Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Функциональная характеристика ретроэлемента Penelope Drosophila virilis

ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Пятков, Константин Иванович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Классы мобильных элементов Drosophila.

1.2. Ретротранспозон Penelope и его роль в возникновении синдрома гибридного дисгенеза у Drosophila virilis.

1.2.1. Структура ретроэлемента Penelope.

1.2.2. Обратная транскриптаза Penelope сильно дивергировала от обратных транскриптаз других ДКП-несо держащих ретроэлементов.

1.2.3. Penelope кодирует предсказанную нуклеазу, подобную UvrC и эндонуклеазам, содержащим URI мотив.

1.2.4. Ретроэлемент Penelope и его возможное участие в эволюции видов группы virilis.

1.3. Межвидовая трансформация насекомых.

1.3.1. Методы введения экзогенной ДНК в геном насекомых.

1.3.2. Использование мобильных элементов в качестве векторов для трансформации насекомых.

1.3.2.1. Р-элемент.

1.3.2.2. Элементы hobo и Hermes.

1.3.2.3. Элементы Mösl и Himarl.

1.2.3.4. ЭлементPiggyBac.

1.3.3.5. Элемент Minos.

1.3.3. Использование вирусов в качестве векторов при трансформации насекомых

1.3.3.1. Sindbis альфавирус.

1.3.3.2. Пантропические ретровирусы.

1.3.4. Трансформация насекомых и выбор вектора.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Материалы.

2.1.1. Штаммы бактерий.

2.1.2. Среды и основные буферы.

2.1.3.Олишнуклеотидные праймеры.

2.1.4. Материалы и реактивы.

2.2. Методы исследования.:.

2.2.1. Выделение плазмидной ДНК.

2.2.2. Выделение плазмидной ДНК в неденатурирующих условиях.

2.2.3. Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

2.2.4. Фосфорилирование олигонуклеотидных праймеров.

2.2.5. Препаративное выделение фрагмента ДНК.

2.2.6. Выделение мРНК из мух.

2.2.7. Лигирование фрагментов ДНК.

2.2.8. Получение компетентных клеток E.coli и их трансформация.

2.2.9. Анализ рекомбинантных клонов.

2.2.10. Электрофорез белков.

2.2.11. Определение концентрации белка.

2.2.12. Определение первичной последовательности ДНК.

2.2.13. Получение высокомеченой 32Р-ДНК методом случайного праймера.

2.2.14. Выделение геномной ДНК из мух.

2.2.15. Гибридизация политенных хромосом in situ.

2.2.16. Очистка обратной транскриптазы Penelope.

2.2.17. Определение активности обратной транскриптазы.

2.2.18. Определение эндонуклеазной активности Penelope.

2.2.19. ДНК-ДНК гибридизация по Саузерну.

2.2.20. Иммунологическая реакция.

2.2.21. Культивирование Spodoptera frugiperda.

2.2.22. Р-элемент зависимая трансформация D.melanogaster.

2.2.23. Анализ белковых последовательностей.

2.2.24. Получение антител.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Характеристика экспрессии Penelope in vivo и in vitro.

3.1.1. Клонирование и экспрессия фрагмента ОРС Penelope.

3.1.2. Определение экспрессии Penelope in vivo.

3.1.3. Определение структуры и последовательности кДНК Penelope в дисгенных гибридах D. virilis.

3.1.4. Клонирование ОРС Penelope в бакуловирусном векторе, экспрессия в культуре клеток Spodoptera frugiperda.

3.1.5. Очистка белка Penelope.

3.1.6. Биохимические свойства обратной транскриптазы Penelope.

3.1.7. Тестирование нуклеазной активности, кодируемой ОРС Penelope.

3.1.7.1. Определение последовательности двух сайтов интеграции Penelope.

3.2. Введение элемента Penelope в геном D.melanogaster.

3.2.1. Получение конструкций, содержащих МЭ Penelope для интеграции в D.melanogaster.

3.2.2. Анализ трансформированных линий при помощи блота по Саузерну и гибридизация in situ.

3.2.3. Определение структуры 5'-фрагмента кДНК Penelope в трансформированных линиях D. melanogaster.

3.2.4. ПЦР анализ трансформированных линий.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Функциональная характеристика ретроэлемента Penelope Drosophila virilis"

Мобильные элементы (МЭ) составляют значительную часть генетического материала про- и эукариотических клеток и являются существенным фактором генетического разнообразия и нестабильности геномов организмов. Перемещение мобильных генетических элементов, которые могут встраиваться в различные участки генома, влияет на структуру и функционирование генов.

Многочисленные исследования последних лет свидетельствуют о тесной структурной и функциональной взаимосвязи мобильных генетических элементов и генома клетки-хозяина. МЭ представляют интерес, как для фундаментальных исследований, так и для прикладных областей. С одной стороны, получены доказательства участия МЭ в возникновении мутаций, хромосомных перестроек, инверсий и транслокаций. С другой стороны, накоплен богатый экспериментальный материал по использованию МЭ в качестве удобного "орудия" для манипуляции с генетическим материалом, введения чужеродной ДНК в геном и получения мутаций.

Ретротранспозон Penelope является особым элементом Drosophila virilis в силу того, что он отвечает за мобилизацию других неродственных семейств транспозонов, наблюдаемую при дисгенезе у этого вида (Evgen'ev et al., 1997). Мобильный элемент Penelope имеет сложную, очень варьирующую организацию у всех изученных видов группы virilis (Евгеньев и др., 1998; Zelentsova et al., 1999; Evgen'ev et al., 2000a). Penelope имеет длину около 3,4 т.п.н., содержит два длинных концевых повтора и единственную открытую рамку считывания (ОРС). Как правило, с обоих концов элемент фланкирован короткими прямыми повторами (Evgen'ev et al., 1997; 2000а; 20006). При помощи компьютерного анализа первичной последовательности белка МЭ Penelope было предсказано, что данный белок содержит обратную транскриптазу (ОТ), а также то, что С-концевой домен, вероятно, является эндонуклеазой, подобной бактериальной эндонуклеазе UvrC, и эндонуклеазам, кодируемым нитронами группы I (Belfort, Roberts, 1997; Aravind et al., 1999). Филогенетический анализ МЭ Penelope свидетельствует о том, что этот элемент не принадлежит ни к одному из известных классов ретроэлементов, а формирует отдельное, возможно, древнее семейство ретротранспозонов (Евгеньев и др., 1998). В настоящее время функционально не охарактеризован ни один из элементов, принадлежащих к этому семейству МЭ, поэтому, изучение структуры Penelope и энзиматических активностей кодируемого им белка является актуальным исследованием. Работа в этом направлении необходима для формирования современных представлений о молекулярных механизмах, обеспечивающих перемещение данного ретротранспозона в геноме, и взаимосвязи его с другими мобильными элементами, перемещение которых наблюдается при дисгенезе у D.virilis.

Дели и задачи исследования. Цель настоящей работы - изучение экспрессии МЭ Penelope и определение энзиматических активностей кодируемого им белка. В соответствии с поставленной целью были сформулированы следующие задачи:

1) изучить экспрессию МЭ Penelope in vivo;

2) провести клонирование и экспрессию открытой рамки считывания (ОРС) Penelope;

3) выделить и очистить белок Penelope и охарактеризовать его ферментативную активность;

4) ввести МЭ Penelope в геном D.melanogaster,

5) изучить экспрессию МЭ Penelope в D.melanogaster.

Работа выполнена в Лаборатории «Молекулярные основы эволюции» Института молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН в соответствии с планом научно-исследовательских работ лаборатории.

Научная новизна. Проведен онтогенетический анализ экспрессии мобильного генетического элемента Penelope Drosophila virilis. Белок Penelope обнаружен в личинках III стадии развития и в яичниках самок Fi от дисгенного скрещивания, а также в личинках (III стадия) и яичниках родительской линии Drosophila virilis, содержащей элемент Penelope. Определена последовательность и структура полноразмерного транскрипта Penelope. Установлено, что транскрипт Penelope имеет длину 2947 нуклеотидов, содержит единственную открытую рамку считывания размером 2574 п.н. и протяженные 5'- и 3'- нетранслируемые области. Показано, что из 5'-нетранслируемой области транскрипта вырезается интрон размером 75 нуклеотидов. Получен рекомбинантный бакуловирус, содержащий ОРС Penelope, с помощью которого данная ОРС экпрессирована в клетках Spodoptera frugiperda. Белок Penelope очищен последовательной хроматографией на фосфоцеллюлозе Р11 (Whatman), гепарин-сефарозе (.Pharmacia) и MonoS (FPLC, Pharmacia). Экспериментально у . показано, что очищенный белок Penelope является Мп -зависимой обратной транскриптазой. Установлено, что продукт экспрессии ОРС элемента Penelope также обладает эндонуклеазной активностью. Методом Р-элемент зависимой трансформации ретротранспозон Penelope введен в геном Drosophila melanogaster. Показано, что в трансформированных линиях D.melanogaster полноразмерный элемент Penelope способен транскрибироваться и перемещаться в новые участки генома.

Результаты по клонированию и экспрессии ОРС Penelope, выявлению и характеристике обратнотранскриптазной активности белка Penelope, определению экспрессии элемента Penelope in vivo, определению последовательности транскрипта Penelope, введению Penelope в геном D.melanogaster и демонстрации его мобильности имеют приоритетный характер.

Полученные в настоящей работе результаты являются первым экспериментальным доказательством функциональной активности МЭ Penelope. Впервые обнаружено перемещение ретротранспозона в геноме другого вида.

Представленные в работе нуклеотидные последовательности полноразмерного транскрипта Penelope, сайтов интеграции Penelope в геном D.virilis psl и psl7 и исправленная последовательность геномного клона рб зарегистрированы в базе нуклеотидных последовательностей (GenBank, USA) под номерами: 16152117, AF446087, AF446086 и 15559193, соответственно.

Практическая ценность результатов работы. Настоящая работа является частью фундаментальных исследований, посвященных изучению мобильных генетических элементов Drosophila virilis. Научно-практическое значение работы состоит в том, что в ней получены результаты, углубляющие понимание механизма транспозиции нового семейства ретроэлементов. Результаты настоящей работы могут быть использованы при конструировании модельных систем для изучения синдрома гибридного дисгенеза, а также при создании векторов для межвидовой трансформации насекомых.

Основные положения, которые выносятся на защиту:

1. Определение экспрессии мобильного элемента in vivo.

2. Определение структуры и последовательности транскрипта элемента Penelope.

3. Создание рекомбинантного бакуловируса, содержащего ОРС Penelope.

4. Выделение, очистка белка Penelope и биохимическая характеристика его обратнотранскриптазной активности.

5. Определение нуклеазной активности продукта экспрессии ОРС Penelope.

6. Введение мобильного элемента Penelope в геном Drosophila melanogaster.

7. Способность элемента Penelope транскрибироваться в трансформированных линиях D. melanogaster и перемещаться в новые участки генома.

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Пятков, Константин Иванович

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Несмотря на то, что выделенные из геномных библиотек D.virilis копии МЭ Penelope имеют разнообразную структуру и как правило усечены с 5'-конца (Evgen'ev et al., 1997, 2000b, Лезин и др., 2001), предложенная нами структура элемента, содержащая два длинных прямых повтора (рис. 1), наиболее точно отражает истинное строение функционально активного элемента. Это подтверждают следующие данные: 1) в геноме D.virilis содержатся копии, соответствующие предложенной схеме (клон рб); 2) установлено, что транскрипция инициируется в 5'-концевом повторе; 3) элемент, имеющий предложенную структуру, способен перемещаться в геноме D.melanogaster, при этом наблюдается образование транскрипта Penelope такого же размера, как у D.virilis; 4) обнаружены ретротранспозоны с подобной структурной организацией (Хепа, Poseidon, Neptune), имеющие высокую степень сходства на уровне нуклеотидных и аминокислотных последовательностей. На основании изложенных фактов элемент Penelope формально следует отнести к ДКП-содержащим ретротранспозонам. В пользу этого также указывает сходство последовательностей в точке инициации транскрипции Penelope, mdgl, mdg3 и mdg4 (Arhipova et al., 1995). Однако наличие усеченных с 5-конца копий, вырожденный сайт дупликации и непостоянство его длины (8-10 п.н.) сближает Penelope с семейством полиА-содержащих ретротранспозонов. Проведенный филогенетический анализ, основанный на множественном выравнивании последовательностей доменов обратной транскриптазы и нуклеазы белка Penelope, не позволяет отнести этот элемент к какой-либо из известных групп ретротранспозонов. По всей видимости, Penelope является представителем нового семейства ретротранспозонов, к которому также относятся элементы Хепа, Poseidon, и Neptune. Из-за недостатка информации относительно структуры и механизма транспозиции определить эволюционные взаимоотношения этого семейства элементов с другими ретротранспозонами пока не представляется возможным.

В пользу того, что МЭ Penelope следует выделить в особую группу, также указывают его некоторые структурные особенности. В нашей работе впервые для ретротранспозонов было показано наличие у них интрона. В настоящее время функция его неизвестна. Можно предположить, что вырезание интрона необходимо для выхода транскрипта из ядра, его трансляции и накопления белков. В таком случае транскрипт, который используется в ретротранспозиции, вероятно, синтезируется только на определенной стадии развития (либо с уникальной копии в геноме) и способен служить матрицей только в делящихся клетках, когда нарушается целостность ядерной мембраны, например, при митозе. Также интрон МЭ Penelope является важным фактором, который должен влиять на трансляцию, поскольку при его вырезании происходит удаление трех инициирующих кодонов AUG, которые предшествуют первому кодону ОРС Penelope. Если учесть, что у эукариот существует сканирующий механизм инициации трансляции, то транскрипт с неудаленным интроном должен быть очень слабой матрицей для синтеза белка Penelope, т.к. предшествующие инициирующие кодоны не совпадают с ОРС Penelope.

В нашей работе мы экспериментально показали, что продукт экспрессии ОРС Penelope обладает эндонуклеазной активностью, но, т.к. определение активности происходило in vivo в клетках E.coli, нельзя исключить возможное участие транскрипта Penelope во внесении одноцепочечных разрывов в ДНК-мишень. Однако все известные в настоящее время "хоминг"-эндонуклеазы не требуют для нуклеазной активности присутствие РНК (Belfort, Roberts, 1997; Kadyrov et al., 1997). Ранее предполагалось, что именно нуклеаза МЭ Penelope может отвечать за одновременную мобилизацию элементов при дисгенезе у D.virilis (Евгеньев, устное сообщение). Если это предположение верно, то у всех элементов, мобилизуемых при дисгенезе, должны быть сходные сайты дупликации и "горячие" точки встраивания. Однако в настоящее время показано, что неслучайно в геноме располагаются только элементы Penelope и Ulysses (Zelentcova et al., 1999; Evgen'ev et al., 2000).

Проведенное исследование является первым экспериментальным доказательством функциональной активности мобильного элемента Penelope. Впервые получены данные о способности ретротранспозона перемещаться в новые участки в геноме другого вида. Эти результаты свидетельствуют в пользу того, что элемент Penelope фактически автономен и не зависит от специфических факторов "донорского" вида D.virilis. В силу того, что профиль экспрессии МЭ Penelope в трансформированных линиях сходен с D.virilis , а в геноме наблюдается амплификация элемента, созданная модельная система может оказаться весьма перспективной и адекватной для изучения влияния МЭ Penelope на активацию других мобильных элементов при гибридном дисгенезе.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Пятков, Константин Иванович, Москва

1. Зайцев Е.Н., Зайцева Е.М., Бакланова И.В., Горелов ВН., Кузьмин Н.П., Крюков В.М., Ланцов В.А. Клонирование и секвенирование гена гесА из штамма Pseudomonas aeruginosa // Генетика. 1986. - Т. 22, № 11. - С. 2721-7.

2. Кадыров Ф.А., Калиман А.В., Крюков В.М. Эндонуклеаза SegE фага Т4. I. Клонирование, экспрессия и биохимическая характеризация эндонуклеазной активности // Молекулярная биология. 1996. - Т. 30, № 5. - С. 1096-106.

3. Лезин Г.Т., Макарова К В., Великодворская ВВ., Зеленцова ЕС., Кечумян P.P., Кидвелл М.Г., Кунин Е.В., Евгеньев М.Б. // Молекулярная биология. 2001. - Т. 35, №5, - С. 805-815.

4. Altschul S., Madden Т., Schaffer A, Zhang J., Zhang Z., Miller W., Lipman D. Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs // Nucleic Acids Res. 1997. - V. 25, № 17. - P. 3389-402.

5. Ananiev E.V., Gvozdev V.A., Ilyin Yu.V., Tchurikov N.A., Georgiev G.P. Reiterated genes with varying location in intercalary heterochromatin regions of Drosophila melanogaster polytene chromosomes // Chromosoma. 1978. - V. 70, № 1. - P. 1-17.

6. Anxolabehere D., Kidwell M., Periquet G. Molecular characteristics of diverse populations are consistent with the hypothesis of a recent invasion of Drosophila melanogaster by mobile P elements // Mol. Biol. Evol. 1988. - V. 5, № 3. - P. 252-69.

7. Aravind L., Walker D., Koonin E. Conserved domains in DNA repair proteins and evolution of repair systems // Nucleic Acids Res. 1999. - V. 27, № 5. - P. 1223-42.

8. Arkhipova I.R, Lyubomirskaya N.V., Ilyin Y.V. Drosophila Retrotransposons / Austin, Texas: R. G. Landes Company, 1995. 134 p.

9. Atkinson P.W., Pinkerton A C., O'Brochta D A. Genetic transformation system in insect // Annu. Rev. Entomol. 2001. - V. 46. - P. 317-46.

10. Atkinson P.W., Warren W.D., O'Brochta D.A. The hobo transposable element of Drosophila can be cross-mobilized in house-flies and excises like the Ac element of maize // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. - V. 90, № 20. - P. 9693-97.

11. Baldarelli R.M., Lengyel J. A. Transient expression of DNA after ballistic introduction into Drosophila embryos // Nucleic Acids Res. 1990. - V. 18, № 19. - P. 5903-4.

12. Bauser C.A., Elick T.A., Fraser M.J. Proteins from nuclear extracts of two lepidopteran cell lines recognize the ends of TTAA-specific transposons piggyBac and tagalong // Insect Mol. Biol. 1999. - V. 8, № 2. - P. 223-30.

13. Becker J.L., Barre-Sinoussi F., Dormont D., Best-Belpomme M., Chermann J.C. Characterization of the purified RNA dependent DNA polymerase isolated from Drosophila // Cell. Mol. Biol. 1987. - V. 33, № 2. - P. 225-235.

14. Belfort M., Roberts R. Homing endonucleases: keeping house in order // Nucleic Acids Res. 1997. - V. 25, № 17. - P. 3379-88.

15. Bender W., Spierer P., Hogness D.S. Chromosomal walking and jumping to isolate DNA from the Ace and rosy loci and the bithorax complex in Drosophila melanogaster U J. Mol. Biol. 1983. -V. 168, № 1. - P. 17-33.

16. Berghammer A.J., Klingler M., Wimmer E.A. A universal marker for transgenic insects //Nature. 1999. - V. 402, №6760. - P. 370-71.

17. Bingham P.M., Judd B.H. A copy of the copia transposable element is very tightly linked to the Wa allele at the while locus of D. melanogaster // Cell. 1981. - V. 25, № 3. -P. 705-11.

18. Bingham P.M., Kidwell M.G., Rubin G M. The molecular basis of P-M hybrid dysgenesis: the role of the P element, a P-strain-specific transposon family // Cell. 1982. -V. 29, №3,-P. 995-1004.

19. Boeke J.D. Transposable elements in Saccharomyces cerevisiae // Berg D.E., Howe M.M. edc. Mobil DNA. Washington, DC: American Society for Microbiology, 1989. - 33574 p

20. Brennan M.D., Rowan R.G., Dickinson W.J. Introduction of a functional P element into the germ-line of Drosophila hawaiiensis // Cell. 1984. - V. 38, № 1. - P. 147-51.

21. Britten R.J. Cases of ancient mobile element DNA insertions that now affect gene regulation // Mol Phylogenet Evol. 1996. - V. 5, № 1. - P. 13-7.

22. Bingham P.M., Zachar Z. Retrotransposons and FB transposon from Drosophila melanogaster II Berg D.E., Howe MM. edc. Mobil DNA. Washington, DC: American Society for Microbiology, 1989. - 485-502 p.

23. Busseau I.A., Pelisson A., Bucheton A. I elements of Drosophila melanogaster generate specific chromosomal rearrangements during transposition II Mol. Gen. Genet. -1989. V. 218, № 2. - P. 222-8.

24. Calvi B.R., Hong T.J., Findley S.D., Gelbart W.M. Evidence for a common evolutionary origin of inverted repeat transposons in Drosophila and plants: hobo, Activator, and Tam3 // Cell. 1991. - V. 66, № 3. -P. 465-71.

25. Cappello J., Handelsman K., Cohen S.M., Lodish H.F. Structure and regulated transcription of DIRS-J : an apparent retrotransposon of Dictyostelium discoideum // Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 1985. - V. 50. - P. 759-67.

26. Capy P., Anxolabehere D., Langin T. The strange phytogenies of transposable elements: are horizontal transfers the only explantation? II Trends Genet. 1994. - V. 10, № l.-P. 7-12.

27. Catteruccia F., Nolan T., Blass C., Muller H.-M., Crisanti A., Kafatos F.C., Loukeris T.G. Toward Anopheles transformation: Minos element activity in anopheline cells and embryos // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -2000. V. 97, № 11. - P. 2157-62.

28. Catteruccia F., Nolan T., Loukeris T.G., Blass C., Savakis C., Kafatos F.C., Crisanti A. Stable germline transformation of the malaria mosquito Anopheles stephensi II Nature. -2000. V. 405, № 6789. - P. 959-62.

29. Cech T.R. The Generality of self-splicing RNA: Relationship to nuclear mRNA splicing // Cell. 1986. - V. 44, № 2. - P. 207-10.

30. Cech T.R. The chemistry of self-splicing RNA and RNA enzymes // Science. 1987. -V. 236, №4808. - P. 1532-9.

31. Chandra A., Gerber T., Chandra P. Biochemical heterogeneity of reverse transcriptase purified from the AIDS virus, HTLV-III // FEBS Lett. 1986. - V. 197, № 1-2. - P. 84-88.

32. Coates C.J., Jasinskiene N., Miyashiro L., James A.A. Mariner transposition and transformation of the yellow fever mosquito, Aedes aegypti II Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1998. -V. 95, № 7. P. 3748-51.

33. Coates C.J., Jasinskiene N, Pott G.B., James A.A. Promoter-directed expression of recombinant firefly luciferase in the salivary glands of fennel-transformed Aedes aegypti 11 Gene. 1999. - V. 226, № 2. - P. 317-25.

34. Coates C.J., Tumey C.L., Frommer M., O'Brochta D.A., Atkinson P.W. Interplasmid transposition of the mariner transposable element in non-drosophilid insects // Mol. Gen. Genet. 1997. - V. 253, № 6. - P. 728-33.

35. CraigieR., Mizuuchi K. Mechanism of transposition of bacteriophage Mm: structure of a transposition intermediate // Cell. 1985. - V. 41, № 3. - P. 867-76.

36. Daniels S B., Strausbaugh L.D., Armstrong R.A. Molecular analysis of P element behavior in Drosophila simulans transformants 11 Mol. Gen. Genet. 1985. - V. 200, № 2. -P. 258-65.

37. Demeric M. Frequency of spontaneous mutations in certain stocks of Drosophila melanogaster. Genetics 1937. V. 22. - P. 469-78

38. Eickbush T.H. Transposing without ends: The non-LTR retrotransposable elements // New Biol. 1992. - V. 4. - P. 430-40.

39. Eickbush D.G., Luan,D.D., Eickbush T.H. Integration of Bombyx mori R2 Sequences into the 28S Ribosomal RNA Genes of Drosophila melanogaster // Mol. Cell. Biol. 2000. -V. 20, №1,-p. 213-23.

40. Elick T.A., Bauser C.A., Eraser M.J. Excision of the piggyBac transposable element in vitro is a precise event that is enhanced by the expression of its encoded transposase // Genetica. 1996. - V. 98. - P. 33-41.

41. Elick T.A., Bauser C.A., Principe N.M., Eraser M.J. PCR analysis of insertion site specificity, transcription, and structural uniformity of the Lepidopteran transposable element IFP2 in the TN-368 genome // Genetica. 1996. - V. 97, № 2. - P. 127-39.

42. Emi N, Friedmann T., Yee J.K. Pseudotype formation of murine leukemia virus with the G protein of vesicular stomatitis virus // J.Virol. 1991. - V.65 - P. 1202-7.

43. Engels W.R. P elements in Drosophila melanogaster // Berg D.E., Howe M.M. edc. Mobil DNA. Washington, DC: American Society for Microbiology, 1989. - 437-84 p.

44. Evgen'ev, M B., Corces V.G., Lankenau D.-H. The Ulysses transposable element of Drosophila shows high structural similarities to functional domains of retroviruses // J. Mol. Biol. 1992. - V. 225. - P. 917-24.

45. Evgen'ev M., Yenikolopov G., Peunova N., Ilyin Y. Transposition of mobile genetic elements in interspecific hybrids ofDrosophila II Chromosoma. 1982. - V. 85. - P. 375-86.

46. Evgen'ev M., Zelentsova H., Mnjoian L., Poluectova H., Kidwell M.G. Invasion of Drosophila viritis by the Penelope transposable element // Chromosoma. 2000a. - V. 109. -P. 350-7.

47. Fadool J.M., Hard D., Dowling J.E. Transposition of the mariner element from Drosophila mauritiana in zebra-fish I I Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. - V. 95. - P. 5182-86.

48. Felsenstein J. Inferring phylogenies from protein sequences by parsimony, distance, and likelihood methods // Methods Enzymol. 1996. - V. 226. - P. 418-27.

49. Feng Q., Moran J. V., Kazazian H.H. Jr., Boeke J.D. Human LI retrotransposon encodes a conserved endonuclease required for retrotransposition I I Cell. 1996. - V. 87, № 5. -P. 905-16.

50. Finnegan D.J. Transposable elements in eukaryotes //Int. Rev. Cytol. 1985. - V. 93. -P. 281-326.

51. Finnegan D.J. Eukaryotic transposable elements and genom evolution // Trends Genet.- 1989. V. 5.-P. 103-7.

52. Finnegan D.J., Rubin G.M., Young M.W., Hogness D.S. Repeated gene families in Drosophila melcmogaster II Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 1978. - V. 42, Pt. 2. - P. 1053-63. Finnegan et al., 1978;

53. Franz G., Savakis C. Minos, a new transposable element from the Drosophila hydei, is a member of the Tci-like family of transposons // Nucleic Acids Res. 1991. - V. 19, № 23. - P. 6646.

54. Fraser M.J., Cary L., Boonvisudhi K., Wang H.-G.H. Assay for movement of lepidopteran transposon IFP2 in insect cells using a baculovims genome as target DNA // Virology. 1995. - V. 211. -P. 397-07.

55. Georgiev G.P. Mobile genetic elements in animal cells and their biological significance // Eur. J. Biochem. 1984. - V. 145. - P. 203-20.

56. Georgiev G.P. Ilyin Y.V., Ryskov A.P. et al. Mobil DNA sequences and their possible role in evolution // Dutta S.K. ed. DNA systematics. Boca Raton, FL. CRC Press, 1986. -V. 1.-19-46 p.

57. Goryshin I.Y., ReznikoffW.S. Tn5 in vitro transposition // J. Biol. Chem. 1998. - V. 273.-P. 7367-74.

58. Gueiros-Filho F.J., Beverley S.M. Trans-kingdom transposition of the Drosophila element mariner within the protozoan Leishmania I I Science. 1997. - V. 276. - P. 1716-19.

59. Handler A.M., Gomez S.P. The hobo transposable element excises and has related elements in tephritid species // Genetics. 1996. - V. 143, № 3. - P. 1339-47.

60. Handler A.M., Harrell R.A. Germline transformation of Drosophila melanogaster with thepiggyBac transposon vector // Insect Mol. Biol. 1999. - V. 8, № 4. - P. 449-57.

61. Handler A.M., James A.A. Insect transgenesis. Methods and application. Boca Ration, FL: CRC Press, 2000. - 376 p.

62. Handler A.M., McCombs S.D., Fraser M.J., Saul S.H. The lepidopteran transposon vector, piggyBac, mediates germ line transformation in the Mediterranean fruit fly // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. -V. 95. - P. 7520-25.

63. Handler A.M., O'Brochta D.A. 1991. Prospects for gene transformation in insects // Annu. Rev. Entomol. 1991. - V. 36. - P. 159-83.

64. Hartl D.L., Lohe A.R., Lozovskaya E.R. Modern thoughts on an ancient mariner. function, evolution, regulation // Annu. Rev. Genet. 1997. - V. 3. - P. 337-58.

65. Hartl D.L., Lohe A.R., Lozovskaya E.R. Regulation of the transposable element mariner // Genetica. 1997. - V. 100, № 1-3. - P. 177-84.

66. Higgs S., Olson K.E., Klimowski L., Powers A.M., Carlson J.O., Possee R.D., Beaty B.J. Mosquito sensitivity to a scorpion neurotoxin expressed using an infectious Sindbis virus vector // Insect Mol. Biol. 1995. - V. 4, № 2. - P. 97-103.

67. Higgs S., Rayner J.O., Olson K.E., Davis B.S., Beaty B.J., Blair C.D. Engineered resistance in Aedes aegypti to a West African and a South American strain of yellow fever virus // Am. J. Trap. Med. Hyg. 1998. - V. 58. - P. 663-70.

68. Higgs S., Traul D., Davis B.S., Kamrud K.I., Wilcox C.L., Beaty B.J. Green fluorescent protein expressed in living mosquitoes without the requirement of transformation // BioTechniques. 1996. - V. 21. - P. 660-64.

69. Jasinskiene N., Coates C.J., James A.A. Structure of Hermes integrations in the germline of the yellow fever mosquito, Aedes aegypti // Insect Mol. Biol. 2000. - V. 9. - P. 11-18.

70. Jacobson JW, Medhora MM, Hard DL. Molecular structure of a somatically unstable transposable element in Drosophila. Proc Natl Acad Sci USA. 1986 V.83, № 22 - P. 86848.

71. Jordan I.K., Matyunina L.V., McDonald J.F. Evidence for the recent horizontal transfer of long terminal repeat transposons. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. - V. 96. - P. 12621-25.

72. Kadyrov F.A., Shlyapnikov M.G., Kryukov V.M. A phage T4 site-specific endonuclease, SegE, is resposible for a non-reciprocal genetic exchange between T-even-related phages.// FEBS Letters. 1997. - V. 415. - P. 75-80.

73. Kamrud K.I., Olson K.E., Higgs S., Powers A.M., Carlson J.O., Beaty B.J. Detection of expressed chloramphenicol acetyltransferase in the saliva of Culex pipiens mosquitoes // Insect. Biochem. Mol. Biol. 1997. -V. 27. - P. 423-29.

74. Kidwell M.G. Horizontal transfer of P elements and other short inverted repeat transposons // Genetica. 1992. - V. 86. - P. 275-86.

75. Kidwell M.G. Evolution of hybrid dysgenesis determinants in Drosophila melanogaster // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1983. - V. 80, № 6. - P. 1655-9.

76. Kidwell M.G. Hybrid dysgenesis in Drosophila melanogaster: The relationship between the P-Mand I-R interaction systems // Genet. Res. -1979. V. 33. - P. 105-17.

77. Kidwell M.G., Kidwell J.F., Sved J.A. Hybrid dysgenesis in Drosophila melanogaster. a syndrome of aberrant traits including mutation, sterility and male recombination 11 Genetics. 1977,-V. 36. - P. 813-33.

78. Kidwell M. The evolutionary history of the P family of transposable elements // J. Heredity. 1994. - V. 85. - P. 339-46.

79. Kim A, Terzian C, Santamaría P, Pelisson A, Purd'homme N, Bucheton A. Retroviruses in invertebrates: the gypsy retrotransposon is apparently an infectious retrovirus of Drosophila melanogaster II Proc.Natl. Acad. Sci USA. 1994 - V. 91 - № 4 - P. 1285-9.

80. Koonin E,, Mushegian A., Bork P. Non-orthologous gene displacement I I Trends Genet. 1996. -V. 12. - P. 334-36.

81. Kokoza V., Ahmed A., Cho W.-L., Jasinskiene N., James A.A., Raikhel A. Engineering blood meal-activated systemic immunity in the yellow fever mosquito, Aedes aegypti I I Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. - V. 97, № 16. - P. 9144-49.

82. May E.W., Craig N.L. Switching from cut-and-paste to replicative Tn7 transposition // Science. 1996. - V. 272. - P. 401.

83. McClintock B. Controlling elements and the gene. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 1956. V. 21, P. 197-216.

84. McGinnis W., Beckendorf S.K. Association of a Drosophila transposable element of the roo family with chromosomal deletion breakpoints // Nucl. Acids. Res. 1983. - V. 11, № 3.-P. 737-51.

85. McGrane V., Carlson J.O., Miller B.R., Beaty B.J. Microinjection of DNA into Aedes triseriatus ova and detection of integration // Am. J. Trap. Med. Hyg. 1988. - V. 39. - P. 502-10.

86. Medhora M., Maruyama K., Haiti D.L. Molecular and functional analysis of the mariner mutator element Mosl in Drosophila // Genetics. 1991. - V. 128. - P. 311-18.

87. Mialhe E., Miller L.H. Ballistic techniques for transfection of mosquito embryos (Anopheles gambiae) //BioTechniques. 1994. - V. 16. - P. 924-31.

88. Miller L.H., Sakai R.K., Romans P., Gwadz R.W., Kantoff P., Coon H.G. Stable integration and expression of a bacterial gene in the mosquito, Anopheles gambiae // Science.- 1987. V. 237.-P. 779-81.

89. Miller L.H., Sakai R.K., Romans P., Gwadz R.W., Kantoff P., Coon H.G. Stable integration and expression of a bacterial gene in the mosquito Anopheles gambiae // Science.- 1987. V. 237, № 4816. - P. 779-81.

90. Mizutani S., Kang C.Y., Temin H.M. Endogenous RNA-directed DNA polymerase activity in virions of RNA tumor viruses and in a fraction from normal chicken cells // Methods Enzymol. 1974. - V. 29. - P. 119-24.

91. Morris A.C. Microinjection of Mosquito Embryos // Molecular Biology of Insect Disease Vectors, ed. JM Crampton, CB Beard, C Louis. London: Chapman & Hall, 1997. P. 423-29.

92. Morris A.C., Eggleston P., Crampton J.M. Genetic transformation of the mosquito Aedes aegypti by microinjection of DNA // Med. Vet. Enlomol. 1989. - V. 3. - P. 1-7.

93. Morris A.C., Schaub T.L., James A.A. FlP-mediated recombination in the vector mosquito, Aedes aegypti //Nucleic Acids Res. 1991. - V. 19, № 21. -P. 5895-900.

94. O'Brochta D.A., Atkinson P.W., Lehane M.J. Transformation of Stomoxys calcitrans with a Hermes gene vector // Insect Mol. Biol. 2000. - V. 9. - P. 531-38.

95. O'Brochta D A. and Handler A.M. Mobility of P elements in drosophilids and nondrosophilids. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1988. - V. 85, - P. 6052-56.

96. O'Brochta D.A., Gomez S.P., Handler A.M. P element excision in Drosophila melcmogaster and related drosophilids // Mol. Gen. Genet. 1991. - V. 225, № 3. - V. 38794.

97. O'Brochta D.A., Warren W.D., Saville K.J., Atkinson P.W. Hermes, a functional non-drosophilid gene vector from Musca domestica // Genetics. 1996. - V. 142. - P. 907-14.

98. Okada H., Inouye Y., Nakamura S. Kinetic analysis of inhibition of reverse transcriptase by streptonigrin // J. Antibioi, 1987. - V. 40. - P. 230-32.

99. Olson K.E., Beaty B., Higgs S. Sindbis Virus Expression Systems for the Manipulation of Insect Vectors /New York: Plenum, 1998. P. 371-404.

100. Olson K.E., Higgs S., Gaines P.J., Powers A.M., Davis B.S., Kamrud K.I., Carlson J.O., Blair CD., Beaty B.J. Genetically engineered resistance to dengue-2 virus transmission in mosquitoes // Science. 1996. - V. 272. - P. 884-86.

101. Patterson, J.T., Stone W.S. Evolution in the Genus Drosophila. New York: The Macmillan Co. 1952. - P. 437-501.

102. Peloquin J. J., Thibault S.T., Miller T.A. Genetic transformation of the pink boll-worm

103. Pectinophora gossvpiella with the piggyBac element // Insect Mol. Biol. 2000. - V. 9. - P. 323-33.

104. Peloquin J.J., Thibault S.T. Schouest L.P.Jr., Miller T.A. Electromechanical microinjection of pink bollwonn Pectinophora gossypiella embryos increases survival // BioTechniques. 1997. - V. 22, № 3. - P. 496-99.

105. Petrov D., Schutzman J., Hartl D., Lozovskaya E. (1995) Diverse transposable elements are mobilized in hybrid dysgenesis in Drosophila virilis // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1995. - V. 92. - P. 8050-54.

106. Petrov D.A., Lozovskaya E.R., Hartl D.L. High intrinsic rate of DNA loss in Drosophila II Nature. 1996. - V. 384, № 6607. - P. 346-9.

107. Pinkerton A.C., Michel K., O'Brochta D.A., Atkinson P.W. Green fluorescent protein as a genetic marker in transgenic Aedes aegypti II Insect Mol. Biol. 2000. - V. 9. - P. 1-10.

108. Pinkerton A C., Whyard S., Mende H.M., Coates C.J., O'Brochta D.A., Atkinson P.W. The Queensland fruit fly, Bactrocera tryoni, contains mutiple members of the hAT family of transposable elements // Insect Mol. Biol. 1999. - V. 8. - P. 423-34.

109. PirrottaV. Vectors for P-mediated transformation in Drosophila I I Biotechnology. -1988,-V. 10.- P. 437-56.

110. Presnail J.K., Hoy M.A. Stable genetic transformation of a beneficial arthropod, Metaseiulus occidentalis (Acari: Phytoseiidae), by a microinjection technique // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992. - V. 89. - P. 7732-36.

111. Raminani L.N., Cupp E.W. Early embryology of Aedes aegypti (L.) (Diptera:Culicidae) //Int. J. Insect Morphol. Embryol. 1975. - V. 4. - P. 517-28.

112. Robertson H.M., Lampe D.J. Distribution of transposable elements in arthropods // Annu. Rev. Entomol. 1995. - V. 40. - P. 333-57.

113. Roth M.J., Tanese N., Goff S.P. Purification and characterization of murine retroviral reverse transcriptase expressed in Escherichia coli II J. Biol. Chem. 1985. - V. 260. - P. 9326-35.

114. Rubin G.M., Sprandling A.C. Genetic transformation of Drosophila with transposable element vectors// Science. 1982. - V. 218. - P. 348-53.

115. Rubin G.M., Spradling A.C. Vectors for P element-mediated gene transfer in Drosophila I I Nucleic Acids Res. 1983. - V. 11. - P. 6341-51.

116. Sambrook J., Fritch E.F., Maniatis T. Molecular cloning: a laboratory manual / N.Y.: Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989. 319 p.

117. Sanger F., Nicklen S., Coulson A.R. DNA sequencing with chain-terminating inhibitors // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1977. - V.74. - P. 5463-7.

118. Sarkar A., Coates C.J, Whyard S, Willhoeft U., Atkinson P.W., O'Brochta D A. The Hermes element from Musca domestica can transpose in four families of cylorrhaphan flies // Genetica. 1997. - V. 99. - P. 15-29.

119. Sarkar A., Yardley K, Atkinson P.W., James A.A., O'Brochta D.A. Transposition of the Hermes element in embryos of the vector mosquito, Aedes aegypti // Insect Biochem. Mol. Biol, 1997. -V. 27. - P. 359-63.

120. Seabaugh R.C., Olson K.E., Higgs S., Carlson J.O., Beaty B.J. Development of a chimeric Sindbis virus with enhanced per os infection of Aedes aegypti II Virology. 1998. -V. 243.-P. 99-112.

121. Sedmark J.J., Grossberg S.E. A rapid sensitive and versatile assay for protein using coomassie brilliant blue G-250 // Anal. Biochem. 1977. - V. 79. - P. 544-52.

122. Sherman A., Dawson A., Mather C., Gilhooley H., Li Y., Mitchell R., Finnegan D., Sang H. Transposition of the Drosophila element mariner into the chicken germ line // Nat. Biotechnol. 1998. -V. 16, № 11. - P. 1050-53.

123. Spicer G. Réévaluation of the phylogeny of the Drosophila virilis species group {Drosophila: Drosophilidae) I I Ann. Ent. Soc. Amer. 1992. - V. 85. - P. 11-25.

124. Studier F.W., Moffatt B.A. Use of bacteriophage T7 RNA polymerase to direct selective high-level expression of cloned genes // J. Mol. Biol. 1986. - V. 189. - P. 113-30.

125. Sundaraajan P., Atkinson P.W., O'Brochta D.A. Transposable element interactions in insects: crossmobilization of hobo and Hermes I I Insect Mol. Biol. 1999. - V. 8. - P. 35968.

126. KiHpíbcoB OU ÜKKK2KSSOU -----. ь к oiK^aaH^HSj о о 5

127. И Ы МН «MHS и ы и м-------j ■ ■q i i i fa й J J о co со соя в яй й H ймьшь atzuz в я к я1. ЬйййнИнй OB« ьквьэ^авкни„ -------„га киш « «! >шажнкнянинккж a ы й в и ж •а .8 ллаиияин мАлидп «Ы « я! ю о м 5ГВ i jS i i i к i i m > « а оi i i i i i i ь к

128. DiHhiHA икн ни* твтвй&шт вм •

129. Ш ваша к н швиемв я w а & а ь « в > ошp« ä cü

130. И PÍ Я Р! Я |J ?• H Ui й i¿ J fa Он й н ы н a н

131. CO PÍ tó H Ü3 Pi Pi Pi И Й И> Й|'0 > Pi H- CO fa I > t i i CO Ы I H

132. I I I I I I i i i >■ i i <яmí pí > со pi и; ca siKZïbfj- . > Й S afcpi ■ н и > н > > й ' "1.Я t¿ fe к O Pi M

133. S н а нн ц со 1 со с» н я! M : й н !г й яlükjUKH * » СО pi H . . fa m

134. И > Я ООО О O IS я » « Ï >ЬS>аьяьььйГ-jKüHiasi шзга о щ « и>ы«101сасяаи!<!01( н й fa й й со и н й й й • > и и ь q.> fa J Й h -teLos pi а агщт я с» я ШЙ Й Й м й рДам

135. Sas f» д oí u oí < pi !xí д i Й en &S«¡ rtbiHBoiraeSrf ШВР!Р!МКЙЙ!ХНЯЯЬЯ!ВЙЙ>Ч<5 Р!ЙНЙИ«ЫЙ о < га > Я Я со > Я|Н Вл et jaíjlíMSe^WKogfe j

136. Н И Н к w й г tó oí fa ra я с» н д а н fa кнкЬяк s»« н я в в н в > н > н < й I i И i iс ¡¿ pi co о: oí ь « о. к шо в pi м >i о о ри о :>| га й н fa в о

137. Я Я я! > й И , -OBиййIЙ^ВЯВННйоимк.' oipipíBPÍWB------>Ж • ШМ.ИШЙ/Е.И

138. H I fa 1H I I I I I I I I I I fa I й i I I ' 1 I1.rpji I i I i I I I I I I I I I 'ra I I ж I I I I m I i ' Iи o i pi i я ' я й i i 1<й«ан«о

139. Ol pi «Г Ы й < !<¡ « bí К M PI и CO H к •iOJPi ra > > mcí й йййй&!йя:нна •

140. J H ¿¡ fc нЭ Œ й Ш А. В, Cu Рч « О В « « ö;: ■кя:>>и>3>мя;смгав;шво1НМ •ия t но о i a vor-uDig .ингчмлпэ лосло'онаоййиофсойвябаб« uhcnh--но • .-i • 2 м ы • • -счсч • •• -в • a 0 шсоигаФЫЯФгаал гаКадсйР|Я:йЯир^н>^я

141. XXBXJM u su а ими n^.í'rti0 о ло (во>п)а) ф а) швввв*0вввк о Я pi Я pi Я Я pí В В « « Pi Pi Я Oí pí .

142. CLUSTAL X (1.62b) MULTIPLE SEQUENCE ALIGNMENT

143. Xena --KKK-WDLLQN--------LEKDKAI-------DRPQYjRL--||PjgE|gIPC------I^gLPKlB--»PfiTP!

144. CoxS . cer- -NMTP)|§TLETLD------&BaaUIM-------KLSNEIigTgKFKFKPMR-.

145. Ec 79---MS--IDIET|--------LQKAYP . .- DFDVLLKS - RPATggfK-------Vjjldip-----KRTI

146. MatS . cer- -NMTP^TliETI.D------j3MNM«YLN-------KLSNEigTpKi'KFKPMR.MVNI'P-----SPK^

147. P OS e i don - KICK - VIDLLQK--------LEKEQAI-------NKPQ YgRL- - gPjSEJ^jPC------f|№p-----|lHKE:

148. EcllO---MS VIRRLAAV--------LRQSDS--------¡SISAFLVT---APRk|k-------VgRI-P-----KRTTG:

149. MatN. aro- -RMTP|Id8kTEE------DFgPDRLA-------PLIASVATjjAgKPKPVR-.RVFiP-----igKSK:

150. Penelope- -QjK-NNTFVAQ--------LFKMpLI-.SKDERNKM- -gTTTAVPPR-----IgjgliPKIf

151. Neptune -VATILDTLQRKK---FiCEKQRKYLVg------DVEPRERREYXLPKiigKEPg----KWTSjIp-----YELPPHP-X|^DdGS-ETYF|AEFt----------DF|CNPLST--KgPAFVRDgYH

152. EC 8 6 -RNLpLPVMNNLH------DMSKATRI-------SVETLRLL^YgADFRSR-.I0T&jg-----K'KpPEiqilMIYQ'piR-ELlALQg------------WVIiRNIIiD-----KLSSSPFS

153. Ec67 --KliDAIiRAATSRE------DliAKJLDI-----KLVFLTNVLYRIgSDNQgT-.QETIP------|i^R|D-RLgbiQRRI---------EDl£sDCRDEIFATRKISNN|-

154. Rets . ent- -N^TPVASLDSLS------AMLglERK-------RLDWIVKS---VSMSgK-.-QiKVET----IfKNKKE --Qi;FEPKR-SL|f IQKKtfN---------KEifjEKID----gPHYLHgAL

155. TelH. sap- -BLRPIVNMDYVVg---ARTFRREKRAEg- -LT^RVKAL^SVLN^ERARRPSLLj^-Xpvij^LDDI^^AWRTFVl^-WR^QDPPP-ELYFVKVDVTp- " A^^IPQDRLTEVI AS 11KPQNTYCVRR

156. TelS .pom- -TERPyiS:iLK|- ------LINEESSg-'- -IPFNIiEVYMKLLTIiKKDLLKHR- - - - -M^pRK- ----RYFVRIDlksBYDRIK-QDLMFRIVK- -------- -KKLKDPEFVIRKjgATIHATS

157. RT R2DM --SAREVPSGIMLR------IMNLILWCG---- -NLPHSIRL- -ARTVFIP -U*^- 1»----• ——---—---------—-----------—

158. RT R2Nvi--AWNSIDECIKS-------LFNMIMIHG

159. RT A. mar---iiKCjjPSRVLAK------VFNLFLLEK

160. RT I,. pol - RLKNGIHVSLAN------VFNT.WQFSG

161. Md M.mus--FKEDI.XPILHK-------LFHKXEVEG------TLPNSFYEATITLIPKP--PI

162. QCPRRgLD--SRTVLIP--------KEPjf----pTOPACFjl- -PL

163. KLPAFLMT - SRTVLVP -.- KVKEP-----KAPTDgj - - PI

164. RIPECMKS- -NRSVLIP-------KGKSN----IiSDVRHWB--PI---FIEIIKTLKIPAD------TGFEKHQSILN------SFGFERGKSII--------SGR---DYIS----- gAWQKAAHgHVR-----DRATKNFVS-TLPQQMSEVIITLIPKK-YgPEAWKHAQVKMILKP

165. RT C. albLIELWPSI.GESI.IR.ASNNILKjgS-

166. TART 52 --LXKggLPTkATBY---LIEl'gNSILRLp

167. RT T.cru--IPVEWRRATIVP------LLKPGKSP-.EliLESgRPISLTSIVSK

168. HXV 1 ---AjpgWjjEKgRQK------liKLEEgT-------NQRAEBMAVLLALQDSKE

169. MVLKRLLWV\f|PHPHQ YAYRSMR®----------TMQT.AHLIH- - EVEHNRNHgFQ--------VSI.PKKSGIG----§DSQYVL§Ii;SfQPlQ|ESSLVQQII.EElpCKEQVYLTWVPAHK|I-.¡SSNEKIDKLVS---

170. TPEEC^-elRETSlA"THgi.VQWA.V----------AVViPEKED-TTQTTEERHliP--------RTVMATN|SNSiSQ--.60.70.80.90. . .98 95 81 9579