Функциональное состояние лейкоцитов крови лабораторных животных при экспериментальной анемии и влиянии фитоэкдистероидов Serratula Coronata L.

Репина, Екатерина Николаевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Функциональное состояние лейкоцитов крови лабораторных животных при экспериментальной анемии и влиянии фитоэкдистероидов Serratula Coronata L.
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Функциональное состояние лейкоцитов крови лабораторных животных при экспериментальной анемии и влиянии фитоэкдистероидов Serratula Coronata L."

□03053827

На правах рукописи

Репина Екатерина Николаевна

ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ЛЕЙКОЦИТОВ КРОВИ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ АНЕМИИ И ВЛИЯНИИ ФИТОЭКДИСТЕРОИДОВ SERRA TULA CORON AT A L.

03.00.13 - физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ярославль 2007

003053827

Работа выполнена на кафедре физиологии человека и животных ГОУ ВПО «Сыктывкарский государственный университет»

Научные руководители

кандидат биологических наук, доцент Мойсеенко Н.А.

доктор биологических наук, профессор Федорова М.З.

Официальные оппоненты

доктор медицинских наук, профессор Михайлов В.П.

кандидат биологических наук, доцент Низов Л.В.

Ведущая организация

Российский университет дружбы народов

Защита состоится «¿V » itW-pjnOL- 2007 г. в «_/£_» час. на заседании диссертационного совета Д 212.307.02 при ГОУ ВПО «Ярославский государственный педагогический университет им. К.Д. Ушинского» (150000, Ярославль, ул. Республиканская, 108)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Ярославский государственный педагогический университет им. К.Д. Ушинского».

Автореферат разослан « » . 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат биологических наук, доцепт ^ЙЁ Тихомирова И.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одной из важнейших проблем современной физиологии является исследование закономерностей процессов адаптации организма к различным факторам среды (H.A. Агаджанян и соавт, 1999; 2001; В.П. Казначеев, 1980; Ф.З. Меерсон, 1981; В.С.Новиков, 1998). Система крови, имея высокую реактивность, быстро включается в реакции на действие физиологических и экстремальных факторов среды, обеспечивая поддержание гомеостаза (Н.В. Васильев и соавт., 1992; Г1.Д. Горизонтов и соавт., 1983; Г.И. Козинец и соавт., 2001; Б.Г. Юшков и соавт., 1999; 2001). Лейкоциты крови вовлечены в иммунные процессы (Р.В. Петров, Т.Н. Ульянкина, 1995; В.А. Черешнев и соавт., 2002 и др.), играют важную роль в создании микрососудистого сопротивления (C.A.Alonso et al., 1995; М.Т. Eppihimer, íl.H. Lipowsky, 1996; B.P. Helmke et al., 1997).

В последнее время значительно вырос интерес к изучению растительных экдистероидов, обладающих комплексом положительных свойств при отсутствии каких-либо побочных эффектов на организм животных и человека (Л.Д. Пчеленко и соавт., 2002; В.Н. Сыров, З.А. Хушбактова, 2001; Yu. D. Kholodova, 2001). Показано, что растительные экдистероиды оказывают адаптогеиное; анаболическое; иммуномодулирующее и иммунокорригирующее; антиоксидантное и антирадикальное; бактерицидное и противовоспалительное; улучшающее реологические свойства крови (В.В. Володин, 1999, 2006; Л.Ф. Осинская и соавт., 1992; М.Б. Плотников и соавт., 1999; A.G. Kurmukov, O.A. Yermishina, 1991). Известно влияние экдистероидов на пролиферацию клеток позвоночных (3. Саатов и соавт., 1979; К. Slama, 1993), что имеет важное значение при развитии анемий разного происхождения.

Фитоэкдистероиды - полигидроксилированные стерины, структурно идентичные или подобные гормонам линьки и метаморфоза насекомых. Теоретической основой их применения является физиологическое действие на организм млекопитающих, обусловленное свойством данных соединений стимулировать биосинтез белка без эффектов других стероидов (К. Slama, R. Lafont, 1995). В 80-х годах в Институте химии растительных веществ АН УзССР из корней левзеи сафлоровидной (Rhapontucum cartomoides (Willd.) lljirí) была выделена активная экдистероидсодержащая субстанция, на основе которой разработан препарат тонизирующего действия «Экдистен» (Н.К. Абубакиров, 1981; И.О. Куракина,

В.М. Булаев, 1990; А.У. Маматханов и соавт., 1980). Низкий процент выхода экдистероидов левзеи, высокие затраты на создание сырьевой базы приводят к поиску растений с высоким содержанием экдистероидов, одним из которых является серпуха венценосная {БеггаШЫ согопаш Ь.). Экдистероидсодержащая субстанция Серпистен растений 8еггМи1а согопа}а Ь. успешно разрабатывается в последнее время (В.В. Володин, И.Ф. Чадин, 1996). Однако механизмы физиологического действия новой субстанции на организм теплокровных изучены недостаточно. Система крови и в том числе лейкоциты отражают многие происходящие в организме физиолого-биохимические процессы. Изучение функционального состояния лейкоцитов в ответ на действие Серпистена продиктовано стремлением ближе подойти к раскрытию механизмов действия субстанции на живой организм, а также потребностью создания нового препарата с большим набором физиологических эффектов.

Цель исследования: изучение функциональной активности и количественного состава лейкоцитов крови лабораторных животных при экспериментальной анемии в условиях корригирующего действия растительных экдистероидов.

Для достижения цели определены следующие задачи:

1. Исследование особенности функциональной активности лейкоцитов крови при экспериментальной гемолитической анемии (фенилгидразин).

2. Оценка характера влияния и эффекты последействия экдистероидсодержащей субстанции на состав и функции лейкоцитов крови практически здоровых лабораторных животных в зависимости от режима и дозы введения.

3. Изучение функционального состояния лейкоцитов крови под действием субстанции Серпистен на фоне развившейся гемолитической анемии и при условии предварительных (профилактических) введений исследуемой субстанции.

Научная новизна исследования. Впервые показаны эффекты одно- и многократного введения экдистероидсодержащей субстанции (ЭС) Серпистен на функциональную активность лейкоцитов лабораторных животных. Выявлена способность ЭС повышать активность элементов защитной системы крови, усиливая фагоцитарную активность лейкоцитов, повышая сумму поглощенных микроорганизмов независимо от дозы, режима введения и состояния организма.

Впервые проведено комплексное исследование функциональной активности лейкоцитов под действием Серпистена у крыс в норме и

при экспериментальной гемолитической анемии. Исследованы особенности сопротивляемости лейкоцитов крови средам с низкой осмолярностыо, выраженные через резистентность и регуляторные возможности при сочетанием и раздельном действии Серпистена и фенилгидразнна. Выявлено, что ЭС, введенная как до, так и на фоне гемолитика, способствует формированию «экономного» типа реагирования нейтрофилов и лимфоцитов, проявляющегося в ограничении набухания клеток при снижении концентрации окружающего раствора. Проведена оценка адгезионной способности лейкоцитов крови под действием Серпистена у крыс в норме и при анемии. Впервые показано, что эффект Серпистена зависит от иола животных (мыши, крысы). Впервые продемонстрирована возможность ЭС «нормализовать» картину белой крови крыс, измененной действием гемолитического яда.

Няучпо-пряктнчсскаи значимость. Способность новой ЭС Серпистен стимулировать несиецифические защитные силы организма грех видов лабораторных животных (млекопитающих) может быть учтена и использована при создании новых лекарств или биологически активных пищевых добавок.

Эффекты ЭС в условиях экспериментальной анемии открывают перспективы использования ее в качестве мембраностабилизирующего и адаптогенного средства в клинической практике для предупреждения и лечения гемолитических анемий.

Материалы и методы экспериментальной части включены в работы большого практикума по курсу «Физиология человека и животных» па кафедре физиологии человека и животных СГУ.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Снижение повреждающего действия гемолитического яда как при профилактическом введении ЭС Сернистен, так и при введении на фоне фенилгидразиновой анемии обусловлено стабилизацией поверхностной мембраны клеток крови, способствующей облегчению выхода животных из состояния гемолитической анемии.

2. При введении ЭС Серпистен в реакциях на гемолитический яд стабилизируется количественное соотношение различных форм лейкоцитов крови лабораторных животных.

3. В ответ на введение ЭС Серпистен происходит активация лейкоцитов, проявляющаяся в повышении суммы поглощенных микроорганизмов и фагоцитарной активности нейтрофилов и моноцитов крови лабораторных животных.

Па правах автора выражаю благодарность научным руководителям д.б.н., проф. М.З. Федоровой БелГУ за руководство в выполнении

работы и к.б.н., доц. Н.Л. Мойсеенко СыктГУ за научное направление темы диссертации и осуществление руководства над работой в период учебы в аспирантуре; д.б.н. В.В. Володину и к.б.н. С.О. Володиной ИБ КНЦ УрО РАН за предоставленную ЭС Серпистен и химические реактивы; сотрудникам кафедры физиологии человека и животных СыктГУ; к.м.н., врачу высшей категории, гематологу-иммунологу г. Н. Новгорода Г.В. Сидневу; ст.н.с. ИБ КНЦ УрО РАН А.И. Кичигину.

Апробация работы. Результаты исследований доложены и обсуждены на III Всероссийской конференции с международным участием, посвященной 175-летшо со дня рождения Ф.В. Овсянникова «Механизмы функционирования висцеральных систем», Санкт-Петербург, 2003; VII Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей «Человек и его здоровье», Санкт-Петербург, 2004; конференции студентов и молодых ученых «Научное студенческое сообщество и современность», Анталия, 2004; XIX Съезде физиологического общества им. И.П. Павлова, Екатеринбург, 2004; IX международном Съезде Фнтофарм, конференции молодых ученых Европейского Фитохимического общества «Растения и здоровье», Санкт-Петербург, 2005; IV Молодежной научной конференции Института физиологии КНЦ УрО РАН «Физиология человека и животных: от эксперимента к клинической практике», Сыктывкар, 2005; 2006; IV Всероссийской научной конференции «Химия и технология растительных веществ», Сыктывкар, 2006.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 22 печатных работы, из них 3 статьи.

Объем и структура диссертации. Диссертация содержит 203 страницы машинописного текста, 27 таблиц, 9 рисунков. Рукопись состоит из четырех глав (обзор литературы, материал и методы исследования, трех разделов, содержащих результаты исследований, обсуждения результатов), выводов и литературы, включающего 289 наименований (213 отечественных и 76 зарубежных публикаций).

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования выполнены на 453 крысах (нелинейные и Wistar) обоего пола, на 319 мышах (альбиносы и СБА) обоего пола и на 18 кроликах Шиншилла (самцы).

Выделение Серпистена из надземной части растений Serratula coronara L. проведено в лаб. биохимии и биотехнологии растений ИБ КНЦ УрО РАН (патент РФ № 2153346, № 2276991, товарный знак № 282636 от 22.05.2005 г.; приоритет 04.08.2005 г.). Субстанция

содержит: 20-гидроксиэкдизон (20Е) - 80%, 258-инокостерон - 11%, экдизон - 5% и др. минорные фракции. Серпистен растворяли в 0,9% КаС! (ЗАО "Верофарм", Воронеж), получая 0,3% раствор.

Организация эксперимента. Лабораторным животным одно- и многократно вводили Серпистен. Анемию вызывали подкожным введением фенилгидразина (ФГ) (2,5% раствор). Крыс и мышей после дачи эфирного наркоза декапигировали. У кроликов кровь для анализа брали из краевой вены уха в объеме 1-1,25 мл. Кровь стабилизировали в жидком состоянии гепарином.

Распределение животных по группам представлено в таблице 1.

Таблица 1

Общая схема исследований

Кол-во

серия группы животных

с? о

Фенил гидра- 1). I - интактная; 10 10

зиновая II - ФГ (3 дня по 5 мг/ьт); 10 10

анемия III - Серпистен (1", 3s, 5s дни по 20 mi/кг) + ФГ (3 дня 10 10

Крысы по 5 мг/кг)

IV - 0,9%NaCI (Iй, 3", 5" дни) + ФГ (3 дня по 5 мг/кг) 10 10

2). 1 -интактная 8 7

II- ФГ (3 дня по 5 мг/кг) 8 8

III - ФГ (3 дня по 5 мг/кг) + Серпистен (4h, 6s, 8й 8 7

дни по 20 мг/кг)

IV - ФГ (3 дня по 5 мг/кг) + 0,9%NaCl (4я. й", 8й дни) 8 8

3). I - интактная 6 6

11 - ФГ (3 дня по 5 мг/кг) + холостой укол (5 дней) 6 7

III - ФГ (3 дня по 5 мг/кг) + Серпистен (5 дней по 5 7 7

мг/кг)

IV - ФГ (3 дня по 5 мг/кг) + 0,9%NaCl (5 дней) 7 6

4). 1 - интактная 9

II - ФГ (2 дня по 7,5 мг/кг) 9

III - Серпистен (5 дней по 5 мг/кг) 4 ФГ (2 дня по 9

7,5 мг/кг)

IV - 0,9%NaCl (5 дней) + ФГ (2 дня по 7,5 мг/кг) 9

Однократное Мыши 17 53

введение I - интакт ная

Серпистена II - Серпистен (на 24 ч - 5 мг/кг) 15 48

Мыгии III - 0,9%NaCl (на 24 ч, объем соответ. II) 17 44

Крысы IV - Серпистен (на 24 ч - 20 мг/кг) 17 45

Кролики V - 0,9%NaCl (на 24 ч, объем соответ IV) 17 46

Крысы

I интактная 24 21

11 - Серпистен (на 1, 3 и 12 ч - 20 мг/кг ) 23 22

111 -0,9%NaCl (на 1, 3 и 12 ч, объем соответ. II) 22 21

Кролики

Интактные 18

I - холостой укол (5 дней) 6

II - Серпистен (на 2 и 24 ч - 2,5 мг/кг) 6

III - 0,9%КаС1 (на 2 и 24 ч, объем соответ. П) 6

Одно- и 1 - шггактная 8 10

многократ- II - Серпистен (на 2 ч - 20 мг/кг) 8 12

ное введение 1И - 0,95ШаС1 (на 2 ч, объем соответ. II) 8 12

Серлистеиа IV - Серпистен (5 дней по 5 мг/кг) 8 8

Крысы V- 0,9%№С1 (5 дней, объем соответ. IV) 7 9

Все манипуляции проводили в соответствии с Правилами (1983) и международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием животных (1993).

Методы исследования лейкоцитов крови. Общее количество лейкоцитов крови подсчитывали общепринятым методом в камере Горяева (А.Я. Любина и соавт., 1971; В.В. Меньшиков и соавт., 1987).

Количественное соотношение различных видов лейкоцитов проводили дифференцированным подсчетом клеток на мазках крови (Й. Тодоров, 1963; Е.А. Кост, 1975).

Розеткообразующие (РОК) клетки определяли по методу Д.И. Бельченко (1992). Готовили мазок, фиксирован! метанолом, окрашивали по Романовскому-Гимзе и путем визуализации определяли РОК (прилипание эритроцита к гранулоцитам), представляющие структуры, напоминающие розетки. Подсчет РОК производили на 100 просмотренных, на мазке крови лейкоцитов. РОК в крови крыс были в основном моноциты и нейтрофилы.

Фагоцитарную активность лейкоцитов определяли методом дрожжевого фагоцитоза в нашей модификации. Для реакции дрожжевого фагоцитоза в лунки иммунологического планшета помещали 0,1 мл крови, 0,01 мл плазмы крови и 0,01 мл 1%-ной взвеси клеток пекарских дрожжей (Saccharomyc.es сегеУ15/'ас). Полученную смесь инкубировали в термостате при 37°С. Через 30 мин готовили мазки инкубационной смеси, фиксировали метанолом и окрашивали. Подсчитывали количество фагоцитирующих клеток (ФА) и количество захваченных объектов фагоцитоза (СПК-сумма поглощенных объектов фагоцитоза). Рассчитывали фагоцитарный индекс (ФИ) - среднее количество объектов, захваченных одним лейкоцитом (А.Г. Кудяшева, А.И. Кичигин, 2000).

Исследование геометрии, резервных возможностей мембраны и осморегуляции лейкоцитов крови проводили комплексным методом М.З. Федоровой и В.II. Левина (1997). По 10 мкл концентрированной суспензии лейкоцитов помещали в три лунки гематологической

(0,9%; 0,45%; 0,2%). Первая лунка (0,9% ЫаС1) служила контролем. Из оставшихся двух лунок по прошествии определенного времени инкубации (0,45% - через 60 с и 60 мин; 0,2% - через 60 с) забирали и переносили на предметное стекло каплю разбавленной суспензии лейкоцитов объемом 5 мкл. Из капли готовили мазок, фиксировали метанолом и окрашивали. Под микроскопом при увеличении 90 окуляр-микрометром МОВ-1-15* измеряли диаметр клеток. Вычисляли средние значения диаметра для 50 нейтрофилов и 50 лимфоцитов в одном мазке. Объем и площадь поверхности клеток вычисляли по стандартным формулам для шаровидных тел: \;=,тГ)3/6 8 -~Ц> \ где О - диаметр шара

Для определения осмотической стойкости клеток подсчитывали их число в 0,9% МаО и после 1 ч в 0,2% №10. Функциональное состояние клеток крови оценивали по кинетике набухания (60 с в 0,45% КаС1) и способности восстанавливать исходный объем при 1 ч в этой же среде. Резервные возможности мембраны определяли по изменениям размера клеток после 60 с в 0,2% ЫаС1 по сравнению с исходной величиной.

За основу исследования адгезионной способности лейкоцитов взята методика, описанная Л.Г'. Зайцевым (2000) в нашей модификации. 0,1 мл суспензии лейкоцитов пропускали через капилляр с внутренним диаметром 1,5 мм. После этого через ту же трубочку пропускали физиологический раствор при напряжении сдвига 0,1 Н/м2. Считали число клеток в исходной суспензии, а также в первом (неадгезировавшие клетки и с малой силой сцепления) и втором (со средней силой сцепления) смывах. Рассчитывали число клеток, оставшихся в капилляре (с большой силой сцепления). Для определения соотношения адгезионной способности нейтрофилов и лимфоцитов готовили мазки.

Статистическая обработка. Проводили подсчет средних арифметических, среднеквадратического отклонения, средней ошибки средней арифметической. Степень достоверности межгрупповых различий определяли по непарному I критерию Стыодента, сдвиги морфометрических показателей в опытах с гипоосмотнческим набуханием - по парному I критерию Стыодента (Г.Ф. Лакин, 1990).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Изменение функциональных свойств лейкоцитов крови лабораторных животных с гемолитической анемией при действии ЭС Серпистен

Для оценки адаптационных реакций и резистентности организма к экстремальным факторам среды особое значение имеет анализ изменений состояния лейкоцитов, выполняющих в организме комплекс важных функции (М.З. Федорова, 2001). Поскольку Серпистен обладает мембраностабилизирующим (A.B. Коцюруба и соавт., 1999), иммуномодулирующим и стрессозащитным (Ж.Е. Иванкова, H.A. Мойсеенко, 2004) эффектом, выбор серии экспериментов остановился на изучении функциональных свойств лейкоцитов крыс с гемолитической анемией при действии С'ерпистена. Для моделирования анемии крысам вводили гемолитнк - ФГ.

Получены данные о снижении ФА лейкоцитов крыс Wistar, в ответ на действие ФГ независимо от пола животного. Так, в ответ на введение (в течение 3 дней) ФГ в дозе 5 мг/кг ФА снижается от 24% до 36%, р<0,001 у самцов и от 15%, р<0,02 до 38%, р<0,01 у самок. Одновременно снижается СПК: от 24%, р<0,01 до 32%, р<0,001 у самцов и от 7%, Р<0,5 до 51%, р<0,1 у самок. ФИ изменяется несущественно. Известно, что гемолитическая анемия при воздействии ФГ обусловлена стимуляцией образования активных форм кислорода и липидных свободных радикалов, которые вызывают разрушение бимолекулярного фосфолииидного слоя мембран с образованием в них нор и ингибированием На+/К""-А'ГФ-азы, а также молекулярные нарушения в состоянии белков скелета клетки. Это ведет к вхождению ионов Na+ в клетку, а затем и воды, вследствие чего, клетка (эритроцит) гипергидратируется и гемолизируется (Б.П. Лю, 2001; Н.М. Василенко, 2002; I. Stoian et al., 1996). Изучение структуры и молекулярной организации белков мембраны эритроцитов дает информацию о молекулярных подходах к изучению аналогичных белков в других клетках, например, спектрин, анкирин и др. в лейкоцитах, поэтому, обнаруженные эффекты ФГ на эритроцитах, можно экстраполировать и на лейкоциты.

Курсовое введение ЭС Серпистен в течение 5 дней, вводимая до ФГ, стимулирует лейкоциты анемичных крыс. Это выражается в увеличении (р<0,001) ФА нейтрофилов и моноцитов в крови крыс по сравнению с животными, которым вводили только ФГ (ФА выше на 37% у самцов и 46% у самок). Отмечается повышение СПК (на 50%, р<0,05 у самцов и 36%, р<0,01 у самок), что может говорить о способности Серпистсна эффективно выводить организм из

патологического состояния, усиливая процесс фагоцитоза и повышая защитные свойства крови. ФИ сохраняется на уровне нормы. Аналогичная реакция клеток наблюдается и при введении Серпистена крысам после ФГ. Выявлено, что в ответ на введение Серпистена как до, так и после введения ФГ по сравнению с интактными животными ФА клеток крови либо не изменяется, либо становится выше. Это говорит об ада пто генном действии исследуемой субстанции и согласуется с данными литературы (Н.П. Тимофеев, 2001; 2005 и др.).

Анализ адгезионной способности лейкоцитов крыс показал (табл. 2), что в ответ на введение ФГ повышается число адгезировавших клеток по сравнению с показателем у интактных (от 14%, Р<0,3 до 39%, р<0,05 у самцов и в качестве тенденции - до 7% у самок). Выявлено увеличение числа клеток (лимфоцитов) с высокой силой сцепления независимо от пола животного. Полученные данные, возможно, свидетельствуют о нарушениях, вносимых ФГ, как на (в) мембране, так и внутри лейкоцитов, что подтверждает гипотезы о негативном действии гемолитика на клетки крови. При введении ЭС. как до гемолитика, так и на его фоне число адгезировавших клеток оказывается меньше, чем у интактных и тех, которым вводили только ФГ. Выявлено снижение числа клеток (лимфоцитов) с высокой силой сцепления (табл. 2). Снижение адгезионной способности лейкоцитов под влиянием Серпистена коррелирует с данными Н. Ма15ис1а е1 а!. (1970), указывающими на антиатеросклеротическое действие фитоэкдистероидов.

Для оценки функционального состояния и резервных возможностей лейкоцитов проведено сравнительное изучение осморсгуляторных реакций клеток крови анемичных крыс и крыс, которым вводили Серпистен до гемолитика или на его фоне. Показано, что при введении ФГ, воздействие на лейкоциты в течение ! ч гипоосмотической нагрузки (0,2% КаС1) приводило к разрушению заметного числа клеток по сравнению с интактными (до 50,5%, р<0,001 у самцов и в качестве тенденции от 7% до 26% у самок). Повышение осмотической стойкости клеток обнаружено при введении Серпистена до ФГ по сравнению с введением только ФГ: 57,8% против 25,7%, р<0,001 у самцов и 74,8% против 46,6%, р<0,01 у самок.

Таблица 2

а). Изменение адгезионной способности лейкоцитов крыс \Vistar с гемолитической анемией на фоне предварительных инъекций ЭС Серпистен (Х±шх)

Группы п-10 А,„ % Ар, % А„ % А», %

Интактные 3 41,6±8,4 (0.9±0,03) 12,8±1,9 (2,1±0,2) 45,6+9,7 (1,3+0,1) 58,4±8,4

? 39,3±3,4 (0.б±0,1) 39,1 ±4,2 (0,6+0,04) 21,7+6,2 (0,5±0,1) 60,7±3,4

ФГ С 18,2±4.0* (1,2±0,04) ¡5,4+4,9 (1,3+0,1) 66.4±5,5 (0,9+0,0) 81.1+4,0»

34,8±0.8 (0,8+0,1) 37,0±4,2 (0,6±0,03) 28,1+4.6 (0,610,1) 65.2+0,8

Серпистен+ФГ 3 79,4+4,I**»1, (1.0+0,05) 13,4±2,4 (2,1 ±0,2) 7,2+2,7?**' (1.5+0.1) 20,6+4,I***1'

9 48,9±1,2*ь (0,8±0.1) 47,7+1, Г (0.5+0,1) 3,4+0,5*»' (0,5+0.04) 51,1±1,2*ь

б). Изменение адгезионной способности лейкоцитов крыс \Vistar при действии ЭС Серпистен на фоне гемолитической анемии (Х±шх)

группы А„. % Ас, % А„ % А.. %

Интактные п*8/7 с? 54,75±4,0 (0.66+0,04) 27,6+3,0 (0,66+0.1) 17,6+3,6 (0,66+0.03) 45,25+4,0

? 44,9+7,0 (0.6±0,1) 29,5+2,6 (0,9±0,2) 25,6+9,1 (0,7+0,1) 55,1 ±7,0

ФГ п=8 о" 48,25±2,8 (0,65+0,1) 24.0±4,2. (0,5а0.04) 27,75+3,5 (0,35+0,1) 51,75+2,8

9 47,1+4,0 (0,7+0,)) 29,9±3,1 (0,4±0,03) 23,0+4,2 (0,4+0.1) 52.9+4,0

ФГ'+Серпистен п=8 с?' 7X2+2,9***" (0,75*0,1) 21,613.0 (0,8+0.1) 5,1±1,0***ь (0,8±0.1) 26,75±2,9'м'*ь

? 50,4+2.4 (0,8+0,02) 33,3±2,9 (0,9±0,1) 16,3+4,8 (1,0+0,1) 49,6+2,4

Примечание: п - число животных самцов и самок соответственно; Ан - неадгезировавшие клетки; Ас - клетки со средней силой сцепления; А„ - клетки с высокой силой сцепления; Аа - общее количество адгезировавших лейкоцитов; разница по сравнению с интактной группой достоверна при р<0,05*, <0,02**, <0,01***; разница с ФГ группой достоверна при р<0,()5а, <0,001ь; в скобках указано соотношение нейтрофилов и лимфоцитов (отн.ед).

Такая же реакция клеток выявлена при введении Серлистена после ФГ. Полагаем, что ЭС изменяет свойства мембраны, повышая резистентность лейкоцитов в условиях гипотонии и препятствует нарушению мембраны клеток при действии гемолитика.

Изучение осморегуляторных свойств лейкоцитов показало (табл. 3), что в ответ на введение ФГ, через 60 с инкубации в 0,2% МаС1 зафиксировано максимальное увеличение среднсклеточных: диаметра, площади поверхности и объема, как нейтрофилов, так и лимфоцитов крови независимо от пола животного. Рост данных параметров клеток по отношению к таковым в изотоническом растворе более выражен, нежели у интактных, что отражает влияние гемолнтика на свойства мембраны (М.З. Федорова, 2002). Анализ характера объемных изменений лейкоцитов при повышении трансмсмбранного осмотического градиента свидетельствует о меньшей устойчивости гранулоцитов к понижению осмотического давления.

Таблшш 3

Размеры нейтрофилов и лимфоцитов, инкубированных в растворах

хлорида натрия разной концентрации у самцов крыс \Vistar с гемолитической анемией на фоне предварительных инъекций ЭС Серпистен (Х±тх)

а).

Группа (п=10) Концентрация раствора, время инкубации

0,9% 0,2%, 60с 0,45%, 60с 0,45%, 1ч

Интактная 9,5+0,1 10,9+0,2" 9,4±0,11' 9,4+0, Г

ФГ 9,3±0,05 П,8±0,04'' 11,0±0,2^ 10.0+0,1''

Серп метен1 ФГ 9.2±0,1 9,6+0,2'- 9,6±0,2" 9,0+0,03'

б).

Группа (п=10) Концентрация раствора, время инкубации

0,9% 0,2%, 60с 0,45%, 60с 0,45%, 1ч

Интактпая 6,6+0,04 7,7±0,Г' 7,7+0, 14 6,5+0,1

ФГ 6,6+0,1 ЗД+Й.ОЗ11 7,5+0,111

Серпистен+ФГ 6,5 ±0,1 7.0+0, И 7,2±0,21' 6,7+0,03е

Примечание: в таблице представлены значения диаметра клеток (мкм); п - число животных в каждой группе; достоверность внутригрупповых различий с клетками, инкубированными в изотоническом (0,9% ¡ЧаС!) растворе при р<0,05а, <0,02ь, <0,01с, <0,001й.

В умеренно гипотонической среде (0,45% №01) лейкоциты анемичных животных демонстрируют нарушение осморегуляторных реакций, проявляющиеся в неполном восстановлении объема нри удлинении времени инкубации. При введении Серпистена до гемолитика или на его фоне в опытах с гипоосмотическими нагрузками установлено формирование «экономного» типа реагирования

лейкоцитов крови животных, проявляющегося в ограничении набухания клеток при снижении концентрации окружающего раствора. Осморегуляторные реакции клеток обеспечивали практически полное восстановление исходного объема клеток через 1 ч в- 0,45% №С1 как у интактных животных, так и у тех, которым вводили Серпистен как до гемолитика, так и на его фоне. Т.е. Серпистен стабилизирует мембрану, что подтверждает его защитные свойства.

В ответ на ФГ независимо от режима введения (по 5 и 7,5 мг/кг соответственно в течение 3 и 2 дней) увеличивается общее количество лейкоцитов (от 24%, Р<0,3 до 59%, р<0,001 у самцов и до 103%, р<0,001 у самок) за счет нейгрофилов. Снижение доли лимфоцитов проявлялось как тенденция. Субстанция Серпистен, вводимая как до, так и на фоне ФГ, сохраняет число лейкоцитов и их соотношение на исходном уровне, т.е., «нормализует» клеточный состав крови, измененный действием ФГ, что подтверждает данные о пролиферативном действии фитоэкдистероидов, к которым относится исследуемая субстанция (3. Саатов и соавт., 1979; К. 81ата, 1993). Динамика изменения количества лейкоцитов крови крыс под действием ФГ и сочетанного с ним действия ЭС Серпистен одной из серии экспериментов представлена на рисунке 1.

тък/мкп

4 ? -

1 □ самцы ! □ самки

Ни

ФГ

серпнстен+ФГ

Рис. 1. Изменение общего количества лейкоцитов крови крыс \Vistur с гемолитической анемией на фоне предварительных инъекций ЭС Серпистен.

Примечание: разница с ннтактной группой достоверна при р<0,001 **; разница с группой ФГ достоверна при р<0,0Г.

Наряду с повышением числа лейкоцитов в ответ на ФГ наблюдается увеличение РОК, которое снижается при введении Серпистена как до, гак и после ФГ. Динамика изменения РОК крови крыс при действии ФГ и ЭС Серпистен представлена на рисунке 2.

□ самцы О самки

600

400

200

ФГ

серпистен+ФГ

Рис. 2. Изменение доли (%) РОК в крови крыс \Vistar с гемолитической анемией на фоне предварительных инъекций ЭС Серпистен (за «0» приняты значения интактных животных, соответствующие 100%).

Примечание: разница с интактной группой дЛстонерна при р<0,01*, <0,001**; разница с группой ФГ достоверна прир<0,01\а.

Выявлено, что показатели крови крыс в ответ на введение МаС1 (растворитель Серпистена), как до, так и на фоне гемолигика имеют однонаправленный характер изменения; не отличаются от ответа на введение только ФГ: выраженное увеличение размера клеток в гипотонической среде и неполное восстановление объема через 1 ч инкубации в 0,45% МаС1; изменение количества РОК; сдвиги количественного состав лейкоцитов. Эти данные показывают разный эффект Серпистена и его растворителя (ЫаС1).

В целом реакция лейкоцитов в ответ на введение фенилгидразина проявляется в снижении фагоцитарной активности и осмотической резистентности клеток, повышении адгезионной способности лейкоцитов, числа розеткообразуюших клеток, общего количества, изменении соотношения лейкоцитов независимо от пола животного. В условиях гипотонии выявлено выраженное увеличение размеров клеток и нарушение осморегуляторных свойств лейкоцитов.

При введении Серпистена как до, так и после гемолитика, показатели фагоцитоза, осмотической стойкости лейкоцитов, их общего количества и клеточного состава становятся близкими к уровню интактных животных. Количество адгезирующих и розеткообразуюших клеток снижается, нормализуются их осморегуляторные реакции.

Реакция лейкоцитов крови лабораторных животных на однократное введение ЭС Серпистен

Исследование динамики изменений состава и функции лейкоцитов в ответ на действие Серпистена проводилось с клетками крови практически здоровых лабораторных животных (мыши, крысы, кролики). В экспериментах (зима, лето) на мышах альбиносах обоего пола Серпистен в дозе 5 мг/кг через 24 ч после введения повышает ФА клеток крови от 23% до 29%, р<0,1 (самцы) и от 8% до 36%, р<0,001 (самки) и СПК от 40%, р<0,1 до 80%, р<0,001 (самцы) и от 19%, Р<0,3 до 66%, р<0,001 (самки). Показатель ФИ не меняется. Вместе с тем, у мышей обоего пола летом выявлена закономерность: с увеличением дозы вводимого вещества (с 5 до 20 мг/кг) повышаются все показатели фагоцитоза. В зимний период года с увеличением дозы вводимой субстанции достоверно выше оказывается ФА клеток крови самцов, тогда как у самок данный показатель фагоцитоза повышается незначительно. Достоверных изменений СПК и ФИ в ответ на введение большей дозы ЭС как по сравнению с показателями у интактпых животных, так и теми, кому вводили вещество в дозе 5 мг/кг, нет.

Аналогичные изменения показателей фагоцитоза (ФА и СПК) получены на крови самок мышей СВА. При этом эффект Серпистена на ФА нейтрофилов и моноцитов в ответ на введение дозы 5 мг/кг более выражен у животных в возрасте 5 и 12 мес, нежели в возрасте 9 мес, тогда как в ответ и а большую дозу эффект максимален - у 9 мес. Показатель ФИ, независимо от дозы, сохраняется на исходном уровне, за исключением повышения его (26%, р<0,05) у 12 мес мышей (доза Серпистена составила 5 мг/кг).

В сериях исследования на крысах (нелинейные и \Vistar) обоего пола Серпистен в дозе 20 мг/кг через 12 ч после введения повышает ФА клеток на 11% (р<0,05) у самцов и, чуть меньше, у самок - 7% по сравнению с интактными животными. Через 1 и 3 ч после введения Серпистена крысам в той же дозе, показатель ФА повышается незначительно. Независимо от времени действия Серпистена, у самок крыс показатель СГ1К оказывается повышенным, у самцов -существенно не меняется, т.е. эффект Серпистена полозависим. Достоверных изменений ФИ не зарегистрировано.

В экспериментах на кроликах Шиншилла в ответ па введение Серпистена в дозе 2,5 мг/кг независимо от времени действия, происходит повышение ФА клеток крови в среднем на 12%, р<0,05 через 2 ч и на 14%, р<0,02 через 24 ч после введения субстанции. Отмечается некоторое повышение СПК. Значение показателя ФИ сохраняется на уровне интактных животных. Активная деятельность

лейкоцитов крови животных независимо от пола и вида, выраженная через усиление фагоцитарной активности нсйтрофилов и моноцитов, и, повышение, тем самым, уровня неспецифической резистентности организма, указывает на высокую биологическую активность вводимого растительного экдистероида - ЭС Серпистен.

Опытами с гипоосмотическими нагрузками при введении самкам мышей СВА Серпистена установлено (табл. 4) формирование

Таблица 4

Размеры нейтрофнлов (а) и лимфоцитов (б), инкубированных в растворах хлорида натрия разной концентрации у мышей СВА при действии ЭС Серпистен (Х±тх)

а).

Группа втраст (мес) Концентрация раствора, время инкубации

0,9% 0,2%, 60с 0.45%, 60с 0,45%, 1 ч

Иптактная (12/8/8) 5 9,1+0,1 11,4±0,Г" 10,9±0,2° 10,4±0,2Ь

9 9.4+0,1 11,5+0,2° 10,9+0,2° 10,4±0,2°

12 9,1+0,1 11,6±0,2С 10,9+0,2е 9,8±0,2Ь

Серпистен (5 мг/кг) (7/7/9) 5 8,5±0,1 9,7+0,2= 9,3±0,2" 8,7+0,1ь

9 8,7+0,1 9,5+0,2" 9,3+0.2Ь 8,7+0,1

12 9,2+0,1 11,3±0,Г' 11,2+0,2° 9,4±0,1

Серпистен (20 мг/кг) (8/7/6) 5 9,5+0,1 11,5±0,2С 10,8+0,2° 9,6+0,1

9 9,5±0,2 9,9+0,4 9,6±0,3 9,4±0,1

12 9,4+0,1 11,7+0,2° 11,5±0,Г 9,7+0,11'

б).

Группа возраст (мес) Концентрация раствора, время инкубации

0,9% 0,2%, 60с 0,45%, 60с 0,45%, 1 ч

Интактная (12/8/8) 5 7,0+0,1 9,4±0,3^ 8,7+0,1<! 7,7±0,

9 7,1+0,1 9,4±0,3° 8.7+0, Г1 7,7+0, Г1

12 6,9±0,1 9,6±0,2° 8,4±0,2а 7,3±0,Г

Серпистен (5 мг/кг) (7/7/9) 5 6,7±0,1 8,1+0,2* 7,4±0,1<| 6,9+0,1"

9 6.7+0,1 7,4+0,1'' 7,1±0,Г 6,7+0,1

12 6,9+0,1 9,3+0,1'' 8.6+0,2а 7,0±0,1

Серпистен (20 мг/кг) (8/7/6) 5 7,2+0,1 9.3+0.3'1 з^+о^-1 7,2+0,311

9 7,1+0,1 7,5+0,3° 7,3+0,1°' 7.0+0,1

12 7,0±0,1 9,6±0,За 9.1 + 0, Г' 7,1+0,1

Примечание: в таблице представлены значения диаметра клеток (мкм); в скобках - число животных в возрасте 5, 9 и 12 мес соответственно; достоверность внутригрупповых различий с клетками, инкубированными в изотоническом (0,9% №С1) растворе при р<0,05а, <0,02ь, <0,01с, <0,001".

«экономного» типа реагирования лейкоцитов, проявляющегося в ограничении набухания клеток при 60 секундной инкубации в 0,2% КаС1 по сравнению с клетками интактных животных. Реакция лейкоцитов в ответ на 60 секундную инкубацию в 0,45% №С1 аналогична 0,2% раствору, но менее выражена. С увеличением дозы лейкоциты становятся более резистентными к условиям гипотонии. Полученные данные свидетельствуют о стабилизации мембраны лейкоцитов в ответ на действие Серпистена. Это подтверждается полным восстановлением исходного объема клеток при часовой инкубации в 0,45% №С1, при введении Серпистена самкам мышеи СВА, как в дозе 5, так и 20 мг/кг. Аналогичные данные получены в эксперименте на мышах альбиносах обоего пола.

Проведен анализ реакции лейкоцитов лабораторных животных в ответ на введение №С1. Полученные данные свидетельствуют о том, что эффект №С1 не сводится к эффекту Серпистена. Подтверждением является снижение показателей фагоцитоза, изменение лейкоцитарной формулы, общего уровня лейкоцитов независимо от вида, пола животных по сравнению с интактными. В ответ на введение КаС1 лейкоциты оказываются менее стойкими к условиям гипотонии, что выражается в увеличении размеров нейтрофилов и лимфоцитов при помещении их в гипотонический раствор и неполное восстановление объема клеток через 1 ч инкубации в 0,45% ИаС1.

Итак, при введении Серпистена (содержащего 0,3% вещества и 99,7% ШС1) происходит «нормализация» картины белой крови животных; повышается активность элементов защитной системы крови независимо от времени действия вещества. В условиях гипотонии лейкоциты становятся более резистентными.

Реактивность лейкоцитов крови крыс на одно- и многократное введение ЭС Серпистсн

Анализ разного режима введения Серпистена показал, что у самцов через 2 ч после однократной инъекции ЭС практически не меняется общее количество лейкоцитов и несколько снижается (22%, Р<0,3) в ответ па 5-кратные инъекции практически того же количества вещества. Наряду с этим снижается количество нейтрофилов (на 30% при однократном и на 26%, р<0,05 при продолжительном введении Серпистена), за счет сегментоядерных клеток, причем эффект через 2 ч после введения выраженнее, чем через 5 суток. Доля палочкоядерных клеток, наоборот, несколько увеличивается через 2 ч после однократной инъекции и не изменяется после 5-кратных инъекций Серпистена. Т.е. ответ на введение дозы Серпистена 20 мг/кг однократпо выражен сильнее, чем ответ на практически такую же и

даже большую (25 мг/кг суммарно) дозу Серпистена, но введенную в 5 приемов. Это указывает на значение режима введения ЭС: постепенное накопление дозы дает эффект той же направленности, но несколько мягче выраженный.

У самок через 2 ч после введения Серпистена отмечается некоторое повышение уровня лейкоцитов (29%, Р<0,2), в ответ на 5-кратные инъекции количество клеток сохраняется на уровне нормы. Достоверного изменения доли нейтрофилов не обнаружено. Т.е реакция нейтрофилов в ответ на введение ЭС нелинейным крысам зависит от пола животного.

Выявлено, что при введении Серпистена в крови самцов появляются базофилы, В ответ на однократную инъекцию ЭС базофнлов в циркулирующей крови оказывается в 2 раза больше, чем в ответ па многократную. Это может свидетельствовать о снижении вязкости цельной крови крыс, поскольку базофилы синтезируют гепарин (Г.И. Козннец и соавт., 2001). У интактных крыс эти клетки не выявляются. У самок базофилы обнаружены во всех исследуемых группах, но максимальное количество (выше в 3 раза) отмечено через 2 ч после введения ЭС.

В отличие от стероидных гормонов (кортизон, гидрокортизон), вызывающих нейтрофилез и снижение количества эозинофидов (П.Д. Горизонтов и соавт., 1983), введение Серпистена приводит к незначительной нейтропении и не вызывает достоверных изменений количества эозинофилов. Это подтверждает положение о том, что Серпистен, относящийся к классу нолигидроксилированных стероидов, не обладает свойствами истинных стероидных гормонов.

Данные литературы свидетельствуют, что ЭС оказывает кратковременное действие. Согласно работам А.У. Тт^апоуа. и А.У. Ко^уигиЬа (1996) максимальное накопление Сзт-стеринов (к которым относится основной компонент (20-гидроксиэкдизон) Серпистена) в тканях отмечается через 2 ч после их введения. Действительно, в нашей работе ответ лейкоцитов на введение новой субстанции фитоэкдистсрондов через 2 ч оказывается, более выражен, чем ответ на многократные инъекции. В то же время после прохождения курса 710 дней действие экдистероидов составляет до 2-х мес (Г.М. Яковлев и соавт., 1990), что подтверждает влияние Серпистена на количественный состав лейкоцитов после 5 дневного курса инъекций.

Серией эксперимента показано разное действие Серпистена и №С1. Так у самцов независимо от режима введения Серпистена доля нейтрофилов снижается за счет сегментоядерных клеток; в ответ же на однократное введение НаС1 она увеличивается за счет палочкоядерных

клеток, на многократное - снижается, но в меньшей степени, чем в ответ на Серпистен. Кроме того, через 2 ч после введения Мл С! отмечается тенденция снижения доли эозинофилов на 63%, после 5-кратных инъекций на 16%. Показано (Г.И. Козинец и соавт., 2004 и др.), что среди признаков, характерных для стресс-реакции системы крови, является нейтрофильный лейкоцитоз и эозинешения. Полагаем, что ЭС является фактором, нивелирующим стресс-реакцию, вызванную ЫаС1 и уколом.

Итак, в ответ на введение Серпистена существенно не меняется общее количество лейкоцитов; степень и направление изменений гематологических показателей зависят от режима введения субстанции: количественный состав лейкоцитов максимально выражен через 2 ч после введения; действие однократного введения Серпистена оказывается сильнее многократных; Серпистен обладает антистрессорным действием и не обнаруживает эффектов стероидных гормонов.

ВЫВОДЫ

1. Фенилгидразин приводит к максимальному использованию «резервных возможностей» мембраны лейкоцитов в ответ на высокие гипоосмотические нагрузки и к неполному восстановлению исходного объема клеток в умеренно гипотонической среде, что свидетельствует о нарушении регуляторных реакций лейкоцитов в ответ на действие гемолитика.

2. В условиях гемолитической анемии в крови крыс уменьшается доля лимфоцитов, увеличивается относительное количество нейтрофилов при снижении поглотительной способности фагоцитов; повышается ауторозеткообразование.

3. Физиологический эффект субстанции Серпистен приводит к повышению фагоцитарной активности нейтрофилов и моноцитов крови при малых и больших дозах введения независимо от режима, пола и вида животного. Фагоцитарный индекс при этом не меняется. В ответ на субстанцию Серпистен, независимо от дозы вещества, «мембранный резерв» лейкоцитов используется менее эффективно.

4. Последействие субстанции Серпистен (через 1, 2, 3, 12 и 24 ч) не сопровождается существенными изменениями общего количества лейкоцитов крови и достоверными сдвигами в лейкоцитарной формуле практически здоровых лабораторных животных (мыши, крысы, кролики). Влияние субстанции Серпистен на количественный состав лейкоцитов максимально выражен через 2 ч после введения, при этом эффект однократного введения оказывается сильнее многократных инъекций.

5. В условиях анемии профилактическое и фоновое введение субстанции Ссрпистен повышает фагоцитарную активность лейкоцитов и сумму поглощенных микроорганизмов, уменьшает адгезионную способность клеток крови и снижает количество ауторозеток, что указывает на его корригирующее действие в условиях фенилгидразиновой анемии.

6. Профилактическое и фоновое введение субстанции Серпистен в условиях анемии приводит к повышению осмотической стойкости и формированию «экономного» типа реагирования лейкоцитов на гипоосмотическис нагрузки, проявляющиеся в ограничении набухания клеток в сильно гипотонической среде и полном восстановлении их объема в умеренно гипотоническом растворе.

7. Субстанция Серпистен оказывает протекторное действие на физиологические реакции лейкоцитов, стабилизируя свойства поверхностной мембраны, и оптимизируя количественный состав и соотношение различных форм белых клеток крови, в условиях экспериментальной анемии.

Список публикаций

1. Репина Е.Н., Мойсеенко Н.А. Модификация лейкоцитов и лейкоцитарной формулы крыс под влиянием 20-гидроксиэкдизона // Вестник Сыктывкарского университета. - 2003. - Сер. Биология (4). -Выи. 2-С. 66-68.

2. Репина Е.Н., Мойсеенко П.А., Иванкова Ж.Е., Петрова Н.Б. 20-гидросиэкдизон из растений Serratilla coronata L. как адаптоген // Эколого-физиологические проблемы адаптации: Материалы XI междунар. симп. - М.: РУДН, 2003. - С. 368-369.

3. Репина Е.Н., Мойсеенко Н.А. Изменения состава белой крови крыс под влиянием феннлгидразина на фоне 20-гидроксиэкдизона // Механизмы функционирования висцеральных систем: Тез. Ш Всерос. конф. с междунар. участием, посвящ. 175-летию со дня рождения Ф.В. Овсянникова. - СПб., 2003. - С. 247-248.

4. Репина Е.Н., Мойсеенко Н.А., Иванкова Ж.Е. Эффекты экдистерона из растений Serratilla coronata L. на теплокровных // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Материалы 58-й межрегнон. конф. по фармации и фармакологии. - Пятигорск, 2003. - С. 338-340.

5. Репина F..H., Иванкова Ж.Е. Антистрессовое влияние 20-гидроксиэкдизона из растений Serratilla coronata L. И Биоразнообразие. Экология. Эволюция. Адаптация: Материалы Юбилейной науч. конф. студентов, аспирантов и молодых ученых, посвящ. 180-летию со дня рождения Л .С. Ценковского. - Одесса, 2003. - С. 66.

6. Репина E.H., Мойсеенко H.A., Петрова Н.Б., Иванкова Ж.Е. Фитоэкдистероиды и кровь млекопитающих в норме и патологии // Экология и здоровье человека: Тр. IX Всерос. конгресса. - Самара, 2004.-С. 188-190.

7. Репина E.H. Эффект 20-гидроксиэкдизона на состав и функции белой крови крыс на фоне гемолитической анемии // Человек и его здоровье: Материалы седьмой медико-биологической конф. молодых исследователей. - СПб., 2004. - С. 242-243.

8. Репина E.H., Мойсеенко H.A., Иванкова Ж.Е. Влияние 20-гидроксиэкдизона из растений Serratilla coronata L. на свойства белой и красной крови кроликов породы Шиншилла // Фундаментальные исследования. - М.: РАЕ, 2004. -№ 2. - С. 151-153.

9. Репина E.H., Мойсеенко H.A. Влияние 20-гидроксиэкдизона из растений Serratilla coronata L. на состав и функциональную активность клеток белой крови крыс линии Wistar // Современные наукоемкие технологии. - М.: РАЕ, 2004. - № 3. - С. 88-89.

10. Репина E.H. Эффекты 20-гидроксиэкдизона на показатели белой крови крыс // Молодежный вестник. - Сыктывкар, 2004. - Вып. 2. - С. 39-42.

11. Репина E.H., Мойсеенко H.A. Влияние 20-гидроксиэкдизона па нейтрофилы и лимфоциты крови крыс на фоне фенилгидразина // Рос. физиол. журнал, им. И.М. Сеченова. - 2004. - Т. 90. - № 8. - С. 229-230.

12. Репина E.H., Мойсеенко H.A., Иванкова Ж.Е. Влияние 20-гидроксиэкдизона на параметры красной и белой крови при гемолитических анемиях // Экология человека: Материалы. Вссрос. конф. с междунар. участием. - Архангельск, 2004. - С. 327-329.

13. Репина E.H., Шадрин Д.М. Действие 20-гидроксиэкдизона на фагоцитарную активность нейтрофилов и моноцитов мышей СВА // Физиология человека и животных: от эксперимента к клинической практике: Тез. докл. IV Молодежной науч. конф. Института физиологии Коми НЦ УрО РАН. - Сыктывкар, 2005. - С. 111.

14. Репина E.H. Действие растительного препарата 20-гидроксиэкдизона на нейтрофилы и лимфоциты крови мышей СВА // Физиология и медицина: Сб. материалов Всерос. конф. молодых исследователей. - Вестник молодых ученых. - СПб., 2005. - С. 99.

15. Репина E.H., Мойсеенко H.A. Влияние 20-гидроксиэкдизона на фагоцитарную активность крови млекопитающих // Бюллетень сибирской медицины. - Томск, 2005. - Т. 4. - С. 40.

16. Репина E.H., Пономарёв М.Б., Иванкова Ж.Е. Влияние экдистероидов серпухи венценосной на показатели крови мышей

линии СБА разного возраста // Молодые исследователи - регионам: Материалы Всерое. науч. конф. студентов и аспирантов. - Вологда: ВоГТУ, 2005. - В 2-х т. - Т. 1. - С. 41 -42.

17. Репина E.H., Шадрин Д.М. Фагоцитарная активность и состав клеток белой крови крыс Wistar при гемолитической анемии на фоне предварительных инъекций 20-гидроксиэкдизона из Serratula coronata L. // Молодые исследователи - регионам: Материалы Всерое. науч. конф. студентов и аспирантов. - Вологда: ВоГТУ, 2005. - В 2-х т. -Т. 1.-С. 46-47.

18. Репина E.H., Мойсеенко H.A., Иванкова Ж.Е., Володин В.В. Роль 20-гидроксиэкдизона растений Serratula coronata L. в развитии вызванной гемолитической анемии крыс Wistar // Растения и здоровье: Материалы IX междунар. Съезда Фитофарм. Конф. молодых ученых Европейского Фотохимического общества. - СПб., 2005. - С. 179-184.

19. Репина Е.Н, Мойсеенко H.A., Шадрин Д.М. Действие фитоэкдистероидов (20-гидроксиэкдизона) на лейкоциты крови мышей СВА разного возраста в норме // Тез. докл. и лекций XII! Междунар. совещания и VI школы по эволюционной физиологии. - СПб.: ВВМ, 2006.-С. 184.

20. Репина F..H., Шадрин Д.М. Фагоцитарная активность клеток белой крови лабораторных животных в норме и эксперименте, и влияние на нее 20-гидроксиэкдизона // Физиология человека и животных: от эксперимента к клинической практике: Тез. докл. V Молодежной науч. конф. Института физиологии Коми НЦ УрО РАН. -Сыктывкар, 2006. - С. 102.

21. Репина E.H., Мойсеенко H.A. Реактивность лейкоцитов крови крыс Wistar с гемолитической анемией на фоне предварительных инъекций фитоэкдистероидов // Химия и технология растительных веществ: Тез. докл. IV Всерос. науч. конф. - Сыктывкар, 2006. - С. 279.

22. Репина E.H., Мойсеенко H.A., Петрова Н.Б., Иванкова Ж.Е. Действие фитоэкдистероидов на количественные и качественные показатели крови млекопитающих в норме и при экспериментальных воздействиях // Вестник Сыктывкарского университета. - 2006. - Сер. Биология (2). - Вып. 1.--С. 122-137.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Репина, Екатерина Николаевна

Введение

ГЛАВА 1. Обзор литературы

1.1. Общая характеристика лейкоцитов крови

1.1.1. Морфометрическая и количественная характеристика лейкоцитов

1.1.2. Функциональные свойства лейкоцитов

1.1.2.1. Фагоцитарная активность лейкоцитов

1.1.2.2. Адгезионная способность лейкоцитов

1.1.2.3. Осмотическая резистеность лейкоцитов

1.2. Экдистероиды: краткая характеристика 31 1.2.1. Фитоэкдистероиды и система крови млекопитающих

ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования

2.1. Животные

2.2. Реактивы и оборудование

2.3. Методы исследования

ГЛАВА 3. Результаты исследования

3.1. Функциональная активность лейкоцитов крови крыс при гемолитической (фенилгидразин) анемии с участием экдистероидсодержащей субстанции Серпистен

3.2. Реактивность лейкоцитов крови лабораторных животных при однократном введении экдистероидсодержащей субстанции Серпистен

3.3. Сравнительная оценка количественного состава лейкоцитов крови крыс при однократных (2 ч) и продолжительных (5 сут) инъекциях экдистероидсодержащей субстанции Серпистен

ГЛАВА 4. Обсуждение результатов

4.1. Изменение функциональных свойств и реактивности лейкоцитов крови лабораторных животных с гемолитической анемией при действии экдистероидсодержащей субстанции Серпистен

4.2. Реакция лейкоцитов крови лабораторных животных на однократное введение экдистероидсодержащей субстанции Серпистен

4.3. Анализ реактивности лейкоцитов крови крыс на однократное и многократное введение экдистероидсодержащей субстанции Серпистен

Выводы

Введение Диссертация по биологии, на тему "Функциональное состояние лейкоцитов крови лабораторных животных при экспериментальной анемии и влиянии фитоэкдистероидов Serratula Coronata L."

Актуальность темы. Одной из важнейших проблем современной физиологии является исследование закономерностей процессов адаптации организма к различным факторам среды (H.A. Агаджанян и соавт, 1999; 2001; В Л. Казначеев, 1980; Ф.З. Меерсон, 1981; B.C. Новиков, 1998). Система крови, имея высокую реактивность, быстро включается в реакции на действие физиологических и экстремальных факторов среды, обеспечивая поддержание гомеостаза (Н.В. Васильев и соавт., 1992; П.Д. Горизонтов и соавт., 1983; Г.И. Козинец и соавт., 2001; Б.Г. Юшков и соавт., 1999; 2001). Лейкоциты крови вовлечены в иммунные процессы (Р.В. Петров, Т.И. Ульянкина, 1995; В.А. Черешнев и соавт., 2002 и др.) и играют важную роль в создании микрососудистого сопротивления (С.A. Alonso et al., 1995; М.Т. Eppihimer, H.H. Lipowsky, 1996; B.P. Helmke et al., 1997).

В последнее время значительно вырос интерес к изучению растительных экдистероидов, обладающих комплексом положительных свойств при отсутствии каких-либо побочных эффектов на организм животных и человека (Л.Д. Пчеленко и соавт., 2002; В.Н. Сыров, З.А. Хушбактова, 2001; Yu. D. Kholodova, 2001). Показано, что растительные экдистероиды оказывают адаптогенное; анаболическое; иммуномодулирующее и иммунокорригирующее; антиоксидантное и антирадикальное; бактерицидное и противовоспалительное; улучшающее реологические свойства крови (В.В. Володин, 1999, 2006; Л.Ф. Осинская, Л.М. Саад, Ю.Д. Холодова, 1992; М.Б. Плотников и соавт., 1999; A.G. Kurmukov, O.A. Yeimishina, 1991). Известно влияние экдистероидов на пролиферацию клеток позвоночных (3. Саатов с соавт., 1979; К. Slama, 1993), что имеет важное значение при развитии анемий разного происхождения.

Фитоэкдистероиды - полигидроксилированные стерины, структурно идентичные или подобные гормонам линьки и метаморфоза насекомых. Теоретической основой применения экдистероидов является их физиологическое действие на организм млекопитающих, обусловленное свойством данных соединений стимулировать биосинтез белка без эффектов других стероидов (К. Бкша, Я. ЬаГоШ, 1995). В 80-х годах в Институте химии растительных веществ АН УзССР из корней с корневищами левзеи сафлоровидной (ЮгаропШсит сагЮто!с1ез (\УИ1с1.) II]т) была выделена активная экдистероидсодержащая субстанция, на основе которой разработан препарат тонизирующего действия «Экдистен» (Н.К. Абубакиров, 1981; И.О. Куракина, В.М. Булаев, 1990; А.У. Маматханов и соавт., 1980). Низкий процент выхода экдистероидов левзеи сафлоровидной, высокие экономические затраты на создание сырьевой базы приводят к поиску растений с высоким содержанием экдистероидов, одним из которых является серпуха венценосная (ЗеггаШ1а согопШа Ь). Экдистероидсодержащая субстанция Серпистен (основной компонент 20-гидрокисэкдизон) растений $еггаш1а согопШа Ь. успешно разрабатывается в последнее время (В.В. Володин, И.Ф. Чадин, 1996). Однако механизмы физиологического действия новой субстанции Серпистен на организм теплокровных изучены недостаточно. Система крови и в том числе лейкоциты отражают многие происходящие в организме физиолого-биохимические процессы (воспалительные, иммунные, микрореологические). Изучение функционального состояния лейкоцитов крови в ответ на действие Серпистена продиктовано, как стремлением ближе подойти к раскрытию механизмов действия исследуемой экдистероидсодержащей субстанции на живой организм, так и потребностью создания нового препарата с большим набором физиологических эффектов.

Цель исследования:

Изучение функциональной активности и количественного состава лейкоцитов крови лабораторных животных при экспериментальной анемии в условиях корригирующего действия растительных экдистероидов.

Для достижения цели исследования реализованы следующие задачи: 1. Исследование особенности функциональной активности лейкоцитов крови при экспериментальной гемолитической анемии (фенилгидразин).

Научная новизна исследования

Впервые показаны эффекты одно- и многократного введения экдистероидсодержащей субстанции (ЭС) Серпистен на количественный состав и функциональную активность лейкоцитов крови лабораторных животных.

Впервые выявлена способность ЭС Серпистен повышать активность элементов защитной системы крови, усиливая, в частности, фагоцитарную активность лейкоцитов, повышая сумму поглощенных микроорганизмов (.ЪассЬаготусев сегехтаё) независимо от дозы, режима введения, а также состояния организма.

Впервые проведено комплексное сравнительное исследование функциональной активности лейкоцитов крови под действием ЭС Серпистен у лабораторных животных (крысы) в норме и при экспериментальной гемолитической анемии. Исследованы особенности сопротивляемости лейкоцитов крови средам с низкой осмолярностью, выраженные через резистентность и регуляторные возможности у крыс при сочетанном и раздельном действии ЭС Серпистен и фенилгидразина. Проведена оценка адгезионной способности лейкоцитов крови под действием ЭС Серпистен у крыс в норме и при экспериментальной анемии.

Впервые показано, что эффект ЭС Серпистен зависит от пола животных (мыши, крысы).

Впервые продемонстрирована возможность ЭС Серпистен «нормализовать» картину белой крови, измененной действием гемолитического яда, в процессе развития гемолитической анемии у млекопитающих (крысы). Эффекты такого рода свойственны адаптогенным препаратам. Эффект нормализации подтверждается, в частности, уменьшением числа ауторозеток (снижение ауторозеткообразования), которые способствуют освобождению циркулирующей крови от поврежденных гемолитиком эритроцитов.

Впервые выявлено, что ЭС субстанция Серпистен, введенная как до гемолитика, так на и его фоне способствует формированию «экономного» типа реагирования нейтрофилов и лимфоцитов у крыс, проявляющегося в ограничении набухания клеток при снижении концентрации окружающего раствора (т.е. ЭС Серпистен стабилизирует мембрану лейкоцитов).

Впервые показано, что предварительные инъекции (профилактические, перед введением фенилгидразина) ЭС Серпистен в течение 5 дней в дозе 5 мг/кг/день и 20 мг/кг через день (суммарная доза 25 и 60 мг/кг, соответственно) стабилизируют картину белой крови так, что в ответ на введение гемолитического яда фенилгидразина она практически не меняется.

Научно-практическая значимость

Обнаруженная способность новой ЭС Серпистен, основным компонентом которой (-80%) является 20-гидроксиэкдизон, стимулировать неспецифические защитные силы организма трех видов лабораторных животных (млекопитающих) может быть учтена и использована при создании новых лекарств или биологически активных пищевых добавок.

Выявленные эффекты ЭС Серпистен в условиях экспериментальной гемолитической анемии открывают перспективы использования его в качестве мембраностабилизирующего и адаптогенного средства для предупреждения последствий действия гемолитических ядов, а также для лечения гемолитических анемий, как средства, облегчающего последствия действия гемолитического яда, то есть, открываются перспективы использования субстанции Серпистен в клинической практике в качестве профилактического и лечебного средства в дополнение к лекарственной терапии для предупреждения и лечения гемолитических анемий.

Материалы и методы экспериментальной части (метод внутрисосудистого розеткообразования для оценки степени повреждения клеточных мембран; комплексный метод исследования геометрии, площади поверхности, резервных возможностей мембраны, осморегуляции, адгезионной способности лейкоцитов, показателей фагоцитоза, общего количества лейкоцитов и лейкоцитарной формулы крови) включены в проводимые на кафедре физиологии человека и животных СГУ работы большого практикума по курсу «Физиология человека и животных».

Результаты проведенных исследований будут способствовать более глубокому пониманию физиологических механизмов действия новой перспективной экдистероидсодержащей субстанции Серпистен на защитную функцию крови организма млекопитающих.

Результаты работы призваны привлечь внимание к свойствам новой экдистероидсодержащей субстанции Серпистен и к изучению действия данной субстанции на лейкоциты крови, а также объяснить выявленные в ходе исследований эффекты режима и доз препарата в физиологических и экстремальных условиях.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Снижение повреждающего действия гемолитического яда как при профилактическом введении ЭС Серпистен, так и при введении на фоне фенилгидразиновой анемии обусловлено стабилизацией поверхностной мембраны клеток крови, способствующей облегчению выхода животных из состояния гемолитической анемии.

Считаю своим приятным долгом выразить искреннюю благодарность научным руководителям д.б.н., проф. Марине Зотовне Федоровой Белгородского университета за руководство в выполнении данной работы и к.б.н., доц. Нелли Алексеевне Мойсеенко Сыктывкарского университета за научное направление темы кандидатской диссертации и осуществление руководства над работой в период моей учебы в аспирантуре, а также д.б.н. В.В. Володину и к.б.н. С.О. Володиной Института биологии Коми НЦ УрО РАН за любезно предоставленную экдистероидсодержащую субстанцию Серпистен и химические реактивы, а также всем сотрудникам кафедры физиологии человека и животных химико-биологического факультета Сыктывкарского университета за поддержку и помощь в выполнении работы. Особую благодарность выражаю к.м.н., врачу высшей категории, гематологу-иммунологу г. Нижнего Новгорода Геннадию Владимировичу Сидневу за ценные советы и консультации и ст.н.с. Института биологии Коми НЦ УрО РАН Андрею Ильичу Кичигину за рекомендации к написанию научной работы и предоставленный метод для более глубокого исследования функциональной активности лейкоцитов крови под действием экдистероидсодержащей субстанции Серпистен.

Апробация работы. Результаты исследований были доложены и обсуждены на III Всероссийской конференции с международным участием, посвященной 175-летию со дня рождения Ф.В. Овсянникова «Механизмы функционирования висцеральных систем» (г. Санкт-Петербург, 2003); VII Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей «Человек и его здоровье» (г. Санкт-Петербург, 2004); конференции студентов и молодых ученых «Научное студенческое сообщество и современность» (г. Анталия, Турция, 2004); XIX Съезде физиологического общества им. И.П. Павлова (г. Екатеринбург, 2004); IX международном Съезде Фитофарм, конференции молодых ученых Европейского Фитохимического общества «Растения и здоровье» (г. Санкт-Петербург, 2005); IV Молодежной научной конференции Института физиологии Коми НЦ УрО РАН «Физиология человека и животных: от эксперимента к клинической практике» (г. Сыктывкар, 2005; 2006); IV Всероссийской научной конференции «Химия и технология растительных веществ» (г. Сыктывкар, 2006).

Публикации

По теме диссертации опубликованы 22 печатные работы, из них 3 статьи.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Репина, Екатерина Николаевна

выводы

5. В условиях анемии профилактическое и фоновое введение субстанции Серпистен повышает фагоцитарную активность лейкоцитов и сумму поглощенных микроорганизмов, уменьшает адгезионную способность клеток крови и снижает количество ауторозеток, что указывает на его корригирующее действие в условиях фенилгидразиновой анемии.

6. Профилактическое и фоновое введение субстанции Серпистен в условиях анемии приводит к повышению осмотической стойкости и формированию экономного» типа реагирования лейкоцитов на гипоосмотические нагрузки, проявляющиеся в ограничении набухания клеток в сильно гипотонической среде и полном восстановлении их объема в умеренно гипотоническом растворе.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Репина, Екатерина Николаевна, Сыктывкар

1.Абубакиров H.K. Экдистероиды цветковых растений (Angiospermae) // Химия природных соединений - 1981. -№ 6. - С. 685-702.

2. Авакян А.Х. Новые молекулярные критерии оценки токсического действия производных гидразина. Активные формы кислорода как ключевые агенты в механизме токсичности // Фармакология и токсикология. 1990. - Т. 53. -N 1. -С. 70-73.

3. Агаджанян H.A., Марачев А.Г., Бобков Г.А. Экологическая физиология чеоловека. М.: КРУК, 1999. - 416 с.

4. Агаджанян H.A., Сушкова Л.Т., Нефедьев В.В. Разработка новых методов исследования эколого-физиологических механизмов адаптации человека // Эколого-физиологические проблемы адаптации: Материалы X междунар. симп.-М.: РУДН, 2001.-С. 17-20.

5. Агаджанян H.A., Федорова М.З. Реактивность лейкоцитов в различных условиях окружающей среды // Экология человека. 2001. - № 4. - С. 66-68.

6. Азизов А.Р., Сейфулла Р.Д., Чубарова A.B. Эффект настойки левзеи и леветона на гуморальный иммунитет спортсменов // Экспериментальная и клиническая фармакология. 1997. - № 9. - С. 47-48.

7. Александров В.Я. Реактивность клеток и белки. Л.: Наука, 1985. - 318 с.

8. Александровская О.В., Радостина Т.Н., Козлов H.A. Цитология, гистология и эмбриология. -М., 1987.-С. 125-135.

9. Алексеев H.A. Клинические аспекты лейкопений, нейтропений и функциональных нарушений нейтрофилов. СПб.: Фолиант, 2002. - 248 с.

10. Ахрем А.А, Ковганко Н.В. Экдистероиды: Химия и биологическая активность. Минск: Наука и техника, 1989. - 327 с.

11. Бабич Л.Г., Бурдыга Ф.В., Холодова Ю.Д., Костернн С.А. Влияниеэкдистерона на корбахоловую контрактуру гладкой мышцы мочеточника и Mg2+, АТФ-зависимый транспорт Са2+ через сарколемму // Докл. АН. 1992. -Т. 324. -№3.- С. 701-705.

12. М.Балтаев У.А. Фитоэкдистероиды: структура, источники и пути биосинтеза в растениях // Биоорган, химия. 2000. - № 12. - С. 892-925.

13. Барбараш H.A. Периодическое действие холода и устойчивость организма // Успехи физиологических наук. 1996. - Т. 27. - № 4. - С. 116-132.

14. Белова JI.A. Биохимия процессов воспаления и поражения сосудов. Роль нейтрофилов // Биохимия. 1997. - Т. 62. - № 6. - С. 659-668.

15. Бельский Ю.М. Недельный биоритм содержания лейкоцитов в периферической крови здоровых мужчин // Гематология и трансфузиология. -1987. Т. 32. - № 7. с. 57-59.

16. Бельченко Д.И. Внутрисосудистое ауторозеткообразование при гемолитических анемиях // Гематология и трансфузиология. 1992. - № 4. - С. 23-25.

17. Бельченко Д.И., Кривошеина ЕЛ. Соотношение интенсивности экзоцитарного лизиса эритроцитов в ауторозетках периферической крови и характера течения острого лимфобластного лейкоза // Гематология и трасфузиология. -1999.-Т. 4.-№3.-С. 13-15.

18. Бергхоф П.К. Мелкие домашние животные (Болезни и лечение). М.: Аквариум, 1999.-263 с.

19. Берестов В.А., Узенбаева Л.Б. Фагоцитарная реакция крови у песцов и норок. СПб.: Наука, 1983. - 112 с.

20. Болдырев A.A. Биологические мембраны и транспорт ионов. М.: МГУ, 1985.-208 с.

21. Бонд В.П. Основы радиобиологии, необходимые для понимания влияния ионизирующих излучений на кроветворение // Руководство по радиационной гематологии. М., 1974. - С. 63-70.

22. Браун А.Д., Моженок Т.П. Неспецифический адаптационный синдром клеточной системы. Л.: Наука, 1987. - 232 с.

23. Вайс X., Елькман В., Циммерман М. и соавт. Функции крови // Физиология человека. М., 1996. - С. 414-453.

24. Василенко Н.М. Действие ксенобиотиков на систему крови // Общая токсикология / Под ред. Б.А. Курляндского, В.А. Филова. М.: Медицина,2002.-С. 258-259.

25. Васильев Н.В., Захаров Ю.М., Коляда Т.И. Система крови и неспецифическая резистентность в экстремальных климатических условиях. -Новосибирск: Наука, 1992. 257 с.

26. Васильева О.В. Сравнительная оценка реактивности лейкоцитов человека и некоторых видов животных: Автореф. дис. канд. биол. наук. Ярославль,2003.-18 с.

27. Володин В.В. Экдистероиды в интактных растениях и клеточных культурах: Автореф. дис. д-ра. биол. наук. М., 1999. - 49 с.

28. Володин В.В. Физиологическая активность фитоэкдистероидов и перспективы их использования в клинике // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: Материалы X междунар. съезда Фитофарм.- СПб., 2006. С. 43-52.

29. Володин В.В., Чадин И.Ф. Принцип «положительных триб» для скрининга растений на содержание экдистероидов // Междунар. совещ. по фитоэкдистероидам: Тез. докл.- Сыктывкар, 1996. С. 34-35.

30. Гаврилов O.K., Козинец Г.И., Черняк Н.Б. Клетки костного мозга и периферической крови. М.: Медицина, 1985. - 288 с.

31. Гидразин. Гигиенические критерии состояния окружающей среды. -Женева: ВОЗ,-1991.-С. 15.

32. Глузман Д.Ф., Абраменко И.В., Скляренко JI.M. Морфоцитохимическая и иммунофенотипическая характеристика лейкозов у ликвидаторов последствий аварии на Чернобыльской АЭС // Гематология и трансфузиология. 2000. - Т. 45.-№4.-С. 24-28.

33. Гольдберг Д.И., Гольдберг Е.Д. Справочник по гематологии. Томск, 1975.-273 с.

34. Гольдберг Д.И., Гольдберг Е.Д., Шубин Н.Г. Гематология животных. -Томск. ТГУ, 1973.-179 с.

35. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Шерстобоев ЕЛО. Механизмы локальной регуляции кроветворения. Томск, 2000. - 148 с.

36. Горизонтов П.Д., Белоусова О.И., Федотова М.И. Стресс и система крови. -М.: Медицина, 1983. 240 с.

37. Грякалова Е.В., Ребров А.П., Киричук В.Ф. Лектининдуцированная агрегация нейтрофилов у больных хроническим гломерулонефритом // Регионарное кровообращение и микроциркуляция. 2006. - Т. 18. - № 2. - С. 41-45.

38. Губский Ю.И., Левицкий Е.Л., Холодова Ю.Д. и соавт. Механизмы генопротекторного действия препарата на основе фитоэкдистероидов (БТК-8л) в условиях повреждения хроматина тетрахлорметаном // Укр. биохим. журнал. 1993. - № 6. - С.75-83.

39. Дайнан Л. Стратегия оценки роли фитоэкдистероидов как детергентов по отношению к беспозвоночным фитофагам // Физиол. раст. 1998. - Т. 45. - № З.-С. 247-359.

40. Долгушин И.И., Бухарин О.В. Нейтрофилы и гомеостаз. Екатеринбург: Уро РАН, 2001.-713 с.

41. Ершова Л.И., Горбунова H.A. Механизмы гемолиза при действии экстремальных факторов // Бюлл. эксп. биол. и мед. 1991. -№ 4. - С. 363-365.

42. Иванов К.П., Мельникова H.H. Динамика лейкоцитов в микрососудах в норме и ее нарушения при гипоксии // Гематология и трансфузиология. 2003.- № 2. С. 20.

43. Иванкова Ж.Е., Монсеенко H.A. Кислотно-основное состояние крови кроликов после кровопускания на фоне 20-гидроксиэкдизона // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. 2004. - Т. 90. - № 8. - С. 194.

44. Илюхин А.В, Зубенкова Э.С., Кахетелидзе М.Г. Лейкопоэз // Нормальное кроветворение и его регуляция. М., 1976. - С. 458-488.

45. Иммунологические методы.-М: Медицина, 1987.-472 с.

46. Казначеев В.П. Современные аспекты адаптации. Новосибирск: Наука, 1980.-192 с.

47. Касснрскнн H.A., Алексеев Г.А. Клиническая гематология. М: Медицина, 1970.-800 с.

48. Кассирскнй И.А., Деищнкова Д.И. Физиологические нормы лейкоцитов и проблема Leucopenia innocens. М.: Медицина, 1974. - 144 с.

49. Кетлинский С.А., Калинина Н.М. Цитокины мононуклеарных фагоцитов в регуляции реакции воспаления и иммунитета // Иммунология. 1995. - № 3. -С. 30-44.

50. Килмеи С.А. Влияние радиации на систему клеточного обновления // Руководство по радиационной гематологии. М., 1974. - С. 77-85.

51. Козннец Г.И., Высоцкий В.В., Погорелов В.М. и соавт. Кровь и инфекция. М: Триада-фарм, 2001. - 456 с.

52. Козинец Г.И., Шишканова З.Г., Сарычева Т.Г. Клетки крови и костного мозга // Цветной атлас. М.: МИА, 2004. - 203 с.

53. Козлов А.И., Вершубская Г.Г. Медицинская антропология коренного населения Севера России. -М.: МНЭПУ, 1999.-288 с.

54. Козловский В.И., Акуленок A.B. Прогнозирование больных артериальной гиертензией// Рецепт.- 2006. -№ 1.-С. 131-137.

55. Койков В.В. Геометрия, механические свойства и функциональное состояние лейкоцитов крови при раке легкого // Биология наука XXI века. 9-ая Междунар. Пущинская школа-конф. молодых ученых: Тез. докл. - Пущино: ПНЦ УрО РАН. - 2005. - С. 147.

56. Колесникова Н.В., Нестерова И.В., Чудилова Г.А. Функциональные системы нейтрофильных гранулоцитов в динамике после экспериментальной острой кровопотери // Гематология и трансфузиология. 1999. - Т. 44. - № 2. -С. 20-23.

57. Копьева Т.Н., Амасова О.М. Полиморфноядерный лейкоцит: роль в развитии острого и хронического неспецифического воспаления легких // Гематология и трансфузиология. 1990. - № 3. - С. 11-13.

58. Косовский М.И., Сыров В.Н., Мнрахмедов М.М. и соавт. Влияние неробола и экдистерона на некоторые связанные инсулинзависимые процессы в норме и при инсулинрезистентности // Проблемы эндокринол. 1989. - Т. 35. -№5.-С. 77-81.

59. Кост Е.А. Справочник по клиническим и лабораторным методам исследования. М: Медицина, 1975. - 287 с.

60. Коцюруба A.B., Ахмед И., Тараканов С.С., Холодова Ю.Д. Изучение механизмов действия экдистерона у цыплят с D-гиповитаминозом. Ранняя фаза действия // Укр. биохим. журнал. 1993. - Т. 65. - № 5. - С. 83-90.

61. Коцюруба A.B., Бухаиевич О.М., Мегедь О.Ф. и соавт. С27-стеро1Дш гормони екдистерон та кальцитрюл активують фосфошозитольний цикл у мембраннш фаз! дп// Укр. биохим. журнал. 1999. - № 1. - С. 27-32.

62. Кудрявцев A.A. Исследование крови в ветеринарной диагностике. М., 1952.-Ч. 1.-374 с.

63. Кудрявцев A.A., Кудрявцева JI.A. Клиническая гематология животных. -М.: Наука, 1974.-286 с.

64. Кузьменко А.И., Морозова Р.П., Николенко И.А. и соавт. Влияние витамина D3 и экдистерона на свободнорадикальное окисление липидов // Биохимия. 1997. - Вып. 6. - С. 712-715.

65. Кузьмнцкий Б.Б., Голубева М.Б., Конопля H.A. и соавт. Новые перспективы в поиске иммуномодулятора среди соединений стероидной структуры // Фармакология и токсикология. 1990. - № 3. - С. 20-22.

66. Куракина И.О., Булаев В.М. Экдистен тонизирующее средство в таблетках по 0,005 г // Новые лекарственные препараты. Экспресс-информация. -М.- 1990.-Вып. 6.-С. 16-18.

67. Курмукова H.A. Влияние экдистена на течение экспериментальной гипоксической гипотрофии у крыс (доклинические исследования) // Поиск,разработка и внедрение новых лекарственных средств: Тез. докл. междунар. науч. конф.- Томск, 2000. С. 27-29.

68. Курмуков А.Г., Сыров В.Н. Противовоспалительный эффект экдистерона // Мед. журн. Узбекистана. 1988. -№ 10. - С. 68-70.

69. Кутепова Т. А, Сыров В.Н., Хушбактова З.А. и соавт.

70. Гипогликемическая активность суммы фитоэкдистероидов из Ajuga turkestanica II Химико-фармацевтический журнал. 2001. - Т. 35. - № 11. - С. 24-85.

71. Лакни Г.Ф. Биометрия. М: Высш. шк., 1990. - 293 с.

72. Лафон Р. Фитоэкдистероиды и мировая флора: разнообразие, распределение и эволюция // Физиол. раст. 1998. - Т. 45. - № 3. - С. 326-346.

73. Левицкий Е.Л., Холодова Ю.Д., Губский Ю.И. и соавт. Механизмы генопротекторного действия препарата на основе фитоэкдистероидов (БТК-8л) в условиях повреждения хроматина хлорофосом // Укр. биохим. журнал. 1993. - № 6. - С. 84-91.

74. Луговская С.А. Структура и функции моноцитов и макрофагов (обзор литературы) // Клиническая лабораторная диагностика. 1997. - № 9. -С. 10-16.

75. Лукьянова А.Г., Ленская Р.В. Динамические изменения цитохимических показателей лимфоцитов периферической крови у детей Чернобыля за период с 1987 до 1995 года // Гематология и трансфузиология. 1996. - Т. 41. - № 6. - С. 27-30.

76. Лю Б.Н. Кислородно-перекисная концепция апоптоза и возможные варианты его механизмов// Успехи совр. биол. -2001. Т. 21. -№ 5. - С. 488-501.

77. Любима А.Я., Спектор И.С., Катасонова Т.В. Программированное пособие по методам клинических лабораторных исследований. М., 1971. - 304 с.

78. Мальцев В.Н., Пашков Е.П., Хаустова Л.И. Основы микробиологии и иммунологии: Курс лекций. М.: Медицина, 2005. - 280 с.

79. Мануилова H.A. Гистология с основами эмбриологии. М.: Просвещение, 1973.-611 с.

80. Маматханов А.У., Шамсутдинов М.-Р.И., Шакиров Т.Т. Выделение экдистерона из корней Rhaponticum carthamoides II Химия природных соединений. 1980. - № 4. - С. 528-529.

81. Маянский А.Н. Актуальные проблемы фагоцитоза // Моделирование и клиническая характеристика фагоцитарных реакций. Горький, 1989. - С. 5-15.

82. Маянский Д.Н. Хроническое воспаление. М.: Медицина, 1991. - 272 с.

83. Маянский А.Н. Фагоцитоз: проблемы и перспективы // Вестник РАМН. -1993. № 4. - С.52-55.

84. Маянский А.Н. Лекции по иммунологии. Нижний Новгород, 2003. - 150 с.

85. Медведев H.H. Линейные мыши. М.: Медицина, 1964. - 253 с.

86. Международные рекомендации по проведению меднко-биологических исследований с использованием лабораторных животных: Основные принципы //Ланималогия. 1993.- №. 1.-С. 29.

87. Меерсон Ф.З. Адаптация, стресс и профилактика. М.: Наука, 1981. - 278 с.

88. Меньшнков В.В., Делекторская Л.Н., Золотницкая Р.П. Лабораторные методы исследования в клинике. М.: Медицина, 1987. - 368 с.

89. Мечников И.И. Учение о фагоцитах и его экспериментальные основы // Мечников И.И. Вопросы иммунитета. М: АН СССР, 1951. - С. 520-644.

90. Миронова В.Н., Холодова Ю.Д., Скачкова Т.Ф. и соавт. Гипохолестеринемичное действие фитоэкдизонов при экспериментальной гипохолестеринемии у крыс // Вопросы мед. химии. 1982. - № 3. - С. 101-105.

91. Мищенко A.A. Зависимость кислотно-основных свойств эритроцитов человека, крысы и лягушки от адреналина, пропранолона и фитогемагглютининов: Дис. канд. биол. наук. Сыктывкар, 1999. - 140 с.

92. Молчанова Т.П. Основы молекулярной организации белков мембраны эритроцитов и их дефекты, приводящие к гемолитическим анемиям // Гематология и трансфузиология. 1989. -№ 7. - С. 32-41.

93. НДМГ. Токсикология, гигиена и профпатология / Под. ред. С.Д. Заугольникава. М.: Институт биофизики, 1982. - С. 260-263.

94. Никитин В.Н. Атлас клеток крови сельскохозяйственных и лабораторных животных. М. Гос-ное изд-во с.х. литературы, 1949. - 48 с.

95. Новиков B.C. Проблема экстремальных состояний человека // XVII съезд Всерос. физиол. общества им. И.П. Павлова: Тез. докл. Ростов-на-Дону, 1998.-С. 85-85.

96. Новодержкииа Ю.К., Воробьева Т.М., Вершинина A.A. Лимфоциты периферической крови при беременности (морфологические особенности) // Клиническая лабораторная диагностика. 1993. - Вып. 6. - С. 64-65.

97. Нуритдинов Э.Н. Анализ периферической картины крови у суслика и белой крысы в различные сезоны года // Журн. эвол. биохим. и физиол. 1990. -Т. 26.-№3.-С. 328-334.

98. О клииико-фармакологнческом исследовании препаратов «Элтон», «Леветон», «Фнтотон», «Адаптон» на физическую работоспособность спортсменов высокой квалификации // Научный отчет по адаптогенам ВНИИ физкультуры и спорта. М., 2000. - 70 с.

99. Организация массового иммунологического обследования больных в клинико-диагностической лаборатории многопрофильной больницы: Методические рекомендации. М., 1988. - 30 с.

100. Орлов С.Н., Скрябин Г.А., Котельцев С.В., Козлов Ю.П. Транспорт одновалентных ионов в эритроцитах карпа; механизм и регуляция // Биологические мембраны. 1989. - Т. 6. - № 12. - С. 1261-1276.

101. Осинская Л.Ф., Саад Л.М., Холодова Ю.Д. Антирадикальное действие и антиоксидантная активность экдистерона // Укр. биохим. журнал. 1992. - № 64.-С. 114-117.

102. Островский В.К., Алимов P.P., Мащенко A.B. Некоторые данные о показателях нормы лейкоцитарного индекса интоксикации // Клиническая лабораторная диагностика. 2003. - № 1. - С. 45-46.

103. Панцхава А.Д. Качественные изменения форменных элементов крови. -Тбилиси: Сабчота Сакартвелио, 1969.-216 с.

104. Пат. 2119331, Россия. С 1, 6 А 61 К 9/06, 35/78. Средство для лечения ожоговых ран "Витадерм" / В.Н. Дармограй, Потехинский СМ., Ухов Ю.И. и др. № 96104062/14; заявл. 29.02.96; опубл. 27.09.98. Бюл. № 27.

105. Пат. 2153346, Россия, МКИ3 А 61 К 35/78. Способ получения экдистероидов / В.В. Володин, С.О. Володина; Институт биологии Коми НЦ УрО РАН; N 99106351/14;Эаявл.29.03.99;Опубл. 27.07.2000. Б.И. N 21.

106. Петров Р.В., Ульянкина Т.Н. И.И. Мечников: открытие иммунной системы // Иммунология. 1995. - № 3. - С. 3-6.

107. Пигаревский В.Е. Зернистые лейкоциты и их свойства. М: Медицина, 1978.-118 с.

108. Плотников М.Б., Алиев О.И., Васильев A.C. и соавт.

109. Гемореологическая активность экстрактов из надземной части Lychnis chalcedonica L. и Rhaponticum carthamoides (Willd) Iljin при экспериментальном инфаркте миокарда // Раст. ресурсы . 1999. - Вып. 1. - С. 103-107.

110. Плотников М.Б., Алиев О.И., Васильев A.C. и соавт. Гемореологические эффекты экстрактов Lychnis chalcedonica L. II Экспер. и клинич. фармакол. 2000. - № 2. - С. 54-56.

111. Плотников М.Б., Зибарева Л.Н., Колтунов A.A. и соавт.

112. Гемореологические свойства экстрактов из некоторых растений, содержащихэкдистероиды // Раст. ресурсы. 1998. - Вып. 34. - С. 91-96.

113. Плотников М.Б., Зибарева JI.H., Васильев A.C. и соавт.

114. Гемореологическая активность экдистерона и различных фракций экстракта из надземной части Lychnis chalcedonica L. in vitro II Раст. ресурсы. 2000, - Вып. 3.-С. 91-94.

115. Подберезин М.М. Современные методы диагностики аутоиммунных гемолитических анемий // Гематология и трансфузиология. 1998. - Т. 43. - № 1.-С. 15-18.

116. Попов C.B. Функциональные реакции нейтрофилов и макрофагов на растительные полисахариды: Дисс. канд. биол. наук. Сыктывкар, 1999. - 172 с.

117. Портянная Н.И., Осипенко Б.Г., Москадынова Г.А. К биохимическому механизму токсического действия гидразинов // Тез. докл. I съезда токсикологов России. М., 1999. - С. 306.

118. Портянная Н.И., Черняк Ю.И., Москадынова Г.А. О влиянии гидразина на процессы микросомального окисления и переоксидации липидов в печени крыс // Медицина труда и промышленная экология. 1994. -N 3. - С. 29-34.

119. Правила работы с лабораторными животными. Информационный материал. Пущино.: НЦБИ АН СССР, 1983. - 8 с.

120. Прокопенко Л.Г., Спиливая Л.Е. Эритроциты как модуляторы иммунологических реакций // Успехи физиол. наук. 1992. - Т. 23. - № 4. - С. 89-106.

121. Пчеленко Л.Д., Метелкииа Л.Г., Володина С.О. Адаптогенный эффект экдистероидсодержащей фракции Serratula coronata L. II Химия раст. сырья. -2002.-№ 1.-С. 669-680.

122. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование. Семейство Asteraceae (Compositae). Л.: Наука, 1983.-450 с.

123. Редчиц Е.Г., Парфенов A.C. Реологические свойства лейкоцитов и их участие в микроциркуляции крови // Гематология и трансфузиология. 1989.1. Т. 39.- № 12.-С. 40-45.

124. Ройт А. Основы иммунологи / Пер. с англ. М.: Мир, 1991. - 328 с.

125. Рошш B.C. Морфологические изменения лейкоцитов // Лабораторное дело. 1990. - № 5. - С. 30-34.

126. Саатов 3., Усманов Б.З., Абубакиров Н.К. Фитоэкдизоны Silene praemixta I. Силеностерон // Химия природных соединений. 1979. - С. 793797.

127. Савченко М.Ф., Денисов В.Б., Бенеманский В.В. Отдаленные последствия НДМГ и гидразина // Несимметричный диметилгидразин. Токсикология, гигиена и профпатология / Под. ред. С.Д. Заугольникова. М., 1982.-С. 39-46.

128. Сапов И.С., Новиков Б.С. Неспецифические механизмы адаптации человека. -JI.: Наука, 1984. 146 с.

129. Сапрыкин В.П., Галанкин В.Н. Ультаструктурная характеристика нефлогогенного и флогогенного взаимодействия staphylococcus aureus с фагоцитами // Вестник Рос. ун-та дружбы народов. Сер. Медицина. - 1999. -№ 1. - С. 26-29.

130. Сахибов А.Д., Сыров В.Н., Усманова A.C., Абакумова О.Ю.

131. Экспериментальный анализ иммунотропического действия фитоэкдистероидов // Докл. АН УзССР. 1989. - Т. 6. - С. 55-57.

132. Свидетельство на товарный знак (знак обслуживания) № 282636, «Серпистен» Serpisten / Институт биологии Коми НЦ УрО РАН; Заявка № 2004717505; Заявл. 04.08.05; Опубл. 22.02.05.

133. Свищева Т.Я. Атлас клеток крови и паразитов человека. СПб.: Диля, 2002.- 128 с.

134. Сейфулла Р.Д., Вайсберг М.А., Сыров В.Н. Действие ратибола на систему свертывания крови // Фармакол. и токсикол. 1986. - № 4. - С. 40-42.

135. Сергеев П.В., Духанин A.C., Шимановский НЛ. Плазматическая мембрана клетки-мишени и стероидные гормоны: начало спора или его завершение? // Бюлл. эксп. биол. и мед. 1995. -№ 10. - С. 342-348.

136. Серов В.В., Пауков B.C. Воспаление, (руководство для врачей). M.: Медицина, 1995. - С. 400-407.

137. Стародуб Н.Ф. Изучение свойств фракций гемоглобина // Биохимия. -1974. Т. 39. - № 4. - С. 757-761.

138. Сыров В.Н. К механизму анаболического действия фитоэкдистероидов в организме млекопитающих // Биол. науки. 1984. - № 11. - С. 16-19.

139. Сыров В.Н., Айзиков М.И., Курмуков А.Г. Влияние экдистерона на содержание белка, гликогена и жира в печени, сердце и мышце белых крыс // Докл. АН УзССР. 1975а. -№ 8. - С. 37-38.

140. Сыров В.Н., Курмуков А.Г. Влияние витикостерона Е на вес органов и содержание в них белка у крыс различного возраста // Докл. АН УзССР. -19756.-№9.-С. 40-41.

141. Сыров В.Н., Курмуков А.Г. Результаты поиска эстрогенных веществ среди растительных соединений // Докл. АН УзССР. 1975в. - № 4. - С. 45-46.

142. Сыров В.Н., Курмуков А.Г. Об анаболической активности фитоэкдизона экдистерона, выделенного из Rhaponticum carthamoides (Willd) Iljin II Фармакол. и токсикол. - 1976а. - № 6. - С. 690-693.

143. Сыров В.Н., Курмуков А.Г. О биологической активности циастерона в опытах на самцах крыс // Биол. науки. 19766. - № 5. - С. 72-74.

144. Сыров В.Н., Курмуков А.Г. О тонизирующих свойствах экдистерона выделенного из левзеи сафлоровидной // Докл. АН УзССР. 1977. - № 12. - С. 27-30.

145. Сыров В.Н., Курмуков А.Г., Сахибов А.Д. Влияние туркестерона и неробола на активность белоксинтезирующей системы печени мышей // Вопросы, мед. химии. 1978. - № 4. - С. 456-460.

146. Сыров В.Н., Курмуков А.Г., Султанов М.Б. Оценка анаболического действия фитоэкдизонов и их 6-кетоаналогов в опытах на крысах-самках // Докл. АН УзССР. 1981а. - № 3. - С. 31-33.

147. Сыров В.Н., Матвеев С.Б., Курмуков А.Г, Исламбеков У.С. Влияние экдистерона и неробола на течение перелома костей в эксперименте // Мед.журн. Узбекистана. 1986. - № 3. - С. 67-69.

148. Сыров В.Н., Мельникова Е.В., Султанов М.Б. Влияние фитоэкдистероида на течение токсического гепатита у крыс, вызванного гелиотрином // Докл. АН УзССР. 19816. -№ 5. - С. 36-38.

149. Сыров В.Н., Насыров С.С., Хушбактова З.А. Результаты экспериментального изучения фитоэкдистероидов в качестве стимуляторов эритропоэза у лабораторных животных // Эксп. и клинич. фармакол. 1997. -№3.- С. 41-44.

150. Сыров В.Н., Хушбактова З.А. Фармакотерапевтический эффект фитоэкдистероидов и неробола при токсическом поражении почек в эксперименте // Эксп. и клинич. фармакол. 2001. - № 4. - С. 56-58.

151. Сыров В.Н., Хушбактова З.А., Абзалова М.Х., Султанов М.Б. О гиполипидемических и антиатеросклеротических свойствах фитоэкдистероидов // Докл. АН УзССР. 1983. - № 9. - С. 44-45.

152. Ташмухамедова М.А., Абзалова М.Х., Сыров В.Н., Султанов М.Б. Огипоглигемических свойствах циастерона // Докл. АН УзССР. 1983. - № 2. -С. 33-34.

153. Ташмухамедова М.А., Алматов К.Т., Сыров В.Н. и соавт. Влияние фиоэкдистероидов и стеронаболов на дыхание и окислительное фосфорилирование митохондрий печени крыс при аллоксановом диабете // Биол. науки. 1985. - № 9. - С. 37-39.

154. Тимофеев Н.П. Использование левзеи сафлоровидной в реабилитации и поддержании здоровья человека // Химия и компьютерное моделирование. Бутлеровские сообщения.-2001.- № 5.-С. 25-28.

155. Тимофеев НЛ. Фитоэкдистероиды: Фармакологическое использование и активность (Обзор) // Медицинские науки. 2005. - № 4. (10). - С. 26-66.

156. Тимофеев Н.П. Продуктивность и динамика содержания фитоэкдистероидов в агропопуляциях Rhaponticum cartomoides и Serratilla coronata L. (Asteraceae) на Европейском Севере. Раст. ресурсы. - 2006а. - Т. 42. - Вып. 2. - С. 17-36.

157. Тимофеев Н.П., Володин В.В., Фролов Ю.М. Распределение 20-гидроксиэкдизона в структуре биомассы надземной части Rhaponticum carthamoides (Willd) Iljin в условиях агроценоза (Республика Коми) // Раст. ресурсы. 1998. - Вып. 3. - С. 63-69.

158. Тиунов JI.A. Механизмы гемолиза // Основы общей промышленной токсикологии / Под ред. Н.А. Толоконцева, В.А. Филова. JL: Медицина, 1976. -С. 192-195.

159. Тодоров И.Н., Митрохин Ю.И., Ефремова О.И., Сидоренко Л.И.

160. Влияние экдистерона на биосинтез белков и нуклеиновых кислот в органах мышей // Химико-фарм. журн. 2000а. - № 9. - С. 3-5.

161. Тодоров И.Н., Митрохин Ю.И., Ефремова О.И., Сидоренко Л.И.

162. Действие экстрактов левзеи сафлоровидной на биосинтез РНК и белков в органах мышей // Химико-фарм. журн. 20006. - № 9. - С. 24-26.

163. Тодоров Й. Клинические лабораторные исследования в педиатрии. -София: Физкультура и медицина, 1963. 608 с.

164. Тренин Д.С., Володин В.В., Бейкин Я.Б., Шлыкова А.Б.

165. Экдистероидная фракция надземной части Serratula coronata L. В реакцииспонтанного розеткообразования и агармиграционном тесте in vitro // Эксп. и клинич. фармак. 1996. - Т. 59. -№ 1. С.55-57.

166. Туков А.Р. Болезни крови и кроветворных органов у ликвидаторов последствий аварии на Чернобыльской АЭС // Гематология и трансфузиология. 2000. - Т. 45. - № 5. - С. 31-33.

167. Тяпкина А.Д., Горичева В.Д. Функциональная активность лейкоцитов в условиях воздействия на организм высокой и низкой температур // Ярославский педагогический вестник. 2003. -№ 5. - С. 144-149.

168. Ужанский Я.Г. Физиологические механизмы регенерации крови. М: Медицина, 1968.-264 с.

169. Улумбеков Э.Г., Челышева Ю.А. Гистология. -М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001. -258 с.

170. Утешев Б.С., Лазарева Г.А., Прокопенко Л.Г. Иммунометаболические эффекты, вызываемые бенфотиамином и рибиксином при гемолитической анемии // Эксп. и клинич. фармак. 2002. - № 1. - С. 37-41.

171. Фанштейн Ф.Э., Козинец Г.И., Бахрамов С.М., Хохлова М.П. Болезни системы крови. Ташкент: Медицина, 1984. - 671 с.

172. Федорова МЗ. Реактивность лейкоцитов крови при различных функциональных нарушениях. Москва-Ярославль, 2001. - 67 с.

173. Федорова МЗ. Функциональные свойства и реактивность лейкоцитов крови при измененных условиях организма, вызванных факторами различной природы: Автореф. дис. д-ра. биол. наук. М., 2002. - 32 с.

174. Федорова М.З., Левин В.Н. Метод комплексного исследования геометрии, площади поверхности, резервных возможностей мембраны и осморегуляции лейкоцитов крови // Клиническая диагностика. 1997. - № 11.-С. 44-46.

175. Федорова МЗ., Левин В.Н. Реакции лимфоцитов на механические и осмотические воздействия при водной депривации // Ярославский педагогический весгаик. 2000. - № 2. - С. 50-53.

176. Федорова М.З., Левин В.Н. Использование "мембранного резерва"лимфоцитами крови при деформации и в условиях гипотонии // Биологические мембраны. 2001. - № 4. - С. 310-315.

177. Федорова М.З., Левин В.Н., Горичева В.Д. Функциональная активность и механические свойства лейкоцитов крови крыс при внешней тепловой нагрузке // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. 2000а. - Т. 86. - С. 16241629.

178. Филиппова В.Н., Володина С.О., Смоленская И.И. и соавт. Экдистероиды в культуре клеток Serratula coronata L. II Вестник Башкирского университета. 2001. - № 2.-С. 129-131.

179. Физиология системы крови. В серии: Руководство по физиологии. Л.: Наука, 1968.-280 с.

180. Фитоэодпстероиды / Под ред. В.В. Володина СПб: Наука, 2003. - 293 с.

181. Фомовская Г.Н., Бердышев А.Г., Холодова Ю.Д. Иммуномодуляторный эффект экдистеронов // Укр. биохим. журнал. 1992. - Т. 32. - С. 56-61.

182. Хаитов P.M. Физиология иммунной системы. М., 2001. - 223 с.

183. Холодова Ю.Д. Фитоэкдистероиды биологически активные полигидроксилированные стерины // Укр. биохим. журнал. - 1979. - Т. 51. - № 5.-С. 560-575.

184. Холодова Ю.Д. Фитоэкдистероиды // Биохим. животных и человека. Респуб. межвед. сб. науч. трудов. 1987. - № 11. - С. 27-41.

185. Холодова Ю.Д. Спектральные свойства стероидных гормонов, сапогенинов и алкалоидов в реакции Чугаева; зависимость от структуры // Укр. биохим. журнал. 1988. -№ 2. - С. 88-92.

186. Хушбактова З.А., Сыров В.Н., Умарова Ф.Т. и соавт. Изменение активности Na, К-АТФ-азы миокарда под действием препаратов растительного происхождения при экспериментальном атеросклерозе // Докл. АН УзССР.1987.-№ 1.-С. 51-53.

187. Чабанный В.Н., Левицкий E.JL, Губский Ю.И. и соавт.

188. Генопротекторный эффект препаратов на основе экдистероидов при отравлении крыс тетрахлорметаном и хлорофосом // Укр. биохим. журнал. 1994. - 66 (5). -С.67-77.

189. Черешнев В.А., Юшков Б.Г., Клнмин В.Г., Лебедева Е.В. Иммунофизиология. -Екатеринбург: УрО РАН, 2002. 260 с.

190. Чермных Н.С., Шимаиовскнй Н.Л., Шутько Г.В. Эффекты метандростенолона и экдистерона на физическую выносливость и белковый обмен в скелетных мышцах // Фармакология и токсикология. 1988. - № 6. - С. 56-62.

191. Черннцкнй Е.А., Воробей A.B. Структура и функции эритроцитарных мембран. Минск: Наука и техника, 1981. - 216 с.

192. Чинчаладзе Ц.В., Осечинский И.В., Абдушелишвили Р.Г.

193. Таксономический анализ распределения показателей периферической крови работников предприятий химического профиля и автотранспорта // Гематология и трансфузиология. 1989. - Т. 34. - № 5. - С. 33-39.

194. Шабанов А.Н. Краткая медицинская энциклопедия. М: Современная энциклопедия, 1972.-Т. 1. - 584 с.

195. Швырев A.A. Анатомия и физиология человека с основами общей патологии / Под общ.ред. Р.Ф. Морозовой. Сер. "Медицина для Вас". Ростов н/Д: Феникс, 2004.-416 с.

196. Шилов Ю.И., Орлова С.Г. Анренергические механизмы регуляции фагоцитарной активности клеток белой крови крыс при остром стрессе // Бюлл. эксп. биол. и мед. 2000. - № 5. - С. 563-566.

197. Шубин М.Г., Авдеева М.Г., Мойсова Д.Л. Взаимосвязь цитохимическойактивности лейкоцитов с феноменом ауторозеткообразования и его клиническое значение у больных лептоспирозом // Клиническая лабораторная диагностика. 1997.-№ 1.-С. 13-14.

198. Юрковский О.И., Грицюк A.M. Общеклинические анализы в практике врача. М: Медицина, 1997. - 123 с.

199. Юшков Б.Г., Климнн В.Г., Северин М.В. Система крови и экстремальные воздействия на организм. Екатеринбург, 1999. - 201 с.

200. Юшков Б.Г., Черешнев В.А., Клнмин В.Г., Черешнева М.В. Иммунная система и регуляция физиологических функций. Уч. пособие. Екатеринбург, 2001.-75 с.

201. Яковлев Г.М., Новиков B.C., Хавинсон В.Х. Резистентность, стресс, регуляция. JI: Наука, 1990. - 238 с.

202. Яновский Д.Н. Руководство по клинической гематологии. Киев: Гос. мед. изд-во. УССР, 1962. - 540 с.

203. Ярилин А.А. Основы иммунологии. М.: Медицина, 1999. - 294 с.

204. Aikake A., Matsumoto Т., Yamaguchi Y. Cerebral neuron protective agents containing ecdysteroids. 1996. - Application JP 94-195279/19940819.

205. Alonso С.A., Pries A.R., Kiesslich O. et al. Transient rheological behavior of blood in low-shear tube flow: velocity profiles and effective viscosity // Am. J. Physiol. 1995. - Vol. 268. - P. H25-H32.

206. Braga D.C., Dal S.M., Maci S., Piatti G. et al. Restoration of polymorphonuclear leukocyte function in elderly subjects by thymomodulin // J. Chemother. 1994. -N 5. - P. 354-359.

207. Butenandt A., Karlson P. Uber die isolierung eines metamorphosehormone der insecten in kristallisierter form // Z. Naturforsch. 1954. - Vol. 96. - P. 389-391.

208. Catalan R.E., Aragonés M.D., Martines A.M. Effects of ecdysterone on cyclic

209. AMP and cycling GMP in mouse plasma // Biochem. Biophys. Res. Comm. 1979. -Vol. 89. - P. 44-49.

210. Catalan R.E., Martines A.M., Aragonés M.D. et al. Alterations in rat lipid metabolism following ecdysterone treatment // Comp. Biochem. Physiol. 1985. -Vol. 81.-P. 771-775.

211. Christopherson K.S., Mark M.R., Bajaj V., Godowski P.J. Ecdysteroid-dependent regulation of genes in mammalian cells by a Drosophila ecdysone receptor and chimeric transactivators // Proc. Nat. Acad. 1992. - Vol. 89. - P. 6314-6318.

212. Czop J.K., Valiante N.H., Janusz M.J. Phagocytosis of particulate activators of the human alternative complement pathway throught monocute beta-glukan receptors // Prog. Clin. Rts. 1989. - Vol. 297. - P. 287-296.

213. Detmar M., Dumas M., Bonté F. et al. Effects of ecdysterone on the differentiation of normal human keratinocytes in vitro // Europ. J. Dermatol. 1994. -Vol. 4.-P. 558-562.

214. Dimitriu A., Thomson N., Hamburger J. A macrophage adherence test // Ann. Inst. Pasteur. 1974. - Vol. 125. - P. 451-459.

215. Dinan L. Phytoecdysteroids: biological aspects // Phytochemistry. 2001. -Vol. 57.-P. 325-339.

216. Dinan L. Practical uses for ecdysteroids in mammals including humans // J. of Insect Science. 2003. - Vol. 37. - P. 30.

217. Dzukharova M. Kh., Sakhibov AD, Kasymov B. et al. Pharmacokinetic experiments with ecdysterone // Khimiko Farmatsevticheskii Zhurnal. 1987. - Vol. 21.-P. 1163-1167.

218. Eppihimer M.T., Lipowsky H.H. Effect of leukocyte-capillary Plugging on the Resistance to Flow in the microvasculature of cremaster Muscle for Normal and activated leukocytes//Microvascular research. 1996.-Vol. 51.-P. 187-201.

219. Galbraith M.N., Horn D.H.S. An insect-moulting hormone from a plant // J.Chem. Soc. Chem. Commun. 1966. - Vol. 37. - P. 905-906.

220. Goodwin T.A. Horn D.H. et. al. Ecdysteroids: A generic term // Nature. -1978.-Vol. 272. -P. 122.

221. Helmke B.P., Bremner S.N., Zweifach B.W. et al. Mechanism for increased blood flow resistance due to leukocytes // Am. J. Physiol. 1997. - Vol. 273. - N. • 42.-P. H2884-H2890.

222. Hikino H., Ohizumi Y., Take mo to T. Absorption, distribution, metabolism and excretion of insect-metamorphosing hormone ecdysterone in mice // II Chemical Pharmaceutical Bull. 1972. - Vol. 20. - P. 2454-2458.

223. Holan V. Antigen-mediated macrophage adherence inhibition // Cell. Immunol. -1974.-Vol. 13.-P. 107-116.

224. Horn D., Koolman J., Stuttgart J. Hystorical introduction // Ecdysone. From chemistry to mode of action New York: Thieme. Med. Publ., 1989. - P. 8-19.

225. Jizba J., Herout V., Sorm F. Isolation of ecdysterone (crustecdysone) from • Polipodium vulgare L. rhisomes // Tetrahedron Lett. 1967. - Vol. 18. - P. 16891691.

226. Karlson P. On the use of ecdysteroid nomenclature // XI Ecdysone Workshop: Programme and Abstr. Paris. - 1994. - P. 7-8.

227. Karlson P., Koolman J., Durchon M.M. Ecdysone: mode of action, inactivation and elimination // Actualités sur les hormones diinvertebres . Paris, 1976. Paris. P. 403-412.

228. Kholodova Yu. D. Phytoecdysteroids: biological effects, application in agriculture and complementary medicine // Yicp. 6ioxiM. hk. 2001. - Vol. 73 (3). - " P. 21

229. Koolman J. Ecdysteroids // Zoolog. Science. 1990. - Vol. 5. - P. 563-580.

230. Koudela K., Tenora J., Bajer J. et al. Stimulation of grrowth and development in Japanese quails after oral administration of ecdysteroid containing diet // Europ. J. Entomol. - 1995.- Vol. 92. - P. 349-354.

231. Kratky F., Opletal L., Hejhalek J, Kucharova S. Effect of 20-hydroxyecdysone on the protein synthesis of pigs // Zivocisna Vyroba. 1997. -Vol. 42.-P. 445-451.

232. Kurmukov A.G., Yermishina OA Effect of ecdysterone on experimental airythmias, ' changes in hemodynamics and contractility of the myocardium produced by a arteiy occlusion

233. Farm, andtoksicol.- 1991.-Vol. 54. P. 27-29.

234. Lafont R. Ecdysteroids and relaed molecules in animals and plant. Arch, of insect biochemistry and physiology. 1997. - Vol. 35. -N. Vi. - P. 3-20.

235. Lafont R., Dinan L. Practical uses for ecdysteroids in mammls including humans // J. of Insect Science. 2003. - Vol. 3.7. - 30 p.

236. Lafont R., Girault J.P., Kerb U. Excretion and metabolism of injected ecdysone in the white mouse // Biochem. Pharmacol. 1988. - Vol. 37. - N. 6. - P. 1174-1177.

237. Lin N., Lin W. 1989. (3-Ecdysone containig skin-protecting cosmetics. Faming Zhuanli Shenqing Gonkkai Shuomingshu. CN 86,106,791 (CI. A61K7/48). 13 Apr. 1988, Appl. 30 Sept 1986, 3 pp. (ChemicalAbstr. Ill: 239323e).

238. Matsuda H., Kawaba T., Yamamoto Y. Pharmacological studies of insect metamorphosis steroids from Achyranthis radix // Folia Pharmac. 1970. - Vol. 66. -P. 551-563.

239. McEwen B.S. Non-genomic and genomic effectsof steroids on neural activiti // TIPS.-1991.-Vol. 12. P. 141-147.

240. Meybeck A. Hydrated lipidic lamellar phases or liposomes based on ecdysteroids // United states patent and trademark office / Certificate of correction. -1991a. Patent. N5,198,225.

241. Meybeck A., Bonte F. Ecdysteroid-containing liposomes for wound healing and skin regeneration. 1990. - Demande FR 2,637,182.

242. Moffat F.I., Han Т., Li Z.M. et al. Involvement of CD44 and the cytoskeletae linker protein ankyrin in hyman neutrophil bacterial phagocytosis // J. Cell Phisiol. -1996. -N3.- P. 638-647.

243. Montiyn R.C. Localisacion of cinthesis of P-46-glukan in Sach. erevisial // Bacheriol. 1999. - Vol. 181. - P. 414-420.

244. Morton D.B., Abbot D., Barelay R. et al. Забор крови у лабораторных млекопитающих и птиц // Laboratory animals. 1993. - Vol. 27. - P. 1-22.

245. Nakanishi Т. Effects of splenectomy on rat polymorphonuclear neutrophil autoimmunity // Asta med et bid. 1995. - Vol. 43. - N 4. - P. 233-238.

246. Nakatsuju T. Effects of splenoctomy on rat polymorphonuclear neutrophil autoimmunity // Asta med et bid. 1995. - Vol. 43. - P. 233-238.

247. Nelson S.D., Gardon W.P. Metabolic activation of hydrazine // Abv. Exp. Med. Biol.-1982.-Vol. 136.-P. 971-981.

248. Odek-Ogunde M., Rajab M.S., Migwi G. J., Ndegwa J.M. Blood Pressure Responses to an Extract of Ajuga remota in Experimenally Hypertensive Rats // Planta Med. 1993. - Vol. 59. - P. 573-574.

249. Ogawa S., Nishimoto N., Matsuda H. Pharmacology of ecdysone in Vertebrates // Invertebrate Endokrinology and Hormonal Heterophylly. / In Berdette W.J. (ed.)). Berlin, 1974. P. 341-344.

250. Okui S., Otaka Т., Uchiyama M. et al. Stimulation of protein synthesis in mouse liver by insect-moulining steroids // Chem.Pharm.Bull. 1968. - Vol. 16. - P. 384-387.

251. Pontsiaca D.D. Cross-linking of the 0-glucan receptor on human monocites results in interleukin-1 production // Blood. 1993. -N. 12. - P. 3695-3700.

252. Prabhu V., Nayar K. Crustecdysone is without estrogenic or antiestrogenic activity in the rat // Experientia. 1974. - Vol. 30. - P. 821.

253. Sakhibov A.D., Syrov V.I., Usmanova A.S., Abakumova O. Yu. Experimental analysis of the immunotropic action of phytoecdysteroids // Docl. A.N. UsSSR. 1989. - Vol. 8 -P. 55-57.

254. Schumacher M. Rapid membrane effects of steroid hormones: an emerging concept on neuroendocrinology // TINS. 1990. - Vol. 13. - P. 359-362.

255. Schroepfer Jr.G.J. Oxysterols: modulators of cholesterol metabolism and other processes // Physiol. Rev. 2000. - Vol. 80. - P. 361-554.

256. Selepcova L., Sommer A., Vargova M. Effect of feeding on a diet containing varying amounts of Rhaponticum carthamoides hay meal on selected morphological parameters in rats // Europ. J. Entomol. 1995. - Vol. 92. - P. 391-397.

257. Sesso De J.M., Gorienger G.C. Developmental toxicity of a hydroxylamine: An Example of a Maternally Mediated Effect // Toxicology and Industrial Health. -1990.-Vol. 6.-N. l.-P. 109-1221.

258. Simon P., Koolman J. Ecdysteroids in Vertebrates: Pharmacological aspects // Ecdysone. From chemystry to mode of action. Stuttgart - New Jork: Thieme Med. Publ, 1989.-P. 254-259.

259. Shibatani J., Okada M., Inaoka Y. et al. Preparation of novel steroid and its use for cosmetics and anticancer agents. 1996. Appl. JP 94-271515/19941104 (Chemical Abstracts 125:143132).

260. Slama K. Ecdysteroids: Insect Hormones, Plant Defensive Factors, or Human Medicine? // Phytoparasitica. -1993. Vol. 21. - P. 3-8.

261. Slama K., Koudela K., Tenora J., Mathova A. Insect hormones in vertebrates: anabolic effects of 20-hydroxyecdysone in Japanese quail // Experientia. 1996. -Vol. 52.-P. 702-706.

262. Slama K., Lafont R. Insect hormones ecdysteroids: their presens and actions in vertebrates // Eur. J. Entomol. - 1995. -N. 22. - P. 355-37.

263. Smith E.B., Clark D.A. Absorption of hydrazine through canine skin // Toxicol. Appl. Pharmacol. 1972. - Vol. 21. - P. 186-193.

264. Springer D.L., Krivak B.M., Broderick D.J. et al. Metabolic fate of hydrazine //J. Toxicol. Environ. Health. 1981. - Vol. 8. - P. 21-29.

265. Stoian I., Oras A., Moldoveanu E. Apoptosis and free radicals // Biohem. Mol. Med. 1996. - Vol. 59. - P. 93-97.

266. Syrov V.N., Khushbaktova Z.A. Woundhealing effects of ecdysteroids // Dokl. AN Respub. Uzb. 1996. - Vol. 12. - P. 47-50.

267. Takahashi H., Nishimoto K. Antidiabetic agents containing ecdysterone or inokosterone. 1992. - Jpn Kokai Tokkyo Koho J.P. 04,125,135 92 124,135. (Chemical Abstracts 117: 84874b).

268. Takemoto T., Shuntaro O., Nishimoto N. et al. Activity of Crude Drugs and Plants//YakugakuZasshi.- 1967.-N. 11.-P. 1414-1418.

269. Trenin D. S., Volodin V.V. 20-hydroxyecdtsone as a Human Lymphocyte and Neutrophil Modulator: In Vitro evaluation // Arch, of Insect bioch. and physiol. -1999.-Vol. 41.-P. 156-161.

270. Tuganova A.V., Kotsyuruba A.V. The in vitro interaction of C27-sterols with the erythrocyte membranes depends on the sterol structure and concentration // Cell, and Mol. Biol. Lett.-1996.-Vol. l.-P. 129-135.

271. Turrini F., Arese P., Yuan J., Low P.S. Clustering of integral membrane proteins of the human erythrocyte membrane stimulates autologus Ig G bilding, complement deposition, phagocytosis // J. Biol. Chem. 1991. Vol. 266. - P. 2361123617.

272. Vadas M., Cooper D., Butcher C., Behndt M. Selectins and CD 18 dependent neutrophil functions //J. Cell Biochem. 1994. -N. 18. - P. 299.

273. Volodin V., Chadin J., Whiting P., Dinan L. Screening plats of European Nort-East Russia for ecdysteroids // Biochem. sistematics and ecol. 2002. - Vol. 30. -P. 525-578.

274. Wallace J.L., Rioux K.P., McKnight W. et al. Hemoprotein dependentproduction of a neutrophil activating from arachidonic acid // Amer J. Physiol. -1992.-N. 5.-P. 1546-1553.

275. Wacshull E. P66-glucan, a saluble P-(l,3)-glucan, enkonces activity und activates an NF-Kappa B. like saefor in human PMN: eridance for a glicosphingolipid (3-(l,3)-glucan receptor // J. Immunopharmacology. 1999. - Vol. 41.-P. 89-107.

276. Yamamura M., Valdimarsson H. A new semiquantitave radiometric opsonin assay selective measurement of opsonizing capacity of the alternative pathway // Ymmunology. 1978. - Vol. 34. - P. 689-694.

Информация о работе

Репина, Екатерина Николаевна
кандидата биологических наук
Сыктывкар, 2007
ВАК 03.00.13

Диссертация

Функциональное состояние лейкоцитов крови лабораторных животных при экспериментальной анемии и влиянии фитоэкдистероидов Serratula Coronata L. - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы