1979. - Vol. 19, № 2.-P. 307-312.

272. Spector J.I., Skrabut E.M., Valeri G.R. Oxygen Consumption, Platelet Aggregation and: Release Reactions in Platelets Freeze Preserved with Dimethylsulfoxide//Transfusion.- 1977.- Vol: 17, № 2. - P. 99-109:

273. Sturk A., Burt L.M., I lakvoort M. et al. The effect of storage on platelet morphology // Transfusion. 1982. - Vol. 22, № 2. - P. 115-120.

274. Towell В., Levine S., Knight W., Anderson J. A comparison of frozen and fresh platelet concentrates in. the support of thrombocytopenic patients // Transfusion.- 1986.- Vol.26, №6.- P. 525-530.

275. Turner R.H., Green C.D. Preparation of biological material for scanning electron microscopy by critical point drying from water miscible solvents // J. Microscopy. 1973. - № 97. - P. 357-363.

276. Turpin F., Tubiana-Hulin M., Meens E. et aK Accidents de le chimiotherapie antitumorale et antileucemique // Sem. Hop. Paris. 1982. - Vol; 58, №38.-P. 2175-2184.

277. Valery C.R. An integrated Liquid-Frozen Blood Banking System // Vox. Sang. 1983. - Vol. 45, № 1. - P. 25-39.

278. Valery C.R., Feingold H., Marchioni L.D. A Simple Method for

279. Freezing Human Platelets Using 6 % Dimethylsulfoxide and Storage- at -80°C //Blood. 1974. - Vol. 43, №1.-P. 131-136.

280. Valeri CR, Srey R, Lane JP, Ragno G. Effect of WBC reduction and storage temperature on PLTs frozen with 6 percent DMSO for as long as 3 years. // Transfusion. 2003. - Vol. 43, №8. - P. 1162-1167.

281. Van Prooijen H.C., Van Heugten J.G., Mommerteeg M.E., Akkerman J.W.N. Acquired secretion defect in platelets after cryopreservation in dimethylsulfoxide // Transfusion. -1986. Vol: 26, № 4. - P. 358-363.

282. Vecchione J., Melaragno A., Hollander A. et al Circulation and function of human platelets isolated from units> of CPDA-1, GPDAr2 and CPDA-3 anticoagulated blood and frozen with DMSO // Transfusion.- 1982.- Vol.22, №3.-P. 206-209.

283. Vezon G., Conte P.H., Lauroua Pi, Moulinier J. Transfusions de plaquettes // Bordeaux Med. 1978 - Vol: 11, № 24. - P. 2239-2245.

284. Vucetic D., Balint В., Taseski J. et al. Biochemical changes in thrombocyte concentrates stored for 5 days.//Vojnosamit Pregl.- 2000.— Vol.57. — P. 29-36.

285. Walker E.M., Cannon A., Mitchum E.N. Current status of leukocyte and platelet administration in cancer therapy // Ann. Clin. Lab. Sci. 1983. - Vol. 13, №6.-P. 453-473.

286. Wallvik I., Akerblom O. The platelet storage capability of different plastic containers // Vox Sang. 1990. - Vol. 58, №1. - P. 40-44.

287. Washitani Y., Irita Y., Yamamoto K. et al. Prevention of acquired defects in platelet function during blood processing // Transfusion. 1988. - Vol. 28, №6. -P. 571-575.

288. Waters A.H., Minchinton R.M., Bell R. et al. A cross-matching procedurs for the selection of: platelet donors for alloimmunized patients V/ Brit. J. Haematol. -1981. Vol. 41, № 1. - P. 59-68.

289. Wautier J.L. Safety and usefulness of autologous cryopreserved platelets // Lancet. 2002. - Vol.22. - P. 2145-2152.

290. Wildt-Eggen J, Schrijver JG, Bouter-Valk HJ, Fijnheer R, Bins M, van Prooijen HC. Improvement of platelet storage conditions by using new polyolefin containers. // Transfusion. 1997. - Vol. 37, №5. - P. 476-481.

291. Wirman J.A., Ruder E.A., Smith R.T., Tsao С Functional and ultrastructural status of platelets prepared by the Celltrifuge // Transfusion. 1975 . -Vol. 15, № 6. - P. 614-619.

292. Witzig Т.Е., Ducatman B.S., Wick M.R. et al. Platelet transfusion therapy in acute leukemia; lack of effect of splenomegaly on transfusion requirements and risk of hemorrage // Amer. J. Hematol. 1985. - Vol. 18, №4. - P. 345-350. .

293. Xiao H, Harvey K, Labarrere CA, Kovacs R. Platelet ci-yopreservation using a combination of epinephrine and dimethyl sulfoxide as. cryoprotectants. //Cryobiology.- 2000. Vol. 41, №2. - P. 97-105.

294. Zaroulis C.G., Spector I.J., Emerson G.P., Valeri G.R. Haemostatic effectiveness of previously frozen washed human platelet transfusions //Congress of The International Society of Blood Transfusion; Abstracts (II), 27-28. Paris, 1978. - T.i. 319. .

295. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

296. Яленский А.Ю., Сведенцов Е.П., Утёмов С.В., Костяев А.А. Криоконсервирование тромбоцитов при — 40° С// В сб.: Материалы научной сессии Кировского филиала Академии Естествознания. Киров, 2001. - С. 142.

297. Яленский А.Ю., Сведенцов Е.П. Новый метод криоконсервирования тромбоцитов при температуре -40°С// Пермский медицинский журнал (рецензируемый).-2003.-Том 20, №2.-С. 197-199.

298. Сведенцов Е.П., Яленский А.Ю. Морфофункциональные особенности тромбоцитов через разные сроки хранения при -40°С// В сб.: Материалы

299. Российской научно-практической конференции «Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии». Санкт-Петербург, 2004. - С. 161-162.

300. Патент РФ № 2230454 Хладоограждающий раствор для замораживания тромбоцитов при умеренно-низкой температуре / Е.П.Сведенцов, А.Ю.Яленский, С.В.Утёмов, А.А.Костяев. Заявлено 24.05.2002; Опубл. 20.06.2004, Бюл.17.

Информация о работе

Яленский, Андрей Юрьевич
кандидата биологических наук
, 0
ВАК 03.00.13

Диссертация

Функциональное состояние тромбоцитов, вышедших из криоанабиоза (-40[О]С) - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему Функциональное состояние тромбоцитов, вышедших из криоанабиоза (-40[О]С) ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Функциональное состояние тромбоцитов, вышедших из криоанабиоза (-40[О]С)"

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Яленский, Андрей Юрьевич

Введение Диссертация по биологии, на тему "Функциональное состояние тромбоцитов, вышедших из криоанабиоза (-40[О]С)"

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Яленский, Андрей Юрьевич

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Яленский, Андрей Юрьевич,

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Функциональное состояние тромбоцитов, вышедших из криоанабиоза (-40[О]С)
ВАК РФ 03.00.13, Физиология